CN103249420A

CN103249420A - 口服用皮肤性状改善剂

Info

Publication number: CN103249420A
Application number: CN2011800317425A
Authority: CN
Inventors: 增冈范江; 狩野光芳; 宫崎幸司; 曾根俊郎
Original assignee: Yakult Honsha Co Ltd
Current assignee: Yakult Honsha Co Ltd
Priority date: 2010-06-28
Filing date: 2011-06-27
Publication date: 2013-08-14
Anticipated expiration: 2031-06-27
Also published as: CN103249420B; JP5903380B2; KR20130119849A; KR101757504B1; EP2586448A4; WO2012002322A1; US9439933B2; EP2586448A1; EP2586448B1; US20130095073A1; JPWO2012002322A1

Abstract

本发明提供口服摄取的发挥优异效果的皮肤性状改善剂。该口服用皮肤性状改善剂，以链球菌属细菌和双歧杆菌属细菌、或含有该2种细菌的发酵乳作为有效成分。

Description

口服用皮肤性状改善剂

技术领域

本发明涉及通过口服摄取改善角质水分含量等的皮肤性状的皮肤性状改善剂。

背景技术

皮肤由于暴露于紫外线而引起炎症、免疫抑制、氧化、DNA损伤等，其结果发生水分量降低、皱纹形成、弹力性降低、皮肤的老化促进等。对于这些皮肤性状的恶化，通常以外用剂的形态投与保湿剂、其他成分。

与此相对，近年来，通过口服摄取保湿成分或抗炎症成分等来改善皮肤性状的方法也有报告（专利文献1、2）。并且，分别报告有嗜热链球菌抑制特应性皮炎（专利文献3）和双歧杆菌属细菌改善皮肤的厚度、弹力性的降低（专利文献4）。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2001-252048号公报

专利文献2：日本特开2005-206578号公报

专利文献3：日本特开2007-39423号公报

专利文献4：日本特开2010-6757号公报

发明内容

发明所要解决的课题

但是，现有的口服用皮肤性状改善剂，其效果不充分，期望具有更优异的皮肤性状改善效果的材料。

因此，本发明的课题在于提供一种口服摄取的发挥优异效果的皮肤性状改善剂。

用于解决课题的方法

在此，本发明的发明者口服投与各种乳酸菌群和使用其的发酵乳，研究对于通过紫外线照射引起的皮肤问题的作用，结果发现如果并用嗜热链球菌属细菌和双歧杆菌属细菌，能够协同增强各自的皮肤性状改善效果，得到优异的口服投与用皮肤性状改善剂，从而完成了本发明。

即，本发明提供以链球菌属细菌和双歧杆菌属细菌、或含有该2种细菌的发酵乳作为有效成分的口服用皮肤性状改善剂。

此外，本发明提供用于口服摄取改善皮肤性状的链球菌属细菌和双歧杆菌属细菌的组合、或含有该2种细菌的发酵乳。

并且，本发明提供皮肤性状的改善方法，其特征在于，口服摄取链球菌属细菌和双歧杆菌属细菌、或含有该2种细菌的发酵乳。

再者，本发明提供用于制造口服用皮肤性状改善剂的链球菌属细菌和双歧杆菌属细菌、或含有该2种细菌的发酵乳的使用。

发明的效果

通过口服摄取本发明的皮肤性状改善剂，显著改善皮肤性状，特别是具有抑制由紫外线照射造成的角质层水分含量的降低或具有角质层水分含量的提高促进作用，改善皮肤的阻挡功能，改善角质层形态（排列规则性、细胞形态清晰性（clarity of cell morphology）等），抑制皮肤的肥厚，抑制皮肤的皱纹形成，抑制经表皮水分蒸散量的增加，具有角质化相关酶活性（组织蛋白酶L样活性）的上升作用等。此外，本发明的皮肤性状改善剂，由于作为有效成分含有能够口服摄取的链球菌属细菌和双歧杆菌属细菌，所以安全性高，能够实现连续的摄取，并且由于该菌的状态不论生死都发挥上述作用效果，所以能够对应于各种嗜好设定摄取时的形态，能够用作口服用医药品、饮料和食品。

