CN109180829A - 一种葛根总黄酮及多糖提取物的制备方法及应用 - Google Patents
一种葛根总黄酮及多糖提取物的制备方法及应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN109180829A CN109180829A CN201810983119.3A CN201810983119A CN109180829A CN 109180829 A CN109180829 A CN 109180829A CN 201810983119 A CN201810983119 A CN 201810983119A CN 109180829 A CN109180829 A CN 109180829A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- extract
- pueraria
- preparation
- filtrate
- polyoses extract
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/0003—General processes for their isolation or fractionation, e.g. purification or extraction from biomass
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明属于生物与新医药中轻工和化工生物技术的天然产物有效成份的分离提取技术，涉及提取与应用领域，具体为提供一种葛根总黄酮及多糖提取物的制备方法及应用。本发明提取前采用木瓜蛋白酶对葛根进行处理，促进各种有效成分的浸出。酶解处理后的葛根采用高压水提‑‑醇沉法提取多糖，显著缩短提取时间，提高效率，提高多糖提取率。葛根多糖提取后的滤渣利用乙醇沉淀后收集的乙醇滤液重复利用提取黄酮类成分，显著提高了葛根的利用率，也减少有机溶剂的使用，减少成本。采用超声‑微波辅助提取滤渣，提高葛根黄酮类成分的提取率。此外，本发明制备的葛根总黄酮及多糖提取物对肿瘤细胞增殖具有抑制作用。
Description
技术领域
本发明属于生物与新医药中轻工和化工生物技术的天然产物有效成份的分离提取技术，涉及提取与应用领域，具体为一种葛根总黄酮及多糖提取物的制备方法及应用。
背景技术
葛根为豆科植物葛的块根，其性凉，味甘辛，具有发表解肌、升阳透疹、解热生津等功效。葛根黄酮是葛根资源中的一类重要功能性成分，已被证实有改善颈项强痛、缓解心绞痛、降血压、治疗视网膜动脉阻塞、增强免疫功能、降血糖、改善脑循环、改善学习记忆能力、抗肿瘤、解酒等功效。有关葛根黄酮的提取方法有微波辅助提取、溶剂提取、超高压提取等。近年来，超声和微波辅助萃取技术广泛应用于植物有效成分的提取，但葛根黄酮的超声--微波辅助技术提取研究未见报道。
目前，对葛根有效成分的研究大多集中于其黄酮类成分，对其多糖的研究相对较少。大量研究表明，多糖除有免疫调节、抗肿瘤的生物学效应外，还具有抗衰老、降血糖和抗凝血等作用，且对机体毒副作用小。因此，葛根黄酮类成分和多糖均是葛根重要的功能性成分，联合使用才能更好的发挥葛根的保健功能。
本发明的目的在于解决现有技术的不足，提供一种葛根总黄酮及多糖提取物的制备方法及应用，提高葛根提取物中总黄酮和多糖的提取率，有效发挥葛根提取物的保健功效。
为了实现上述发明目的，本发明提供如下技术方案：
（1）挑选合格的葛根进行切片、粉碎至30目得到葛根粉，备用；
（2）向葛根粉中加入木瓜蛋白酶和Tris-HCL缓冲液恒温酶解4～6h，将酶解物料投入高压反应釜中，加入水，设置磁力搅拌速率为200r/min，氮气加压提取，提取完毕后过滤，取滤液、滤渣备用；滤液在45℃条件下真空浓缩至原体积的10%～15%，加入无水乙醇，静置待沉淀完全，过滤，收集沉淀物和乙醇滤液；沉淀物在60℃条件下真空干燥0.5～1.0h，粉碎，即得葛根多糖提取物；
（3）将步骤（2）中提取后得到的滤渣投入提取罐中，加入水和步骤（2）收集的乙醇滤液，超声--微波辅助提取，过滤，取滤液；将滤液与步骤（2）收集剩余的乙醇滤液混合，在45℃条件下减压浓缩成浸膏状，在60～70℃条件下真空干燥，粉碎，即得葛根总黄酮提取物。
（4）将步骤（2）和（3）制得的葛根多糖提取物与葛根总黄酮提取物混合30min，得葛根总黄酮及多糖提取物。
