CN110461835A - 异噁唑甲酰胺化合物及其用途 - Google Patents

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姜华
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Abstract

本发明提供式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其已显示可用于治疗听力损失或平衡失调，其中R1至R3和L如本文所定义。

Description

异噁唑甲酰胺化合物及其用途
优先权的主张
本申请主张2017年3月24日提交的PCT/CN2017/078060的优先权，其通过引用全文纳入本文。
发明领域
本公开涉及化合物、包括这些化合物的组合物、和其用于听力损失或平衡失调的治疗的用途。
背景技术
内耳中的毛细胞是听觉和平衡所必需的。如果毛细胞以任何方式被损害，人将遭受听力损失或平衡失调。人内耳在出生时每个耳蜗仅含有约15,000个毛细胞，并且尽管这些细胞可能由于各种遗传或环境因素而丢失，但是丢失或损坏的细胞不能被替代。但是，转录因子Atoh1的过表达可从耳蜗和螺旋器的感觉器官的上皮细胞诱导感觉毛细胞(Zheng和Gao，《自然神经科学(Nat Neurosci)》2000；3：580-586；Kawamoto等，《神经科学杂志(JNeurosci)》2003；23：4395-4400；Izumikawa M等，《自然医学(Nat Med.)》2005；11：271-276；Gubbels等，《自然(Nature)》2008；455：537-541)。因此，需要发现诱导Atoh1表达且促进哺乳动物的毛细胞再生的治疗组合物和方法。
发明概述
本公开提供对治疗听力损失或平衡失调有用的化合物、其药学上可接受的盐、其药物组合物及其组合。本公开还提供治疗听力损失或平衡失调的方法，包括向有该需要的对象给予有效量的本公开的化合物、或其药学上可接受的盐。
本公开的一个方面提供式(I)的化合物或其药学上可接受的盐：
本公开的另一个方面提供一种药物组合物，其包括治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、或其子式、和一种或多种药学上可接受的载体。
本公开的又一个方面提供一种药物组合，其包括治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、或其子式、和一种或多种治疗活性剂。
本公开的又一个方面提供一种用于治疗听力损失或平衡失调的方法，其包括向有该需要的对象给予治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、或其子式。
本公开的又一个方面提供用于制备式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、或其子式的方法。
具体实施方式
本文描述了本公开的各种(枚举的)实施方式。将认识到，每个实施方式中说明的特征可以与其他说明的特征组合，以进一步提供本公开的实施方式。
实施方式1：一种式(I)的化合物
或其药学上可接受的盐，其中：
R1选自苯基、噻吩基、和呋喃基，其每个独立地被1-2个F任选取代；
L是被独立地选自C1-6烷基和卤素的1-4个取代基所任选取代的C5-C6亚烷基，其中任选地，C1-6烷基取代基与其所连接的碳原子一起形成3-元环烷基环；
R2和R3与它们所连接的氮原子一起形成包括碳原子和独立地选自N和O的1-3个杂原子的4-至10-元杂环基，其被1-4个R4所任选取代；
每个R4独立地选自C1-6烷基、C3-8环烷基、卤素、(C0-C3亚烷基)-CN、C1-6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基、(C0-C6亚烷基)-OR5、(＝O)、NH(C＝O)R5、NH(C＝O)OR7、NH(C＝O)N(R5)2、(C＝O)N(R7)2、(C＝O)R5、(C＝O)O(C1-6烷基)、(C＝O)O(C3-8环烷基)、S(＝O)2R5、S(＝O)2N(R7)2、NHS(＝O)2R5、被1-3个R6所任选取代的苯基和包括碳原子和独立地选自N、O和S的1-3个杂原子且被1-3个R6所任选取代的5-至6-元杂芳基；
