CN107822948B

CN107822948B - 具有晒后修护、抗氧化、美白功效的组合物及其制备方法

Info

Publication number: CN107822948B
Application number: CN201711213729.7A
Authority: CN
Inventors: 罗霞; 许晓燕; 江南; 余梦瑶; 李芳�
Original assignee: Sichuan Academy of Chinese Medicine Sciences SACMS
Current assignee: Sichuan Xianhe Biotechnology Co ltd
Priority date: 2017-11-28
Filing date: 2017-11-28
Publication date: 2020-06-23
Anticipated expiration: 2037-11-28
Also published as: CN107822948A

Abstract

本发明属于化妆品领域，具体涉及一种具有晒后修护、抗氧化、美白功效的组合物，它是以松茸、灵芝、银耳等菌类药材为主要原料制备而成。本发明组合物是由以下重量配比的原料制成：松茸0.5～5份、赤芝0.5～5份、银耳0.5～5份。本发明以松茸、赤芝、银耳三种天然菌类药材提取物为主要活性物质，制成的组合物可用于肌肤的护理，较单独采用松茸、赤芝或银耳能够明显减轻UVB诱导HaCaT细胞的光损伤，具有明显的抗皮肤光老化作用，因此具有晒后修护作用；能够有效清除DPPH自由基和羟基自由基，具有良好的抗氧化作用，从而具备明确的抗衰功效。能够明显抑制酪氨酸酶的活性，以及抑制黑色素瘤细胞中黑色素的生成，进而起到美白的效果，具有明确的美白功效。

Description

具有晒后修护、抗氧化、美白功效的组合物及其制备方法

技术领域

本发明属于化妆品领域，具体涉及一种具有晒后修护、抗氧化、美白功效的组合物，它是以松茸、灵芝、银耳等菌类药材为主要原料制备而成。

背景技术

松茸作为一种珍稀野生食药用菌，是国家二级濒危物种，是世界性稀缺濒危资源。松茸是亚洲特有种，在我国主要分布在东北地区、云贵川地区和台湾地区。松茸具有丰富的营养价值和药理作用。研究表明松茸有抗肿瘤、抗糖尿病、抗突变、防辐射、抗菌、增强免疫力、保肝、促进胃肠功能和美白护肤、延缓衰老、延年益寿等多种有益作用。近年来，松茸的美白和抗衰功效已经越来越多地在化妆品中应用。

赤芝从古代以来即有药用记载。赤芝作为拥有数千年药用历史的中国传统珍稀药材，具备很高的药用价值，经过科研机构数十年的现代药理学研究证实，赤芝对于增强人体免疫力，抗氧化、防辐射、美白肌肤、促进睡眠等方面均具有显著疗效。赤芝具有的抗神经衰老及延缓衰老，美容养颜的功效在化妆品中具有独特的魅力，其应用愈来愈广泛。

银耳营养丰富,食味鲜美,不但是营养价值很高食用菌,也是药用价值较高药用菌,是世界公认保健品。银耳多糖是银耳中的主要活性物质。现代医学和药理学的很多研究表明银耳多糖具有提高免疫力、抗衰老、美白嫩肤、降血糖和降血脂等多种生理功能。银耳多糖以其丰富的原料来源、独特的生物学功能和良好的食用安全性,近年来在天然功能性食品添加剂、医药保健品、日用化妆品等领域崭露头角。将银耳的提取物加入化妆品中具有很高的营养价值和护肤作用。

