KR20130119849A

KR20130119849A - 경구용 피부 성상 개선제

Info

Publication number: KR20130119849A
Application number: KR1020127033087A
Authority: KR
Inventors: 노리에 마스오카; 미츠요시 가노; 고우지 미야자키; 도시로 소네
Original assignee: 가부시키가이샤 야쿠르트 혼샤
Priority date: 2010-06-28
Filing date: 2011-06-27
Publication date: 2013-11-01
Also published as: CN103249420B; JP5903380B2; KR101757504B1; EP2586448A4; WO2012002322A1; US9439933B2; EP2586448A1; EP2586448B1; CN103249420A; US20130095073A1; JPWO2012002322A1

Abstract

경구 섭취로 우수한 효과를 발휘하는 피부 성상 개선제를 제공한다.
스트렙토코커스속 세균 및 비피도박테리움속 세균, 또는 당해 2 종의 세균을 함유하는 발효유를 유효 성분으로 하는 경구용 피부 성상 개선제.

Description

경구용 피부 성상 개선제{SKIN PROPERTIES IMPROVING AGENT FOR ORAL ADMINISTRATION}

본 발명은 경구 섭취에 의해 각질 수분 함량 등의 피부 성상을 개선하는 피부 성상 개선제에 관한 것이다.

피부는 자외선의 노출에 의해 염증, 면역 억제, 산화, DNA 손상 등을 일으키고, 그 결과 수분량의 저하, 주름 형성, 탄력성의 저하, 피부의 노화 촉진 등이 발생한다. 이들 피부 성상의 악화에 대해서는, 보습제, 그 밖의 성분을 외용제의 형태로 투여하는 것이 일반적이다.

이것에 대하여, 최근 보습 성분이나 항염증 성분 등을 경구적으로 섭취함으로써 피부 성상을 개선하는 수단이 보고되어 있다 (특허문헌 1, 2). 또한, 스트렙토코커스·서모필러스균이 아토피성 피부염을 억제하는 것 (특허문헌 3), 및 비피도박테리움속 세균이 피부의 두께, 탄력성의 저하를 개선하는 것 (특허문헌 4) 이 각각 보고되어 있다.

일본 공개특허공보 2001-252048호 일본 공개특허공보 2005-206578호 일본 공개특허공보 2007-39423호 일본 공개특허공보 2010-6757호

그러나, 종래의 경구용 피부 성상 개선제는 그 효과가 충분하지 않아, 더욱 우수한 피부 성상 개선 효과를 갖는 소재가 요망되었다.

따라서, 본 발명의 과제는, 경구 섭취로 우수한 효과를 발휘하는 피부 성상 개선제를 제공하는 것에 있다.

그래서 본 발명자는, 다양한 유산균군 및 그것을 사용한 발효유를 경구 투여하고, 자외선 조사에 의한 피부 트러블에 대한 작용을 검토해 온 결과, 스트렙토코커스·서모필러스속 세균과 비피도박테리움속 세균을 병용하면, 각각의 피부 성상 개선 효과가 상승적으로 증강되어, 우수한 경구 투여용 피부 성상 개선제가 얻어짐을 알아내어, 본 발명을 완성하였다.

즉, 본 발명은, 스트렙토코커스속 세균 및 비피도박테리움속 세균, 또는 당해 2 종의 세균을 함유하는 발효유를 유효 성분으로 하는 경구용 피부 성상 개선제를 제공하는 것이다.

또, 본 발명은, 경구 섭취하여 피부 성상을 개선하기 위한 스트렙토코커스속 세균 및 비피도박테리움속 세균의 조합, 또는 당해 2 종의 세균을 함유하는 발효유를 제공하는 것이다.

또한, 본 발명은, 스트렙토코커스속 세균 및 비피도박테리움속 세균, 또는 당해 2 종의 세균을 함유하는 발효유를 경구 섭취하는 것을 특징으로 하는 피부 성상의 개선 방법을 제공하는 것이다.

또한, 본 발명은, 경구용 피부 성상 개선제 제조를 위한 스트렙토코커스속 세균 및 비피도박테리움속 세균, 또는 당해 2 종의 세균을 함유하는 발효유의 사용을 제공하는 것이다.

본 발명의 피부 성상 개선제는 경구적으로 섭취함으로써, 특히 자외선 조사에 의한 각질층 수분 함량의 저하를 억제하거나 또는 각질층 수분 함량의 상승 촉진 작용을 갖고, 피부의 배리어 기능을 개선하고, 각질층 형태 (배열 규칙성, 세포 형태 명료성 등) 를 개선하고, 피부의 비후를 억제하고, 피부의 주름 형성을 억제하고, 경표피 수분 증산량의 증가를 억제하고, 각질화 관련 효소 활성 (카텝신 L 형 활성) 의 상승 작용을 갖는 등, 피부 성상을 현저하게 개선한다. 또, 본 발명의 피부 성상 개선제는, 경구 섭취 가능한 스트렙토코커스속 세균 및 비피도박테리움속 세균을 유효 성분으로서 함유하고 있으므로 안전성이 높고, 계속적인 섭취를 실현 가능하게 하고, 게다가 그 균의 상태는 생사에 관계없이 상기 작용 효과를 발휘하므로 다양한 기호에 따라 섭취시의 형태를 설정할 수 있고, 경구용 의약품이나 음식품으로서 유용하다.

도 1 은 각 시험군의 체중 변화를 나타내는 도면이다.
도 2 는 각 시험군의 섭이량 변화를 나타내는 도면이다.
도 3 은 각 시험군의 각질 수분량을 나타내는 도면이다.
도 4 는 각 시험군의 경표피 수분 증산량을 나타내는 도면이다.
도 5 는 인간에게 있어서의 음용 전후의 각질층 수분 함량 (Corneometer) 변화를 나타내는 도면이다.
도 6 은 인간에게 있어서의 음용 전후의 각질층 수분 함량 (SKICON) 변화를 나타내는 도면이다.
도 7 은 인간 각질층 세포의 염색 화상을 나타내는 도면이다.
도 8 은 각질층 형태 (배열 규칙성) 의 스코어 추이를 나타내는 도면이다.
도 9 는 각질층 형태 (세포 형태 명료성) 의 스코어 추이를 나타내는 도면이다.

