JP4171549B2 - 含フッ素アミノ酸誘導体 - Google Patents
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、医薬として有用な含フッ素アミノ酸誘導体に関し、例えば、精神分裂病、不安及びその関連疾患、うつ病、二極性障害、てんかん等の精神医学的障害、さらに、薬物依存症、認知障害、アルツハイマー病、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、筋硬直に伴う運動障害、脳虚血、脳不全、脊髄障害、頭部障害等の神経学的疾患の治療及び予防に有用である新規な含フッ素アミノ酸誘導体に関する。
【０００２】
【従来の技術】
近年、グルタミン酸受容体遺伝子のクロ−ニングが相次ぎ、グルタミン酸受容体には驚異的な数のサブタイプが存在することが明らかとなった。現在、グルタミン酸受容体は、受容体がイオンチャネル型構造を持つ「イオノトロピック型」及び、受容体がＧ−タンパク質と共役している「メタボトロピック型」の２つに大きく分類されている（Science, 258, 597-603, 1992）。更に、イオノトロピック受容体は薬理学的にＮ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）、α−アミノ−３−ヒドロキシ−５−メチルイソキサゾ−ル−４−プロピオネ−ト（ＡＭＰＡ）及びカイネ−トの３種類に分類され（Science, 258, 597-603, 1992）、メタボトロピック受容体はタイプ１〜タイプ８の８種類に分類される（J.Neurosci., 13, 1372-1378, 1993; Neuropharmacol., 34, 1-26, 1995）。
【０００３】
メタボトロピックグルタミン酸受容体は薬理学的には３つのグループに分類される。この中で、グループ２（ｍＧｌｕＲ２／ｍＧｌｕＲ３）は、アデニルサイクラーゼと結合し、サイクリックアデノシン１リン酸（ｃＡＭＰ）のホルスコリン刺激性の蓄積を抑制する（Trends Pharmacol. Sci., 14, 13(1993)）ことから、グループ２メタボトロピックグルタミン酸受容体に作用する化合物は急性及び慢性の精神医学的疾患及び神経学的疾患の治療又は予防に有効なはずである。そして、グループ２メタボトロピックグルタミン酸受容体に作用する物質としては、特開平８−１８８５６１号公報に(+)-(1S,2S,5R,6S)−２−アミノビシクロ[3.1.0]ヘキサン−２，６−ジカルボン酸が開示されている。
【０００４】
ところで、フッ素原子は強い電子吸引性と高い脂溶性を付与する傾向を有しており、フッ素原子の導入された化合物は物性を大きく変える。このため、フッ素原子の導入は化合物の吸収性、代謝的安定性及び薬理作用に大きく影響を及ぼす可能性がある。しかし、フッ素原子の導入は決して容易なことではない。実際に、特開平８−１８８５６１号公報において、(+)-(1S,2S,5R,6S)−２−アミノビシクロ[3.1.0]ヘキサン−２，６−ジカルボン酸へのフッ素原子の導入は全く検討されていない。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、上記した従来技術の現状に鑑み、例えば、精神分裂病、不安及びその関連疾患、うつ病、二極性障害、てんかん等の精神医学的障害、並びに、薬物依存症、認知障害、アルツハイマー病、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、筋硬直に伴う運動障害、脳虚血、脳不全、脊髄障害、頭部障害等の神経学的疾患に治療効果及び予防効果を有する薬物であって、特に経口投与でグループ２メタボトロピックグルタミン酸受容体に作用することのできる薬物を提供することにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、(+)-(1S,2S,5R,6S)−２−アミノビシクロ[3.1.0]ヘキサン−２,６−ジカルボン酸にフッ素原子を導入した含フッ素アミノ酸誘導体について鋭意検討した結果、グループ２メタボトロピックグルタミン酸受容体に経口投与で影響を及ぼすことのできる新規含フッ素アミノ酸誘導体を見出し、本発明を完成した。
【０００７】
すなわち、本発明は、式［Ｉ］
【化３】
［式中、Ｘ1は水素原子又はフッ素原子を示し、Ｒ1及びＲ2は同一又は異なって水素原子又は炭素数１−１０のアルキル基を示す。］で表される２−アミノ−３−フルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−２，６−ジカルボン酸誘導体、その医薬上許容される塩又はその水和物である。
【０００８】
本発明において、炭素数１−１０のアルキル基とは、直鎖状又は分岐鎖状のアルキル基であり、直鎖状又は分岐鎖状アルキル基としては、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ペンチル基、イソペンチル基、１−エチルプロピル基、へキシル基、イソへキシル基、１−エチルブチル基、ヘプチル基、イソヘプチル基、オクチル基、ノニル基、デシル基などを挙げることができる。
【０００９】
また、本発明における医薬上許容される塩としては、例えば、硫酸、塩酸、燐酸などの鉱酸との塩、酢酸、シュウ酸、乳酸、酒石酸、フマール酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸などの有機酸との塩、トリメチルアミン、メチルアミンなどのアミンとの塩、又はナトリウムイオン、カリウムイオン、カルシウムイオンなどの金属イオンとの塩などを挙げることができる。なお、本発明化合物は、各種の溶媒和物として存在し得るが、医薬としての適用性の面からは水和物が好ましい。
【００１０】
式［Ｉ］で示される化合物の中でＸ1が水素原子の場合は、１、２、３、５及び６位に５つの不斉炭素原子が存在する。従って、Ｘ1が水素原子である本発明化合物は、光学活性体、ラセミ体等の２種のエナンチオマー混合物及びジアステレオマーの混合物として存在できる。更に、Ｘ1がフッ素原子の場合、１、２、５及び６位に４つの不斉炭素原子が存在する。従って、Ｘ1がフッ素原子である本発明化合物は、光学活性体、ラセミ体等の２種のエナンチオマー混合物及びジアステレオマーの混合物として存在できる。
【００１１】
式［Ｉ］に示す化合物において好ましいＸ1は水素原子である。さらに、Ｘ1が水素原子である場合には、式［Ｉ］に示す化合物は下記の立体化学配置を有することがより好ましい。
【化４】
【００１２】
また、Ｘ1、Ｒ1及びＲ2が水素原子の場合、本化合物の光学異性体の中で最も好ましい光学活性体は正の旋光性を有しており、この絶対立体化学配置は、本化合物の合成前駆体である２−スピロ−５´−ヒダントイン−３−フルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボン酸 (Ｒ)−(＋)−1−フェニルエチルアミン塩のＸ線単結晶構造解析により、１Ｓ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｓと決定された。
【００１３】
一方、式［Ｉ］においてＲ1とＲ2の片方又は両方が水素以外を示す場合、すなわちエステル体はグループ２メタボトロピックグルタミン酸受容体に影響を及ぼさない。しかし、このエステル体は生体内でカルボン酸に加水分解され、グループ２メタボトロピックグルタミン酸受容体に影響を及ぼすカルボン酸に変化する。このように、本発明化合物のエステル体はプロドラッグとして機能するため、極めて有用である。
【００１４】
【発明の実施の形態】
式［Ｉ］の化合物は、以下に示す各反応式に従って製造することができる。下記の反応式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｘ1は前記と同様であり、Ｒ3とＲ4は同一又は異なって炭素数１−１０の低級アルキル基を示し、Ｙは一般的なアミノ基の保護基（PROTECTIVE GROUPS IN ORGANIC SYNTHESIS,THEODORA W. GREENE and PETER G. M. WUTS著 参照）を示す。
【００１５】
まず、下記式［化５］に示されるように、出発物質であるケトン体（１）の所定の位置に１又は２のフッ素原子が導入される。
【化５】
【００１６】
光学活性体、ラセミ体等の２種のエナンチオマー混合物又はジアステレオマーの混合物であるモノフッ化化合物(２)は、対応する光学活性体、ラセミ体等の２種のエナンチオマー混合物又はジアステレオマーの混合物であるケトン体(１)を一旦エノールシリルエーテル体又はエノールエステル体とした後、フッ素化試薬と反応させるか、或いはケトン体(１)に直接、フッ素化試薬を反応させることによって得ることができる。また、光学活性体、ラセミ体等の２種のエナンチオマー混合物又はジアステレオマーの混合物であるジフッ化化合物(３)は、モノフッ化化合物(２)を一旦エノールシリルエーテル体とした後フッ化試薬と反応させるか、モノフッ化化合物(２)に直接フッ化試薬と反応させるか、或いはケトン体(１)に２当量以上のフッ素化試薬を反応させることによって得ることができる。
【００１７】
ここで、エノールシリルエーテル体の製造は、ケトン体(１)に、例えばテトラヒドロフラン、ジエチルエーテルなどのエーテル類、トルエン、ベンゼンなどの炭化水素類、メタノール、ｔ−ブタノールなどのアルコール類、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド等の不活性溶媒中、例えばｎ−ブチルリチウム、ｓ−ブチルリチウムなどのアルキルリチウム類、例えばリチウムビストリメチルシリルアミド、カリウムビストリメチルシリルアミド、ナトリウムアミドなどの金属アミド類、例えば水素化ナトリウムなどの水素化金属類、又は、例えばトリエチルアミン等のアミン類等の塩基の存在下、例えばクロロトリメチルシラン、クロロｔ−ブチルジメチルシラン等のシリル化剤を反応させることによって行うことができる。ここでの反応温度は１００℃以下が好ましく、更に−７８℃から室温がより好ましい。
【００１８】
また、エノールエステル体の製造は、上記シリル化剤を、例えば無水酢酸等の酸無水物、例えばプロピオニルクロライド等の酸ハライド、又は、例えば酢酸等のカルボン酸とエトキシカルボニルクロライド等のアルコキシカルボニルハライドから調製される混合酸無水物等に代えることにより、エノールシリルエーテル体の製造と同様に行うことができる。
【００１９】
フッ素化試薬としては、例えば、Ｎ−フルオロピリジニウムトリフラート、Ｎ−フルオロ−Ｎ−ｔ−ブチルベンゼンスルホンアミド、Ｎ−フルオロサッカリンスルタム、Ｎ−フルオロビス（ベンゼンスルホン）イミド、Ｎ−フルオロ−ｏ−ベンゼンスルホンイミドなどのＮ−フルオロ型フッ素化剤、フッ素、フッ化水素、酸性フッ化カリウム（ＨＫＦ2）等の無機フッ化化合物、ＣｌＯ3Ｆ、又はＣＦ3ＣＯＯＦ等を使用することができる。
【００２０】
ここで、直接フッ素化試薬を反応させる態様としては、ケトン体(１)に、例えばテトラヒドロフラン、ジエチルエーテルなどのエーテル類、トルエン、ベンゼンなどの炭化水素類、メタノール、ｔ−ブタノールなどのアルコール類、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド等の不活性溶媒中、例えばｎ−ブチルリチウム、ｓ−ブチルリチウムなどのアルキルリチウム類、例えばリチウムビストリメチルシリルアミド、ナトリウムアミドなどの金属アミド類、例えば水素化ナトリウムなどの水素化金属類、又は、例えばトリエチルアミン等のアミン類等の塩基の存在下、反応温度を好ましくは１００℃以下で、より好ましくは−７８℃から室温で、上記したようなフッ素化試薬を反応させる態様が好ましい。
【００２１】
このようにして得られた、光学活性体、ラセミ体等の２種のエナンチオマー混合物又はジアステレオマーの混合物であるモノ又はジフッ素化化合物(４)は、下記式［化６］に示すように、例えば、ストレッカーアミノ酸合成（Strecker Amino Acid Synthesis）（Ann.,75,27(1850);91,349(1850)）、ブッヘラー−ベルグス反応（Bucherer-Bergs Reaction）（J.Prakt.Chem.,140,69(1934)）又はこれらの変法によって得られたアミノシアニド誘導体又はヒダントイン誘導体等を加水分解することによって、本発明化合物である対応する光学活性体、ラセミ体等の２種のエナンチオマー混合物又はジアステレオマーの混合物である含フッ素アミノ酸誘導体(５)とすることができる。
【化６】
【００２２】
