CN103540156B - 显色剂的稳定剂及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种显色剂的稳定剂及其用途，其即使在水分存在下、光照条件下也能够使10‑(羧甲基氨基羰基)‑3，7‑双(二甲基氨基)吩噻嗪盐或者其衍生物稳定化。其使用下述(1)和(2)中的至少一种化合物作为10‑(羧甲基氨基羰基)‑3，7‑双(二甲基氨基)吩噻嗪盐或者其衍生物的稳定剂。(1)具有碳原子数8～16的烷基的表面活性剂。(2)选自由下述式(I)所表示的化合物、下述式(II)所表示的化合物以及类黄酮系色素所组成的组中的至少一种色素物质。R1‑N=N‑R2···(I)

Description

显色剂的稳定剂及其用途
技术领域
本分案申请为申请号200980106670.9(国际申请号PCT／JP2009／055296)、申请日2009年3月18日的发明专利的分案申请，该发明专利申请的发明名称为“显色剂的稳定剂及其用途”。
技术领域
本发明涉及使显色剂10-(羧甲基氨基羰基)-3，7-双(二甲基氨基)吩噻嗪或者其衍生物、或其盐稳定化的稳定剂及其用途。
背景技术
作为目标成分的测定(定性、定量)方法，广泛应用利用了氧化还原反应的酶法。该方法是如下所述的方法：例如，由待测的目标成分生成氧化物质，利用氧化酶使该氧化物质与通过氧化生成显色化合物的显色剂反应，测定所产生的显色的吸光度。该方法中，吸光度的大小与所生成的显色化合物的量相当，所生成的前述显色化合物的量与所生成的氧化物质的量相当，前述氧化物质的量与目标成分的量相当。也就是说，通过检测所产生的显色(所生成的显色化合物)，能够借助这样的氧化还原反应来间接地测定目标成分。
作为这样的通过氧化而显色的显色剂，已知有通过氧化而使作为显色团的亚甲基蓝游离的10-(羧甲基氨基羰基)-3，7-双(二甲基氨基)吩噻嗪。对于该显色剂，由于亚甲基蓝不易因为再还原而退色，因而能够进行高灵敏度的检测，期望用于各种分析中。
该显色剂在如前所述的氧化还原反应中使用时，例如，由于处理性容易，因而能够以溶解于水、缓冲液等溶剂中而成的液体试剂(湿系)形式保存至使用时。另外，为了实现仅添加试样就能够开始前述氧化还原反应，以将前述显色剂固定化在多孔体等基材上的试验片(干系)形式保持至使用时。然而，该显色剂非常不稳定，如前所述，具有在由于添加酶而导致的人为的氧化还原反应开始前、即在保存时产生自然显色这样的问题。其原因被推测是由于：例如在前述湿系的情况下，前述溶剂中前述显色剂变得不稳定，在干系的情况下，由于吸收空气中的水分，因而前述显色剂变得不稳定等。另外，不论湿系还是干系，在紫外线等光照射条件下保存时，前述显色剂也会不稳定化而产生自然显色，这也被视为问题。
这样，前述显色剂自然显色时，在实际使用中，由于自然显色导致的亚甲基蓝的游离的缘故，有可能吸光度测定中的背景上升，测定精度降低。特别是，前述显色剂中，游离的亚甲基蓝具有如前述那样不易退色的性质。为此，虽然具有高灵敏度这样的优点，但另一方面，与其他显色团相比，通过自然氧化而游离的显色团(亚甲基蓝)不易退色，因而存在难以回避该影响的问题。在将前述显色剂以液体状态保存的情况下，例如，在约1天左右，确认到对测定有影响的自然显色，在约3天左右，难以用作分析用试剂(专利文献1)。
为了防止这样的自然显色导致的影响，每次测定时，需要调制前述显色剂试剂，这样操作变得复杂，成本也变高。
专利文献1：日本特开平4-27839
发明内容
因此，本发明的目的在于，提供即使在例如水分存在下或光照射的条件下也能够使10-(羧甲基氨基羰基)-3，7-双(二甲基氨基)吩噻嗪或者其衍生物、或其盐稳定化的稳定剂。
本发明的稳定剂的特征在于，其是10-(羧甲基氨基羰基)-3，7-双(二甲基氨基)吩噻嗪或者其衍生物、或其盐的稳定剂，其包含下述(1)和(2)中的至少一种化合物。
(1)具有碳原子数8～16的烷基的表面活性剂
(2)选自由下述式(I)所表示的化合物、下述式(II)所表示的化合物以及类黄酮系色素所组成的组中的至少一种色素物质
R1-N=N-R2…(I)
前述式(I)中，
R1是
R2是
R1以及R2中，
X为氢、卤素、钠或钾，各X可以相同也可以不同，
Y为氢或SO3X，各Y可以相同也可以不同，
Z为氢、甲基或甲氧基，各Z可以相同也可以不同。
前述式(II)中，
X为氢、卤素、钠或钾，各X可以相同也可以不同，
Y为氢、卤素、钠或钾，各Y可以相同也可以不同。
本发明的显色试剂的特征在于，其为包含10-(羧甲基氨基羰基)-3，7-双(二甲基氨基)吩噻嗪或者其衍生物、或其盐的显色试剂，进一步包含本发明的稳定剂。
本发明的稳定化方法，其特征在于，其为使10-(羧甲基氨基羰基)-3，7-双(二甲基氨基)吩噻嗪或者其衍生物、或其盐稳定化的方法，使10-(羧甲基氨基羰基)-3，7-双(二甲基氨基)吩噻嗪盐或其衍生物与本发明的稳定剂共存。
本发明的保存方法，其特征在于，其为10-(羧甲基氨基羰基)-3，7-双(二甲基氨基)吩噻嗪或者其衍生物、或其盐的保存方法，在通过本发明的稳定化方法使其稳定化的状态下保存。
本发明的显色反应用试剂盒的特征在于，包含10-(羧甲基氨基羰基)-3，7-双(二甲基氨基)吩噻嗪或者其衍生物、或其盐作为显色剂，进一步包含本发明的稳定剂。
本发明中，前述10-(羧甲基氨基羰基)-3，7-双(二甲基氨基)吩噻嗪或者其衍生物、或其盐只要没特别说明，则均称为“显色剂”。
