CN114634545B - 一种脱除农药残留的罗汉果甜苷的规模化生产方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种脱除农药残留的罗汉果甜苷的规模化生产方法，包括以下步骤：A)将高温烘烤处理过的罗汉果使用热水浸提，固液分离，得到浸提液；B)将所述浸提液过超滤膜，收集透过液；C)将所述透过液过阴离子交换树脂，上柱结束后使用水洗柱，合并收集所有流出液；D)将所述流出液上柱于大孔吸附树脂，再依次使用降解剂I、降解剂II和过氧化氢水溶液洗柱，最后使用醇水溶液解析，收集解析液；E)将所述解析液浓缩、干燥，得到罗汉果甜苷。本发明通过超滤和两步层析，能够有效将罗汉果甜苷中的农药残留去除，且在罗汉果甜苷的纯化过程中，同时进行脱色，得到的产品为纯白色，本发明中的罗汉果甜苷V含量≥92％，收率≥93％。

Description

一种脱除农药残留的罗汉果甜苷的规模化生产方法

技术领域

本发明的目的在于提供一种脱除农药残留的罗汉果甜苷的规模化生产方法。

背景技术

罗汉果为葫芦科多年生宿根性藤本植物罗汉果的果实，属于中国特有的经济和药用植物。中国有着利用植物治疗疾病的悠久历史，中医上认为罗汉果能够提神生津、清热润肺、祛火止咳、滑肠通便等效用，罗汉果在东南亚和西方国家有着“东方神国”和“长寿之果”的美誉。罗汉果苷类、黄酮类、脂肪酸等都在罗汉果中被发现，其中罗汉果苷为罗汉果中被研究最多的化合物，罗汉果或其提取物所表现的抗疲劳、消炎、抗癌、降脂减肥等生理功效均与罗汉果中化学成分及其机体内的代谢和作用方式有着密切的关系。近年来，随着化学分析技术的发展，罗汉果中一些新的化合物被鉴定出来；而罗汉果中化学成分对一些菌类生长的抑制作用与消炎和免疫力的提高有着重要关系；抗氧化作用则与抵抗疲劳，抗癌密不可分；对糖在机体代谢的调节和胰岛细胞的保护作用，则能够对糖尿病症状产生积极的效果。

罗汉果甜苷是罗汉果的甜味成分，在罗汉果干果中的总含量为其质量的3.75％～3.85％。罗汉果甜苷又称罗汉果甜甙(或罗汉果甜)，植物含量较高且水溶性好，已经有纯度98％以上成品用作食品添加剂，萃取于广西特产经济植物——罗汉果，其甜度为蔗糖的300倍，其热量为零，具有清热润肺镇咳、润肠通便之功效，对肥胖、便秘、糖尿病等具有防治作用。

罗汉果提取物作为一种植物提取物，主要原料都来源于罗汉果，其在种植过程中由于种植需要会进行喷洒农药进行防虫防病，会直接造成最终产品农药残留问题，这些有害物质如果不加以进一步脱除，则会最终进入到食品中，从而给食品带来安全风险；罗汉果为中国特有种资资源，其作为天然食品甜味剂主要销售市场北美洲的美国、加拿大；欧洲的英国、法国、德国、瑞士、意大利等；亚洲的日本、韩国、印尼；大洋洲的澳大利亚、新西兰等发达国家。民以食为天，食以安为先。所以如何更有效的脱除罗汉果提取物中的有害物质，提升罗汉果提取物的国际贸易出口额，就显得尤为重要。

CN106306991公开了一种同时去除罗汉果提取物中农残和塑化剂的方法，是通过二氧化碳超临界萃取、纳滤、喷雾干燥后即得，其主要工艺是超临界二氧化碳萃取，该工艺需要精密复杂且昂贵的设备，生产成本极大。

发明内容

本发明的目的在于提供一种脱除农药残留的罗汉果甜苷的规模化生产方法，本发明中的方法从罗汉果中提取生产的罗汉果甜苷含量高、收率高，可有效脱去罗汉果甜苷中的农药残留，同时工艺路线简单，贴合实际生产，产业化能力强。

