CN110075134A - 一种灵芝三萜酸的提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种灵芝三萜酸的提取方法，涉及中药有效成份提取技术领域。该包括如下步骤：将灵芝粉碎后加入水中进行恒温热水浴，加入综合酶进行酶解提取；酶解产物进行过滤，得到第一滤液和第一滤渣；第一滤渣加水，加入碱液调节体系至弱碱性，超声条件下二次提取，过滤取第二滤液，合并第一滤液与第二滤液得提取液；提取液经双水相精制得到灵芝三萜酸溶液，除去溶剂即得。该方法以水为提取溶剂在综合酶辅助下提取灵芝三萜酸，成本低，操作方便，首次提取后滤渣进行二次提取，有效提高提取效率以及原材料的利用率。提取液经双水相精制纯化，除去其中的杂质，得到的灵芝三萜酸纯度高。该方法中全程避免使用有毒害的有机溶剂，污染小，对环境友好。
Description
技术领域
本发明涉及中药有效成分提取技术领域，尤其是一种灵芝三萜酸的提取方法。
背景技术
灵芝(Ganoderma lucidum [Leys.ex Fr.]Karst)为多孔菌科(polyproraceae)灵芝属（Ganoderma）真菌赤芝（Ganoderma lucidum [Leys.ex Fr.]Karst）或紫芝（Ganoderma lucidum [Fr.]Lloyd）的干燥子实体。灵芝性温、味甘，多分布于闽、贵、云、冀、苏、吉、浙等省，在我国已有悠久的要用历史，始载于《神农本草经》，具有补中益气、扶正固本、滋补强壮之功效，是一种珍贵的中药材。
灵芝三萜酸是灵芝中的主要药效成分之一，有显著的降血脂、降血压和保护肝功能。现有技术中，灵芝三萜酸的提取一般以有机溶剂为提取溶剂，一方面大量使用有机溶剂，对环境不友好，另一方面，提取效率低，造成原材料浪费。
发明内容
本发明的发明目的在于：针对上述存在的问题，提供一种灵芝三萜酸的提取方法，该方法以水为提取溶剂，在综合酶的辅助下提取灵芝三萜酸粗品，粗品随后进行精制提纯，提取效率高、提取物纯度高。
本发明采用的技术方案如下：
一种灵芝三萜酸的提取方法，其特征在于，其包括以下步骤：
将灵芝粉碎后加入水中进行恒温热水浴，加入综合酶进行酶解提取；
酶解产物进行过滤，得到第一滤液和第一滤渣；
第一滤渣加水，并加入碱液调节体系至弱碱性，在超声条件下进行二次提取，过滤取第二滤液，合并第一滤液与第二滤液得到提取液；
提取液经双水相体系精制提纯得到灵芝三萜酸溶液，除去其中溶剂即得。
本发明的一种灵芝三萜酸的提取方法，步骤（1）中，所述综合酶包括用量比为28-35（mg/g）:4-8（mg/g）:4-6（mg/g）的蜗牛酶、果胶酶和纤维素酶。
由于采用了上述技术方案，灵芝在综合酶的辅助下以水未溶剂提取灵芝三萜酸，成本低，操作简便。首次提取后，滤渣进行二次提取，有利于提高提取效率，提高原材料的利用率。提取液经双水相体系进行精制纯化，除去其中的杂质成份，得到的灵芝三萜酸纯度高， 本方案中全程避免使用有毒害的有机溶剂，安全性高，并且污染小，对环境友好。
本发明的一种灵芝三萜酸的提取方法，恒温水浴的温度为60-80℃，时间为20-40min；灵芝与水的料液比为1:30-50（g：mL），酶解提取前调节水的pH值为5-6。
由于采用了上述技术方案，由于提高提取温度，有利于提高灵芝三萜酸的提取效率。调节溶液pH至综合酶的最适pH，有利于保持综合酶的活性。
本发明的一种灵芝三萜酸的提取方法，加入综合酶的同时，加入酶活稳定剂，所述酶活稳定剂由按质量计的壳聚糖份0.6-1、普鲁兰多糖0.5-0.8份、3-甲酰基苯硼酸0.06-0.08份、甘油1-2份组成；所用酶活稳定剂的质量与综合酶的质量之比为0.01-0.04:1。