具体的には、モノ又はジフッ化化合物(４)は、例えば、シアン化ナトリウム又はシアン化カリウム及び炭酸アンモニウムと、例えばエタノールなどのアルコール類又はアルコール類と水の混合溶媒中、好ましくは３０℃〜５０℃で１日〜２日反応することにより、合成中間体であるヒダントイン誘導体とすることができる。前記ヒダントイン誘導体は、続いて、例えば水酸化ナトリウムなどの塩基、或いは塩酸、硫酸等の酸によって、例えばエタノールなどのアルコール類、ジオキサンなどのエーテル類、アセトンなどのケトン類、又は水などの不活性溶媒中加水分解することによって、本発明化合物である含フッ素アミノ酸誘導体(５)とすることが可能である。
【００２３】
下記式［化７］に示すように、(１ＳＲ,５ＲＳ,６ＳＲ)−(１)で示されるケトン体に１つのフッ素原子が導入されたモノフッ化化合物（前出の（２）参照）のブッヘラー−ベルグス反応によって得られる、(１ＳＲ,５ＲＳ,６ＳＲ)−(６)で示されるヒダントイン誘導体は、例えばシリカゲル等を用いたカラムクロマトグラフィーや再結晶などの一般的な手法によって、（１ＳＲ，２ＳＲ，３ＳＲ，５ＲＳ，６ＳＲ）、（１ＳＲ，２ＳＲ，３ＲＳ，５ＲＳ，６ＳＲ）、（１ＳＲ，２ＲＳ，３ＳＲ，５ＲＳ，６ＳＲ）、（１ＳＲ，２ＲＳ，３ＲＳ，５ＲＳ，６ＳＲ）の４つのジアステレオマーに分離することが出来る。
【００２４】
更に、この４つのジアステレオマーは、それぞれ、そのエステル部位を加水分解して（７）で示されるカルボン酸誘導体とした後、例えば塩基性キラル分割剤を用いた分割等の一般的な分割を行うことによって、（１Ｓ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）、（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｒ）、（１Ｓ，２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ，６Ｓ）、（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）、（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）、（１Ｒ，２Ｓ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｒ）、（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ，６Ｓ）、（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）の８つのエナンチオマー（８）に分割できる。そして、これらのエナンチオマー（８）は、そのヒダントイン部位を加水分解によって、本発明化合物である８つの光学活性な含フッ素アミノ酸誘導体（９）とすることができる。
【化７】
【００２５】
ここで、塩基性キラル分割剤としては、例えば(＋)又は(−)−１−フェニルエチルアミン、(＋)又は(−)−２−アミノ−１−ブタノール、(＋)又は(−)−アラニノール、ブルシン、シンコニジン、シンコニン、キニン、キニジン、デヒドロアビエチルアミン等の光学活性なアミン類を使用することができる。
【００２６】
一方、本発明化合物の１つである、２つのフッ素原子を含有する４つの光学活性な（１Ｓ，２Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）、（１Ｒ，２Ｒ，５Ｓ，６Ｒ）、（１Ｓ，２Ｒ，５Ｒ，６Ｓ）、（１Ｒ，２Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−含フッ素アミノ酸誘導体（１２）は、下記式［化８］に示すように、(１ＳＲ,５ＲＳ,６ＳＲ)−(１)を出発原料にして上記の場合と同様にフッ素化、ヒダントイン化、ジアステレオマー（１０）の分離、エステル部位の加水分解による誘導体（１１）の生成、分割及びヒダントイン部位の加水分解を行うことによって合成することができる。
【化８】
【００２７】
なお、１つのフッ素原子を有する、(１ＳＲ,５ＲＳ,６ＳＲ)−(２)で示されるモノフッ化化合物は、下記式［化９］に示すように、［化７］と同様の一般的な手法によるジアステレオマーの分離、エステル部位の加水分解及び分割を行うことにより、（１Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）、（１Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｒ）、（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ，６Ｓ）、（１Ｒ，３Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）の４つの光学活性なケトカルボン酸（１３）とすることができる。
【化９】
【００２８】
したがって、４つの光学活性なケトカルボン酸(１３)について直接、或いはそのエステル化後に、式（５）により示した化合物の合成の場合と同様の操作を行い、また、更にジアステレオマーの分離を行うことによっても、光学活性な本発明化合物である含フッ素アミノ酸誘導体を製造することができる。
【００２９】
また、下記式［化１０］に示されるように、２つのフッ素原子を有する（１Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）、（１Ｒ，５Ｓ，６Ｒ）の２つの光学活性なケトカルボン酸（１４）は、２つのフッ素原子を有する(１ＳＲ,５ＲＳ,６ＳＲ)−(３)で示されるケトン体から、［化９］において式（１３）により示した化合物の合成の場合と同様の操作、すなわち、エステルの加水分解及び分割によって得ることができる。
【化１０】
【００３０】
したがって、２つの光学活性なケトカルボン酸(１４)について直接、或いはエステル化後に、［化６］において式（５）により示した化合物の合成の場合と同様の操作を行い、更にジアステレオマーの分離を行うことによっても光学活性な本発明化合物である含フッ素アミノ酸誘導体を製造することができる。
【００３１】
ところで、下記式［化１１］に示されるように、式(６)で示される光学活性体、ラセミ体等の２種のエナンチオマー混合物又はジアステレオマーの混合物として存在する本発明化合物である含フッ素アミノ酸は、アミノ基をＹで示される保護基で保護した後、Ｒ3−Ｘ2又はＲ4−Ｘ2で示されるアルキルハライド、もしくはＲ3−ＯＨ又はＲ4−ＯＨで示されるアルコールを用いて一般的な方法にてエステル化し、アミノ基の保護基を除去することによって、式(１５)で示される本発明化合物である含フッ素アミノ酸エステルに誘導することができる。
【化１１】
【００３２】
ここで、アミノ基の保護、エステル化及びアミノ基の脱保護は、PROTECTIVE GROUPS IN ORGANIC SYNTHESIS,THEODORA W. GREENE and PETER G. M.WUTS著に示されるような一般的な方法で実施可能である。
【００３３】
更に、式(１５)で示される含フッ素アミノ酸エステル、又は、式(１７)で示されるＮ−保護含フッ素アミノ酸エステルの各ジアステレオマーは、例えばシリカゲル等を用いたカラムクロマトグラフィーや再結晶などの一般的な手法によって分離することが出来る。また、式(１５)の各ジアステレオマーは、例えば酸性キラル分割剤を用いた分割等の一般的な分割方法によって各エナンチオマーに分割できる。
【００３４】
ここで、酸性キラル分割剤としては、(＋)又は(−)−ジ−ｐ−トルオルイル酒石酸、(＋)又は(−)−ジベンゾイル酒石酸、(＋)又は(−)−酒石酸、(＋)又は(−)−マンデル酸、(＋)又は(−)−しょうのう酸、又は(＋)又は(−)−しょうのうスルホン酸等の光学活性な有機酸類を使用することが可能である。
【００３５】
本発明化合物は１つまたはそれ以上の医薬的に許容される担体、賦形剤又は希釈剤と組み合わされて医薬的製剤とされることができる。前記担体、賦形剤及び希釈剤の例には、水、乳糖、デキストロース、フラクトース、ショ糖、ソルビトール、マンニトール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、でんぷん、ガム、ゼラチン、アルギネート、ケイ酸カルシウム、リン酸カルシウム、セルロース、水シロップ、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、アルキルパラヒドロキシベンゾエート、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、グリセリン、ゴマ油、オリーブ油、大豆油などの各種油が含まれる。
【００３６】
本発明化合物は、これらの担体、賦形剤又は希釈剤、そして、必要に応じて一般に使用される増量剤、結合剤、崩壊剤、ｐＨ調整剤、溶解剤などの添加剤が混合された上で、常用の製剤技術によって錠剤、丸剤、カプセル剤、顆粒剤、粉剤、液剤、乳剤、懸濁剤、軟膏剤、注射剤、皮膚貼付剤などの経口又は非経口用医薬、特にグループ２メタボトロピックグルタミン酸受容体作用薬として調製されることができる。本発明の化合物は成人患者に対して０．０１〜５００ｍｇを１日１回又は数回に分けて経口又は非経口で投与することが可能であるが、使用の容易性及び薬効の点からみて経口投与することが好ましい。なお、この投与量は治療対象となる疾病の種類、患者の年齢、体重、症状などにより適宜増減することが可能である。
【００３７】
【実施例】
以下、実施例及び試験例を示し本発明を具体的に説明する。ただし、それによって本発明をこれらの例のみに限定するものでないことは云うまでもない。
【００３８】
実施例１
(1SR,3RS,5RS,6SR)エチル ３−フルオロ−２−オキソビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボキシレート、及び(1SR,3SR,5RS,6SR)エチル ３−フルオロ−２−オキソビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボキシレートの合成
【００３９】
窒素雰囲気下、ｎ−ブチルリチウム３０.９ｍｌ（１.５４Ｍヘキサン溶液）と1,1,1,3,3,3−ヘキサメチルジシラザン７.５０ｇから調製したリチウムビストリメチルシリルアミドのテトラヒドロフラン１５０ｍｌ中に、−７５℃でテトラヒドロフラン１５０ｍｌに溶解した(1SR,5RS,6SR)エチル ２−オキソビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボキシレート６.６０ｇを滴下した。この温度で１時間撹拌した後、クロロトリメチルシラン７.５ｍｌを加え、室温で１時間撹拌した。反応溶液を減圧下濃縮後、残渣に無水ヘキサンを加え、生じた無機塩を濾別し、濃縮した。
【００４０】
残渣を塩化メチレン６６ｍｌに溶解し、Ｎ−フルオロベンゼンスルホンイミド１５.００ｇを加え、室温で１６.５時間撹拌した。反応溶液を水で２回洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、乾燥剤を濾別後、減圧下、濃縮した。残渣をクロマトグラフィー（シリカゲル：ワコウゲル(和光純薬製)、展開溶媒：ヘキサン−塩化メチレン−酢酸エチル＝６０：４：１）で精製し、(1SR,3RS,5RS,6SR)エチル ３−フルオロ−２−オキソビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボキシレートと(1SR,3SR,5RS,6SR)エチル ３−フルオロ−２−オキソビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボキシレートの混合物を４.３０ｇ得た。
【００４１】
得られた化合物のプロトンＮＭＲとマススペクトルデータを示す。
1Ｈ−ＮＭＲ(CDCl3)δ(ppm)；1.28(3Hx3/4,t,J=7.2Hz),1.29(3Hx1/4,t,J=7.2Hz),2.11-2.79(5H,m),4.18(2H,q,J=7.2Hz),4.51(1Hx1/4,dd,J=51Hz,8.1Hz),4.58(1Hx3/4,dt,J=51Hz,8.1Hz)
ＭＳ(FAB)(Pos)ｍ／ｅ；１８７(Ｍ+＋１)
【００４２】
実施例２
(1SR,3RS,5RS,6SR)エチル ３−フルオロ−２−オキソビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボキシレート、及び(1SR,3SR,5RS,6SR)エチル ３−フルオロ−２−オキソビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボキシレートの合成
【００４３】
