CN104771416A - 用于控制体重的罗伊氏乳杆菌gmnl-263组合物及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明是一种控制体重的组合物，其包含罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri GMNL-263)的保藏编号为CCTCC M209263。另，本发明亦关于通过该组合物或该乳杆菌用以控制体重的新颖用途，其作用机制为抑制脂肪生合成，而降低油滴形成达成控制体重的用途。

Description

用于控制体重的罗伊氏乳杆菌GMNL-263组合物及其用途

技术领域

本发明是关于乳杆菌分离株，其在控制体重的技术领域。 

背景技术

随着城市的发展，肥胖(obesity)逐渐成为现代人很常遇到的健康杀手。越来越多研究指出肥胖会增加糖尿病、癌症、胆囊疾病、高血压、动脉硬化等新血管疾病的风险之后，如何有效降低体脂肪与减缓肥胖为当务的急事。 

肥胖是通常由于生理或生物化学功能改变而导致的体脂肪过剩，其可显著损害健康。脂肪通常包括中性脂、磷脂及胆固醇。重量的增加取决于人的能量摄入大于能量消耗。存在两种类型的肥胖：(a)单纯性肥胖(simple obesity)，及(b)继发性肥胖(second obesity)。单纯性肥胖可分为先天性肥胖(idiopathic obesity)及后天性肥胖(acquired obesity)，其可占超过95%的肥胖。先天性肥胖是由大量的脂肪细胞所致，且常见于儿童期肥胖。后天性肥胖是由脂肪细胞的尺寸更大所致，且常见于成年期肥胖。继发性肥胖被又称为症状性肥胖，其通常是由内分泌或新陈代谢疾病所致。肥胖与若干慢性疾病，诸如糖尿病、心肌病(cardiopathy)、高血压、中风、胆石(biliary calculus)、痛风及某些癌相关。 

目前有五种治疗肥胖的策略：减食、运动、行为治疗、药物治疗，及手术治疗(therapeutic operation)。视病人的健康危险因子，及体重减轻的速度及效果而定，可选择或组合该等策略对肥胖病人进行治疗，其体重减轻的速度及效果受诸如年龄、身高、家族史及危险因子等多个因素的影响。药物治疗的机制包括抑制食欲、增加能量消耗、刺激脂肪移动、降低三酰基甘油合成、及抑制脂肪吸收。此等药物的实例为苯丙醇胺(phenylpropanolamine，PPA)、罗氏鲜(orlistat，Xenical TM)，及诺美婷(sibutramine，Reductil TM)。然而，藉由天然物质而非药物来治疗肥胖成为新的趋势。 

益生菌为有助于健康的肠道菌目前有报导发现除了调节免疫能力及肠 道保健外，对于高血压、癌症及高胆固醇疾病也有改善功能。另外，目前研究显示，某些益生菌对于肥胖疾病鼠具有调节体重及体脂肪能力，且不管是活菌或是死菌皆具有功效。基于前人研究，推测益生菌里可能具有重要功效成份。本案申请人的前案US8,298,526，发现Lactobacillus reuteri GMNL-263可有效改善第一型糖尿病的症状。然而目前对于以益生菌是否能有效改善肥胖症状或减少体重、以及是经由何种机制改善肥胖，则尚未有文献报导是否有其功效。 

发明内容

由于前揭益生菌在于肥胖之间研究并不广泛，而亟待加以寻找有效改善的益生菌。由于3T3-L1前脂肪细胞已广泛使用在脂肪组织探讨及作用机制上，故本实验是利用3T3-L1前脂肪细胞探讨乳酸菌萃取物对脂肪细胞生合成的影响，已找出可能具有抗肥胖潜力的乳酸菌Lactobacillus reuteri GMNL-263(Lr263)；进一步以动物实验模拟肥胖鼠，检测经高脂肪食物喂食并搭配不同剂量的Lr263死菌、活菌。 

本发明的目的即在于提供一种益生菌用于制备体重减轻或体重维持的组合物的用途，其中该益生菌包含罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri GMNL-263)的保藏编号为BCRC910452与CCTCC M209263。 

为达成前述发明目的，其中该罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri GMNL-263)组合物包含活菌、死菌及萃取物至少一者。 