由于采用了上述技术方案，提取问题高于综合酶的最适温度，不利于保持综合酶的活性，加入酶活稳定剂能有效保持综合酶的活性，从而保障提取效率。
本发明的一种灵芝三萜酸的提取方法，二次提取时，第一滤渣与水的料液比为1:10-20，调节体系pH为7.5-10，提取温度为40-60℃，时间为20-40min。
本发明的一种灵芝三萜酸的提取方法，超声功率为220-260W，频率为40-60kHz。
由于采用了上述技术方案，弱碱性条件下有利于灵芝三萜酸的提取，超声辅助下能进一步提高提取效率。
本发明的一种灵芝三萜酸的提取方法，萃取前，将提取液进行浓缩，浓缩至相对密度1.05-1.15（60℃），得到浓缩液。
需要说明的是，上述方案的意义为提取浓缩至60℃下的相对密度为1.10。
本发明的一种灵芝三萜酸的提取方法，所述双水相体系包括第一水相和第二水相，第一水相为乙醇，第二水相选自硫酸铵、硫酸钾、碳酸钾、磷酸钾或磷酸氢二钾中的一种；第一水相与第二水相的体积比为1:1-2。
本发明的一种灵芝三萜酸的提取方法第一水相的质量分数为20%-30%，第二水相的质量分数为15%-25%，所述第一水相与第二水相的体积比为1:1-2；浓缩液与双水相体系的体积比为1:3-5；双水相精制提纯的温度为30-40℃。
由于采用了上述技术方案，经双水相精制提纯，避免使用有毒害的有机溶剂，安全性高，污染小，同时有效提高了灵芝三萜酸的纯度，双水相的较低温度避免了灵芝三萜酸的分解。
综上所述，由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：
本发明提供了一种灵芝三萜酸的提取方法，该方法以水为提取溶剂，在综合酶的辅助下提取灵芝三萜酸，成本低，操作方便，首次提取后，滤渣进行二次提取，有利于提高提取效率，提高原材料的利用率。提取液经双水相精制纯化，除去其中的杂质，得到的灵芝三萜酸纯度高。该方法中全程避免使用有毒害的有机溶剂，污染小，对环境友好。
具体实施方式
本说明书中公开的所有特征，或公开的所有方法或过程中的步骤，除了互相排斥的特征和/或步骤以外，均可以以任何方式组合。
本说明书（包括任何附加权利要求、摘要）中公开的任一特征，除非特别叙述，均可被其他等效或具有类似目的的替代特征加以替换。即，除非特别叙述，每个特征只是一系列等效或类似特征中的一个例子而已。
实施例1
本实施例提供一种灵芝三萜酸的提取方法，该方法包括如下步骤：
步骤一：取赤芝，粉碎后加入水中进行恒温热水浴，加入综合酶进行酶解提取。
步骤二：酶解提取完成后，将酶解产物进行过滤，得到第一滤液和第一滤渣。
步骤三：取第一滤渣，加水，调节体系至弱碱性，并在超声辅助下进行二次提取，提取完成后，过滤取第二滤液；合并第一滤液与第二滤液得到提取液。
步骤四：提取液用经双水相体系进行精制提纯，到灵芝三萜酸溶液，除去其中溶剂即得。
实施例2
本实施例提供一种灵芝三萜酸的提取方法，该方法包括如下步骤：
步骤一：取赤芝，粉碎后取2g置于三角瓶中，加入ph=5柠檬酸—柠檬酸钠缓冲溶液100mL，置于60℃下恒温热水浴，分别按照28mg/g、8mg/g、4mg/g的用量加入蜗牛酶、果胶酶和纤维素酶，酶解提取20min。
步骤二：酶解提取完成后，将酶解产物进行过滤，得到第一滤液和第一滤渣。
步骤三：取第一滤渣，按照料液比为1:10加水，用NaHCO3溶液调节体系pH为7.5，在60℃，超声功率为220W，频率为60KHz的条件下水浴40min，过滤取第二滤液，合并第一滤液与第二滤液，得到提取液。
步骤四：提取液用经双水相体系进行精制提纯，到灵芝三萜酸溶液，除去其中溶剂即得。
实施例3
本实施例提供一种灵芝三萜酸的提取方法，该方法包括如下步骤：