优选的，所述步骤（2）中木瓜蛋白酶添加量为2.5%。
优选的，所述步骤（2）中Tris-HCL缓冲液的PH值为6。
优选的，所述步骤（2）中酶解条件为50～60℃恒温酶解。
优选的，所述步骤（2）中高压提取条件为提取压力0.7～1.0MPa，温度100～120℃，提取时间0.5～1h。
优选的，所述步骤（2）中浓缩液按体积比1:20～1:30加入无水乙醇，静置3～5h。
优选的，所述步骤（3）中提取溶剂、水和步骤（2）收集的乙醇滤液分别按料液比1:15～1:20g/ml和1:20～1:30g/ml加入提取罐中。
优选的，所述步骤（3）中超声-微波辅助提取条件为微波功率100～120W、超声功率50W，提取0.5～1h。
与现有技术相比，本专利所述的一种葛根总黄酮及多糖提取物的制备方法及应用具有以下有益效果，提取前采用木瓜蛋白酶对葛根进行处理，促进各种有效成分的浸出。酶解处理后的葛根采用高压水提--醇沉法提取多糖，显著缩短提取时间，提高提取效率，提高多糖含量。葛根多糖提取后的滤渣及醇沉后收集的乙醇滤液重复利用提取黄酮类成分，显著提高了葛根的利用率，也减少有机溶剂的使用，减少成本。采用超声-微波辅助提取滤渣，提高葛根黄酮类成分的提取率。
具体实施方式
【实施例1】
一种葛根总黄酮及多糖提取物的制备方法，包括如下步骤：
（1）挑选合格的葛根进行切片、粉碎至30目得到葛根粉，备用；
（2）向葛根粉中加入2.5%的木瓜蛋白酶和料液比为1:4g/ml的Tris-HCL缓冲液（pH=6），在50℃条件下恒温酶解6h，将酶解物料投入高压反应釜中，按料液比1:25g/ml加入水，氮气加压，设置磁力搅拌速率为200r/min，在提取压力0.7MPa，温度120℃的条件下提取0.5h，提取完毕后过滤，取滤液、滤渣备用；滤液在45℃条件下真空浓缩至原体积的10%，加入体积比为1:20的无水乙醇，静置3h待沉淀完全，过滤，收集沉淀物和乙醇滤液；沉淀物在60℃条件下真空干燥0.5，粉碎，即得葛根多糖提取物；
（3）将步骤（2）中提取后得到的滤渣投入提取罐中，按料液比1:15g/ml加入水和1:20g/ml加入步骤（2）收集的乙醇滤液，在微波功率100W、超声功率50W的条件下提取0.5h，过滤，取滤液；将滤液与步骤（2）收集剩余的乙醇滤液混合，在45℃条件下减压浓缩成浸膏状，在60℃条件下真空干燥，粉碎，即得葛根总黄酮提取物；
（4）将步骤（2）和（3）制得的葛根多糖提取物与葛根总黄酮提取物混合30min，得葛根总黄酮及多糖提取物，提取物收率29.2%。
【实施例2】
一种葛根总黄酮及多糖提取物的制备方法，包括如下步骤：
（1）挑选合格的葛根进行切片、粉碎至30目得到葛根粉，备用；
（2）向葛根粉中加入2.5%的木瓜蛋白酶和料液比为1:4g/ml的Tris-HCL缓冲液（pH=6），在60℃条件下恒温酶解4h，将酶解物料投入高压反应釜中，按料液比1:30g/ml加入水，氮气加压，设置磁力搅拌速率为200r/min，在提取压力1.0MPa，温度100℃的条件下提取1h，提取完毕后过滤，取滤液、滤渣备用；滤液在45℃条件下真空浓缩至原体积的15%，加入体积比为1:30的无水乙醇，静置5h待沉淀完全，过滤，收集沉淀物和乙醇滤液；沉淀物在60℃条件下真空干燥1.0h，粉碎，即得葛根多糖提取物；
（3）将步骤（2）中提取后得到的滤渣投入提取罐中，按料液比1:20g/ml加入水和1:30g/ml加入步骤（2）收集的乙醇滤液，在微波功率120W、超声功率50W的条件下提取1h，过滤，取滤液；将滤液与步骤（2）收集剩余的乙醇滤液混合，在45℃条件下减压浓缩成浸膏状，在70℃条件下真空干燥，粉碎，即得葛根总黄酮提取物；
（4）将步骤（2）和（3）制得的葛根多糖提取物与葛根总黄酮提取物混合30min，得葛根总黄酮及多糖提取物，提取物收率30.4%。
【实施例3】
一种葛根总黄酮及多糖提取物的制备方法，包括如下步骤：
（1）挑选合格的葛根进行切片、粉碎至30目得到葛根粉，备用；
（2）向葛根粉中加入2.5%的木瓜蛋白酶和料液比为1:4g/ml的Tris-HCL缓冲液（pH=6），在55℃条件下恒温酶解5h，将酶解物料投入高压反应釜中，按料液比1:25g/ml加入水，氮气加压，设置磁力搅拌速率为200r/min，在提取压力1.0MPa，温度120℃的条件下提取1h，提取完毕后过滤，取滤液、滤渣备用；滤液在45℃条件下真空浓缩至原体积的10%，加入体积比为1:20的无水乙醇，静置4h待沉淀完全，过滤，收集沉淀物和乙醇滤液；沉淀物在60℃条件下真空干燥0.5h，粉碎，即得葛根多糖提取物；