每个R5独立地选自H、C1-6烷基和C3-8环烷基；
每个R6独立地选自C1-6烷基、C3-8环烷基、卤素、CN、C1-6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基、OR5、N(R5)2、NH(C＝O)R5、(C＝O)N(R5)2、(C＝O)R5、(C＝O)OR5、S(＝O)2R5和S(＝O)2N(R5)2；和
每个R7独立地选自H、C1-6烷基、被1-2个OR5所任选取代的C3-8环烷基、(C0-C3亚烷基)-CN和(C0-C3亚烷基)-OR5。
实施方式2：根据实施方式1的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1选自苯基、被一个F所取代的苯基、2-噻吩基、3-噻吩基、2-呋喃基和3-呋喃基。
实施方式3：根据实施方式1或2的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1是
实施方式4：根据实施方式1的化合物或其药学上可接受的盐，其中L是被1-4个卤素所任选取代的C5亚烷基。
实施方式5：根据实施方式1-4中任一个的化合物或其药学上可接受的盐，其中L是被两个F所任选取代的C5亚烷基。
实施方式6：根据实施方式1-5中任一个的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2和R3与它们所连接的氮原子一起形成具有选自以下结构的4-至10-元杂环基：
其每个独立地被1-2个R4所任选取代。
实施方式7：根据实施方式1-6中任一个的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2和R3与它们所连接的氮原子一起形成具有选自以下结构的4-至10-元杂环基：
其每个独立地被1-2个R4所任选取代。
实施方式8：根据实施方式1-7中任一个的化合物或其药学上可接受的盐，其中每个R4独立地选自C1-6烷基、卤素、(C0-C3亚烷基)-CN、(C0-C6亚烷基)-OR5、(＝O)、NH(C＝O)R5、NH(C＝O)OR7、NH(C＝O)N(R5)2、(C＝O)N(R7)2、(C＝O)R5、(C＝O)O(C1-6烷基)、(C＝O)O(C3-8环烷基)、S(＝O)2N(R7)2、NHS(＝O)2R5、被1-3个R6所任选取代的苯基和包括碳原子和独立地选自N、O和S的1-3个杂原子且被1-3个R6所任选取代的5-至6-元杂芳基；
实施方式9：根据实施方式1-8中任一个的化合物或其药学上可接受的盐，其中每个R4独立地选自CH3、CH2CH(CH3)2、F、CN、CH2-CN、OH、OCH3、CH2-OH、(CH2)2-OH、NH(C＝O)OCH3、NH(C＝O)CH3、NH(C＝O)NHCH3、(C＝O)NH2、(C＝O)NHCH3、(C＝O)NH(环戊基-OH)、(C＝O)NH(CH2-CN)、(C＝O)NH(CH2CH2-CN)、(C＝O)NH(CH2CH2-OH)、C(＝O)CH3、S(＝O)2NH2、NHS(＝O)2CH3、苯基和咪唑基。
实施方式10：根据实施方式1-9中任一个的化合物或其药学上可接受的盐，其中每个R4独立地选自CH3、F、(CH2)2-OH、(C＝O)NH2、S(＝O)2NH2、(C＝O)NH(CH2-CN)、(C＝O)NH(CH2CH2-CN)、(C＝O)NH(环戊基-OH)和NHS(＝O)2CH3。
实施方式11：根据实施方式1的化合物或其药学上可接受的盐，其选自：
实施例8：N-(5-(4-甲基哌嗪-1-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺；
实施例19：N-(5-(3-(甲基磺酰胺基)氮杂环丁-1-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺；
实施例27：N-(5-(3-氨基甲酰基氮杂环丁-1-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺；
实施例45：(S)-N-(5-(3-氟吡咯烷-1-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺；
实施例51：N-(5-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺；
