CN102786482A - Akt蛋白激酶抑制剂 - Google Patents

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K.L.斯潘塞
P.斯滕格尔
韩永信
N.C.卡兰
M.蒙森
G.P.A.维格尔斯
J.布拉克
A.皮斯科皮奥
J.乔西
S.米勒
校登明
徐睿
饶畅
王斌
A.L.伯纳基
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Abstract

本发明提供包括式A-L-CR的化合物，包括其拆分的对映体、非对映体、溶剂合物和可药用盐，式中CR为环状核心基团，L为连接基团，而A如本申请说明书中定义。还提供使用本发明的化合物作为AKT蛋白激酶抑制剂的方法和治疗过度增生性疾病如癌症的方法。

Description

AKT蛋白激酶抑制剂
本申请为分案申请，原申请的申请日为2004年11月19日，申请号为200480034234.2(PCT/US2004/039094)，发明名称为“AKT蛋白激酶抑制剂”。
本申请要求于2003年11月21日申请的序列号为60/524,003的美国临时申请的权益，该申请在此全文引入作为参考。
发明背景
1.发明领域
本发明涉及丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(如AKT及相关激酶)的新型抑制剂、含有所述抑制剂的药用组合物以及这些抑制剂的制备方法。所述抑制剂可用于治疗哺乳动物、尤其是人类的过度增生性疾病，例如癌症和炎症。
2.现有技术的描述
蛋白激酶是一类催化γ-磷酸基团从ATP转移至用作底物的受体蛋白的酶。激酶的专一性目标是丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸残基的羟基。由于这种特异性靶向，激酶一般被称为丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶或酪氨酸激酶。据估计人类基因组编码超过500种不同的蛋白激酶。
丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸残基磷酸化的这一看来似乎不太重要的任务与蛋白激酶在信号转导过程和细胞功能调节中的重要性不符。激酶通常由诸如G蛋白偶联蛋白受体或生长因子受体之类的跨膜细胞受体所介导，跨膜细胞受体当被胞外配体活化时，引起胞内蛋白的磷酸化。通常，相互连接系列(或级联)的蛋白激酶对于发挥这种初始信号的总体作用而言是必不可少的，这可最终导致与细胞死亡(凋亡)同样极端的作用。
磷酸化蛋白与非磷酸化蛋白的比率是一种微妙的平衡，蛋白磷酸酶充当蛋白激酶的负调节剂，当磷酰基不再需要时将其除去。作为这种相互作用的实例，激酶的磷酸化状态可控制细胞是经历分裂、在细胞周期中停滞还是程序性细胞死亡。如果这种激酶/磷酸酶关系变得不受控制，与疾病相关的潜在后果则是巨大的。例如，蛋白激酶活性或表达的异常可能与多种过度增生性疾病、炎症和组织修复相关，并且已经与多种疾病相联系，这些疾病的范围从相对无生命危险的疾病如银屑病至几乎总是致命的疾病如攻击性脑癌-多形性成胶质细胞瘤。
值得注意的是，非典型蛋白磷酸化和/或表达常常被报道是癌症中细胞异常增殖、转移和细胞存活的成因之一。其中包括VEGF、ILK、AKT、ROCK、p70S6K、Bcl、PKA、PKC、Raf、Src、PDK1、ErbB2、MEK、IKK、Cdk、EGFR、BAD、CHK1、CHK2和GSK3在内的各种激酶的异常调节和/或表达业已与癌症特异性地相关联。
最近来自CDC的数据表明：癌症是美国第二大死因，所报道的所有死亡中有近1/4可归因于恶性肿瘤(Anderson，National VitalStatistics Report，2001，49(11)：1)。尽管最近在对癌症的起源、发展和治疗的了解方面取得了一些进展，但是仍需要做大量工作来改善癌症患者的总体预后。
磷脂酰肌醇3′-OH激酶途径(PI3K)是对包括细胞周期进程、增殖、运动性、代谢和存活在内的多种细胞功能发挥作用的信号途径之一。受体蛋白酪氨酸激酶(RTK)的活化，引起PI3K将磷脂酰肌醇(4，5)-二磷酸[PtdIns(4，5)P2]磷酸化，产生膜结合磷脂酰肌醇(3，4，5)-三磷酸[PtdIns(3，4，5)P3]。这进而促进来自胞浆的各种各样的蛋白激酶通过PtdIns(3，4，5)P3与激酶的血小板白细胞C激酶底物同系物(PH)结构域结合而被募集到质膜。值得注意的作为PI3K的关键下游靶的激酶包括磷酸肌醇依赖性激酶1(PDK1)和AKT(也称为蛋白激酶B)。这类激酶的磷酸化则允许涉及介质(如GSK3、mTOR、PRAS40、FKHD、NF-κB、BAD、胱天蛋白酶-9等)的多种其它途径的活化或去活化。
PI3K途径的一个重要的负反馈机制是PTEN，一种催化PtdIns(3，4，5)P3去磷酸化为PtdIns(4，5)P2的磷酸酶(Furnari，F.B.等，Cancer Res.1998，58：5002；Dahia，P.L.M.，Hum.Molec.Genet.1999，8：185)。非常重要的是，所有实体瘤中，PETN在超过60％的实体瘤中突变为无活性形式，允许PI3K途径被组成型活化。由于大多数癌症是实体瘤，所以这种观察结果提示通过特异性靶向PI3K本身或PI3K途径中的个别下游激酶，人们可能能够减轻各种癌症的作用并恢复正常的细胞功能。
PI3K脂质产物中表征最为充分的靶之一是AGC丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶AKT(Hemmings，B.A.，Science，1997，275：628)。AKT是急性转化性反转录病毒AKT8之原癌基因v-akt的人同源物。其与蛋白激酶A和C有高度序列同源性，这也使其得到名称-蛋白激酶B(PKB)以及A和C相关物(Related to A and C)(RAC)。已知存在AKT的三种同种型，即Akt1、Akt2和Akt3，它们有80％的总体同源性(Staal，S.P，Proc.Natl.Acad.Sci.，1987，84：5034；Nakatani，K，Biochem，Biophys，Res.Commun.，1999，257：906)。另外，Akt2和Akt3都表现出有剪接变异体。
AKT被PtdIns(3，4，5)P3募集到细胞膜时，同种型Akt1、Akt2和Akt3被PDK1分别于T308、T309和T305以及分别于S473、S474和S472磷酸化(活化)。这种磷酸化由一种尚未知晓的激酶(推定名为PDK2)进行，虽然业已表明PDK1(Balendran，A.，Curr.Biol.，1999，9：393)、自磷酸化(Toker，A.，J.Biol.Chem.，2000，275：8271)和整联蛋白相关激酶(ILK)(Delcommenne，M.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1998，95：11211)涉及该过程。虽然AKT的一磷酸化活化了该酶，但其最大激酶活性则需要二磷酸化。
AKT据信通过抑制细胞凋亡并增强血管生成和增殖而发挥其对癌症的作用。另外，业已表明AKT在许多形式的人类癌症中过量表达，这些癌症包括但不限于结肠癌(Zinda等，Clin.Cancer Res.，2001，7：2475)、卵巢癌(Cheng，J.Q.等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1992，89：9267)、脑癌(Haas Kogan，D.等，Curr.Biol.，1998，8：1195)、肺癌(Brognard，J.等，Cancer Res.，2001，61：3986)、胰腺癌(Cheng，J.Q.，Proc.Natl.Acad.Sci.，1996，93：3636)、前列腺癌(Graff，J.R.等，J.Biol.Chem.，2000，275：24500)和胃癌(Staal，S.P.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1987，84：5034)。
靶向异常调节途径并最终导致疾病的激酶抑制剂的开发，对于医药界具有巨大的伦理和商业上的利益。于是，作为抗癌药、独立疗法或与其它已接受手术联合，抑制以下(1)、(2)、(3)或(4)的化合物因此将成为有效的靶：(1)AKT募集到细胞膜，(2)由PDK1或PDK2活化，(3)底物磷酸化，或(4)AKT下游靶之一。
发明概述
本发明提供抑制AKT蛋白激酶的新型化合物、这些化合物的制备方法以及含这类化合物的药用组合物。本发明的化合物可用作可通过抑制AKT蛋白激酶而得以治疗的疾病的治疗药。更具体地讲，本发明包括具有通式I的化合物，包括拆分的对映体和非对映体，及其可药用前药、代谢物、盐和溶剂合物：
A-L-CR
(I)
式中：
CR为杂芳基，其中所述杂芳基任选被选自以下的一个或多个基团取代：卤素、羟基、氰基、硝基、叠氮基、-NR21SO2R24、-SO2NR21R22、-NR21S(O)R4、-S(O)NR21R22、-C(O)R21、-C(O)OR21、-OC(O)R21、-OC(O)OR21、-NR21C(O)OR24、-NR21C(＝NR21)NR22R23、-NR21C(O)R22、-C(O)NR21R22、-SR21、-S(O)R24、-SO2R24、-NR21R22、-NR21C(O)NR22R23、-NR21C(NCN)NR22R23、-OR21、C1-C4烷基、C1-C6杂烷基、C2-C6烯基、C2-C6杂烯基、C2-C6炔基、C2-C6杂炔基、C3-C6环烷基、C3-C6杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基和杂芳基烷基，其中所述烷基、杂烷基、烯基、杂烯基、炔基、杂炔基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基和杂芳基烷基中的任一个任选进一步被选自以下的一个或多个基团取代：卤素、羟基、氰基、硝基、叠氮基、氟代甲基、二氟甲基、三氟甲基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6杂烷基、C2-C6杂烯基、C2-C6杂炔基、C3-C6环烷基、C3-C6杂环烷基、-SR21、-S(O)R24、-SO2R24、-C(O)R21、C(O)OR21、-C(O)NR21R22、-NR21R22和-OR21；
L选自：
R12为氢、卤素、羟基、氰基、硝基、氨基、叠氮基、C1-C5烷基、C2-C5烯基、C2-C5炔基、C1-C5杂烷基、C2-C5杂烯基或C2-C5杂炔基，其中所述烷基、烯基、炔基、杂烷基、杂烯基和杂炔基中的任一个任选地被独立选自以下的一个或多个基团取代：卤素、氰基、硝基、氨基、叠氮基、C1-C4烷基、氟代甲基、二氟甲基、三氟甲基、甲氧基、氟代甲氧基、二氟甲氧基和三氟甲氧基；
A为
Figure BDA00001987566300061
或
Figure BDA00001987566300062
W为N或CR15，条件是：当L为取代或未取代的亚哌嗪基时，W必须是CR15；
G为氢、烷基、杂烷基、烯基、杂烯基、炔基、杂炔基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基，其中所述烷基、杂烷基、烯基、杂烯基、炔基、杂炔基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基中的任一个任选被选自以下的一个或多个基团取代：卤素、羟基、氰基、氨基、硝基、叠氮基、-NR21SO2R24、-SO2NR21R22、-NR21S(O)R4、-S(O)NR21R22、-C(O)R21、-C(O)OR21、-OC(O)R21、-OC(O)OR21、-NR21C(O)OR24、-NR21C(＝NR21)NR22R23、-NR21C(O)R22、-C(O)NR21R22、-SR21、-S(O)R24、-SO2R24、-NR21R22、-NR21C(O)NR22R23、-NR21C(NCN)NR22R23、-OR21、C1-C4烷基、C1-C4杂烷基、C2-C4烯基、C2-C4杂烯基、C2-C4炔基、C2-C4杂炔基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基；
B1和B2独立地不存在或为C1-C4亚烷基、C1-C4亚杂烷基、C2-C4亚烯基、C2-C4亚杂烯基、C2-C4亚炔基、C2-C4亚杂炔基、C3-C6亚环烷基和C3-C6亚杂环烷基，其中所述亚烷基、亚杂烷基、亚烯基、亚杂烯基、亚炔基、亚杂炔基、亚环烷基或亚杂环烷基中的任一个任选地被独立选自以下的一个或多个基团取代：卤素、羟基、氰基、硝基、叠氮基、C1-C4烷基、C1-C4杂烷基、C2-C4烯基、C2-C4杂烯基、C2-C4炔基、C2-C4杂炔基、NR21R22和OR21；
R21、R22和R23独立地为氢、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6杂烷基、C2-C6杂烯基、C2-C6杂炔基、C3-C6环烷基、C3-C6杂环烷基、芳基、芳基烷基、杂芳基或杂芳基烷基；
R24为C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6杂烷基、C2-C6杂烯基、C2-C6杂炔基、C3-C6环烷基、C3-C6杂环烷基、芳基、芳基烷基、杂芳基或杂芳基烷基；
或者R21、R22、R23或R24中任何两个与它们所连接的原子一起形成4-10元碳环、芳环、杂芳环或杂环，其中所述碳环、芳环、杂芳环或杂环中的任一个任选地被独立选自以下的一个或多个基团取代：卤素、氰基、硝基、三氟甲基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、叠氮基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、杂环基和杂环基烷基；
R13和R14独立地为氢、羟基、氰基、C1-C6烷基、C1-C6杂烷基、C2-C6烯基、C2-C6杂烯基、C2-C6炔基、C2-C6杂炔基、C1-C6环烷基、C1-C6杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、芳基烷基、杂芳基烷基、-C(O)R21、C(O)OR21、C(＝NR21)NR22R23或-SO2R24，其中所述烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、杂烷基、杂烯基、杂炔基、芳基烷基或杂芳基烷基中的任一个任选地被独立选自以下的一个或多个基团取代：卤素、羟基、氰基、氨基、硝基、叠氮基、-NR21SO2R24、-SO2NR21R22、-NR21S(O)R4、-S(O)NR21R22、-C(O)R21、-C(O)OR21、-OC(O)R21、-OC(O)OR21、-NR21C(O)OR24、-NR21C(＝NR21)NR22R23、-NR21C(O)R22、-C(O)NR21R22、-SR21、-S(O)R24、-SO2R24、-NR21R22、-NR21C(O)NR22R23、-NR21C(NCN)NR22R23、-OR21、C1-C4烷基、C1-C4杂烷基、C2-C4烯基、C2-C4杂烯基、C2-C4炔基、C2-C4杂炔基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基；
或者R13和R14与它们连接的原子一起形成4-10元碳环、芳环、杂芳环或杂环，其中所述碳环、芳环、杂芳环和杂环中的任一个任选地被独立选自以下的一个或多个基团取代：卤素、氰基、硝基、叠氮基、C1-C4烷基、C1-C4杂烷基、C2-C4烯基、C2-C4杂烯基、C2-C4炔基、C2-C4杂炔基、NR21R22和OR21；
或者R13和B2的原子与N一起形成4-10元碳环、芳环、杂芳环或杂环，其中所述碳环、芳环、杂芳环和杂环中的任一个任选地被独立选自以下的一个或多个基团取代：卤素、氰基、硝基、叠氮基、C1-C4烷基、C1-C4杂烷基、C2-C4烯基、C2-C4杂烯基、C2-C4炔基、C2-C4杂炔基、NR21R22和OR21；
R15为氢、C1-C4烷基、C1-C4杂烷基、C2-C4烯基、C2-C4杂烯基、C2-C4炔基或C2-C4杂炔基，其中所述烷基、杂烷基、烯基、杂烯基、炔基或杂炔基中的任一个任选地被独立选自以下的一个或多个基团取代：卤素、羟基、氰基、硝基、叠氮基、NR21R22和OR21；
或者R13和R15与它们连接的原子一起形成3-10元碳环、芳环、杂芳环或杂环，其中所述碳环、芳环、杂芳环和杂环中的任一个任选地被独立选自以下的一个或多个基团取代：卤素、氰基、硝基、叠氮基、C1-C4烷基、C1-C4杂烷基、C2-C4烯基、C2-C4杂烯基、C2-C4炔基、C2-C4杂炔基、NR21R22和OR21；
或者当W为CR15时，R15和B1或B2的原子与C一起形成3-10元碳环、芳环、杂芳环或杂环，其中所述碳环、芳环、杂芳环和杂环中的任一个任选地被独立选自以下的一个或多个基团取代：卤素、氰基、硝基、叠氮基、C1-C4烷基、C1-C4杂烷基、C2-C4烯基、C2-C4杂烯基、C2-C4炔基、C2-C4杂炔基、NR21R22和OR21。
本发明也涉及含有有效量选自式I化合物的药物的药用组合物。也描述了式I化合物的制备方法。
在另一个实施方案中，本发明提供利用式I化合物抑制AKT蛋白激酶活性的方法。
在又一个实施方案中，本发明提供治疗由AKT蛋白激酶介导疾病或医学病症的方法。例如，本发明提供治疗温血动物过度增生性疾病的方法，该方法包括给予这种动物治疗或预防所述过度增生性疾病有效量的一种或多种式I化合物或其可药用盐或其体内可裂解前药。
在再一个实施方案中，本发明提供一种抑制AKT蛋白激酶产生的方法，该方法包括给予温血动物抑制AKT蛋白激酶产生有效量的式I化合物或其可药用盐或其体内可切割前药。
在另一个实施方案中，本发明提供一种提供AKT蛋白激酶抑制效果的方法，包括给予温血动物有效量的式I化合物或其可药用盐或其体内可切割前药。
在又一个实施方案中，本发明提供治疗或预防AKT蛋白激酶介导疾病的方法，包括给予哺乳动物治疗或预防所述AKT蛋白激酶介导疾病有效量的式I化合物或其可药用盐、其体内可切割前药或药物制剂。可按照本发明方法治疗的AKT蛋白激酶介导疾病包括但不限于癌症、炎症和各种增生性疾病、心血管疾病、神经变性性疾病、妇科疾病和皮肤病。
可按照本发明方法治疗的过度增生性疾病包括但不限于头部、颈部、肺部、胸部、结肠、卵巢、膀胱、胃、食道、子宫或前列腺的癌症和其它种类的过度增生性疾病。本发明的化合物和方法可以用来治疗包括以下所述的疾病和病症：类风湿性关节炎、骨关节炎、子宫内膜异位、动脉粥样硬化、静脉移植物狭窄、吻合周(peri-anastomatic)假体移植物狭窄、前列腺增生、慢性阻塞性肺病、银屑病、抑制组织修复所致神经损伤、瘢痕组织形成(且可有助于伤口愈合)、多发性硬化、炎性肠病、感染(尤其是细菌感染、病毒感染、反转录病毒感染或寄生物感染)(通过增加细胞凋亡)、肺病、肿瘤、帕金森病、移植排斥(作为免疫抑制药)、黄斑变性和脓毒性休克。
式I化合物可以有益地与其它已知治疗药联合施用。
本发明的其它优点和新特征将在下文的描述中分部叙述，其中部分在本领域技术人员检查下文描述时是显而易见的，或者可以通过实施本发明而获悉。本发明的优点可以利用所附权利要求书中具体指出的手段、组合、组合物和方法来实现和达到。
附图简述
所附附图结合到本文中，并且构成说明书的一部分，说明本发明的非限制性实施方案，与说明书一起用于解释本发明的原理。
附图中：
图1所示为制备化合物8-11的反应流程。
图2所示为制备化合物14的反应流程。
图3所示为制备化合物18的反应流程。
图4所示为制备化合物22的反应流程。
图5所示为制备化合物28的反应流程。
图6所示为制备化合物31的反应流程。
图7所示为制备化合物35和36的反应流程。
图8所示为制备化合物39和40的反应流程。
图9所示为制备化合物40的反应流程。
图10所示为制备化合物46的反应流程。
图11所示为制备化合物50的反应流程。
图12所示为制备化合物55的反应流程。
图13所示为制备化合物57和58的反应流程。
图14所示为制备化合物60和61的反应流程。
图15所示为制备化合物69-71的反应流程。
图16所示为制备化合物72-74的反应流程。
图17所示为制备化合物78的反应流程。
图18所示为制备化合物的80和81反应流程。
图19所示为制备化合物的85和86反应流程。
图20所示为制备化合物90的反应流程。
图21所示为制备化合物93-97的反应流程。
图22所示为制备化合物100和101的反应流程。
图23所示为制备化合物104-109的反应流程。
图24所示为制备化合物112-116的反应流程。
图25所示为制备化合物120-125的反应流程。
图26所示为制备化合物127和129的反应流程。
图27所示为制备化合物132和134的反应流程。
图28所示为制备化合物137和139的反应流程。
图29所示为制备化合物141-144的反应流程。
图30所示为制备化合物148的反应流程。
图31所示为制备化合物151-153的反应流程。
图32所示为制备化合物155和156的反应流程。
图33所示为制备化合物161-162的反应流程。
图34所示为制备化合物171-715的反应流程。
图35所示为制备化合物178-182的反应流程。
图36所示为制备化合物179的反应流程。
图37所示为制备化合物190的反应流程。
图38所示为制备化合物197-199的反应流程。
图39所示为制备化合物205-208的反应流程。
图40所示为制备化合物215和217的反应流程。
图41所示为制备化合物219、221和223的反应流程。
图42所示为制备化合物229的反应流程。
图43所示为制备化合物232和234的反应流程。
图44所示为制备化合物237-242的反应流程。
图45所示为制备化合物244和247的反应流程。
图46所示为制备化合物250、251和254-256的反应流程。
图47所示为制备化合物263和271的反应流程。
图48所示为制备化合物269和271的反应流程。
发明详述
本发明的式I化合物可用于抑制AKT蛋白激酶。除用作AKT抑制剂之外，式I化合物也可用作酪氨酸激酶以及丝氨酸和苏氨酸激酶的抑制剂。这类化合物可用作可通过抑制AKT蛋白激酶信号途径以及酪氨酸和丝氨酸/苏氨酸激酶受体途径而得以治疗的疾病的治疗药。一般而言，本发明包括具有通式I的化合物，包括拆分的对映体和非对映体、及其可药用前药、代谢物、盐和溶剂合物：
AA-L-CR
I
式中：
CR为杂芳基，其中所述杂芳基任选被选自以下的一个或多个基团取代：卤素、羟基、氰基、硝基、叠氮基、-NR21SO2R24、-SO2NR21R22、-NR21S(O)R4、-S(O)NR21R22、-C(O)R21、-C(O)OR21、-OC(O)R21、-OC(O)OR21、-NR21C(O)OR24、-NR21C(＝NR21)NR22R23、-NR21C(O)R22、-C(O)NR21R22、-SR21、-S(O)R24、-SO2R24、-NR21R22、-NR21C(O)NR22R23、-NR21C(NCN)NR22R23、-OR21、C1-C4烷基、C1-C6杂烷基、C2-C6烯基、C2-C6杂烯基、C2-C6炔基、C2-C6杂炔基、C3-C6环烷基、C3-C6杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基和杂芳基烷基，其中所述烷基、杂烷基、烯基、杂烯基、炔基、杂炔基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基和杂芳基烷基中的任一个任选进一步被选自以下的一个或多个基团取代：卤素、羟基、氰基、硝基、叠氮基、氟代甲基、二氟甲基、三氟甲基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6杂烷基、C2-C6杂烯基、C2-C6杂炔基、C3-C6环烷基、C3-C6环烷基、-SR21、-S(O)R24、-SO2R24、-C(O)R21、C(O)OR21、-C(O)NR21R22、-NR21R22和-OR21；
L选自：
Figure BDA00001987566300131
Figure BDA00001987566300132
R12为氢、卤素、羟基、氰基、硝基、氨基、叠氮基、C1-C5烷基、C2-C5烯基、C2-C5炔基、C1-C5杂烷基、C2-C5杂烯基或C2-C5杂炔基，其中所述烷基、烯基、炔基、杂烷基、杂烯基和杂炔基中的任一个任选地被独立选自以下的一个或多个基团取代：卤素、氰基、硝基、氨基、叠氮基、C1-C4烷基、氟代甲基、二氟甲基、三氟甲基、甲氧基、氟代甲氧基、二氟甲氧基和三氟甲氧基；
A为
Figure BDA00001987566300133
W为N或CR15，条件是：当L为取代或未取代的亚哌嗪基时，W必须是CR15；
G为氢、烷基、杂烷基、烯基、杂烯基、炔基、杂炔基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基，其中所述烷基、杂烷基、烯基、杂烯基、炔基、杂炔基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基中的任一个任选被选自以下的一个或多个基团取代：卤素、羟基、氰基、氨基、硝基、叠氮基、-NR21SO2R24、-SO2NR21R22、-NR21S(O)R4、-S(O)NR21R22、-C(O)R21、-C(O)OR21、-OC(O)R21、-OC(O)OR21、-NR21C(O)OR24、-NR21C(＝NR21)NR22R23、-NR21C(O)R22、-C(O)NR21R22、-SR21、-S(O)R24、-SO2R24、-NR21R22、-NR21C(O)NR22R23、-NR21C(NCN)NR22R23、-OR21、C1-C4烷基、C1-C4杂烷基、C2-C4烯基、C2-C4杂烯基、C2-C4炔基、C2-C4杂炔基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基；
B1和B2独立地不存在或为C1-C4亚烷基、C1-C4亚杂烷基、C2-C4亚烯基、C2-C4亚杂烯基、C2-C4亚炔基、C2-C4亚杂炔基、C3-C6亚环烷基和C3-C6亚杂环烷基，其中所述亚烷基、亚杂烷基、亚烯基、亚杂烯基、亚炔基、亚杂炔基、亚环烷基或亚杂环烷基中的任一个任选地被独立选自以下的一个或多个基团取代：卤素、羟基、氰基、硝基、叠氮基、C1-C4烷基、C1-C4杂烷基、C2-C4烯基、C2-C4杂烯基、C2-C4炔基、C2-C4杂炔基、NR21R22和OR21；
R21、R22和R23独立地为氢、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6杂烷基、C2-C6杂烯基、C2-C6杂炔基、C3-C6环烷基、C3-C6杂环烷基、芳基、芳基烷基、杂芳基或杂芳基烷基；
R24为C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6杂烷基、C2-C6杂烯基、C2-C6杂炔基、C3-C6环烷基、C3-C6杂环烷基、芳基、芳基烷基、杂芳基或杂芳基烷基；
或者R21、R22、R23或R24中任何两个与它们连接的原子一起形成4-10元碳环、芳环、杂芳环或杂环，其中所述碳环、芳环、杂芳环或杂环中的任一个任选地被独立选自以下的一个或多个基团取代：卤素、氰基、硝基、三氟甲基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、叠氮基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、杂环基和杂环基烷基；
R13和R14独立地为氢、羟基、氰基、C1-C6烷基、C1-C6杂烷基、C2-C6烯基、C2-C6杂烯基、C2-C6炔基、C2-C6杂炔基、C1-C6环烷基、C1-C6杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、-C(O)R21、C(O)OR21、C(＝NR21)NR22R23或-SO2R24，其中所述烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、杂烷基、杂烯基、杂炔基、芳基烷基或杂芳基烷基中的任一个任选地被独立选自以下的一个或多个基团取代：卤素、羟基、氰基、氨基、硝基、叠氮基、-NR21SO2R24、-SO2NR21R22、-NR21S(O)R4、-S(O)NR21R22、-C(O)R21、-C(O)OR21、-OC(O)R21、-OC(O)OR21、-NR21C(O)OR24、-NR21C(＝NR21)NR22R23、-NR21C(O)R22、-C(O)NR21R22、-SR21、-S(O)R24、-SO2R24、-NR21R22、-NR21C(O)NR22R23、-NR21C(NCN)NR22R23、-OR21、C1-C4烷基、C1-C4杂烷基、C2-C4烯基、C2-C4杂烯基、C2-C4炔基、C2-C4杂炔基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基；
或者R13和R14与它们连接的原子一起形成4-10元碳环、芳环、杂芳环或杂环，其中所述碳环、芳环、杂芳环和杂环中的任一个任选地被独立选自以下的一个或多个基团取代：卤素、氰基、硝基、叠氮基、C1-C4烷基、C1-C4杂烷基、C2-C4烯基、C2-C4杂烯基、C2-C4炔基、C2-C4杂炔基、NR21R22和OR21；
或者R13和B2的原子与N一起形成4-10元碳环、芳环、杂芳环或杂环，其中所述碳环、芳环、杂芳环和杂环中的任一个任选地被独立选自以下的一个或多个基团取代：卤素、氰基、硝基、叠氮基、C1-C4烷基、C1-C4杂烷基、C2-C4烯基、C2-C4杂烯基、C2-C4炔基、C2-C4杂炔基、NR21R22和OR21；
R15为氢、C1-C4烷基、C1-C4杂烷基、C2-C4烯基、C2-C4杂烯基、C2-C4炔基或C2-C4杂炔基，其中所述烷基、杂烷基、烯基、杂烯基、炔基或杂炔基中的任一个任选地被独立选自以下的一个或多个基团取代：卤素、羟基、氰基、硝基、叠氮基、NR21R22和OR21；
或者R13和R15与它们连接的原子一起形成3-10元碳环、芳环、杂芳环或杂环，其中所述碳环、芳环、杂芳环或杂环中的任一个任选地被独立选自以下的一个或多个基团取代：卤素、氰基、硝基、叠氮基、C1-C4烷基、C1-C4杂烷基、C2-C4烯基、C2-C4杂烯基、C2-C4炔基、C2-C4杂炔基、NR21R22和OR21；
或者当W为CR15时，R15和B1或B2的原子与C一起形成3-10元碳环、芳环、杂芳环或杂环，其中所述碳环、芳环、杂芳环和杂环中的任一个任选地被独立选自以下的一个或多个基团取代：卤素、氰基、硝基、叠氮基、C1-C4烷基、C1-C4杂烷基、C2-C4烯基、C2-C4杂烯基、C2-C4炔基、C2-C4杂炔基、NR21R22和OR21。
在本发明的一个实施方案中，CR选自：
式中X为N或CR1；
Y为CR2或N，条件是：当X为N时，Y必须是CR2；
Z为CR3R3a或NR2a，条件是：当X为N时，Z必须是CR3；
D1、D2、D3和D4独立地为CR4或N，条件是：D1、D2、D3或D4中不超过两个为N；
-----为任选的双键；
D5为CR5R5a、NR2a、O或S，条件是：当D5为O或S时，D8必须是C，D7必须是CR7或N，且或者(i)Q必须是CR6或CR6R6a，或者(ii)D7必须是CR7或CR7R7a；
Q为CR6、N或C＝O，条件是：或者(w)当Q为N时，D5、D7和D8之一必须是C，或(x)当Q为C＝O时，D5必须是CR5或N，D7必须是D7或N，且D8必须是C；
D7为CR7、N、O或S，条件是：当D7为O或S时，D8必须是C，D5必须是CR5或N，且或者(y)Q必须是CR6，或者(z)D5必须是CR5；
D8为C或N，条件是：当D8为N时，D5必须是CR5R5a，且Q必须是CR6或CR6R6a；
K或M为羰基，条件是：K和M不同时为羰基；
R1、R5、R5a和R8独立地为氢、卤素、羟基、氰基、硝基、叠氮基、氟代甲基、二氟甲基、三氟甲基、甲氧基、氟代甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、氨基、氨基甲基、二甲氨基、氨基乙基、二乙氨基或乙氧基；
R2为氢、卤素、羟基、氰基、硝基、氨基、叠氮基、C1-C4烷基、C1-C4杂烷基、C2-C4烯基、C2-C4杂烯基、C2-C4炔基、C2-C4杂炔基、C1-C6环烷基、C1-C6杂环烷基、C1-C6芳基或C1-C6杂芳基，其中所述烷基、杂烷基、烯基、杂烯基、炔基、杂炔基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基中的任一个任选地进一步被独立选自以下的一个或多个基团取代：卤素、羟基、氰基、硝基、叠氮基、氟代甲基、二氟甲基、三氟甲基、甲氧基、氟代甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、氨基、氨基甲基、二甲氨基、氨基乙基、二乙氨基和乙氧基；
R2a为氢、羟基、氰基、硝基、C1-C4烷基、C1-C4杂烷基、C2-C4烯基、C2-C4杂烯基、C2-C4炔基、C2-C4杂炔基、C3-C6环烷基、C3-C6杂环烷基、芳基或杂芳基，其中所述烷基、杂烷基、烯基、杂烯基、炔基、杂炔基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基中的任一个任选地被独立选自以下的一个或多个基团取代：卤素、羟基、氰基、硝基、叠氮基、氟代甲基、二氟甲基、三氟甲基、甲氧基、氟代甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、氨基、氨基甲基、二甲氨基、氨基乙基、二乙氨基或乙氧基；
R3和R3a独立地为氢、卤素、羟基、氰基、硝基、氨基、叠氮基、C1-C6烷基、C1-C6杂烷基、C2-C6烯基、C2-C6杂烯基、C2-C6炔基、C2-C6杂炔基、C1-C6环烷基、C1-C6杂环烷基、芳基或杂芳基，其中所述烷基、杂烷基、烯基、杂烯基、炔基、杂炔基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基中的任一个任选地进一步被独立选自以下的一个或多个基团取代：卤素、羟基、氰基、硝基、叠氮基、OR1、NR1R2和(C＝O)R2；
R4、R6、R6a、R7、R7a和R10独立地为氢、羟基、氰基、氨基、硝基、叠氮基、烷基、杂烷基、烯基、杂烯基、炔基、杂炔基、环烷基、杂环烷基、芳基、芳基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、-NR21SO2R24、-SO2NR21R22、-NR21S(O)R4、-S(O)NR21R22、-C(O)R21、-C(O)OR21、-OC(O)R21、-OC(O)OR21、-NR21C(O)OR24、-NR21C(＝NR21)NR22R23、-NR21C(O)R22、-C(O)NR21R22、-SR21、-S(O)R24、-SO2R24、-NR21R22、-NR21C(O)NR22R23、-NR21C(NCN)NR22R23或-OR21，其中所述烷基、杂烷基、烯基、杂烯基、炔基、杂炔基、环烷基、杂环烷基、芳基、芳基烷基、杂芳基或杂芳基烷基中的任一个任选地被独立选自以下的一个或多个基团取代：卤素、羟基、氰基、氨基、硝基、叠氮基、-NR21SO2R24、-SO2NR21R22、-NR21S(O)R4、-S(O)NR21R22、-C(O)R21、-C(O)OR21、-OC(O)R21、-OC(O)OR21、-NR21C(O)OR24、-NR21C(＝NR21)NR22R23、-NR21C(O)R22、-C(O)NR21R22、-SR21、-S(O)R24、-SO2R24、-NR21R22、-NR21C(O)NR22R23、-NR21C(NCN)NR22R23、-OR21、C1-C4烷基、C1-C4杂烷基、C2-C4烯基、C2-C4杂烯基、C2-C4炔基、C2-C4杂炔基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基，其中所述烷基、杂烷基、烯基、杂烯基、炔基、杂炔基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基可任选地进一步被独立选自以下的一个或多个基团取代：卤素、羟基、氰基、氨基、硝基、叠氮基、C1-C4烷基、C1-C4杂烷基、C2-C4烯基、C2-C4杂烯基、C2-C4炔基、C2-C4杂炔基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基、-NR21R22和-OR21；
或者R6和R7与它们连接的原子一起形成4-10元碳环、芳环、杂芳环或杂环，其中所述碳环、芳环、杂芳环和杂环中的任一个任选地被独立选自以下的一个或多个基团取代：卤素、氰基、硝基、三氟甲基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、叠氮基、-OR1、-NR1R2、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、杂环基和杂环基烷基；且
R9为氢、卤素、羟基、氰基、硝基、叠氮基、C1-C6烷基、C1-C6杂烷基、C2-C6烯基、C2-C6杂烯基、C2-C6炔基、C2-C6杂炔基、C1-C6环烷基、C1-C6杂环烷基、芳基、杂芳基、-NR21R22、-OR21、-NR21SO2R24和-NR21C(O)R22，其中所述烷基、杂烷基、烯基、杂烯基、炔基、杂炔基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基中的任一个任选地进一步被独立选自以下的一个或多个基团取代：卤素、羟基、氰基、硝基、叠氮基、OR1、NR1R2和(C＝O)R2。
在本发明的一个实施方案中，CR选自：
Figure BDA00001987566300191
式中D5、D7、D8、X和Q如上定义。
按照本发明的另一实施方案，A为：
Figure BDA00001987566300192
式中B1和B2独立地不存在或为C1-C4亚烷基；
R21a-R21c独立地为H、卤素、CH3、CF3、CH3O、CN、NO2、NH2、Ph、OH或OCH2Ph；
R22a、R22b和R24独立地为H、CH3或卤素；
R23a为H；且
R23b为H、CH3、CH2NH2、CH2NHCH2、CH2CH2NH2、CH2CH2NHCH2、CH2CH2N(CH2)2、-(C＝O)CH2NH2或-(C＝O)CH2CH2NH2；
或者R23a和R23b结合形成5元或6元杂环。
在本发明的再一个实施方案中，A为
Figure BDA00001987566300201
式中R25和R26独立地为H或CH3；且
R27为1-萘基、2-萘基、3′-苄基噻吩基、2′-噻吩基、2′-吡啶基、3′-吡啶基、4′-吡啶基、4′-噻唑基或3，3-二苯基。
本发明式I的A基团的更具体的实例包括但不限于：
Figure BDA00001987566300202
式中G、B1、R13和R14如上定义。
在一个替代实施方案中，本发明式I的A基团为选自通常以三字母符号命名的20种天然氨基酸的D-氨基酸或L-氨基酸，也包括非天然氨基酸，包括但不限于4-羟基脯氨酸、羟赖氨酸、demosine、isodemosine、3-甲基组氨酸、正缬氨酸、β-丙氨酸、γ-氨基丁酸、瓜氨酸、高半胱氨酸、高丝氨酸、鸟氨酸和甲硫氨酸砜。在一个优选实施方案中，式I的A基团为丙氨酸、苯丙氨酸、组氨酸或色氨酸。
基于式I的化合物的一个具体实例是：
Figure BDA00001987566300211
基于式I的化合物的另一个具体实例是：
Figure BDA00001987566300212
式中R28为H、卤素、CH3、CF3、CH3O、CN、NO2、NH2、Ph、OH或OCH2Ph。
基于式I的化合物的再一个具体实例是：
Figure BDA00001987566300213
式中D16为O或N；且
R29为H、卤素、CH3、CF3、CH3O、CN、NO2、NH2、Ph、OH或OCH2Ph。
本文所用术语“烷基”是指具有1-12个碳原子的饱和直链或支链一价烃基，其中烷基可以任选独立地被一个或多个下文所述取代基取代。烷基的实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、叔戊基、己基、异己基等。
本文所用术语“亚烷基”是指具有1-12个碳原子的饱和直链或支链二价烃基，例如亚甲基、亚乙基、亚丙基、2-甲基亚丙基、亚戊基等。亚烷基可以任选独立地被一个或多个本文所述取代基取代。
术语“杂烷基”是指具有1-12个碳原子的饱和直链或支链一价烃基，其中至少一个碳原子被选自N、O或S的杂原子所取代，并且其中所述基团可以是碳基团或杂原子基团(即杂原子可以出现在该基团的中部或末端)。杂烷基可以任选独立地被一个或多个本文所述取代基取代。术语“杂烷基”包括烷氧基和杂烷氧基(heteroalkoxy)。
本文所用术语“亚杂烷基”是指具有1-12个碳原子的饱和直链或支链二价烃基，其中至少一个碳原子被选自N、O或S的杂原子所取代，并且其中所述基团可以是碳基团或杂原子基团(即杂原子可以出现在该基团的中部或末端)。亚杂烷基可以任选独立地被一个或多个本文所述取代基取代。
“烯基”是指具有2-12个碳原子、含有至少一个双键的直链或支链一价烃基，其中烯基可以任选独立地被一个或多个下文所述取代基取代。烯基的实例包括但不限于：乙烯基(-CH＝CH2)、烯丙基(-CH2CH＝CH2)、1-环戊-1-烯基、1-环戊-2-烯基、1-环戊-3-烯基、5-己烯基(-CH2CH2CH2CH2CH＝CH2)、1-环己-1-烯基、1-环己-2-烯基和1-环己-3-烯基。
“亚烯基”是指具有2-12个碳原子、含有至少一个双键的直链或支链二价烃基，如1，2-亚乙基(-CH＝CH-)。亚烯基可以任选独立地被一个或多个本文所述取代基取代。
术语“杂烯基”是指具有2-12个碳原子和至少一个双键的直链或支链一价烃基，其中至少一个碳原子被选自N、O或S的杂原子所取代，并且其中所述基团可以是碳基团或杂原子基团(即杂原子可以出现在该基团的中部或末端)。杂烯基可以任选独立地被一个或多个本文所述取代基取代。术语“杂烯基”包括烯氧基和杂烯氧基。
“亚杂烯基”是指具有2-12个碳原子且含有至少一个双键的直链或支链二价烃基，其中至少一个碳原子被选自N、O或S的杂原子所取代，并且其中所述基团可以是碳基团或杂原子基团(即杂原子可以出现在该基团的中部或末端)。亚杂烯基可以任选独立地被一个或多个本文所述取代基取代。
术语“烯丙基”是指具有式RC＝CHCHR的基团，其中R为烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基或本文定义的任何取代基，其中烯丙基可以任选独立地被本文所述一个或多个取代基取代。
术语“炔基”是指具有2-12个碳原子、含有至少一个叁键的直链或支链一价烃基，其中炔基可以任选独立地被一个或多个下文所述取代基取代。炔基的实例包括但不限于乙炔基(-C≡CH)和炔丙基(-CH2C≡CH)。
“亚炔基”是指具有2-12个碳原子、含有至少一个叁键的直链或支链二价烃基。亚炔基可以任选独立地被一个或多个本文所述取代基取代。典型的亚炔基包括但不限于亚乙炔基(-C≡C-)、亚丙炔基(-CH2C≡C-)和4-戊炔基(-CH2CH2CH2C≡C-)。
术语“杂炔基”是指具有2-12个碳原子和至少一个叁键的直链或支链一价烃基，其中至少一个碳原子被选自N、O或S的杂原子所取代，并且其中所述基团可以是碳基团或杂原子基团(即杂原子可以出现在该基团的中部或末端)。杂炔基可以任选独立地被一个或多个本文所述取代基取代。术语“杂炔基”包括炔氧基和杂炔氧基。
“亚杂炔基”是指具有2-12个碳原子且含有至少一个叁键的直链或支链二价烃基，其中至少一个碳原子被选自N、O或S的杂原子所取代，并且其中所述基团可以是碳基团或杂原子基团(即杂原子可以出现在该基团的中部或末端)。亚杂炔基可以任选独立地被一个或多个本文所述取代基取代。
术语“碳环”、“碳环基”或“环烷基”是指具有3-10个碳原子的饱和或部分不饱和环状烃基。术语“环烷基”包括单环和多环(如二环和三环)环烷基结构，其中多环结构任选包括与饱和或部分不饱和环烷基或杂环烷基环或芳环或杂芳环稠合的饱和或部分不饱和环烷基。环烷基的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基等。环烷基可以任选独立地在一个或多个可取代位置上被各种基团所取代。例如，这样的环烷基可以任选被例如下述基团所取代：C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、卤素、羟基、氰基、硝基、氨基、一(C1-C6)烷基氨基、二(C1-C6)烷基氨基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基、氨基(C1-C6)烷基、一(C1-C6)烷基氨基(C1-C6)烷基或二(C1-C6)烷基氨基(C1-C6)烷基。
术语“杂环烷基”、“杂环”或“杂环基”是指具有3-8个环原子的饱和或部分不饱和碳环基团，其中至少一个环原子是选自氮、氧和硫的杂原子，其余的环原子为C，其中一个或多个环原子可以任选独立地被一个或多个以下所述取代基取代。该基团可以是碳基团或杂原子基团。该术语还包括二环和三环稠合环系统，其包括杂环稠合的一个或多个碳环或杂环。“杂环烷基”也包括其中杂环基与芳环或杂芳环稠合的基团。杂环烷基环的实例包括但不限吡咯烷基、四氢呋喃基、二氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢吡喃基、二氢吡喃基、四氢噻喃基、哌啶子基、吗啉代、硫代吗啉代、噻
Figure BDA00001987566300241
烷基、哌嗪基、高哌嗪基、吖丁啶基、
Figure BDA00001987566300242
丁环基、噻丁环基、高哌啶基、
Figure BDA00001987566300243
庚环基、噻庚环基、
Figure BDA00001987566300244
吖庚因基、二氮杂庚因基、噻吖庚因基、1，2，3，6-四氢哌啶基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、茚满基、2H-吡喃基，4H-吡喃基、二烷基、1，3-二氧戊环基、吡唑啉基、二噻烷基、二硫戊环基、二氢吡喃基，二氢噻吩基，二氢呋喃基、吡唑烷基咪唑啉基、咪唑烷基、3-氮杂二环[3.1.0]己烷基、3-氮杂二环[4.1.0]庚烷基、氮杂二环[2.2.2]己烷基、3H-吲哚基和喹嗪基。螺旋部分也包括在该定义的范围内。由以上所列基团衍生的上述基团在可能时可以是C连接的或是N连接的。例如，吡咯衍生的基团可以是吡咯-1-基(N连接的)或吡咯-3-基(C连接的)。此外，咪唑衍生的基团可以是咪唑-1-基(N连接的)或咪唑-3-基(C连接的)。其中两个环碳原子被氧代基(＝O)部分取代的杂环基的实例是1，1-二氧代-硫代吗啉基。本文的杂环基是未取代的，或者如具体限定的，在一个或多个可取代位置被各种基团所取代。例如，这样的杂环基可以任选被例如下述的基团所取代：C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、卤素、羟基、氰基、硝基、氨基、一(C1-C6)烷基氨基、二(C1-C6)烷基氨基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基、氨基(C1-C6)烷基、一(C1-C6)烷基氨基(C1-C6)烷基或二(C1-C6)烷基氨基(C1-C6)烷基。
术语“亚杂环烷基”是指具有3-8个环原子的饱和或部分不饱和二价碳环基团，其中至少一个环原子是选自氮、氧和硫的杂原子，其余的环原子为C，其中一个或多个环原子可以任选独立地被一个或多个本文所述取代基取代。实例包括但不限于取代的和未取代的亚哌啶基。
术语“芳基”是指具有单环(如苯基)、多环(例如联苯基)或多个稠环的一价芳族碳环基团，其中至少一个环是芳环，(如1，2，3，4-四氢萘基、萘基)，其任选地被例如卤素、低级烷基、低级烷氧基、三氟甲基、芳基、杂芳基和羟基一取代、二取代或三取代。
术语“杂芳基”是指具有5-10个原子、含至少一个、至多4个选自氮、氧或硫的杂原子的5元环、6元环或7元环的一价芳族基团，其包括稠环系统(至少一个环为芳环)。杂芳基的实例为吡啶基、咪唑基、嘧啶基、吡唑基、三唑基、吡嗪基、四唑基、呋喃基、噻吩基、异
Figure BDA00001987566300251
唑基、噻唑基、
Figure BDA00001987566300252
唑基、异噻唑基、吡咯基、喹啉基、异喹啉基、吲哚基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、噌啉基、吲唑基、中氮茚基、2，3-二氮杂萘基、哒嗪基、三嗪基、异吲哚基、蝶啶基、嘌呤基、
Figure BDA00001987566300253
二唑基、三唑基、噻二唑基、噻二唑基、呋咱基、苯并呋咱基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并唑基、喹唑啉基、喹喔啉基、1，5-二氮杂萘基和呋喃并吡啶基。螺部分也包括在该定义的范围内。杂芳基任选被例如卤素、低级烷基、低级烷氧基、卤代烷基、芳基、杂芳基和羟基一取代、二取代或三取代。
术语“卤代”代表氟代、氯代、溴代或碘代。同样，术语“卤素”是指氟、氯、溴或碘取代基。
术语“芳基烷基”是指被一个或多个芳基部分(如上文定义)取代的烷基部分(也如上文定义)。更优选的芳基烷基是芳基-C1-3-烷基。实例包括苄基、苯乙基等。
术语“杂芳基烷基”是指被杂芳基部分(如上文定义)取代的烷基部分(也如上文定义)。更优选的杂芳基烷基是5元或6元杂芳基-C1-3-烷基。实例包括但不限于唑基甲基、吡啶基甲基等。
术语“杂环基烷基”是指被杂环基部分(如上文定义)取代的烷基部分(也如上文定义)。更优选的杂环基烷基是5元或6元杂环基-C1-3-烷基。实例包括但不限于四氢吡喃基甲基。
术语“环烷基烷基”是指被环烷基部分(如上文定义)取代的烷基部分(也如上文定义)。更优选的环烷基为5元或6元环烷基-C1-3-烷基。实例包括但不限于环丙基烷基。
术语“Me”意指甲基，“Et”意指乙基，“Bu”意指丁基，而“Ac”意指乙酰基。
一般而言，式I化合物的各个部分或官能团可以任选被一个或多个取代基取代。适用于本发明目的的取代基的实例包括但不限于：卤代、烷基、烯丙基、烯基、炔基、杂烷基、杂烯丙基、杂烯基、杂炔基、烷氧基、杂烷氧基、Gn-环烷基、Gn-杂环烷基、Gn-OR、Gn-NO2、Gn-CN、Gn-CO2R、Gn-(C＝O)R、Gn-O(C＝O)R、Gn-O-烷基、Gn-OAr、Gn-SH、Gn-SR、Gn-SOR、Gn-SO2R、Gn-S-Ar、Gn-SOAr、Gn-O2Ar、芳基、杂芳基、Gn-Ar、Gn-(C＝O)NR2R3、Gn-NR2R3、Gn-NR(C＝O)R、Gn-SO2NR2R3、PO3H2、SO3H2，式中G为具有1-4个碳的亚烷基或具有2-4个碳的亚烯基或亚炔基；n为0或1；R1、R2和R3为烷基、烯丙基、烯基、炔基、杂烷基、杂烯丙基、杂烯基、杂炔基、烷氧基、杂烷氧基、Gn-环烷基或Gn-杂环基烷基；而Ar为芳基或杂芳基，其中所述烷基、烯丙基、烯基、炔基、杂烷基、杂烯丙基、杂烯基、杂炔基、烷氧基、杂烷氧基、Gn-环烷基、Gn-杂环烷基、亚烷基、亚烯基、亚炔基、Ar、R1、R2和R3可以进一步被取代或是未取代的。
不言而喻，在其中两个或更多个基团连续使用以定义与某个结构来连接的取代基的情况下，第一个命名的基团被认为是末端基团，而最后一个命名的基团被认为与所述结构相连。因此，例如，基团-芳基烷基是以烷基与所述结构相连的。
本发明的化合物可以具有一个或多个不对称中心；这种化合物因此可以作为单个(R)-或(S)-立体异构体或其混合物来制备。除非另有说明，否则说明书和权利要求书中某个具体化合物的描述或定义将包括其两种单个对映体和混合物或换言之其外消旋体。因此，本发明也包括式I化合物的外消旋体和拆分的对映体、非对映体。确定立体化学和分离立体异构体的方法是本领域所熟知的(请参看″AdvancedOrganic Chemistry″，第4版，J.March，John Wiley and Sons，New York，1992的第4章中的讨论)。
除式I化合物外，本发明还包括这类化合物的溶剂合物、药物活性代谢物、可药用前药和可药用盐。
术语“溶剂合物”是指一种分子与一个或多个溶剂分子的聚集体。
“药物活性代谢物”是特定化合物或其盐通过体内代谢所产生的药理活性产物。一种化合物的代谢物可以用本领域已知的常规技术来鉴定，用诸如本文所述的试验来测定其活性。
具有包括但不限于游离氨基、酰胺基、羟基或羧基的官能团的本发明化合物可以转变为可药用前药。“可药用前药”是可以在生理条件下或者通过溶剂分解而转变为特定化合物或这类化合物的可药用盐的化合物。前药包括其中氨基酸残基或者具有两个或更多个(例如两个、三个或四个)氨基酸残基的多肽链通过酰胺键或酯键共价连接于本发明化合物的游离氨基、羟基或羧基的化合物。氨基酸残基包括但不限于通常以三字母符号表示的20种天然氨基酸，还包括4-羟基脯氨酸、羟赖氨酸、demosine、isodemosine、3-甲基组氨酸、正缬氨酸、β-丙氨酸、γ-氨基丁酸、瓜氨酸、高半胱氨酸、高丝氨酸、鸟氨酸和甲硫氨酸砜。本发明的一种优选前药是与磷酸残基共价连接的式I化合物。本发明的另一个优选前药是与缬氨酸残基共价连接的式I化合物。
也包括其它类型的前药。例如，游离羧基可以衍生化为酰胺或烷基酯。作为另一个实例，通过将羟基转变为磷酸酯、半琥珀酸酯、二甲氨基乙酸酯或磷酰氧基甲氧羰基，可以将包含游离羟基的本发明化合物衍生化为前药，如Advanced Drug Delivery Reviews，1996，19，115中所概述的。也包括羟基和氨基的氨基甲酸酯前药，同样包括羟基的碳酸酯前药、磺酸酯和硫酸酯。也包括其中酰基可以为烷基酯、任选被包括但不限于醚、胺和羧酸官能团的基团所取代的、或者其中酰基为上述氨基酸酯的、羟基作为(酰氧基)甲基酯和(酰氧基)乙基酯的衍生化。这种类型的前药描述于J.Med.Chem.，1996，39，10中。更具体的实例包括用诸如下述基团取代醇基团的氢原子：(C1-C6)烷酰氧基甲基、1-((C1-C6)烷酰氧基)乙基、1-甲基-1-((C1-C6)烷酰氧基)乙基、(C1-C6)烷氧基羰基氧基甲基、N-(C1-C6)烷氧基羰基氨基甲基、琥珀酰基、(C1-C6)烷酰基、α-氨基(C1-C4)烷酰基、芳基酰基和α-氨基酰基、或α-氨基酰基-α-氨基酰基，其中每个α-氨基酰基独立选自天然存在的L-氨基酸、P(O)(OH)2、-P(O)(O(C1-C6)烷基)2或葡基(通过除去半缩醛形式的糖的羟基而得到的基团)。
游离氨基也可以衍生化为酰胺、磺酰胺或磷酰胺。所有这些前药部分都可以加入包括但不限于醚、胺或羧酸官能团的基团。例如，通过用诸如R-羰基、RO-羰基、NRR′-羰基的基团取代氨基中的氢原子可以生成前药，其中R和R′各自独立地为(C1-C10)烷基、(C3-C7)环烷基、苄基，或R-羰基为天然α-氨基酰基或天然α-氨基酰基-天然α-氨基酰基、-C(OH)C(O)OY，式中Y为H、(C1-C6)烷基或苄基、-C(OY0)Y1(式中Y0为(C1-C4)烷基，而Y1为(C1-C6)烷基、羧基(C1-C6)烷基、氨基(C1-C6)烷基或一-N-或二-N，N-(C1-C6)烷基氨基烷基)、-C(Y2)Y3(式中Y2为H或甲基，而Y3为一-N-或二-N，N-(C1-C6)烷基氨基、吗啉代、哌啶-1-基或吡咯烷-1-基)。
“可药用盐”是保留特定化合物的游离酸和碱之生物功效并且是非生物学的或者并非不合要求的盐。本发明的化合物可以具有足够酸性的、足够碱性的或具有这两种性质的官能团，因此可与任何数目的无机碱或有机碱、以及无机酸和有机酸反应，从而生成可药用盐。可药用盐的实例包括通过使本发明化合物与无机或有机酸或无机碱反应而制得的盐，诸如包括下述的盐：硫酸盐、焦硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、磷酸盐、磷酸一氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸盐、丙酸盐、癸酸盐、辛酸盐、丙烯酸盐、甲酸盐、异丁酸盐、己酸盐、庚酸盐、丙炔酸盐、草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、癸二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、丁炔-1，4-二酸盐、己炔-1，6-二酸盐、苯甲酸盐、氯代苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、dinitromenzoates、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、邻苯二甲酸盐、磺酸盐、二甲苯磺酸盐、苯基乙酸盐(pheylacetates)、苯基丙酸盐、苯基丁酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、γ-羟基丁酸盐、乙醇酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、丙磺酸盐、萘-1-磺酸盐、萘-2-磺酸盐和扁桃酸盐。
如果本发明的化合物是碱，则可以通过本领域可得到的任何适宜方法制备所需的可药用盐，例如用无机酸或有机酸处理游离碱，无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等，有机酸如乙酸、马来酸、琥珀酸、扁桃酸、富马酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、乙醇酸、水杨酸、诸如葡糖醛酸或半乳糖醛酸的吡喃糖苷基酸、诸如柠檬酸或酒石酸之类的α羟酸、诸如天冬氨酸或谷氨酸的氨基酸、诸如苯甲酸或肉桂酸之类的芳族酸、诸如对甲苯磺酸或乙磺酸之类的磺酸等。
如果本发明化合物是酸，则所需的可药用盐可以用任何适宜的方法来制备，例如用诸如胺(伯胺、仲胺或叔胺)、碱金属氢氧化物或碱土金属氢氧化物等的无机碱或有机碱处理游离酸。合适盐的说明性实例包括但不限于由诸如甘氨酸和精氨酸之类的氨基酸、氨、伯胺、仲胺和叔胺和诸如哌啶、吗啉和哌嗪之类的环状胺衍生的有机盐，以及由钠、钙、钾、镁、锰、铁、铜、锌、铝和锂衍生的无机盐。
本发明的化合物可以用本文所述的反应途径和合成流程，使用本领域可得到技术，用容易得到的原料来制备。
本发明的治疗方面
本发明也提供用于治疗哺乳动物过度增生性疾病的药用组合物，其包含治疗有效量的本发明化合物或其可药用盐、前药、代谢物或水合物、以及可药用载体。在一个实施方案中，所述药用组合物用于治疗诸如皮肤癌、脑癌、肺癌、鳞状细胞癌、膀胱癌、胃癌、胰腺癌、乳腺癌、头部癌、颈部癌、肾脏癌症、肾癌、卵巢癌、前列腺癌、结肠直肠癌、食管癌、睾丸癌、妇科癌症、心脏癌症、肝癌、骨癌、脑膜癌、脊髓癌、血癌、皮肤癌、肾上腺癌或甲状腺癌的癌症。在另一实施方案中，所述药用组合物用于治疗非癌性过度增生性疾病，如皮肤良性增生(银屑病)、再狭窄或前列腺增生(如良性前列腺增生(BPH))。
本发明还涉及治疗哺乳动物过度增生性疾病的方法，其包括给予所述哺乳动物治疗有效量的本发明化合物或其可药用盐、前药或水合物，并结合选自以下的抗肿瘤药：有丝分裂抑制剂、烷化剂、抗代谢药、嵌入性抗生素、生长因子抑制剂、细胞周期抑制剂、酶抑制剂、拓扑异构酶抑制剂、生物反应调节剂、抗激素、血管生成抑制剂和抗雄激素。
本发明还涉及治疗哺乳动物胰腺炎或肾病的方法，其包括给予所述哺乳动物治疗有效量的本发明化合物或其可药用盐、前药或水合物。
本发明还涉及预防哺乳动物胚细胞植入的方法，其包括给予所述哺乳动物治疗有效量的本发明化合物或其可药用盐、前药或水合物。
本发明还涉及治疗哺乳动物脉管生成或血管生成相关疾病的方法，其包括给予所述哺乳动物治疗有效量的本发明化合物或其可药用盐、前药或水合物。在一个实施方案中，所述方法用于治疗选自以下的疾病：肿瘤血管生成、如类风湿性关节炎之类的慢性炎症、动脉粥样硬化、炎性肠病、如银屑病、湿疹(excema)和硬皮病之类的皮肤病、糖尿病、糖尿病性视网膜病、早产儿视网膜病、年龄相关性黄斑变性、血管瘤、神经胶质瘤、黑素瘤、卡波西肉瘤、卵巢癌、乳癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌、结肠癌和表皮样癌。
本发明还涉及用于治疗哺乳动物中与下述疾病相关的疾病或病症的药用组合物：炎性疾病、自身免疫病、破坏性骨病、增生性疾病、传染病、病毒性疾病、纤维变性性疾病或神经变性性疾病，该组合物包含治疗有效量的本发明化合物或其可药用盐、前药或水合物和可药用载体。上述疾病和/或病症的实例包括但不限于：类风湿性关节炎、动脉粥样硬化、炎性肠病、如银屑病、湿疹和硬皮病之类的皮肤病、糖尿病和糖尿病并发症、糖尿病性肾病、早产儿视网膜病、年龄相关性黄斑变性、血管瘤、慢性阻塞性肺病、特发性肺纤维化、过敏反应如哮喘、过敏性鼻炎和特应性皮炎、肾病和肾衰、多囊性肾病、急性冠状综合征、充血性心力衰竭、骨关节炎、神经纤维瘤病、器官移植排斥、恶病质和疼痛。
还提供用作患有上述疾病或病症的温血动物的这种疾病和病症治疗药物的式I化合物，所述温血动物优选为哺乳动物，更优选为人类。也提供式I化合物在制备用于治疗患有上述疾病或病症的温血动物的上述疾病或病症的药物中的应用，所述温血动物优选为哺乳动物，更优选为人类。
可按照本发明方法用本发明化合物或其可药用盐、前药和水合物治疗的患者，包括例如业已诊断出患有以下疾病的患者：银屑病、再狭窄、动脉粥样硬化、BPH、肺癌、骨癌、CMML、胰腺癌、皮肤癌、头颈部癌、皮肤或眼内黑素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛门区癌症、胃癌、结肠癌、乳癌、睾丸癌、妇科肿瘤(如子宫肉瘤、输卵管癌、子宫内膜癌、宫颈癌、阴道癌或外阴癌)、何杰金氏病、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌症(如甲状腺癌、甲状旁腺癌或肾上腺癌)、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、前列腺癌、慢性或急性白血病、儿童实体瘤、淋巴细胞性淋巴瘤、膀胱癌、肾脏或子宫癌症(如肾细胞癌、肾盂癌)、或中枢神经系统肿瘤(如原发性CNS淋巴瘤、脊柱肿瘤、脑干神经胶质瘤或脑垂体腺瘤)。
本发明还涉及用于抑制哺乳动物的异常细胞生长的药用组合物，其包含适量的本发明化合物或其可药用盐或溶剂合物或前药以及适量的化疗药，其中所述化合物、盐、溶剂合物或前药的量以及化疗药的量一起，可有效抑制异常的细胞生长。目前已知有许多化疗药。在一个实施方案中，所述化疗药选自：有丝分裂抑制剂、烷化剂、抗代谢药、抗肿瘤抗生素、生长因子抑制剂、细胞周期抑制剂、酶、拓扑异构体抑制剂、生物反应调节剂、抗激素、血管生成抑制剂和抗雄激素。
本发明还涉及抑制哺乳动物的异常细胞生长或治疗过度增生性疾病的方法，该方法包括给予所述哺乳动物适量的本发明化合物或其可药用盐或溶剂合物或前药并联合放射治疗，其中所述化合物、盐、溶剂合物或前药的量与放射治疗联合，可有效抑制所述哺乳动物的异常细胞生长或治疗过度增生性疾病。用于给予放射治疗的方法是本领域已知的，这些技术可以以本文所述的联合疗法使用。这种联合疗法中本发明化合物的给予可以如下文所述方法确定。
相信本发明的化合物可以赋予异常细胞对用于杀伤和/或抑制这类细胞生长的辐射更为敏感。因此，本发明还涉及使哺乳动物的使异常细胞致敏、从而用放射治疗的方法，其包括给予哺乳动物适量的本发明化合物或其可药用盐或溶剂合物或前药，所述量可有效地使异常细胞对放射疗法敏化。该方法中所述化合物、盐或溶剂合物的量可以按照本文所述的用于确定这类化合物有效量的方法来确定。
本发明的化合物和方法可用来治疗其它疾病和病症(如炎性疾病)，包括类风湿性关节炎、骨关节炎、子宫内膜异位、动脉粥样硬化、静脉移植物狭窄、peri-anastomatic假体移植物狭窄、前列腺增生、慢性阻塞性肺病、银屑病、组织修复所致神经损伤的抑制、瘢痕组织形成(且可有助于伤口愈合)、多发性硬化、炎性肠病、感染尤其是细菌感染、病毒感染、反转录病毒感染或寄生物感染(通过增加细胞凋亡)、肺病、肿瘤、帕金森病、移植排斥(作为免疫抑制药)、黄斑变性和脓毒性休克。
治疗有效量的本发明化合物可以用来治疗通过AKT蛋白激酶、酪氨酸激酶、其它丝氨酸/苏氨酸激酶、和/或双特异性激酶的调节或调控介导的疾病。“有效量”意指将化合物给予需要这种治疗的哺乳动物时足以有效治疗由于一种或多种AKT蛋白激酶、酪氨酸激酶、其它丝氨酸/苏氨酸激酶、和/或双特异性激酶的活性所介导疾病的化合物的量。因此，例如，选自式I的化合物或其盐、活性代谢物或前药的治疗有效量，是足以调节、调控或抑制一种或多种AKT蛋白激酶、酪氨酸激酶、其它丝氨酸/苏氨酸激酶、和/或双特异性激酶之活性、从而由该活性介导的疾病得以减轻或缓解的量。
术语“异常细胞生长”和“过度增生性疾病”在本申请中可互换使用。
除非另有说明，否则本文所用的“异常细胞生长”，是指不受正常调节机制控制的细胞生长(如丧失了接触抑制)。这包括例如下述异常生长：(1)由于突变型酪氨酸激酶的表达或受体酪氨酸激酶过量表达而增殖的肿瘤细胞(肿瘤)；(2)其中发生异常酪氨酸激酶活化的其它增生性疾病的良性和恶性细胞；(3)由于受体酪氨酸激酶引起增殖的任何肿瘤；(4)因异常丝氨酸/苏氨酸激酶活化而增生的任何肿瘤；(5)其中发生异常丝氨酸/苏氨酸激酶活化的其它增生性疾病的良性和恶性细胞。
给定药剂对应于这种量的量将随诸如特定化合物、疾病状态及其严重程度、需治疗哺乳动物的特性(如体重)等因素而有所变化，然而可以由本领域技术人员通过常规方法来确定。“治疗”意指受影响的哺乳动物如人类病症至少部分由于一个或多个AKT蛋白激酶、酪氨酸激酶、其它丝氨酸/苏氨酸激酶、和/或双特异性激酶的活性而减轻，包括但不限于防止哺乳动物发生病症、特别是当发现哺乳动物有患该病症素质但尚未诊断患有该病症时；调节和/或抑制该病症；和/或缓解该病症。
为了使用式I化合物或其可药用盐、溶剂合物、代谢物或前药来治疗性治疗(包括预防性治疗)包括人类在内的哺乳动物，通常按照标准制药实践将其配制为药用组合物。按照本发明这一方面，提供一种药用组合物，其包含前文所述的式I化合物或其可药用盐、溶剂合物、代谢物或前药以及可药用稀释剂或载体。
为了制备本发明的药用组合物，优选按照常规药物混合技术将治疗或预防有效量的式I化合物或其可药用盐、溶剂合物、代谢物或前药(单独或与本文公开的其它治疗药一起)与可药用载体均匀混合，得到一次剂量。载体视给药所需制剂的形式如口服或胃肠外给药，可以采用多种多样的形式。适宜载体的实例包括任何和所有溶剂、分散介质、辅药、包衣、抗细菌药和抗真菌药、等渗剂和吸收延迟剂、甜味剂、稳定剂(以促进长期贮存)、乳化剂、粘合剂、增稠剂、盐、防腐剂、溶剂、分散介质、包衣、抗细菌药和抗真菌药、等渗剂和吸收延迟剂、矫味剂和制备特定治疗用组合物可能需要的各种材料，如缓冲剂和吸收剂。这类介质和药物与药用活性物质的应用是本领域所熟知的。除任何常规介质或药物与式I化合物不配伍之外，考虑了其在治疗用组合物和制剂中的应用。也可以将补充有效成分加入到本文所述的组合物和制剂中。
本发明的组合物可采用适于口服应用(如片剂、糖锭剂、硬胶囊剂或软胶囊剂、水性或油性混悬剂、乳剂、可分散粉剂或颗粒剂、糖浆或酏剂)、局部应用(如乳膏剂、软膏剂、凝胶剂、或水性或油性乳剂或混悬剂)、吸入给药(如作为细微粉剂或液体气雾剂)、吹入给药(如作为细微粉剂)、或胃肠外给药(如作为静脉内、皮下或肌内给药用的无菌水性或油性溶液剂，或作为直肠给药用栓剂)的形式。举例而言，计划用于口服应用的组合物可含有一种或多种着色剂、甜味剂、矫味剂和/或防腐剂。
片剂制剂用的适宜可药用赋形剂包括：例如惰性稀释剂，如乳糖、碳酸钠、磷酸钙或碳酸钙；制粒剂和崩解剂，如玉米淀粉或藻酸(algenicacid)；粘合剂，如淀粉；润滑剂，如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉；防腐剂，如对羟基苯甲酸乙酯或丙酯；和抗氧化剂，如抗坏血酸。片剂制剂可以是未包衣的或采用常规包衣材料和本领域熟知的方法包衣，从而在这任何情况下改变其崩解作用和随后有效成分在胃肠道的吸收，或者改进其稳定剂和/或外观。
口服用组合物可采用硬明胶胶囊的形式，其中有效成分与惰性固体稀释剂如碳酸钙、磷酸钙或高岭土混合，或者可作为软明胶胶囊，其中有效成分与水或如花生油、液体石蜡或橄榄油之类的油混合。
水性混悬剂一般含有细粉形式的有效成分与一种或多种下述物质：悬浮剂，如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、西黄蓍胶和阿拉伯胶；分散剂或润湿剂，如卵磷脂或烯化氧与脂肪酸的缩合产物(如聚氧乙烯硬脂酸酯)、或环氧乙烷与长链脂族醇的缩合产物(如十七碳乙烯氧基十六醇(heptadecaethyleneoxycetanol))、或环氧乙烷与由脂肪酸和己糖醇衍生的偏酯(如聚氧乙烯山梨醇一油酸酯)的缩合产物、或环氧乙烷与由脂肪酸和脱水己糖醇衍生的偏酯的缩合产物(如聚乙烯脱水山梨醇一油酸酯)。水性混悬剂也可含有一种或多种防腐剂(如对羟基苯甲酸乙酯或丙酯)、抗氧化剂(如抗坏血酸)、着色剂、矫味剂和/或甜味剂(如蔗糖、糖精或阿司帕坦)。
通过将有效成分悬浮于植物油(如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油)或矿物油(如液体石蜡)中，可配制油性混悬剂。油性混悬剂也可含有增稠剂，如蜂蜡、固体石蜡或鲸蜡醇。也可加入甜味剂(如上述甜味剂)和矫味剂，以提供适口的口服制剂。这些组合物可通过加入抗氧化剂如抗坏血酸来加以防腐。
适用于通过加入水而制备水性混悬剂的可分散粉剂和颗粒剂一般含有有效成分和分散剂或润湿剂、悬浮剂和一种或多种防腐剂。适宜的分散剂或润湿剂和悬浮剂的实例为上文已经提及的分散剂、润湿剂和悬浮剂。其它赋形剂如甜味剂、矫味剂和着色剂也可存在。
本发明的药用组合物也可采用水包油型乳剂。油相可以是植物油(如橄榄油或花生油)或矿物油(如液体石蜡)或这些油中任何油的混合物。适宜的乳化剂可以是例如天然树胶(如阿拉伯胶或西黄蓍胶)、天然磷脂(如大豆卵磷脂)、由脂肪酸和脱水己糖醇衍生的酯或偏酯(如脱水山梨醇一油酸酯)以及所述偏酯与环氧乙烷的缩合产物(如聚氧乙烯脱水山梨醇一油酸酯)。乳剂还可含有甜味剂、矫味剂和防腐剂。
糖浆和酏剂可用甜味剂如甘油、丙二醇、山梨醇、阿司帕坦或蔗糖来配制，也可含有缓和剂、防腐剂、矫味剂和/或着色剂。
药用组合物也可采用无菌注射用水性或油性混悬剂的形式，其可按照已知方法采用一种或多种合适的上述分散剂或润湿剂和悬浮剂来配制。无菌注射用制剂也可以是无毒胃肠外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌注射用溶液剂或混悬剂，如1，3-丁二醇中的溶液剂。
栓剂制剂可通过将有效成分与合适的无刺激赋形剂混合来配制，该赋形剂在常温下为固体，但在直肠温度下为液体，因而在直肠中融化而释放药物。适宜的赋形剂包括例如可可脂和聚乙二醇。
诸如乳膏、软膏剂、凝胶剂和水性或油性溶液剂或混悬剂的局部制剂一般可通过采用本领域熟知的常规方法，将有效成分与常规局部可接受的溶媒或稀释剂配制在一起而制得。
吹入给药用组合物可采用细微粉剂形式，其含有例如平均直径30μm或小得多的颗粒，粉剂本身或者仅含有效成分，或者含有用一种或多种生理上可接受的载体如乳糖稀释的有效成分。吹入用粉剂然后常规装在含有例如1-50mg有效成分的胶囊中，以供用涡轮式吸入装置来使用，诸如用于吹入已知药剂色甘酸钠。
吸入给药用组合物可采用常规加压气雾剂形式，其安排以含细微固体的气雾剂或者液体小滴发放有效成分。可使用常规气雾剂抛射剂，如挥发性氟化烃或烃类，气雾剂装置常规上安排发放计量的有效成分。
有关制剂的进一步的信息，请参看Comprehensive MedicinalChemistry(Corwin Hansch；Chairman of Editorial Board)第5卷第25.2章，Pergamon Press 1990，该文献具体引作参考。
与一种或多种赋形剂组合产生单一剂型的本发明化合物的量，必须视所治疗的宿主和具体给药途径而变化。例如，拟口服给予人体的制剂可含有例如0.5mg-2g有效成分，其与常规适量赋形剂混合，赋形剂的量可在总组合物重量的大约5-98％范围内变化。单位剂型一般含有大约1mg至大约500mg的有效成分。有关给药途径和给药方案的进一步信息，请参看Comprehensive Medicinal Cehmistry第5卷第25.3章(Corwin Hansch；Chairman of Editorial Board)，Pergamon Press1990，该文献具体引作参考。
用于治疗或预防目的的式I化合物剂量的大小，按照众所周知的医学原理，自然视所述病症的性质和严重程度、动物或病人的年龄和性别以及给药途径而变化。
本发明的化合物可单独使用，或者与用于治疗可由抑制MEK获益的疾病的其它药物和疗法联合使用。这样的治疗除涉及本发明化合物之外，还可涉及常规外科手术或放射治疗或化学治疗。这种化学治疗可包括一种或多种下述类别的抗肿瘤药：
(i)抗增殖药/抗肿瘤药及其联合药物，按医学肿瘤学使用，如烷化剂(如顺铂、卡铂、环磷酰胺、氮芥、美法仑，苯丁酸氮芥、白消安和亚硝基脲)；抗代谢药(如抗叶酸剂，诸如氟嘧啶类，如5-氟尿嘧啶和替加氟、雷替曲塞、甲氨蝶呤、阿糖胞苷、羟基脲或欧洲专利申请第239362号中所公开的一种优选的抗代谢药B-(5-[N-(3，4-二氢-2-甲基-4-氧代喹唑啉-6-基甲基)-N-甲基氨基]-2-噻吩甲酰)-1-谷氨酸)；抗肿瘤抗生素(如蒽环霉素，如阿霉素、博来霉素、多柔比星、柔红霉素、表柔比星、伊达比星、丝裂霉素C、放线菌素D和普卡霉素；抗有丝分裂药(例如长春花生物碱，如长春新碱、长春碱、长春地辛和长春瑞滨以及taxoids，如泰素和泰索帝)；和拓扑异构酶抑制剂(例如表鬼臼毒素如依托泊苷和替尼泊苷、安吖啶、托泊替康和喜树碱)；
(ii)细胞抑制剂，诸如抗雌激素类(如他莫昔芬、托瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬和iodoxyfene)、雌激素受体负调节剂(如氟维司群)，抗雄激素类(如比卡鲁胺、氟他胺、尼鲁米特、醋酸环丙孕酮和CasodexTM(4′-氰基-3-(4-氟苯基磺酰)-2-羟基-2-甲基-3′-(三氟甲基)-N-丙酰苯胺))、LHRH拮抗剂或LHRH激动剂(如戈舍瑞林、亮丙瑞林和布舍瑞林)、孕激素类(如醋酸甲地孕酮)、芳香酶抑制剂(如阿那曲唑、来曲唑、伏氯唑和依西美坦)和5α-还原酶抑制剂(如非那雄胺)；
(iii)抑制癌细胞侵入的药剂(例如金属蛋白酶抑制剂，如马立马司他，和尿激酶纤溶酶原激活物受体功能抑制剂)；
(iv)生长因子功能抑制剂，如生长因子抗体、生长因子受体抗体(如抗erbB2抗体曲妥单抗[HerceptinTM]和抗erbB1抗体西妥昔单抗[C225])、法尼基转移酶抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂和丝氨酸-苏氨酸激酶抑制剂(如表皮生长因子家族酪氨酸激酶抑制剂，诸如N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基-6-(3-吗啉基丙氧基)喹唑啉-4-胺(吉非替尼(gefitinib)，AZD1839)、N-(3-乙炔基苯基)-6，7-双(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-4-胺(埃罗替尼(erlotinib)，OSI-774)和6-丙烯酰氨基-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-(3-吗啉基丙氧基)-喹唑啉-4-胺(CI 1033))、血小板衍生生长因子家族抑制剂和肝细胞生长因子家族抑制剂；
(v)抗血管生成药，例如抑制血管内皮生长因子作用的抑制剂(如抗血管内皮细胞生长因子抗体贝伐单抗[AvastinTM]、诸如国际专利申请WO 97/22596、WO 97/30035、WO 97/32856和WO 98/13354中公开的那些化合物)和通过其它机制起作用的化合物(如利诺胺、整联蛋白αvβ3功能抑制剂、MMP抑制剂、COX-2抑制剂和血管生长抑素)；
(vi)血管损害药，如考布他汀A4和国际专利申请WO 99/02166、WO 00/40529、WO 00/41669、WO 01/92224、WO 02/04434和WO02/08213中公开的化合物；
(vii)反义疗法(如针对以上所列靶的反义疗法，如ISIS 2503和抗ras反义疗法)；
(viii)基因疗法，包括例如GVAXTM，替代异常基因如异常p53或异常BRCA1或BRCA2的方法，GDEPT(基因定向酶前药疗法)方法，如使用胞嘧啶脱氨酶、胸苷激酶或细菌硝基还原酶的方法，和增强患者对化学治疗或放射治疗耐受性的方法，如多药耐药性基因治疗；
(ix)干扰素；和
(x)免疫疗法，包括例如离体和体内增强患者肿瘤细胞免疫原性的方法，诸如用细胞因子如白介素2、白介素4或粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子转染，降低T细胞无反应性的方法，采用转染免疫细胞如细胞因子转染的树突细胞的方法，采用细胞因子转染的肿瘤细胞系的方法和采用抗独特型抗体的方法。
这种联合治疗可以通过同时、序贯或分别给予各个治疗组分来完成。这种联合制品采用上文所述剂量范围的本发明化合物和其批准剂量范围内的其它药物活性剂。
按照本发明的该方法，提供一种用于联合治疗癌症的药用组合物，其包含上文所述式I化合物和上述所述其它抗肿瘤药
虽然式I化合物主要作为用于温血动物(包括人类)的治疗药是有价值的，但它们也可用于需要控制AKT蛋白激酶、酪氨酸激酶、其它丝氨酸/苏氨酸激酶、和/或双特异性激酶的任何时候。因此，它们可用作供开发新的生物测试和寻找新的药理学药剂用的药理学标准物。
可以在体外、体内或在细胞系内测试本发明化合物对AKT蛋白激酶、酪氨酸激酶、其它丝氨酸/苏氨酸激酶、和/或双特异性激酶的活性。体外测定包括测定对激酶活性抑制作用的测定。交替的体外测定定量测定该抑制剂与激酶结合的活性，并且可以通过放射性标记该抑制剂、然后结合、分离该抑制剂/激酶复合物并测定结合放射性标记的量来测定，或者通过进行竞争实验来测定，其中将新抑制剂与已知的放射性配体一起温育。这些和其它有用的体外和细胞培养物测定是本领域技术人员众所周知的。
虽然业已描述了本发明，并且在某种程度上作出了具体阐述，但不言而喻，本发明所公开的内容仅仅作为实例，本领域技术人员在不背离本发明的精神和不偏离本发明要求保护的范围的情况下，可以对各部分的组合和排列作出多种变化。
本发明化合物可以有机合成领域的技术人员所熟知的多种方式来制备。本发明的化合物可以采用下述的方法、以及有机化学合成领域中已知的合成方法、或者本领域技术人员知晓的其改进方法来合成。优选的方法包括但不限于下述方法。
本发明的新化合物可以采用本小节所述的反应和技术来制备。反应在适于所用试剂和材料的溶剂中进行，并且适用于所进行的转化。此外，在下述合成方法的描述中，应当理解，可对所有建议的反应条件，包括溶剂、反应氛围、反应温度、实验时间长度和后处理方法选择为该反应的标准条件，本领域技术人员应当容易认识到这一点。有机合成领域的技术人员可以理解，分子各部分上存在的官能团必须与所建议的试剂和反应相容。对于本领域技术人员而言，这种限制到与反应条件相匹配的取代基是显而易见的，必须使用替代方法。
本发明化合物的制备可以会聚方式或序贯合成方式进行。这类化合物和制备这些化合物的中间体的制备和纯化中所需的技术是本领域技术人员所知的。纯化方法包括但不限于正相或反相色谱、结晶和蒸馏。
本发明化合物(8)、(9)、(10)和(11)的制备说明示于图1。合成始于取代喹唑啉酮(3)的制备，后者例如通过使相应的取代芳基氨基酸(1)和相应的取代酰胺(2)缩合而制得(请参看例如LeMahieu等，J.Med.Chem.，1983，26，420-5及其中引用的参考文献)。通过用卤化剂(如POCl3)处理，可以达到在喹唑啉酮(3)中引入离去基团，得到氯化喹唑啉(4)。卤素离去基团然后被取代且受保护的哌嗪(5)(例如Boc，但可使用任何适宜的保护基；请参看T.W.Greene等，Protective groups inorganic synthesis，Wiley and Sons，1999，第3版，第494-653页)所取代。哌嗪(5)可以纯净化合物或者在碱存在下被引入氯化喹唑啉(4)中。然后用已知方法脱除哌嗪保护基(请参看Greene等，出处同上)(6)。
喹唑啉中间体(6)中哌嗪伯胺的取代可采用各种各样的亲电子试剂和反应条件来完成。例如，通过适宜N-取代的或受保护的氨基酸(如Boc等)使哌嗪酰化，这在溶液相和固相条件下都可采用各种标准肽偶联方法来引入，产生诸如化合物(8)的产物。作为代表性实例，请参看Miklos Bodanszky，‘Principles of Peptide Synethesis’，Springer-Verlag，1993，第2版，和C.Najera，Synlett，2002，9，1388-1403。然后，上述(如果受保护)N-保护氨基酸单元用相应的方法(例如对Boc基团采用酸；Greene等，出处同上)脱保护，然后按照本领域技术人员已知的方法根据需要进行操作。
由喹唑啉中间体(6)，通过用天然或“非天然”氨基酸(7)酰化，可以制备与化合物(8)类似的本发明化合物。“非天然”氨基酸的制备也是本领域技术人员所熟知的，其应用包括在本发明范围内(有关代表性综述，请参看C.Najera，Synlett，2002，9，1388-1403和J.-A.Ma，angew.Chemie，Int.Ed.，2003，42，4290-4299和其中引用的参考文献)。
或者，哌嗪(6)可用酸或酰基卤在碱存在下酰化，产生取代的胺(10)。另外，取代叔胺(11)可通过用合适的醛(或替代物)在还原剂(如氰基硼氢化钠)存在下处理哌嗪(6)而制得。哌嗪(6)也可用环氧化物处理，得到氨基醇(9)。可在标准条件(如还原、烷基化、氧化、钯或镍介导偶联等)下对所有官能团进行进一步操作，以进一步使各化合物官能化。
图1所述化合物可以或者作为外消旋体或者作为单一对映体(例如采用对映体纯氨基酸(7))制备。如果作为外消旋体制备，则通过在手性固定相柱上，用正相或反相HPLC技术分离化合物的外消旋混合物，可以分离出相应的对映体。或者，可以用合适的手性酸(或适宜的活化衍生物)如酒石酸二苯甲酰基酯等(请参看例如Kinbara，K.等，J.Chem.Soc.，Perkin Trans.2，1996，2615；和Tomori，H.等，Bull.Chem.Soc.Jpn.，1996，3581)处理外消旋化合物(8)，制备化合物(8)的非对映体混合物。然后可以采用常规技术(即硅胶色谱、结晶、HPLC等)分离非对映体，然后除去手性助剂，得到对映体纯化合物(8)。
本发明的其它化合物可以采用用其它方式取代和官能化的酸、氨基酸、羟酸以及图2-15中所述的变体来制备。例如，本发明的化合物(14)可按图2所示来制备。用适宜保护基(如乙酸酯)保护取代的α-羟基苄酯(12)的羟基，得到化合物13。然后将苄酯转变为相应的羧酸(例如通过氢解)，得到化合物(14)。
图3所示为化合物(18)的制备。将取代的苄基硼酸(15)、乙醛酸(16)和手性或非手性一保护(例如用Boc保护基)的二胺(17)(如3-Boc-氨基吡咯烷)在合适溶剂如1，2-二氯乙烷中混合，在高温下搅拌，得到羧酸(18)。
图4所示为化合物(22)的制备。用适宜的氨基保护基(如Boc)保护2-(2-氨基乙氧基)乙醇(19)，将羟基氧化为羧酸，得到中间体(20)。然后将化合物(20)中的酸用适宜的碱(如K2CO3)和烷基卤转变为酯，得到中间体化合物(21)。用强碱(如LDA或LHMDS)，接着加入取代的苄基卤，完成中间体化合物(21)的烯醇化，得到烷基化酯，然后通过碱水解将烷基化酯转变为相应的酸(22)。
化合物(28)的制备如图5所示。在酸性条件(无机酸、R2OH)或碱性条件(K2CO3，R2X)下将取代的苯基羧酸(23)转变为合适的酯(24)。用强碱(如LDA)，并加入卤代乙酸酯(如溴代乙酸叔丁酯)，完成酯(22)的烯醇化，得到中间体化合物(25)。通过用酸(如TFA)处理化合物(25)，进行选择性酯脱保护，得到羧酸(26)。将羧酸(26)转变为酰基叠氮化物(例如用二苯基磷酰叠氮)，然后通过在合适的醇溶剂(如叔丁醇)中，在有或无路易斯酸(如SnCl4)的情况下加热，将酰基叠氮化物转变为相应的氨基甲酸酯保护的胺，得到化合物(27)。然后通过在碱性条件(如LiOH/THF水溶液)下水解，将羧酸酯转变为相应的酸，得到化合物(28)。
图6所示为羧酸(31)的制备。用强碱(如LDA/LiBr或LHMDS)且加入取代的苄基卤，使内酰胺(29)烯醇化，得到烷基化中间体化合物(30)。然后在碱性条件下(如LiOH/THF水溶液)使内酰胺开环，得到羧酸(31)。
化合物(36)可如图7所示制备。使合适取代的苯甲醛与氰基乙酸乙酯缩合，得到结构(32)的化合物。用还原剂如NaBH4处理，得到饱和化合物(33)，然后用钴介导氢化物还原，得到化合物(34)。然后可以对胺进行保护，将酯皂化，得到化合物(35)。采用(例如)EDCI或PyBrop，然后脱保护，可以完成与哌嗪的偶联，得到最终化合物(36)。
图8所示为氨基酸(40)的制备。通过使苯甲醛与氰基乙酸乙酯缩合，然后按照Lee，J.等(1999)，3060-3065中所述方法进行催化加氢，可以制备化合物(39)。通过用伯胺保护，然后在碱性条件下(如LiOH水溶液)皂化，可以将化合物(39)转变为化合物氨基酸(40)。
得到氨基酸(40)的一个替代方法如图9所示。可以于低温下，用各种各样的有机金属试剂如LDA在合适的溶剂如THF或乙醚中处理其中Pg为合适保护基(例如Boc)的化合物(41)，得到二价阴离子中间体，可用适量的苄基卤将其猝灭，得到中间体化合物(42)。在碱性条件如LiOH水溶液下皂化，得到所需产物(40)。
图10概述了由化合物(45)合成氨基醇(46)的方法。如图9所示，通过顺序进行脱质子化、烷基化和皂化，可以由化合物(44)制备化合物(45)。
化合物(50)的制备示于图11。通过用合适的有机金属试剂如LDA，在合适的溶剂如THF或乙醚中，在低温下处理苯基乙酸衍生物(47)，然后与其中X为适宜离去基团(例如Br、Cl)且Pg为适宜保护基(如Boc或Ts)的化合物(48)反应，得到中间体化合物(49)(Ho-sam A.等(1997)，J.Med.Chem.，40，2196；Ohkanda等(2004)，J.Med.Chem.，47，432)。在碱性条件下(如LiOH水溶液)将化合物(49)皂化，得到酸(50)。
化合物(55)可以按图12所示制备。用醇酯化适当取代的市售酸(51)，得到所需的酯(52)。用合适的碱和亲电子试剂(如丙烯酸酯等(53))处理酯(52)，然后用酸裂解酯(请参看T.W.Greene等，出处同上)，得到中间体化合物(54)。用活化试剂然后加热引入叠氮化物(得到酰基-叠氮化物)，影响酸(54)重排为必要的N-保护氨基-酯中间体(如Boc，但可使用任何合适的保护基与合适的醇溶剂；请参看Greene等，出处同上)。用氢氧化物碱处理酯中间体，得到N-保护的氨基酸(55)。
化合物(58)可以如图13所示制备。用催化碱如叔丁醇钾进行苯乙酸乙酯与丙烯酸叔丁酯的迈克尔加成，然后对叔丁酯进行酸解，得到化合物(56)。用二苯基磷酰叠氮进行库尔提斯重排，然后将酯皂化，得到化合物(57)。用EDCI或PyBrop可完成哌嗪的偶联，然后脱除Boc基团，得到最终化合物(58)。
图14所示为化合物(61)的制备。利用碱如双(三甲基甲硅烷基)氨基化锂，用α-溴乙酸叔丁酯对苯乙酸乙酯进行烷基化，得到化合物(59)。该顺序的其余部分如图13中所示，得到化合物(61)。
化合物(71)可如图15所示制备。用异哌啶甲酸乙酯替代4-氯喹唑啉，然后对酯进行皂化，得到中间体(68)。用卤化试剂如亚硫酰氯或草酰氯处理，得到酰基氯(69)。用MeOH、THF或DCE中的NaCNBH3或NaH(OAc)3作为溶剂，用N-Boc-乙二胺对适当取代的苯甲醛进行还原性胺化，得到仲胺(70)。使(69)与胺(70)反应，然后脱除Boc基团，得到化合物(71)。
或者，化合物(74)可如图16所示制备。用MeOH、THF或DCE中的NaCNBH3或NaH(OAc)3作为溶剂，用N-(2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯对适当取代的苯胺进行还原性胺化，得到仲胺(72)。通过脱除Boc基团，然后进行酸-碱提取和色谱，纯化化合物(72)，得到结构(73)的化合物，然后通过用Boc2O处理，将其变回化合物(72)。以DMAP作为碱，与中间体(69)反应，然后用(例如)HCl乙醚溶液脱除Boc基团和取代(如果需要)，得到化合物(74)。
化合物(78)可如图17所示制备。可以按照文献记载的方法，由7-氮杂吲哚制备化合物(75)。通过将N-苄基哌啶与中间体(75)一起熔融，可以完成哌嗪的引入，得到中间体(76)。可采用(例如)在甲醇中Pd-C存在下的氢化，完成苄基保护基的脱除。Boc保护的氨基酸与中间体(77)的偶联可采用(例如)EDCI或PyBrop来完成，然后脱除Boc基团，得到化合物(78)。
图18所示为化合物(81)的制备。可以按照与文献记载方法(A.R.等，J.Org.Chem.，2003，68，4935-4937)类似的方法，由2-氨基吡啶制备化合物(79)。用(例如)HCl乙醚溶液脱除Boc基团，得到中间体(80)。用(例如EDCI或PyBrop将哌嗪与N保护的氨基酸偶联，然后脱保护，得到最终化合物(81)。
图19描述了5-或6-取代吲唑(86)的制备。采用标准条件(例如催化加氢、锌/乙酸、Fe/HCl、SnCl2/MeOH或FeSO4水溶液)，将其中R5和R7是适用于后续反应的取代基的取代硝基吲唑(82)还原为氨基吲唑(83)。氨基吲唑(83)可以在酸清除剂存在下与化合物(84)(如双(2-氯乙基)胺)反应，得到环化产物(85)。在适宜的溶剂(例如乙醇)中通过在大约50-150℃下加热进行该反应。然后所得的哌嗪化合物(85)用可采用各种标准肽偶联方法在溶液相或固相条件下被引入的合适酸(例如受保护氨基酸)来酰化。该偶联产物可能需要一个单独的脱保护步骤来除去R中的任何保护基，得到产物(86)。例如，通过用强酸如三氟乙酸(TFA)或盐酸在惰性溶剂如二氯甲烷或甲醇存在下处理，可以脱除Boc保护基。可以通过用氢气在钯催化剂存在下催化氢化，或者通过转移氢化，进行Cbz基团的脱除。可以用低沸点胺(如哌啶等)在诸如DMF等溶剂中脱除Fmoc基团。
图20描述了3-烷基和3-芳基取代的吲唑(90)的合成。可用图20所示方法制备碘代中间体(87)。用适宜的保护基对化合物(87)进行保护，用烷基或芳基硼酸或酯和适宜的Pd催化剂如(Pd(PPh3)4处理，得到所需的3-取代中间体(89)，然后将其脱保护，得到化合物(90)。
3-氨基取代的吲唑的制备概述于图21。通过Pd或Cu介导的偶联(Buchwald等(2000)，J.Org..Chem.，65，1144；Hartwig等(1998)Angew.Chem.Int.Ed.Eng.，37，2046)，使适当一保护的哌嗪中间体与其中X为合适离去基团(如溴、碘或OTf)的化合物(91)反应，得到中间体(92)，可以制备化合物(92)。脱除保护基，然后让酰胺与酸偶联，得到化合物(93)，然后用肼处理化合物(93)，得到3-氨基吲唑中间体(94)。对N-1氮进行选择性保护，得到化合物(95)，后者可用酰基卤在惰性溶剂(如二氯甲烷等)中进行酰化，得到酰胺(96)。可以加入诸如二异丙基乙胺、三乙胺、吡啶或DMAP的有机碱作为酸清除剂，以促进偶联反应。通过脱除保护基，可以完成化合物(96)向化合物(97)的转变。
图22描述了带有异喹啉环的一类特殊化合物的合成。按照已知方法，在碱和钯或铜催化剂存在下，使适当一保护的哌嗪(99)与被离去基团X(其中X为卤素，如氯、溴和碘)或磺酸酯(如OSO2CF3)取代的异喹啉化合物反应，可以制备化合物(100)。脱除化合物(100)中的保护基Pg，得到胺中间体，如图19所示，可通过与酸进行酰胺偶联，然后任选脱除保护基，可将胺中间体常规转变为化合物(101)。
图23介绍了5-位带有取代基的一类具体嘧啶。通过在酸清除剂(如二异丙基乙胺或三乙胺)存在下，使适当一保护的哌嗪化合物(103)和4-氯取代的嘧啶中间体(102)(其中X为Br或I)进行SNAr反应，可以制备化合物(104)。脱除保护基Pg，然后与酸(106)进行酰胺偶联，得到中间体(107)。可以通过金属介导反应使中间体(107)与各种偶联组分(108)反应，得到产物(109)。例如，在嘧啶环5位带有O联或S联取代基的化合物，可以通过在改进的Ullman偶联条件(Wolter，M.等，Org.Lett.2002，4，973-976)下，使中间体(107)和醇或硫醇在碱(如Cs2CO3)和Cu催化剂(如CuCl、CuI等)存在下反应而制得。在某些情况下，可加入添加剂(如2，2，6，6-四甲基-庚烷-3，5-二酮、戊烷-2，4-二酮、1，10-菲咯啉(phenethroline)等)以加快反应。或者，如果可得到硫醇钠，则该反应不需要碱。化合物(107)与硫醇之间的偶联反应也可通过钯催化反应(Kondo，T.等Chem.Rev.，2000，3205-3220；Zheng，N.等，J.Org.Chem.，1998，63，9606-9607)来完成。通过中间体(107)与胺之间的Pd或Cu介导的偶联(Buchwald等，(2000)，J.Org.Chem.，65，1144；Hartwig等(1998)Angew.Chem.Int.Ed.Eng.37，2046)，可以制备嘧啶环5位带有N联取代基的化合物。在碱(如Na2CO3和Et3N)、Pd(0)催化剂(如Pd(PPh3)4、Pd(PPh3)Cl2、Pd2(dba)3和Pd(OAc)2)和合适配位体(如PPh3和AsPh3)存在下，通过其中Y为硼酸或硼酸酯的中间体(107)和(108)之间的Suzuki偶联(Miyaura，N.Suzuki A.(1995)，Chem.Rev.95，2457；Org.React.(1997)，50，1)，可制备嘧啶环5位带有烷基或芳基取代基的化合物。或者，通过在Pd催化剂(如Pd(PPh3)4)或Ni催化剂(如Ni(acac)2)存在下化合物(107)和(108)间的Kumada偶联(其中Y-R′为有机锌试剂)，可制备5-烷基和芳基取代的嘧啶(109)。或者，在通过Pd催化剂存在下化合物(107)和(108)之间的Stille偶联(其中Y-R′为有机锡烷试剂)，也可制备5-烷基和芳基取代的嘧啶(109)。
图24描述了5位带有O联取代基的化合物的替代合成。通过Cu催化的中间体(110)与苯甲醇偶联，可制备化合物(111)。经氢化脱除苄基，得到5-羟基嘧啶中间体(112)，通过如图19所示的脱保护和酰胺偶联，将中间体(112)转变为化合物(115)。用烷基卤在碱(如K2CO3、Cs2CO3等)存在下，在惰性溶剂(如DMF)中对化合物(115)进行烷基化，得到所需的化合物(116)。
化合物(125)可如图25所示合成。通过使相应的取代丙二酸二酯(117)和相应的取代甲脒(118)在碱(如NaOEt)存在下缩合，可制备适当取代的嘧啶(119)。用卤化剂(如POCl3或POBr3)处理嘧啶(119)，得到二卤化物(120)。用受保护的哌嗪(121)替代所述卤素之一，得到一取代的化合物(122)，该化合物可通过还原(例如催化氢化)第二个卤素而转变为化合物(123)。用图22所示方法，可使化合物(123)转变为所需的化合物(125)。
图26描述了制备5，6-二取代的嘧啶(129)的方法。用纯亲核体(如胺)处理化合物(126)，或者在碱存在下用亲核体处理化合物(126)，可得到化合物SNAr产物(127)。或者，可以通过各种金属介导的偶联反应，如图23所示的反应，可将化合物(126)转变为化合物(127)。通过顺序进行图22所示的脱保护、酰胺偶联和任选的脱保护，可将化合物(127)转变为所需的化合物(129)。
嘧啶环6位具有氨基的化合物的制备示于图27。通过中间体(130)和氨相当物(如二苯甲酮亚胺)间的钯催化偶联反应，可制备式(131)的化合物。有关氨相当物的芳基化的综述和主要参考文献，请参看Muci，A.R.，Buchwald，S.L.，Topics in Current Chemistry，2002，219，131。脱除化合物(131)中的保护基Pg2，得到氨基中间体(132)。采用图22所示的方法，可将(132)转变为所需的化合物(134)。
图28概述了带有噌啉环的本发明化合物的制备。可用单罐法，由4-羟基噌啉(135)和受保护的哌嗪(136)经由三氟甲磺酸酯中间体(Cacchi，S.等，Synlett，1997，1400)制备化合物(137)。序贯脱除化合物(137)中的保护基，然后进行酰胺偶联和任选的脱保护，得到化合物(139)。
图29描述了含二氨基化合物的合成。保护化合物(140)中的氨基，得到受保护中间体，让后者与邻苯二甲酰亚胺进行Mitsunobu反应，得到化合物(141)。可用碱(如肼和低沸点胺)选择性脱除邻苯二甲酰亚胺基。采用标准肽偶联方法用酸酰化化合物(142)，然后脱除保护基，得到产物(144)。
如图30所示，或者首先在已知条件下选择性脱除化合物(141)中的保护基而得到化合物(146)，可使后者与酸偶联得到酰胺(147)。用碱(如肼和低沸点胺)脱除邻苯二甲酰亚胺基，得到产物(148)。
图31概述了1-取代喹嗪酮(153)的制备。用有机金属碱(如n-BuLi)处理化合物(149)，然后用2-乙氧基亚甲基丙二酸二乙酯猝灭，得到迈克尔加成产物(150)。当在惰性溶剂(如二甲苯)中加热化合物(150)时发生环化，得到中间体(151)。通过在酸性溶液(如HCl水溶液或硫酸溶液)中加热，可除去中间体(151)中的羧酸酯基。序贯脱除化合物(152)中的保护基，然后进行酰胺偶联和任选的脱保护，得到化合物(153)。
图32描述了具有4-羟基哌啶接头的化合物的合成。在碱(如NaH或三乙胺)存在下，在合适的溶剂如DMF、THF等中，通过适当N保护的4-羟基哌啶化合物与其中X为离去基团(如Cl或Br)的取代喹唑啉中间体(154)之间的SNAr反应，可制备化合物(155)。脱除化合物(155)中的保护基Pg，然后与酸进行酰胺偶联和任选的脱保护，得到所需的化合物(156)。
具有四氢吡啶接头的化合物的合成描述于图33。用有机金属试剂(如LDA)和N-苯基三氟甲磺酰亚胺处理其中Pg为合适保护基的化合物(157)，得到三氟甲磺酸酯(158)(Eastwood，P.R.(2000)，TetrahedronLett.，3705)。通过用合适的钯催化剂，与适当的二硼物质(如二硼酸二频哪醇酯(dipinacolatodiboron))或其它的硼亲电子源反应，可完成三氟甲磺酸酯(158)向相应的硼酸酯(borinate)(159)的转变。然后使酯(159)与其中X为离去基团(如氯、溴、碘或OTf)的化合物(160)在钯催化下反应，得到中间体(161)。或者，也可通过转换离去基团和硼物质，以相反方向进行交叉偶联反应。例如，通过其中X为硼酸(boronic acid)或酯的化合物(160)与三氟甲磺酸酯(158)间的反应，可制备中间体(161)。序贯除去化合物(161)中的保护基、然后进行酰胺偶联和任选的脱保护，可得到化合物(162)。
图34描述了5，6-二取代吡咯并嘧啶(175)的制备。化合物(168)获自商业来源，或者采用文献记载的方法(如Eger，K.等(1987)，J.Heterocycl.Chem.24，425-430；Roth，H.J.等(1975)，Arch.Pharm.308，179-185；Pichler，H.等(1986)，Liebigs Ann.Chem.1986，1485-1505)制备。化合物(168)与甲酸在高温下缩合，得到中间体(169)(Traxler，P.M.等(1996)，J.Med.Cehm，39，2285-2292)。用卤化剂(如POCl3)处理化合物(169)，得到卤化物(170)。脱除保护基Pg，然后用或者纯净的适当保护的哌嗪(172)取代卤素，或者在酸清除剂(如二异丙基乙胺或三乙胺)存在下用适当保护的哌嗪(172)取代卤素，得到中间体(173)。用图22所示方法，可将中间体(173)转变为化合物(175)。
3-取代吡唑并嘧啶(182)的制备描述于图35。化合物(176)可获自商业来源，或者用文献记载的方法(如Hamaguchi，M.等(1986)，Heterocycles.24，2111-2115；MaCall，M.A.等(1962)，J.Org.Chem.27，2433-2439)制备。化合物(176)与肼缩合，得到氰基中间体(177)，后者可通过与甲酸在高温下缩合而转变为化合物(178)。或者，首先将化合物(96)水解，得到伯酰胺，然后将其与甲酰胺在高温下缩合，得到环化产物(178)。用卤化剂(图POCl3)处理(178)，得到卤化物(179)。用图22所示方法，可以将(179)转变为所需的化合物(182)。
用于合成3-取代吡唑并嘧啶的中间体(179)的替代途径示于图36。通过用有机金属试剂(如LDA)处理而将4，6-二氯嘧啶的C-5位区域选择性去质子化，然后用醛(184)猝灭，得到羟基中间体(185)(Radinov，R.等(1986)，Synthesis，11，886-891；Radinov，R.等(1991)，J.Org.Chem.，56，4793-4796)。可用氧化剂(如CrO3或MnO2)氧化中间体(185)，得到酮(186)。用肼在惰性溶剂如THF或DCM中处理，得到环化产物(179)。用图22所示方法，可将(179)转变为所需化合物(182)。
如图37所示，化合物(190)可用两种方法制备。第一种方法，用氨基酰氨基哌嗪(189)取代杂环核心(188)，然后用酸脱保护，得到所需产物(190)。第二种方法，用N保护的哌嗪(191)取代杂环核心(188)，得到中间体(192)，将后者脱保护、与氨基酸(193)偶联并用酸脱保护，得到最终化合物(190)。卤化物(188)可获自商业来源，或者可用本领域技术人员已知的方法制备。
四氢吡啶并(pyrado)[2，3-d]嘧啶衍生物(199)可如图38所示制备。2-氨基-3-吡啶并羧酸(194)与甲酰胺一起加热，得到4-羟基吡啶并嘧啶衍生物(195)，后者用(例如)POCl3氯化，得到4-氯吡啶并嘧啶衍生物(196)。化合物(196)与1-Boc-哌嗪的SNAr反应得到中间体(197)。中间体(197)在氢气下在催化量的(例如)PtO2存在下还原，得到四氢吡啶并[2，3-d]嘧啶衍生物(198)。脱保护后，让化合物(198)与N保护的氨基酸进行酰胺偶联，然后用酸脱保护，得到产物(199)。
二氢吡咯并[2，3-d]嘧啶衍生物可如图39所示制备。将2-乙氧羰基-琥珀酸二乙酯(200)与甲脒一起加热，得到(4，6-二羟基嘧啶-5-基)-乙酸甲酯(201)。用(例如)POCl3卤化化合物(201)，得到二氯嘧啶衍生物(202)。用在THF中的碱(如KH)和亲电子试剂R3X处理化合物(142)，得到中间体(203)。用诸如DIBAL-H的试剂还原得到醇，用(例如)MsCl在碱(如TEA)存在下活化该醇，得到甲磺酸酯中间体(204)。用(例如)对甲氧基苄胺处理甲磺酸酯(204)，得到二氢吡咯并[2，3-d]嘧啶衍生物(205)。让化合物(205)与1-Boc-哌嗪进行SNAr反应，生成中间体(206)。用酸(如TFA)将化合物(206)脱保护，得到游离胺(207)。游离胺(207)与适当取代的/保护的氨基酸进行酰胺偶联，然后脱保护(必要时)，得到产物(208)。
本发明的化合物(217)可如图40所示制备。因此，硼酸(213)与适当取代的芳基卤(214)的钯催化交叉偶联，得到酯中间体，该中间体用氢氧化物碱皂化，得到酸(215)。酸(215)和胺(216)在标准条件(如EDCI、HOBt等)下偶联，得到N保护/取代的高级(advanced)中间体(如Boc，但可使用任何适宜的保护基；请参看Greene等，出处同上)。必要时裂解N保护/取代的中间体(如Boc)，得到产物(217)。
化合物(223)可如图41所示制备。例如通过用卤化剂(如POCl3)处理，可完成将离去基团引入适当取代的市售4，3，0-杂环(218)中，得到氯化物(219)。用纯净的或在碱存在下的适当取代和保护的哌嗪(220)(如Boc，但可使用任何适宜的保护基，请参看Greene等，出处同上)取代该离去基团，然后脱除哌嗪保护基(用上述教科书中的参考文献)，可得到高级喹唑啉中间体(221)。然后可用各种亲电子试剂和反应条件，完成哌嗪仲胺的取代。用可在溶液相和固相两种条件下用各种标准肽偶联方法可引入适当N取代或保护的氨基酸(如Boc等(162))，酰化该哌嗪，得到化合物(223)。有关代表性实例，请参看MiklosBodanszky，‘Principles of Peptide Synthesis’，Springer-Verlag，1993，第2版和C.Najera，Synlett，2002，9，1388-1403。如上所述(以及若受保护)，N保护的氨基酸单元然后可用Greene等(出处同上)中所示的代表性方法(如酸，对于Boc基团)脱保护，然后按照本领域技术人员已知的方法根据需要进行操作。或者(如图1所示)，可用有机合成领域技术人员已知的方法，将胺(221)与任何其它亲电子试剂反应，所述试剂包括但不限于环氧化物、酰基卤、醛等。
式(229)化合物可如图42所示制备。让化合物(224)与保护的接头(如Boc-哌嗪)进行SNAr反应，得到哌嗪(225)。可用有机金属介导的反应来引入活化乙炔(226)，用碱(如KOtBu)处理，得到吡咯并嘧啶(228)。将哌嗪保护基脱保护(就Boc基团而言用例如酸)和酰化(例如用保护的氨基酸，然后必要时脱保护)，得到所需产物(229)。
式(234)的化合物可如图43所示制备。因此，对适当取代的硝基吡啶酮(nitropyridone)(230)进行卤化(如POCl3)，随后用乙烯基格利雅试剂处理，得到适当卤化的吡咯并吡啶(232)。随后用适当取代的哌嗪衍生物(233)进行SNAr取代(或者过渡金属介导的反应)，得到所需产物(234)。
图44描述了式(242)的化合物的通用制备方法。将适当取代的氨基噻吩(235)酰化(用例如甲酸和乙酸铵并加热)和用(例如)甲酰胺和甲酸铵在高温下环化，得到合适的杂环。然后用(例如)草酰氯卤化，得到适当卤化的中间体(237)。然后将该中间体以多种方式官能化。例如，用适当取代的哌嗪取代(用或者加热或者过渡金属介导的反应)，将得到所需产物(242)。或者可以用(例如)有机锂碱和卤素源(如NCS、Br2、I2等)卤化所述核心，得到化合物(238)。就溴化而言，观察到非区域选择性和多溴化现象，使其成为更完全取代和官能化的衍生物(239)。然后可让这些化合物经过多种阴离子或过渡金属介导的反应(例如Suzuki、Stille、Negishi等反应)，得到进一步官能化(如(240)或(241))。在所有情况下，随后用适当取代的哌嗪取代(必要时与后续官能化一起)，得到所需产物(242)。
化合物(247)可如图45所示制备。用适宜的氧化剂(如三溴化吡啶
Figure BDA00001987566300531
)在合适溶剂(如叔丁醇)中氧化4-氯吡咯并[2，3-d]嘧啶(243)，将所得的偕二溴化物在合适条件下(例如用Zn/HOAc)，在合适溶剂(如MeOH)中还原，得到内酰胺244。在合适溶剂(如IPA或NMP)中，在有或无碱(如三乙胺)的情况下让化合物(244)与一保护的二胺(245)(如用Boc保护基)反应，然后用无机酸(如HCl)脱保护，得到中间体(246)。然后将化合物(246)与(例如)保护的氨基酸(例如用Boc保护基)在有或无碱(如三乙胺或DIEA)的合适溶剂(如DCM或DMF)中混合，用合适的偶联剂(如DCC、HBTU或EDCI)处理，在用酸(就Boc保护基而言)脱保护后，得到化合物(247)。
图46所示为化合物(256)的通用制备方法。利用重排，使用(例如)二苯基磷酰叠氮在合适碱和溶剂(如t-BuOH)存在下，在高温下，可将适当取代的噻吩甲酸(248)转变为保护的氨基噻吩(249)。其可用合适的丙二酸酯衍生物(如丙二酸2-乙氧基亚甲基酯)在高温下处理，得到吡啶并噻吩(250)。用(例如)POCl3在碱(如NEt3)存在下卤化，得到氯化物(251)，后者然后可用合适的接头(如Boc-哌嗪)处理并适当地脱保护，得到哌嗪衍生物(252)。酰化(用例如适当保护的氨基酸在标准条件下)、然后脱保护(必要时)，得到所需产物(254)。或者，不用脱保护，可用含水碱性条件下(如LiOH的水溶液和甲醇)将该酯皂化得到酸(255)，该酸然后可通过在合适溶剂(如二苯基醚)中于高温下脱羧而去除。在任何额外和必要的脱保护之后，获得所需产物(256)。
化合物(265)的通用制备方法示于图47。因此，用(例如)乙酸酯基团在标准条件下保护适当取代的卤代吡啶酮(257)，随后经过渡金属介导引入官能化乙炔(actyylene)(258)(例如使用PdCl2(PPh3)2和CuI)，得到中间体乙炔(260)。用碱处理(如Na2CO3水溶液和加热)而实现环化，得到吡啶基呋喃核心(261)。经N-氧化(如mcpba氧化)和用卤化剂(如POCl3)处理进行处理，得到卤化物(263)，该卤化物然后被(例如)哌嗪取代，得到(264)，随后通过(例如)引入适当保护的氨基酸进行进一步官能化，然后脱保护，得到所需产物(265)。
图48描述了化合物(271)的通用制备方法。尿嘧啶衍生物(266)与3-氨基吡唑(267)在碱存在下偶联，得到吡唑并吡啶酮(268)。卤化(例如用POCl3)得到卤化物(269)，用适当取代的接头取代(例如Boc-哌嗪，采用加热)、脱除保护基(如TFA，对于Boc基团)，然后用(例如保护的氨基酸酰化(随后适当的保护)，得到所需产物(271)。
为了说明本发明而包括下述实施例。然而，应当理解，这些实施例并不限制本发明，仅仅用来提出实施本发明的方法。本领域技术人员会认识到，可容易地改变所述的化学反应，以制备多种本发明的其它类似物，用于制备本发明化合物的替代方法视为落入本发明范围内。例如，未举例说明的本发明化合物的合成可采用对于本领域显而易见的改进方法成功地进行，例如通过适当保护干扰基团，利用本领域已知的除本申请所述试剂之外的其它合适试剂，和/或对反应条件进行常规改进。或者，本文公开的或本领域已知的其它反应也视为能用于制备本发明的其它化合物。
生物学实施例
AKT-1激酶测定实施例
本发明所述化合物的活性可采用下述方法测定：该方法描述了一种激酶测定，其采用市售IMAP试剂盒，通过荧光极化测量全长人重组活性AKT-1对荧光标记肽的磷酸化。
该测定的材料来自IMAP AKT测定散装试剂盒(IMAP AKTAssay Bulk Kit)，产品号为R8059，得自Molecular Devices，Sunnyvale，CA。该试剂盒的材料包括IMAP反应缓冲液(5x)：经稀释的1×IMAP反应缓冲液含有10mM Tris-HCl(pH 7.2)、10mM MgCl2、0.1％BSA、0.05％NaN3。临用前常规加入DDT至1mM的终浓度。
也包括IMAP结合缓冲液(5x)和IMAP结合试剂。结合溶液以IMAP结合试剂在1×IMAP结合缓冲液中的1∶400稀释液来制备。
荧光素标记AKT底物(Crosstide)，其具有GRPRTSSFAEG的序列(F1)。在1×IMAP反应缓冲液中制备20μM的贮液。
所用的板包括Costar 3657(382孔，由聚丙烯制成，具有白色V形底)，该板用于化合物稀释和制备化合物-ATP混合物。测定板为Packard ProxyPlateTM-384F。
所用的AKT-1由用PDK1和MAP激酶2活化的全长人重组AKT-1制备。
测定程序始于DMSO中10mM化合物贮液的制备。在DMSO中以1∶2连续稀释贮液和对照化合物(10μl化合物+10μl DMSO)9次，得到所需剂量范围内的50×稀释液系列。然后，将2.1μl等份的化合物的DMSO溶液转移至Costar 3657板上，该板含有50μl含1mM DTT的1×IMAP反应缓冲液中的10.4μM ATP。在充分混合后，将2.5μl等份液体转移至ProxyPlateTM-384F板上。
通过加入2.5μl等份溶液(含200nM荧光标记肽底物和4nMAKT-1)起动该测定。将板以1000g离心1分钟，并于环境温度下保温60分钟。然后加入15μl结合溶液猝灭反应，再次离心，于周围温度下再保温30分钟，然后在Victor 1420Multilabel HTS计数器上读数，以测量荧光极化。
在该测定中所测试的几种式I化合物显示出抑制AKT蛋白激酶的活性，这些化合物包括(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-丙-1-酮、(2R)-2-氨基-3-(2-萘基)-1-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-丙-1-酮和(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-(4-噻吩并[3，2-b]吡啶-7-基-哌嗪-1-基)-丙-1-酮。
制备实施例
本发明的化合物可以或者以外消旋体制备或者以单一对映体制备(如使用对映体纯试剂制备)。若作为外消旋体制备，则可以通过在手性固定相柱上用正相或反相HPLC技术分离外消旋混合物，来分离相应的对映体。或者，可通过用合适的手性酸(或适当活化的衍生物)如酒石酸二苯甲酰基酯等处理外消旋混合物，分离非对映体混合物(请参看例如Kinbara，K.等，J.Chern.Soc.，Perkin Trans.2，1996，2615；和Tomori，H.等，1996，Bull.Chem.Soc.Jpn.，1996，3581)。然后用常规技术(即硅胶色谱、结晶、HPLC等)分离非对映体，然后除去手性助剂，得到对映体纯物质。
以下实施例描述了本发明某些化合物的合成。除非另有说明，否则所有温度均以摄氏度记载。试剂购自商业供应商，如AldrichChemical Company、Lancaster、TCI或Maybridge，并且无需进一步纯化而使用，除非另有说明。
以下叙述的反应一般在氮气或氩气正压下、或者在无水溶剂中用干燥管(除非另有说明)进行，反应烧瓶通常配有橡胶隔片以供通过注射引入底物和试剂。玻璃器皿经烘箱干燥和/或加热干燥。
HPLC保留时间(Rt)以分钟报告。除非另有说明，否则使用以下HPLC条件得到所报告的保留时间：柱子：Waters YMC ODS-AQ，3.0x50mm；5-95％梯度的MeCN水溶液(0.01％HFBA，1％IPA)；流速：1.00ml/min；于220nm检测。
1H-NMR谱在以400MHz操作的Varian仪器上记录。以CDCl3溶液(以ppm报告)，用氯仿作为参比标准(7.25ppm)得到1H-NMR谱。需要时使用其它NMR溶剂。当报告峰多重性时，使用以下缩写：s(单峰)，d(双峰)，t(三重峰)，m(多重峰)，br(宽峰)，dd(双双峰)，dt(双三重峰)。
实施例1A
Figure BDA00001987566300591
4-哌嗪基喹唑啉氨基酰胺的制备
步骤1：向4-氯喹唑啉(2.0g，12.2mmol)(Tobe，Masanori等，Bioorg.Med.Chem.2003，11(3)，383)和DIEA(3.2ml，18.2mmol)的40ml IPA溶液中加入Boc-哌嗪(1.96g，12.81mmol)。将反应混合物加热至回流并搅拌20小时，此后将其冷却至室温并通过旋转蒸发浓缩。将残余物溶于二氯甲烷(DCM)中，用1N NaOH洗涤。将有机层干燥(Na2SO4)、过滤并通过旋转蒸发浓缩。所得的油溶于25ml二
Figure BDA00001987566300592
烷中，滴加4MHCl/二烷(46ml，182mmol)。对悬浮液超声处理2分钟，并于室温搅拌13小时，此后反应混合物通过旋转蒸发浓缩至干。将所得的胺HCl盐溶于2N NaOH中，用DCM萃取。将有机层干燥(Na2SO4)，过滤并经旋转蒸发浓缩。所得的油经二氧化硅纯化(9∶1∶0.02DCM/MeOH/NH4OH)，得到4-哌嗪基喹唑啉，为黄色油状物(2.5g，96％)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.74(s，1H)，7.92-7.86(m，2H)，7.76-7.70(m，1H)，7.48-7.42(m，1H)，3.75(t，J＝4.9Hz，4H)，3.09(t，J＝4.9Hz，4H)，1.89(brs，1H).Rt0.70.MS(ESI+)[M+H]+215.
步骤2：向含有悬浮于4-哌嗪基喹唑啉(1.0当量)的CHCl3溶液中PS-CDI(Argonaut，1.04mmol/g，2.2当量)的Jones管中加入固体Boc-保护的氨基酸(1.5当量)(请参看实施例1B)。将反应混合物于室温振摇15小时，此后将其真空过滤，用CHCl3冲洗树脂，滤液经旋转蒸发浓缩。必要时，粗制偶联产物经二氧化硅纯化(DCM/EtOAc或DCM/MeOH)。所得的Boc-氨基酰胺溶于最少量二
Figure BDA00001987566300594
烷中，加入4MHCl/二
Figure BDA00001987566300595
烷(10当量)。将悬浮液超声处理5分钟并于室温搅拌12小时，此后将其经旋转蒸发浓缩。使固体分散于乙醚中，在氮气压力下经过滤分离并减压干燥，得到盐酸盐形式的相应的4-哌嗪基喹唑啉氨基酰胺。必要时，用1N NaOH将盐酸盐变为游离碱，用DCM萃取，合并的有机层经干燥(Na2SO4)、过滤、旋转蒸发浓缩和减压干燥。
实施例1B
将下述氨基酸作为Boc-保护的氨基酸引入实施例1步骤2中的4-哌嗪基喹唑啉：
按实施例1步骤2所述的方法，使用4-哌嗪基喹唑啉和实施例1B中所示的适宜氨基酸，制备实施例2-21所述的化合物。
实施例2
Figure BDA00001987566300611
(2R)-2-氨基-3-苯基-1-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-丙-1-酮
Rt 2.15。MS(ESI+)[M+H]+362。
实施例3
Figure BDA00001987566300612
(2R)-2-氨基-4-苯基-1-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-丁-1-酮
Rt 2.26。MS(ESI+)[M+H]+376。
实施例4
Figure BDA00001987566300613
(2R)-2-氨基-3-(4-甲氧基苯基)-1-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-丙-1-酮
Rt 2.15。MS(ESI+)[M+H]+392。
实施例5
(2R)-2-氨基-1-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-3-(2-噻吩基)-丙-1-酮
Rt 2.10。MS(ESI+)[M+H]+368。
实施例6
(2R)-2-氨基-3-(3-吲哚基)-1-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-丙-1-酮
Rt 2.24。MS(ESI+)[M+H]+401。
实施例7
Figure BDA00001987566300623
(2R)-2-氨基-3-(2-氯苯基)-1-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-丙-1-酮
Rt 2.23。MS(ESI+)[M+H]+396。
实施例8
Figure BDA00001987566300631
(2R)-2-氨基-3-(3-氯苯基)-1-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-丙-1-酮
Rt 2.30。MS(ESI+)[M+H]+396。
实施例9
Figure BDA00001987566300632
(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-丙-1-酮
Rt2.36.MS(ESI+)[M+H]+396.1HNMR(游离碱，CDCl3，400MHz)δ8.73(s，1H)，7.89(d，J＝8.4Hz，1H)，7.78(d，J＝8.4Hz，1H)，7.77-7.71(m，1H)，7.49-7.43(m，1H)，7.31-7.26(m，2H)，7.23-7.19(m，2H)，4.37(brs，1H)，3.92-3.82(m，1H)，3.73-3.57(m，6H)，3.39-3.30(m，1H)，3.29-3.19(m，1H)，3.12-3.02(m，2H).
实施例10
Figure BDA00001987566300633
(2R)-2-氨基-3-(4-氟苯基)-1-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-丙-1-酮
(12)
Rt 2.23。MS(ESI+)[M+H]+380。
实施例11
Figure BDA00001987566300641
(2R)-2-氨基-3-(2-萘基)-1-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-丙-1-酮
Rt 2.39。MS(ESI+)[M+H]+412。
实施例12
Figure BDA00001987566300642
(2R)-2-氨基-2-(2-茚满基)-1-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-乙-1-酮
Rt 2.33。MS(ESI+)[M+H]+388。
实施例13
Figure BDA00001987566300643
(±)-2-(4-氟苯基)-2-哌嗪基-1-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-乙-1-酮
Rt 2.21分钟。MS(ESI+)[M+H]+435。
实施例14
Figure BDA00001987566300651
(2R)-2-氨基-3-(2，4-二氯苯基)4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-丙-1-酮
Rt 2.39。MS(ESI+)[M+H]+430。
实施例15
Figure BDA00001987566300652
(2R)-2-氨基-3-(3，4-二氯苯基)-1-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-丙-1-酮
Rt 2.43。MS(ESI+)[M+H]+430。
实施例16
(2R)-2-(N-甲基氨基)-3-苯基-1-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-丙-1-酮
Rt 2.15。MS(ESI+)[M+H]+376。
实施例17
(2R)-2-(N，N-二甲基氨基)-3-苯基-1-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-丙-1-酮 的制备
向(2R)-2-(N-甲基氨基)-3-苯基-1-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-丙-1-酮(游离碱，14mg，0.037mmol)的1，2-二氯乙烷溶液中加入甲醛溶液(37％w/w，50μl，0.61mmol)，然后加入Na(OAc)3BH(0.12mmol)。将反应混合物于室温搅拌3小时，此后加入饱和NaHCO3，然后搅拌反应混合物10分钟。悬浮液用DCM萃取，将合并的萃取液干燥(Na2SO4)、过滤并经旋转蒸发浓缩。残余物经Fluorosil塞用ETOAC过滤，滤液经旋转蒸发浓缩。将所得残余物溶于乙醚中，加入过量的4M HCI/二
Figure BDA00001987566300662
烷。黄色固体在氮气压下经过滤分离并减压干燥，得到所需产物(7mg，41％)，为二盐酸盐形式。Rt 2.20。MS(ESI+)[M+H]+390。
实施例18
Figure BDA00001987566300663
(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-((3R)-1，2，3，4-四氢-异喹啉-3-基)-甲酮
Rt 2.21。MS(ESI+)[M+H]+374。
实施例19
Figure BDA00001987566300671
(2R)-2-(2-氨基乙酰氨基)-3-苯基-1-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-丙-1-酮 的制备
按照实施例1步骤2的方法，用Boc-甘氨酸酰化(2R)-2-氨基-3-苯基-1-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-丙-1-酮(游离碱)并将其脱保护，得到(2R)-2-(2-氨基乙酰氨基)-3-苯基-1-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-丙-1-酮。Rt 2.23。MS(ESI+)[M+H]+419。
实施例20
Figure BDA00001987566300672
(2R)-2-(3-氨基丙酰氨基)-3-苯基-1-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-丙-1-酮 的制备
按照实施例1步骤2的方法，用Boc-高丙氨酸酰化(2R)-2-氨基-3-苯基-1-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-丙-1-酮(游离碱)并将其脱保护，得到(2R)-2-(3-氨基丙酰氨基)-3-苯基-1-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-丙-1-酮。Rt 2.24。MS(ESI+)[M+H]+433。
对于以下制备的化合物，用来获得所报告保留时间(分钟)的HPLC条件是：柱子：Waters YMC ODS-AQ，4.6x 50mm；5-95％梯度的MeCN水溶液(0.01％HFBA，1％IPA)；流速：2.00ml/min；于220nm检测。
实施例21
Figure BDA00001987566300681
(2R)-2-[(2-氨基乙基)氨基]-3-(4-氯苯基)-1-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)- 丙-1-酮的制备
将(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-丙-1-酮(游离碱，41mg，0.104mmol)与Boc-2-氨基乙醛(16mg，0.104mmol)的0.7ml甲醇溶液一起于室温搅拌搅拌1小时，此后加入NaBH4(6mg，0.160mmol)。将反应混合物搅拌3小时，然后用1N NaOH猝灭。反应混合物用DCM萃取，合并的萃取液经干燥(Na2SO4)、过滤并经旋转蒸发浓缩。粗制残余物经二氧化硅纯化(15∶1DCM/MeOH)。所得的Boc-胺中间体用1.4ml HCl/二
Figure BDA00001987566300682
烷处理并于室温搅拌14小时，此后用乙醚稀释反应混合物。固体在氮气压下经过滤分离并减压干燥，得到所需产物(29mg，51％)，为三盐酸盐形式。Rt 1.69。MS(CI+)[M+H]+439。
实施例22
(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-((2R)-2-甲基-4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-丙 -1-酮的制备
4-((3R)-3-甲基哌嗪基)喹唑啉按照与实施例1步骤1类似的方法制备，然后按照实施例1步骤2的方法将其用Boc-4-氯-D-苯丙氨酸酰化并脱保护，得到(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-((2R)-2-甲基-4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-丙-1-酮。Rt 1.72。MS(CI+)[M+H]+410。
实施例23
Figure BDA00001987566300692
2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(6-苯基喹唑啉-4-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮的制 备
步骤1：将6-溴喹唑啉-4-酚(1.0g，4.44mmol)的POCl3(10ml)溶液在密封管中于110℃下搅拌并加热过夜。将溶液冷却至室温并倒在冰(200g)上。溶液用DCM(300ml)萃取，用水(200ml)洗涤、经硫酸钠干燥并真空浓缩，得到含杂质的6-溴-4-氯喹唑啉，为褐色固体，该化合物无需进一步纯化(1.5g)。MS(APCI+)[M+H]+243.1。
步骤2：将步骤1的粗产物(1.5g)、哌嗪-1-甲酸叔丁酯(2.29g，12.3mmol)和三乙胺(2.15ml，15.4mmol)在N-甲基吡咯烷酮(50ml)中的溶液于80℃搅拌并加热2小时。将溶液冷却至室温，用EtOAc(200ml)稀释，用水(3x 200ml)洗涤并经硫酸钠干燥。混合物经硅胶柱色谱纯化(50％EtOAc/己烷)，得到4-(6-溴-喹唑啉-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯，为无色油状物(1.5g，3.8mmol，85％，来自步骤1)。
MS(APCI+)[M+H]+394.9and392.9.1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.76(1H，s)，8.02(1H，s)，7.84-7.78(2H，m)，3.74(4H，s)，3.66(4H，s)，1.51(9H，s.)
步骤3：将HCl(1.0M的Et2O溶液，30ml)加入到4-(6-溴-喹唑啉-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.50g，3.81mmol)的MeOH(50ml)溶液中，于室温搅拌过夜。混合物经真空浓缩，得到6-溴-4-哌嗪-1-基-喹唑啉，为二盐酸盐(1.3g，93％)。MS(APCI+)[M+H]+295.1。
步骤4：在氮气下，EDCI·HCl(230mg，1.2mmol)、HOBt(160mg，1.2mmol)和Boc-D-4-氯苯丙氨酸(240mg，1.2mmol)于室温下加入到6-溴-4-哌嗪-1-基-喹唑啉二盐酸盐(360mg，0.98mmol)和三乙胺(0.30ml，1.2mmol)在DMF(8ml)中的搅拌溶液中。于室温搅拌过夜。用EtOAc(100ml)稀释，并用水(3x 50ml)洗涤。经硫酸钠干燥并真空浓缩。混合物经硅胶柱色谱纯化(100％EtOAc)，得到[2-[4-(6-溴喹唑啉-4-基)-哌嗪-1-基]-1-(4-氯苄基)-2-氧代-乙基]-氨基甲酸叔丁酯，为黄色固体(320mg，57％)。MS
(APCI+)[M+H]+575.9.1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.75(1H，s)，7.95(1H，s)，7.85-7.79(2H，m)，7.30-7.27(2H，m)，7.17(2H，d，J7.1Hz)，5.39(1H，app.d，J8.2Hz)，4.86(1H，app.d，J7.3 Hz)，3.83-3.60(6H，m)，3.36-3.26(2H，m)，3.04-2.96(2H，m)，1.43(9H，s.).
步骤5：于室温氮气下，将THF(5ml)加入到Pd2dba3(8.0mg，0.0087mmol)和三苯基砷(11mg，0.035mmol)的搅拌混合物中。将黄色溶液于室温搅拌2分钟，通过导管转移到[2-[4-(6-溴喹唑啉-4-基)-哌嗪-1-基]-1-(4-氯苄基)-2-氧代-乙基]-氨基甲酸叔丁酯(50mg，0.087mmol)和苯基硼酸(21mg，0.17mmol)在乙二醇二甲醚(5ml)和碳酸钠水溶液(2M，5ml)中的搅拌溶液中，并于80℃、氮气下搅拌和加热过夜。将反应物冷却至室温，萃取到EtOAc(100ml)中，用水(50ml)洗涤，经硫酸钠干燥并真空浓缩。混合物经硅胶柱色谱纯化(100％EtOAc)，得到{1-(4-氯苄基)-2-氧代-2-[4-(6-苯基喹唑啉-4-基)-哌嗪-1-基]-乙基}-氨基甲酸叔丁酯，为油状物(30mg，60％)。MS(APCI+)[M+H]+574.0和572.0。
步骤6：于室温下将三氟乙酸(4ml)加入到{1-(4-氯苄基)-2-氧代-2-[4-(6-苯基-喹唑啉-4-基)-哌嗪-1-基]-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(30mg)的DCM(10ml)溶液中。将溶液于室温搅拌4小时，用NaOH水溶液(1N，10ml)猝灭，用EtOAc(100ml)稀释，并用NaOH水溶液(2x 50ml)洗涤。有机相经硫酸钠干燥并真空浓缩，得到2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(6-苯基-喹唑啉-4-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮，为无色油状物(23mg)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.77(1H，s)，8.02-8.00(2H，m)，7.98(1H，s)，7.64(2H，d，J7.4Hz)，7.53(2H，t，J7.7Hz)，7.44(1H，t，J7.3 Hz)，7.30(2H，d，J8.6 Hz)，7.17(2H，d，J8.6 Hz)，3.98(1H，t，J7.3Hz)，3.87-3.60(6H，m)，3.42-3.34(2H，m)，2.97(1H，dd，J7.4and 13.3Hz)，2.84(1H，dd，J7.0and 13.7Hz.)
使油状物溶于THF(10ml)中，用HCl(1.0M的Et2O溶液，10ml)处理并真空浓缩，得到2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(6-苯基-喹唑啉-4-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮的二盐酸盐，为固体(21mg)。
实施例24
(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-(4-噻吩并[3，2，b]吡啶-7-基-哌嗪-1-基)-丙 -1-酮二盐酸盐的制备
步骤1：将NaH(60的矿物油溶液，0.24g)的DMF(15ml)溶液分次加入到噻吩并[3，2-b]吡啶-7-酚(0.756g)中。将反应混合物于40℃加热并搅拌30分钟。冷却后，加入N-苯基三氟甲磺酰亚胺(2.1g)，将反应混合物于室温搅拌1小时，加入Boc-哌嗪(1.9g)。将混合物于80℃搅拌2小时。加入乙酸乙酯(100ml)，所得溶液用盐水(2x50ml)洗涤，经硫酸钠干燥、减压浓缩并经色谱纯化(1∶4己烷/EtOAc)，得到黄色油状产物1.32g(82.5％)。Rt2.10分钟。MS(ESI+)[M+H]+320。
步骤2：将4-噻吩并[3，2-b]吡啶-7-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.32g)的DCM(20ml)溶液加入到4N HCl/二
Figure BDA00001987566300721
烷(21ml)溶液中。将反应物于室温搅拌10小时。减压除去溶剂，将所得的胺盐酸盐溶于饱和碳酸氢钠(20ml)中，并用DCM(30ml)萃取。有机层经干燥(Na2SO4)、过滤并经旋转蒸发浓缩，得到7-哌嗪-1-基-噻吩并[3，2-b]吡啶，为灰白色固体(0.85g，93.8％)。Rt 1.40分钟。MS(ESI+)[M+H]+220。
步骤3：于0℃将DIEA(0.07ml)和HBTU(0.12g)加入到(2R)-2-叔丁氧羰基氨基-3-(4-氯苯基)-丙酸(0.092g)的THF(5ml)溶液中。将混合物于室温搅拌20分钟，然后加入7-哌嗪-1-基-噻吩并[3，2-b]吡啶(0.056g)。将反应物于室温搅拌1小时。加入20ml EtOAc并分离有机层。水层用EtOAc(20ml)萃取。合并的有机层用饱和碳酸氢钠(20ml)洗涤并经硫酸钠干燥。除去溶剂后，残余物经快速色谱纯化(EtOAc)，得到产物，为白色泡沫状固体(0.126g，98.5％)。Rt 2.43分钟。MS(ESI+)[M+H]+501。
步骤4：将所得的Boc-氨基酰胺(0.056mg)溶于二烷中，加入4M HCl/二
Figure BDA00001987566300723
烷(0.5ml)。将悬浮液于室温搅拌3小时，此后将其浓缩，得到相应的氨基酰胺，为其盐酸盐(0.53g，98％)。Rt1.77分钟。MS(ESI+)[M+H]+ 401。
实施例25
Figure BDA00001987566300731
2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-(4-噻吩并[3，2-d]嘧啶-4-基-哌嗪-1-基)-丙-1-酮 二盐酸盐的制备
步骤1：向Boc-D-Phe(4-Cl)-OH(3.65g，12.2mmol)、哌嗪(10g，116mmol)的DCM(200ml)溶液中加入HOBT(3.3g，24mmol)和EDCI(4.7g，25mmol)。将混合物于室温搅拌12小时。溶液用水、盐水洗涤，然后经硫酸镁干燥。过滤后，将有机溶剂蒸发，残余物经硅胶色谱纯化，得到产物[1-(4-氯苄基)-2-氧代-2-哌嗪-1-基-乙基]-氨基甲酸叔丁酯(0.58g，13％)
1HNMR(CDCl3，400Hz)δ7.25(d，J＝8.4Hz，2H)，7.12(d，J＝8.0Hz，2H)，5.52(d，J＝8.4Hz，1H)，4.83-4.77(m，1H)，3.63-3.45(m，2H)，3.37-3.32(m，1H)，3.08-3.04(m，1H)，2.99-2.90(m，2H)，2.81-2.70(m，3H)，2.42-2.38(m，1H)，1.41(s，9H).MS(ESI+)[M+H]+369.
步骤2：向3-氨基噻吩-2-甲酸甲酯(20g，127mmol)的甲酸(100ml)溶液中加入乙酸铵(13g，169mmol)。将混合物回流3小时。冷却至室温后，滤出沉淀，用水洗涤并真空干燥，得到3-甲酰氨基噻吩-2-甲酸甲酯(20.5g，87％)。
1HNMR(DMSO，400Hz)δ10.38(s，1H)，8.42(s，1H)，8.00(d，J＝5.2Hz，1H)，7.90(d，J＝5.6Hz，1H)，3.84(s，3H).MS(ESI+)[M+H]+186.
步骤3：向3-甲酰氨基噻吩-2-甲酸甲酯(20.5g，111mmol)和甲酸铵(21g，333mmol)的混合物中加入甲酰胺(29.8g，662mmol)。于140加热浆液10小时。冷却后，滤出固体，用水洗涤并真空干燥，得到产物3H-噻吩并[3，2-d]嘧啶-4-酮(12.5g，74％)。
1H NMR(DMSO，400Hz)δ12.31(br，1H)，8.18(d，J＝5.2Hz，1H)，8.16(s，1H)，7.41(d，J＝5.2Hz，1H).MS(ESI+)[M+H)+153
步骤4：0℃下，在1小时内，向DMF(13.2ml，170mmol)的DCM(100ml)溶液中非常缓慢地加入草酰氯(22ml，252mmol)的DCM(100ml)溶液。向所得白色凝胶溶液中加入3H-噻吩并[3，2-d]嘧啶-4-酮(12g，79mmol)。将混合物回流4小时。冷却后将混合物倒入水(500ml)中，用DCM(3x250ml)萃取。然后有机相经硫酸镁干燥、过滤并浓缩，得到7-氯-噻吩并[3，2-b]吡啶，为白色固体(13.4g，99％)。
1H NMR(CDCl3，400Hz)δ9.00(s，1H)，8.06(d，J＝5.6Hz，1H)，7.61(d，J＝5.6Hz，1H).MS(ESI+)[M+H]+170
步骤5：将[1-(4-氯苄基)-2-氧代-2-哌嗪-1-基-乙基]-氨基甲酸叔丁酯(60mg，0.163mmol)和4-氯噻吩并[3，2-d]嘧啶(950mg，0.293mmol)的甲苯(5ml)/TEA(1ml)溶液回流12小时。除去溶剂后，残余物经硅胶色谱纯化，得到[1-(4-氯苄基)-2-氧代-2-(4-噻吩并[3，2-d]嘧啶-4-基-哌嗪-1-基)-乙基]-氨基甲酸叔丁酯(71mg，86.7％)。
1HNMR(CDCl3，400Hz)δ8.60(s，1H)，7.76(d，J＝5.2Hz，1H)，7.45(d，J＝5.2Hz，1H)，7.26(d，J＝8.4Hz，1H)，7.15(d，J＝8.4Hz，1H)，5.39(d，J＝8.8Hz，1H)，4.88-4.82(m，1H)，3.94-3.76(m，4H)，3.69-3.58(m，3H)，3.25-3.22(m，1H)，2.98(d，J＝7.2Hz，2H)，1.43(s，9H).MS(ESI+)[M+H]+503.
步骤6：向[1-(4-氯苄基)-2-氧代-2-(4-噻吩并[3，2-d]嘧啶-4-基-哌嗪-1-基)-乙基]-氨基甲酸叔丁酯的DCM(2ml)溶液中加入HCl/二
Figure BDA00001987566300741
烷溶液(4M，1ml)。将混合物于室温搅拌4小时。除去溶剂，定量得到2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-(4-噻吩并[3，2-d]嘧啶-4-基-哌嗪-1-基)-丙-1-酮二盐酸盐。MS(ESI+)[M+H]+402。
实施例26
Figure BDA00001987566300742
2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-丙 -1-酮二盐酸盐的制备
步骤1：向4，6-二氯-5-氨基嘧啶(1g，6.1mmol)的TEA(2ml)和甲苯(10ml)溶液中加入1-Boc-哌嗪(2.3g，12.3mmol)。将混合物回流12小时。除去溶剂，残余物经硅胶色谱纯化，得到产物4-(5-氨基-6-氯嘧啶-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.9g，99％)。
1HNMR(CDCl3,400Hz)δ8.16(s，1H)，3.87(s，2H)，3.56(m，4H)，3.29(m，4H)，1.49(s，9H).MS(ESI+)[M+H]+314.
步骤2：在氮气下，向4-(5-氨基-6-氯嘧啶-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1g，3.19mmol)和TMS-乙炔(1.5g，15mmol)在TEA(10ml)和THF(30ml)中的溶液中加入PdCl2(PPh3)2(0.33g，0.47mmol)和CuI(0.1g，0.53mmol)。将混合物加热至80℃达20小时。除去溶剂，残余物经硅胶色谱纯化，得到产物4-(5-氨基-6-三甲基甲硅烷基乙炔基-嘧啶-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.3g，25％)。
1H NMR(CDCl3，400Hz)δ8.00(s，1H)，3.74(s，2H)，3.28-3.25(m，4H)，3.02-2.99(m，4H)，1.20(s，9H)，0.00(s，9H).MS(ESI+)[M+H]+376.
步骤3：在氮气下，向tBuOK(0.063g，0.56mmol)的NMP(4ml)溶液中加入4-(5-氨基-6-三甲基甲硅烷基乙炔基-嘧啶-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.1g，0.27mmol)的NMP(1ml)溶液。将混合物于室温下剧烈搅拌4小时。用水(1ml)和乙酸乙酯(50ml)猝灭反应物。有机相用盐水和水洗涤，直至NMP消失，经硫酸镁干燥、过滤并浓缩。残余物经硅胶色谱纯化，得到产物4-(5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(43mg，53％)。
1H NMR(CDCl3，400Hz)δ9.47(s，1H)，8.49(s，1H)，7.37(d，J＝2.4Hz，1H)，6.62(d，J＝2.8Hz，1H)，3.85-3.82(m，4H)，3.61-3.58(m，4H).1.49(s，9H).MS(ESI+)[M+H]+304.
步骤4：向4-(5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(43mg，0.14mmol)的DCM(4ml)溶液中加入HCl/二
Figure BDA00001987566300751
烷溶液(4M，1ml)。将混合物于室温搅拌4小时。除去溶剂，残余物用TEA(2ml)、Boc-D-Phe(4-Cl)-OH(43mg，0.14mmol)、HOBT(30mg，0.222mmol)和EDCI(41mg，0.214mmol)在DCM(5ml)中的溶液处理。将混合物于室温搅拌12小时。除去溶剂，残余物经硅胶色谱纯化，得到产物{1-(4-氯苄基)-2-氧代-2-[4-(5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(30mg，44％)。
1H NMR(CDCl3，400Hz)δ9.85(s，1H)，8.48(s，1H)，7.37(s，1H)，7.25-7.23(d，J＝8.4Hz，2H)，7.13-7.11(d，J＝8.4Hz，2H)，6.60(s，1H)，5.39-5.37(d，J＝8.8Hz，1H)，4.83-4.78(m，1H)，3.81-3.43(m，7H)，3.31-3.27(m，1H)，3.00-2.91(m，2H)，1.41(s，9H).MS(ESI+)[M+H]+485.
步骤5：向{1-(4-氯苄基)-2-氧代-2-[4-(5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-乙基}-氨基甲酸叔丁酯的DCM(4ml)溶液中加入HCl的二
Figure BDA00001987566300761
烷溶液(4M，1ml)，并搅拌4小时。除去溶剂，定量得到2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮二盐酸盐。MS(ESI+)[M+H]+385。
实施例27
2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(1H-吡咯并[3，2-b]吡啶-7-基)-哌嗪-1-基]-丙 -1-酮的制备
步骤1：向4-羟基-3-硝基-吡啶(2g，14mmol)的POCl3(6ml)溶液中加入PCl5(2.5g，12mmol)。将混合物加热至回流达3小时。蒸发溶剂，残余物用冰水冷却，并与水(3ml)和CHCl3(6ml)一起剧烈搅拌。水溶液用CHCl3(5x5ml)萃取。合并有机相并经硫酸镁干燥。过滤后，除去溶剂，得到产物4-氯-3-硝基-吡啶(2.24g，99％)。
1H NMR(CDCl3，400Hz)δ9.13(s，1H)，8.70(d，J＝5.2Hz，1H)，7.55(d，J＝5.6Hz，1H).MS(ESI+)[M+H]+159.
步骤2：在氮气、-78℃下，向4-氯-3-硝基-吡啶(2g，13mmol)的无水THF(100ml)溶液中加入过量的乙烯基溴化镁(1.0M，40ml，40mmol)。将混合物于-20℃搅拌8小时，然后反应物用20％NH4Cl(75ml)猝灭。水相用乙酸乙酯(3x100ml)萃取。合并的有机层经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。残余物经硅胶色谱纯化，得到7-氯-1H-吡咯并[3，2-b]吡啶(0.3g，16％)。
1H NMR(CD3OD，400Hz)δ8.22(d，J＝5.2Hz，1H)，7.64(d，J＝3.2Hz，1H)，7.23(d，J＝5.2Hz，1H)，6.67(d，J＝3.2Hz，1H).MS(ESI+)[M+H]+153.
步骤3：向7-氯-1H-吡咯并[3，2-b]吡啶(40mg，0.262mmol)的二甲苯(4ml)和TEA(1ml)溶液中加入[1-(4-氯苄基)-2-氧代-2-哌嗪-1-基-乙基]-氨基甲酸叔丁酯(0.1g，0.27mol)。将混合物回流6天。真空除去溶剂，残余物经HPLC纯化，得到{1-(4-氯苄基)-2-氧代-2-[4-(1H-吡咯并[3，2-b]吡啶-7-基)-哌嗪-1-基]-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(10mg，8％)。
1HNMR(CDCl3，400Hz)δ11.81(s，1H)，7.95(d，J＝6.4Hz，1H)，7.40(s，1H)，7.15(dJ＝8.00Hz，2H)，6.46(d，J＝6.8Hz，2H)，5.42(d，J＝8.4Hz，1H)，4.82(d，J＝7.2Hz，1H)，3.87-3.28(m，8H)，2.98(d，J＝6.4Hz，2H)，1.41(s，9H).MS(ESI+)[M+H]+484.
步骤4：向{1-(4-氯苄基)-2-氧代-2-[4-(1H-吡咯并[3，2-b]吡啶-7-基)-哌嗪-1-基]-乙基}-氨基甲酸叔丁酯的DCM(4ml)溶液中加入HCl/二
Figure BDA00001987566300771
烷溶液(4M，1ml)。将混合物于室温搅拌4小时。除去溶剂，定量得到产物2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(1H-吡咯并[3，2-b]吡啶-7-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮。MS(ESI+)[M+H]+384。
实施例28
Figure BDA00001987566300772
2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(6-碘噻吩并[3，2-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-丙 -1-酮的制备
步骤1：于-78℃，在1小时内向LDA(1.8M，20.6ml，37.1mmol)的THF(65ml)溶液中滴加4-氯-噻吩并[3，2-d]嘧啶(5.26g，31mmol)的THF(50ml)溶液。搅拌20分钟后，于-78℃下将I2(12.7g，50mmol)的THF(40ml)溶液滴加到混合物中。将混合物于室温搅拌20分钟，然后升温至室温达2小时。将混合物倒入水(100ml)中并搅拌30分钟。滤出固体，用水和己烷-己烷/DCM(50∶1)洗涤，得到产物4-氯-6-碘噻吩并[3，2-d]嘧啶(6.86g，75％)、1H NMR(DMSO，400Hz)δ8.97(s，1H)，8.15(s，1H)。
步骤2：向4-氯-6-碘噻吩并[3，2-d]嘧啶(0.22g，0.742mmol)的DCE(5ml)/TEA(2ml)的溶液中加入[1-(4-氯苄基)-2-氧代-2-哌嗪-1-基-乙基]-氨基甲酸叔丁酯(25mg，0.68mmol)。将混合物回流2小时。除去溶剂，残余物经硅胶色谱纯化，得到产物{1-(4-氯苄基)-2-[4-(6-碘噻吩并[3，2-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(44mg，95％)。
1H NMR(CDCl3，400Hz)δ8.47(s，1H)，7.64(s，1H)，7.27-7.25(d，J＝8.4Hz，2H)，7.17-7.15(d，J＝8.0Hz，H)，5.44(d，J＝8.8Hz，1H)，4.85-4.81(m，1H)，3.86-3.50(m，7H)，3.24-3.19(m，1H)，2.99-2.97(d，J＝7.2Hz，2H)，1.43(s，9H).MS(ESI+)[M+H]+628.
步骤3：向{1-(4-氯苄基)-2-[4-(6-碘噻吩并[3，2-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯的DCM(4ml)溶液中加入HCl的二
Figure BDA00001987566300781
烷溶液(4M，1ml)。将混合物于室温搅拌4小时。除去溶剂，定量得到产物2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(6-碘噻吩并[3，2-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮。MS(ESI+)[M+H]+528。
实施例29
Figure BDA00001987566300791
2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(6-丙-1-炔基-噻吩并[3，2-d]嘧啶-4-基)-哌嗪 -1-基]-丙-1-酮二盐酸盐的制备
步骤1：于室温下，向ZnBr2(70mg，0.311mmol)的THF(2ml)溶液中加入炔丙基溴化镁(0.5M，0.6ml，0.3mmol)。搅拌20分钟后，加入6-碘噻吩并[3，2-d]嘧啶(50mg，0.08mmol)。混合物用氮气吹扫，并加入PdCl2(dppf)。将混合物在氮气下于室温搅拌12小时。过滤后，将滤液浓缩，残余物经硅胶色谱纯化，得到产物{1-(4-氯苄基)-2-氧代-2-[4-(6-丙-1-炔基-噻吩并[3，2-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(17mg，40％)。
1H NMR(CDCl3，400Hz)δ8.56(s，1H)，7.37(s，1H)，7.27-7.25(d，J＝8Hz，2H)，7.16-7.14(d，J＝8.4Hz，2H)，5.37-5.35(d，J＝8.4Hz，1H)，4.85-4.82(m，1H)，3.86-3.51(m，7H，3.23-3.20(m，1H)，3.00-2.94(m，2H)，2.15(s，3H)，1.42(s，9H).MS(ESI+)[M+H]+540.
步骤2：向{1-(4-氯苄基)-2-氧代-2-[4-(6-丙-1-炔基-噻吩并[3，2-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-乙基}-氨基甲酸叔丁酯的DCM(4ml)溶液中加入HCl的二烷溶液(4M，1ml)。将混合物搅拌4小时。除去溶剂，定量得到产物2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(6-丙-1-炔基-噻吩并[3，2-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮二盐酸盐。MS(ESI+)[M+H]+440。
实施例30
Figure BDA00001987566300793
2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(6-噻吩-3-基-噻吩并[3，2-d]嘧啶-4-基)-哌嗪 -1-基]-丙-1-酮二盐酸盐的制备
步骤1：向{1-(4-氯苄基)-2-[4-(6-碘噻吩并[3，2-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(50mg，0.080mmol)的DMF(3ml)溶液中加入2M Na2CO3(0.1ml)和3-噻吩基硼酸(15mg，0.117mmol)。混合物用氮气吹扫20分钟，然后加入Pd(PPh3)4(10mg，0.012mmol)。将混合物加热至90℃达12小时。真空除去溶剂，残余物经硅胶色谱纯化，得到产物{1-(4-氯苄基)-2-氧代-2-[4-(6-噻吩-3-基-噻吩并[3，2-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(16mg，34.4％)
1H NMR(CDCl3，400Hz)δ8.57(s，1H)，7.70-7.42(m，4H)，7.27(d，J＝8.4，2H)，7.16(d，J＝8.4Hz，2H)，5.36(d，J＝8.8Hz，1H)，4.87-4.84(m，1H)，3.91-3.59(m，7H)，3.27-3.24(d，J＝11.2Hz，1H)，3.00-2.99(d，J＝7.2Hz，2H)，1.43(s，9H).MS(ESI+)[M+H]+584.
步骤2：向产物{1-(4-氯苄基)-2-氧代-2-[4-(6-噻吩-3-基-噻吩并[3，2-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-乙基}-氨基甲酸叔丁酯的DCM(4ml)溶液中加入HCl/二烷溶液(4M，1ml)。将混合物于室温搅拌4小时。除去溶剂，定量得到产物2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(6-噻吩-3-基-噻吩并[3，2-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮二盐酸盐。MS(ESI+)[M+H]+484。
实施例31
Figure BDA00001987566300802
2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(6-甲硫基-噻吩并[3，2-d]嘧啶-4-基-哌嗪-1- 基]-丙-1-酮二盐酸盐的制备
步骤1：{1-(4-氯苄基)-2-[4-(6-碘噻吩并[3，2-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(50mg，0.080mmol)、甲硫醇钠(12mg，2.15mmol)和1，3-二叔丁基-丙二酮(940mg，0.22mmol)的溶液用氮气吹扫。加入NMP(2ml)和CuCl(5mg，0.05mmol)。将混合物加热至130℃达3小时。冷却后，反应物用乙酸乙酯稀释并过滤。滤液用水、盐水洗涤，并经硫酸镁干燥。过滤后，除去溶剂，残余物经硅胶色谱纯化，得到产物{1-(4-氯苄基)-2-[4-(6-甲硫基-噻吩并[3，2-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(20mg，46％)。
1HNMR(CDCl3，400Hz)δ8.61(s，1H)，7.57(s，1H)，7.28-7.26(d，J＝6.4Hz，2H)，7.18-7.16(d，J＝8.4Hz，2H)，5.33-5.31(d，J＝8.8Hz，1H)，4.81-4.79(m，1H)，4.01-3.71(m，7H)，3.24-3.19(m，1H)，3.03-2.98(m，2H)，2.74(s，3H)，1.43(s，9H).MS(ESI+)[M+H]+548.
步骤2：向{1-(4-氯苄基)-2-[4-(6-甲硫基-噻吩并[3，2-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯的DCM(4ml)溶液中加入HCl的二烷溶液(4M，1ml)。将混合物于室温搅拌4小时。除去溶剂，定量得到产物2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(6-甲硫基-噻吩并[3，2-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮二盐酸盐。MS(ESI+)[M+H]+448。
实施例32
4-{4-[2-氨基-3-(4-氯苯基)-丙酰基]-哌嗪-1-基}-噻吩并[3，2-d]嘧啶-6-甲 腈二盐酸盐的制备
步骤1：向{1-(4-氯苄基)-2-[4-(6-碘噻吩并[3，2-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(50mg，0.080mmol)的吡啶(5ml)溶液中加入CuCN(20mg，0.223mmol)。将混合物在氮气下回流12小时。除去溶剂，残余物经硅胶色谱纯化，得到{1-(4-氯苄基)-2-[4-(6-氰基噻吩并[3，2-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(29mg，69％)。
1HNMR(CDCl3，400Hz)δ8.65(s，1H)，7.95(s，1H)，7.28-7.26(d，J＝7.6Hz，2H)，7.18-7.16(d，J＝8.4Hz，2H).5.35-5.33(d，J＝8.4Hz，1H)，4.85-4.80(m，1H)，3.91-3.56(m，7H，3.24-3.19(m，1H)，3.01-2.99(d，J＝8.0Hz，2H)，1.44(s，9H).MS(ESI+)[M+H]+527.
步骤2：向{1-(4-氯苄基)-2-[4-(6-氰基噻吩并[3，2-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯的DCM(4ml)溶液中加入HCl的二
Figure BDA00001987566300821
烷溶液(4M，1ml)。将混合物于室温搅拌10小时。除去溶剂，残余物经HPLC纯化，得到产物4-{4-[2-氨基-3-(4-氯苯基)-丙酰基]-哌嗪-1-基}-噻吩并[3，2-d]嘧啶-6-甲腈二盐酸盐(12mg，44％)。MS(ESI+)[M+H]+427。
实施例33
Figure BDA00001987566300822
2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(6-甲基噻吩并[3，2-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]- 丙-1-酮二盐酸盐的制备
步骤1：向4-氯-6-碘噻吩并[3，2-d]嘧啶(0.5g，1.7mmol)的DCE(5ml)/TEA(1ml)溶液中加入1-苄基-哌嗪(0.3g，1.69mmol)。将混合物回流1小时。除去溶剂，残余物经硅胶色谱纯化，得到(4-苄基-哌嗪-1-基)-6-碘噻吩并[3，2-d]嘧啶(0.65g，88％)。
1H NMR(CDCl3，400Hz)δ8.47(s，1H)7.60(s，1H)，7.35-7.23(m，5H)，3.95-3.92(m，4H)，3.51(s，2H)，2.59-2.54(m，4H).MS(ESI+)[M+H]+437.
步骤2：于室温下，向真空干燥的ZnBr2(0.5g，2.2mmol)在THF(10ml)中的悬浮液中滴加MeMgBr(3M，0.6ml，1.8mmol)。加入后，将混合物搅拌1小时，然后在氮气下加入(4-苄基-哌嗪-1-基)-6-碘噻吩并[3，2-d]嘧啶(0.4g，0.92mmol)，再加入PdCl2(dppf)(30mg)。将混合物加热至60℃达2小时。用水猝灭反应物。分离出有机相，经硫酸镁干燥。过滤后除去溶剂，残余物经硅胶色谱纯化，得到产物4-(4-苄基-哌嗪-1-基)-6-甲基噻吩并[3，2-d]嘧啶(0.16g，54％)。
1H NMR(CDCl3，400Hz)δ8.52(s，1H)，7.35-7.26(m，5H)，7.07(s，1H)，3.98-3.95(m，4H)，3.56(s，2H)，2.59-2.57(m，7H)MS(ESI+)[M+H]+325.
步骤3：向4-(4-苄基-哌嗪-1-基)-6-甲基噻吩并[3，2-d]嘧啶(65mg，0.20mmol)的MeOH(10ml)溶液中加入Pd/C(10％，20mg)和2滴TFA。混合物在氢气囊下搅拌4小时。滤出催化剂，并将滤液浓缩。将残余物溶于DCM(6ml)和TEA(2ml)中，然后加入Boc-D-Phe(4-Cl)-OH(59mg，0.20mmol)，再加入HOBT(50mg，0.37mmol)和EDCI(74mg，0.39mmol)。将混合物于室温搅拌12小时。除去溶剂，残余物经硅胶色谱纯化，得到产物{1-(4-氯苄基)-2-[4-(6-甲基噻吩并[3，2-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(60mg，59％)。
1HNMR(CDCl3，400Hz)δ8.54(s，1H)，7.28-7.26(d，J＝7.2Hz，2H)，7.17-7.15(d，J＝8.4Hz，2H)，7.08(s，1H)，5.37-5.359d，J＝8.8Hz，1H)，4.86-4.84(m，1H)，3.87-3.57(m，7H)，3.24-3.22(m，1H)，3.00-2.98(d，J＝7.2Hz，2H)，2.63(s，3H)，1.43(s，9H).MS(ESI+)[M+H]+516.
步骤4：向{1-(4-氯苄基)-2-[4-(6-甲基噻吩并[3，2-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯的DCM(4ml)溶液中加入HCl/二
Figure BDA00001987566300831
烷溶液(4M，1ml)。将混合物搅拌4小时。除去溶剂，定量得到产物2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(6-甲基噻吩并[3，2-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮二盐酸盐。MS(ESI+)[M+H]+416。
实施例34
Figure BDA00001987566300841
(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(1H-吲哚-5-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮二盐 酸盐的制备
步骤1：将5-氨基吲唑(2.53g，19.0mmol)、双(2-氯乙基)胺盐酸盐(3.60g，20.1mmol)和乙醇(30ml)的混合物回流下加热过夜。让混合物冷却至室温。加入Na2CO3(2.14g，20.2mmol)，将反应混合物回流下加热8小时。冷却后，将混合物过滤，滤液经真空蒸发。将残余物溶于1N HCl(100ml)中，用DCM(2x 50ml)萃取。水相用4N NaOH(30ml)调至碱性，用EtOAc(2x 100ml)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，干燥并浓缩。残余物经柱色谱纯化(20∶1DCM/MeOH至20∶1∶0.5DCM/MeOH/Et3N)，得到5-哌嗪-1-基-1H-吲唑(1.26g，33％)，为褐色固体。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ12.80(s，1H)，7.89(s，1H)，7.40(d，J＝8.8Hz，1H)，7.16(dd，J＝8.8Hz，J＝2.0Hz，1H)，7.07(s，1H)，3.17(s，1H)，2.99(m，4H)，2.89(m，H).LCMS(APCI+)m/z203[M+H]+；Rt＝1.33minutes.
步骤2：向(D)-Boc-4-氯苯丙氨酸(0.119g，0.396mmol)和5-哌嗪-1-基-1H-吲唑(0.100g，0.494mmol)的DMF(5ml)溶液中加入EDCI(0.152g，0.791mmol)、HOBt(0.121g，0.791mmol)和三乙胺(0.110ml，0.791mmol)。将反应混合物于室温搅拌过夜。让混合物在水和EtOAc之间分配。水相用EtOAc萃取。合并的有机层用NaHCO3水溶液、盐水洗涤，干燥并浓缩。残余物经柱色谱纯化(80∶1至50∶1DCM/MeOH)，得到(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(1H-吲唑-5-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(0.176g，92％)，为白色固体。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ10.12(s，1H)，7.98(s，1H)，7.41(d，J＝8.8Hz，1H)，7.28(d，J＝8.4Hz，2H)，7.16(d，J＝8.4Hz，2H)，7.12(dd，J＝8.8Hz，J＝2.0Hz，1H)，7.07(s，1H)，5.46(m，1H)，4.88(m，1H)，3.74(m，2H)，3.53(m，1H)，3.31(m，1H)，3.07(m，1H)，2.99(d，J＝6.8Hz，2H)，2.91(m，2H)，2.49(m，1H)，1.43(s，9H).LCMS(APCI+)m/z 484，486[M+H]+；Rt＝3.01minutes.
步骤3：向(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(1H-吲唑-5-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(0.176g，0.364mmol)的DCM(10ml)溶液中加入4N HCl的二
Figure BDA00001987566300851
烷溶液(1ml)。将混合物于室温搅拌过夜并蒸发。将所得固体悬浮于异丙醇-乙醚(1∶5)并搅拌30分钟。将混合物过滤，得到(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(1H-吲唑-5-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮二盐酸盐(0.151g，91％)，为白色固体。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ8.24(s，1H)，8.03(8，1H)，7.75(d，J＝9.2Hz，1H)，7.65(d，J＝9.2Hz，1H)，7.47(d，J＝8.0Hz，2H)，7.37(d，J＝8.0Hz，2H)，4.82(m，1H)，4.12(m，1H)，3.94(m，2H)，3.73(m，2H)，3.51(m，2H)，3.22(dd，J＝13.2Hz，J＝6.0Hz，1H)，3.15(dd，J＝13.2Hz，J＝9.2Hz，1H)，2.87(m，1H).LCMS(APCI+)m/z384，386[M+H]+；Rt＝1.92minutes.
实施例35
Figure BDA00001987566300852
(2S)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(1H-吲唑-5-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮二盐 酸盐的制备
步骤1：采用实施例34步骤2所述的方法，用(L)-Boc-4-氯苯丙氨酸替代(D)-Boc-4-氯苯丙氨酸，制备(2S)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(1H-吲唑-5-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯。
1HNMR(CDCl3，400MHz)δ10.03(s，1H)，7.98(s，1H)，7.41(d，J＝8.8Hz，1H)，7.28(d，J＝8.4Hz，2H)，7.16(d，J＝8.4Hz，2H)，7.12(dd，J＝8.8Hz，J＝2.0Hz，1H)，7.07(s，1H)，5.46(m，1H)，4.88(m，1H)，3.74(m，2H)，3.53(m，1H)，3.31(m，1H)，3.07(m，1H)，2.99(d，J＝6.8Hz，2H)，2.91(m，2H)，2.49(m，1H)，1.43(s，9H).
步骤2：用实施例34步骤3所述的方法，用(2S)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(1H-吲唑-5-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯替代(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(1H-吲唑-5-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯，制备(2S)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(1H-吲唑-5-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮二盐酸盐。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ8.24(s，1H)，8.03(s，1H)，7.75(d，J＝9.2Hz，1H)，7.65(d，J＝9.2Hz，1H)，7.47(d，J＝8.0Hz，2H)，7.37(d，J＝8.0Hz，2H)，4.82(m，1H)，4.12(m，1H)，3.94(m，2H)，3.73(m，2H)，3.51(m，2H)，3.22(dd，J＝13.2Hz，J＝6.0Hz，1H)，3.15(dd，J＝13.2Hz，J＝9.2Hz，1H)，2.87(m，1H).LCMS(APCI+)m/z 384，386[M+H]+；Rt＝1.92minutes.
实施例36
(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(1H-吲唑-6-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮二盐 酸盐的制备
步骤1：用实施例34步骤1所述的方法，用6-氨基吲唑替代5-氨基吲唑，制备6-哌嗪-1-基-1H-吲唑。LCMS(APCI+)m/z 203[M+H]+；Rt＝1.53分钟。
步骤2：用实施例34步骤2所述的方法，用6-哌嗪-1-基-1H-吲唑替代5-哌嗪-1-基-1H-吲唑，制备(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(1H-吲唑-6-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯。
1HNMR(CDCl3，400MHz)δ9.91(s，1H)，7.94(d，J＝2.0HZ，1H)，7.61(dd，J＝8.8Hz，J＝2.0Hz，1H)，7.28(d，J＝8.4Hz，2H)，7.16(d，J＝8.4Hz，2H)，6.86(dd，J＝8.8Hz，J＝2.0Hz，1H)，6.73(s，1H)，5.42(m，1H)，4.88(m，1H)，3.74(m，2H)，3.53(m，1H)，3.29(m，1H)，3.19(m，1H)，3.00(m，4H)，2.59(m，1H)，1.43(s，9H).LCMS(APCI+)m/z 484，486[M+H]+；Rt＝3.40minutes.
步骤3：用实施例34步骤3所述的方法，用(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(1H-吲唑-6-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯替代(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(1H-吲唑-5-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯，制备(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(1H-吲唑-6-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮二盐酸盐。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ8.30(s，1H)，7.78(d，J＝9.2Hz，1H) 7.40(d，J＝8.4Hz，2H)，7.32(d，J＝8.4Hz，2H)，7.15(d，J＝9.2Hz，1H)，6.97(s，1H)，4.76(m，1H)，3.80(m，2H)，3.62(m，1H)，3.40(m，1H)，3.10-3.30(m，5H)，2.72(m，1H).LCMS(APCI+)m/z384，386[M+H]+；Rt＝2.02minutes.
实施例37
Figure BDA00001987566300871
(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(1-甲基-1H-吲唑-5-基-哌嗪)-1-基]-丙-1- 酮二盐酸盐的制备
步骤1：向5-哌嗪-1-基-1H-吲唑(0.34g，1.3mmol)的1，4-二
Figure BDA00001987566300872
烷(5ml)溶液中加入3N NaOH(0.42ml，1.3mmol)。冷却至0℃后，滴加碳酸叔丁酯(0.25g，1.3mmol)的1，4-二
Figure BDA00001987566300873
烷(1ml)溶液。将反应混合物于室温搅拌过夜，然后倒入水中，用EtOAc萃取。合并的有机层用饱和NaHCO3水溶液、水、盐水洗涤，干燥并浓缩。残余物经柱色谱纯化(EtOAc∶己烷，1∶1)，得到4-(1H-吲唑-5-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.31g，82％)，为白色固体。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ10.01(s，1H)，7.80(s，1H)，7.42(d，J＝9.2Hz，1H)，7.21(dd，J＝9.2Hz，J＝2.0Hz，1H)，7.16(d，J＝2.0Hz，1H)，3.62(m，4H)，3.09(m，4H)，1.50(s，9H).LCMS(APCI+)m/z303[M+H]+；Rt＝2.50minutes.
步骤2：向NaH(60％，4mg，0.1mmol)的DMF(0.5ml)溶液中滴加4-(1H-吲唑-5-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.100g，0.33mmol)的DMF(1ml)溶液。搅拌30分钟后，滴加甲基碘(0.026g，0.18mmol)。将混合物于室温搅拌2小时，然后让其在EtOA和水之间分配。水相用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，干燥并浓缩。残余物经柱色谱纯化(己烷∶EtOAc，2∶1)，得到4-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.023g，22％)，为白色固体。
1HNMR(CDCl3，400MHz)δ7.87(s，1H)，7.32(d，J＝9.2Hz，1H)，7.20(d，J＝9.2Hz，1H)，7.12(s，1H)，4.04(s，3H)，3.62(m，4H)，3.09(m，4H)，1.50(s，9H).LCMS(APCI+)m/z317[M+H]+；Rt＝3.31minutes.
步骤3：用实施例34步骤3所述的方法，用4-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯替代(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(1H-吲唑-5-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯，制备1-甲基-5-哌嗪-1-基-1H-吲唑二盐酸盐。LCMS(APCI+)m/z 217[M+H]+；Rt＝1.15分钟。
步骤4：用实施例34步骤2所述的方法，用1-甲基-5-哌嗪-1-基-1H-吲唑二盐酸盐替代5-哌嗪-1-基-1H-吲唑，制备(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ7.87(s，1H)，7.31(d，J＝9.2Hz，1H)，7.28(d，J＝8.0Hz，2H)，7.17(d，J＝8.0Hz，2H)，7.12(d，J＝9.2Hz，1H)，7.04(s，1H)，5.41(m，1H)，4.87(m，1H)，4.04(s，3H)，3.73(m，2H)，3.50(m，1H)，3.31(m，1H)，3.07(m，1H)，2.99(d，J＝7.2Hz，2H)，2.94(m，2H)，2.48(m，1H)，1.43(s，9H).LCMS(APCI+)m/z498，500[M+H]+；Rt＝3.27minutes.
步骤5：采用实施例34步骤3所述的方法，用(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯替代(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(1H-吲唑-5-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯，制备(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮二盐酸盐。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ8.13(s，1H)，7.96(s，1H)，7.76(d，J＝9.2Hz，1H)，7.62(dd，J＝9.2Hz，J＝2.0Hz，1H)，7.47(d，J＝8.4Hz，2H)，7.37(d，J＝8.4Hz，2H)，4.81(m，1H)，4.11(m，4H)，3.98(m，1H)，3.90(m，1H)，3.69(m，2H)，3.49(m，2H)，3.16(m，2H)，2.84(m，1H).LCMS(APCI+)m/z398，400[M+H]+；Rt＝2.05minutes.
实施例38
(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-(4-异喹啉-6-基-哌嗪-1-基)-丙-1-酮二盐酸 盐的制备
步骤1：用氮气吹扫装有无水DME(2ml)中的6-溴异喹啉(按照文献Neiko Nerenz等(1998)J.Chem.Soc.Perkin Trans.2，437-447所述的方法，由4-溴苯甲醛制备，0.200g，0.961mmol)、1-Boc哌嗪(0.215g，1.15mmol)、K3PO4(0.286g，1.35mmol)、(2′-二环己基磷烷基-联苯-2-基)-二甲胺(0.028g，0.072mmol)和Pd2dba3(0.022g，0.024mmol)的圆底烧瓶，并回流下加热5小时。冷却后，让混合物于EtOAc和水之间分配。有机层用盐水洗涤，干燥并浓缩。残余物经柱色谱纯化(1∶1己烷/EtOAc)，得到4-异喹啉-6-基-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.210g，70％)，为白色固体。
1H MR(CDCl3，400MHz)δ9.04(s，1H)，8.39(dd，J＝6.8Hz，J＝2.8Hz，1H)，7.83(dd，J＝9.2Hz，J＝2.8Hz，1H)，7.45(d，J＝6.8Hz，1H)，7.32(dd，J＝9.2Hz，J＝2.4Hz，1H)，6.98(s，1H)，3.64(m，4H)，3.35(m，4H)，1.50(s，9H).LCMS(APCI+)m/z314[M+H]+；Rt＝2.14minutes.
步骤2：用实施例34步骤3所述的方法，用4-异喹啉-6-基-哌嗪-1-甲酸叔丁酯替代(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(1H-吲唑-5-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯，制备6-哌嗪-1-基-异喹啉二盐酸盐。1HNMR(CD3OD，400MHz)δ9.28(s，1H)，
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ9.28(s，1H)，8.30(d，J＝9.2Hz，1H)，8.24(d，J＝7.2Hz，1H)，8.04(d，J＝6.8Hz，1H)，7.83(dd，J＝9.2Hz，J＝2.4Hz，1H)，7.49(s，1H)，3.98(m，4H)，3.45(m，4H).LCMS(APCI+)m/z 214[M+H]+；Rt＝1.76minutes.
步骤3：用实施例34步骤2所述的方法，用6-哌嗪-1-基-异喹啉二盐酸盐替代5-哌嗪-1-基-1H-吲唑，制备(2R)-[1-(4-氯苄基)-2-(4-异喹啉-6-基-哌嗪-1-基)-2-氧代-乙基]-氨基甲酸叔丁酯。
1HNMR(CDCl3，400MHz)δ9.04(s，1H)，8.40(dd，J＝5.6Hz，J＝3.2Hz，1H)，7.83(dd，J＝9.2Hz，J＝2.4Hz，1H)，7.46(d，J＝6.0Hz，1H)，7.27(m，3，H)7.17(d，J＝8.0Hz，2H)，6.90(s，1H)，5.41(m，1H)，4.87(m，1H)，3.76(m，2H)，3.58(m，1H)，3.31(m2H)，3.20(m，2H)，2.99(d，J＝6.8Hz，2H)，2.78(m，1H)，1.43(s，9H).LCMS(APCI+)m/z495，497[M+H]+；Rt＝2.50minutes.
步骤4：用实施例34步骤3所述的方法，用(2R)-[1-(4-氯苄基)-2-(4-异喹啉-6-基-哌嗪-1-基)-2-氧代-乙基]-氨基甲酸叔丁酯替代(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(1H-吲唑-5-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯，制备(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-(4-异喹啉-6-基-哌嗪-1-基)-丙-1-酮二盐酸盐。
1HNMR(CD3OD，400MHz)δ9.18(s，1H)，8.22(d，J＝9.2Hz，1H)，8.16(d，J＝6.8Hz，1H)，7.95(d，J＝6.8Hz，1H)，7.69(dd，J＝9.2Hz，J＝2.4Hz，1H)，7.38(d，J＝8.4Hz，2H)，7.32(d，J＝8.4Hz，2H)，7.27(s，1H)，4.75(m，1H)，3.58-3.84(m，6H)，3.10-3.30(m，4H).LCMS(APCI+)m/z395，397[M+H]+；Rt＝2.68分钟。
实施例39
(2R)-2-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(4-异喹啉-6-基-哌嗪-1-基)-丙-1-酮二 盐酸盐的制备
步骤1：采用实施例34步骤2所述的方法，用6-哌嗪-1-基-异喹啉二盐酸盐替代5-哌嗪-1-基-1H-吲唑，用(D)-Boc-色氨酸替代(D)-Boc-4-氯苯丙氨酸，制备(2R)-[1-(1H-吲哚-3-基甲基)-2-(4-异喹啉-6-基-哌嗪-1-基)-2-氧代-乙基]-氨基甲酸叔丁酯。
1HNMR(CDCl3，400MHz)δ9.00(s，1H)，8.37(d，J＝6.4Hz，1H)，8.19(s，1H)，7.76(d，J＝9.2Hz，1H)，7.72(d，J＝7.6Hz，1H)，7.41(d，J＝6.0Hz，1H)，7.30(d，J＝7.6Hz，1H)，7.18(m，2H)，7.12(d，J＝8.8Hz，1H)，7.08(s，1H)，6.70(s，1H)，5.53(d，J＝8.4Hz，1H)，5.03(m，1H)，3.79(m，1H)，3.47(m，1H)，3.05-3.40(m，6H)，2.73(m，1H)，1.97(m，1H)，1.46(s，9H).LCMS(APCI+)m/z 500[M+H]+；Rt＝2.75minutes.
步骤2：用实施例34步骤3所述的方法，用(2R)-[1-(1H-吲哚-3-基甲基)-2-(4-异喹啉-6-基-哌嗪-1-基)-2-氧代-乙基]-氨基甲酸叔丁酯替代(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(1H-吲唑-5-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯，制备(2R)-2-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(4-异喹啉-6-基-哌嗪-1-基)-丙-1-酮二盐酸盐。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ10.65(s，1H)，9.14(s，1H)，8.15(m，2H)，7.89(d，J＝6.8Hz，1H)，7.56(d，J＝5.6Hz，1H)，7.51(d，J＝9.2Hz，1H)，7.30(m，2H)，7.07(m，3H)，4.70(m，1H) 3.74(m，1H)，3.64(m，1H)，3.39(m，5H)，3.01(m，1H)，2.86(m，1H)，2.36(m，1H).LCMS(APCI+)m/z400[M+H]+；Rt＝1.73minutes.
实施例40
(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(5-甲硫基嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-丙-1- 酮二盐酸盐的制备
步骤1：将4-氯-5-碘嘧啶(3.00g，12.5mmol)(按照文献TakaoSakamoto等(1986)Chem.Pharm.Bull.，2719-2724所述的方法，由4(3H)-嘧啶酮制备)、Et3N(5.22ml，37.4mmol)、1-Boc哌嗪(2.79g，15.0mmol)和NMP(30ml)的混合物于75℃加热6小时。冷却后，让反应混合物于EtOAc和水之间分配。水相用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，干燥并浓缩。残余物经柱色谱纯化(2∶1己烷/EtOAc)，得到4-(5-碘-嘧啶-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(4.81g，99％)，为白色固体。1H NMR(CDCl3，
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.70(s，1H)，8.62(s，1H)，3.57(s，8H)，1.49(s，9H).LCMS(APCI+)m/z391[M+H]+；Rt＝2.96minutes.
步骤2：用实施例34步骤3所述的方法，用4-(5-碘-嘧啶-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯替代(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(1H-吲唑-5-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯，制备5-碘-4-哌嗪-1-基-嘧啶二盐酸盐。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ8.87(s，1H)，8.84(s，1H)，4.36(t，J＝4.2Hz，4H)，3.47(t，J＝4.2Hz，4H).LCMS(APCI+)m/z291[M+H]+；Rt＝1.45minutes.
步骤3：用实施例34步骤2所述的方法，用5-碘-4-哌嗪-1-基-嘧啶二盐酸盐替代5-哌嗪-1-基-1H-吲唑，制备(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(5-碘嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.70(s，1H)，8.62(s，1H)，7.27(d，J＝8.0Hz，2H)，7.15(d，J＝8.0Hz，2H)，5.38(m，1H)，4.84(m，1H)，3.73(m，2H)，3.65(m，1H)，3.53(m，2H)，3.45(m，2H)，3.249(m，1H)，3.12(m，1H)，2.98(m，2H)，1.42(s，9H).LCMS(APCI+)m/z572，574[M+H]+；Rt＝3.25minutes.
步骤4：向圆底烧瓶中加入甲硫醇钠(17mg，0.25mmol)、(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(5-碘嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(71mg，0.12mmol)和2，2，6，6-四甲基-庚-3，5-二酮(6mg，0.25当量)。真空吹扫和再充入氮气后，将NMP(3ml)和CuCl(6mg，0.06mmol)加入该混合物中。将反应物于130℃搅拌1小时。冷却后，反应混合物用EtOAc稀释并经硅藻土(Celite)过滤。滤液用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。残余物经快速柱色谱纯化(1∶1己烷/EtOAc)，得到(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(5-甲硫基嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(24mg，39％)，为无色胶状物。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.56(s，1H)，8.29(s，1H)，7.26(d，J＝8.4Hz，2H)，7.14(d，J＝8.4Hz，2H)，5.37(m，1H)，4.84(m，1H)，3.70(m，1H)，3.61(m，2H)，3.51(m，4H)，3.20(m，2H)，2.97(m，2H)，2.42(s，3H)，1.42(s，9H).LCMS(APCI+)m/z492，494[M+H]+；Rt＝3.57minutes.
步骤5：用实施例34步骤3所述的方法，用(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(5-甲硫基嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯替代(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(1H-吲唑-5-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯，制备(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(5-甲硫基嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮二盐酸盐。
1HNMR(CD3OD，400MHz)δ8.64(s，1H)，8.30(s，1H)，7.39(d，J＝8.0Hz，2H)，7.32(d，J＝8.0Hz，2H)，4.75(m，1H)，4.09(m，2H)，4.00(m，1H)，3.83(m，1H)，3.68(m，3H)，3.17(m，3H)，2.55(s，3H).LCMS(APCI+)m/z392，394[M+H]+；Rt＝1.85minutes.
实施例41
Figure BDA00001987566300941
(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(5-苯基嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮 二盐酸盐的制备
步骤1：将(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(5-碘嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(0.150g，0.262mmol)、苯基硼酸(0.042g，0.341mmol)和2N碳酸钠溶液(0.34ml，0.68mmol)在DME(3ml)中搅拌，混合物用N2脱气15分钟。加入四(三苯基膦)合钯(0)(0.015g，0.013mmol)，并将混合物于80℃加热24小时。使混合物冷却至室温，并于DCM和水之间分配。水层用DCM萃取。合并的有机层用饱和NaHCO3水溶液洗涤，干燥并浓缩。残余物用快速硅胶色谱纯化，用己烷∶EtOAc(3∶1至1∶1)洗脱，得到(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-氧代-2-[4-(5-苯基嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(0.074g，54％)，为无色油状物。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.65(s，1H)，8.21(s，1H)，7.46(m，2H)，7.38(m，2H)，7.25(m，3H)，7.09(d，J＝8.4Hz，2H)，5.30(m，1H)，4.73(m，1H)，3.50(m，1H)，3.43(m，1H)，3.30(m，2H)，3.16(m，2H)，2.97(m，1H)，2.91(d，J＝7.6Hz，2H)，2.85(m，1H)，1.39(s，9H).LCMS(APCI+)m/z522，524[M+H]+；Rt＝2.72minutes.
步骤2：用实施例34步骤3所述的方法，用(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-氧代-2-[4-(5-苯基嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-乙基}-氨基甲酸叔丁酯替代(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(1H-吲唑-5-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯，制备(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(5-苯基嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮二盐酸盐。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ8.75(s，1H)，8.20(s，1H)，7.56(m，3H)，7.44(d，J＝6.8Hz，2H)，7.37(d，J＝8.0Hz，2H)，7.25(d，J＝8.0Hz，2H)，4.62(m，1H)，3.47-3.54(m，6H)，3.38-3.44(m，4H).LCMS(APCI+)m/z422，424[M+H]+；Rt＝2.40minutes.
实施例42
Figure BDA00001987566300951
(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(5-噻吩-3-基-嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-丙 -1-酮二盐酸盐的制备
步骤1：采用实施例41步骤1中所述的方法，用3-噻吩硼酸替代苯基硼酸，制备(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-氧代-2-[4-(5-噻吩-3-基-嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-乙基}-氨基甲酸叔丁酯。
1HNMR(CDCl3，400MHz)δ8.64(s，1H)，8.27(s，1H)，7.46(d，J＝4.8Hz，1H)，7.33(s，1H)，7.26(d，J＝8.4Hz，2H)，7.16(d，J＝4.8Hz，1H)，7.11(d，J＝8.4Hz，2H)，5.33(m，1H)，4.76(m，1H)，3.55(m，1H)，3.48(m，1H)，3.27(m，2H)，3.16(m，2H)，2.98(m，1H)，2.92(d，J＝6.8Hz，2H)，2.82(m，1H)，1.40(s，9H).LCMS(APCI+)m/z528，530[M+H]+；Rt＝2.75minutes.
步骤2：用实施例34步骤3所述的方法，用(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-氧代-2-[4-(5-噻吩-3-基-嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-乙基}-氨基甲酸叔丁酯替代(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(1H-吲唑-5-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯，制备(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(5-噻吩-3-基-嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮二盐酸盐。
1HNMR(CD3OD，400MHz)δ8.74(s，1H)，8.24(s，1H)，7.70(s，1H)，7.65(8，1H)，7.39(d，J＝8.0Hz，2H)，7.27(d，J＝8.0Hz，2H)，7.22(d，J＝4.8Hz，1H)，4.62(m，1H)，3.48-3.55(m，6H)，3.38-3.44(m，4H).LCMS(APCI+)m/z428，430[M+H]+；Rt＝2.76minutes.
实施例43
Figure BDA00001987566300961
(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(5-苯氧基嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-丙-1- 酮二盐酸盐的制备
向圆底烧瓶中加入苯酚(33mg，0.35mmol)、(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(5-碘嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(100mg，0.175mmol)、Cs2CO3(114mg，0.350mmol)和2，2，6，6-四甲基-庚-3，5-二酮(8mg，0.25当量)。真空吹扫和再充入氮气后，向该混合物中加入NMP(3ml)和CuCl(9mg，0.09mmol)。将反应物于130搅拌2小时。冷却后，反应物用EtOAc稀释并过滤。滤液用水、盐水洗涤并干燥。蒸发溶剂，然后经快速柱色谱(10∶1DCM/MeOH)，得到标题化合物，为游离碱，通过用4N HCl的二
Figure BDA00001987566300962
烷溶液处理，将其转变为二盐酸盐(36mg，38％)。
1HNMR(CD3OD，400MHz)δ8.64(s，1H)，7.96(s，1H)，7.70(s，1H)，7.65(s，1H)，7.49(m，2H)，7.37(m，2H)，7.29(m，3H)，7.14(d，J＝8.0Hz，2H)，4.70(m，1H)，4.11(m，2H)，4.00(m，1H)，3.76(m，2H)，3.57(m，2H)，3.10(m，3H).LCMS(APCI+)m/z438，440[M+H]+；Rt＝2.13minutes.
实施例44
Figure BDA00001987566300963
(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(5-碘嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮二 盐酸盐的制备
用实施例34步骤3所述的方法，用(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(5-碘嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯替代(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(1H-吲唑-5-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯，制备标题化合物。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ8.77(s，1H)，8.73(s，1H)，7.41(d，J＝8.4Hz，2H)，7.33(d，J＝8.4Hz，2H)，4.74(m，1H)，4.05(m，2H)，3.95(m，1H)，3.84(m，1H)，3.69(m，3H)，3.22(m，1H)，3.13(m，2H).LCMS(APCI+)m/z472，474[M+H]+；Rt＝2.06minutes.
实施例45
Figure BDA00001987566300971
(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(5-氯嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮二 盐酸盐的制备
步骤1：用实施例40步骤1所述的方法，用4，5-二氯嘧啶(按照文献Chestfield J.等(1955)J.Chem.Soc.Abstracts，3478-3481所述的方法，由5-氯嘧啶-4-酚制备)替代4-氯-5-碘嘧啶，用[1-(4-氯苄基)-2-氧代-2-哌嗪-1-基-乙基]-氨基甲酸叔丁酯替代1-Boc哌嗪，制备(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(5-氯嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.57(s，1H)，8.32(s，1H)，7.27(d，J＝8.0Hz，2H)，7.15(d，J＝8.0Hz，2H)，5.36(m，1H)，4.85(m，1H)，3.50-3.80(m，6H)，3.24(m，2H)，2.98(m，2H)，1.43(s，9H).LCMS(APCI+)m/z480，482，484[M+H]+；Rt＝3.24minutes.
步骤2：用实施例34步骤3所述的方法，用(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(5-氯嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯替代(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(1H-吲唑-5-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯，制备(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(5-氯嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮二盐酸盐。
1HNMR(CD3OD，400MHz)δ8.74(s，1H)，8.57(s，1H)，7.40(d，J＝7.6Hz，2H)，7.33(d，J＝7.6Hz，2H)，4.74(m，1H)，4.13(m，2H)，4.03(m，1H)，3.85(m，1H)，3.72(m，3H)，3.22(m，1H)，3.16(m，2H).LCMS(APCI+)m/z380，382，384[M+H]+；Rt＝2.01minutes.
实施例46
(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(5-氟嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮二 盐酸盐的制备
步骤1：用实施例40步骤1所述的方法，用4-氯-5-氟嘧啶(按照文献(Kheifets，G.M.等，2000，Russian J.Org.Chem.，1373-1387)所述的方法，由5-氟嘧啶-4-酚制备)替代4-氯-5-碘嘧啶，用[1-(4-氯苄基)-2-氧代-2-哌嗪-1-基-乙基]-氨基甲酸叔丁酯替代1-Boc哌嗪，制备(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(5-氟嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.41(d，J＝2.8Hz，1H)，8.12(d，J＝6.4Hz，1H)，7.27(d，J＝8.0Hz，2H)，7.15(d，J＝8.0Hz，2H)，5.35(m，1H)，4.83(m，1H)，3.45-3.75(m，6H)，3.35(m，1H)，3.18(m，1H)，2.98(d，J＝7.2Hz，2H)，1.43(s，9H).LCMS(APCI+)m/z464，466[M+H]+；Rt＝2.93minutes.
步骤2：用实施例34步骤3所述的方法，用(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(5-氟嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯替代(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(1H-吲唑-5-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯，制备(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(5-氟嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮二盐酸盐。
1HNMR(CD3OD，400MHz)δ8.66(s，1H)，8.50(s，1H)，7.39(d，J＝8.0Hz，2H)，7.32(d，J＝8.0Hz，2H)，4.75(m，1H)，4.05(m，2H)，3.97(m，1H)，3.88(m，1H)，3.70(m，3H)，3.23(m，1H)，3.15(m，2H).LCMS(APCI+)m/z364，366[M+H]+；Rt＝1.88minutes.
实施例47
Figure BDA00001987566300991
(2R)-2-氨基-1-[4-(5-苄氧基嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-3-(4-氯苯基)-丙-1- 酮二盐酸盐的制备
步骤1：将装有4-(5-碘-嘧啶-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(780mg，2.00mmol)、CuI(38mg，0.20mmol)、1，10-菲咯啉(72mg，0.4mmol)、Cs2CO3(912mg，2.8mmol)、苯甲醇(0.62ml，6.0mmol)和甲苯(2ml)的密封管于110℃加热40小时。将所得悬浮液冷却至室温，经硅胶塞过滤，用EtOAc洗脱。蒸发溶剂并经快速硅胶色谱纯化(10∶1己烷/EtOAc)，得到4-(5-苄氧基嘧啶-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.640g，86％)，为白色固体。
1HNMR(CDCl3，400MHzδ8.36(s，1H)，7.99(s，1H)，7.39(m，5H)，5.08(s，2H)，3.73(m，4H)，3.48(m，4H)，1.47(s，9H).LCMS(APCI+)m/z371[M+H]+；Rt＝2.52minutes.
步骤2：用实施例34步骤3所述的方法，用4-(5-苄氧基嘧啶-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯替代(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(1H-吲唑-5-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯，制备5-苄氧基-4-哌嗪-1-基-嘧啶二盐酸盐。LCMS(APCI+)m/z 271[M+H]+；Rt＝1.64分钟。
步骤3：用实施例34步骤2所述的方法，用5-苄氧基-4-哌嗪-1-基-嘧啶二盐酸盐替代5-哌嗪-1-基-1H-吲唑，制备(2R)-[2-[4-(5-苄氧基嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-1-(4-氯苄基)-2-氧代-乙基]-氨基甲酸叔丁酯。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.34(s，1H)，8.00(s，1H)，7.38(m，5H)，7.24(d，J＝8.0Hz，2H)，7.12(d，J＝8.0Hz，2H)，5.37(d，J＝8.8Hz，1H)，5.06(s′，2H)，4.81(m，1H)，3.64(m，5H)，3.44(m，1H)，3.34(m，1H)，3.13(m，1H)，2.96(m，2H)，1.41(s，9H).LCMS(APCI+)m/z552，554[M+H]+；Rt＝2.79minutes.
步骤4：用实施例34步骤3所述的方法，用(2R)-[2-[4-(5-苄氧基嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-1-(4-氯苄基)-2-氧代-乙基]-氨基甲酸叔丁酯替代(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(1H-吲唑-5-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯，制备(2R)-2-氨基-1-[4-(5-苄氧基嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-3-(4-氯苯基)-丙-1-酮二盐酸盐。
1HNMR(CD3OD，400MHz)δ8.49(s，1H)，8.11(s，1H)，7.48(m，5H)，7.36(d，J＝8.4Hz，2H)，7.28(d，J＝8.4Hz，2H)，5.20(s，2H)，4.68(m，1H)，4.07(m，2H)，3.97(m，1H)，3.69(m，2H)，3.59(m，2H)，3.12(m，3H).LCMS(APCI+)m/z452，454[M+H]+；Rt＝2.02minutes.
实施例48
Figure BDA00001987566301001
(2R)-2-氨基-1-[4-(5-氨基嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-3-(4-氯苯基)-丙-1-酮 二盐酸盐的制备
步骤1：用实施例34步骤3所述的方法，用4-(5-氨基嘧啶-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(按照U.S.5,563,142中所述的方法，由4，6-二氯-硝基嘧啶制备)替代(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(1H-吲唑-5-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯，制备4-哌嗪-1-基-嘧啶-5-基胺二盐酸盐。LCMS(APCI+)m/z 180[M+H]+；Rt＝1.12分钟。
步骤2：用实施例34步骤2所述的方法，用4-哌嗪-1-基-嘧啶-5-基胺二盐酸盐替代5-哌嗪-1-基-1H-吲唑，制备(2R)-[2-[4-(5-氨基嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-1-(4-氯苄基)-2-氧代-乙基]-氨基甲酸叔丁酯。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.38(s，1H)，7.97(s，1H)，7.27(d，J＝8.0Hz，2H)，7.14(d，J＝8.0Hz，2H)，5.38(d，J＝8.4Hz，1H)，4.85(m，1H)，3.66(m，2H)，3.52(m，2H)，3.44(s，2H)，3.23(m，4H)，2.93(m，2H)，1.42(s，9H).LCMS(APCI+)m/z461，463[M+H]+；Rt＝2.38minutes.
步骤3：用实施例34步骤3所述的方法，用(2R)-[2-[4-(5-氨基嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-1-(4-氯苄基)-2-氧代-乙基]-氨基甲酸叔丁酯替代(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(1H-吲唑-5-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯，制备(2R)-2-氨基-1-[4-(5-氨基嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-3-(4-氯苯基)-丙-1-酮二盐酸盐。
1HNMR(CD3OD，400MHz)δ8.41(s，1H)，7.80(s，1H)，7.40(d，J＝8.4Hz，2H)，7.32(d，J＝8.4Hz，2H)，4.77(m，1H)，3.84(m，4H)，3.63(m，2H)，3.50(m，1H)，3.18(m，3H).LCMS(APCI+)m/z361，363[M+H]+；Rt＝1.68minutes.
实施例49
Figure BDA00001987566301011
(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(5-甲氧基嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-丙-1- 酮二盐酸盐的制备
步骤1：在氮气下，向4-(5-苄氧基嘧啶-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.540g，1.46mmol)的MeOH(20ml)溶液中小心加入10％披钯炭(40mg)。将反应容器真空下抽空，然后用气囊置于氢气氛下。将混合物于室温搅拌2小时。此时排空氢气，经过滤除去催化剂。将滤液浓缩。残余物经快速色谱纯化(1∶1己烷/EtOAc)，得到4-(5-羟基嘧啶-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.390g，95％)，为白色固体。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.18(s，1H)，7.75(s，1H)，3.93(m，4H)，3.54(m，4H)，1.41(s，9H).LCMS(APCI+)m/z281[M+H]+；Rt＝2.01minutes.
步骤2：用实施例34步骤3所述的方法，用4-(5-羟基嘧啶-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯替代(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(1H-吲唑-5-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯，制备4-哌嗪-1-基-嘧啶-5-酚二盐酸盐。LCMS(APCI+)m/z 181[M+H]+；Rt＝1.15分钟。
步骤3：用实施例34步骤2所述的方法，用4-哌嗪-1-基-嘧啶-5-酚二盐酸盐替代5-哌嗪-1-基-1H-吲唑，制备(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(5-羟基嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.18(s，1H)，7.76(s，1H)，7.25(d，J＝8.0Hz，2H)，7.14(d，J＝8.0Hz，2H)，5.39(d，J＝8.4Hz，1H)，4.84(m，1H)，3.55-3.95(m，5H)，3.51(m，2H)，3.21(m，1H)，2.96(m，2H)，1.42(s，9H).LCMS(APCI+)m/z 462，464[M+H]+；Rt＝2.41minutes.
将甲基碘(18mg，0.13mmol)、K2CO3(18mg，0.13mmol)和(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(5-羟基嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(50mg，0.11mmol)于DMF(2ml)中的混合物在室温下搅拌1小时。反应混合物用水稀释并用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，干燥并浓缩。残余物经快速色谱纯化(己烷∶EtOAc，1∶1)，得到(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(5-甲氧基嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(20mg，39％)，为无色油状物。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.34(s，1H)，7.94(s，1H)，7.26(d，J＝8.4Hz，2H)，7.14(d，J＝8.4Hz，2H)，5.37(d，J＝8.4Hz，1H)，4.84(m，1H)，3.87(s，3H)，3.65(m，5H)，3.48(m，1H)，3.33(m，1H)，3.20(m，1H)，2.96(m，2H)，1.42(s，9H).LCMS (APCI+)m/z476，478[M+H]+；Rt＝2.44minutes.
采用实施例34步骤3所述的方法，用(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(5-甲氧基嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯替代(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(1H-吲唑-5-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯，制备(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(5-甲氧基嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮二盐酸盐。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ8.50(s，1H)，8.01(s，1H)，7.38(d，J＝8.0Hz，2H)，7.32(d，J＝8.0Hz，2H)，4.75(m，1H)，4.12(m，2H)，4.04(m，1H)，3.97(s，3H)，3.81(m，2H)，3.67(m，2H)，3.16(m，3H).LCMS(APCI+)m/z376，378[M+H]+；Rt＝1.77minutes.
实施例50
Figure BDA00001987566301031
(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(5-异丙氧基嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-丙 -1-酮二盐酸盐的制备
步骤1：采用实施例49步骤2所述的方法，用异丙基溴替代甲基碘，制备(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(5-异丙氧基嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.33(s，1H)，7.94(s，1H)7.26(d，J＝8.0Hz，2H)，7.14(d，J＝8.0Hz，2H)，5.39(d，J＝8.8Hz，1H)，4.84(m，1H)，4.48(m，1H)，3.63(m，5H)，3.48(m，1H)，3.33(m，1H)，3.14(m，1H)，2.97(m，2H)，1.42(s，9H)，1.34(d，J＝6.4Hz，6H).LCMS(APCI+)m/z 504，506[M+H]+；Rt＝2.61minutes.
步骤2：用实施例34步骤3所述的方法，用(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(5-异丙氧基嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯替代(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(1H-吲唑-5-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯，制备(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(5-异丙氧基嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮二盐酸盐。
1HNMR(CD3OD，400MHz)δ8.47(s，1H)，8.03(s，1H)，7.39(d，J＝8.0Hz，2H)，7.33(d，J＝8.0Hz，2H)，4.73(m，2H)，4.13(m，2H)，4.02(m，1H)，3.81(m，2H)，3.66(m，2H)，3.17(m，3H)，1.42(d，J＝6.4Hz，6H).LCMS(APCI+)m/z404，406[M+H]+；Rt＝1.86minutes.
实施例51
Figure BDA00001987566301041
(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(5-甲基嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮 二盐酸盐的制备
步骤1：将(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(5-碘嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(0.070g，0.12mmol)、甲基硼酸(0.022g，0.37mmol)、K2CO3(0.085g，0.61mmol)和PdCl2(PPh3)2(0.0086g，0.012mmol)在DMF(2ml)中的混合物于100℃、氮气下加热16小时。将混合物冷却至室温并于EtOAc和水之间分配。有机层用饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤，干燥并浓缩。残余物用快速硅胶色谱纯化，用DCM/MeOH(70∶1)洗脱，得到(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(5-甲基嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(0.022g，39％)，为无色油状物。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.62(s，1H)，8.20(s，1H)，7.26(d，J＝8.0Hz，2H)，7.14(d，J＝8.0Hz，2H)，5.37(d，J＝8.4Hz，1H)，4.84(m，1H)，3.70(m，1H)，3.60(m，1H)，3.42(m，1H)，3.32(m，4H)，3.02(m，3H)，2.20(s，3H)，1.42(s，9H).LCMS(APCI+)m/z460，462[M+H]+；Rt＝2.38minutes.
步骤2：用实施例34步骤3所述的方法，用(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(5-甲基嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯替代(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(1H-吲唑-5-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯，制备(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(5-甲基嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮二盐酸盐。1H NMR
1HNMR(CD3OD，400MHz)δ8.65(s，1H)，8.13(s，1H)，7.39(d，J＝8.4Hz，2H)，7.32(d，J＝8.4Hz，2H)，4.73(m，1H)，3.40(m，2H)，3.96(m，1H)，3.80(m，1H)，3.67(m，3H)，3.21(m，1H)，3.14(m，2H).LCMS(APCI+)m/z360，362[M+H]+；Rt＝1.70minutes.
实施例52
Figure BDA00001987566301051
(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-(4-噌啉-4-基-哌嗪-1-基)-丙-1-酮二盐酸盐 的制备
步骤1：向NaH(60的矿物油溶液，0.099g，2.46mmol)于DMF(5ml)中的悬浮液中滴加噌啉-4-酚(按照美国专利4,620,000中所述的方法，由2-氨基苯乙酮制备，0.300g，2.05mmol)的DMF(2ml)溶液。将反应混合物于40℃加热并搅拌30分钟。冷却后，加入N-苯基三氟甲磺酰胺(0.880g，2.46mmol)的DMF(2ml)溶液，将反应混合物于室温搅拌1小时。向该混合物中加入1-Boc哌嗪(0.765g，4.11mmol)。将反应物于80℃搅拌4小时。冷却后，让混合物于EtOAc和水之间分配。水相用EtOAc萃取。合并的有机层用水、盐水洗涤，干燥并浓缩。残余物经柱色谱纯化(1∶1至1∶3己烷/EtOAc)，得到4-噌啉-4-基-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.246g，38％)，为黄色油状物。1HNMR(CDCl3，400MHz)δ8.91(s，1H)，8.47(d，J＝8.4Hz，1H)，7.97(d，J＝8.4Hz，1H)，7.80(t，J＝7.2Hz，1H)，7.69(t，J＝7.2Hz，1H)，3.74(m，4H)，3.34(m，4H)，1.51(s，9H).LCMS(APCI+)m/z315[M+H]+；Rt＝2.14minutes.
步骤2：用实施例34步骤3所述的方法，用4-噌啉-4-基-哌嗪-1-甲酸叔丁酯替代(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(1H-吲唑-5-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯，制备4-哌嗪-1-基-噌啉二盐酸盐。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ8.96(s，1H)，8.33(d，J＝8.8Hz，1H)，8.15(t，J＝7.2Hz，1H)，8.07(d，J＝8.4Hz，1H)，7.88(t，J＝7.2Hz，1H)，4.42(m，4H)，3.64(m，4H).LCMS(APCI+)m/z215[M+H]+；Rt＝1.46minutes.
步骤3：采用实施例34步骤2所述的方法，用4-哌嗪-1-基-噌啉二盐酸盐替代5-哌嗪-1-基-1H-吲唑，制备(2R)-[1-(4-氯苄基)-2-(4-噌啉-4-基-哌嗪-1-基)-2-氧代-乙基]-氨基甲酸叔丁酯。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.82(s，1H)，8.48(d，J＝8.4Hz，1H)，7.89(d，J＝8.4Hz，1H)，7.80(t，J＝7.2Hz，1H)，7.70(t，J＝7.2Hz，1H)，7.31(d，J＝8.4Hz，2H)，7.18(d，J＝8.4Hz，2H)，5.36(m，1H)，4.88(m，1H)，3.85(m，2H)，3.69(m，1H)，3.40(m，1H)，3.28(m，1H)，3.17(m，2H)，3.01(d，J＝7.2Hz，2H)，2.78(m，1H)，1.43(s，9H).LCMS(APCI+)m/z496，498[M+H]+；Rt＝2.44minutes.
步骤4；用实施例34步骤3所述的方法，用(2R)-[1-(4-氯苄基)-2-(4-噌啉-4-基-哌嗪-1-基)-2-氧代-乙基]-氨基甲酸叔丁酯替代(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(1H-吲唑-5-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯，制备(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-(4-噌啉-4-基-哌嗪-1-基)-丙-1-酮二盐酸盐。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ8.75(s，1H)，8.27(d，J＝8.4Hz，1H)，8.10(t，J＝7.2Hz，1H)，7.99(d，J＝8.4Hz，1H)，7.82(t，J＝7.2Hz，1H)，7.42(d，J＝8.0Hz，2H)，7.34(d，J＝8.0Hz，2H)，4.74(m，1H)，4.19(m，3H)，3.89(m，4H)，3.41(m，1H)，3.18(d，J＝7.6Hz，2H).LCMS(APCI+)m/z 396，398[M+H]+；Rt＝2.46minutes.
实施例53
Figure BDA00001987566301071
(2R)-2-氨基-1-(4-噌啉-4-基-哌嗪-1-基)-3-苯基丙-1-酮二盐酸盐的制备
步骤1：用实施例34步骤2所述的方法，用4-哌嗪-1-基-噌啉二盐酸盐替代5-哌嗪-1-基-1H-吲唑，用(D)-Boc-苯丙氨酸替代(D)-Boc-4-氯苯丙氨酸，制备(2R)-[1-苄基-2-(4-噌啉-4-基-哌嗪-1-基)-2-氧代-乙基]-氨基甲酸叔丁酯。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.73(s，1H)，8.46(d，J＝8.4Hz，1H)，7.85(d，J＝8.4Hz，1H)，7.79(t，J＝8.0Hz，1H)，7.68(t，J＝8.0Hz，1H)，7.29(m，5H)，5.42(d，J＝8.4Hz，1H)，4.91(m，1H)，3.89(m，1H)，3.67(m，1H)，3.57(m，1H)，3.32(m，2H)，3.08(m，2H)，2.99(m，2H)，2.32(m，1H)，1.45(s，9H).LCMS(APCI+)m/z462[M+H]+；Rt＝2.30minutes.
步骤2：用实施例34步骤3所述的方法，用(2R)-[1-苄基-2-(4-噌啉-4-基-哌嗪-1-基)-2-氧代-乙基]-氨基甲酸叔丁酯替代(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(1H-吲唑-5-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯，制备(2R)-2-氨基-1-(4-噌啉-4-基-哌嗪-1-基)-3-苯基丙-1-酮二盐酸盐。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ8.72(s，1H)，8.25(d，J＝8.4Hz，1H)，8.09(t，J＝8.0Hz，1H)，7.99(d，J＝8.4Hz，1H)，7.80(t，J＝8.0Hz，1H)，7.37(m，2H)，4.75(m，1H)，4.24(m，1H)，4.12(m，2H)，3.89(m，3H)，3.65(m，1H)，3.23(m，3H).LCMS(APCI+)m/z 362[M+H]+；Rt＝2.38minutes.
实施例54
Figure BDA00001987566301081
(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(2-甲基喹唑啉-4-基)-哌嗪-1-基]-丙-1- 酮二盐酸盐的制备
步骤1：用实施例40步骤1所述的方法，用4-氯-2-甲基喹唑啉替代4-氯-5-碘嘧啶，用[1-(4-氯苄基)-2-氧代-2-哌嗪-1-基-乙基]-氨基甲酸叔丁酯替代1-Boc哌嗪，制备(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(2-甲基喹唑啉-4-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯。
1HNMR(CDCl3，400MHz)δ7.84(d，J＝8.4Hz，1H)，7.77(d，J＝8.4Hz，1H)，7.71(t，J＝8.4Hz，1H)，7.41(t，J＝8.4Hz，1H)，7.28(d，J＝8.4Hz，2H)，7.16(d，J＝8.4Hz，2H)，5.37(d，J＝8.4Hz，1H)，4.87(m，1H)，3.73(m，3H)，3.60(m，4H)，3.29(m，2H)，2.98(m，2H)，2.84(s，3H)，1.43(s，9H).LCMS (APCI+)m/z510，512[M+H]+；Rt＝2.50minutes.
步骤2：用实施例34步骤3所述的方法，用(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(2-甲基喹唑啉-4-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯替代(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(1H-吲唑-5-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯，制备(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(2-甲基喹唑啉-4-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮二盐酸盐。1H NMR(CD3OD，400MHz)δ8.19(d，J＝8.0Hz，1H)，8.01(t，J＝8.0Hz，1H)，7.77(d，J＝8.0Hz，1H)，7.72(t，J＝8.0Hz，1H)，7.40(d，J＝8.4Hz，2H)，7.34(d，J＝8.4Hz，2H)，4.76(m，1H)，4.27(m，2H)，4.19(m，1H)，3.70-3.95(m，4H)，3.17(m，3H).LCMS(APCI+)m/z410，412[M+H]+；Rt＝1.80minutes.
实施例55
Figure BDA00001987566301091
(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(2-氯喹唑啉-4-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮 二盐酸盐的制备
步骤1：用实施例40步骤1所述的方法，用2，4-二氯喹唑啉替代4-氯-5-碘嘧啶，用[1-(4-氯苄基)-2-氧代-2-哌嗪-1-基-乙基]-氨基甲酸叔丁酯替代1-Boc哌嗪，制备(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(2-氯喹唑啉-4-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ7.84(d，J＝8.0Hz，1H)，7.77(m，2H)，7.47(t，J＝8.0Hz，1H)，7.29(d，J＝8.4Hz，2H)，7.16(d，J＝8.4Hz，2H)，5.35(d，J＝8.8Hz，1H)，4.84(m，1H)，3.74(m，5H)，3.40(m，1H)，3.31(m，1H)，2.99(d，J＝8.0Hz，2H)，1.43(s，9H).LCM8(APCI+)m/z530，532，534[M+H]+；Rt＝3.74minutes.
步骤2：用实施例34步骤3所述的方法，用(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(2-氯喹唑啉-4-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯替代(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(1H-吲唑-5-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯，制备(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(2-氯喹唑啉-4-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮二盐酸盐。1HNMR(CD3OD，400MHz)δ8.16(d，J＝8.4Hz，1H)，7.97(t，J＝8.4Hz，1H)，7.74(d，J＝8.4Hz，1H)，7.69(t，J＝8.4Hz，1H)，7.40(d，J＝8.0Hz，2H)，7.33(d，J＝8.0Hz，2H)，4.74(m，1H)，4.14(m，2H)，4.06(m，1H)，3.91(m，1H)，3.78(m，3H)，3.33(m，1H)，3.17(m，2H).LCMS(APCI+)m/z430，432，434[M+H]+；Rt＝2.24minutes.
实施例56
Figure BDA00001987566301101
(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(2-甲氧基喹唑啉-4-基)-哌嗪-1-基]-丙 -1-酮二盐酸盐的制备
向(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(2-氯喹唑啉-4-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(23mg，0.043mmol)的MeOH(1ml)溶液中加入4N HCl的二
Figure BDA00001987566301102
烷溶液(1ml)。将混合物于室温搅拌2天，然后蒸发，得到标题化合物(14mg，65％)，为白色固体。
1HNMR(CD3OD，400MHz)δ8.17(d，J＝7.2Hz，1H)，7.94(t，J＝7.2Hz，1H)，7.60(d，J＝8.0Hz，2H)，7.39(m，4H)，4.75(m，1H)，4.10-4.35(m，6H)，3.86(m，4H)，3.17(m，3H).LCMS(APCI+)m/z 426，428[M+H]+；Rt＝1.86minutes.
实施例57
(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-(4-喹啉-4-基-哌嗪-1-基)-丙-1-酮的制备
步骤1：向4-氯喹啉(2.0g，12.2mmol)的甲苯(100ml)溶液中加入哌嗪(7.98g，92.7mmol)。将反应混合物加热至回流，并搅拌96小时，此后将其冷却至室温，然后进一步冷却至0℃。将所得混合物过滤，以除去沉淀的盐酸盐。用甲苯洗涤该盐后，合并的滤液用10％乙酸水溶液(2x 25ml)洗涤。合并的萃取液用乙醚(25ml)洗涤，然后通过加入1M NaOH将其碱化至pH 8-10。所得的水性混合物用二氯甲烷(3x25ml)萃取。合并的有机萃取液经干燥(Na2SO4)、过滤并旋转蒸发浓缩。得到粗制残余物4-哌嗪基喹啉，为黄色固体(2.54g，97％)，无需进一步纯化而使用。1H NMR与文献(Abel，M.D.等，Journal of HeterocyclicChemistry(1996)，33(2)，415-420)中报道的相一致。
步骤2：向含悬浮于4-哌嗪基喹啉(1.0当量)的CHCl3溶液中的PS-CDI(Argonaut，1.04mmol/g，2.2当量)的Jones管中加入固体Boc-保护的氨基酸(1.5当量)。将反应混合物于室温振摇15小时，然后真空过滤，树脂用氯仿冲洗，将滤液旋转蒸发浓缩。必要时，该粗制偶联产物经二氧化硅纯化(DCM/EtOAc或DCM/MeOH)。将所得的Boc-氨基酰胺溶于最少量二烷中，并加入4M HCl/二
Figure BDA00001987566301112
烷(10当量)。对悬浮液超声处理5分钟并于室温搅拌12小时，此后将其旋转蒸发浓缩。将固体分散于乙醚中，在氮气压下经过滤分离，减压干燥，得到相应的氨基酰胺，为盐酸盐，其经HPLC分析纯度为90％。Rt 2.36。MS(APCI+)[M+H]+395。Rt 2.36。MS(APCI+)[M+H]+395。
实施例58
1-喹唑啉-4-基-哌啶-4-甲酸(2-氨基-乙基)-(4-氯苄基)-酰胺二盐酸盐的 制备
步骤1：于环境温度下，将三乙胺(12.7ml，91.1mmol)加入到4-氯-喹唑啉(5.00g，30.4mmol)和异哌啶甲酸(isonipecotate)乙酯(4.78g，30.4mmol)的THF(80ml)溶液中。回流12小时后，将混合物真空浓缩，让所得残余物在DCM和0.1M NaOH水溶液之间分配。分离的DCM层经干燥(Na2SO4)、过滤并真空浓缩。将所得固体悬浮于Et2O中并过滤，得到1-喹唑啉-4-基-哌啶-4-甲酸乙酯(8.0g，28.0mmol)。将该物质溶于EtOH(50ml)和THF(50ml)中，然后加入NaOH(3.73g，93.4mmol)的水(50ml)溶液。搅拌12小时后，用1.0N HCl(93.5ml)中和混合物并真空浓缩。除去挥发性有机物后，在所得水溶液中形成白色沉淀。滤出固体并将其风干，得到1-喹唑啉-4-基-哌啶-4-甲酸(6.5g)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ12.28(bs，1H)，8.57(s，1H)，7.91(m，1H)，7.75(m，2H)，7.49(m，1H)，4.13(m，2H)，3.22(m，2H)，2.57(m，1H)，1.93(m，2H)，1.72(m，2H).
步骤2：将亚硫酰氯(1.37ml，18.8mmol)加入到1-喹唑啉-4-基-哌啶-4-甲酸(2.20g，8.55mmol)于DCM(40ml)中的悬浮液中，得到澄清的溶液。搅拌2小时后形成沉淀，滤出沉淀，得到1-喹唑啉-4-基-哌啶-4-羰酰氯盐酸盐，为白色固体(2.0g)。
步骤3：将N-(2-氨基乙基)氨基甲酸叔丁酯(1.00g，6.24mmol)和4-氯苯甲醛(0.90g，6.37mmol)的DCE(10ml)溶液搅拌30分钟，然后一次性加入NaBH(OAc)3(1.98g，9.36mmol)。搅拌12小时后，混合物用0.2N HCl酸化至pH 2，用DCM萃取(3次，每次弃去)。酸性水层用2.0M NaOH碱化至pH 10，用DCM萃取。DCM萃取液经干燥(Na2SO4)、过滤并真空浓缩，得到[2-(4-氯苄基氨基)-乙基]-氨基甲酸叔丁酯，为油状物(1.0g)。LCMS(APCI+)m/z 285，287[M+H]+。
步骤4：将1-喹唑啉-4-基-哌啶-4-羰酰氯盐酸盐(197mg，0.63mmol)加入到于冰浴中冷却的[2-(4-氯苄基氨基)-乙基]-氨基甲酸叔丁酯(180mg，0.63mmol)和DMAP(154mg，1.26mmol)的DCM(6.5ml)溶液中。搅拌12小时后，让混合物于DCM(50ml)和含1ml 1.0M HCl的H2O(80ml)之间分配。排出DCM层，酸性水层用DCM萃取3次。合并的DCM萃取液经干燥(Na2SO4)、过滤并真空浓缩。粗产物用EtOAc作洗脱剂，经色谱纯化(SiO2)，得到{2-[(4-氯苄基)-(1-喹唑啉-4-基-哌啶-4-羰基)-氨基]-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(190mg)。
步骤5：将{2-[(4-氯苄基)-(1-喹唑啉-4-基-哌啶-4-羰基)-氨基]-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(190mg，0.36mmol)溶于DCM(5ml)中，然后加入2.0M HCl的Et2O溶液(2ml)。搅拌12小时后，混合物用DCE稀释并真空浓缩。然后将所得白色固体悬浮于MeCN中并真空浓缩(重复两次)，得到1-喹唑啉-4-基-哌啶-4-甲酸(2-氨基-乙基)-(4-氯苄基)-酰胺二盐酸盐，为白色粉末(120mg)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.83(m，1H)，8.51(bs，2H)，8.20(m，2H)，8.01(m，2H)，7.71(m，1H)，7.48(d，J＝8.3Hz，1H)，7.39(d，J＝8.3Hz，1H)，7.31(d，J＝8.3Hz，1H)，7.25(d，J＝8.3Hz，1H)，4.79(m，2H)，4.55(s，1H)，3.59(m，7H)，3.03(m，1H)，2.90(m，1H)，1.92(m，4H).LCMS(APCI+)m/z424，426[M+H]+.
实施例59
Figure BDA00001987566301131
2-(R)-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)-哌嗪-1-基]- 丙-1-酮二盐酸盐的制备
步骤1：在密封管中将4-氯-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(2.50g，16.4mmol)和N-苄基哌嗪(3.18g，18.0mmol)的混合物于175℃熔融3小时，导致形成结晶固体物质。加入0.1M NaOH水溶液(10ml)后固体溶解，得到悬浮液。经过滤，得到4-(4-苄基-哌嗪-1-基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶，为白色固体(3.90g)。LCMS(APCI+)m/z 293[M+H]+。
步骤2：将4-(4-苄基-哌嗪-1-基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(3.90g，13.3mmol)和Pd(OH)2/C(937mg，1.33mmol)的MeOH(60ml)溶液在1个大气压氢气下搅拌2天。混合物用MeOH稀释，经硅藻土过滤并将滤液真空浓缩，得到4-哌嗪-1-基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶，为固体(100mg，保持为游离碱)。将残留物质悬浮于MeOH中并用2.0M HCl的Et2O处理。将该混合物真空浓缩，得到4-哌嗪-1-基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶二盐酸盐(2.30g)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ11.5(bs，1H)，9.43(bs，2H)，7.96(d，J＝5.4Hz，1H)，7.25(d，J＝3.3Hz，1H)，6.49(d，J＝3.4Hz，1H)，6.45(d，J＝5.4Hz，1H)，3.56(bs，4H)，3.21(bs，4H).
步骤3：将PyBrop(407mg，0.87mmol)一次性加入到于冰浴中冷却的(R)-N-Boc-4-氯苯丙氨酸(458mg，1.53mmol)和4-哌嗪-1-基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(200mg，0.73mmol)的DCM(5ml)溶液中。然后滴入DIEA(0.66ml，3.78mmol)，除去冰浴，将混合物于环境温度下搅拌12小时。混合物用DCM稀释，用0.1N HCl洗涤。分离的DCM层经干燥(Na2SO4)、过滤并真空浓缩。将该物质溶于MeOH(4ml)中，然后加入一水LiOH(122mg，2.91mmol)的H2O(2ml)溶液，然后搅拌12小时。将混合物真空浓缩并经色谱纯化(SiO2)，用2％MeOH/DCM、然后用5％MeOH/DCM作为洗脱剂。将所得物质溶于DCM(4ml)和2.0M HCl的Et2O(2ml)溶液中，然后搅拌12小时。将混合物真空浓缩并经色谱纯化(SiO2)，用10％MeOH/DCM、然后用10％(7NNH3/MeOH)/DCM作为洗脱剂。经纯化的物质溶于MeOH中，加入2.0N HCl的Et2O溶液，然后真空浓缩。将所得玻璃状物悬浮于Et2O中并真空浓缩(重复两次)，得到2-(R)-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮二盐酸盐，为灰白色粉末(50mg)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ12.6(s，1H) 8.56(bs，3H)，8.03(d，J＝7.1Hz，1H)，7.38(m，3H)，7.32(m，2H)，6.84(s，1H)，6.69(d，J＝7.1Hz，1H)，4.63(bs，1H)，3.88-3.58(m，7H)，3.33(m，1H)，3.14(m，1H)，3.05(m，1H).LCMS(APCI+)m/z384，386[M+H]+.
实施例60
Figure BDA00001987566301151
3-氨基-1-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-2-对甲苯基-丙-1-酮二盐酸盐的制 备
步骤1：将n-BuLi(1.60M的己烷溶液，40.7ml，65.1mmol)于0℃加入到二异丙胺(9.4ml，67.0)的280ml THF溶液中。将混合物于0℃搅拌30分钟，然后冷却至-78℃。通过注射器将对甲苯基-乙酸甲酯(10.48g，63.8mmol；由对甲苯基-乙酸制备)的10ml THF溶液加入到-78℃的LDA溶液中，然后搅拌45分钟。通过注射器加入纯净的溴乙酸叔丁酯(28ml)，将反应物于-78℃搅拌15分钟。除去该浴，让反应物升温至室温。再搅拌5小时后，用饱和氯化铵溶液猝灭反应混合物，真空除去有机物。油性混合物用乙酸乙酯萃取，并合并有机相。有机物经硫酸镁干燥、过滤并真空浓缩。粗制油状物经硅胶纯化(25∶1己烷∶EtOAc)，得到2-对甲苯基-琥珀酸4-叔丁酯1-甲酯，为浅黄色油状物(15.3g，86％)。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ7.16(d，J＝8.0Hz，2H)，7.12(d，J＝8.0Hz，2H)，3.99(dd，J＝10.4，5.6Hz，1H)，3.66(s，3H)，3.09(dd，J＝16.8，10.4Hz，1H)，2.57(dd，J＝16.8，5.6Hz，1H)，2.32(s，3H)，1.41(m，1H).HPLC Rt＝3.71min.
步骤2：2-对甲苯基-琥珀酸4-叔丁酯1-甲酯(15.3g，54.8mmol)的110ml DCM溶液用纯净的TFA(63ml)于室温处理。将混合物搅拌5小时至反应完成，然后将反应混合物浓缩并真空干燥过夜，得到白色固体。将固体悬浮于190ml甲苯中，冷却至0℃，连续用二苯基磷酰叠氮(13.4ml，62.1mmol)和三乙胺(19.7ml，141mmol)处理。让反应混合物(均质的)升温至室温，然后搅拌4小时至反应完成。该溶液用1％柠檬酸溶液猝灭并用EtOAc萃取。合并的有机物经盐水洗涤、经硫酸钠干燥、过滤并真空浓缩，得到浅褐色油状物。将粗制叠氮化物溶于190ml叔丁醇中，用纯SnCl4(0.25ml，2.82mmol)处理，然后小心加热至90℃，同时放出氮气。将混合物于90℃搅拌2.5小时，然后冷却至室温。溶液用饱和NaHCO3溶液猝灭，然后浓缩。油性混合物用EtOAc萃取，合并的有机物用盐水洗涤、经硫酸镁干燥、过滤并真空浓缩。残余物经硅胶纯化(9∶1己烷∶EtOAc)，得到3-叔丁氧羰基氨基-2-对甲苯基-丙酸甲酯，为浅褐色油状物(12.3g，74％)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ7.14(s，4H)，4.86(brs，1H)，3.85(m，1H)，3.68(s，3H)，3.58(m，1H)，3.49(m，1H)，2.33(s，3H)，1.42(s，9H).HPLC Rt＝3.31min.
步骤3：将3-叔丁氧羰基氨基-2-对甲苯基-丙酸甲酯(12.3g，41.9mmol)溶于200ml 1∶1THF∶水中，并用一水氢氧化锂(2.64g，62.9mmol)于室温处理。将反应物于室温搅拌过夜至反应完成，然后真空浓缩。油性混合物用水进行分配，用EtOAc洗涤(弃去)。水层用固体KHSO4处理，直至pH＜2，然后用EtOAc萃取。合并的有机物经硫酸钠干燥、过滤并真空浓缩，得到3-叔丁氧羰基氨基-2-对甲苯基-丙酸，为白色固体(10.95g，93％)。1H NMR(旋转异构体的约1∶1混合物)(CDCl3，400MHz)δ10.40-8.40(brs，1H)，7.16(d，J＝8.4Hz，H)，7.13(d，J＝8.4Hz，2H)，6.80or4.91(brs，1H)，3.86and 3.75(m，1H)，3.55(m，1H)，3.47(m，2H)，2.31(s，3H)，1.44and 1.41(s，9H).LCMS(APCI-)m/z557[2M-H]-.HPLC Rt＝2.80min.
步骤4：将4-哌嗪-1-基-喹唑啉二盐酸盐(50mg，0.174mmol，用2N NaOH使其成为游离碱，用DCM萃取)、HOBt一水合物(27mg，0.174mmol)和3-叔丁氧羰基氨基-2-对甲苯基-丙酸(58mg，0.209mmol)溶于1.3ml DCM/3-5滴THF中。反应混合物用DCC(43mg，0.209mmol)处理，并于室温搅拌2.5小时至反应完成。混合物用DCM稀释、通过压缩Celite真空过滤并用DCM冲洗。将滤液与2N氢氧化钠溶液一起搅拌5分钟，转移至分液漏斗中，用DCM萃取。合并的有机物经硫酸钠干燥、过滤并浓缩。残余物经硅胶纯化(1∶9DCM∶EtOAc)，得到3-Boc-氨基-1-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-2-对甲苯基-丙-1-酮。将该物质溶于1.0ml 1，4-二烷中并用1.0ml 4M HCl的1，4-二
Figure BDA00001987566301172
烷溶液处理(沉淀)。将混合物于室温搅拌过夜至反应完成，然后浓缩至干。将固体溶于最少量MeOH中，然后用乙醚研磨。所得的固体在氮气压下经玻璃漏斗过滤分离，用乙醚冲洗并真空干燥，得到3-氨基-1-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-2-对甲苯基-丙-1-酮二盐酸盐，为浅黄色粉末(60mg，77％)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.84(s，1H)，8.16(d，J＝8.4Hz，1H)，8.00(m，4H)，7.91(d，J＝8.0Hz，1H)，7.69(t，J＝8.0Hz，1H)，7.20(s，4H)，4.40(m，1H)，4.14(m，3H)，3.81(m，4H)，3.45(m，2H)，2.94(m，1H)，2.28(s，3H).LCMS(APCI+)m/z 376[M+H]+.HPLC Rt＝1.67min.
实施例61
Figure BDA00001987566301173
4-氨基-2-(4-氯苯基)-1-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-丁-1-酮的制备
步骤1：将(4-氯苯基)-乙酸(20.0g，106mmol)于环境温度下溶于220ml乙醇中。加入催化量的硫酸(10滴)，得到浅黄色溶液。将反应物搅拌过夜至反应完成，然后浓缩至30ml。让浓缩物于乙酸乙酯和半饱和NaHCO3溶液之间分配。水层用乙酸乙酯萃取，合并有机相。有机相用水、盐水洗涤，分离、经硫酸镁干燥并真空浓缩，得到所需的纯的(4-氯苯基)-乙酸乙酯，为浅黄色油状物(21.0g，99％)。
1HNMR(CDCl3，400MHz)δ7.29(d，J＝8.4Hz，2H)，7.22(d，J＝8.4Hz，2H)，4.15(q，J＝7.2Hz，2H)，3.58(s，2H)，1.25(t，J＝7.2Hz，3H).
步骤2：将(4-氯苯基)-乙酸乙酯(9.52g，47.9mmol)溶于80ml THF中，冷却至0℃，用叔丁醇钾(538mg，4.79mmol)处理。将所得有机溶液于0℃搅拌15分钟，然后冷却至-78℃。在10分钟内，以三等份加入丙烯酸叔丁酯(7.72ml，52.7mmol)。将溶液搅拌过夜，同时缓慢加热至室温。将反应溶液真空浓缩，让残余物于乙酸乙酯和饱和氯化铵溶液之间分配。水层用乙酸乙酯萃取并合并有机相。有机物用盐水洗涤、分离、经硫酸镁干燥、过滤并真空浓缩。残余物经色谱纯化(硅胶，用9∶1己烷∶EtOAc洗脱)，得到2-(4-氯苯基)-戊二酸5-叔丁酯1-乙酯，其纯度超过80％(9.00g，57％)。
1H NMR (CDCl3，400MHz)δ7.31-7.21(m，4H)，4.13(q，J＝7.6Hz，2H)，3.58(t，J＝8.0Hz，1H)，2.27(m，1H)，2.16(t，J＝7.2Hz，2H)，2.04(m，1H)，1.43(s，9H)1.21(t，J＝7.6Hz，3H).
步骤3：将2-(4-氯苯基)-戊二酸5-叔丁酯1-乙酯(9.00g，27.5mmol)于室温下溶于40ml DCM中，缓慢用40ml TFA处理。将溶液搅拌3小时至反应完成，然后真空浓缩。残余物在真空下贮存过夜，然后溶于80ml甲苯中。让溶液于氮气下脱气，冷却至0℃，用三乙胺(8.44ml，60.6mmol)处理，然后用二苯基磷酰叠氮(6.53ml，30.3mmol)处理。让反应物升温至室温，搅拌3小时，然后真空浓缩。将残余物再次溶于乙酸乙酯中，用1w/w％柠檬酸溶液洗涤。有机物经硫酸镁干燥、过滤并浓缩(＜30℃)，得到中间体叠氮化物，为黄色油状物。立即将该物质溶于80ml叔丁醇中，用SnCl4(1.65ml 1.0M的DCM溶液，1.65mmol)处理。将溶液加热至80℃达1小时，导致放出氮气。反应混合物用饱和NaHCO3(20ml)处理，然后真空浓缩，得到凝胶状物。让残余物在乙酸乙酯和水之间分配，水层用乙酸乙酯萃取。有机物用盐水洗涤、分离、经硫酸镁干燥、过滤并真空浓缩。残余物经色谱纯化(硅胶，用4∶1己烷∶EtOAc洗脱，Rf＝0.20)，得到纯的4-叔丁氧羰基氨基-2-(4-氯苯基)-丁酸乙酯，为白色油状物(5.61g，60％)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ7.29(d，J＝8.4Hz，2H)，7.23(d，J＝8.4Hz，2H)，4.51(brs，1H)，4.12(m，2H)，3.57(t，J＝7.6Hz，1H)，3.09(m，2H)，2.25(m，1H)，1.93(m，1H)，1.43(s，9H)，1.20(t，J＝7.2Hz，3H).
步骤4：将4-叔丁氧羰基氨基-2-(4-氯苯基)-丁酸乙酯(5.61g，16.4mmol)溶于40ml THF和10ml水中，然后冷却至0℃。混合物用一水氢氧化锂(1.38g，32.8mmol)处理，得到黄色溶液。除去冰浴，将混合物搅拌过夜使其达到室温。将反应混合物浓缩至大约15ml并用水稀释。水层用乙酸乙酯稀释(弃去)，然后用3M HCl溶液处理至酸性(pH＝2-3)。所得的白色沉淀用乙酸乙酯萃取并合并有机相。有机物用盐水洗涤、分离、经硫酸镁干燥、过滤并真空浓缩，得到4-叔丁氧羰基氨基-2-(4-氯苯基)-丁酸，为无色油状物。将该物质再溶于最少量热(60℃)己烷中并再次浓缩，得到纯的所需产物，为白色泡沫状物。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ12.05-9.51(brs，1H)，7.31-7.25(m，4H)，4.59(brs，1H)，3.61(d，J＝7.6Hz，1H)，3.14(brs，2H)，2.28(m，1H)，1.92(m，1H)，1.43(s，9H).
步骤5：将4-哌嗪-1-基-喹唑啉(60mg，0.21mmol)和4-叔丁氧羰基氨基-2-(4-氯苯基)-丁酸(62mg，0.21mmol)溶于1.5ml DCM中并冷却至0℃。溶液分别用PyBrop(98mg，0.21mmol)和DIEA(74μl，0.42mmol)处理。让混合物升温过夜至室温，让内容物于乙酸乙酯和饱和氯化铵溶液之间分配。水层用乙酸乙酯萃取并合并有机相。有机物用NaHCO3溶液洗涤、分离、经Na2SO4干燥、过滤并真空浓缩。残余物经色谱纯化(硅胶，用己烷/EtOAc梯度洗脱)，得到纯Boc-中间体，为无色油状物。将该物质溶于1.0ml 1，4-二
Figure BDA00001987566301191
烷中并用1.0ml 4M HCl/二烷(2.79mmol)处理。将融合于室温搅拌过夜至反应完成。所得的悬浮液用乙醚稀释并经真空过滤分离。让固体填料于干燥氮气流下干燥，得到纯的4-氨基-2-(4-氯苯基)-1-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-丁-1-酮二盐酸盐，为白色固体(32mg，37％)。将少量该产物变为游离碱以供分析用。1HNMR(CDCl3，400MHz)δ8.73(s，1H)，7.91(d，J＝8.4Hz，1H)，7.81(d，J＝8.4Hz，1H)，7.75(t，J＝7.6Hz，1H)，7.47(t，J＝7.6Hz，1H)，7.32(d，J＝8.8Hz，2H)，7.25(d，J＝8.8Hz，2H)，4.01(dd，J＝7.2Hz，1H)，3.94(m，1H)，3.81(m，1H)，3.71(m，3H)，3.62(m，2H)，3.25(m，1H)，2.69(t，J＝6.8Hz，2H)，2.26(m，1H)，1.84(m，1H)，1.40(brs，2H).LCMS(APCI+)m/z410[M+H]+；Rt＝1.64min.
实施例62
Figure BDA00001987566301201
(3E)-4-苯基-2-哌嗪-1-基-1-(4-喹唑啉-4-基哌嗪-1-基)-丁-3-烯-1-酮三盐 酸盐的制备
采用实施例1A中所述的方法，用(3E)-2-(4-Boc-哌嗪基)-4-苯基丁-3-烯酸，制备(3E)-4-苯基-2-哌嗪-1-基-1-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-丁-3-烯-1-酮三盐酸盐(17mg，47％)。LCMS(APCI+)m/z 443[M+H]+。HPLC Rt 2.31min。
实施例63
Figure BDA00001987566301202
3-氨基-4-苯基-N-(1-喹唑啉-4-基-哌啶-4-基)-丁酰胺二盐酸盐的制备
步骤1：向4-氯喹唑啉(2.0g，12.2mmol)的45ml IPA溶液中加入Boc-4-氨基哌啶(2.56g，12.8mmol)和DIEA(3.2ml，18.2mmol)。将反应混合物加热至回流并搅拌16小时，此后将反应混合物冷却至室温并浓缩。将残余物溶于EtOAc中，用水、1N NaOH、盐水洗涤，干燥(Na2SO4)、过滤并浓缩，得到4-(4-Boc-氨基哌啶-1-基)喹唑啉，该物质直接用于下一步骤。
步骤2：向粗制4-(4-Boc-氨基哌啶-1-基)喹唑啉的40ml 1∶1二
Figure BDA00001987566301203
烷∶DCM溶液中加入20ml 4M HCl/二
Figure BDA00001987566301204
烷。将所得悬浮液于室温搅拌14小时，然后将其浓缩至干。将残余物在DCM和1M NaOH中搅拌，分离各相，水相用DCM萃取。合并的有机相经干燥(Na2SO4)、过滤并浓缩。残余物经硅胶纯化(8∶1EtOAc∶MeOH)，得到4-(4-氨基哌啶-1-基)喹唑啉(2.7g，96％)，为黄色油状物。
1HNMR(CDCl3，400MHzδ8.73(s，1H)，7.92-7.85(m，2H)，7.76-7.70(m，1H)，7.48-7.42(m，1H)，4.35-4.26(m，2H)，3.26-3.17(m，2H)，3.09-2.99(m，1H)，2.05-1.96(m，2H)，1.66-1.52(m，2H)，1.47(brs，2H).LCMS(APCI+)m/z 329[M+H]+.HPLC Rt1.57min.
步骤3：由4-(4-氨基哌啶-1-基)喹唑啉，按照实施例1A步骤2中所用方法，用Boc-β-高苯丙氨酸，制备3-氨基-4-苯基-N-(1-喹唑啉-4-基-哌啶-4-基)-丁酰胺二盐酸盐(10mg，33％)。LCMS(APCI+)m/z390[M+H]+。HPLC Rt 1.94min。
实施例64
Figure BDA00001987566301211
3-氨基-4-苯基-N-(1-喹唑啉-4-基-哌啶-4-基甲基)-丁酰胺二盐酸盐的制 备
采用所述用于制备实施例63的方法，在SNAr步骤中用4-Boc-氨基甲基哌啶，制备3-氨基-4-苯基-N-(1-喹唑啉-4-基-哌啶-4-基甲基)-丁酰胺二盐酸盐(13mg，42％)。LCMS(APCI+)m/z 404[M+H]+。HPLCRt 1.98min。
实施例65
Figure BDA00001987566301221
3-氨基-4-苯基-1-[4-(喹唑啉-4-基氨基)-哌啶-1-基]-丁-1-酮二盐酸盐的 制备
采用所述用于制备实施例63的方法，在SNAr步骤中用4-氨基-1-Boc-哌啶，制备3-氨基-4-苯基-1-[4-(喹唑啉-4-基氨基)-哌啶-1-基]-丁-1-酮二盐酸盐(19mg，59％)。LCMS(APCI+)m/z 390[M+H]+。HPLCRt 2.24min。
实施例66
Figure BDA00001987566301222
3-氨基-4-苯基-1-[3-(喹唑啉-4-基氨基)-吡咯烷-1-基]-丁-1-酮二盐酸盐 的制备
采用所述用于制备实施例63的方法，在SNAr步骤中用3-氨基-Boc-吡咯烷，制备3-氨基-4-苯基-1-[3-(喹唑啉-4-基氨基)-吡咯烷-1-基]-丁-1-酮二盐酸盐(16mg，51％)。LCMS(APCI+)m/z 376[M+H]+。HPLC Rt 2.17min
实施例67
Figure BDA00001987566301231
3-氨基-4-苯基-N-[3-(喹唑啉-4-基氨基)-丙基]-丁酰胺二盐酸盐的制备
采用所述用于制备实施例63的方法，在SNAr步骤中用Boc-丙二胺，制备3-氨基-4-苯基-N-[3-(喹唑啉-4-基氨基)-丙基]-丁酰胺二盐酸盐(14mg，46％)。LCMS(APCI+)m/z 364[M+H]+。HPLC Rt 2.14min。
实施例68
Figure BDA00001987566301232
3-氨基-4-苯基-N-[3-(喹唑啉-4-基氨基)-乙基]-丁酰胺二盐酸盐的制备
采用所述用于制备实施例63的方法，在SNAr步骤中用Boc-乙二胺，制备3-氨基-4-苯基-N-[3-(喹唑啉-4-基氨基)-乙基]-丁酰胺二盐酸盐(11mg，37％)。LCMS(APCI+)m/z 350[M+H]+。HPLC Rt 2.07min。
实施例69
Figure BDA00001987566301233
3-氨基-4-苯基-N-(3-喹唑啉-4-基-3-氮杂二环[3.1.0]己-6-基)-丁酰胺二 盐酸盐的制备
采用所述用于制备实施例63的方法，在SNAr步骤中用(1α，5α，6α)-6-Boc-氨基-3-氮杂二环[3.1.0]己烷(按照文献Tamim F.Braish等1996，1100-1102中所述方法制备)，制备3-氨基-4-苯基-N-(3-喹唑啉-4-基-3-氮杂二环[3.1.0]己-6-基)-丁酰胺二盐酸盐(19mg，59％，非对映体混合物)。LCMS(APCI+)m/z 388[M+H]+。HPLC Rt 2.13，2.23min。
实施例70
Figure BDA00001987566301241
(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1- 基]-丙-1-酮二盐酸盐的制备
步骤1：将含有4-氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(5.0g，32.6mmol)、Boc-哌嗪(15g，81mmol)和DIEA(19.8ml，114mmol)的130ml IPA溶液于80℃搅拌18小时，然后将反应物浓缩。粗产物在硅胶上快速纯化(20∶1DCM∶MeOH)，得到黄色粉末，将其从MeOH/最少量DCM中重结晶，得到4-Boc-哌嗪-1-基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶，为白色晶状固体(3次收获)。
1HNMR(CDCl3，400MHz)δ11.37(brs，1H)，8.34(s，1H)，7.12(d，J＝3.3Hz，1H)，6.49(d，J＝3.5Hz，1H)，4.01-3.94(m，4H)，3.64-3.56(m，4H)，1.48(s，9H).HPLC Rt 2.05min.
步骤2：向4-Boc-哌嗪-1-基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶的225ml DCM溶液中用加液漏斗滴加120ml 4M HCl/二
Figure BDA00001987566301242
烷，将所得悬浮液于室温搅拌18小时。然后反应混合物用乙醚稀释，在氮气压下经玻璃漏斗过滤分离固体，固体用乙醚冲洗并真空干燥，得到4-哌嗪-1-基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶二盐酸盐(8.44g，94％)，为白色粉末。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ12.75(1H，s)，9.63(2H，s)，8.44(1H，s)，7.50(1H，s)，6.95(1H，s)，4.26-4.21(4H，m)，3.33-3.26(4H，m).LC/MS(APCI+)m/z204[M+H]+.
步骤3：向4-哌嗪-1-基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶二盐酸盐(30mg，0.11mmol)、HOBt·H2O(17mg，0.11mmol)、TEA(45μl，0.33mmol)和(D)-Boc-4-氯苯丙氨酸(39mg，0.13mmol)的1.6ml DMF溶液中加入DCC(27mg，0.13mmol)。将反应混合物于室温搅拌4小时，然后将其浓缩。将残余物悬浮于DCM中，通过棉塞真空过滤除去固体，并用DCM冲洗。将滤液浓缩，粗产物在硅胶上纯化(1∶1至1∶4DCM∶EtOAc)，得到(2R)-2-Boc-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮，其用于下一步骤。
步骤4：向(2R)-2-Boc-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮的1ml二烷中加入1ml 4M HCl/二
Figure BDA00001987566301252
烷。将所得悬浮液于室温搅拌过夜，然后浓缩至干。将固体溶于最少量MeOH中，然后用乙醚研磨。所得的固体在氮气压下经玻璃漏斗过滤分离，用乙醚冲洗并真空干燥，得到(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮二盐酸盐(19mg，38％)，为粉红色粉末。
1HNMR(D2O，400MHz)δ8.16(1H，s)，7.27(1H，s)，7.18-7.11(4H，m)，6.68(1H，s)，4.60-4.56(1H，m)，3.98-3.69(4H，m)，3.61-3.52(2H，m)，3.45-3.37(1H，m)，3.20-3.12(1H，m)，3.00-2.91(2H，m).LCMS(APCI+)m/z385[M+H]+.HPLC Rt 1.68min.
实施例71
Figure BDA00001987566301261
(S)-2-氨基甲基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌嗪 -1-基]-丙-1-酮二盐酸盐的制备
步骤1：在氮气、-78℃下，将nBuLi(1.6M的己烷溶液，20ml，32mmol)加入到(4R，5S)-4-甲基-5-苯基-
Figure BDA00001987566301262
唑烷-2-酮(5.2g，29mmol)的THF(60ml)溶液中。将溶液于-78℃搅拌10分钟，然后加入3-(4-氯苯基)-丙酰氯(6.0g，29mmol)，让溶液在1小时内升温至室温。溶液用饱和氯化铵水溶液猝灭，萃取到DCM(2x 200ml)中，经硫酸钠干燥并真空浓缩。产物经硅胶柱色谱纯化(50％EtOAc/己烷)，得到(4R，5S)-3-[3-(4-氯苯基)-丙酰基]-4-甲基-5-苯基-
Figure BDA00001987566301263
唑烷-2-酮(4.8g，48％)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ7.44-7.35(3H，m)，7.30-7.24(4H，m)，7.19(2H，d，J8.0Hz)，5.64(1H，d，J7.4Hz)，4.77-4.71(1H，m)，3.34-3.17(2H，m)，2.98(2H，t，J7.7Hz)，0.88(3H，d，J6.7Hz.)
步骤2：在氮气、-78℃下，NaHMDS(1.0M，17ml，17mmol)加入到(4R，5S)-3-[3-(4-氯苯基)-丙酰基]-4-甲基-5-苯基-
Figure BDA00001987566301264
唑烷-2-酮(4.8g，14mmol)的THF(200ml)搅拌溶液中。于-78℃搅拌45分钟，在10分钟内滴加溴乙酸叔丁酯(2.5ml，17mmol)。让溶液在4小时内升温至-20℃，用饱和氯化铵水溶液猝灭。将产物萃取到EtOAc(2x 300ml)中，经硫酸钠干燥、真空浓缩并经硅胶柱色谱纯化(20％EtOAc/己烷)，得到(3S)-3-(4-氯苄基)-4-((4R，5S)-4-甲基-2-氧代-5-苯基-唑烷-3-基)-4-氧代-丁酸叔丁酯(5.1g，80％)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ7.44-7.21(9H，m)，5.45(1H，d，J7.3Hz)，4.68-4.62(1H，m)，4.51-4.42(1H，m)，3.01(1H，dd，J 13.0and 6.2Hz)，2.78(1H，dd，J16.7and10.6Hz)，2.63(1H，dd，J13.2and9.0Hz)，2.32(1H，dd，J6.7and 4.3Hz)，1.38(9H，s)，0.89(3H，d，J6.6Hz.)
步骤3：(3S)-3-(4-氯苄基)-4-((4R，5S)-4-甲基-2-氧代-5-苯基-
Figure BDA00001987566301271
唑烷-3-基)-4-氧代-丁酸叔丁酯(5.1g，11mmol)的DCM(100ml)溶液用TFA(50ml)处理，并于室温搅拌1小时。将溶液真空浓缩、溶解于甲苯中，然后真空浓缩。置于高真空下6小时，得到(3S)-3-(4-氯苄基)-4-((4R，5S)-4-甲基-2-氧代-5-苯基-
Figure BDA00001987566301272
唑烷-3-基)-4-氧代-丁酸(4.5g，100％)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ7.44-7.37(3H，m)，7.31-7.21(6H，m)，5.48(1H，d，J6.9Hz)，4.70-4.63(1H，m)，4.50-4.42(1H，m)，3.05(1H，dd，J13.3and 6.2Hz)，2.89(1H，dd，J17.7and 10.6Hz)，2.63(1H，dd，J13.2and 9.0Hz)，2.43(1H，dd，J17.6and 4.4Hz)，0.86(3H，d，J6.6Hz.)
步骤4：在氮气、-0℃下，将NEt3(700μl，5.0mmol)加入到(3S)-3-(4-氯苄基)-4-((4R，5S)-4-甲基-2-氧代-5-苯基-唑烷-3-基)-4-氧代-丁酸(1.0g，2.5mmol)的PhMe(50ml)搅拌溶液中。然后加入二苯基磷酰叠氮(650μl，3.0mmol)。将溶液于0℃搅拌15分钟，然后于室温搅拌过夜。溶液用1％柠檬酸洗涤，萃取到EtOAc中并真空浓缩。将其溶于tBuOH(50ml)中，加入SnCl4(1.0M的DCM溶液，0.1ml)，然后于85℃搅拌并加热5小时。冷却至室温，用饱和碳酸氢盐溶液猝灭。于室温搅拌10分钟，然后真空浓缩。将产物溶于水(100ml)中，并萃取到EtOAc(2x 200ml)中。经硫酸钠干燥并真空浓缩。产物经硅胶柱色谱纯化(10％EtOAc/己烷)，然后在Biotage上纯化，得到[(2S)-2-(4-氯苄基)-3-((4R，5S)-4-甲基-2-氧代-5-苯基-
Figure BDA00001987566301274
唑烷-3-基)-3-氧代-丙基]-氨基甲酸叔丁酯(300mg，25％)。LCMS(APCI+)m/z 373[M-Boc+H]+；Rt：3.92min.
步骤5：于0℃下，向[(2S)-2-(4-氯苄基)-3-((4R，5S)-4-甲基-2-氧代-5-苯基-
Figure BDA00001987566301275
唑烷-3-基)-3-氧代-丙基]-氨基甲酸叔丁酯(300mg，0.63mmol)的THF/H2O(30/10ml)溶液中加入LiOH(80mg，1.9mmol)和H2O2(30％体积，3.0ml，0.63mmol)，于0℃搅拌30分钟。然后缓慢并小心地加入Na2SO3(饱和溶液，10ml)。用EtOAc(100ml)稀释并萃取到水(2x 100ml)中。将水层酸化(1N HCl)，萃取到EtOAc(3x 100ml)中。经硫酸钠干燥并真空浓缩，得到(S)-2-(叔丁氧羰基氨基-甲基)-3-(4-氯苯基)-丙酸(150mg，75％)。LCMS(APCI-)m/z 322[M-Boc+H]-；Rt：2.23min。
步骤6：于室温下，将NEt3(150μl，1.1mmol)加入到4-哌嗪-1-基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶二盐酸盐(100mg，0.36mmol)、(S)-2-(叔丁氧羰基氨基-甲基)-3-(4-氯苯基)-丙酸(130mg，0.40mmol)、EDCI(83mg，0.44mmol)和HOBt(59mg，0.44mmol)的DMF(15ml)搅拌悬浮液中。于室温搅拌过夜，将其倒入EtOAc(100ml)中，用水(100ml)、1N NaOH(50ml)洗涤、经Na2SO4干燥、真空浓缩、经硅胶柱色谱纯化(100％EtOAc)，得到(S)-{2-(4-氯苄基)-3-氧代-3-[4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-丙基}-氨基甲酸叔丁酯。LCMS(APCI+)m/z 499[M+H]+；Rt：2.70分钟。将其溶于DCM(50ml)中，与TFA(5ml)一起搅拌过夜。倒入EtOAc(100ml)中，用1NNaOH(2x 100ml)洗涤，经硫酸钠干燥并真空浓缩。生成盐酸盐(Et2O.HCl，2M的乙醚溶液)，得到(S)-2-氨基甲基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮二盐酸盐(100mg，59％)。LCMS(APCI+)m/z 399[M+H]+；Rt：1.82min。[游离碱：
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ9.97(1H，br.s)，8.32(1H，s)，7.24(2H，d，J7.4Hz)，7.13(2H，d，J7.4Hz)，7.09(1H，d，J2.4Hz)，6.45(1H，d，J2.3Hz)，4.00-3.68(5H，m)，3.60-3.53(1H，m)，3.46-3.40(1H，m)，3.33-3.27(1H，m)，3.16-3.05(2H，m)，2.92-2.83(2H，m)，2.77(1H，dd，J13.3and5.5Hz.)]
实施例72
Figure BDA00001987566301291
(R)-2-氨基-1-[4-(3-溴-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-3-(4-氯 苯基)-丙-1-酮二盐酸盐的制备
步骤1：将4-羟基吡唑并嘧啶(2.5g，18mmol)溶于POCl3(34ml，0.37mol)和N，N-二甲基苯胺(4.7ml，37mmol)中。将该混合物加热至回流(120℃)达1.5小时，得到暗红色溶液。将混合物浓缩至粘稠油状物并于冰浴中冷却至0℃。将油状物倒入冰-水混合物中并搅拌5分钟。酸性熔融体用乙醚(4x 100ml)萃取，合并有机相。有机物依次用冷水、冷的半饱和NaHCO3溶液、盐水洗涤，经硫酸镁干燥、过滤并真空浓缩，得到4-氯-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶(1.1g，39％)，为浅黄色粉末。1HNMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.79(1H，s)，8.41(1H，s)。
步骤2：向4-氯-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶(1.1g，7.1mmol)的CHCl3(50ml)悬浮液中加入NBS(1.49g，8.4mmol)。将混合物于室温搅拌5小时，冷却至0℃，固体经真空过滤分离、用冷氯仿冲洗并风干。固体经硅胶柱色谱纯化(50％EtOAc/己烷)，得到3-溴-4-氯-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶(1.3，77％)。
步骤3：于0℃，向3-溴-4-氯-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶(1.3g，5.5mmol)的DMF(42ml)溶液中分次加入NaH(180mg，7.7mmol)。将反应混合物于0℃搅拌5分钟，然后于室温搅拌1.5小时，此后再将其冷却至0℃。加入纯净的PhSO2Cl(0.7ml，5.6mmol)，将反应混合物升温至室温并搅拌过夜。反应物用饱和氯化铵水溶液猝灭，再用水稀释。所得的沉淀经真空过滤分离，得到1-苯磺酰基-3-溴-4-氯-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶(1.8g，88％)。
1HNMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.11(1H，s)，8.11(2H，d，J8.1Hz)，7.84(1H，t，J7.5Hz)，7.70(2H，t，J8.0Hz.)
步骤4：将1-苯磺酰基-3-溴-4-氯-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶(1.8g，4.8mmol)、Boc-哌嗪(1.4g，7.2mmol)和DIPEA(2.1ml，12mmol)的IPA(40ml)溶液于回流下搅拌并加热过夜。将反应混合物冷却至-10℃，固体经真空过滤分离、用冷IPA冲洗并进一步在高真空下干燥，得到4-(1-苯磺酰基-3-溴-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.7g，67％)，为白色粉末。LCMS(APCI+)m/z523and 525[M+H]+；Rt：3.57min.1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.53(1H，s)，8.23(2H，d，J 8.5Hz)，7.65(1H，t，J6.9Hz)，7.54(2H，t，J7.8Hz)，3.82-3.79(4H，m)，3.60-3.57(4H，m)，1.48(9H，s.)
步骤5：将无水HCl(4N的二烷溶液，10ml)加入到1-苯磺酰基-3-溴-4-哌嗪-1-基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶(210mg，0.40mmol)的MeOH(20ml)搅拌溶液中，并于室温搅拌过夜。将悬浮液真空浓缩，得到1-苯磺酰基-3-溴-4-哌嗪-1-基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶二盐酸盐(200mg，100％)。LCMS(APCI+)m/z 423和425[M+H]+；Rt：1.98min。
步骤6：于室温下，将DIPEA(84μl，0.48mmol)加入到1-苯磺酰基-3-溴-4-哌嗪-1-基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶二盐酸盐(40mg，0.081mmol)和(D)-2-叔丁氧羰基氨基-3-(4-氯苯基)-丙酸(27mg，0.089mmol)的DCM(10ml)悬浮液中。然后加入HBTU(34mg，0.089mmol)，将反应物于室温搅拌过夜。加入MeOH(5ml)和3M LiOH(3ml)，将混合物于50℃搅拌并加热2小时。混合物用饱和NaHCO3水溶液(10ml)稀释，萃取到DCM中，经硫酸钠干燥并真空浓缩。粗制混合物经硅胶柱色谱纯化(50％EtOAc/己烷)，得到(R)-[2-[4-(3-溴-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-1-(4-氯苄基)-2-氧代-乙基]-氨基甲酸叔丁酯。LCMS(APCI+)m/z 564和566[M+H]+；Rt：3.04min。将其溶于MeOH(10ml)中并用无水HCl(4M的二
Figure BDA00001987566301302
烷溶液，20ml)处理。将溶液于室温搅拌过夜并真空浓缩，得到(R)-2-氨基-1-[4-(3-溴-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-3-(4-氯苯基)-丙-1-酮二盐酸盐(13mg，30％)。LCMS(APCI+)m/z 464和466[M+H]+；Rt：2.00min。
实施例73
(S)-2-氨基甲基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(5-甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4- 基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮二盐酸盐的制备
步骤1：向4-氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(2.5g，16mmol)的CDCl3(65ml)溶液中加入NBS(2.9g，16mmol)，将反应混合物于回流下搅拌并加热2.5小时。将混合物冷却至室温，固体经真空过滤分离、用冷CHCl3冲洗并风干，得到5-溴-4-氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(3.0g，79％)。
LCMS(APCI+)m/z232and 234[M+H]+；Rt：2.32min.1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ12.98(1H，br.s)，8.63(1H，s)，7.96(1H，s.)
步骤2：于0℃下，向5-溴-4-氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(3.0g，13mmol)的DMF(40ml)溶液中加入NaH(60％w/w的矿物油溶液，720mg，18.1mmol)，将混合物于0℃、氮气下搅拌30分钟。然后加入PhSO2Cl(1.7g，13mmol)，将反应物于室温搅拌2小时，然后加入H2O(200ml)，引起沉淀。沉淀经过滤收集并真空干燥，得到7-苯磺酰基-5-溴-4-氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(4.9g，100％)。
1HNMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.85(1H，s)，8.45(1H，s)，8.19(2H，d，J8.7Hz)，7.81(1H，t，J7.4Hz)，7.70(2H，t，J7.8Hz.)
步骤3：将7-苯磺酰基-5-溴-4-氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(4.9g，13mmol)、哌嗪-1-甲酸叔丁酯(3.7g，20mmol)和DIPEA(5.7ml，33mmol)的IPA(30ml)悬浮液于回流下搅拌并加热6小时。将混合物冷却至-10℃，固体经真空过滤收集、用冷IPA冲洗并真空干燥，得到4-(7-苯磺酰基-5-溴-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(5.9g，86％)。LCMS(APCI+)m/z522and 524[M+H]+；Rt：3.92min.1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.48(1H，s)，8.21(2H，d，J8.2Hz)，7.66-7.62(2H，m)，7.54(2H，t，J7.8Hz)，3.62-3.55(8H，m)，1.48(9H，s.)
步骤4：将MeZnCl(2.0M的THF溶液，720μl，1.4mmol)于室温、氮气下加入到4-(7-苯磺酰基-5-溴-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(250mg，0.48mmol)和四(三苯基膦)合钯(0)(140mg，0.12mmol)的THF(10ml)悬浮液中。将溶液回流下搅拌并加热2小时，然后冷却至室温，用饱和氯化铵水溶液洗涤，萃取到EtOAc(2x 100ml)中，经硫酸钠干燥并真空浓缩。产物在Biotage上纯化(二氧化硅，40％EtOAc/己烷)，得到4-(7-苯磺酰基-5-甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(210mg，94％)。
LCMS(APCI+)m/z458[M+H]+；Rt：3.73.1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.49(1H，s)，8.18(2H，d，J8.2Hz)，7.59(1H，t，J6.9Hz)，7.50(2H，t，J7.8Hz)，7.34(1H，s)，3.59-3.54(4H，m)，3.48-3.44(4H，m)，2.35(3H，s)，1.48(9H，s.)
步骤5：用无水HCl(4M的二
Figure BDA00001987566301321
烷溶液，100ml)处理4-(7-苯磺酰基-5-甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(4.0g，13mmol)的DCM(100ml)溶液，室温下搅拌过夜。将悬浮液真空浓缩，得到7-苯磺酰基-5-甲基-4-哌嗪-1-基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶二盐酸盐(5.4g，100％)。LCMS(APCI+)m/z 358[M+H]+；Rt：1.79。
步骤6：于室温下，将DIPEA(120ul，0.70mmol)加入到7-苯磺酰基-5-甲基-4-哌嗪-1-基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶二盐酸盐(50mg，0.12mmol)和(S)-2-(叔丁氧羰基氨基-甲基)-3-(4-氯苯基)-丙酸(40mg，0.13mmol)的DCM(10ml)溶液中。然后加入HBTU(48mg，0.13mmol)，将反应物于室温搅拌过夜。加入MeOH(5ml)和3M LiOH(1.2ml)，将混合物于50℃搅拌并加热2小时。混合物用饱和NaHCO3水溶液(10ml)洗涤，萃取到DCM中、经硫酸钠干燥并真空浓缩。粗制混合物经硅胶柱色谱纯化(50％EtOAc/己烷)，得到(S)-{2-(4-氯苄基)-3-[4-(5-甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-3-氧代-丙基}-氨基甲酸叔丁酯。LCMS(APCI+)m/z 253[M+H]+；Rt：2.85min。将其溶于MeOH(10ml)中，用无水HCl(4M的二
Figure BDA00001987566301331
烷溶液，20ml)处理。将溶液于室温搅拌过夜并真空浓缩，得到(S)-2-氨基甲基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(5-甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮二盐酸盐(21mg，37％)。LCMS(APCI+)m/z 413[M+H]+；Rt：1.82min。
实施例74
Figure BDA00001987566301332
(2S)-2-氨基甲基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(5-噻吩-2-基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶 -4-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮二盐酸盐的制备
步骤1：向4-(7-苯磺酰基-5-溴-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(150mg，0.29mmol)的4ml DME(在使用前用氮气脱气)中加入0.94M Na2CO3水溶液(0.61ml，0.57mmol)和Pd(PPh3)4(66mg，0.057mmol)。将反应混合物搅拌5分钟，然后加入2-噻吩硼酸(55mg，0.43mmol)。将反应混合物加热至回流并搅拌16小时，然后冷却至室温，经旋转蒸发除去DME。反应混合物用水稀释，用DCM萃取，合并的萃取液经干燥(Na2SO4)、过滤并浓缩。粗产物经硅胶纯化(8∶1至4∶1己烷∶EtOAc)，得到4-(7-苯磺酰基-5-噻吩-2-基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(120mg，79％)，为米色粉末。LCMS(APCI+)m/z 526[M+H]+；Rt：3.25min。
步骤2：向4-(7-苯磺酰基-5-噻吩-2-基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(120mg，0.23mmol)的2ml二
Figure BDA00001987566301333
烷溶液中加入1.5ml 4M HCl/二烷。将反应混合物于室温搅拌6小时，然后用乙醚稀释，固体在氮气压下经玻璃漏斗过滤分离、用乙醚冲洗并真空干燥，得到7-苯磺酰基-4-哌嗪-1-基-5-噻吩-2-基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶二盐酸盐(110mg，95％)，为黄色粉末。LCMS(APCI+)m/z 426[M+H]+；Rt：1.95min。
步骤3：向7-苯磺酰基-4-哌嗪-1-基-5-噻吩-2-基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶二盐酸盐(50mg，0.10mmol)、DIEA(0.10ml，0.60mmol)和(2S)-2-(Boc-氨基甲基)-3-(4-氯苯基)-丙酸(38mg，0.12mmol)的2mlDCM溶液中加入HBTU(44mg，0.12mmol)。将反应混合物于室温搅拌2小时，然后加入2ml MeOH和0.5ml 3M LiOH。将反应混合物加热至35℃并搅拌2小时，然后加入饱和NaHCO3，混合物用DCM萃取。合并的萃取液经干燥(Na2SO4)、过滤并浓缩。粗产物经硅胶纯化(用2∶1DCM∶EtOAc冲洗，然后用2∶1至1∶4DCM∶EtOAc梯度冲洗)，得到(2S)-2-Boc-氨基甲基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(5-噻吩-2-基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮，该物质用于下一步骤。
步骤4：向(2S)-2-Boc-氨基甲基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(5-噻吩-2-基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮的1.5ml二
Figure BDA00001987566301342
烷溶液中加入1.5ml 4M HCl/二烷。将所得悬浮液于室温搅拌16小时，然后浓缩至干。将固体溶于最少量MeOH中，通过加入乙醚研磨产物。固体在氮气压下经玻璃漏斗过滤分离，用乙醚冲洗并真空干燥，得到(2S)-2-氨基甲基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(5-噻吩-2-基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮二盐酸盐(37mg，67％)，为浅黄色粉末。
1H NMR(D2O，400MHz)δ8.18(1H，s)，7.41(1H，d，J5.4Hz)，7.30(1H，s)，7.19(2H，d，J8.6Hz)，7.06(1H，dd，J5.0and 3.5Hz)，7.01(2H，d，J8.0Hz)，6.88(1H，d，J3.5Hz)，3.47-3.14(5H，m)，3.08-3.00(3H，m)，2.86-2.77(3H，m)，2.59(1H，t，J12.0Hz)，2.13-2.06(1H，m).LCMS(APCI+)m/z481[M+H]+；Rt：1.87min.
实施例75
Figure BDA00001987566301351
2-氨基-3-(4-氯-2-甲基-苯基)-1-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-丙-1-酮二盐 酸盐的制备
步骤1：将含有4-氯-2-甲基-苯甲酸(4g，23mmol)和LiAlH4(890mg，23.5mmol)的250ml THF混合物在氮气氛下于室温搅拌2小时。用十水硫酸钠猝灭反应物。混合物经Celite塞过滤，用THF洗涤滤饼。将滤液减压浓缩。残余物经biotage纯化，用30％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到(4-氯-2-甲基-苯基)-甲醇(3.70g，100％)，为无色油状物。
1HNMR(CDCl3，400MHz)δ7.30-7.25(1H，m)，7.18-7.14(2H，m)，4.66(2H，d，J5.8Hz)，2.32(3H，s.)
步骤2：将含有(4-氯-2-甲基-苯基)-甲醇(2g，13mmol)和PBr3(1.3ml，14mmol)的150ml乙醚溶液于室温搅拌过夜。反应物用乙醚稀释并用水洗涤。有机相经硫酸镁干燥。过滤、除去溶剂并经biotage纯化残余物，用20％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到1-溴甲基-4-氯-2-甲基-苯(1.89g，67％)，为无色油状物。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ7.26-7.11(3H，m)，4.67(2H，s)，2.39(3H，s.)
步骤3：在氮气氛下，向(二苯亚甲基-氨基)-乙酸乙酯(2.3g，8.6mmol)的50ml DMSO溶液中加入叔丁醇钾(1.2g，11mmol)。搅拌20分钟后，加入1-溴甲基-4-氯-2-甲基-苯(1.89g，8.6mmol)，将反应物于室温搅拌过夜。反应物用乙酸乙酯稀释，用盐水洗涤。有机相经硫酸镁干燥。过滤、除去溶剂并经biotage纯化，用20％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到2-(二苯亚甲基-氨基)-3-(4-氯-2-甲基-苯基)-丙酸乙酯(1.75g，50％)，为黄色油状物。LCMS(APCI+)m/z 406[M+H]+；Rt：4.16min。
步骤4：将含有2-(二苯亚甲基-氨基)-3-(4-氯-2-甲基-苯基)-丙酸乙酯(1.7g，4.2mmol)和90ml 3N HCl的混合物于75℃加热过夜。将反应物冷却至室温，用乙酸乙酯洗涤。将水相减压浓缩，得到2-氨基-3-(4-氯-2-甲基-苯基)-丙酸(640mg，72％)，为白色固体。LCMS(APCI+)m/z214[M+H]+；Rt：1.83min。
LCMS(APCI+)m/z214[M+H]+；Rt：1.83min.1H NMR (D2O，400MHz)δ7.18(1H，s)，7.11(1H，d，J8.7Hz)，7.05(1H，d，J8.3Hz)，4.05-4.00(1H，m)，3.23(1H，dd，J14.3and 6.1Hz)，2.98(1H，dd，J14.4and8.5Hz)，2.19(3H，s.)
步骤5：向含有2-氨基-3-(4-氯-2-甲基-苯基)-丙酸(640mg，3.0mmol)、25ml二
Figure BDA00001987566301361
烷和9ml 1N氢氧化钠的溶液中加入boc anhydride(0.73g，3.3mmol)。将反应物于室温搅拌3小时。反应物用水稀释，用DCM洗涤。水相用1N HCl酸化，用乙酸乙酯萃取。有机相经硫酸镁干燥。过滤并除去溶剂，得到2-叔丁氧羰基氨基-3-(4-氯-2-甲基苯基)-丙酸(640mg，80％)，为白色固体。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ7.13(1H，s)，7.07(2H，s)，5.14-5.08(1H，m)，4.55-4.48(1H，m)，3.24-3.16(1H，m)，2.96-2.88(1H，m)，2.33(3H，s)，1.38(9H，s.)
步骤6：在氮气氛下，向含有2-叔丁氧羰基氨基-3-(4-氯-2-甲基-苯基)-丙酸(200mg，0.64mmol)的30ml DMF溶液中加入HOBT(0.12g，0.76mmol)、EDCI(0.15g，0.76mmol)和NMM(0.19g，1.9mmol)。搅拌10分钟后，加入4-哌嗪-1-基-喹唑啉(200mg，0.93mmol)，并搅拌过夜。反应物用乙酸乙酯稀释，用水洗涤。有机相经硫酸镁干燥。过滤、除去溶剂并经biotage纯化，用10％MeOH/DCM洗脱，得到[1-(4-氯-2-甲基苄基)-2-氧代-2-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-乙基]-氨基甲酸叔丁酯(0.31g，95％)。LCMS(APCI+)m/z 510[M+H]+；Rt：2.54min。
步骤7：在氮气氛下，向含有[1-(4-氯-2-甲基苄基)-2-氧代-2-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-乙基]-氨基甲酸叔丁酯(0.30g，0.59mmol)的30ml DCM溶液中加入TFA(1.4ml)。于室温搅拌过夜后，将反应物减压浓缩。将残余物溶于DCM中并加入2N HCl/乙醚。滤出固体并干燥，得到2-氨基-3-(4-氯-2-甲基-苯基)-1-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-丙-1-酮二盐酸盐(0.217g)，为灰白色固体。
LCMS(APCI+)m/z410[M+H]+；Rt：1.87min.1H NMR(D2O，400MHz)δ8.48(1H，s)，7.91-7.862H，m)，7.66-7.59(2H，m)，7.08-7.02(2H，m)，4.60-4.54(1H，m)，4.20-4.12(1H，m)，3.86-3.72(3H，m)，3.61-3.38(2H，m)，3.28-3.16(2H，m)，3.01-2.94(1H，m)，2.76-2.68(1H，m)，2.19(3H，s.)
实施例76
Figure BDA00001987566301371
4-{4-[3-氨基-2-(4-氯苯基)-丙酰基]-哌嗪-1-基}-1，3-二氢吡咯并[2，3-b] 嘧啶-2-酮二盐酸盐的制备
步骤1：将4-氯-5，7-二氢吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-酮(按照文献Li Sun等，Bioorg.and Med.Chem.Lett.2002，12，2153-2157；690mg，3.7mmol)、Boc-哌嗪(630mg，3.7mmol)和DIEA(0.96ml，5.5mmol)的20ml IPA溶液加热至回流并搅拌14小时，然后将反应混合物浓缩。粗产物经硅胶纯化(1∶2DCM∶EtOAc至1∶4DCM∶EtOAc梯度)，得到4-Boc-哌嗪-1-基-5，7-二氢吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-酮，该物质用于下一步骤。
步骤2：向4-Boc-哌嗪-1-基-5，7-二氢吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-酮的25ml二
Figure BDA00001987566301372
烷溶液中加入15ml 4M HCl/二
Figure BDA00001987566301373
烷。将所得悬浮液于室温搅拌15小时，然后用乙醚稀释。固体在氮气压下经玻璃漏斗过滤分离、用乙醚冲洗并真空干燥，得到4-哌嗪-1-基-5，7-二氢吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-酮二盐酸盐(350mg，100％)，为红色粉末。
1HNMR(DMSO-d6，400MHz)δ11.12(1H，s)，9.26(2H，br.s)，8.25(1H，s)，3.89-3.84(4H，m)，3.77(2H，s)，3.16-3.09(4H，m).LCMS(APCI+)m/z220[M+H]+；Rt：0.68min.
步骤3：向4-哌嗪-1-基-5，7-二氢吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-酮二盐酸盐(40mg，0.14mmol)、HOBt·H2O(21mg，0.14mmol)、TEA(57μl，0.41mmol)和3-Boc-氨基-2-(4-氯苯基)-丙酸(由4-氯苯基乙酸甲酯，用制备A109的方法制备；49mg，0.16mmol)的1.2ml 5∶1DCM∶THF溶液中加入DCC(34mg，0.16mmol)，将反应混合物于室温搅拌4小时，然后浓缩。将残余物悬浮/溶于DCM中，固体通过棉塞真空过滤而除去，用DCM冲洗。将滤液浓缩，粗产物经硅胶纯化(1∶1至1∶5DCM∶EtOAc梯度)，得到4-{4-[3-Boc-氨基-2-(4-氯苯基)-丙酰基]-哌嗪-1-基}-1，3-二氢吡咯并[2，3-b]嘧啶-2-酮，该物质用于下一步骤。LCMS(APCI+)m/z401[M-Boc+H]+；Rt：2.16min。
步骤4：向4-{4-[3-Boc-氨基-2-(4-氯苯基)-丙酰基]-哌嗪-1-基}-1，3-二氢吡咯并[2，3-b]嘧啶-2-酮的1.2ml二烷溶液中加入1.2ml 4MHCl/二
Figure BDA00001987566301382
烷。将所得悬浮液于室温搅拌15小时，然后浓缩至干。将固体溶于最少量MeOH中，通过加入乙醚研磨产物。所得固体在氮气压下经玻璃漏斗过滤分离、用乙醚冲洗并真空干燥，得到4-{4-[3-氨基-2-(4-氯苯基)-丙酰基]-哌嗪-1-基}-1，3-二氢吡咯并[2，3-b]吡啶-2-酮二盐酸盐(28mg，43％)，为暗红色粉末。
1HNMR(D2O，400MHz)δ8.10(1H，s)，7.31-7.14(4H，m)，4.28-4.22(1H，m)，3.92-3.82(1H，m)，3.73-2.94(11H，m).LCMS(APCI+)m/z 401[M+H]+；Rt：1.98min.
实施例77
Figure BDA00001987566301391
4-氨基-2-(4-氯苯基)-2-氟-1-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-丁-1-酮二盐酸 盐的制备
步骤1：将4-氯扁桃酸(12.3g，65.9mmol)于甲苯(50ml)、EtOH(16ml)和浓硫酸(0.1ml)中的溶液回流12小时，同时用迪安-斯达克收集器除去水。将混合物真空浓缩、用DCM稀释并用稀NaHCO3水溶液洗涤。分离的DCM层经干燥(硫酸镁)、过滤并真空浓缩，得到(4-氯苯基)-羟基-乙酸乙酯，为无色油状物(10.0g)，该物质在静置后结晶。
步骤2：将(4-氯苯基)-羟基-乙酸乙酯(10.0g，46.6mmol)的DCM(35ml)用导管引入于-78℃冷却的三氟化[双(2-甲氧基乙基)氨基]硫(9.45ml，51.3mmol)的DCM(35ml)溶液中。搅拌12小时并升温至环境温度后，将混合物倒入饱和NaHCO3水溶液中。混合物用DCM萃取，有机萃取液经干燥(硫酸镁)、过滤并真空浓缩。粗产物经色谱纯化(SiO2)，用DCM作为洗脱剂，得到(4-氯苯基)-氟乙酸乙酯，为无色油状物(7.0g)。
步骤3：于0℃，将叔丁醇钾(155mg，1.38mmol)加入到(4-氯苯基)-氟乙酸乙酯(3.00g，13.8mmol)的THF(25ml)溶液中，得到橙红色。15分钟后，将混合物冷却至-78℃，加入纯净的丙烯酸叔丁酯(2.23ml，15.2mmol)。搅拌并升温至环境温度达12小时后，混合物用饱和氯化铵猝灭、真空浓缩、用水稀释并用DCM萃取。DCM萃取液经干燥(硫酸镁)、过滤并真空浓缩。粗产物经色谱纯化(SiO2)，用DCM作为洗脱剂，得到无色油状物(1.20g)。将该油状物的DCM(6ml)和TFA(4ml)溶液搅拌过夜。混合物用甲苯(40ml)稀释并真空浓缩。将粗制产物溶于稀NaHCO3水溶液中，用DCM萃取(两次，弃去)。用1.0N HCl将水层酸化至pH 1.0，用DCM萃取(两次)。有机萃取液经干燥(Na2SO4)、过滤并真空浓缩，得到2-(4-氯苯基)-2-氟-戊二酸1-乙酯，为油状物(1.0g)。
步骤4：将三乙胺(0.53ml，3.81mmol)加入到2-(4-氯苯基)-2-氟-戊二酸1-乙酯(1.00g，3.46mmol)的t-BuOH(20ml)溶液中，然后加入二苯基磷酰叠氮(0.82ml，3.81mmol)。将混合物于95℃加热3小时，真空浓缩，让其于稀NaHCO3水溶液和DCM之间分配。分离的DCM层经干燥(Na2SO4)、过滤并真空浓缩。粗制产物经色谱纯化(SiO2)，用DCM作为洗脱剂，得到4-叔丁氧羰基氨基-2-(4-氯苯基)-2-氟-丁酸乙酯(600mg)。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ7.42(m，2H)，7.35(m，2H)，5.25(m，0.4H)，4.61(m，0.6H)，4.19(m，2H)，3.35(m，0.6H)，3.23(m，1.4H)，2.59(m，1H)，2.34(m，1H)，1.40(m，9H)，1.24(m，3H).LCMS(APCI+)m/z260[M+H]+(丢失Boc基团).
步骤5：将一水氢氧化锂(0.27g，6.45mmol)的H2O(5ml)溶液加入到4-叔丁氧羰基氨基-2-(4-氯苯基)-2-氟-丁酸乙酯(580mg，1.61mmol)的THF(5ml)和MeOH(5ml)溶液中。搅拌12小时后，将混合物真空浓缩，用水稀释并用DCM萃取(3次，弃去)。然后将水相酸化至pH 1并用DCM萃取(两次)。有机萃取液经干燥(Na2SO4)、过滤并真空浓缩，得到4-叔丁氧羰基氨基-2-(4-氯苯基)-2-氟-丁酸(400mg)。该物质无需进一步纯化而用于下述步骤。
步骤6：将PyBrop(562mg，1.21mmol)一次性加入到于冰浴中冷却的4-叔丁氧羰基氨基-2-(4-氯苯基)-2-氟-丁酸(400mg，1.21mmol)和4-哌嗪-1-基-喹唑啉二盐酸盐(346mg，1.21mmol)的DCM(12ml)溶液中。让混合物升温至环境温度并搅拌12小时。混合物用DCM稀释，用0.1N HCl洗涤。分离的DCM层经干燥(Na2SO4)、过滤并真空浓缩。粗产物经色谱纯化(SiO2)，用2％MeOH/DCM、然后用5％MeOH/DCM作为洗脱剂，得到[3-(4-氯苯基)-3-氟-4-氧代-4-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-丁基]-氨基甲酸叔丁酯(230mg)。LCMS(APCI+)m/z 528，530[M+H]+。
步骤7：将[3-(4-氯苯基)-3-氟-4-氧代-4-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-丁基]-氨基甲酸叔丁酯(226mg，0.43mmol)的DCM(2ml)和2.0MHCl/Et2O(1ml)溶液搅拌12小时。将混合物真空浓缩并经色谱纯化(SiO2)，用10％MeOH/DCM、然后用10％(7N NH3的MeOH溶液)/DCM作为洗脱剂。将纯化物质溶于MeOH中，加入2.0N HCl的Et2O溶液，然后真空浓缩。将所得玻璃状物在异丙醇中于回流下加热并真空浓缩。将所得固体悬浮于乙腈中并真空浓缩(重复两次)，得到4-氨基-2-(4-氯苯基)-2-氟-1-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-丁-1-酮二盐酸盐，为白色粉末。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.86(s，1H)，8.18(m，4H)，8.01(m，2H)，7.69(m，1H)，7.58(d，J＝8.4Hz，2H)，7.40(d，J＝8.6Hz，2H)，4.23(m，2H)，4.09(m，1H)，3.80(m，4H)，3.47(m，1H)，2.86(m，1H)，2.67(m，2H)，2.41(m，1H).LCMS(APCI+)m/z428，430[M+H]+.
实施例78
Figure BDA00001987566301411
3-氨基-2-(4-溴-2-氟-苄基)-1-[4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1- 基]-丙-1-酮二盐酸盐的制备
步骤1：于0℃向二异丙胺(1.3ml，9.0mmol)的THF(20ml)溶液中加入n-BuLi(1.6M的己烷溶液，5.6ml，9.0mmol)。将反应物于0℃搅拌15分钟，然后冷却至-78℃。滴加3-叔丁氧羰基氨基-丙酸叔丁酯(1.0g，4.1mmol)的THF(5ml)溶液。将混合物于-78℃搅拌2小时。滴加4-溴-1-溴甲基-2-氟-苯(1.3g，4.9mmol)的THF(4ml)溶液。完成后除去干冰浴，再让反应物在冰浴中升温至0℃。于0℃搅拌30分钟后，将反应物倒入饱和氯化铵水溶液中。分离有机层。水层用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤、干燥并浓缩。残余物经柱色谱纯化(己烷∶EtOAc，20∶1至5∶1)，得到2-(4-溴-2-氟-苄基)-3-叔丁氧羰基氨基-丙酸叔丁酯(1.35g，77％)，为无色油状物。
1HNMR(CDCl3，400MHz)δ7.20(d，J＝8.0Hz，2H)，7.08(t，J＝8.0Hz，1H)，4.86(m，1H)，3.28(m，2H)，2.92(m，3H)，1.43(s，9H)，1.36(s，9H).
步骤2：将2-(4-溴-2-氟-苄基)-3-叔丁氧羰基氨基-丙酸叔丁酯(1.30g，3.01mmol)溶于THF(12ml)和MeOH(12ml)。加入一水LiOH(0.50g，12.0mmol)的H2O(12ml)溶液。将混合物于回流下加热过夜。冷却后，真空蒸发溶剂。将残余物溶于水中，用乙醚萃取(2x)。水相用1NHCl酸化，用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤、干燥并浓缩，得到2-(4-溴-2-氟-苄基)-3-叔丁氧羰基氨基-丙酸(1.00g，88％)，为白色固体。
1HNMR(CD3OD，400MHz)δ7.26(m，2H)，7.19(m，1H)，3.27(m，2H)，2.86(m，3H)，1.43(s，9H).
步骤3：在实施例34步骤2中，用4-哌嗪-1-基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶二盐酸盐替代5-哌嗪-1-基-1H-吲唑，用2-(4-溴-2-氟-苄基)-3-叔丁氧羰基氨基-丙酸替代(D)-Boc-4-氯苯丙氨酸，然后如实施例34步骤3所述除去Boc保护基，制备3-氨基-2-(4-溴-2-氟-苄基)-1-[4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮二盐酸盐。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ8.37(s，1H)，7.40(d，J＝3.6Hz，1H)，7.36(m，1H)，7.31(m，1H)，7.24(t，J＝8.0Hz，1H)，6.95(d，J＝3.6Hz，1H)，4.14(m，2H)，4.02(m，1H)，3.87(m，4H)，3.55(m，2H)，3.34(m，1H)，3.11(m，1H)，2.98(m，2H).LCMS(APCI+)m/z 461，463[M+H]+；Rt＝1.79min.
实施例79
Figure BDA00001987566301431
2-(R)-氨基-3-(4-氯苯基)-1-(4-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基-哌嗪-1-基)-丙-1- 酮二盐酸盐的制备
步骤1：将1-哌嗪甲酸叔丁酯(7.45g，40.0mmol)和苯并三唑(4.76g，40.0mmol)于H2O(200ml)中的混合物搅拌1小时。然后加入乙二醛(40wt.％水溶液，2.90g，20mmol)，将混合物搅拌12小时，从而产生沉淀。滤出沉淀并用水洗涤。将固体溶于DCM中，干燥(Na2SO4)、过滤并真空浓缩，得到1，2-(苯并三唑-1-基)-1，2-(4-哌嗪-1-甲酸叔丁酯)乙烷灰白色固体(10.0g)。
步骤2：将2-氨基吡啶(282mg，3.00mmol)和1，2-(苯并三唑-1-基)-1，2-(4-哌嗪-1-甲酸叔丁酯)乙烷(1.90g，3.00mmol)于二氯乙烷(30ml)中的混合物回流3小时。然后加入粉状KOH(555mg，9.90mmol)，将混合物搅拌12小时。将混合物过滤，滤液真空浓缩。所得物质经色谱纯化(SiO2)，用DCM、然后用5％MeOH/DCM作为洗脱剂，得到4-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(900mg)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ7.96(m，1H)，7.52(m，1H)，7.25(m，1H)，7.10(m，1H)，6.78(m，1H)，3.61(m，4H)，2.98(m，4H)，1.47(s，9H).
步骤3：将4-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(950mg，3.14mmol)于DCM(10ml)溶液和2.0N HCl/Et2O(5ml)中的溶液搅拌12小时。形成沉淀，将其滤出，得到3-哌嗪-1-基-咪唑并[1，2-a]吡啶二盐酸盐，为红色固体(800mg)。
步骤4：将三乙胺(0.30ml，2.18mmol)加入到(R)-N-Boc-4-氯苯丙氨酸(392mg，1.31mmol)、3-哌嗪-1-基-咪唑并[1，2-a]吡啶二盐酸盐(300mg，1.09mmol)和1-羟基苯并三唑(177mg，1.31mmol)的DMF(5ml)溶液中，然后一次性加入1-[3-(二甲氨基)丙基]-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(251mg，1.31mmol)。搅拌12小时后，混合物用水稀释、用1.0M NaOH碱化至pH 12，用DCM萃取。DCM萃取液经干燥(Na2SO4)、过滤并真空浓缩。残余物经色谱纯化(SiO2)，用DCM∶Et2O(1∶1)、然后用10％MeOH/DCM作为洗脱剂，得到(R)-[1-(4-氯苄基)-2-(4-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基-哌嗪-1-基)-2-氧代-乙基]-氨基甲酸叔丁酯(350mg)。
步骤5：将(R)-[1-(4-氯苄基)-2-(4-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基-哌嗪-1-基)-2-氧代-乙基]-氨基甲酸叔丁酯(350mg，0.72mmol)于DCM(3ml)和2.0N HCl/Et2O(2ml)中的溶液搅拌12小时。将混合物真空浓缩，所得物质经色谱纯化(SiO2)，用10％MeOH/DCM、然后用10％(7NNH3的MeOH)/DCM作为洗脱剂。将该物质溶于MeOH中，然后加入2.0N HCl/Et2O并真空浓缩。由异丙醇中、然后从乙腈中汽提所得的胶状物，得到2-(R)-氨基-3-(4-氯苯基)-1-(4-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基-哌嗪-1-基)-丙-1-酮二盐酸盐，为白色固体(100mg)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.66(d，J＝6.8Hz，1H)，8.49(bs，3H)，7.89(m，3H)，7.45(m，1H)，7.38(d，J＝8.3Hz，2H)，7.26(d，J＝8.3Hz，2H)，4.69(bs，1H)，3.49(m，6H)，3.08(m，1H)，2.94(m，3H)，2.85(m，1H).LCMS(APCI+)m/z384，386[M+H]+.
实施例80
Figure BDA00001987566301441
2(R)-氨基-3-(4-氯苯基-3-甲基-1-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-丁-1-酮的 制备
步骤1：将2-(4-氯苯基)-2-甲基-丙酸(6.10g，30.7mmol)于室温下溶于120ml无水THF中。在5分钟内通过注射器滴加70％w/w的Red-Al溶液(28.25ml，0.101mol)(剧烈起泡)。将混合物加热至回流3小时。将溶液冷却至0℃，小心加入饱和酒石酸钠溶液(100ml，猛烈放出氢气)和100ml水进行猝灭。水性混合物用乙酸乙酯萃取，合并的有机物用稀NaHCO3溶液洗涤，然后用盐水洗涤、分离、经硫酸镁干燥、过滤并真空浓缩，得到2-(4-氯苯基)-2-甲基-丙-1-醇，为无色油状物(5.70g，99％)。该物质无需纯化就可使用。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ7.32(s，5H)，3.62(d，J＝4.4Hz，2H)，1.33(s，6H)，1.23(t，J＝4.4Hz，1H).
步骤2：将DMSO(436ml，61.4mmol)溶于100ml DCM中，于-78℃下用草酰氯(4.02μl，46.6mmol)处理。将溶液于-78℃搅拌30分钟，然后以10ml的DCM溶液滴加2-(4-氯苯基)-2-甲基-丙-1-醇(5.67g，30.7mmol)。加入完成后，将溶液于-78℃搅拌2小时，然后用三乙胺(25.7ml，184mmol)处理。让溶液升温至环境温度并搅拌3小时。加水猝灭溶液，再用DCM进行分配。水相用DCM萃取，合并的有机物经硫酸镁干燥、过滤并真空浓缩。残余物经色谱纯化(二氧化硅，己烷/乙酸乙酯梯度)，得到2-(4-氯苯基)-2-甲基丙醛，为黄色油状物(5.60g，99％)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ9.48(s，1H)，7.35(d，J＝8.8Hz，2H)，7.21(d，J＝8.8Hz，1H)，1.45(s，6H).
步骤3：将2-(4-氯苯基)-2-甲基丙醛(5.60g，30.7mmol)和(S)-4-甲基-苯亚磺酰胺(5.00g，32.2mmol)溶于300ml DCM中，用Ti(OEt)4(32.1ml，153mmol)处理。将混合物在将氮气加热至回流4小时。将溶液在冰浴中冷却并通过滴加200ml水进行猝灭。经硅藻土塞过滤除去所得的沉淀(Ti盐)，用DCM洗涤。分离所得滤液，水相再用DCM萃取。合并的有机物经硫酸镁干燥、过滤并真空浓缩。残余物经硅胶塞过滤纯化(己烷∶乙酸乙酯，1∶1)，得到(R)-4-甲基苯亚磺酸[2-(4-氯苯基)-2-甲基亚丙基]-酰胺，为无色油状物，该物质在静置后固化，得到白色固体(9.28g，95％)。
1HNMR(CDCl3，400MHz)δ8.14(s，1H)，7.54(d，J＝8.4Hz，2H)，7.31(d，J＝8.8Hz，2H)，7.27(d，J＝8.8Hz，2H)，7.14(m，2H)，2.42(s，3H)，1.52(s，3H)，1.47(s，3H).
步骤4：将二乙基氰化铝(43.5ml 1.0M甲苯溶液，43.5mmol)加入到异丙醇(28.9ml，377mmol)中，于10℃搅拌15分钟。于-78℃通过导管将该溶液引入作为290ml THF溶液的(R)-4-甲基苯亚磺酸[2-(4-氯苯基)-2-甲基-亚丙基]-酰胺(9.28g，29.0mmol)中。将该溶液于-78℃搅拌15分钟，然后让其缓慢升温至室温过夜。该溶液通过加入稀NaHCO3溶液猝灭，用乙酸乙酯萃取。合并的有机物用盐水洗涤、分离、经Na2SO4干燥、过滤并真空浓缩，得到4-甲基-苯亚磺酸[2-(4-氯苯基)-1-氰基-2-甲基-丙基]-酰胺，为无色油状物(9.55g，95％收率)。将该物质在浓HCl溶液中加热至110℃(回流)过周末。将溶液冷却至室温、用乙醚洗涤，然后真空浓缩，得到(S)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-3-甲基-丁酸盐酸盐，为白色固体(1.61g，21％)。
1HNMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.19(brs，1H)，7.48(d，J＝8.0Hz，2H)，7.41(d，J＝8.0Hz，2H)，7.13(s，3H)，4.15(s，1H)，1.42(s，3H)，1.40(s，3H).LCMS(APCI+)m/z228[M+H]+；Rt＝1.81min.
步骤5：于室温下将(S)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-3-甲基-丁酸盐酸盐(1.00g，3.79mmol)溶于6ml 2M NaOH溶液中，用二碳酸二叔丁酯(957μl，4.16mmol)处理。将溶液搅拌4小时至反应完成，加入1M HCl溶液将水溶液酸化(pH＝2-3)。水相用乙酸乙酯萃取，合并有机相。有机物用盐水洗涤、分离、经硫酸镁干燥、过滤并真空浓缩，得到无色油状物。残余物经色谱纯化(二氧化硅，己烷/乙酸乙酯梯度)，得到(S)-2-叔丁氧羰基氨基-3-(4-氯苯基)-3-甲基-丁酸(636mg，51％)。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ12.67-10.55(brs，1H)，7.29(m，4H)，4.97(d，J＝8.4Hz，1H)，4.55(d，J＝8.4Hz，1H)，1.45(s，9H)，1.38(s，6H).LCMS(APCI+)m/z228[M-Boc+H]+；Rt＝3.20min.
步骤6：将4-哌嗪-1-基-喹唑啉二盐酸盐(220mg，0.766mmol)、(S)-2-叔丁氧羰基氨基-3-(4-氯苯基)-3-甲基-丁酸(251mg，0.766mmol，1.0当量)、1-羟基苯并三唑(109mg，0.804mmol，1.05当量)和EDCI(154mg，0.804mmol，1.05当量)溶于/悬浮于6.0ml DMF中。混合物用三乙胺(427μl，3.06mmol)处理，将其搅拌过夜至反应完成。让反应物于乙酸乙酯和稀NaHCO3溶液之间分配。水相用乙酸乙酯萃取，合并有机相。有机相用水洗涤，然后用盐水洗涤，分离、经硫酸镁干燥、过滤并真空浓缩。残余物通过小硅胶塞用乙酸乙酯洗脱并真空浓缩。立即将受保护的中间体溶于1ml二
Figure BDA00001987566301471
烷中，用4M HCl/二
Figure BDA00001987566301472
烷(1.92ml，7.66mmol)于室温下处理4小时。所得沉淀用乙醚研磨，然后过滤，得到(R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-3-甲基-1-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-丁-1-酮二盐酸盐，为浅黄色固体(277mg，73％)。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.89(s，1H)，8.46(brs，3H)，8.17(d，J＝8.4Hz，1H)，8.06(t，J＝7.6Hz，1H)，7.97(d，J＝8.4Hz，1H)，7.74(d，J＝8.0Hz，1H)，7.50(d，J＝8.0Hz，2H)，7.42(d，J＝8.0Hz，2H)，4.53(brs，1H)，4.09(m，3H)，3.90(m，3H)，3.32(m，1H)，3.04(t，J＝9.2Hz，1H)，1.51(s，3H)，1.43(s，3H).LCMS(APCI+)m/z424[M+H]+；Rt＝1.90min.
实施例81
Figure BDA00001987566301473
(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(6，7，8，9-四氢-5H-1，3，9-三氮杂-芴-4-基)- 哌嗪-1-基]-丙-1-酮二盐酸盐的制备
步骤1：用实施例40步骤1所述的方法，用4-氯-6，7，8，9-四氢-5H-1，3，9-三氮杂-芴(按照文献Traxler，P.M.等(1996)，J.Med.Chem.，39，2285-2292所述的方法，由2-氨基-1-(4-甲氧基-苄基)-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-甲腈制备)替代4-氯-5-碘嘧啶，制备4-(6，7，8，9-四氢-5H-1，3，9-三氮杂-芴-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ10.24(s，1H)，8.32(s，1H)，3.59(m，4H)，3.55(m，4H)，2.78(m，4H)，1.92(m，2H)，1.82(m，2H)，1.43(s，9H).LCMS(APCI+)m/z358[M+H]+；Rt＝3.12min.
步骤2：用实施例34步骤3所述的方法，用4-(6，7，8，9-四氢-5H-1，3，9-三氮杂-芴-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯替代(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(1H-吲唑-5-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯，制备4-哌嗪-1-基-6，7，8，9-四氢-5H-1，3，9-三氮杂-芴二盐酸盐。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ8.42(s，1H)，4.14(m，4H)，3.48(m，4H)，2.83(m，4H)，1.96(m，2H)，1.86(m，2H).LCMS(APCI+)m/z258[M+H]+；Rt＝1.52min.
步骤3：向4-哌嗪-1-基-6，7，8，9-四氢-5H-1，3，9-三氮杂-芴二盐酸盐(20mg，0.061mmol)和(D)-Boc-4-氯苯丙氨酸(20mg，0.067mmol)的悬浮液中加入DIEA(63μl，0.36mmol)和HBTU(25mg，0.067mmol)。将反应物于室温搅拌2小时。让混合物在水和EtOAc之间分配。有机层用NaHCO3水溶液和盐水洗涤、干燥并浓缩。残余物经柱色谱纯化(DCM∶MeOH，40∶1至20∶1)，得到(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-氧代-2-[4-(6，7，8，9-四氢-5H-1，3，9-三氮杂-芴-4-基)-哌嗪-1-基]-乙基}-氨基甲酸叔丁酯，为无色油状物。用实施例34步骤3中所述方法脱除Boc保护基，得到(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(6，7，8，9-四氢-5H-1，3，9-三氮杂-芴-4-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮二盐酸盐(28mg，90％)，为白色固体。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ8.29(s，1H)，7.42(d，J＝8.0Hz，2H)，7.33(d，J＝8.0Hz，2H)，4.74(m，1H)，3.75(m，6H)，3.38(m，1H)，3.16(m，3H)，2.77(m，4H)，1.92(m，4H)LCMS(APCI+)m/z439，441[M+H]+；Rt＝2.16min.
实施例82
(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(喹唑啉-4-基氧基)-哌啶-1-基]-丙-1-酮 的制备
步骤1：在0℃下，向NaH(60％，0.146g，3.65mmol)的DMF(15ml)悬浮液中滴加4-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.611g，3.04mmol)的DMF(5ml)溶液。将反应物搅拌1小时，然后加入4-氯喹唑啉(0.500g，3.04mmol)。让混合物升温至室温并搅拌过夜。让混合物在水和EtOAc之间分配。水相用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，干燥并浓缩。残余物经柱色谱纯化(己烷∶EtOAc，2∶1)，得到4-(喹唑啉-4-基氧基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.76g，76％)，为无色油状物。用实施例34步骤3中所述方法脱除Boc保护基，得到4-(哌啶-4-基氧基)-喹唑啉二盐酸盐，为白色固体。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ9.35(s，1H)，8.59(d，J＝8.4Hz，1H)，8.31(td，J＝7.2Hz，J＝1.2Hz 1H)，8.11(d，J＝8.4Hz，1H)，8.04(t，J＝7.2Hz，1H)，6.00(m，1H)，3.55(m，2H)，3.40(m，2H)，2.42(m，4H).LCMS(APCI+)m/z230[M+H]+；Rt＝1.67min.
步骤2：用实施例34步骤2所述的方法，用4-(哌啶-4-基氧基)-喹唑啉二盐酸盐替代5-哌嗪-1-基-1H-吲唑，用(D)-Fmoc-4-氯苯丙氨酸替代(D)-Boc-4-氯苯丙氨酸，制备(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-氧代-2-[4-(喹唑啉-4-基氧基)-哌啶-1-基]-乙基}-氨基甲酸9H-芴-9-基甲酯。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.77(s，1H)，8.12(m，1H)，8.02(s，1H)，7.94(m，1H)，7.84(m，1H)，7.77(m，2H)，7.59(m，4H)，7.41(m，2H)，7.30(m，4H)，7.15(m，2H)，5.71(d，J＝8.4Hz，1H)，5.55(m，1H)，4.94(m，1H)，4.40(m，2H)，4.21(m，1H)，3.85(m，1H)，3.61(m，1H)，3.38(m，1H)，3.02(m，2H)，1.94(m，5H).LCMS(APCI+)m/z633，635[M+H]+；Rt＝3.98min.
步骤3：向(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-氧代-2-[4-(喹唑啉-4-基氧基)-哌啶-1-基]-乙基}-氨基甲酸9H-芴-9-基甲酯(0.166g，0.262mmol)的DCM(5ml)搅拌溶液中加入哌啶(1ml)。将反应物于室温搅拌4小时。蒸发挥发物。残余物经柱色谱纯化(DCM∶MeOH，50∶1至10∶1)，得到(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(喹唑啉-4-基氧基)-哌啶-1-基]-丙-1-酮(0.099g，92％)，为无色油状物。1HNMR(CDCl3，400MHz)δ8.77(s，1H)，8.15(m，1H)，7.94(d，J＝8.4Hz，1H)，7.85(m，1H)，7.59(m，1H)，7.30(d，J＝8.0Hz，2H)，7.17(d，J＝8.0Hz，2H)，5.57(m，1H)，3.95(m，2H)，3.10-3.70(m，3H)，2.95(m，1H)，2.82(m，1H)，1.30-2.10(m，4H).LCMS(APCI+)m/z 411，413[M+H]+；Rt＝2.19min.
实施例83
Figure BDA00001987566301501
4-氨基-2-(3，4-二氯苯基)-1-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-丁-1-酮二盐酸 盐的制备
步骤1：进行与实施例61步骤1-3中所述反应类似的反应，但由(3，4-二氯苯基)-乙酸甲酯起始，得到4-叔丁氧羰基氨基-2-(3，4-二氯苯基)-丁酸。
1HNMR(CDCl3，400MHz)δ7.41(m，2H)，7.17(d，J＝8Hz，1H)，4.61(brs，1H)，3.58(m，1H)，3.16(m，2H)，2.28(m，1H)，1.92(m，1H)，1.44(s，9H).
步骤2：将4-哌嗪-1-基-喹唑啉(20mg，0.070mmol)溶于1mlCHCl3中，加入4-叔丁氧羰基氨基-2-(3，4-二氯苯基)-丁酸(36mg，0.10mmol)。加入PS-碳二亚胺树脂(0.21mmol)，将混合物振摇过夜。对反应混合物进行过滤，将滤液真空浓缩。残余物经柱色谱纯化(硅胶，用1∶4DCM/EtOAc洗脱)，得到纯的Boc-保护的中间体。将该中间体溶于1.0ml 1，4-二
Figure BDA00001987566301511
烷中，用1.0ml 4M HCl/二
Figure BDA00001987566301512
烷(4mmol)处理。将溶液于室温搅拌过夜至反应完成。将反应混合物浓缩至干，残余物用2ml乙醚研磨。在氮气氛下过滤固体，将其真空干燥2小时，得到4-氨基-2-(3，4-二氯苯基)-1-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-丁-1-酮二盐酸盐(15mg，42％)。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ8.69(s，1H)，8.22(d，J＝9Hz，1H)，8.04(t，J＝8Hz，1H)，7.77(m，2H)，7.54(m，2H)，7.31(d，J＝8.6MHz，1H)，4.30(m，4H)，3.98(m，4H)，3.60(m，1H)，2.98(m，1H)，2.86(m，1H)，2.36(m，1H)，2.02(m，1H).
实施例84
Figure BDA00001987566301513
2-(3，4-二氯苯基)-4-甲基氨基-1-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-丁-1-酮二 盐酸盐的制备
按照文献所述方法(Mahavir Prashad等，Org.Lett.2003，5(2)，125-128)，将2-(3，4-二氯苯基)-4-Boc-氨基-1-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-丁-1-酮N-甲基化，得到[3-(3，4-二氯苯基)-4-氧代-4-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-丁基]-甲基-氨基甲酸叔丁酯，其用过量HCl/二
Figure BDA00001987566301514
烷处理，得到2-(3，4-二氯苯基)-4-甲基氨基-1-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-丁-1-酮二盐酸盐(7mg，31％)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.85(brs，2H)，8.84(s，1H)，8.17(d，J＝7.6Hz，1H)，8.01(m，1H)，7.89(d，J＝7.6Hz，1H)，7.69-7.61(m，3H)，7.33(d，J＝7.6Hz，1H)，4.40(m，1H)，4.11(brs，3H)，3.95(m，2H)，3.78(m，1H)，3.73(m，2H)，3.45(m，3H)，2.80(m，1H)，2.71(m，1H)，2.25(m，1H)，1.97(m，1H).LCMS(APCI+)m/z458[M+H]+.HPLC Rt＝1.78min.
实施例85
Figure BDA00001987566301521
1-{4-[4-氨基-2-(3，4-二氯苯基)丁酰基]-哌嗪-1-基}-喹嗪-4-酮盐酸盐的 制备
步骤1：于-78℃下，向4-吡啶-2-基甲基-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(按照文献J Med.Chem.(1993)，36，2984所述的方法，由1-吡啶-2-基甲基-哌嗪制备)(2.00g，7.21mmol)的THF(15ml)溶液中加入n-BuLi(1.6M己烷溶液，5.0ml，7.9mmol)。将混合物加热至室温并搅拌30分钟。然后将溶液冷却至-78℃，滴加乙氧基亚甲基丙二酸二乙酯(1.72g，7.93mmol)的THF(2ml)溶液。让反应混合物在1小时内升温至0℃并于0℃搅拌1小时。将反应物倒入水中，用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，干燥并浓缩。残余物经柱色谱纯化(己烷∶EtOAc，8∶1至1∶1)，得到2-[2-(4-叔丁氧羰基-哌嗪-1-基)-1-乙氧基-2-吡啶-2-基-乙基]-丙二酸二乙酯(2.40g，67％)，为非对映体混合物。
非对映体1：
1HNMR(CDCl3，400MHz)δ8.55(d，J＝4.4Hz，1H)，7.63(td，J＝7.6Hz，J＝1.6Hz，1H)，7.21(d，J＝7.6Hz，1H)，7.16(dd，J＝7.6Hz，J＝1.6Hz，1H)，4.74(m，1H)，4.16(m，5H)，3.75(q，J＝7.2Hz，2H)，3.52(d，J＝4.4Hz，1H)，3.38(m，4H)，2.67(m，2H)，2.44(m，2H)，1.40(s，9H)，1.22(m，6H)，1.44(t，J＝7.2Hz，3H).LCMS(APCI+)m/z494[M+H]+；Rt＝3.61min.
非对映体2：
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.58(d，J＝4.8Hz，1H)，7.59(td，J＝7.6Hz，J＝1.6Hz，1H)，7.15(dd，J＝7.6Hz，J＝1.6Hz，1H)，7.08(d，J＝8.0Hz，1H)，4.91(m，1H)，4.16(m，5H)，3.53(m，1H)，3.22(m，6H)，2.50(m，2H)，2.19(m，2H)，1.34(s，9H)，1.24(m，6H)，0.69(t，J＝7.2Hz，3H).LCMS(APCI+)m/z494[M+H]+；Rt＝3.62min.
步骤2：将2-[2-(4-叔丁氧羰基-哌嗪-1-基)-1-乙氧基-2-吡啶-2-基-乙基]-丙二酸二乙酯(2.40g，4.86mmol)溶于二甲苯(20ml)中，于140℃加热12小时。冷却后蒸发挥发物，残余物经柱色谱纯化(EtOAc)，得到1-(4-叔丁氧羰基-哌嗪-1-基)-4-氧代-1，9a-二氢-4H-喹嗪-3-甲酸乙酯(1.39g，71％)，为橙色固体。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ9.48(d，J＝7.2Hz，1H)，8.34(s，1H)，7.69(td，J＝7.2Hz，J＝1.2Hz，1H)，7.23(m，1H)，4.44(q，J＝7.2Hz，2H)，4.14(m，2H)，3.10(m，2H)，2.88(m，4H)，1.51(s，9H)，1.43(t，J＝7.2Hz，3H).LCMS(APCI+)m/z402[M+H]+；Rt＝2.85min.
步骤3：将1-(4-叔丁氧羰基-哌嗪-1-基)-4-氧代-1，9a-二氢-4H-喹嗪-3-甲酸乙酯(0.320g，0.797mmol)的浓盐酸(5ml)混合物回流30分钟。冷却后，用NaHCO3水溶液碱化反应物，用DCM充分萃取。合并的有机层用盐水洗涤、干燥并浓缩，得到1-哌嗪-1-基-1，9a-二氢-喹嗪-4-酮(0.075g，41％)，为黄色油状物。
1HNMR(CDCl3，400MHz)δ9.16(d，J＝7.2Hz，1H)，8.20(d，J＝9.2Hz，1H)，7.71(d，J＝9.6Hz，1H)，7.37(t，J＝7.2Hz，1H)，7.03(t，J＝6.4Hz，1H)，6.61(d，J＝9.2Hz，1H)，3.07(m，4H)，2.87(m，4H).LCMS(APCI+)m/z 230[M+H]+；Rt＝0.29min.
步骤4：在实施例34步骤2中，用1-哌嗪-1-基-1，9a-二氢-喹嗪-4-酮替代5-哌嗪-1-基-1H-吲唑，用4-叔丁氧羰基氨基-2-(3，4-二氯苯基)-丁酸替代(D)-Boc-4-氯苯丙氨酸，然后如实施例34步骤所述脱除Boc保护基，制备1-{4-[4-氨基-2-(3，4-二氯苯基)-丁酰基]-哌嗪-1-基}-喹嗪-4-酮盐酸盐。1H NMR (CD3OD，400MHz)δ9.25(d，J＝7.2Hz，1H)，9.57(d，J＝8.8Hz，1H)，8.00(m，2H)，7.71(d，J＝7.2Hz，1H)，7.58(m，2H)，7.33(d，J＝8.0Hz，1H)，7.02(d，J＝8.4Hz，1H)，4.31(m，1H)，3.82(m，5H)，3.65(m，2H)，3.34(m，1H)，2.98(m，1H)，2.86(m，1H)，2.36(m，1H)，2.03(m，1H).LCMS(APCI+)m/z 459，461，463[M+H]+；Rt＝2.02min.
实施例86
Figure BDA00001987566301541
(2R)-2-氨基-3-苯基-1-4-喹唑啉-4-基-哌啶-1-基)-丙-1-酮二盐酸盐的制 备
步骤1：向25ml烧瓶中加入4-三氟甲磺酰氧基-3，6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸苄酯(按照文献Wustrow，D.J.等(1991)，Synthesis，993-995由4-氧代-哌啶-1-甲酸苄酯制备，1.14g，3.12mmol)、4-氯喹唑啉(0.512g，3.12mmol)、氯化锂(0.397g，9.36mmol)、Pd(PPh3)4(0.180g，0.156mmol)和六甲基二锡(1.02g，3.12mmol)。加入1，4-二
Figure BDA00001987566301542
烷(20ml)，反应物用氮气脱气15分钟。将混合物回流下搅拌过夜。冷却后，将黑色悬浮液倒入饱和氟化钾水溶液中。混合物用EtOAc稀释，并搅拌2小时。分离有机相。水相用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤、干燥并浓缩。残余物经柱色谱纯化(己烷∶EtOAc，2∶3)，得到4-喹唑啉-4-基-3，6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸苄酯(0.790g，73％)，为无色油状物。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ9.27(s，1H)，8.19(d，J＝7.2Hz，1H)，8.07(d，J＝8.8Hz，1H)，7.91(m，1H)，7.62(t，J＝7.2Hz，1H)，7.41(m，6H)，6.18(m，1H)，5.23(s，2H)，4.32(s，2H)，3.85(t，J＝5.6Hz，1H)，2.80(brs，2H).LCMS(APCI+)m/z346[M+H]+；Rt＝3.16min.
步骤2：在氮气下，向4-喹唑啉-4-基-3，6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸苄酯(0.907g，2.63mmol)的MeOH(30ml)搅拌溶液中小心地加入10％披钯炭(100mg)。用parr振荡器，将反应物在50psi下氢化3天。经过滤除去催化剂，将滤液真空蒸发。所得的残余物经柱色谱纯化(DCM∶MeOH，20∶1至DCM∶MeOH∶Et3N，100∶10∶1)，得到4-(1，2，3，6-四氢-吡啶-4-基)-喹唑啉(0.358g，64％)，为白色蜡状固体。
1HNMR(CDCl3，400MHzδ9.27(s，1H)，8.19(d，J＝8.4Hz，1H)，8.06(d，J＝8.4Hz，1H)，7.88(t，J＝8.4Hz，1H)，7.65(t，J＝8.4Hz，1H)，3.71(m，1H)，3.31(m，2H)，2.90(m，2H)，1.99(m，4H).LCMS(APCI+)m/z214[M+H]+；Rt＝1.60min.
步骤3：在实施例34步骤2中，用4-(1，2，3，6-四氢-吡啶-4-基)-喹唑啉替代5-哌嗪-1-基-1H-吲唑，用(D)-Boc-苯丙氨酸替代(D)-Boc-4-氯苯丙氨酸，制备(2R)-[1-苄基-2-氧代-2-(4-喹唑啉-4-基-哌啶-1-基)-乙基]-氨基甲酸叔丁酯。
1HNMR(CDCl3，400MHz)(1∶1mixture ofrotamers)δ9.26，9.21(2s，1H，rotamers)，8.08(m，2H)，7.89(m，1H)，7.65(m，1H)，7.28(m，5H)，5.51，5.43(2d，J＝8.4Hz，1H，rotamers)，4.92(m，1H)，4.72(m，1H)，3.95，3.83(2d，J＝13.2Hz，1H，rotamers)，3.65(m，1H)，2.20-3.30(m，4H)，1.20-2.10(m，4H，1.44，1.42(2s，9H，rotamers).LCMS(APCI+)m/z461[M+H]+；Rt＝3.23min.
步骤4：用实施例34步骤3所述的方法，用(2R)-[1-苄基-2-氧代-2-(4-喹唑啉-4-基-哌啶-1-基)-乙基]-氨基甲酸叔丁酯替代(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(1H-吲唑-5-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯，制备(2R)-2-氨基-3-苯基-1-(4-喹唑啉-4-基-哌啶-1-基)-丙-1-酮二盐酸盐。LCMS(APCI+)m/z 361[M+H]+；Rt＝2.38min。
实施例87
Figure BDA00001987566301561
(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)-3，6-二氢 -2H-吡啶-1-基]-丙-1-酮二盐酸盐的制备
步骤1：向经氮气冲洗的、装有4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂戊环(dioxaborolan)-2-基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(制备按照文献Eastwood，P.R.(2000)，Tetrahedron Lett.，3705-3708记载的方法，由叔丁基-4-氧代哌啶-1-甲酸酯制备，127mg，0.410mmol)、K2CO3(142mg，1.02mmol)和二氯[1，1′-双(二苯基膦基)-二茂铁]合钯(II)二氯甲烷加合物(17mg，0.020mmol)的烧瓶中加入1-苯磺酰基-4-氯-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(100mg，0.342mmol)的DMF(3ml)溶液。将混合物于80℃加热36小时。将混合物冷却至室温，让其在EtOAc和盐水之间分配，合并的有机层用饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤，干燥并浓缩。残余物用快速硅胶色谱纯化，用己烷∶EtOAc(2∶1)洗脱，得到4-(1-苯磺酰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(0.068g，45％)，为无色油状物。1HNMR(CDCl3，400MHz)δ8.37(d，J＝5.2Hz，1H)，8.20(d，J＝8.0Hz，2H)，7.73(d，J＝4.0Hz，1H)，7.56(m，1H)，7.49(m，2H)，7.03(d，J＝5.2Hz，1H)，6.73(d，J＝4.0Hz，1H)，6.14(brs，1H)，4.12(m，2H)，3.65(m，2H)，2.55(m，2H)，1.50(s，9H).LCMS(APCI+)m/z440[M+H]+；Rt＝3.84min.
步骤2：用实施例34步骤3所述的方法，用4-(1-苯磺酰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯替代(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(1H-吲唑-5-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯，制备1-苯磺酰基-4-(1，2，3，6-四氢-吡啶-4-基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶二盐酸盐。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ8.36(d，J＝5.2Hz，1H)，8.15(d，J＝8.0Hz，2H)，7.93(d，J＝4.0Hz，1H)，7.76(m，1H)，7.56(m，2H)，7.29(d，J＝5.2Hz，1H)，6.97(d，J＝4.0Hz，1H)，6.29(brs，1H)，3.93(m，2H)，3.60(m，2H)，2.85(m，2H).LCMS(APCI+)m/z340[M+H]+；Rt＝1.87min.
步骤3：向1-苯磺酰基-4-(1，2，3，6-四氢-吡啶-4-基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶二盐酸盐(25mg，0.061mmol)和(D)-Boc-4-氯苯丙氨酸(20mg，0.067mmol)的DMF(2ml)溶液中加入DIEA(63μl，0.36mmol)和HBTU(25mg，0.067mmol)。将反应物于室温搅拌2小时。让混合物在水和EtOAc之间分配。有机层用NaHCO3水溶液和盐水洗涤，干燥并浓缩。将残余物溶于THF(0.3ml)和MeOH(0.3ml)中。加入一水氢氧化锂(10mg，0.24mmol)的H2O(0.3ml)溶液。将混合物于50℃加热过夜。冷却后，让反应物在EtOAc和水之间分配。有机层用盐水洗涤、干燥并浓缩。残余物经柱色谱纯化(己烷∶EtOAc，1∶1至3∶1)，得到(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-氧代-2-[4-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-基]-乙基}-氨基甲酸叔丁酯，为无色油状物。用实施例34步骤3中所述方法脱除Boc保护基，得到(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-基]-丙-1-酮二盐酸盐(9mg，33％)，为白色固体。1HNMR(CD3OD，400MHz)(1∶1mixture ofrotamers)δ8.37(m，1H)，7.73(s，1H)，7.47，7.40(2d，J＝6.0Hz，rotamers)，7.33(m，3H)，7.23(d，J＝8.0Hz，2H)，6.99(m，1H)，6.33，6.31(2s，1H，rotamers)，4.74(m，1H)，4.36(m，1H)，4.21(m，1H)，3.45-3.90(m，2H)，3.05-3.30(m，2H)，1.90-2.70(m，2H).LCMS(APCI+)m/z381，383[M+H]+；Rt＝1.95min.
实施例88
Figure BDA00001987566301571
2(R)-氨基-3-(4-氯苯基)-N-(1-喹唑啉-4-基-氮杂环丁烷-3-基)-丙酰胺的 制备
步骤1：将(1-二苯甲基氮杂环丁烷-3-基)-氨基甲酸叔丁酯(500mg，1.48mmol)、Pd/C(10％w/w，157mg，0.07mmol)和甲酸铵(932mg，14.8mmol)称量加入配有冷凝器的25RBF中，脱气3次，悬浮/溶于6ml甲醇中。将混合物加热至60℃达4小时至反应完成，让其冷却至室温。混合物通过硅藻土塞过滤，用乙醇洗涤，将滤液真空浓缩。将残余物再溶于30ml DCM中，经硫酸钠干燥、过滤并真空浓缩，得到粗制中间体。将该中间体和4-氯喹唑啉(268mg，1.63mmol)溶于6ml NMP中，然后用二异丙基乙胺(515μl，2.96mmol)处理。将溶液加热至80℃过夜至反应完成，得到橙色混合物。冷却至室温后，溶液用乙酸乙酯稀释，倒入稀NaHCO3溶液中。水相用乙酸乙酯萃取，合并有机相。有机相用水、盐水洗涤、分离、经硫酸镁干燥并真空浓缩。残余物经色谱纯化(硅胶，用9∶1MeOH∶EtOAc洗脱)，得到纯的(1-喹唑啉-4-基-氮杂环丁烷-3-基)-氨基甲酸叔丁酯，为黄褐色固体(390mg，88％)
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.47(s，1H)，7.94(d，J＝8.4Hz，1H)，7.78(t，J＝7.6Hz，1H)，7.72(d，J＝8.4Hz，1H)，7.67(m，1H)，7.48(t，J＝7.6Hz，1H)，4.73(m，2H)，4.50(m，1H)，4.30(m，2H)，1.41(s，9H)，LCMS(APCI+)m/z301[M+H]+；Rt＝2.26min.
步骤2：将(1-喹唑啉-4-基-氮杂环丁烷-3-基)-氨基甲酸叔丁酯(390mg，1.30mmol)溶于7ml 4M HCl中，于80℃搅拌，3小时后反应完成。水溶液用乙醚洗涤(弃去)，将水层真空浓缩，得到脱保护的中间体，为白色固体。向装有该固体的烧瓶中加入HOBt(193mg，1.43mmol)、EDCI(274mg，1.43mmol)和2(S)-叔丁氧羰基氨基-3-(4-氯苯基)-丙酸(389mg，1.30mmol)。将混合物悬浮/溶于12.0ml DMF中，用TEA(905μl，6.49mmol)处理。将混合物搅拌4小时至反应完成。让内容物在乙酸乙酯和稀NaHCO3溶液之间分配。水相用乙酸乙酯萃取，合并有机相。有机相用水、盐水洗涤、分离、经硫酸镁干燥、过滤并真空浓缩，得到粗制Boc-中间体，为白色固体。将该物质溶于7ml DCM中，用4.0ml TFA处理。2小时后，将反应溶液真空浓缩，得到浅黄色油状物。让内容物在乙酸乙酯和稀NaHCO3溶液之间分配。水相用乙酸乙酯萃取，合并有机相。有机物用盐水洗涤、分离、经硫酸钠干燥、过滤并真空浓缩。残余物经色谱纯化(硅胶，用9∶1MeOH∶DCM洗脱)，得到纯的2(R)-氨基-3-(4-氯苯基)-N-(1-喹唑啉-4-基-氮杂环丁烷-3-基)-丙酰胺，为无色油状物(177mg，30％)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.60(s，1H)，8.02(brs，1H)，7.82(d，J＝8.4Hz，1H)，7.75(d，J＝8.8Hz，1H)，7.72(t，J＝8.4Hz，1H)，7.40(t，J＝7.6Hz，1H)，7.29(d，J＝8.4Hz，1H)，7.15(d，J＝8.4Hz，1H)，4.85(m，3H)，4.29(dd，J＝15.6，5.6Hz，2H)，3.64(dd，J＝8.8，4.0Hz，1H)，3.22(dd，J＝13.6，4.0Hz，1H)，2.78(dd，J＝14.0，8.8Hz，1H).LCMS(APCI+)m/z382[M+H]+；Rt＝0.76min.
实施例89
Figure BDA00001987566301591
4-氨基-1-[4-(6-氨基-5-环丙基-嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-2-(4-二氯苯基)- 丁-1-酮二盐酸盐的制备
步骤1：向5-环丙基-嘧啶-4，6-二酚(1.35g，8.87mmol)的DCE(35ml)搅拌溶液中缓慢加入POCl3(4.14ml，44.4mmol)，然后加入DIEA(1.72g，13.3mmol)。将反应混合物加热至回流2天。冷却后，真空蒸发溶剂。让残余物在5％NaHCO3和EtOAc之间分配。有机相用盐水洗涤、干燥并通过硅胶塞，得到4，6二氯-5-环丙基-嘧啶(1.30g，78％)，为黄色油状物。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ(s，1H)，1.65(m，1H)，1.03(m，2H)，1.58(m，2H)。
步骤2：用实施例40步骤1所述的方法，用5-环丙基-4，6-二氯-嘧啶替代4-氯-5-碘嘧啶，制备4-(5-环丙基-6-氯-嘧啶-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.31(s，1H)，3.64(m，4H)，3.54(m，4H)，1.73(m，1H)，1.46(s，9H)，1.14(m，2H)，0.65(m，2H).LCMS(APCI+)m/z339，341[M+H]+；Rt＝2.38min.
步骤3：向圆底烧瓶中加入Pd(OAc)2(84mg，0.37mmol)和rac-BINAP(234mg，0.37mmol)，用氮气吹扫。向烧瓶中加入4-(5-环丙基-6-氯-嘧啶-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.27g，3.75mmol)、二苯甲酮亚胺(815mg，4.50mmol)、NaOBut(793mg，8.25mmol)和甲苯(24ml)。将混合物加热至95℃达1小时。冷却至室温后，反应物用EtOAc稀释、通过硅藻土过滤并浓缩。粗制产物经柱色谱纯化(己烷∶EtOAc，2∶1)，得到4-[6-(二苯亚甲基-氨基)-5-环丙基-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.62g，89％)，为无色油状物。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.38(8，1H)，7.41(m，10H)，3.40(m，4H)，3.32(m，4H)，1.46(s，9H)，0.93(m，1H)，0.86(m，2H)，0.59(m，2H).LCMS(APCI+)m/z484[M+H]+；Rt＝3.94min.
步骤4：向4-[6-(二苯亚甲基-氨基)-5-环丙基-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.60g，3.31mmol)的MeOH(70ml)搅拌溶液中加入盐酸羟胺(0.41g，6.0mmol)和NaOAc(0.65g，7.9mmol)。于室温搅拌过夜后，让反应混合物于0.1N NaOH和DCM之间分配。将有机层干燥并浓缩。残余物经柱色谱纯化(DCM∶MeOH，20∶1)，得到4-(6-氨基-5-环丙基-嘧啶-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.00g，95％)，为无色糖浆。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.12(s，1H)，4.97(s，2H)，3.52(m，4H)，3.50(m，4H)，1.48(s，9H)，1.44(m，1H)，1.02(m，2H)，0.64(m，2H).LCMS(APCI+)m/z320[M+H]+；Rt＝2.51min.
步骤5：用实施例34步骤3所述的方法，用4-(6-氨基-5-环丙基-嘧啶-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯替代(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(1H-吲唑-5-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯，制备5-环丙基-6-哌嗪-1-基-嘧啶-4-基胺二盐酸盐。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ8.18(s，1H)，4.12(m，4H)，3.31(m，4H)，1.66(m，1H)，1.18(m，2H)，0.58(m，2H).LCMS(APCI+)m/z220[M+H]+；Rt＝0.74min.
步骤6：按照实施例34步骤2的方法，用5-环丙基-6-哌嗪-1-基-嘧啶-4-基胺二盐酸盐替代5-哌嗪-1-基-1H-吲唑，用4-叔丁氧羰基氨基-2-(4-氯苯基)-丁酸替代(D)-Boc-4-氯苯丙氨酸，然后按照实施例34步骤3中所述脱除Boc保护基，制备4-氨基-1-[4-(6-氨基-5-环丙基-嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-2-(4-氯苯基)-丁-1-酮二盐酸盐。
1HNMR(CD3OD，400MHz)δ8.04(s，1H)，7.41(d，J＝8.4Hz，2H)，7.33(d，J＝8.4Hz，2H)，4.19(m，1H)，3.95(m，1H)，3.85(m，2H)，3.61(m，3H)，3.22(m，2H)，2.95(m，1H)，2.82(m，1H)，2.31(m，1H)，2.01(m，1H)，1.56(m，1H)，1.08(m，2H)，0.47(m，2H).LCMS(APCI+)m/z415，417[M+H]+；Rt＝1.87min.
实施例90
Figure BDA00001987566301611
(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-(4-呋喃并[3，2-b]吡啶-7-基-哌嗪-1-基)-丙 -1-酮二盐酸盐的制备
步骤1：将3-羟基-2-溴吡啶(21.4g，123mmol)的乙酸酐(25g，245mmol)溶液回流1小时。冷却后，将混合物倒入冰水中，用Na2CO3中和，并用乙醚萃取。将有机相干燥并浓缩。残余物经柱色谱纯化，用乙醚洗脱，得到乙酸2-溴-吡啶-3-基酯(26.2g，99％)。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.28(m，1H)，7.46(m，1H)，7.30(m，1H)，2.38(s，3H)。
步骤2：在氮气下，向PdCl2(PPh3)2(1.4g，2.0mmol)和CuI(0.4g，2.1mmol)于TEA(100ml)和THF(200ml)中的溶液中一次性加入2-溴-3-乙酰氧基-吡啶(13.1g，60.6mmol)和TMS-乙炔(7.0g，71mmol)于THF(100ml)中的混合物。将混合物于室温搅拌1小时。然后用饱和NaHCO3(50ml)和MeOH(50ml)猝灭。将混合物于80℃搅拌2小时。冷却后，混合物用乙醚萃取。将有机相干燥并浓缩。残余物经柱色谱纯化，得到呋喃并[3，2-b]吡啶(1.54g，21％)。
1H MR(CDCl3,400MHz)δ8.55(m，1H)，7.84(m，1H)，7.75(m，1H)，7.72(m，1H)，6.99(m，1H).
步骤3：向呋喃并[3，2-b]吡啶(1.5g，13.0mmol)的CHCl3(30ml)溶液中加入MCPBA(2.9g，17.0mmol)。将混合物于室温搅拌16小时。然后混合物通过氧化铝(140g，碱性)过滤，用乙酸乙酯/己烷(1∶1)和DCM/MeOH(20∶1)洗涤，得到呋喃并[3，2-b]吡啶4-氧化物(1.49g，88％)。1HNMR(CDCl3，400MHz)δ8.25(m，1H)，7.81(m，1H)，7.51(m，1H)，7.23(m，1H)。
步骤4：向呋喃并[3，2-b]吡啶4-氧化物的CHCl3(5ml)溶液中加入POCl3(5g，33mmol)。将混合物回流2小时。冷却后，混合物用冰水猝灭，用NaHCO3中和，用CHCl3(3x100ml)萃取。将有机相干燥并浓缩。残余物经柱色谱纯化，得到7-氯-呋喃并[3，2-b]吡啶(0.74g，50％)。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.46(m，1H)，7.92(m，1H)，7.28(m，1H)，7.04(m，1H)。
步骤5：在密封管将7-氯-呋喃并[3，2-b]吡啶(0.73g，4.75mmol)和哌嗪(1.2g，14mmol)的混合物加热至130℃达4小时。冷却后，将固体溶于MeOH和DCM中，浓缩并经柱色谱纯化，用DCM/MeOH(10∶1-1∶1)洗脱，得到7-哌嗪-1-基-呋喃并[3，2-b]吡啶(0.21g，22％)。MS(APCI+)[M+H]+204。
步骤6：向7-哌嗪-1-基-呋喃并[3，2-b]吡啶(0.21g，1.03mmol)和(2R)-2-叔丁氧羰基氨基-3-(4-氯苯基)-丙酸(0.6g，2.0mmol)于DMF(10ml)和TEA(2ml)中的溶液中，加入HOBT(0.3g，2.2mmol)和EDCI(0.42g，2.2mmol)。将混合物于室温搅拌4小时。除去溶剂，残余物经柱色谱纯化，得到(2R)-[1-(4-氯苄基)-2-(4-呋喃并[3，2-b]吡啶-7-基-哌嗪-1-基)-2-氧代-乙基]-氨基甲酸叔丁酯(7mg，1.4％)。MS(APCI+)[M+H]+486。
步骤7：向(2R)-[1-(4-氯苄基)-2-(4-呋喃并[3，2-b]吡啶-7-基-哌嗪-1-基)-2-氧代-乙基]-氨基甲酸叔丁酯(7mg，0.014mmol)的DCM(4ml)溶液中加入HCl/二
Figure BDA00001987566301631
烷(4M，1ml)。将混合物于室温搅拌4小时。除去溶剂，得到(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-(4-呋喃并[3，2-b]吡啶-7-基-哌嗪-1-基)-丙-1-酮，为盐酸盐(6mg，99％)。MS(APCI+)[M+H]+386。
实施例91
(7S，2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(7-甲基-5，6，7，8-四氢-吡啶并[2，3-d]嘧 啶-4-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮二盐酸盐和(7R，2R)-2-氨基-3-(4-氯苯 基)-1-[4-(7-甲基-5，6，7，8-四氢-吡啶并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基-丙-1- 酮二盐酸盐的制备
步骤1：在高压气体贮罐中，将2-氯-6-甲基-烟酸(3.00g，17.5mmol)的甲醇铵(7M，60ml)溶液加热至120℃过夜。冷却后，除去溶剂，残余物用2N HCl中和。滤出沉淀，用水洗涤并干燥，得到2-氨基-6-甲基-烟酸(1.44g，54％)。1HNMR(CD3OD，400MHz)δ8.21(d，J＝7.6Hz，1H)，6.60(d，J＝7.6Hz，1H)，2.41(s，3H).MS(APCI+)[M+H]+153.
步骤2：将2-氨基-6-甲基-烟酸(1.44g，9.46mmol)和甲酰胺(8.0g，178mmol)的混合物于170℃搅拌2小时。冷却后，混合物用水(4ml)猝灭。滤出沉淀，用水洗涤并干燥，得到7-甲基-吡啶并[2，3-d]嘧啶-4-酚(0.79g，51％)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.49(d，J＝8.4Hz，1H)，8.22(s，1H)，7.35(d，J＝8.0Hz，1H)，2.75(s，3H).MS(APCI+)[M+H]+162.
步骤3：向7-甲基-吡啶并[2，3-d]嘧啶-4-酚(0.78g，4.84mmol)的DCE(30ml)溶液中加入DIEA(1.0ml，1.19mmol)，然后加入POCl3(2.4ml，26.1mmol)。将混合物回流过夜。冷却后，除去溶剂，将残余物溶于水(50ml)中，用乙酸乙酯(3x100ml)萃取。将有机相干燥并浓缩。残余物经柱色谱纯化，用己烷/乙酸乙酯(2∶1)洗脱，得到4-氯-7-甲基-吡啶并[2，3-d]嘧啶(0.66g，76％)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ9.22(s，1H)，8.49(d，J＝8.8Hz，1H)，7.57(d，J＝8.4Hz，1H)，2.88(s，3H).MS(APCI+)[M+H]+180.
步骤4：将4-氯-7-甲基-吡啶并[2，3-d]嘧啶(0.66g，3.67mmol)和1-Boc-哌嗪(0.75g，4.03mmol)于DCE(40ml)和TEA(5ml)中的混合物回流1小时。冷却后除去溶剂，残余物经柱色谱纯化，用乙酸乙酯-DCM/MeOH(10∶1)洗脱，得到4-(7-甲基-吡啶并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.2g，99％)。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.82(s，1H)，8.11(d，J＝8.4Hz，1H)，7.28(d，J＝8.8Hz，1H)，3.79(m，4H)，3.65(m，4H)，2.75(s，3H)，1.50(s，9H).MS(APCI+)[M+H]+330.
步骤5：将4-(7-甲基-吡啶并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.2g，3.64mmol)、PtO2(42mg，0.18mmol)于MeOH(40ml)和TFA(2ml)中的溶液在氢气(1atm)下于室温搅拌4小时。滤出催化剂并除去溶剂。残余物经柱色谱纯化，用DCM/MeOH(20∶1)洗脱，得到4-(7-甲基-5，6，7，8-四氢-吡啶并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯，为TFA盐(0.43g，27％)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ9.75(s，1H)，7.97(s，1H)，3.60(m，10H)，2.60(m，2H)，2.00(m，1H)，1.48(s，9H)，1.35(d，J＝6.4Hz，3H).MS(APCI+)[M+H]+334.
步骤6：向4-(7-甲基-5，6，7，8-四氢-吡啶并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯TFA盐(0.19g，0.44mmol)的DCM(20ml)和TEA(1ml)溶液中加入(S)-Mosher氏酰基氯(0.14g，0.55mmol)。将混合物于室温搅拌20分钟。除去溶剂，残余物经柱色谱纯化，用己烷/乙酸乙酯(4∶1-3∶1-2∶1)洗脱。第一次加样得到(7S)-4-[7-甲基-8-(3，3，3-三氟-2-甲氧基-2-苯基-丙酰基)-5，6，7，8-四氢-吡啶并[2，3-d]嘧啶-4-基]-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(84mg，34％)。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.27(s，1H)，7.28(m，2H)，7.12(m，3H)，4.74(m，1H)，3.90(s，3H)，3.40(m，4H)，3.08(m，4H)，2.32(m，1H)，2.20(m，1H)，1.94(m，1H)，1.49(s，9H)，1.27(m，1H)，1.11(d，J＝6.4Hz，3H)。MS(ESI+)[M+H]+550。第二次加样得到(7R)-4-[7-甲基-8-(3，3，3-三氟-2-甲氧基-2-苯基-丙酰基)-5，6，7，8-四氢-吡啶并[2，3-d]嘧啶-4-基]-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(85mg，35％)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.20(s，1H)，7.57(m，2H)，7.40(m，3H)，4.54(m，1H)，3.52(s，3H)，3.50(m，4H)，3.31(m，4H)，2.55(m，1H)，2.42(m，1H)，1.91(m，1H)，1.48(s，9H)，1.27(m，1H)，1.19(d，J＝6.4Hz，3H).MS(APCI+)[M+H]+550.
步骤7：向(7S)-4-[7-甲基-8-(3，3，3-三氟-2-甲氧基-2-苯基-丙酰基)-5，6，7，8-四氢-吡啶并[2，3-d]嘧啶-4-基]-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(84mg，0.153mmol)的MeOH(5ml)溶液中加入LiOH(3M，4ml)。将混合物于室温搅拌4天，然后用2N HCl中和。除去溶剂，残余物经柱色谱纯化，用乙酸乙酯-DCM/MeOH(20∶1)洗脱，得到(7S)-4-(7-甲基-5，6，7，8-四氢-吡啶并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(32mg，63％)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.11(s，1H)，5.20(s，1H)，3.54(m，5H)，3.30(m，4H)，2.57(m，2H)，1.95(m，1H)，1.48(s，9H)，1.40(m，1H)，1.27(d，J＝6.4Hz，3H).MS(APCI+)[M+H]+334.
步骤8：向(7S)-4-(7-甲基-5，6，7，8-四氢-吡啶并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(32mg，0.096mmol)的DCM(2ml)溶液中加入HCl/二
Figure BDA00001987566301651
烷(4M，2ml)。将混合物于室温搅拌3小时。去除溶剂，得到(7S)-7-甲基-4-哌嗪-1-基-5，6，7，8-四氢-吡啶并[2，3-d]嘧啶，为盐酸盐(22mg，99％)。MS(APCI+)[M+H]+234。
步骤9：向(7S)-7-甲基-4-哌嗪-1-基-5，6，7，8-四氢-吡啶并[2，3-d]嘧啶(7.5mg，0.032mmol)的DCM(4ml)和DIEA(0.5ml)溶液中加入D-2-叔丁氧羰基氨基-3-(4-氯苯基)-丙酸(10mg，0.033mmol)和HBTU(13mg，0.034mmol)。将混合物于室温搅拌1小时。除去溶剂，残余物经柱色谱纯化，用己烷/乙酸乙酯(2∶1)洗脱，得到(7S，2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(7-甲基-5，6，7，8-四氢-吡啶并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(16mg，96％)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.10(s，1H)，7.26(d，J＝6.8Hz，2H)，7.12(d，J＝8.0Hz，2H)，5.45(d，J＝8.4Hz，1H)，5.10(s，1H)，4.84(m，1H)，3.60(m，4H)，3.30(m，2H)，3.00(m，4H)，2.50(m，2H)，1.96(m，1H)，1.80(m，1H)，1.44(m，1H)，1.41(s，9H)，1.27(d，J＝6.4Hz，3H).MS(APCI+)[M+H]+516.
步骤10：向(7S，2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(7-甲基-5，6，7，8-四氢-吡啶并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(16mg，0.031mmol)的DCM(5ml)溶液中加入HCl/二
Figure BDA00001987566301661
烷(4M，2ml)。将混合物于室温搅拌4小时。除去溶剂，得到(7S，2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(7-甲基-5，6，7，8-四氢-吡啶并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮二盐酸盐(13mg，99％)。MS(APCI+)[M+H]+416。以类似的方式，由(7R)-4-[7-甲基-8-(3，3，3-三氟-2-甲氧基-2-苯基-丙酰基)-5，6，7，8-四氢-吡啶并[2，3-d]嘧啶-4-基]-哌嗪-1-甲酸叔丁酯制备(7R，2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(7-甲基-5，6，7，8-四氢-吡啶并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮二盐酸盐。
实施例92
Figure BDA00001987566301662
3-氨基-2-(4-氯苯基)-1-[4-(5-甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌 嗪-1-基]-丙-1-酮二盐酸盐的制备
步骤1：向7-苯磺酰基-5-甲基-4-哌嗪-1-基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶二盐酸盐(35mg，0.081mmol)、3-Boc-氨基-2-(4-氯苯基)-丙酸(27mg，0.089mmol)和TEA(0.11ml，0.81mmol)于1.2ml DCM的溶液中加入HBTU(34mg，0.089mmol)。将反应混合物于室温搅拌2小时，然后加入0.15ml 3M LiOH和1.0ml MeOH。将反应混合物于35℃搅拌3.5小时，然后加入饱和NaHCO3。混合物用DCM萃取，合并的萃取液经干燥(硫酸钠)、过滤并浓缩。粗产物经硅胶纯化(用1∶1DCM∶EtOAc冲洗，然后用1∶1至1∶4DCM∶EtOAc梯度冲洗)，得到3-Boc-氨基-2-(4-氯苯基)-1-[4-(5-甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮，该物质用于下一步骤。
步骤2：向3-Boc-氨基-2-(4-氯苯基)-1-[4-(5-甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮的1ml二
Figure BDA00001987566301671
烷溶液中加入1.5ml 4MHCl/二
Figure BDA00001987566301672
烷。将所得悬浮液于室温搅拌7小时，然后将其浓缩至干。然后将固体溶于最少量MeOH中，加入乙醚研磨产物。固体在氮气压力下通过玻璃漏斗过滤分离，用乙醚冲洗并真空干燥，得到3-氨基-2-(4-氯苯基)-1-[4-(5-甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮二盐酸盐(21mg，55％)，为淡棕色粉末。
1HNMR (D2O，400MHz)δ8.08(s，1H)，7.29(d，J＝8.4Hz，2H)，7.17(d，J＝8.4Hz，2H)，7.07(s，1H)，4.30(t，J＝6.5Hz，1H)，4.03-3.94(m，1H)，3.82-3.73(m，1H)，3.68-3.46(m，5H)，3.28(dd，J＝12.9，7.4Hz，1H)，3.23(dd，J＝12.9，5.7Hz，1H)，3.04-2.94(m，1H)，2.13(s，3H).LCMS(APCI+)m/z399[M+H]+；Rt：2.11min.
实施例93
2-(4-氯苯基)-3-二甲氨基-1-[4-(5-甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4- 基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮二盐酸盐的制备
步骤1：将7-苯磺酰基-5-甲基-4-哌嗪-1-基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶二盐酸盐(200mg，0.465mmol)和3-叔丁氧羰基氨基-2-(4-氯苯基)-丙酸(146mg，0.488mmol)于室温下溶于/悬浮于2.0ml DMF中，用TEA(259μl，1.86mmol)处理。一次性加入HBTU(194mg，0.511mmol)，将反应物于室温搅拌过夜至反应完成。让反应物在乙酸乙酯和稀NaHCO3溶液之间分配。水相用乙酸乙酯萃取，合并有机相。有机相用水洗涤，然后用盐水洗涤，分离、经硫酸镁干燥、过滤并真空浓缩。残余物经色谱纯化(硅胶，用70∶30乙酸乙酯∶己烷洗脱)，得到纯的[3-[4-(7-苯磺酰基-5-甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-2-(4-氯苯基)-3-氧代-丙基]-氨基甲酸叔丁酯，为无色凝胶状物(295mg，99％)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.44(s，1H)，8.16(d，J＝8.4Hz，2H)，7.59(t，J＝7.2Hz，1H)，7.49(appt，J＝7.6Hz，2H)，7.31(m，3H)，7.20(d，J＝8.0Hz，2H)，5.12(m，1H)，4.09(m，1H)，3.92(m，1H)，3.60(m，1H)，3.56-3.46(m，4H)，3.38(d，J＝10.4Hz，2H)，3.32(m，1H)，2.90(m，1H)，2.29(s，3H)，1.41(s，9H).LCMS(APCI+)m/z639[M+H]+；Rt＝3.70min.
步骤2：将[3-[4-(7-苯磺酰基-5-甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-2-(4-氯苯基)-3-氧代-丙基]-氨基甲酸叔丁酯(295mg，0.464mmol)溶于2.3ml 1，4-二
Figure BDA00001987566301681
烷中，用4M HCl/1，4-二
Figure BDA00001987566301682
烷(2.3ml，9.29mmol)处理。将混合物搅拌4小时至反应完成，得到黄色沉淀。悬浮液用乙醚洗涤，倒入水中。再加入乙醚，振摇各层。弃去乙醚洗涤液，水相用饱和NaHCO3溶液处理至pH纸为碱性(约10)，得到白色沉淀。水相用乙酸乙酯萃取，合并有机相。有机相用水洗涤，然后用盐水洗涤，分离，经硫酸镁干燥、过滤并真空浓缩，得到几乎纯的3-氨基-1-[4-(7-苯磺酰基-5-甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-2-(4-氯苯基)-丙-1-酮，为无色油状物(194mg，77％)。1H NMR(游离碱，CDCl3，400MHz)δ8.44(s，1H)，8.16(d，J＝8.4Hz，2H)，7.59(t，J＝7.2Hz，1H)，7.49(appt，J＝7.6Hz，2H)，7.31(m，3H)，7.19(d，J＝8.0Hz，2H)，3.92(m，1H)，3.85(dd，J＝8.4，5.2Hz，1H)，3.61(m，1H)，3.56-3.50(m，4H)，3.43(m，2H)，3.32(m，2H)，2.90(m，2H)，2.29(s，3H).LCMS(APCI+)m/z 539[M+H]+；Rt＝2.40min.
步骤3：将3-氨基-1-[4-(7-苯磺酰基-5-甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-2-(4-氯苯基)-丙-1-酮(75mg，0.139mmol)溶于1.0ml1，2-二氯乙烷中，用37％甲醛水溶液(31μl，0.417mmol)处理。将溶液于室温搅拌15分钟，然后一次性加入三乙酰氧基硼氢化钠(118mg，0.557mmol)。反应在1小时内完成，将内容物倒入稀NaHCO3溶液中。水相用乙酸乙酯萃取，合并有机相。有机相用水洗涤，然后用盐水洗涤，分离，经硫酸镁干燥、过滤并真空浓缩。残余物经色谱纯化(硅胶，用含1％TEA的9∶1乙酸乙酯∶甲醇洗脱)，得到纯1-[4-(7-苯磺酰基-5-甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-2-(4-氯苯基)-3-二甲基氨基-丙-1-酮中间体，为无色油状物。将该油状物溶于各0.5ml的THF、甲醇和水中。溶液用一水氢氧化锂(29mg，0.696mmol)处理，得到不透明溶液，将其搅拌过夜至反应完成。让溶液于乙酸乙酯和水之间分配，水相再用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用水洗涤，然后用盐水洗涤，分离、经硫酸钠干燥、过滤并真空浓缩，得到粗制产物，为黄色油状物。残余物经色谱纯化(硅胶，用含1％TEA的4∶1乙酸乙酯∶甲醇洗脱)，得到标题游离碱，为无色油状物。将该物质溶于最少量THF(＞1ml)中，用2.0M HCl/乙醚处理。滤出所产生的白色沉淀，用乙醚洗涤并减压干燥，得到2-(4-氯苯基)-3-二甲氨基-1-[4-(5-甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮二盐酸盐，为白色固体(24mg，35％)。
1H NMR(Free-Base，CDCl3，400MHz)δ10.72(brs，1H)，8.34(s，1H)，7.30(d，J＝8.4Hz，2H)，7.24(d，J＝8.4Hz，2H)，6.93(s，1H)，4.11(m，1H)，3.95(m，1H)，3.65(m，2H)，3.55(m，3H)，3.33(m，2H)，3.05(m，1H)，2.48(dd，J＝12.4，4.8Hz，1H)，2.36(s，3H)，2.32(s，6H).LCMS(APCI+)m/z427[M+H]+；Rt＝1.97min.
实施例94
Figure BDA00001987566301701
2-(4-氯苯基)-4-二甲基氨基-1-[4-(5-甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4- 基)-哌嗪-1-基]-丁-1-酮二盐酸盐的制备
用实施例93步骤1-3中所述方法[在步骤1中用4-叔丁氧羰基氨基-2-(4-氯苯基)-丁酸替代3-叔丁氧羰基氨基-2-(4-氯苯基)-丙酸]，制备2-(4-氯苯基)-4-二甲基氨基-1-[4-(5-甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-丁-1-酮二盐酸盐(21mg，30％)。1H NMR(CD3OD，400MHz)δ8.29(s，1H)，7.41(d，J＝8.4Hz，2H)，7.36(d，J＝8.4Hz，H)，7.25(s，1H)，4.25(t，J＝6.8Hz，1H)，3.97(appd，J＝8.8Hz，2H)，3.85-3.72(m，4H)，3.63(m，1H)，3.32(m，1H)，3.17(m，1H)，3.07(m，1H)，2.89(s，3H)，2.88(s，3H)，2.41(m，1H)，2.39(s，3H)，2.10(m，1H).LCMS(APCI+)m/z441[M+H]+；Rt＝1.87min.
实施例95
Figure BDA00001987566301702
N-(2-氨基-乙基)-N-(4-氯苄基)-4-吡啶-4-基-苯甲酰胺二盐酸盐的 制备
步骤1：将(2-氨基-乙基)-氨基甲酸叔丁酯(5.00g，31.2mmol)和4-氯-苯甲醛(4.61g，32.77mmol)于室温下溶于60ml 1，2-二氯乙烷中。将反应混合物搅拌40分钟，然后用三乙酰氧基硼氢化钠(9.90g，46.8mmol)处理。将混合物搅拌过夜至反应完成，用饱和NaHCO3溶液猝灭。水相用DCM萃取、分离、经硫酸镁干燥并真空浓缩。残余物经色谱纯化(硅胶，用己烷/EtOAc加上2％三乙胺洗脱)，得到纯的[2-(4-氯苄基氨基)-乙基]-氨基甲酸叔丁酯，为粘稠黄色油状物(5.38g，61％)。
1HNMR(CDCl3，400MHz)δ7.29(d，J＝8.0Hz，2H)，7.25(d，J＝8.0Hz，2H)，4.92(brs，1H)，3.75(s，2H)，3.23(appd，J＝5.6Hz，2H)，2.73(appt，J＝6.0Hz，2H)，1.44(s，9H)，1.36(brs，1H).LCMS(APCI+)m/z285[M+H]+；Rt＝2.30min.
步骤2：4-溴-苯甲酸乙酯(1.00g，4.37mmol)、吡啶-4-硼酸(537mg，4.37mmol)和四(三苯基膦)合钯(0)(757mg，0.655mmol)在氮气下脱气。将固体溶于15ml 1，4-二
Figure BDA00001987566301711
烷和2.6ml 2M碳酸钠溶液中。将混合物加热至80℃过夜，至反应完成，让其冷却至室温。让内容物在乙酸乙酯和水之间分配，水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用水洗涤，然后用盐水洗涤，经硫酸镁干燥、过滤并真空浓缩。残余物经色谱纯化(硅胶，用1∶1己烷∶EtOAc洗脱，Rf＝0.2)，得到纯的4-吡啶-4-基-苯甲酸乙酯，为浅黄色固体(350mg，35％)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.71(d，J＝4.4Hz，2H)，8.16(d，J＝8.0Hz，2H)，7.71(d，J＝8.0Hz，2H)，7.53(d，J＝4.4Hz，2H)，4.42(q，J＝7.2Hz，2H)，1.43(t，J＝7.2Hz，3H).LCMS(APCI+)m/z 228[M+H]+；Rt＝2.81min.
步骤3：将4-吡啶-4-基-苯甲酸乙酯(430mg，1.89mmol)在6.5ml3M HCl溶液中加热至100℃过夜，至反应完成。将混合物冷却至室温，用水稀释(溶解沉淀)。将溶液过滤并真空浓缩，得到4-吡啶-4-基-苯甲酸盐酸盐，为浅黄色固体(380mg，85％)。
1HNMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.93(d，J＝5.6Hz，2H)，8.27(d，J＝5.6Hz，2H)，8.13(d，J＝8.0Hz，2H)，8.09(d，J＝8.0Hz，2H)，-CO2H or-NH+notobserved.LCMS(APCI+)m/z200[M+H]+；Rt＝1.05min.
步骤4：将4-吡啶-4-基-苯甲酸盐酸盐(100mg，0.502mmol)、[2-(4-氯苄基氨基)-乙基]-氨基甲酸叔丁酯(143mg，0.502mmol)、HOBt(77mg，0.502mmol)和EDCI(56mg，0.552mmol)溶于1.7ml DMF中，用三乙胺(77μl，0.552mmol)处理至室温。将反应物搅拌过夜至反应完成，让其在乙酸乙酯和稀NaHCO3溶液之间分配。水相用乙酸乙酯萃取，合并有机相。有机相用水、盐水洗涤、经硫酸镁干燥、过滤并真空浓缩。残余物经色谱纯化(硅胶，用己烷/乙酸乙酯梯度加上2％三乙胺洗脱)，得到{2-[(4-氯苄基)-(4-吡啶-4-基-苯甲酰基)-氨基]-乙基}-氨基甲酸叔丁酯，为无色油状物(184mg，93％)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.68(d，J＝4.8Hz，2H)，7.65(m，2H)，7.54(d，J＝8.4Hz，2H)，7.48(d，J＝4.4Hz，2H)，7.34(m，2H)，7.13(m，2H)，4.91(m，1H)，4.59(brs，2H)，3.62(m，2H)，3.44(m，2H)，1.46(s，9H).LCMS(APCI+)m/z466[M+N]+；Rt＝3.19min.
步骤5：将{2-[(4-氯苄基)-(4-吡啶-4-基-苯甲酰基)-氨基]-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(184mg，0.395mmol)溶于2.0ml 1，4-二
Figure BDA00001987566301721
烷中，用2.0ml 4M HCl/1，4-二烷处理。将反应物搅拌1小时至反应完成，用乙醚稀释。产物经真空过滤分离，得到N-(2-氨基-乙基)-N-(4-氯苄基)-4-吡啶-4-基-苯甲酰胺二盐酸盐，为浅黄色细粉(166mg，96％)。
1HNMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.91(d，J＝6.0Hz，2H)，8.26(d，J＝6.0Hz，2H)，8.13(brs，3H)，8.05(d，J＝8.0Hz，2H)，7.76(d，J＝7.6Hz，2H)，7.45(brs，1H)，7.44(d，J＝8.0Hz，2H)，7.26(d，J＝7.6Hz，2H)，4.57(brs，2H)，3.61(m，2H)，3.08(m，2H).LCMS(APCI+)m/z366[M+H]+；Rt＝2.13min.
实施例96
Figure BDA00001987566301723
(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(5，6，7，8-四氢-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4- 基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮二盐酸盐的制备
步骤1：将2-氨基烟酸(7.00g，50.7mmol)和甲酰胺(22.8g，506mmol)的混合物加热至167℃达2.5小时。冷却后，将固体从热水(100ml)中重结晶，得到纯产物(4.80g，64％)。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.94(m，1H)，8.64(d，1H，J＝7.6Hz)，8.30(s，1H)，7.59(m，1H).MS(APCI+)[M+H]+148.
步骤2：将4-羟基吡啶并[2，3-d]嘧啶(2.00g，13.6mmol)的POCl3(40ml)溶液回流2小时。冷却后，真空下除去过量的POCl3。残余物用饱和NaHCO3猝灭，用乙酸乙酯(3x100ml)萃取。将有机相干燥并浓缩。残余物经柱色谱纯化，用己烷/乙酸乙酯(1∶1)洗脱，得到4-氯吡啶并[2，3-d]嘧啶(0.72g，32％)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ9.35(m，1H)，9.30(s，1H)，8.66(m，1H)，7.73(m，1H).MS(APCI+)[M+H]+166.
步骤3：向4-氯吡啶并[2，3-d]嘧啶(0.72g，4.4mmol)和1-Boc哌嗪(0.84g，4.5mmol)于DCE(10ml)和IPA(10ml)中的溶液中加入三乙胺(4ml)。将混合物回流4小时。冷却后除去溶剂。残余物经柱色谱纯化，用乙酸乙酯洗脱，得到4-吡啶并[2，3-d]嘧啶-4-基-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.26g，92％)。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ9.07(dd，J＝4.30Hz，J＝1.98Hz，1H)，8.88(s，1H)，8.25(dd，J＝7.99Hz，J＝1.98Hz，1H)，7.41(dd，J＝8.18Hz，J＝3.74Hz，1H)，3.82(m，4H)，3.65(m，4H)，1.50(s，9H).MS(APCI+)[M+H]+316.
步骤4：向4-吡啶并[2，3-d]嘧啶-4-基-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.24g，0.76mmol)的MeOH(10ml)和TFA(1ml)溶液中加入PtO2(10mg)。将混合物在氢气(1atm)下于室温搅拌过夜。滤出催化剂并去除溶剂。残余物经柱色谱纯化，用DCM/MeOH(20∶1)洗脱，得到4-(5，6，7，8-四氢-吡啶并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.15g，62％)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.10(s，1H)，5.92(s，1H)，3.50(m，4H)，3.40(m，2H)，3.25(m，4H)，2.55(m，2H)，1.85(m，2H)，1.48(s，9H).MS(APCI+)[M+H]+320.
步骤5：向4-(5，6，7，8-四氢-吡啶并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.88g，2.75mmol)的DCM(10ml)溶液中加入HCl/二烷(4M，5ml)。将混合物于室温搅拌4小时。除去溶剂，得到4-哌嗪-1-基-5，6，7，8-四氢-吡啶并[2，3-d]嘧啶，为盐酸盐(0.80g，99％)。MS(APCI+)[M+H]+220。
步骤6：向4-哌嗪-1-基-5，6，7，8-四氢-吡啶并[2，3-d]嘧啶二盐酸盐(20mg，0.068mmol)和(2R)-2-叔丁氧羰基氨基-3-(4-氯苯基)-丙酸(21mg，0.070mmol)于DCM(5ml)和TEA(1ml)的溶液中加入HBTU(30mg，0.079mmol)。将混合物于室温搅拌4小时。除去溶剂，残余物经柱色谱纯化，用乙酸乙酯/DCM/MeOH(20∶1)洗脱，得到(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-氧代-2-[4-(5，6，7，8-四氢-吡啶并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(18mg，53％)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.10(s，1H)，7.25(m，3H)，7.12(m，2H)，5.42(d，J＝8.8Hz，1H)，5.14(s，1H)，4.84(m，1H)，3.67(m，3H)，3.50(m，1H)，3.40(m，2H)，3.23(m，5H)，2.95(m，4H)，2.50(m，2H)，1.86(m，2H)，1.67(s，1H)，1.42(s，9H).MS(APCI+)[M+H]+502.
步骤7：向(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-氧代-2-[4-(5，6，7，8-四氢-吡啶并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(18mg，0.036mmol)的DCM(4ml)溶液中加入HCl/二烷(4M，2ml)。将混合物于室温搅拌4小时。除去溶剂，得到(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(5，6，7，8-四氢-吡啶并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮二盐酸盐(14mg，99％)。MS(APCI+)[M+H]+401。
实施例97
Figure BDA00001987566301742
(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(6，7-二氢-5H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4- 基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮二盐酸盐的制备
步骤1：向甲酰胺盐酸盐(21.6g，268mmol)的MeOH(300ml)溶液中加入NaOMe(25％的MeOH溶液，120ml，555mmol)。将混合物于室温搅拌1小时。缓慢加入1，1，2-乙烷三甲酸三乙酯(64.4g，60ml，262mmol)的MeOH(90ml)溶液。加入后，将混合物于室温搅拌20小时。除去溶剂，将残余物溶于冰水(200ml)中，用2N HCl(140ml)中和至pH＝1-2。滤出所形成的固体，用水(50ml)洗涤并真空干燥，得到(4，6-二羟基-嘧啶-5-基)-乙酸甲酯(45g，93％)。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.03(s，1H)，3.67(s，3H)，3.42(s，2H)。MS(APCI+)[M+H]+185。
步骤2：向(4，6-二羟基-嘧啶-5-基)-乙酸甲酯(45g，244mmol)的DCE(800ml)溶液中加入DIEA(72ml，413mmol)，然后缓慢加入POCl3(80ml，874mmol)。加入后，将混合物于室温搅拌2小时，然后回流过夜。冷却后除去溶剂，将残余物溶于冰水(400ml)中，用10NNaOH中和至pH 6。用乙酸乙酯(3x500ml)萃取。将有机相干燥并浓缩。残余物经柱色谱纯化，用己烷/乙酸乙酯(4∶1)洗脱，得到(4，6-二氯-嘧啶-5-基)-乙酸甲酯(38g，70％)。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.73(s，1H)，4.00(s，2H)，3.77(s，3H)。MS(APCI+)[M+H]+222。
步骤3：于-78℃下，向(4，6-二氯-嘧啶-5-基)-乙酸甲酯(0.52g，2.35mmol)的乙醚(40ml)溶液中滴加DIBAL-H(1.5M，4ml，6.05mmol)。加入后，让混合物升温至室温，并搅拌3小时。然后用2N HCl(10ml)于-78℃猝灭。用乙酸乙酯(3x50ml)萃取。将有机相干燥并浓缩，得到相当纯的2-(4，6-二氯-嘧啶-5-基)-乙醇(0.44g，97％)。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.66(s，1H)，3.96(t，J＝6.8Hz，2H)，3.23(t，J＝6.8Hz，2H).1.65(s，1H)。MS(APCI+)[M+H]+194。
步骤4：向2-(4，6-二氯-嘧啶-5-基)-乙醇(0.46g，2.4mmol)的DCM(40ml)溶液中加入MsCl(0.50g，4.36mmol)、三乙胺(1ml)和催化量的DMAP。于室温搅拌过夜后，去除溶剂，残余物经柱色谱纯化，用己烷/乙酸乙酯(4∶1)洗脱，得到甲磺酸2-(4，6-二氯-嘧啶-5-基)-乙酯(0.52g，80％)。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.71(s，1H)，4.50(t，J＝6.4Hz，2H)，3.42(t，J＝6.8Hz，2H)，3.02(s，3H)。
步骤5：将甲磺酸2-(4，6-二氯-嘧啶-5-基)-乙酯(0.50g，1.84mmol)和4-甲氧基苄胺(0.60g，4.37mmol)于DCE(30ml)和TEA(4ml)中的溶液回流过夜。冷却后除去溶剂，残余物经柱色谱纯化，用己烷/乙酸乙酯(4∶1)洗脱，得到4-氯-7-(4-甲氧基-苄基)-6，7-二氢-5H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(036g，71％)。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.35(s，1H)，7.26(dd，J＝2.8Hz，J＝1.6Hz，2H)，6.88(d，J＝4.4Hz，2H)，5.33(s，1H)，4.62(d，J＝5.6Hz，2H)，3.81(s，3H)，3.73(t，J＝7.2Hz，2H)，3.04(t，J＝6.8Hz，2H).MS(APCI+)[M+H]+276.
步骤6：将4-氯-7-(4-甲氧基-苄基)-6，7-二氢-5H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(0.36g，1.31mmol)、1-Boc-哌嗪(1.0g，5.37mmol)和tBuOK(0.18g，1.60mmol)的NMP(20ml)溶液加热至128℃达20小时。冷却后，混合物用乙酸乙酯(500ml)萃取，用水(5x150ml)洗涤。将有机相干燥并浓缩。残余物经柱色谱纯化，用己烷/乙酸乙酯(1∶1)洗脱，得到4-[7-(4-甲氧基-苄基)-6，7-二氢-5H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.32g，57％)。1HNMR(CDCl3，400MHz)δ8.17(s，1H)，7.20(d，J＝8.4Hz，2H)，6.84(d，J＝8.4Hz，2H)，4.50(s，2H)，3.79(s，3H)，3.59(m，4H)，3.48(m，4H)，3.35(m，2H)，3.30(m，2H)，1.49(s，9H).MS(APCI+)[M+H]+426.
步骤7：将4-[7-(4-甲氧基-苄基)-6，7-二氢-5H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.32g，0.74mmol)的TFA(20ml)溶液于65℃搅拌20小时。冷却后，真空蒸发TFA，得到双-三氟乙酸4-哌嗪-1-基-6，7-二氢-5H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(0.15g，99％)。MS(APCI+)[M+H]+206。
步骤8：向双三氟乙酸4-哌嗪-1-基-6，7-二氢-5H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(20mg，0.097mmol)的DCM(10ml)和TEA(2ml)溶液中加入(2R)-2-叔丁氧羰基氨基-3-(4-氯苯基)-丙酸(30mg，0.10mmol)和HBTU(30mg，0.079mmol)。将混合物于室温搅拌2小时。除去溶剂，残余物经柱色谱纯化，得到(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(6，7-二氢-5H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(19mg，40％)。1HNMR(CDCl3，400MHz)δ8.03(s，1H)，7.25(m，2H)，7.12(m，2H)，5.40(m，1H)，4.83(m，2H)，3.50(m，10H)，3.20(m，5H)，2.96(m，2H)，2.28(m，3H)，1.42(s，9H).MS(APCI+)[M+H]+488.
步骤9：向(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(6，7-二氢-5H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(19mg，0.039mmol)的DCM(4ml)溶液中加入HCl/二烷(4M，2ml)。将混合物于室温搅拌6小时。除去溶剂，得到(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(6，7-二氢-5H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮二盐酸盐(15mg，99％)。MS(APCI+)[M+H]+388。
实施例98
(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(5-甲基-6，7-二氢-5H-吡咯并[2，3-d] 嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮二盐酸盐的制备
步骤1：于0℃下，向KH(30％，13.3g，125mmol)的THF(200ml)溶液中缓慢加入(4，6-二氯-嘧啶-5-基)-乙酸甲酯(20.0g，90.0mmol)和MeI(290.0g，8.8ml，141.0mmol)的THF(200ml)溶液。加入后，将混合物于室温搅拌30分钟，然后加热至回流1小时。冷却至0℃后，混合物用饱和氯化铵水溶液猝灭。分离有机相，水相用乙酸乙酯(3x200ml)萃取。合并有机相并将其干燥。除去溶剂，残余物经柱色谱纯化。用己烷/乙酸乙酯(5∶1)洗脱，得到2-(4，6-二氯-嘧啶-5-基)-丙酸甲酯(17.6g，83％)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.69(s，1H)，4.39(dd，J＝14.4Hz，J＝7.2Hz，1H)，3.73(s，3H)，1.57(d，J＝7.2Hz，3H).
步骤2：于-78℃下，向2-(4，6-二氯-嘧啶-5-基)-丙酸甲酯(0.5g，2.13mmol)的乙醚(40ml)溶液中滴加DIBAL-H(1.5M，4ml，6.0mmol)。让混合物升温至室温并搅拌3小时。用2N HCl(10ml)于-78℃猝灭。水相用乙酸乙酯(3x50ml)萃取。将有机相干燥并浓缩。残余物经柱色谱纯化，用己烷/乙酸乙酯(4∶1)洗脱，得到2-(4，6-二氯-嘧啶-5-基)-丙-1-醇(0.40g，91％)。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.62(s，1H)，4.16(m，1H)，3.90(m，2H)，1.93(s，1H)，1.40(d，J＝7.2Hz，3H)。
步骤3：向2-(4，6-二氯-嘧啶-5-基)-丙-1-醇(0.40g，1.93mmol)的DCM(40ml)溶液中加入MsCl(0.50g，4.36mmol)、TEA(1ml)和催化量的DMAP。将混合物于室温搅拌2小时。除去溶剂，残余物经柱色谱纯化，用己烷/乙酸乙酯(4∶1)洗脱，得到甲磺酸2-(4，6-二氯-嘧啶-5-基)-丙酯(0.54g，98％)。1HNMR(CDCl3，400MHz)δ8.68(s，1H)，4.74(m，1H)，4.55(m，1H)，4.14(m，1H)，2.99(s，3H)，1.49(dd，J＝7.2Hz，J＝1.2Hz，3H).
步骤4：向甲磺酸2-(4，6-二氯-嘧啶-5-基)-丙酯(0.54g，1.89mmol)的DCM(30ml)和TEA(4ml)溶液中加入4-甲氧基苄胺(0.80g，5.83mmol)。将混合物回流过夜。冷却后除去溶剂，残余物经柱色谱纯化，用己烷/乙酸乙酯(4∶1)洗脱，得到4-氯-7-(4-甲氧基-苄基)-5-甲基-6，7-二氢-5H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(0.55g，99％)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.24(s，1H)，7.17(d，J＝7.6Hz，2H)，6.86(d，J＝7.6Hz，2H)，4.55(s，2H)，3.80(s，3H)，3.66(m，1H)，3.37(m，1H)，3.07(m，1H)，1.31(dd，J＝7.2Hz，J＝1.2Hz，3H).MS(APCI+)[M+H]+291.
步骤5：向4-氯-7-(4-甲氧基-苄基)-5-甲基-6，7-二氢-5H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(0.55g，1.88mmol)的NMP(20ml)溶液中加入1-Boc-哌嗪(1.0g，5.40mmol)和tBuOK(0.21g，1.88mmol)。将混合物加热至128℃达30小时。冷却后，混合物用乙酸乙酯(500ml)稀释，用水(5x150ml)洗涤。将有机相干燥并浓缩。残余物经柱色谱纯化，用己烷/乙酸乙酯(1∶1)洗脱，得到4-(5-甲基-6，7-二氢-5H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.30g，36％)。1HNMR(CDCl3，400MHz)δ8.19(s，1H)，7.18(d，J＝8.4Hz，2H)，6.84(d，J＝8.4Hz，2H)，4.52(dd，J＝27.6Hz，J＝14.8Hz，2H)，3.79(s，3H)，3.58(m，12H)，3.34(m 1H)，2.95(m，1H)，1.48(s，9H)，1.15(d，J＝6.8Hz，3H).MS(APCI+)[M+H]+440.
步骤6：将4-(5-甲基-6，7-二氢-5H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.30g，0.68mmol)的TFA(20ml)溶液加热至65℃过夜。冷却后，真空蒸发过量的TFA，得到5-甲基-4-哌嗪-1-基-6，7-二氢-5H-吡咯并[2，3-d]嘧啶，为TFA盐(0.15g，99％)。MS(APCI+)[M+H]+220。
步骤7：向5-甲基-4-哌嗪-2-基-6，7-二氢-5H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(18mg，0.082mmol)的DCM(10ml)和TEA(2ml)溶液中加入(2R)-2-叔丁氧羰基氨基-3-(4-氯苯基)-丙酸(25mg，0.082mmol)和HBTU(31mg，0.082mmol)。将混合物于室温搅拌2小时。除去溶剂，残余物经柱色谱纯化，用乙酸乙酯-DCM/MeOH(30∶1)洗脱，得到(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(5-甲基-6，7-二氢-5H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(32mg，78％)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.06(s，1H)，7.26(d，J＝6.0Hz，2hours)，7.14(d，J＝8.0Hz，2H)，5.39(d，J＝8.0Hz，1H)，4.82(m，2H)，3.45(m，10H)，3.18(m，4H)，3.00(m，2H)，1.83(m，4H)，1.42(s，9H)，1.19(m，3H).MS(APCI+)[M+H]+502.
步骤8：向(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(5-甲基-6，7-二氢-5H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(32mg，0.064mmol)的DCM/MeOH(5∶1，6ml)溶液中加入HCl/二
Figure BDA00001987566301791
烷(4M，2ml)。将混合物于室温搅拌6小时。除去溶剂，得到(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(5-甲基-6，7-二氢-5H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮二盐酸盐(26mg，99％)。MS(APCI+)[M+H]+402。
实施例99
Figure BDA00001987566301801
(2R)-N-{4-[4-(2-氨基-3-苯基-丙酰基)-哌嗪-1-基]-喹唑啉-6-基}- 甲磺酰胺二盐酸盐的制备
步骤1：向4-氯-6-硝基喹唑啉(按照文献Alexander J.Bridges等，J.Med.Chem.1996，39，267-276和其中引用的参考文献中所述方法制备；12g，57.5mmol)和DIEA(10ml，57.5mmol)的230ml IPA溶液中加入Boc-哌嗪(10.7g，57.5mmol)。将反应混合物加热至60℃，并搅拌13小时，然后将其冷却至室温，经旋转蒸发浓缩。将残余物溶于二氯甲烷(DCM)中，用1N NaOH处理。将有机层干燥(Na2SO4)、过滤并经旋转蒸发浓缩。所得的油状物在硅胶上纯化(1∶1至1∶4DCM∶EtOAc梯度)，得到4-(6-硝基-喹唑啉-4-基)-1-Boc-哌嗪，为浅黄色油状物(18.3g，89％)。LCMS(APCI+)m/z 360[M+H]+。HPLC Rt 3.06min。
步骤2：向Pd/C(5％w/w，800mg，0.38mmol)的100ml 2-甲氧基乙醇(在使用前用氮气脱气)悬浮液中加入4-(6-硝基-喹唑啉-4-基)-1-Boc-哌嗪(4.0g，11.1mmol)的10ml 2-甲氧基乙醇溶液。用氢气囊向反应混合物中通气，将反应混合物于室温、一个大气压氢气下搅拌13小时。然后加入硅藻土(Celite)，反应混合物通过Celite塞过滤，用MeOH冲洗。将滤液浓缩，所得的油状物通过硅胶短柱用EtOAc过滤。将所得滤液浓缩，得到4-(6-氨基-喹唑啉-4-基)-1-Boc-哌嗪(3.47g，95％)。LCMS(APCI+)m/z 330[M+H]+。HPLC Rt 2.31min。
步骤3：向(6-氨基喹唑啉-4-基)1-Boc-哌嗪(1.0g，3.04mmol)、三乙胺(1.7ml，12.2mmol)和DMAP(93mg，0.76mmol)于20ml DCM中的0℃溶液中，通过加液漏斗滴加甲磺酰氯(0.59ml，7.6mmol)的6mlDCM溶液。将反应混合物搅拌5分钟，升温至室温，再搅拌1.5小时。然后将反应混合物冷却至0℃，通过注射器缓慢加入NaOMe(5.4M的MeOH溶液，5.6ml，30.4mmol)。将反应混合物搅拌10分钟，升温至室温，再搅拌2小时，然后加入饱和氯化铵。反应混合物用DCM萃取，合并的萃取液用盐水洗涤、干燥(Na2SO4)、过滤并浓缩。所得残余物在硅胶上纯化(20∶1DCM∶MeOH)，得到N-(4-Boc-哌嗪-1-基-喹唑啉-6-基)-甲磺酰胺(1.05g，85％)，为淡棕色粉末。LCMS(APCI+)m/z408[M+H]+。HPLC Rt 2.64min。
步骤4：向N-(4-Boc-哌嗪-1-基-喹唑啉-6-基)-甲磺酰胺(1.05g，2.58mmol)的15ml二
Figure BDA00001987566301811
烷溶液中加入10ml 4M HCl/二
Figure BDA00001987566301812
烷。将所得悬浮液于室温搅拌17小时，然后用乙醚稀释，固体在氮气压下通过玻璃漏斗过滤分离、用乙醚冲洗并真空干燥，得到N-(4-哌嗪-1-基-喹唑啉-6-基)-甲磺酰胺二盐酸盐(969mg，99％)，为白色粉末。1HNMR(CD3OD，400MHz)δ8.80(s，1H)，8.12(s，1H)，7.81-7.84(m，2H)，4.50(dd，J＝5.2，5.2Hz，4H)，3.57(dd，J＝5.2，5.2Hz，4H)，3.13(s，3H).LCMS(APCI+)m/z308[M+H]+.HPLCRt 1.55min.
步骤5：将PS-CDI(Argonaut，1.04mmol/g，56mg，2.0当量)悬浮于N-(4-哌嗪-1-基-喹唑啉-6-基)-甲磺酰胺二盐酸盐(11mg，0.029mmol，1.0当量)和DIEA(25μl，0.15mmol，5.0当量)的1.6ml 9∶1CHCl3∶THF溶液中，向装有该悬浮液的Jones管中连续加入HOBt·H2O(6mg，0.038mmol，1.3当量)和(D)-Boc-苯丙氨酸(8mg，0.032mmol，1.1当量)。将反应混合物于室温振摇15小时，然后加入Si-trisamine(Silicycle，1.21mmol/g，48mg，2.0当量)。将反应混合物再振摇1小时，然后真空过滤，树脂用CHCl3冲洗，滤液经旋转蒸发浓缩。粗产物经硅胶纯化(19∶1DCM∶MeOH)，得到(2R)-N-{4-[4-(2-Boc-氨基-3-苯基-丙酰基)-哌嗪-1-基]-喹唑啉-6-基}-甲磺酰胺，为澄清的无色残余物。
步骤6：向(2R)-N-{4-[4-(2-Boc-氨基-3-苯基-丙酰基)-哌嗪-1-基]-喹唑啉-6-基}-甲磺酰胺的1.0ml二
Figure BDA00001987566301813
烷溶液中加入1.2ml 4M HCl/二烷。将所得悬浮液于室温下再搅拌13小时，然后将其浓缩至干。将所得固体溶于最少量MeOH中，加入乙醚研磨产物。所得的悬浮液用乙醚洗涤，固体在氮气压下通过玻璃漏斗过滤分离，用乙醚冲洗，进一步真空干燥，得到(2R)-N-{4-[4-(2-氨基-3-苯基-丙酰基)-哌嗪-1-基]-喹唑啉-6-基}-甲磺酰胺二盐酸盐(13mg，84％)，为黄色粉末。LCMS(APCI+)m/z 455[M+H]+。HPLC Rt 2.18min。
实施例100
Figure BDA00001987566301821
4-氨基-2-(2-氯苯基)-1-[4-(1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1- 基]-丁-1-酮二盐酸盐的制备
步骤1：将1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酚(5.00g，36.73mmol)溶于68.5ml磷酰氯和9.31ml N，N-二甲基苯胺(73.47mmol)。将该混合物加热至回流(120℃)达90分钟，至反应完成，得到暗红色溶液。将混合物真空浓缩并于冰浴中冷却至0℃。将残余物倒入冰浴中并搅拌3分钟。酸性熔融物用乙醚萃取，合并有机相。有机物用冷水、冷的半饱和NaHCO3溶液、盐水洗涤，分离，经硫酸镁干燥、过滤并真空浓缩，得到4-氯-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶，为浅黄色粉末(2.30g，41％)。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.84(s，1H)，8.46(s，1H)，未观测到NH。
步骤2：将4-氯-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶(500mg，3.24mmol)和哌嗪-1-甲酸叔丁酯(603mg，3.24mmol)溶于11.0ml NMP中，然后用二异丙基乙胺(845μl，4.85mmol)处理。将黄色溶液加热至80℃过夜至反应完成，让其冷却至室温。溶液用乙酸乙酯稀释，倒入稀NaHCO3溶液中，用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用水、盐水洗涤，分离、经硫酸镁干燥、过滤并真空浓缩，得到粗产物，为黄褐色固体。将该物质用DCM/己烷研磨，得到4-(1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯，为乳白色固体(824mg，84％)。1HNMR(CDCl3，400MHz)δ8.48(s，1H)，8.06(s，1H) 4.05(m，4H)，3.67(m，4H).LCMS(APCI+)m/z305[M+H]+；Rt＝2.14min.
步骤3：将4-(1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(600mg，1.97mmol)溶于4ml 1，4-二
Figure BDA00001987566301831
烷中，用10ml 4M HCl/1，4-二烷于室温下处理。将溶液搅拌2小时，得到产物的浅黄色悬浮液。溶剂用乙醚稀释，搅拌10分钟，过滤。产物塞状物用乙醚洗涤，让其在氮气流下干燥，得到4-哌嗪-1-基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶二盐酸盐，为浅黄色固体(539mg，99％)。
1HNMR(D6O，400MHz)δ8.59(s，1H)，8.42(s，1H)，4.29(appt，J＝5.6Hz，4H)，3.42(appt，J＝5.6Hz，4H).LCMS(APCI+)m/z205[M+H]+；Rt＝0.34min.
步骤4：将4-哌嗪-1-基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶二盐酸盐(60mg，0.22mmol)、HOBt(29mg，0.22mmol)、EDCI(46mg，0.24mmol)和4-叔丁氧羰基氨基-2-(2-氯苯基)-丁酸[用实施例61中的方法制备(68mg，0.22mmol)]悬浮/溶于1.5ml DMF中，然后用三乙胺(121μl，0.87mmol)处理。将混合物搅拌4小时至反应完成，然后让其在乙酸乙酯和稀NaHCO3溶液之间分配。水层用乙酸乙酯萃取，合并有机相。有机相用水、盐水洗涤，分离、经硫酸镁干燥、过滤并真空浓缩。将残余物溶于1ml 1，4-二烷中，用1ml 4M HCl/1，4-二烷处理。将溶液于室温搅拌过夜至反应完成，用乙醚稀释，得到沉淀。打碎该物质，得到悬浮的粒状固体。将其搅拌30分钟。将悬浮液过滤，用乙醚洗涤并在氮气流下干燥，得到4-氨基-2-(2-氯苯基)-1-[4-(1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-丁-1-酮二盐酸盐，为黄褐色固体(69.2mg，67％)。
1H NMR (D6O，400MHz)δ8.52(brs，1H)，8.31(s，1H)，7.40(d，J＝7.2Hz，1H)，7.12(m，3H)，4.42(t，J＝6.8Hz，1H) 4.11(m，1H)，3.98(m，3H)，3.70(m，2H)，3.61(m，1H)，3.41(m，1H)，2.96(m，1H)，2.80(m，1H)，2.21(m，1H)，1.94(m，1H).LCMS(APCI+)m/z 400[M+H]+；Rt＝1.52min.
实施例101
Figure BDA00001987566301841
4-氨基-2-(4-甲基苄基)-1-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-丁-1-酮二盐 酸盐的制备
步骤1：在氮气、-78℃下，在15分钟内向含有LiHMDS(1.0M，11.3ml，11mmol)的40ml THF溶液中滴加2-氧代-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(2.gg，11mmol)的15ml THF溶液。加入完毕后，将反应物于-78℃下搅拌45分钟，然后在5分钟内滴加含有4-甲基苄基溴(2.1g，11mmol)的15ml THF溶液。将反应物于-78℃搅拌1小时，然后升温至0℃，搅拌1小时。混合物用36ml 3M LiOH猝灭，于室温搅拌过夜。反应物用水稀释，用乙醚洗涤。水相用1N HCl酸化，用DCM萃取。有机相经硫酸镁干燥。过滤并除去溶剂，得到4-叔丁氧羰基氨基-2-(4-甲基苄基)-丁酸(1.61g，49％)。LCMS(APCI-)m/z 306[M-Boc-H]-；Rt：2.14min。
步骤2：在氮气氛下，向含有4-叔丁氧羰基氨基-2-(4-甲基苄基)-丁酸(0.24g，0.77mmol)的25ml DMF溶液中加入EDCI(0.16g，0.84mmol)、HOBT(130mg，0.84mmol)和NMM(0.28g，2.8mmol)。于室温搅拌15分钟后，加入4-哌嗪-1-基-喹唑啉(200mg，0.93mmol)，于室温下搅拌反应物。反应物用乙酸乙酯稀释，用水、饱和碳酸氢钠和水洗涤。有机相经硫酸镁干燥。过滤、除去溶剂并经biotage纯化，用10％MeOH/DCM洗脱，得到[3-(4-甲基-苄基)-4-氧代-4-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-丁基]-氨基甲酸叔丁酯(0.225g，64％)，为白色固体。
LCMS(APCI+)m/z504[M+H]+；Rt：3.03min.1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.69(1H，s)，7.92(1H，d，J8.3Hz)，7.76-7.71(2H，m)，7.45(1H，t，J7.8Hz)，7.06(4H，m)，4.53(1H，br.s)，3.96-3.76(2H，m)，3.63-3.54(2H，m)，3.47-3.40(2H，m)，3.24-2.84(6H，m)，2.76-2.70(1H，m)，2.27(3H，s)，2.09-2.00(1H，m)，1.73-1.65(1H，m)，1.40(9H，s.)
步骤3：将含有[3-(4-甲基-苄基)-4-氧代-4-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-丁基]-氨基甲酸叔丁酯(0.22g，0.44mmol)的10ml DCM和5ml 4NHCl/二
Figure BDA00001987566301851
烷混合物于室温、氮气氛下搅拌过夜。将反应物减压浓缩。将残余物溶于甲醇中，加入乙醚以沉淀产物。滤出固体并干燥，得到4-氨基-2-(4-甲基苄基)-1-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-丁-1-酮二盐酸盐(167mg)。
LCMS(APCI+)m/z404[M+H]+；Rt：1.87min.1H NMR(D2O，400MHz)δ8.45(1H，s)，7.87(2H，t，J8.1Hz)，7.65-7.57(2H，m)，7.01(4H，s)，4.18-4.12(1H，m)，3.98-3.92(1H，m)，3.82-3.71(2H，m)，3.52-3.37(3H，m)，3.25-2.76(6H，m)，2.64-2.54(1H，m)，2.02(3H，s)，1.98-1.80(1H，m.)
实施例102
Figure BDA00001987566301852
(2R，3′R)-2-(3′-氨基-吡咯烷-1-基)-2-(3，4-二氯苯基)-1-(4-喹唑啉-4- 基-哌嗪-1-基)-乙酮三盐酸盐 和 (2S，3′R)-2-(3′-氨基-吡咯烷-1-基)-2-(3，4-二氯苯基)-1-(4-喹唑啉-4- 基-哌嗪-1-基)-乙酮三盐酸盐的制备
步骤1：向一水乙醛酸(1.0g，10.9mmol)和(3R)-3-Boc-氨基-吡咯烷(2.06g，11.1mmol)的65ml DCE溶液中加入3，4-二氯苯基硼酸(2.11g，11.1mmol)。将反应混合物加热至回流并搅拌16小时，然后将其冷却至室温，用DCM稀释，用1M Na2CO3萃取。碱性水层用EtOAc萃取，合并的萃取液用1N NaOH洗涤、干燥(Na2SO4)、过滤并浓缩。将所产生的残余物溶于最少量DCM中，加入乙醚研磨产物。所得固体经真空过滤中分离、用乙醚洗涤并真空干燥，得到(3′R)-(3′-Boc-氨基-吡咯烷-1-基)-(3，4-二氟苯基)-乙酸的一种非对映体(1.53g，36％)，为黄褐色粉末，该物质称为非对映体1。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.63(s，1H)，7.45(d，J＝8.2Hz，1H)，7.33(d，J＝8.0Hz，1H)，7.09(d，J＝6.4Hz，0.2H)，6.95(d，J＝6.4Hz，0.8H)，3.92-3.78(m，1H)，3.51(s，0.25H)，3.49(s，0.75H)，3.40-3.30(m，1H)，2.77-2.69(m，0.2H)，2.64-2.53(m，1.8H)，2.42-2.33(m，1H)，2.31-2.17(m，1H)，2.01-1.88(m，1H)，1.58-1.46(m，1H)，1.36(s，9H).LCMS(APCI)+m/z389[M+H]+；HPLC Rt 2.17min.
来自上述的碱性水层用固体KHSO4小心酸化至大约pH 6.5，直至停止放出CO2。然后油性混合物用EtOAc萃取，合并的萃取液经干燥(Na2SO4)、过滤并浓缩。将所得残余物溶于最少量DCM中，加入乙醚研磨产物。所得固体经真空过滤分离，用乙醚洗涤并真空干燥，得到(3′R)-(3′-Boc-氨基-吡咯烷-1-基)-(3，4-二氟苯基)-乙酸的另一种非对映体(0.67g，16％)，为黄褐色粉末，将其称为非对映体2。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.68(s，1H)，7.67-7.58(m，1.25H)，7.46-7.37(m，1H)，7.13-7.03(m，0.75H)，4.20(d，J＝6.6Hz，1H)，3.97(brs，1H)，3.11-3.00(m，0.5H)，2.90-2.76(m，1.5H)，2.74-2.63(m，0.5H)，2.63-2.52(m，1H)，2.47-2.37(m，0.5H)，2.13-1.97(m，1H)，1.74-1.60(m，1H)，1.36(s，9H).LCMS(APCI)+m/z389[M+H]+；HPLC Rt 2.17min.
步骤2，(非对映体1)：向4-哌嗪-1-基喹唑啉(30mg，0.14mmol)和非对映体1(65mg，0.17mmol)的1.2ml 3∶1DCM∶THF溶液中顺序加入HOBt·H2O(21mg，0.14mmol)和DCC(34mg，0.17mmol)。将反应混合物于室温搅拌3.5小时，然后用DCM稀释，通过压缩硅藻土真空过滤，用DCM冲洗。然后将滤液与2NNaOH一起搅拌，用DCM萃取。合并的萃取液经干燥(Na2SO4)、过滤并浓缩。粗产物在二氧化硅上纯化(1∶4DCM∶乙酸乙酯至30∶1DCM∶MeOH梯度)，得到(3′R)-2-(3′-Boc-氨基-吡咯烷-1-基)-2-(3，4-二氯苯基)-1-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-乙酮。然后将其溶于1.2ml二
Figure BDA00001987566301871
烷中，加入1.5ml 4M HCl/二烷。将所得悬浮液于室温搅拌16小时，然后将其浓缩至干。将固体溶于最少量MeOH中，用乙醚研磨产物。所得固体在氮气压下通过玻璃漏斗过滤分离，用乙醚冲洗并真空干燥，得到(3′R)-2-(3′-氨基-吡咯烷-1-基)-2-(3，4-二氯苯基)-1-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-乙酮三盐酸盐的一种非对映体(67mg，81％)，为浅黄色粉末。1H NMR(D2O，400MHz)δ8.45(s，1H)，7.91(d，J＝8.0Hz，1H)，7.89(d，J＝7.8Hz，1H)，7.67(d，J＝8.4Hz，1H)，7.59(d，J＝7.8Hz，1H)，7.56(s，1H)，7.51(d，J＝8.4Hz，1H)，7.33(d，J＝8.4Hz，1H)，5.54(s，0.75H)，5.52(s，0.25H)，4.25-3.95(m，5H)，3.77-3.35(m，7H)，3.26-3.06(m，1H)，2.60-2.40(m，1H)，2.19-1.94(m，1H).LCMS(APCI)+m/z485[M+H]+；HPLC Rt 1.71min.
步骤2，非对映体2：按照上述用于非对映体1的步骤2，用非对映体2酰化4-哌嗪-1-基喹唑啉，得到(3′R)-2-(3-氨基-吡咯烷-1-基)-2-(3，4-二氯苯基)-1-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-乙酮三盐酸盐的另一种非对映体(60mg，72％)，为浅黄色粉末。
1HNMR(D2O，400MHz)δ8.45(s，1H)，7.91(d，J＝7.8Hz，1H)，7.89(d，J＝7.8Hz，1H)，7.67(d，J＝8.4Hz，1H)，7.59(d，J＝8.0Hz，1H)，7.55(s，1H)，7.49(d，J＝8.2Hz，1H)，7.32(d，J＝7.6Hz，1H)，5.46(d，J＝12.7Hz，1H)，4.24-3.95(m，5H)，3.82-3.44(m，6H)，3.40-3.28(m，0.5H)，3.20-3.10(m，1H)，3.10-2.98(m，0.5H)，2.56-2.36(m，1H)，2.15-1.92(m，1H).LCMS(APCI)+m/z485[M+H]+；HPLCRt 1.69min.
实施例103
Figure BDA00001987566301873
(2R)-2-氨基-3-苯基-1-(4-吡啶并[2，3-d]嘧啶-4-基-哌嗪-1-基)丙-1- 酮三盐酸盐的制备
步骤1：将2-氨基烟酸(7g)和甲酰胺(22.8g)于167℃(内部温度)加热2.5小时。冷却后，固体从100ml热水中重结晶，得到吡啶并[2，3-d]嘧啶-4-酚，为浅黄色粉末(5.2g，69.7％)。1H NMR(DMSO，400MHz)δ12.60(br，1H)，8.90(br，1H)，8.50(m，1H)，8.37(s，1H)，7.50(m，1H).Rt0.87min.MS(ESI+)[M+H]+148.
步骤2：将吡啶并[2，3-d]嘧啶-4-酚(3g)的POCl3(45ml)溶液于回流下搅拌3小时。除去过量的POCl3。将残余物加入10ml冷水中，用EtOAc(2x30ml)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，并经硫酸钠干燥。在除去溶剂后，得到4-氯吡啶并[2，3-d]嘧啶，为黄色固体(0.3g，7.6％)。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ9.38(br，1H)，9.31(s，1H)，8.62(d，1H)，7.75(m，1H)。
步骤3：将乙醇(10ml)中的4-氯-吡啶并[2，3-d]嘧啶(0.3g)和哌嗪(1.6g)回流1小时。去除溶剂，加入50ml甲苯。真空除去甲苯。所得固体无需纯化而直接用于下一步骤。Rt 1.93min。MS(ESI+)[M+H]+216。
步骤4：于0℃下，将DIEA(0.74ml)和HBTU(1.3g)加入到(2R)-2-叔丁氧羰基氨基-3-苯基-丙酸(0.092g)的THF(5ml)溶液中。将混合物于室温搅拌20分钟，然后加入4-哌嗪-1-基-吡啶并[2，3-d]嘧啶(0.31g)。将反应物于室温搅拌1小时。加入20ml EtOAc并分离有机层。水层用EtOAc(20ml)萃取。合并的有机层用饱和碳酸氢钠(20ml)洗涤并经硫酸钠干燥。去除溶剂后，残余物经快速色谱纯化(10∶1＝DCM∶MeOH)，得到[1-苄基-2-氧代-2-(4-吡啶并[2，3-d]嘧啶-4-基-哌嗪-基)-乙基-氨基甲酸叔丁酯，为白色泡沫状固体(0.392g，58.9％)。1HNMR(CDCl3，400MHz)δ9.11(br，1H)，8.92(s，1H)，8.15(d，1H)，7.40(m，1H)，7.20-7.33(m，5H)，5.42(m，1H)，4.85(m，1H)，3.78-3.82(m，2H)，3.61-3.70(m，2H)，3.50-3.58(m，2H)，3.15-3.20(m，1H)，3.08-3.12(m，2H)，1.42(s，9H).Rt2.23min.MS(ESI+)[M+H]+463.
步骤5：将[1-苄基-2-氧代-2-(4-吡啶并[2，3-d]嘧啶-4-基-哌嗪-基)-乙基-氨基甲酸叔丁酯(0.046mg)溶于DCM(5ml)中，加入HCl/二
Figure BDA00001987566301891
烷(0.5ml)。将悬浮液于室温搅拌3小时，然后将其浓缩，得到(2R)-2-氨基-3-苯基-1-(4-吡啶并[2，3-d]嘧啶-4-基-哌嗪-1-基)-丙-1-酮三盐酸盐(0.031g，86％)。Rt 1.55min。MS(ESI+)[M+H]+363。
实施例104
5-氨基-2-(4-氯苄基)-1-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-戊-1-酮二盐酸 盐的制备
步骤1：向-78℃的LHMDS(1.0M，5.3ml，5.3mmol)的10ml THF溶液中，通过注射器加入Boc-2-哌啶酮(1.0g，5.0mmol)的8ml THF溶液。将反应混合物于-78℃搅拌1小时，然后通过注射器快速加入4-氯苄基溴(1.1g，5.3mmol)的5ml THF溶液。将反应混合物于-78℃下搅拌1小时，升温至0℃，再搅拌1小时，然后用17ml 3M LiOH溶液猝灭。然后将反应混合物于室温搅拌15小时，此后用水稀释并用乙醚洗涤。水层用固体KHSO4酸化，用DCM萃取，萃取液经干燥(Na2SO4)、过滤并浓缩，得到5-Boc-氨基-2-(4-氯苄基)-戊酸(1.0g，60％)，为澄清的无色糖浆。LCMS(APCI-)m/z 340[M-H]-；Rt：2.37min。
步骤2：将EDCI(100mg，0.54mmol)、HOBt·H2O(82mg，0.54mmol)、5-Boc-氨基-2-(4-氯苄基)-戊酸(170mg，0.50mmol)和TEA(190μl，1.4mmol)于3ml DMF中的溶液搅拌10分钟，加入固体4-哌嗪-1-基-喹唑啉二盐酸盐(130mg，0.45mmol)。将反应混合物于室温搅拌15小时，然后加入水。反应混合物用DCM萃取，合并的萃取液用饱和NaHCO3洗涤，干燥(Na2SO4)、过滤并浓缩。粗产物经硅胶纯化(1∶1至1∶9DCM∶EtOAc)，得到5-Boc-氨基-2-(4-氯苄基)-1-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-戊-1-酮。LCMS(APCI+)m/z 538[M+H]+；Rt：3.12min。
步骤3：向5-Boc-氨基-2-(4-氯苄基)-1-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-戊-1-酮的1.5ml二
Figure BDA00001987566301901
烷溶液中加入2.5ml 4M HCl/二
Figure BDA00001987566301902
烷。将所得悬浮液于室温搅拌17小时，然后将其浓缩至干。将固体溶于最少量MeOH中，加入乙醚研磨产物。固体在氮气压下通过玻璃漏斗过滤分离，用乙醚冲洗并真空干燥，得到5-氨基-2-(4-氯苄基)-1-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-戊-1-酮二盐酸盐(110mg，46％)，为白色粉末。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ8.71(1H，d，J2.0Hz)，8.20(1H，d，J8.7Hz)，8.05(1H，t，J7.8Hz)，7.84-7.75(2H，m)，7.31-7.22(4H，m)，4.40-4.30(1H，m)，4.29-4.20(1H，m)，4.12-4.02(1H，m)，3.92-3.66(4H，m)，3.53-3.42(1H，m)，3.29-3.21(1H，m)，2.97-2.81(4H，m)，1.87-1.62(4H，m).LCMS(APCI+)m/z438[M+H]+；Rt：1.98min.
实施例105
2-(2-氨基-乙氧基)-3-(4-氯苯基)-1-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-丙 -1-酮二盐酸盐的制备
将PS-CDI(175mg，0.181mmol)、一水HOBt(214mg，0.140mmol)、4-哌嗪-1-基-喹唑啉二盐酸盐(52mg，0.181mmol)和2-(2-叔丁氧羰基氨基-乙氧基)-3-(4-氯苯基)-丙酸(48mg，0.140mmol；按照文献Nizal S.Chandrakumar等，J.Med.Chem.1992，35，2928-2938中所述的方法，通过用4-氯苄基溴将(2-Boc-氨基-乙氧基)-乙酸乙酯烷基化而制得)悬浮于/溶于2.5ml氯仿(加上3-5滴THF)中。将混合物于室温振摇过夜，然后用MP-CO3(330mg，0.838mmol)处理2小时。将混合物真空过滤，用氯仿冲洗并真空浓缩。残余物经硅胶纯化(1∶19DCM∶EtOAc)，得到2-(2-Boc-氨基-乙氧基)-3-(4-氯苯基)-1-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-丙-1-酮。将该物质溶于1.0ml 1，4-二
Figure BDA00001987566301911
烷中，用1.5ml4M HCl/1，4-二烷处理，得到慢沉淀。对混合物进行短暂超声处理并于室温搅拌过夜至反应完成。将所得悬浮液真空浓缩，固体悬浮于乙醚中，在氮气压下过滤并真空干燥，得到2-(2-氨基-乙氧基)-3-(4-氯苯基)-1-(4-喹唑啉-4-基-哌嗪-1-基)-丙-1-酮二盐酸盐，为黄色粉末(13mg，18％)。LCMS(APCI+)m/z 440[M+H]+。HPLC Rt＝1.75min。
实施例106
Figure BDA00001987566301913
(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(3-环丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶 -4-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮二盐酸盐的制备
步骤1：于-78℃下，向LDA(9.85ml，1.5M，15.8mmol)的THF(20ml)搅拌溶液中滴加4，6-二氯嘧啶(2.00g，13.4mmol)的THF(12ml)溶液。搅拌1.5小时后，滴加环丙烷甲醛(1.05g，15.0mmol)的THF(10ml)溶液。将溶液于-78℃搅拌1小时，然后加入水(10ml)猝灭。让反应混合物升温至室温，并于EtOAc和水之间分配。有机层用盐水洗涤、干燥并浓缩。残余物经柱色谱纯化(己烷/EtOAc，3∶1)，得到环丙基-(4，6-二氯-嘧啶-5-基)-甲醇(2.36g，80％)，为黄色油状物。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.70(s，1H)，4.56(m，1H)，2.63(d，J＝8.0Hz，1H)，1.70(m，1H)，0.76(m，1H)，0.55(m，2H).
步骤2：于0℃下，向经剧烈搅拌的环丙基-(4，6-二氯-嘧啶-5-基)-甲醇(0.84g，3.8mmol)的无水丙酮(12ml)溶液中，分次加入氧化铬(VI)(1.2g，12mmol)。将混合物于0℃搅拌30分钟。通过加入异丙醇(2ml)，破坏过量的氧化剂。搅拌15分钟后，将反应混合物倒入饱和NaHCO3溶液中，经Celite过滤。滤液用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，干燥并浓缩。残余物经柱色谱纯化(己烷∶EtOAc，6∶1)，得到环丙基-(4，6-二氯-嘧啶-5-基)-甲酮(0.80g，96％)，为无色油状物。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.83(s，1H)，2.26(m，1H)，1.46(m，2H)，1.26(m，2H)。
步骤3：将环丙基-(4，6-二氯-嘧啶-5-基)-甲酮(0.75g，3.5mmol)、无水肼(0.13ml，4.1mmol)和THF(35ml)的混合物于室温搅拌4小时。让反应物于水和EtOAc之间分配。有机层用盐水洗涤、干燥并通过硅胶短柱，得到4-氯-3-环丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶(0.50g，74％)，为白色固体。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ11.87(s，1H)，8.80(s，1H)，2.55(m，1H)，1.15(m，2H)，1.14(m，2H).
步骤4：用实施例40步骤1所述的方法，用4-氯-3-环丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶替代4-氯-5-碘嘧啶，制备4-(3-环丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯。LCMS(APCI+)m/z 345[M+H]+；Rt＝2.52min。
步骤5：用实施例34步骤3所述的方法，用4-(3-环丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯替代(2R)-{1-(4-氯苄基)-2-[4-(1H-吲唑-5-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁酯，制备3-环丙基-4-哌嗪-1-基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶二盐酸盐。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.58(s，1H)，4.60(m，4H)，3.53(m，4H)，2.36(m，1H)，1.31(m，2H)，1.14(m，2H).LCMS(APCI+)m/z 245[M+H]+；Rt＝1.02min.
步骤6：在实施例81步骤3的步骤中，用3-环丙基-4-哌嗪-1-基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶二盐酸盐替代4-哌嗪-1-基-6，7，8，9-四氢-5H-1，3，9-三氮杂-芴二盐酸盐，制备(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-[4-(3-环丙基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮二盐酸盐。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ8.48(s，1H)，7.40(d，J＝8.4Hz，2H)，7.34(d，J＝8.4Hz，2H)，4.77(m，1H)，4.24(m，3H)，3.87(m，2H)，3.74(m，2H)，3.25(m，1H)，3.16(m，2H)，2.27(m，1H)，1.28(m，2H)，1.10(m，2H).LCMS(APCI+)m/z426，428[M+H]+；Rt＝1.88min.
实施例107
Figure BDA00001987566301931
2-(3，4-二氯苯基)-3-(1H-咪唑-4-基)-1-[4-(7H-吡咯并[2，3-]嘧啶-4- 基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮二盐酸盐的制备
步骤1：采用实施例78步骤1中所述的方法，用(3，4-二氯苯基)-乙酸甲酯替代3-叔丁氧羰基氨基-丙酸叔丁酯，用4-溴甲基-咪唑-1-甲酸叔丁酯(按照文献J.Med. Chem.1997，40，2208中所述的方法，由4(5)-羟基甲基咪唑盐酸盐制备)替代4-溴-1-溴甲基-2-氟-苯，制备4-[2-(3，4-二氯苯基)-2-甲氧基羰基-乙基]-咪唑-1-甲酸叔丁酯。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ7.96(s，1H)，7.42(s，1H)，7.38(d，J＝8.0Hz，1H)，7.16(d，J＝8.0Hz，1H)，7.02(s，1H)，4.08(t，J＝7.6Hz，1H)，3.66(s，3H)，3.32(dd，J＝14.4Hz，J＝8.4Hz，1H)，2.92(dd，J＝14.4Hz，J＝6.8Hz，1H).LCMS(APCI+)m/z 299，301，303[M-Boc+H]+；Rt＝3.72min.
步骤2：采用实施例78步骤2中所述的方法，用4-[2-(3，4-二氯苯基)-2-甲氧羰基-乙基]-咪唑-1-甲酸叔丁酯替代3-叔丁氧羰基氨基-2-(4-三氟甲基苄基)-丙酸乙酯，制备2-(3，4-二氯苯基)-3-(1H-咪唑-4-基)-丙酸。1HNMR(CD3OD，400MHz)δ8.25(s，1H)，7.51(s，1H)，7.42(d，J＝8.0Hz，1H)，7.26(d，J＝8.0Hz，1H)，7.00(s，1H)，3.84(m，1H)，3.38(m，1H)，3.00(dd，J＝14.4Hz，J＝6.8Hz，1H).LCMS(APCI+)m/z 285，287，289[M+H]+；Rt＝1.54min.
步骤3：在实施例B-1步骤2中，用4-哌嗪-1-基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶二盐酸盐替代5-哌嗪-1-基-1H-吲唑，用2-(3，4-二氯苯基)-3-(1H-咪唑-4-基)-丙酸替代(D)-Boc-4-氯苯丙氨酸，制备2-(3，4-二氯苯基)-3-(1H-咪唑-4-基)-1-[4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-丙-1-酮。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ8.76(s，1H)，8.32(s，1H)，7.52(m，2H)，7.38(s，1H)，7.29(m，2H)，6.92(s，1H)，4.58(m，1H)，3.70-4.20(m，7H)，3.63(m，1H)，3.43(m，1H)，3.16(m，1H).LCMS(APCI+)m/z470，472，474[M+H]+；Rt＝2.15min.
词语“包含”、“包括”当用于本说明书和所附权利要求书中时，旨在具体限定存在所述的特征、整数、组分或步骤，但不排除存在或加入一个或多个其它特征、整数、组分、步骤或组别。

Claims (10)

1. 一种化合物，其包括其经拆分的对映体、非对映体、溶剂合物和可药用盐，所述化合物包含式I：
Figure 2012102808790100001DEST_PATH_IMAGE002
式中：
CR为杂芳基，其中所述杂芳基任选被选自以下的一个或多个基团取代：卤素、羟基、氰基、硝基、叠氮基、-NR21SO2R24、-SO2NR21R22、-NR21S(O)R4、-S(O)NR21R22、-C(O)R21、-C(O)OR21、-OC(O)R21、-OC(O)OR21、-NR21C(O)OR24、-NR21C(=NR21)NR22R23、-NR21C(O)R22、-C(O)NR21R22、-SR21、-S(O)R24、-SO2R24、-NR21R22、-NR21C(O)NR22R23、-NR21C(NCN)NR22R23、-OR21、C1-C4烷基、C1-C6杂烷基、C2-C6烯基、C2-C6杂烯基、C2-C6炔基、C2-C6杂炔基、C3-C6环烷基、C3-C6杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基和杂芳基烷基，其中所述烷基、杂烷基、烯基、杂烯基、炔基、杂炔基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基和杂芳基烷基中的任一个任选进一步被选自以下的一个或多个基团取代：卤素、羟基、氰基、硝基、叠氮基、氟代甲基、二氟甲基、三氟甲基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6杂烷基、C2-C6杂烯基、C2-C6杂炔基、C3-C6环烷基、C3-C6杂环烷基、-SR21、-S(O)R24、-SO2R24、-C(O)R21、C(O)OR21、-C(O)NR21R22、-NR21R22和-OR21；
L选自：
Figure 2012102808790100001DEST_PATH_IMAGE004
其中R12为氢、卤素、羟基、氰基、硝基、氨基、叠氮基、C1-C5烷基、C2-C5烯基、C2-C5炔基、C1-C5杂烷基、C2-C5杂烯基或C2-C5杂炔基，其中所述烷基、烯基、炔基、杂烷基、杂烯基和杂炔基中的任一个任选被独立选自以下的一个或多个基团取代：卤素、氰基、硝基、氨基、叠氮基、C1-C4烷基、氟代甲基、二氟甲基、三氟甲基、甲氧基、氟代甲氧基、二氟甲氧基和三氟甲氧基；
A为
Figure 2012102808790100001DEST_PATH_IMAGE006
W为N或CR15，条件是：当L为取代或未取代的亚哌嗪基时，W必须是CR15；
G为氢、烷基、杂烷基、烯基、杂烯基、炔基、杂炔基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基，其中所述烷基、杂烷基、烯基、杂烯基、炔基、杂炔基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基中的任一个任选被选自以下的一个或多个基团取代：卤素、羟基、氰基、氨基、硝基、叠氮基、-NR21SO2R24、-SO2NR21R22、-NR21S(O)R4、-S(O)NR21R22、-C(O)R21、-C(O)OR21、-OC(O)R21、-OC(O)OR21、-NR21C(O)OR24、-NR21C(=NR21)NR22R23、-NR21C(O)R22、-C(O)NR21R22、-SR21、-S(O)R24、-SO2R24、-NR21R22、-NR21C(O)NR22R23、-NR21C(NCN)NR22R23、-OR21、C1-C4烷基、C1-C4杂烷基、C2-C4烯基、C2-C4杂烯基、C2-C4炔基、C2-C4杂炔基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基；
B1和B2独立地不存在或为C1-C4亚烷基、C1-C4亚杂烷基、C2-C4亚烯基、C2-C4亚杂烯基、C2-C4亚炔基、C2-C4亚杂炔基、C3-C6亚环烷基和C3-C6亚杂环烷基，其中所述亚烷基、亚杂烷基、亚烯基、亚杂烯基、亚炔基、亚杂炔基、亚环烷基或亚杂环烷基中的任一个任选被独立选自以下的一个或多个基团取代：卤素、羟基、氰基、硝基、叠氮基、C1-C4烷基、C1-C4杂烷基、C2-C4烯基、C2-C4杂烯基、C2-C4炔基、C2-C4杂炔基、NR21R22和OR21；
R21、R22和R23独立地为氢、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6杂烷基、C2-C6杂烯基、C2-C6杂炔基、C3-C6环烷基、C3-C6杂环烷基、芳基、芳基烷基、杂芳基或杂芳基烷基；
R24为C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6杂烷基、C2-C6杂烯基、C2-C6杂炔基、C3-C6环烷基、C3-C6杂环烷基、芳基、芳基烷基、杂芳基或杂芳基烷基；
或者R21、R22、R23或R24中任何两个与它们连接的原子一起形成4-10元碳环、芳环、杂芳环或杂环，其中所述碳环、芳环、杂芳环或杂环中的任一个任选被独立选自以下的一个或多个基团取代：卤素、氰基、硝基、三氟甲基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、叠氮基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、杂环基和杂环基烷基；
R13和R14独立地为氢、羟基、氰基、C1-C6烷基、C1-C6杂烷基、C2-C6烯基、C2-C6杂烯基、C2-C6炔基、C2-C6杂炔基、C1-C6环烷基、C1-C6杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、-C(O)R21、C(O)OR21、C(=NR21)NR22R23或-SO2R24，其中所述烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、杂烷基、杂烯基、杂炔基、芳基烷基或杂芳基烷基中的任一个任选被独立选自以下的一个或多个基团取代：卤素、羟基、氰基、氨基、硝基、叠氮基、-NR21SO2R24、-SO2NR21R22、-NR21S(O)R4、-S(O)NR21R22、-C(O)R21、-C(O)OR21、-OC(O)R21、-OC(O)OR21、-NR21C(O)OR24、-NR21C(=NR21)NR22R23、-NR21C(O)R22、-C(O)NR21R22、-SR21、-S(O)R24、-SO2R24、-NR21R22、-NR21C(O)NR22R23、-NR21C(NCN)NR22R23、-OR21、C1-C4烷基、C1-C4杂烷基、C2-C4烯基、C2-C4杂烯基、C2-C4炔基、C2-C4杂炔基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基；
或者R13和R14与它们连接的原子一起形成4-10元碳环、芳环、杂芳环或杂环，其中所述碳环、芳环、杂芳环和杂环中的任一个任选被独立选自以下的一个或多个基团取代：卤素、氰基、硝基、叠氮基、C1-C4烷基、C1-C4杂烷基、C2-C4烯基、C2-C4杂烯基、C2-C4炔基、C2-C4杂炔基、NR21R22和OR21；
或者R13和B2的原子与N一起形成4-10元碳环、芳环、杂芳环或杂环，其中所述碳环、芳环、杂芳环和杂环中的任一个任选被独立选自以下的一个或多个基团取代：卤素、氰基、硝基、叠氮基、C1-C4烷基、C1-C4杂烷基、C2-C4烯基、C2-C4杂烯基、C2-C4炔基、C2-C4杂炔基、NR21R22和OR21；
R15为氢、C1-C4烷基、C1-C4杂烷基、C2-C4烯基、C2-C4杂烯基、C2-C4炔基或C2-C4杂炔基，其中所述烷基、杂烷基、烯基、杂烯基、炔基或杂炔基中的任一个任选被独立选自以下的一个或多个基团取代：卤素、羟基、氰基、硝基、叠氮基、NR21R22和OR21；
或者R13和R15与它们连接的原子一起形成3-10元碳环、芳环、杂芳环或杂环，其中所述碳环、芳环、杂芳环和杂环中的任一个任选被独立选自以下的一个或多个基团取代：卤素、氰基、硝基、叠氮基、C1-C4烷基、C1-C4杂烷基、C2-C4烯基、C2-C4杂烯基、C2-C4炔基、C2-C4杂炔基、NR21R22和OR21；
或者当W为CR15时，R15和B1或B2的原子与C一起形成3-10元碳环、芳环、杂芳环或杂环，其中所述碳环、芳环、杂芳环和杂环中的任一个任选被独立选自以下的一个或多个基团取代：卤素、氰基、硝基、叠氮基、C1-C4烷基、C1-C4杂烷基、C2-C4烯基、C2-C4杂烯基、C2-C4炔基、C2-C4杂炔基、NR21R22和OR21。
2. 权利要求1的化合物，其中
CR选自：
式中X为N或CR1；
Y为CR2或N，条件是：当X为N时，Y必须是CR2；
Z为CR3R3a或NR2a，条件是：当X为N时，Z必须是CR3；
D1、D2、D3和D4独立地为CR4或N，条件是：D1、D2、D3或D4中不超过两个为N；
-----为任选的双键；
D5为CR5R5a、NR2a、O或S，条件是：当D5为O或S时，D8必须是C，D7必须是CR7或N，且或者(i) Q必须是CR6或CR6R6a，或者(ii) D7必须是CR7或CR7R7a；
Q为CR6、N或C=O，条件是：或者(w)当Q为N时，D5、D7和D8之一必须是C，或(x)当Q为C=O时，D5必须是CR5或N，D7必须是CR7或N，且D8必须是C；
D7为CR7、N、O或S，条件是：当D7为O或S时，D8必须是C，D5必须是CR5或N，且或者(y) Q必须是CR6，或者(z) D5必须是CR5；
D8为C或N，条件是：当D8为N时，D5必须是CR5R5a，且Q必须是CR6或CR6R6a；
K或M为羰基，条件是：K和M不同时为羰基；
R1、R5、R5a和R8独立地为氢、卤素、羟基、氰基、硝基、叠氮基、氟代甲基、二氟甲基、三氟甲基、甲氧基、氟代甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、氨基、氨基甲基、二甲氨基、氨基乙基、二乙氨基或乙氧基；
R2为氢、卤素、羟基、氰基、硝基、氨基、叠氮基、C1-C4烷基、C1-C4杂烷基、C2-C4烯基、C2-C4杂烯基、C2-C4炔基、C2-C4杂炔基、C1-C6环烷基、C1-C6杂环烷基、C1-C6芳基或C1-C6杂芳基，其中所述烷基、杂烷基、烯基、杂烯基、炔基、杂炔基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基中的任一个任选地进一步被独立选自以下的一个或多个基团取代：卤素、羟基、氰基、硝基、叠氮基、氟代甲基、二氟甲基、三氟甲基、甲氧基、氟代甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、氨基、氨基甲基、二甲氨基、氨基乙基、二乙氨基和乙氧基；
R2a为氢、羟基、氰基、C1-C4烷基、C1-C4杂烷基、C2-C4烯基、C2-C4杂烯基、C2-C4炔基、C2-C6杂炔基、C3-C6环烷基、C3-C6杂环烷基、芳基或杂芳基，其中所述烷基、杂烷基、烯基、杂烯基、炔基、杂炔基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基中的任一个任选被独立选自以下的一个或多个基团取代：卤素、羟基、氰基、硝基、叠氮基、氟代甲基、二氟甲基、三氟甲基、甲氧基、氟代甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、氨基、氨基甲基、二甲氨基、氨基乙基、二乙氨基或乙氧基；
R3和R3a独立地为氢、卤素、羟基、氰基、硝基、氨基、叠氮基、C1-C6烷基、C1-C6杂烷基、C2-C6烯基、C2-C6杂烯基、C2-C6炔基、C2-C6杂炔基、C1-C6环烷基、C1-C6杂环烷基、芳基或杂芳基，其中所述烷基、杂烷基、烯基、杂烯基、炔基、杂炔基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基中的任一个任选地进一步被独立选自以下的一个或多个基团取代：卤素、羟基、氰基、硝基、叠氮基、OR1、NR1R2和(C=O)R2；
R4、R6、R6a、R7、R7a和R10独立地为氢、羟基、氰基、氨基、硝基、叠氮基、烷基、杂烷基、烯基、杂烯基、炔基、杂炔基、环烷基、杂环烷基、芳基、芳基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、-NR21SO2R24、-SO2NR21R22、-NR21S(O)R4、-S(O)NR21R22、-C(O)R21、-C(O)OR21、-OC(O)R21、-OC(O)OR21、-NR21C(O)OR24、-NR21C(=NR21)NR22R23、-NR21C(O)R22、-C(O)NR21R22、-SR21、-S(O)R24、-SO2R24、-NR21R22、-NR21C(O)NR22R23、-NR21C(NCN)NR22R23或-OR21，其中所述烷基、杂烷基、烯基、杂烯基、炔基、杂炔基、环烷基、杂环烷基、芳基、芳基烷基、杂芳基或杂芳基烷基中的任一个任选被独立选自以下的一个或多个基团取代：卤素、羟基、氰基、氨基、硝基、叠氮基、-NR21SO2R24、-SO2NR21R22、-NR21S(O)R4、-S(O)NR21R22、-C(O)R21、-C(O)OR21、-OC(O)R21、-OC(O)OR21、-NR21C(O)OR24、-NR21C(=NR21)NR22R23、-NR21C(O)R22、-C(O)NR21R22、-SR21、-S(O)R24、-SO2R24、-NR21R22、-NR21C(O)NR22R23、-NR21C(NCN)NR22R23、-OR21、C1-C4烷基、C1-C4杂烷基、C2-C4烯基、C2-C4杂烯基、C2-C4炔基、C2-C4杂炔基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基，其中所述烷基、杂烷基、烯基、杂烯基、炔基、杂炔基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基可任选地进一步被独立选自以下的一个或多个基团取代：卤素、羟基、氰基、氨基、硝基、叠氮基、C1-C4烷基、C1-C4杂烷基、C2-C4烯基、C2-C4杂烯基、C2-C4炔基、C2-C4杂炔基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基、-NR21R22和-OR21；
或者R6和R7与它们连接的原子一起形成4-10元碳环、芳环、杂芳环或杂环，其中所述碳环、芳环、杂芳环和杂环中的任一个任选被独立选自以下的一个或多个基团取代：卤素、氰基、硝基、三氟甲基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、叠氮基、OR1、NR1R2、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、杂环基和杂环基烷基；且
R9为氢、卤素、羟基、氰基、硝基、叠氮基、C1-C6烷基、C1-C6杂烷基、C2-C6烯基、C2-C6杂烯基、C2-C6炔基、C2-C6杂炔基、C1-C6环烷基、C1-C6杂环烷基、芳基、杂芳基、-NR21R22、-OR21、-NR21SO2R24和-NR21C(O)R22，其中所述烷基、杂烷基、烯基、杂烯基、炔基、杂炔基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基中的任一个任选地进一步被独立选自以下的一个或多个基团取代：卤素、羟基、氰基、硝基、叠氮基、OR1、NR1R2和(C=O)R2。
3. 权利要求2的化合物，其中CR选自：
Figure 2012102808790100001DEST_PATH_IMAGE010
。
4. 权利要求2的化合物，其中CR选自：
Figure 2012102808790100001DEST_PATH_IMAGE012
。
5. 权利要求2的化合物，其中L选自：
Figure 2012102808790100001DEST_PATH_IMAGE014
。
6. 权利要求2的化合物，其中A为：
Figure 2012102808790100001DEST_PATH_IMAGE016
其中G为氢、烷基、环烷基、杂环芳基、芳基或杂芳基，其中所述烷基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基中的任一个任选被选自以下的一个或多个基团取代：卤素、羟基、氰基、氨基、硝基、叠氮基、-NR21SO2R24、-SO2NR21R22、-NR21S(O)R4、-S(O)NR21R22、-C(O)R21、-C(O)OR21、-OC(O)R21、-OC(O)OR21、-NR21C(O)OR24、-NR21C(=NR21)NR22R23、-NR21C(O)R22、-C(O)NR21R22、-SR21、-S(O)R24、-SO2R24、-NR21R22、-NR21C(O)NR22R23、-NR21C(NCN)NR22R23、-OR21、C1-C4烷基、C2-C4烯基、C2-C4炔基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基。
7. 权利要求5的化合物，其中A为：
Figure 2012102808790100001DEST_PATH_IMAGE018
其中G为氢、烷基、环烷基、杂环芳基、芳基或杂芳基、其中所述烷基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基中的任一个任选被选自以下的一个或多个基团取代：卤素、羟基、氰基、氨基、硝基、叠氮基、-NR21SO2R24、-SO2NR21R22、-NR21S(O)R4、-S(O)NR21R22、-C(O)R21、-C(O)OR21、-OC(O)R21、-OC(O)OR21、-NR21C(O)OR24、-NR21C(=NR21)NR22R23、-NR21C(O)R22、-C(O)NR21R22、-SR21、-S(O)R24、-SO2R24、-NR21R22、-NR21C(O)NR22R23、-NR21C(NCN)NR22R23、-OR21、C1-C4烷基、C2-C4烯基、C2-C4炔基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基。
8. 权利要求5的化合物，其中A为：
Figure 2012102808790100001DEST_PATH_IMAGE020
。
9. 一种组合物，其包含权利要求1的化合物和可药用载体。
10. 权利要求1-8任一项的化合物在制备用于治疗过度增生性疾病或炎症的药物中的应用。
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