附图说明

图1为表示各试验组的体重变化的图。

图2为表示各试验组的摄食量变化的图。

图3为表示各试验组的角质水分量的图。

图4为表示各试验组的经表皮水分蒸散量的图。

图5为表示人在饮用前后的角质水分含量（Corneometer）变化的图。

图6为表示人在饮用前后的角质水分含量（SKICON）变化的图。

图7为表示人角质层细胞的染色图像的图。

图8为表示角质层形态（排列规则性）的得分变化（score shift）的图。

图9为表示角质层形态（细胞形态清晰性）的得分变化的图。

具体实施方式

本发明的口服用皮肤性状改善剂作为有效成分包含链球菌数细菌和双歧杆菌属细菌、或包含含有该2种细菌的发酵乳。

作为本发明中使用的链球菌属细菌可以列举嗜热链球菌（Streptococcus thermophilus，也称为S.therm.）、酿脓链球菌（S.pyogenes）、马链球菌兽瘟亚种（S.zooepidemicus）、马链球菌（S.equi）、停乳链球菌马样亚种（S.equisimilis）、停乳链球菌（S.dysgalactiae）等，从皮肤性状改善效果的观点出发，优选嗜热链球菌。作为嗜热链球菌的具体例子，可以列举嗜热链球菌YIT2021株（FERM BP-7537：保藏日2001年4月5日）、嗜热链球菌YIT2084株（FERM BP-10879：保藏日2007年7月24日）、嗜热链球菌YIT2001（FERM BP-7538：保藏日2001年4月5日）。

作为本发明中使用的双歧杆菌属细菌，可以列举短双歧杆菌（Bifidobacterium breve，也称为B.breve）、长双歧杆菌（B.longum）、两岐双歧杆菌（B.bifidum）、动物双歧杆菌（B.animalis）、猪双歧杆菌（B.suis）、婴儿双歧杆菌（B.infantis）、青春双歧杆菌（B.adolescentis）、链状双歧杆菌（B.catenulatum）、假小链双歧杆菌（B.pseudocatenulatum）、乳双歧杆菌（B.lactis）、球双歧杆菌（B.globosum）等。其中，短双歧杆菌、长双歧杆菌、两岐双歧杆菌以前在乳制品中大量使用，积累有安全性等的数据，而且，从皮肤性状改善效果的观点出发而优选，特别优选短双歧杆菌。作为短双歧杆菌的具体例，可以列举短双歧杆菌YIT12272（FERM BP-11320：保藏日2011年1月20日）、短双歧杆菌YIT4065（FERM BP-6223：保藏日1998年1月16日）。上述的嗜热链球菌和短双歧杆菌保藏于〒305-8566茨城县筑波市东1-1-1筑波中心中央第6国家高级工业科学技术学院国际专利生物保藏中心（AIST）。

上述2种细菌，能够以活菌体原样状态作为皮肤性状改善剂使用，除此之外，能够使用例如活菌体的冻结干燥物、实施了加热处理或醇处理等杀菌处理的死菌体、包含该菌体的培养物或者再加工上述菌体或培养物得到的制品作为皮肤性状改善剂。

本发明的皮肤性状改善剂通过口服摄取，显著改善皮肤的性状，特别是具有抑制由紫外线照射造成的角质层水分含量降低或者具有角质层水分含量的提高促进作用，改善皮肤的阻挡功能，改善角质层形态（排列规则性、细胞形态清晰性等），抑制皮肤的肥厚，抑制皮肤的皱纹形成，抑制经表皮水分蒸散量的增加，具有角质化相关酶活性（组织蛋白酶L样活性）的上升作用等。

本发明中，抑制由紫外线照射造成的角质层水分含量的降低是指例如在通过后述的实施例所示的方法测定角质层水分含量的情况下，抑制由紫外线照射造成的角质层水分含量的降低的作用，另外，角质层水分含量的提高促进作用是指不论紫外线照射的有无，都将角质层水分含量提高促进到与未照射紫外线的健康皮肤同等或者在其以上的水平的作用。其中，作为测定角质层水分含量的方法，不限于后述的实施例所示的方法。

本发明的皮肤性状改善剂中，以提高皮肤性状改善作用为目的，还能够添加难消化性糖类。作为难消化性糖类，优选低聚半乳糖、低聚果糖等的低聚糖，特别优选低聚半乳糖。这些难消化性糖类的每一次的使用量，根据服用的对象的症状、年龄、体重等而不同，因此，不能统一决定，但设为大约0.1～10g左右即可。

本发明的皮肤性状改善剂，能够依照常规方法，与药学上可接受的载体制成各种剂型的医药组合物。

例如，能够在上述菌株或其加工物等中，加入乳糖、白糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、淀粉、碳酸钙、高岭土、结晶纤维素、硅酸等的赋形剂，水、乙醇、丙醇、葡萄糖液、淀粉液、明胶溶液、羧甲基纤维素、甲基纤维素、磷酸钾、聚乙烯基吡咯烷酮等的结合剂，藻酸钠、儿茶酸末、碳酸氢钠、碳酸钙、聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯类、十二烷基硫酸钠等的崩解剂，甘油、淀粉等的保湿剂，精制滑石、硬脂酸盐、聚乙二醇等的润滑剂等，通过常规方法，制造颗粒剂、片剂、胶囊剂等。并且，对于片剂，根据需要能够制成实施了通常的包衣的片剂，例如糖衣片、明胶包衣片、肠溶包衣片、薄膜包衣片或者双层片、多层片。

