CN103402374A

CN103402374A - 新蛇菊苷-罗汉果苷v混合物

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Publication number: CN103402374A
Application number: CN2012800107807A
Authority: CN
Inventors: J·R·布里奇斯; A·卡尔森; B·T·波里特; M·昆兰; T·C·雄克; E·F·特哈达; S·Y·周
Original assignee: Tate and Lyle Ingredients Americas LLC
Current assignee: Tate and Lyle Solutions USA LLC
Priority date: 2011-01-28
Filing date: 2012-01-24
Publication date: 2013-11-20
Anticipated expiration: 2032-01-24
Also published as: EP2667733A2; CA2825753C; CN105124520B; JP2014506783A; BR112013018961A2; WO2012103074A2; US8962698B2; KR101809183B1; BR122021007625B1; ES2794563T3; US20120264831A1; EP3111781A1; AU2012209241B2; US20140199466A1; IL227514A0; KR20140018892A; JP6702897B2; JP6014051B2; MX2013008633A; RU2596978C2

Abstract

一种组合物，包含重量比≥1∶1和≤6∶1的罗汉果苷V和新蛇菊苷组分，其中所述新蛇菊苷组分由选自新蛇菊苷A、新蛇菊苷B和新蛇菊苷D的一种或多种化合物组成。纯化罗汉果提取物的方法包括使所述罗汉果提取物与活性炭以及大孔聚合吸附树脂、离子交换树脂或这两者接触。一种组合物，包含罗汉果提取物，其中罗汉果苷V占所述罗汉果提取物的50wt%-75wt%，并且所述组合物包含相对于所述罗汉果苷V总计0-13wt%的芳香糖苷，以及相对于所述罗汉果苷V0-15ppm的半挥发性有机化合物。

Description

新蛇菊苷-罗汉果苷V混合物

背景技术

天然热量甜味剂如蔗糖、葡萄糖和果糖具有理想的口味特征，但是它们增加产品的热量。因此，消费者对视为更健康的替代品的低热量或无热量的甜味剂有很大兴趣。已知无热量的天然或合成的高效甜味剂，但是它们大部分通常具有不像糖那样令消费者满意的风味特征谱。因此，期望开发可以取代糖并具有更理想的味道特征谱的无热量甜味剂。

物种甜叶菊(Stevia rebaudiana)(“甜叶菊(Stevia)”)是某些天然存在的甜味甜菊糖苷的来源。已进行相当多的研究和开发以评价甜叶菊的甜味甜菊糖苷作为无热量甜味剂的用途。可以从甜叶菊提取的甜味甜菊糖苷包括6种新蛇菊苷(即，新蛇菊苷A-F)、甜菊苷(来自野生型甜叶菊的提取物中的主要糖苷)、甜菊双糖苷(steviolbioside)、甜叶悬钩子苷(rubusoside)和甜苷(dulcoside)。

基于新蛇菊苷A和其他甜味甜菊糖苷的商业低热量或无热量甜味剂往往具有苦味和甘草回味。这些特征在约300ppm以上的浓度时特别值得注意。在食品应用中，优选使用水平(8-10%糖当量值)通常为约500ppm-约1000ppm，这高于在首先注意到后味的范围。因此持续需要包括甜味甜菊糖苷在内的减少热量、低热量和/或无热量的甜味剂，其具有减少的或者没有苦味、不期望的口味(例如，甘草)的味道特征谱，或者更像天然热量甜味剂的甜味特征谱，或者这类特性的组合。

发明内容

在一方面，本发明提供一种组合物，其包含重量比≥1:1且≤6:1的罗汉果苷(mogroside)V和新蛇菊苷组分，其中所述新蛇菊苷组分由选自新蛇菊苷A、新蛇菊苷B和新蛇菊苷D的一种或多种化合物组成。

在另一方面，本发明提供一种纯化罗汉果(Luo Han Guo)提取物的方法，所述方法包括使罗汉果提取物与活性炭以及大孔聚合吸附树脂、离子交换树脂或这两者接触。

在另一方面，本发明提供一种包含罗汉果提取物的组合物，其中罗汉果苷V占所述罗汉果提取物的50wt%-75wt%，并且所述组合物包含相对于所述罗汉果苷V总计0-13wt%的芳香糖苷，以及相对于所述罗汉果苷V0-15ppm的半挥发性有机化合物。

附图说明

图1分别在上方和下方的色谱图中示出示例性干罗汉果提取物的HPLC分析以及已根据本发明进行碳处理的相同物质的分析。

图2示出图1所示的色谱图的放大视图。

图3示出罗汉果样品中存在的半挥发性化合物的气相色谱图，一个在用活性炭处理之前进行，并且一个在根据本发明用活性炭处理之后进行。

图4示出包含产生霉味的组分的罗汉果部分的HPLC色谱图。

图5示出罗汉果部分的ATR-FTIR谱，显示出与芳香糖苷的存在一致的特征带。

图6示出图4中的主要组分的飞行时间(ToF)准确质谱。

具体实施方式

定义

如本文所用，短语“甜味甜菊糖苷”表示具有甜菊醇(steviol)二萜环系统的一般结构的任何天然存在的化合物，其含有一个或多个化学连接至该环的糖残基。

如本文所用，短语“新蛇菊苷组分”表示存在的新蛇菊苷A、B和D的总和，应理解可能事实上仅存在这些中的一种或两种。

包含新蛇菊苷-罗汉果苷V混合物的甜味组合物

现在公开罗汉果苷V与由新蛇菊苷A、B和D中的一种或多种组成的新蛇菊苷组分的混合物提供优异的口味特征，在许多情况下，当在相同水平的甜度比较时，优于单独的新蛇菊苷组分或罗汉果苷V。在一些系统中，改良的味道在约pH2-约pH8的pH值下最明显。