实施例52：N-(5-(5-甲基-2,5-二氮杂双环[2.2.2]辛-2-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺；
实施例54：N-(5-(4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺；
实施例61：N-(5-(3-(甲基氨基甲酰基)氮杂环丁-1-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺；
实施例65：N-(5-(3-氨基甲酰基氮杂环丁-1-基)戊基)-5-(4-氟苯基)异噁唑-3-甲酰胺；
实施例72：N-(5-(3-氨磺酰基氮杂环丁-1-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺；
实施例73：5-(5-氟噻吩-2-基)-N-(5-(4-甲基哌嗪-1-基)戊基)异噁唑-3-甲酰胺；
实施例74：N-(3,3-二氟-5-(4-甲基哌嗪-1-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺；
实施例77：N-(5-(3-((氰基甲基)氨基甲酰基)氮杂环丁-1-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺；
实施例83：N-(5-(3-((2-羟基环戊基)氨基甲酰基)氮杂环丁-1-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺；
实施例85：5-(4-氟苯基)-N-(5-(3-(甲基氨基甲酰基)氮杂环丁-1-基)戊基)异噁唑-3-甲酰胺；和
实施例88：N-(5-(3-((氰基甲基)氨基甲酰基)氮杂环丁-1-基)戊基)-5-(4-氟苯基)异噁唑-3-甲酰胺。
实施方式12：根据实施方式1的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物选自所例举的例的任意一种或多种。
实施方式13：一种药物组合物，其包括：
治疗有效量的根据实施方式1-12中任一个的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，和
一种或多种药学上可接受的载体。
实施方式14：一种药物组合，其包括：
治疗有效量的根据实施方式1-12中任一个的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，和
一种或多种治疗活性剂。
实施方式15：一种治疗听力损失或平衡失调的方法，包括向有该需要的对象给予治疗有效量的根据实施方式1-12中任一个的化合物或其药学上可接受的盐。
实施方式16：根据实施方式15的方法，其中对象患有部分或完全听力损失。
实施方式17：根据实施方式15或16的方法，其中听力损失是获得性听力损失。
实施方式18：根据实施方式15-17中任一个的方法，其中听力损失是感觉神经性听力损失。
实施方式19：根据实施方式15-18中任一个的方法，其中听力损失或平衡失调与感觉毛细胞的损伤或损失相关。
实施方式20：根据实施方式15-19中任一个的方法，其中听力损失或平衡失调是急性或慢性暴露于耳毒性化合物、急性或慢性暴露于噪音、衰老、自身免疫性疾病、身体创伤、炎症或病毒所导致的。
实施方式21：根据实施方式15-20中任一个的方法，其中化合物或其药学上可接受的盐促进、刺激或诱导感觉毛细胞再生。
实施方式22：如实施方式1-12中任一个的化合物或其药学上可接受的盐，其用作药物。
实施方式23：实施方式1-12中任一个的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗听力损失或平衡失调的药物中的用途。
本公开的其他特征在示例性实施方式的以上描述的过程中将变得显而易见，所述示例性实施方式是为了说明本公开而给出的，并且不旨在限制本公开。
定义
出于解释本说明书的目的，将应用以下定义，并且在适当时，以单数使用的术语将包括复数。除非上下文另有明确说明，否则本说明书中使用的术语具有以下含义。
本文所述的所有方法可以任何合适的顺序进行，除非另有说明或者与上下文明显矛盾。本文涉及的任何和所有实施例/实例，或者示例性的语言(例如，“例如/如/诸如”)的使用仅仅是为了更好地阐述本公开，而不是对本公开所要求保护范围的限制。