窒素雰囲気下、ｎ−ブチルリチウム１.５ｍｌ（１.５４Ｍヘキサン溶液）と1,1,1,3,3,3−ヘキサメチルジシラザン０.３８ｇから調製したリチウムビストリメチルシリルアミドのテトラヒドロフラン６ｍｌ中に、−７５℃でテトラヒドロフラン６ｍｌに溶解した(1SR,5RS,6SR)エチル ２−オキソビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボキシレート０.２０ｇを滴下した。この温度で４５分間撹拌した後、Ｎ−フルオロベンゼンスルホンイミド０.７５ｇを加え、室温で２時間撹拌した。反応溶液を水で２回洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、乾燥剤を濾別後、減圧下、濃縮した。残渣をクロマトグラフィー（シリカゲル：ワコウゲル(和光純薬製)、展開溶媒：ヘキサン−塩化メチレン−酢酸エチル＝６０：４：１）で精製し、(1SR,3RS,5RS,6SR)エチル ３−フルオロ−２−オキソビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボキシレートと(1SR,3SR,5RS,6SR)エチル ３−フルオロ−２−オキソビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボキシレートの混合物を０.０８ｇ得た。
【００４４】
得られた化合物のプロトンＮＭＲとマススペクトルデータを示す。
1Ｈ−ＮＭＲ(CDCl3)δ(ppm)；1.28(3Hx3/4,t,J=7.2Hz),1.29(3Hx1/4,t,J=7.2Hz),2.11-2.79(5H,m),4.18(2H,q,J=7.2Hz),4.51(1Hx1/4,dd,J=51Hz,8.1Hz),4.58(1Hx3/4,dt,J=51Hz,8.1Hz)
ＭＳ(FAB)(Pos)ｍ／ｅ；１８７(Ｍ+＋１)
【００４５】
実施例３
(1SR,5RS,6SR)エチル 3,3−ジフルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボキシレートの合成
【００４６】
窒素雰囲気下、ｎ−ブチルリチウム３０.９ｍｌ（１.５４Ｍヘキサン溶液）と1,1,1,3,3,3−ヘキサメチルジシラザン７.５０ｇから調製したリチウムビストリメチルシリルアミドのテトラヒドロフラン１５０ｍｌ中に、−７５°Ｃでテトラヒドロフラン１５０ｍｌに溶解した(1SR,5RS,6SR)エチル ２−オキソビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボキシレート６.６０ｇを滴下した。この温度で１時間撹拌した後、クロロトリメチルシラン７.５ｍｌを加え、室温で１時間撹拌した。反応溶液を減圧下濃縮後、残渣に無水ヘキサンを加え、生じた無機塩を濾別し、濃縮した。残渣を塩化メチレン６６ｍｌに溶解し、Ｎ−フルオロベンゼンスルホンイミド１５.００ｇを加え、室温で１６.５時間撹拌した。反応溶液を水で２回洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、乾燥剤を濾別後、減圧下、濃縮した。残渣をクロマトグラフィー（シリカゲル：ワコウゲル(和光純薬製)、展開溶媒：ヘキサン−塩化メチレン−酢酸エチル＝６０：４：１）で精製し、(1SR,5RS,6SR)エチル 3,3−ジフルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボキシレートを０.０２ｇ得た。
【００４７】
得られた化合物のプロトンＮＭＲとマススペクトルデータを示す。
1Ｈ−ＮＭＲ(CDCl3)δ(ppm)；1.30(3H,t,J=7.1Hz),2.42-2.80(5H,m),4.20(2H,q,J=7.1Hz)
ＭＳ(Ion Spray)(Nega)ｍ／ｅ；２０３(Ｍ+−１)
【００４８】
実施例４
(1SR,5RS,6SR)エチル 3,3−ジフルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボキシレートの合成
【００４９】
窒素雰囲気下、ｎ−ブチルリチウム５.０ｍｌ（１.５４Ｍヘキサン溶液）と1,1,1,3,3,3−ヘキサメチルジシラザン１.４０ｇから調製したリチウムビストリメチルシリルアミドのテトラヒドロフラン２６ｍｌ中に、−７５℃でテトラヒドロフラン６.５ｍｌに溶解した実施例１で合成した化合物１.３ｇを滴下した。この温度で１時間撹拌した後、クロロトリメチルシラン１.３ｍｌを加え、室温で１時間撹拌した。反応溶液を減圧下濃縮後、残渣に無水ヘキサンを加え、生じた無機塩を濾別し、濃縮した。
【００５０】
残渣を塩化メチレン１３ｍｌに溶解し、Ｎ−フルオロベンゼンスルホンイミド３.３０ｇを加え、室温で５時間撹拌した。反応溶液を水で２回洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、乾燥剤を濾別後、減圧下、濃縮した。残渣をクロマトグラフィー（シリカゲル：ワコウゲル(和光純薬製)、展開溶媒：ヘキサン−塩化メチレン−酢酸エチル＝６０：４：１）で精製し、(1SR,5RS,6SR)エチル 3,3−ジフルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボキシレートを０.３４ｇ得た。
【００５１】
得られた化合物のプロトンＮＭＲとマススペクトルデータを示す。
1Ｈ−ＮＭＲ(CDCl3)δ(ppm)；1.30(3H,t,J=7.1Hz),2.42-2.80(5H,m),4.20(2H,q,J=7.1Hz)
ＭＳ(Ion Spray)(Nega)ｍ／ｅ；２０３(Ｍ+−１)
【００５２】
実施例５
(1SR,2SR,3SR,5RS,6SR)エチル ２−スピロ−５´−ヒダントイン−３−フルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボキシレート、(1SR,2SR,3RS,5RS,6SR)エチル ２−スピロ−５´−ヒダントイン−３−フルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボキシレート、及び(1SR,2RS,3RS,5RS,6SR)エチル ２−スピロ−５´−ヒダントイン−３−フルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボキシレートの合成
【００５３】
(1SR,3RS,5RS,6SR)エチル ３−フルオロ−２−オキソビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボキシレートと(1SR,3SR,5RS,6SR)エチル ３−フルオロ−２−オキソビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボキシレートの混合物４.８４ｇを、水２６ｍｌとエタノール３８ｍｌの混合溶液に溶解し、炭酸アンモニウム６.２５ｇとシアン化カリウム１.８６ｇを加え３５°Ｃで３７時間撹拌した。反応混合物を室温まで冷却後水３１ｍｌを加え、更に氷冷下２.５時間撹拌し生じた結晶を濾取し、２.１０ｇの第１結晶を得た。濾液に氷冷下濃塩酸を加えｐＨを１.０に調整し、生成した結晶を濾取し、２.００ｇの第２結晶を得た。
【００５４】
第１結晶をクロマトグラフィー（シリカゲル：ワコウゲル(和光純薬製)、展開溶媒：クロロホルム−メタノール＝１００：１）に付し、低極性ジアステレオマーを０.６１ｇと極性ジアステレオマーＡ（極性ジアステレオマーＢを約２５％を含む、極性ジアステレオマーＡと極性ジアステレオマーＢのＲｆ値は同じ）０.５５ｇに分離した。
【００５５】
低極性ジアステレオマー０.６１ｇを水−エタノール＝１：１の混合溶液より再結晶し、(1SR,2SR,3SR,5RS,6SR)エチル ２−スピロ−５´−ヒダントイン−３−フルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボキシレートを０.５２ｇを得た
。
【００５６】
得られた化合物のプロトンＮＭＲとマススペクトルデータを示す。
1Ｈ−ＮＭＲ(DMSO-d6)δ(ppm)；1.19(3H,t,J=7.0Hz),1.95-2.46(5H,m),4.06(2H,q,J=7.0Hz),4.81(1H,dd,J=52Hz,5.1Hz),8.44(1H,s),10.91(1H,s)
ＭＳ(ＥＩ)ｍ／ｅ；２５６(Ｍ+)
【００５７】
また、極性ジアステレオマーＡ ０.５５ｇを水−エタノール＝１：１の混合溶液より再結晶し、(1SR,2SR,3RS,5RS,6SR)エチル ２−スピロ−５´−ヒダントイン−３−フルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボキシレート０.３７ｇを得た。
【００５８】
得られた化合物のプロトンＮＭＲとマススペクトルデータを示す。
1Ｈ−ＮＭＲ(DMSO-d6)δ(ppm)；1.18(3H,t,J=7.1Hz),1.85-2.43(5H,m),4.05(2H,q,J=7.1Hz),4.70(1H,dt,J=52Hz,8.0Hz),8.21(1H,s),10.83(1H,s)
ＭＳ(ＥＩ)ｍ／ｅ；２５６(Ｍ+)
【００５９】
一方、第２結晶を酢酸エチルで洗浄し不溶物を濾別後濾液を減圧下濃縮し、残渣を水−エタノール＝１：１で２回再結晶した。この２回の再結晶濾液を減圧下濃縮し、残渣をクロマトグラフィー（シリカゲル：ワコウゲル(和光純薬製)、展開溶媒：クロロホルム−メタノール＝１００：１）に付し前記低極性ジアステレオマーを完全に除去した。得られた極性ジアステレオマーＢ（極性ジアステレオマーＡを約１０％を含む）の結晶０.２５ｇを水−エタノール＝１：１で再結晶を行い、、(1SR,2RS,3RS,5RS,6SR)エチル ２−スピロ−５´−ヒダントイン−３−フルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボキシレートを０.１８ｇ得た。
【００６０】
得られた化合物のプロトンＮＭＲとマススペクトルデータを示す。
1Ｈ−ＮＭＲ(DMSO-d6)δ(ppm)；1.18(3H,t,J=7.1Hz),1.81-2.17(4H,m),2.36(1H,dd,J=13Hz,7.2Hz),3.95-4.11(2H,m),4.90(1H,ddd,J=51Hz,8.9Hz,7.2Hz),8.54(1H,s),10.87(1H,s)
ＭＳ(ＥＩ)ｍ／ｅ；２５６(Ｍ+)
【００６１】
なお、上記と同様にして下記の化合物を合成した。
(1SR,2SR,5RS,6SR)エチル ２−スピロ−５´−ヒダントイン−3,3−ジフルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボキシレート
【００６２】
この化合物のプロトンＮＭＲとマススペクトルデータを示す。
1Ｈ−ＮＭＲ(DMSO-d6)δ(ppm)；1.19(3H,t,J=7.0Hz),1.85-1.89(1H,m),2.00-2.08(1H,m),2.15-2.27(1H,m),2.33-2.50(1H,m),2.55-2.86(1H,m),4.07(2H,q,J=7.0Hz),8.49(1H,m)
ＭＳ(ＥＩ)ｍ／ｅ；２７４(Ｍ+)
【００６３】
実施例６
(1SR,2SR,3RS,5RS,6SR)−２−アミノ−３−フルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−2,6−ジカルボン酸の合成
【００６４】
(1SR,2SR,3RS,5RS,6SR)エチル ２−スピロ−５´−ヒダントイン−３−フルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボキシレート３００ｍｇを３Ｍ水酸化ナトリウム水溶液２.５ｍｌに溶解し、１６時間加熱還流した。反応溶液を室温まで冷却後、ガラスフィルターで濾過し、濾液を濃塩酸でｐＨ３にした後、イオン交換クロマトグラフィー（ＡＧ１−Ｘ８ 陰イオン交換樹脂(Ｂｉｏ−Ｒａｄ)、展開溶媒：０.１Ｍ酢酸〜３Ｍ酢酸）で精製し、(1SR,2SR,3RS,5RS,6SR)−２−アミノ−３−フルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−２,６−ジカルボン酸を５１ｍｇ得た。
【００６５】
得られた化合物のプロトンＮＭＲとマススペクトルデータを示す。
1Ｈ−ＮＭＲ(TFA-d)δ(ppm)；2.23-2.24(1H,m),2.56-2.96(4H,m),5.15(1H,dt,J=52Hz,7.5Hz)
ＭＳ(ＣＩ)ｍ／ｅ；２０４(Ｍ+＋１)
【００６６】
なお、上記と同様にして下記の化合物を合成した。