步骤一：取赤芝，粉碎后取2g置于三角瓶中，加入ph=6柠檬酸—柠檬酸钠缓冲溶液60mL，置于70℃恒温水浴中，分别按照35mg/g、4mg/g、6mg/g的用量加入蜗牛酶、果胶酶和纤维素酶，酶解提取40min。
步骤二：酶解提取完成后，将酶解产物进行过滤，得到第一滤液和第一滤渣。
步骤三：取第一滤渣，按照料液比为1:20加水，用NaHCO3溶液调节体系pH为8.0，在40℃，超声功率为260W，频率为40KHz的条件下水浴20min，过滤取第二滤液，合并第一滤液与第二滤液，得到提取液。
步骤四：将提取液进行加热浓缩，浓缩至相对密度为1.05（60℃），得到浓缩液。取质量分数为20%的乙醇溶液，质量分数为25%的硫酸钾，二者按照体积比为1:1混合制备双水相体系。将浓缩液与双水相体系按照体积比为1:3混合，在30-40℃条件下进行精制提纯，取上相得到灵芝三萜酸溶液，灵芝三萜酸溶液经冷冻干燥得到灵芝三萜酸。
实施例4
本实施例提供一种灵芝三萜酸的提取方法，该方法包括如下步骤：
步骤一：取赤芝，粉碎后取2g置于三角瓶中，加入ph=5.5柠檬酸—柠檬酸钠缓冲溶液100mL，置于65℃恒温水浴中，分别按照30mg/g、6mg/g、5.3mg/g的用量加入蜗牛酶、果胶酶和纤维素酶，同时，按照酶活稳定剂的质量与综合酶的总质量之比为0.01:1加入酶活稳定剂，酶活稳定剂由按质量计的壳聚糖0.6份、普鲁兰多糖0.8份、3-甲酰基苯硼酸0.06份、甘油1份组成，酶解提取30min。
步骤二：酶解提取完成后，将酶解产物进行过滤，得到第一滤液和第一滤渣。
步骤三：取第一滤渣，按照料液比为1:15加水，用NaOH溶液调节体系pH为10.0，在60℃，超声功率为240W，频率为60KHz的条件下水浴30min，过滤取第二滤液，合并第一滤液与第二滤液，得到提取液。
步骤四：将提取液进行加热浓缩，浓缩至相对密度为1.15（60℃），得到浓缩液。取质量分数为30%的乙醇溶液，质量分数为15%的磷酸钾，二者按照体积比为1:2混合制备双水相体系。将浓缩液与双水相体系按照体积比为1:4混合，在30-40℃条件下进行精制提纯，取上相得到灵芝三萜酸溶液，灵芝三萜酸溶液经冷冻干燥得到灵芝三萜酸。
实施例5
本实施例提供一种灵芝三萜酸的提取方法，该方法包括如下步骤：
步骤一：取赤芝，粉碎后取2g置于三角瓶中，加入ph=5.5柠檬酸—柠檬酸钠缓冲溶液80mL，置于75℃恒温水浴中，分别按照30mg/g、6mg/g、5.3mg/g的用量加入蜗牛酶、果胶酶和纤维素酶，同时，按照酶活稳定剂的质量与综合酶的质量之比为0.02:1加入酶活稳定剂，酶活稳定剂由按质量计的壳聚糖0.8份、普鲁兰多糖0.6份、3-甲酰基苯硼酸0.06份、甘油2份组成。搅拌均匀，酶解提取30min。
步骤二：酶解提取完成后，将酶解产物进行过滤，得到第一滤液和第一滤渣。
步骤三：取第一滤渣，按照料液比为1:18加水，用NaOH溶液调节体系pH为9.0，在50℃，超声功率为250W，频率为50KHz的条件下水浴30min，过滤取第二滤液，合并第一滤液与第二滤液，得到提取液。
步骤四：将提取液进行加热浓缩，浓缩至相对密度为1.10（60℃），得到浓缩液。取质量分数为25%的乙醇溶液，质量分数为20%的硫酸铵，二者按照体积比为1:1.5混合制备双水相体系。将浓缩液与双水相体系按照体积比为1:5混合，在30-40℃条件下进行精制提纯，取上相得到灵芝三萜酸溶液，灵芝三萜酸溶液经冷冻干燥得到灵芝三萜酸。
实施例6
本实施例对本发明提供的灵芝三萜酸的提取方法的实用性进行验证。具体方法如下：