本发明提供一种脱除农药残留的罗汉果甜苷的规模化生产方法，包括以下步骤：

A)将高温烘烤处理过的罗汉果使用热水浸提，固液分离，得到浸提液；

B)将所述浸提液过超滤膜，收集透过液；

C)将所述透过液过阴离子交换树脂，上柱结束后使用水洗柱，合并收集所有流出液；

D)将所述流出液上柱于大孔吸附树脂，再依次使用降解剂I、降解剂II和过氧化氢水溶液洗柱，最后使用醇水溶液解析，收集解析液；

E)将所述解析液浓缩、干燥，得到罗汉果甜苷。

优选的，所述高温烘烤处理的温度为120～170℃；所述热水浸提的温度为85～95℃。

优选的，所述超滤膜的截留分子量为1万～5万Da。

优选的，所述阴离子交换树脂为LX-T5型树脂、LXD-762型树脂、LX-94型树脂和D941型树脂中的一种或几种；

所述阴离子交换树脂的体积与所述透过液中固形物的质量之比为(7～13)mL：1g。

优选的，所述大孔吸附树脂为D101型树脂、LX-100B型树脂、LX-T28型树脂、LX-T81和LX-38型树脂中的一种或几种；

所述大孔吸附树脂的体积为与所述透过液中固形物的质量之比为(2～5)mL：1g。

优选的，所述降解剂I为亚硫酸钠水溶液、亚硫酸钾水溶液、亚硫酸氢钠水溶液、亚硫酸氢钾水溶液、焦亚硫酸钠水溶液和焦亚硫酸钾水溶液中的一种或几种；

所述亚硫酸钠或亚硫酸钾水溶液的质量浓度为4～6％，亚硫酸氢钠水溶液或亚硫酸氢钾水溶液的质量浓度为5～8％，焦亚硫酸钠水溶液和焦亚硫酸钾水溶液的质量浓度为3～5％。

优选的，所述降解剂I的使用量为2～3BV，流速为0.3～0.8BV/h。

优选的，所述降解剂II为氯酸钠水溶液和/或氯酸钾水溶液；所述降解剂II的质量浓度为0.5～2％。

优选的，所述降解剂I的使用量为2～3BV，流速为0.3～0.8BV/h。

优选的，所述过氧化氢水溶液的质量浓度为6～10％；

所述过氧化氢水溶液的使用量为4～6BV，流速为1.5～2BV/h。

本发明提供了一种脱除农药残留的罗汉果甜苷的规模化生产方法，包括以下步骤：A)将高温烘烤处理过的罗汉果使用热水浸提，固液分离，得到浸提液；B)将所述浸提液过超滤膜，收集透过液；C)将所述透过液过阴离子交换树脂，上柱结束后使用水洗柱，合并收集所有流出液；D)将所述流出液上柱于大孔吸附树脂，再依次使用降解剂I、降解剂II和过氧化氢水溶液洗柱，最后使用醇水溶液解析，收集解析液；E)将所述解析液浓缩、干燥，得到罗汉果甜苷。本发明通过超滤和两步层析，能够有效将罗汉果甜苷中的农药残留去除，且在罗汉果甜苷的纯化过程中，同时进行脱色，得到的产品为纯白色，本发明中的罗汉果甜苷V含量≥92％，收率≥93％。

具体实施方式

本发明提供了一种脱除农药残留的罗汉果甜苷的规模化生产方法，包括以下步骤：

A)将高温烘烤处理过的罗汉果使用热水浸提，固液分离，得到浸提液；

B)将所述浸提液过超滤膜，收集透过液；

C)将所述透过液过阴离子交换树脂，上柱结束后使用水洗柱，合并收集所有流出液；

D)将所述流出液上柱于大孔吸附树脂，再依次使用降解剂I、降解剂II和过氧化氢水溶液洗柱，最后使用醇水溶液解析，收集解析液；

E)将所述解析液浓缩、干燥，得到罗汉果甜苷。

本发明中所述罗汉果为罗汉果鲜果或者经过烘干的罗汉果干果，本发明优选将所述罗汉果先低温干燥，然后再高温烘烤，得到处理后的罗汉果。

在本发明中，所述低温干燥的温度优选为70～90℃，更优选为75～85℃，如70℃、75℃、80℃、85℃、90℃，优选为以上述任意数值为上限或下限的范围值；所述低温干燥的时间优选为2～3小时，更优选为2.5～3小时。