(1SR,2SR,5RS,6SR)−２−アミノ−3,3−ジフルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−2,6−ジカルボン酸
【００６７】
この化合物のプロトンＮＭＲとマススペクトルデータを示す。
1Ｈ−ＮＭＲ(TFA-d)δ(ppm)；2.46(1H,brs),2.63-2.90(3H,m),3.01-3.12(1H,m)
ＭＳ(ＣＩ)ｍ／ｅ；２２２(Ｍ+＋１)
【００６８】
実施例７
(1SR,2SR,3SR,5RS,6SR)−２−アミノ−３−フルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−２,６−ジカルボン酸の合成
【００６９】
(1SR,2SR,3SR,5RS,6SR)エチル ２−スピロ−５´−ヒダントイン−３−フルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボキシレート１００ｍｇを６０％硫酸水溶液１.５ｍｌに溶解し、１４０℃で１２時間加熱した。反応溶液を室温まで冷却後、５Ｍ水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ８にした後、イオン交換クロマトグラフィー（ＡＧ１−Ｘ８ 陰イオン交換樹脂（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）、展開溶媒：０.１Ｍ酢酸〜２Ｍ酢酸）で精製し、(1SR,2SR,3SR,5RS,6SR)−２−アミノ−３−フルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−2,6−ジカルボン酸を２０ｍｇ得た。
【００７０】
得られた化合物のプロトンＮＭＲとマススペクトルデータを示す。
1Ｈ−ＮＭＲ(TFA-d)δ(ppm)；2.49(1H,brs),2.59-3.06(4H,m),5.40(1H,dd,J=52Hz,5.3Hz)
ＭＳ(ＣＩ)ｍ／ｅ；２０４(Ｍ+＋１)
【００７１】
なお、上記と同様にして下記の化合物を合成した。
(1SR,2RS,3RS,5RS,6SR)−２−アミノ−３−フルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−2,6−ジカルボン酸
【００７２】
この化合物のプロトンＮＭＲとマススペクトルデータを示す。
1Ｈ−ＮＭＲ(TFA-d)δ(ppm)；2.33(1H,brs),2.54-2.89(4H,m),5.42-5,59(1H,m)
ＭＳ(ＣＩ)ｍ／ｅ；２０４(Ｍ+＋１)
【００７３】
実施例８
(1S,2S,3S,5R,6S)−２−アミノ−３−フルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−2,6−ジカルボン酸の合成
【００７４】
(１) (1SR,2SR,3SR,5RS,6SR)エチル ２−スピロ−５´−ヒダントイン−３−フルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボキシレート２.２０ｇと２Ｍ水酸化ナトリウム１７ｍｌの混合物を室温で撹拌した。２時間後、濃塩酸を加えｐＨを１.０に調整した。生成した結晶を濾過により単離し、乾燥して(1SR,2SR,3SR,5RS,6SR)２−スピロ−５´−ヒダントイン−３−フルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボン酸を１.８１ｇ得た。
【００７５】
この化合物のプロトンＮＭＲとマススペクトルデータを示す。
1Ｈ−ＮＭＲ(DMSO-d6)δ(ppm)；1.85-2.44(5H,m),4.80(1H,dd,J=52Hz,5.3Hz),8.44(1H,s),10.88(1H,s),12.30(1H,brs)
ＭＳ(FAB)(Nega)ｍ／ｅ；２２７(Ｍ+−１)
【００７６】
(２) (1SR,2SR,3SR,5RS,6SR)２−スピロ−５´−ヒダントイン−３−フルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボン酸１.８０ｇをアセトン：水＝８：５の混合溶液２６ｍｌ中５５℃で撹拌し、(Ｒ)−(＋)−1−フェニルエチルアミン０.９６ｇを加えた後、室温で１５時間 撹拌した。生成した結晶を濾過し、(Ｒ)−(＋)1−フェニルエチルアミン塩１.３０ｇを得た。なお、濾液は実施例９において使用した。
【００７７】
次に、この塩１.２０ｇを水１５ｍｌに懸濁し、１Ｍ塩酸を用いてｐＨを１.０に調整し、室温で１４時間撹拌した。生成した結晶を濾過により単離し(1S,2S,3S,5R,6S)２−スピロ−５´−ヒダントイン−３−フルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボン酸０.６５ｇを得た。更に濾液はイオン交換クロマトグラフィー（ＡＧ５０Ｗ−Ｘ８ 陽イオン交換樹脂(Ｂｉｏ−Ｒａｄ)、展開溶媒：１Ｍ酢酸）で精製し、(1S,2S,3S,5R,6S)２−スピロ−５´−ヒダントイン−３−フルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボン酸を０.０６ｇ得た。この化合物の比旋光度は以下のとおりであった。
22［α］D＝＋３６.８４(ｃ＝０.２０,ＭｅＯＨ)
【００７８】
(３) (1S,2S,3S,5R,6S)２−スピロ−５´−ヒダントイン−３−フルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボン酸０.６０ｇを６０％硫酸水溶液１０ｍｌに溶解し、１４０℃で２日間撹拌した。反応溶液を室温まで冷却後、５Ｍ水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ８にした後、イオン交換クロマトグラフィー(ＡＧ１−Ｘ８ 陰イオン交換樹脂（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）、展開溶媒：０.１Ｍ酢酸〜２Ｍ酢酸）で精製し、(1S,2S,3S,5R,6S)−２−アミノ−３−フルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−2,6−ジカルボン酸を０.３４ｇ得た。この化合物の比旋光度は以下のとおりであった。
22［α］D＝＋５８.６１(ｃ＝０.２０,１Ｎ ＨＣｌ)
【００７９】
実施例９
(1R,2R,3R,5S,6R)−２−アミノ−３−フルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−2,6−ジカルボン酸の合成
【００８０】
(１) 実施例８(２)の濾液を減圧下、濃縮した。得られた結晶１.３ｇと水１７ｍｌの混合物を１Ｍ塩酸を用いてｐＨを１.０に調整し、室温で撹拌した。４時間後、生成した結晶を濾取し０.８１ｇの結晶を得た。濾液はイオン交換クロマトグラフィー（ＡＧ５０Ｗ−Ｘ８ 陽イオン交換樹脂(Ｂｉｏ−Ｒａｄ)、展開溶媒：１Ｍ酢酸）で精製し、０.０８ｇの結晶を得た。
【００８１】
(２) 前記２つの結晶を合わせ(０.８９ｇ)、アセトン：水=８：５の混合溶液１３ｍｌを加え、５５℃で撹拌した。この溶液に(Ｓ)−(−)−1−フェニルエチルアミン０.４７ｇを加えた後、室温で１５時間撹拌した。生成した結晶を濾過し、(Ｒ)−(−)−1−フェニルエチルアミン塩を１.１０ｇ得た。
【００８２】
この塩を実施例８の(２)と同様に１Ｍ塩酸を用いてフリー体とし、(1R,2R,3R,5S,6R)２−スピロ−５´−ヒダントイン−３−フルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボン酸０.５８ｇを得た。濾液をイオン交換クロマトグラフィー（ＡＧ５０Ｗ−Ｘ８ 陽イオン交換樹脂(Ｂｉｏ−Ｒａｄ)、展開溶媒：１Ｍ酢酸）で精製し、(1R,2R,3R,5S,6R)２−スピロ−５´−ヒダントイン−３−フルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボン酸を０.０７ｇ得た。この化合物の比旋光度は以下のとおりであった。
22［α］D＝−３７.５２(ｃ＝０.２０,ＭｅＯＨ)
【００８３】
(３)(1R,2R,3R,5S,6R)２−スピロ−５´−ヒダントイン−３−フルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボン酸０.５８ｇを実施例８の(３)と同様に反応し、(1R,2R,3R,5S,6R)−２−アミノ−３−フルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−2,6−ジカルボン酸０.３７ｇを得た。この化合物の比旋光度は以下のとおりであった。
22［α］D＝−５９.３６(ｃ＝０.２０,１Ｎ ＨＣｌ)
【００８４】
試験例１（被検薬のcＡＭＰ蓄積に及ぼす効果）
代謝型グルタメ−ト受容体 ｍＧｌｕＲ２安定発現ＣＨＯ細胞を、１０％透析馬胎児血清含有ダルベッコ改変イ−グル培地［１％Proline 50units/ml,Penicillin 50μg/ml,Streptomycin 2mM,L-glutamine（用時添加）］を用いて１.２６×１０４cells/well/0.32cm2/150μlの割合で９６穴プレ−トに播種し、３７℃、５％ＣＯ2下で２日間培養を行った。その後、L-Glutamine free培地に交換し、４時間後に上清を吸引除去し、１５０μｌのＰＢＳ(＋)−ＩＢＭＸ(10mM PBS(-),1mM MgCl2,1mM CaCl2,1mM IBMX)を添加して、２０分間、３７℃、５％ＣＯ2存在下でインキュベ−ションを行った。再び上清を吸引除去し、６０μｌの１０−５Ｍ Forskolin、１０−１０〜１０−４Ｍの表１に示す被検体を含有したＰＢＳ(＋)−ＩＢＭＸを添加して１５分間、３７℃で５％ＣＯ2存在下インキュベ−ションを行い、Forskolin刺激ｃＡＭＰ蓄積量に対するアゴニストの抑制効果の検討を行った［コントロ−ルは、Forskolinと化合物無添加の条件とした。（Tanabe et al,Neuron,8,169-179(1992)）］。１００μｌの氷冷エタノールを添加して反応停止し、上清を別のプレ−トに全量回収した後、エバポレーターで常温乾固し、−２０℃で保存した。乾固したサンプルは、ｃＡＭＰ EIA kit（アマシャム社）を用いてｃＡＭＰ量を定量した。各ｃＡＭＰ量からコントロ−ルの値を差し引いた。１０−５ＭのForskolinで刺激を行ったときのｃＡＭＰ蓄積を５０％抑制する被検薬の濃度ＥＤ50値を求めた。結果を表１に示す。
【表１】
【００８５】
試験例２（マウスのメタンフェタミン運動過多に及ぼす効果）
雄性ＩＣＲ系マウス（体重２３−３２ｇ、日本チャールスリバー）を１群１１〜１２匹用いた。マウスは塩化ビニール製円筒透明測定ケージ（直径３０ｃｍ、高さ３０ｃｍ）に入れ９０分間環境順化させた。
【００８６】
次に、マウスに表２に示す各化合物を経口投与し、その３０分後にメタンフェタミンを１ｍｇ／ｋｇ腹腔内投与した。その１５分後に自動活動量測定装置（ＳＣＡＮＥＴ／ＳＶ−１０、東洋産業株式会社）を用いてマウスの３０分間の運動量をカウント数により測定した。前記各化合物は０.３％tween80−生理食塩水を溶媒として、これに懸濁して使用した。
【００８７】
そして、溶媒のみを投与したマウス群のカウント数と、表２に示す各化合物を所定の用量づつ投与したマウス群のカウント数より抑制率を求め、ＥＤ50値を算出した。結果を表２に示す。なお、統計処理は分散分析（ＡＮＯＶＡ）後、ダンネット検定によって行った。
【００８８】
表２に示されるように、比較例としてのＬＹ３５４７４０は０.０１ｍｇ／ｋｇ経口投与群を除き、用量依存的にメタンフェタミン運動過多を抑制［Ｆ(４,５４)＝３.２４２,Ｐ＜０.０５］するが、ＥＤ50値は０.８７ｍｇ／ｋｇであった。一方、本発明化合物であるＣｏｍｐ．１についても同様な作用が認められ［Ｆ(３,４３)＝３.３０６,Ｐ＜０.０５］たが、本発明化合物のＥＤ50値は０.０５ｍｇ／ｋｇであり、ＬＹ３５４７４０の１７.４倍のメタンフェタミン運動過多抑制効果を有していた。
【表２】
【００８９】
【発明の効果】
本発明の含フッ素アミノ酸誘導体は医薬として有用であり、特にメタボトロピックなグルタミン酸受容体の作動薬として有用である。したがって、本発明は、例えば精神分裂病、不安及びその関連疾患、うつ病、二極性障害、てんかん等の精神医学的障害、例えば薬物依存症、認知障害、アルツハイマー病、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、筋硬直に伴う運動障害、脳虚血、脳不全、脊髄障害、頭部障害等の神経学的疾患の治療及び予防に使用することができる。
【発明の属する技術分野】