본 발명의 경구용 피부 성상 개선제는, 스트렙토코커스속 세균 및 비피도박테리움속 세균, 또는 당해 2 종의 세균을 함유하는 발효유를 유효 성분으로서 함유한다.

본 발명에 사용되는 스트렙토코커스속 세균으로는, 스트렙토코커스·서모필러스 (Streptococcus thermophilus, S. therm. 이라고도 한다), 스트렙토코커스·피오게네스 (S. pyogenes), 스트렙토코커스·주에피데미커스 (S. zooepidemicus), 스트렙토코커스·에쿠이 (S. equi), 스트렙토코커스·에쿠이시밀리스 (S. equisimilis), 스트렙토코커스·디스갈락티에 (S. dysgalactiae) 등을 들 수 있는데, 피부 성상 개선 효과의 면에서 스트렙토코커스·서모필러스가 바람직하다. 스트렙토코커스·서모필러스의 구체예로는, 스트렙토코커스·서모필러스 YIT2021 주 (FERM BP-7537 : 기탁일 2001년 4월 5일), 스트렙토코커스·서모필러스 YIT2084 주 (FERM BP-10879 : 기탁일 2007년 7월 24일), 스트렙토코커스·서모필러스 YIT2001 주 (FERM BP-7538 : 기탁일 2001년 4월 5일) 을 들 수 있다.

본 발명에 사용되는 비피도박테리움속 세균으로는, 비피도박테리움·브레브 (Bifidobacterium breve, B. breve. 라고도 한다), 비피도박테리움·롱검 (B. longum), 비피도박테리움·비피덤 (B. bifidum), 비피도박테리움·아니말리스 (B. animalis), 비피도박테리움·주이스 (B. suis), 비피도박테리움·인판티스 (B. infantis), 비피도박테리움·아돌레센티스 (B. adolescentis), 비피도박테리움·카테눌라툼 (B. catenulatum), 비피도박테리움·슈도카테눌라툼 (B. pseudocatenulatum), 비피도박테리움·락티스 (B. lactis), 비피도박테리움·글로보섬 (B. globosum) 등을 들 수 있다. 그 중에서도, 비피도박테리움·브레브, 비피도박테리움·롱검, 비피도박테리움·비피덤은 이전부터 유제품에 수많이 사용되어 안전성 등의 데이터가 누적되어 있고, 또 피부 성상 개선 효과의 면에서 바람직하며, 특히 비피도박테리움·브레브가 바람직하다. 비피도박테리움·브레브의 구체예로는, 비피도박테리움·브레브 YIT12272 주 (FERM BP-11320 : 기탁일 2011년 1월 20일), 비피도박테리움·브레브 YIT4065 주 (FERM BP-6223 : 기탁일 1998년 1월 16일) 를 들 수 있다. 상기 스트렙토코커스·서모필러스 및 비피도박테리움·브레브는, 우편 번호 305-8566 이바라키현 츠쿠바시 히가시 1-1-1 츠쿠바 센터 중앙 제 6 독립 행정 법인 산업 기술 종합 연구소 특허 생물 기탁 센터에 기탁되어 있다.

상기 2 종의 세균은, 생균체를 그대로의 상태로 피부 성상 개선제로서 사용할 수 있는 것 외에, 예를 들어, 생균체의 동결 건조물, 가열 처리나 알코올 처리 등의 살균 처리를 실시한 사균체, 당해 균체를 함유하는 배양물 또는 추가로 이들을 가공한 것을 피부 성상 개선제로서 사용할 수 있다.

본 발명의 피부 성상 개선제는 경구적으로 섭취함으로써, 특히 자외선 조사에 의한 각질층 수분 함량의 저하를 억제하거나 또는 각질층 수분 함량의 상승 촉진 작용을 갖고, 피부의 배리어 기능을 개선하고, 각질층 형태 (배열 규칙성, 세포 형태 명료성 등) 를 개선하고, 피부의 비후를 억제하고, 피부의 주름 형성을 억제하고, 경표피 수분 증산량의 증가를 억제하고, 각질화 관련 효소 활성 (카텝신 L 형 활성) 의 상승 작용을 갖는 등, 피부 성상을 현저하게 개선한다.

본 발명에 있어서, 자외선 조사에 의한 각질층 수분 함량의 저하 억제란, 예를 들어 후술하는 실시예에 나타내는 방법에 의해 각질층 수분 함량을 측정한 경우, 자외선 조사에 의한 각질층 수분 함량의 저하를 억제하는 작용을 말하며, 또 각질층 수분 함량의 상승 촉진 작용이란, 자외선 조사 유무에 상관없이, 자외선 비조사의 건강한 피부와 동등하거나 혹은 그 이상의 레벨로까지 각질층 수분 함량을 상승 촉진시키는 작용을 말한다. 여기서, 각질층 수분 함량의 측정법으로는, 후술하는 실시예에 나타내는 방법에 한정되지 않는다.

본 발명의 피부 성상 개선제에는, 피부 성상 개선 작용을 높일 목적으로 추가로 난소화성 당질을 첨가할 수 있다. 난소화성 당질로는, 갈락토올리고당, 프락토올리고당 등의 올리고당이 바람직하고, 특히 갈락토올리고당이 바람직하다. 이들 난소화성 당질의 1 회당의 사용량은, 복용하는 대상자의 증상, 연령, 체중 등에 따라서도 상이하기 때문에, 한 마디로 결정할 수는 없지만, 대략 0.1 ∼ 10 g 정도로 하면 된다.

본 발명의 피부 성상 개선제는, 통상적인 방법에 따라, 약학적으로 허용되는 담체와 함께 다양한 제형의 의약 조성물로 할 수 있다.