但松茸、灵芝、银耳三者提取物等为主体互配形成的组合物未见晒后修护、抗氧化、美白功效之报道。

发明内容

本发明所解决的技术问题是提供一种具有晒后修护、抗氧化、美白功效的组合物。

本发明组合物是由以下重量配比的原料制成：松茸0.5～5份、赤芝0.5～5份、银耳0.5～5份。

本发明组合物优选采用以下重量配比的原料制成：松茸0.5～2份、赤芝0.5～4份、银耳0.5～1份。

本发明组合物最优选采用以下重量配比的原料制成：松茸0.5～2份、赤芝0.5～2份、银耳0.5～1份。

本发明组合物的制备方法包括如下步骤：

A、按重量配比称取原料松茸、赤芝、银耳，粉碎，混合；

B、按以下重量配比加水提取：步骤A所得原料1份，水10～30份；提取条件为：提取温度45～75℃，提取2-4次，每次提取20～40min，过滤得提取液；

C、收集合并步骤B所得提取液，浓缩至料液比(以生药计)1：10～1：30，即得。

上述制备方法中，优选步骤B按以下重量配比加水提取：步骤A所得原料1份，水15～25份。

上述制备方法中，优选步骤B提取条件为：提取温度55～65℃，提取2-3次，每次提取25～35min，过滤得提取液。

进一步优选的，步骤B提取条件中：每次提取25～30min。

上述制备方法中，优选步骤C浓缩至料液比(以生药计)1︰15～1︰25。

进一步优选的，步骤C浓缩至料液比(以生药计)1︰20。

本发明组合物以松茸、赤芝、银耳为主要原料，采用化妆品常用辅料制备得到的化妆品具有晒后修护、抗氧化、美白功效。其中，本发明组合物中采用的化妆品常用辅料为乳酸杆菌/豆浆发酵产物、可溶性蛋白多糖、皱波角叉菜提取物、甘露糖等。本发明化妆品组合物可用于制备面膜、爽肤水、乳液、精华液、面霜、眼膜等常见化妆品。

本发明以松茸、赤芝、银耳三种天然菌类药材提取物为主要活性物质，制成的组合物可用于肌肤的护理，较单独采用松茸、赤芝或银耳能够明显减轻UVB诱导HaCaT细胞的光损伤，具有明显的抗皮肤光老化作用，因此具有晒后修护作用；能够有效清除DPPH自由基和羟基自由基，具有良好的抗氧化作用，从而具备明确的抗衰功效。能够明显抑制酪氨酸酶的活性，以及抑制黑色素瘤细胞中黑色素的生成，进而起到美白的效果，具有明确的美白功效。本发明制备的化妆品组合物按常规方法制备的化妆品也具有明确的晒后修护、抗氧化、美白功效。

具体实施方式

以下通过实施例形式的具体实施方式，本发明的上述内容再作进一步的详细说明，说明但不限制本发明。

本发明组合物的功效试验及刺激性试验

以上述由以生药重量计的松茸、赤芝、银耳制成本发明组合物，进行下述的功效试验及刺激性试验。

具体制备方法如下：

A、按重量配比称取原料松茸2份、赤芝2份、银耳1份，粉碎，混合；

B、按以下重量配比加水提取：步骤A所得原料1份，水20份；提取条件为：提取温度55～65℃，提取3次，每次提取30min，过滤得提取液；

C、收集合并步骤B所得提取液，浓缩至料液比(以生药计)1：20，即得。

1、UVB诱导的HaCaT细胞光损伤试验

松茸、赤芝、银耳分别冷冻干燥后用MEM完全培养基溶解，浓度为1mg/ml，调节pH值至7.0，0.22μm孔径滤膜过滤除菌，4℃保存，用时以MEM完全培养基稀释成实验所需浓度。将对数期HaCaT细胞接种于96孔板，37℃、5％CO₂培养箱培养，待细胞贴壁后，分为正常对照组，模型对照组，本发明松茸赤芝银耳组合物高、中、低剂量组(100μg/ml，50μg/ml，25μg/ml)，松茸组(50μg/ml)，赤芝组(50μg/ml)，银耳组(50μg/ml)，每组设6个复孔。培养24h，给予60mJ/cm²UVB照射，培养24h。采用MTT法对细胞活性进行测定，向每孔(含180μL培养基)加入20μL浓度为5mg·mL^-1的MTT，孵育4h，弃上清，加入150μLDMSO，于恒温培养振荡器内振荡10min，酶标仪测定各孔在492nm处吸光值(OD值)，计算细胞活性。取各组细胞培养液，进行LDH活性检测，按LDH试剂盒说明书进行操作。

表1各样品对HaCaT细胞活性的影响

注：与正常对照组比较，^**P<0.01；与模型对照组比较，^#P<0.05，^##P<0.01

试验结果如表1所示，从试验结果可知，与正常对照组比较，模型对照组细胞活性显著下降(P<0.01)，说明造模成功。各给药组与模型对照组比较，均能不同程度的提高细胞活性，松茸赤芝银耳组合物的高、中剂量组有显著的统计差异(P<0.01)，说明松茸赤芝银耳组合物较松茸、赤芝和银耳而言，对UVB诱导的HaCaT细胞光损伤能够提高细胞活性。