本発明は、医薬として有用な含フッ素アミノ酸誘導体に関し、例えば、精神分裂病、不安及びその関連疾患、うつ病、二極性障害、てんかん等の精神医学的障害、さらに、薬物依存症、認知障害、アルツハイマー病、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、筋硬直に伴う運動障害、脳虚血、脳不全、脊髄障害、頭部障害等の神経学的疾患の治療及び予防に有用である新規な含フッ素アミノ酸誘導体に関する。
【０００２】
【従来の技術】
近年、グルタミン酸受容体遺伝子のクロ−ニングが相次ぎ、グルタミン酸受容体には驚異的な数のサブタイプが存在することが明らかとなった。現在、グルタミン酸受容体は、受容体がイオンチャネル型構造を持つ「イオノトロピック型」及び、受容体がＧ−タンパク質と共役している「メタボトロピック型」の２つに大きく分類されている（Science, 258, 597-603, 1992）。更に、イオノトロピック受容体は薬理学的にＮ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）、α−アミノ−３−ヒドロキシ−５−メチルイソキサゾ−ル−４−プロピオネ−ト（ＡＭＰＡ）及びカイネ−トの３種類に分類され（Science, 258, 597-603, 1992）、メタボトロピック受容体はタイプ１〜タイプ８の８種類に分類される（J.Neurosci., 13, 1372-1378, 1993; Neuropharmacol., 34, 1-26, 1995）。
【０００３】
メタボトロピックグルタミン酸受容体は薬理学的には３つのグループに分類される。この中で、グループ２（ｍＧｌｕＲ２／ｍＧｌｕＲ３）は、アデニルサイクラーゼと結合し、サイクリックアデノシン１リン酸（ｃＡＭＰ）のホルスコリン刺激性の蓄積を抑制する（Trends Pharmacol. Sci., 14, 13(1993)）ことから、グループ２メタボトロピックグルタミン酸受容体に作用する化合物は急性及び慢性の精神医学的疾患及び神経学的疾患の治療又は予防に有効なはずである。そして、グループ２メタボトロピックグルタミン酸受容体に作用する物質としては、特開平８−１８８５６１号公報に(+)-(1S,2S,5R,6S)−２−アミノビシクロ[3.1.0]ヘキサン−２，６−ジカルボン酸が開示されている。
【０００４】
ところで、フッ素原子は強い電子吸引性と高い脂溶性を付与する傾向を有しており、フッ素原子の導入された化合物は物性を大きく変える。このため、フッ素原子の導入は化合物の吸収性、代謝的安定性及び薬理作用に大きく影響を及ぼす可能性がある。しかし、フッ素原子の導入は決して容易なことではない。実際に、特開平８−１８８５６１号公報において、(+)-(1S,2S,5R,6S)−２−アミノビシクロ[3.1.0]ヘキサン−２，６−ジカルボン酸へのフッ素原子の導入は全く検討されていない。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、上記した従来技術の現状に鑑み、例えば、精神分裂病、不安及びその関連疾患、うつ病、二極性障害、てんかん等の精神医学的障害、並びに、薬物依存症、認知障害、アルツハイマー病、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、筋硬直に伴う運動障害、脳虚血、脳不全、脊髄障害、頭部障害等の神経学的疾患に治療効果及び予防効果を有する薬物であって、特に経口投与でグループ２メタボトロピックグルタミン酸受容体に作用することのできる薬物を提供することにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、(+)-(1S,2S,5R,6S)−２−アミノビシクロ[3.1.0]ヘキサン−２,６−ジカルボン酸にフッ素原子を導入した含フッ素アミノ酸誘導体について鋭意検討した結果、グループ２メタボトロピックグルタミン酸受容体に経口投与で影響を及ぼすことのできる新規含フッ素アミノ酸誘導体を見出し、本発明を完成した。
【０００７】
すなわち、本発明は、式［Ｉ］
【化３】
【０００８】
本発明において、炭素数１−１０のアルキル基とは、直鎖状又は分岐鎖状のアルキル基であり、直鎖状又は分岐鎖状アルキル基としては、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ペンチル基、イソペンチル基、１−エチルプロピル基、へキシル基、イソへキシル基、１−エチルブチル基、ヘプチル基、イソヘプチル基、オクチル基、ノニル基、デシル基などを挙げることができる。
【０００９】
また、本発明における医薬上許容される塩としては、例えば、硫酸、塩酸、燐酸などの鉱酸との塩、酢酸、シュウ酸、乳酸、酒石酸、フマール酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸などの有機酸との塩、トリメチルアミン、メチルアミンなどのアミンとの塩、又はナトリウムイオン、カリウムイオン、カルシウムイオンなどの金属イオンとの塩などを挙げることができる。なお、本発明化合物は、各種の溶媒和物として存在し得るが、医薬としての適用性の面からは水和物が好ましい。
【００１０】
式［Ｉ］で示される化合物の中でＸ1が水素原子の場合は、１、２、３、５及び６位に５つの不斉炭素原子が存在する。従って、Ｘ1が水素原子である本発明化合物は、光学活性体、ラセミ体等の２種のエナンチオマー混合物及びジアステレオマーの混合物として存在できる。更に、Ｘ1がフッ素原子の場合、１、２、５及び６位に４つの不斉炭素原子が存在する。従って、Ｘ1がフッ素原子である本発明化合物は、光学活性体、ラセミ体等の２種のエナンチオマー混合物及びジアステレオマーの混合物として存在できる。
【００１１】
式［Ｉ］に示す化合物において好ましいＸ1は水素原子である。さらに、Ｘ1が水素原子である場合には、式［Ｉ］に示す化合物は下記の立体化学配置を有することがより好ましい。
【化４】
また、Ｘ1、Ｒ1及びＲ2が水素原子の場合、本化合物の光学異性体の中で最も好ましい光学活性体は正の旋光性を有しており、この絶対立体化学配置は、本化合物の合成前駆体である２−スピロ−５´−ヒダントイン−３−フルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボン酸 (Ｒ)−(＋)−1−フェニルエチルアミン塩のＸ線単結晶構造解析により、１Ｓ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｓと決定された。
【００１３】
一方、式［Ｉ］においてＲ1とＲ2の片方又は両方が水素以外を示す場合、すなわちエステル体はグループ２メタボトロピックグルタミン酸受容体に影響を及ぼさない。しかし、このエステル体は生体内でカルボン酸に加水分解され、グループ２メタボトロピックグルタミン酸受容体に影響を及ぼすカルボン酸に変化する。このように、本発明化合物のエステル体はプロドラッグとして機能するため、極めて有用である。
【００１４】
【発明の実施の形態】
式［Ｉ］の化合物は、以下に示す各反応式に従って製造することができる。下記の反応式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｘ1は前記と同様であり、Ｒ3とＲ4は同一又は異なって炭素数１−１０の低級アルキル基を示し、Ｙは一般的なアミノ基の保護基（PROTECTIVE GROUPS IN ORGANIC SYNTHESIS,THEODORA W. GREENE and PETER G. M. WUTS著 参照）を示す。
【００１５】
まず、下記式［化５］に示されるように、出発物質であるケトン体（１）の所定の位置に１又は２のフッ素原子が導入される。
【化５】
光学活性体、ラセミ体等の２種のエナンチオマー混合物又はジアステレオマーの混合物であるモノフッ化化合物(２)は、対応する光学活性体、ラセミ体等の２種のエナンチオマー混合物又はジアステレオマーの混合物であるケトン体(１)を一旦エノールシリルエーテル体又はエノールエステル体とした後、フッ素化試薬と反応させるか、或いはケトン体(１)に直接、フッ素化試薬を反応させることによって得ることができる。また、光学活性体、ラセミ体等の２種のエナンチオマー混合物又はジアステレオマーの混合物であるジフッ化化合物(３)は、モノフッ化化合物(２)を一旦エノールシリルエーテル体とした後フッ化試薬と反応させるか、モノフッ化化合物(２)に直接フッ化試薬と反応させるか、或いはケトン体(１)に２当量以上のフッ素化試薬を反応させることによって得ることができる。
【００１７】
ここで、エノールシリルエーテル体の製造は、ケトン体(１)に、例えばテトラヒドロフラン、ジエチルエーテルなどのエーテル類、トルエン、ベンゼンなどの炭化水素類、メタノール、ｔ−ブタノールなどのアルコール類、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド等の不活性溶媒中、例えばｎ−ブチルリチウム、ｓ−ブチルリチウムなどのアルキルリチウム類、例えばリチウムビストリメチルシリルアミド、カリウムビストリメチルシリルアミド、ナトリウムアミドなどの金属アミド類、例えば水素化ナトリウムなどの水素化金属類、又は、例えばトリエチルアミン等のアミン類等の塩基の存在下、例えばクロロトリメチルシラン、クロロｔ−ブチルジメチルシラン等のシリル化剤を反応させることによって行うことができる。ここでの反応温度は１００℃以下が好ましく、更に−７８℃から室温がより好ましい。
【００１８】
また、エノールエステル体の製造は、上記シリル化剤を、例えば無水酢酸等の酸無水物、例えばプロピオニルクロライド等の酸ハライド、又は、例えば酢酸等のカルボン酸とエトキシカルボニルクロライド等のアルコキシカルボニルハライドから調製される混合酸無水物等に代えることにより、エノールシリルエーテル体の製造と同様に行うことができる。
【００１９】
フッ素化試薬としては、例えば、Ｎ−フルオロピリジニウムトリフラート、Ｎ−フルオロ−Ｎ−ｔ−ブチルベンゼンスルホンアミド、Ｎ−フルオロサッカリンスルタム、Ｎ−フルオロビス（ベンゼンスルホン）イミド、Ｎ−フルオロ−ｏ−ベンゼンスルホンイミドなどのＮ−フルオロ型フッ素化剤、フッ素、フッ化水素、酸性フッ化カリウム（ＨＫＦ2）等の無機フッ化化合物、ＣｌＯ3Ｆ、又はＣＦ3ＣＯＯＦ等を使用することができる。
【００２０】
ここで、直接フッ素化試薬を反応させる態様としては、ケトン体(１)に、例えばテトラヒドロフラン、ジエチルエーテルなどのエーテル類、トルエン、ベンゼンなどの炭化水素類、メタノール、ｔ−ブタノールなどのアルコール類、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド等の不活性溶媒中、例えばｎ−ブチルリチウム、ｓ−ブチルリチウムなどのアルキルリチウム類、例えばリチウムビストリメチルシリルアミド、ナトリウムアミドなどの金属アミド類、例えば水素化ナトリウムなどの水素化金属類、又は、例えばトリエチルアミン等のアミン類等の塩基の存在下、反応温度を好ましくは１００℃以下で、より好ましくは−７８℃から室温で、上記したようなフッ素化試薬を反応させる態様が好ましい。
【００２１】
このようにして得られた、光学活性体、ラセミ体等の２種のエナンチオマー混合物又はジアステレオマーの混合物であるモノ又はジフッ素化化合物(４)は、下記式［化６］に示すように、例えば、ストレッカーアミノ酸合成（Strecker Amino Acid Synthesis）（Ann.,75,27(1850);91,349(1850)）、ブッヘラー−ベルグス反応（Bucherer-Bergs Reaction）（J.Prakt.Chem.,140,69(1934)）又はこれらの変法によって得られたアミノシアニド誘導体又はヒダントイン誘導体等を加水分解することによって、本発明化合物である対応する光学活性体、ラセミ体等の２種のエナンチオマー混合物又はジアステレオマーの混合物である含フッ素アミノ酸誘導体(５)とすることができる。
【化６】
具体的には、モノ又はジフッ化化合物(４)は、例えば、シアン化ナトリウム又はシアン化カリウム及び炭酸アンモニウムと、例えばエタノールなどのアルコール類又はアルコール類と水の混合溶媒中、好ましくは３０℃〜５０℃で１日〜２日反応することにより、合成中間体であるヒダントイン誘導体とすることができる。前記ヒダントイン誘導体は、続いて、例えば水酸化ナトリウムなどの塩基、或いは塩酸、硫酸等の酸によって、例えばエタノールなどのアルコール類、ジオキサンなどのエーテル類、アセトンなどのケトン類、又は水などの不活性溶媒中加水分解することによって、本発明化合物である含フッ素アミノ酸誘導体(５)とすることが可能である。
【００２３】