예를 들어, 상기 균주 또는 그 가공물 등에 유당, 백당, 염화나트륨, 포도당, 우레아, 전분, 탄산칼슘, 카올린, 결정 셀룰로오스, 규산 등의 부형제, 물, 에탄올, 프로판올, 포도당액, 전분액, 젤라틴 용액, 카르복시메틸셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 인산칼륨, 폴리비닐피롤리돈 등의 결합제, 알긴산나트륨, 카테킨 분말, 탄산수소나트륨, 탄산칼슘, 폴리옥시에틸렌소르비탄 지방산 에스테르류, 라우릴황산나트륨 등의 붕괴제, 글리세린, 전분 등의 보습제, 정제 탤크, 스테아르산염, 폴리에틸렌글리콜 등의 활택제 등을 첨가하고, 통상적인 방법에 의해 과립제, 정제, 캡슐제 등을 제조할 수 있다. 또한, 정제에 대해서는, 필요에 따라 통상적인 제피 (劑皮) 를 실시한 정제, 예를 들어, 당의정, 젤라틴 피포정 (被包錠), 장용피정 (腸溶皮錠), 필름 코팅정 혹은 이중정, 다중정으로 할 수도 있다.

본 발명의 경구용 피부 성상 개선제에 있어서는, 스트렙토코커스속 세균 및 비피도박테리움속 세균을 함유하고 있으면 되는데, 당해 2 종의 세균을 함유하는 발효유를 사용해도 된다. 당해 발효유로는, 유 (乳) 성분을 함유하는 배지 중에서 상기 2 종의 세균을 배양한 것이면 되고, 유성분을 함유하는 배지 중에서 상기 2 종의 세균 중 1 종을 배양한 발효유를 각각 제조하여 혼합한 것이어도 되고, 유성분을 함유하는 배지 중에서 상기 2 종의 세균을 혼합 배양한 것이어도 된다.

배지에 함유되는 유성분으로는, 우유, 산양유 등의 수유 (獸乳), 탈지유, 분유, 탈지 분유, 생크림 등을 사용할 수 있다. 배양은 통상적인 발효유의 제조법에 준하면 되고, 예를 들어 25 ∼ 46 ℃, 바람직하게는 35 ∼ 42 ℃ 에서, 6 ∼ 120 시간, 바람직하게는 24 ∼ 72 시간 실시하면 된다. 배양 방법은 정치 (靜置), 교반, 진탕 등 어느 것이어도 된다.

또, 상기 균체 또는 그 가공물 등을 식품에 직접 첨가함으로써, 또는 유성분 등의 가식성 배지를 사용한 경우에는, 당해 균주를 사용하여 발효유 등의 발효 식품을 제조함으로써, 각종 음식품으로서 이용할 수 있다. 음식품의 바람직한 예로는, 요구르트, 치즈, 발효유, 유제품 유산균 음료, 발효 두유, 아이스크림, 과즙 음료, 스프, 쿠키 등을 예시할 수 있다.

본 발명의 피부 성상 개선제, 특히 발효유의 형태인 경우에는, 통상적으로 사용되는 다양한 식품 소재를 배합할 수 있다. 구체적으로는, 자당, 글루코오스, 프룩토오스, 팔라티노오스, 트레할로오스, 락토오스, 자일로오스, 맥아당 등의 당질, 소르비톨, 자일리톨, 에리트리톨, 락티톨, 팔라티니트, 환원 물엿, 환원 맥아당 물엿 등의 당 알코올, 아스파탐, 타우마틴, 수크랄로오스, 아세술팜 K, 스테비아 등의 고감미도 감미료, 한천, 젤라틴, 카리기난, 구아검, 잔탄검, 펙틴, 로커스트빈검, 젤란검, 카르복시메틸셀룰로오스, 대두 다당류, 알긴산프로필렌글리콜 등의 각종 증점 안정제, 자당 지방산 에스테르, 글리세린 지방산 에스테르, 폴리글리세린 지방산 에스테르, 소르비탄 지방산 에스테르, 레시틴 등의 유화제, 크림, 버터, 사워 크림 등의 유지방, 칼슘, 마그네슘, 아연, 철, 망간 등의 미네랄분을 들 수 있다.

또, 본 발명의 피부 성상 개선제에는, 경구적으로 섭취함으로써 피부 성상에 유익한 작용을 주는 소재를 배합할 수 있다. 이와 같은 소재로는, 비타민 A, 비타민 B 류, 비타민 C, 비타민 D, 비타민 E 등의 비타민류, β-카로틴, γ-카로틴, 루테인 등의 카로티노이드, 리놀산, 리놀렌산, EPA, DHA 등의 지방산류, 콜라겐, 무코 다당류, 세라미드 등의 피부 구성 성분 등을 예시할 수 있다.

또한, 본 발명의 피부 성상 개선제에는, 경구 섭취가 가능하고 생체에 유익한 기능을 주는 유산균을 함유하는 것이어도 된다.

이와 같은 유산균으로는, 락토바실러스·아시도필러스 (Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스·브레비스 (Lactobacillus brevis), 락토바실러스·코리니포미스 (Lactobacillus coryniformis), 락토바실러스·커바투스 (Lactobacillus curvatus), 락토바실러스·카제이 (Lactobacillus casei), 락토바실러스·델브릭키이·서브스피시즈 락티스 (Lactobacillus delbrueckii subsp. lactis), 락토바실러스·델브릭키이·서브스피시즈 불가리쿠스 (Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus), 락토바실러스·퍼멘텀 (Lactobacillus fermentum), 락토바실러스·갈리나룸 (Lactobacillus gallinarum), 락토바실러스·가세리 (Lactobacillus gasseri), 락토바실러스·헬베티쿠스 (Lactobacillus helveticus), 락토바실러스·존소니 (Lactobacillus johnsonii), 락토바실러스·케피리 (Lactobacillus kefiri), 락토바실러스·말리 (Lactobacillus mali), 락토바실러스·플란타룸 (Lactobacillus plantarum), 락토바실러스·펜토서스 (Lactobacillus pentosus), 락토바실러스·파라카제이 (Lactobacillus paracasei), 락토바실러스·사케이 (Lactobacillus sakei), 락토바실러스·지에 (Lactobacillus zeae) 등의 락토바실러스속 세균, 락토코커스·락티스·서브스피시즈 락티스 (Lactococcus lactis subsp. lactis), 락토코커스·락티스·서브스피시즈 크레모리스 (Lactococcus lactis subsp. cremoris), 락토코커스·플란타룸 (Lactococcus plantarum) 등의 락토코커스속 세균, 류코노스톡·메센테로이데스·서브스피시즈 크레모리스 (Leuconostocmesenteroides subsp. cremoris), 류코노스톡·락티스 (Leuconostoc lactis) 등의 류코노스톡속 세균, 페디오코커스·아시딜락티시 (Pediococcus acidilactici), 페디오코커스·펜토사세우스 (Pediococcus pentosaceus), 페디오코커스·할로필러스 (Pediococcus halophilus) 등의 페디오코커스속 세균, 엔테로코커스·패시움 (Enterococcus faecium), 엔테로코커스·패칼리스 (Enterococcus faecalis) 등의 엔테로코커스속 세균을 예시할 수 있다. 이들은 단독으로 또는 2 종 이상 병용해도 된다.