在本发明中，所述高温烘烤的温度优选为120～170℃，更有选为130～160℃，如120℃、125℃、130℃、135℃、140℃、145℃、150℃、155℃、160℃、165℃、170℃，优选为以上述任意数值为上限或下限的范围值；所述高温烘烤的时间优选为20～30min，如20min、21min、22min、23min、24min、25min、26min、27min、28min、29min、30min，优选为以上述任意数值为上限或下限的范围值。

罗汉果甜苷其热稳定性极强，长时间的高温对其影响极小。同时农药一般都为热敏性物质，其受热会加速其降解，从而实现脱除农残的目的。

本发明将高温烘烤处理后的罗汉果使用热水进行浸提，固液分离后得到浸提液。

在本发明中，所述热水的温度优选为85～95℃，更优选为80～90℃。当所述罗汉果为罗汉果鲜果时，所述罗汉果与热水的料液质量比优选为1：(6～10)，更优选为1：(7～9)，如1：6，1：7，1：8，1：9，1：10，优选为以上述任意数值为上限或下限的范围值。当所述罗汉果为罗汉果干果时，所述罗汉果与热水的料液质量比优选为1：(25～40)，更优选为1：(30～35)，如1：25，1：28，1：30，1：32，1：35，1：38，1：40，优选为以上述任意数值为上限或下限的范围值。

在本发明中，所述浸提可以是连续逆流提取、渗漏提取或罐式提取，其中连续逆流提取、渗漏提取浸提时间为2～3h；罐式提取分2～4次浸提，浸提时间为1～1.5h/次。

得到浸提液后，本发明将所述浸提液过超滤膜，收集透过液。

在本发明中，所述超滤膜的截留分子量优选为1万～5万Da，更优选为2万～4万Da，如1万Da，1.5万Da，2万Da，2.5万Da，3万Da，3.5万Da，4万Da，4.5万Da，5万Da，优选为以上述任意数值为上限或下限的范围值。

得到透过液之后，本发明将所述透过液进行两次层析，第一次层析使用阴离子交换树脂，第二次使用大孔吸附树脂。

本发明优选将所述透过液先上柱于阴离子交换树脂层析柱，上柱结束后使用水洗柱，合并收集所有流出液。

在本发明中，所述阴离子交换树脂优选为LX-T5型树脂、LXD-762型树脂、LX-94型树脂和D941型树脂中的一种或几种；所述阴离子交换树脂的体积与所述透过液中固形物的质量之比优选为(7～13)mL：1g，如7mL：1g，8mL：1g，9mL：1g，10mL：1g，11mL：1g，12mL：1g，13mL：1g，优选为以上述任意数值为上限或下限的范围值。

在本发明中，所述阴离子交换树脂的径高比优选为1：(6～10)，更优选为1：(7～9)，如1：6，1：7，1：8，1：9，1：10，优选为以上述任意数值为上限或下限的范围值。

所述透过液的上柱流速优选为0.3～1.0BV/h，更优选为0.5～0.8BV/h，如0.3BV/h，0.4BV/h，0.5BV/h，0.6BV/h，0.7BV/h，0.8BV/h，0.9BV/h，1.0BV/h，优选为以上述任意数值为上限或下限的范围值。

本发明优选在透过液上柱结束后使用纯水进行洗柱，合并收集所有流出液。

在本发明中，所述纯水洗柱的流速与透过液的流速相同，优选为0.3～1.0BV/h，更优选为0.5～0.8BV/h，如0.3BV/h，0.4BV/h，0.5BV/h，0.6BV/h，0.7BV/h，0.8BV/h，0.9BV/h，1.0BV/h，优选为以上述任意数值为上限或下限的范围值。所述纯水的使用量优选为1～2BV。

本发明优选对使用后的阴离子交换树脂进行活化，具体活化方法如下：

将待活化的阴离子交换树脂先使用乙醇浸泡，然后倾倒出乙醇之后用水洗柱至无醇味，依次使用稀盐酸、纯水和次氯酸钠/钾洗柱，最后使用纯水洗柱至pH为7～8，活化完成。

更具体的，将待活化的阴离子交换树脂用95％乙醇浸泡12h后，倾出乙醇后加入过液面的水进行湿态装柱；用纯水洗柱至无醇味，然后用3～5BV、3～5％的稀盐酸以0.5～1BV/h的流速洗柱，接着用纯水洗至pH为5.5～6.5；随后用4～6BV、3～5％的次氯酸钠或次氯酸钾以0.5～1BV/h的流速洗柱，再用纯水洗至pH为7～8，活化即完成。

