CN107857822A - 从毛蚶中提取多糖的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了从毛蚶中提取多糖的方法，具体为：1）将毛蚶鲜肉脱脂、粉碎；2）向脱脂毛蚶粉水溶液缓慢通过高压脉冲电场装置；3）向高压脉冲电场处理液中加入复合酶缓冲液，提取，冷却至室温，离心，上清液浓缩得毛蚶多糖提取液；4）向毛蚶多糖提取液中加入乙醇‑(NH4)2SO4双水相体系进行萃取分离，将下相进行透析，浓缩，乙醇沉淀，离心，将沉淀物用水复溶，冷冻干燥得毛蚶多糖纯品。本发明提取方法简单可行，提取速率快，能耗低，提取率高，易于工业化规模生产；该提取方法结合高压脉冲电场和酶解提取毛蚶多糖，使多糖的提取效率提高、残留率降低，蛋白质的去除率高，脱脂速率高，石油醚的用量少，脱脂彻底。

Description

从毛蚶中提取多糖的方法
技术领域
本发明涉及天然产物深加工技术领域，特别涉及从毛蚶中提取多糖的方法。
背景技术
毛蚶（Arca subcrenata）是我国重要海产经济贝类，属于软体动物门（Mollusca）双壳纲(Bivalvia)列齿目(Taxodonta)蚶科(Arcidae)。属海产经济贝类。毛蚶常栖息在稍有淡水注入的浅海 泥沙中，由于特殊的生长环境，所以肉质肥嫩、味道鲜美，营养价值也很高，可以提高机体的免疫能力，因此引起了国内外学者的关注，目前国内学者已从毛蚶中提取得到一些活性成分。
随着经济的发展，陆地资源的充分利用，以及海洋养殖业的快速发展，近年来海洋资源的开发变得日益迫切。海洋中有丰富的已开发和待开发的海洋药物资源，所以开发海洋药物资源变得尤其重要。不同的海洋药物资源具有不同的药物功效，而多糖不仅能提高机体免疫功能，还具有抗肿瘤、抗辐射及抗凝血和抗氧化等多种生物活性。多糖的多种生物活性对于肿瘤等世纪难题的防治具有重大意义。并且海洋资源具有区域性、季节性的特点，因此，多糖的提取工艺优化及多糖配方食品的开发利用具有重要的应用价值。多糖是一种生物大分子。存在于植物、动物及微生物细胞中，是生命有机体的重要组成部分。通过脱水各单糖之间形成糖苷键，糖苷键以线性或分支的方式连接，形成链状聚合物。大量研究表明，多糖具有抗衰老、抗肿瘤、免疫调节、抗乙肝病毒感染、抗艾滋病病毒等活性，更重要的是多糖毒副作用小，因此，多糖将在防治等方面解决癌症及艾滋病等世纪难题。多糖的结构与其生物学 功能密切相关，因此近些年具有生物学活性多糖结构的解析是糖化学领域的热点，同时也是一个难点。
发明内容
本发明的目的在于提供一种提取方法简单可行，资源利用率高，提取速率快，提取率高，多糖的提取效率提高、残留率降低，脱脂速率高，脱脂彻底的从毛蚶中提取多糖的方法。
本发明针对上述技术中提到的问题，采取的技术方案为：
从毛蚶中提取多糖的方法，其具体步骤为：
步骤1：将毛蚶鲜肉绞碎、匀浆，加入6-8倍毛蚶重的石油醚，在温度为40-50℃、功率为100-150W下超声波脱脂40-55min，过滤，滤渣经低温烘干、粉碎制成脱脂毛蚶粉，多糖的组织细胞多有脂质包围，组织中往往含有较多的蛋白，所以要先进行脱脂处理，超声波振动能产生并传递强大的能量，给于石油醚大速度和加速度，超声波的空化作用使媒质被撕裂成很多的小空穴，这些小空穴瞬时生成、生长、崩溃会产生高达几千个大气压的瞬时压力，使脂肪组织软化、损伤，加速石油醚在组织中的渗透和扩散，从而使油脂加速渗透出来，可以除去毛蚶中的脂肪，同时石油醚中含有石油醚重量0.023-0.036%的两性霉素和石油醚重量0.014-0.016%的5-氟胞嘧啶，两性霉素和5-氟胞嘧啶的加入不仅能够大大提高石油醚脱脂速率，降低石油醚的用量，且脱脂彻底，还可以毛蚶细胞膜物质相结合，损伤膜的通透性，为提取细胞膜内的多糖成分作准备；