本发明的口服用皮肤性状改善剂中，包含链球菌属细菌和双歧杆菌属细菌即可，但是也可以使用含有该2种细菌的发酵乳。作为该发酵乳，只要是在包含乳成分的培养基中培养上述2种细菌得到的发酵乳即可，可以是分别制造在包含乳成分的培养基中培养上述2种细菌的1种的发酵乳、进行混合得到的发酵乳，也可以是在包含乳成分的培养基中混合培养上述2种细菌得到的发酵乳。

作为培养基中包含的乳成分，能够使用牛乳、山羊乳等动物乳、脱脂乳、乳粉、脱脂乳粉、生奶油等。培养根据通常的发酵乳的制造方法即可，例如在25～46℃、优选在35～42℃，进行6～120小时、优选24～72小时即可。培养方法，可以为静置、搅拌、振荡等的任意培养方法。

此外，通过将上述菌体或其加工物等直接添加到食品中，或者在使用乳成分等的可食用性培养基的情况下，通过使用该菌株制造发酵乳等的发酵食品，就能够作为各种饮料和食品利用。作为饮料和食品优选的例子，能够例示酸奶、奶酪、发酵乳、乳制品乳酸菌饮料、发酵豆浆、冰淇淋、果汁饮料、汤、小甜饼干等。

本发明的皮肤性状改善剂，特别是在发酵乳的形态的情况下，能够配合通常使用的各种食品原材料。具体来说，能够列举蔗糖、葡萄糖、果糖、帕拉金糖（Palatinose）、海藻糖、乳糖、木糖、麦芽糖等的糖类，山梨糖醇、木糖醇、赤藓糖醇、乳糖醇、帕拉金糖醇（Plaltinitol）、还原糖浆、还原麦芽糖糖浆等的糖醇，阿斯巴甜、奇异果甜蛋白、三氯蔗糖（Sucralose）、乙酰磺胺酸钾（Acesulfame-K）、甜叶菊（Stevia）等的高甜味度甜味料，琼脂、明胶、角叉菜胶、瓜尔胶、黄原胶、果胶、刺槐豆胶、吉兰糖胶、羧甲基纤维素、大豆多糖类、藻酸丙二醇等的各种增粘稳定剂，蔗糖脂肪酸酯、甘油脂肪酸酯、聚甘油脂肪酸酯、脱水山梨糖醇脂肪酸酯、卵磷脂等的乳化剂，奶油、黄油、酸奶油等的乳脂肪，钙、镁、锌、铁、锰等的矿物成分。

此外，本发明的皮肤性状改善剂，能够配合通过口服摄取对皮肤性状带来有益作用的原材料。作为这样的原材料，能够例示维生素A、维生素B类、维生素C、维生素D、维生素E等的维生素类，β-胡萝卜素、γ-胡萝卜素、叶黄素等的类胡萝卜素，亚油酸、亚麻酸、EPA、DHA等的脂肪酸类，胶原蛋白、粘多糖类、神经酰胺等的皮肤构成成分等。

另外，本发明的皮肤性状改善剂中可以包含能够口服摄取的对生物体赋予有益功能的乳酸菌。

作为这样的乳酸菌，能够例示嗜酸乳杆菌（Lactobacillusacidophilus）、短乳杆菌（Lactobacillus brevis）、棒状乳杆菌（Lactobacilluscoryniformis）、弯曲乳杆菌（Lactobacillus curvatus）、干酪乳杆菌（Lactobacillus casei）、德氏乳杆菌乳亚种（Lactobacillus delbrueckiisubsp.lactis）、德氏乳杆菌保加利亚亚种（Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus）、发酵乳杆菌（Lactobacillu fermentum）、鸡乳杆菌（Lactobacillus gallinarum）、加氏乳杆菌（Lactobacillus gasseri）、瑞士乳杆菌（Lactobacillus helveticus）、约氏乳杆菌（Lactobacillus johnsonii）、高加索酸奶乳杆菌（Lactobacillus kefiri）、苹果乳杆菌（Lactobacillusmali）、植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）、戊糖乳杆菌（Lactobacilluspentosus）、类干酪乳杆菌（Lactobacillus paracasei）、清酒乳杆菌（Lactobacillus sakei）、玉米乳杆菌（Lactobacillus zeae）等的乳杆菌属细菌，乳酸乳球菌乳亚种（Lactococcus lactis subsp.lactis）、乳酸乳球菌乳脂亚种（Lactococcus lactis subsp.cremoris）、植物乳球菌（Lactococcus plantarum）等的乳球菌属细菌，肠膜明串珠菌乳脂亚种（Leuconostocmesenteroides subsp.cremoris）、乳明串珠菌（Leuconostoclactis）等的明串珠菌属细菌，乳酸片球菌（Pediococcus acidilactici）、戊糖片球菌（Pediococcus pentosaceus）、嗜盐片球菌（Pediococcushalophilus）等的片球菌属细菌，屎肠球菌（Enterococcus faecium）、屎肠球菌（Enterococcus faecalis）等的肠球菌属细菌。它们可以单独也可以并用2种以上。

