CN108318478A - 一种人体上皮组织癌细胞的检测试剂及其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种人体上皮组织癌细胞的检测试剂及其制备方法和用途。本发明人体上皮组织癌细胞的检测试剂，它由含有下述配比的原料制备而成：二甲基亚砜0‑96体积份，叶酸衍生物0‑6重量份，亚甲基蓝0‑3重量份，乙酸0‑10体积份，抗坏血酸0‑6重量份，环糊精0‑10重量份，锌粉0‑10重量份，抗氧化剂0‑3重量份。本发明还提供了前述试剂的制备方法和用途。本发明检测试剂可以有效检测上皮组织肿瘤细胞，且特异性好，灵敏度高，应用前景良好。

Description

一种人体上皮组织癌细胞的检测试剂及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及一种检测试剂，具体涉及一种人体上皮组织癌细胞的检测试剂及其制备方法和用途。

背景技术

在医学上，癌是指起源于上皮组织的恶性肿瘤，是恶性肿瘤中最常见的一类。中国近年来的肿瘤发病率和死亡率持续上升，这已经成为一个必须高度重视的社会问题。很多癌症如果早期发现是有很大几率被治愈的，因此对于恶性肿瘤细胞早期的检测手段的研究成了医学上的一大热门话题。依据病理细胞学和组织学的检查手段是最早出现的，但是早期的癌细胞在形态上和结构上还没有发生改变，那么细胞学和组织学的手段就无法做出诊断。后来，癌细胞的染色技术迅速发展，目前已经有多种染色方法可以较为准确地诊断出细胞的病变程度，常见的有醋酸白、碘试验、吖啶橙荧光染色法等等。但是，醋酸白特异性差，易造成假阳性；碘试验是基于糖原反应的。特异性也较低；吖啶橙荧光染色法需要仪器支持，所以适用性不普遍。

目前市场上又出现了一种新的染色诊断方法——叶酸受体介导的特色染色方法。大量的临床试验证明了，叶酸受体的数量会在癌细胞表面高度表达，而在正常细胞中较少甚至没有，所以叶酸的复合物可以作为肿瘤特异性靶向介导分子，用于诊断和治疗；在肿瘤细胞中，也存在这大量的活性氧，这是因为肿瘤细胞处于强烈的氧化应激环境中，而正常的细胞则没有这样的现象。该诊断方法则利用这两个特点，设计出了一种新的细胞染色诊断方法：亚甲基蓝与叶酸形成的复合物又对癌细胞有着高效的靶向性，在酸性条件下，该复合物更容易与癌细胞表面的叶酸受体结合，从而进入癌细胞内；而生物染色剂亚甲基蓝与肿瘤细胞有着高度的亲和性，在肿瘤细胞强烈的氧化应激环境下，无色还原态的亚甲基蓝会很快地变成蓝色，由此达到了诊断的效果。

与前述传统的方法相比，叶酸受体介导的染色方法的特异性和灵敏度有所提高。叶酸受体介导的染色方法的灵敏度和特异性高度依赖于染色剂，如，103483872公开的一种一种用于肿瘤组织细胞的染色剂组合物，其特征在于，所述组合物按重量百分比计包含以下组分：显色剂，0.01-5％；叶酸≤6.5％；隐色剂，0.1-10％；pH调节剂≤10％；水，3-95％；其中，显色剂为亚甲基蓝、二氯酚靛酚、二氯酚靛酚钠之一种或其组合物；其中，隐色剂为锌粉、辛酸亚锡之一种或多种；其中，pH调节剂包括甲酸、乙酸、乳酸、柠檬酸、苹果酸、草酸、丁二酸、酒石酸、硼酸之一种。采用该染色剂进行染色的灵敏度最高为94.5％，特异度最高为92.1％，出现假阳性和假阴性的可能性还是比较大，需要进一步改进。