本发明人等进行了深入研究，结果发现，根据前述的(1)或(2)的化合物，通过使其与前述显色剂共存，从而能够抑制前述显色剂的自然显色。为此，若使用本发明的稳定剂，则能够抑制自然显色并使前述显色剂稳定化，由此能够实现以往难以实现的前述显色剂的保存。另外，根据本发明的稳定化方法，例如，通过防止能够进行高灵敏度测定的前述显色剂的自然显色，能够提高稳定化，因而能够使前述显色剂的适用范围更宽。因此，可以说本发明在例如临床检查等中极其有用。
具体实施方式
本发明中，“前述显色剂的稳定化”是指，例如抑制前述显色剂的自然显色、以及维持前述显色剂作为显色剂的功能等。本发明的稳定剂由于能够抑制不稳定的前述显色剂的自然显色，因而还能够称为前述显色剂的自然显色抑制剂。
如前所述，本发明中，前述显色剂为10-(羧甲基氨基羰基)-3，7-双(二甲基氨基)吩噻嗪或者其衍生物、或其盐。10-(羧甲基氨基羰基)-3，7-双(二甲基氨基)吩噻嗪由下述式表示，被氧化时，亚甲基蓝游离，由此显示出显色。10-(羧甲基氨基羰基)-3，7-双(二甲基氨基)吩噻嗪盐例如可以由和光纯药以商品名DA-67获得。前述10-(羧甲基氨基羰基)-3，7-双(二甲基氨基)吩噻嗪的衍生物没有特别限定，例如，只要是将显色的亚甲基蓝或显色的亚甲基蓝衍生物通过氧化而游离即可。具体来说，可列举出例如，下述式中的氢原子取代为卤素或羟基等的衍生物等。另外，前述盐没有特别限定，作为前述盐的抗衡离子，可列举出例如钠、钾等一价金属离子。
前述显色剂通常用于利用氧化还原反应检测试样中的目标成分。前述显色剂在例如添加到反应体系时，通过前述显色剂与前述反应体系中的氧化物质的氧化还原反应，生成(游离)作为吩噻嗪衍生物色素的亚甲基蓝。该游离的亚甲基蓝的量与氧化物质的量相当，因而通过检测游离的亚甲基蓝的有无或量，从而能够判断反应体系中的氧化物质的有无或量。前述氧化物质例如可由作为检测对象的目标成分通过氧化还原反应生成。另外，目标成分为氧化物质的情况下，可以将其直接与前述显色剂反应，也可以由目标成分进一步生成氧化物质，使其与前述显色剂反应。
如前所述，本发明的稳定剂，其特征在于，其是用于使前述显色剂稳定化的稳定剂，包含下述(1)和(2)中的至少一种化合物。
(1)具有碳原子数8～16的烷基的表面活性剂
(2)选自由前述式(I)所表示的化合物、前述式(II)所表示的化合物以及类黄酮系色素所组成的组中的至少一种色素物质
本发明的稳定剂可以进一步包含例如下述(3)和(4)中的至少一种化合物。
(3)具有碳原子数12以上的烃基的季铵或其盐
(4)β-环糊精或其衍生物
推测这是因为，前述(1)的表面活性剂通过与前述显色剂的吩噻嗪骨架的疏水性键而抑制了亚甲基蓝从前述显色剂游离。另外，推测这是因为前述(2)的色素物质与吩噻嗪骨架的3位以及7位的二甲基氨基作用，抑制了亚甲基蓝从前述显色剂游离。另外，本发明不受这些机理的任何限定。
推测这是因为，前述(3)的季铵通过与前述显色剂的羰基的离子键和与前述显色剂的吩噻嗪骨架的疏水键，抑制了亚甲基蓝从前述显色剂游离。另外，还推测是因为前述(4)的β-环糊精通过与前述显色剂结合，从而抑制了亚甲基蓝从前述显色剂游离。另外，本发明不受这些机理的任何限定。
以下，分别说明前述(1)～(4)的化合物。
(1)表面活性剂
本发明中前述表面活性剂为具有碳原子数8～16的烷基的表面活性剂。前述烷基可列举出例如，直链烷基、支链烷基、环烷基等取代烷基、烷氧基烷基等，另外，还包括直链酰基、支链酰基等。作为前述表面活性剂，可列举出例如，下述式(IV)所表示的化合物等。
R-X···(IV)
前述式(IV)中，R为例如碳原子数8以上或9以上的烷基或者取代烷基、或酰基或者取代酰基。作为具体例子，可列举出碳原子数9～16的直链烷基或者直链酰基、碳原子数10～40且主链碳原子数9～16的支链烷基或者支链酰基、或由环烷基取代的直链烷基(例如，环烷基的碳原子数为3～8，除环烷基之外的直链的碳原子数为4～13)等。作为前述环烷基，可列举出例如，环己基、环戊基、环丁基等。
前述式(IV)中，X为糖残基，例如，优选单糖或二糖的残基。作为前述单糖，可列举出例如，甘露糖苷、葡糖苷、硫代葡糖苷等，作为二糖，可列举出例如，麦芽糖苷、吡喃果糖基-吡喃葡萄糖苷、硫代麦芽糖苷、蔗糖等。这些糖的结构可以为α、β、D、L中的任一种。另外，结合在糖的环式结构上的氢或OH基的氢可以被例如Na、K等一价金属、卤素等取代。另外，本发明中，介于前述R与糖残基的环式结构的结合之间的原子(例如，-O-、-S-等)为糖残基的组成部分。
作为本发明中的前述表面活性剂的具体例子，例如，可列举出：
正十二烷基-β-D-麦芽糖苷(正十二烷基-β-D-吡喃麦芽糖苷)、
6-环己基己基-β-D-麦芽糖苷、
蔗糖单月桂酸酯(β-D-吡喃果糖基-α-D-吡喃葡萄糖苷单月桂酸酯)、
正癸基-β-D-麦芽糖苷(正癸基-β-D-吡喃麦芽糖苷)、
正壬基-β-D-硫代麦芽糖苷(正壬基-β-D-硫代吡喃麦芽糖苷)、
5-环己基戊基-β-D-麦芽糖苷、
十一烷基-β-D-麦芽糖苷、
正十二烷基-α-D-麦芽糖苷、
十六烷基-β-D-麦芽糖苷、以及
3-氧杂十三烷基-α-D-甘露糖苷等。这些化合物的化学式如下所示。本发明中，前述表面活性剂可以为下述任一种，也可以组合使用两种以上。
这些中，优选前述式(IV)中的R(烷基链或酰基)的碳原子数为12以上的、正十二烷基-β-D-麦芽糖苷、蔗糖单月桂酸酯、十六烷基-β-D-麦芽糖苷等。另外，在R的碳原子数相同的情况下(例如，碳原子数相同的烷基或酰基)，前述R优选酰基。作为前述表面活性剂，优选例如，正十二烷基-β-D-麦芽糖苷(正十二烷基-β-D-吡喃麦芽糖苷)。
(2)色素物质
本发明中的化合物(2)为选自由前述式(I)所表示的化合物、前述式(II)所表示的化合物以及类黄酮系色素所组成的组中的至少一种色素物质。