步骤2：按料液比为1:16-20向脱脂毛蚶粉加水中，混合均匀，通过进液泵，缓慢通过高压脉冲电场装置，高压脉冲电场电场强度为20-40kV/cm，脉冲数为10-15，即得高压脉冲电场处理液，利用其细胞膜电穿孔技术，可瞬时击穿、破碎细胞膜，改变细胞膜的通透性，进而利于活性物质的溶出和目标物质的提取；
步骤3：向高压脉冲电场处理液中加入pH为7.0-8.0复合酶缓冲液，加酶量2-5×104U/g，在50-60℃提取时间2-3h，冷却至室温，在3000-5000r/min离心10-20min，上清液浓缩至6-8mg/ml，即为毛蚶多糖提取液，复合酶为重量比为1:0.36-0.52的木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶的混合物，复合蛋白酶的加入可快速切断多糖糖链上连接的蛋白，除去大部分蛋白，同时催化效率高、条件温和、提取率高，减少了多糖的损失，能保存多糖原有的结构与活性；
步骤4：向毛蚶多糖提取液中加入乙醇-(NH4)2SO4双水相体系进行萃取分离，将萃取后的下相进行透析，然后浓缩至4.6-5.8mg/ml，加入3-4倍体积无水乙醇，在2-5℃条件下静置10-15h，在6000-8000rpm下离心10-15min，将沉淀物用水复溶，冷冻干燥得毛蚶多糖纯品，该步骤具有较好的纯化作用，还可除去还原糖、色素等杂质，避免了传统层析技术的成本高、收率低、耗时长等弊端，提取工艺简单、成本低，适于间歇性和规模化生产加工高纯度、高收率的多糖。
作为对上述技术方案的进一步改进，其中步骤4中乙醇-(NH4)2SO4双水相体系中乙醇、(NH4)2SO4和PBS的重量比是0.22-0.26:0.2-0.23:1，双水相体系和毛蚶多糖提取液的体积比为12-14:1。
与现有技术相比，本发明的优点在于：
1）本发明提取方法简单可行，机械化操作成度高，资源利用率高，提取速率快，能耗低，提取率高，生产成本低，易于工业化规模生产；
2）本发明利用高压脉冲电场技术处理，可瞬时击穿、破碎细胞膜，改变细胞膜的通透性，进而利于活性物质的溶出和目标物质的提取；
3）本发明脱脂处理可以除去毛蚶中的脂肪，脱脂速率高，石油醚的用量少，脱脂彻底，且可损伤毛蚶细胞膜的通透性，利于毛蚶多糖的提取；
4）本发明利用双水相体系进行萃取分离，纯化效果好，还可除去还原糖、色素等杂质，避免了传统层析技术的成本高、收率低、耗时长等弊端，提取工艺简单、成本低，适于间歇性和规模化生产加工高纯度、高收率的多糖。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明方案作进一步说明：
实施例1：
从毛蚶中提取多糖的方法，其具体步骤为：
步骤1：将毛蚶鲜肉绞碎、匀浆，加入6-8倍毛蚶重的石油醚，在温度为40-50℃、功率为100-150W下超声波脱脂40-55min，过滤，滤渣经低温烘干、粉碎制成脱脂毛蚶粉，石油醚中含有石油醚重量0.023-0.036%的两性霉素和石油醚重量0.014-0.016%的5-氟胞嘧啶；
步骤2：按料液比为1:16-20向脱脂毛蚶粉加水中，混合均匀，通过进液泵，缓慢通过高压脉冲电场装置，高压脉冲电场电场强度为20-40kV/cm，脉冲数为10-15，即得高压脉冲电场处理液；
步骤3：向高压脉冲电场处理液中加入pH为7.0-8.0复合酶缓冲液，加酶量2-5×104U/g，在50-60℃提取时间2-3h，冷却至室温，在3000-5000r/min离心10-20min，上清液浓缩至6-8mg/ml，即为毛蚶多糖提取液；