본 발명의 경구 섭취 가능한 피부 성상 개선제에 있어서의 스트렙토코커스속 세균 및 비피도박테리움속 세균의 1 회당의 사용량은, 복용하는 대상자의 증상, 연령, 체중 등에 따라서도 상이하기 때문에, 한 마디로 결정할 수는 없지만, 대략 균수로서 각각 10³ ∼ 10¹³ CFU 정도로 하면 되고, 각각 특히 10⁶ ∼ 10¹³ CFU 정도로 하는 것이 바람직하다.

또, 본 발명의 피부 성상 개선제의 섭취 개시 시기나 섭취 기간 등은 특별히 제한은 없으며, 자외선 조사에 수반되는 피부 장해의 발생 전후에 경구적으로 섭취하면 되는데, 충분한 효과를 얻기 위해서는, 자외선의 조사에 수반되는 피부 장해 발생 등의 유무에 상관없이 계속적으로 경구 섭취하는 것이 바람직하다.

실시예

이하에 실시예를 들어 본 발명을 더욱 상세하게 설명하는데, 본 발명은 이들 실시예에 조금도 제약되는 것은 아니다.

참고예 1

교호 계대 배양법에 의한 비피도박테리움·브레브 YIT 10001, YIT 4125 의 육종 개량

비피도박테리움·브레브 YIT 10001 주 (FERM BP-8205) 및 비피도박테리움·브레브 YIT 4125 주 (FERM BP-7813) 를 친주로 하여 교호 계대 농축을 실시하였다.

(1) 20.7 ％ 전체 분유 배지를 135 ℃, 3.5 초 살균한 후, 비피도박테리움·브레브 YIT 10001 주 또는 YIT 4125 주의 시드 스타터 1 을 0.5 ％, 비피도박테리움·비피덤의 시드 스타터를 1 ％ 접종하고, 33 ℃ 에서 pH 5.3 까지 혼합 배양하여 균액 A1 (400 ㎖) 을 조제하였다.

(2) 균액 A1 에 팔라티노오스의 최종 농도가 10 ％ 가 되도록 시럽액 A 를 조합 (調合) 하여 유제품 A1 (630 ㎖) 을 조제하였다. 유제품 A1 (200 ㎖) 을 300 ㎖ 용량의 콜벤에 나누어 따르고, 솜마개를 한 호기적 조건하에서 5 ℃, 1 주일 교반 (90 rpm) 보존 (이후, 호기 교반 보존으로 약기한다) 한 후, 시험관에 가득 충전하고 부틸 마개를 한 혐기 조건하에서 10 ℃, 1 주일 정치 보존 (이후, 혐기 정치 보존으로 약기한다) 하였다.

(3) 본 조건으로 보존한 유제품 A1 (1 ㎖) 을 세파로신 첨가 밀크 배지 (12 ％ 탈지 분유, 0.1 ％ 효모 엑기스, 0.03 ％ L-시스테인염산염, 0.2 ％ 침강성 탄산칼슘, 세파로신 5 ㎍/㎖, 이후, 세파로신 첨가 밀크 배지로 약기한다) 10 ㎖ 에 접종하고, 37 ℃, 24 시간 혐기 배양하여 비피도박테리움·브레브의 마더 스타터 2 로 하였다. 마더 스타터 2 (0.03 ㎖) 를 밀크 배지 (12 ％ 탈지 분유, 0.1 ％ 효모 엑기스, 0.03 ％ L-시스테인염산염, 0.2 ％ 침강성 탄산칼슘, 이후, 밀크 배지로 약기한다) 30 ㎖ 에 접종하고, 37 ℃, 24 시간 혐기 배양하여 비피도박테리움·브레브의 시드 스타터 2 를 조제하였다. 시드 스타터 2 를 사용하여 상기와 동일한 조작을 반복하였다. 즉, 시드 스타터 2 로 조제한 유제품 A2 를 호기 교반 보존 후, 혐기 정치 보존하여, 비피도박테리움·브레브의 마더 스타터 3, 또한 시드 스타터 3 을 조제하였다.

(4) 다음으로, 23.5 ％ 탈지 분유 배지를 120 ℃, 3.5 초 살균한 후, 비피도박테리움·브레브의 시드 스타터 3 을 2 ％, 락토코커스·락티스의 시드 스타터를 0.01 ％ 접종하고, 37 ℃ 에서 pH 4.4 까지 혼합 배양하여 균액 B1 (100 ㎖) 을 조제하였다.

(5) 또, 120 ℃, 3.5 초 살균한 19.7 ％ 탈지 분유 배지에 유 (乳) 펩티드를 0.08 ％ 첨가한 후, 스트렙토코커스·서모필러스의 시드 스타터를 0.5 ％ 접종하고, 37 ℃ 에서 pH 4.3 까지 배양하여 균액 C1 (700 ㎖) 을 조제하였다. 균액 B1 에 균액 C1 을 첨가하고 (혼합비 1 : 2), 또한 환원 맥아당 물엿의 최종 농도가 5 ％ 가 되도록 시럽액 B 를 조합하여 유제품 B1 (870 ㎖) 을 조제하였다.