次氯酸钠/钾为强碱弱酸盐，溶液显碱性，是一种碱性介质氧化剂，同时具有漂白性，用其作为阴离子交换树脂活化剂，可以使次氯酸根离子与阴离子交换树脂发生官能团结合，使阴离子交换树脂具有次氯酸跟离子官能团。当透过液上柱液该阴离子交换树脂时，该官能团与上柱液中的阴离子发生交换，一方面由于其具有氧化剂，对农药残留具有一定的降解性；同时还由于色素物质与阴离子交换树脂发生交换，且次氯酸盐具有漂白性，从而实现脱色效果。

得到流出液后，本发明将所述流出液上柱于大孔吸附树脂，上柱结束后，依次使用降解剂I、降解剂II和过氧化氢水溶液洗柱，最后使用醇水溶液解析，收集解析液。

在本发明中，所述大孔吸附树脂优选为D101型树脂、LX-100B型树脂、LX-T28型树脂、LX-T81和LX-38型树脂中的一种或几种；所述大孔吸附树脂的体积为与所述透过液中固形物的质量之比优选为(2～5)mL：1g，更优选为(3～4)mL：1g，如2mL：1g，3mL：1g，4mL：1g，5mL：1g，优选为以上述任意数值为上限或下限的范围值。

在本发明中，所述大孔吸附树脂的径高比优选为1：(5～10)，更优选为1：(6～9)，如1：5，1：6，1：7，1：8，1：9，1：10，优选为以上述任意数值为上限或下限的范围值；所述流出液的上柱流速优选为0.5～1.5BV/h，如0.5BV/h，0.6BV/h，0.7BV/h，0.8BV/h，0.9BV/h，1.0BV/h，1.1BV/h，1.2BV/h，1.3BV/h，1.4BV/h，1.5BV/h，优选为以上述任意数值为上限或下限的范围值。

在本发明中，所述降解剂I优选为亚硫酸钠水溶液、亚硫酸钾水溶液、亚硫酸氢钠水溶液、亚硫酸氢钾水溶液、焦亚硫酸钠水溶液和焦亚硫酸钾水溶液中的一种或几种；所述亚硫酸钠或亚硫酸钾水溶液的质量浓度优选为4～6％，更优选为4～5％；亚硫酸氢钠水溶液或亚硫酸氢钾水溶液的质量浓度为5～8％，更有选为6～7％；焦亚硫酸钠水溶液和焦亚硫酸钾水溶液的质量浓度为3～5％，更优选为3～4％。

在本发明中，所述降解剂I的使用量优选为2～3BV，如2BV，2.1BV，2.2BV，2.3BV，2.4BV，2.5BV，2.6BV，2.7BV，2.8BV，2.9BV，3BV，优选为以上述任意数值为上限或下限的范围值；所述降解剂I的流速优选为0.3～0.8BV/h，更优选为0.4～0.7BV/h，如0.3BV/h，0.4BV/h，0.5BV/h，0.6BV/h，0.7BV/h，0.8BV/h，优选为以上述任意数值为上限或下限的范围值。

本发明中的降解剂I均为还原剂，可以加速降低残留农药的含量。

在本发明中，所述降解剂II优选为氯酸钠水溶液和/或氯酸钾水溶液；所述降解剂II的质量浓度为0.5～2％，优选为1～1.5％，如0.5％，0.6％，0.7％，0.8％，0.9％，1.0％，1.1％，1.2％，1.3％，1.4％，1.5％，1.6％，1.7％，1.8％，1.9％，2％，优选为以上述任意数值为上限或下限的范围值。

在本发明中，所述降解剂II的使用量优选为2～3BV，如2BV，2.1BV，2.2BV，2.3BV，2.4BV，2.5BV，2.6BV，2.7BV，2.8BV，2.9BV，3BV，优选为以上述任意数值为上限或下限的范围值；所述降解剂II的流速优选为0.3～0.8BV/h，更优选为0.4～0.7BV/h，如0.3BV/h，0.4BV/h，0.5BV/h，0.6BV/h，0.7BV/h，0.8BV/h，优选为以上述任意数值为上限或下限的范围值。