本发明的能够口服摄取的皮肤性状改善剂中链球菌属细菌和双歧杆菌属细菌的每一次的使用量，根据服用的对象的症状、年龄、体重等不同，因此不能统一决定，但是作为大约菌数分别设为10³～10¹³CFU左右即可，特别是优选分别设为10⁶～10¹³CFU左右。

此外，本发明的皮肤性状改善剂的摄取开始时间和摄取期间等没有特别限定，只要在伴随着紫外线照射的皮肤问题发生前后口服摄取即可，但为了得到充分的效果，不管有无伴随着紫外线的照射的皮肤问题的产生等，优选连续地口服摄取。

实施例

以下，列举实施例更详细地说明本发明，但是本发明不受这些实施例任何限定。

参考例1

通过交替传代培养的短双歧杆菌YIT 10001、YIT 4125的育种改良

短双歧杆菌YIT 10001株（FERM BP-8205）和短双歧杆菌YIT 4125（FERM BP-7813）作为亲株，进行交替传代浓缩。

（1）将20.7%的全脂乳粉培养基在135℃杀菌3.5秒，之后，接种0.5%的短双歧杆菌YIT 10001株或YIT 4125株的子菌种1（seedstarter）、1%的两岐双歧杆菌的子菌种，在33℃混合培养到pH5.3，调制菌液A1（400mL）。

（2）向菌液A1中配合糖浆液A，使得帕拉金糖的最终浓度为10%，调制乳制品A1（630mL）。将乳制品A1（200mL）分注入300mL的烧瓶中，塞好棉栓，在这样的需氧条件下，在5℃进行1周（90rpm）搅拌保存（以后，简称为需氧搅拌保存），然后，在试管中填充满管，在塞入丁基橡胶塞的厌氧条件下，在10℃，静置保存一周（以后，简称为厌氧静置保存）。

（3）将在本条件保存的乳制品A1（1mL）接种在添加有头孢菌素的奶培养基（12%脱脂乳粉、0.1%酵母提取物、0.03%L-半胱氨酸盐酸盐、0.2%沉淀性碳酸钙、头孢菌素5μg/mL，以后，简称为添加有头孢菌素的奶培养基）10mL中，在37℃，24小时厌氧培养，得到短双歧杆菌的母菌种（mother starter）2。将母菌种2（0.03mL）接种在奶培养基（12%脱脂乳粉、0.1%酵母提取物、0.03%L-半胱氨酸盐酸盐、0.2%沉淀性碳酸钙，以后，称为奶培养基）30mL中，在37℃、厌氧培养24小时，调制短双歧杆菌的子菌种2。使用子菌种2重复进行与上述同样的操作。即，将子菌种2调制的乳制品A2进行需氧搅拌保存后，进行厌氧静置保存，调制短双歧杆菌的母菌种3、以及子菌种3。

（4）接着，将23.5%脱脂乳粉培养基在120℃杀菌3.5秒之后，接种2%的短双歧杆菌的子菌种3、0.01%的乳酸乳球菌的子菌种，在37℃混合培养到pH4.4，调制菌液B1（100mL）。

（5）此外，在120℃、3.5秒杀菌后的19.7%脱脂乳粉培养基中添加0.08%乳肽，之后，接种0.5%嗜热链球菌的子菌种，在37℃培养到pH4.3，调制菌液C1（700mL）。向菌液B1中加入菌液C1（混合比1:2），配合糖浆液B使得还原麦芽糖糖浆的最终浓度为5%，调制乳制品B1（870mL）。

（6）与乳制品A1同样，在添加有头孢菌素的奶培养基10mL中接种需氧搅拌保存后厌氧静置保存的乳制品B1（1mL），在37℃进行24小时厌氧培养，得到短双歧杆菌的母菌种4。在奶培养基30mL中接种母菌种4（0.03mL），在37℃进行厌氧培养24小时，调制短双歧杆菌的子菌种4。使用子菌种4，重复与上述同样的操作。即，将由子菌种4调制的乳制品B2需氧搅拌保存后进行厌氧静置保存，调制短双歧杆菌的母菌种5、以及子菌种5。