作为前述色素物质，可以为例如前述式(I)所表示的化合物、前述(II)所表示的化合物以及前述类黄酮系色素中的任一种，也可以组合使用任两种，还可以组合使用全部三种。
R1-N=N-R2···(I)
前述式(I)中，
R1是
R2是
R1以及R2中，
X为氢、卤素、一价金属(例如，钠或钾)，各X可以相同也可以不同，
Y为氢或SO3X，前述Y可以相同也可以不同，
Z为氢、甲基或甲氧基，各Z可以相同也可以不同。另外，各式中，氢可以被取代为卤素、一价金属(钠或钾等)等(以下皆同)。
作为
可列举出例如，
等。
作为可列举出例如，
等。
作为可列举出例如，
等。
作为前述式(I)所表示的色素物质的具体例子，可列举出例如以下化合物。
前述式(2)中，R2优选例如下述式(5)，前述式(3)中，R2优选例如下述式(6)，前述式(4)中，Z优选各自为例如甲基、甲氧基，R2优选为下述式(5)。
作为前述式(I)所表示的色素物质，可列举出例如，
5-羟基-1-(4-磺酸苯基)-4-(4-磺酸苯基偶氮)吡唑-3-羧酸或其盐(例如，三钠盐)、
6-羟基-5-(4-磺酸苯基偶氮)-2-萘磺酸或其盐(例如，二钠盐)、
3-羟基-4-(4-磺酸萘基偶氮)-2，7-萘二磺酸或其盐(例如，三钠盐)、
6-羟基-5-[(2-甲氧基-5-甲基-4-磺酸苯基)二氮烯基]萘-2-磺酸或其盐(例如，二钠盐)、
7-羟基-8-(4-磺酸萘基偶氮)-1，3-萘二磺酸或者其盐(例如，三钠盐)或其水合物(例如，11/2水合物)等。作为这些盐、水合物可以使用例如市售品，这些色素物质可以是食用的也可以是非食用的。作为具体例子，可列举出以下物质。
黄色3号
别称：柠檬黄(Tartrazine)、FD&C Yellow No.5
化学名：5-羟基-1-(4-磺酸苯基)-4-[(4-磺酸苯基)二氮烯基]-1H-吡唑-3-羧酸三钠盐
黄色5号
另别称：Sunset Yellow FCF
化学名：6-羟基-5-(4-磺酸苯基偶氮)-2-萘-2-磺酸二钠盐
红色2号
别称：Amaranth(苋菜红)
化学名：3-羟基-4-(4-磺酸-1-萘基偶氮)-2，7-萘二磺酸三钠
红色40号
别称：Allura Red AC(诱惑红)
化学名：6-羟基-5-[(2-甲氧基-5-甲基-4-磺酸苯基)二氮烯基]萘-2-磺酸二钠
红色102号
别称：New Coccine(新胭脂红)
化学名：7-羟基-8-(4-磺酸-1-萘基偶氮)-1，3-萘二磺酸三钠1·1/2水合物
前述式(I)所表示的色素物质可以使用例如任一种，也可以组合使用两种以上。
前述式(II)中，
X为氢、卤素、一价金属(例如，钠或钾)，各X可以相同也可以不同，
Y为氢、卤素、一价金属(例如，钠或钾)，各Y可以相同也可以不同。
另外，作为前述式(II)所表示的色素物质，可列举出例如，
3’，6’-二羟基-2’，4’，5’，7’-四碘螺[异苯并呋喃-1(3H)，9’-(9H)呫吨]-3-酮或者其盐(例如，二钠盐)或水合物(例如，一水合物)、
3’，6’-二羟基-2’，4’，5’，7’-四溴-4，5，6，7，-四氯螺[异苯并呋喃-1(3H)，9’-[9H]呫吨]-3-酮或其盐(例如，二钠盐)、
4，5，6，7-四氯-3’，6’-二羟基-2’，4’，5’，7’-四碘螺[异苯并呋喃-1(3H)，9’-[9H]呫吨]-3-酮或其盐(例如，二钠盐)、
2，4，5，7-四溴-3，6-二羟基呫吨-9-螺环-1’-3H-异苯并呋喃-3’-酮或其盐(例如，二钠盐)、
3，6-二羟基呫吨-9-螺环-1′-3’H-异苯并呋喃-3’-酮或其盐(例如，二钠盐)等。
作为这些盐、水合物，可以使用例如市售品，这些色素物质可以是食用的，也可以是非食用的。作为具体例子，可列举出以下物质。
红色3号
别称：Erythrosine(赤藓红)
化学名：2’，4’，5’，7’-四碘-3’，6’-二羟基呫吨-9-螺环-1‘-3H-异苯并呋喃-3’-酮二钠盐
红色104号
别称：红色104-1号、Phloxine B(焰红染料B)
化学名：2，4，5，7-四溴-3，6-二羟基呫吨-9-螺环-1’-4’，5’，6’，7’-四氯-3’H-异苯并呋喃-3’-酮二钠盐
红色105号
别称：红色105—1号、Rose Bengal(玫瑰红)
化学名：2，4，5，7-四碘-3，6-二羟基呫吨-9-螺环-1’-4’，5’，6’，7’-四氯-3’H-异苯并呋喃-3’-酮二钾盐
红色230-1号
别称：曙红、酸性红87
化学名：2’，4’，5’，7’-四溴-3’，6’-二羟基呫吨-9-螺环-1’-3H-异苯并呋喃-3’-酮二钠盐
黄色202—1号
别称：荧光素钠
化学名：3，6-二羟基呫吨-9-螺环-1′-3’H-异苯并呋喃-3’-酮二钠盐
前述式(II)所表示的色素物质例如可使用任一种，也可以组合使用两种以上。
作为前述类黄酮系色素，可列举出例如，类黄酮、类黄酮的聚合物等。作为前述类黄酮，可列举出例如市售的柿色素(来自柿(Diospyros kaki THUMB.)的柿色素(Japanesepersimmon color))等。前述柿色素通常以由果实提取以类黄酮作为主要成分。另外，作为前述类黄酮的聚合物，可列举出例如，市售的可可色素(来自可可(Theobroma cacaoLINNE.)的可可色素(Cacao color))等。前述可可色素通常以作为前述类黄酮的一种的花色苷的聚合物作为主要成分。前述花色苷的聚合物例如如下述式所示。下述式中，n为聚合度。n没有特别限定，例如为5以上、优选6以上。n的上限没有特别限定。R为配糖体半乳糖醛酸。
前述类黄酮色素例如可使用任一种，也可以组合使用两种以上。
