CN107557421B - 一种从灵芝中提取有效成分的方法 - Google Patents

一种从灵芝中提取有效成分的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种从灵芝中提取有效成分的方法，包括以下步骤：(1)取灵芝、灵芝残次品或灵芝边角料，干燥，粉碎，采用高能纳米冲击磨法技术进行破壁处理；(2)采用纤维素酶进行酶解；(3)过滤得滤液和滤渣；(4)滤渣进行碳酸氢钠辅助超声以提取灵芝酸；(5)滤液用超滤膜进行超滤处理，以分离出分子量小于1万的物质和分子量大于1万的物质；(6)对分子量小于1万的物质进行层析处理，以分离出灵芝肽和灵芝氨基酸；(7)对分子量大于1万的物质进行酶解处理，得灵芝多糖浓缩液；(8)对灵芝多糖浓缩液进行醇沉辅助分级处理，得不同分子量范围的灵芝多糖。本发明的方法，不仅可以化废为宝，而且可以减少环境污染，可推广应用。

Description

一种从灵芝中提取有效成分的方法
技术领域
本发明涉及一种从灵芝中提取有效成分(灵芝酸、灵芝多肽、氨基酸、灵芝多糖)的方法，属于灵芝提纯技术领域。
背景技术
灵芝，为灵芝科灵芝属真菌，我国现有已知灵芝属真菌66种，其中以灵芝和紫芝药用价值最高，被视为珍贵的中药材。现代研究表明灵芝营养成分丰富且营养价值高，含有人体必需的氨基酸、脂肪酸、常量及微量元素、维生素C、E、胡萝卜素及生物活性多糖等。医学研究证明灵芝除对肝炎、白血病、关节炎、糖尿病、神经衰弱等多种由细菌、病毒引起的疾病有疗效外，还对人类三大死因癌症、冠心病、脑溢血有疗效。由于野生资源有限，如何从灵芝子实体、菌丝体等中分离得到多糖，灵芝酸、灵芝肽等有效成分成为研究的热点。
灵芝多糖主要是指具有生理活性的单糖聚合体，灵芝多糖具有抗肿瘤及提高肌体免疫活性、清除自由基、抗衰老、抗血栓、抗凝血等作用，是灵芝具有扶正固本的主要有效成分。灵芝酸具有护肝排毒、抗氧化、抗菌消炎、抗病毒、抑制肝脏肿瘤细胞等活性，是灵芝药用功效的主要物质基础之一，灵芝酸呈苦味，有灵芝酸A、B、C、D、E等种类。灵芝子实体中均含有18种氨基酸，其中人体必需氨基酸的相对含量高于50％，比一般食用菌约高40％，并且作为影响一般菌类蛋白质价值的第一限制氨基酸——蛋氨酸在灵芝中平均为0.46％，高于一般食用菌。灵芝肽是分子结构介于氨基酸和蛋白质之间的一类化合物，具有有些蛋白质所没有的生理调节功能，灵芝多肽具有保肝护肝等功效。
灵芝不但是中医药中的珍品，而且已成为东方传统医药文化的一部分。随着现代医药科技的发展，灵芝也进入了食品、医药、饮料、化妆品等领域，以灵芝为原料制作的产品主要有灵芝孢子油、灵芝片、灵芝孢子粉、灵芝条、灵芝保健酒、灵芝孢子美白精华原液、灵芝手工皂等。目前在中国大陆、香港、台湾、日本、韩国、东南亚及欧美等国家和地区已掀起了一股灵芝热，关于灵芝的开发和科研层出不穷。由于灵芝有效成分的不断发现，疗效显著，得到了国际医药科研工作者的重视，目前，对灵芝的保健功效的宣传，已家喻户晓，使灵芝在保健应用中的地位有所提升。同时，由于灵芝为安全高效、无任何毒副作用的纯天然产品，将成为人们健康生活的重要保障。
发明内容
针对上述现有技术，本发明提供了一种从灵芝中提取有效成分(包括灵芝酸、灵芝多肽、氨基酸、灵芝多糖等)的方法，该方法对灵芝、灵芝边角料、残次品等进行分离纯化以提取有效成分，不仅可以化废为宝，而且可以减少环境污染。
本发明是通过以下技术方案实现的：
一种从灵芝中提取有效成分的方法，包括以下步骤：