在本发明中，所述降解剂II为氧化剂，可以加速降低残留农药的含量。

在本发明中，所述过氧化氢水溶液的质量浓度优选为6～10％，更优选为7～9％，如6％，7％，8％，9％，10％，优选为以上述任意数值为上限或下限的范围值。

在本发明中，所述过氧化氢水溶液的使用量为4～6BV，如4BV，5BV，6BV，优选为以上述任意数值为上限或下限的范围值；所述过氧化氢水溶液的流速优选为1.5～2BV/h，如1.5BV/h，1.6BV/h，1.7BV/h，1.8BV/h，19BV/h，2BV/h，优选为以上述任意数值为上限或下限的范围值。

本发明中的过氧化氢为氧化剂，其可以加速降低残留的农药的同时，也可以洗掉层析柱上残留的降解剂，同时漂白吸附在层析柱上的目标物质，且其本身可以降解为水和氧气，且在后续浓缩干燥过程中无残留。

在本发明中，所述醇水溶液优选为体积分数为60～70％的醇水溶液，其中的醇优选为甲醇和/或乙醇。

所述醇水溶液的用量优选为2.5～4BV，更优选为3～3.5BV，如2.5BV，2.6BV，2.7BV，2.8BV，2.9BV，3BV，3.1BV，3.2BV，3.3BV，3.4BV，3.5BV，3.6BV，3.7BV，3.8BV，3.9BV，4BV，优选为以上述任意数值为上限或下限的范围值；所述醇水溶液的流速优选为0.8～1.3BV/h，如0.8BV/h，0.9BV/h，1.0BV/h，1.1BV/h，1.2BV/h，1.3BV/h，优选为以上述任意数值为上限或下限的范围值。

完成上述两次层析之后，将得到的解析液依次进行浓缩、干燥和粉碎过筛，得到罗汉果甜苷。

在本发明中，所述浓缩以脱去醇及水分为目的，可以是单效真空蒸发式浓缩、多效真空蒸发式浓缩、旋转蒸发式浓缩中的一种或几种的组合；本发明优选将所述解析液浓缩至可溶性固形物含量为25～50％，如25％、30％、35％、40％、45％、50％、优选为以上述任意数值为上限或下限的范围值。

在本发明中，所述干燥以去除水分为目的，可以是真空干燥、微波干燥、鼓风干燥、喷雾干燥中的一种或几种的组合。

在本发明中，所述过筛的目数优选为160～200目。

本发明提供了一种脱除农药残留的罗汉果甜苷的规模化生产方法，包括以下步骤：A)将高温烘烤处理过的罗汉果使用热水浸提，固液分离，得到浸提液；B)将所述浸提液过超滤膜，收集透过液；C)将所述透过液过阴离子交换树脂，上柱结束后使用水洗柱，合并收集所有流出液；D)将所述流出液上柱于大孔吸附树脂，再依次使用降解剂I、降解剂II和过氧化氢水溶液洗柱，最后使用醇水溶液解析，收集解析液；E)将所述解析液浓缩、干燥，得到罗汉果甜苷。本发明通过超滤和两步层析，能够有效将罗汉果甜苷中的农药残留去除，且在罗汉果甜苷的纯化过程中，同时进行脱色，得到的产品为纯白色，本发明中的罗汉果甜苷V含量≥92％，收率≥93％。

为了进一步说明本发明，以下结合实施例对本发明提供的一种脱除农药残留的罗汉果甜苷的规模化生产方法进行详细描述，但不能将其理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1

(1)烘烤：精确称取约10kg罗汉果鲜果(鲜含量0.48％)，将其置于90℃恒温烘烤2.5h，然后将其置于150℃高温烘烤30min，随后冷却放置室温条件下冷却至室温；