本发明中，在例如具有在光照射的条件下保存前述显色剂的可能性的情况下，特别优选前述色素物质。在使该色素物质与前述显色剂共存的情况下，认为由于前述色素物质的存在，例如对显色剂的光的照射被遮蔽。前述显色剂对光不稳定，由于光照射而可能产生自然显色，因此，在考虑到这样的条件下的保存时，优选将前述色素物质用作本发明的稳定剂。
(3)季铵或其盐
如前所述，本发明中的化合物(3)为具有碳原子数12以上的烃基的季铵或其盐。以下，称为“季铵”。
前述烃基的碳原子数为12以上即可，可列举出例如13、14、15、16、17、18、19或20等。前述碳原子数优选为14以上、16以上、17以上，其上限没有限定。作为前述碳原子数的范围，可列举出例如，14～18的范围、16～18的范围。
作为前述季铵，例如与N连接的4个烃基中的任一个可以为前述碳原子数的烃基。作为前述季铵，例如可以是4个烃基中只有1个为前述碳原子数的烃基，也可以2个以上为前述碳原子数的烃基，还可以是3以上为前述碳原子数的烃基，也可以是全部为前述碳原子数的烃基。其中，优选4个烃基中的1个为前述碳原子数的烃基的季铵。
作为前述烃基，可列举出例如，直链或支链的烷基、环状烷基、直链或者支链或环状的具有取代基的烷基或具有取代基的芳基等。前述取代基例如可以相互相同也可以不同。作为前述取代基，可列举出例如，卤素、直链或者支链的烷基、苯基、羟基、直链或者支链的C1～C6烷氧基等。作为前述芳基，可列举出例如苯基等。作为前述环状烷基，可列举出例如环己基等。另外，还可以代替它们为例如直链或支链的烷基羰基等。
作为季铵的具体例子，可列举出例如，
苄索铵(benzethonium)、
硬脂基三甲基铵、
鲸蜡基三甲基铵、
十六烷基三甲基铵、
苯扎铵(benzalkonium)、
苄基二甲基十四烷基铵、
肉豆蔻基三甲基铵、
月桂基三甲基铵
十二烷基三甲基铵、或、
椰油胺乙酸盐等。
另外，作为前述季铵的盐，可列举出例如，氯化物盐、溴化物盐等，其中优选氯化物盐或溴化物盐。作为这些的具体例子，可列举出例如，苄索氯铵、硬脂基三甲基氯化铵、鲸蜡基三甲基氯化铵、十六烷基三甲基氯化铵、苯扎氯铵、苄基二甲基十四烷基氯化铵、肉豆蔻基三甲基氯化铵、月桂基三甲基氯化铵、十二烷基三甲基氯化铵、氯化椰油胺乙酸盐、苄索溴铵、硬脂基三甲基溴化铵、鲸蜡基三甲基溴化铵、十六烷基三甲基溴化铵、苯扎溴铵、苄基二甲基十四烷基溴化铵、肉豆蔻基三甲基溴化铵、月桂基三甲基溴化铵、十二烷基三甲基溴化铵、溴化椰油胺乙酸盐等。
这些化合物可以使用任一种，也可以使用两种以上。另外，具有前述碳原子数的烃基的季铵可以与例如具有不同碳原子数的烃基的胺组合使用，也可以与具有碳原子数11以下的烃基的季铵等组合使用。
(4)β-环糊精或其衍生物
如前所述，本发明中的化合物(4)为β-环糊精或其衍生物(以下，称为“β-环糊精”)。作为前述衍生物，可列举出例如，
麦芽糖基-β-环糊精、
葡萄糖基-β-环糊精、
羧甲基-β-环糊精、
二甲基-β-环糊精、
单氨基-β-环糊精、
2-羟丙基-β-环糊精、
甲基-β-环糊精、
葡糖醛酸基葡萄糖基-β-环糊精、
七(2，6-二-O-甲基)-β-环糊精、
三-O-甲基-β-环糊精、
琥珀酰-β-环糊精、
磺丙基-β-环糊精、
琥珀酰羟丙基-β-环糊精、
三乙酰基-β-环糊精等。本发明中，前述β-环糊精可以使用一种也可以组合使用两种以上。
本发明中的各化合物例如可以为其互变异构体或立体异构体(例：几何异构体、构象异构体以及光学异构体等)等异构体。另外，前述各化合物在盐的情况下，抗衡离子没有特别限定，可列举出例如，六氟化磷酸离子(PF6 -)、四氟化硼酸离子(BF4 -)、氢氧化物离子(OH-)、醋酸离子、碳酸离子、磷酸离子、硫酸离子、硝酸离子、卤素化物离子、次卤酸离子、亚卤酸离子、卤酸离子、高卤酸离子、三氟甲磺酸离子(OSO2CF3 -)、四(五氟苯基)硼酸离子(B(C6F5)4 -)等阴离子(anion)。作为前述卤素化物离子，可列举出例如，氟化物离子(F-)、氯化物离子(Cl-)、溴化物离子(Br-)、碘化物离子(I-)等。作为前述次亚卤酸离子，可列举出例如，次氟酸离子、次氯酸离子、次溴酸离子、次碘酸离子等。作为前述亚卤酸离子，可列举出例如，亚氟酸离子、亚氯酸离子、亚溴酸离子、亚碘酸离子等。作为前述卤酸离子，可列举出例如，氟酸离子、氯酸离子、溴酸离子、碘酸离子等。作为前述高卤酸离子，可列举出例如，高氟酸离子、高氯酸离子、高溴酸离子、高碘酸离子等。
本发明中，“卤素”是指任意的卤素元素。作为前述卤素，可列举出例如，氟、氯、溴以及碘等。另外，本发明中，“烷基”如前所述，只要是不限定碳原子数则没有特别限定。作为前述烷基，可列举出例如，甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基、十三烷基、十四烷基、十五烷基、十六烷基、十七烷基、十八烷基、十九烷基、二十烷基等。另外，本发明中，在取代基等存在异构体的情况下，没有特别限定，可以是任意异构体。例如，在简称为“丙基”时，可以是正丙基和异丙基中的任一种。例如，在简称为“丁基”的情况下，可以是正丁基、异丁基、仲丁基以及叔丁基中的任一种。