（3）将步骤（2）中提取后得到的滤渣投入提取罐中，按料液比1:20g/ml加入水和1:20g/ml加入步骤（2）收集的乙醇滤液，在微波功率110W、超声功率50W的条件下提取1h，过滤，取滤液；将滤液与步骤（2）收集剩余的乙醇滤液混合，在45℃条件下减压浓缩成浸膏状，在65℃条件下真空干燥，粉碎，即得葛根总黄酮提取物；
（4）将步骤（2）和（3）制得的葛根多糖提取物与葛根总黄酮提取物混合30min，得葛根总黄酮及多糖提取物，提取物收率28.6%。
实施例1-3所得葛根总黄酮及多糖提取物对肿瘤细胞增殖的抑制作用
将实施例1-3所制得的葛根总黄酮及多糖提取物分别用去离子水配置成浓度为2mg/L的溶液。
将生长良好的S180细胞（1×108･L-1）、K562细胞（5×107･L-1）分别接种于96孔培养板每孔100μL，再加入2mg/L葛根总黄酮及多糖提取物溶液（对照组加入生理盐水）20μL后于0.05 CO2、37℃、充分湿化条件下培养24 h。每孔加入5g･L-1的MTT 10μL，继续培养4h进行显色反应，以50%N,N-二甲酰胺（含20% SDS）100μL终止反应，再置0.05 CO2、37℃、充分湿化条件下16～18h后在511型全自动酶标仪测570nm波长处吸光度，计算百分抑制率。结果见下表：
表1 葛根总黄酮及多糖提取物对肿瘤细胞增殖的抑制作用（n=4）
由上表可知，葛根总黄酮及多糖提取物对动物肿瘤细胞(S180)和人白血病细胞( K562 )均有明显的抑制作用。
对于本领域的普通技术人员而言，具体实施例只是对本发明进行了示例性描述，显然本发明具体实现并不受上述方式的限制，只要采用了本发明的方法构思和技术方案进行的各种非实质性的改进，或未经改进将本发明的构思和技术方案直接应用于其它场合的，均在本发明的保护范围之内。
Claims (8)
1.一种葛根总黄酮及多糖提取物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）挑选合格的葛根进行切片、粉碎至30目得到葛根粉，备用；
（2）向葛根粉中加入木瓜蛋白酶和Tris-HCL缓冲液恒温酶解4～6h，将酶解物料投入高压反应釜中，加入水，设置磁力搅拌速率为200r/min，氮气加压提取，提取完毕后过滤，取滤液、滤渣备用；滤液在45℃条件下真空浓缩至原体积的10%～15%，加入无水乙醇，静置待沉淀完全，过滤，收集沉淀物和乙醇滤液；沉淀物在60℃条件下真空干燥0.5～1.0h，粉碎，即得葛根多糖提取物；
（3）将步骤（2）中提取后得到的滤渣投入提取罐中，加入水和步骤（2）收集的乙醇滤液，超声--微波辅助提取，过滤，取滤液；将滤液与步骤（2）收集剩余的乙醇滤液混合，在45℃条件下减压浓缩成浸膏状，在60～70℃条件下真空干燥，粉碎，即得葛根总黄酮提取物；
（4）将步骤（2）和（3）制得的葛根多糖提取物与葛根总黄酮提取物混合30min，得葛根总黄酮及多糖提取物。
2.如权利要求1所述的一种葛根总黄酮及多糖提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中木瓜蛋白酶添加量为2.5%。
3.如权利要求1所述的一种葛根总黄酮及多糖提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中Tris-HCL缓冲液的PH值为6。
4.如权利要求1所述的一种葛根总黄酮及多糖提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中酶解条件为50～60℃恒温酶解。
5.如权利要求1所述的一种葛根总黄酮及多糖提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中高压提取条件为提取压力0.7～1.0MPa，温度100～120℃，提取时间0.5～1h。
6.如权利要求1所述的一种葛根总黄酮及多糖提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中浓缩液按体积比1:20～1:30加入无水乙醇，静置3～5h。