发明内容

为了解决前述问题，本发明提供了一种用于上皮组织肿瘤细胞的检测试剂及其制备方法和用途。

本发明人体上皮组织癌细胞的检测试剂，它由含有下述配比的原料制备而成：

二甲基亚砜0-96体积份，叶酸衍生物0-6重量份，亚甲基蓝0-3重量份，乙酸0-10体积份，抗坏血酸0-6重量份，环糊精0-10重量份，锌粉0-10重量份，抗氧化剂0-3重量份。

优选地，它由含有下述配比的原料制备而成：

二甲基亚砜65～96体积份，叶酸0.3～5重量份，亚甲基蓝0.16～3重量份，乙酸2～10体积份，抗坏血酸0.1～4.5重量份，β-环糊精1～5重量份，锌粉0.4～7重量份，抗氧化剂0.01～0.5重量份。

其中，体积份：重量份为g：mL。

进一步优选地，它由含有下述配比的原料制备而成：

二甲基亚砜90～96体积份，叶酸0.3～0.5重量份，亚甲基蓝0.16～0.3重量份，乙酸2～6体积份，抗坏血酸0.6～1重量份，β-环糊精1重量份，锌粉0.4～0.6重量份，抗氧化剂0.01～0.04重量份。

再进一步优选地，它含有下述配比的原料制备而成：

二甲基亚砜90体积份，叶酸0.5重量份，亚甲基蓝0.3重量份，乙酸6体积份，抗坏血酸0.6重量份，β-环糊精1重量份，锌粉0.6重量份，抗氧化剂0.01重量份。

其中，所述环糊精是β-环糊精、α-环糊精或者γ-环糊精，

其中，所述抗氧化剂是褪黑素、茶多酚、生育酚或者黄酮。

本发明还提供了前述检测试剂的制备方法，步骤如下：

(1)先将叶酸溶解到二甲基亚砜中，配成溶液A；

(2)取抗坏血酸和亚甲基蓝、锌粉，加入乙酸搅拌，然后再加入剩余二甲基亚砜继续搅拌，溶液B；

(3)待溶液B颜色褪去变淡后，将其加入到溶液中，加入β-环糊精和褪黑素，搅拌混匀，即可。

步骤(1)中使用的DMSO为30～50体积份，步骤(2)中使用的DMSO为15～60体积份。

优选地，步骤(1)中使用的DMSO为36～40体积份，步骤(2)中使用的DMSO为50～60体积份；进一步优选地，步骤(1)中使用的DMSO为40体积份，步骤(2)中使用的DMSO为50体积份。

本发明还提供了前述的检测试剂在制备检测人体上皮组织癌细胞的检测试剂中的用途。

上皮组织癌是指发生在皮肤、黏膜表面和器官内的恶性肿瘤，是人类最常见的恶性肿瘤之一，多见于40岁以上的人群。主要包括鳞状细胞癌、腺癌、基底细胞癌和移行细胞癌等，鳞状细胞癌常发生在鳞状上皮被覆的部位，如皮肤、口腔、唇、食管、喉、子宫颈、阴道、阴茎等处；腺癌较多见于胃肠、胆囊、子宫体等处；基底细胞癌多见于老年人面部；移行细胞癌发生于膀胱、输尿管或肾盂的移行上皮。本发明为体外检测试剂，临床主要用于宫颈、阴道等上皮组织异常病变的初步筛查，使医生获取病变的第一手资料，帮助医生做出临床决策。

本发明用于上皮组织肿瘤细胞的检测试剂可以有效检测上皮组织肿瘤细胞，且特异性好，灵敏度高，优于现有的检测试剂，且制备方法简便，成本低廉，应用前景良好。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