本发明的稳定剂可以仅含有例如前述(1)和(2)的化合物中的任一种，也可以含有两者。另外，本发明的稳定剂可以进一步含有例如前述(3)和(4)中的至少一种，也可以含有两者。在本发明的稳定剂含有例如前述(1)～(4)的化合物中的两种以上的情况下，其组合没有特别限定，可列举出例如，前述(2)与(3)的组合、前述(2)～(4)的组合、前述(1)～(3)的组合、前述(1)～(4)的组合等。作为前述(2)与(3)的组合，可例示出例如，柠檬黄与十六烷基三甲基铵和十二烷基十六烷基氯化铵中的至少一种的组合。另外，作为前述(2)～(4)的组合，可列举出例如，十六烷基三甲基铵和十二烷基十六烷基氯化铵中的至少一种与柠檬黄、选自由2-羟丙基-β-环糊精、β-环糊精、麦芽糖基-β-环糊精、葡萄糖基-β-环糊精以及葡糖醛酸基葡萄糖基-β-环糊精所组成的组中的至少一种的组合。另外，作为前述(1)～(3)的组合，可列举出例如，正十二烷基-α，β-麦芽糖苷、柠檬黄、和十六烷基三甲基铵的组合。作为前述(1)～(4)的组合，可列举出例如，正十二烷基-α，β-D-麦芽糖苷、柠檬黄、与十六烷基三甲基铵和十二烷基三甲基铵中的至少一种、以及2-羟丙基-β-环糊精的组合等。
前述稳定剂的形态没有特别限定，例如，可以是液体(湿系)也可以使干燥体(干系)。
本发明的稳定剂的使用方法没有特别限定，与前述显色剂共存即可，特别是，在将前述显色剂保存至使用时，优选与前述显色剂共存。在将前述显色剂以湿系的状态保存的情况下，例如，向添加前述显色剂的溶剂中加入本发明的稳定剂即可。另外，前述显色剂和前述稳定剂向前述溶剂中的添加顺序没有特别限定。另外，在将前述显色剂以干系状态保存的情况下，例如，可以混合干系的前述显色剂与干系的稳定剂，也可以通过干燥包含前述显色剂和稳定剂的溶剂，从而制成干系。另外，可以与如后述的本发明的显色试剂同样地使用本发明的稳定剂。
本发明的稳定剂还可以包含前述(3)和(4)的化合物来代替前述(1)和(2)中的至少一种化合物。在这种情况下，除了前述(3)和(4)的化合物以外，还可以包含例如前述(1)和(2)中的至少一种化合物。另外，除了使用前述(3)和(4)的化合物以外，与前述相同。
<显色试剂>
本发明的显色试剂，其特征在于，其为可保存前述显色剂的试剂，其包含前述显色剂和本发明的稳定剂。
本发明的显色试剂还可以包含前述(1)和(2)中的至少一种化合物作为前述稳定剂。具体来说，可以包含例如前述(1)和(2)的化合物中任意一种，也可以包含两者的化合物。本发明的显色试剂还可以包含前述(3)和(4)中的任一种，也可以包含两者。另外，前述(1)～(4)的化合物可以各自是一种，例如也可以包含两种以上的碳原子数或取代基不同的化合物。
在本发明的显色试剂含有例如前述(1)～(4)的化合物中的两种以上的情况下，其组合没有特别限定，可列举出例如，前述(2)和(3)的组合、前述(2)～(4)的组合、前述(1)～(3)的组合、前述(1)～(4)的组合等。
本发明的显色试剂中，本发明的稳定剂相对于前述显色剂的添加比例没有特别限定，前述显色剂(A)与前述稳定剂(B)的摩尔比(A：B)优选为例如，1：1～1：1000000的范围。
作为具体例子，前述显色剂(A)与前述(1)的表面活性剂(B1)的摩尔比(A：B1)优选为例如1：2～1：50000的范围。前述显色剂(A)与前述(2)的色素物质(B2)的摩尔比(A：B2)优选为例如1：1～1：100000的范围，更优选为1：2～1：50000的范围。
前述显色剂(A)与前述(3)的季铵(B3)的摩尔比(A：B3)优选为例如1：1～1：100000的范围，更优选为1：2～1：50000的范围。前述显色剂(A)与前述(4)的β-环糊精(B4)的摩尔比(A：B4)优选为例如1：1～1：100000的范围，更优选为1：2～1：50000的范围。
在前述显色试剂为干燥试剂的情况下，可列举出例如，前述显色剂与前述稳定剂共存的干燥体等。对于前述干燥试剂，这样的干系的显色试剂例如可以在将前述显色剂和本发明的稳定剂溶解等在前述那样的溶剂中后，除去溶剂，从而调制。前述干系的显色试剂例如为粉末状，可以容纳在容器等中，例如，可以为被载体等承载的状态。作为后者，可列举出例如试验用芯片等。具体来说，在前述试验用芯片的情况下，可以通过如下方式调制：例如，将前述显色剂和前述稳定剂溶解等在前述溶剂中，准备前述液体试剂，将其加样到前述芯片基板的期望的区域中，之后通过除去前述溶剂，从而调制。前述试验用芯片的基板没有特别限定，可列举出例如，滤纸、多孔体、塑料制基板等。
本发明的显色试剂还可以与例如乙二胺四醋酸(EDTA)、二乙烯三胺五醋酸(DTPA)以及反式-1，2-二氨基环己烷-N，N，N’，N’-四醋酸(CyDTA)、O，O’-双(2-氨乙基)乙二醇-N，N，N’，N’-四醋酸(GEDTA)或氨三醋酸(NTA)等螯合剂、叠氮化钠等共存。通过使这些物质共存，可以进一步使自然显色稳定化。另外，这些物质可以为一种也可以共存两种以上。
另外，本发明的显色试剂可以根据用途在例如前述显色剂的显色反应(氧化还原反应)中适当含有必要的添加剂。作为前述添加剂，可列举出例如，过氧化物酶(POD)、氧化酶、蛋白酶等酶、缓冲剂、前述酶的稳定剂、前述那样的溶剂等。
前述显色试剂的形态没有特别限定，例如，可以为液体试剂(湿系)，也可以为干燥试剂(干系)。
在前述显色试剂为液体试剂的情况下，前述显色试剂中的前述显色剂的浓度为例如1～10000μmol／L的范围，优选5～1000μmol／L的范围。另外，本发明的显色试剂中的前述显色剂以及稳定剂的浓度没有特别限定，例如，在与试样、反应体系等混合时，还可以设定为需要的浓度。通过将前述显色试剂添加到例如反应体系中，从而优选稀释到例如1.2～100倍，更优选2～20倍。