7.如权利要求1所述的一种葛根总黄酮及多糖提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中提取溶剂、水和步骤（2）收集的乙醇滤液分别按料液比1:15～1:20g/ml和1:20～1:30g/ml加入提取罐中。
8.如权利要求1所述的一种葛根总黄酮及多糖提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中超声-微波辅助提取条件为微波功率100～120W、超声功率50W，提取0.5～1h。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810983119.3A CN109180829A (zh) | 2018-08-27 | 2018-08-27 | 一种葛根总黄酮及多糖提取物的制备方法及应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810983119.3A CN109180829A (zh) | 2018-08-27 | 2018-08-27 | 一种葛根总黄酮及多糖提取物的制备方法及应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN109180829A true CN109180829A (zh) | 2019-01-11 |
Family
ID=64916239
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201810983119.3A Pending CN109180829A (zh) | 2018-08-27 | 2018-08-27 | 一种葛根总黄酮及多糖提取物的制备方法及应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN109180829A (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111171172A (zh) * | 2020-02-19 | 2020-05-19 | 四川健腾生物技术有限公司 | 一种葛根多糖提取物的制备方法 |
| CN114404508A (zh) * | 2022-02-23 | 2022-04-29 | 吉林农业科技学院 | 一种乌拉草提取物的制备方法 |
| CN115251383A (zh) * | 2022-07-27 | 2022-11-01 | 劲牌持正堂药业有限公司 | 一种从青稞米中连续制备两种不同用途青稞米黄酮提取物的方法及应用 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1493695A (zh) * | 2003-08-22 | 2004-05-05 | 李全宏 | 葛根同步提取葛根淀粉、葛根多糖、葛根异黄酮工艺 |
| CN101020720A (zh) * | 2006-12-28 | 2007-08-22 | 宋桃森 | 葛根多糖提取工艺 |
| CN102127043A (zh) * | 2010-12-27 | 2011-07-20 | 武汉工程大学 | 一种葛根黄酮和葛根多糖的提取与分离的方法 |
| CN104387485A (zh) * | 2014-11-12 | 2015-03-04 | 绥化学院 | 一种复合酶协同高压热水浸提法提取金针菇多糖的方法 |
-
2018
- 2018-08-27 CN CN201810983119.3A patent/CN109180829A/zh active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1493695A (zh) * | 2003-08-22 | 2004-05-05 | 李全宏 | 葛根同步提取葛根淀粉、葛根多糖、葛根异黄酮工艺 |
| CN101020720A (zh) * | 2006-12-28 | 2007-08-22 | 宋桃森 | 葛根多糖提取工艺 |
| CN102127043A (zh) * | 2010-12-27 | 2011-07-20 | 武汉工程大学 | 一种葛根黄酮和葛根多糖的提取与分离的方法 |