为达成前述发明目的，其中该组合物为医药组合物、食品或其组合；其中该医药组合物可进一步包含药学上可接受的载剂，其中该医药组合物是呈一可供口服投药的剂型，其中该剂型是选自于下列所构成的群组：溶液、悬浮液、乳剂、粉末、锭剂、丸剂、糖浆、口含锭、片剂、口嚼胶、浓浆以及胶囊，其中该医药组合物包含每日剂量10⁵至10¹⁰个罗伊氏乳杆菌GMNL-263活菌、死菌及萃取物至少一者。其中该食品可进一步包含至少一种选自于下列群组中的益生菌：乳杆菌属物种(Lactobacillu ssp.)、双叉杆菌属物种 (Bifidobacterium sp.)、链球菌属物种(Streptococcus sp.)及酵母菌(yeasts)，其中该食品可进一步包含一可食性材料，该可食性材料包含水、流体乳品、牛奶、浓缩牛奶、酸奶、酸乳、冷冻优格、乳杆菌发酵饮料、奶粉、冰淇淋、奶酪、干酪、豆奶、发酵豆奶、蔬果汁、果汁、运动饮料、甜点、果冻、糖果、婴儿食品、健康食品、动物饲料、中草药材或膳食补充品，其中该食品包含10⁵至10¹⁰个罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri GMNL-263)活菌、死菌及萃取物至少一者。 

本发明的次一目的在于提供一种如前述发明目的组合物用于制备治疗肥胖及其并发症的组合物的用途，其中该并发症是选自由高胆固醇血脂症、动脉粥状硬化、冠心病及脂肪肝所组成的群组。 

本发明的次一目的在于提供一种如前述发明目的组合物用于制备抑制脂肪生合成、高总体脂肪、高内脏脂肪、高生殖腺脂肪、高总胆固醇浓度、高三酸甘油脂质浓度、或高低密度脂蛋白/高密度脂蛋白比值(LDL/HDL)的组合物的用途。 

附图说明

图1为Lr263萃取物对脂肪细胞的脂肪含量影响，(A)Oil Red O染色图(100X镜像)。(B)脂肪含量百分比图，三重覆，abc表示显著差异，p<0.05，Duncan分析； 

图2为Lr263对体重的影响，(A)为第12周；(B)为第0-12周； 

图3为Lr263对体脂肪/体重比的影响； 

图4为Lr263对内脏脂肪重/体重比的影响； 

图5为Lr263对生殖腺脂肪重/体重比的影响； 

图6为Lr263对肝功能的影响； 

图7为Lr263对血脂值的影响； 

图8为Lr263对LDL/HDL比的影响。 

具体实施方式

本说明书中所述的所有技术性及科学术语，除非另外有所定义，皆为该所属领域具有通常技艺者可共同了解的意义。 

本发明是一种治疗肥胖的组合物，其包含罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri GMNL-263)的保藏编号为CCTCC M209263。另，本发明亦关于通过该组合物或该乳杆菌用以治疗肥胖的新颖用途，其作用机制为抑制脂肪生合成，而降低油滴形成达成治疗肥胖的用途。 

其中该乳杆菌分离株亦包含其继代培养的后代，或突变株，但仍具有与本发明所述的菌种特性、基因体(genomic)、或用途(用于抑制肠病毒)相同者。 

本文所述组合物是可包含，但不限于：食品、饮品、健康食品、动物饮水添加物、动物饲料添加物、动物用及人类用医疗组合物、食品添加物、饮料添加物等适用本发明的应用形式。 

术语″治疗″、″治疗中″及其类术语是指延缓、改善、减少或逆转目前正折磨着患者的该病症或该病症相关的任何症状的方法以及预防该病症或其任何正出现的症状的方法。 

术语″药学上可接受″意谓物质或组合物必须与调配物的其他成份兼容，且对患者无害。 

术语″萃取物(Cell Lyaste)″可为自特定萃取步骤或系列萃取步骤获得的单一萃取物，或者萃取物亦可为自若干独立萃取步骤获得的若干萃取物的组合。此等经组合萃取物因此亦涵盖于术语「萃取物」内。 