下記式［化７］に示すように、(１ＳＲ,５ＲＳ,６ＳＲ)−(１)で示されるケトン体に１つのフッ素原子が導入されたモノフッ化化合物（前出の（２）参照）のブッヘラー−ベルグス反応によって得られる、(１ＳＲ,５ＲＳ,６ＳＲ)−(６)で示されるヒダントイン誘導体は、例えばシリカゲル等を用いたカラムクロマトグラフィーや再結晶などの一般的な手法によって、（１ＳＲ，２ＳＲ，３ＳＲ，５ＲＳ，６ＳＲ）、（１ＳＲ，２ＳＲ，３ＲＳ，５ＲＳ，６ＳＲ）、（１ＳＲ，２ＲＳ，３ＳＲ，５ＲＳ，６ＳＲ）、（１ＳＲ，２ＲＳ，３ＲＳ，５ＲＳ，６ＳＲ）の４つのジアステレオマーに分離することが出来る。
【００２４】
更に、この４つのジアステレオマーは、それぞれ、そのエステル部位を加水分解して（７）で示されるカルボン酸誘導体とした後、例えば塩基性キラル分割剤を用いた分割等の一般的な分割を行うことによって、（１Ｓ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）、（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｒ）、（１Ｓ，２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ，６Ｓ）、（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）、（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）、（１Ｒ，２Ｓ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｒ）、（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ，６Ｓ）、（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）の８つのエナンチオマー（８）に分割できる。そして、これらのエナンチオマー（８）は、そのヒダントイン部位を加水分解によって、本発明化合物である８つの光学活性な含フッ素アミノ酸誘導体（９）とすることができる。
【化７】
ここで、塩基性キラル分割剤としては、例えば(＋)又は(−)−１−フェニルエチルアミン、(＋)又は(−)−２−アミノ−１−ブタノール、(＋)又は(−)−アラニノール、ブルシン、シンコニジン、シンコニン、キニン、キニジン、デヒドロアビエチルアミン等の光学活性なアミン類を使用することができる。
【００２６】
一方、本発明化合物の１つである、２つのフッ素原子を含有する４つの光学活性な（１Ｓ，２Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）、（１Ｒ，２Ｒ，５Ｓ，６Ｒ）、（１Ｓ，２Ｒ，５Ｒ，６Ｓ）、（１Ｒ，２Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−含フッ素アミノ酸誘導体（１２）は、下記式［化８］に示すように、(１ＳＲ,５ＲＳ,６ＳＲ)−(１)を出発原料にして上記の場合と同様にフッ素化、ヒダントイン化、ジアステレオマー（１０）の分離、エステル部位の加水分解による誘導体（１１）の生成、分割及びヒダントイン部位の加水分解を行うことによって合成することができる。
【化８】
なお、１つのフッ素原子を有する、(１ＳＲ,５ＲＳ,６ＳＲ)−(２)で示されるモノフッ化化合物は、下記式［化９］に示すように、［化７］と同様の一般的な手法によるジアステレオマーの分離、エステル部位の加水分解及び分割を行うことにより、（１Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）、（１Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｒ）、（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ，６Ｓ）、（１Ｒ，３Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）の４つの光学活性なケトカルボン酸（１３）とすることができる。
【化９】
したがって、４つの光学活性なケトカルボン酸(１３)について直接、或いはそのエステル化後に、式（５）により示した化合物の合成の場合と同様の操作を行い、また、更にジアステレオマーの分離を行うことによっても、光学活性な本発明化合物である含フッ素アミノ酸誘導体を製造することができる。
【００２９】
また、下記式［化１０］に示されるように、２つのフッ素原子を有する（１Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）、（１Ｒ，５Ｓ，６Ｒ）の２つの光学活性なケトカルボン酸（１４）は、２つのフッ素原子を有する(１ＳＲ,５ＲＳ,６ＳＲ)−(３)で示されるケトン体から、［化９］において式（１３）により示した化合物の合成の場合と同様の操作、すなわち、エステルの加水分解及び分割によって得ることができる。
【化１０】
したがって、２つの光学活性なケトカルボン酸(１４)について直接、或いはエステル化後に、［化６］において式（５）により示した化合物の合成の場合と同様の操作を行い、更にジアステレオマーの分離を行うことによっても光学活性な本発明化合物である含フッ素アミノ酸誘導体を製造することができる。
【００３１】
ところで、下記式［化１１］に示されるように、式(６)で示される光学活性体、ラセミ体等の２種のエナンチオマー混合物又はジアステレオマーの混合物として存在する本発明化合物である含フッ素アミノ酸は、アミノ基をＹで示される保護基で保護した後、Ｒ3−Ｘ2又はＲ4−Ｘ2で示されるアルキルハライド、もしくはＲ3−ＯＨ又はＲ4−ＯＨで示されるアルコールを用いて一般的な方法にてエステル化し、アミノ基の保護基を除去することによって、式(１５)で示される本発明化合物である含フッ素アミノ酸エステルに誘導することができる。
【化１１】
ここで、アミノ基の保護、エステル化及びアミノ基の脱保護は、PROTECTIVE GROUPS IN ORGANIC SYNTHESIS,THEODORA W. GREENE and PETER G. M.WUTS著に示されるような一般的な方法で実施可能である。
【００３３】
更に、式(１５)で示される含フッ素アミノ酸エステル、又は、式(１７)で示されるＮ−保護含フッ素アミノ酸エステルの各ジアステレオマーは、例えばシリカゲル等を用いたカラムクロマトグラフィーや再結晶などの一般的な手法によって分離することが出来る。また、式(１５)の各ジアステレオマーは、例えば酸性キラル分割剤を用いた分割等の一般的な分割方法によって各エナンチオマーに分割できる。
【００３４】
ここで、酸性キラル分割剤としては、(＋)又は(−)−ジ−ｐ−トルオルイル酒石酸、(＋)又は(−)−ジベンゾイル酒石酸、(＋)又は(−)−酒石酸、(＋)又は(−)−マンデル酸、(＋)又は(−)−しょうのう酸、又は(＋)又は(−)−しょうのうスルホン酸等の光学活性な有機酸類を使用することが可能である。
【００３５】
本発明化合物は１つまたはそれ以上の医薬的に許容される担体、賦形剤又は希釈剤と組み合わされて医薬的製剤とされることができる。前記担体、賦形剤及び希釈剤の例には、水、乳糖、デキストロース、フラクトース、ショ糖、ソルビトール、マンニトール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、でんぷん、ガム、ゼラチン、アルギネート、ケイ酸カルシウム、リン酸カルシウム、セルロース、水シロップ、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、アルキルパラヒドロキシベンゾエート、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、グリセリン、ゴマ油、オリーブ油、大豆油などの各種油が含まれる。
【００３６】
本発明化合物は、これらの担体、賦形剤又は希釈剤、そして、必要に応じて一般に使用される増量剤、結合剤、崩壊剤、ｐＨ調整剤、溶解剤などの添加剤が混合された上で、常用の製剤技術によって錠剤、丸剤、カプセル剤、顆粒剤、粉剤、液剤、乳剤、懸濁剤、軟膏剤、注射剤、皮膚貼付剤などの経口又は非経口用医薬、特にグループ２メタボトロピックグルタミン酸受容体作用薬として調製されることができる。本発明の化合物は成人患者に対して０．０１〜５００ｍｇを１日１回又は数回に分けて経口又は非経口で投与することが可能であるが、使用の容易性及び薬効の点からみて経口投与することが好ましい。なお、この投与量は治療対象となる疾病の種類、患者の年齢、体重、症状などにより適宜増減することが可能である。
【００３７】
【実施例】
以下、実施例及び試験例を示し本発明を具体的に説明する。ただし、それによって本発明をこれらの例のみに限定するものでないことは云うまでもない。
【００３８】
実施例１
(1SR,3RS,5RS,6SR)エチル ３−フルオロ−２−オキソビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボキシレート、及び(1SR,3SR,5RS,6SR)エチル ３−フルオロ−２−オキソビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボキシレートの合成
【００３９】
窒素雰囲気下、ｎ−ブチルリチウム３０.９ｍｌ（１.５４Ｍヘキサン溶液）と1,1,1,3,3,3−ヘキサメチルジシラザン７.５０ｇから調製したリチウムビストリメチルシリルアミドのテトラヒドロフラン１５０ｍｌ中に、−７５℃でテトラヒドロフラン１５０ｍｌに溶解した(1SR,5RS,6SR)エチル ２−オキソビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボキシレート６.６０ｇを滴下した。この温度で１時間撹拌した後、クロロトリメチルシラン７.５ｍｌを加え、室温で１時間撹拌した。反応溶液を減圧下濃縮後、残渣に無水ヘキサンを加え、生じた無機塩を濾別し、濃縮した。
【００４０】
残渣を塩化メチレン６６ｍｌに溶解し、Ｎ−フルオロベンゼンスルホンイミド１５.００ｇを加え、室温で１６.５時間撹拌した。反応溶液を水で２回洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、乾燥剤を濾別後、減圧下、濃縮した。残渣をクロマトグラフィー（シリカゲル：ワコウゲル(和光純薬製)、展開溶媒：ヘキサン−塩化メチレン−酢酸エチル＝６０：４：１）で精製し、(1SR,3RS,5RS,6SR)エチル ３−フルオロ−２−オキソビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボキシレートと(1SR,3SR,5RS,6SR)エチル ３−フルオロ−２−オキソビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボキシレートの混合物を４.３０ｇ得た。
【００４１】
得られた化合物のプロトンＮＭＲとマススペクトルデータを示す。
1Ｈ−ＮＭＲ(CDCl3)δ(ppm)；1.28(3Hx3/4,t,J=7.2Hz),1.29(3Hx1/4,t,J=7.2Hz),2.11-2.79(5H,m),4.18(2H,q,J=7.2Hz),4.51(1Hx1/4,dd,J=51Hz,8.1Hz),4.58(1Hx3/4,dt,J=51Hz,8.1Hz)
ＭＳ(FAB)(Pos)ｍ／ｅ；１８７(Ｍ+＋１)
【００４２】
実施例２
(1SR,3RS,5RS,6SR)エチル ３−フルオロ−２−オキソビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボキシレート、及び(1SR,3SR,5RS,6SR)エチル ３−フルオロ−２−オキソビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボキシレートの合成
【００４３】
窒素雰囲気下、ｎ−ブチルリチウム１.５ｍｌ（１.５４Ｍヘキサン溶液）と1,1,1,3,3,3−ヘキサメチルジシラザン０.３８ｇから調製したリチウムビストリメチルシリルアミドのテトラヒドロフラン６ｍｌ中に、−７５℃でテトラヒドロフラン６ｍｌに溶解した(1SR,5RS,6SR)エチル ２−オキソビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボキシレート０.２０ｇを滴下した。この温度で４５分間撹拌した後、Ｎ−フルオロベンゼンスルホンイミド０.７５ｇを加え、室温で２時間撹拌した。反応溶液を水で２回洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、乾燥剤を濾別後、減圧下、濃縮した。残渣をクロマトグラフィー（シリカゲル：ワコウゲル(和光純薬製)、展開溶媒：ヘキサン−塩化メチレン−酢酸エチル＝６０：４：１）で精製し、(1SR,3RS,5RS,6SR)エチル ３−フルオロ−２−オキソビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボキシレートと(1SR,3SR,5RS,6SR)エチル ３−フルオロ−２−オキソビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボキシレートの混合物を０.０８ｇ得た。