用于本公开上下文的术语“一个”、“一种”、“该”以及类似表达(尤其在权利要求书的内容中)应解释为涵盖单数和复数，除非另有说明或者与上下文明显矛盾。
如本文所用，术语“杂原子”是指氮(N)、氧(O)或硫(S)原子，特别是氮或氧。
除非另有说明，否则任何具有不满足的价态的杂原子被认为具有足以满足化合价的氢原子。
如本文所用，术语“烷基”是指通式CnH2n+1的烃基。烷烃基可以是直链或支链的。例如，术语“C1-C6烷基”或C1至C6烷基”是指包含1至6个碳原子的单价、直链或支链的脂族基团(例如，甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、1-甲基丁基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、新戊基、3,3-二甲基丙基、己基、2-甲基戊基等)。
术语“C0-C6亚烷基”是指键(当碳原子数为0)或包含1至6个碳原子的二价亚烷基(可以是直链或支链)(例如，亚甲基(-CH2-)、乙烯基(-CH2CH2-)、正丙烯基(-CH2CH2CH2-)、异丙烯基(-CH(CH3)CH2-)、正丁烯基(-CH2CH2CH2CH2-)、异丁烯基、叔丁烯基、正戊烯基、异戊烯基、新戊烯基、正己烯基等)。
术语“烷氧基”是指连接一个氧的烷基，其可表示为–O-R或-OR，其中R代表烷基。“C1-C6烷氧基”或“C1至C6烷氧基”旨在包括C1、C2、C3、C4、C5、和C6烷氧基。烷氧基实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基(例如，正丙氧基和异丙氧基)和叔丁氧基。类似地，“烷硫基”或“硫代烷基”代表如上定义的烷基与指定数量碳原子通过硫桥连接；例如甲基-S-和乙基-S-。
“卤素”或“卤代”可以是氟、氯、溴或碘(作为取代基的优选卤素是氟和氯)。
“卤代烷基”旨在包括被一种或多种卤素取代的、具有特定数量碳原子的支链和直链饱和脂族烃基。因此，“C1-C6卤代烷基”或“C1至C6卤代烷基”旨在包括但不限于氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、三氯甲基、五氟乙基、五氯乙基、2,2,2-三氟乙基、七氟丙基、和七氯丙基。
“卤代烷氧基”表示如上定义的卤代烷基与指定数量碳原子通过氧桥连接。例如，“C1-C6卤代烷氧基”或“C1至C6卤代烷氧基”旨在包括三不限于三氟甲氧基、二氟甲氧基、2,2,2-三氟乙氧基、和五氟乙氧基。类似地，“卤代烷硫基”或“硫代卤代烷氧基”代表如上定义的卤代烷氧基与指定数量碳原子通过硫桥连接；例如三氟甲基-S-和五氟乙基-S-。
术语“环烷基”是指非芳族碳环，包括具有特定数量碳原子的单-、二-或多环体系。因此，“C3-C8环烷基”或“C3至C8环烷基”旨在包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、和降冰片基。
术语“芳基”是指具有单环(例如，苯基)或稠合的环体系(例如，萘。)的6-至10-元芳香族碳环部分。典型的芳基是苯基。
术语“杂芳基”是指在5-至10-元芳香族环体系中包含至少一个杂原子(例如，氧、硫、氮或其组合)的芳香族部分(例如，吡咯基、吡啶基、吡唑基、吲哚基、吲唑基、噻吩基、呋喃基、苯并呋喃基、噁唑基、异噁唑基、咪唑基、三唑基、四唑基、三嗪基、嘧啶基、吡嗪基、噻唑基、嘌呤基、苯并咪唑基、喹啉基、异喹啉基、喹喔啉基、苯并吡喃基、苯并苯硫基、苯并咪唑基、苯并噁唑基、1H-苯并[d][1,2,3]三唑基等)。杂芳族部分可由单环或稠合的环体系构成。典型的单杂芳环是包括一至三个独立地选自氧、硫和氮的杂原子的5-至6-元环，并且典型的稠合的杂芳环体系是包括一至四个独立地选自氧、硫和氮的杂原子的9-至10-元环体系。稠合的杂芳环体系可由两个稠合在一起的杂芳环或与芳基(例如苯基)稠合的杂芳基构成。