(1)取灵芝、灵芝残次品或灵芝边角料，干燥，粉碎，采用高能纳米冲击磨法技术进行破壁处理；
干燥至水分含量小于10％；
粉碎后过100目筛；
采用高能纳米冲击磨法技术进行破壁处理的参数为：球料比为4:1(质量比)，磨球时间为5h；
(2)上述破壁处理后，采用纤维素酶进行酶解(以增加破壁效率，使破壁率达到90％以上)；所述酶解的具体方式为：向破壁处理后的灵芝中加入5～10倍量(重量倍数)的水，再加入纤维素酶(添加量为4500U/g)，在42～48℃下酶解25～35min；
(3)上述酶解后，过滤得滤液(滤液中含有可溶性的灵芝多糖、灵芝多肽和蛋白)和滤渣(含有灵芝酸)；
(4)上述的滤渣，进行碳酸氢钠辅助超声以提取灵芝酸：将滤渣加入质量浓度为6％的碳酸氢钠溶液中，滤渣与碳酸氢钠溶液的重量比为1:4～6，进行超声提取，提取时间2.5h；过滤，将滤液浓缩干燥，得灵芝酸；
(5)步骤(3)中的滤液，用超滤膜进行超滤处理，以分离出分子量小于1万的物质(多肽和氨基酸)和分子量大于1万的物质(蛋白质和多糖)；
(6)对上述得到的分子量小于1万的物质进行层析处理，以分离出灵芝肽和灵芝氨基酸；
(7)对上述得到的分子量大于1万的物质进行酶解处理：添加6000U/g的碱性蛋白酶，在48～52℃下酶解25～35min，得酶解液；向酶解液中加入2％～6％的活性炭，搅拌15～20min，过滤，得滤液，浓缩至浓度为60％～70％，得灵芝多糖浓缩液；
(8)对灵芝多糖浓缩液进行醇沉辅助分级处理(以分级出不同分子量的多糖)：向灵芝多糖浓缩液中加入乙醇或乙醇溶液，加入后乙醇的浓度为25％(体积百分数)，静置10～20小时，过滤得滤液和滤渣；向滤液中加入乙醇或乙醇溶液，加入后乙醇的浓度为45％，静置10～20小时，过滤得滤液和滤渣；向滤液中加入乙醇或乙醇溶液，加入后乙醇的浓度为65％，静置10～20小时，过滤得滤液和滤渣；向滤液中加入乙醇或乙醇溶液，加入后乙醇的浓度为85％，静置10～20小时，过滤得滤液和滤渣；收集每次的沉淀，干燥，即得不同分子量范围的灵芝多糖。
本发明的从灵芝中提取有效成分的方法，可提取出灵芝酸、灵芝多肽、氨基酸、灵芝多糖等，所得到的灵芝酸的纯度≥98％，所得到的灵芝多糖，灰分≤10％，所得到的灵芝多肽，灰分≤8％。尤其是灵芝多糖，进行了分级处理，可以得到不同分子量范围的灵芝多糖。本发明的方法，对灵芝、灵芝边角料、残次品等进行分离纯化以提取有效成分，不仅可以化废为宝，而且可以减少环境污染，可推广应用。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明。
下述实施例中所涉及的仪器、试剂、材料等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规仪器、试剂、材料等，可通过正规商业途径获得。下述实施例中所涉及的实验方法，检测方法等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规实验方法，检测方法等。
实施例1从灵芝中提取有效成分
步骤如下：
(1)取灵芝、灵芝残次品或灵芝边角料，干燥至水分含量小于10％，粉碎，过100目筛，采用高能纳米冲击磨法技术进行破壁处理，进行破壁处理的参数为：球料比为4:1，磨球时间为5h；
(2)上述破壁处理后，采用纤维素酶进行酶解，酶解的具体方式为：向破壁处理后的灵芝中加入8倍量的水，再加入纤维素酶，添加量为4500U/g，在45℃下酶解30min；
(3)上述酶解后，过滤得滤液和滤渣；