【００４４】
得られた化合物のプロトンＮＭＲとマススペクトルデータを示す。
1Ｈ−ＮＭＲ(CDCl3)δ(ppm)；1.28(3Hx3/4,t,J=7.2Hz),1.29(3Hx1/4,t,J=7.2Hz),2.11-2.79(5H,m),4.18(2H,q,J=7.2Hz),4.51(1Hx1/4,dd,J=51Hz,8.1Hz),4.58(1Hx3/4,dt,J=51Hz,8.1Hz)
ＭＳ(FAB)(Pos)ｍ／ｅ；１８７(Ｍ+＋１)
【００４５】
実施例３
(1SR,5RS,6SR)エチル 3,3−ジフルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボキシレートの合成
【００４６】
窒素雰囲気下、ｎ−ブチルリチウム３０.９ｍｌ（１.５４Ｍヘキサン溶液）と1,1,1,3,3,3−ヘキサメチルジシラザン７.５０ｇから調製したリチウムビストリメチルシリルアミドのテトラヒドロフラン１５０ｍｌ中に、−７５°Ｃでテトラヒドロフラン１５０ｍｌに溶解した(1SR,5RS,6SR)エチル ２−オキソビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボキシレート６.６０ｇを滴下した。この温度で１時間撹拌した後、クロロトリメチルシラン７.５ｍｌを加え、室温で１時間撹拌した。反応溶液を減圧下濃縮後、残渣に無水ヘキサンを加え、生じた無機塩を濾別し、濃縮した。残渣を塩化メチレン６６ｍｌに溶解し、Ｎ−フルオロベンゼンスルホンイミド１５.００ｇを加え、室温で１６.５時間撹拌した。反応溶液を水で２回洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、乾燥剤を濾別後、減圧下、濃縮した。残渣をクロマトグラフィー（シリカゲル：ワコウゲル(和光純薬製)、展開溶媒：ヘキサン−塩化メチレン−酢酸エチル＝６０：４：１）で精製し、(1SR,5RS,6SR)エチル 3,3−ジフルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボキシレートを０.０２ｇ得た。
【００４７】
得られた化合物のプロトンＮＭＲとマススペクトルデータを示す。
1Ｈ−ＮＭＲ(CDCl3)δ(ppm)；1.30(3H,t,J=7.1Hz),2.42-2.80(5H,m),4.20(2H,q,J=7.1Hz)
ＭＳ(Ion Spray)(Nega)ｍ／ｅ；２０３(Ｍ+−１)
【００４８】
実施例４
(1SR,5RS,6SR)エチル 3,3−ジフルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボキシレートの合成
【００４９】
窒素雰囲気下、ｎ−ブチルリチウム５.０ｍｌ（１.５４Ｍヘキサン溶液）と1,1,1,3,3,3−ヘキサメチルジシラザン１.４０ｇから調製したリチウムビストリメチルシリルアミドのテトラヒドロフラン２６ｍｌ中に、−７５℃でテトラヒドロフラン６.５ｍｌに溶解した実施例１で合成した化合物１.３ｇを滴下した。この温度で１時間撹拌した後、クロロトリメチルシラン１.３ｍｌを加え、室温で１時間撹拌した。反応溶液を減圧下濃縮後、残渣に無水ヘキサンを加え、生じた無機塩を濾別し、濃縮した。
【００５０】
残渣を塩化メチレン１３ｍｌに溶解し、Ｎ−フルオロベンゼンスルホンイミド３.３０ｇを加え、室温で５時間撹拌した。反応溶液を水で２回洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、乾燥剤を濾別後、減圧下、濃縮した。残渣をクロマトグラフィー（シリカゲル：ワコウゲル(和光純薬製)、展開溶媒：ヘキサン−塩化メチレン−酢酸エチル＝６０：４：１）で精製し、(1SR,5RS,6SR)エチル 3,3−ジフルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボキシレートを０.３４ｇ得た。
【００５１】
得られた化合物のプロトンＮＭＲとマススペクトルデータを示す。
1Ｈ−ＮＭＲ(CDCl3)δ(ppm)；1.30(3H,t,J=7.1Hz),2.42-2.80(5H,m),4.20(2H,q,J=7.1Hz)
ＭＳ(Ion Spray)(Nega)ｍ／ｅ；２０３(Ｍ+−１)
【００５２】
実施例５
(1SR,2SR,3SR,5RS,6SR)エチル ２−スピロ−５´−ヒダントイン−３−フルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボキシレート、(1SR,2SR,3RS,5RS,6SR)エチル ２−スピロ−５´−ヒダントイン−３−フルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボキシレート、及び(1SR,2RS,3RS,5RS,6SR)エチル ２−スピロ−５´−ヒダントイン−３−フルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボキシレートの合成
【００５３】
(1SR,3RS,5RS,6SR)エチル ３−フルオロ−２−オキソビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボキシレートと(1SR,3SR,5RS,6SR)エチル ３−フルオロ−２−オキソビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボキシレートの混合物４.８４ｇを、水２６ｍｌとエタノール３８ｍｌの混合溶液に溶解し、炭酸アンモニウム６.２５ｇとシアン化カリウム１.８６ｇを加え３５°Ｃで３７時間撹拌した。反応混合物を室温まで冷却後水３１ｍｌを加え、更に氷冷下２.５時間撹拌し生じた結晶を濾取し、２.１０ｇの第１結晶を得た。濾液に氷冷下濃塩酸を加えｐＨを１.０に調整し、生成した結晶を濾取し、２.００ｇの第２結晶を得た。
【００５４】
第１結晶をクロマトグラフィー（シリカゲル：ワコウゲル(和光純薬製)、展開溶媒：クロロホルム−メタノール＝１００：１）に付し、低極性ジアステレオマーを０.６１ｇと極性ジアステレオマーＡ（極性ジアステレオマーＢを約２５％を含む、極性ジアステレオマーＡと極性ジアステレオマーＢのＲｆ値は同じ）０.５５ｇに分離した。
【００５５】
低極性ジアステレオマー０.６１ｇを水−エタノール＝１：１の混合溶液より再結晶し、(1SR,2SR,3SR,5RS,6SR)エチル ２−スピロ−５´−ヒダントイン−３−フルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボキシレートを０.５２ｇを得た
。
【００５６】
得られた化合物のプロトンＮＭＲとマススペクトルデータを示す。
1Ｈ−ＮＭＲ(DMSO-d6)δ(ppm)；1.19(3H,t,J=7.0Hz),1.95-2.46(5H,m),4.06(2H,q,J=7.0Hz),4.81(1H,dd,J=52Hz,5.1Hz),8.44(1H,s),10.91(1H,s)
ＭＳ(ＥＩ)ｍ／ｅ；２５６(Ｍ+)
【００５７】
また、極性ジアステレオマーＡ ０.５５ｇを水−エタノール＝１：１の混合溶液より再結晶し、(1SR,2SR,3RS,5RS,6SR)エチル ２−スピロ−５´−ヒダントイン−３−フルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボキシレート０.３７ｇを得た。
【００５８】
得られた化合物のプロトンＮＭＲとマススペクトルデータを示す。
1Ｈ−ＮＭＲ(DMSO-d6)δ(ppm)；1.18(3H,t,J=7.1Hz),1.85-2.43(5H,m),4.05(2H,q,J=7.1Hz),4.70(1H,dt,J=52Hz,8.0Hz),8.21(1H,s),10.83(1H,s)
ＭＳ(ＥＩ)ｍ／ｅ；２５６(Ｍ+)
【００５９】
一方、第２結晶を酢酸エチルで洗浄し不溶物を濾別後濾液を減圧下濃縮し、残渣を水−エタノール＝１：１で２回再結晶した。この２回の再結晶濾液を減圧下濃縮し、残渣をクロマトグラフィー（シリカゲル：ワコウゲル(和光純薬製)、展開溶媒：クロロホルム−メタノール＝１００：１）に付し前記低極性ジアステレオマーを完全に除去した。得られた極性ジアステレオマーＢ（極性ジアステレオマーＡを約１０％を含む）の結晶０.２５ｇを水−エタノール＝１：１で再結晶を行い、、(1SR,2RS,3RS,5RS,6SR)エチル ２−スピロ−５´−ヒダントイン−３−フルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボキシレートを０.１８ｇ得た。
【００６０】
得られた化合物のプロトンＮＭＲとマススペクトルデータを示す。
1Ｈ−ＮＭＲ(DMSO-d6)δ(ppm)；1.18(3H,t,J=7.1Hz),1.81-2.17(4H,m),2.36(1H,dd,J=13Hz,7.2Hz),3.95-4.11(2H,m),4.90(1H,ddd,J=51Hz,8.9Hz,7.2Hz),8.54(1H,s),10.87(1H,s)
ＭＳ(ＥＩ)ｍ／ｅ；２５６(Ｍ+)
【００６１】
なお、上記と同様にして下記の化合物を合成した。
(1SR,2SR,5RS,6SR)エチル ２−スピロ−５´−ヒダントイン−3,3−ジフルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボキシレート
【００６２】
この化合物のプロトンＮＭＲとマススペクトルデータを示す。
1Ｈ−ＮＭＲ(DMSO-d6)δ(ppm)；1.19(3H,t,J=7.0Hz),1.85-1.89(1H,m),2.00-2.08(1H,m),2.15-2.27(1H,m),2.33-2.50(1H,m),2.55-2.86(1H,m),4.07(2H,q,J=7.0Hz),8.49(1H,m)
ＭＳ(ＥＩ)ｍ／ｅ；２７４(Ｍ+)
【００６３】
実施例６
(1SR,2SR,3RS,5RS,6SR)−２−アミノ−３−フルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−2,6−ジカルボン酸の合成
【００６４】
(1SR,2SR,3RS,5RS,6SR)エチル ２−スピロ−５´−ヒダントイン−３−フルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボキシレート３００ｍｇを３Ｍ水酸化ナトリウム水溶液２.５ｍｌに溶解し、１６時間加熱還流した。反応溶液を室温まで冷却後、ガラスフィルターで濾過し、濾液を濃塩酸でｐＨ３にした後、イオン交換クロマトグラフィー（ＡＧ１−Ｘ８ 陰イオン交換樹脂(Ｂｉｏ−Ｒａｄ)、展開溶媒：０.１Ｍ酢酸〜３Ｍ酢酸）で精製し、(1SR,2SR,3RS,5RS,6SR)−２−アミノ−３−フルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−２,６−ジカルボン酸を５１ｍｇ得た。
【００６５】
得られた化合物のプロトンＮＭＲとマススペクトルデータを示す。
1Ｈ−ＮＭＲ(TFA-d)δ(ppm)；2.23-2.24(1H,m),2.56-2.96(4H,m),5.15(1H,dt,J=52Hz,7.5Hz)
ＭＳ(ＣＩ)ｍ／ｅ；２０４(Ｍ+＋１)
【００６６】
なお、上記と同様にして下記の化合物を合成した。
(1SR,2SR,5RS,6SR)−２−アミノ−3,3−ジフルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−2,6−ジカルボン酸
【００６７】
この化合物のプロトンＮＭＲとマススペクトルデータを示す。
1Ｈ−ＮＭＲ(TFA-d)δ(ppm)；2.46(1H,brs),2.63-2.90(3H,m),3.01-3.12(1H,m)
ＭＳ(ＣＩ)ｍ／ｅ；２２２(Ｍ+＋１)
【００６８】
実施例７
(1SR,2SR,3SR,5RS,6SR)−２−アミノ−３−フルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−２,６−ジカルボン酸の合成
【００６９】