如此，重复2次乳制品A的调制、需氧搅拌保存和厌氧静置保存，之后，使用存活的短双歧杆菌，重复2次乳制品B的调制、需氧搅拌保存和厌氧静置保存，进行短双歧杆菌的浓缩操作。这一系列工序为1个循环，合计重复4个循环。最终，从10℃、厌氧静置保存2周的乳制品A8和乳制品B8中，各取出1mL涂布在添加有5μg/mL头孢菌素的TOS丙酸琼脂培养基（Yakult药品工业）中，在37℃以Anaero Pack（三菱气体化学）进行厌氧培养，分离菌落。通过反复进行该菌落分离，进行纯化，将来自短双歧杆菌YIT 10001株和YIT 4125株的单菌落从乳制品A8中分离合计21株，从乳制品B8中分离合计21株，合计分离42株。

参考例2

存活性确认试验

使用亲株和分离株，用参考例1的方法，分别调制乳制品A、B，在需氧条件下、5℃、搅拌保存1周之后，在厌氧条件下、10℃、静置保存2周。筛选在乳制品A、B两者中存活性良好的短双歧杆菌YIT12272株（来自YIT 4125株，由乳制品A8分离）。

YIT12272株，对照菌（YIT 10001株、YIT 4125株）在乳制品A、B中的存活性的结果示于表1。YIT12272株在乳制品A、B的任一个中，即使在需氧条件下、5℃、搅拌保存1周后，在厌氧条件下、10℃、静置保存2周，都存活3×10⁷cfu/mL以上的活菌。另一方面，虽然由对照菌制备的乳制品A、B的任一个中，都存活有3×10⁷cfu/mL以上的活菌，但是在两个制品中都没有显示良好的存活性。

此外，乳制品A、B的物性示于表2。在菌液A中配合糖浆A，调制乳制品A，乳制品A的pH、酸度分别为5.6、3.4，菌液A的渗透压为550mOsm，乳制品A增加至950mOsm。另一方面。在菌液B中配合菌液C和糖浆B，调制乳制品B，乳制品B的pH、酸度分别为4.4、7.5，菌液B的渗透压为900mOsm，乳制品B减少至600mOsm。

由以上可知，短双歧杆菌YIT12272株在培养温度、pH、酸度、配合糖浆引起的渗透压变化、无脂乳固体成分、乳脂肪成分不同的乳制品A、B中，与对照菌相比，存活性得到强化。

[表1]

乳制品A、B保存后的短双歧杆菌YIT12272株的活菌数

需氧条件下、5℃、搅拌保存1周后，厌氧条件下、10℃、静置保存2周，在添加有5μg/mL头孢菌素的TOS丙酸琼脂培养基中测定活菌数

[表2]

乳制品A、B的物性

渗透压：由京都第一科学株式会社制造的Osmostart OM-6040测定

实施例1

（1）实验动物和饲养方法

使用5周龄的雌性无毛小鼠（Hos：HR-1）。在CS笼中群养，使用AIN93G饲料驯化1周，之后，以没有体重差别的方式分组，使用试验食品饲养2周。饲养条件在实验期间设为恒温（24±1℃）、恒湿（60±5%），明暗周期为12小时。饲料和水使其自由摄取。改良AIN93N的组成制作饲料。饲料在乳钵中混合后加入适量去离子水，制成膏状，移动到冻结干燥托盘中，切割为块状。冻结干燥后，真空包装进行冷藏保存。饲料组成如表3所示。

[表3]

（2）实验组

[表4]

B.breve：短双歧杆菌YIT12272

S.therm.：嗜热链球菌YIT2084

（3）试验饲料

（a）B.breve.菌末…通过常规方法调制m-ILS液体培养基，在121℃进行15分钟灭菌处理，在气相N₂置换条件下，接种1%子菌种，在37℃培养23小时。培养结束后的活菌数为1.16×10⁹CFU/mL。该培养液通过生理食盐水清洗，除去培养基成分，混合到改良AIN-93G饲料中。混合后冻结干燥，制作固体饲料。

（b）B.breve.发酵乳…调制在10%脱脂乳粉（YOTSUBA YAA）中加入有0.03%Yeast Extract的培养基，在121℃灭菌处理15分钟，在气相N2置换条件下接种1%的依照常规方法调制的子菌种，在37℃培养44小时。培养结束后的活菌数为1.02×10⁸CFU/mL。将该培养液冻结干燥、粉末化后，混合到饲料中。混合后，进行冻结干燥，制作固体饲料。