本发明的组合物是可利用熟悉此技艺者所详知的技术，将上述的乳杆菌分离株，与一药学上可接受的载剂(pharmaceutically acceptable vehicle)，制备成一适用本发明组合物的剂形。其中该剂形包含但不限于：溶液(solution)、乳剂(emulsion)、悬浮液(suspension)、粉末(powder)、锭剂(tablet)、丸剂(pill)、口含锭(lozenge)、片剂(troche)、口嚼胶(chewing gum)、胶囊(capsule)以及其他类似或适用本发明的剂形。 

其中该药学上可接受的载剂可包含一或多种选自于下列的试剂：溶剂 (solvent)、乳化剂(emulsifier)、悬浮剂(suspending agent)、分解剂(decomposer)、黏结剂(binding agent)、赋形剂(excipient)、安定剂(stabilizing agent)、螯合剂(chelating agent)、稀释剂(diluent)、胶凝剂(gelling agent)、防腐剂(preservative)、润滑剂(lubricant)、表面活性剂(surfactant)，及其他类似或适用本发明的载剂。 

上述组合物中，亦可视需要适宜地添加一或多种以上制剂领域内通常使用的溶解补助剂、缓冲剂、保存剂、着色剂、香料、风味剂等。 

另一较佳实施例中，本发明所提供的前述组合物，可进一步添加一可食性材料，以制备为一种食品产品或保健产品。其中该可食性材料包含，但不限于：水(water)、流体乳品(fluid milk products)、牛奶(milk)、浓缩牛奶(concentrated milk)；发酵乳品(fermented milk)，诸如酸奶(yogurt)、酸乳(sour milk)、冷冻优格(frozen yogurt)、乳杆菌发酵饮料(lactic acid bacteria-fermented beverages)；奶粉(milk powder)；冰淇淋(ice cream)；奶酪(cream cheeses)；干酪(dry cheeses)；豆奶(soybean milk)；发酵豆奶(fermented soybean milk)；蔬果汁(vegetable-fruit juices)；果汁(juices)；运动饮料(sports drinks)；甜点(confectionery)；果冻(jellys)；糖果(candies)；婴儿食品(infant formulas)；健康食品(health foods)；动物饲料(animal feeds)；中草药材(Chinese herbals)；膳食补充品(dietary supplements)等。 

此外，本发明所发现的新颖菌种，亦可与其他现有菌种一并被包含于一组成物中。 

其中该组合物，可进一步包含至少一种选自于下列群组中的现有益生菌：乳杆菌属物种(Lactobacillus sp.)、链球菌属物种(Streptococcus sp.)、双叉杆菌属物种(Bifidobacterium sp.)、酵母菌(yeasts)。 

其中该现有乳杆菌属物种(Lactobacillus sp.)包含但不限于：乳酸乳杆菌(Lactobacillus lactis)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)、双岐乳杆菌(Lactobacillus bifidus)、奶酪乳杆菌(Lactobacillus casei)、副奶酪乳杆菌副奶酪亚种(Lactobacillus paracasei subsp.paracasei)、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)、加氏乳杆菌(Lactobacillus  gasseri)、罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)、发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)、或其组合。 

其中该现有链球菌属物种(Streptococcus sp.)包含但不限于：乳酸链球菌(Streptococcus lactis)、嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)、奶酪链球菌(Streptococcus cremoris)、或其组合。 

其中该现有双叉杆菌属物种(Bifidobacterium sp.)包含但不限于：短型双叉杆菌(Bifidobacterium breve)、乳酸双叉杆菌(Bifidobacterium lactis)、长型双叉杆菌(Bifidobacterium longum)、双叉型双叉杆菌(Bifidobacterium bifidum)、或其组合。 

其中该现有酵母菌(yeasts)包含但不限于：啤酒酵母菌(Saccharomyces cereviseae)、乳酒假丝酵母菌(Candida kefyr)、弗罗稜酵母菌(Saccharomyces florentinus)、或其组合。 