罗汉果苷V可以获得自罗汉果提取物，其可商购自许多来源。制备这类提取物的示例性方法描述于美国专利第5,411,755号和美国公开号2006/0003053，两者援引加入本文用于所有目的。罗汉果提取自原产于中国南部和泰国北部的草本多年生藤本植物罗汉果(Siraitia grosvenorii)的果实。它是罗汉果(Siraitia)属中的4个物种之一。植物学同义词包括罗汉果(Momordica grosvenorii)和罗汉果(Thladiantha grosvenorii)。所述提取物比蔗糖甜约200-300倍。

通常，罗汉果苷V是罗汉果提取物的最丰富的单一罗汉果苷组分，伴随有其他罗汉果苷如罗汉果苷I、II、III、IV和VI以及其他提取的物质，例如多酚、类黄酮、类黑精、萜、蛋白质、糖类、芳香糖苷和半挥发性有机化合物。在本发明的一些实施方案中，以罗汉果提取物的形式提供罗汉果苷V(未加工的或者纯化和/或浓缩以增加罗汉果苷V含量)。在一些实施方案中，罗汉果苷V占所述提取物的至少40wt%，或者至少45wt%，或者至少50wt%。通常，其占所述提取物的最多95wt%，所述提取物的最多85wt%，所述提取物的最多75wt%，所述提取物的最多70wt%，或者最多65wt%，或者最多60wt%。

在一些本发明的甜味组合物中，罗汉果苷V比新蛇菊苷组分的重量比为至少1:1，或者至少1.3:1，或者至少1.5:1。所述重量比通常为最多5:1，或者最多4:1，或者最多3.5:1，或者最多3:1，或者最多2.5:1，或者最多2:1，或者最多1.9:1，或者最多1.8:1，或者最多1.7:1。

新蛇菊苷组分由新蛇菊苷A、B和/或D中的一种或多种组成。新蛇菊苷组分通常占存在的总甜味甜菊糖苷的至少65wt%，或者至少70wt%，或者至少75wt%，或者至少80wt%，或者至少90wt%，或者至少97wt%。如果存在，甜味甜菊糖苷的剩余部分(balance)可以包含一种或多种新蛇菊苷C、E和/或F、甜菊苷以及不是新蛇菊苷组分部分的任何其他甜味甜菊糖苷。通常，新蛇菊苷A占存在的甜味甜菊糖苷的至少50wt%，或者至少60wt%，或者至少70wt%，或者至少80wt%，或者至少90wt%，或者至少95wt%。新蛇菊苷A、B和D可以获得自甜叶菊的提取物，其可商购自许多来源。已知并且已在文献中描述制备这类提取物以及从所述提取物获得相对纯的新蛇菊苷A、B或D的许多不同方法。在一典型方法中，将甜叶菊植株干燥并进行水提取方法。这种粗提取物包含约50%新蛇菊苷A。通常使用乙醇或甲醇作为溶剂，通过结晶技术分离提取物中的各种糖苷分子，允许分离纯新蛇菊苷A、B和D。然后可以将各纯化的糖苷组合使用以提供可用于本发明的新蛇菊苷组分。

虽然本发明的甜味组合物可以包含不同量的各种类型甜味剂的混合物，但是在一些实施方案中，所述组合物基本上由任选地纯化和/或浓缩的罗汉果提取物以及任选地纯化和/或浓缩的甜叶菊提取物组成。

去除罗汉果的异味组分

在广泛研究之后，现在还发现罗汉果提取物中某些杂质的存在导致一些味道测试者描述为“霉味”的异味。具体地，已鉴定芳香糖苷和半挥发性有机化合物产生这种不期望的口味，虽然还可能存在额外的霉味或其他异味组分。一种特别的芳香糖苷的分子量为502道尔顿，并且看来特别地产生霉味。这种化合物的分子式为C₂₆H₃₀O₁₀，并且根据本发明，所有具有这种分子式的化合物在一些实施方案中是受限的。实现足够低水平的这种化合物的任何方法适合本发明的目的。一种合适的方式是使罗汉果苷V的水溶液(例如任选地纯化和/或浓缩的罗汉果提取物的形式)通过颗粒活性炭的柱。还可以使用活性炭的其他形式，例如粉末。碳处理通常还去除额外的霉味或其他异味组分以及农药残留和一般在用于人食用的成分中不期望的其他这类物质。通常，水是碳处理期间存在的唯一载体，并且不加入有机溶剂。在一些实施方案中，将罗汉果提取物用大孔聚合吸附树脂、离子交换树脂和活性炭处理。通常处理会按照这个顺序，但不是必须如此。一种示例性大孔聚合树脂可商购自Rohm and Haas,Philadelphia,PA，商品名为