（c）S.therm.发酵乳…在10%脱脂乳粉中接种0.1%子菌种，加入另外灭菌的Hinute DH（不二制油），通过发酵罐（B.E.MARUBISHI）在37℃、100rpm、pH6.8培养24小时。培养结束后的活菌数为5×10⁸CFU/mL。将该培养液冻结干燥、粉末化后，混合到饲料中。混合后，进行冻结干燥，制作固体饲料。

（d）B.breve.+S.therm.混合发酵乳…以上述方法培养，分别添加粉末化的B.breve.发酵乳和S.therm.发酵乳粉末10%，制作饲料。

（4）菌数测定方法

通过0.1%Bacto yeast extract（Difco公司生产）适当稀释在乳钵中匀浆化的饵料，涂布在琼脂平板培养基中，测定活菌数。

（5）实验日程

从摄取试验食物的第11日开始通过紫外线照射装置（东芝SE-FL-20），以40mJ/cm²/day进行4日的紫外线照射，次日解剖。体重测定一周一次，摄食量测定一周进行2～3次左右，此外进行日常观察。

（6）测定项目

从试验食物开始第15日，使用皮肤计测仪器，测定皮肤性状。

（a）经表皮水分蒸散量（TEWL）

使用Tewa meter TM210（Courage+khazaka electronic GmbH）测定经表皮水分蒸散量，作为生物功能的指标。数值每2秒测定，计算并表示出30秒的平均值。

（b）角质层水分含量

使用3.5MHZ的高频电导率测定装置（SKICON-200，IBS），测定小鼠背部皮肤角质层的电导率值。

（7）统计

统计处理使用SAS的前临床程序包，显著差别检验进行Dunnett检验。

（8）

a.体重和摄食量

体重和摄食量的经时变化如图1和图2所示。任意组之间没有显著差别，没有发现紫外线照射或者样品差异造成的小鼠的生长和健康状况的差异。

（b）皮肤性状

b-1角质层水分含量

角质层水分含量如图3所示。角质层水分含量通过紫外线照射显著降低，但是在短双歧杆菌和嗜热链球菌混合发酵乳组中抑制了显著降低。其结果，与分别单独投放短双歧杆菌或嗜热链球菌的组相比，具有协同效果。其值甚至高于没有照射紫外线的空白组，显示极为显著的效果。即，本发明的皮肤性状改善剂，不仅能够单纯抑制紫外线照射带来的角质层水分含量降低，还具有将角质层水分含量提高促进到与未照射紫外线的健康皮肤同等或以上水平的作用，显示极高的实用性。

b-2经表皮水分蒸散量（TEWL）

TEWL示于图4。通过紫外线照射，TEWL显著提升，表明表皮阻挡功能下降。所有组中都有显著改善，该改善效果在短双歧杆菌和嗜热链球菌混合发酵乳组中最高。

实施例2

（1）含有短双歧杆菌YIT12272和嗜热链球菌YIT2021的发酵乳的制造

在120℃进行了3.5秒平皿杀菌的脱脂乳粉溶液（SNF20.7%）中接种2%短双歧杆菌YIT12272的前培养液，在37℃培养24小时，得到双歧杆菌发酵乳。同样，在平皿杀菌过的脱脂乳粉溶液（SNF17.4%）中接种0.5%的嗜热链球菌YIT2021的前培养液，在37℃培养24小时，得到乳酸菌发酵乳。混合这些菌液，加入配合有还原麦芽糖糖浆、聚糊精、低聚半乳糖、乳化铁、阿斯巴甜等的糖浆溶液，得到发酵乳。

作为安慰剂，制造不含上述细菌和低聚半乳糖的未发酵乳。未发酵乳中添加与上述发酵乳所含的量等量的乳酸和乙酸。

各饮料的成分组成如表5所示。试验饮料的饮用开始后的YIT12272的平均活菌数和平均总乳酸菌数分别为6.9×10⁸CFU/mL、5.1×10⁸CFU/mL。此外，饮用结束时的YIT12272的平均活菌数和平均总乳酸菌数分别为6.6×10⁸CFU/mL、5.1×10⁸CFU/mL。

[表5]

（2）对于安慰组和试验组各20名（女性）4周每天使其各饮用1支（100mL）。评价饮用前、饮用后和后观察后（饮用结束2周后）的皮肤性状。

对于皮肤测量，通过由洗面奶洗脸，去掉化妆品，在30分钟放松状态下驯化肌肤，之后，以仰着的状态躺在床上，将左脸（眼角和鼻的交点）的角质层水分含量使用Corneometer（商标）CM825（株式会社Integral制造）和SKICON-200（IBS公司制造）测定5次计算平均值。此外，左脸的水分蒸散量使用Cutometer MPA 580（商标）（株式会社Integral制造）测定。