(2)浸提：将其置于小型提取罐，分3次加入8倍量的90℃的热水，每次浸提1.5h，每次浸提过200目筛网，合并收集浸提液；

(3)超滤：将浸提液过截留分子量为4万Da的超滤膜，收集透过液；

(4)层析Ⅰ：将透过液上柱于LX-T5型阴离子交换树脂层析柱，其柱体积为固形物含量的12倍(12ml：1g)，径高比为1：9，上柱流速为0.6BV/h，然后1BV纯水洗柱，合并收集所有流出液。

LX-T5型阴离子交换树脂的活化方式为：将待活化的阴离子交换树脂用95％乙醇浸泡12h后，倾出乙醇后加入过液面的水进行湿态装柱；用纯水洗柱至无醇味，然后用5BV、5％的稀盐酸以0.7BV/h的流速洗柱，接着用纯水洗至pH为6.0；随后用6BV、4％的次氯酸钠以1BV/h的流速洗柱，再用纯水洗至pH为7，活化即完成。

(5)层析II：将流出液上柱于D101型大孔吸附树脂层析柱，其柱体为固形物含量的4倍(4ml：1g)，径高比为1：9，上柱流速为1.0BV/h；上柱结束后先用3BV、6％的亚硫酸钠水溶液，以0.5BV/h流速洗柱，接着用3BV、1.5％的氯酸钾水溶液，以0.7BV/h流速洗柱，然后再用6BV、10％的过氧化氢水溶液，以1.5BV/h流速洗柱，最后用3.5BV、体积分数为65％的乙醇水溶液，以1BV/h的流速解吸，收集解吸液。

(6)浓缩干燥：将得到的解吸液在真空度为-0.09MPa、温度为80℃条件下浓缩汁可溶性固形物为33.4％，然后在-0.09MPa、85℃真空干燥至恒重，粉碎过筛200目后，即得47.88g罗汉果甜苷产品。

经过检测和计算：产品为纯白色，罗汉果甜苷含量为94.42％，收率为94.87％，农残六氯苯、五氯硝基苯、七氯、乐果、乙硫磷、敌敌畏、氯氰菊酯、氰戊菊酯和溴氰菊酯皆未检出。

实施例2

(1)烘烤：精确称取约10kg罗汉果鲜果(鲜含量0.48％)，将其置于75℃恒温烘烤3.0h，然后将其置于170℃高温烘烤30min，随后冷却放置室温条件下冷却至室温；

(2)浸提：将其置于小型提取罐，分3次加入8倍量的95℃的热水，每次浸提1.0h，每次浸提过200目筛网，合并收集浸提液；

(3)超滤：将浸提液过截留分子量为3万Da的超滤膜，收集透过液；

(4)层析Ⅰ：将透过液上柱于LXD-762型阴离子交换树脂层析柱，其柱体积为固形物含量的10倍(10ml：1g)，径高比为1：8，上柱流速为0.8BV/h，然后1.5BV纯水洗柱，合并收集所有流出液。

LX-T5型阴离子交换树脂的活化方式为：将待活化的阴离子交换树脂用95％乙醇浸泡12h后，倾出乙醇后加入过液面的水进行湿态装柱；用纯水洗柱至无醇味，然后用3.5BV、5％的稀盐酸以0.5BV/h的流速洗柱，接着用纯水洗至pH为6.3；随后用5BV、4％的次氯酸钠以1BV/h的流速洗柱，再用纯水洗至pH为7.6，活化即完成。

(5)层析II：将流出液上柱于LX-T28型大孔吸附树脂层析柱，其柱体为固形物含量的3倍(3ml：1g)，径高比为1：7，上柱流速为0.6BV/h；上柱结束后先用2.5BV、4％的亚硫酸钠水溶液，以0.5BV/h流速洗柱，接着用2.5BV、1.0％的氯酸钾水溶液，以0.4BV/h流速洗柱，然后再用5BV、10％的过氧化氢水溶液，以1.5BV/h流速洗柱，最后用3.0BV、体积分数为68％的乙醇水溶液，以1.2BV/h的流速解吸，收集解吸液。

(6)浓缩干燥：将得到的解吸液在真空度为-0.09MPa、温度为80℃条件下浓缩汁可溶性固形物为30.7％，然后在-0.09MPa、85℃真空干燥至恒重，粉碎过筛200目后，即得48.13g罗汉果甜苷产品。