XAD1180N。一种示例性合适的离子交换树脂为阴离子树脂，商品名为

FPA90CL，也可获得自Rohm and Haas。

处理必须使用足量的活性炭，并且必须进行足够长的接触时间以将一种或多种芳香糖苷以及半挥发性有机化合物杂质的水平减少至可接受的水平。在本发明的一些实施方案中，甜味组合物包含总计0-13wt%的芳香糖苷，或者0-11wt%，或者0-10wt%，或者0-9wt%，所有均相对于罗汉果苷V。芳香糖苷可以为苯基糖苷，或更具体地为酚糖苷，或者它们可以为香豆素糖苷，或更具体地为呋喃香豆素糖苷。在一些实施方案中，这些相同的限制也适合分子量502的化合物，并且更具体地适合式C₂₆H₃₀O₁₀的化合物，在每种情况下指分子量502或式C₂₆H₃₀O₁₀的所有化合物的总量。

在本发明的一些实施方案中，甜味组合物包含总计0-15ppm wt的半挥发性有机化合物，或者0-11ppm wt，或者0-7ppm wt，或者0-3ppm wt，所有均相对于罗汉果苷V。如本文所用，术语“半挥发性”表示这样的化合物，其具有超过120道尔顿的分子量以及在1atm压力下大于150℃且最高350℃的沸点。这类半挥发性有机化合物可以包含但不限于表7所列的化合物。所述半挥发性有机化合物可以例如包括脂肪族呋喃、不饱和脂肪族化合物(aliphatics)、酯、多环烃和/或萜类化合物。

可以将通常包含至少40%罗汉果苷V(d.s.b)的可商购罗汉果粉状果实提取物用活性炭如下处理。将干提取物以至少约1wt%且通常最多约70wt%的浓度溶于去离子水。将水加热至足以促进粉状物质溶解的温度，通常在环境温度和160°F(71.1℃)之间的范围内，并且任选地使用微滤膜或者使用具有不反应性助滤剂的滤纸过滤。微滤的目的是去除可以使产品变坏的不溶性蛋白和/或微生物。用活性炭(active carbon)(也称作活性炭(activated carbon))吸附所得的滤液。碳可以是可用的活性炭的任何形式，并且可以例如源自木材、烟煤、褐煤、椰子、骨炭或任何其他来源。在一实施方案中，使用的活性炭是通过蒸汽活化褐煤而制备的活性炭。通常，碳为颗粒形式，但是也可以使用其他物理形式如粉末或珠活性炭。一般使用高度多孔并具有高表面积(例如，超过100m²/g，超过200m²/g，或者超过300m²/g)的活性炭是有利的。引起异味的不期望的组分(以及其他不期望的物质如农药)被吸附至碳，但是改良的味道物质不被吸附并继续洗脱。该方法允许50%-99.9%的回收率(干物质基础)。使用的活性炭的量可以为0.05%-150%(罗汉果果实提取物的水溶液中存在的干物质的百分比)。更典型地，为了实现足够低水平的异味组分，在固体基础上使用相对于罗汉果果实提取物的至少2wt%或至少5wt%的活性炭。在某些实施方案中，至少6wt%或至少10wt%给出最佳结果。通常，最多使用15wt%。

在一典型方法中，用期望量的活性炭(通常为颗粒形式)填充柱，并且使去离子水以1-10床体积/小时范围的流速从顶部至底部或从底部至顶部(下流或上流方向)通过该柱。通过的水的量可以为2-5床体积。水在与活性炭接触的时候可以为升高的温度(例如，135°F-185°F)，这有助于在随后罗汉果果实提取物的水溶液通过柱的时候减少不期望的物质如重金属从碳渗出。一旦水置换剩余的空气和来自碳的一些细微颗粒，将罗汉果果实提取物的水溶液以1-10床体积/小时范围的流速向柱进样。应当给柱装夹套，并且夹套温度应当维持在与进料溶液相同的温度，通常在室温至71℃的范围中。最初，进料置换柱中的水。一旦柱洗脱液显示出存在物质的迹象，则将洗脱液收集为改良的味道物质。洗脱液中固体的存在可以通过测量折射率(RI)来评价。为了这个目的通常建立RI与干物质之间的关系。

将罗汉果果实提取物进样至柱直至达到靶处理水平。一旦进样结束，将柱中仍存在的剩余罗汉果果实提取物用去离子水或反渗水洗脱(chase)，以置换罗汉果物质。持续收集流出液直至流出液的折射率接近单独水的折射率。

任选地，如果期望，可以将回收的改良的味道物质浓缩以将DS%(干物质)提高至任何合适的水平用于随后的干燥。可以通过蒸发或膜，或者通过任何其他合适的方法来完成浓缩。通过使用纳滤膜(200Da.M.W.C.O.)或反渗透膜(脱盐测定>98%)膜浓缩是可能的。两种膜均可以单独使用而不损失显著量的罗汉果苷至渗透液。然后通过使用常规喷雾干燥单元或通过使用常规喷雾团聚单元或其他方法干燥该物质。或者该物质可以直接使用。在一实施方案中，在干燥之前，将回收的改良的味道物质与一种或多种其他组分如新蛇菊苷A、B和/或D或者纯化的包含甜味甜菊糖苷的甜叶菊提取物混合。

包含新蛇菊苷-罗汉果苷V混合物的甜味组合物的用途

可以利用已知的方法加工包含新蛇菊苷-罗汉果苷V混合物的组合物以改变粒径和物理形态。诸如团聚、喷雾干燥、滚筒干燥和其他形式的物理加工的方法可以用来调整粒径以提供更好的流动、水合或溶解特性。所述组合物可以液体形式提供，任选地包含一种或多种防腐剂和/或加工助剂，以在特定应用中便于使用。可以将包含新蛇菊苷-罗汉果苷V混合物的组合物与填充剂如麦芽糖糊精和相似的化合物共同加工以提供具有受控的甜度、剂量、效力和操作特性的产物。