对于皱纹测量，从被测试者的左眼角使用有机硅橡胶（SILFLO，Flexico Developments）制作阴模复制品，通过数字显微镜获取该复制品的图像后，进行图像分析（WinROOF Pro Ver.6.1：三谷商事）。皱纹依照日本化妆品工业联合会制作的皱纹测量法的指南进行解析，作为测量数据，以皱纹最大深度（mm）表示。

作为肌肤的更新（turnover）的正常化指标，测定作为角质化相关酶的组织蛋白酶L样活性。方法按照常规方法，使用作为合成肽的Z-Val-Val-Arg-MCA为基质进行荧光分析。

对于角质层采取，饮用前和后观察后选取相同部位，饮用后选取与饮用前不同的部位，分别通过胶带剥离方法在同一部位采取3层。将角质层第二层的采取样品在0.5%亮绿-1.0%龙胆紫B水溶液中、室温、8分钟染色，之后，用蒸馏水清洗。通过数字显微镜获取该图像后，使用上述图像分析装置，进行角质细胞面积、圆形度和周长的测定。对每1名被测试者从3个视野测定30个角质细胞面积。此外，角质层形态（排列规则性和细胞形态清晰性）根据分别表示在表6和表7中的评价基准进行得分化，将3名观察者的得分平均。

[表6]

排列规则性的评价基准

得分	基准
		1	几乎没有具有规则性的集落（colony）
2	不规则集落多
		3	具有规则性的集落多
4	几乎都为规则性集落

[表7]

细胞形态清晰性评价基准

得分	基准
		1	几乎都为轮廓不清晰的细胞
2	轮廓不清晰的细胞多
		3	轮廓清晰的细胞多
4	几乎都为轮廓清晰的细胞

（3）结果

3-1角质层水分含量

角质层水分含量的变化如图5～6所示。通过SKICON测定的结果，安慰组在饮用后、后观察后与饮用前相比显著降低。另一方面，试验组在饮用后没有变化，在后观察后显著降低。通过CORNEOMETER测定的结果，安慰组中在饮用后、后观察后都确认到显著降低，但试验组与饮用前相比没有变化。试验组与安慰组的比较中，尽管试验组在饮用后、后观察后没有显著差异，但显示高的值。

3-2角质化相关酶

试验组中，组织蛋白酶L样活性，与饮用前相比，在饮用后显著上升。另一方面，安慰群中没有看到变化。

3-3角质层形态

研究角质层细胞面积、周长和圆形度（4π×面积/（周长）²、0<圆形度≤1）的变化。角质层细胞的形态，形状越大，越接近圆形（正六边形）越为良好的状态，因此任一个测定项目的值越大则角质层的状态判定为越好。圆形度在两组中，与饮用前相比，在饮用后、后观察后都显著上升。作为一例，试验组的50多岁的女性的角质层细胞的染色图像如图7所示。观察到饮用前细胞小形状也不均一，而饮用后，细胞变大，处于形状整齐（正六边形）的状态。

将角质层形态（排列规则性和细胞形态清晰性）以分值化评价的结果（得分值利用与饮用前的变化量（Δ得分）表示）示于图8和图9。与安慰组相比，试验组中在饮用后的得分改善效果高，还确认到存在饮用的改善效果在后观察后持续的倾向。

3-4皱纹

皱纹最大深度，在安慰组中没有变化，但在试验组中，与饮用前相比显著减少。

实施例3

含有短双歧杆菌YIT4065和嗜热链球菌YIT2021的发酵乳的制造

在120℃进行了3.5秒平皿杀菌的脱脂乳粉溶液（SNF20.7%）中接种2%短双歧杆菌YIT4065的前培养液，在37℃培养24小时，得到双歧杆菌发酵乳。同样，在平皿杀菌的脱脂乳粉溶液（SNF17.4%）中接种0.5%的嗜热链球菌YIT2021的前培养液，在37℃培养24小时，得到乳酸菌发酵乳。混合这些菌液，加入配合有还原麦芽糖糖浆、聚糊精、低聚半乳糖、乳化铁、阿斯巴甜等的糖浆溶液，得到发酵乳。

确认了短双歧杆菌YIT4065通过口服摄取的皮肤性状改善作用（TEWL、水分含量、皮沟、皮丘数目等）与短双歧杆菌YIT12272具有同等效果，本实施例的发酵乳能够期待具有本发明的皮肤性状改善作用。