(6) 유제품 A1 과 동일하게 호기 교반 보존 후, 혐기 정치 보존한 유제품 B1 (1 ㎖) 을 세파로신 첨가 밀크 배지 10 ㎖ 에 접종하고, 37 ℃, 24 시간 혐기 배양하여 비피도박테리움·브레브의 마더 스타터 4 로 하였다. 마더 스타터 4 (0.03 ㎖) 를 밀크 배지 30 ㎖ 에 접종하고, 37 ℃, 24 시간 혐기 배양하여 비피도박테리움·브레브의 시드 스타터 4 를 조제하였다. 시드 스타터 4 를 사용하여 상기와 동일한 조작을 반복하였다. 즉, 시드 스타터 4 로 조제한 유제품 B2 를 호기 교반 보존 후, 혐기 정치 보존하여, 비피도박테리움·브레브의 마더 스타터 5, 또한 시드 스타터 5 를 조제하였다.

이와 같이, 유제품 A 의 조제, 호기 교반 보존 및 혐기 정치 보존을 2 회 반복한 후, 생존한 비피도박테리움·브레브를 사용하여, 유제품 B 의 조제, 호기 교반 보존 및 혐기 정치 보존을 2 회 반복하고, 비피도박테리움·브레브의 농축 조작을 실시하였다. 본 일련의 공정을 1 사이클로 하여, 합계 4 사이클 반복하였다. 최종적으로 10 ℃, 2 주일 혐기 정치 보존한 유제품 A8 및 유제품 B8 로부터, 각각 1 ㎖ 를 세파로신 5 ㎍/㎖ 를 첨가한 TOS 프로피온산 한천 배지 (야쿠르트 약품 공업) 에 도말하고, 37 ℃ 에서 아내로팍 (미츠비시 가스 화학) 으로 혐기 배양하여 콜로니를 분리하였다. 본 콜로니 분리를 반복함으로써 순화 (純化) 하고, 비피도박테리움·브레브 YIT 10001 주 및 YIT 4125 주 유래의 단일 콜로니를 유제품 A8 로부터 합계 21 주, 유제품 B8 로부터 합계 21 주, 합계 42 주를 분리하였다.

참고예 2

생존성 확인 시험

친주와 분리주를 사용하여, 참고예 1 의 방법으로 유제품 A, B 를 각각 조제하고, 호기 조건하에서 5 ℃, 1 주일 교반 보존 후, 혐기 조건하에서 10 ℃, 2 주일 정치 보존하였다. 유제품 A, B 양방에서 생존성이 양호하였던 비피도박테리움·브레브 YIT12272 주 (YIT 4125 주 유래, 유제품 A8 로부터 분리) 를 선발하였다.

YIT12272 주, 대조균 (YIT 10001 주, YIT 4125 주) 의 유제품 A, B 에서의 생존성의 결과를 표 1 에 나타낸다. YIT12272 주는, 유제품 A, B 어느 것에 있어서도, 호기 조건하에서 5 ℃, 1 주일 교반 보존 후, 혐기 조건하에서 10 ℃, 2 주일 정치 보존해도 3 × 10⁷ cfu/㎖ 이상의 생균이 생존하였다. 한편, 대조균으로 제조한 유제품 A, B 중 어느 일방에서는 3 × 10⁷ cfu/㎖ 이상의 생균이 생존하였지만, 양방의 제품에서 양호한 생존성을 나타내지 않았다.

또, 유제품 A, B 의 물성을 표 2 에 나타낸다. 균액 A 에 시럽 A 를 조합하여 유제품 A 를 조제한 결과, 유제품 A 의 pH, 산도는 각각 5.6, 3.4 이고, 삼투압은 균액 A 에서는 550 mOsm 이었지만, 유제품 A 에서는 950 mOsm 으로 증가하였다. 한편, 균액 B 에 균액 C 와 시럽 B 를 조합하여 유제품 B 를 조제한 결과, 유제품 B 의 pH, 산도는 각각 4.4, 7.5 이고, 삼투압은 균액 B 에서는 900 mOsm 이었지만, 유제품 B 에서는 600 mOsm 으로 감소하였다.

이상으로부터, 비피도박테리움·브레브 YIT12272 주는, 배양 온도, pH, 산도, 시럽 조합에 의한 삼투압 변화, 무지유 고형분, 유지방분이 상이한 유제품 A, B 의 양방에서, 대조균과 비교하여 생존성이 강화되었음이 밝혀졌다.

실시예 1

(1) 실험 동물과 사육 방법

5 주령 암컷 헤어리스 마우스 (Hos : HR-1) 를 사용하였다. CS 케이지에서 군사 (群飼) 하고, 1 주일 AIN93G 사료로 순화 (馴化) 한 후, 체중에 차이가 나지 않도록 군 분류하고, 시험식으로 2 주일 사육하였다. 사육 조건은 실험 기간을 통하여 항온 (24 ± 1 ℃), 항습 (60 ± 5 ％) 으로 하고, 명암 주기는 12 시간으로 하였다. 사료 및 물은 자유 섭취시켰다. 사료는 AIN93G 조성을 개변하여 제조하였다. 사료는 막자사발로 혼합 후, 탈이온수를 적당량 첨가하여 페이스트상으로 하고, 동결 건조 트레이로 옮겨 블록상으로 잘라 나눴다. 동결 건조 후, 진공팩하여 냉장 보존하였다. 사료 조성을 표 3 에 나타낸다.

(2) 실험군

(3) 시험 사료

(a) B. breve. 균말 … m-ILS 액체 배지를 정법에 따라 조제하고, 121 ℃ 15 분간 멸균 처리하고, 기상 N₂ 치환 조건으로 시드 스타터를 1 ％ 접종하고, 37 ℃ 에서 23 시간 배양하였다. 배양이 종료된 생균수는 1.16 × 10⁹ CFU/㎖ 였다. 이 배양액을 생리 식염수로 세정하여 배지 성분을 제거한 후, 개변 AIN-93G 사료에 혼합하였다. 혼합 후 동결 건조시켜 고형 사료를 제조하였다.

(b) B. breve. 발효유 … 10 ％ 탈지 분유 (요츠바 YAA) 에 0.03 ％ Yeast Extract 를 첨가한 배지를 조제하고, 121 ℃ 15 분간 멸균 처리하고, 기상 N₂ 치환 조건으로 정법에 따라 조제한 시드 스타터를 1 ％ 접종하고, 37 ℃ 에서 44 시간 배양하였다. 배양이 종료된 생균수는 1.02 × 10⁸ CFU/㎖ 였다. 이 배양액을 동결 건조시켜 분말화한 후, 사료에 혼합하였다. 혼합 후, 동결 건조시켜 고형 사료를 제조하였다.