经过检测和计算：产品为纯白色，罗汉果甜苷含量为93.51％，收率为94.42％，农残六氯苯、五氯硝基苯、七氯、乐果、乙硫磷、敌敌畏、氯氰菊酯、氰戊菊酯和溴氰菊酯皆未检出。

实施例3

(1)烘烤：精确称取约10kg罗汉果干果(干含量2.12％)，将其置于80℃恒温烘烤2.5h，然后将其置于160℃高温烘烤30min，随后冷却放置室温条件下冷却至室温；

(2)浸提：将其置于小型提取罐，分3次加入30倍量的90℃的热水，每次浸提1.5h，每次浸提过200目筛网，合并收集浸提液；

(3)超滤：将浸提液过截留分子量为2万Da的超滤膜，收集透过液；

(4)层析Ⅰ：将透过液上柱于D941型阴离子交换树脂层析柱，其柱体积为固形物含量的8倍(8ml：1g)，径高比为1：7，上柱流速为0.7BV/h，然后1BV纯水洗柱，合并收集所有流出液。

LX-T5型阴离子交换树脂的活化方式为：将待活化的阴离子交换树脂用95％乙醇浸泡12h后，倾出乙醇后加入过液面的水进行湿态装柱；用纯水洗柱至无醇味，然后用4BV、4％的稀盐酸以0.6BV/h的流速洗柱，接着用纯水洗至pH为5.8；随后用4.6BV、5％的次氯酸钾以0.7BV/h的流速洗柱，再用纯水洗至pH为7.5，活化即完成。

(5)层析II：将流出液上柱于LX-100B型大孔吸附树脂层析柱，其柱体为固形物含量的3倍(3ml：1g)，径高比为1：8，上柱流速为0.9BV/h；上柱结束后先用3BV、6％的亚硫酸钾水溶液，以0.7BV/h流速洗柱，接着用3BV、2.0％的氯酸钠水溶液，以0.6BV/h流速洗柱，然后再用6BV、7％的过氧化氢水溶液，以1.8BV/h流速洗柱，最后用3.5BV、体积分数为65％的乙醇水溶液，以1BV/h的流速解吸，收集解吸液。

(6)浓缩干燥：将得到的解吸液在真空度为-0.09MPa、温度为80℃条件下浓缩汁可溶性固形物为41.5％，然后在-0.09MPa、85℃真空干燥至恒重，粉碎过筛200目后，即得211.43g罗汉果甜苷产品。

经过检测和计算：产品为纯白色，罗汉果甜苷含量为95.53％，收率为95.19％，农残六氯苯、五氯硝基苯、七氯、乐果、乙硫磷、敌敌畏、氯氰菊酯、氰戊菊酯和溴氰菊酯皆未检出。

对比例1

按照实施例1中的方法制备得到罗汉果甜苷产品，不同的是，采用氢氧化钠代替实施例1步骤(4)中所使用的次氯酸钠，得到46.88g罗汉果甜苷产品。

经过检测和计算：产品为浅黄色，罗汉果甜苷含量为93.12％，收率为91.58％，六氯苯0.152mg/kg、乐果0.132mg/kg、敌敌畏0.298mg/kg，五氯硝基苯、七氯、乙硫磷、氯氰菊酯、氰戊菊酯和溴氰菊酯皆未检出。

由此可知，对比例1漂白性差，即脱色差，氧化性差，农药有残留。

对比例2

按照实施例1中的方法制备得到罗汉果甜苷产品，不同的是，采用氯化钠代替实施例1步骤(5)中所使用的亚硫酸钠，得48.93g罗汉果甜苷产品。

经过检测和计算：产品为略显黄色，罗汉果甜苷含量为87.56％，收率为89.98％，六氯苯0.342mg/kg、五氯硝基苯0.288mg/kg、乐果0.353mg/kg、乙硫磷0.020mg/kg、敌敌畏0.224mg/kg、氯氰菊酯0.431mg/kg、氰戊菊酯0.329mg/kg；七氯和溴氰菊酯皆未检出。