本发明的甜味组合物在食品，即可食用或咀嚼的组合物如食物、饮料、药物、糖果、口香糖等中可用作减少热量、低热量或无热量甜味剂。已发现本发明的甜味组合物可以具有更像糖的甜味特征谱，并且具有与仅包含甜味甜菊糖苷的甜味剂相比减少的苦的后味和减少的异味(例如，甘草)。测试显示，在大多数情况下，当在提供相等甜度的浓度下测试时，受试个体认为本发明的甜味组合物优于包含97%新蛇菊苷A的组合物。具体地，所述甜味组合物提供即时的甜味和延迟的甜味，导致更令人满意的味道。预期将本发明的甜味组合物加入食物和饮料会导致与用已知的包含甜味甜菊糖苷的甜味组合物(如具有97%新蛇菊苷A作为甜味剂的组合物)制备的食物和饮料相比更美味的食物和饮料。

除了新蛇菊苷-罗汉果苷V混合物，本发明的甜味剂组合物可以包含其他高强度甜味剂。例如，可以包含甜味甜菊糖苷。合适的高强度甜味剂的具体实例包括天然高强度甜味剂，例如：

甜苷A、甜苷B(也称作新蛇菊苷C)、甜叶悬钩子苷、罗汉果苷III、罗汉果苷IV、罗汉果苷VI、赛门苷(siamenoside)、莫纳甜(monatin)及其盐(莫纳甜SS、RR、RS、SR)、仙茅甜蛋白、甘草酸及其盐、奇异果甜蛋白、应乐果甜蛋白、马槟榔甜蛋白、brazzein、hernandulcin、叶甜素、菝葜苷和根皮苷；以及

人工高强度甜味剂，例如：

糖精、阿斯巴甜、三氯蔗糖、纽甜(neotame)、甜蜜素和丁磺氨钾。

根据本发明，新蛇菊苷-罗汉果苷V混合物还可以与热量甜味剂如糖(例如，高果糖玉米糖浆、蔗糖、果糖等)和多元醇(例如，山梨醇、木糖醇、乳糖醇等)和/或其他低热量甜味剂组合以产生具有减少的热量值的甜味组合物。

在一些实施方案中，本发明提供包含甜味组合物的食品，所述甜味组合物具有高浓度的新蛇菊苷-罗汉果苷V混合物。基本上任何可食用或咀嚼的组合物可以根据本发明增甜。非限制性实例包括食品(例如，烘培食品、汤、调味汁、加工的肉类、罐头水果、罐头蔬菜、乳制品、冷冻甜点)；饮料(例如，碳酸饮料、茶饮料、运动饮料、乳制品饮料、酒精性饮料、能量饮料、风味水、维生素饮料、果汁饮料、和果汁、粉状软饮料)，药物或医药产品(例如，片剂、锭剂、混悬剂等)，保健品(例如，补品、维生素等)，糖果或甜点；口香糖；烟草制品(例如，嚼烟)；等等。包含的甜味组合物的量有效地赋予增甜产品期望的甜度。在一些实施方案，增甜产品的pH为至少约2且不大于约8。

在一些实施方案中，食品包含如本文所述的甜味组合物，所述甜味组合物包含新蛇菊苷-罗汉果苷V混合物以及一种或多种额外的甜味甜菊糖苷。在一些实施方案中，包含新蛇菊苷组分、额外的甜菊糖苷组分和罗汉果苷V组分的甜味组合物以至少约50ppm，或者至少约200ppm，或者至少约500ppm，或者至少约1000ppm，或者至少约1500ppm，或者至少约3500ppm，或者至少约5000ppm的总浓度存在于食品中。

实施例

实施例1：甜叶菊-罗汉果苷V混合物比新蛇菊苷A偏好测试

将包含50wt%罗汉果苷V的固体罗汉果提取物与主要包含新蛇菊苷A的甜叶菊产物的混合物在甜度和偏好组测试中与97wt%新蛇菊苷比较。罗汉果提取物是可获得自Biovittoria(Guilin,People’s Republic of China)的商品名为Fruit Sweetness^TM的商业产品的纯化形式，其中纯化通过如本文其他地方所述用活性炭处理以去除产生异味的芳香糖苷和半挥发性有机化合物。这种产品在下文中作为样品A进行鉴定。甜叶菊产品是可获得自GLGLife Tech Corporation of Vancouver,B.C.,Canada的商品名为BlendSure^TM7.5的商业产品，其由约75wt%新蛇菊苷A和25wt%甜菊苷组成。

偏好测试

通过一组味道测试者，对在pH3柠檬酸缓冲液(0.045%柠檬酸和0.013%柠檬酸钠)中具有等于97%新蛇菊苷A的甜度的BlendSure7.5和样品A的混合物的甜度和偏好进行成对比较测试。用24-46个评价的完全区组设计进行测试。轮换呈现顺序。溶液在室温下于用3位数编码标记的2盎司梳芙厘(soufflé)杯中提供。使小组成员饮用每个样品的至少一半。测试之间有1分钟的强制等待期以清理(clear)小组成员的味觉。让小组成员鉴定更甜并且他们更喜欢的溶液。在测试之前和期间，小组成员可用瓶装水、2%蔗糖溶液和无盐饼干清理他们的味觉。如下文所示，用二项检验以0.05的α风险如双尾检验分析甜度结果。