(c) S. therm. 발효유 … 10 ％ 탈지 분유에 시드 스타터를 0.1 ％ 접종하고, 별도로 멸균한 하이뉴트 DH (후지 제유) 를 첨가하고, 자 퍼멘터 (마루비시 바이오 엔지니어링) 로 37 ℃, 100 rpm, pH 6.8 에서 24 시간 배양하였다. 배양이 종료된 생균수는 5 × 10⁸ CFU/㎖ 였다. 이 배양액을 동결 건조시켜 분말화한 후, 사료에 혼합하였다. 혼합 후, 동결 건조시켜 고형 사료를 제조하였다.

(d) B. breve ＋ S. therm. 혼합 발효유 … 상기 방법으로 배양하고, 분말화한 B. breve. 발효유와 S. therm. 발효유 분말을 각각 10 ％ 첨가하여 사료를 제조하였다.

(4) 균수 측정 방법

막자사발로 균질화한 먹이를 멸균한 0.1 ％ Bacto yeast extract (Difco 사 제조) 로 적절히 희석시키고, 한천 평판 배지에 도말하여 생균수를 측정하였다.

(5) 실험 스케줄

시험식 섭취 11 일째부터 자외선 조사 장치 (토시바 SE-FL-20) 를 사용하여 40 mJ/㎠/day 로 4 일간 자외선 조사를 실시하고, 다음날 해부하였다. 체중 측정은 주 1 회, 섭이량 측정은 주 2 ∼ 3 회 정도 실시하고, 그 밖에는 일상 관찰을 실시하였다.

(6) 측정 항목

시험식 개시부터 15 일째에 피부 계측 기기를 사용하여 피부 성상을 측정하였다.

(a) 경표피 수분 증산량 (TEWL)

Tewa meter TM210 (Courage ＋ khazaka electronic GmbH) 을 사용하여 경표피 수분 증산량을 측정하고, 배리어 기능의 지표로 하였다. 수치는 2 초마다 30 초간 측정한 평균값을 산출하여 나타냈다.

(b) 각질층 수분 함량

3.5 MHZ 의 고주파 전도도 측정 장치 (SKICON-200, IBS) 를 사용하여, 마우스 등부 피부 각질층의 컨덕턴스값을 측정하였다.

(7) 통계

통계 처리는 SAS 의 전 (前) 임상 패키지를 사용하고, 유의차 검정은 Dunnett 검정을 실시하였다.

(8)

a. 체중 및 섭이량

체중 및 섭이량의 시간 경과적 변화를 도 1 및 2 에 나타낸다. 어느 군 사이에 있어서도 유의차는 확인되지 않았으며, 자외선 조사나 샘플의 차이에 의한 마우스의 생육이나 건강 상태의 차이는 관찰되지 않았다.

(b) 피부 성상

b-1. 각질층 수분 함량

각질층 수분 함량을 도 3 에 나타낸다. 각질층 수분 함량은 자외선 조사에 의해 현저하게 저하되었는데, 비피도박테리움·브레브 및 스트렙토코커스·서모필러스 혼합 발효유군에 있어서 유의하게 저하가 억제되었다. 그 결과는, 비피도박테리움·브레브 또는 스트렙토코커스·서모필러스 각각 단독 투여군에 대하여 상승적이었다. 그 값은 자외선 조사를 하지 않은 블랭크군도 상회하는 결과로, 매우 현저한 효과를 나타냈다. 즉, 본 발명의 피부 성상 개선제는 자외선 조사에 의한 각질층 수분 함량의 저하를 간단히 억제할 뿐만 아니라, 자외선 비조사의 건강한 피부와 동등 이상의 레벨로까지 각질층 수분 함량을 상승 촉진시키는 작용을 갖고 있어, 매우 실용성이 높은 것임이 나타났다.

b-2. 경표피 수분 증산량 (TEWL)

TEWL 을 도 4 에 나타낸다. 자외선 조사에 의해 TEWL 이 현저하게 항진되어 표피 배리어 기능이 저하되었음이 시사되었다. 모든 군에 있어서 이것을 유의하게 개선하였다. 그 개선 효과는 비피도박테리움·브레브 및 스트렙토코커스·서모필러스 혼합 발효유군에서 가장 높았다.

실시예 2

(1) 비피도박테리움·브레브 YIT12272 및 스트렙토코커스·서모필러스 YIT2021 을 함유하는 발효유의 제조

120 ℃, 3.5 초간 플레이트 살균한 탈지 분유 용액 (SNF 20.7 ％) 에 비피도박테리움·브레브 YIT12272 의 전 (前) 배양액을 2 ％ 접종하고, 37 ℃ 에서 24 시간 배양하여 비피더스균 발효유를 얻었다. 또 동일하게 플레이트 살균한 탈지 분유 용액 (SNF 17.4 ％) 에 스트렙토코커스·서모필러스 YIT2021 의 전배양액을 0.5 ％ 접종하고, 37 ℃ 에서 24 시간 배양하여 유산균 발효유를 얻었다. 이들 균액을 혼합하고, 환원 맥아당 물엿, 폴리덱스트로오스, 갈락토올리고당, 유화철, 아스파탐 등을 혼합한 시럽 용액을 조합하여, 발효유를 얻었다.

플라세보로서, 상기 세균 및 갈락토올리고당을 함유하지 않는 미발효유를 제조하였다. 미발효유에는 상기 발효유에 함유되는 양과 등량의 유산 및 아세트산을 첨가하였다.

각 음료의 성분 조성을 표 5 에 나타낸다. 시험 음료의 음용 개시시의 YIT12272 의 평균 생균수 및 평균 총 유산균수는 각각 6.9 × 10⁸ CFU/㎖, 5.1 × 10⁸ CFU/㎖ 였다. 또, 음용 종료시의 YIT12272 의 평균 생균수 및 평균 총 유산균수는 각각 6.6 × 10⁸ CFU/㎖, 5.1 × 10⁸ CFU/㎖ 였다.

(2) 플라세보군과 시험군 각 20 명 (여성) 에게 4 주일 매일 1 개 (100 ㎖) 씩 음용시켰다. 음용 전, 음용 후 및 후관찰 후 (음용 종료 2 주일 후) 에 피부 성상을 평가하였다.