由此可知，对比例2漂白性差，即脱色差，氧化性差，农药有残留，得到的罗汉果甜苷产品含量较低。

对比例3

按照实施例1中的方法制备得到罗汉果甜苷产品，不同的是，采用氯化钠代替实施例1步骤(5)中所使用的氯酸钾，得50.33g罗汉果甜苷产品。

经过检测和计算：产品为略显黄色，罗汉果甜苷含量为85.52％，收率为90.32％，五氯硝基苯0.142mg/kg、七氯0.255mg/kg、乙硫磷0.155mg/kg、氯氰菊酯0.014mg/kg、溴氰菊酯0.282mg/kg；六氯苯、乐果、敌敌畏和氰戊菊酯皆未检出。

由此可知，对比例3漂白性差，即脱色差，氧化性差，农药有残留，得到的罗汉果甜苷产品含量较低。

对比例4

按照实施例1中的方法制备得到罗汉果甜苷产品，不同的是，采用纯水代替实施例1步骤(5)中所使用的过氧化氢，得48.19g罗汉果甜苷产品。

经过检测和计算：产品为略显黄色，罗汉果甜苷含量为91.12％，收率为92.11％，六氯苯0.203mg/kg、七氯0.104mg/kg、氰戊菊酯0.298mg/kg；五氯硝基苯、乐果、乙硫磷、敌敌畏、氯氰菊酯和溴氰菊酯皆未检出。

由此可知，对比例4漂白性差，即脱色差，氧化性差，农药有残留，得到的罗汉果甜苷产品含量较低。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (5)

1.一种脱除农药残留的罗汉果甜苷的规模化生产方法，包括以下步骤：

A)将高温烘烤处理过的罗汉果使用热水浸提，固液分离，得到浸提液；

B)将所述浸提液过超滤膜，收集透过液；

C)将所述透过液过阴离子交换树脂，上柱结束后使用水洗柱，合并收集所有流出液；

D)将所述流出液上柱于大孔吸附树脂，再依次使用降解剂I、降解剂II和过氧化氢水溶液洗柱，最后使用醇水溶液解析，收集解析液；

所述降解剂I为亚硫酸钠水溶液、亚硫酸钾水溶液、亚硫酸氢钠水溶液、亚硫酸氢钾水溶液、焦亚硫酸钠水溶液和焦亚硫酸钾水溶液中的一种或几种；所述亚硫酸钠或亚硫酸钾水溶液的质量浓度为4～6％，亚硫酸氢钠水溶液或亚硫酸氢钾水溶液的质量浓度为5～8％，焦亚硫酸钠水溶液和焦亚硫酸钾水溶液的质量浓度为3～5％；所述降解剂I的使用量为2～3BV，流速为0.3～0.8BV/h；

所述降解剂II为氯酸钠水溶液和/或氯酸钾水溶液；所述降解剂II的质量浓度为0.5～2％；所述降解剂II的使用量为2～3BV，流速为0.3～0.8BV/h；

所述过氧化氢水溶液的质量浓度为6～10％；所述过氧化氢水溶液的使用量为4～6BV，流速为1.5～2BV/h；

E)将所述解析液浓缩、干燥，得到罗汉果甜苷；

还包括对使用后的阴离子交换树脂进行活化步骤，具体活化方法如下：

将待活化的阴离子交换树脂先使用乙醇浸泡，然后倾倒出乙醇之后用水洗柱至无醇味，依次使用稀盐酸、纯水和次氯酸钠/钾洗柱，最后使用纯水洗柱至pH为7～8，活化完成。

2.根据权利要求1所述的罗汉果甜苷的规模化生产方法，其特征在于，所述高温烘烤处理的温度为120～170℃；所述热水浸提的温度为85～95℃。

3.根据权利要求1所述的罗汉果甜苷的规模化生产方法，其特征在于，所述超滤膜的截留分子量为1万～5万Da。

4.根据权利要求1所述的罗汉果甜苷的规模化生产方法，其特征在于，所述阴离子交换树脂为LX-T5型树脂、LXD-762型树脂、LX-94型树脂和D941型树脂中的一种或几种；

所述阴离子交换树脂的体积与所述透过液中固形物的质量之比为(7～13)mL：1g。

5.根据权利要求1所述的罗汉果甜苷的规模化生产方法，其特征在于，所述大孔吸附树脂为D101型树脂、LX-100B型树脂、LX-T28型树脂、LX-T81和LX-38型树脂中的一种或几种；

所述大孔吸附树脂的体积为与所述透过液中固形物的质量之比为(2～5)mL：1g。