在前述显色试剂为液体试剂的情况下，例如，可以通过将前述显色剂和前述稳定剂溶解、悬浊或分散(以下，还称为“溶解等”)到溶剂中而调制。前述溶剂没有特别限定，可列举出例如，水、缓冲液等水系溶剂等，另外，还可以使用水系溶剂与有机溶剂的混合溶剂等。作为前述缓冲液，可以使用通常的缓冲液，可列举出例如，Tris缓冲液、Tris-HCl缓冲液、MES缓冲液、MES-Tris缓冲液、MOPS缓冲液、MOPS-Tris缓冲液、ADA缓冲液、Bis-Tris缓冲液、PIPES缓冲液、磷酸缓冲液、柠檬酸缓冲液、HEPES缓冲液、TAPS缓冲液、双甘氨肽缓冲液、甘氨酰胺缓冲液等。前述缓冲液的浓度为例如1～500mmol／L的范围，优选为5～100mmol／L的范围。前述缓冲液中，例如，在具有羧基、磺基等的酸的情况下，优选使用显示比使用时的pH更低的pKa的缓冲液。另外，前述缓冲液中，例如，在具有氨基等的碱的情况下，优选使用显示比使用时的pH更高pKa的缓冲液。
前述显色试剂的pH没有特别限定，例如为pH3～12优选pH4～10，更优选pH5～9。
如前述那样，通过使本发明的稳定剂共存，可以使前述显色剂稳定化。因此，根据本发明的显色试剂，可以稳定保存本发明的显色剂直到使用时。保存时期没有特别限定，例如，即使10天以上，也能够抑制自然显色，比以往更稳定地保存前述显色剂。保存时期优选20年以内、更优选4年以内。另外，在不共存本发明的稳定剂而作为液体的显色试剂保存的情况下，例如，在10天左右，约20～90％产生自然显色。前述本发明的显色试剂的保存温度没有特别限定，例如为40℃以下，优选0～30℃、更优选2～10℃。
另外，如前所述，本发明的显色试剂在保存时，即使前述稳定剂抑制了氧化还原反应所导致的显色，也如前所述在使用时由于添加被检体等而使前述稳定剂的浓度降低，因此能充分避免对使用时的显色的抑制。
另外，本发明的显色试剂可以包含前述(3)和(4)的化合物来代替前述(1)和(2)中的至少一种化合物。在这种情况下，除了前述(3)和(4)的化合物以外，还可以包含例如前述(1)和(2)中的至少一种化合物。另外，除了使用前述(3)和(4)的化合物以外，与前述同样。
<稳定化方法>
本发明的稳定化方法，其特征在于，其为前述显色剂的稳定化方法，使前述显色剂与前述稳定剂共存。
使前述显色剂与前述稳定剂共存的形态没有任何限定，如前述那样，可以以液体状态共存，也可以以干燥状态共存。另外，前述显色剂与前述稳定剂的添加比例等与前述同样。另外，本发明的稳定化方法例如可以通过使用前述本发明的稳定剂或本发明的显色试剂来实现，具体方法与前述同样。
<保存方法>
如前述那样，本发明的保存方法，其特征在于，其是前述显色剂的保存方法，将显色剂在通过本发明的稳定化方法而稳定化的状态下保存。本发明中，只要在将本发明的稳定剂和显色剂共存的状态下保存即可，其他的形态、条件没有任何限定。另外，前述两者的添加比例、保存天数、保存温度等也如前所述。
<显色反应用试剂盒>
本发明的显色反应用试剂盒，其特征在于，其为包含前述显色剂的试剂盒，其进一步包含本发明的稳定剂。
如前所述，本发明的显色反应用试剂盒中，可以以液体状态或干燥状态混合前述显色剂与前述稳定剂。另外，本发明的显色反应用试剂盒中，前述显色剂和前述稳定剂可以容纳在各自的容器中。在这样的情况下，前述显色剂例如优选为干燥状态。并且，例如，通过将前述干燥状态的显色剂与前述稳定剂溶解等在溶剂中，能够以液体试剂的形式保存前述显色剂。
作为用于前述显色剂的显色反应中的试剂，没有特别限定。作为具体例子，例如，由目标的检测物质产生过氧化氢，将前述过氧化氢和前述显色剂作为底物进行氧化还原反应(显色反应)的情况优选包含过氧化物酶(POD)等氧化酶等。另外，用于由前述目标检测物质产生过氧化氢的各种酶可以包含例如蛋白酶、氧化酶、还原酶等。除了之外，作为前述试剂，可列举出例如，缓冲剂、缓冲液等溶剂等。
<目标成分的测定方法>
本发明的测定方法，其特征在于，其为通过亚甲基蓝的检测来测定试样中的目标成分的方法，其包括下述(A)～(E)工序。
(A)由前述试样中的前述目标成分产生氧化物质的工序
(B)向前述试样中添加本发明的显色试剂的工序
(C)通过前述氧化物质与前述显色试剂中的显色剂的氧化还原反应，由前述显色剂使亚甲基蓝游离的工序
(D)检测游离的亚甲基蓝，测定前述亚甲基蓝的生成的有无或生成量的工序
(E)由前述测定结果确定前述试样中的目标成分的有无或量的工序
本发明的特征在于，使前述显色剂与本发明的稳定剂共存，除此之外的工序、条件没有任何限定。也就是说，其能够适用于所有包含如下工序的测定方法(例如，定性方法或定量方法等)：由前述显色剂使亚甲基蓝游离，检测游离的亚甲基蓝的工序。为此，本发明优选适用于如下方法等：例如，通过氧化还原反应产生亚甲基蓝，测定亚甲基蓝的有无或其量的增减，从而对目标成分进行定性或定量。另外，前述显色试剂的添加顺序也没有特别限定，例如，可以在前述(A)工序的前或后任意时刻。
如前所述，前述反应体系中的亚甲基蓝可以通过吸光度测定进行。通常，亚甲基蓝的极大吸收波长为例如约660～670nm(例如，约666nm)，检测波长为例如600～680nm的范围。另外，使用前述(2)的色素物质作为本发明的稳定剂，前述反应体系中前述显色剂与前述色素物质共存的情况下，例如，可以将亚甲基蓝的光谱位移到长波长侧。为此，在使用前述(2)的色素物质时，例如，可以在670nm以上、680nm以上、690nm以上进行测定。作为具体波长范围，例如为610～730nm，优选650～715nm，更优选660～700nm。
本发明中的目标成分例如只要能够利用显色剂进行测定，则其种类没有任何限定。作为前述目标成分，可列举出例如，能够由前述目标成分通过氧化还原反应产生氧化物质的物质等。另外，前述目标成分自身为氧化物质的情况下，如前所述，可以由前述目标成分进一步产生氧化物质，也可以例如省略前述(A)工序，在前述(B)工序中，使作为氧化物质的目标成分本身与显色剂反应。作为前述目标成分的具体例子，可列举出例如，糖化血红蛋白(Hb)、糖化白蛋白等糖化蛋白质、糖肽、糖化氨基酸、葡萄糖、尿酸、胆固醇、肌酐、肌氨酸、甘油等。