另，本发明亦提供前述乳杆菌用于制备体重减轻或体重维持的组合物的方法或用途。 

本发明所提供的组合物及其用于体重减轻或体重维持的方法，其投药路径，可视需求适宜调整，并未特别限定，较佳者为经口投予适用剂形。 

本发明是以下面的实施例予以示范阐明，但本发明不受下述实施例所限制。本发明所用的药物、生物材料皆市售易于取得，下列仅为示例可取得的管道。 

本发明是以下面的实施例予以示范阐明，但本发明不受下述实施例所限制。 

本案申请人(景岳生物科技公司)是由健康成人胃肠道检体中，分离百余株分离株，以建立一分离株菌种库。采集地位、获取时间、采集者、采集者联络方式如下表一。 

表一、遗传资源信息 

从菌种库中挑选可治疗肥胖的乳杆菌，该乳杆菌的寄存编号、寄存日期及菌株名称，如表二所示；其中罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)GMNL-263(以下简称Lr263)为一公开的菌种，其菌株特征、保藏证明、存活试验报告等证明文件正本及相关信息，已包含于多国专利中。 

表二、本发明的乳杆菌于台湾新竹食品工业发展研究所生物资源保存及研究中心(BCRC)或中国典型培养物保藏中心(CCTCC)的寄存信息 

实施例一 

实验材料：3T3-L1前脂肪细胞(台湾新竹食品工业研究所购买BCRC60159)、DMEM-高葡萄糖、MRS培养基(broth)。 

实验检测方式：主要参考Park等人(2011)所述方法，略为修改。 

a.乳酸菌萃取物(CellLyaste)的制备： 

菌株从菌种库获得并且取出，经由MRS培养基培养18小时。 

将已培养的菌液经2,700rpm10分钟离心及PBS缓冲液清洗、除去培养基，最终得到无残留培养基的菌株。 

利用PBS缓冲溶液回溶菌株，并且调整菌数至1×10¹⁰cell/ml。 

将以调整后菌液经超音波进行破菌后，利用0.22μm过滤膜过滤后，储存于-20℃备用。 

b.3T3-L1细胞培养： 

3T3-L1前脂肪细胞培养至含有10%小牛血清(BS)及1%抗生素(PS)的 DMEM(High Glucose)培养基，每个2～3日更换培养基，继代一次。 

整细胞数为8×10⁴cell/well，种入24孔平底细胞培养盘，三日后可达到全满，更换培养基后继续培养两日。 

改以含10%FBS、10μg/mL胰岛素、0.5mM3-isobutyl-1-methylxanthine及1μM dexamethasone的DMEM(高葡萄糖)分化培养基，培养三日。 

之后再更换成只含有10%胎牛血清蛋白(FBS)、1%抗生素(PS)及10μg/mL胰岛素的DMEM(HighGlucose)分化培养基，每两日更换一次培养基，培养十四日后，约有90%分化成成熟脂肪细胞。 

c.蛋白质定量分析： 

将细胞培养基除去后，利用PBS缓冲溶液清洗三次。 

以Trypsin使细胞从培养盘中脱落后，将细胞以PBS收集至试管中。 

在转速2,000rpm离心五分钟，除去上轻液并添加lysisbuffer，使细胞破裂。 

再以转速14,000rpm离心十分钟，取上清液作为测定样品将Bio-Rad Proteinassay五倍稀释后，取900μl与100μl上清液或者标准品BSA一同混合均匀，并静置5分钟。 

测定A595波长。 

测定细胞内油脂的Oil Red O染色法：Oil Red O是一种油溶性的染剂，会将细胞质中的油脂染成红色。 

先除去培养基后，利用PBS缓冲溶液轻轻润洗细胞三次。 

添加200μl甲醇静置一小时，以固定细胞。 

将oil red O stock solution配制成oil red O working solution备用，将润洗后的细胞加入200μl oil red O working solution进行染色一小时。 

除去染色液后，以去离子水清洗三次，再将水分吸除。 

以显微镜观察拍照。 

添加500μl异丙醇放至隔夜，使染剂溶出后，测定波长492nm。将已测定的油脂含量除以蛋白质含量，即为每个细胞中含有油脂量。 

检测结果 

Lr263萃取物是以1×10¹⁰cell/ml浓度超音波震荡溶于PBS溶液中，将细胞萃取物依不同添加浓度处理3T3-L1前脂肪细胞，观察对脂肪细胞分化影响。 

培养二十二日后，将脂肪细胞经Oil Red O染色后，油滴可被清楚观察到(红色部分)。从图1A可以发现Lr263萃取物浓度增加，红色油滴的面积随之减少的情形。 

添加0.05及0.5%浓度Lr263萃取液处理脂肪细胞，其脂肪油滴含量为68.5±16.0%及32.1±5.6%，相对抑制脂肪生合成约30%及70%。而最高添加浓度5%处理部分，有抑制脂肪生合成约90%能力，只有13.4±1.6%脂肪含量(图1B)。 