(4)上述的滤渣，进行碳酸氢钠辅助超声以提取灵芝酸：将滤渣加入质量浓度为6％的碳酸氢钠溶液中，滤渣与碳酸氢钠溶液的重量比为1:5，进行超声提取，提取时间2.5h；过滤，将滤液浓缩干燥，得灵芝酸；
(5)步骤(3)中的滤液，用超滤膜进行超滤处理，以分离出分子量小于1万的物质和分子量大于1万的物质；
(6)对上述得到的分子量小于1万的物质进行层析处理，以分离出灵芝肽和灵芝氨基酸；
(7)对上述得到的分子量大于1万的物质进行酶解处理：添加6000U/g的碱性蛋白酶，在50℃下酶解30min，得酶解液；向酶解液中加入4％的活性炭，搅拌20min，过滤，得滤液，浓缩至浓度为65％，得灵芝多糖浓缩液；
(8)对灵芝多糖浓缩液进行醇沉辅助分级处理：向灵芝多糖浓缩液中加入乙醇或乙醇溶液，加入后乙醇的浓度为25％，静置15小时，过滤得滤液和滤渣；向滤液中加入乙醇或乙醇溶液，加入后乙醇的浓度为45％，静置15小时，过滤得滤液和滤渣；向滤液中加入乙醇或乙醇溶液，加入后乙醇的浓度为65％，静置15小时，过滤得滤液和滤渣；向滤液中加入乙醇或乙醇溶液，加入后乙醇的浓度为85％，静置15小时，过滤得滤液和滤渣；收集每次的沉淀，干燥，即得不同分子量范围的灵芝多糖。
实施例2从灵芝中提取有效成分
步骤如下：
(1)取灵芝、灵芝残次品或灵芝边角料，干燥至水分含量小于10％，粉碎，过100目筛，采用高能纳米冲击磨法技术进行破壁处理，进行破壁处理的参数为：球料比为4:1，磨球时间为5h；
(2)上述破壁处理后，采用纤维素酶进行酶解，酶解的具体方式为：向破壁处理后的灵芝中加入5倍量的水，再加入纤维素酶，添加量为4500U/g，在42℃下酶解35min；
(3)上述酶解后，过滤得滤液和滤渣；
(4)上述的滤渣，进行碳酸氢钠辅助超声以提取灵芝酸：将滤渣加入质量浓度为6％的碳酸氢钠溶液中，滤渣与碳酸氢钠溶液的重量比为1:4，进行超声提取，提取时间2.5h；过滤，将滤液浓缩干燥，得灵芝酸；
(5)步骤(3)中的滤液，用超滤膜进行超滤处理，以分离出分子量小于1万的物质和分子量大于1万的物质；
(6)对上述得到的分子量小于1万的物质进行层析处理，以分离出灵芝肽和灵芝氨基酸；
(7)对上述得到的分子量大于1万的物质进行酶解处理：添加6000U/g的碱性蛋白酶，在48℃下酶解35min，得酶解液；向酶解液中加入2％的活性炭，搅拌20min，过滤，得滤液，浓缩至浓度为60％，得灵芝多糖浓缩液；
(8)对灵芝多糖浓缩液进行醇沉辅助分级处理：向灵芝多糖浓缩液中加入乙醇或乙醇溶液，加入后乙醇的浓度为25％，静置10小时，过滤得滤液和滤渣；向滤液中加入乙醇或乙醇溶液，加入后乙醇的浓度为45％，静置10小时，过滤得滤液和滤渣；向滤液中加入乙醇或乙醇溶液，加入后乙醇的浓度为65％，静置10小时，过滤得滤液和滤渣；向滤液中加入乙醇或乙醇溶液，加入后乙醇的浓度为85％，静置10小时，过滤得滤液和滤渣；收集每次的沉淀，干燥，即得不同分子量范围的灵芝多糖。
实施例3从灵芝中提取有效成分
步骤如下：
(1)取灵芝、灵芝残次品或灵芝边角料，干燥至水分含量小于10％，粉碎，过100目筛，采用高能纳米冲击磨法技术进行破壁处理，进行破壁处理的参数为：球料比为4:1，磨球时间为5h；
(2)上述破壁处理后，采用纤维素酶进行酶解，酶解的具体方式为：向破壁处理后的灵芝中加入10倍量的水，再加入纤维素酶，添加量为4500U/g，在48℃下酶解25min；
(3)上述酶解后，过滤得滤液和滤渣；