表2各样品对HaCaT细胞培养液中LDH活性的影响

试验结果如表2所示，从试验结果可知，与正常对照组比较，模型对照组细胞培养液中LDH活性显著降低(P<0.01)，说明造模成功。各给药组与模型对照组比较，均能不同程度地降低细胞培养液中LDH的活性，松茸赤芝银耳组合物的高、中剂量组有显著的统计差异(P<0.01)，说明松茸赤芝银耳组合物较松茸、赤芝和银耳而言，对UVB诱导的HaCaT细胞光损伤有修复作用。

2、DNCB诱导的小鼠DTH试验

昆明种小鼠80只，雌性各半，18～22g，随机分为正常对照组，模型对照组，松茸赤芝银耳组合物高、中、低剂量组(10ml/kg，5ml/kg，2.5ml/kg)，松茸组(10％浓度，5ml/kg)，赤芝组(10％浓度，5ml/kg)，银耳组(5ml/kg)，每组10只。用8％硫化钠酒精溶液背部、腹部脱毛(2cm×3cm)，24小时后，用5％DNCB(0.05ml/只)涂布于小鼠脱毛后的腹部皮肤致敏，次日强化1次，正常对照组涂布相同剂量生理盐水。致敏前1天开始皮肤涂布样品，每天1次，连续7天，模型对照组和正常对照组涂布生理盐水(5ml/kg)。末次给药40分钟后，用1％DNCB丙酮液(0.02ml/只)涂右耳激发过敏反应，正常对照组涂布相同剂量生理盐水，24小时后，颈椎脱臼处死小鼠，剪下双耳，用8mm打孔器分别在左右耳相同部位打下耳片，分析天平称重，以两耳片重量差为肿胀度，作为迟发型超敏反应(DTH)强度指标。

表3各样品对DNCB诱导的小鼠DTH的影响

注：与正常对照组比较，^**P<0.01；与模型对照组比较，^#P<0.05，^##P<0.01。

试验结果如表3所示，从试验结果可知，造模后模型对照组耳肿胀度增大，与正常对照组比较，差异有显著性意义(P<0.01)，说明造模成功。各给药组小鼠耳肿胀度与模型对照组比较，松茸赤芝银耳组合物的高、中剂量组有明显的统计差异(P<0.05，P<0.01)，说明松茸赤芝银耳组合物较松茸、赤芝和银耳而言，对DNCB所致小鼠迟发型超敏反应(DTH)所引起的耳廓肿胀有显著的对抗作用。

3、抗氧化能力测试试验

1)抗氧化功效检测样品制备

松茸赤芝银耳组合物烘干制干粉，粉碎；松茸粉碎；赤芝粉碎；银耳烘干制干粉，粉碎；上述细粉均过60目筛取粉末5g溶于100ml水，60℃超声提取1h后，3000g离心10min，过滤后收集滤液定容为5ml，即浓度为1g/ml，然后稀释成40-400mg/ml。

2)清除·OH自由基能力的测定

在试管中分别加入1ml pH值为7.4的磷酸盐缓冲溶液(0.05mol/L)，0.4ml 6mmol/L的邻二氮菲溶液(无水乙醇配制)，充分混匀后，加入0.4ml 6mmol/L FeSO4溶液，加入后立即混匀。然后向其中加入0.5ml一定浓度的样品溶液，混匀再加入0.5ml0.1％的H₂O₂最后补充体积至4ml同时做空白试验。另再做损伤和未损伤管。其中损伤管中加入0.5ml0.1％的H₂O₂，未损伤管不加H₂O₂，最后补充各体积至4ml。于37℃下保温1h，测量536nm下的吸光度，重复两次，计算平均值。羟自由基清除率＝(A_i-A)/(A₀-A)×100％。

A为不加样品时溶液的吸光值，A₀为不加样和H₂O₂时溶液的吸光值。注意浓度控制，先试验3-4倍浓度，再逐步稀释至最适浓度，控制温度。

3)提取物清除DPPH自由基能力的测定

取待测样品1ml和事先用95％乙醇配好的0.4mg/ml的DPPH自由基试剂1ml于10ml的玻璃试管中。样品加入后振动30s，37℃保温10min后517nm波长下测定其吸光值(A_i)。同时测定不加DPPH自由基试剂的样品空白吸光值(A_j)和加DPPH自由基试剂但不加样品的吸光值(A₀)，如下表4所示。