附图说明

图1对比试剂1的检测结果

图2对比试剂2的检测结果

图3本发明试剂的检测结果

具体实施方式

本发明具体实施方式中使用的原料、设备均为已知产品，通过购买市售产品获得。

实施例1本发明检测试剂的制备

1、制备方法

组成：90mL二甲基亚砜(DMSO)，0.5g叶酸，0.3g亚甲基蓝，6mL乙酸，0.6g抗坏血酸，1gβ-环糊精，0.6g锌粉，0.01g褪黑素。

步骤：

(1)先将叶酸0.5g完全溶解到40mL DMSO中，配成溶液A；

(2)取抗坏血酸0.6g和亚甲基蓝0.3g，锌粉0.7g，加入6mL乙酸搅拌，然后再加入50mL的DMSO继续搅拌，溶液B；

(3)待溶液B颜色褪去变淡后，将其加入到溶液A中，加入1gβ-环糊精和0.01g褪黑素，搅拌配成溶液。

实施例2本发明检测试剂的制备

组成：96mL二甲基亚砜，0.3g叶酸，0.16g亚甲基蓝，2mL乙酸，0.1g抗坏血酸，1gβ-环糊精，0.4g锌粉，0.04g褪黑素。

步骤：

(1)先将叶酸0.3g完全溶解到36mL DMSO中，配成溶液A；

(2)取抗坏血酸0.1g和亚甲基蓝0.16g，锌粉0.4g，加入2mL乙酸搅拌，然后再加入60mL的DMSO继续搅拌，溶液B；

(3)待溶液B颜色褪去变淡后，将其加入到溶液A中，加入1gβ-环糊精和0.04g褪黑素，搅拌配成溶液。

实施例3本发明检测试剂的制备

组成：65mL二甲基亚砜，5g叶酸，3g亚甲基蓝，10mL乙酸，4.5g抗坏血酸，5gβ-环糊精，7g锌粉，0.5g褪黑素。

步骤：

(1)先将叶酸5g完全溶解到50mL DMSO中，配成溶液A；

(2)取抗坏血酸5g和亚甲基蓝3g，锌粉7g，加入10mL乙酸搅拌，然后再加入15mL的DMSO继续搅拌，溶液B；

(3)待溶液B颜色褪去变淡后，将其加入到溶液A中，加入5gβ-环糊精和0.1g褪黑素，搅拌配成溶液。

以下通过试验例说明本发明的有益效果。

试验例1采用本发明试剂检测上皮组织癌细胞的特异性和灵敏度

1、试验方法

先用棉签伸入病人患处取样(宫颈炎、宫颈癌、性病、尖锐湿疣)，再用取样的棉签去蘸取多功能醋酸白溶液，最后将其放置在空气中，用肉眼观察棉签的颜色变化：3min后，上皮组织有醋酸白化反应，同时棉签变色，检测呈阳性，患者则需要进一步的确诊；反之，若无明显颜色变化，检测结果呈阴性则说明患者并没有癌变或癌前病变的症状。

灵敏度＝真阳性人数/(真阳性人数+假阴性人数)*100％。正确判断病人的率。

特异度＝真阴性人数/(真阴性人数+假阳性人数))*100％。正确判断非病人的率。

2、试验结果

经过检测，采用本发明实施例1的试剂检测癌细胞的灵敏度为96.4％，特异性为98.3％；

经过检测，采用本发明实施例1的试剂检测癌细胞的灵敏度为96.4％，特异性为98.3％；

采用本发明实施例2的试剂检测癌细胞的灵敏度为95.7％，特异性为96.2％；

采用本发明实施例3的试剂检测癌细胞的灵敏度为93.2％，特异性为93.8％。

试验结果说明，本发明检测试剂可以准确检测癌细胞，灵敏度和特异性均较高，其中，优选实施例1和实施例2所述的试剂，进一步优选实施例1所述的试剂。

对比试验

1、试验方法

1.1试剂：

对比试剂1：采用的碱性溶液来溶解叶酸，还原剂使用的是葡萄糖作为还原剂，具体试剂组成为：30mL二甲基亚砜，2g葡萄糖，2.7mL 1M氢氧化钠水溶液，0.2g叶酸，0.1g亚甲基蓝，1gβ-环糊精，3mL的乙酸，62g二甲基甲酰胺。检测结果如图1(上：不含Hela细胞的棉签；下：含有Hela细胞的棉签)；