术语“杂环基”是指饱和或部分饱和、但非芳族的环或环体系，其包括具有特定数量环原子的单环、稠环、桥环和螺环。例如，杂环基包括但不限于5-至6-元杂环基、4-至10-元杂环基、4-至14-元杂环基和5-至14-元杂环基。除非另有说明，杂环基包括1至7、1至5、1至3、或1至2个独立地选自氮、氧和硫的杂原子作为环成员，N和S还可任选地被氧化为各种氧化态。杂环可连接在任何杂原子或碳原子上。这样的杂环基的实例包括但不限于氮杂环丁烷、氧杂环丁烷、哌啶、哌嗪、吡咯啉、吡咯烷、咪唑烷、咪唑啉、吗啉、四氢呋喃、四氢噻吩、四氢噻喃、四氢吡喃、1,4-二噁烷、1,4-氧硫杂环己烷、六氢嘧啶基、3-氮杂双环[3.1.0]己烷、氮杂环庚烷、3-氮杂双环[3.2.2]壬烷、十氢异喹啉、2-氮杂螺[3.3]庚烷、2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷、2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷、8-氮杂-双环[3.2.1]辛烷、3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷、3-氧杂-8-氮杂-双环[3.2.1]辛烷、8-氧杂-3-氮杂-双环[3.2.1]辛烷、2-氧杂-5-氮杂-双环[2.2.1]庚烷、2,5-二氮杂-双环[2.2.1]庚烷、1,4-二氧杂-8-氮杂-螺[4.5]癸烷、3-氧杂-1,8-二氮杂螺[4.5]癸烷、八氢吡咯并[3,2-b]吡咯等。
如本文所引用，术语“取代的"意为至少一个氢原子被非氢基团所替代，条件是保持正常的价态，且取代导致稳定的化合物。当取代基是酮(即，＝O)时，则原子上有2个氢被替代。酮取代基不存在于芳族部分上。
在本公开的化合物上存在氮原子(例如，胺)的情况下，可以通过用氧化剂(例如，mCPBA和/或过氧化氢)处理将它们转化为N氧化物，以提供本公开的其他化合物。因此，所示和要求保护的氮原子被认为覆盖所示的氮及其N-氧化物(N→O)衍生物。
当任何变量在化合物的任何组分或公式中出现不止一次时，其在每次出现时的定义独立于各其它出现的定义。因此，例如，如果显示基团被0-3个R基团所取代，则所述基团可以被最多三个取代或未取代的R基团所取代，并且每次出现时，R独立地从R的定义中选择。
当连接取代基的键显示为跨过连接环内两个原子的键时，所述取代基可键合至所述环上的任何原子。当列出取代基而没有表明这种取代基与给定式的化合物的其余部分键合的原子时，则该取代基可以通过该取代基中的任何原子键合。
只有当取代基和/或变化形式的组合产生稳定化合物时，才允许该组合。
如本领域普通技术人员将能够理解的，例如，分子中的酮(-CH-C＝O)基团可以互变异构为其烯醇形式(-C＝C-OH)。因此，即使结构仅描绘其中一种，本公开旨在涵盖所有可能的互变异构体。
术语“药学上可接受的”表示物质或组合物必须在化学和/或毒理学上与包含在制剂中的其他成分和/或与用其治疗的哺乳动物相容。
除非另有说明，术语“本公开的化合物”是指式(I)的化合物和其子式以及异构体，如立体异构体(包括非对映异构体、对映异构体和外消旋体)、几何异构体、构象异构体(包括旋转异构体和阻转异构体)、互变异构体、同位素标记的化合物(包括氘取代)、和固有形成的部分(例如，多晶型物、溶剂合物和/或水合物)。当存在能够形成盐的部分时，盐也包括在内，特别是药学上可接受的盐。
本领域技术人员将认识到，本公开的化合物可含有手性中心，因此可以以不同的异构形式存在。本文中所用的术语“异构体”是指，具有相同分子式但原子排列与构型不同的不同的化合物。
“对映异构体”是一对立体异构体，它们是彼此的不可重叠镜像。一对对映异构体的1:1混合物是“外消旋”混合物。该术语用于表示合适的外消旋混合物。当指定本公开的化合物的立体化学时，使用常规RS系统指定具有两个手性中心的已知相对和绝对构型的单一立体异构体(例如，(1S,2S))；具有已知相对构型但未知绝对构型的单一立体异构体用星号表示(例如，(1R*,2R*))；以及具有两个字母的外消旋物(例如，(1RS,2RS)作为(1R,2R)和(1S,2S)的外消旋混合物；(1RS,2SR)作为(1R,2S)和(1S,2R)的外消旋混合物)。“非对映异构体”是具有至少两个非对称原子的立体异构体，但它们彼此是非镜像的。绝对立体化学根据Cahn-Ingold-Prelog R-S系统指定。当化合物是纯对映异构体时，各手性碳原子处的立体化学可通过R或S指定。未知其绝对构象的解离的化合物可根据它们使钠D线的波长处的平面偏振光旋转的方向(右旋的或左旋)指定(+)或(-)。或者，拆分的化合物可以通过手性HPLC通过相应的对映异构体/非对映异构体的相应保留时间来定义。