以下，通过实施例对本发明进一步具体说明，但本发明并不限于这些。
实施例1
前述显色剂通常显示出易被光分解的性质。因此，对于前述显色剂，确认到：在色素物质的共存下，利用前述色素物质，使由亚甲基蓝的自然产生引起的背景上升稳定化(抑制)。作为前述显色剂，使用和光纯药公司制的商品名DA-67。
[表1]
首先，调制前述第2试剂，在曝露于光的状态下在冰箱内保存30天。前述第2试剂中，作为前述色素物质，使用柠檬黄(Kishida Chemical Co.，Ltd.制)或食品添加剂食用黄色4号(东京化成公司制)。前述色素物质均为前述式(I)所表示的前述(2)的色素物质。
接着，调制前述第1试剂，将前述第1试剂78μL与纯化水13μL混合，在37℃下进行5分钟孵育后，添加保存后的前述第2试剂19.5μL。并且，通过生化学自动分析装置(商品名JCA-BM8：日本电子公司制)测定即将添加前述第2试剂前的反应液在波长694nm的吸光度(A0’)与添加前述第2试剂5分钟后反应液在波长694nm的吸光度(A5’)，求出其差(A5’-A0’)。另外，作为比较例1，对于使用未添加色素物质的第2试剂，进行同样测定。另外，为了公平地比较前述第2试剂的背景的上升，向前述第1试剂中添加大量的柠檬黄。
[表2]
如前述表2所示，相对于使用未添加色素物质(-)的第2试剂的比较例1，使用添加了色素物质的前述第2试剂的各实施例能够抑制694nm处的吸光度上升(背景上升)。也就是说，前述显色剂具有容易被光分解的性质，可以说，通过向前述第2试剂中添加前述色素物质，从而光被遮蔽，抑制了亚甲基蓝的自然生成。为此，若使前述显色剂与前述色素物质共存，则如前述那样，在水分存在下能够保存直到使用时，在使用不耐光的前述显色剂的测定方法中，是非常有用的试剂。
实施例2
对于通过氧化生成亚甲基蓝的前述显色剂，在前述色素物质的共存下照射光，确认由前述色素物质导致的显色剂的稳定化效果(亚甲基蓝的自然产生的抑制)。
(显色剂溶液)
作为前述显色剂，使用与实施例1同样的DA-67(商品名)，使其溶解到30mmol/L的MOPS-NaOH(pH7.6)中，使浓度为0.05mmol/L。
(色素物质溶液)
将下述色素物质溶解到纯化水中，使浓度为10mmol/L。下述色素物质全部都是前述式(I)所表示的前述(2)的色素物质。
No.1 柠檬黄
No.2 食品添加剂食用黄色5号
No.3 食品添加剂食用红色2号
混合前述显色剂溶液、前述色素物质溶液以及纯化水，使前述显色剂的最终浓度为0.025mmol/L、前述色素物质的最终浓度为规定浓度(0.1mmol/L、0.2mmol/L、0.4mmol/L)，调制试样(各10mL)。将放入这些试样的透明玻璃的容器在15点～16点的1小时、放置在朝南的磨砂玻璃附近，曝露于日光中。温度为25℃。曝露后，对于前述试样，通过分光光度计(V-550、日本分光公司制)进行光谱的测定。另外，作为对照，使用纯化水来代替前述色素物质溶液，进行同样的测定。对于各试样，下表示出与前述各色素物质对应的最大吸收波长处的吸光度的测定结果。前述最大吸收波长分别是No.1(柠檬黄)为666nm、No.2(黄色5号)为681nm、No.3(红色2号)为646nm。另外，下表中，最大显色吸光度是指，前述各试样中，由所含有的全部显色剂产生亚甲基蓝的情况下的吸光度，亚甲基蓝生成率是指，曝露后的亚甲基蓝的生成率，由将最大显色吸光度设为100％的情况下的曝露后的吸光度的比例表示。
[表3]
如前述表所示，在前述色素物质的共存下将前述显色剂曝露于日光的情况下，与未添加前述色素物质的对照相比，抑制了由曝露导致的吸光度的上升。即，通过前述色素物质，抑制了由前述显色剂产生的亚甲基蓝的生成(自然产生)。
实施例3
在作为前述稳定剂的柠檬黄与季铵盐共存下保存前述显色剂，确认由前述稳定剂引起的显色剂的稳定化效果(亚甲基蓝的自然产生的抑制)。
[表4]
首先，调制前述第2试剂，在25℃下放置规定期间(0天、3天、7天)。前述第2试剂中，使用柠檬黄作为稳定剂1、以及使用季铵作为稳定剂2。前述柠檬黄为由前述式(I)所表示的前述(2)的色素物质。另外，前述季铵为前述(3)的化合物，使用十六烷基三甲基铵以及十二烷基十六烷基氯化铵。另外，前述第2试剂中的各稳定剂的添加比例如下述表5所示。
并且，调制前述第1试剂，混合前述第1试剂78μL和纯化水6.5μL，在37℃下孵育5分钟，添加放置后的前述第2试剂19.5μL，在37℃下进行显色反应。并且，通过生化学自动分析装置(商品名JCA-BM8：日本电子公司制)测定即将添加放置(3天、7天)后的第2试剂或未放置的第2试剂之前的反应液在主波长694nm/副波长751nm的吸光度(A0)、以及添加前述第2试剂5分钟后的反应液在主波长694nm/副波长751nm的吸光度(A5)，求出各测定值的差(A5-A0)。这些结果如下表5所示。
[表5]
如前述表所示，通过与柠檬黄、一种或两种的季铵盐共存，即使保存包含前述显色剂的第2试剂，也没发现大幅度的吸光度增加。由此可知，通过与柠檬黄、季铵盐共存，能够抑制显色剂的自然显色。
实施例4
除了使用下述第2试剂(R2-4)以外，与前述实施例3同样地，进行前述第2试剂的保存以及吸光度测定，确认由各种稳定剂引起的显色剂的稳定化效果(亚甲基蓝的自然产生的抑制)。
下述第2试剂中，稳定剂1的柠檬黄为前述式(I)所表示的前述(2)的色素物质，稳定剂2的十六烷基三甲基铵为前述季铵。稳定剂3如下述各表所示，使用前述(4)的β环糊精衍生物。另外，前述第2试剂中的各稳定剂的添加比例如下述各表所示。
[表6]
[表7]