对比试剂2：试剂的具体组成：93mL二甲基亚砜，0.1g叶酸，0.04％亚甲基蓝，6mL乙酸，0.1g抗坏血酸，1gβ-环糊精，0.2g锌粉，0.01g褪黑素。检测结果如图2(上：不含Hela细胞的棉签；下：含有Hela细胞的棉签)；

本发明试剂：本发明实施例1所示的检测试剂；

1.2检测方法

以Hela细胞为检测细胞，不同将检测剂组合物用大棉签蘸取，均匀涂抹于组织表面，观察棉签颜色以及组织颜色变化。

其中，对比试剂2按照实验例1的方法检测灵敏度和特异性。

2、检测结果

结果如图1～图3所示，采用本发明方法检测的效果比较好，而采用其他试剂的检测效果不佳。

另外，对比试剂2检测发灵敏度和特异性分别是72.4％和74.1％，远远低于本发明的检测结果。

综上所述，本发明用于上皮组织肿瘤细胞的检测试剂可以有效检测上皮组织肿瘤细胞，且特异性好，灵敏度高，应用前景良好。

Claims (10)

1.一种人体上皮组织癌细胞的检测试剂，其特征在于：它由含有下述配比的原料制备而成：

二甲基亚砜0-96体积份，叶酸衍生物0-6重量份，亚甲基蓝0-3重量份，乙酸0-10体积份，抗坏血酸0-6重量份，环糊精0-10重量份，锌粉0-10重量份，抗氧化剂0-3重量份。

2.根据权利要求1所述的检测试剂，其特征在于：它由含有下述配比的原料制备而成：

二甲基亚砜65～96体积份，叶酸0.3～5重量份，亚甲基蓝0.16～3重量份，乙酸2～10体积份，抗坏血酸0.1～4.5重量份，β-环糊精1～5重量份，锌粉0.4～7重量份，抗氧化剂0.01～0.5重量份。

3.根据权利要求2所述的检测试剂，其特征在于：它由含有下述配比的原料制备而成：

二甲基亚砜90～96体积份，叶酸0.3～0.5重量份，亚甲基蓝0.16～0.3重量份，乙酸2～6体积份，抗坏血酸0.6～1重量份，β-环糊精1重量份，锌粉0.4～0.6重量份，抗氧化剂0.01～0.04重量份。

4.根据权利要求3所述的检测试剂，其特征在于：它含有下述配比的原料制备而成：

二甲基亚砜90体积份，叶酸0.5重量份，亚甲基蓝0.3重量份，乙酸6体积份，抗坏血酸0.6重量份，β-环糊精1重量份，锌粉0.6重量份，抗氧化剂0.01重量份。

5.根据权利要求1～4任意一项所述的检测试剂，其特征在于：所述环糊精是β-环糊精、α-环糊精或者γ-环糊精。

6.根据权利要求1～4任意一项所述的检测试剂，其特征在于：所述抗氧化剂是褪黑素、茶多酚、生育酚或者黄酮。

7.一种制备权利要求1～6任意一项所述检测试剂的方法，其特征在于：步骤如下：

(1)先将叶酸溶解到部分二甲基亚砜中，配成溶液A；

(2)取抗坏血酸和亚甲基蓝、锌粉，加入乙酸搅拌，然后再加入剩余的二甲基亚砜继续搅拌，溶液B；

(3)待溶液B颜色褪去变淡后，将其加入到溶液中，加入β-环糊精和褪黑素，搅拌混匀，即可。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：

步骤(1)中使用的DMSO为30～50体积份，步骤(2)中使用的DMSO为15～60体积份。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：步骤(1)中使用的DMSO为36～40体积份，步骤(2)中使用的DMSO为50～60体积份；优选地，步骤(1)中使用的DMSO为40体积份，步骤(2)中使用的DMSO为50体积份。

10.权利要求1～6任意一项所述的检测试剂在制备检测人体上皮组织癌细胞的检测试剂中的用途。