(4)上述的滤渣，进行碳酸氢钠辅助超声以提取灵芝酸：将滤渣加入质量浓度为6％的碳酸氢钠溶液中，滤渣与碳酸氢钠溶液的重量比为1:6，进行超声提取，提取时间2.5h；过滤，将滤液浓缩干燥，得灵芝酸；
(5)步骤(3)中的滤液，用超滤膜进行超滤处理，以分离出分子量小于1万的物质和分子量大于1万的物质；
(6)对上述得到的分子量小于1万的物质进行层析处理，以分离出灵芝肽和灵芝氨基酸；
(7)对上述得到的分子量大于1万的物质进行酶解处理：添加6000U/g的碱性蛋白酶，在52℃下酶解25min，得酶解液；向酶解液中加入6％的活性炭，搅拌15min，过滤，得滤液，浓缩至浓度为70％，得灵芝多糖浓缩液；
(8)对灵芝多糖浓缩液进行醇沉辅助分级处理：向灵芝多糖浓缩液中加入乙醇或乙醇溶液，加入后乙醇的浓度为25％，静置20小时，过滤得滤液和滤渣；向滤液中加入乙醇或乙醇溶液，加入后乙醇的浓度为45％，静置20小时，过滤得滤液和滤渣；向滤液中加入乙醇或乙醇溶液，加入后乙醇的浓度为65％，静置20小时，过滤得滤液和滤渣；向滤液中加入乙醇或乙醇溶液，加入后乙醇的浓度为85％，静置20小时，过滤得滤液和滤渣；收集每次的沉淀，干燥，即得不同分子量范围的灵芝多糖。
上述虽然结合实施例对本发明的具体实施方式进行了描述，但并非对本发明保护范围的限制，所属领域技术人员应该明白，在本发明的技术方案的基础上，本领域技术人员不需要付出创造性劳动即可做出的各种修改或变形仍在本发明的保护范围以内。

Claims (1)

1.一种从灵芝中提取有效成分的方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)取灵芝、灵芝残次品或灵芝边角料，干燥至水分含量小于10％，粉碎，过100目筛，采用高能纳米冲击磨法技术进行破壁处理，进行破壁处理的参数为：球料比为4:1，磨球时间为5h；
(2)上述破壁处理后，采用纤维素酶进行酶解，酶解的具体方式为：向破壁处理后的灵芝中加入5～10倍量的水，再加入纤维素酶，添加量为4500U/g，在42～48℃下酶解25～35min；
(3)上述酶解后，过滤得滤液和滤渣；
(4)上述的滤渣，进行碳酸氢钠辅助超声以提取灵芝酸：将滤渣加入质量浓度为6％的碳酸氢钠溶液中，滤渣与碳酸氢钠溶液的重量比为1:4～6，进行超声提取，提取时间2.5h；过滤，将滤液浓缩干燥，得灵芝酸；
(5)步骤(3)中的滤液，用超滤膜进行超滤处理，以分离出分子量小于1万的物质和分子量大于1万的物质；
(6)对上述得到的分子量小于1万的物质进行层析处理，以分离出灵芝肽和灵芝氨基酸；
(7)对上述得到的分子量大于1万的物质进行酶解处理：添加6000U/g的碱性蛋白酶，在48～52℃下酶解25～35min，得酶解液；向酶解液中加入2％～6％的活性炭，搅拌15～20min，过滤，得滤液，浓缩至浓度为60％～70％，得灵芝多糖浓缩液；
(8)对灵芝多糖浓缩液进行醇沉辅助分级处理：向灵芝多糖浓缩液中加入乙醇或乙醇溶液，加入后乙醇的浓度为25％，静置10～20小时，过滤得滤液和滤渣；向滤液中加入乙醇或乙醇溶液，加入后乙醇的浓度为45％，静置10～20小时，过滤得滤液和滤渣；向滤液中加入乙醇或乙醇溶液，加入后乙醇的浓度为65％，静置10～20小时，过滤得滤液和滤渣；向滤液中加入乙醇或乙醇溶液，加入后乙醇的浓度为85％，静置10～20小时，过滤得滤液和滤渣；收集每次的沉淀，干燥，即得不同分子量范围的灵芝多糖。
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