피부 계측에 대해서는, 세안 크림에 의한 세안으로 화장을 지우고, 30 분간 릴렉스한 상태로 피부를 순화한 후, 위를 향한 상태로 베드에 눕고, 좌측 볼 (눈꼬리와 코의 교점) 의 각질층 수분 함량을 Corneometer (상표) CM825 (주식회사 인테그랄 제조) 와 SKICON-200 (IBS 사 제조) 을 사용하여 5 회 측정하여 평균화하였다. 또, 좌측 볼의 수분 증산량을 Cutometer MPA 580 (상표) (주식회사 인테그랄 제조) 을 사용하여 측정하였다.

주름의 계측에 대해서는, 피험자의 좌측 눈꼬리로부터 실리콘 고무 (SILFLO, Flexico Developments) 를 사용하여 네거티브 레플리카를 제조하고, 본 레플리카의 화상을 디지털 마이크로스코프로 도입한 후, 화상 해석 (WinROOF Pro Ver. 6.1 : 미타니 상사) 을 실시하였다. 주름은 일본 화장품 공업 연합회가 작성한 주름 계측법의 가이던스에 따라 해석하고, 계측 파라미터로서, 주름 최대 깊이 (㎜) 로 나타냈다.

피부의 턴 오버의 정상화의 지표로서, 각질화 관련 효소인 카텝신 L 형 활성을 측정하였다. 방법은, 정법에 따라 합성 펩티드인 Z-Val-Val-Arg-MCA 를 기질로서 사용한 형광 분석을 실시하였다.

각질층 채취에 대해서는, 음용 전과 후관찰 후에서는 동일한 부위를, 음용 후에서는 음용 전과 상이한 부위를 선정하고, 각각 테이프 스트립법에 의해 동일 부위로부터 3 층 채취하였다. 각질층 2 층째의 채취 샘플을 0.5 ％ 브릴리언트 그린-1.0 ％ 겐티아나 바이올렛 B 수용액 중, 실온에서 8 분간 염색한 후, 증류수로 세정하였다. 본 화상을 디지털 마이크로스코프로 도입한 후, 상기 화상 해석 장치를 사용하여 각질 세포 면적, 원형도 및 주위 길이의 측정을 실시하였다. 피험자 1 명에 대해 3 시야에서 30 개의 각질 세포 면적을 측정하였다. 또, 각질층 형태 (배열 규칙성 및 세포 형태 명료성) 를 각각 표 6 및 표 7 에 나타내는 평가 기준으로 스코어화하고, 관찰자 3 명의 스코어를 평균내었다.

(3) 결과

3-1. 각질층 수분 함량

각질층 수분 함량의 추이를 도 5 ∼ 6 에 나타낸다. SKICON 으로 측정한 결과, 플라세보군은 음용 후, 후관찰 후에 있어서 음용 전에 비해 유의하게 저하되었다. 한편, 시험군에서는 음용 후에서는 변화하지 않고 후관찰 후에서 유의하게 저하되었다. CORNEOMETER 로 측정한 결과, 플라세보군에 있어서 음용 후, 후관찰 후 모두 유의한 저하가 확인되었지만, 시험군에서는 음용 전과 비교하여 변화가 없었다. 시험군과 플라세보군의 비교에서도, 음용 후, 후관찰 후에 시험군에서는 유의차는 없었지만, 높은 값을 나타냈다.

3-2. 각질화 관련 효소

시험군에 있어서, 카텝신 L 형 활성은 음용 전과 비교하여 음용 후에서 유의하게 상승하였다. 한편, 플라세보군에 있어서는 변화가 관찰되지 않았다.

3-3. 각질층 형태

각질층 세포 면적, 주위 길이 및 원형도 (4π × 면적/(주위 길이)², 0 ＜ 원형도 ≤ 1) 의 추이를 검토하였다. 각질층 세포의 형태는 형태가 크고, 보다 원형 (정육각형) 에 가까운 것이 양호한 상태이므로, 어느 측정 항목도 값이 클수록 각질층의 상태는 양호한 것으로 판정된다. 원형도는 양 군 모두 음용 전과 비교하여 음용 후, 후관찰 후에서 유의하게 상승하였다. 일례로서, 시험군의 50 대 여성의 각질층 세포의 염색 화상을 도 7 에 나타낸다. 음용 전에서는 세포가 작고 형태도 불균일하였지만, 음용 후에는 세포가 크고 형태도 고르게 되어 있는 (정육각형) 상태가 관찰되었다.

각질층 형태 (배열 규칙성 및 세포 형태 명료성) 를 스코어화로 평가한 결과 (스코어값은 음용 전과의 변화량 (△ 스코어) 으로 나타낸다) 를 도 8 및 도 9 에 나타낸다. 시험군에 있어서는 플라세보군과 비교하여 음용 후의 스코어의 개선 효과가 높았고, 또 음용에 의한 개선 효과가 후관찰 후에도 지속되는 경향이 확인되었다.

3-4. 주름

주름 최대 깊이는, 플라세보군에서는 변화가 없었지만, 시험군에 있어서 음용 전과 비교하여 유의하게 감소하였다.

실시예 3

비피도박테리움·브레브 YIT4065 및 스트렙토코커스·서모필러스 YIT2021 을 함유하는 발효유의 제조

120 ℃, 3.5 초간 플레이트 살균한 탈지 분유 용액 (SNF 20.7 ％) 에 비피도박테리움·브레브 YIT4065 의 전배양액을 2 ％ 접종하고, 37 ℃ 에서 24 시간 배양하여 비피더스균 발효유를 얻었다. 또 동일하게 플레이트 살균한 탈지 분유 용액 (SNF 17.4 ％) 에 스트렙토코커스·서모필러스 YIT2021 의 전배양액을 0.5 ％ 접종하고, 37 ℃ 에서 24 시간 배양하여 유산균 발효유를 얻었다. 이들 균액을 혼합하고, 환원 맥아당 물엿, 폴리덱스트로오스, 갈락토올리고당, 유화철, 아스파탐 등을 혼합한 시럽 용액을 조합하여, 발효유를 얻었다.