通过二项检验和计算的Thurstonian d’分析甜度和偏好问题的结果。一尾二项检验的p-值计算为

1 - Σ_{k = 0}^{c} (\begin{matrix} n \\ k \end{matrix}) p_{0}^{k} {(1 - p_{0})}^{n - k}

其中c为成功的次数，n为试验的次数，并且p₀为机会概率。当p-值小于先验设置的α风险时，认为测试是统计学显著的。双尾p-值是如上文计算的一尾p-值的两倍。

Thurstonian d’是心理生理差异的线性量度。当在75%的试验中判断刺激更强时，一般认为d’=1为最小可辨差异(JND)。Thurstonian d’独立于测试方法，并且对于成对比较测试，其计算为

p_{c} = Φ (d^{'} / \sqrt{2})

其中p_c为成功的比例，并且Φ(·)为标准正态分布的累积分布函数。这些统计学计算的完整处理可以在关于该主题的标准教科书中找到(Bi J.,“Sensory Discrimination Tests and Measurements,”Blackwell Publishing,2006,第2和9章)。

合并的重复测试结果如下文表1所示。

表1

在pH3柠檬酸缓冲液中且在无显著差异(p-值>0.05双尾)的甜度水平下，上述数据表明对包含某些范围内的罗汉果苷V比新蛇菊苷A比例的混合物的偏好。具体地，可以看到以下内容。

675ppm样品A和225BlendSure7.5的混合物(75%样品A，总计900ppm)显著优于900ppm的97%新蛇菊苷A。

825ppm样品A和275BlendSure7.5的混合物(75%样品A，总计1100ppm)显著优于1000ppm的97%新蛇菊苷A。

444ppm样品A和296BlendSure7.5的混合物(60%样品A，总计740ppm)与605ppm的97%新蛇菊苷A没有明显不同。

547ppm样品A和365BlendSure7.5的混合物(60%样品A，总计912ppm)显著优于705ppm的97%新蛇菊苷A。

660ppm样品A和440BlendSure7.5的混合物(60%样品A，总计1100ppm)在偏好上与1000ppm的97%新蛇菊苷A没有明显不同。

相对于97%新蛇菊苷A，包含75%样品A的样品A和BlendSure7.5的混合物比包含60%样品A的混合物表现更好。

随着甜度水平的升高，样品A和BlendSure7.5的混合物更优于97%新蛇菊苷A。

实施例2：甜叶菊-罗汉果苷V混合物比甜叶菊偏好测试

将pH3柠檬酸缓冲液(0.045%柠檬酸和0.013%柠檬酸钠)中的包含50wt%罗汉果苷V的固体罗汉果提取物和主要包含新蛇菊苷A的甜叶菊产物的混合物与甜叶菊产物在甜度和偏好组测试中进行比较。混合物和甜叶菊产物如实施例1所述。通过构建等效图(异效应曲线)可以检测到协同作用，其中将具有相同效果(在这种情况下为甜度)的两种物质的浓度绘制在图表上，轴为所述物质的浓度。当两种物质之间没有协同作用时为线性等效图结果。当两种物质之间有协同作用时为具有向下弯曲结果的等效图。等效图和协同作用的完整讨论可以参见Berenbaum,“What is Synergy”,Pharmacological Reviews,Vol.1989,No.41pages93-129。从线性等效图预测具有等于500ppm、700ppm和900ppm BlendSure7.5的甜度的BlendSure7.5和样品A的混合物没有甜度协同作用。

用一组味道测试者对与500ppm、700ppm和900ppm BlendSure7.5的水平一样甜的BlendSure7.5和样品A的混合物的甜度和偏好进行成对比较测试。用34-44个评价的完全区组设计进行测试。轮换呈现顺序。溶液在室温下于用3位数编码标记的2盎司梳芙厘杯中提供。使小组成员饮用每个样品的至少一半。测试之间有1分钟的强制等待期以清理小组成员的味觉。让小组成员鉴定更甜并且他们更喜欢的溶液。在测试之前和期间，小组成员可用瓶装水、2%蔗糖溶液和无盐饼干清理他们的味觉。如实施例1中分析结果，并且在表2中总结。

表2

可以从上述数据看到，没有BlendSure7.5与样品A之间的甜度协同作用的证据。但是，随着样品A比BlendSure7.5的比例增加，与单独BlendSure7.5相比，对BlendSure7.5和样品A的混合物的偏好增加，并且甜度也增加。

实施例3：从罗汉果提取物去除芳香糖苷和半挥发性化合物

将容量为约115ml的3’x1/2”ID夹套玻璃柱(Ace玻璃掺入)用已用沸水新鲜洗涤的约57g天然粒状活性炭(来自Calgon Corporation的CAL12x40)填充。将柱夹套加热至60℃并且在实验持续期间维持在该温度。填充柱之后，使约500mL去离子水以2.5mL/min的流速通过碳床以置换和去除碳细粒。通过将1.241kg的Biovittoria Fruit Sweetness^TM溶于3.318kg的Milli-Q水(Milli-Q反渗透水纯化系统提供的水，可获得自Millipore Corp.)来制备Biovittoria Fruit Sweetness^TM的27%%wt溶液(约50wt%罗汉果苷V干固体基础(dsb))。然后将该溶液加热至60℃，使其通过Millipore Optiseal Durapore0.22μm亲水折叠筒式滤器至无菌进料瓶，并且在运行期间维持在60℃。