综合以上结果，Lr263萃取液能有效抑制脂肪细胞在分化过程中，脂肪油脂的产生，换句话说，能够抑制脂肪的生合成。故从体外试验结果，Lr263是具有抗肥胖潜力的乳酸菌。 

实施例二 

实验流程：实验从第一天开始喂食高脂饲料以及乳酸菌，经过12周后将老鼠牺牲。实验期间每日纪录饮水以及食物摄取量；每周纪录体重变化、空腹血糖值；每四周侦测一次口服葡萄糖耐受性。 

乳酸菌死菌的制备：将罗伊氏乳杆菌Lr263培养在MRS培养基并放置在37℃培养箱，经过12小时后，用PBS洗菌两次后，在100℃水浴槽放置20分钟。再加入冷冻保护剂之后，以冷冻干燥机将含Lr263乳酸菌菌液冻亁成粉末状。 

正常饮食与高脂饲料，饲料配方详述如下： 

表三、饮食配方 

动物实验：5周龄离乳的雄性SD大鼠购自乐斯科公司(台北，台湾)，饲养于塑胶饲养笼，每组十只，控制12小时昼/夜循环，温度25±1℃，自由饮水与进食。实验动物经一周的调适后，将实验动物依体重随机成以下八组。 

正常饲料组： 

给予正常饲料并每天喂食1ml的RO水 

正常饲料+Lr263死菌组： 

给予正常饲料并每天喂食Lr263乳酸菌(5×10⁹cells/rat) 

高脂肪饮食组(HFD)(阴性控制组)： 

给予高脂饲料并每天喂食1ml的RO水 

HFD+Shirota死菌(阳性控制组)： 

给予高脂饲料并每天喂食Shirota乳酸菌(5×10⁹cell/rat)。日本京都大学医学部的微生物学教授代田稔于1930年成功培养出对人体肠道有益健康的乳酸菌，其后以其名字命名为「代田菌」(Lactobacillus casei strain Shirota)，作为本案阳性控制组。 

高脂饲料+Lr263乳酸菌死菌低剂量组： 

给予高脂饲料并每天喂食Lr263乳酸菌死菌(5×10⁵cell/rat) 

高脂饲料+Lr263乳酸菌死菌中剂量组： 

给予高脂饲料并每天喂食Lr263乳酸菌死菌(5×10⁷cell/rat) 

高脂饲料+Lr263乳酸菌死菌高剂量组： 

给予高脂饲料并每天喂食Lr263乳酸菌死菌(5×10⁹cell/rat) 

高脂饲料+Lr263乳酸菌活菌组： 

给予高脂饲料并每天喂食Lr263乳酸菌活菌(2×10⁹cell/rat) 

统计分析：数据利用SPSS软件，经变异数分析(one-way analysis of variance,ANOVA)测试各实验组间是否有显著的差异，若有显著差异(P＜0.01)，再以邓肯式多变域测验(Duncan’snew multiple range test)做进一步分析。 

检测结果： 

A、Lr263死菌对体重的影响： 

各个组别经过不同处里的喂食后，在第12周时，阳性控制组喂食HFD+Shirota仅有下降的趋势，未达显著差异；反观本案经过HFD+Lr263死菌低剂量组、HFD+Lr263死菌中剂量组、HFD+Lr263死菌高剂量组、HFD+Lr263活菌组的喂食后，体重相较于HFD组皆有统计上显著的下降(图2A、B、表四)，且其中死菌中剂量组能达成减重的效果甚至比活菌组来得更好。该等结果论证Lr263死菌、活菌在治肥胖、减重方面是有效的。 