实施例4

含有短双歧杆菌YIT4065和嗜热链球菌YIT2084的发酵乳的制造

在120℃进行了3.5秒平皿杀菌的脱脂乳粉溶液（SNF20.7%）中接种2%短双歧杆菌YIT4065的前培养液，在37℃培养24小时，得到双歧杆菌发酵乳。同样，在平皿杀菌的脱脂乳粉溶液（SNF17.4%）中接种0.5%的嗜热链球菌YIT2084的前培养液，在37℃培养24小时，得到乳酸菌发酵乳。混合这些菌液，加入配合有还原麦芽糖糖浆、聚糊精、低聚半乳糖、乳化铁、阿斯巴甜等的糖浆溶液，得到发酵乳。

确认了短双歧杆菌YIT4065通过口服摄取的皮肤性状改善作用（TEWL、水分含量、皮沟、皮丘数目等）与短双歧杆菌YIT12272具有同等效果，本实施例的发酵乳能够期待具有本申请发明的皮肤性状改善作用。

Claims

1.一种口服用皮肤性状改善剂，其特征在于，以链球菌属细菌和双歧杆菌属细菌、或含有该2种细菌的发酵乳作为有效成分。

2.如权利要求1所述的口服用皮肤性状改善剂，其特征在于，链球菌属细菌为嗜热链球菌。

3.如权利要求1或2所述的口服用皮肤性状改善剂，其特征在于，链球菌属细菌为嗜热链球菌YIT2021株（FERM BP-7537）或嗜热链球菌YIT2084株（FERM BP-10879）。

4.如权利要求1～3中任一项所述的口服用皮肤性状改善剂，其特征在于，双歧杆菌属细菌为短双歧杆菌。

5.如权利要求1～4中任一项所述的口服用皮肤性状改善剂，其特征在于，双歧杆菌属细菌为短双歧杆菌YIT4065株（FERM BP-6223）或短双歧杆菌YIT12272株（FERM BP-11320）。

6.如权利要求1～5中任一项所述的口服用皮肤性状改善剂，其特征在于，还含有低聚半乳糖。

7.如权利要求1～6中任一项所述的口服用皮肤性状改善剂，其特征在于，皮肤性状改善为抑制紫外线照射造成的角质层水分含量的降低。

8.如权利要求1～7中任一项所述的口服用皮肤性状改善剂，其特征在于，皮肤性状改善为促进角质层水分含量的上升。

9.口服摄取、改善皮肤性状用的链球菌属细菌和双歧杆菌属细菌的组合、或含有该2种细菌的发酵乳。

10.如权利要求9所述的组合或发酵乳，其特征在于，链球菌属细菌为嗜热链球菌。

11.如权利要求9或10所述的组合或发酵乳，其特征在于，链球菌属细菌为嗜热链球菌YIT2021株（FERM BP-7537）或嗜热链球菌YIT2084株（FERM BP-10879）。

12.如权利要求9～11中任一项所述的组合或发酵乳，其特征在于，双歧杆菌属细菌为短双歧杆菌。

13.如权利要求9～12中任一项所述的组合或发酵乳，其特征在于，双歧杆菌属细菌为短双歧杆菌YIT4065株（FERM BP-6223）或短双歧杆菌YIT12272株（FERM BP-11320）。

14.如权利要求9～13中任一项所述的组合或发酵乳，其特征在于，还含有低聚半乳糖。

15.如权利要求9～14中任一项所述的组合或发酵乳，其特征在于，皮肤性状改善为抑制紫外线照射造成的角质层水分含量的降低。

16.如权利要求9～15中任一项所述的组合或发酵乳，其特征在于，皮肤性状改善为促进角质层水分含量的上升。

17.一种皮肤性状改善方法，其特征在于，口服摄取链球菌属细菌和双歧杆菌属细菌、或含有该2种细菌的发酵乳。

18.如权利要求17所述的方法，其特征在于，链球菌属细菌为嗜热链球菌。

19.如权利要求17或18所述的方法，其特征在于，链球菌属细菌为嗜热链球菌YIT2021株（FERM BP-7537）或嗜热链球菌YIT2084株（FERM BP-10879）。

20.如权利要求17～19中任一项所述的方法，其特征在于，双歧杆菌属细菌为短双歧杆菌。

21.如权利要求17～20中任一项所述的方法，其特征在于，双歧杆菌属细菌为短双歧杆菌YIT4065株（FERM BP-6223）或短双歧杆菌YIT12272株（FERM BP-11320）。

22.如权利要求17～21中任一项所述的方法，其特征在于，还口服摄取低聚半乳糖。

23.如权利要求17～22中任一项所述的方法，其特征在于，皮肤性状改善为抑制紫外线照射造成的角质层水分含量的降低。

24.如权利要求17～23中任一项所述的方法，其特征在于，皮肤性状改善为促进角质层水分含量的上升。