利用管13和蠕动泵(

泵)使该溶液以2.6g/min(等于1.25床体积/小时)的速度通过柱。在90分钟部分中收集洗脱液，平均质量为234克/部分。部分19(运行时间：28.5小时)之后，品尝洗脱液，并且非正式地确定其具有比进样物质显著更好的味道。因此，将额外的355.5g的Biovittoria Fruit Sweetness^TM溶于945.3g的Milli-Q水，使其达到60℃，通过Millipore Optiseal Durapore0.22μm亲水折叠筒式滤器，并且将其加入进料瓶中。37.5小时之后，通过将柱进料变为Milli-Q水(60℃)来开始除甜(术语“除甜”理解为洗涤柱以置换剩余的Fruit Sweetness^TM溶液)。将柱除甜6小时直至洗脱液的折射率与水的折射率相似。在所有部分中收集的物质对应于进样至该装置的干物质的约98wt%总质量收率。进样至该装置的总物质的处理水平(1241g+335g)计算为3.61wt%。通过比较Fruit Sweetness^TM的水溶液、部分1-5的复合物、部分1-10的复合物、部分1-15的复合物、部分1-20的复合物以及部分1-25的复合物，圆桌的8位有经验的品尝员比较了关于减少的异味的可接受性。发现1-5、1-10和1-15的复合物表现出与Fruit Sweetness^TM进料物质相比显著水平的味道改良。1-15的复合物包含947g干物质，因此对应于6.0wt%的碳处理水平。此后部分1-15的复合物鉴定为样品A(286683)。

HPLC用来确定Biovittoria Fruit Sweetness^TM进料以及碳处理后味道更好的罗汉果洗脱液的芳香糖苷组成。Waters2695分离模块配备Waters2487双λ吸光度检测器以及具有Phenomenex Gemini C18安全筒，4x3mm的Phenomenex Gemini C18柱，5μm，150x4.6mm。在1.0mL/min的流速和40℃的柱温下，将下文列出的乙腈/水梯度用作流动相。使用203nm下的UV检测，并且进样体积为40μL。

流动相：乙腈/水体积%线性分段梯度

纯罗汉果苷V标准品(ChomaDex,Inc.)用于在203nm下检测的所有组分的校准定量。表3总结了在干固体基础(d.s.b)上以罗汉果苷V计的组分的wt%。在Biovittoria Fruit Sweetness^TM进料和碳洗脱液之间，在上述限定条件下于3.5-4.5分钟的范围中，观察到从HPLC柱洗脱的芳香糖苷的显著减少，并且这种减少对应于注意到的显著味道改良。

表3

通过以下条件限定，用火焰离子化检测(FID)的顶空GC用来确定罗汉果进料以及碳处理后回收的味道更好的罗汉果中的半挥发性有机化合物的组成。

Combi PAL自动进样器

模式：顶空

注射器体积：1mL

注射器温度：85℃

搅拌器温度：80℃

预温育时间：30分钟

预温育搅拌器速度：500rpm(5sec开，2sec关)

柱塞填充速度：200μL/sec

粘度延迟：12sec

预进样延迟：0sec

柱塞进样延迟：100μL/sec

进样后延迟：10sec

注射器冲洗时间：3min

GC循环时间：54min

Varian3800GC

烤箱：

初始温度：40℃

初始维持时间：5分钟

斜坡：7.5℃/min

最终温度：235℃

最终维持时间：14分钟

前进气道(1177)：

温度：250℃

模式：无分流

柱：

类型：Rtx-624(30m x0.25mm x1.4μm)–Restek Cat#10968

模式：恒流

流速：1.0mL/min(Helium)

中阀烤箱：

温度：250℃

Varian4000FID

温度：250℃

补气：2mL/min(He)

H₂流速：40mL/min

空气流速：450mL/min

Varian4000离子阱MS

扫描类型：完全

质量范围：25-275m/z

扫描时间：0.00-45.00分钟

离子化类型：EI

靶TIC：20000计数

最大离子时间：25000μsec

发射电流：10μamps

平均扫描：3μ扫描(0.60sec/扫描)

数据传输速率：1.67Hz

倍增器偏移：0V

将纯D-苧烯标准品(Sigma-Aldrich)用于图3所示的半挥发性有机化合物组分的校准定量。表4总结在干固体基础(dsb)上以D-苧烯计的组分的总半挥发性有机化合物ppm wt。观察到从Biovittoria Fruit Sweetness^TM进料(284178)到碳处理的罗汉果(样品A286683)的半挥发性有机化合物的显著减少，这对应于罗汉果味道的显著改良。

表4

实施例4：罗汉果提取物中的异味组分的鉴定

感官评价发现水溶液中通过碳的罗汉果物质具有比进料罗汉果物质更好、更容易接受的味道。具有约50wt%的罗汉果苷V含量的示例性干罗汉果提取物(Biovittoria Fruit Sweetness^TM)的HPLC分析以及已进行碳处理和喷雾干燥的相同物质的分析分别在图1中的上方和下方的色谱图中示出。HPLC方法参数如实施例3，具有以下修改的线性分段梯度。