B、Lr263对体脂肪重/体重比的影响： 

各个组别经过不同处里的喂食后，在第12周时，发现经过HFD+Lr263死菌中剂量组、HFD+Lr263死菌高剂量组、HFD+Lr263活菌组的喂食后，脂肪/体重比相较于HFD组皆有统计上显著的下降(图3)。其中经喂食Lr263死菌，随着剂量的提升脂肪/体重比呈现下降的趋势，HFD+Lr263死菌低、中、高剂量组相较于HFD组分别下降达21.6%、24.8%与31.0%。 

C、Lr263对内脏脂肪重/体重比的影响： 

呈上述测量总体脂肪重/体重比后，进一步检视第12周时内脏脂肪重量改变的情形。同样发现经过HFD+Lr263死菌中剂量组、HFD+Lr263死菌高剂量组、HFD+Lr263活菌组的喂食后，内脏脂肪重/体重比相较于HFD组皆有统 计上显著的下降(图4)。其中经喂食Lr263死菌，随着剂量的提升内脏脂肪重/体重比呈现下降的趋势，HFD+Lr263死菌低、中、高剂量组相较于HFD组分别下降达20.9%、23.2%与31%。 

D、Lr263对生殖腺脂肪重/体重比的影响： 

呈上述测量总体脂肪重/体重比后，进一步检视第12周时生殖腺脂肪重量改变的情形。同样发现经过HFD+Lr263死菌中剂量组、HFD+Lr263死菌高剂量组、HFD+Lr263活菌组的喂食后，生殖腺脂肪重/体重比相较于HFD组皆有统计上显著的下降(图5)。其中经喂食Lr263死菌，随着剂量的提升生殖腺脂肪重/体重比呈现下降的趋势，HFD+Lr263死菌低、中、高剂量组相较于HFD组分别下降达10.0%、31.8%与33.7%。 

E、Lr263对肝功能的影响： 

各个组别经过不同处里的喂食后，在第12周时，分别检测生化血清中天冬氨酸氨基转移酶(AST，U/L)与丙氨酸基转移酶(ALT，U/L)值。其中AST检测后发现经过HFD+Lr263死菌低剂量组、HFD+Lr263死菌高剂量组、HFD+Lr263活菌组的喂食后，AST数值相较于HFD组皆有统计上显著的下降(图6)，而HFD+Shirota组别则无显著差异。另外，ALT检测后发现经过HFD+Lr263死菌低剂量组、HFD+Lr263死菌中剂量组、HFD+Lr263死菌高剂量组、HFD+Lr263活菌组的喂食后，ALT数值相较于HFD组皆有统计上显著的下降(图6)，而HFD+Shirota组别则无显著差异。 

我们惊讶地发现，无论是AST还是ALT数值，Lr263死菌在仅给予低剂量(5×10⁵cell/ml/rat)的情形下，就可以达到需Lr263活菌高剂量(2×10⁹cell/ml/rat)才可达成的效果，且其效果甚至可达到与正常喂食组相同的数值。 

F、Lr263对血脂值的影响： 

各个组别经过不同处里的喂食后，在第12周时，分别检测生化血清血脂中总胆固醇(T-CHO，mg/dL)与三酸甘油脂(TG，mg/dL)值。其中总胆固醇检测后发现经过HFD+Lr263死菌低剂量组、HFD+Lr263死菌中剂量组、HFD+Lr263死菌高剂量组、HFD+Lr263活菌组的喂食后，总胆固醇数值相较 于HFD组皆有统计上显著的下降(图7)。另外，三酸甘油脂检测后发现经过HFD+Lr263死菌低剂量组、HFD+Lr263死菌中剂量组、HFD+Lr263死菌高剂量组、HFD+Lr263活菌组的喂食后，三酸甘油脂数值相较于HFD组亦皆有统计上显著的下降(图7)。 

我们同样惊讶地发现，无论是总胆固醇还是三酸甘油脂数值，Lr263死菌在低剂量(5×10⁵cell/ml/rat)的情形下，其效果即可达到与正常喂食组相当的数值。 

G、Lr263对LDL/HDL比的影响： 

各个组别经过不同处里的喂食后，在第12周时，分别检测低密度脂蛋白/高密度脂蛋白(LDL/HDL)值。经检测后发现经过HFD+Lr263死菌低剂量组、HFD+Lr263死菌中剂量组、HFD+Lr263死菌高剂量组、HFD+Lr263活菌组的喂食后，LDL/HDL比值相较于HFD组皆有统计上显著的下降(图8)，而HFD+Shirota组别则无显著差异。 