步骤4：向毛蚶多糖提取液中加入乙醇-(NH4)2SO4双水相体系进行萃取分离，将萃取后的下相进行透析，然后浓缩至4.6-5.8mg/ml，加入3-4倍体积无水乙醇，在2-5℃条件下静置10-15h，在6000-8000rpm下离心10-15min，将沉淀物用水复溶，冷冻干燥得毛蚶多糖纯品，其中双水相体系中乙醇、(NH4)2SO4和PBS的重量比是0.22-0.26:0.2-0.23:1，双水相体系和毛蚶多糖提取液的体积比为12-14:1。
实施例2：
从毛蚶中提取多糖的方法，其具体步骤为：
步骤1：将毛蚶鲜肉绞碎、匀浆，加入8倍毛蚶重的石油醚，在温度为40℃、功率为150W下超声波脱脂40min，过滤，滤渣经低温烘干、粉碎制成脱脂毛蚶粉，石油醚中含有石油醚重量0.036%的两性霉素和石油醚重量0.014%的5-氟胞嘧啶；
步骤2：按料液比为1:17向脱脂毛蚶粉加水中，混合均匀，通过进液泵，缓慢通过高压脉冲电场装置，高压脉冲电场电场强度为40kV/cm，脉冲数为11，即得高压脉冲电场处理液；
步骤3：向高压脉冲电场处理液中加入pH为8.0复合酶缓冲液，加酶量5×104U/g，在50℃提取时间3h，冷却至室温，在5000r/min离心12min，上清液浓缩至8mg/ml，即为毛蚶多糖提取液；
步骤4：向毛蚶多糖提取液中加入乙醇-(NH4)2SO4双水相体系进行萃取分离，将萃取后的下相进行透析，然后浓缩至4.6mg/ml，加入4倍体积无水乙醇，在2℃条件下静置15h，在8000rpm下离心11min，将沉淀物用水复溶，冷冻干燥得毛蚶多糖纯品，其中双水相体系中乙醇、(NH4)2SO4和PBS的重量比是0.26:0.2:1，双水相体系和毛蚶多糖提取液的体积比为14:1。
实施例3：
从毛蚶中提取多糖的方法，其具体步骤为：
步骤1：将毛蚶鲜肉绞碎、匀浆，加入7倍毛蚶重的石油醚，在温度为45℃、功率为120W下超声波脱脂48min，过滤，滤渣经低温烘干、粉碎制成脱脂毛蚶粉，石油醚中含有石油醚重量0.03%的两性霉素和石油醚重量0.015%的5-氟胞嘧啶；
步骤2：按料液比为1:18向脱脂毛蚶粉加水中，混合均匀，通过进液泵，缓慢通过高压脉冲电场装置，高压脉冲电场电场强度为30kV/cm，脉冲数为12，即得高压脉冲电场处理液；
步骤3：向高压脉冲电场处理液中加入pH为7.5复合酶缓冲液，加酶量3×104U/g，在55℃提取时间2.5h，冷却至室温，在4000r/min离心15min，上清液浓缩至7mg/ml，即为毛蚶多糖提取液；
步骤4：向毛蚶多糖提取液中加入乙醇-(NH4)2SO4双水相体系进行萃取分离，将萃取后的下相进行透析，然后浓缩至5.0mg/ml，加入3.5倍体积无水乙醇，在4℃条件下静置12h，在7000rpm下离心12min，将沉淀物用水复溶，冷冻干燥得毛蚶多糖纯品，其中双水相体系中乙醇、(NH4)2SO4和PBS的重量比是0.24:0.22:1，双水相体系和毛蚶多糖提取液的体积比为13:1。
本发明的操作步骤中的常规操作为本领域技术人员所熟知，在此不进行赘述。
以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明，应理解的是以上所述仅为本发明的具体实施例，并不用于限制本发明，凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、补充或类似方式替代等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.从毛蚶中提取多糖的方法，其特征在于：所述提取方法的具体步骤为：
1）将毛蚶鲜肉绞碎、匀浆，加入石油醚，超声波脱脂，过滤，滤渣经低温烘干、粉碎制成脱脂毛蚶粉；
2）向脱脂毛蚶粉加水中，混合均匀，通过进液泵，缓慢通过高压脉冲电场装置，即得高压脉冲电场处理液；
3）向高压脉冲电场处理液中加入复合酶缓冲液提取，冷却至室温，离心，将上清液浓缩，即为毛蚶多糖提取液；