流动相：乙腈/水体积%线性梯度

HPLC分析显示碳处理后，剩余的罗汉果苷异构体的特征谱基本上未改变。图1的色谱图的极性较大区域的放大视图在图2中示出，其中下方色谱图中示出的处理产物显示21min附近的峰(用箭头标记)相对于上方色谱图中的未处理产物大大减少。为了确定21min附近洗脱的组分与“霉味”异味减少的关系，将一系列提取和纯化步骤用于以与实施例3相似的方式用来处理罗汉果的用过的碳。在整个研究中，每个提取纯化步骤之后，专家组的品尝员评价加有～5-10X原始水平的回收组分的碳处理的罗汉果，以鉴定表现出Fruit Sweetness^TM的特征性“霉味”异味的样品。

为了回收罗汉果水溶液的碳处理去除的组分，将已用于罗汉果精制的约500g用过的碳在水洗涤后用多个350mL等份的溶剂顺序提取。用乙醇然后用丙酮洗涤碳。将提取物通过0.45μm尼龙滤器过滤并在环境温度下于氮气流下蒸干以回收约2.0g固体。上述专家组的品尝员观察到来自丙酮提取的残余物包含Fruit Sweetness^TM的显著“霉味”异味特征。如下文所述，还证实21min HPLC组分(图1和2)包含在丙酮部分中，并且还包含在所有随后的“霉味”异味部分中。

完全干燥后，将50mL水和50mL氯仿之间的液-液萃取用于最初丙酮提取的部分。“霉味”异味保留在水溶性部分中(回收约1.8g固体)。随后，使用4个叠层式Waters Sep-Pak C18SPE筒(Waters Corp.,WAT020515)的固相萃取用来进一步分级分离异味残余物。用5mL甲醇和10mL的Milli-Q水预处理后，一次将10mL水中的约10mg/mL残余物装在筒上。然后使用如下的一系列10mL SPE洗涤获得回收的部分：100%水、2%乙腈(MeCN)/98%水、5%MeCN、10%MeCN、20%MeCN、25%MeCN、30%MeCN、40%MeCN、50%MeCN和100%MeCN。将所有萃取物在氮气流下干燥并通过感官组评价。从用过的碳至SPE分级分离的整个分离过程重复三次，具有相同感官结果。

如专家组品尝员所证实的，当加入碳处理的罗汉果的水溶液时，确定特征性“霉味”异味在从20%MeCN/80%水洗脱的SPE部分(288054)回收的约250mg固体中显著浓缩。这个部分的HPLC再次显示21min洗脱组分，图4。进行相对于SPE空白(10mL水+10mL50%MeCN+10mL100%MeCN)的这种分离物的主要组分的化学分析，使用Antek总氮、Folin-Ciocalteu酚比色测试、茚三酮蛋白比色测试、酸消化物的离子色谱氨基酸分析、干固体的ATR-FTIR、LC-MS以及NMR。结果在表5和6中总结，并且与芳香糖苷类的化合物一致。

表5

测试	288054–SPE20%MeCN
		表示为没食子酸当量的Folin-Ciocalteu酚	17.6mg/mL
茚三酮蛋白颜色测试	黄色(最小蛋白)
		Antek总氮	0.4%wt
IC氨基酸	以蛋白计2.4%wt
		ATR-FTIR	图5
LC-MS	图6
		H-NMR,¹³C-NMR,COSY-45,DEPT-135	表5

图5示出部分288054的基线校正的ATR-FTIR谱。可以看到OH、脂肪族CH、CO和弱苯基吸光度的特征性条带，全部均与芳香糖苷的存在一致。未观察到C=O吸光度。图6示出对应于图4中样品288054的主要组分的飞行时间(ToF)精确质谱，保留时间21.0分钟。图6中插入的表列出了质量离子503道尔顿的最可能的化学计量式。据显示具有1.6ppm质量精度的最可能的精确物质为C₂₆H₃₀O₁₀电中性化合物。

表6

利用5%水溶液的顶空，通过如实施例3定义的气相色谱与质谱检测(GC-MS)评价各种半挥发性组分的分布和建议的性质。图3示出FruitSweetness^TM进料(284178)和样品A的半挥发性组分特征谱的比较。表7示出匹配对应于图3中标记的化合物的28种半挥发性有机化合物的最佳MS文库的列表。列出已知的对这些化合物的味道和气味感官反应用于比较(参见例如，Mosciano,G.,Perfumer and Flavorist25,No.6,26,(2000)。

表7

实施例5

在500-mL烧杯中将40g量的Fruit Sweetness^TM溶于200g的Milli-Q水中，并且将30g活性炭(来自Calgon Carbon Corporation的BG-HHM)加入Fruit Sweetness^TM溶液中。将活性炭浆搅拌2小时，同时在0、5、15、30、60、90和120分钟采集无菌过滤溶液的50μL样品。将样品在Milli-Q水中稀释20倍，并且通过HPLC分析时间点之间罗汉果苷的相对丰度。2小时后，将活性炭浆通过Whatman#2滤纸过滤，并且将滤液无菌过滤至已称重的冷冻干燥瓶中。一旦已将无菌滤液冷冻干燥，记录其质量并用HPLC分析罗汉果苷V含量。将冷冻干燥的物质命名为样品B。然后由48-50位小组成员将样品B(碳浆处理的Fruit Sweetness^TM)的550ppm中性pH水溶液针对中性pH水中的500ppm Reb A97测试味道偏好。为了比较，还在中性pH水中将Fruit Sweetness^TM针对500ppm Reb A97测试偏好。如完全区组设计进行测试。轮换呈现顺序。溶液在室温下于2盎司梳芙厘杯中提供。使小组成员饮用所有样品。不允许小组成员重新品尝样品。让小组成员鉴定更甜并且他们优选的溶液。在测试之前和期间，小组成员可用瓶装水、2%蔗糖溶液和无盐饼干清理他们的味觉。