我们惊讶地发现，Lr263死菌在低剂量(5×10⁵cell/ml/rat)的情形下，其效果几乎可达到与正常喂食组相当的数值，且随着剂量的增加LDL/HDL比值的下降效果更加显著。 

表四、喂食Lr263后，第1-12周各组大鼠体重(g)的测量结果 

#：p<0.05数据相较于正常饮食组组具统计意义 

*：p<0.05数据相较于高脂肪饮食组组具统计意义 

表五、喂食Lr263后，第12周各组大鼠体重、脂肪比、血清生化值的测量结果 

*：p<0.05数据相较于高脂肪饮食组组具统计意义 

#：p<0.05数据相较于正常饮食组组具统计意义 

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。 

Claims (13)

1.一种益生菌用于制备体重减轻或体重维持的组合物的用途，其特征在于，所述益生菌包含罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri GMNL-263)，其保藏编号为CCTCC M209263。

2.根据权利要求1所述的益生菌用于制备体重减轻或体重维持的组合物的用途，其特征在于，所述罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri GMNL-263)包含活菌、死菌及萃取物至少一者。

3.根据权利要求1所述的益生菌用于制备体重减轻或体重维持的组合物的用途，其特征在于，所述组合物为医药组合物、食品或其组合。

4.根据权利要求3所述的益生菌用于制备体重减轻或体重维持的组合物的用途，其特征在于，所述医药组合物进一步包含药学上可接受的载剂。

5.根据权利要求3所述的益生菌用于制备体重减轻或体重维持的组合物的用途，其特征在于，所述医药组合物是呈供口服投药的剂型。

6.根据权利要求5所述的益生菌用于制备体重减轻或体重维持的组合物的用途，其特征在于，所述剂型是选自于下列所构成的群组：溶液、悬浮液、乳剂、粉末、锭剂、丸剂、糖浆、口含锭、片剂、口嚼胶、浓浆以及胶囊。

7.根据权利要求3所述的益生菌用于制备体重减轻或体重维持的组合物的用途，其特征在于，所述食品进一步包含至少一种选自于下列群组中的益生菌：乳杆菌属物种(Lactobacillu ssp.)、双叉杆菌属物种(Bifidobacterium sp.)、链球菌属物种(Streptococcu ssp.)及酵母菌(yeasts)。

8.根据权利要求3所述的益生菌用于制备体重减轻或体重维持的组合物的用途，其特征在于，所述食品进一步包含可食性材料，该可食性材料包含水、流体乳品、牛奶、浓缩牛奶、酸奶、酸乳、冷冻优格、乳杆菌发酵饮料、奶粉、冰淇淋、奶酪、干酪、豆奶、发酵豆奶、蔬果汁、果汁、运动饮料、甜点、果冻、糖果、婴儿食品、健康食品、动物饲料、中草药材或膳食补充品。

9.根据权利要求3～6任一项所述的益生菌用于制备体重减轻或体重维持的组合物的用途，其特征在于，所述医药组合物包含每日剂量10⁵至10¹⁰个罗伊氏乳杆菌(Lactobacillu sreuteri GMNL-263)活菌、死菌及萃取物至少一者。

10.根据权利要求7或8所述的益生菌用于制备体重减轻或体重维持的组合物的用途，其特征在于，所述食品包含10⁵至10¹⁰个罗伊氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri GMNL-263)活菌、死菌及萃取物至少一者。

11.一种权利要求1～10任一项所述的组合物用于制备治疗肥胖及其并发症的组合物的用途。

12.根据权利要求11所述的用于制备治疗肥胖及其并发症的组合物的用途，其特征在于，所述并发症是选自由高胆固醇血脂症、动脉粥状硬化、冠心病及脂肪肝所组成的群组。

13.一种权利要求1～10任一项所述的组合物用于制备抑制脂肪生合成、高总体脂肪、高内脏脂肪、高生殖腺脂肪、高总胆固醇浓度、高三酸甘油脂质浓度、或高低密度脂蛋白/高密度脂蛋白比值的组合物的用途。