用实施例2-5提供的方法提取灵芝三萜酸，并测定灵芝三萜酸的得率（每次实验进行三次重复，取平均值），同时以周晓等（周晓,王成忠,李双,等.响应面法优化超声辅助提取灵芝三萜的工艺研究.食品工业,2015,(6):136-140）和郑士彬等（郑士彬, 韩阳, 韩静,等.响应面法优化灵芝三萜回流提取工艺[J].中南药学,2015(4):378-382.）提供的方法分别作为对比例1和对比例2，以共同考察灵芝三萜酸的得率，结果如表1所示。
表1 不同方法提取灵芝三萜酸的得率比较
| 编号 | 灵芝三萜酸得率（mg/g） |
| 实施例2 | 14.302 |
| 实施例3 | 14.125 |
| 实施例4 | 16.094 |
| 实施例5 | 16.275 |
| 对比例1 | 12.98 |
| 对比例2 | 6.91 |
由表1可知，对比实施例2-5与对比例1和2对比可知，按照实施例2-5提供的方法提取灵芝三萜酸，其得率明显高于对比例1和对比例2中的得率。同时，对比实施例2-3和实施例4-6可知，添加了酶活稳定剂能够有效稳定酶活，获得较高的灵芝三萜酸得率。
本发明并不局限于前述的具体实施方式。本发明扩展到任何在本说明书中披露的新特征或任何新的组合，以及披露的任一新的方法或过程的步骤或任何新的组合。
Claims (9)
1.一种灵芝三萜酸的提取方法，其特征在于，其包括以下步骤：
将灵芝粉碎后加入水中进行恒温热水浴，加入综合酶进行酶解提取；
酶解产物进行过滤，得到第一滤液和第一滤渣；
第一滤渣加水，并加入碱液调节体系至弱碱性，在超声条件下进行二次提取，过滤取第二滤液，合并第一滤液与第二滤液得到提取液；
提取液经双水相体系精制提纯得到灵芝三萜酸溶液，除去其中溶剂即得。
2.根据权利要求1所述的灵芝三萜酸的提取方法，其特征在于，所述综合酶包括用量比为28-35（mg/g）:4-8（mg/g）:4-6（mg/g）的蜗牛酶、果胶酶和纤维素酶。
3.根据权利要求2所述的灵芝三萜酸的提取方法，其特征在于，恒温水浴的温度为60-80℃，时间为20-40min；灵芝与水的料液比为1:30-50（g：mL），酶解提取前调节水的pH值为5-6。
4.根据权利要求3所述的灵芝三萜酸的提取方法，其特征在于，加入综合酶的同时，加入酶活稳定剂，所述酶活稳定剂由按质量计的壳聚糖份0.6-1份、普鲁兰多糖0.5-0.8份、3-甲酰基苯硼酸0.06-0.08份、甘油1-2份组成；所用酶活稳定剂的质量与综合酶的质量之比为0.01-0.04:1。
5.根据权利要求1所述的灵芝三萜酸的提取方法，其特征在于，二次提取时，第一滤渣与水的料液比为1:10-20，调节体系pH为7.5-10，提取温度为40-60℃，时间为20-40min。
6.根据权利要求5所述的灵芝三萜酸的提取方法，其特征在于，超声功率为220-260W，频率为40-60kHz。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的灵芝三萜酸的提取方法，其特征在于，萃取前，将提取液进行浓缩，浓缩至相对密度1.05-1.15（60℃），得到浓缩液。
8.根据权利要求7所述的灵芝三萜酸的提取方法，其特征在于，所述双水相体系包括第一水相和第二水相，第一水相为乙醇，第二水相选自硫酸铵、硫酸钾、碳酸钾、磷酸钾或磷酸氢二钾中的一种；第一水相与第二水相的体积比为1:1-2。
9.根据权利要求8所述的灵芝三萜酸的提取方法，其特征在于，第一水相的质量分数为20%-30%，第二水相的质量分数为15%-25%，所述第一水相与第二水相的体积比为1:1-2；浓缩液与双水相体系的体积比为1:3-5；双水相精制提纯的温度为30-40℃。
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