| CN104387485A (zh) * | 2014-11-12 | 2015-03-04 | 绥化学院 | 一种复合酶协同高压热水浸提法提取金针菇多糖的方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 王广慧: "《食药用真菌中的生物活性物质及其应用研究》", 30 June 2015, 黑龙江大学出版社 * |
| 郭力: "《中药化学》", 31 August 2015, 中国医药科技出版社 * |
| 麻明友: "葛根总黄酮的超声微波双辅助萃取研究", 《食品科学》 * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111171172A (zh) * | 2020-02-19 | 2020-05-19 | 四川健腾生物技术有限公司 | 一种葛根多糖提取物的制备方法 |
| CN114404508A (zh) * | 2022-02-23 | 2022-04-29 | 吉林农业科技学院 | 一种乌拉草提取物的制备方法 |
| CN115251383A (zh) * | 2022-07-27 | 2022-11-01 | 劲牌持正堂药业有限公司 | 一种从青稞米中连续制备两种不同用途青稞米黄酮提取物的方法及应用 |
| CN115251383B (zh) * | 2022-07-27 | 2024-05-10 | 劲牌持正堂药业有限公司 | 一种从青稞米中连续制备两种不同用途青稞米黄酮提取物的方法及应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN106243172B (zh) | 一种提取黑果枸杞花色苷的方法 | |
| CN103073651B (zh) | 一种灵芝多糖的提取方法及应用 | |
| CN103059162B (zh) | 一种高效提取香菇多糖的新方法 | |
| CN109180829A (zh) | 一种葛根总黄酮及多糖提取物的制备方法及应用 | |
| CN104187682A (zh) | 一种降血糖中草药保健谷朊粉肽的制备工艺 | |
| CN105777926B (zh) | 一种从核桃中综合提取有效成分的方法 | |
| CN103271951B (zh) | 一种制备高腺苷含量的虫草制剂的方法 | |
| CN102652829A (zh) | 一种人参肽的提取方法 | |
| CN102224879A (zh) | 香菇多肽的制备方法和用途 | |
| CN103923201A (zh) | 一种海马活性糖蛋白的制备方法 | |
| CN104667021A (zh) | 一种含竹叶黄酮的复方制品及其制备方法 | |
| CN102304501A (zh) | 一种复合酶制剂及其用于提取植物多糖的应用和方法 | |
| CN102643360B (zh) | 一种纳豆多糖的提取与分离方法 | |
| CN107286264A (zh) | 大枣营养物质分离的深加工方法 | |
| CN106699916A (zh) | 一种莲藕多酚和多糖的联合提取方法 | |
| CN106727888A (zh) | 一种菊芋复方制品及其制备方法 | |
| CN110151860A (zh) | 一种黑果枸杞提取物的制备方法及其用途 | |
| CN105497109A (zh) | 利用微生物发酵技术生产黄芪总黄酮的工艺 | |
| CN104448024B (zh) | 一种高含量黄绿蜜环菌多糖的制备方法 | |
| CN101352616B (zh) | 采用膜分离集成工艺技术制备松树皮提取物的方法 | |
| CN108624636A (zh) | 一种香菇多糖的制备方法 | |
| CN106344824B (zh) | 一种雪莲培养物口服液及其制备方法 | |
| CN107674903A (zh) | 阿胶活性肽、组合物及制备方法 | |
| CN110731503A (zh) | 一种参杞蛹虫草片及其制备方法 | |
| CN111620961A (zh) | 一种从灵芝孢子粉中提取灵芝多糖的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20190111 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |