CN102753533A - 咪唑烷二酮衍生物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了式(Ia)的化合物和其可药用盐。本发明还提供了所述化合物或盐作为Kv3.1和/或Kv3.2调节剂的用途，以及在治疗需要Kv3.1和/或Kv3.2调节剂的疾病或病症中的用途，例如抑郁和情感障碍、听觉障碍、精神分裂症、物质滥用障碍、睡眠障碍或癫痫。

Description

咪唑烷二酮衍生物
本发明涉及新的化合物、含有它们的药物组合物及其在治疗中的用途，特别是作为抗精神病药物的用途。
发明背景
Kv3电压门控钾通道家族包括4个成员，Kv3.1、Kv3.2、KV3.3和Kv3.4。每种亚型的基因可通过选择拼接、产生具有不同C末端结构域的版本形成多种同工型。目前在哺乳动物中已鉴定了13种异型，但这些变体表达的电流似乎是相同的(Rudy和McBain,2001,Trends in Neurosciences24,517-526)。Kv3通道经质膜去极化至-20mV以上的电压而活化；此外，在膜复极化后通道立即失活。这些生物物理性质保证了所述通道向神经元动作电位的去极化期峰值打开以开始复极化。由Kv3介导的动作电位的快速终止使神经元更快恢复以到达亚阈值膜电位，其能够触发进一步的动作电位。因此，某些神经元中的Kv3通道的存在使其能在高频率下放电(Rudy和McBain,2001,Trends in Neurosci.24,517-526)。Kv3.1-3亚型在CNS中占主要部分，而Kv3.4通道主要位于骨骼肌肉和交感神经元中(Weiser等,1994,J.Neurosci.14,949-972)。Kv3.1-3通道亚型在皮质和海马脑区域(例如Chow等,1999,J.Neurosci.19,9332-9345;Martina等,1998,J.Neurosci.18,8111-8125;McDonald和Mascagni,2006,Neurosci.138,537-547,Chang等,2007,J.Comp.Neurol.502,953-972)、在丘脑(例如Kasten等,2007,J.Physiol.584,565-582)、小脑(例如Sacco等,2006,Mol.Cell.Neurosci.33,170-179)和听觉脑干核(Li等,2001，J.Comp.Neurol.437,196-218)中的中间神经元亚类中差异表达。
一种或多种Kv3亚型缺失的小鼠的特征显示缺乏Kv3.1导致自发活动行为增加、脑动电流描记活动改变、以及片段化的睡眠型式(Joho等,1999,J.Neurophysiol.82,1855-1864)。Kv3.2的缺失导致癫痫发作阈值下降、皮质脑动电流描记活动改变(Lau等,2000,J.Neurosci.20,9071-9085)。Kv3.3的缺失与轻度运动失调和运动缺陷有关(McMahon等,2004,Eur.J.Neurosci.19,3317-3327)。Kv3.1和Kv3.3的双重删除导致特征为自发性癫痫、运动失调以及对乙醇作用的敏感度增加的严重表型(Espinosa等,2001,J.Neurosci.21,6657-6665;Espinosa等,2008,J.Neurosci.28,5570-5581)。
已知的Kv3通道药理学是有限的。已显示四乙铵(TEA)能在低毫摩尔浓度下抑制所述通道(Rudy和McBain,2001,Trends in Neurosci.24,517-526)，来自海葵——沟迎风海葵(Anemonia sulcata)(Diochot等,1998,J.Biol.Chem.273,6744–6749)的降血压物质(BDS)毒素能以高亲和性选择性抑制Kv3通道(Yeung等,2005,J.Neurosci.25,8735–8745)。除直接作用于Kv3通道的化合物外，已显示激活蛋白激酶A(PKA)和蛋白激酶C(PKC)的受体激动剂能在特定的脑区域中调节Kv3-介导的电流，导致神经元以高频率放电的能力下降(Atzori等,2000,Nat.Neurosci.3,791-798;Song等,2005,Nat Neurosci.8,1335-1342)；这些研究认为PKA和PKC能以神经元特异性的方式特异性地磷酸化Kv3通道，引起Kv3介导的电流的下降。还没有能正调节或活化Kv3通道的化合物或生物化学机制的文献报道。
双相情感障碍、精神分裂症、焦虑和癫痫症是中枢神经系统的严重病症，其与抑制性中间神经元和γ-氨基丁酸(GABA)传导功能减退有关(Reynolds等,2004,Neurotox.Res.6,57-61;Benes等,2008,PNAS,105,20935-20940;Brambilla等,2003,Mol.Psychiatry.8,721-37,715;Aroniadou-Anderjaska等,2007,Amino Acids 32,305-315;Ben-Ari,2006,Crit.Rev.Neurobiol.18,135-144)。在皮质和海马中表达Kv3通道的小清蛋白阳性的篮状细胞在局部环路中产生反馈抑制中起关键作用(Markram等,2004,Nat.Rev.Neurosci.5,793-807)。如果在这些环路中谷氨酸能的锥体细胞的兴奋性突触输入相对于抑制性输入具有相对优势，提供抑制性输入的中间神经元的快速放电是保证平衡抑制所必需的。此外，抑制性输入的精确时间同步是维持网络同步所必需的，例如在产生与认知功能有关的γ频率场电位振动中(Fisahn等,2005,J.Physiol 562,65-72;Engel等,2001,Nat.Rev.Neurosci.2,704-716)。值得注意的是，在精神分裂症患者中观察到γ振动减少(Spencer等,2004,PNAS 101,17288-17293)。因此，Kv3通道的阳性调节物可能增强脑中快速放电神经元的特定组的放电性质。这些作用在与这些神经元组的异常活性有关的病症中是有益的。
此外，已显示Kv3.2通道被CNS中的主要昼夜节律起搏点的视交叉上核(SCN)神经元所表达(Schulz和Steimer,2009,CNS Drugs 23 Suppl 2,3-13)。我们证实了Kv3.2通道的表达在24小时周期内变化；因此Kv3.2通道表达可能有助于SCN中神经元放电性质的改变，从而影响昼夜节律。因此，调节Kv3.2通道活性的药物能影响昼夜节律，从而在治疗相关病症中是有用的。
听觉丧失是影响约16%的欧洲和美国人群的流行病(Goldman和Holme,2010,Drug Discovery Today 15,253-255)，在世界范围内约2.5亿人中流行(B.Shield,2006,听觉损害的社会和经济成本评价(Evaluation ofthe social and economic costs of hearing impairment).A report for Hear-ItAISBL:www.hear-it.org/multimedia/Hear It Report October 2006.pdf)。由于生存期望持续增长，患有听觉病症的人数也随之增加。此外，相信当今社会生活方式可能加重了年轻一代人群中的负担。听觉病症(包括耳鸣)对于生活质量具有严重影响，其引起社会隔绝、抑郁、工作和关系障碍、低自尊和偏见。Kv3家族的电压门控离子通道在听觉脑干核中高水平表达(Li等,2001,J.Comp.Neurol.437,196-218)，此处其允许从耳蜗向更高级的脑区域传递听觉信息的神经元的快速放电。在听觉损伤的小鼠中观察到Kv3.1通道表达在中枢听觉神经元中的缺失(von Hehn等,2004,J.Neurosci.24,1936-1940)，Kv3.1表达的下降可能与老年小鼠听觉损失相关(Jung等2005 Neurol.Res.27,436-440)。此外，听觉脑干网络的病理学可塑性可能促进耳鸣症状，许多具有不同类型听觉损失的人都具有这一症状。最近的研究表明，Kv3.1通道功能和表达的调节在控制听觉神经元兴奋性中起主要作用(Kaczmarek等,2005,Hearing Res.206,133-145)，表明该机制能解释导致耳鸣的某些塑性变化。最后，脆性X综合征和自闭症经常与对感觉输入(包括听觉刺激)的高敏反应有关。最近的研究结果表明由FMR-I基因编码的蛋白可直接调节Kv3.1通道在听觉脑干核中的表达，该基因突变或缺失可导致脆性X综合征(Strumbos等,2010,J.Neuroscience,出版中)，表明Kv3.1通道的错误调控能导致脆性X综合征或自闭症患者听觉过敏。因此，我们认为听觉脑干核中Kv3通道的小分子调节剂能够在治疗听觉病症中有益，包括耳鸣和与脆性X综合征和自闭症相关的听觉过敏。
因此，本发明第一方面提供了式(Ia)的化合物或其可药用盐
Figure BDA00001749351300041
其中：
R1是卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、卤代C1-4烷基、卤代C1-4烷氧基或氰基;
R2是H、卤素、氰基、C1-4烷基或C1-4烷氧基；条件是当R2是H时，R1不在对位；
X是C或N；
Y是C或N；
R3是C1-4烷基；
R4是H、氘或C1-4烷基；或R3和R4能稠合形成C3-4螺碳环基团。
本发明第二方面提供了式(Ib)的化合物或其可药用盐
Figure BDA00001749351300051
其中：
R1是卤素、C1-4烷基或C1-4烷氧基、卤代C1-4烷氧基、氰基;
R2是H、卤素、C1-4烷基和C1-4烷氧基；条件是当R2是H时，R1不在对位；
X是C或N；
Y是C或N；
R3是C1-4烷基；
R4是H、氘或C1-4烷基；或R3和R4能稠合形成C3-4螺碳环基团。
本发明第三方面提供了式(Ic)的化合物或其可药用盐
Figure BDA00001749351300052
其中：
R1是卤素、C1-4烷基或C1-4烷氧基；
R2是H、卤素、C1-4烷基和C1-4烷氧基；条件是当R2是H时，R1不在对位；
X是C或N；
Y是C或N；
R3是C1-4烷基；
R4是H、氘或C1-4烷基；或R3和R4能稠合形成C3-4螺碳环基团。
本文所用的“式(I)”表示式(Ia)、式(Ib)或式(Ic)中任何一种。
在本发明的一个实施方案中，R1是C1-4烷氧基。在本发明的另一个实施方案中，R1是甲氧基。
在本发明的一个实施方案中，R1是C1-4烷基。在本发明的另一个实施方案中，R1是甲基。在本发明的另一个实施方案中，R1是乙基。在本发明的另一个实施方案中，R1是丙基。在本发明的另一个实施方案中，R1是丁基。
在本发明的一个实施方案中，R1是卤素。在本发明的另一个实施方案中，R1是氯。在本发明的另一个实施方案中，R1是氟。
在本发明的一个实施方案中，R1是卤代C1-4烷氧基。在本发明的另一个实施方案中，R1是三氟甲氧基。
在本发明的一个实施方案中，R1是卤代C1-4烷基。在本发明的另一个实施方案中，R1是三氟甲基。
在本发明的一个实施方案中，R1是氰基。
在本发明的一个实施方案中，R2是H。
在本发明的一个实施方案中，R2是C1-4烷基。在本发明的另一个实施方案中，R2是甲基。
在本发明的一个实施方案中，R2是卤素。在本发明的另一个实施方案中，R2是氯。在本发明的另一个实施方案中，R2是氟。
在本发明的一个实施方案中，R2是C1-4烷基。
在本发明的一个实施方案中，R2是氰基。
在本发明的一个实施方案中，X是C，并且Y是C。
在本发明的一个实施方案中，X是N，并且Y是C。
在本发明的一个实施方案中，X是N，并且Y是N。
在本发明的一个实施方案中，R3是甲基。在本发明的另一个实施方案中，R3是乙基。在本发明的另一个实施方案中，R3是丙基。在本发明的另一个实施方案中，R3是丁基。
在本发明的一个实施方案中，R4是H。
在本发明的一个实施方案中，R4是氘。
在本发明的一个实施方案中，R4是C1-4烷基。在本发明的另一个实施方案中，R4是甲基。
在本发明的一个实施方案中，R3和R4一起形成C3-4螺碳环基。在本发明的另一个实施方案中，R3和R4一起形成C3螺碳环基。在本发明的另一个实施方案中，R3和R4一起形成C4螺碳环基。
在本发明的一个实施方案中，R3是C1-4烷基，R4是H，且手性中心的绝对构型是R。
在本发明的一个实施方案中，R1是C1-4烷基、C1-4烷氧基或卤代C1-4烷氧基；R2是H、氰基或烷基；X是N，Y是N或C，R3是C1-4烷基，并且R4是C1-4烷基或H；或其可药用的盐。
在本发明的一个实施方案中，R1是丙基、丁基、甲氧基、丙氧基或三氟甲氧基；R2是H、氰基或甲基；X是N，Y是N或C，R3是乙基，并且R4是甲基或H；或其可药用的盐。
在本发明的一个实施方案中，R1是甲氧基，R2是甲基。在本发明的另一个实施方案中，R1是间位的甲氧基，R2是对位的甲基。在本发明的另一个实施方案中，R1是间位的甲氧基，R2是对位的甲基，R3是C1-4烷基，R4是H，R3是R构型。在本发明的另一个实施方案中，R1是间位的甲氧基，R2是对位的甲基，X是N，Y是C，R3是C1-4烷基，R4是H，手性中心的绝对构型是R。在本发明的另一个实施方案中，R1是间位的甲氧基，R2是对位的甲基，X是N，Y是C，R3是乙基，R4是H，手性中心的绝对构型是R。
在本发明的一个实施方案中，化合物选自：
(5R)-5-甲基-3-{4-[(3-甲基苯基)氧基]苯基}-2,4-咪唑烷二酮;
(5R)-5-甲基-3-(4-{[3-(甲氧基)苯基]氧基}苯基)-2,4-咪唑烷二酮;
(5R)-3-(4-{[3-(乙氧基)苯基]氧基}苯基)-5-甲基-2,4-咪唑烷二酮;
(5R)-3-{4-[(3-氯-5-氟苯基)氧基]苯基}-5-甲基-2,4-咪唑烷二酮;
(5R)-3-{4-[(3-氯-4-氟苯基)氧基]苯基}-5-甲基-2,4-咪唑烷二酮;
(5S)-3-{4-[(3-氯-4-氟苯基)氧基]苯基}-5-甲基-2,4-咪唑烷二酮;
(5R)-5-甲基-3-(4-{[2-甲基-5-(甲氧基)苯基]氧基}苯基)-2,4-咪唑烷二酮;
(5R)-5-甲基-3-(4-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}苯基)-2,4-咪唑烷二酮;
(5R)-5-甲基-3-(6-{[3-(1-甲基乙基)苯基]氧基}-3-吡啶基)-2,4-咪唑烷二酮;
(5R)-5-甲基-3-[6-({3-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}氧基)-3-吡啶基]-2,4-咪唑烷二酮;
(5R)-3-{6-[(2,5-二甲基苯基)氧基]-3-吡啶基}-5-甲基-2,4-咪唑烷二酮;
(5R)-3-{6-[(2,3-二甲基苯基)氧基]-3-吡啶基}-5-甲基-2,4-咪唑烷二酮;
(5R)-3-{6-[(2,6-二甲基苯基)氧基]-3-吡啶基}-5-甲基-2,4-咪唑烷二酮;
(5R)-3-{6-[(2-乙基苯基)氧基]-3-吡啶基}-5-甲基-2,4-咪唑烷二酮;
(5R)-5-甲基-3-(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)-2,4-咪唑烷二酮;
(5R)-5-甲基-3-(6-{[2-甲基-5-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)-2,4-咪唑烷二酮;
(5R)-5-甲基-3-(6-{[2-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)-2,4-咪唑烷二酮;
(5R)-5-乙基-3-(4-{[3-(甲氧基)苯基]氧基}苯基)-2,4-咪唑烷二酮;
(5R)-5-乙基-3-(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)-2,4-咪唑烷二酮;
(5S)-5-乙基-3-(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)-2,4-咪唑烷二酮;
(5R)-5-乙基-3-(6-{[3-(1-甲基乙基)苯基]氧基}-3-吡啶基)-2,4-咪唑烷二酮;
5,5-二甲基-3-(4-{[3-(甲氧基)苯基]氧基}苯基)-2,4-咪唑烷二酮;
3-{4-[(2,3-二甲基苯基)氧基]苯基}-5,5-二甲基-2,4-咪唑烷二酮;
3-{6-[(2-乙基苯基)氧基]-3-吡啶基}-5,5-二甲基-2,4-咪唑烷二酮;
3-{6-[(2,6-二甲基苯基)氧基]-3-吡啶基}-5,5-二甲基-2,4-咪唑烷二酮;
(5R)-5-(1-甲基乙基)-3-(4-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}苯基)-2,4-咪唑烷二酮;
(5R)-5-甲基-3-(2-{[3-(1-甲基乙基)苯基]氧基}-5-嘧啶基)-2,4-咪唑烷二酮;
(5R)-5-乙基-3-(2-{[3-(乙氧基)-4-甲基苯基]氧基}-5-嘧啶基)-2,4-咪唑烷二酮;
(5R)-5-(1,1-二甲基乙基)-3-(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)-2,4-咪唑烷二酮;
(5R)-5-乙基-5-甲基-3-(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)-2,4-咪唑烷二酮;
7-(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)-5,7-二氮杂螺[3.4]辛烷-6,8-二酮;
6-(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)-4,6-二氮杂螺[2.4]庚烷-5,7-二酮;
4-{[5-(4,4-二甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基)-2-吡啶基]氧基}-2-(1-甲基乙基)苄腈;
4-{[5-(4,4-二甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基)-2-吡啶基]氧基}-2-[(三氟甲基)氧基]苄腈;
3-{6-[(4-氟-3-甲基苯基)氧基]-3-吡啶基}-5,5-二甲基-2,4-咪唑烷二酮;
3-{6-[(4-氟-2-甲基苯基)氧基]-3-吡啶基}-5,5-二甲基-2,4-咪唑烷二酮;
5,5-二甲基-3-(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)-2,4-咪唑烷二酮;
(5R)-5-(1-甲基乙基)-3-(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)-2,4-咪唑烷二酮;
3-(6-{[2-(1,1-二甲基乙基)苯基]氧基}-3-吡啶基)-5,5-二甲基-2,4-咪唑烷二酮;
3-(2-{[2-(1,1-二甲基乙基)苯基]氧基}-5-嘧啶基)-5,5-二甲基-2,4-咪唑烷二酮;
(5R)-5-乙基-5-甲基-3-(2-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-5-嘧啶基)-2,4-咪唑烷二酮;
(5R)-5-乙基-3-(2-{[3-(乙氧基)-4-甲基苯基]氧基}-5-嘧啶基)-5-甲基-2,4-咪唑烷二酮;
5,5-二甲基-3-[6-({3-[(三氟甲基)氧基]苯基}氧基)-3-吡啶基]-2,4-咪唑烷二酮;
4-{[5-(4,4-二甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基)-2-吡啶基]氧基}-3-乙基苄腈;
2-氯-4-{[5-(4,4-二甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基)-2-吡啶基]氧基}苄腈;
5,5-二甲基-3-[6-({4-甲基-3-[(三氟甲基)氧基]苯基}氧基)-3-吡啶基]-2,4-咪唑烷二酮;
4-{[5-(4,4-二甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基)-2-吡啶基]氧基}-2-(甲氧基)苄腈;
4-{[5-(4,4-二甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基)-2-吡啶基]氧基}-3-甲基苄腈;
4-{[5-(4,4-二甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基)-2-吡啶基]氧基}-3-(三氟甲基)苄腈;
4-{[5-(4,4-二甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基)-2-吡啶基]氧基}-2-乙基苄腈;
4-{[5-(4,4-二甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基)-2-嘧啶基]氧基}-2-乙基苄腈;
3-环丙基-4-{[5-(4,4-二甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基)-2-吡啶基]氧基}苄腈;
4-{[5-(4,4-二甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基)-2-吡啶基]氧基}-3-(1,1-二甲基乙基)苄腈;
2-[(环丙基甲基)氧基]-4-{[5-(4,4-二甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基)-2-吡啶基]氧基}苄腈;
4-{[5-(4,4-二甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基)-2-吡啶基]氧基}-2-(乙氧基)苄腈;
2-环丙基-4-{[5-(4,4-二甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基)-2-吡啶基]氧基}苄腈;
5,5-二甲基-3-[2-({4-甲基-3-[(三氟甲基)氧基]苯基}氧基)-5-嘧啶基]-2,4-咪唑烷二酮;
4-{[5-(4,4-二甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基)-2-嘧啶基]氧基}-3-(1,1-二甲基乙基)苄腈;
4-{[5-(4,4-二甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基)-2-吡啶基]氧基}-2-[(1-甲基乙基)氧基]苄腈;
4-({5-[(4R)-4-乙基-4-甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-吡啶基}氧基)-2-[(1-甲基乙基)氧基]苄腈;
3-环丙基-4-({5-[(4R)-4-乙基-4-甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-吡啶基}氧基)苄腈;
4-({5-[(4R)-4-乙基-4-甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-吡啶基}氧基)-2-[(三氟甲基)氧基]苄腈;
2-环丙基-4-({5-[(4R)-4-乙基-4-甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-吡啶基}氧基)苄腈;
(5R)-5-乙基-5-甲基-3-[2-({4-甲基-3-[(三氟甲基)氧基]苯基}氧基)-5-嘧啶基]-2,4-咪唑烷二酮;
3-(1,1-二甲基乙基)-4-({5-[(4R)-4-乙基-4-甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-嘧啶基}氧基)苄腈;
3-(1,1-二甲基乙基)-4-({5-[(4R)-4-乙基-4-甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-吡啶基}氧基)苄腈;
4-{[4-(4,4-二甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基)苯基]氧基}-2-(甲氧基)苄腈;
4-{[4-(4,4-二甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基)苯基]氧基}-2-(乙氧基)苄腈;
4-({4-[(4R)-4-乙基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]苯基}氧基)-2-(乙氧基)苄腈;
3-环丙基-4-({5-[(4R)-4-乙基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-吡啶基}氧基)苄腈;
3-(1,1-二甲基乙基)-4-({5-[(4R)-4-乙基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-吡啶基}氧基)苄腈;
4-({5-[(4R)-4-乙基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-吡啶基}氧基)-2-(甲氧基)苄腈;
4-({4-[(4R)-4-乙基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]苯基}氧基)-2-(甲氧基)苄腈;
2-[(环丙基甲基)氧基]-4-({5-[(4R)-4-乙基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-吡啶基}氧基)苄腈;
(5R)-5-乙基-3-[6-({4-甲基-3-[(三氟甲基)氧基]苯基}氧基)-3-吡啶基]-2,4-咪唑烷二酮;
2-环丙基-4-({5-[(4R)-4-乙基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-吡啶基}氧基)苄腈;
4-({5-[(4R)-4-乙基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-吡啶基}氧基)-2-(1-甲基乙基)苄腈;
4-({5-[(4R)-4-乙基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-吡啶基}氧基)-2-(1-甲基乙基)苄腈;
(5R)-5-乙基-3-[2-({4-甲基-3-[(三氟甲基)氧基]苯基}氧基)-5-嘧啶基]-2,4-咪唑烷二酮;
4-({5-[(4R)-4-乙基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-吡啶基}氧基)-2-[(1-甲基乙基)氧基]苄腈;
4-({5-[(4R)-4-乙基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-吡啶基}氧基)-3-甲基苄腈;
4-({5-[(4R)-4-乙基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-吡啶基}氧基)-2-[(三氟甲基)氧基]苄腈;
3-乙基-4-({5-[(4R)-4-乙基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-嘧啶基}氧基)苄腈;
4-({5-[(4R)-4-乙基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-嘧啶基}氧基)-3-甲基苄腈;
3-(1,1-二甲基乙基)-4-({5-[(4R)-4-乙基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-嘧啶基}氧基)苄腈；和
4-({5-[(4R)-4-乙基-4-甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-吡啶基}氧基)-2-(1-甲基乙基)苄腈；
或其可药用盐。
在本发明的一个实施方案中，所述化合物选自：
(5R)-5-乙基-3-(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基;
(5R)-5-乙基-5-甲基-3-(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)-2,4-咪唑烷二酮;
4-({5-[(4R)-4-乙基-4-甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-吡啶基}氧基)-2-[(三氟甲基)氧基]苄腈;
(5R)-5-乙基-5-甲基-3-[2-({4-甲基-3-[(三氟甲基)氧基]苯基}氧基)-5-嘧啶基]-2,4-咪唑烷二酮;
3-(1,1-二甲基乙基)-4-({5-[(4R)-4-乙基-4-甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-吡啶基}氧基)苄腈;
(5R)-5-乙基-3-[6-({4-甲基-3-[(三氟甲基)氧基]苯基}氧基)-3-吡啶基]-2,4-咪唑烷二酮;
4-({5-[(4R)-4-乙基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-吡啶基}氧基)-2-(1-甲基乙基)苄腈;
4-({5-[(4R)-4-乙基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-吡啶基}氧基)-2-(1-甲基乙基)苄腈;
(5R)-5-乙基-3-[2-({4-甲基-3-[(三氟甲基)氧基]苯基}氧基)-5-嘧啶基]-2,4-咪唑烷二酮;
4-({5-[(4R)-4-乙基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-吡啶基}氧基)-2-[(1-甲基乙基)氧基]苄腈;
4-({5-[(4R)-4-乙基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-吡啶基}氧基)-2-[(三氟甲基)氧基]苄腈;
3-(1,1-二甲基乙基)-4-({5-[(4R)-4-乙基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-嘧啶基}氧基)苄腈;
或其可药用盐。
为避免疑问，本发明化合物的任一特征的实施方案可与任何本发明化合物的其他特征的实施方案组合以构成另一个实施方案。
本文所用术语“卤素”或“卤素原子”是指氟、氯、溴或碘原子。
当化合物含有(C1-4)烷基(单独或构成较大基团的一部分，如(C1-4)烷氧基)时，烷基可以是直链、支链、环状或其组合。(C1-4)烷基的实例是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、环丙基和环丁基。(C1-4)烷氧基的实例是甲氧基。卤代C1-4烷基的一个实例是三氟甲基。卤代C1-4烷氧基的实例是三氟甲氧基。
应当理解，为用作药物，式(I)化合物的盐应当是可药用的。适当的可药用盐对于本领域技术人员而言是显而易见的。可药用的盐包括Berge、Bighley和Monkhouse J.Pharm.Sci(1977)66,pp 1-19描述的那些。这些可药用盐包括与无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸或磷酸以及有机酸例如琥珀酸、马来酸、乙酸、富马酸、柠檬酸、酒石酸、苯甲酸、对甲苯磺酸、甲磺酸或萘磺酸形成的酸加成盐。其他可用于式(I)化合物的分离的盐类例如草酸盐和甲酸盐也包括在本发明的范围内。
某些式(I)化合物可与一个或多个当量的酸形成酸加成盐。本发明在其范围内包括了所有可能的化学计量和非化学计量形式。
式(I)化合物可以晶态或非晶态形式制备，如果是晶态，可任选是溶剂化的，例如水合物。本发明在其范围内包括了化学计量的溶剂化物(例如水合物)以及含有可变数量溶剂(例如水)的化合物。
应当理解，本发明包括式(I)化合物的可药用衍生物，这些包括在本发明的范围之内。
本文所用“可药用衍生物”包括式(I)化合物的任何可药用的酯或盐，其施用至个体后能(直接或间接)提供式(I)化合物或其活性代谢产物或残基。
应当理解，本发明包括式(I)化合物的所有异构体及其可药用的衍生物，包括所有几何异构、互变异构和旋光异构形式及其混合物(例如外消旋混合物)。当式(I)化合物中存在额外的手性中心时，本发明在其范围内包括所有可能的非对映异构体，包括其混合物。不同的异构体形式可通过常规方法分离或拆分，或者任何给定的异构体可通过常规合成方法或立体特异性或不对称合成获得。
本发明还包括同位素标记的化合物，其与式(I)中所述的那些相同，但一个或多个原子被具有不同于天然状态下常见的原子量或质量数的原子替换。可掺入本发明化合物的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、氟、碘和氯的同位素，例如3H、11C、14C、18F、123I或125I。
含有上述同位素和/或其他原子的其他同位素的本发明化合物以及所述化合物的可药用盐包括在本发明范围内。本发明同位素标记的化合物，例如含有放射性同位素例如3H或14C的那些可用于药物和/或底物组织分布分析。氚即3H以及碳-14即14C同位素由于其制备和检测方便，因此是尤其优选的。11C和18F同位素在PET(正电子发射断层摄影)中尤其有用。
由于式(I)化合物用于药物组合物，因此容易理解，其各自应当以基本上纯的形式提供，例如至少60%纯、更优选至少75%纯和优选至少85%纯、尤其是至少98%纯(%是基于重量/重量比)。所述化合物的不纯制备物可用于制备用于药物组合物中的更纯的形式。
根据本发明的另一方面提供了制备式(I)化合物及其衍生物的方法。下述方案详细描述了本发明化合物的某些合成途径。在下列方案中，反应基团可根据公知的技术使用保护基团保护和去保护。
通常，式(I)的化合物可根据本领域技术人员已知的有机合成技术以及实施例中所述的代表性方法制备。
式(I)的化合物及其盐和溶剂化物可通过下列给出的通用方法制备。除非另外说明，在下列叙述中，基团R1、R2、X、Y、R3和R4具有上文式(I)化合物的定义。
方案1
Figure BDA00001749351300161
步骤(ii):式(I)的化合物可通过在溶剂例如二氯甲烷中使用羰基化试剂例如三光气来环化式(II)的化合物制备，所述羰基化试剂优选在相同溶剂中预稀释，在0°C下，在碱例如三乙胺存在下第二次加入。某些情况下可使用乙酸乙酯作为溶剂。任选加入催化量的DMAP。
步骤(i):式(II)的化合物可通过在酸性条件下(例如TFA)，在溶剂如二氯甲烷中在0°C下从式(III)的化合物去除BOC保护基团进行制备。
方案2
Figure BDA00001749351300162
步骤(ii):式(III)的化合物可如下制备：在诸如N,N-二甲基甲酰胺的溶剂中，通过在诸如DIPEA的碱和诸如HATU、TBTU、HBTU的偶联剂存在下，将式(IV)的苯胺和式(V)的N-保护氨基酸通过酸性偶联得到。
步骤(i)：某些式(V)的N-Boc保护的氨基酸是可商业购买的，例如Aldrich的N-{[(1,1-二甲基乙基)氧基]羰基}-2-甲基丙氨酸、Aldrich的N-{[(1,1-二甲基乙基)氧基]羰基}-D-丙氨酸、例如Bachem UK Ltd的(2R)-2-({[(1,1-二甲基乙基)氧基]羰基}氨基)丁酸、例如来自Nagase & CoLtd的N-{[(1,1-二甲基乙基)氧基]羰基}-D-异缬氨酸。
式(V)的N-保护的氨基酸也可从式(VI)的化合物制备，例如在碱例如NaHCO3水溶液、氢氧化钠水溶液在溶剂如THF、甲醇、二噁烷中使用Boc酸酐制备。文献中已有许多描述(例如Tetrahedron,2006,62(42),9966-9972)
方案3
Figure BDA00001749351300171
某些苯胺(IV)可商业购买，例如ChemBridge公司的4-{[3-(甲氧基)苯基]氧基}苯胺。
其他苯胺可从硝基化合物(VII)制备，将(VII)转化成(IV)的适当的反应条件例如：
-在铁粉和氯化铵存在下，在溶剂例如乙醇或THF/水混合物中加热或不加热进行还原
-在锌粉和氯化铵存在下，在溶剂溶剂例如乙醇或THF/水混合物中加热或不加热进行还原
-在溶剂例如乙酸乙酯、乙醇中，使用氯化锡水合物加热(例如回流)还原。
方案4
Figure BDA00001749351300172
式(IVa)的苯胺，其中R1是(C1-4烷基或C1-4烷氧基)，R2是(H、C1-4烷基或C1-4烷氧基)并且(X,Y)≠(N,N)，可从式(VIIa)的硝基化合物制备，条件如方案3所述或如下：
-使用催化剂例如Pd/C在溶剂例如甲醇、乙醇、THF、甲醇/乙酸乙酯混合物中用H2氢化，加热或不加热。
-使用水合肼和催化量的Pd/C在诸如乙醇的溶剂中加热还原。
方案5
Figure BDA00001749351300173
式(VIIb)的化合物，其中X=Y=C或(X=C,Y=N)或(X=N,Y=C)，可通过亲核芳族取代制备。该反应中使用式(VIIIb)的硝基衍生物，其中Z=F(通常当[X=C,Y=C]时)或Z=Cl(通常当[X=N,Y=C]或[X=C,Y=N]时)，以及式(IX)的酚，在例如下列的碱存在下和在下列溶剂中反应
-碳酸钾，例如在N,N-二甲基甲酰胺或乙腈中，使用常规的加热或微波加热
-叔丁醇钾，例如在DMSO中，
-氢化钠，例如在N,N-二甲基甲酰胺中，常规的加热，例如在回流条件下，或使用微波辐射。任选地，在加入硝基衍生物(VIII)前，酚(IX)可预先在溶剂和碱存在下搅拌。
式(VIIc)的化合物，其中X=Y=N，可通过亲核芳族取代从酚(IX)和硝基化合物(VIIIc)制备，其中通常Z=Cl。使用的碱例如：
-碳酸钾，例如室温下在N,N-二甲基甲酰胺或乙腈中，
-三乙胺，例如在乙腈中回流。
方案6
Figure BDA00001749351300181
式(IXa)的酚，其中R1和R2是与典型的亚硝基化条件相容的基团，可使用相应的苯胺(X)和亚硝酸钠在过量酸例如硫酸存在下，在溶剂例如水中制备，第一次在0°C或0°C-5°C，第二次在例如40°C-90°C加热制备。
方案7
Figure BDA00001749351300182
式(Xa)的苯胺(其中R1和R2是对典型的亚硝基化条件非敏感性的基团)可从式(XI)的硝基衍生物制备(其中R1和R2是对典型的亚硝基化条件非敏感性的基团)，其使用通常的还原条件，例如
-在金属催化剂，例如兰尼镍或Pd/C的存在下，在溶剂例如甲醇中，通常在室温下使用H2氢化。
-在铁粉和氯化铵存在下，在室温下在溶剂例如THF/水混合物或乙醇中进行还原。
方案8
Figure BDA00001749351300191
某些式(XI)的硝基衍生物是可商业购买的。
某些其他硝基衍生物，例如式(XIa)的化合物，其中R2是乙氧基，可从相应的式(XII)的硝基苯酚衍生物制备，使用例如碘乙烷在碱例如碳酸钾存在下，在丙酮中加热(例如回流)而烷基化。
方案9
式(IXb)的苯酚，其中R1是H，R2是C1-4烷氧基(R5是C1-4烷基)可通过单烷基化从式(XIII)的化合物制备，其使用例如适当的烷基碘，在碱例如氢氧化钾存在下，在溶剂例如乙醇中制备。
方案10
Figure BDA00001749351300193
步骤(iii):相应于式(I)的式(Ia)的化合物,其中X=C、Y=C，可从式(XIV)的化合物通过例如在100°C下在HCl水溶液中加热制备。
步骤(ii):式(XIV)的化合物可从式(XV)的异氰酸酯制备，其中X=C、Y=C，其通过在碱例如DIPEA存在下，在溶剂例如THF中，在室温下加入式(VI)的氨基酸进行制备。
步骤(i):某些式(XV)的异氰酸酯是可商业购买的，其他可从式(IVb)的苯胺使用三光气和任选的三乙胺，在溶剂例如二氯甲烷中，在室温下制备。相应于式(IV)的苯胺的式(IVb)的苯胺，其中X=C、Y=C，可通过上述类似的条件制备。
任选地，步骤(ii)和(iii)可用一锅法进行，第一时间内，在碱例如吡啶或三乙胺存在下，在溶剂例如N.N-二甲基甲酰胺或二氯甲烷/DMF混合物中(例如在35°C)将异氰酸酯(XV)加入到式(VI)的氨基酸中，随后在第二时间内，加入HCl并加热(例如在100°C)。异氰酸酯可在溶剂(例如THF)中预稀释或不稀释。
方案11
Figure BDA00001749351300201
相应于式(I)化合物的式(Ib)的化合物，其中X=C、Y=C，并且R3=H，可用一锅法从苯胺(IVb)[相应于式(IV)的苯胺，其中X=C,Y=C]制备。
第一时间内，式(XVI)的氨基酸酯可通过Boc基团进行N保护，其与Boc-酸酐在碱例如DMAP存在下，在溶剂例如二氯甲烷中反应。在第二时间内，该溶液可与苯胺(IVb)反应，在35°C下加热，在第三时间内，可通过加入HCl并在例如100°C加热促进环化。
方案12
Figure BDA00001749351300202
步骤(ii):能够使用亲核取代制备式(Ic)的化合物，其对应于式(I)的化合物，其中X=N，Y=C，R3=R4=Me并且(R1,R2)是诸如下列的组合：(p-CN,m-iPr)、(H,m-OCF3)、(p-F,m-CH3)、(p-F,o-CH3)、(p-CN,m-Cl)、(p-CN,o-Et)、(p-Me,m-OCF3)、(p-CN,m-OMe)。该反应使用相应的式(IXc)的苯酚、式(XVII)的氟化合物，在碱例如碳酸钾存在下，在高沸点溶剂例如DMF中加热至120°C反应。
步骤(i)：式(XVII)的氟化合物可通过使用芳基硼酸(XIX)使5,5-二甲基-2,4-咪唑烷二酮(XVIII)进行N-芳基化而制备，使用例如醋酸酮(II)，用诸如吡啶的碱和诸如二氯甲烷的溶剂，在室温下敞口促进反应。
方案13
Figure BDA00001749351300211
步骤(ii):式(Id)的化合物，其相应于式(I)的化合物，其中X=N,Y=C或X=C,Y=C或X=N,Y=N并且R3=R4=Me，可从式(XXa)的脲通过环化制备，其在碱例如甲醇钠存在下，在溶剂例如甲醇中在例如65°C加热制备。
步骤(i)：式(XXa)的脲可如下制备：在例如0°C下将含有式(IVc)的苯胺(相应于式IV的苯胺，其中X=N,Y=C或X=C,Y=C或X=N,Y=N)和诸如三乙胺的碱在溶剂例如EtOAc中的溶液加入到羰基化试剂例如三光气在溶剂例如EtOAc的溶液中，随后加入三乙胺和酯(XXIa)。任选地，所述酯(XXIa)可预先溶解在诸如EtOAc的溶剂中，将三乙胺加入到该预制溶液中。任选地可加入额外的三乙胺和酯(XXIa)或一些额外的三光气。需要的酯(XXIa)可从对应的氨基酸制备，使用甲醇，加入亚硫酰氯后例如在回流条件下加热反应混合物。
方案14
Figure BDA00001749351300212
步骤(ii):式(Ie)的化合物，其相应于式(I)的化合物，其中X=N,Y=C或X=C,Y=C或X=N,Y=N并且R3=Me,R4=Et，可从式(XXb)的脲通过环化制备，其在碱例如甲醇钠存在下，在溶剂例如甲醇中在例如65°C加热制备。
步骤(i)：式(XXb)的脲可如下制备：在例如0°C下将含有式(IVc)的苯胺(相应于式IV的苯胺，其中X=N,Y=C或X=C,Y=C或X=N,Y=N)和诸如三乙胺或二异丙基乙胺的碱在溶剂例如EtOAc或二氯甲烷中的溶液加入到羰基化试剂例如三光气在溶剂例如EtOAc或二氯甲烷的溶液中，随后加入三乙胺或二异丙基乙胺和酯(XXIb)。任选地，所述酯(XXIb)可预先溶解在诸如EtOAc或二氯甲烷的溶剂中，将三乙胺或二异丙基乙胺加入到该预制溶液中。任选地可加入一些额外的三乙胺或二异丙基乙胺和酯(XXIb)或一些额外的三光气。需要的酯(XXIb)可从对应的氨基酸制备，使用甲醇，加入亚硫酰氯后例如在回流条件下加热反应混合物。
方案15
Figure BDA00001749351300221
步骤(iii):式(IX)的苯酚可从式(XXII)的化合物通过去除苄基制备，例如在氢存在下(例如P=1大气压)，使用诸如Pd/C的催化剂在诸如甲醇、乙酸乙酯/乙醇混合物的溶剂中反应。
步骤(ii)：式(XXIIa)的化合物，其相应于式(XXII)的化合物，其中[R1;R2]例如为[(p-CN;o-Me或o-Et)或(p-Me或p-Et;m-OCF3)]，可使用适当的预先形成的有机锌中间体的溶液(例如在THF中)以及Pd(tBu3P)2和相应的溴化合物(XXIII)溶液(例如在THF中)通过Negishi偶联制备。所述有机锌中间体如下制备：在例如-15°C、0°C或室温下，在诸如THF、乙醚的溶剂中将氯化锌溶液加入到适当的烷基溴化镁溶液中或反之将烷基溴化镁溶液加入到氯化锌溶液中。在例如0°C下可将溴化合物(XXIII)在例如THF中的溶液加入到有机锌中间体中，或反之将有机锌中间体溶液加入到例如60°C预热的溴化合物(XXIII)的溶液中。任选的可加入一些额外的Pd(tBu3P)2或一些额外的预形成的有机锌中间体。
步骤(i)：式(XXIII)的溴化合物可从式(XXIV)的化合物制备，其使用苄基卤化物，例如苄基溴在碱例如碳酸钾存在下，在溶剂例如丙酮中在例如50°C加热苄基化而制备。
方案16
Figure BDA00001749351300231
式(VIIc)的化合物[相应于式(VII)的化合物，其中X=N,Y=C或X=N,Y=N,R1=CN并且R2=间-或邻-(Me,Et或环丙基)]可使用适当的预先形成的有机锌中间体的溶液(例如在THF中)以及Pd(tBu3P)2和相应的卤素化合物(VIId)[相应于式(VII)的化合物，其中R1=CN并且R2=间-或邻-卤素，例如溴和碘)]在诸如THF的溶剂中通过Negishi偶联制备。所述有机锌中间体如下制备：在例如-15°C、0°C或室温下，在诸如THF、乙醚的溶剂中将氯化锌溶液加入到适当的烷基溴化镁溶液中或反之将烷基溴化镁溶液加入到氯化锌溶液中。在例如0°C下可将卤素化合物(VIId)在例如THF中的溶液加入到有机锌中间体中，或反之将有机锌中间体溶液加入到例如60°C预热的卤素化合物(VIId)的溶液中。任选的可加入一些额外的Pd(tBu3P)2或一些额外的预形成的有机锌中间体。
方案17
Figure BDA00001749351300232
式(XXV)的化合物，其中X=N,Y=C,R1=对-CN并且R5=间-(环丙基)、间-异丙烯基]，可使用相应的硼酸或硼酸酯、诸如三磷酸钾的碱、含有钯催化剂的系统和诸如(Pd(OAc)2/PCy3)或(Pd(tBu3)2的配体，在诸如DMF、混合物(甲苯/水)等的溶剂中通过Suzuki偶联制备，在例如110°C下加热，任选微波辐射。
方案18
Figure BDA00001749351300241
式(IXc)的苯酚[相应于式(IX)的化合物，其中R1=对-CN和R6=间-I或邻-Me]可从式(XXVI)的氟芳族化合物制备，使用三甲基硅醇钾，在例如室温至70°C下，在诸如乙腈的溶剂中反应。
方案19
Figure BDA00001749351300242
步骤ii:式(IXd)的苯酚[相应于式(IX)的化合物，其中R1=对-CN和R2=邻-tBu]可从式(XXVII)的化合物制备，使用盐酸羟胺在乙酸中例如在回流条件下加热制备。
步骤i:式(XXVII)的化合物可通过Reimer-Tiemann甲酰化反应制备，在诸如MeOH/水的混合物溶剂中，使用氢氧化物碱例如氢氧化钠的水溶液在例如60°C加热并加入氯仿，从式(XXVIII)的化合物制备。
方案20
Figure BDA00001749351300243
步骤ii:式(VIIf)的化合物[相应于式(VII)的化合物，其中X=C,Y=N或X=C,Y=C并且R1=对-CN，并且R2=OR7，R7=C1-4烷基]可从式(XXIX)的化合物制备，使用烷化剂如适当的卤素衍生物，诸如碳酸钾的碱，在诸如DMF的溶剂中在例如介于室温至60°的温度下反应。
步骤i:式(XXIX)的化合物可从式(XXX)的化合物和亲电试剂(VIII)制备，其中Z=F或Cl，通过方案5中描述的类似方式制备。
方案21
Figure BDA00001749351300251
式(IXe)的苯酚可从式(XXXI)的化合物制备，在诸如二氯甲烷或二氯乙烷的溶剂中使用去甲基化试剂例如BBr3，在介于常温和100°C的适当温度下进行，任选在微波辐射下进行。
方案22
Figure BDA00001749351300252
步骤iii:式(IIIa)的化合物[相应于式(III)的化合物，其中X=C,Y=N，并且R1=对-CN和R2=iPr]可从式(XXXII)的化合物制备，在诸如Pd/C的催化剂存在下，在诸如甲醇的溶剂中用氢还原(P=1大气压)。
步骤ii、i:式(XXXII)的化合物可从式(XXXIII)的硝基化合物使用类似于方案3、2中所述的两步制备(例如用铁/氯化铵还原并偶联)。
方案23
Figure BDA00001749351300253
步骤i:式(XXXIV)的化合物，其中X=N,Y=N，可使用甲基硼酸、诸如三磷酸钾的碱、含有钯催化剂的系统和诸如(Pd(OAc)2/PCy3)或(Pd(tBu3)2)的配体，在诸如DMF的溶剂中，在例如110°C下加热，任选在微波辐射下进行。
方案24
Figure BDA00001749351300254
步骤i:式(Ie)的化合物可从式(XXXV)的化合物制备，在诸如Pd/C的催化剂存在下，在诸如甲醇的溶剂中通过氢(P=1大气压)还原进行。
本发明提供了用于治疗的式(I)的化合物或其可药用盐。
式(I)的化合物或其可药用盐可用于治疗或预防需要Kv3.1或Kv3.2或Kv3.1和Kv3.2通道调节剂的疾病或病症。本文中，Kv3.1或Kv3.2或Kv3.1和Kv3.2通道调节剂是正向或负向改变这些通道性质的化合物。
可被Kv3.1和/或Kv3.1通道调节介导的疾病或病症选自下列。所列疾病的括号内的数字是指精神障碍的诊断和统计手册(第4版，美国精神病学协会出版，DSM-IV)和/或国际疾病分类(第10版，ICD-10)中的分类代码。
式(I)的化合物或其可药用盐可用于治疗或预防抑郁和情感障碍，包括严重抑郁发作、躁狂性发作、混合性发作和轻躁狂发作；抑郁性疾病包括严重抑郁障碍、心境恶劣障碍(300.4)、未有特殊说明的抑郁障碍(311)；双极神经元障碍包括双极障碍I型、双极障碍II型(带轻躁狂发作的复发性严重抑郁发作)(296.89)、循环型情感障碍(301.13)和未有特殊说明双相型障碍(296.80)；其他情感障碍包括一般医疗情况导致的情感障碍(293.83)，其包括具有抑郁特征、严重抑郁样发作、躁狂特征和混合特征的亚型)、物质诱导的情感障碍(包括具有抑郁特征、躁狂特征和混合特征的亚型)以及未有特殊说明的情感障碍(296.90)；季节性情感障碍。
式(I)的化合物或其可药用盐可用于治疗或预防精神分裂症，其包括偏执型精神分裂症(295.30)、紊乱型精神分裂症(295.10)、紧张型精神分裂症(295.20)、未分化型精神分裂症(295.90)和残余型精神分裂症(295.60)亚型；精神分裂症样精神障碍(295.40)、情感性分裂症(295.70)，包括双相型和抑郁型亚型；妄想症(297.1)，包括色情狂型、夸大型、妒忌型、被迫害型、肉体型、混合型和未分类型亚型；短时精神障碍(298.8)；感应性精神疾患(297.3)；一般医疗情况导致的精神障碍，包括妄想亚型和幻觉亚型；物质诱导的精神障碍，包括妄想亚型(293.81)和幻觉亚型(293.82)；以及未有特殊说明的精神障碍(298.9)。
式(I)的化合物或其可药用盐可用于治疗或预防焦虑症，包括惊恐发作；惊恐障碍，包括恐怖性障碍不伴广场恐怖(300.01)和恐怖性障碍伴广场恐怖(300.21)；广场恐怖症；广场恐怖不伴恐怖性病症史(300.22)、特异恐怖(300.29，之前称单纯恐怖症)，包括动物型、自然环境型、血注射创伤型、处境型和其他亚型，社交恐怖症(社交焦虑障碍，300.23)、强迫性障碍(300.3)、创伤后应激障碍(309.81)、急性应激障碍(308.3)、广泛性焦虑症(300.02)、一般医疗情况引起的焦虑障碍(293.84)、物质诱导的焦虑障碍、分离焦虑障碍(309.21)、焦虑适应障碍(309.24)和未有特殊说明的焦虑障碍(300.00)。
式(I)的化合物或其可药用盐可用于治疗或预防物质相关性障碍，包括物质应用所致精神障碍，例如物质依赖、物质渴望和物质滥用；物质诱导的障碍，例如物质中毒、物质戒断、物质诱导的谵妄、物质诱导的永久性痴呆、物质诱导的永久性遗忘症、物质诱导的精神障碍、物质诱导的情感障碍、物质诱导的焦虑障碍、物质诱导的性功能障碍、药物诱导睡眠障碍和致幻剂引起的持久性知觉障碍(幻觉重现)；酒精相关性障碍，例如酒精依赖(303.90)、酒精滥用(305.00)、酒精中毒(303.00)、戒酒(291.81)、酒精中毒性谵妄、戒酒谵妄、酒精引起的持久性痴呆、酒精引起的持久性遗忘障碍、酒精所致的精神病性障碍、酒精所致的情感障碍、酒精引起的焦虑障碍、酒精引起的性功能障碍、酒精引起的睡眠障碍和未有特殊说明的酒精相关的障碍(291.9)；安非他明(或安非他明样)相关的障碍，例如安非他明依赖(304.40)、安非他明滥用(305.70)、安非他明中毒(292.89)、安非他明脱瘾(292.0)、安非他明中毒性谵妄、安非他明感应性精神障碍、安非他明诱导的心境障碍、安非他明引起的焦虑障碍、安非他明引起的性功能障碍、安非他明引起的睡眠障碍和未有特殊说明的安非他明有关的障碍(292.9)；咖啡因有关的障碍，例如咖啡因中毒(305.90)、咖啡因引起的焦虑障碍、咖啡因引起的睡眠障碍、未有特殊说明的咖啡因有关的障碍(292.9)；大麻有关的障碍，例如大麻依赖(304.30)、大麻瘾(305.20)、大麻中毒(292.89)、大麻中毒性谵妄、大麻引起的精神障碍、大麻引起的焦虑障碍、未有特殊说明的大麻有关的障碍(292.9)；可卡因相关性障碍，例如可卡因依赖(304.20)、可卡因滥用(305.60)、可卡因中毒(292.89)、可卡因脱瘾(292.0)、可卡因中毒性谵妄、可卡因引起的精神障碍、可卡因引起的心境障碍、可卡因引起的焦虑障碍、可卡因引起的性功能障碍、可卡因引起的睡眠障碍和未有特殊说明的可卡因有关的障碍(292.9)；致幻剂有关的障碍，例如致幻剂依赖(304.50)、致幻剂滥用(305.30)、致幻剂中毒(292.89)、致幻剂引起的持久性知觉障碍(幻觉重现)(292.89)、致幻剂中毒性谵妄、致幻剂引起的精神障碍、致幻剂引起的心境障碍、致幻剂引起的焦虑障碍和未有特殊说明的致幻剂有关的障碍(292.9)；吸入剂有关的障碍，例如吸入剂依赖(304.60)、吸入剂滥用(305.90)、吸入剂中毒(292.89)、吸入剂中毒性谵妄、吸入剂引起的持久性痴呆、吸入剂引起的精神障碍、吸入剂引起的心境障碍、吸入剂引起的焦虑障碍和未有特殊说明的吸入剂有关的障碍(292.9)；尼古丁有关的障碍，例如尼古丁依赖(305.1)、尼古丁戒断(292.0)和未有特殊说明的尼古丁有关的障碍(292.9)；阿片有关的障碍，例如类阿片依赖(304.00)、类阿片滥用(305.50)、阿片中毒(292.89)、阿片脱瘾(292.0)、阿片中毒性谵妄、阿片引起的精神障碍、阿片引起的心境障碍、阿片引起的性功能障碍、阿片引起的睡眠障碍和未有特殊说明的阿片有关的障碍(292.9)；苯环利定(或苯环利定样)有关的障碍，例如苯环利定依赖(304.60)、苯环利定滥用(305.90)、苯环利定中毒(292.89)、苯环利定中毒性谵妄、苯环利定引起的精神障碍、苯环利定引起的心境障碍、苯环利定引起的焦虑障碍和未有特殊说明的苯环利定有关的障碍(292.9)；镇静剂、催眠剂或抗焦虑剂相关的障碍，例如镇静剂、催眠剂或抗焦虑剂依赖(304.10)、镇静剂、催眠剂或抗焦虑剂滥用(305.40)、镇静剂、催眠剂或抗焦虑剂中毒(292.89)、镇静剂、催眠剂或抗焦虑剂脱瘾(292.0)、镇静剂、催眠剂或抗焦虑剂中毒性谵妄、镇静剂、催眠剂或抗焦虑剂脱瘾性谵妄、镇静剂、催眠剂或抗焦虑剂引起的持久性痴呆、镇静剂、催眠剂或抗焦虑剂引起的持久性遗忘症、镇静剂、催眠剂或抗焦虑剂引起的引起的精神障碍、镇静剂、催眠剂或抗焦虑剂引起的心境障碍、镇静剂、催眠剂或抗焦虑剂引起的焦虑障碍、镇静剂、催眠剂或抗焦虑剂引起的性功能障碍、镇静剂、催眠剂或抗焦虑剂引起的睡眠障碍和未有特殊说明的镇静剂、催眠剂或抗焦虑剂有关的障碍(292.9)；多种药物有关的障碍，例如多种药物依赖(304.80)；以及其他(或未知)物质有关的障碍，例如合成代谢甾类、硝酸盐吸入剂和氧化亚氮。
式(I)的化合物或其可药用盐可用于治疗或预防认知增强，包括治疗在其他疾病例如精神分裂症、双相型障碍、抑郁症、其他与认知损伤有关的精神疾病和精神病症，例如阿尔茨海默病中的认知损伤。
式(I)的化合物或其可药用盐可用于治疗或预防睡眠障碍，包括原发性睡眠障碍，例如睡眠异常，例如原发性失眠(307.42)、原发性嗜睡症(307.44)、发作性睡病(347)、与呼吸有关的睡眠障碍(780.59)、昼夜节律睡眠障碍(307.45)和未有特殊说明的睡眠异常(307.47)；原发性障碍例如深眠状态，例如梦魇(307.47)、夜惊症(307.46)、梦游症(307.46)和未有特殊说明的深眠状态(307.47)；与其他精神障碍有关的睡眠障碍，例如与其他精神障碍有关的失眠症(307.42)和与其他精神障碍有关的睡眠过度(307.44)；一般医疗情况引起的睡眠障碍，尤其是与诸如神经性障碍、神经痛、不宁腿综合征、心肺疾病有关的睡眠障碍；以及物质引起的睡眠障碍，包括失眠型、睡眠过度型、深眠型和混合型亚型；睡眠呼吸暂停和飞行时差反应综合征。
式(I)的化合物或其可药用盐可用于治疗或预防进食障碍，例如神经厌食症(307.1)，包括限制型亚型和食欲亢进/催泻亚型；神经性贪食(307.51)，包括催泻亚型和非催泻亚型；肥胖；强迫性进食障碍；暴食症；以及未有特殊说明的进食障碍(307.50)。
式(I)的化合物或其可药用盐可用于治疗或预防孤独症谱群疾病，包括自闭障碍(299.00)、阿斯佩各障碍(299.80)、赖特病(299.80)、童年瓦解性障碍(299.10)以及未有特殊说明的普遍障碍(299.80，包括不典型孤独症)。
式(I)的化合物或其可药用盐可用于治疗或预防注意力-缺乏/多动症，包括注意缺陷/多动症复合亚型(314.01)、注意缺陷/多动症为主的疏忽亚型(314.00)、注意缺陷/多动症活动过度刺激亚型(314.01)和未有特殊说明的注意缺陷/多动症(314.9)；多动障碍；行为分裂病症，例如行为障碍，包括儿童期发病亚型(321.81)、青少年发病亚型(312.82)和未有特殊说明的发病(312.89)，对立违抗障碍(313.81)和未有特殊说明的分裂行为；以及抽搐性运动障碍，例如图雷特精神障碍(307.23)。
式(I)的化合物或其可药用盐可用于治疗或预防人格障碍，包括偏执型人格障碍(301.0)、分裂型人格障碍(301.20)、精神分裂型人格障碍(301,22)、反社会性人格障碍(301.7)、边缘性人格障碍(301,83)、戏剧样人格障碍(301.50)、自爱性人格障碍(301,81)、回避性人格障碍(301.82)、依赖性人格障碍(301.6)、强迫型人格障碍(301.4)和未有特殊说明的人格障碍(301.9)。
式(I)的化合物或其可药用盐可用于治疗或预防性功能障碍，包括性欲障碍，例如性心理障碍(302.71)和性厌恶(302.79)；性欲望异常例如女性性唤起障碍(302.72)和男性勃起障碍(302.72)；性功能障碍例如女性性高潮障碍(302.73)、男性性高潮障碍(302.74)和射精过早(302.75)；性交痛障碍例如女性交媾困难(302.76)和阴道痉挛(306.51)；未有特殊说明的性功能障碍(302.70)；性变态例如露阴癖(302.4)、恋物癖(302.81)、摩擦症(302.89)、恋童癖(302.2)、性受虐癖(302.83)、性虐待症(302.84)、易装癖(302.3)、窥阴癖(302.82)和未有特殊说明的性变态(302.9)；性认同异常例如儿童性身份障碍(302.6)和青年或成年性身份障碍(302.85)；以及未有特殊说明的性机能障碍(302.9)。
式(I)的化合物或其可药用盐可用于治疗或预防冲动控制障碍，包括：间歇性暴躁障碍(312.34)、偷窃狂(312.32)、病理性赌博(312.31)、纵火狂(312.33)、拔毛癖(312.39)、未有特殊说明的冲动控制障碍(312.3)、贪食症、购物狂、强迫性性行为和强迫性贮藏。
式(I)的化合物或其可药用盐可用于治疗或预防听力障碍，包括听神经病、听觉处理障碍、听觉丧失，其包括突发性耳聋、噪音引起的听觉丧失、物质引起的听觉丧失和60岁以上成年人的听觉丧失(老年性耳聋)和耳鸣。
式(I)的化合物或其可药用盐可用于治疗或预防美尼尔氏病、平衡障碍和内耳障碍。
式(I)的化合物或其可药用盐可用于治疗或预防听觉过敏和响度感觉障碍，包括脆性X染色体综合征和孤独症。
式(I)的化合物或其可药用盐可用于治疗或预防癫痫(包括但不限于定位有关的癫痫、全身性癫痫、全身性和局部性抽搐癫痫等)、Lennox-Gastaut综合征有关的发作、作为疾病或病症并发症的癫痫发作(例如与脑病、苯丙酮尿、幼年型戈谢病、伦德伯格进行性肌阵挛性癫痫、中风、头损伤、应激、激素变化、药物使用或戒断、酒精使用或戒断、睡眠剥夺、发烧、感染等有关的发作)、特发性震颤、不宁腿综合征、部分和全身癫痫发作(包括强直性癫痫发作、阵挛性癫痫发作、强直阵挛性癫痫发作、失张力发作、肌阵挛性癫痫发作、失神型发作)、继发性全身性癫痫发作、颞叶癫痫、失神性癫痫(包括儿童、青少年、肌阵挛性、光和图案诱导的)、严重癫痫性脑病(包括缺氧相关的和Rasmussen综合征)、发热惊厥、部分性癫痫持续状态、进行性肌阵挛性癫痫(包括翁-伦病和拉弗拉病)、创伤后发作/癫痫，包括与头部损伤有关的那些、简单反射癫痫(包括光敏性、身体感觉性、本体感受性、听原性的和前庭的)、通常与癫痫有关的代谢性疾病，例如吡多辛依赖性癫痫、门凯卷发病、克拉伯病、酒精和药物(例如可卡因)滥用引起的癫痫、与癫痫有关的皮质畸形(例如双皮质综合征和皮质下带状灰质异位症)、与癫痫发作或癫痫有关的染色体异常，例如部分单体性(15Q)/安格尔曼综合征)等。
在本发明的一个实施方案中，提供了式(I)的化合物或其可药用盐，其用于治疗或预防抑郁和情感障碍、听觉障碍、精神分裂症、物质滥用病症、睡眠障碍或癫痫。
在本发明的一个实施方案中，提供了式(I)的化合物或其可药用盐，其用于治疗或预防双相型障碍或躁狂。
本文所用术语“治疗”包括控制、缓和、减少或调节疾病状态或其症状。
本文所用术语“预防”是指预防个体的疾病或障碍的症状或预防患者疾病或障碍的症状的复发，且不限于完全预防病痛。
本发明还提供了治疗或预防其中需要Kv3的调节剂的疾病或障碍的方法，例如上文提到的那些疾病和障碍，其包括向需要的患者施用有效量的式(I)的化合物或其可药用盐。
本发明还提供了式(I)的化合物或其可药用盐，其用于治疗或预防需要Kv3调节剂的疾病或障碍，例如上文提到的那些疾病和障碍。
本发明还提供了式(I)的化合物或其可药用盐在制备治疗或预防需要Kv3调节剂的疾病或障碍的药物中的用途，例如上文提到的那些疾病和障碍。
本发明还提供了治疗抑郁和情感障碍、精神分裂症、物质滥用病症、睡眠障碍或癫痫的方法，例如上文提到的那些适应症，所述方法包括向需要的患者施用有效量的Kv3调节剂或其可药用盐。
当用于治疗时，本发明的化合物通常作为药物组合物施用。本发明还提供了包含式(I)的化合物或其可药用盐以及可药用的载体的药物组合物。
式(I)的化合物或其可药用盐可通过任何常规方法施用，例如口服、肠胃外、口腔、舌下、经鼻、直肠或经皮施用，药物组合物相应进行调整。
当口服施用时，式(I)的化合物或其活性可药用盐可制成液体或固体，例如糖浆、混悬液、乳液、片剂、胶囊或锭剂。
液体制剂通常由活性成分的混悬液或溶液组成，其位于适当的液体载体中，例如水性溶剂，如水、乙醇或甘油，或非水性溶剂，例如聚乙二醇或油。所述制剂还可含有助悬剂、防腐剂、矫味剂和/或着色剂。
片剂形式的组合物可使用任何适当的制备固体制剂的常用药用载体制备，例如硬脂酸镁、淀粉、乳糖和纤维素。
胶囊形式的组合物可使用常规包装方法制备，例如含有活性成分的小片可使用标准载体制备，随后装填到硬明胶胶囊中；或者分散液或混悬液可使用任何适当的药用载体制备，例如水性胶、纤维素、硅酸盐或油类，随后将所述分散液或混悬液装填到软明胶胶囊中。
典型的肠胃外组合物由活性成分的溶液或混悬液组成，其位于无菌水性载体或肠胃外可接受的油中，例如聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、卵磷脂、花生油或芝麻油。或者，所述溶液可冻干，并在施用前用适当的溶剂重构。
用于鼻腔粘膜给药的组合物可制成气雾剂、滴剂、凝胶和粉末。气雾剂通常包括活性成分的溶液或细混悬液，其位于可药用的水性或非水性溶剂中，通常以单剂量或多剂量的无菌形式存在于密闭容器中，容器可以是筒或再装填的形式经雾化装置使用。或者，密闭容器可以是一次性的分散装置，例如单剂量鼻吸入器或装有计量阀门的气雾剂分配器。当所述剂型包括气雾剂分配器时，其含有抛射剂，可以是压缩气体，例如空气，或有机抛射剂，例如氟氯碳氢化合物或氢氟碳。气雾剂剂型也可采用泵喷雾器的形式。
适于口腔或舌下施用的组合物包括片剂、锭剂和软锭剂，其中活性成分与载体例如糖和阿拉伯胶、黄蓍胶或明胶和甘油配制。
直肠给药的组合物在栓剂形式中非常方便，其含有常规栓剂基质，例如可可脂。
适于经皮施用的组合物包括软膏、凝胶和贴剂。
在一个实施方案中，所述组合物是单位剂量形式，例如片剂、胶囊或安瓿。
根据施用的方法，组合物可含有0.1%至100%重量，例如10至60%重量的活性成分。根据施用的方法，所述组合物可含有0%至99%重量，例如40%至90%重量的载体。根据施用的方法，所述组合物可含有0.05mg至1000mg，例如1.0mg至500mg活性成分。根据施用的方法，所述组合物可含有50mg-1000mg，例如100mg-400mg载体。用于治疗上述病症的化合物的剂量通常根据疾病的严重程度、患者的体重以及其他类似的因素而有所不同。然而，通常适当的单位剂量为0.05-1000mg，更适合为1.0-500mg，所述单位剂量可每天施用一次以上，例如2或3次/天。所述治疗可持续数周或数月。
本发明在另一方面提供了包含式(I)的化合物或其可药用衍生物与其他治疗剂的组合。
当所述化合物用于和其他治疗剂组合时，这些化合物可先后或同时通过任何方便的途径施用。
上述组合可方便地以用于药物制剂中的形式提供，因此包含上文定义的组合和可药用的载体或赋形剂的药物制剂构成了本发明的另一方面。所述组合的各单独成分可以以独立或合并的药物制剂形式先后或同时施用。
当式(I)的化合物或其可药用衍生物与针对同一疾病状态具有活性的第二治疗剂组合施用时，各化合物的剂量可不同于单独使用所述化合物时的剂量。适当的剂量可由本领域技术人员容易的确定。
本发明的药物组合物可通过混合制备，优选在环境温度下和大气压下进行，其通常适于口服、肠胃外或直肠施用，可以是片剂、胶囊、口服液体制剂、粉末、颗粒、锭剂、重构粉末、可注射或输注的溶液或混悬液、或栓剂的形式。通常优选口服施用的组合物。
本发明还提供了Kv3调节剂或其可药用的盐，其用于治疗或预防抑郁症、情感障碍、听觉障碍、精神分裂症、物质滥用病症、睡眠障碍或癫痫。
具体而言，Kv3调节剂或其可药用盐尤其可用于治疗或预防抑郁和情感障碍，包括严重抑郁发作、躁狂性发作、混合型发作和轻躁狂发作；抑郁性疾病，包括严重抑郁障碍、心境恶劣障碍(300.4)、未特别说明的抑郁障碍(311)；双极神经元障碍，包括双极障碍I型、双极障碍II型(带轻躁狂发作的复发性严重抑郁发作)(296.89)、循环型情感障碍(301.13)和未特别说明的双相型障碍(296.80)；其他情感障碍包括一般医疗状况引起的情感障碍(293.83)，其包括具有抑郁特征、严重抑郁样发作、躁狂特征和混合特征的亚型)、物质诱导的情感障碍(包括具有抑郁特征、躁狂特征和混合特征的亚型)以及未有特殊说明的情感障碍(296.90)；季节性情感障碍。
本发明还提供了治疗抑郁和情感障碍、听觉障碍、精神分裂症、物质滥用病症、睡眠障碍或癫痫(包括例如上文提到的那些病症)的方法，其包括向需要的患者施用有效量的Kv3调节剂或其可药用的盐。
本发明还提供了Kv3调节剂或其可药用的盐，其用于治疗或预防抑郁和情感障碍、听觉障碍、精神分裂症、物质滥用病症、睡眠障碍或癫痫，包括例如上文提到的那些病症。
本发明还提供了Kv3调节剂或其可药用的盐在制备治疗或预防抑郁和情感障碍、听觉障碍、精神分裂症、物质滥用病症、睡眠障碍或癫痫(包括例如上文提到的那些病症)的药物中的用途。
当用于治疗中，所述Kv3调节剂通常作为药物组合物施用，例如包含Kv3调节剂或其可药用盐以及可药用载体的组合物。上文描述了所述组合物及其施用方法的实例，所述组合物包含式(I)的化合物及其可药用盐。所述组合物和施用方法也可用于其他Kv3调节剂或其可药用盐，用于治疗或预防抑郁和情感障碍、听觉障碍、精神分裂症、物质滥用病症、睡眠障碍或癫痫(包括例如上文提到的那些病症)。
本说明书中引用的所有出版物，包括但不限于专利和专利申请，通过参考引入本文，正如每个出版物都具体和各自地通过参考引入本文并被充分说明一样。
附图简述
本发明通过参考下列附图进行说明，其仅用作举例，其中：
图1a：使用实施例89中所述实验记录的hKv3.2电流。数据显示是在4种不同细胞中记录的2种浓度的实施例19的化合物在-15mV去极化电压阶跃期间各自的电流。使用单指数曲线拟合数据(实线)，使用Prism第5版(Graphpad Software公司)的拟合程序。
图1b：使用实施例89中所述实验记录的hKv3.2电流。数据显示是在2种不同细胞中记录的2种浓度的实施例71的化合物在-15mV去极化电压阶跃期间各自的电流。使用单指数曲线拟合数据(实线)，使用Prism第5版(Graphpad Software公司)的拟合程序。
图2：来自经鉴定的小鼠躯体感觉皮质“快速放电”中间神经元的记录。
图3：小鼠躯体感觉皮质中的小白蛋白阳性的中间神经元记录的动作电位频率，其通过去极化电流阶跃激发。
图4：来自小鼠躯体感觉皮质中的小白蛋白阳性的中间神经元的激发动作电位的半宽度。
图5：体外目测鉴定的小鼠MNTB神经元记录的高电压活化的钾电流。
试验
本发明通过下述化合物进行说明。在下列方法中，在各原料之后通常提供了参考说明。其仅仅是用于辅助本领域的化学家。原料不是必须从所参考的说明制备。
分析设备
原料、试剂和溶剂购自供应商，如未特别说明不需进一步纯化。除非另外说明，所有具有手性中心的化合物均是外消旋的。当反应描述为以类似于较早的更完整描述的反应的方式进行时，所使用的一般反应条件基本上是相同的。使用的后处理条件是本领域的标准类型，但可根据不同反应进行调整。原料不是必须从指定的批次制备。合成的化合物可具有各种纯度，范围为例如85%-98%。
在Varian仪器上，在300、400、500或600MHz下记录质子核磁共振谱(NMR)，或在布鲁克仪器上，在400MHz记录。化学位移以ppm(δ)为单位记录，使用残留溶剂线作为内标。分裂模式描述为s(单峰)、br.s(宽单峰)、d(双峰)、t(三重峰)、q(四重峰)、dd(双二重峰)、dt(双三重峰)和m(多重峰)。NMR谱在25-30°C下记录。
直接注入式质谱(MS)在安捷伦1100系列LC/MSD质谱仪上进行，在ES(+)和ES(-)电离模式下进行[ES(+):质量范围:100-1000amu.注入溶剂：水+0.1% HCO2H/CH3CN 50/50。ES(-):质量范围:100-1000amu.注入溶剂：水+0.05% NH4OH/CH3CN 50/50]。该方法的使用通过所述化合物的分析特征描述中“MS_1(ESI)”标明。或者，在偶联了安捷伦1100的HPLC仪器的ES(+)和ES(-)电离模式下，在质谱仪上进行质谱分析[LC/MS-ESI(+)分析在Supelcosil ABZ+Plus上进行(33×4.6mm,3μm)(流动相:2.2分钟内，从10%[CH3CN+0.05%TFA]到90%[CH3CN+0.05%TFA]和10%[水]，在这些条件下保持2.8分钟。T=45°C,流速=0.9mL/分)]。该方法的使用通过所述化合物的分析特征描述中“MS_2(ESI)”标明。
HPLC-质谱(HPLC-MS)在与安捷伦1100系列HPLC偶联的安捷伦1100系列LC/MSD质谱仪上进行，在正或负电喷雾离子化模式下，在酸性和碱性梯度条件下进行。酸性梯度：LC/MS-ES (+或-)分析在SupelcosilABZ+Plus柱上进行(33x4.6mm,3μm)。流动相:A:(水+0.1%HCO2H)/B:CH3CN。梯度(标准方法):t=0分，0%(B)，在5分钟内从0%(B)到95%(B)，持续1.5分钟，在0.1分钟内从95%(B)到0%(B)，停止时间8.5分钟。柱温=室温.流速=1ml/min。该方法的使用通过所述化合物的分析特征描述中“LC-MS_A”标明。
酸性梯度的高效液相色谱：
在装有2996PDA检测器并与Waters Micromass ZQTM质谱仪偶联的UPLC/MS AcquityTM系统上，以正或负电喷雾离子化模式获取总离子流(TIC)和DAD UV色谱痕量以及与峰相关的MS和UV光谱[LC/MS-ES(+或-):分析使用AcquityTM UPLC BEH C18柱进行(50x2.1mm,粒径1.7μm)。
一般性方法：流动相:A:(水+01%HCO2H)/B:(CH3CN+0.06%HCO2H)。梯度:t=0min 3%(B),t=0.05min 6%(B),t=0.57min 70%(B),t=1.06min 99%(B)持续0.389min,t=1.45min 3%(B),停止时间1.5min。柱温=40°C。流速=1.0mL/min。质量范围:ES(+):100-1000amu.ES(-):100-800amu。UV检测范围:210-350nm。该方法的使用通过所述化合物的分析特征描述中“UPLC”标明。
第一聚焦方法：流动相:A:(水+0.1%HCO2H)/B:(CH3CN+0.1%HCO2H)。梯度:t=0min 3%(B),t=1.06min 99%(B),t=1.45min 99%(B),t=1.46min 3%(B),停止时间1.5min。柱温=40°C。流速=1.0mL/min。质量范围:ES(+):100-1000amu.ES(-):100-800amu.UV检测范围：210-350nm。该方法的使用通过所述化合物的分析特征描述中“UPLC_s”标明。
第二聚焦方法：流动相:A:(水+0.1%HCO2H)/B:(CH3CN+0.1%HCO2H)。梯度:t=0min 3%(B),t=1.5min 100%(B),t=1.9min 100%(B),t=2min 3%(B),停止时间2min。柱温=40°C。流速=1.0mL/min。质量范围:ES(+):100-1000amu.ES(-):100-800amu.UV检测范围：210-350nm。该方法的使用通过所述化合物的分析特征描述中“UPLC_ipqc”标明。
碱性梯度的高效液相色谱：
在装有PDA检测器并与Waters SQD质谱仪偶联的UPLC/MSAcquityTM系统上，以正或负交替电喷雾离子化模式获取总离子流(TIC)和DAD UV色谱痕量以及与峰相关的MS和UV光谱[LC/MS-ES+/-:分析使用AcquityTM UPLC BEH C18柱进行(50x2.1mm,粒径1.7μm)。流动相:A:(10mM NH4HCO3水溶液(用氨水调节至pH 10))/B:CH3CN。梯度:t=0min 3%(B),t=1.06min 99%(B)持续0.39min,t=1.46min3%(B),停止时间1.5min。柱温=40°C。流速=1.0mL/min。质量范围:ES(+):100-1000amu.ES(-):100-1000amu.UV检测范围:220-350nm。该方法的使用通过所述化合物的分析特征描述中“UPLC_B”标明。
对于涉及微波辐射的反应，使用Personal Chemistry EmrysTMOptimizer或Biotage Initiator。
在多种制备中，纯化使用Biotage手动快速色谱(Flash+)、Biotage自动快速色谱(Horizon,SP1和SP4)，Companion CombiFlash(ISCO)自动快速色谱、Flash Master Personal或Vac Master系统进行。
快速色谱在230-400目硅胶(由Merck AG Darmstadt,德国提供)或300-400目硅胶(由Sinopharm Chemical Reagent Co.,Ltd.提供)、VarianMega Be-Si预装柱、预装Biotage硅胶柱(例如Biotage SNAP柱)、KP-NH预装快速柱、ISOLUTE NH2预装柱或ISCO RediSep硅胶柱上进行。
SPE-Si柱是由Varian提供的硅固相提取柱。
在多种制备中，纯化在装有Waters 2996PDA检测器并偶联ZQTM质谱仪(Waters)的质量指示的自动纯化(MDAP)系统FractionlynxTM上进行，以正或负电喷雾离子化模式ES+、ES-操作(质量范围100-1000或100-900)
使用了一系列半制备的梯度：
方法A:色谱碱性条件
柱：XTerra Prep MS C18OBD(150mmx30mm颗粒大小10μm)室温
流动相：A:(水+10mM碳酸氢铵水溶液(用氨水调节至pH10))，B：乙腈
流速:40ml/min
梯度:10%(B)0.5min，12.5min内从10%(B)到95%(B)，3min内从95%(B)到100%(B)。
方法B:色谱碱性条件
柱：XTerra Prep MS C18 OBD(150mmx30mm颗粒大小10μm)室温
流动相：A:水+10mM碳酸氢铵水溶液(用氨水调节至pH10))，B：乙腈
流速:40ml/min
梯度:1min内从20%到25%(B)，12min内从25%(B)到65%(B)，0.5min内从65%(B)到100%(B)
方法C:色谱碱性条件
柱：Waters Xbridge C18 OBD(50mmx19mm颗粒大小5μm)室温
流动相：A:水+10mM碳酸氢铵水溶液(用氨水调节至pH10))，B：乙腈
流速：17ml/min
梯度：1min内从20%(B)到25%(B)，9min内从25%(B)到55%(B)，2min内从55%(B)到100%(B)，0.1min内回到20%(B)。
方法D:色谱酸性条件
柱：Waters Xbridge C18 OBD(50mmx19mm颗粒大小5μm)室温
流动相:A:(水+0.1%甲酸水溶液);B:乙腈
流速：17ml/min
梯度：1min内从20%(B)到25%B，9min内从25%(B)到55%(B)，2min内从55%(B)到100%(B)，0.1min内回到20%(B)。
方法E:色谱碱性条件
柱：Waters Xbridge C18 OBD(50mmx19mm颗粒尺寸5μm)室温
流动相：A:(水+10mM碳酸氢铵水溶液(用氨水调节至pH10))，B：乙腈
流速：17ml/min
梯度：1min内从10%(B)-15%(B)，7min内从15%(B)-70%(B)，1min内从70%(B)-100%(B)，100%(B)2min,0.1min内回到10%(B)。
方法F:色谱碱性条件
柱:Phenomenex Gemini AXIA C18(50x21.2mm颗粒尺寸5μm)
流动相:A:水+10mM碳酸氢铵水溶液(用氨水调节至pH10))，B：乙腈
流速：17ml/min
梯度：1min内从10%(B)-15%(B)，8min内从15%(B)-65%(B)，1min内从65%(B)-100%(B)，0.1min内回到10%(B)。
方法G:色谱碱性条件
柱:Phenomenex Gemini AXIA C18(50x21.2mm颗粒尺寸5μm)
流动相:A:水+10mM碳酸氢铵水溶液(用氨水调节至pH10))，B：乙腈
流速：17ml/min
梯度：1min内从10%(B)-15%(B)，7min内从15%(B)-70%(B)，1min内从70%(B)-100%(B)，100%(B)2min,0.1min内回到10%(B)。
方法H:色谱酸性条件
柱：Waters Xbridge C18 OBD(100mmx19mm颗粒尺寸5μm)室温
流动相:A:(水+0.1%甲酸水溶液);B:乙腈
流速：17ml/min
梯度：5%(B)1min，9min内从5%(B)到90%(B)，0.1min内从90%(B)到100%(B)，100%(B)0.8min，0.1min内回到5%(B)。
方法I:色谱酸性条件
柱：Waters Sunfire OBD(100mmx19mm,颗粒尺寸5μm)室温流动相:A:(水+0.1%甲酸水溶液);B:乙腈
流速：17ml/min
梯度：9min内从30%(B)到70%(B)，1min内从70%(B)到100%(B)，1min内回到30%(B)。
方法J:色谱酸性条件
柱：Waters Sunfire OBD(100mmx19mm,颗粒尺寸5μm)室温
流动相:A:(水+0.1%甲酸水溶液);B:乙腈
流速：17mL/min
梯度：10%(B)1min，10min内从10%(B)到95%(B)，95%(B)1.5min,0.1min内回到10%(B)。
SPE-SCX柱是Varian提供的离子交换固相提取柱。SPE-SCX柱使用的洗脱剂是DCM和MeOH或MeCN或MeOH、随后氨的MeOH溶液(通常为2N)。除非另外说明，否则收集的组分是用氨的MeOH溶液洗脱的那些。
缩写
Figure BDA00001749351300411
Figure BDA00001749351300421
Figure BDA00001749351300431
支持实施例和中间体
中间体1
{(1R)-1-甲基-2-[(4-{[3-(甲氧基)苯基]氧基}苯基)氨基]-2-氧代乙基}氨 基甲酸1,1-二甲基乙基酯
Figure BDA00001749351300432
向N-{[(1,1-二甲基乙基)氧基]羰基}-D-丙氨酸(250mg,1.321mmol)的无水N,N-二甲基甲酰胺溶液(5mL)中依次加入DIPEA(0.346mL,1.982mmol)和TBTU(467mg,1.453mmol)，将反应混合物在室温下搅拌15分钟。随后加入(4-{[3-(甲氧基)苯基]氧基}苯基)胺(313mg,1.453mmol)，将反应混合物在室温下搅拌30分钟。使用盐水(10mL)终止反应，用水稀释(5mL)，用乙醚萃取(3次20mL)。有机层用硫酸钠干燥，过滤蒸发，残余物通过硅胶色谱纯化(Biotage系统,25g,SNAP柱)，使用环己烷/乙酸乙酯梯度洗脱(100/0-70/30)获得淡黄色胶状的标题化合物(440mg)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.96(1H,s),7.62(2H,m),7.25(1H,t),7.04-7.11(1H,m),7.01(2H,m),6.68(1H,dd),6.44-6.55(2H,m),4.04-4.16(1H,m),3.70-3.76(3H,m),1.29-1.46(9H,m),1.19-1.29(3H,m);UPLC:0.76min,387[M+H]+。
中间体2
N 1 -(4-{[3-(甲氧基)苯基]氧基}苯基)-D-丙氨酰胺
Figure BDA00001749351300441
向{(1R)-1-甲基-2-[(4-{[3-(甲氧基)苯基]氧基}苯基)氨基]-2-氧代乙基}氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯(中间体1,435mg)的无水二氯甲烷溶液中(6mL)加入TFA(2mL,26.0mmol)，将反应混合物在室温下搅拌1小时。蒸发溶剂和过量TFA，残余物通过SCX柱纯化获得黄色胶状的标题化合物(320mg)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.67(2H,m),7.25(1H,t),7.00(2H,m),6.68(1H,dd),6.53(1H,t),6.49(1H,dd),3.73(3H,s),3.39-3.46(1H,m),1.22(3H,d);UPLC:0.51min,287[M+H]+。
中间体3
1-(乙氧基)-3-[(4-硝基苯基)氧基]苯
Figure BDA00001749351300442
平行进行两项反应。平行建立两个微波管。在大的30mL微波管中，将3-(乙氧基)苯酚(2次，1.25g,9.045mmol)溶于6mL二甲基甲酰胺。加入1-氟-4-硝基苯(2次，1.28g,9.045mmol)和碳酸钾(2次3.75g,27.15mmol)。120°C下在微波辐射下加热反应混合物1小时。过滤合并的反应混合物。过滤的固体用二氯甲烷洗涤。真空蒸发挥发物。向粗产物中加入一些二氯甲烷和盐水。化合物用二氯甲烷和乙酸乙酯各萃取2次。合并的有机相用硫酸钠干燥。其提供了标题化合物(4g)。
1H NMR(400MHz,甲醇-d4):δppm 8.38-8.05(2H,m),7.46-7.31(1H,m),7.20-7.05(2H,m),6.94-6.81(1H,m),6.77-6.63(2H,m),4.08(2H,q),1.42(3H,t);UPLC:0.89min,260[M+H]+。
中间体4
4-{[3-(乙氧基)苯基]氧基}苯胺
Figure BDA00001749351300451
将1-(乙氧基)-3-[(4-硝基苯基)氧基]苯(中间体3,4g)和氯化锡单水合物(28.8g,139mmol)的乙酸乙酯溶液(200mL)加热回流过夜(15小时)。冷却反应混合物，随后用乙酸乙酯(50mL)稀释，用饱和NaHCO3(100mL)、盐水(100mL)洗涤，硫酸钠干燥。蒸发挥发物后，残余物用SCX纯化(用甲醇洗涤柱，吸附化合物，用甲醇洗涤(3CV)，2N的氨的甲醇溶液解吸附(3CV))。蒸发获得标题化合物(2.9g)。
1HNMR(400MHz,CDCl3):δppm 6.50(1H,t),6.21(2H,d),6.06(2H,d),5.91-5.84(3H,m),3.34-3.29(4H,m),0.72(3H,t);UPLC:0.89min,260[M+H]+。
中间体5
3-氯-5-氟苯基4-硝基苯基醚
Figure BDA00001749351300452
向3-氯-5-氟苯酚(1.46g,10mmol)和1-氟-4-硝基苯(1.41g,10mmol)在乙腈中的溶液(40mL)中加入碳酸钾(2.76g,20mmol)，随后反应混合物加热回流4小时。过滤后，除去溶剂。获得的残余物用正己烷洗涤(2次15mL)，干燥获得标题化合物(2.38g)，其直接用于下一步骤。
中间体6
4-[(3-氯-5-氟苯基)氧基]苯胺
Figure BDA00001749351300453
向3-氯-5-氟苯基4-硝基苯基醚(中间体5,2.38g)的THF(40mL)和水(10mL)的溶液中加入铁粉(11.2g,200mmol)和氯化铵(10.7g,200mmol)。加热回流反应混合物4小时。过滤后，浓缩溶剂获得残余物，倒入50mL水。混合物用乙酸乙酯萃取(3次50mL)，洗涤合并的有机相，用硫酸镁干燥。除去溶剂后获得标题化合物(2.02g)，其直接用于下一步骤。
中间体7
3-氯-4-氟苯基4-硝基苯基醚
Figure BDA00001749351300461
向3-氯-4-氟苯酚(1.46g,10mmol)和1-氟-4-硝基苯(1.41g,10mmol)的乙腈溶液(40mL)中加入碳酸钾(2.76g,20mmol)。加热回流反应混合物4小时。过滤后，除去溶剂获得残余物。残余物用正己烷洗涤(2次15mL)，干燥获得标题化合物(2.48g)，其直接用于下一步骤。
中间体8
4-[(3-氯-4-氟苯基)氧基]苯胺
Figure BDA00001749351300462
向3-氯-4-氟苯基4-硝基苯基醚(中间体7,2.48g)的THF/水的溶液(40mL/10mL)中加入铁粉(11.2g,200mmol)和氯化铵(10.7g,200mmol)，加热回流反应混合物4小时。过滤后浓缩溶剂获得残余物，倒入50mL水。混合物用乙酸乙酯萃取(3次50mL)，洗涤合并的有机相，用硫酸镁干燥。除去溶剂后获得标题化合物(2.15g)，其直接用于下一步骤。
中间体9
N-[({4-[(3-氯-4-氟苯基)氧基]苯基}氨基)羰基]-D-丙氨酸
Figure BDA00001749351300463
向4-[(3-氯-4-氟苯基)氧基]苯胺(中间体8,237mg)和三光气(99mg,0.33mmol)的15mL二氯甲烷溶液中加入DIPEA(155mg,1.2mmol)，室温下搅拌混合物2小时。随后蒸发溶剂获得残余物。将残余物溶于5mL THF，转移到DIPEA(65mg,0.5mmol,Acros)和D-丙氨酸(89mg,1mmol)在5mL THF的混合物中。整个反应混合物在室温下搅拌16小时。除去溶剂获得标题化合物(352mg)，其直接用于下一步骤。
MS_2(ESI):353[M+H]+
中间体10
N-[({4-[(3-氯-4-氟苯基)氧基]苯基}氨基)羰基]-L-丙氨酸
Figure BDA00001749351300471
以类似于中间体9的方法制备标题化合物，用L-丙氨酸代替D-丙氨酸(89mg,1mmol)获得标题化合物(325mg)，其直接用于下一步骤。
MS_2(ESI):353[M+H]+
中间体11
2-甲基-5-(甲氧基)苯胺
Figure BDA00001749351300472
在H2气氛中，在室温下将1-甲基-4-(甲氧基)-2-硝基苯(20.0g,119.8mmol)和Pd/C(10%,3g)在甲醇(100mL)中的混悬液搅拌过夜。混合物用硅藻土层过滤，真空蒸发滤液获得固体的标题化合物(16.1g)。
MS_2(ESI):138[M+H]+。
中间体12
2-甲基-5-(甲氧基)苯酚
Figure BDA00001749351300473
0-5°C下向2-甲基-5-(甲氧基)苯胺(中间体11,6.0g)的H2SO4(5M,20mL)溶液中分批加入NaNO2(3.4g,49.3mmol)。将混合物在50°C搅拌1小时，用乙酸乙酯萃取(4次30mL)。合并的乙酸乙酯层用硫酸钠干燥，真空浓缩获得残余物，其通过硅胶柱色谱纯化(EtOAc:PE=1:20洗脱)获得固体的标题化合物。
MS_2(ESI):139[M+H]+。
中间体13
1-甲基-4-(甲氧基)-2-[(4-硝基苯基)氧基]苯
Figure BDA00001749351300481
向2-甲基-5-(甲氧基)苯酚(中间体12,1.5g)和1-氟-4-硝基苯(1.4g,10.0mmol)的乙腈溶液(100mL)中加入碳酸钾(2.1g,15.2mmol)，加热回流混合物5小时。浓缩所得混合物，用乙酸乙酯(3次30mL)和水(100mL)分层。合并的乙酸乙酯层用硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。粗产物通过硅胶柱色谱纯化(EtOAc:PE=1:20)获得标题化合物固体(2.5g)。
中间体14
4-{[2-甲基-5-(甲氧基)苯基]氧基}苯胺
在H2气氛下，室温下将1-甲基-4-(甲氧基)-2-[(4-硝基苯基)氧基]苯(中间体13,2.5g)和Pd/C(10%,1g)的MeOH(100mL)混悬液搅拌过夜并通过硅藻土层过滤。蒸发滤液获得固体状的标题化合物(2.0g)。
1HNMR(400MHz,CDCl3):δppm 7.14-7.12(1H,d),6.85-6.82(2H,d),6.68-6.66(2H,d),6.59-6.56(1H,d),6.40(1H,s),3.74-3.71(5H,m),2.25(3H,s);MS_2(ESI):230[M+H]+
中间体15
{(1R)-1-甲基-2-[(4-{[2-甲基-5-(甲氧基)苯基]氧基}苯基)氨基]-2-氧代乙 基}氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯
向N-{[(1,1-二甲基乙基)氧基]羰基}-D-丙氨酸(89mg,0.471mmol)在无水N,N-二甲基甲酰胺(5mL)的溶液中加入DIPEA(0.103mL,0.589mmol)，随后加入HATU(179mg,0.471mmol)，在氩气中将反应混合物在室温下搅拌15分钟。随后加入4-{[2-甲基-5-(甲氧基)苯基]氧基}苯胺(中间体14,90mg)，在氩气中将反应混合物在60°C搅拌1小时30分钟。蒸发反应混合物。获得的残余物通过硅胶柱色谱纯化(Companion instrument,40g硅胶柱)，用梯度cHex/EtOAc 100/0-75/25在15分钟内洗脱，随后用75/25洗脱30分钟获得标题化合物(155mg)。
1H-NMR(400MHz,甲醇-d4):δppm 7.52(2H,d),7.13(1H,d),6.85(2H,d),6.64(1H,dd),6.42(1H,d),4.22(1H,dd),3.57-3.78(3H,m),2.12(3H,s),1.46(9H,s),1.41(3H,d);UPLC_B:1.04min,401[M+H]+。
中间体16
N 1 -(4-{[2-甲基-5-(甲氧基)苯基]氧基}苯基)-D-丙氨酰胺
Figure BDA00001749351300492
将{(1R)-1-甲基-2-[(4-{[2-甲基-5-(甲氧基)苯基]氧基}苯基)氨基]-2-氧代乙基}氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯(中间体15,150mg)溶于3mL无水二氯甲烷。在氩气中，在0°C下向该溶液中滴加30当量的TFA(0.866mL,11.24mmol)。将反应物在0°C搅拌4小时。蒸发反应混合物。获得的残余物用SCX柱纯化(用3CV甲醇洗涤柱，吸附化合物，用甲醇洗涤(5CV)，2CV的氨的甲醇溶液解吸附(1N))。蒸发挥发物获得标题化合物(129mg)。
1H-NMR(400MHz,甲醇-d4):δppm 7.48(2H,m),7.10(1H,d),6.81(2H,m),6.60(1H,dd),6.36(1H,d),3.64(3H,s),3.54(1H,m),2.06(3H,s),1.33(3H,d);UPLC_B:0.77min,301[M+H]+。
中间体17
4-甲基-3-(甲氧基)苯胺
Figure BDA00001749351300501
向1-甲基-2-(甲氧基)-4-硝基苯(2.5g,14.96mmol)在甲醇中的溶液(50mL)加入兰尼镍(~2g)，将反应混合物在室温下，在H2气氛(1大气压)中搅拌过夜。过滤催化剂，残余物用SCX柱纯化(50g)获得无色油状的标题化合物(1.86g)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:6.73(1H,d),6.19(1H,d),6.05(1H,dd),4.85(2H,s),3.68(3H,s),1.97(3H,s);UPLC_B:0.62min,138[M+H]+。
中间体18
4-甲基-3-(甲氧基)苯酚
Figure BDA00001749351300502
0°C下向4-甲基-3-(甲氧基)苯胺(中间体17,1.86g)在水(100mL)/H2SO4(30mL,563mmol)的混悬液中缓慢加入亚硝酸钠(1.029g,14.91mmol)水溶液(10mL)，将反应混合物在0°C下搅拌30分钟。将反应混合物缓慢加入在90°C预热的98%H2SO4(20mL)的水溶液(80mL)中，在该温度下搅拌1小时。冷却后混合物用Et2O萃取(2x200mL)，有机层用硫酸钠干燥，过滤并蒸发获得红/棕色油状的标题化合物(1.86g)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.14(1H,br.s),6.87(1H,d),6.35(1H,d),6.24(1H,dd),3.71(3H,s),2.01(3H,s);UPLC_B:0.63min,137[M-H]-。
中间体19
1-甲基-2-(甲氧基)-4-[(4-硝基苯基)氧基]苯
向4-甲基-3-(甲氧基)苯酚(中间体18,0.800g)的无水乙腈溶液(60mL)中加入碳酸钾(1.600g,11.58mmol)，随后加入1-氟-4-硝基苯(817mg,5.79mmol)，加热回流反应混合物6小时。过滤固体，蒸发溶剂获得橙色固体状的标题化合物(1.43g)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:8.24(2H,m),7.23(1H,d),7.11(2H,m),6.82(1H,d),6.66(1H,dd),3.78(3H,s),2.16(3H,s);UPLC_B:1.03min,260[M+H]+。
中间体20
4-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}苯胺
向1-甲基-2-(甲氧基)-4-[(4-硝基苯基)氧基]苯(中间体19,1.43g)的四氢呋喃(65mL)/水(32.5mL)溶液中加入铁(1.540g,27.6mmol)，随后加入氯化铵(1.475g,27.6mmol)，反应混合物在室温下搅拌5小时。过滤催化剂，溶液用饱和的Na2CO3水溶液(10mL)稀释，用乙酸乙酯萃取(2次60mL)。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤蒸发获得棕/红色固体状的标题化合物(1.25g)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.00(1H,d),6.77-6.70(2H,m),6.60-6.51(3H,m),6.24(1H,dd),4.94(2H,br.s),3.71(3H,s),2.06(3H,s);UPLC_B:0.86min,230[M+H]+。
中间体21
{(1R)-1-甲基-2-[(4-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}苯基)氨基]-2-氧代乙 基}氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯
向N-{[(1,1-二甲基乙基)氧基]羰基}-D-丙氨酸(182mg,0.960mmol)在无水N,N-二甲基甲酰胺(DMF)溶液中(4mL)加入DIPEA(0.305mL,1.745mmol)，随后加入TBTU(336mg,1.047mmol)，将反应混合物在室温下搅拌15分钟。随后加入4-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}苯胺(中间体20,200mg)，将反应混合物在同一温度下搅拌1小时。反应用水终止(2mL)，盐水稀释(10mL)并用乙酸乙酯萃取(2次20mL)。有机层用硫酸钠干燥，过滤并蒸发，残余物用快速色谱纯化(Biotage系统,10g SNAP柱)使用梯度环己烷/乙酸乙酯(100/0-80/20)获得淡黄色固体状的标题化合物(304mg)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.93(s,1H),7.60(m,2H),7.09(d,2H),6.97(m,2H),6.63(d,1H),6.39(dd,1H),4.15-4.03(m,1H),3.74(s,3H),2.10(s,3H),1.39(s,9H),1.26(d,3H),UPLC_B:RT 0.96min,m/z 401[M+H]+。
中间体22
N 1 -(4-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}苯基)-D-丙氨酰胺
Figure BDA00001749351300521
向{(1R)-1-甲基-2-[(4-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}苯基)氨基]-2-氧代乙基}氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯(中间体21,300mg)的无水二氯甲烷溶液(7.5mL)中缓慢加入TFA(2.5mL,32.4mmol)，室温下搅拌反应混合物1.5小时。蒸发溶剂和过量的TFA，残余物通过SCX柱纯化(10g)，获得橙色油状的标题化合物(219mg)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.64(2H,m),7.08(1H,s),6.96(2H,m),6.63(1H,d),6.39(1H,dd),3.74(3H,s),3.41(1H,q),2.10(3H,s),1.21(3H,d);UPLC_B:0.80min,301[M+H]+。
中间体23
2-{[3-(1-甲基乙基)苯基]氧基}-5-硝基吡啶
Figure BDA00001749351300531
在30mL大微波管中，将2-氯-5-硝基吡啶(1.041g,6.57mmol,1当量)溶于5.5mL二甲基甲酰胺中，加入3-(1-甲基乙基)苯酚(0.90mL,6.57mmol,1当量)和碳酸钾(4.54g,32.8mmol,5当量)。将反应混合物在微波辐射下在110°C加热1小时(Biotage Initiator)。过滤反应混合物。过滤的固体用二氯甲烷洗涤(30mL)。真空蒸发挥发物。将粗制化合物溶于二氯甲烷(20mL)，加入盐水(20mL)。化合物用二氯甲烷萃取2次(2x20mL)，乙酸乙酯萃取2次(2x20mL)。有机相用硫酸钠干燥。蒸发获得标题化合物(1.402g)。
1HNMR(400MHz,甲醇-d4):δppm 8.94(1H,d),8.52(1H,dd),7.33(1H,t),7.15(1H,d),7.06(1H,d),7.02(1H,t),6.90-6.97(1H,m),2.81(3H,s);UPLC:0.93min,259[M+H]+。
中间体24
6-{[3-(1-甲基乙基)苯基]氧基}-3-吡啶胺
Figure BDA00001749351300532
将2-{[3-(1-甲基乙基)苯基]氧基}-5-硝基吡啶(中间体23,1.39g)溶于乙醇(25mL)。加入一水合肼(0.524mL,1076mmol)和钯炭(401mg,0.377mmol)。在氩气下回流加热反应混合物1小时。冷却反应物，随后在硅藻土上过滤。真空蒸发有机相。残余物通过快速硅胶色谱纯化(Companioninstrument,120g硅胶柱,梯度：15分钟内环己烷/乙酸乙酯从100/0到30/70，随后在30/70保持30分钟)。蒸发获得黄色油状的标题化合物(821mg)。
1HNMR(400MHz,甲醇-d4):δppm 7.65(1H,d),7.29-7.15(2H,m),6.99(1H,d),6.81-6.86(1H,m),6.68-6.78(2H,m),2.97-2.75(1H,m),1.23(3H,s),1.22(3H,s);UPLC:0.70min,229[M+H]+。
中间体25
{(1R)-1-甲基-2-[(6-{[3-(1-甲基乙基)苯基]氧基}-3-吡啶基)氨基]-2-氧代 乙基}氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯
Figure BDA00001749351300541
向N-{[(1,1-二甲基乙基)氧基]羰基}-D-丙氨酸(69.6mg,0.368mmol)的无水N,N-二甲基甲酰胺溶液(4mL)中加入DIPEA(0.080mL,0.460mmol)、HATU(140mg,0.368mmol)，将反应混合物在氩气中在室温下搅拌15分钟。随后加入6-{[3-(1-甲基乙基)苯基]氧基}-3-吡啶胺(中间体24,70mg)，将反应混合物在氩气中在60°C搅拌过夜。蒸发反应混合物。获得的残余物通过硅胶色谱纯化(Companion系统,12g柱)，梯度为环己烷/乙酸乙酯从100/0到65/35，获得标题化合物(59mg)。
1HNMR(400MHz,甲醇-d4):δppm 8.33(1H,d),8.05(1H,dd),7.30(1H,t),7.08(1H,d),6.92-6.98(1H,m),6.83-6.91(2H,m),4.12-4.29(1H,m),2.79-2.97(1H,m),1.45(9H,s),1.38(3H,d),1.25(6H,d);UPLC:0.85min,400[M+1]+
中间体26
N 1 -(6-{[3-(1-甲基乙基)苯基]氧基}-3-吡啶基)-D-丙氨酰胺
将{(1R)-1-甲基-2-[(6-{[3-(1-甲基乙基)苯基]氧基}-3-吡啶基)氨基]-2-氧代乙基}氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯(中间体25,56mg)溶于3mL无水二氯甲烷。0°C下向该溶液中滴加30当量的TFA(0.324mL)。随后将反应物在0°C搅拌3小时。蒸发反应混合物。获得的粗制品通过SCX在5g柱上纯化。首先使用3CV的甲醇，随后残余物被吸附在柱上，用5CV甲醇洗涤，用2CV氨的甲醇溶液解吸附(1N)。蒸发挥发物获得标题化合物(38mg)。
1HNMR(400MHz,甲醇-d4):δppm  8.40(1H,d),8.10(1H,dd),7.33(1H,t),7.10(1H,d),6.98(1H,t),6.85-6.92(2H,m),3.52-3.69(1H,m),2.78-3.02(1H,m),1.39(3H,d),1.27(6H,d);UPLC:0.59min,300[M+1]+
中间体27
3-[(1-甲基乙基)氧基]苯酚
Figure BDA00001749351300551
在30分钟内向1,3-苯二醇(8g,72.7mmol)和2-碘丙烷(12g,70.6mmol)的乙醇溶液(100mL回流预热的)中加入KOH(83%,5.3g,77.6mmol)的水溶液(20mL)。混合物回流3小时，倒入NaOH(1N,100mL)。所得混合物用乙酸乙酯萃取(3次50mL)，水层用10%HCl酸化，调节pH=5，用乙酸乙酯萃取(3次50mL)。合并的萃取物用盐水洗涤(50mL)，干燥并真空浓缩。残余物通过硅胶柱色谱纯化(PE:EtOAc=5:1)获得无色油状的标题化合物(2.1g)。
MS 1(ESI):151[M-H]-
中间体28
2-({3-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}氧基)-5-硝基吡啶
Figure BDA00001749351300552
向3-[(1-甲基乙基)氧基]苯酚(中间体27,456mg)的DMSO溶液(8mL)中加入t-BuOK(336mg,3mmol,Acros)。将反应混合物在20°C搅拌30分钟。加入2-氯-5-硝基吡啶(474mg,3mmol,Aldrich)，将所得混合物在120°C搅拌2小时。将反应混合物冷却至室温，倒入冰水(50mL)，用二氯甲烷萃取(3次50mL)。合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。残余物通过硅胶柱色谱纯化(PE:EtOAc=50:1)获得淡黄色固体状的标题化合物(670mg)。
MS 1(ESI):275[M+H]+
中间体29
6-({3-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}氧基)-3-吡啶胺
Figure BDA00001749351300561
向2-({3-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}氧基)-5-硝基吡啶(中间体28,670mg,2.45mmol)的甲醇溶液(50mL)中加入Pd/C(10%,100mg,0.1湿重当量)，烧瓶用H2充填。所得混合物在室温下，在H2气氛中搅拌过夜并过滤。真空浓缩滤液获得棕色固体状的标题化合物(560mg)。
MS 1(ESI):245[M+H]+
中间体30
N-{[(1,1-二甲基乙基)氧基]羰基}-D-丙氨酸
Figure BDA00001749351300562
向D-丙氨酸(4.45g,50mmol)的THF(100mL)和水(50mL)溶液中加入NaHCO3(4.2g,50mmol)的水溶液(30mL)。搅拌15分钟后，加入Boc-酸酐(16.35g,75mmol)的THF溶液(20mL)，将混合物在室温下搅拌4小时。蒸发溶剂，使用2N HCl调节pH=3-4。混合物用乙酸乙酯萃取(3次200mL)，合并的乙酸乙酯层用盐水洗涤(50mL)，干燥并浓缩。残余物用乙酸乙酯/己烷重结晶获得白色固体状的标题化合物(5g)。
1HNMR(DMSO-d6):δppm 12.38(1H,s),7.11-7.09(1H,d),3.94-3.88(1H,m),1.38(9H,s),1.22-1.21(3H,d)。
中间体31
((1R)-1-甲基-2-{[6-({3-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}氧基)-3-吡啶基]氨 基}-2-氧代乙基)氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯
Figure BDA00001749351300563
将6-({3-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}氧基)-3-吡啶胺(中间体29,244mg,1mmol),N-{[(1,1-二甲基乙基)氧基]羰基}-D-丙氨酸(中间体30,284mg),HBTU(567mg,1.5mmol)和DIPEA(194mg,1.5mmol,Acros)在DMF(8mL)中的溶液在微波(Biotage instrument)下在110°C加热3小时。蒸发溶剂获得棕色油状的标题化合物，其直接用于下一步骤(400mg,96%产率)。
MS_2(ESI):416[M+H]+
中间体32
N 1 -[6-({3-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}氧基)-3-吡啶基]-D-丙氨酰胺
Figure BDA00001749351300571
在0°C下，在15分钟内向((1R)-1-甲基-2-{[6-({3-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}氧基)-3-吡啶基]氨基}-2-氧代乙基)氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯(中间体31,400mg,0.96mmol)的二氯甲烷溶液(14mL)中分批加入TFA(6mL)。将所得混合物在室温下搅拌2小时。蒸发溶剂获得灰色油状的标题化合物(260mg,85%)。
MS 1(ESI):316[M+H]+
中间体33
2-[(2,5-二甲基苯基)氧基]-5-硝基吡啶
Figure BDA00001749351300572
在微波管中，将2-氯-5-硝基吡啶(80mg,0.505mmol)溶于2mL无水二甲基甲酰胺。加入2,5-二甲基苯酚(80mg,0.505mmol,1当量)和碳酸钾(418mg,3.03mmol,6当量)。将反应混合物在微波辐射下在110°C加热1小时(Biotage Initiator)。过滤反应混合物。过滤的固体用二氯甲烷洗涤(5mL)。蒸发挥发物。将残余物溶于二氯甲烷(10mL)，加入盐水(10mL)。有机层用二氯甲烷萃取2次(2x15mL)，乙酸乙酯萃取2次(2x15mL)。有机相用硫酸钠干燥。除去溶剂获得标题化合物(112mg)
1HNMR(400MHz,甲醇-d4):δppm 8.97(1H,d),8.58(1H,dd),7.20-6.90(4H,m),2.32(3H,s),2.07(3H,s);UPLC:0.87mins,245[M+H]+。
中间体34
6-[(2,5-二甲基苯基)氧基]-3-吡啶胺
Figure BDA00001749351300581
将2-[(2,5-二甲基苯基)氧基]-5-硝基吡啶(中间体33,140mg,0.450mmol)溶于乙醇(3mL)。加入一水合肼(83μL,0.884mmol)和钯炭(47mg,0.044mmol)。在氩气下加热回流反应混合物。加热过夜后，冷却反应物。过滤反应混合物。真空蒸发有机相。残余物通过SCX纯化(用MeOH洗涤，2N的氨的甲醇溶液解吸附)。蒸发获得标题化合物(85mg)。
UPLC:0.68min,215[M+H]+。
中间体35
[(1R)-2-({6-[(2,5-二甲基苯基)氧基]-3-吡啶基}氨基)-1-甲基-2-氧代乙基] 氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯
Figure BDA00001749351300582
标题化合物以类似于制备中间体25的方法制备，用6-[(2,5-二甲基苯基)氧基]-3-吡啶胺(中间体34)代替6-{[3-(1-甲基乙基)苯基]氧基}-3-吡啶胺，硅胶色谱使用下列条件：Companion instrument,12g柱，梯度cHex/EtOAc从100/0到70/30。这提供了淡棕色油状的标题化合物(63mg)。
1HNMR(400MHz,甲醇-d4):δppm 8.31(1H,d),8.05(1H,dd),7.18(1H,d),6.98(1H,d),6.76-6.87(2H,m),4.02-4.34(1H,m),2.35(3H,s),2.12(3H,s)1.47(9H,s)1.41(3H,d);UPLC:0.84min,386[M+1]+
中间体36
N 1 -{6-[(2,5-二甲基苯基)氧基]-3-吡啶基}-D-丙氨酰胺
Figure BDA00001749351300583
将[(1R)-2-({6-[(2,5-二甲基苯基)氧基]-3-吡啶基}氨基)-1-甲基-2-氧代乙基]氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯(中间体35,60mg)溶于4mL无水二氯甲烷。在0°C下向该溶液中滴加40当量的TFA(0.480mL)。在0°C下将反应物搅拌3小时。蒸发反应混合物，随后通过SCX在5g柱上纯化。首先使用3CV甲醇，随后残余物吸附到柱上，用5CV甲醇洗涤，用CV氨的甲醇溶液解吸附(1N)。蒸发挥发物，获得标题化合物(49mg)。
1HNMR(400MHz,甲醇-d4):δppm 8.34(1H,d),8.07(1H,dd),7.18(1H,d),6.99(1H,d),6.69-6.90(2H,m),3.60(1H,q),2.32(3H,s),2.12(3H,s),1.39(3H,d);UPLC:0.54min,286[M+1]+
中间体37
2-[(2,3-二甲基苯基)氧基]-5-硝基吡啶
Figure BDA00001749351300591
在20mL微波管中，将2-氯-5-硝基吡啶(500mg,3.15mmol)、2,3-二甲基苯酚(385mg,3.15mmol)和碳酸钾(1308mg,9.46mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)获得深棕色混悬液。密封反应管，在110°C下在BiotageInitiator中加热1h。冷却后反应物用25mL Et2O稀释。有机相用3x25mL水、10mL盐水洗涤，硫酸钠干燥，过滤并真空蒸发获得淡橙色油状的标题化合物。(640mg)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 9.07(1H,d),8.50(1H,dd),7.24-7.19(1H,m),7.18-7.14(1H,m),7.04(1H,d),6.95(1H,d),2.38(3H,s),2.09(3H,s);UPLC:0.81min,245[M+H]+。
中间体38
6-[(2,3-二甲基苯基)氧基]-3-吡啶胺
在50mL圆底烧瓶中，将2-[(2,3-二甲基苯基)氧基]-5-硝基吡啶(中间体37,640mg)溶解于乙醇(10mL)，获得淡黄色溶液。加入一水合肼(0.463mL,4.72mmol)和钯炭(25.10mg,0.236mmol)。将反应混合物在90°C下搅拌。1小时后，反应完成。过滤反应混合物，真空蒸发有机相，获得淡黄色油状的标题化合物(573mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 7.72(1H,d),7.05-7.16(2H,m),7.01(1H,d),6.86(1H,d),6.71(1H,d),3.48(2H,br.s),2.34(3H,s),2.16(3H,s);UPLC:0.62min,215[M+H]+。
中间体39
[(1R)-2-({6-[(2,3-二甲基苯基)氧基]-3-吡啶基}氨基)-1-甲基-2-氧代乙基] 氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯
向N-{[(1,1-二甲基乙基)氧基]羰基}-D-丙氨酸(26.5mg,0.140mmol)的无水N,N-二甲基甲酰胺(4mL)溶液中加入DIPEA(31μl,0.175mmol,1.5当量)，随后加入HATU(53.2mg,0.140mmol,1.2当量)，将反应混合物在氩气下，在室温下搅拌15分钟。随后加入6-[(2,3-二甲基苯基)氧基]-3-吡啶胺(中间体38,25mg)，将反应混合物在氩气下在60°C搅拌。反应混合物加热过夜。随后蒸发。获得的残余物直接在硅胶色谱上纯化(Companioninstrument,2x4g柱)梯度为环己烷/乙酸乙酯在15分钟内从100/0到70/30，70/30保留20分钟，获得标题化合物(31mg)。
1HNMR(400MHz,甲醇-d4):δppm 8.29(1H,d),8.02(1H,dd),7.20-6.99(3H,m),6.81(2H,dd),4.21(1H,m),2.32(3H,s),2.08(3H,s),1.45(9H,s),1.40(3H,d);UPLC:0.80min,386[M+1]+
中间体40
N 1 -{6-[(2,3-二甲基苯基)氧基]-3-吡啶基}-D-丙氨酰胺
将[(1R)-2-({6-[(2,3-二甲基苯基)氧基]-3-吡啶基}氨基)-1-甲基-2-氧代乙基]氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯(中间体39,29mg)溶于3mL无水二氯甲烷。在0°C下在氩气中向该溶液滴加30当量的TFA(168μl,2.179mmol)。反应物在0°C搅拌1小时，在室温下搅拌2小时。蒸发反应混合物。获得的残余物通过SCX纯化(首先使用3CV甲醇，随后残余物吸附到柱上，用5CV甲醇洗涤，用2CV氨的甲醇溶液解吸附(1N))。蒸发挥发物，获得标题化合物(21mg)。
UPLC:0.52min,286[M+1]+
中间体41
2-[(2,6-二甲基苯基)氧基]-5-硝基吡啶
Figure BDA00001749351300611
在20mL微波管中，将2-氯-5-硝基吡啶(500mg,3.15mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)获得淡黄色溶液。加入2,6-二甲基苯酚(385mg,3.15mmol)和碳酸钾(1308mg,9.46mmol)，密封反应管，在110°C下在微波辐射下(Biotage instrument)加热1h。反应混合物用10mL水猝灭，用10mLEt2O稀释。使用分液漏斗分离相。有机相用3x10mL水、10mL盐水洗涤，硫酸钠干燥，过滤并真空蒸发获得淡橙色油状的标题化合物(555.9mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 9.04(1H,d),8.50(1H,dd),7.16(3H,s),7.03(1H,d),2.12(6H,s);UPLC_B:0.95mins,245[M+H]+。
中间体42
6-[(2,6-二甲基苯基)氧基]-3-吡啶胺
在50mL圆底烧瓶中，将2-[(2,6-二甲基苯基)氧基]-5-硝基吡啶(中间体41，555.9mg)溶解于乙醇(10mL)，获得淡橙色溶液。加入一水合肼(0.416mL,4.32mmol)和钯炭(230mg,0.216mmol)。将反应混合物在90°C下搅拌。3小时后，反应完成。过滤反应混合物，真空蒸发有机相，获得929.9mg深橙色的固体，加载到10gSCX柱上，其随后用200mL乙醇冲洗，接着用50mL 2M的氨的MeOH溶液洗脱。真空蒸发氨洗脱液获得深橙色固体状的标题化合物(447.6mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):d ppm 7.64(1H,d),7.02-7.12(4H,m),6.62(1H,d),3.50(2H,br.s),2.14(6H,s);UPLC_B:0.74mins,215[M+H]+。
中间体43
[(1R)-2-({6-[(2,6-二甲基苯基)氧基]-3-吡啶基}氨基)-1-甲基-2-氧代乙基] 氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯
Figure BDA00001749351300621
在8mL试管中将N-{[(1,1-二甲基乙基)氧基]羰基}-D-丙氨酸(190mg,1.003mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(4mL)获得无色溶液。加入N-乙基-N-(1-甲基乙基)-2-丙胺(0.219mL,1.253mmol)和N-[(二甲基氨基)(3H-[1,2,3]三唑[4,5-b]吡啶-3-基氧基)亚甲基]-N-甲基甲铵六氟磷酸盐(381mg,1.003mmol)。反应混合物立即变成黄色，在室温下搅拌15分钟。加入6-[(2,6-二甲基苯基)氧基]-3-吡啶胺(中间体42,223.8mg)，将反应混合物温热至60°C。4小时后使用Genevac真空蒸发溶剂，获得深棕色油状物，该残余物通过硅胶色谱纯化(Biotage instrument,25g SNAP硅胶柱)，用环己烷/EtOAc洗脱，从3:1环己烷/EtOAc到1:1环己烷/EtOAc，10CV；随后1:1环己烷/EtOAc，5CV。收集的组分为淡橙色油状的标题化合物(282mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)d ppm 10.03(1H,br.s),8.22(1H,d),8.07(1H,dd),7.02-7.19(4H,m),6.97(1H,dd),4.03-4.18(1H,m),2.04(6H,s),1.40(9H,s),1.27(3H,d);UPLC_B:0.89min,386[M+H]+。
中间体44
N 1 -{6-[(2,6-二甲基苯基)氧基]-3-吡啶基}-D-丙氨酰胺
Figure BDA00001749351300631
在50mL圆底烧瓶中，将[(1R)-2-({6-[(2,6-二甲基苯基)氧基]-3-吡啶基}氨基)-1-甲基-2-氧代乙基]氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯(中间体43,282mg)溶解于二氯甲烷(2mL)，获得黄色溶液。加入三氟乙酸(2mL,26.0mmol)。将反应混合物在室温下搅拌。20分钟后，真空蒸发溶剂，获得黄色油状物，加载到5gSCX柱上，其随后用25mL MeOH冲洗，接着用25mL 2M的氨的MeOH溶液洗脱。真空蒸发氨洗脱液获得固化的黄色油状的标题化合物(173.8mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)d ppm 9.51(1H,br.s),8.23-8.12(2H,m),7.17-7.01(3H,m),6.85-6.75(1H,m),3.64(1H,q),2.13(6H,s),1.83(2H,br.s),1.44(3H,d);UPLC_B:0.70mins,286[M+H]+。
中间体45
2-[(2-乙基苯基)氧基]-5-硝基吡啶
Figure BDA00001749351300632
在20mL微波管中，将2-氯-5-硝基吡啶(500mg,3.15mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)获得淡棕色溶液。加入2-乙基苯酚(0.378mL,3.15mmol)和K2CO3(1308mg,9.46mmol)，密封反应管，在110°C下在BiotageInitiator中加热1h。冷却后反应完全。反应混合物用10mL水猝灭，用10mL Et2O稀释。使用分液漏斗分离相。有机相用3x10mL水、10mL盐水洗涤，硫酸钠干燥，过滤并真空蒸发获得淡橙色油状的标题化合物(623mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 9.06(1H,d),8.49(1H,dd),7.40-7.34(1H,m),7.33-7.28(2H,m),7.10-7.05(1H,m),7.04(1H,d),2.55(2H,q),1.18(3H,t);UPLC_B:0.95min,245[M+H]+。
中间体46
6-[(2-乙基苯基)氧基]-3-吡啶胺
Figure BDA00001749351300641
在50mL圆底烧瓶中，将2-[(2-乙基苯基)氧基]-5-硝基吡啶(中间体45,623mg)溶解于乙醇(10mL)，获得淡橙色溶液。加入一水合肼(0.442mL,4.59mmol)和钯炭(244mg,0.230mmol)。将反应混合物在90°C下搅拌。3小时后，反应完成。过滤反应混合物，真空蒸发有机相，获得1.1408g深橙色的固体，加载到10g SCX柱上，其随后用200mL乙醇冲洗，接着用50mL 2M的氨的MeOH溶液洗脱。真空蒸发氨洗脱液获得深橙色固体状的标题化合物(456.1mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.71(d,1H),7.26-7.31(m,1H),7.16-7.22(m,1H),7.10-7.15(m,1H),7.07(dd,1H),6.96(dd,1H),6.70(d,1H),3.52(br.s.,2H),2.64(q,2H),1.20(t,3H);UPLC_B:0.75mins,215[M+H]+。
中间体47
[(1R)-2-({6-[(2-乙基苯基)氧基]-3-吡啶基}氨基)-1-甲基-2-氧代乙基]氨 基甲酸1,1-二甲基乙基酯
Figure BDA00001749351300642
在8mL试管中将N-{[(1,1-二甲基乙基)氧基]羰基}-D-丙氨酸(193mg,1.022mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(4mL)获得无色溶液。加入N-乙基-N-(1-甲基乙基)-2-丙胺(0.223mL,1.277mmol)和N-[(1H-1,2,3-苯并三唑-1-基氧基)(二甲基氨基)亚甲基]-N-甲基甲铵四氟硼酸盐(328mg,1.022mmol)。在室温下搅拌反应混合物15分钟。加入6-[(2-乙基苯基)氧基]-3-吡啶胺(中间体46,228mg)，将反应混合物温热至60°C32小时。使用Genevac真空蒸发溶剂，获得深棕色油状物，该残余物通过硅胶色谱纯化(Biotage系统,25g SNAP柱)，用环己烷/EtOAc洗脱，从3:1环己烷/EtOAc到1:1环己烷/EtOAc，10CV；随后1:1环己烷/EtOAc，5CV。收集的组分为标题化合物(251.1mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 8.70(1H,br.s),8.17(1H,d),8.05(1H,dd),7.31(1H,dd),7.14-7.27(2H,m),7.02(1H,dd),6.82(1H,d),5.11(1H,d),4.22-4.52(1H,m),2.60(2H,q),1.47(9H,s),1.44-1.46(3H,m),1.18(3H,t);UPLC_B:0.90min,386[M+H]+。
中间体48
N 1 -{6-[(2-乙基苯基)氧基]-3-吡啶基}-D-丙氨酰胺
Figure BDA00001749351300651
在50mL圆底烧瓶中，将[(1R)-2-({6-[(2-乙基苯基)氧基]-3-吡啶基}氨基)-1-甲基-2-氧代乙基]氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯(中间体47,251.1mg)溶解于二氯甲烷(2mL)，获得淡橙色溶液。加入三氟乙酸(2mL,26.0mmol)。将反应混合物在室温下搅拌。20分钟后，真空蒸发溶剂，获得黄色油状物，加载到5g SCX柱上，其随后用25mL MeOH冲洗，接着用25mL 2M的氨的MeOH溶液洗脱。真空蒸发氨洗脱液获得固化的黄色油状的标题化合物(170.0mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 9.58(1H,br.s),8.24(1H,d),8.20(1H,dd),7.30-7.35(1H,m),7.15-7.27(2H,m),7.03(1H,dd),6.85(1H,d),3.69(1H,q),2.61(2H,q),2.31(2H,br.s),1.46(3H,d),1.20(3H,t);UPLC_B:0.71mins,286[M+H]+。
中间体49
2-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-5-硝基吡啶
Figure BDA00001749351300652
向4-甲基-3-(甲氧基)苯酚(中间体18,400mg)的无水N,N-二甲基甲酰胺(15mL)溶液中加入碳酸钾(1200mg,8.69mmol)，随后加入2-氯-5-硝基吡啶(551mg,3.47mmol)，将反应混合物在115°C搅拌2小时。反应用水终止(10mL)，盐水稀释(20mL)并用乙酸乙酯萃取(3次30mL)。有机相用冰冷的盐水洗涤(2次30mL)，硫酸钠干燥，过滤并蒸发。残余物通过硅胶色谱纯化(Biotage系统,100g SNAP柱)使用环己烷/乙酸乙酯10/0-8/2梯度洗脱。蒸发获得淡黄色油状的标题化合物(570mg)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:2.16(3H,s),3.76(3H,s),6.68-6.73(1H,m),6.83-6.86(1H,m),7.24-7.18(2H,m),8.64-8.58(1H,m),9.08-9.02(1H,m);UPLC_B:0.93min,261[M+H]+。
中间体50
6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶胺
Figure BDA00001749351300661
向2-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-5-硝基吡啶(中间体49,568mg)的四氢呋喃(25mL)/水(12.50mL)溶液中加入铁(609mg,10.91mmol)，随后加入氯化铵(584mg,10.91mmol)，将反应混合物在室温下搅拌8小时。过滤催化剂，溶液用饱和的Na2CO3水溶液稀释(5mL)，并用乙酸乙酯萃取(2次40mL)。合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤并蒸发。残余物通过硅胶色谱纯化(Biotage系统，具有50g SNAP柱)，使用环己烷/乙酸乙酯8/2-1/1梯度洗脱。蒸发获得淡黄色油状的标题化合物(465mg)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.54(1H,d),7.06(2H,ddd),6.72(1H,d),6.59(1H,d),6.38(1H,dd),5.07(2H,s),3.73(3H,s),2.10(3H,s);UPLC_B:0.72min,231[M+H]+。
中间体51
{(1R)-1-甲基-2-[(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)氨基]-2- 氧代乙基}氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯
Figure BDA00001749351300662
向N-{[(1,1-二甲基乙基)氧基]羰基}-D-丙氨酸(181mg,0.955mmol)在无水N,N-二甲基甲酰胺(DMF)溶液中(3mL)加入DIPEA(0.303mL,1.737mmol)，随后加入TBTU(335mg,1.042mmol)，将反应混合物在室温下搅拌15分钟。随后加入6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶胺(中间体50,200mg)，将反应混合物在同一温度下搅拌1小时。反应用水终止(2mL)，盐水稀释(10mL)并用乙酸乙酯萃取(2次20mL)。有机层用硫酸钠干燥，过滤并蒸发，残余物用硅胶色谱纯化(Biotage系统,10g SNAP柱)使用梯度环己烷/乙酸乙酯(100/0-70/30)获得标题化合物(350mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)d ppm 10.09(1H,br.s),8.38-8.29(1H,m),8.09-8.03(1H,m),7.12(2H,d),6.97(1H,d),6.70(1H,d),6.57-6.51(1H,m),4.16-4.04(1H,m),3.74(3H,s),2.13(3H,s),1.39(9H,s),1.26(3H,d);UPLC_B:0.87min,402[M+H]+
中间体52
N 1 -(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)-D-丙氨酰胺
Figure BDA00001749351300671
向{(1R)-1-甲基-2-[(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)氨基]-2-氧代乙基}氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯(中间体51,350mg)的无水二氯甲烷溶液(7.5mL)中缓慢加入TFA(2.5mL,32.4mmol)，室温下搅拌反应混合物1.5小时。蒸发溶剂和过量的TFA，残余物通过SCX柱纯化(10g)，获得无色油状的标题化合物(258mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)d ppm 8.40(1H,d),8.11(1H,dd),7.13(1H,d),6.96(1H,d),6.70(1H,d),6.54(1H,dd),3.75(3H,s),3.44(1H,q),3.33(2H,br.s),2.13(3H,s),1.22(3H,d);UPLCB:0.70min,302[M+H]+
中间体53
2-{[2-甲基-5-(甲氧基)苯基]氧基}-5-硝基吡啶
Figure BDA00001749351300681
向2-甲基-5-(甲氧基)苯酚(中间体12,2g)和2-氯-5-硝基吡啶(2.1g,13.2mmol)的DMF(50mL)溶液中加入碳酸钾(2.76g,20mmol)，将反应混合物在100°C搅拌过夜。真空蒸发混合物，加入水(100mL)，用乙酸乙酯萃取(3次100mL)，合并的有机相用硫酸钠干燥，蒸发获得棕色油，其通过硅胶柱色谱纯化(流动相:EtOAc/PE=1/50-1/20)获得标题化合物(1.5g)。
MS_2(ESI):261[M+H]+
中间体54
6-{[2-甲基-5-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶胺
Figure BDA00001749351300682
向2-{[2-甲基-5-(甲氧基)苯基]氧基}-5-硝基吡啶(中间体53,1.5g)的乙醇溶液(100mL)中加入Pd/C(5%,200mg)，将混合物在室温下在H2气氛中搅拌过夜。用硅藻土过滤混合物，蒸发滤液获得黄色油，其通过硅胶柱色谱纯化(流动相:EtOAc/PE=1/5-1/2)。获得标题化合物(850mg)。
1HNMR(400MHz,CDCl3):δ7.70(1H,s),7.12(1H,d),7.05-7.08(1H,d),6.69(1H,d),6.63-6.66(1H,d),6.54(1H,s),3.74(3H,s),3.45(2H,s),2.12(3H,s);MS_2(ESI):231[M+H]+
中间体55
{(1R)-1-甲基-2-[(6-{[2-甲基-5-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)氨基]-2- 氧代乙基}氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯
Figure BDA00001749351300683
标题化合物以类似于中间体15的制备方法制备，用6-{[2-甲基-5-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶胺(中间体54,90mg)代替4-{[2-甲基-5-(甲氧基)苯基]氧基}苯胺获得标题化合物(152mg)。
1H NMR(400MHz,甲醇-d4):δppm 8.32(1H,d),8.05(1H,d),7.18(1H,d),6.86(1H,d),6.76(1H,d),6.61(1H,d),4.25(1H,m),3.13(3H,s),2.08(3H,s),1.46(9H,s),1.41(3H,d);UPLC_B:0.85min,402[M+H]+
中间体56
N 1 -(6-{[2-甲基-5-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)-D-丙氨酰胺
Figure BDA00001749351300691
标题化合物以类似于中间体16的制备方法制备，用{(1R)-1-甲基-2-[(6-{[2-甲基-5-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)氨基]-2-氧代乙基}氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯(中间体55,150mg)代替{(1R)-1-甲基-2-[(4-{[2-甲基-5-(甲氧基)苯基]氧基}苯基)氨基]-2-氧代乙基}氨基甲酸酯获得标题化合物(120mg)。
1H NMR(400MHz,甲醇-d4):δppm 8.32(1H,d),8.05(1H,dd),7.17(1H,d),6.83(1H,d),6.73(1H,d),6.58(1H,d),3.74(3H,s),3.63-3.50(1H,m),2.06(3H,s),1.36(3H,d);UPLC_B:0.66min,302[M+H]+
中间体57
2-甲基-1-(甲氧基)-3-硝基苯
Figure BDA00001749351300692
0°C下向2-甲基-3-硝基苯酚(15.3g,100mmol)的DMF(150mL)溶液中加入氢化钠(60%矿物油溶液,2.6g,110mmol)，将混合物在室温下搅拌30分钟。加入甲基碘(28.4g,200mmol)，将混合物加热至80°C、5小时。加入水(100mL)，混合物用乙酸乙酯萃取(3次100mL)。合并的乙酸乙酯相用硫酸钠干燥，真空浓缩获得残余物，其通过硅胶柱色谱纯化(PE:EtOAc=5:1)。蒸发获得黄色固体状的标题化合物(14.4g)。
中间体58
2-甲基-3-(甲氧基)苯胺
Figure BDA00001749351300701
向2-甲基-1-(甲氧基)-3-硝基苯(中间体57,1.67g)的甲醇(50mL)溶液中加入Pd/C(10%,50mg)，将反应混合物在H2气氛中搅拌1小时。硅藻土过滤混合物。蒸发获得固体状的标题化合物(1.31g)。
中间体59
2-甲基-3-(甲氧基)苯酚
0°C下向2-甲基-3-(甲氧基)苯胺(中间体58,1.31g)的H2SO4(6M,100mL)溶液中分批加入NaNO2(794mg,11mmol)。将混合物在40°C搅拌2小时，加入水(100mL)，用乙酸乙酯萃取(3次100mL)。干燥合并的乙酸乙酯层并蒸发。残余物通过硅胶柱色谱纯化(PE:EtOAc=5:1)获得固体标题化合物(569mg)。
中间体60
2-{[2-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-5-硝基吡啶
Figure BDA00001749351300703
0°C下向2-甲基-3-(甲氧基)苯酚(中间体59,1.3g)的DMF(50mL)溶液中加入氢化钠(60%矿物油溶液,480mg,0.012mol)，将混合物搅拌30分钟。加入2-氯-5-硝基吡啶(1.9g,0.012mol,Aldrich)，将混合物加热至60°C3小时。倒入水中(100mL)，用乙酸乙酯萃取(4次100mL)。合并的乙酸乙酯相用硫酸钠干燥，真空浓缩获得残余物，通过硅胶柱色谱纯化(PE:EtOAc=10:1)获得液体状的标题化合物(2.3g)。
MS_2(ESI):261[M+H]+。
中间体61
6-{[2-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶胺盐酸盐
向2-{[2-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-5-硝基吡啶(中间体60,2.3g)的甲醇(30mL)溶液中加入Pd/C(10%,0.3g)，室温下向混合物中通入H22小时。硅藻土过滤反应混合物。滤液通入HCl气体。所得混合物浓缩获得白色固体状的标题化合物(2g)。
1HNMR(DMSO-d6):δppm 10.0-8.5(3H,m),8.03-8.02(1H,s),7.73-7.71(1H,d),7.22-7.18(1H,t),7.05-7.02(1H,d),6.87-6.85(1H,d),6.65-6.63(1H,d),3.82(3H,s),1.90(3H,s);MS_2(ESI):231[M-(HCl)+H]+.
中间体62
{(1R)-1-甲基-2-[(6-{[2-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)氨基]-2- 氧代乙基}氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯
Figure BDA00001749351300712
标题化合物(307mg)以类似于中间体25的制备方法制备，用6-{[2-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶胺(中间体61,201mg)代替6-{[3-(1-甲基乙基)苯基]氧基}-3-吡啶胺。
1H NMR(400MHz,甲醇-d4):δppm 8.75(1H,d),8.44(1H,dd),7.93-8.11(1H,m),7.53(1H,dd),7.19(1H,t),6.83(2H,t),6.62(1H,d),4.09-4.33(1H,m),3.87(3H,s),2.02(3H,s),1.44-1.51(9H,m),1.42(3H,d);UPLC_B:0.86min,402[M+H]+
中间体63
N 1 -(6-{[2-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)-D-丙氨酰胺
Figure BDA00001749351300721
标题化合物(268mg)以类似于中间体26的制备方法制备，用{(1R)-1-甲基-2-[(6-{[2-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)氨基]-2-氧代乙基}氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯(中间体62,304mg)代替{(1R)-1-甲基-2-[(6-{[3-(1-甲基乙基)苯基]氧基}-3-吡啶基)氨基]-2-氧代乙基}氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯。反应物在0°C下搅拌1小时并在室温下搅拌2小时，而不是在0°C搅拌3小时。
1H NMR(400MHz,甲醇-d4):δppm 8.33(1H,d),8.03(1H,dd),7.18(1H,t),6.81(2H,t),6.60(1H,d),3.85(3H,s),3.66(1H,q),2.00(3H,s),1.40(3H,d);UPLC_B:0.67min,302[M+H]+
中间体64
((1R)-1-{[(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)氨基]羰基}丙基) 氨基甲酸1，1-二甲基乙基酯
Figure BDA00001749351300722
向(2R)-2-({[(1,1-二甲基乙基)氧基]羰基}氨基)丁酸(106mg,0.521mmol)在无水N,N-二甲基甲酰胺(DMF)溶液中(2mL)加入DIPEA(0.152mL,0.869mmol)，随后加入TBTU(181mg,0.565mmol)，将反应混合物在室温下搅拌15分钟。随后加入6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶胺(中间体50,100mg)，将反应混合物在同一温度下搅拌过夜。反应用水终止(1mL)，盐水稀释(1mL)并用乙酸乙酯萃取(3次5mL)。有机层用硫酸钠干燥，过滤并蒸发，残余物用硅胶色谱纯化(Biotage系统,10g SNAP柱)使用梯度环己烷/乙酸乙酯(100/0-70/30)洗脱，获得白色固体的标题化合物(180mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:10.13(1H,br.s),8.31-8.37(1H,m),8.02-8.10(1H,m),7.09-7.16(1H,m),7.01-7.08(1H,m),6.96(1H,d),6.70(1H,d),6.51-6.58(1H,m),3.91-4.03(1H,m),3.75(3H,s),2.13(3H,s),1.50-1.76(2H,m),1.39(9H,s),0.90(3H,t);UPLC_B:0.91min,416[M+H]+。
中间体65
(2R)-2-氨基-N-(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)丁酰胺
Figure BDA00001749351300731
向((1R)-1-{[(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)氨基]羰基}丙基)氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯(中间体64,175mg)的无水二氯甲烷溶液(6mL)中缓慢加入TFA(2mL,26.0mmol)，室温下搅拌反应混合物1小时。蒸发溶剂和过量的TFA，残余物通过SCX柱纯化(5g)，获得无色固体状的标题化合物(122mg)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:8.36-8.42(1H,m),8.11(1H,dd),7.12(1H,d),6.95(1H,d),6.67-6.73(1H,m),6.54(1H,dd),3.75(3H,s),3.24(1H,m),2.13(3H,s),1.59-1.73(1H,m),1.42-1.56(1H,m),0.90(3H,t);UPLC_B:0.74min,316[M+H]+。
中间体65b(中间体65的2HCl盐)
(2R)-2-氨基-N-(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)丁酰 胺·2HCl
将6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶胺(中间体50,500g),(2R)-2-({[(1,1-二甲基乙基)氧基]羰基}氨基)丁酸(530g)和Et3N(905mL)在乙酸乙酯(2L)中混合，在0°C搅拌直到完全溶解。在30分钟内滴加
Figure BDA00001749351300733
(2.15L)，维持温度在~0°C。加入乙酸乙酯(500mL)清洗管线。后处理：加入10%w/w碳酸钠水溶液(2.5L)，将混合物搅拌20分钟。随后加入水(1.5L)和乙酸乙酯(1L)，分离两相。有机层用10%w/w碳酸钠水溶液(2.5L)洗涤，相分离前搅拌混合物10分钟，随后用28%苹果酸水溶液(2.5L)，最后用20%NaCl水溶液(2.5L)洗涤。浓缩有机溶液至最小体积(<2L)，加入乙腈(5L)，浓缩溶液至最小体积(<2L)，加入乙腈至12.5L(其为中间体64的乙腈溶液)。20°C下向该溶液中加入5-6N HCl的异丙醇溶液(2.5L)，所得反应混合物在45°C搅拌1.5小时。获得的混悬液冷却至20°C，搅拌1小时，随后过滤。收集的固体用5/1乙腈/异丙醇洗涤(3x1.5L)，随后40°C真空干燥至恒重，获得标题化合物(817g)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 11.13(1H,s),8.30-8.50(m,4H),8.07(1H,dd),7.10(1H,d),6.98(1H,d),6.69(1H,d),6.53(1H,dd),3.99(1H,m),3.72(3H,s),2.10(3H,s),1.80-1.95(2H m),0.92(3H,t)。
使用常规离子交换色谱方法确定氯化物的量。方法条件:仪器DionexICS2000,柱型Dionex AS18 2mm×250mm;流动相KOH 41mM;流速0.47mL/min;Conductimetric Detection。结果:氯化物17.5%w/w。从该结果可确认所得中间体65b是二盐酸盐。
中间体66
((1S)-1-{[(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)氨基]羰基}丙基) 氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯
Figure BDA00001749351300741
向(2S)-2-({[(1,1-二甲基乙基)氧基]羰基}氨基)丁酸(66.2mg,0.326mmol)在无水N,N-二甲基甲酰胺(DMF)溶液中(1mL)加入DIPEA(0.095mL,0.543mmol)，随后加入TBTU(112mg,0.347mmol)，将反应混合物在室温下搅拌15分钟。随后加入6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶胺(中间体50,50mg)，将反应混合物在同一温度下搅拌过夜。混合物用乙酸乙酯稀释(10mL)并用盐水洗涤(3次8mL)。分离有机层，用硫酸钠干燥，过滤并蒸发，残余物用快速硅胶色谱纯化(10g SNAP柱)，使用梯度环己烷/乙酸乙酯(100/0-60/40)洗脱。获得白色固体的标题化合物(73mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO):δppm 10.13(1H,s),8.33(1H,d),8.06(1H,dd),7.11(1H,d),7.05(1H,d),6.95(1H,d),6.69(1H,d),6.53(1H,dd),4.00-3.91(1H,m),3.73(3H,s),2.13(3H,s),1.74-1.51(2H,m),1.38(9H,s),0.89(3H,t);UPLC_B:0.92min,414[M-H]-
中间体67
(2S)-2-氨基-N-(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)丁酰胺
Figure BDA00001749351300751
将((1S)-1-{[(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)氨基]羰基}丙基)氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯(中间体66,70mg)的二氯甲烷(2.5mL)溶液冷却至0°C。滴加TFA(0.779mL,10.11mmol)。将反应混合物在0°C搅拌1.5小时，随后蒸发。残余物用二氯甲烷(10mL)稀释，用饱和NaHCO3水溶液中和(15mL)。分离有机层，用硫酸钠干燥，过滤并蒸发，获得淡黄色油状的标题化合物(53.1mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO):δppm 8.39(1H,d),8.11(1H,dd),7.12(1H,d),6.95(1H,d),6.70(1H,d),6.54(1H,dd),3.74(3H,s),3.52–3.21(1H,m),2.12(3H,s),1.71–1.44(2H,m),0.89(3H,t)。UPLC_B:0.75min,314[M-H]-
中间体68
(2R)-2-({[(1,1-二甲基乙基)氧基]羰基}氨基)丁酸
Figure BDA00001749351300752
0°C下向(2R)-2-氨基丁酸5(1.95g,18.91mmol)在19mL 1M氢氧化钠水溶液和13mL甲醇中加入Boc-酸酐(4.95g,22.69mmol)。将反应混合物温热至室温搅拌12小时。大多数甲醇蒸发后，将溶液用1M的HCl酸化至pH2，用乙酸乙酯萃取(3次60mL)。合并有机萃取物，用盐水洗涤(2次12mL)。蒸发溶剂获得标题化合物(3.48g)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 12.35(1H,s),7.02(1H,d),3.71-4.07(1H,m),1.47-1.79(2H,m),1.38(9H,s),0.88(3H,t);UPLC:0.60min,204[M+H]]+.
中间体69
{(1R)-1-甲基-2-[(6-{[3-(1-甲基乙基)苯基]氧基}-3-吡啶基)氨基]-2-氧代 乙基}氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯
向(2R)-2-({[(1,1-二甲基乙基)氧基]羰基}氨基)丁酸(中间体68,875mg)在无水N,N-二甲基甲酰胺(50mL)的溶液中加入DIPEA(0.935mL,5.36mmol,1.5当量)，随后加入HATU(1.629g,4.28mmol,1.2当量)，在氩气中将反应混合物在室温下搅拌15分钟。随后加入(4-{[3-(甲氧基)苯基]氧基}苯基)胺4-{[3-(甲氧基)苯基]氧基}苯胺(中间体24,815mg)，在氩气中将反应混合物在63°C搅拌。反应物持续加热17小时。蒸发后，获得的残余物通过硅胶柱色谱纯化(Companion系统,120g柱)，用梯度环己烷/乙酸乙酯100/0-70/30洗脱，获得黄色粉末状的标题化合物(1.282g)。
1H NMR(400MHz,甲醇-d4):δppm 8.37(1H,d),8.10(1H,dd),7.34(1H,t),7.13(1H,d),6.98(1H,t),6.92(2H,m),4.11(1H,t),2.94-2.89(1H,m),2.02-1.77(1H,m),1.75-1.72(1H,m),1.48(9H,s),1.27(6H,d),1.04(3H,t);UPLC:0.91min,414[M+1]+
中间体70
(2R)-2-氨基-N-(6-{[3-(1-甲基乙基)苯基]氧基}-3-吡啶基)丁酰胺
Figure BDA00001749351300762
将((1R)-1-{[(6-{[3-(1-甲基乙基)苯基]氧基}-3-吡啶基)氨基]羰基}丙基)氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯(中间体69,1.28g)溶于18mL无水二氯甲烷。0°C下在氩气中向该溶液中滴加30当量的TFA(7.15mL,93mmol)。随后将反应物在0°C搅拌3小时。蒸发反应混合物。获得的残余物通过SCX在50g柱上纯化。首先使用3CV的甲醇洗涤，随后化合物被吸附在柱上，用5CV甲醇洗涤，用2CV氨的甲醇溶液解吸附(1N)。蒸发挥发物获得标题化合物(932mg)。
1H NMR(400MHz,甲醇-d4):δppm 8.36(1H,d),8.08(1H,dd),7.30(1H,t),7.08(1H,d),6.98-6.78(3H,m),3.39(1H,t),2.94-2.84(1H,m),2.81(2H,s),1.87-1.74(1H,m),1.73-1.59(1H,m),1.25(6H,d),1.00(3H,t);UPLC:0.60min,314[M+1]+
中间体71
{1,1-二甲基-2-[(4-{[3-(甲氧基)苯基]氧基}苯基)氨基]-2-氧代乙基}氨基 甲酸1,1-二甲基乙基酯
向N-{[(1,1-二甲基乙基)氧基]羰基}-2-甲基丙氨酸(1.7g,8.36mmol)在无水N,N-二甲基甲酰胺(DMF)溶液中(35mL)加入DIPEA(2.434mL,13.94mmol)，随后加入TBTU(2.80g,8.71mmol)，将反应混合物在室温下搅拌15分钟。随后加入(4-{[3-(甲氧基)苯基]氧基}苯基)胺(1.5g,6.97mmol)，将反应混合物在同一温度下搅拌过夜。反应用盐水终止(100mL)，用乙酸乙酯萃取(2次150mL)。有机层用冰冷的盐水洗涤(3次100mL)，硫酸钠干燥，过滤并蒸发，残余物用硅胶色谱纯化(Biotage系统,100g SNAP柱)，使用梯度环己烷/乙酸乙酯(100/0-70/30)洗脱获得白色固体的标题化合物(1.90g)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)d ppm 9.47(1H,br.s),7.50-7.76(2H,m),7.24(1H,t),6.97(3H,d),6.67(1H,dd),6.44-6.55(2H,m),3.72(3H,s),1.25-1.47(15H,m);UPLC_B:0.91min,401[M+1]+.
中间体72
2-甲基-N 1 -(4-{[3-(甲氧基)苯基]氧基}苯基)丙氨酰胺
Figure BDA00001749351300781
0°C下向{1,1-二甲基-2-[(4-{[3-(甲氧基)苯基]氧基}苯基)氨基]-2-氧代乙基}氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯(中间体71,1.89g)的二氯甲烷(60mL)溶液中滴加TFA(20mL,260mmol)。将反应混合物在同一温度下搅拌2小时，蒸发溶剂和过量的TFA。残余物用SCX柱(50g)纯化获得淡棕色油状的标题化合物(1.34g)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 7.73-7.64(2H,m),7.25(1H,t),6.95-7.03(2H,m),6.64-6.70(1H,m),6.45-6.55(2H,m),3.72(3H,s),1.28(6H,s);UPLC_B:0.79min,301[M+1]+
中间体73
2,3-二甲基苯基4-硝基苯基醚
在微波管中，将1-氟-4-硝基苯(500mg,3.54mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)，获得淡黄色溶液。加入2,3-二甲基苯酚(433mg,3.54mmol)和碳酸钾(1469mg,10.63mmol)。密封反应管，在100°C加热1小时(Biotage Initiator)。冷却后反应物用25mL Et2O稀释。有机相用25mL水洗涤3次，10mL饱和盐水洗涤，硫酸钠干燥。过滤并真空蒸发获得黄色固体状的标题化合物(865.1mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 8.25-8.14(2H,m),7.17(1H,t),7.13-7.08(1H,m),6.96-6.83(3H,m),2.36(3H,s),2.10(3H,s);UPLC:0.90min,244[M+H]+。
中间体74
4-[(2,3-二甲基苯基)氧基]苯胺
Figure BDA00001749351300791
将2,3-二甲基苯基4-硝基苯基醚(中间体73,865mg)溶解于乙醇(10mL)，获得淡黄色溶液。加入50%一水合肼(0.698mL,7.1mmol)和Pd/C(37.8mg,0.36mmol)。将反应混合物在90°C下搅拌1小时。过滤反应混合物，真空蒸发有机相，获得淡黄色油状的标题化合物(796mg)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):δppm 7.07–6.96(1H,m),6.90(1H,d),6.83–6.73(2H,m),6.72–6.61(3H,m),2.33(3H,s),2.22(3H,s);UPLC:0.60min,214[M+H]+。
中间体75
[2-({4-[(2,3-二甲基苯基)氧基]苯基}氨基)-1,1-二甲基-2-氧代乙基]氨基 甲酸1,1-二甲基乙基酯
Figure BDA00001749351300792
将4-[(2,3-二甲基苯基)氧基]苯胺(中间体74,200mg)溶于5.0mLDMF，加入DIPEA(0.246mL,1.41mmol)和HATU(428mg,1.13mmol)，搅拌15分钟后，加入N-{[(1,1-二甲基乙基)氧基]羰基}-2-甲基丙氨酸(229mg,1.13mmol)，反应混合物在40°C搅拌过夜。除去挥发物后，粗产品用硅胶柱色谱纯化(Companion instrument,40g硅胶柱)，用梯度cHex/EtOAc 100/0-0/100洗脱获得标题化合物(109mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 7.51-7.41(2H,m),7.12-6.95(2H,m),6.93-6.84(2H,m),6.82-6.73(1H,m),2.35(3H,s),2.19(3H,s),1.60(3H,s),1.57(3H,s),1.49(9H,s);UPLC:0.83min,399[M+H]+。
中间体76
N 1 -{4-[(2,3-二甲基苯基)氧基]苯基}-2-甲基丙氨酰胺
Figure BDA00001749351300801
将[2-({4-[(2,3-二甲基苯基)氧基]苯基}氨基)-1,1-二甲基-2-氧代乙基]氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯(中间体75,109mg)溶于4.0mL二氯甲烷，随后加入TFA(1.0mL)。将反应混合物在室温下搅拌1小时。除去挥发物后，残余物加载到SCX柱上，用DCM/MeOH/NH3(2.0M MeOH溶液)洗脱。蒸发获得68mg标题化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 7.62(2H,d),7.17-6.96(2H,m),6.84(2H,d),6.78-6.68(1H,m),2.30(3H,s),2.11(3H,s),1.29(6H,s);UPLC:0.57min,299[M+H]+。
中间体77
[2-({6-[(2-乙基苯基)氧基]-3-吡啶基}氨基)-1,1-二甲基-2-氧代乙基]氨 基甲酸1,1-二甲基乙基酯
Figure BDA00001749351300802
在8mL试管中将N-{[(1,1-二甲基乙基)氧基]羰基}-2-甲基丙氨酸(208mg,1.022mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(4mL)获得无色溶液。加入N-乙基-N-(1-甲基乙基)-2-丙胺(0.223mL,1.277mmol)和N-[(1H-1,2,3-苯并三唑-1-基氧基)(二甲基氨基)亚甲基]-N-甲基甲铵四氟硼酸盐(328mg,1.022mmol)。反应混合物在室温下搅拌15分钟。加入6-[(2-乙基苯基)氧基]-3-吡啶胺(中间体46,228mg)，将反应混合物温热至60°C。24小时后加入另150mgN-[(1H-1,2,3-苯并三唑-1-基氧基)(二甲基氨基)亚甲基]-N-甲基甲铵四氟硼酸盐。再8小时后，使用Genevac真空蒸发溶剂，获得深棕色油状物，该残余物通过硅胶色谱纯化(Biotage系统,25g SNAP柱)，用环己烷/EtOAc洗脱，从3:1环己烷/EtOAc到1:1环己烷/EtOAc，10CV；随后1:1环己烷/EtOAc，5CV。收集的组分为淡橙色固体状的标题化合物(88.6mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 9.06(1H,br.s),8.17-8.10(2H,m),7.33(1H,dd),7.29-7.15(2H,m),7.04(1H,dd),6.91-6.82(1H,m),4.91(1H,br.s),2.62(2H,q),1.60(6H,s),1.47(9H,s),1.20(3H,t);UPLC_B:0.92min,400[M+H]+。
中间体78
N 1 -{6-[(2-乙基苯基)氧基]-3-吡啶基}-2-甲基丙氨酰胺
Figure BDA00001749351300811
在50mL圆底烧瓶中，将[2-({6-[(2-乙基苯基)氧基]-3-吡啶基}氨基)-1,1-二甲基-2-氧代乙基]氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯(中间体77,88.6mg)溶解于二氯甲烷(2mL)，获得黄色溶液。加入三氟乙酸(2mL,26.0mmol)。将反应混合物在室温下搅拌。20分钟后，真空蒸发溶剂，获得黄色油状物，加载到5g SCX柱上，其随后用25mL MeOH冲洗，接着用25mL 2M的氨的MeOH溶液洗脱。真空蒸发氨洗脱液获得固化的黄色油状的标题化合物(67.1mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 9.90(1H,br.s),8.18-8.27(2H,m),7.33(1H,dd),7.15-7.28(2H,m),7.03(1H,dd),6.80-6.90(1H,m),2.62(2H,q),1.84(2H,br.s),1.49(6H,s),1.20(3H,t);UPLC_B:0.78min,300[M+H]+。
中间体79
[2-({6-[(2,6-二甲基苯基)氧基]-3-吡啶基}氨基)-1,1-二甲基-2-氧代乙基] 氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯
Figure BDA00001749351300812
在8mL试管中将N-{[(1,1-二甲基乙基)氧基]羰基}-2-甲基丙氨酸(204mg,1.003mmol)和N-乙基-N-(1-甲基乙基)-2-丙胺(0.219mL,1.253mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(4mL)获得淡黄色溶液。加入N-[(二甲基氨基)(3H-[1,2,3]三唑[4,5-b]吡啶-3-基氧基)甲基亚甲基]-N-甲基甲铵六氟磷酸盐(381mg,1.003mmol)。反应混合物变成亮黄色，在室温下搅拌15分钟。加入6-[(2,6-二甲基苯基)氧基]-3-吡啶胺(中间体42,223.8mg)，将反应混合物温热至60°C。4小时后反应完成，使用Genevac真空蒸发溶剂，获得深棕色油状物，通过硅胶色谱纯化(Biotage系统,25g SNAP柱)，用环己烷/EtOAc洗脱，从3:1环己烷/EtOAc到1:1环己烷/EtOAc，10CV；随后1:1环己烷/EtOAc，5CV。收集的组分得到淡黄色固体状的标题化合物(202.1mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 9.55(1H,br.s),8.15-8.28(1H,m),7.99-8.11(1H,m),7.10-7.18(2H,m),7.04-7.10(1H,m),6.97-7.05(1H,m),6.94(1H,d),2.04(6H,s),1.38(15H,br.s);UPLC_B:0.91min,400[M+H]+。
中间体80
N 1 -{6-[(2,6-二甲基苯基)氧基]-3-吡啶基}-2-甲基丙氨酰胺
Figure BDA00001749351300821
在50mL圆底烧瓶中，将[2-({6-[(2,6-二甲基苯基)氧基]-3-吡啶基}氨基)-1,1-二甲基-2-氧代乙基]氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯(中间体79,202.1mg)溶解于二氯甲烷(2mL)，获得黄色溶液。加入三氟乙酸(2mL,26.0mmol)。将反应混合物在室温下搅拌20分钟后，真空蒸发溶剂，获得黄色油状物，加载到5g SCX柱上，其随后用25mL MeOH冲洗，接着用25mL2M的氨的MeOH溶液洗脱。真空蒸发氨洗脱液获得固化的黄色油状的标题化合物(144.4mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 9.87(1H,br.s),8.21(1H,dd),8.17(1H,d),7.03-7.16(3H,m),6.79(1H,d),2.14(6H,s),1.85(2H,br.s),1.47(6H,s)。UPLC_B:0.77min,300[M+H]+。
中间体81
N-{[(1,1-二甲基乙基)氧基]羰基}-D-缬氨酸
Figure BDA00001749351300831
向D-缬氨酸(1g,8.54mmol)的四氢呋喃溶液中加入NaOH(0.376g,9.39mmol)的水(10mL)溶液，随后加入Boc-酸酐(2.180mL,9.39mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。加入5%的HCl水溶液，pH调节至约5-6，混合物用乙酸乙酯萃取(50mL)。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并蒸发获得无色油状的标题化合物(1.85g)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:12.53(1H,br.s),6.91-6.80(1H,m),3.76(1H,dd),2.06-1.92(1H,m),1.38(9H,s),0.86(6H,t)。
中间体82
((1R)-2-甲基-1-{[(4-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}苯基)氨基]羰基}丙 基)氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯
向N-{[(1,1-二甲基乙基)氧基]羰基}-D-缬氨酸(中间体81,120mg)在无水N,N-二甲基甲酰胺(DMF)溶液(1mL)中加入DIPEA(0.152mL,0.872mmol)，随后加入TBTU(182mg,0.567mmol)，将反应混合物在室温下搅拌5分钟。随后加入4-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}苯胺(中间体50,100mg)，将反应混合物在同一温度下搅拌3小时。反应用盐水终止(2mL)并用乙酸乙酯萃取(3次3mL)。有机层用硫酸钠干燥，过滤并蒸发，残余物用硅胶色谱纯化(Biotage系统,10g SNAP柱)，使用梯度环己烷/乙酸乙酯(100/0-80/20)获得白色固体状的标题化合物(113mg)。
UPLC_B:1.04min,429[M+H]+。
中间体83
N 1 -(4-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}苯基)-D-缬氨酰胺
Figure BDA00001749351300841
向((1R)-2-甲基-1-{[(4-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}苯基)氨基]羰基}丙基)氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯(中间体82,110mg)的无水二氯甲烷(3mL)溶液中加入TFA(1mL,12.98mmol)，将反应混合物在室温下搅拌1小时。蒸发溶剂和过量的TFA，残余物通过SCX柱(5g)纯化获得淡黄色固体状的标题化合物(68mg)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:0.89(dd,6H),7.66-7.60(2H,m),7.12-7.06(1H,m),7.00-6.92(2H,m),6.67-6.61(1H,m),6.42-6.36(1H,m),3.74(3H,s),3.13-3.07(1H,m),2.11(3H,s),1.98-1.88(1H,m);UPLC_B:0.89min,329[M+H]+。
中间体84
2-{[3-(1-甲基乙基)苯基]氧基}-5-硝基嘧啶
Figure BDA00001749351300842
向3-(1-甲基乙基)苯酚(680mg,5mmol,Aldrich)的乙腈(50mL)溶液中加入2-氯-5-硝基嘧啶(800mg,5mmol)和三乙基胺(1.01g,10mmol)，将所得混合物加热回流并搅拌3小时。真空浓缩反应混合物，向残余物中加入水(80mL)。用乙酸乙酯萃取(3次50mL)，合并的有机层用硫酸钠干燥，蒸发获得棕色油，其通过硅胶色谱纯化(流动相:乙酸乙酯:石油醚=0~20%)获得标题化合物(900mg)。
MS_2(ESI):260[M+H]+
中间体85
2-{[3-(1-甲基乙基)苯基]氧基}-5-嘧啶胺
Figure BDA00001749351300843
向2-{[3-(1-甲基乙基)苯基]氧基}-5-硝基嘧啶(中间体84,520mg)在甲醇(50mL)中的溶液中加入Pd/C(10%重量,100mg)，将混合物在H2气氛中搅拌3小时。硅藻土层过滤所得混合物，真空浓缩滤液获得标题化合物(400mg)。
MS_2(ESI):230[M+H]+
中间体86
{(1R)-1-甲基-2-[(2-{[3-(1-甲基乙基)苯基]氧基}-5-嘧啶基)氨基]-2-氧代 乙基}氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯
Figure BDA00001749351300851
向2-{[3-(1-甲基乙基)苯基]氧基}-5-嘧啶胺(中间体85,229mg)的乙腈(20mL)溶液中加入N-{[(1,1-二甲基乙基)氧基]羰基}-D-丙氨酸(378mg,2mmol)、HBTU(474mg,1.25mmol)和DIPEA(387mg,3mmol)，将混合物加热回流并搅拌过夜。真空浓缩所得混合物，加入水(100mL)，用乙酸乙酯萃取(3次100mL)，合并的有机层用硫酸钠干燥，蒸发获得棕色油，其通过硅胶色谱纯化(流动相:乙酸乙酯:石油醚=1/5-1/2)获得标题化合物(300mg)。
中间体87
N 1 -(2-{[3-(1-甲基乙基)苯基]氧基}-5-嘧啶基)-D-丙氨酰胺
Figure BDA00001749351300852
向{(1R)-1-甲基-2-[(2-{[3-(1-甲基乙基)苯基]氧基}-5-嘧啶基)氨基]-2-氧代乙基}氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯(中间体86,300mg)的乙酸乙酯(50mL)溶液中通入HCl(气体)。将混合物在室温下搅拌1小时。真空浓缩所得混合物，用饱和的NaHCO3水溶液中和至pH=8，用二氯甲烷萃取(5次30mL)。合并的有机层用硫酸钠干燥，蒸发获得标题化合物(200mg)。
MS_2(ESI):301[M+H]+
中间体88
乙基2-甲基-5-硝基苯基醚
将2-甲基-5-硝基苯酚(450mg,2.94mmol)、乙基碘(356μl,4.41mmol)和碳酸钾(609mg,4.41mmol)的15mL丙酮溶液回流加热2天。过滤反应混合物，真空浓缩，残余物用乙酸乙酯和水分层。有机层用硫酸钠干燥，真空浓缩获得标题化合物(397mg)，其直接用于下一步骤。
1H NMR(400MHz,甲醇-d4):δppm 7.78(1H,dd),7.72(1H,d),7.40(1H,dd),4.22-4.17(2H,q),2.35(3H,s),1.53(3H,t);UPLC:0.82min,182[M+H]+。
中间体89
3-(乙氧基)-4-甲基苯胺
Figure BDA00001749351300862
将铁粉(609mg,10.90mmol)加入乙基2-甲基-5-硝基苯基醚(中间体88,395mg)的THF/水混合物(15mL/5mL)的溶液中，随后加入氯化铵(583mg,10.90mmol)。将反应混合物在氮气下搅拌过夜。将反应混合物倒入水中(20mL)，过滤铁。使用乙酸乙酯洗涤过滤的固体。滤液用乙酸乙酯萃取(3次)。合并乙酸乙酯层，用硫酸钠干燥，浓缩获得标题化合物(303mg)，其直接用于下一步骤。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 6.90(1H,d),6.35-6.02(2H,m),3.97(2H,q),2.11(3H,s),1.41(3H,t);UPLC:0.44min,152[M+H]+。
中间体90
3-(乙氧基)-4-甲基苯酚
Figure BDA00001749351300871
将3-(乙氧基)-4-甲基苯胺(中间体89,300mg)在水/98%浓硫酸(20mL/7mL)中的混悬液在氩气下冷却至0°C。缓慢加入亚硝酸钠(151mg,2.182mmol)的4mL水溶液。将反应混合物在0°C搅拌1小时30分钟。随后将反应混合物缓慢加入到在90°C预热的水/98%浓硫酸(18mL/5mL)中。将反应混合物在90°C搅拌1小时15分钟。冷却后，用乙醚萃取反应混合物(4次)。收集的有机相用硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩获得标题化合物(276mg)。
1H NMR(400MHz,甲醇-d4):δppm 6.87(1H,d),6.34(1H,d),6.25(1H,dd),3.97(2H,q),2.06(3H,s),1.40-1.37(3H,t);UPLC:0.66min,153[M+H]+。
中间体91
2-{[3-(乙氧基)-4-甲基苯基]氧基}-5-硝基嘧啶
Figure BDA00001749351300872
将2-氯-5-硝基吡啶(114mg,0.716mmol,1当量)溶于3mL二甲基甲酰胺，加入3-(乙氧基)-4-甲基苯酚(中间体90,109mg)和碳酸钾(198mg,1.432mmol)。将反应混合物在室温下搅拌3小时。过滤反应混合物，过滤的固体用二氯甲烷洗涤。真空蒸发挥发物。向残余物中加入乙酸乙酯和盐水。化合物用乙酸乙酯萃取2次，用二氯甲烷萃取2次。收集的有机相用硫酸钠干燥，过滤并蒸发获得标题化合物，其直接用于下一步骤(113mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 9.33(2H,s),7.21(1H,d),6.72-6.72(2H,m),4.02(2H,q),2.25(3H,s),1.44(3H,t);UPLC:0.79min,276[M+H]+
中间体92
2-{[3-(乙氧基)-4-甲基苯基]氧基}-5-嘧啶胺
Figure BDA00001749351300881
将铁粉(89mg,1.598mmol)加入2-{[3-(乙氧基)-4-甲基苯基]氧基}-5-硝基嘧啶(中间体91,110mg)的THF/水(9mL/3mL)溶液中，随后加入氯化铵(86mg,1.598mmol)。将反应混合物在氮气下搅拌过夜。将反应混合物倒入水中过滤铁。使用乙酸乙酯洗涤过滤的固体。滤液用乙酸乙酯萃取(3次)。合并的乙酸乙酯层用硫酸钠干燥，浓缩获得标题化合物(94mg)，其直接用于下一步骤。
UPLC:0.64min,246[M+H]+
中间体93
((1R)-1-{[(2-{[3-(乙氧基)-4-甲基苯基]氧基}-5-嘧啶基)氨基]羰基}丙基) 氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯
Figure BDA00001749351300882
向(2R)-2-({[(1,1-二甲基乙基)氧基]羰基}氨基)丁酸(90mg,0.445mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(7mL)的溶液中加入DIPEA(97μl,0.557mmol)和HATU(169mg,0.445mmol)，将反应混合物在室温下搅拌10分钟。随后加入2-{[3-(乙氧基)-4-甲基苯基]氧基}-5-嘧啶胺(中间体92,91mg)，将反应混合物在室温下搅拌48小时。蒸发反应混合物，通过硅胶柱色谱纯化(Companion系统)，在20分钟内用梯度环己烷/乙酸乙酯100/0-40/60洗脱，随后40/60洗脱15分钟获得标题化合物(83mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 8.73(2H,s),7.13(1H,d),6.75-6.52(2H,m),4.17-4.09(1H,m),3.98(2H,q),2.20(3H,s),2.04-1.88(1H,m),1.81-1.61(1H,m),1.46(9H,s),1.40(3H,t),1.02(3H,t);UPLC:0.79min,431[M+H]+
中间体94
(2R)-2-氨基-N-(2-{[3-(乙氧基)-4-甲基苯基]氧基}-5-嘧啶基)丁酰胺
Figure BDA00001749351300891
向冷却至0°C的((1R)-1-{[(2-{[3-(乙氧基)-4-甲基苯基]氧基}-5-嘧啶基)氨基]羰基}丙基)氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯(中间体93,80mg)的二氯甲烷(1mL)溶液中加入TFA(573μl,7.43mmol)，将反应混合物在0°C下搅拌1.5小时。蒸发溶剂和TFA，混合物用二氯甲烷和饱和的碳酸氢钠溶液稀释，分离有机层，硫酸钠干燥，过滤并蒸发获得标题化合物(65mg)，其直接用于下一步骤。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 9.39(1H,s),8.82(2H,s),7.14(1H,d),6.78-6.49(2H,m),3.98(2H,q),3.47(1H,dd),2.20(3H,s),2.09-1.91(1H,m),1.81(2H,sb),1.76-1.56(1H,m),1.02(3H,t);UPLC:0.54min,331[M+H]+
中间体95
N-{[(1,1-二甲基乙基)氧基]羰基}-3-甲基-D-缬氨酸
Figure BDA00001749351300892
0°C下向3-甲基-D-缬氨酸(900mg,6.86mmol)的1M NaOH水溶液(7mL)和7mL甲醇中加入Boc-酸酐(1.797g,8.23mmol)。将反应混合物温热至室温，搅拌过夜。大多数甲醇蒸发后，将溶液用1M的HCl酸化至pH2，用乙酸乙酯萃取(3x20mL)。合并有机层，用盐水洗涤(2x5mL)。蒸发溶剂获得白色固体状的标题化合物(1.36g)，产率83%。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 12.44(1H,s),6.82(1H,d),3.76(1H,d),1.38(9H,s),0.93(9H,s);UPLC:0.64min,232[M+H]+
中间体96
((1R)-2,2-二甲基-1-{[(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)氨基] 羰基}丙基)氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯
向N-{[(1,1-二甲基乙基)氧基]羰基}-3-甲基-D-缬氨酸(中间体95,20.1mg)在无水N,N-二甲基甲酰胺(1mL)的溶液中加入DIPEA(0.015mL,0.087mmol)，随后加入HATU(38.0mg,0.100mmol)，在氩气中将反应混合物在室温下搅拌15分钟。随后加入6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶胺(中间体50,10mg)，在氩气中将反应混合物在50°C搅拌3小时。反应物在室温下过夜。蒸发反应混合物。将获得的残余物溶于二氯甲烷。有机层用盐水洗涤，随后用饱和的碳酸氢钠水溶液洗涤。随后用硫酸钠干燥。获得的残余物通过硅胶纯化(Companion设备)，用环己烷/乙酸乙酯100/0-70/30洗脱，获得标题化合物(9.2mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 8.53(1H,s),8.21(1H,d),7.87(1H,d),7.09(1H,d),6.76(1H,d),6.59(2H,m),5.43(1H,d),4.10(1H,d),3.75(3H,s),2.17(3H,s),1.42(9H,s),1.07(9H,s);UPLC_ipqc:0.87min,444[M+H]+
中间体97
3-甲基-N 1 -(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)-D-缬氨酰胺
Figure BDA00001749351300902
向冷却至0°C的((1R)-2,2-二甲基-1-{[(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)氨基]羰基}丙基)氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯(中间体96,8.2mg)的无水二氯甲烷(0.5mL)溶液中加入TFA(57μl,0.740mmol)，将溶液在该温度下搅拌3小时。蒸发挥发物。残余物溶于二氯甲烷(2mL)，加入NaHCO3水溶液(4mL)。分层，水层用二氯甲烷萃取2次。收集的有机层用硫酸钠干燥，蒸发获得标题化合物(6.2mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 9.13(1H,br s),8.18(2H,m),7.11(1H,d),6.87(1H,d),6.60(2H,m),3.78(3H,s),3.27(1H,s),2.19(3H,s),1.69(2H,br s),1.06(9H,s);UPLC_ipqc:0.73min,344[M+H]+
中间体98
((1R)-1-甲基-1-{[(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)氨基]羰 基}丙基)氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯
Figure BDA00001749351300911
向N-{[(1,1-二甲基乙基)氧基]羰基}-D-异缬氨酸(94mg,0.434mmol)在无水N,N-二甲基甲酰胺(1mL)的溶液中加入DIPEA(0.114mL,0.651mmol)，随后加入HATU(165mg,0.434mmol)，将反应混合物在室温下搅拌15分钟。随后加入6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶胺(中间体50,50mg)，在室温下搅拌1小时后将混合物加热至50°C，该温度下搅拌4小时，随后冷却至室温，在该温度下搅拌过夜。混合物用盐水猝灭(2mL)，乙酸乙酯萃取(3x2mL)。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并蒸发。残余物通过硅胶快速色谱纯化(10g SNAP柱)，用环己烷/乙酸乙酯100/0-60/40洗脱(Biotage系统)获得白色固体状的标题化合物(65mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 9.60(1H,br s),9.10(1H,br s),8.31(1H,br.s.),8.03(1H,br s),7.12(1H,d),6.93(1H,d),6.69(1H,d),6.53(1H,dd),3.74(3H,s),2.11(3H,s),1.72-1.86(1H,m),1.60-1.72(1H,m),1.41(9H,s),1.33(3H,s),0.78(3H,t);UPLC:0.87min,430[M+H]+
中间体99
N 1 -(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)-D-异缬氨酰胺
Figure BDA00001749351300912
向冷却至0°C的((1R)-1-甲基-1-{[(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)氨基]羰基}丙基)氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯(中间体98,65mg)的无水二氯甲烷(3mL)溶液中滴加入TFA(0.700mL,9.08mmol)，将溶液在该温度下搅拌2小时。0°C下将反应用NaHCO3饱和水溶液(20mL)猝灭，并用二氯甲烷萃取(3x7mL)。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并蒸发获得白色固体状的标题化合物(44mg)。
中间体100
1-({[(1,1-二甲基乙基)氧基]羰基}氨基)环丁烷甲酸
Figure BDA00001749351300921
0°C下向1-氨基环丁烷甲酸(626mg,5.44mmol)的5.6mL 1M氢氧化钠水溶液和4mL甲醇中加入Boc-酸酐(1.425g,6.53mmol)。将反应混合物温热至室温并搅拌12小时。大多数甲醇蒸发后，将溶液用1M的HCl酸化至pH2，用乙酸乙酯萃取。合并有机萃取物，用盐水洗涤。蒸发溶剂获得标题化合物(1.09g)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 12.21(1H,s),7.44(1H,s),2.29-2.47(2H,m),2.09(2H,q),1.74-1.94(2H,m),1.36(9H,s);UPLC:0.56min,216[M+H]+
中间体101
(1-{[(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)氨基]羰基}环丁基)氨 基甲酸1,1-二甲基乙基酯
Figure BDA00001749351300922
向1-({[(1,1-二甲基乙基)氧基]羰基}氨基)环丁基甲酸(中间体100,70.1mg)的无水N,N-二甲基甲酰胺(2mL)溶液中加入DIPEA(0.095mL,0.543mmol)和TBTU(112mg,0.347mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15分钟，加入6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶胺(中间体50,50mg)，将该混合物在室温下搅拌1天。反应用水终止(5mL)，乙酸乙酯萃取(3x5mL)。合并的有机层用盐水洗涤(3x8mL)，分离并用硫酸钠干燥，过滤并蒸发。残余物通过快速硅胶色谱纯化，使用25g SNAP柱和环己烷:乙酸乙酯(10:0-7:3)洗脱。获得白色粉末状的标题化合物(80mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 9.52(1H,s),8.34(1H,s),7.96(1H,m),7.51(1H,s),7.13(1H,d),6.95(1H,d),6.70(1H,d),6.54(1H,dd),3.75(3H,s),2.13(3H,s),2.11(2H,br.s.),1.76-1.97(2H,m),1.39(9H,s),1.26(2H,s);UPLC_B:0.93min,426[M-H]-
中间体102
1-氨基-N-(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)环丁烷甲酰胺
Figure BDA00001749351300931
向冷却至0°C的(1-{[(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)氨基]羰基}环丁基)氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯(中间体101,80mg)的无水二氯甲烷(2mL)溶液中滴加入TFA(0.865mL,11.23mmol)，将溶液在0°C下搅拌2小时。随后恢复至室温。蒸发二氯甲烷和过量的TFA。残余物用二氯甲烷(5mL)稀释并用饱和的NaHCO3中和。分离有机层，硫酸钠干燥，过滤和蒸发获得白色固体状的标题化合物(60mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)d ppm 9.43(1H,br.s.),8.37-7.89(2H,m),7.09(1H,d),6.85(1H,d),6.67-6.39(2H,m),3.77(3H,s),2.92-2.62(2H,m),2.18(3H,s),1.97-2.06(2H,m),1.97-1.74(2H,m);UPLC:0.54min,328[M+H]+
中间体103
1-({[(1,1-二甲基乙基)氧基]羰基}氨基)环丙烷甲酸
Figure BDA00001749351300932
以与中间体100类似的方式制备标题化合物(998mg)，用1-氨基环丙烷甲酸(550mg,5.44mmol)代替1-氨基环丁烷甲酸。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 12.26(1H,s),7.40(1H,s),1.38(9H,s),1.26(2H,m),0.96(2H,m);UPLC:0.52min,202[M+H]+。
中间体104
(1-{[(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)氨基]羰基}环丙基)氨 基甲酸1,1-二甲基乙基酯
Figure BDA00001749351300941
以与中间体101类似的方式制备标题化合物(80mg)，用1-({[(1,1-二甲基乙基)氧基]羰基}氨基)环丙烷甲酸(中间体103,65.5mg)代替1-({[(1,1-二甲基乙基)氧基]羰基}氨基)环丁烷甲酸。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)d ppm 9.56-9.76(1H,m),8.34(1H,d),8.04(1H,dd),7.31-7.51(1H,m),7.13(1H,d),6.94(1H,d),6.71(1H,d),6.55(1H,dd),3.75(3H,s),2.13(3H,s),1.42(9H,s),1.26-1.39(2H,m),0.75-1.07(2H,m);UPLC_B:0.89min,412[M-H]-
中间体105
1-氨基-N-(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)环丙烷甲酰胺
Figure BDA00001749351300942
以与中间体102类似的方式制备标题化合物(58mg)，用(1-{[(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)氨基]羰基}环丙基)氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯(中间体104,80mg)代替(1-{[(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)氨基]羰基}环丁基)氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯。
1H NMR(400MHz,CDCl3)d ppm 9.85(1H,s),8.23(1H,d),8.14(1H,dd),7.09(1H,d),6.85(1H,d),6.67-6.45(2H,m),3.77(3H,s),2.18(3H,s),1.85(2H,br.s.),1.47-1.57(2H,m),0.96-0.85(2H,m);UPLC:0.52min,314[M+H]+
中间体106
3-(6-氟-3-吡啶基)-5,5-二甲基-2,4-咪唑烷二酮
Figure BDA00001749351300951
平行进行两项反应。各自向5,5-二甲基-2,4-咪唑烷二酮(1.5g,11.71mmol)的无水二氯甲烷溶液(100mL)中加入(6-氟-3-吡啶基)硼酸(1.980g,14.05mmol)、醋酸铜(II)(2.126g,11.71mmol)和吡啶(1.420mL,17.56mmol)。反应物在空气下在室温下搅拌过夜。合并两项反应混合物，过滤固体。所得溶液用水洗涤(90mL)。水相用二氯甲烷萃取2次(2次90mL)。合并有机相，用盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。除去溶剂获得残余物，其通过硅胶色谱纯化(Biotage系统,100g SNAP柱)，使用梯度为环己烷/乙酸乙酯65/35到50/50，获得白色固体状的标题化合物(1.27g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 8.40(1H,m),7.94(1H,m),7.06(1H,dd),6.18(1H,br.s),1.57(6H,s);UPLC_ipqc:0.56min,224[M+H]+
中间体107
2-甲基丙氨酸酯盐酸盐
将2-胺-2-甲基丙酸(25g,242.43mmol)溶于甲醇(150mL)。在0°C下向反应混合物中滴加亚硫酰氯(25mL)。回流反应物3小时，蒸发并在真空干燥。固体用Et2O洗涤数次并干燥，获得白色固体状的标题化合物(37g)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 8.71(3H,s),3.77(3H,s),1.5(6H,s)。
中间体108
3-(1,1-二甲基乙基)-4-羟基苯甲醛
Figure BDA00001749351300953
将2-(1,1-二甲基乙基)苯酚(10g,66.67mmol)溶于40mL MeOH，滴加NaOH(40g,1mol)的40mL水溶液。随后在60°C加入40mL CHCl3(在1小时内)。该温度下搅拌反应混合物3小时。冷却至室温后，将反应混合物冷却至0°C，加入4M HCl直到溶液到达pH 5-6。混合物用DCM萃取(3次)，收集的有机相用Na2SO4干燥，过滤并蒸发。粗产物加载到硅胶柱上，用环己烷/EtOAc洗脱(从100:0到80:20环己烷/EtOAc，随后保持在80:20)，获得766mg标题化合物。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 10.62(1H,s),9.79(1H,s),7.73(1H,br.s),7.67–7.57(1H,m),7.01–6.90(1H,m),1.38(9H,s);UPLC_ipqc:0.97min,177[M-H]-。
中间体109
3-(1,1-二甲基乙基)-4-羟基苄腈
Figure BDA00001749351300961
将3-(1,1-二甲基乙基)-4-羟基苯甲醛(中间体108,550mg)和羟胺盐酸盐(322mg,4.63mmol)在8.0mL乙酸中回流搅拌1小时。冷却至0°C后，将混合物倒入Et2O，用水洗涤一次，NaOH洗涤一次(5%水溶液)。收集的水相用Et2O萃取(2次)，合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤蒸发，用戊烷研磨获得540mg标题化合物。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 10.92(1H,br.s),7.53–7.45(2H,m),6.92(1H,d),1.34(9H,s);UPLC_ipqc:1.03min,174[M-H]-。
中间体110
3-溴-4-[(苯基甲基)氧基]苄腈
Figure BDA00001749351300962
将3-溴-4-羟基苄腈(5.94g,0.03mol)溶于100mL无水丙酮中。加入碳酸钾(8.29g,0.06mol)。向混合物中滴加入苄基溴(5g,0.03mol)。将反应混合物在50°C搅拌过夜。随后冷却至室温，过滤并蒸发。获得的残余物溶于乙酸乙酯(300mL)，加入水(200mL)。分离相，收集的有机相用硫酸钠干燥。蒸发获得淡黄色固体状的标题化合物(7.6g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 7.85(1H,d),7.57(1H,dd),7.45-7.36(5H,m),6.99(1H,d),5.23(2H,s);UPLC_ipqc:1.24min.
下列化合物使用上述方法按照上述的反应流程制备，用适当取代的苯酚替换3-溴-4-羟基苄腈。
中间体112
3-乙基-4-[(苯基甲基)氧基]苄腈
向1M乙基溴化镁溶液(2mL,1.5当量)中加入THF(10mL)，将反应混合物冷却至0°C。缓慢加入0.5M氯化锌的THF溶液(4mL,1.5当量)，将反应混合物在同一温度下搅拌30分钟。加入Pd(tBu3P)2(102mg,0.1当量)，随后加入3-溴-4-[(苯基甲基)氧基]苄腈(中间体110,576mg)的THF溶液，将反应物温热至室温。搅拌30分钟后，另加入一些Pd(tBu3P)2(51mg,0.05当量)，随后搅拌30分钟，第三次加入Pd(tBu3P)2(51mg,0.05当量)并搅拌30分钟。反应混合物用饱和NH4Cl水溶液猝灭(100mL)，用乙酸乙酯萃取3次(3x150mL)。收集的有机相用硅藻土过滤，硫酸钠干燥。获得的残余物通过硅胶色谱纯化(Companion系统,40g Si柱)，使用梯度环己烷/乙酸乙酯100:0，随后100:0-90:10洗脱。蒸发获得白色固体状的标题化合物(336mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 7.49–7.27(7H,m),6.94(1H,d),5.15(2H,s),2.72(2H,q),1.23(3H,t);UPLC_ipqc:1.30min,236[M-H]-。
中间体113
1-甲基-4-[(苯基甲基)氧基]-2-[(三氟甲基)氧基]苯
Figure BDA00001749351300981
有机金属溶液的制备：室温下向1M ZnCl2的Et2O溶液(6mL)中缓慢加入1.4M甲基溴化镁的THF溶液(4.3mL)，将反应混合物在室温下搅拌20分钟。
向60°C的1-溴-4-[(苯基甲基)氧基]-2-[(三氟甲基)氧基]苯(中间体111,537mg,1.55mmol)和Pd(tBu3P)2(208mg,0.4mmol)的溶液中加入5.15mL上述有机金属溶液，反应混合物在60°C搅拌1小时。再加入5.15mL有机金属溶液，反应混合物在60°C搅拌30分钟。冷却后反应用水(1mL)淬灭，用氯化铵的饱和水溶液(20mL)稀释，乙酸乙酯萃取(2x50mL)。有机层用盐水洗涤(2x20mL)、干燥(Na2SO4)，过滤并蒸发。粗产物通过快速色谱纯化(硅胶,100:0-80:20环己烷/EtOAc)获得固体状的标题化合物(203mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 7.30-7.49(5H,m),7.15(1H,d),6.79-6.90(2H,m),5.05(2H,s),2.25(3H,s);UPLC_ipqc:1.43min,281[M-H]-。
下列化合物使用上述方法按照上述的反应流程制备，用适当取代的卤代化合物替换1-溴-4-[(苯基甲基)氧基]-2-[(三氟甲基)氧基]苯。
Figure BDA00001749351300982
Figure BDA00001749351300991
中间体115
3-乙基-4-羟基苄腈
将3-乙基-4-[(苯基甲基)氧基]苄腈(中间体112,334mg)溶于15mLEtOAc/EtOH(2/1)，向溶液中加入10%mol Pd/C(0.1当量)。将所得混合物在氢气气氛中，在室温下搅拌过夜。在氩气下过滤反应混合物，除去溶剂。获得的残余物通过硅胶色谱纯化(Companion系统,40g Si柱)，使用梯度环己烷/乙酸乙酯(100:0-80:20)洗脱。蒸发获得白色固体状的标题化合物(148mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 10.50(1H,br s),7.50(2H,m),6.92(1H,d),2.55(2H,q),1.12(3H,t);UPLC_ipqc:0.84min,146[M-H]-
下列化合物使用上述方法制备，用适当的苄基化的苯酚替换3-乙基-4-[(苯基甲基)氧基]苄腈。
Figure BDA00001749351300993
中间体117
4-羟基-2-碘苄腈
Figure BDA00001749351301001
向2-氟-4-碘苄腈(5.0g,20.24mmol)的无水乙腈溶液(100mL)中加入三甲基硅醇钾(1.18g)，将反应混合物在50°C搅拌过夜。减压除去溶剂，将残余物溶于乙酸乙酯(100mL)，加入pH3的缓冲水溶液，至pH～5。分离两相，干燥有机层(Na2SO4)，过滤并蒸发获得棕色固体状的标题化合物(4.90g)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 10.92(1H,s),7.65(1H,d),7.39(1H,d),6.93(1H,dd);UPLC_ipqc:0.81min,244[M-H]-。
下列化合物使用上述方法按照上述的反应流程制备，用适当取代的氟苄腈替换4-氟-2-碘苄腈。
Figure BDA00001749351301002
中间体119
4-羟基-2-[(三氟甲基)氧基]苄腈
Figure BDA00001749351301003
平行进行两项反应(A和B)，随后合并两批反应混合物进行后处理和纯化。
反应A:向4-甲氧基-2-(三氟甲氧基)苄腈(50mg,0.23mmol)的1,2-二氯乙烷溶液(1mL)中滴加1M BBr3的DCM溶液(0.69mL,0.69mmol)。将所得反应混合物在微波辐射下搅拌5次(设定参数:T=100°C,t=1小时)，每次再加入1M BBr3的DCM溶液(1mL)。所用的1M BBr3的DCM溶液总量为4.69mL。
反应B:在一试管中加入4-甲氧基-2-(三氟甲氧基)苄腈(750mg,3.45mmol)、1,2-二氯乙烷(5mL)，随后滴加1M BBr3的DCM溶液(10.36mL,10.36mmol)。将所得反应混合物在微波辐射下搅拌1小时(设定T=100°C)。向反应混合物中另加入1M BBr3的DCM溶液(1mL)，将所得反应混合物在微波辐射下再搅拌3次(设定参数:T=100°C,t=1.5小时)，每次再加入1M BBr3的DCM溶液(0.8mL)。所用的1M BBr3的DCM溶液总量为13.76mL。
将反应混合物A和B滴加到NaHCO3饱和水溶液中，加入固体NaHCO3调节pH至7。分离两相，水相用DCM(1x)和EtOAc(2x)萃取。干燥合并的有机相，蒸干获得黑色油状的标题化合物与未反应原料的混合物(1.48g)。该混合物不需任何进一步纯化即用于下一步骤。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 11.35(1H,s),7.82(1H,d),6.91-6.98(2H,m);UPLC_ipqc:0.88min,204[M+H]+,202[M-H]-。
中间体120
4-[(5-硝基-2-吡啶基)氧基]-3-(三氟甲基)苄腈
将2-氯-5-硝基吡啶(70mg,0.44mmol)、4-羟基-3-(三氟甲基)苄腈(91mg,0.49mmol)、K2CO3(92mg,0.66mmol)在DMF(2mL)中的混合物在50°C下搅拌过夜。加入水(4mL)，形成沉淀。过滤固体，用MeOH研磨获得褐色固体状的标题化合物(85mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 8.99(1H,d),8.60(1H,dd),8.07(1H,s),7.95(1H,d),7.48(1H,d),7.19-7.32(1H,m);UPLC_ipqc:1.1min,310[M+H]+。
以下化合物根据前述反应流程使用上述的方法制备，将适当的卤代硝基芳基例如2-氯-5-硝基吡啶、2-氯-5-硝基嘧啶、1-氟-4-硝基苯等与适当取代的苯酚在适当的温度下反应，任选在微波辐射下进行。某些最终产物通过快速色谱纯化(硅胶；环己烷/EtOAc或其他适当的溶剂系统)。
Figure BDA00001749351301031
中间体133
2-乙基-4-[(5-硝基-2-嘧啶基)氧基]苄腈
Figure BDA00001749351301041
在一个烧结的2颈瓶中，在氮气下，向-15°C冷却的ZnCl2(0.82mL0.5M THF溶液,0.41mmol)的1.0mL THF溶液中缓慢加入EtMgBr(0.41mL 1.0M THF溶液,0.41mmol)，将反应混合物在该温度下搅拌1小时，随后加入Pd(tBu3P)2(7.0mg,0.03mmol)，接着加入2-碘-4-[(5-硝基-2-嘧啶基)氧基]苄腈(中间体121,50.0mg)的THF溶液(1.0mL)，将反应混合物在-15°C搅拌1小时，随后除去NaCl/冰浴。室温下2小时后，加入3.5mg(0.015mmol)的(tBu3P)2。反应物用NH4Cl(饱和水溶液)淬灭，用EtOAc萃取(3次)。收集的有机相用Na2SO4干燥，过滤并蒸发。获得的残余物加载到硅胶柱上，用环己烷/EtOAc洗脱(100:0-90:10环己烷/EtOAc，随后维持在90:10)获得25mg标题化合物。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 9.47(2H,br.s),7.94(1H,d),7.49(1H,br.s),7.41–7.33(1H,m),2.84(2H,q),1.24(3H,t);UPLC_ipqc:1.06min,271[M+H]+。
中间体134
2-环丙基-4-[(5-硝基-2-吡啶基)氧基]苄腈
Figure BDA00001749351301042
有机金属溶液的制备：室温下向0.5M ZnCl2的THF溶液(9mL)中缓慢加入0.5M环丙基溴化镁的THF溶液(9mL)，将反应混合物在室温下搅拌20分钟。
向60°C的2-碘-4-[(5-硝基-2-吡啶基)氧基]苄腈(中间体129,550mg)和Pd(tBu3P)2(76mg,0.15mmol)的溶液中加入6mL上述有机金属溶液，将反应混合物在60°C搅拌1小时。再加入6mL有机金属溶液，将反应混合物在60°C搅拌1小时。再加入6mL有机金属溶液，将反应混合物在60°C搅拌1小时。冷却后反应用水(1mL)淬灭，用氯化铵的饱和水溶液(20mL)稀释，乙酸乙酯萃取(2x50mL)。有机层用盐水洗涤(2x20mL)、干燥(Na2SO4)，过滤并蒸发。粗产物通过快速硅胶色谱纯化(SNAP 50g)，用100:0-80:20正己烷/乙酸乙酯洗脱，获得白色固体状的标题化合物(400mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 9.06(1H,d),8.67(1H,dd),7.88(1H,d),7.35(1H,d),7.23(1H,dd),7.01(1H,dd),2.17-2.27(1H,m),1.10-1.19(2H,m),0.82-0.90(2H,m);UPLC_ipqc:1.13min,282[M+H]+。
以下化合物根据前述反应流程使用上述的方法制备，用适当的格氏试剂代替环丙基溴化镁形成有机锌试剂。
Figure BDA00001749351301051
中间体137
3-环丙基-4-[(5-硝基-2-吡啶基)氧基]苄腈
Figure BDA00001749351301052
在一试管中将3-溴-4-[(5-硝基-2-吡啶基)氧基]苄腈(中间体122,800mg)溶于16.0mL甲苯中。加入环丙基硼酸(1073.8mg,12.5mmol)，随后加入Pd(OAc)2(56.1mg,0.25mmol)和(Cy)3P(70.0mg 0.25mmol)。随后加入K3PO4(1855.0mg,8.75mmol)的水溶液(8.0mL水)。将反应混合物在80°C加热过夜。冷却至室温后，混合物用盐水和EtOAc分层，分离的水相用EtOAc萃取(3次)。收集的有机相用Na2SO4干燥，过滤并蒸发。将获得的粗产物加载到硅胶柱上，用环己烷/EtOAc洗脱(100:0-80:20环己烷/EtOAc)，获得634mg标题化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 9.04(1H,br.s),8.69(1H,dd),7.75(1H,d),7.58(1H,s),7.41(2H,t),1.90–1.80(1H,m),0.90–0.73(4H,m);UPLC_ipqc:1.12min,282[M+H]+。
中间体138
2-(1-甲基乙烯基)-4-[(5-硝基-2-吡啶基)氧基]苄腈
Figure BDA00001749351301061
向2-碘-4-[(5-硝基-2-吡啶基)氧基]苄腈(中间体129,5.0g)的DMF(50mL)溶液中加入K3PO4(5.77g,27.24mmol)、Pd(tBu3)2(696mg,1.36mmol)和4,4,5,5-四甲基-2-(1-甲基乙烯基)-1,3,2-二氧杂硼烷(3.84mL,20.43mmol)，随后将反应混合物在110°C搅拌4小时。冷却后反应物用水稀释(100mL)，乙酸乙酯萃取(3x100mL)。有机层用冰盐水洗涤(3x50mL)、干燥(Na2SO4),过滤并蒸发，残余物通过快速硅胶色谱纯化(SNAP 100g)，用100:0-80:20的环己烷/乙酸乙酯洗脱获得白色固体状的标题化合物(1.8g)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 9.08(1H,d),8.69(1H,dd),7.97(1H,d),7.47(1H,d),7.40(2H,d),5.46(1H,s),5.32(1H,s),2.16(3H,s);UPLC_ipqc:1.14min,282[M+H]+。
中间体139
2-(乙氧基)-4-[(4-硝基苯基)氧基]苄腈
Figure BDA00001749351301062
将2-羟基-4-[(4-硝基苯基)氧基]苄腈(中间体127,87.2mg)溶于DMF(5mL)。加入K2CO3(92.2mg,0.67mmol)和碘乙烷(32μL,0.40mmol)。将反应混合物在室温下搅拌。16小时后，蒸干反应混合物获得粗产物，其通过硅胶色谱纯化(100:0-50:50环己烷/EtOAc，10CV;随后50:50环己烷/EtOAc，10CV)获得84.9mg黄色固体状的标题化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 8.26-8.35(2H,m)7.82(1H,d)7.26-7.35(2H,m)7.09(1H,d)6.80(1H,dd)4.18(2H,q)1.36(3H,t);UPLC_ipqc:1.16min,[M+H]+。
以下化合物使用前述的反应流程通过上述方法制备，用适当取代的苯酚替换2-羟基-4-[(4-硝基苯基)氧基]苄腈，用适当的亲电试剂替换碘乙烷。某些最终产物通过快速色谱纯化(硅胶;环己烷/EtOAc或其他适当的溶剂系统)。
中间体142
2-[(1-甲基乙基)氧基]-4-[(5-硝基-2-吡啶基)氧基]苄腈
Figure BDA00001749351301072
在一试管中将2,4-二羟基苄腈(300mg,2.2mmol)、2-氯-5-硝基吡啶(351.96mg,2.22mmol)和K2CO3(920mg,6.62mmol)溶于DMF(5mL)。将反应物在微波辐射下加热1小时(设定温度:110°C)。反应混合物用Et2O和水稀释，用1N的HCl酸化直到pH=2，分离相，有机层用Na2SO4干燥。过滤固体，除去溶剂获得粗制棕色固体状的2-羟基-4-[(5-硝基-2-吡啶基)氧基]苄腈(664mg)。向该粗产物的无水DMF溶液(5mL)中加入碳酸钾(460mg,3.33mmol)和异丙基溴化物(313μL,3.33mmol)，将反应混合物在50°C搅拌过夜。反应物用盐水稀释(10mL)，乙酸乙酯萃取(2x20mL)。有机层用Na2SO4干燥，过滤并蒸发，残余物通过硅胶快速色谱纯化(SNAP 25g)，用100:0-75:25环己烷/乙酸乙酯洗脱获得白色固体状的标题化合物(260mg)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):δppm 9.06(1H,d),8.56(1H,dd),7.61-7.67(1H,m),7.15(1H,d),6.76-6.84(2H,m),4.56-4.68(1H,m),1.44(6H,d)。
中间体143
4-[(5-氨基-2-吡啶基)氧基]-3-(三氟甲基)苄腈
室温下向4-[(5-硝基-2-吡啶基)氧基]-3-(三氟甲基)苄腈(中间体120,83mg)的THF(3mL)/水(1.5mL)溶液中加入铁(75mg,1.34mmol)和NH4Cl(72mg,1.34mmol)，将所得反应混合物搅拌过夜。用硅藻土小层过滤混合物，用EtOAc和水洗涤。向过滤的混合物中加入NaHCO3饱和水溶液，分离两相。水相用EtOAc萃取，干燥合并的有机相，蒸发至干。粗产物通过快速色谱纯化(companion系统,2x12gSi柱，从100:0到70:30环己烷/EtOAc)获得标题化合物(72mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 7.97(1H,s),7.69-7.79(2H,m),7.23(1H,d),7.16(1H,dd),6.93(1H,d);UPLC_ipqc:0.91min,280[M+H]+。
以下化合物使用前述的反应流程通过上述方法制备，用适当的硝基衍生物替换4-[(5-硝基-2-吡啶基)氧基]-3-(三氟甲基)苄腈(中间体120)。某些最终产物通过快速色谱纯化(硅胶或NH柱;环己烷/EtOAc或其他适当的溶剂系统)。某些情况下在通常的快速色谱之前进行SCX纯化(MeOH，随后2M胺的MeOH溶液)。
Figure BDA00001749351301091
Figure BDA00001749351301101
Figure BDA00001749351301111
中间体162
2-({4-溴-3-[(三氟甲基)氧基]苯基}氧基)-5-嘧啶胺
Figure BDA00001749351301121
向4-溴-3-[(三氟甲基)氧基]苯酚(257mg,1.0mmol)的无水DMF(4mL)中加入碳酸钾(276mg,2mmol)，随后加入2-氯-5-硝基嘧啶(319mg,2.0mmol)，将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应用水淬灭(1mL)，用盐水稀释(5mL)，乙酸乙酯萃取(2x15mL)。干燥有机层(Na2SO4),过滤并蒸发，获得粗制2-({4-溴-3-[(三氟甲基)氧基]苯基}氧基)-5-硝基嘧啶。将该粗产物溶于THF/水(2:1)(6mL)，加入铁(279mg,5mmol)和NH4Cl(267,5mg,5mmol)，将反应混合物在室温下搅拌过夜。过滤固体，溶液用饱和NaHCO3水溶液(5mL)稀释，乙酸乙酯萃取(2x20mL)。干燥有机层(Na2SO4),过滤并蒸发，残余物通过硅胶快速色谱纯化(SNAP 25g)，用75:25-40:60环己烷/乙酸乙酯洗脱获得浅黄色固体状的标题化合物(280mg)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 8.00(2H,s),7.81(1H,d),7.34-7.40(1H,m),7.14(1H,dd),5.37(2H,br.s.);UPLC_ipqc:1.02min,350[M]+Br模式.
以下化合物使用前述的反应流程通过上述方法制备，用适当取代的苯酚替换4-溴-3-[(三氟甲基)氧基]苯酚。
Figure BDA00001749351301122
中间体164
2-({4-甲基-3-[(三氟甲基)氧基]苯基}氧基)-5-嘧啶胺
Figure BDA00001749351301131
向2-({4-溴-3-[(三氟甲基)氧基]苯基}氧基)-5-嘧啶胺(中间体162,270mg)的DMF溶液(4mL)中加入K3PO4(490mg,2.31mmol)，Pd(tBu3)2(197mg,0.385mmol)和甲基硼酸(276mg,4.62mmol)，在微波辐射下将反应混合物在110°C搅拌30分钟。冷却后反应物用水稀释(10mL)，乙酸乙酯萃取(3x10mL)。有机层用冰冷的盐水洗涤(2x5mL)、干燥(Na2SO4),过滤并蒸发。残余物通过硅胶快速色谱纯化(SNAP 10g)，用80:20-50:50环己烷/乙酸乙酯洗脱获得白色固体状的标题化合物(135mg)。
UPLC_ipqc:0.97min,286[M+H]+。
中间体165
N-{[(6-{[4-氰基-2-(三氟甲基)苯基]氧基}-3-吡啶基)氨基]羰基}-2-甲基 丙氨酸甲基酯
Figure BDA00001749351301132
0°C下向三光气(32mg,0.11mmol)的EtOAc(1mL)溶液中滴加4-[(5-氨基-2-吡啶基)氧基]-3-(三氟甲基)苄腈(中间体143,69.8mg)在三乙基胺(60μL)/EtOAc(4mL)中的溶液，随后加入2-甲基丙氨酸甲基酯盐酸盐(中间体107,46mg)的三乙基胺(120μL)/EtOAc(4mL)混悬液。搅拌所得混合物1小时。向反应混合物中加入pH3的缓冲水溶液，分离两相。水相用EtOAc萃取3次，合并的有机相用硫酸钠干燥，蒸发至干获得粗制的标题化合物(49mg)。该粗制物不经进一步纯化即用于下一步骤。
UPLC_ipqc:1.01min,423[M+H]+。
以下化合物使用前述的反应流程通过上述方法制备，用适当的苯胺替换4-[(5-氨基-2-吡啶基)氧基]-3-(三氟甲基)苄腈(中间体143)。最终产品分离为粗产物。
Figure BDA00001749351301141
中间体168
{(1R)-1-[({6-[(4-氰基-2-环丙基苯基)氧基]-3-吡啶基}氨基)羰基]丙基} 氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯
Figure BDA00001749351301142
将(2R)-2-({[(1,1-二甲基乙基)氧基]羰基}氨基)丁酸(121.4mg,0.60mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)。加入N,N-二异丙基乙基胺(0.126mL,0.72mmol)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲
Figure BDA00001749351301143
六氟磷酸盐(227.2mg,0.60mmol)。将反应混合物在室温下搅拌30分钟。将4-[(5-氨基-2-吡啶基)氧基]-3-环丙基苄腈(中间体145,100mg)溶于1.0mL DMF，将所得溶液加入到反应混合物中。将反应混合物在60°C搅拌和加热2h。冷却至室温后，真空蒸发反应混合物，获得的粗产物加载到硅胶柱上，用环己烷/EtOAc洗脱(100:0-50:50环己烷/EtOAc,随后保持50:50)获得133mg标题化合物。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):δppm 8.42(1H,br.s),8.20–8.10(2H,m),7.51-7.44(1H,m),7.32–7.23(1H,m),7.08(1H,d),7.03–6.95(1H,m),4.95(1H,br.s),4.16–4.05(1H,m),2.07–1.95(2H,m),1.77–1.68(1H,m),1.47(9H,s),1.04(3H,t),0.95–0.88(2H,m),0.71–0.64(2H,m);UPLC_ipqc:1.14min,437[M+H]+。
以下化合物使用前述的反应流程通过上述方法制备，用适当的氨基酸替换(2R)-2-({[(1,1-二甲基乙基)氧基]羰基}氨基)丁酸，用适当的苯胺替换4-[(5-氨基-2-吡啶基)氧基]-3-环丙基苄腈(中间体145)。反应在适当的温度下进行，其范围为常温至高温。最终产物通过快速色谱纯化(硅胶;环己烷/EtOAc或其他适当的溶剂系统)。
Figure BDA00001749351301151
Figure BDA00001749351301161
Figure BDA00001749351301171
Figure BDA00001749351301181
Figure BDA00001749351301191
中间体187
((1R)-1-{[(6-{[4-氰基-3-(1-甲基乙基)苯基]氧基}-3-吡啶基)氨基]羰基} 丙基)氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯
Figure BDA00001749351301201
向((1R)-1-{[(6-{[4-氰基-3-(1-甲基乙烯基)苯基]氧基}-3-吡啶基)氨基]羰基}丙基)氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯(中间体178,73mg)的MeOH(10mL)溶液中加入在活性炭上的Pd 10%w/w(14mg)，将反应混合物在H2气氛下(P=1大气压)搅拌30分钟。过滤催化剂，减压除去溶剂。残余物通过快速硅胶色谱纯化(SNAP 10g)，用75:25-40:60环己烷/乙酸乙酯洗脱获得白色固体状的标题化合物(62mg)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 10.24(1H,br.s.),8.42(1H,d),8.16(1H,dd),7.78(1H,d),7.24(1H,d),7.15(1H,d),7.07-7.11(1H,m),7.05(1H,dd),3.95-4.02(1H,m),3.19-3.27(1H,m),1.57-1.76(2H,m),1.39(9H,s),1.26(6H,d),0.91(3H,t);UPLC_ipqc:1.20min,439[M+H]+。
中间体188
(2R)-2-氨基-N-{6-[(4-氰基-2-环丙基苯基)氧基]-3-吡啶基}丁酰胺
Figure BDA00001749351301202
将{(1R)-1-[({6-[(4-氰基-2-环丙基苯基)氧基]-3-吡啶基}氨基)羰基]丙基}氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯(中间体168,133mg)溶于DCM(6mL)，在0°C下缓慢加入TFA(3.0mL)。将反应混合物在该温度下搅拌2小时。除去挥发物后，获得的粗产物加载到SCX柱上，用MeOH，随后用2M NH3的MeOH溶液洗脱获得102mg标题化合物。
H-NMR(400MHz,CDCl3):δppm 9.68(1H,br.s),8.32–8.18(2H,m),7.51-7.43(1H,m),7.25–7.31(1H,m),7.08(1H,d),6.99(1H,d),3.59–3.51(1H,m),2.06–1.95(2H,m),1.73–1.63(1H,m),1.03(3H,t),0.95–0.89(2H,m),0.74–0.63(2H,m);UPLC_ipqc:0.68min,337[M+H]+。
以下化合物使用前述的反应流程通过上述方法制备，用适当N-BOC保护的胺替换{(1R)-1-[({6-[(4-氰基-2-环丙基苯基)氧基]-3-吡啶基}氨基)羰基]丙基}氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯(中间体168)。最终产物通过SCX纯化(MeOH，随后用2M NH3的MeOH溶液)，浓缩含有产物的用氨洗脱的组分获得游离碱。或者，除去挥发物后，向溶于适当有机溶剂的粗产物中加入饱和NaHCO3水溶液，分离两相，干燥有机层，过滤并蒸发获得游离碱形式的最终化合物。
Figure BDA00001749351301211
Figure BDA00001749351301221
Figure BDA00001749351301231
Figure BDA00001749351301251
中间体207
4-({5-[(4R)-4-乙基-4-甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-吡啶基}氧 基)-2-(1-甲基乙烯基)苄腈
Figure BDA00001749351301261
0°C下向三光气(118mg,0.40mmol)的无水DCM(3mL)溶液中加入DIPEA(0.695ml,4.0mmol)，随后缓慢(5分钟)加入4-[(5-氨基-2-吡啶基)氧基]-2-(1-甲基乙烯基)苄腈(中间体154,100mg)的无水DCM溶液(6mL)。随后将(2R)-2-甲基-1-(甲氧基)-1-氧代-2-丁基铵氯化物(268mg,1.6mmol)溶于无水DCM(3mL)，在同一温度下加入，将反应混合物在0°C搅拌45分钟。反应用水淬灭，加入缓冲水溶液(pH 3)，使pH到达约5-6。加入乙酸乙酯(40ml)，分离两相。有机层用盐水洗涤(2x10ml)、干燥(Na2SO4),过滤并蒸发获得黄色泡沫状的脲中间体。将该脲溶于MeOH(10mL)，加入NaOMe(10mg)，将反应混合物在搅拌下回流45分钟。冷却后反应混合物用氯化铵的饱和水溶液淬灭(10mL)，用乙酸乙酯稀释(20mL)。分离两相，干燥有机层(Na2SO4)，过滤并蒸发，残余物通过硅胶快速色谱纯化(SNAP10g)，用75:25-50:50环己烷/乙酸乙酯洗脱获得白色固体状的标题化合物(100mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 8.31(1H,d),7.87(1H,dd),7.71(1H,d),7.14-7.20(2H,m),7.12(1H,d),5.94(1H,br.s.),5.42(1H,s),5.34(1H,s),2.20(3H,s),1.95-2.05(1H,m),1.79(1H,dd),1.56(3H,s),1.00(3H,t);UPLC_ipqc:1.04min,377[M+H]+。
实施例1
(5R)-5-甲基-3-{4-[(3-甲基苯基)氧基]苯基}-2,4-咪唑烷二酮
Figure BDA00001749351301262
向Boc-酐(0.522g,2.394mmol)的二氯甲烷溶液(4mL)中加入DMAP(0.248g,2.033mmol)，随后通过注射器缓慢加入D-丙氨酸叔丁基酯的二氯甲烷溶液(4mL)(从D-丙氨酸叔丁基酯盐酸盐制备)(0.410g)，其通过DCM和Na2CO3水溶液分层。干燥有机层(K2CO3)，真空蒸发挥发物，再次溶于二氯甲烷。搅拌混合物10分钟，分成三等分(溶液1)。
35°C下向4-[(3-甲基苯基)氧基]苯胺(90mg,0.45mmol)的二氯甲烷(1mL)振荡溶液中通过注射器缓慢加入1等分的约1/3的溶液1(历经约1min)。30min后，加入HCl(约0.8mL)，将异质混合物在100°C振荡加热2小时。通过玻璃毛细管蒸馏二氯甲烷。冷却至室温后吸取HCl水溶液，真空干燥残余物。残余物通过硅胶色谱纯化(Biotage instrument,10g柱)用0-100% EtOAc/cHex洗脱，干燥获得固体状的标题化合物(30mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 7.40-7.34(2H,m),7.28-7.22(1H,m),7.12-7.05(2H,m),6.98(1H,d),6.91-6.84(2H,m),5.75(1H,br.s),4.28(1H,m),2.34-2.39(3H,s),1.59(3H,m);LC-MS_A:2.44min,295[M-H]-
实施例2
(5R)-5-甲基-3-(4-{[3-(甲氧基)苯基]氧基}苯基)-2,4-咪唑烷二酮
Figure BDA00001749351301271
向N1-(4-{[3-(甲氧基)苯基]氧基}苯基)-D-丙氨酰胺(中间体2,315mg)和三乙胺(0.307mL,2.200mmol)的无水乙酸乙酯(5mL)溶液中加入三光气(163mg,0.550mmol)，将反应混合物搅拌5分钟。随后加入DMAP(67.2mg,0.550mmol)，继续搅拌反应混合物10分钟。反应用饱和的碳酸钠溶液淬灭(5mL)，用水稀释(10mL)，乙酸乙酯萃取(3次20mL)。有机层用硫酸钠干燥，过滤并蒸发。残余物通过硅胶色谱纯化(Biotage系统,10gSNAP柱)，用梯度洗脱(环己烷/乙酸乙酯100/0-60/40)获得白色固体状的标题化合物(115mg)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:8.46(1H,s),7.27-7.42(3H,m),7.09(2H,d),6.77(1H,dd),6.65(1H,t),6.60(1H,dd),4.26(1H,m),3.76(3H,s),1.36(3H,d);LC-MS_A:2.31min,311[M-H]-
实施例3
(5R)-3-(4-{[3-(乙氧基)苯基]氧基}苯基)-5-甲基-2,4-咪唑烷二酮
Figure BDA00001749351301281
标题化合物以与实施例1类似的方式制备，其中使用4-[(3-乙氧基苯基)氧基]苯胺(中间体4,0.104g)代替4-[(3-甲基苯基)氧基]苯胺。硅胶柱色谱纯化后获得棕色胶状的标题化合物，用Et2O:cHex(约1:2,约1.5mL)研磨。干燥后获得淡棕色固体状的标题化合物(9mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 7.38(2H,m),7.28-7.22(1H,m),7.14-7.07(2H,m),6.73-6.67(1H,m),6.66-6.60(2H,m),5.56(1H,br.s),4.29(1H,m),4.02(2H,q),1.61-1.57(3H,m),1.47-1.39(3H,m);LC-MS_A:2.46min,325[M-H]-
实施例4
(5R)-3-{4-[(3-氯-5-氟苯基)氧基]苯基}-5-甲基-2,4-咪唑烷二酮
Figure BDA00001749351301282
向三光气(0.052g,0.177mmol)中振荡加入4-[(3-氯-5-氟苯基)氧基]苯胺(中间体6,0.12g)的甲苯溶液(1mL)和三乙胺(0.16g)。迅速形成稠的浆体，再加入甲苯(1mL)。在室温下搅拌混合物3小时，随后通过吸管快速加入D-丙氨酸(0.067g,0.757mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(2mL)和水(约2mL)溶液(几乎不溶)。形成双层系统，剧烈搅拌2小时，在室温下保持过夜。蒸发挥发物，加入盐酸(2mL,24.35mmol)，随后将异质混合物在100°C加热2小时，冷却至室温。冷却至室温后，吸去HCl水溶液，残余物用真空干燥。残余物通过硅胶色谱纯化(Biotage instrument,10g柱)，用0-100%EtOAc/cHex洗脱获得无色固体状的标题化合物(7mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 7.52-7.41(2H,m),7.21-7.11(2H,m),6.92-6.79(2H,m),6.72-6.58(1H,m),5.57(1H,s),4.31(1H,dd),1.61(3H,d);LC-MS_A:2.58min,333[M-H]-
实施例5
(5R)-3-{4-[(3-氯-4-氟苯基)氧基]苯基}-5-甲基-2,4-咪唑烷二酮
Figure BDA00001749351301291
将N-[({4-[(3-氯-4-氟苯基)氧基]苯基}氨基)羰基]-D-丙氨酸(中间体9,352mg)的15mL 3N HCl中的溶液在100°C加热16小时。加入碳酸钠，将混合物pH调节至8。混合物用乙酸乙酯萃取(3次50mL)，合并的有机相用盐水洗涤，硫酸镁干燥。除去溶剂获得残余物，其通过柱色谱纯化(MeOH/DCM=1/50)获得42mg白色固体状的标题化合物。
1HNMR(300MHz,DMSO):δppm 8.47(1H,s),7.50-7.45(1H,t),7.38-7.36(3H,m),7.13-7.09(3H,m),4.28-4.23(1H,q),1.36-1.34(3H,d);MS_2(ESI):335[M+H]+
实施例6
(5S)-3-{4-[(3-氯-4-氟苯基)氧基]苯基}-5-甲基-2,4-咪唑烷二酮
Figure BDA00001749351301292
将N-[({4-[(3-氯-4-氟苯基)氧基]苯基}氨基)羰基]-L-丙氨酸(中间体10,352mg)在15mL 3N HCl中的混合物在100°C加热16小时。加入碳酸钠，将混合物pH调节至8。混合物用乙酸乙酯萃取(3x50mL)。合并的有机相用盐水洗涤，硫酸镁干燥。除去溶剂获得粗制化合物，其通过柱色谱纯化(MeOH/DCM=1/50)获得40mg白色固体状的标题化合物.
1HNMR(300MHz,CDCl3):δppm 7.41-7.31(2H,m),7.15-7.09(2H,m),7.08-7.03(2H,m),6.94-6.90(1H,m),5.70(1H,s),4.30-4.25(1H,q),1.59-1.57(3H,d);MS 1(ESI):335[M+H]+
实施例7
(5R)-5-甲基-3-(4-{[2-甲基-5-(甲氧基)苯基]氧基}苯基)-2,4-咪唑烷二酮
将N1-(4-{[2-甲基-5-(甲氧基)苯基]氧基}苯基)-D-丙氨酰胺(中间体16,118mg)溶于无水二氯甲烷(18mL)。在冰浴中冷却反应混合物。加入三乙胺0.327mL,2.350mmol)。随后加入三光气的无水二氯甲烷(46.5mg,0.157mmol)溶液(7mL)。在氩气下将反应物在0°C搅拌10分钟。加入饱和的NaHCO3水溶液(18mL)，水层用二氯甲烷萃取4次(4x15mL)。硫酸钠干燥后，真空除去溶剂。残余物通过硅胶色谱纯化(Companion系统,12g柱)，用梯度cHex/EOAc 100/0-60/40在20分钟内洗脱，随后用60/40洗脱30分钟，获得标题化合物(91mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 7.34-7.28(2H,m),7.15(1H,d),7.01-6.92(2H,m),6.68(1H,dd),6.53(1H,d),5.63(1H,s),4.25(1H,dd),3.74(3H,s),2.14(3H,s),1.56(3H,d);UPLC_B:0.79min,326[M+1]+
实施例8
(5R)-5-甲基-3-(4-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}苯基)-2,4-咪唑烷二酮
向N1-(4-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}苯基)-D-丙氨酰胺(中间体22,215mg)的无水二氯甲烷(15mL)中加入三乙胺(0.499mL,3.58mmol)，将反应混合物冷却至0°C。缓慢加入三光气(96mg,0.322mmol)的无水二氯甲烷溶液(5mL)，将反应混合物在同一温度下搅拌30分钟。反应用水淬灭(10mL)，二氯甲烷萃取(20mL)。有机层用硫酸钠干燥，过滤并蒸发，残余物通过快速色谱纯化(Biotage系统,SNAP柱)，在硅胶上使用梯度环己烷/乙酸乙酯(80/20-40/60)洗脱获得白色固体状的标题化合物(165mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 8.45(1H,s),7.32(2H,m),7.16(1H,d),7.05(2H,m),6.74(1H,d),6.52(1H,dd),4.25(1H,dd),3.77(3H,s),2.14(3H,s),1.35(3H,d);UPLC_B:RT 0.82min,327[M+H]+
实施例9
(5R)-5-甲基-3-(6-{[3-(1-甲基乙基)苯基]氧基}-3-吡啶基)-2,4-咪唑烷二 酮
Figure BDA00001749351301311
将N1-(6-{[3-(1-甲基乙基)苯基]氧基}-3-吡啶基)-D-丙氨酰胺(中间体26,35mg)溶于无水二氯甲烷(3mL)中，冰浴冷却反应混合物。加入三乙胺(98μl,0.701mmol)，随后滴加三光气在无水二氯甲烷中的溶液(13.88mg,0.047mmol，溶于1mL二氯甲烷)，将反应混合物在氩气下在0°C搅拌10分钟。加入饱和的碳酸氢钠水溶液(4mL)，水层用二氯甲烷萃取4次(4x5mL)。硫酸钠干燥后，真空除去溶剂。获得的残余物通过硅胶色谱纯化(Companion系统,2x4g硅胶柱)，使用梯度为环己烷/乙酸乙酯100/0-50/50，10分钟；50/50，20分钟。获得薄膜状的标题化合物(27mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 8.32(1H,d),7.78-7.75(1H,dd),7.36(1H,t),7.14(1H,d),7.05(1H,t),7.01-6.99(2H,m),6.55(1H,s),4.27(1H,q),2.96(1H,m),1.59(3H,d),1.30(6H,d);UPLC:0.78min,326[M+1]+
实施例10
(5R)-5-甲基-3-[6-({3-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}氧基)-3-吡啶基]-2,4-咪 唑烷二酮
Figure BDA00001749351301312
0°C下在5分钟内向N1-[6-({3-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}氧基)-3-吡啶基]-D-丙氨酰胺(中间体32,229mg)和三乙基胺(442mg,4.38mmol)的二氯甲烷溶液(20mL)中滴加三光气(216mg,0.73mmol)的二氯甲烷溶液(10mL)。在室温下搅拌所得混合物2小时。蒸馏溶剂，残余物用二氯甲烷(3次50mL)和水(50mL)分层。合并的有机层用盐水洗涤(3次10mL)，硫酸钠干燥，过滤并浓缩获得灰色固体，其通过硅胶色谱纯化(PE:EtOAc=2:1)获得白色固体状的标题化合物(120mg)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δppm 8.54(1H,s),8.15-8.14(1H,d),7.86-784(1H,dd),7.33-7.28(1H,t),7.13-7.10(1H,d),6.80-6.77(1H,dd),6.71-6.67(2H,m),4.64-4.58(1H,m),4.30-4.25(1H,q),1.37-1.35(3H,d),1.27-1.25(6H,d)。
MS 1(ESI):342[M+H]+
实施例11
(5R)-3-{6-[(2,5-二甲基苯基)氧基]-3-吡啶基}-5-甲基-2,4-咪唑烷二酮
Figure BDA00001749351301321
标题化合物以类似于实施例9的方式制备，使用N1-{6-[(2,5-二甲基苯基)氧基]-3-吡啶基}-D-丙氨酰胺(中间体36,48mg)代替N1-(6-{[3-(1-甲基乙基)苯基]氧基}-3-吡啶基)-D-丙氨酰胺，获得黄色粉末状的标题化合物(31mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 8.25(1H,d),7.74-7.71(1H,dd),7.17(1H,d),6.98-6.88(3H,m),6.16(1H,s),4.25(1H,q),2.32(3H,s),2.14(3H,s),1.56(3H,d);UPLC:0.77min,312[M+1]+
实施例12
(5R)-3-{6-[(2,3-二甲基苯基)氧基]-3-吡啶基}-5-甲基-2,4-咪唑烷二酮
将N1-{6-[(2,3-二甲基苯基)氧基]-3-吡啶基}-D-丙氨酰胺(中间体40,13mg)溶于无水二氯甲烷(2mL)，将反应混合物(在氩气下)在冰浴中冷却。加入三乙胺(38.1μl,0.273mmol)。随后滴加三光气在无水二氯甲烷中的溶液(5.41mg,0.018mmol,0.40当量溶于1mL DCM中)。在氩气中，将反应混合物在0°C搅拌10min。加入饱和的NaHCO3水溶液(3mL)，水层用二氯甲烷萃取4次(4x4mL)。硫酸钠干燥后，真空除去溶剂。残余物通过硅胶色谱纯化(Companion系统,4g硅胶柱)，使用梯度为环己烷/乙酸乙酯100:0-55:45，10分钟；55:45，20分钟。由此获得标题化合物(9mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 8.26(1H,d),7.75-7.54(2H,m),7.16-6.92(3H,m),5.63(1H,s),4.24(1H,m),2.34(3H,s),2.11(3H,s),1.60(3H,d);UPLC:0.70min,312[M+H]+
实施例13
(5R)-3-{6-[(2,6-二甲基苯基)氧基]-3-吡啶基}-5-甲基-2,4-咪唑烷二酮
Figure BDA00001749351301331
在一个50mL圆底烧瓶中将N1-{6-[(2,6-二甲基苯基)氧基]-3-吡啶基}-D-丙氨酰胺(中间体44,173.8mg)溶于二氯甲烷(5mL)获得黄色溶液。将反应混合物冷却至0°C。加入N，N-二甲基-4-吡啶胺(36.5mg,0.298mmol)、三乙胺(0.208mL,1.492mmol)和三光气(89mg,0.298mmol)。0°C下搅拌反应混合物。20分钟后真空蒸发溶剂获得黄色固体。该残余物通过硅胶色谱纯化(Biotage instrument,10g SNAP硅胶柱)，用环己烷/EtOAc2:1-1:3洗脱，20CV;随后用1:3环己烷/EtOAc洗脱5CV。收集的组分提供了无色油状的标题化合物(162mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)d ppm 8.26(1H,d),7.76(1H,dd),7.07-7.19(3H,m),6.95(1H,d),6.67(1H,br.s),4.32-4.22(1H,m),2.17(6H,s),1.57(3H,d);UPLC_s:0.80min,312[M+H]+。
实施例14
(5R)-3-{6-[(2-乙基苯基)氧基]-3-吡啶基}-5-甲基-2,4-咪唑烷二酮
Figure BDA00001749351301332
在一个50mL圆底烧瓶中将N1-{6-[(2-乙基苯基)氧基]-3-吡啶基}-D-丙氨酰胺(中间体48,170.0mg)溶于二氯甲烷(5mL)获得黄色溶液。将反应混合物冷却至0°C。加入N，N-二甲基-4-吡啶胺(35.7mg,0.292mmol)、三乙胺(0.203mL,1.460mmol)和三光气(87mg,0.292mmol)。0°C下搅拌反应混合物。20分钟后真空蒸发溶剂获得黄色固体。该残余物通过硅胶色谱纯化(Biotage instrument,10g SNAP硅胶柱)，用环己烷/EtOAc 2:1-1:3洗脱，20CV;随后用1:3环己烷/EtOAc洗脱5CV。收集的组分提供了无色油状的标题化合物(153.2mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 8.29(1H,d),7.76(1H,dd),7.36(1H,dd),7.31-7.20(2H,m),7.08(1H,dd),6.99(1H,d),6.68-6.52(1H,m),4.32-4.23(1H,m),2.62(2H,q),1.57(3H,d),1.26-1.18(3H,m);UPLC_B:0.76mins,312[M+H]+。
实施例15
(5R)-5-甲基-3-(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)-2,4-咪唑烷 二酮
Figure BDA00001749351301341
向N1-(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)-D-丙氨酰胺(中间体52,255mg)的无水二氯甲烷(15mL)溶液中加入TEA(0.590mL,4.23mmol)，将反应混合物冷却至0°C。缓慢加入三光气(113mg,0.381mmol)的无水二氯甲烷(DCM)(5mL)溶液，将反应混合物在同一温度下搅拌30分钟。用水(10mL)淬灭反应，二氯甲烷萃取(20mL)。有机层用硫酸钠干燥。过滤并蒸发，残余物通过硅胶色谱纯化(Biotage系统,10g SNAP柱)，使用梯度为环己烷/乙酸乙酯70/30-30/70洗脱，获得白色固体状的标题化合物(172mg,0.525mmol)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 8.54(1H,br.s),8.13(1H,d),7.81-7.86(1H,m),7.17(1H,d),7.09(1H,d),6.79(1H,d),6.63(1H,dd),4.27(1H,q),3.77(3H,s),2.15(3H,s),1.37(3H,d);UPLC_B:0.75min,328[M+1]+
实施例16
(5R)-5-甲基-3-(6-{[2-甲基-5-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)-2,4-咪唑烷 二酮
Figure BDA00001749351301351
标题化合物以类似实施例7的方式制备，用N1-(6-{[2-甲基-5-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)-D-丙氨酰胺(中间体56,118mg)代替N1-(4-{[2-甲基-5-(甲氧基)苯基]氧基}苯基)-D-丙氨酰胺获得标题化合物(78mg)
1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 8.26(1H,d),7.73(1H,dd),7.17(1H,d),6.94(1H,d),6.74(1H,dd),6.64(1H,d),5.88(1H,s),4.36-4.14(1H,m),3.82-3.71(3H,s),2.10(3H,s),1.57(3H,d);UPLC_B:0.71min,328[M+1]+
实施例17
(5R)-5-甲基-3-(6-{[2-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)-2,4-咪唑烷 二酮
Figure BDA00001749351301352
标题化合物以类似实施例9的方式制备，用N1-(6-{[2-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)-D-丙氨酰胺(中间体63,200mg)代替N1-(6-{[3-(1-甲基乙基)苯基]氧基}-3-吡啶基)-D-丙氨酰胺获得标题化合物(184mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 8.28(1H,d),7.77(1H,m),7.23(1H,m),6.98(1H,d),6.80-6.73(2H,m),6.49(1H,s),4.29-4.27(1H,m),3.89(3H,s),2.09(3H,s),1.58(3H,d);UPLC_B:0.72min,328[M+1]+
实施例18
(5R)-5-乙基-3-(4-{[3-(甲氧基)苯基]氧基}苯基)-2,4-咪唑烷二酮
向D-2-氨基丁酸(60.4mg,0.586mmol)的二氯甲烷溶液(1mL)中加入DIPEA(0.236mL,1.352mmol)和N-甲基-N-三氟乙酰胺(269mg,1.352mmol)，将混悬液在40°C下在密闭的容器中振荡2.5小时，产生视觉透明的溶液(溶液1)。
向Boc-酐(138mg,0.631mmol)的二氯甲烷溶液(1mL)中加入DMAP(55.1mg,0.451mmol)，随后加入4-{[3-(甲氧基)苯基]氧基}苯胺(97mg,0.451mmol)的二氯甲烷溶液(1mL)。搅拌混合物10分钟。通过注射器将由此获得的棕色溶液加入到溶液1中，在35°C振荡，该温度下继续振荡2小时。随后将溶液在室温下保持约64小时，加入浓盐酸(约0.8mL)，将该异质混合物在100°C加热振荡2小时，使DCM通过玻璃毛细管蒸馏出来。冷却至室温后，残余物用水稀释(约3mL)，二氯甲烷萃取(2次约2mL)。真空浓缩二氯甲烷萃取物。残余物通过硅胶色谱纯化(Biotage系统,10g柱)，使用梯度cHex/EtOAc 95/5-0/100洗脱获得粘性油，将其溶于Et2O(约0.7mL)和cHex(约0.1mL)，保持过夜。从少量的棕色油中倒出分层的淡棕色溶液。蒸发溶剂启动结晶。干燥所得产物，用Et2O研磨(2次约0.5mL)，干燥后获得固体状的标题化合物(28mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 7.40-7.33(2H,m),7.28-7.23(1H,m),7.15-7.07(2H,m),6.75-6.69(1H,m),6.67-6.61(2H,m),5.64(1H,br.s),4.25-4.18(1H,m),3.81(3H,s),2.10-1.88(2H,m),1.09(3H,t);LC-MS_A:2.43min,325[M-H]-
实施例19
(5R)-5-乙基-3-(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)-2,4-咪唑 烷二酮
方法A
向(2R)-2-氨基-N-(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)丁酰胺(中间体65,120mg)的无水二氯甲烷溶液中(8mL)加入TEA(0.265mL,1.903mmol)，将反应混合物冷却至0°C。缓慢加入三光气(50.8mg,0.171mmol)的无水二氯甲烷(DCM)溶液(2mL)，将反应混合物在同一温度下搅拌30分钟。反应用水淬灭(2mL)，分离两相。有机层用硫酸钠干燥。过滤并蒸发，残余物通过硅胶色谱纯化(Biotage系统,10g SNAP柱)，使用梯度环己烷/乙酸乙酯80/20-环己烷/乙酸乙酯50/50洗脱，获得白色固体状的标题化合物(108mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 8.61(1H,s),8.12(1H,d),7.82(1H,dd),7.17(1H,d),7.08(1H,d),6.79(1H,d),6.63(1H,dd),4.25-4.18(1H,m),3.77(3H,s),2.15(3H,s),1.89-1.62(2H,m),0.95(3H,t):UPLC_B:0.79min,342[M+H]+。
方法B
将(2R)-2-氨基-N-(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)丁酰胺·2HCl(中间体65b)(750g)混悬于二氯甲烷(7.5L)和7.5%碳酸钠水溶液(6L)中，搅拌直到溶解。分离两相，有机相用NaCl 10%水溶液洗涤(6L)，45°C下真空浓缩至约3.75L，通过共沸混合物除去水(水约0.05%)。添加二氯甲烷至15L，随后加入Et3N(1.35L)。将该溶液冷却至0°C。
将三光气(201g)溶于二氯甲烷(4.5L)，将该溶液在约10分钟内加入到上述溶液中，维持内部温度为约10°C。管线用二氯甲烷洗涤(375mL)。后处理：有机混合物用28%的苹果酸水溶液洗涤(7.5L)，随后用2%w/w的碳酸钠水溶液(7.5L)洗涤，最终使用20%NaCl水溶液(7.5L)洗涤。浓缩有机相至最小体积(约3.75L)，加入甲苯(2.25L)，浓缩至最小体积(3L)。再次加入甲苯(1L)，浓缩至小体积(3L)，除去所有的DCM。获得混悬液，搅拌3小时后过滤并用甲苯洗涤(2x1L)。45°C下真空干燥固体至恒重(471g)获得标题化合物。固体如下重结晶：将459g标题化合物混悬于异丙醇(1400mL)，加热直至完全溶解(~70°C)，随后冷却至20°C，搅拌3小时，随后过滤并用IPA洗涤(2x700mL)。45°C下真空干燥固体至恒重(412g)的标题化合物。固体进一步如下研磨：20°C下将412g标题化合物混悬于甲苯(1200mL)，搅拌2小时，随后过滤并用甲苯洗涤(2x420mL)。45°C下真空干燥固体至恒重(404g)，获得白色固体状的标题化合物。
13C-NMR(150.81MHz,DMSO-d6):δppm 173.7,162.7,158.6,155.9,153.1,145.8,138.9,131.1,124.7,122.6,113.0,111.3,104.9,58.0,55.9,24.9,16.0,9.3.
手性色谱法:(柱类型:Chiralpack OJ-H 4,6mm×250mm,5μm;柱温40°C;流动相:正己烷/乙醇比例为55/45%v/v;流速0,8mL/min;检测器UV DAD220nm)11.26分钟,对映体过量:99.58%。
实施例20
(5S)-5-乙基-3-(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)-2，4-咪唑烷 二酮
Figure BDA00001749351301381
向(2S)-2-氨基-N-(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)丁酰胺(中间体67,43mg)的无水二氯甲烷(3mL)中加入三乙胺(0.095mL,0.682mmol)。冰浴冷却反应混合物。随后滴加三光气(18.21mg,0.061mmol)的二氯甲烷溶液(0.750mL)，将反应混合物在0°C下搅拌30分钟。反应用水淬灭(10mL)。分离有机相，硫酸钠干燥，过滤并蒸发.残余物通过快速硅胶色谱纯化，使用柱SNAP 10g，环己烷/乙酸乙酯80/20-40/60洗脱获得白色固体状的标题化合物(37.2mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO):δppm 8.60(1H,s),8.12(1H,d),7.82(1H,dd),7.16(1H,d),7.08(1H,d),6.78(1H,d),6.63(1H,dd),4.21–4.19(1H,m),3.76(3H,s),2.14(3H,s),1.84–1.66(2H,m),0.95(3H,t):UPLC:0.76min,342[M+H]+
实施例21
(5R)-5-乙基-3-(6-{[3-(1-甲基乙基)苯基]氧基}-3-吡啶基)-2,4-咪唑烷二 酮
Figure BDA00001749351301391
将(2R)-2-氨基-N-(6-{[3-(1-甲基乙基)苯基]氧基}-3-吡啶基)丁酰胺(中间体70,930mg)溶于无水二氯甲烷(100mL)。将反应混合物在氩气下在冰浴中冷却。加入三乙胺(2.482mL,17.81mmol)。随后滴加三光气的无水二氯甲烷溶液(352mg,1.187mmol溶于40mL二氯甲烷)。将反应混合物在氩气下在0°C搅拌10分钟。加入饱和的NaHCO3水溶液(100mL)，水层用二氯甲烷萃取4次(4x80mL)。硫酸钠干燥后，真空除去溶剂。获得的残余物通过硅胶色谱纯化(Companion系统,120g硅胶柱)，使用环己烷/乙酸乙酯100/0-55/45梯度洗脱。获得米色粉末状的标题化合物(5R)-5-乙基-3-(6-{[3-(1-甲基乙基)苯基]氧基}-3-吡啶基)-2,4-咪唑烷二酮(768mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 8.27(1H,d),7.74(1H,dd),7.32(1H,t),7.11(1H,d),7.01(1H,t),6.98-6.95(2H,m),6.40(1H,s),4.18(1H,t),2.96-2.89(1H,m),1.99-1.97(1H,m),1.93-1.63(1H,m),1.27(3H,s),1.25(3H,s),1.05(3H,t);UPLC:0.81min,340[M+H]+。
实施例22
5,5-二甲基-3-(4-{[3-(甲氧基)苯基]氧基}苯基)-2,4-咪唑烷二酮
Figure BDA00001749351301392
0°C下向2-甲基-N1-(4-{[3-(甲氧基)苯基]氧基}苯基)丙氨酰胺(中间体72,1.33g)和三乙基胺(3.70mL,26.6mmol)的无水二氯甲烷溶液(80mL)中滴加三光气(600mg,2.022mmol)的无水二氯甲烷溶液(20mL)，将反应混合物在同一温度下搅拌30分钟。反应物用饱和的氯化铵水溶液淬灭(100mL)，分离两相。水层用二氯甲烷萃取(100mL)，合并两次的有机相，硫酸钠干燥。过滤并蒸发.残余物通过硅胶色谱纯化(Biotage系统,100gSNAP柱)，使用环己烷/乙酸乙酯80/20-40/60梯度洗脱获得白色固体状的标题化合物(950mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 8.54(1H,br.s),7.34-7.40(2H,m),7.31(1H,t),7.09(2H,m),6.73-6.79(1H,m),6.65(1H,t),6.56-6.62(1H,m),3.75(3H,s),1.40(6H,s);UPLC_B-MS:0.79min,327[M+H]+
标题化合物也可用另一种方法获得。向2-氨基异丁酸(120mg,1.164mmol)的二氯甲烷溶液中(2mL)加入DIPEA(0.467mL,2.68mmol)和N-甲基-N-三氟乙酰胺(533mg,2.68mmol)，将混悬液在封闭管中在40°C振荡3.5小时，随后在50°C振荡1小时。产生透明溶液(溶液1)。
冰浴冷却条件下向Boc2O(406mg,1.862mmol)的二氯甲烷溶液(8mL)中加入DMAP(163mg,1.338mmol)，随后用注射器缓慢(约5min)加入4-{[3-(甲氧基)苯基]氧基}苯胺(288mg,1.338mmol)的二氯甲烷溶液(2mL)。室温下搅拌混合物15分钟。将由此获得的棕色溶液通过注射器加入到溶液1中，继续搅拌1小时。真空蒸发挥发物。
加入浓HCl(约2mL)，将该异质混合物在100°C加热2小时，冷却至室温后，残余物用水稀释(约10mL)，二氯甲烷萃取(3次约5mL)。真空浓缩二氯甲烷萃取物。残余物通过硅胶色谱纯化(Biotage系统,25g柱)，使用梯度cHex/EtOAc 95/5-0/100洗脱。收集高纯度组分，Et2O研磨(2次约0.5mL)，干燥获得固体状的标题化合物(40mg)
合并含有产物但纯度较低的组分(TLC)获得0.14g棕色物质。其再次用硅胶色谱纯化(Biotage系统,95/5-40/60)，从Et2O(约2mL)中结晶，用Et2O洗涤(2次约0.5mL)。真空干燥后获得另一部分标题化合物(15mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 7.43-7.35(2H,m),7.28-7.24(1H,m),7.11(2H,d),6.75-6.69(1H,m),6.67-6.61(2H,m),5.59-5.66(1H,br,s),3.81(3H,s),1.61-1.54(6H,s);UPLC:0.69min,325[M-H]-
实施例23
3-{4-[(2,3-二甲基苯基)氧基]苯基}-5,5-二甲基-2,4-咪唑烷二酮
Figure BDA00001749351301401
在氮气气氛下将N1-{4-[(2,3-二甲基苯基)氧基]苯基}-2-甲基丙氨酰胺(中间体76,68mg)溶于2mL乙酸乙酯中。加入TEA(0.070mL,0.50mmol)，随后加入三光气(33.8mg,0.11mmol)在1.0mL乙酸乙酯中的溶液。搅拌5分钟后，加入DMAP(13.9mg,0.11mmol)，将反应混合物在室温下搅拌10分钟。用饱和的NaHCO3溶液淬灭后，混合物用乙酸乙酯萃取2次，收集的有机相用硫酸钠干燥，过滤并蒸发。获得的残余物通过硅胶色谱纯化，用cHex/EtOAc 100/0-0/100梯度洗脱。获得标题化合物(74mg)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 8.49(1H,br.s),7.38-7.28(2H,m),7.22-7.05(2H,m),6.99-6.87(2H,m),6.88-6.81(1H,m),2.31(3H,s),2.10(3H,s),1.41(6H,s);UPLC:0.74min,325[M+H]+。
实施例24
3-{6-[(2-乙基苯基)氧基]-3-吡啶基}-5,5-二甲基-2,4-咪唑烷二酮
Figure BDA00001749351301411
在一个50mL圆底烧瓶中，将N1-{6-[(2-乙基苯基)氧基]-3-吡啶基}-2-甲基丙氨酰胺(中间体78,67.1mg)溶于二氯甲烷(5mL)获得淡黄色的溶液。反应混合物在0°C冷却，加入N，N-二甲基-4-吡啶胺(13.28mg,0.109mmol)、三乙胺(0.076mL,0.544mmol)和三光气(32.3mg,0.109mmol)。将反应混合物在0°C下搅拌20分钟后，真空蒸发反应混合物获得黄色固体，其通过硅胶色谱纯化(Biotage系统,10g SNAP柱)，用环己烷/EtOAc梯度洗脱，2:1-1:3，20CV;随后1:3，5CV。收集的组分获得白色固体状的标题化合物(60.9mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 8.30(1H,d),7.78(1H,dd),7.33-7.39(1H,m),7.20-7.31(2H,m),7.06-7.12(1H,m),6.98(1H,d),6.25(1H,br.s),2.62(2H,q),1.58(6H,s),1.22(3H,t);UPLC_B:0.80min,326[M+H]+。
实施例25
3-{6-[(2,6-二甲基苯基)氧基]-3-吡啶基}-5,5-二甲基-2,4-咪唑烷二酮
在一个50mL圆底烧瓶中，N1-{6-[(2,6-二甲基苯基)氧基]-3-吡啶基}-2-甲基丙氨酰胺(中间体80,144.4mg)溶于二氯甲烷(5mL)获得淡黄色的溶液。反应混合物在0°C冷却，加入N，N-二甲基-4-吡啶胺(27.7mg,0.227mmol)、三乙胺(0.158mL,1.134mmol)和三光气(67.3mg,0.227mmol)。将反应混合物在0°C下搅拌20分钟后，真空蒸发反应混合物获得黄色固体，其通过硅胶色谱纯化(Biotage系统,10g SNAP柱)，用环己烷/EtOAc梯度洗脱，2:1-1:3，20CV;随后1:3，5CV。收集的组分获得白色固体状的标题化合物(139.7mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)):δppm 8.30-8.26(1H,m),7.78(1H,dd),7.20-7.07(3H,m),6.94(1H,d),6.33(1H,br.s),2.17(6H,s),1.58(6H,s):UPLC_s:0.84min,326[M+H]+。
实施例26
(5R)-5-(1-甲基乙基)-3-(4-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}苯基)-2,4-咪 唑烷二酮
Figure BDA00001749351301422
向N1-(4-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}苯基)-D-缬氨酰胺(中间体83,65mg)的无水二氯甲烷溶液中(10mL)加入TEA(0.138mL,0.990mmol)，将反应混合物冷却至0°C。缓慢加入三光气(26.4mg,0.089mmol)的无水二氯甲烷(3mL)溶液，将反应混合物在0°C下搅拌1小时。反应用水(2mL)和饱和的氯化铵水溶液(5mL)淬灭，用二氯甲烷萃取(2次10mL)。有机层用硫酸钠干燥。过滤并蒸发，残余物用快速硅胶色谱纯化(Biotage系统,10gSNAP柱)，使用环己烷/EtOAc 100/0-60/40梯度洗脱，获得白色固体状标题化合物(55mg)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:8.52(1H,s),7.29(2H,m),7.16(1H,d),7.05(2H,m),6.74(1H,d),6.52(1H,dd),4.13(1H,dd),3.77(3H,s),2.14(4H,s),1.02(3H,d),0.88(3H,d);UPLC_B:0.91min,355[M+H]+。
实施例27
(5R)-5-甲基-3-(2-{[3-(1-甲基乙基)苯基]氧基}-5-嘧啶基)-2,4-咪唑烷二 酮
Figure BDA00001749351301431
向N1-(2-{[3-(1-甲基乙基)苯基]氧基}-5-嘧啶基)-D-丙氨酰胺(中间体87,100mg)的二氯甲烷溶液(30mL)中加入三光气(40mg,0.133mmol)和三乙胺(51mg,0.5mmol)。将所得混合物在0°C搅拌30分钟，加入水(30mL)。用二氯甲烷萃取(3次30mL)，合并的有机层用硫酸钠干燥，蒸发获得标题化合物(100mg)。
1HNMR(400MHz,CDCl3):δppm 8.62(2H,s),7.26-7.30(1H,t),7.08-7.05(2H,m),6.99-6.92(2H,m),4.22-4.20(1H,d),2.88-2.84(1H,m),1.47-1.45(3H,d),1.19-1.18(6H,d);MS_2(ESI):326[M+H]+。
实施例28
(5R)-5-乙基-3-(2-{[3-(乙氧基)-4-甲基苯基]氧基}-5-嘧啶基)-2,4-咪唑烷 二酮
Figure BDA00001749351301432
向((2R)-2-氨基-N-(2-{[3-(乙氧基)-4-甲基苯基]氧基}-5-嘧啶基)丁酰胺(中间体94,62mg)的无水二氯甲烷(4mL)中加入TEA(158μl,1.13mmol)，将反应混合物冷却至0°C。滴加三光气(25.2mg,0.085mmol)的无水二氯甲烷(2mL)溶液，反应混合物在0°C搅拌20min。真空蒸发反应混合物。获得的残余物用硅胶色谱纯化(Companion系统,12g硅胶柱)，使用环己烷/EtOAc 100/0-50/50洗脱20分钟，然后环己烷/EtOAc 50/50洗脱15分钟，获得白色固体状标题化合物(40mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 8.68(1H,s),7.16(1H,d),6.82-6.59(2H,m),6.29(1H,s),4.23(1H,t),4.12(1H,q),2.22(3H,s),2.04(2H,s),2.02–1.95(1H,m),1.96-1.80(1H,m),1.26(3H,t),1.06(3H,t);UPLC:0.72min,357[M+H]+
实施例29
(5R)-5-(1,1-二甲基乙基)-3-(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶 基)-2,4-咪唑烷二酮
Figure BDA00001749351301441
将3-甲基-N1-(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)-D-缬氨酰胺(中间体97,5.2mg)溶于无水二氯甲烷(0.5mL)。冰浴冷却反应混合物。在0°C下加入三乙胺(12.6μl,0.091mmol)。随后滴加0.5mL三光气的无水二氯甲烷(2.47mg,0.0083mmol)溶液。将反应混合物在氩气下，在0°C搅拌20分钟。加入水，水层用二氯甲烷萃取4次。硫酸钠干燥后，真空除去溶剂。获得的残余物通过快速硅胶色谱纯化(Companion系统,4g硅胶柱)，使用环己烷/乙酸乙酯100/0-60/40洗脱15分钟，随后用60/40洗脱10分钟。获得标题化合物(5.9mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 8.24(1H,d),7.69(1H,dd),7.17(1H,d),7.00(1H,d),6.66(2H,m),6.46(1H,br s),3.89(1H,s),3.82(3H,s),2.23(3H,s),1.13(9H,s);UPLC_ipqc:1.11min,370[M+H]+
实施例30
(5R)-5-乙基-5-甲基-3-(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)-2,4- 咪唑烷二酮
Figure BDA00001749351301451
向N1-(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)-D-异缬氨酰胺(中间体99,42mg)的无水二氯甲烷(6mL)加入TEA(0.089mL,0.638mmol)，将反应混合物冷却至0°C。滴加三光气(17.03mg,0.057mmol)的无水二氯甲烷(1.500mL)溶液，将反应混合物在该温度下搅拌1小时，随后再次滴加三光气(17.03mg,0.057mmol)的无水二氯甲烷(1.500mL)溶液。反应物搅拌30分钟，维持在冰浴中，用水(10mL)淬灭，混合物温热至室温，用二氯甲烷萃取(3x7mL)。合并的有机层用硫酸钠干燥。过滤并蒸发，残余物用快速硅胶色谱纯化，使用10g SNAP柱和环己烷/EtOAc为洗脱剂80/20-50/50洗脱(Biotage系统)。获得白色固体状标题化合物(24mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 8.57(1H,s),8.13(1H,d),7.83(1H,dd),7.17(1H,d),7.07(1H,d),6.79(1H,d),6.62(1H,dd),3.76(3H,s),2.14(3H,s),1.57-1.86(2H,m),1.39(3H,s),0.86(3H,t);UPLC_B:0.83min,354[M-H]+。
实施例31
7-(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)-5,7-二氮杂螺[3.4]辛烷 -6,8-二酮
Figure BDA00001749351301452
向1-氨基-N-(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)环丁烷甲酰胺(中间体102,60mg)的无水二氯甲烷(2mL)溶液中加入TEA(0.128mL,0.916mmol)。将反应混合物在冰浴中冷却，随后滴加三光气(24.47mg,0.082mmol)的无水二氯甲烷(0.500mL)溶液。将混合物在0°C搅拌30分钟。反应维持在0°C，用水淬灭(10mL)。混合物用二氯甲烷萃取(3x4mL)。合并的有机层用硫酸钠干燥。过滤并蒸发，残余物用快速硅胶色谱纯化，使用25g SNAP柱和环己烷/EtOAc为洗脱剂从100:0-50/50洗脱。获得白色固体状标题化合物(52mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 8.96(1H,s),8.14(1H,d),7.84(1H,dd),7.17(1H,d),7.08(1H,d),6.79(1H,d),6.63(1H,dd),3.77(3H,s),2.61-2.72(2H,m),2.42-2.26(3H,m),2.15(3H,s),1.82-2.02(1H,m);UPLC:0.72min,354[M+H]+。
实施例32
6-(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)-4,6-二氮杂螺[2.4]庚烷 -5,7-二酮
Figure BDA00001749351301461
向1-氨基-N-(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)环丙烷甲酰胺(中间体105,58mg)的无水二氯甲烷(2mL)溶液中加入TEA(0.129mL,0.925mmol)，将反应混合物在冰浴中冷却。滴加三光气(24.72mg,0.083mmol)的无水二氯甲烷(0.500mL)溶液，将反应物在0度搅拌30分钟，随后再次加入三光气(24.72mg,0.083mmol)的无水二氯甲烷(0.500mL)溶液。将反应物在0度搅拌30分钟，维持在冰浴中，用水(10mL)淬灭，分离有机层，用硫酸钠干燥。过滤并蒸发，残余物用快速硅胶色谱纯化，使用25gSNAP柱和环己烷/EtOAc为洗脱剂从100:0-50/50洗脱。获得白色固体状标题化合物(20mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 8.71(1H,s),8.18(1H,d),7.88(1H,dd),7.18(1H,d),7.09(1H,d),6.79(1H,d),6.64(1H,dd),3.77(3H,s),2.15(3H,s),1.20-1.47(4H,m);UPLC:0.68min,340[M+H]+。
实施例33
5,5-二甲基-3-(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)-2,4-咪唑烷 二酮
实施例34
(5R)-5-(1-甲基乙基)-3-(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶 基)-2,4-咪唑烷二酮
实施例35
3-(6-{[2-(1,1-二甲基乙基)苯基]氧基}-3-吡啶基)-5,5-二甲基-2,4-咪唑烷 二酮
Figure BDA00001749351301472
实施例36
3-(2-{[2-(1,1-二甲基乙基)苯基]氧基}-5-嘧啶基)-5,5-二甲基-2,4-咪唑烷 二酮
Figure BDA00001749351301473
实施例37
(5R)-5-乙基-5-甲基-3-(2-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-5-嘧啶基)-2,4- 咪唑烷二酮
Figure BDA00001749351301474
实施例38
(5R)-5-乙基-3-(2-{[3-(乙氧基)-4-甲基苯基]氧基}-5-嘧啶基)-5-甲基-2,4- 咪唑烷二酮
实施例39
4-{[5-(4,4-二甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基)-2-吡啶基]氧基}-2-(1-甲基乙 基)苄腈
Figure BDA00001749351301481
将4-羟基-2-(1-甲基乙基)苄腈(30mg)溶于1mL二甲基甲酰胺。加入3-(6-氟-3-吡啶基)-5,5-二甲基-2,4-咪唑烷二酮(中间体106,41.5mg)和碳酸钾(51.4mg,0.372mmol)。将反应混合物在120°C搅拌40小时。加入一些乙醚(4mL)和水(4mL)。水层用乙醚萃取4次。收集的有机相用硫酸钠干燥，蒸发获得残余物，其通过质量指示的纯化(方法H)。组分蒸发后，加入饱和的NaHCO3溶液(3mL)，用二氯甲烷萃取(4次4mL)，蒸发获得标题化合物(13mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 8.32(1H,d),7.88(1H,dd),7.66(1H,d),7.17(1H,dd),7.08(2H,m);5.57(s,1H),3.40(1H,m),1.57(6H,s),1.33(6H,d);UPLC_ipqc:1.01min,365[M+H]+。
实施例40
5,5-二甲基-3-[6-({3-[(三氟甲基)氧基]苯基}氧基)-3-吡啶基]-2,4-咪唑烷 二酮
Figure BDA00001749351301482
将3-[(三氟甲基)氧基]苯酚(19.95mg,0.112mmol)溶于1mL二甲基甲酰胺。加入3-(6-氟-3-吡啶基)-5,5-二甲基-2,4-咪唑烷二酮(中间体106,25mg)、碳酸钾(31.0mg,0.224mmol)。将反应物在120°C下搅拌22小时，加入一些乙醚(4mL)和水(4mL)。水层用乙醚萃取4次。收集的有机相用硫酸钠干燥，蒸发获得残余物，其通过质量指示的纯化(方法I)。组分蒸发后，加入饱和的NaHCO3溶液(3mL)，用二氯甲烷萃取(4次4mL)，蒸发获得白色固体状的标题化合物(23mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 8.30(1H,d),7.83(1H,dd),7.42(1H,t),7.06(4H,m),6.36(s br,1H),1.55(6H,s);UPLC_ipqc:1.01min,382[M+H]+
实施例41
3-{6-[(4-氟-3-甲基苯基)氧基]-3-吡啶基}-5,5-二甲基-2,4-咪唑烷二酮
Figure BDA00001749351301491
标题化合物以类似于实施例39的方法制备，用4-氟-3-甲基苯酚(11.30mg,0.090mmol)代替4-羟基-2-(1-甲基乙基)苄腈。使用质量指示的纯化方法J(代替方法H)。获得白色固体状的标题化合物(17mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 8.26(1H,d),7.77(1H,dd),7.03-6.92(4H,m),5.50(1H,s br),2.29(3H,s),1.57(6H,s);UPLC_ipqc:0.96min,330[M+H]+。
实施例42
3-{6-[(4-氟-2-甲基苯基)氧基]-3-吡啶基}-5,5-二甲基-2,4-咪唑烷二酮
Figure BDA00001749351301492
标题化合物以类似于实施例40的方法制备，用4-氟-2-甲基苯酚(14.13mg,0.112mmol)代替3-[(三氟甲基)氧基]苯酚，获得白色固体状的标题化合物(13mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 8.26(1H,d),7.77(1H,dd),7.03-6.93(4H,m),5.50(1H,s br),2.29(3H,s),1.57(6H,s);UPLC_ipqc:0.94min,330[M+H]+。
实施例43
4-{[5-(4,4-二甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基)-2-吡啶基]氧基}-3-乙基苄腈
Figure BDA00001749351301501
将3-乙基-4-羟基苄腈(中间体115,70mg)溶于2mL二甲基甲酰胺。加入3-(6-氟-3-吡啶基)-5,5-二甲基-2,4-咪唑烷二酮(中间体106,102mg)和碳酸钾(126mg,0.915mmol)。将反应混合物在120°C搅拌96小时。加入一些乙醚(4mL)和水(4mL)。水层用乙醚萃取4次。收集的有机相用硫酸钠干燥，蒸发获得残余物，其通过快速硅胶色谱纯化(companion系统,12gSi柱)，使用环己烷/乙酸乙酯100/0、随后100/0-55/45洗脱。蒸发获得白色固体状的标题化合物(54mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 8.27(1H,d),7.87(1H,dd),7.62(1H,d),7.55(1H,dd),7.16(1H,dd);6.40(1H,s),5.58(1H,s),2.65(2H,q),1.56(6H,s),1.21(3H,t);UPLC_ipqc:0.97min,349[M-H]-。
以下化合物使用前述的反应流程通过上述方法制备，将3-(6-氟-3-吡啶基)-5,5-二甲基-2,4-咪唑烷二酮(中间体106)与适当取代的苯酚反应12-96小时。某些最终产物通过快速色谱纯化(硅胶或NH柱;环己烷/EtOAc或其他适当的溶剂系统)，分离为游离碱的形式；或者，某些产物通过质量指示的纯化方法纯化(方法K色谱酸性条件:柱=Waters Sunfire OBD(150mmx30mm,5μm颗粒)，室温;流动相=A(水+0.1%甲酸水溶液),B(乙腈+0.1%甲酸的乙腈溶液);流速=40mL/min;梯度=1%(B)-100%(B)，8.5min；100%(B)，6.5min；0.5min内回到1%(B))，含有产物的组分用NaHCO3碱化，用适当的有机溶剂萃取，干燥并浓缩获得游离碱。最后在1个例子中(实施例77)进行额外的SCX纯化步骤(DCM和MeOH作为溶剂)。
Figure BDA00001749351301502
Figure BDA00001749351301511
实施例48
4-{[5-(4,4-二甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基)-2-吡啶基]氧基}-3-(三氟甲 基)苄腈
Figure BDA00001749351301512
将N-{[(6-{[4-氰基-2-(三氟甲基)苯基]氧基}-3-吡啶基)氨基]羰基}-2-甲基丙氨酸甲基酯(中间体165,49mg)的MeOH溶液(10mL)加热回流10分钟。向热反应混合物中加入甲醇钠(4mg)，继续回流2.5小时。蒸干溶剂，将获得的残余物通过快速色谱纯化(companion系统,12gSi柱)，使用环己烷/EtOAc从70/30到50/50洗脱获得两批产物。第二批产物用质量指示的纯化方法(方法K)再次纯化。获得所需的化合物，其与第一批合并，获得白色固体状的标题化合物(8.2mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 8.30(1H,d),8.02(1H,s),7.90-7.99(1H,m),7.87(1H,d),7.46(1H,d),7.21(1H,d),5.68(1H,br.s.),1.59(6H,s);UPLC_ipqc:0.98min,391[M+H]+。
以下化合物使用前述的反应流程通过上述方法制备，用适当的脲代替N-{[(6-{[4-氰基-2-(三氟甲基)苯基]氧基}-3-吡啶基)氨基]羰基}-2-甲基丙氨酸甲基酯(中间体165)。最终产物通过快速色谱纯化(硅胶柱;环己烷/EtOAc或其他适当的溶剂系统)，分离为游离碱的形式。
Figure BDA00001749351301521
实施例51
4-{[5-(4,4-二甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基)-2-嘧啶基]氧基}-2-乙基苄腈
Figure BDA00001749351301522
0°C下向三光气(20.8mg,0.07mmol)的EtOAc溶液(0.5mL)中搅拌滴加4-[(5-氨基-2-嘧啶基)氧基]-2-乙基苄腈(中间体144,35mg)/TEA(0.037mL,0.27mmol)的EtOAc溶液(1.0mL)。随后在0°C缓慢加入2-甲基丙氨酸甲基酯盐酸盐(中间体107,33.6mg)/TEA(0.073mL,0.52mmol)的1.0mL EtOAc溶液，在该温度下搅拌反应混合物10分钟。混合物用pH3的缓冲水溶液淬灭，调节至pH5-6，用EtOAc萃取(3次)。收集的有机相用Na2SO4干燥，过滤并蒸发。将获得的粗产物溶于MeOH(1.0mL)，加入3.0mg(0.056mmol)甲醇钠，将混合物在60°C加热5分钟。冷却至室温后，蒸发混合物，用EtOAc稀释，NH4Cl洗涤(饱和水溶液)，水相用EtOAc萃取(3次)。收集的有机相用Na2SO4干燥，过滤并蒸发。获得的粗产物加载到硅胶柱上，用环己烷/EtOAc洗脱(70:30-60:40环己烷/EtOAc，20CV，维持在60:40，20CV)获得11.5mg标题化合物。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):δppm 8.77(2H,br.s),7.69(1H,d),7.21(1H,br.s),7.16(1H,d),5.89(1H,br.s),2.91(2H,q),1.60(6H,s),1.33(3H,t);UPLC_ipqc:0.92min,352[M+H]+。
下列化合物使用前述反应流程通过上述方法制备，用适当的苯胺替换4-[(5-氨基-2-嘧啶基)氧基]-2-乙基苄腈(中间体144)。最终产物用快速色谱纯化(硅胶或NH柱;环己烷/EtOAc,二氯甲烷/甲醇或其他适当的溶剂系统)；或者某些产物通过质量指示的纯化进行纯化，含有产物的组分用NaHCO3碱化，用适当的有机溶剂萃取，干燥并浓缩获得所需的产物。
Figure BDA00001749351301541
实施例60
4-({5-[(4R)-4-乙基-4-甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-吡啶基}氧 基)-2-[(1-甲基乙基)氧基]苄腈
在一个2-颈圆底烧瓶中，将双(三氯甲基)碳酸酯(174.5mg,0.59mmol)溶于DCM(10mL)，在其中加入N,N-二乙胺(0.651mL,3.74mmol)。获得的溶液冷却至0°C。在一单独容器中，将4-[(5-氨基-2-吡啶基)氧基]-2-[(1-甲基乙基)氧基]苄腈(中间体156,145.4mg)溶于DCM(10mL)，将获得的溶液在5分钟内滴加到冷却的双(三氯甲基)碳酸酯溶液中。滴加完毕后检查4-[(5-氨基-2-吡啶基)氧基]-2-[(1-甲基乙基)氧基]苄腈完全消失，向反应混合物中加入N,N-二乙胺(0.280mL,1.60mmol)和(2R)-2-甲基-1-(甲氧基)-1-氧代-2-丁基氯化铵的DCM溶液(5mL)(Tetrahedron 1988,44(15),4793-6,179.2mg,1.07mmol)，搅拌25分钟。反应混合物用10mL水淬灭，50mL DCM稀释，使用pH 3的缓冲水溶液酸化至pH约5-6。分离相，有机层用15mL盐水洗涤，硫酸钠干燥，过滤并真空蒸发获得白色泡沫。将泡沫溶于8mL甲醇，向反应混合物中加入甲醇钠(17.3mg,0.32mmol)。密封容器，在PLS上，在60°C下振荡。15分钟后，继续分批加入甲醇钠(17.3mg,0.32mmol)，振荡1.5hr。使用biotage V10仪器真空蒸发反应混合物，获得灰黄色固体。粗产物通过Biotage SP1纯化(硅胶；100:0-50:50环己烷/EtOAc，10CV)获得标题化合物(116.5mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 8.30(1H,d),7.84(1H,dd),7.56(1H,d),7.08(1H,d),6.78(1H,d),6.75(1H,dd),6.10(1H,br.s.),4.49-4.69(1H,m),1.91-2.04(1H,m),1.71-1.83(1H,m),1.55(3H,s),1.41(3H,s),1.40(3H,s),0.98(3H,t);UPLC_ipqc:1.03min,395[M+H]+。
下列化合物使用前述反应流程通过上述方法制备，用适当的苯胺替换4-[(5-氨基-2-吡啶基)氧基]-2-[(1-甲基乙基)氧基]苄腈(中间体156)。
Figure BDA00001749351301561
Figure BDA00001749351301571
实施例67
4-{[4-(4,4-二甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基)苯基]氧基}-2-(甲氧基)苄腈
Figure BDA00001749351301581
将N1-(4-{[4-氰基-3-(甲氧基)苯基]氧基}苯基)-2-甲基丙氨酰胺(中间体191,77.0mg)溶于DCM(10mL)。加入三乙基胺(0.218mL,1.57mmol)，并将所得混合物冷却到0°C。将双(三氯甲基)碳酸酯(68.1mg,0.22mmol)溶于5mL的DCM，并将所得溶液滴加到反应混合物中。反应混合物在0°C搅拌。15分钟后，将反应混合物真空蒸发，得到粗产物，其通过硅胶色谱纯化(100:0-50:50环己烷/EtOAc，10CV；随后50:50环己烷/EtOAc，10CV)，得到65.1mg白色固体状的标题化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 8.56(1H,br.s.)7.72(1H,d)7.42-7.49(2H,m)7.19-7.29(2H,m)6.97(1H,d)6.57(1H,dd)3.89(3H,s)1.41(6H,s);UPLC_ipqc:0.93min,352[M+H]+。
下列化合物使用前述反应流程通过上述方法制备，用适当的胺代替N1-(4-{[4-氰基-3-(甲氧基)苯基]氧基}苯基)-2-甲基丙氨酰胺(中间体191)。终产物通过快速色谱纯化(硅胶柱;环己烷/EtOAc或其他适宜的溶剂系统)。
Figure BDA00001749351301582
Figure BDA00001749351301591
Figure BDA00001749351301601
Figure BDA00001749351301611
Figure BDA00001749351301621
实施例86
4-({5-[(4R)-4-乙基-4-甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-吡啶基}氧 基)-2-(1-甲基乙基)苄腈
Figure BDA00001749351301631
向4-({5-[(4R)-4-乙基-4-甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-吡啶基}氧基)-2-(1-甲基乙烯基)苄腈(中间体207,98mg)的MeOH溶液中(10mL)加入10%w/w的钯/活性炭(10mg)，在H2气氛下将反应混合物搅拌1小时(P=1大气压)。过滤催化剂，减压除去溶剂。残余物通过硅胶快速色谱纯化(SNAP 10g)，用75:25-40:60环己烷/乙酸乙酯洗脱获得白色固体状的标题化合物(80mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.61(1H,br.s.),8.21(1H,d),7.94(1H,dd),7.84(1H,d),7.35(1H,d),7.27(1H,d),7.18(1H,dd),3.21-3.30(1H,m),1.73-1.85(1H,m),1.60-1.72(1H,m),1.40(3H,s),1.28(6H,d),0.88(3H,t);UPLC_ipqc:1.08min,379[M+H]+。
参考中间体208
1,3-二{[(甲氧基)甲基]氧基}苯
Figure BDA00001749351301632
0°C下向1,3-苯二醇(1.5g,13.62mmol)的无水N,N-二甲基甲酰胺溶液(13.62ml)中加入氢化钠(0.981g,40.9mmol)，将反应混合物在同一温度下搅拌15分钟。快速加入MOM-Cl(3.10ml,40.9mmol)，搅拌反应混合物1小时，同时温热至室温。反应用盐水淬灭(20ml)，乙酸乙酯萃取(3x50ml)。有机层用盐水洗涤(2x30ml)，硫酸钠干燥，过滤并蒸发，残余物通过硅胶快速色谱纯化(Biotage系统)，使用50g SNAP柱，环己烷与环己烷/乙酸乙酯8:2洗脱获得无色油状的标题化合物(1.59g,8.02mmol)。
1H NMR(400MHz,DMSO):δppm 7.16-7.23(1H,d),6.69-6.64(3H,m),5.17(4H,s),3.38(6H,s)。
参考中间体209
(2,6-二{[(甲氧基)甲基]氧基}苯基)(氧代)乙酸乙酯
室温下向1,3-二{[(甲氧基)甲基]氧基}苯(参考中间体208,2.19g)的无水四氢呋喃溶液(10mL)中加入BuLi 1.6M的己烷溶液(8.29ml,13.26mmol)，将反应混合物在同一温度下搅拌30分钟。混合物冷却至-78°C，在-78°C加入到(通过套管)氯(氧代)乙酸乙酯(2.263g,16.57mmol)的无水四氢呋喃溶液(10ml)中。将反应混合物在-78°C搅拌30分钟。反应物用饱和氯化铵水溶液淬灭(10ml)，乙酸乙酯萃取(2x30ml)。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并蒸发.残余物通过硅胶快速色谱纯化(Biotage系统)，使用100g SNAP柱，环己烷至环己烷/乙酸乙酯8:2洗脱获得淡黄色油状的标题化合物(1.75g)。
1H NMR(400MHz,DMSO):δppm 7.46(1H,t),6.87(2H,d),5.20(4H,s),4.29(2H,q),3.34(6H,s),1.27(3H,t)。
参考中间体210
2-(2,6-二{[(甲氧基)甲基]氧基}苯基)-2-丙烯酸乙酯
Figure BDA00001749351301642
0°C下向甲基三苯基溴化
Figure BDA00001749351301643
(3.13g,8.75mmol)的无水四氢呋喃中(30ml)缓慢加入KHMDS(1.745g,8.75mmol)，在0°C下搅拌反应混合物15分钟，在室温下搅拌45分钟。将反应混合物冷却至0度，缓慢加入(2,6-二{[(甲氧基)甲基]氧基}苯基)(氧代)乙酸乙酯(参考中间体209,1.74g)的无水四氢呋喃溶液(10mL)，将反应混合物在0°C搅拌2小时。反应用氯化铵的饱和水溶液淬灭(10ml)，用水稀释(20ml)，乙酸乙酯萃取(2x50ml)。有机层用硫酸钠干燥。过滤并蒸发.残余物通过硅胶快速色谱纯化(Biotage系统)，使用100g SNAP柱和环己烷至环己烷/乙酸乙酯8:2作为洗脱剂获得无色油状的标题化合物(1.37g)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 7.21(1H,t),6.78(2H,d),6.44(1H,d),5.74(1H,d),5.12(4H,s),4.12(2H,q),3.32(6H,s),1.17(3H,t)。
参考中间体211
1-(2,6-二{[(甲氧基)甲基]氧基}苯基)环丙烷甲酸乙酯
Figure BDA00001749351301651
向三甲基硫氧鎓碘化物(1.805g,8.20mmol)的无水二甲基亚砜溶液(20mL)中加入60%氢化钠在矿物油中的分散液(0.310g,7.75mmol)，在室温下搅拌反应混合物1小时。缓慢加入2-(2,6-二{[(甲氧基)甲基]氧基}苯基)-2-丙烯酸乙酯(参考中间体210,1.35g)的无水二甲基亚砜溶液(10mL)，将反应混合物在室温下搅拌1小时。反应用氯化铵的饱和水溶液淬灭(10ml)，用水稀释(20ml)，乙酸乙酯萃取(2x50ml)。有机层用水洗涤(50ml)，硫酸钠干燥。过滤并蒸发。残余物通过硅胶快速色谱纯化(Biotage系统)，使用50gSNAP柱和环己烷至环己烷/乙酸乙酯8:2作为洗脱剂获得无色油状的标题化合物(1.14g)。
1H NMR(400MHz,DMSO):δppm 7.15(1H,t),6.71(2H,d),5.18(4H,s),3.97(2H,q),3.36(6H,s),1.53-1.58(2H,m),1.09-1.14(2H,m),1.04(3H,t)。
参考中间体212
2-[1-(羟基甲基)环丙基]-3-{[(甲氧基)甲基]氧基}苯酚
Figure BDA00001749351301661
向1-(2,6-二{[(甲氧基)甲基]氧基}苯基)环丙烷甲酸乙酯(参考中间体211,490mg)的乙醇溶液(10mL)中加入2N HCl水溶液(0.789mL,1.579mmol)，将反应混合物在50°C搅拌过夜。加入甲苯(20mL)，减压除去合并的溶剂。残余物再混悬于甲苯中(20ml)，蒸发溶剂。将获得的残余物溶于无水四氢呋喃(20ml)，混合物冷却至0°C，加入60%NaH在矿物油中的混悬液(126mg,3.16mmol)，将反应混合物在同一温度下搅拌30分钟。随后加入MOM-Cl(0.120mL,1.579mmol)，将反应混合物在0°C搅拌2小时。加入LiAlH4(1M的THF溶液,1.579ml,1.579mmol)，在同一温度下继续搅拌反应混合物1小时。反应用氯化铵的饱和水溶液淬灭(10ml)，用水稀释(10ml)，乙酸乙酯萃取(2x50ml)。合并的有机层用硫酸钠干燥。过滤并蒸发。残余物通过硅胶快速色谱纯化(Biotage系统)，使用25g SNAP柱和环己烷至环己烷/乙酸乙酯7:3作为洗脱剂获得无色油状的标题化合物(191mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO):δppm 8.90(1H,br.s)6.96(1H,t),6.50(1H,d),6.45(1H,d),5.16(2H,s),4.93(1H,br.s),3.45(2H,s),3.40(3H,s),0.86-0.93(2H,m),0.56-0.62(2H,m);UPLC:0.59min,225[M+H]+。
参考中间体213
4-{[(甲氧基)甲基]氧基}螺[1-苯并呋喃-3,1'-环丙烷]
Figure BDA00001749351301662
向2-[1-(羟基甲基)环丙基]-3-{[(甲氧基)甲基]氧基}苯酚(参考中间体212,190mg)的无水四氢呋喃溶液(10ml)中加入三苯基膦(333mg,1.271mmol)，搅拌反应混合物直到PPh3完全溶解。随后滴加DIAD(0.198ml,1.017mmol)，将反应混合物在室温下搅拌30分钟。减压除去溶剂。残余物通过硅胶快速色谱纯化(Biotage系统)，使用25g SNAP柱和环己烷至环己烷/乙酸乙酯9:1作为洗脱剂获得淡黄色油状的标题化合物(120mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO):δppm 6.97(1H,t),6.51(1H,d),6.43(1H,d),5.12(2H,s),4.40(2H,s),3.35(3H,s),1.43-1.48(2H,m),0.85-0.90(2H,m);UPLC_B:0.88min,207[M+H]+。
参考中间体214
螺[1-苯并呋喃-3,1'-环丙烷]-4-醇
向4-{[(甲氧基)甲基]氧基}螺[1-苯并呋喃-3,1'-环丙烷](参考中间体213,118mg)的甲醇溶液(5ml)中加入2N HCl水溶液(0.286mL,0.572mmol)，将反应混合物在50°C搅拌过夜。减压除去合并的溶剂，残余物再次溶于甲苯(10ml)，除去溶剂。残余物通过硅胶快速色谱纯化(Biotage系统)，使用10g SNAP柱和环己烷至环己烷/乙酸乙酯7:3作为洗脱剂获得白色固体状的标题化合物(70mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO):δppm 9.28(1H,s),6.81(1H,t),6.24(1H,d),6.22(1H,d),4.34(2H,s),1.40-1.45(2H,m),0.77-0.82(2H,m)。
参考中间体215
5-硝基-2-(螺[1-苯并呋喃-3,1'-环丙烷]-4-基氧基)吡啶
向螺[1-苯并呋喃-3,1'-环丙烷]-4-醇(参考中间体214,70mg)的无水N,N-二甲基甲酰胺溶液(2ml)中加入碳酸钾(89mg,0.647mmol)，随后加入2-氯-5-硝基吡啶(75mg,0.475mmol)。将反应混合物在100°C搅拌3小时。反应物用盐水淬灭(1ml)，用水稀释(2ml)。乙酸乙酯萃取(3x10ml)。有机层用硫酸钠干燥。过滤并蒸发.残余物通过硅胶快速色谱纯化(Biotage系统)，使用10g SNAP柱和环己烷至环己烷/乙酸乙酯9:1作为洗脱剂获得白色固体状的标题化合物(100mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO):δppm 9.05(1H,d),8.63(1H,dd),7.23(1H,d),7.13(1H,t),6.73(1H,d),6.60(1H,d),4.45(2H,s),1.05-1.10(2H,m),0.88-0.93(2H,m);UPLC:0.79min,285[M+H]+。
参考中间体216
6-(螺[1-苯并呋喃-3,1'-环丙烷]-4-基氧基)-3-吡啶胺
向5-硝基-2-(螺[1-苯并呋喃-3,1'-环丙烷]-4-基氧基)吡啶(参考中间体215,99mg)的四氢呋喃(5ml)/水(2.5ml)溶液中加入铁(97mg,1.741mmol)，随后加入氯化铵(93mg,1.741mmol)，将反应混合物在室温下搅拌4小时。过滤催化剂，将残余物用NaHCO3饱和水溶液稀释(5ml)，乙酸乙酯萃取(3x10ml)，有机层用硫酸钠干燥。过滤并蒸发，残余物通过硅胶快速色谱纯化(Biotage系统)，使用10g SNAP柱，环己烷/乙酸乙酯8:2至环己烷/乙酸乙酯1:1洗脱获得淡黄色固体状的标题化合物(85mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO):δppm 7.52(1H,d),7.06(1H,dd),6.97(1H,t),6.70(1H,d),6.53(1H,d),6.23(1H,d),5.08(2H,s),4.43(2H,s),1.28-1.33(2H,m),0.86-0.91(2H,m);UPLC:0.62min,255[M+H]+。
参考中间体217
[(1R)-1-({[6-(螺[1-苯并呋喃-3,1'-环丙烷]-4-基氧基)-3-吡啶基]氨基}羰 基)丙基]氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯
Figure BDA00001749351301682
向(2R)-2-({[(1,1-二甲基乙基)氧基]羰基}氨基)丁酸(94mg,0.462mmol)的无水N,N-二甲基甲酰胺溶液(2mL)中加入DIPEA(0.115mL,0.661mmol)，随后加入TBTU(159mg,0.496mmol)，将反应混合物在室温下搅拌15分钟。加入6-(螺[1-苯并呋喃-3,1'-环丙烷]-4-基氧基)-3-吡啶胺(参考中间体216,84mg)，将反应混合物在同一温度下搅拌6小时。反应物用盐水淬灭(2ml)，用水稀释(5ml)，乙酸乙酯萃取(2x10ml)。有机层用冰冷的盐水洗涤(2x5ml)，硫酸钠干燥，过滤并蒸发.残余物通过硅胶快速色谱纯化(Biotage系统)，使用10g SNAP柱，环己烷至环己烷/乙酸乙酯7:3洗脱获得无色油状的标题化合物(130mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO):δppm 10.14(1H,br.s),8.32(1H,d),8.08(1H,dd),7.02-7.09(2H,m),6.96(1H,d),6.63(1H,d),6.42(1H,d),4.44(2H,s),3.93-4.01(1H,m),1.52-1.75(2H,m),1.39(9H,s),1.15-1.22(2H,m),0.85-0.95(5H,m);UPLC:0.80min,440[M+H]+。
参考中间体218
(2R)-2-氨基-N-[6-(螺[1-苯并呋喃-3,1'-环丙烷]-4-基氧基)-3-吡啶基]丁 酰胺
Figure BDA00001749351301691
0°C下向[(1R)-1-({[6-(螺[1-苯并呋喃-3,1'-环丙烷]-4-基氧基)-3-吡啶基]氨基}羰基)丙基]氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯(参考中间体217,128mg)的无水二氯甲烷溶液(3mL)中缓慢加入TFA(0.9mL,11.68mmol)，将反应混合物在同一温度下搅拌2小时。反应物用二氯甲烷(10ml)稀释，加入NaHCO3饱和水溶液，调节pH至约8。分离两相，水层用二氯甲烷重新萃取(10ml)。合并有机层，硫酸钠干燥，过滤并蒸发获得无色油状的标题化合物(92mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO):δppm 8.37(1H,d),8.13(1H,dd),7.05(1H,t),6.95(1H,d),6.63(1H,d),6.42(1H,d),4.44(2H,s),3.24(1H,m),1.61-1.72(1H,m),1.44-1.55(1H,m),1.16-1.21(2H,m),0.91(3H,t),0.86-0.91(2H,m);UPLC_B:0.74min,340[M+H]+。
参考中间体219
(1,1-二甲基-2-氧代-2-{[6-(螺[1-苯并呋喃-3,1'-环丙烷]-4-基氧基)-3-吡 啶基]氨基}乙基)氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯
Figure BDA00001749351301701
向N-{[(1,1-二甲基乙基)氧基]羰基}-2-甲基丙氨酸(80mg,0.393mmol)的无水N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)溶液中加入DIPEA(0.096mL,0.551mmol)，随后加入HATU(150mg,0.393mmol)，将反应混合物在室温下搅拌15分钟。将该溶液加入到6-(螺[1-苯并呋喃-3,1'-环丙烷]-4-基氧基)-3-吡啶胺(参考中间体218,40mg)的无水N,N-二甲基甲酰胺溶液(0.5ml)中，在室温下搅拌反应混合物过夜。反应用水淬灭(2ml)，盐水稀释(10ml)，用乙酸乙酯萃取(2x20ml)。有机层用硫酸钠干燥，过滤并蒸发，残余物通过硅胶快速色谱纯化(Biotage系统)，使用10g SNAP柱和环己烷/乙酸乙酯8:2至环己烷/乙酸乙酯1:1作为洗脱剂获得白色固体状的标题化合物(52mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO):δppm 9.62(1H,br.s),8.24-8.42(1H,br.m),8.05(1H,d),6.98-7.10(2H,m),6.92(1H,d),6.61(1H,d),6.40(1H,d),4.44(2H,s),1.42(6H,s),1.36(9H,s),1.15-1.21(2H,m),0.85-0.91(2H,m);UPLC:0.81min,440[M+H]+。
参考中间体219
2-甲基-N 1 -[6-(螺[1-苯并呋喃-3,1'-环丙烷]-4-基氧基)-3-吡啶基]丙氨酰 胺
Figure BDA00001749351301702
0°C下向(1,1-二甲基-2-氧代-2-{[6-(螺[1-苯并呋喃-3,1'-环丙烷]-4-基氧基)-3-吡啶基]氨基}乙基)氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯(参考中间体219,50mg)的无水二氯甲烷溶液(4mL)中缓慢加入TFA(1ml,12.98mmol)，将反应混合物在同一温度下搅拌2小时。反应物用二氯甲烷稀释(10ml)，加入NaHCO3饱和水溶液，调节pH至约8。分离两相，有机层用硫酸钠干燥。过滤并蒸发获得无色油状的标题化合物(35mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO):δppm 8.40(1H,d),8.15(1H,dd),7.04(1H,t),6.94(1H,d),6.62(1H,d),6.41(1H,d),4.43(2H,s),1.28(6H,s),1.15-1.20(2H,m),0.86-0.91(2H,m);UPLC:0.56min,340[M+H]+。
参考实施例87
(5R)-5-乙基-3-[6-(螺[1-苯并呋喃-3,1'-环丙烷]-4-基氧基)-3-吡啶 基]-2,4-咪唑烷二酮
Figure BDA00001749351301711
向(2R)-2-氨基-N-[6-(螺[1-苯并呋喃-3,1'-环丙烷]-4-基氧基)-3-吡啶基]丁酰胺(参考中间体218,90mg)的无水二氯甲烷溶液(15ml)中加入TEA(0.185ml,1.326mmol)，将反应混合物冷却至0°C。缓慢加入三光气(35.4mg,0.119mmol)的无水二氯甲烷溶液(5mL)，将反应混合物在同一温度下搅拌30分钟。反应用水淬灭(10mL)，分离两相。有机层用硫酸钠干燥，过滤并蒸发.残余物通过硅胶快速色谱纯化(Biotage系统)，使用10g SNAP柱和环己烷/乙酸乙酯8:2至环己烷/乙酸乙酯1:1作为洗脱剂获得白色固体状的标题化合物(65mg,0.178mmol)。
1H NMR(400MHz,DMSO):δppm 8.63(1H,s),8.14(1H,d),7.85(1H,dd),7.11(1H,s),7.09(1H,t),6.68(1H,dd),6.52(1H,dd),4.45(2H,s),4.18-1.24(1H,m),1.76-1.88(1H,m),1.64-1.76(1H,m),1.13-1.18(2H,m),0.96(3H,t),0.89-0.94(2H,m);UPLC_B:0.78min,366[M+H]+。
参考实施例88
5,5-二甲基-3-[6-(螺[1-苯并呋喃-3,1'-环丙烷]-4-基氧基)-3-吡啶基]-2,4- 咪唑烷二酮
Figure BDA00001749351301721
向2-甲基-N1-[6-(螺[1-苯并呋喃-3,1'-环丙烷]-4-基氧基)-3-吡啶基]丙氨酰胺(参考中间体219,34mg)的无水二氯甲烷溶液(6mL)中加入TEA(0.070mL,0.501mmol)，将混合物冷却至0°C。缓慢加入三光气(13.38mg,0.045mmol)的无水二氯甲烷溶液(2mL)，将反应混合物在同一温度下搅拌1小时。反应用水淬灭(3ml)，分离两相。有机层用硫酸钠干燥，过滤并蒸发.残余物通过硅胶快速色谱纯化(Biotage系统)，使用10g SNAP柱和环己烷/乙酸乙酯7:3至环己烷/乙酸乙酯3:7作为洗脱剂获得白色固体状的标题化合物(23mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO):δppm 8.63(1H,s),8.17(1H,d),7.88(1H,d),7.06-7.12(2H,m),6.67(1H,d),6.51(1H,d),4.45(2H,s),1.41(6H,s),1.12-1.17(2H,m),0.88-0.93(2H,m);UPLC:0.73min,366[M+H]+。
实施例89
生物测试
本发明化合物调节电压门控钾通道亚型Kv3.2/3.1的能力可通过下列实验确定。
细胞生物学
用pCIH5-hKv3.2载体转染中国仓鼠卵巢(CHO)-K1细胞建立表达人Kv3.2通道(hKv3.2)的稳定细胞系。细胞在补充有10%胎牛血清、1X非必需氨基酸(Invitrogen)和500ug/ml潮霉素B(Invitrogen)的DMEM/F12培养基中培养。细胞在37°C下在含有5%CO2的空气的潮湿环境中生长和维持。
为评价化合物对于人Kv3.1(hKv3.1)通道的影响，使用hKv3.1BacMam试剂转导CHO/Gam/E1A克隆22，别名CGE22细胞。该细胞系设计为改良的基于CHO-K1的宿主，与野生型CHO-K1相比具有增强的重组蛋白表达。使用表达腺病毒Gam1蛋白的BacMam病毒转导CHO-K1细胞，用遗传霉素-G418选择，产生稳定的细胞系CHO/Gam-A3。CHO/Gam-A3细胞用pCDNA3-E1A-Hygro转染，随后用潮霉素B选择，FACS分类获得单细胞克隆。随后在临时转导研究中使用BacMam-荧光素酶和BacMam-GFP病毒选择最高BacMam转导和重组蛋白表达的克隆。CGE22细胞在与hKv3.2CHO-K1稳定细胞系相同的培养基中培养，加入300ug/ml潮霉素-B和300ug/ml G418。所有其他条件与hKv3.2CHO-K1细胞一样。实验前一天将1千万个CGE22细胞平铺于T175培养瓶中，加入hKv3.1BacMam试剂(pFBM/人 Kv3.1)(MOI为50)。24小时后使用转导的细胞。
用于IonWorks QuattroTM实验的细胞的制备
实验当天，从培养箱中取出细胞，除去培养基。细胞用5ml无钙和镁的杜尔贝科PBS(DPBS)洗涤，加入3ml乙二胺四乙酸(Invitrogen,Italy)分离，在37°C温育5分钟。轻敲烧瓶取出细胞，加入10ml含有钙和镁的DPBS制备细胞混悬液。随后将细胞混悬液放置在15ml离心管中离心2分钟，1200rpm。离心后，去除上清，将细胞沉淀物再悬浮于4ml含有钙和镁的DPBS中，使用5ml吸管吹打沉淀。校正细胞混悬液的体积，使得用于分析的细胞浓度为约3百万细胞/毫升。
所有加入细胞的溶液均预先温热至37°C。
电生理学
实验在室温下使用IonWorks QuattroTM平面阵列电生理技术(Molecular Devices公司)进行，使用PatchPlate TM PPC。刺激方案和数据采集使用微型计算机进行(Dell Pentium 4)。通过在每孔应用10mV电压差确定平面孔电极阻力(Rp)。这些测定在加入细胞前完成。加入细胞并密封后，使用-80mV至-70mV的电压差约160ms进行密封测试。随后，向电极内表面加入两性霉素B溶液获得胞内通路。细胞维持在-70mV。所有实验中使用50ms超极化(10mV)前脉冲激发漏电流、随后20ms在试验脉冲前保持电位而扣除渗漏。从保持电位-70mV，应用第一试验脉冲至-15mV 100ms，随后在-70mV保持100ms，应用第二脉冲至40mV 50ms。随后在-100mV处再维持细胞100ms，随后在200ms内使电压从-100mV提高到40mV。所有试验中，试验脉冲方案在测试化合物不存在(预读数)或存在(后读数)情况下进行。预读数和后读数通过加入化合物后孵育3分钟而分开。
溶液和药物
胞内溶液含有下列成分(mM):葡萄糖酸钾100，KCl 54，MgCl2 3.2，HEPES 5，用KOH调节至pH 7.3。两性霉素B溶液制备成50mg/ml的DMSO储存液，稀释至最终的0.1mg/ml胞内溶液的工作浓度。外部溶液为杜尔贝科磷酸盐缓冲盐水(DPBS)，含有下列成分(mM):CaCl20.90，KCl2.67，KH2PO4 1.47，MgCl.6H2O 0.493，NaCl 136.9，Na3PO4 8.06，pH为7.4。
将本发明的化合物(或参考化合物例如N-环己基-N-[(7,8-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-喹啉基)甲基]-N′-苯基脲)以10mM的储存浓度溶于二甲基亚砜(DMSO)。这些溶液进一步用DMSO稀释，使用Biomek FX(BeckmanCoulter)在384孔化合物板中进行。将各稀释液(1μL)转移到另一化合物板中，加入含有0.05%普流尼克酸的外部溶液(66μL)。加入3.5μL来自含有本发明化合物各平板的溶液，与细胞在IonWorks QuattroTM试验过程中孵育。最终试验稀释度为200，最终化合物浓度范围为50μM至50nM。
数据分析
分析记录，在无化合物的情况下使用密封电阻(>20MΩ)和峰电流振幅(电压差40mV时>500pA)过滤，从进一步分析中去除不适当的细胞。-15mV电压差下加入药物前后的配对比较被用于确定各化合物的阳性调节作用。数据相对于参考化合物(50μM N-环己基-N-[(7,8-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-喹啉基)甲基]-N′-苯基脲)的最大效应和溶媒对照(0.5% DMSO)的作用进行归一化。归一化的数据使用ActivityBase软件分析。通过使用ActivityBase的四参数逻辑函数拟合浓度-响应数据，测定增加电流50%所需要的化合物浓度(pEC50)。
N-环己基-N-[(7,8-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-喹啉基)甲基]-N′-苯基脲来自ASINEX(登记号:552311-06-5)。
所有实施例化合物均通过上述试验测试，证明对于Kv3.1或Kv3.2或Kv3.1和Kv 3.2(本文中为“Kv3,1和/或Kv3.2”)的平均全细胞电流比50μM N-环己基-N-[(7,8-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-喹啉基)甲基]-N′-苯基脲至少增强了20%。因此，在实施例x的重组细胞测试中，所有的实施例均为正调节剂。本文中，Kv3.1和/或Kv3.2正调节剂是显示使由哺乳动物细胞中重组表达的人Kv3.1和/或人Kv3.2通道介导的全细胞电流至少增强20%的化合物，其使用实施例89中描述的方法测定(生物测试)。
实施例89中所述试验的数据的第二项分析研究了化合物对于去极化电压脉冲开始时电流增加速率的效果。化合物对于去极化电压脉冲开始后Kv3.1或Kv3.2电流增加的效果的幅度可通过使用下列方程的非线性拟合中获得的时间常数(Tauact)确定。
Y=(Y0-Ymax)＊exp(-K＊X)+Ymax
其中:
Y0是去极化电压脉冲开始时的电流值；
Ymax是坪电流；
K是速率常数，Tauact是激活时间常数，其是K的倒数。
类似的可以研究化合物对于去极化电压脉冲结束时Kv3.1和Kv3.2电流衰减对通道闭合的时间的影响。此时，化合物对于通道闭合效果的幅度通过去极化电压脉冲刚结束时电流衰减(尾电流)的非线性拟合的时间常数(Taudeact)确定。
测定了实施例中一些化合物的激活时间常数(Tauact)。图1显示了本发明中两个化合物的数据。表1提供了所有通过该方法分析的实施例的Tauact数据。
图1a显示了使用实施例89中所述实验记录的hKv3.2电流。数据显示是在4种不同细胞中记录的2种浓度的实施例19的化合物在去极化电压阶跃至-15mV期间各自的电流。使用单指数曲线拟合数据(实线)，使用Prism第5版(Graphpad Software公司)的拟合程序。
图1b显示了使用实施例89中所述实验记录的hKv3.2电流。数据显示是在2种不同细胞中记录的2种浓度的实施例71的化合物在去极化电压阶跃至-15mV期间各自的电流。使用单指数曲线拟合数据(实线)，使用Prism第5版(Graphpad Software公司)的拟合程序。
表1:激活时间(Tauact)分析的主要hKv3.2数据。为比较化合物，化合物浓度的选择是在电压脉冲结束时产生类似的电流为准(~0.3nA)，溶媒除外，其中最大电流<0.1nA。
  实施例   浓度(μM)   Tauact平均值(ms)   标准偏差   实验数目
  溶媒   -   7.1   1.7   6(细胞)
  19   6.25   9.9   2.2   5
  30   12.5   7.3   1.8   4
  87   0.2   50.1   7.5   5
  88   0.4   19.3   1.0   4
  71   0.2   23.0   6.2   4
  77   0.8   9.2   2.3   2
  70   3.1   13.0   2.3   2
  76   3.1   7.6   1.9   2
  78   3.1   8.2   2.0   2
  82   3.1   10.4   2.8   2
  80   3.1   9.7   1.0   2
从表1可以看出，实施例87、88和71显著增加了Tauact值，而其他化合物与溶媒对照(DMSO 0.5%)相比对Tauact无显著效应。
Kv3.1和Kv3.2通道必须非常快速地活化和失活，以使神经元以高频率释放动作电位(Rudy和McBain,2001,Trends in Neurosciences 24,517-526)。活化变缓将延迟动作电位复极化的开始；失活减缓将导致减少神经元应激性的超极化电流，延迟神经元能够释放下一动作电位的时间。两种减缓效应一起使神经元高频放电的能力下降。因此，对Kv3.1和/或Kv3.2通道有减缓效应的化合物能有效用作通道的负调节剂，从而减缓神经元放电。该效应可使用电生理技术在体外大鼠脑部皮质“快速放电”的中间神经元的记录中观察到(图2)。
图2显示了小鼠躯体感觉皮层中“快速放电”中间神经元的记录。通过100、200和300Hz高频率去极化电流脉冲的训练，诱导所述神经元以高频率放电。测定了每一脉冲下神经元释放动作电位的能力。该图Y轴上的棘波概率为1表示在每个去极化电流脉冲下的神经元产生动作电位。无药物存在下(实心圈,n=9)，一直到300Hz神经元都维持棘波概率为1。然而，在实施例87(1μM;空心圈,n=6)存在下，神经元不能接受最高频率下的训练，＊p<0.05，对重复测定进行的方差分析。
因此，尽管在实施例89的重组细胞测试中鉴定所有实施例为正调节剂，但显著增加Tauact值的化合物降低了天然组织中神经元以高速度放电的能力，因此其是负调节剂。
作为正调节剂的化合物包括实施例19、30、77、70、76、78、82和80。
作为负调节剂的化合物包括实施例87、88和71。
本发明一方面提供了Kv3增强化合物，其具有的平均tau值不超过溶媒(DMSO 0.5%)存在时所得平均值2个标准偏差，其用于治疗其中正调节Kv3.1和/或Kv3.2通道功能有益的疾病，所述疾病包括精神分裂症、双相情感障碍、听觉障碍、睡眠障碍、物质相关的病症和癫痫。
本发明一方面提供了Kv3增强化合物，其具有的平均tau值超过溶媒(DMSO 0.5%)存在时所得平均值2个标准偏差，其用于治疗其中抑制Kv3.1和/或Kv3.2通道功能有益的疾病，所述疾病包括听觉过敏、脆性X综合征和孤独症。
临床前试验
所有体内研究按照意大利法律(Art.7,Legislative Decree no.116,1992年1月27日)规定的计划许可证(其承认欧洲指导原则86/609/EEC)以及葛兰素史克公司关于实验动物的看护和使用规定以及相关的操作标准进行。
在以下研究中，化合物19是实施例19的化合物。
实施例90
体外化合物对小鼠躯体感觉皮质的中间神经元放电的效果评价
动物
转基因小鼠[CB6-Tg(Gad1-EGFP)G42Zj h/J]购自The JacksonLaboratory(缅因州,USA)。这些小鼠在篮状中间神经元的表达钙结合蛋白小白蛋白(Pv)的亚类中选择性表达增强的绿色荧光蛋白(EGFP)。在其他生长抑素(SOM)、胆囊收缩素(CCK)、钙网膜蛋白(CR)和VIP阳性的中间神经元类中未报道有EGFP表达。这些小鼠因此可用于鉴定表达Pv的γ-氨基丁酸能神经元亚类，其表达Kv3.1和Kv3.2通道并能够以高频率放电。
切片准备
试验在含有躯体感觉皮质的250-μm-厚的脑切片上进行，简言之，从深度麻醉(异氟烷)的25-35日龄Gad1-EGFP小鼠中获取脑。使用DTK 1000切片机(DSK,日本)在以下溶液(mM)中切片:KCl(2.5),CaCl2(0.1),NaH2PO4(1.2),MgCl2(5),NaHCO3(26),蔗糖(189)和葡萄糖(10)，保持在2-6°C，通入95% O2-5% CO2。切片后，将切片在恢复培养箱中用人工脑脊液(ACSF)平衡至少1小时，所述脑脊液含有(mM):NaCl(120),KCl(2.5),CaCl2(2),NaH2PO4(2.5),MgCl2(1.5),NaHCO3(26)和葡萄糖(10)，在室温下用95% O2-5% CO2饱和。
电生理学记录
为进行电生理学记录，将切片转移到安装在直立显微镜(Axioskop,Carl Zeiss,Germany)载台上的浸泡腔内，用充氧的ACSF浸泡。使用40倍的物镜，用红外示差干涉对比(IR-DIC)电视显微镜(Hamamatsu C5985,Hamamatsu City,日本)可视化切片中的神经元。通过用GFP滤片的荧光灯照射制备物，并在荧光和IR-DIC电视显微镜之间切换来鉴定小白蛋白阳性的中间神经元。仅记录GFP阳性的神经元。使用Sutter P-97片电极拉制的硼硅玻璃吸管进行全细胞记录，所述吸管充满下列内部溶液(mM):KGluconate(125),EGTA(10),HEPES(10),MgCl2(1),KCl(10)和MgATP(2);用KOH调节至pH 7.3。当用该内部溶液充满时，片电极的峰电阻为4-7MΩ。室温下(20-22°C)使用Multiclamp 700B放大器(Axon Instruments,Foster City,CA,USA)进行记录。电流控制(下文所示)和数据采集使用pClamp 10.0软件和Digidata 1320A界面进行(Axon Instruments,FosterCity,CA,USA)。中和暂态电容，在整个试验过程中连续监控串联电阻。如果改变>20%则弃去细胞。数据用3kHz滤过，在10kHz取样。
药物
将本发明的化合物溶于DMSO(100%)中，将四乙基铵(TEA)和河豚毒素(TTX)(均来自Sigma,Italy)溶于蒸馏水中，储存在-20°C下直到使用。药物在实验当天稀释至最终浓度。使用的DMSO最高终浓度为0.1%。
实验过程
通过使用不同强度的长电流阶跃评价记录的中间神经元的放电活性。因此，在吉咖封口形成后，将放大器调成电流钳模式，使神经元到达静息膜电位。随后向细胞注入负电流以获得接近-80mV的静息电位。在此条件下分步注入电流(50pA增值,600ms)引起动作电位。该方法每个细胞重复至少2次。
进行在线电桥平衡补偿，整个实验过程中连续监测Rm值。
用药
在溶媒(0.1%DMSO)、TEA(0.5mM)+0.1%DMSO或TEA(0.5mM)+实施例19(1或10μM)存在下将切片在恢复腔中孵育至少1小时。将切片转移到记录腔中后，在循环的ACSF中注入适当的药物以维持同样的药物条件。
数据采集和分析
原始数据使用Clampex 10.0(Molecular Devices,USA)采集。使用Clampfit 10.0软件分析数据(Molecular Devices,USA)。根据在600ms阶跃电流间检测到的动作电位数目来计算响应于阶跃电流注入的动作电位放电频率(Hz)。对相同实验条件下和同一细胞内每次电流阶跃的频率值进行平均。由于每一细胞触发动作电位的阈值不同，电流阶跃强度表示为相对于产生动作电位的电流阈值的pA，而非绝对值。
使用Clampfit计算各动作电位的动作电位半峰宽。每个分析的细胞中每个实验条件下，取不饱和电流阶跃(通常为距阈值100-150pA)引发的动作电位的第2-5个或最后10个的值进行平均。
统计分析
对于治疗对动作电位放电频率的效果的统计差异使用重复测定的双因素ANOVA评价，如果需要，进行事后计划比较(当p<0.05时认为差异显著)。药物治疗对于动作电位半峰宽和第一衍生振幅的效果使用ANOVA评价。所有的统计学分析使用Statistica软件进行(StatSoft第8版)。在适当时，结果用平均值±SEM表示。
数据纳入/排除标准
将细胞纳入或排除分析的标准是基于精确的电流钳条件和整个实验过程中记录的稳定性。当Rs和/或Rm值变化超过20%时，在线评价将排除细胞。
结果
用0.5mM TEA孵育的切片记录的中间神经元响应于电流阶跃而放电的最大频率低于对照切片记录的神经元(图X)。该效应在用TEA(0.5mM)+1μM或10μM实施例19孵育的切片中显著逆转(重复测定的单因素ANOVA，＊与单用TEA相比p<0.05)。
图3.小鼠躯体感觉皮质中的小白蛋白阳性的中间神经元记录的动作电位频率，其由去极化电流阶跃引发(持续时间600ms，Δ：50pA的增量)，其先用溶媒(0.1%DMSO;实心圈,n=6)、TEA(0.5mM)+0.1%DMSO(空心圈,n=7)、TEA(0.5mM)+实施例19(1μM;实心三角,n=9)或TEA(0.5mM)+实施例19(10μM;空心三角,n=5)孵育至少1小时。＊p<0.05;重复测定的单因素ANOVA。
此外，用0.5mM TEA孵育的切片记录的细胞动作电位半峰宽比对照切片(0.1%DMSO)(图Y)显著增加。在用TEA(0.5mM)+1μM或10μM实施例19孵育的切片中，平均动作电位半峰宽相对于仅用TEA(0.5mM)孵育的切片分别显著减少24%和36%(ANOVA和Dunnett检验,＊p<0.05,n=9;＊＊p<0.01,n=5)。
图4.小鼠躯体感觉皮质中的小白蛋白阳性的中间神经元诱发动作电位的半峰宽。记录前，切片用溶媒(对照;0.1%DMSO,n=6)、TEA(0.5mM)+0.1%DMSO(n=7)、TEA(0.5mM)+实施例19(1μM;n=9)、或TEA(0.5mM)+实施例19(10μM;n=5)孵育至少1小时。＊p<0.05;＊＊p<0.01,＊＊＊p<0.001,ANOVA后进行Dunnett检验。
这些结果表明本发明的化合物能以正调节Kv3通道的方式调节小鼠大脑中快速放电的中间神经元的行为。增强皮质脑区域中Kv3功能的能力也与这些化合物治疗精神分裂症、双相型障碍和癫痫的能力一致。
实施例91
化合物对于小鼠斜方体的内侧核中神经元记录的钾电流效果的体外评价
动物
雄性CBA/Ca小鼠(年龄12–16天)被用于这些实验(根据UK动物科学规程条约,1986)。如以前描述(Brew和Forsythe,2005)制备含有斜方体内侧核(MNTB)的脑切片。
药物
除非另外说明，化学品和试剂购自Sigma,(Poole,UK)。将实施例19溶于DMSO，在ACSF中稀释至需要的浓度。
电生理学记录
如之前所述(Brew和Forsythe,2005)对鉴定的MNTB神经元进行记录。将切片放置在倒置显微镜载台上的浸泡腔内，室温下用充气的(95% O2–5% CO2)ACSF以1ml/分钟的速率连续灌注。使用Axopatch 700B放大器对视觉鉴定的MNTB神经元进行全细胞记录(Molecular Devices,Union City,CA,USA)。钳溶液包含(mM)：葡萄糖酸钾(97.5),KCl(32.5),Hepes(40),EGTA(5),MgCl2(1),Na2磷酸肌酸(5)，用KOH调节至pH 7.2。吸管电阻为3–5MΩ，串联电阻为6–10MΩ(补偿70%,10μs延迟)。有规律地记录电阻，若增加大于2MΩ则弃去该记录。
一旦获得全细胞构型，将细胞保持在-60mV，之后应用如下电压方案：将细胞从保持电位跃迁到-90，700ms，阶跃到-40mV，25ms，随后应用-100到+40mV(10mV增量)范围的电压脉冲220ms，然后回到保持电位。完成该方案后，向浸泡介质中加入TEA(1mM)。5分钟后，使用同样的电压方案进行第二套记录。随后，在TEA(1mM)的持续存在下向ACSF中加入化合物19(10mM)，5分钟后，使用前述电压方案进行最后一套记录。
统计分析
每一细胞使用非配对t检验比较药物处理间的+40mV电压阶跃引发的电流。
结果
TEA(1mM)显著降低了+40mV电压阶跃引发的外部高电压活化的钾电流的振幅(图5)。该效应由随后应用的实施例19(10mM)所逆转。
图5.体外小鼠中视觉鉴别的MNTB神经元中记录的高电压活化的钾电流。数据以不同药物条件下的+40mV电压阶跃引发的电流振幅的平均值(+/-s.d.)表示。TEA(1mM)，TEA(1mM)+实施例19(10mM)。统计学分析使用非配对t检验进行。
这些数据表明本发明的化合物可调节MNTB的神经元(加工听觉信息的脑干区域)中高电压活化的钾电流(推测由Kv3.1介导;Brew和Forsythe,2005)。该结果支持了本发明的化合物在治疗听觉障碍中的用途。
实施例92
大鼠电休克癫痫发作模型
实验准备
雄性CD大鼠(85-130g)由Charles River,Italy提供。动物分组饲养，自由进食(标准啮齿类动物饲料)和饮水，12小时光照/黑夜周期(0600h开灯)。在所有情况下，到达GSK与开始研究之间至少间隔5天。
实验方案
动物以适当的剂量、途径和预治疗时间施用试验化合物，并返回其笼子。试验在与用于饲养的房间分开的房间进行。试验包括测定强直后肢伸肌癫痫发作的阈值，使用Hugo Sachs Electronik刺激器，其提供0.3秒的50Hz正弦波恒定电流，在1-300mA之间完全可调。通过角膜电极传递刺激(Stean TO,Atkins AR,Heidbreder CA,Quinn LP,Trail BK,Upton N.(2005)Br J Pharmacol.144(5):628-35)。癫痫发作阈值使用Kimball等人的“上和下”方法确定(1957)(Kimball AW,Burnett WT Jr,Doherty DG.(1957)Radiat Res.7(1):1-12)。每组中的第一动物用可能接近于诱导发作的阈值的电流刺激。如果未诱导强直发作，下一动物接受高5mA的诱导。如果诱导了强直发作，下一动物接受低5mA的刺激。对照(溶媒)组内所有动物重复这一过程。用试验化合物处理的组中，使用5-10mA的阶跃。研究结束时，采集血样分析该房间中动物药物的浓度(n=4/组)。
药物和材料
所有剂量按碱计算。丙戊酸钠混悬于Methocell 1%(w/v)，在测试前1小时通过口服途径以5mL/kg给药。将化合物19溶于DMSO，随后混悬于Methocell 1%(w/v)至最终DMSO浓度为5%(v/v)。随后在试验前2小时口服施用5mL/kg的化合物19。
数据分析
测定每一动物癫痫发作的诱导，以全或无的效应评分为存在(+)或不存在(0)。每一治疗组的数据记录为所用每一电流水平下+和0的数目，根据Kimball等人的方法(1957)，该信息随后被用于计算CC50值(50%的动物显示发作所需要的电流)+平均值的标准偏差。药物的效果计算为CC50的%变化。根据Litchfield和Wilcoxon的方法(1949)，评价药物治疗的动物和适当的溶媒治疗组之间的显著差异。
结果
使用化合物19预处理后，两个剂量下癫痫发作的阈值显著增加：在30mg/kg口服剂量下，化合物19使发作阈值增加了91%，而在60mg/kg口服剂量下，发作阈值增加了218%。更高剂量的化合物19导致的增加与口服300mg/kg阳性对照丙戊酸钠导致的增加(+258%)类似。
30和60mg/kg剂量给药后2小时，卫星动物测定的化合物19的血浓度分别为5.3和9.1μg/mL。这些浓度分别等价于非结合的血浓度1.3和2.2μM，因此与前文中体外重组人Kv3电生理测定中使Kv3介导的电流显著增加的化合物19浓度一致。
结论
这些结果表明，化合物19具有抗惊厥效果，该效果可能通过Kv3钾通道的正调节介导。
实施例93
小鼠的精神刺激物诱导的活动过度
试验准备
雄性CD-1小鼠(25-35g)由Charles River,Italy提供。动物分组饲养，自由进食(标准啮齿类动物饲料)和饮水，12小时光照/黑夜周期(0600h开灯)。在所有情况下，到达GSK与开始研究之间至少间隔5天。
试验方案
动物以适当的剂量、途径和预治疗时间施用试验化合物，并返回其笼子。试验在与用于饲养的房间分开的房间进行。小鼠口服测试化合物治疗，单独放置在Perspex盒中(长20.5cm,宽20.5cm,高34cm)，覆盖有多孔盖。红外监测传感器位于周围墙上(水平感应器)。在地上2.5cm对侧具有两个额外的传感器(垂直感应器)。使用VersaMax系统收集并分析数据(Accuscan Instruments Inc.,Columbus,OH)，其随后传递信息至计算机。30分钟适应后，小鼠用安非他命腹腔给药(i.p.)2mg/kg，以10mL/kg。随后在60分钟内评价试验台上的运动行为。运动行为测定为60分钟测试期内各小鼠在试验台上移动的总距离(cm)。
药物和材料
所有剂量均以碱为基础计算。将氯氮平溶于蒸馏水，以3mg/kg的剂量腹腔内给药(i.p.)10mL/kg。口服施用化合物19(10,30或60mg/kg)或溶媒(HPMC 0.5%w/v,Tween800.1%v/v水溶液)，剂量为10mL/kg。氯氮平和化合物19均在将动物置于实验台前立即给药(安非他命施用前30分钟)。
结果
单独施用安非他命使总运动距离显著增加。口服施用30mg/kg化合物19显著减少了安非他命造成的总运动距离。更高剂量的口服60mg/kg化合物19进一步减少了安非他命引起的活动的增加，其类似于阳性对照氯氮平(腹腔给药3mg/kg)的模式。数据如表1所示。
表1:化合物19对安非他命诱导的小鼠运动过度的效果。在施用安非他命(2mg/kg i.p.)之前30分钟口服施用化合物19。在施用安非他命(2mg/kgi.p.)之前30分钟腹腔内施用氯氮平。评价施用安非他命后60分钟内活动的总距离。数据表达为平均值±标准误。对数据进行单向方差分析(ANOVA)后进行Dunnett检验(＊＊=p<0.01，相对于单独使用安非他命)。
  治疗   总活动距离(cm)
  溶媒   1049±522＊＊
  安非他命(AMPH)2.0mg/kg   16304±3309
  AMPH 2mg/kg+化合物1910mg/kg   15267±3166
  AMPH 2mg/kg+化合物1930mg/kg   5790±1436＊＊
  AMPH 2mg/kg+化合物1960mg/kg   1494±378＊＊
  AMPH 2mg/kg+氯氮平3mg/kg   932±362＊＊
结论
这些结果显示，以与那些具有抗惊厥效果的试剂类似的剂量的化合物19能够防止精神兴奋剂安非他命引起的活动过度。化合物19和其他正调节Kv3.1和/或Kv3.2通道的化合物因此可用于治疗与活动过度有关的病症，例如双相躁狂症，或与多巴胺系统障碍有关的病症，例如药物依赖、注意力缺陷多动症(ADHD)或精神分裂症。
实施例94
普通狨猴的行为
测试化合物的中枢抗焦虑效应可根据化合物减少狨猴对人的胁迫性逼近的特征性防御姿势的能力进行评价。同样该实验可根据化合物减少动物跳跃次数的能力评价测试化合物的镇静或催眠效应。该研究基于Costall,B.等人描述的方法，(1988)Br.J.Pharmac.95p475P。2岁以上的重量为300-500g的实验室繁育(GSK SpA,Italy)的雄性和雌性普通狨猴被用于该研究。所述动物配对饲养在笼中，室温维持在25±1°C，60%湿度，12小时光照/黑暗循环(0600开灯，30分钟模拟日出和黄昏)。各配对中的两只动物均纳入实验，其在动物饲养笼中进行。
由于不同狨猴的行为应答可能有差异，“响应”动物可预先选择以满足基线标准要求，其在人接近后的2分钟试验期内至少具有10个姿势。
试验中记录的姿势由上文Costall等人所述;
-生殖器露出("尾姿势"):动物将背部对着观察者，抬高其尾巴，露出生殖器区域；
-气味标记：动物用围肛和围生殖器臭腺标记笼表面；
-眯眼注视：动物通过眼缝注视观察者，且耳朵变平；
-弓背竖毛：动物弓着背在笼中移动，身体的毛全部竖起，不与观察者进行眼神交流。
从笼子后方跳跃到笼子前方的数目提供了活动能力指数，其可用于评价试验化合物产生的催眠、镇静或运动刺激的能力。
药物和材料
试验前2小时口服施用单剂量的化合物19(0.3、1或3mg/kg)或溶媒(HPMC 0.5%(w/v)、Tween800.1%(v/v)水溶液)(n=5-6只动物/组)。
结果
化合物19(1和3mg/kg口服)显著减少了动物在2分钟试验期内的跳跃次数，任何剂量下对于姿势均无影响，表明其具有镇静或催眠效应。数据总结于表2。
表2:化合物19对于狨猴行为的影响。试验前2小时口服施用化合物19。数据表达为平均值±标准误。对数据进行单向方差分析(ANOVA)后进行Dunnett检验，比较各化合物与相关溶媒治疗(＊=p<0.05，相对于溶媒治疗的动物;＊＊=p<0.01，相对于溶媒治疗的动物)。
  治疗   姿势数   跳跃数
  溶媒   12.2±0.3   22.3±2.5
  化合物19 0.3mg/kg   12.2±1.03   21.3±2.7
  化合物19 1mg/kg   10.0±1.2   15.3±2.5＊
  化合物193mg/kg   9.7±1.1   11.5±1.9＊＊
结论
这些结果表明化合物19在非人灵长类中具有催眠或镇静效应，因此说明正调节Kv3.1和/或Kv3.2通道的化合物19和其他化合物可用于治疗睡眠障碍。
实施例95
普通狨猴的药物-脑电描记法(phEEG)
动物和手术
该研究使用2岁以上的重250-500g的实验室繁育的雄性(切除输精管的)和雌性普通狨猴(绒毛猴，Callithrix jacchus)。所述动物配对饲养在笼中，室温维持在25±1°C，60%湿度，12小时光照/黑暗循环(0600开灯，30分钟模拟日出和黄昏)。动物接受标准进食，随意饮水。各配对中的只有一只动物纳入实验，其在动物饲养笼中进行。
本发明化合物的效果使用皮质EEG的遥感监测记录(ECoG)评价。使用标准外科技术将多通道遥感传感器(DSI model TL11M2-F40-EET)植入麻醉的狨猴腹腔内。通过顶额区域的两个钻孔将用牙粘固粉永久固定在颅骨的记录电极与硬脑膜接触。手术后，动物成对在其笼中饲养(一只移植，而其配偶未进行手术)，自由进食和饮水。手术恢复后动物显示正常的行为；然而，在至少3周后评价phEEG。所有体内研究根据意大利法律进行，并符合葛兰素史克的伦理学标准。
试验方案
动物放置在其笼中的休息盒内，各时间点使用Dataquest ART软件记录EEG扫描5分钟，使用Spike2软件(CED,UK)分析。在预处理阶段每2秒测定各频带的频谱功率并进行平均化。溶媒或药物治疗后，各5分钟记录期内以类似的方法每2秒测定各频带的频谱功率。离线计算各不同条带的绝对频谱功率的变化(δ,θ,α和β)。
药物治疗根据完全交叉设计分配。所有治疗均在动物之间随机分布，在不同的试验之间，各动物在经过适当的清除期后接受溶媒和各剂量的药物。
6只动物用实施例30口服治疗，剂量为0.3、1和3mg/kg(1ml/kg)，在治疗后+15、30、60、90、120和180分钟记录EEG扫描。将实施例30混悬于含有0.1%(w/v)Tween80和0.5%(w/v)HPMC的12.5%(w/v)Captisol水溶液中。
数据分析
考虑四种不同频率的带：δ(1.50-6.00Hz),θ(6.00-8.00Hz),α(8.00-12.00Hz)和β(12.00-30.00Hz)。各时间点下各条带的频谱功率值首先进行对数转化，随后用混合效应模型分析，以时间为固定效应，基线水平为共变，动物为随机项。数据表示为相对于基线的百分比变化的平均值及其标准偏差。
结果
这些研究中观察到的药物-EEG变化显示，与溶媒相比，最高剂量的实施例30(3mg/kg)导致δ带在30-120分钟内的绝对功率的统计学显著增加(p<0.05)，以及θ带功率在60分钟的统计学显著增加(p<0.05)。中间剂量的(1mg/kg)实施例30诱导δ带在30分钟的绝对功率的边际性显著增加(p<0.10)，和相伴的β带的显著降低(p<0.05)。任何剂量的实施例30均未观察到对α带的显著效应。
这些结果表明，本发明的化合物可具有抗精神病药物样性质，因为能够观察到其EEG变化的模式与人的抗精神病药物类似。

Claims (18)

1.式(Ia)的化合物或其可药用盐
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其中：
R1是卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、卤代C1-4烷基、卤代C1-4烷氧基或氰基;
R2是H、卤素、氰基、C1-4烷基或C1-4烷氧基；条件是当R2是H时，R1不在对位；
X是C或N；
Y是C或N；
R3是C1-4烷基；
R4是H、氘或C1-4烷基；或R3和R4能稠合形成C3-4螺碳环基团。
2.根据权利要求1的化合物或其可药用盐，其中R1是卤素、C1-4烷基或C1-4烷氧基、卤代C1-4烷氧基、氰基，R2是H、卤素、C1-4烷基和C1-4烷氧基；条件是当R2是H时，R1不在对位。
3.根据权利要求1或2的化合物或其可药用盐，其中R1是卤素、C1-4烷基或C1-4烷氧基。
4.根据权利要求1的化合物或其可药用盐，其中R1是C1-4烷基、C1-4烷氧基或卤代C1-4烷氧基;R2是H、氰基或烷基；X是N，Y是N或C，R3是C1-4烷基；R4是C1-4烷基或H。
5.根据权利要求1或4的化合物或其可药用盐，其中R1是丙基、丁基、甲氧基、丙氧基或三氟甲氧基；R2是H、氰基或甲基；X是N，Y是N或C，R3是乙基，R4是甲基或H。
6.化合物，其选自下列：
(5R)-5-甲基-3-{4-[(3-甲基苯基)氧基]苯基}-2,4-咪唑烷二酮;
(5R)-5-甲基-3-(4-{[3-(甲氧基)苯基]氧基}苯基)-2,4-咪唑烷二酮;
(5R)-3-(4-{[3-(乙氧基)苯基]氧基}苯基)-5-甲基-2,4-咪唑烷二酮;
(5R)-3-{4-[(3-氯-5-氟苯基)氧基]苯基}-5-甲基-2,4-咪唑烷二酮;
(5R)-3-{4-[(3-氯-4-氟苯基)氧基]苯基}-5-甲基-2,4-咪唑烷二酮;
(5S)-3-{4-[(3-氯-4-氟苯基)氧基]苯基}-5-甲基-2,4-咪唑烷二酮;
(5R)-5-甲基-3-(4-{[2-甲基-5-(甲氧基)苯基]氧基}苯基)-2,4-咪唑烷二酮;
(5R)-5-甲基-3-(4-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}苯基)-2,4-咪唑烷二酮;
(5R)-5-甲基-3-(6-{[3-(1-甲基乙基)苯基]氧基}-3-吡啶基)-2,4-咪唑烷二酮;
(5R)-5-甲基-3-[6-({3-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}氧基)-3-吡啶基]-2,4-咪唑烷二酮;
(5R)-3-{6-[(2,5-二甲基苯基)氧基]-3-吡啶基}-5-甲基-2,4-咪唑烷二酮;
(5R)-3-{6-[(2,3-二甲基苯基)氧基]-3-吡啶基}-5-甲基-2,4-咪唑烷二酮;
(5R)-3-{6-[(2,6-二甲基苯基)氧基]-3-吡啶基}-5-甲基-2,4-咪唑烷二酮;
(5R)-3-{6-[(2-乙基苯基)氧基]-3-吡啶基}-5-甲基-2,4-咪唑烷二酮;
(5R)-5-甲基-3-(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)-2,4-咪唑烷二酮;
(5R)-5-甲基-3-(6-{[2-甲基-5-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)-2,4-咪唑烷二酮;
(5R)-5-甲基-3-(6-{[2-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)-2,4-咪唑烷二酮;
(5R)-5-乙基-3-(4-{[3-(甲氧基)苯基]氧基}苯基)-2,4-咪唑烷二酮;
(5R)-5-乙基-3-(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)-2,4-咪唑烷二酮;
(5S)-5-乙基-3-(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)-2,4-咪唑烷二酮;
(5R)-5-乙基-3-(6-{[3-(1-甲基乙基)苯基]氧基}-3-吡啶基)-2,4-咪唑烷二酮;
5,5-二甲基-3-(4-{[3-(甲氧基)苯基]氧基}苯基)-2,4-咪唑烷二酮;
3-{4-[(2,3-二甲基苯基)氧基]苯基}-5,5-二甲基-2,4-咪唑烷二酮;
3-{6-[(2-乙基苯基)氧基]-3-吡啶基}-5,5-二甲基-2,4-咪唑烷二酮;
3-{6-[(2,6-二甲基苯基)氧基]-3-吡啶基}-5,5-二甲基-2,4-咪唑烷二酮;
(5R)-5-(1-甲基乙基)-3-(4-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}苯基)-2,4-咪唑烷二酮;
(5R)-5-甲基-3-(2-{[3-(1-甲基乙基)苯基]氧基}-5-嘧啶基)-2,4-咪唑烷二酮;
(5R)-5-乙基-3-(2-{[3-(乙氧基)-4-甲基苯基]氧基}-5-嘧啶基)-2,4-咪唑烷二酮;
(5R)-5-(1,1-二甲基乙基)-3-(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)-2,4-咪唑烷二酮;
(5R)-5-乙基-5-甲基-3-(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)-2,4-咪唑烷二酮;
7-(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)-5,7-二氮杂螺[3.4]辛烷-6,8-二酮;
6-(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)-4,6-二氮杂螺[2.4]庚烷-5,7-二酮;
4-{[5-(4,4-二甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基)-2-吡啶基]氧基}-2-(1-甲基乙基)苄腈;
4-{[5-(4,4-二甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基)-2-吡啶基]氧基}-2-[(三氟甲基)氧基]苄腈;
3-{6-[(4-氟-3-甲基苯基)氧基]-3-吡啶基}-5,5-二甲基-2,4-咪唑烷二酮;
3-{6-[(4-氟-2-甲基苯基)氧基]-3-吡啶基}-5,5-二甲基-2,4-咪唑烷二酮;
5,5-二甲基-3-(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)-2,4-咪唑烷二酮;
(5R)-5-(1-甲基乙基)-3-(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)-2,4-咪唑烷二酮;
3-(6-{[2-(1,1-二甲基乙基)苯基]氧基}-3-吡啶基)-5,5-二甲基-2,4-咪唑烷二酮;
3-(2-{[2-(1,1-二甲基乙基)苯基]氧基}-5-嘧啶基)-5,5-二甲基-2,4-咪唑烷二酮;
(5R)-5-乙基-5-甲基-3-(2-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-5-嘧啶基)-2,4-咪唑烷二酮;
(5R)-5-乙基-3-(2-{[3-(乙氧基)-4-甲基苯基]氧基}-5-嘧啶基)-5-甲基-2,4-咪唑烷二酮;
5,5-二甲基-3-[6-({3-[(三氟甲基)氧基]苯基}氧基)-3-吡啶基]-2,4-咪唑烷二酮;
4-{[5-(4,4-二甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基)-2-吡啶基]氧基}-3-乙基苄腈;
2-氯-4-{[5-(4,4-二甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基)-2-吡啶基]氧基}苄腈;
5,5-二甲基-3-[6-({4-甲基-3-[(三氟甲基)氧基]苯基}氧基)-3-吡啶基]-2,4-咪唑烷二酮;
4-{[5-(4,4-二甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基)-2-吡啶基]氧基}-2-(甲氧基)苄腈;
4-{[5-(4,4-二甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基)-2-吡啶基]氧基}-3-甲基苄腈;
4-{[5-(4,4-二甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基)-2-吡啶基]氧基}-3-(三氟甲基)苄腈;
4-{[5-(4,4-二甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基)-2-吡啶基]氧基}-2-乙基苄腈;
4-{[5-(4,4-二甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基)-2-嘧啶基]氧基}-2-乙基苄腈;
3-环丙基-4-{[5-(4,4-二甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基)-2-吡啶基]氧基}苄腈;
4-{[5-(4,4-二甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基)-2-吡啶基]氧基}-3-(1,1-二甲基乙基)苄腈;
2-[(环丙基甲基)氧基]-4-{[5-(4,4-二甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基)-2-吡啶基]氧基}苄腈;
4-{[5-(4,4-二甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基)-2-吡啶基]氧基}-2-(乙氧基)苄腈;
2-环丙基-4-{[5-(4,4-二甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基)-2-吡啶基]氧基}苄腈;
5,5-二甲基-3-[2-({4-甲基-3-[(三氟甲基)氧基]苯基}氧基)-5-嘧啶基]-2,4-咪唑烷二酮;
4-{[5-(4,4-二甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基)-2-嘧啶基]氧基}-3-(1,1-二甲基乙基)苄腈;
4-{[5-(4,4-二甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基)-2-吡啶基]氧基}-2-[(1-甲基乙基)氧基]苄腈;
4-({5-[(4R)-4-乙基-4-甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-吡啶基}氧基)-2-[(1-甲基乙基)氧基]苄腈;
3-环丙基-4-({5-[(4R)-4-乙基-4-甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-吡啶基}氧基)苄腈;
4-({5-[(4R)-4-乙基-4-甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-吡啶基}氧基)-2-[(三氟甲基)氧基]苄腈;
2-环丙基-4-({5-[(4R)-4-乙基-4-甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-吡啶基}氧基)苄腈;
(5R)-5-乙基-5-甲基-3-[2-({4-甲基-3-[(三氟甲基)氧基]苯基}氧基)-5-嘧啶基]-2,4-咪唑烷二酮;
3-(1,1-二甲基乙基)-4-({5-[(4R)-4-乙基-4-甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-嘧啶基}氧基)苄腈;
3-(1,1-二甲基乙基)-4-({5-[(4R)-4-乙基-4-甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-吡啶基}氧基)苄腈;
4-{[4-(4,4-二甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基)苯基]氧基}-2-(甲氧基)苄腈;
4-{[4-(4,4-二甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基)苯基]氧基}-2-(乙氧基)苄腈;
4-({4-[(4R)-4-乙基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]苯基}氧基)-2-(乙氧基)苄腈;
3-环丙基-4-({5-[(4R)-4-乙基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-吡啶基}氧基)苄腈;
3-(1,1-二甲基乙基)-4-({5-[(4R)-4-乙基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-吡啶基}氧基)苄腈;
4-({5-[(4R)-4-乙基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-吡啶基}氧基)-2-(甲氧基)苄腈;
4-({4-[(4R)-4-乙基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]苯基}氧基)-2-(甲氧基)苄腈;
2-[(环丙基甲基)氧基]-4-({5-[(4R)-4-乙基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-吡啶基}氧基)苄腈;
(5R)-5-乙基-3-[6-({4-甲基-3-[(三氟甲基)氧基]苯基}氧基)-3-吡啶基]-2,4-咪唑烷二酮;
2-环丙基-4-({5-[(4R)-4-乙基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-吡啶基}氧基)苄腈;
4-({5-[(4R)-4-乙基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-吡啶基}氧基)-2-(1-甲基乙基)苄腈;
4-({5-[(4R)-4-乙基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-吡啶基}氧基)-2-(1-甲基乙基)苄腈;
(5R)-5-乙基-3-[2-({4-甲基-3-[(三氟甲基)氧基]苯基}氧基)-5-嘧啶基]-2,4-咪唑烷二酮;
4-({5-[(4R)-4-乙基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-吡啶基}氧基)-2-[(1-甲基乙基)氧基]苄腈;
4-({5-[(4R)-4-乙基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-吡啶基}氧基)-3-甲基苄腈;
4-({5-[(4R)-4-乙基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-吡啶基}氧基)-2-[(三氟甲基)氧基]苄腈;
3-乙基-4-({5-[(4R)-4-乙基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-嘧啶基}氧基)苄腈;
4-({5-[(4R)-4-乙基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-嘧啶基}氧基)-3-甲基苄腈;
3-(1,1-二甲基乙基)-4-({5-[(4R)-4-乙基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-嘧啶基}氧基)苄腈；和
4-({5-[(4R)-4-乙基-4-甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-吡啶基}氧基)-2-(1-甲基乙基)苄腈;
或其可药用盐。
7.根据权利要求6的化合物，其中所述化合物选自：
(5R)-5-乙基-3-(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基;
(5R)-5-乙基-5-甲基-3-(6-{[4-甲基-3-(甲氧基)苯基]氧基}-3-吡啶基)-2,4-咪唑烷二酮;
4-({5-[(4R)-4-乙基-4-甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-吡啶基}氧基)-2-[(三氟甲基)氧基]苄腈;
(5R)-5-乙基-5-甲基-3-[2-({4-甲基-3-[(三氟甲基)氧基]苯基}氧基)-5-嘧啶基]-2,4-咪唑烷二酮;
3-(1,1-二甲基乙基)-4-({5-[(4R)-4-乙基-4-甲基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-吡啶基}氧基)苄腈;
(5R)-5-乙基-3-[6-({4-甲基-3-[(三氟甲基)氧基]苯基}氧基)-3-吡啶基]-2,4-咪唑烷二酮;
4-({5-[(4R)-4-乙基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-吡啶基}氧基)-2-(1-甲基乙基)苄腈;
4-({5-[(4R)-4-乙基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-吡啶基}氧基)-2-(1-甲基乙基)苄腈;
(5R)-5-乙基-3-[2-({4-甲基-3-[(三氟甲基)氧基]苯基}氧基)-5-嘧啶基]-2,4-咪唑烷二酮;
4-({5-[(4R)-4-乙基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-吡啶基}氧基)-2-[(1-甲基乙基)氧基]苄腈;
4-({5-[(4R)-4-乙基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-吡啶基}氧基)-2-[(三氟甲基)氧基]苄腈;
3-(1,1-二甲基乙基)-4-({5-[(4R)-4-乙基-2,5-二氧代-1-咪唑烷基]-2-嘧啶基}氧基)苄腈;
或其可药用盐。
8.根据前述任一权利要求的化合物或其可药用盐，其用于治疗。
9.根据权利要求1-7任一项的化合物或其可药用盐，其用于治疗或预防其中需要Kv3.1和/或Kv3.2通道调节剂的疾病或病症。
10.用于权利要求10的用途的根据权利要求1-7任一项的化合物或其可药用盐，其中所述疾病或病症选自抑郁和情感障碍、听觉障碍、精神分裂症、物质滥用障碍、睡眠障碍或癫痫。
11.治疗或预防其中需要Kv3的调节剂的疾病或病症的方法，其包括向有需要的个体施用有效量的权利要求1-7任一项的化合物或其可药用盐。
12.根据权利要求11的方法，其中所述疾病或病症选自抑郁和情感障碍、听觉障碍、精神分裂症、物质滥用障碍、睡眠障碍或癫痫。
13.根据权利要求1-7任一项的化合物或其可药用盐在制备治疗或预防其中需要Kv3的调节剂的疾病或病症的药物中的用途。
14.根据权利要求13的化合物的用途，其中所述疾病或病症选自抑郁和情感障碍、听觉障碍、精神分裂症、物质滥用障碍、睡眠障碍或癫痫。
15.Kv3.1和/或Kv3.2增强化合物，其具有的平均tau值不超过溶媒(DMSO 0.5%)存在时所得平均值2个标准偏差，其用于治疗其中正调节Kv3.1和/或Kv3.2通道功能有益的疾病或病症。
16.权利要求15的化合物，其中所述疾病或病症选自精神分裂症、双相情感障碍、听觉障碍、睡眠障碍、物质相关的病症和癫痫。
17.Kv3.1和/或Kv3.2增强化合物，其具有的平均tau值超过溶媒(DMSO 0.5%)存在时所得平均值2个标准偏差，其用于治疗其中抑制Kv3.1和/或Kv3.2通道功能有益的疾病。
18.权利要求17的化合物，其中所述疾病或病症选自听觉过敏、脆性X综合征和孤独症。
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