(1SR,2SR,3SR,5RS,6SR)エチル ２−スピロ−５´−ヒダントイン−３−フルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボキシレート１００ｍｇを６０％硫酸水溶液１.５ｍｌに溶解し、１４０℃で１２時間加熱した。反応溶液を室温まで冷却後、５Ｍ水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ８にした後、イオン交換クロマトグラフィー（ＡＧ１−Ｘ８ 陰イオン交換樹脂（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）、展開溶媒：０.１Ｍ酢酸〜２Ｍ酢酸）で精製し、(1SR,2SR,3SR,5RS,6SR)−２−アミノ−３−フルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−2,6−ジカルボン酸を２０ｍｇ得た。
【００７０】
得られた化合物のプロトンＮＭＲとマススペクトルデータを示す。
1Ｈ−ＮＭＲ(TFA-d)δ(ppm)；2.49(1H,brs),2.59-3.06(4H,m),5.40(1H,dd,J=52Hz,5.3Hz)
ＭＳ(ＣＩ)ｍ／ｅ；２０４(Ｍ+＋１)
【００７１】
なお、上記と同様にして下記の化合物を合成した。
(1SR,2RS,3RS,5RS,6SR)−２−アミノ−３−フルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−2,6−ジカルボン酸
【００７２】
この化合物のプロトンＮＭＲとマススペクトルデータを示す。
1Ｈ−ＮＭＲ(TFA-d)δ(ppm)；2.33(1H,brs),2.54-2.89(4H,m),5.42-5,59(1H,m)
ＭＳ(ＣＩ)ｍ／ｅ；２０４(Ｍ+＋１)
【００７３】
実施例８
(1S,2S,3S,5R,6S)−２−アミノ−３−フルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−2,6−ジカルボン酸の合成
【００７４】
(１) (1SR,2SR,3SR,5RS,6SR)エチル ２−スピロ−５´−ヒダントイン−３−フルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボキシレート２.２０ｇと２Ｍ水酸化ナトリウム１７ｍｌの混合物を室温で撹拌した。２時間後、濃塩酸を加えｐＨを１.０に調整した。生成した結晶を濾過により単離し、乾燥して(1SR,2SR,3SR,5RS,6SR)２−スピロ−５´−ヒダントイン−３−フルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボン酸を１.８１ｇ得た。
【００７５】
この化合物のプロトンＮＭＲとマススペクトルデータを示す。
1Ｈ−ＮＭＲ(DMSO-d6)δ(ppm)；1.85-2.44(5H,m),4.80(1H,dd,J=52Hz,5.3Hz),8.44(1H,s),10.88(1H,s),12.30(1H,brs)
ＭＳ(FAB)(Nega)ｍ／ｅ；２２７(Ｍ+−１)
【００７６】
(２) (1SR,2SR,3SR,5RS,6SR)２−スピロ−５´−ヒダントイン−３−フルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボン酸１.８０ｇをアセトン：水＝８：５の混合溶液２６ｍｌ中５５℃で撹拌し、(Ｒ)−(＋)−1−フェニルエチルアミン０.９６ｇを加えた後、室温で１５時間 撹拌した。生成した結晶を濾過し、(Ｒ)−(＋)1−フェニルエチルアミン塩１.３０ｇを得た。なお、濾液は実施例９において使用した。
【００７７】
次に、この塩１.２０ｇを水１５ｍｌに懸濁し、１Ｍ塩酸を用いてｐＨを１.０に調整し、室温で１４時間撹拌した。生成した結晶を濾過により単離し(1S,2S,3S,5R,6S)２−スピロ−５´−ヒダントイン−３−フルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボン酸０.６５ｇを得た。更に濾液はイオン交換クロマトグラフィー（ＡＧ５０Ｗ−Ｘ８ 陽イオン交換樹脂(Ｂｉｏ−Ｒａｄ)、展開溶媒：１Ｍ酢酸）で精製し、(1S,2S,3S,5R,6S)２−スピロ−５´−ヒダントイン−３−フルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボン酸を０.０６ｇ得た。この化合物の比旋光度は以下のとおりであった。
22［α］D＝＋３６.８４(ｃ＝０.２０,ＭｅＯＨ)
【００７８】
(３) (1S,2S,3S,5R,6S)２−スピロ−５´−ヒダントイン−３−フルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボン酸０.６０ｇを６０％硫酸水溶液１０ｍｌに溶解し、１４０℃で２日間撹拌した。反応溶液を室温まで冷却後、５Ｍ水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ８にした後、イオン交換クロマトグラフィー(ＡＧ１−Ｘ８ 陰イオン交換樹脂（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）、展開溶媒：０.１Ｍ酢酸〜２Ｍ酢酸）で精製し、(1S,2S,3S,5R,6S)−２−アミノ−３−フルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−2,6−ジカルボン酸を０.３４ｇ得た。この化合物の比旋光度は以下のとおりであった。
22［α］D＝＋５８.６１(ｃ＝０.２０,１Ｎ ＨＣｌ)
【００７９】
実施例９
(1R,2R,3R,5S,6R)−２−アミノ−３−フルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−2,6−ジカルボン酸の合成
【００８０】
(１) 実施例８(２)の濾液を減圧下、濃縮した。得られた結晶１.３ｇと水１７ｍｌの混合物を１Ｍ塩酸を用いてｐＨを１.０に調整し、室温で撹拌した。４時間後、生成した結晶を濾取し０.８１ｇの結晶を得た。濾液はイオン交換クロマトグラフィー（ＡＧ５０Ｗ−Ｘ８ 陽イオン交換樹脂(Ｂｉｏ−Ｒａｄ)、展開溶媒：１Ｍ酢酸）で精製し、０.０８ｇの結晶を得た。
【００８１】
(２) 前記２つの結晶を合わせ(０.８９ｇ)、アセトン：水=８：５の混合溶液１３ｍｌを加え、５５℃で撹拌した。この溶液に(Ｓ)−(−)−1−フェニルエチルアミン０.４７ｇを加えた後、室温で１５時間撹拌した。生成した結晶を濾過し、(Ｒ)−(−)−1−フェニルエチルアミン塩を１.１０ｇ得た。
【００８２】
この塩を実施例８の(２)と同様に１Ｍ塩酸を用いてフリー体とし、(1R,2R,3R,5S,6R)２−スピロ−５´−ヒダントイン−３−フルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボン酸０.５８ｇを得た。濾液をイオン交換クロマトグラフィー（ＡＧ５０Ｗ−Ｘ８ 陽イオン交換樹脂(Ｂｉｏ−Ｒａｄ)、展開溶媒：１Ｍ酢酸）で精製し、(1R,2R,3R,5S,6R)２−スピロ−５´−ヒダントイン−３−フルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボン酸を０.０７ｇ得た。この化合物の比旋光度は以下のとおりであった。
22［α］D＝−３７.５２(ｃ＝０.２０,ＭｅＯＨ)
【００８３】
(３)(1R,2R,3R,5S,6R)２−スピロ−５´−ヒダントイン−３−フルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−６−カルボン酸０.５８ｇを実施例８の(３)と同様に反応し、(1R,2R,3R,5S,6R)−２−アミノ−３−フルオロビシクロ[3.1.0]ヘキサン−2,6−ジカルボン酸０.３７ｇを得た。この化合物の比旋光度は以下のとおりであった。
22［α］D＝−５９.３６(ｃ＝０.２０,１Ｎ ＨＣｌ)
【００８４】
試験例１（被検薬のcＡＭＰ蓄積に及ぼす効果）
代謝型グルタメ−ト受容体 ｍＧｌｕＲ２安定発現ＣＨＯ細胞を、１０％透析馬胎児血清含有ダルベッコ改変イ−グル培地［１％Proline 50units/ml,Penicillin 50μg/ml,Streptomycin 2mM,L-glutamine（用時添加）］を用いて１.２６×１０４cells/well/0.32cm2/150μlの割合で９６穴プレ−トに播種し、３７℃、５％ＣＯ2下で２日間培養を行った。その後、L-Glutamine free培地に交換し、４時間後に上清を吸引除去し、１５０μｌのＰＢＳ(＋)−ＩＢＭＸ(10mM PBS(-),1mM MgCl2,1mM CaCl2,1mM IBMX)を添加して、２０分間、３７℃、５％ＣＯ2存在下でインキュベ−ションを行った。再び上清を吸引除去し、６０μｌの１０−５Ｍ Forskolin、１０−１０〜１０−４Ｍの表１に示す被検体を含有したＰＢＳ(＋)−ＩＢＭＸを添加して１５分間、３７℃で５％ＣＯ2存在下インキュベ−ションを行い、Forskolin刺激ｃＡＭＰ蓄積量に対するアゴニストの抑制効果の検討を行った［コントロ−ルは、Forskolinと化合物無添加の条件とした。（Tanabe et al,Neuron,8,169-179(1992)）］。１００μｌの氷冷エタノールを添加して反応停止し、上清を別のプレ−トに全量回収した後、エバポレーターで常温乾固し、−２０℃で保存した。乾固したサンプルは、ｃＡＭＰ EIA kit（アマシャム社）を用いてｃＡＭＰ量を定量した。各ｃＡＭＰ量からコントロ−ルの値を差し引いた。１０−５ＭのForskolinで刺激を行ったときのｃＡＭＰ蓄積を５０％抑制する被検薬の濃度ＥＤ50値を求めた。結果を表１に示す。
【表１】
試験例２（マウスのメタンフェタミン運動過多に及ぼす効果）
雄性ＩＣＲ系マウス（体重２３−３２ｇ、日本チャールスリバー）を１群１１〜１２匹用いた。マウスは塩化ビニール製円筒透明測定ケージ（直径３０ｃｍ、高さ３０ｃｍ）に入れ９０分間環境順化させた。
【００８６】
次に、マウスに表２に示す各化合物を経口投与し、その３０分後にメタンフェタミンを１ｍｇ／ｋｇ腹腔内投与した。その１５分後に自動活動量測定装置（ＳＣＡＮＥＴ／ＳＶ−１０、東洋産業株式会社）を用いてマウスの３０分間の運動量をカウント数により測定した。前記各化合物は０.３％tween80−生理食塩水を溶媒として、これに懸濁して使用した。
【００８７】
そして、溶媒のみを投与したマウス群のカウント数と、表２に示す各化合物を所定の用量づつ投与したマウス群のカウント数より抑制率を求め、ＥＤ50値を算出した。結果を表２に示す。なお、統計処理は分散分析（ＡＮＯＶＡ）後、ダンネット検定によって行った。
【００８８】
表２に示されるように、比較例としてのＬＹ３５４７４０は０.０１ｍｇ／ｋｇ経口投与群を除き、用量依存的にメタンフェタミン運動過多を抑制［Ｆ(４,５４)＝３.２４２,Ｐ＜０.０５］するが、ＥＤ50値は０.８７ｍｇ／ｋｇであった。一方、本発明化合物であるＣｏｍｐ．１についても同様な作用が認められ［Ｆ(３,４３)＝３.３０６,Ｐ＜０.０５］たが、本発明化合物のＥＤ50値は０.０５ｍｇ／ｋｇであり、ＬＹ３５４７４０の１７.４倍のメタンフェタミン運動過多抑制効果を有していた。
【表２】
【発明の効果】
本発明の含フッ素アミノ酸誘導体は医薬として有用であり、特にメタボトロピックなグルタミン酸受容体の作動薬として有用である。したがって、本発明は、例えば精神分裂病、不安及びその関連疾患、うつ病、二極性障害、てんかん等の精神医学的障害、例えば薬物依存症、認知障害、アルツハイマー病、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、筋硬直に伴う運動障害、脳虚血、脳不全、脊髄障害、頭部障害等の神経学的疾患の治療及び予防に使用することができる。
Claims (6)
- 式
- 式
- （１Ｓ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−２−アミノ−３−フルオロビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸、その医薬上許容される塩又はその水和物。
- １つ又はそれ以上の医薬的に許容される担体、賦形剤又は希釈剤と組み合わされた請求項１〜３のいずれかに記載の化合物を含有してなる医薬的製剤。
- 請求項１〜３のいずれかに記載の化合物を有効成分とする医薬。
- グループ２メタボトロピックグルタミン酸受容体作用薬である請求項５に記載の医薬。
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