用二项检验以0.05的α风险分析数据，对于甜度为双尾测试，对于偏好为一尾测试。

表8

表9

表8显示在相等甜度水平下，商业产品Fruit Sweetness^TM并不显著优于Reb A。但是，在相等甜度水平下，浆碳处理的Fruit Sweetness^TM样品B显著优于BlendSure7.5(表9)。

虽然本文参考具体实施方式说明并描述了本发明，但是本发明并不限于显示的细节。相反，在权利要求的等同物的领域和范围内可以在细节上进行各种修改而不背离本发明。

Claims

1.一种组合物，其包含重量比≥1:1且≤6:1的罗汉果苷V和新蛇菊苷组分，其中所述新蛇菊苷组分由选自新蛇菊苷A、新蛇菊苷B和新蛇菊苷D的一种或多种化合物组成。

2.权利要求1的组合物，其中所述重量比为≥1.5:1。

3.前述权利要求中任一项的组合物，其中所述新蛇菊苷组分以包含甜味甜菊糖苷的甜叶菊提取物的形式提供，其中所述新蛇菊苷组分占所述甜味甜菊糖苷的至少70wt%。

4.前述权利要求中任一项的组合物，其中所述罗汉果苷V以罗汉果提取物的形式提供，其中所述罗汉果苷V占所述罗汉果提取物的至少40wt%。

5.权利要求4的组合物，其中所述罗汉果提取物已用活性炭处理。

6.前述权利要求中任一项的组合物，其中所述罗汉果苷V作为罗汉果提取物的组分提供，其中所述罗汉果苷V占所述罗汉果提取物的45wt%-60wt%。

7.前述权利要求中任一项的组合物，其中相对于罗汉果苷V，所述组合物包含总计0-13wt%的芳香糖苷。

8.前述权利要求中任一项的组合物，其中相对于罗汉果苷V，所述组合物包含总计0-13wt%的分子量为502道尔顿的化合物。

9.前述权利要求中任一项的组合物，其中相对于罗汉果苷V，所述组合物包含总计0-13wt%的式C₂₆H₃₀O₁₀的化合物。

10.前述权利要求中任一项的组合物，其中相对于罗汉果苷V，所述组合物包含总计0-15ppm wt的半挥发性有机化合物。

11.前述权利要求中任一项的组合物，其还包含热量甜味剂。

12.前述权利要求中任一项的组合物，其还包含额外的高强度甜味剂。

13.一种饮料，其包含权利要求1-12中任一项的组合物。

14.一种食品，其包含权利要求1-12中任一项的组合物。

15.一种口腔护理产品，其包含权利要求1-12中任一项的组合物。

16.一种烟草产品，其包含权利要求1-12中任一项的组合物。

17.一种医药产品，其包含权利要求1-12中任一项的组合物。

18.一种保健品，其包含权利要求1-12中任一项的组合物。

19.一种包含罗汉果提取物的组合物，其中罗汉果苷V占所述罗汉果提取物的50wt%-75wt%，并且所述组合物包含相对于所述罗汉果苷V总计0-13wt%的芳香糖苷，以及相对于所述罗汉果苷V0-15ppm的半挥发性有机化合物。

20.一种包含罗汉果提取物的组合物，其中罗汉果苷V占所述罗汉果提取物的50wt%-75wt%，并且所述组合物包含相对于所述罗汉果苷V总计0-13wt%的分子量为502道尔顿的化合物，以及相对于所述罗汉果苷V0-15ppm的半挥发性有机化合物。

21.一种包含罗汉果提取物的组合物，其中罗汉果苷V占所述罗汉果提取物的50wt%-75wt%，并且所述组合物包含相对于所述罗汉果苷V总计0-13wt%的式C₂₆H₃₀O₁₀的化合物，以及相对于所述罗汉果苷V0-15ppm的半挥发性有机化合物。

22.一种纯化罗汉果提取物的方法，所述方法包括使所述罗汉果提取物与活性炭接触，其中进行接触的罗汉果提取物是之前已经与大孔聚合吸附树脂、离子交换树脂或这两者接触的罗汉果提取物。

23.权利要求22的方法，其中进行接触的罗汉果提取物是之前已经与所述大孔聚合吸附树脂接触的罗汉果提取物。

24.一种纯化罗汉果提取物的方法，所述方法包括使所述罗汉果提取物与大孔聚合吸附树脂、离子交换树脂和活性炭接触。

25.权利要求24的方法，其中与所述大孔聚合吸附树脂、离子交换树脂和活性炭的接触以所列的顺序进行。

26.通过权利要求22-25中任一项的方法制备的纯化的罗汉果提取物。

27.一种组合物，其包含重量比≥1:1且≤6:1的罗汉果苷V和新蛇菊苷组分，其中所述新蛇菊苷组分由选自新蛇菊苷A、新蛇菊苷B和新蛇菊苷D的一种或多种化合物组成；

其中所述罗汉果苷V以罗汉果提取物的形式提供，其中所述罗汉果苷V占所述罗汉果提取物的至少40wt%；并且

其中所述罗汉果提取物是权利要求26的纯化的罗汉果提取物。