表4DPPH试验加样表

样品对DPPH的清除百分比I＝1-[(Ai-Aj)/A0]×100％。

试验结果：通过清除率推算出样品的EC₅₀，结果如表5所示。

表5样品清除·OH、DPPH自由基的EC₅₀试验结果

试验结果如表5所示，在清除·OH、DPPH自由基方面，松茸赤芝银耳组合物的EC₅₀均低于松茸、赤芝和银耳，说明其抗氧化效果好，具有更好的自由基清除能力。

4、松茸赤芝银耳组合物安全性试验

采用通行的化妆品原料检测中的“急性经口和急性经皮毒性试验”以及“皮肤和急性眼刺激性/腐蚀性试验”，试验结果均显示松茸赤芝银耳组合物属于无毒、无刺激性、无腐蚀性的化妆品原料，可用于化妆品中。

从上述试验结果可知，松茸赤芝银耳组合物较单一的松茸、赤芝和银耳而言，对UVB诱导HaCaT细胞的光损伤，能够提高细胞活性，具有良好的修复作用；能够降低DNCB诱导的小鼠迟发型超敏反应(DTH)，具有更好的抗过敏作用；能够有效清除DPPH自由基和羟基自由基，具有良好的抗氧化作用；说明松茸赤芝银耳组合物具有很强的晒后修护、抗氧化、美白皮肤的功效。由松茸赤芝银耳组合物为原料，可以采用其发酵物原液或发酵物粉，按常规方法制备的爽肤水、乳液、精华液、面霜、面膜、眼膜等形式的化妆品也应具有明确的晒后修护、抗氧化、美白皮肤的功效。

将上述组合物应用于实际时，可与乳酸杆菌/豆浆发酵产物、可溶性蛋白多糖、皱波角叉菜提取物、甘露糖等化妆品常见辅料配合使用。

如：

实施例1制备本发明化妆品组合物的组分的百分数含量为

松茸、赤芝、银耳组合物：15％

乳酸杆菌/豆浆发酵产物10％

可溶性蛋白多糖1％

皱波角叉菜提取物2％

甘露糖3％

余量为化妆品外用剂型的常用基质以及去离子水或纯化水或蒸馏水。

实施例2制备本发明化妆品组合物的组分的优选百分数含量为

松茸、赤芝、银耳组合物：10％

乳酸杆菌/豆浆发酵产物5％

可溶性蛋白多糖1％

皱波角叉菜提取物1％

甘露糖1％

实施例3制备本发明化妆品组合物的组分的最佳百分数含量为

松茸、赤芝、银耳组合物：5％

乳酸杆菌/豆浆发酵产物2％

可溶性蛋白多糖0.5％

皱波角叉菜提取物0.5％

甘露糖0.5％

Claims

1.具有晒后修护、抗氧化、美白功效的组合物，其特征在于：由以下重量配比的原料制成：松茸0.5～5份、赤芝0.5～5份、银耳0.5～5份；

具有晒后修护、抗氧化、美白功效的组合物的制备方法，包括如下步骤：

A、按重量配比称取原料松茸、赤芝、银耳，粉碎，混合；

C、收集合并步骤B所得提取液，浓缩至料液比，以生药按重量计为1：10～1：30，即得。

2.根据权利要求1所述的具有晒后修护、抗氧化、美白功效的组合物，其特征在于：由以下重量配比的原料制成：松茸0.5～2份、赤芝0.5～4份、银耳0.5～1份。

3.根据权利要求1所述的具有晒后修护、抗氧化、美白功效的组合物，其特征在于：由以下重量配比的原料制成：松茸0.5～2份、赤芝0.5～2份、银耳0.5～1份。

4.具有晒后修护、抗氧化、美白功效的组合物的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

A、按重量配比称取原料松茸、赤芝、银耳，粉碎，混合；

5.根据权利要求4所述的具有晒后修护、抗氧化、美白功效的组合物的制备方法，其特征在于：步骤B按以下重量配比加水提取：步骤A所得原料1份，水15～25份。

6.根据权利要求4所述的具有晒后修护、抗氧化、美白功效的组合物的制备方法，其特征在于：步骤B提取条件为：提取温度55～65℃，提取2-3次，每次提取25～35min，过滤得提取液。

7.根据权利要求6所述的具有晒后修护、抗氧化、美白功效的组合物的制备方法，其特征在于：步骤B提取条件：每次提取25～30min。

8.根据权利要求4所述的具有晒后修护、抗氧化、美白功效的组合物的制备方法，其特征在于：步骤C浓缩至料液比，以生药按重量计为1︰15～1︰25。

9.根据权利要求8所述的具有晒后修护、抗氧化、美白功效的组合物的制备方法，其特征在于：步骤C浓缩至料液比，以生药按重量计为1︰20。