4）向毛蚶多糖提取液中加入乙醇-(NH4)2SO4双水相体系进行萃取分离，将萃取后的下相进行透析，浓缩，加入无水乙醇，静置，离心，将沉淀物用水复溶，冷冻干燥得毛蚶多糖纯品。
2.根据权利要求1所述的从毛蚶中提取多糖的方法，其特征在于：所述步骤1中石油醚为毛蚶重的6-8倍，超声波脱脂温度为40-50℃、功率为100-150W、时间为40-55min。
3.根据权利要求1所述的从毛蚶中提取多糖的方法，其特征在于：所述步骤1中石油醚中含有石油醚重量0.023-0.036%的两性霉素和石油醚重量0.014-0.016%的5-氟胞嘧啶。
4.根据权利要求1所述的从毛蚶中提取多糖的方法，其特征在于：所述步骤2中脱脂毛蚶粉和水的料液比为1:16-20，高压脉冲电场电场强度为20-40kV/cm，脉冲数为10-15。
5.根据权利要求1所述的从毛蚶中提取多糖的方法，其特征在于：所述步骤3中复合酶缓冲液pH为7.0-8.0，加酶量为2-5×104U/g，提取温度为50-60℃、时间2-3h。
6.根据权利要求1所述的从毛蚶中提取多糖的方法，其特征在于：所述步骤3中复合酶为重量比为1:0.36-0.52的木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶的混合物。
7.根据权利要求1所述的从毛蚶中提取多糖的方法，其特征在于：所述步骤3中上清液浓缩至6-8mg/ml。
8.根据权利要求1所述的从毛蚶中提取多糖的方法，其特征在于：所述步骤4中乙醇-(NH4)2SO4双水相体系中乙醇、(NH4)2SO4和PBS的重量比是0.22-0.26:0.2-0.23:1，所述双水相体系和毛蚶多糖提取液的体积比为12-14:1。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110236144A (zh) * 2019-06-27 2019-09-17 江苏大学 一种营养河蚬汁及其制备方法
CN112321738A (zh) * 2020-11-02 2021-02-05 台州学院 一种抑制α-葡萄糖苷酶的青钱柳多糖制备方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104497164A (zh) * 2015-01-26 2015-04-08 吉林大学 高压脉冲电场辅助酶解提取河蚌多糖工艺
CN106986948A (zh) * 2017-03-13 2017-07-28 汕头大学 一种太平洋牡蛎中性多糖及其制备方法和应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104497164A (zh) * 2015-01-26 2015-04-08 吉林大学 高压脉冲电场辅助酶解提取河蚌多糖工艺
CN106986948A (zh) * 2017-03-13 2017-07-28 汕头大学 一种太平洋牡蛎中性多糖及其制备方法和应用

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110236144A (zh) * 2019-06-27 2019-09-17 江苏大学 一种营养河蚬汁及其制备方法
CN112321738A (zh) * 2020-11-02 2021-02-05 台州学院 一种抑制α-葡萄糖苷酶的青钱柳多糖制备方法
CN112321738B (zh) * 2020-11-02 2022-05-24 台州学院 一种抑制α-葡萄糖苷酶的青钱柳多糖制备方法

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