稳定剂1：柠檬黄
稳定剂2：十六烷基三甲基铵
*：葡糖醛酸基葡萄糖基-β-环糊精
如前述表7所示，通过使柠檬黄、十六烷基三甲基铵以及β-环糊精类共存，即使保存包含前述显色剂的第2试剂，也没有发现大幅的吸光度增加。
[表8]
稳定剂1：柠檬黄
稳定剂2：十六烷基三甲基铵
如前述表8所示，通过与柠檬黄和正十二烷基-α，β-D-麦芽糖苷共存，即使保存包含前述显色剂的第2试剂，也没有发现大幅的吸光度增加。
下述表9中，下述F2～F4在前述第2试剂(R2-4)中使用MES、Tris以及Tris-HCl来调节pH，下述F5和F6使用MOPS、Tris、MOPS-Tris来调节pH，除此之外，与前述实施例3同样地，进行前述第2试剂的保存和吸光度测定。
[表9]
稳定剂1：柠檬黄
稳定剂2：十六烷基三甲基铵
如前述表9所示，可知，在柠檬黄和十六烷基三甲基铵的共存下，越是相对高地设定pH(例如，pH7.2左右)，越能够抑制前述显色剂的自然显色。
下述表10中，除了下述G1～G5调节为下表所述的pH以外，与前述实施例3同样地，进行了前述第2试剂的保存和吸光度测定。另外，下述G6在前述第2试剂(R2-4)中将Tris-HCl、Tris以及MES的含量改为Tris70mmol／L、MES(pKa)97mmol／L，除此以外，与前述实施例3同样地，进行了前述第2试剂的保存和吸光度测定。
[表10]
稳定剂1：柠檬黄
稳定剂2：十六烷基三甲基铵
HPβcD：2-羟丙基-β-环糊精
DDM：正十二烷基-α，β-D-麦芽糖苷
DDTMA：十二烷基三甲基铵
如前述表所示，可知，除了柠檬黄、十六烷基三甲基铵以外，还添加β-环糊精类、正十二烷基-α，β-D-麦芽糖苷、三甲基铵，也能够抑制显色剂的自然显色。
产业上的可利用性
如以上那样，根据本发明，能够使显色剂稳定化，能够抑制其自然显色，因而能够保存以往难以保存的显色剂。这样，根据本发明的方法，能够提高可进行高灵敏度测定的显色剂的稳定性，因而能够比以往更进一步拓宽作为显色剂的适用范围，因而可以说在例如临床检查等中极其有用。

Claims (12)

1.一种稳定剂，其特征在于，其是使10-(羧甲基氨基羰基)-3,7-双(二甲基氨基)吩噻嗪或者其衍生物、或其盐稳定化的稳定剂，其包含下述(2)和(3)的化合物：
(2)下述式(I)所表示的色素物质，
R1-N＝N-R2···(I)
前述式(I)中，
R1是
R2是
R1和R2中，
X在SO3X中为氢、钠或钾，在OX和COOX中为氢、钠或钾，各X可以相同也可以不同，
Y为氢或SO3X，各Y可以相同也可以不同，
Z为氢、甲基或甲氧基，各Z可以相同也可以不同，
(3)十六烷基三甲基铵和十二烷基三甲基铵中的至少一种或其盐。
2.根据权利要求1所述的稳定剂，其还包含下述(4)的化合物：
(4)β-环糊精或其衍生物，
前述(4)的β-环糊精的衍生物为选自由下述化合物所组成的组中的至少一种：
麦芽糖基-β-环糊精、
葡萄糖基-β-环糊精、
羧甲基-β-环糊精、
二甲基-β-环糊精、
单氨基-β-环糊精、
2-羟丙基-β-环糊精、
甲基-β-环糊精、
葡糖醛酸基葡萄糖基-β-环糊精、
七(2,6-二-O-甲基)-β-环糊精、
三-O-甲基-β-环糊精、
琥珀酰-β-环糊精、
磺丙基-β-环糊精、
琥珀酰羟丙基-β-环糊精以及
三乙酰基-β-环糊精。
3.根据权利要求1所述的稳定剂，前述(2)的色素物质为选自由如下物质所组成的组中的至少一种由前述式(I)所表示的化合物，
5-羟基-1-(4-磺酸苯基)-4-(4-磺酸苯基偶氮)吡唑-3-羧酸及其盐、
6-羟基-5-(4-磺酸苯基偶氮)-2-萘磺酸及其盐、
3-羟基-4-(4-磺酸萘基偶氮)-2,7-萘二磺酸及其盐、
6-羟基-5-[(2-甲氧基-5-甲基-4-磺酸苯基)二氮烯基]萘-2-磺酸及其盐、以及
7-羟基-8-(4-磺酸萘基偶氮)-1,3-萘二磺酸及其盐。
4.根据权利要求1所述的稳定剂，前述(3)的季铵的盐为氯化物盐和溴化物盐中的至少一种。
5.根据权利要求1所述的稳定剂，其防止前述10-(羧甲基氨基羰基)-3,7-双(二甲基氨基)吩噻嗪或者其衍生物、或其盐的自然显色。
6.一种显色试剂，其特征在于，其包含10-(羧甲基氨基羰基)-3,7-双(二甲基氨基)吩噻嗪或者其衍生物、或其盐，
进一步包含权利要求1所述的稳定剂。
7.根据权利要求6所述的显色试剂，前述显色试剂为液体试剂。
8.一种稳定化方法，其特征在于，其是使10-(羧甲基氨基羰基)-3,7-双(二甲基氨基)吩噻嗪或者其衍生物、或其盐稳定化的方法，
使10-(羧甲基氨基羰基)-3,7-双(二甲基氨基)吩噻嗪或其衍生物与权利要求1所述的稳定剂共存。
9.根据权利要求8所述的稳定化方法，在溶剂中，使10-(羧甲基氨基羰基)-3,7-双(二甲基氨基)吩噻嗪或者其衍生物、或其盐与前述稳定剂共存。
10.根据权利要求8所述的稳定化方法，通过前述稳定剂，防止前述10-(羧甲基氨基羰基)-3,7-双(二甲基氨基)吩噻嗪或者其衍生物、或其盐的自然显色。
11.一种保存方法，其特征在于，其是10-(羧甲基氨基羰基)-3,7-双(二甲基氨基)吩噻嗪或者其衍生物、或其盐的保存方法，
在通过权利要求8所述的稳定化方法使之稳定化的状态下保存10-(羧甲基氨基羰基)-3,7-双(二甲基氨基)吩噻嗪或者其衍生物、或其盐。
12.一种显色反应用试剂盒，其特征在于，其包含10-(羧甲基氨基羰基)-3,7-双(二甲基氨基)吩噻嗪或者其衍生物、或其盐作为显色剂，进一步包含权利要求1所述的稳定剂。
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