비피도박테리움·브레브 YIT4065 는, 경구 섭취에 의한 피부 성상 개선 작용 (TEWL, 수분 함량, 피부 홈·피부 구릉수 등) 에 있어서, 비피도박테리움·브레브 YIT12272 와 동등한 효과를 발휘함을 확인하여, 본 실시예의 발효유에는 본원 발명의 피부 성상 개선 작용을 기대할 수 있다.

실시예 4

비피도박테리움·브레브 YIT4065 및 스트렙토코커스·서모필러스 YIT2084 를 함유하는 발효유의 제조

120 ℃, 3.5 초간 플레이트 살균한 탈지 분유 용액 (SNF 20.7 ％) 에 비피도박테리움·브레브 YIT4065 의 전배양액을 2 ％ 접종하고, 37 ℃ 에서 24 시간 배양하여 비피더스균 발효유를 얻었다. 또 동일하게 플레이트 살균한 탈지 분유 용액 (SNF 17.4 ％) 에 스트렙토코커스·서모필러스 YIT2084 의 전배양액을 0.5 ％ 접종하고, 37 ℃ 에서 24 시간 배양하여 유산균 발효유를 얻었다. 이들 균액을 혼합하고, 환원 맥아당 물엿, 폴리덱스트로오스, 갈락토올리고당, 유화철, 아스파탐 등을 혼합한 시럽 용액을 조합하여, 발효유를 얻었다.

통산 산업성 공업 기술원 생명 공학 공업 기술 연구소

FERMBP-6223

19960229

독립 행정 법인 산업 기술 종합 연구소 특허 생물 기탁 센터

FERMBP-7537

19961101

독립 행정 법인 산업 기술 종합 연구소 특허 생물 기탁 센터

FERMBP-7538

20010131

독립 행정 법인 산업 기술 종합 연구소 특허 생물 기탁 센터

FERMBP-10879

20060818

독립 행정 법인 산업 기술 종합 연구소 특허 생물 기탁 센터

FERMBP-11320

20100216

Claims

스트렙토코커스속 세균 및 비피도박테리움속 세균, 또는 당해 2 종의 세균을 함유하는 발효유를 유효 성분으로 하는 경구용 피부 성상 개선제.
제 1 항에 있어서,
스트렙토코커스속 세균이 스트렙토코커스·서모필러스인 피부 성상 개선제.
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
스트렙토코커스속 세균이 스트렙토코커스·서모필러스 YIT2021 주 (FERM BP-7537) 또는 스트렙토코커스·서모필러스 YIT2084 주 (FERM BP-10879) 인 피부 성상 개선제.
제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서,
비피도박테리움속 세균이 비피도박테리움·브레브인 피부 성상 개선제.
제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서,
비피도박테리움속 세균이 비피도박테리움·브레브 YIT4065 주 (FERM BP-6223) 또는 비피도박테리움·브레브 YIT12272 주 (FERM BP-11320) 인 피부 성상 개선제.
제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서,
추가로 갈락토올리고당을 함유하는 피부 성상 개선제.
제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
피부 성상 개선이 자외선 조사에 의한 각질층 수분 함량의 저하 억제인 피부 성상 개선제.
제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서,
피부 성상 개선이 각질층 수분 함량의 상승 촉진인 피부 성상 개선제.
경구 섭취하여 피부 성상을 개선하기 위한 스트렙토코커스속 세균 및 비피도박테리움속 세균의 조합, 또는 당해 2 종의 세균을 함유하는 발효유.
제 9 항에 있어서,
스트렙토코커스속 세균이 스트렙토코커스·서모필러스인 조합 또는 발효유.
제 9 항 또는 제 10 항에 있어서,
스트렙토코커스속 세균이 스트렙토코커스·서모필러스 YIT2021 주 (FERM BP-7537) 또는 스트렙토코커스·서모필러스 YIT2084 주 (FERM BP-10879) 인 조합 또는 발효유.
제 9 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 있어서,
비피도박테리움속 세균이 비피도박테리움·브레브인 조합 또는 발효유.
제 9 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서,
비피도박테리움속 세균이 비피도박테리움·브레브 YIT4065 주 (FERM BP-6223) 또는 비피도박테리움·브레브 YIT12272 주 (FERM BP-11320) 인 조합 또는 발효유.
제 9 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서,
추가로 갈락토올리고당을 함유하는 조합 또는 발효유.
제 9 항 내지 제 14 항 중 어느 한 항에 있어서,
피부 성상 개선이 자외선 조사에 의한 각질층 수분 함량의 저하 억제인 조합 또는 발효유.
제 9 항 내지 제 15 항 중 어느 한 항에 있어서,
피부 성상 개선이 각질층 수분 함량의 상승 촉진인 조합 또는 발효유.
스트렙토코커스속 세균 및 비피도박테리움속 세균, 또는 당해 2 종의 세균을 함유하는 발효유를 경구 섭취하는 것을 특징으로 하는 피부 성상 개선 방법.
제 17 항에 있어서,
스트렙토코커스속 세균이 스트렙토코커스·서모필러스인 방법.
제 17 항 또는 제 18 항에 있어서,
스트렙토코커스속 세균이 스트렙토코커스·서모필러스 YIT2021 주 (FERM BP-7537) 또는 스트렙토코커스·서모필러스 YIT2084 주 (FERM BP-10879) 인 방법.
제 17 항 내지 제 19 항 중 어느 한 항에 있어서,
비피도박테리움속 세균이 비피도박테리움·브레브인 방법.
제 17 항 내지 제 20 항 중 어느 한 항에 있어서,
비피도박테리움속 세균이 비피도박테리움·브레브 YIT4065 주 (FERM BP-6223) 또는 비피도박테리움·브레브 YIT12272 주 (FERM BP-11320) 인 방법.
제 17 항 내지 제 21 항 중 어느 한 항에 있어서,
추가로 갈락토올리고당을 경구 섭취하는 방법.
제 17 항 내지 제 22 항 중 어느 한 항에 있어서,
피부 성상 개선이 자외선 조사에 의한 각질층 수분 함량의 저하 억제인 방법.
제 17 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항에 있어서,
피부 성상 개선이 각질층 수분 함량의 상승 촉진인 방법.