本文中所述的某些化合物包含一个或多个非对称中心或轴线，并且可因此产生对映体、非对映体，和在绝对立体化学方面如(R)-或(S)-可确定的其它立体异构体形式。
当化合物含有双键或者为该分子提供一定量的结构刚性的一些其它特征时，会出现几何异构体。如果化合物包含双键，其取代基可以是E或Z构型。如果化合物包含双取代的环烷基，则环烷基取代基可具有顺式-或反式-构型。
构象异构体(或构象异构体)是可以通过一个或多个键的旋转而不同的异构体。旋转异构体是构象异构体，其通过仅一个键的旋转而不同。
术语“阻转异构体”是指基于轴向或平面手性的结构异构体，其由分子中的受限旋转产生。
除非另有说明，本公开的化合物意在包括全部此类可能的异构体，包括外消旋混合物，任选纯的形式和中间体混合物。光学活性(R)-和(S)-异构体可使用手性合成子或手性试剂来制备，或者使用常规技术进行拆分(例如，在手性SFC或HPLC色谱柱上分离，如可获自大赛璐公司(DAICEL Corp.)的和或其他等效的柱，使用适当的溶剂或混合溶剂来实现良好的分离)。
本公开的化合物可以以光学活性或外消旋形式分离。光学活性形式可以通过拆分外消旋形式或通过合成光学活性起始材料来制备。用于制备本公开的化合物的所有方法和其中所制备的中间体被认为是本公开的一部分。当制备对映体或非对映体产物时，它们可以通过常规方法、例如通过色谱法或分级结晶来分离。
取决于工艺条件，本公开的最终产物以游离(中性)或盐形式获得。这些最终产品的游离形式和盐都在本公开的范围内。如果需要，可将一种形式的化合物转化为另一种形式。游离碱或酸可以转化成盐；盐可以转化成游离的化合物或另一种盐；可以将本公开的异构化合物的混合物分离成单独的异构体。
优选药学上可接受的盐。但是，其他盐例如在制备过程中可采用的分离或纯化步骤中可能是有用的，因此其预期在本公开的范围内。
如本文所用，“药学上可接受的盐”是指所公开化合物的衍生物，其中母体化合物通过制备其酸或碱盐来修饰。例如，药学上可接受的盐包括但不限于乙酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、溴化物/氢溴酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、樟脑磺酸盐、癸酸盐、氯化物/盐酸盐、氯脲乙酸盐、柠檬酸盐、乙二磺酸盐、富马酸盐、葡萄糖酸盐、葡糖酸盐、葡萄糖醛酸盐、谷氨酸盐、戊二酸盐、乙醇酸盐、马尿酸盐、氢碘酸盐/碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、十二烷基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐/羟基丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、粘酸、萘甲酸盐、萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、十八烷酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、苯乙酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、聚半乳糖醛酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、氨基磺酸盐、磺基水杨酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐、三氟乙酸盐和昔美酸盐(xinafoate)形式。
药学上可接受的酸加成盐可以由无机酸和有机酸形成。可获得盐的无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。可获得盐的有机酸包括例如，乙酸、丙酸、乙醇酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、磺基水杨酸等。
药学上可接受的碱加成盐可以由无机碱和有机碱形成。可获得盐的无机碱包括例如铵盐和元素周期表第I至XII栏中的金属。在某些实施方式中，由钠、钾、铵、钙、镁、铁、银、锌和铜获得盐；特别合适的盐包括铵盐、钾盐、钠盐、钙盐和镁盐。可获得盐的有机碱包括例如伯胺、仲胺和叔胺、经取代的胺(包括天然产生的取代胺)、环胺、碱性离子交换树脂等。某些有机胺包括异丙胺、苄星、胆碱、二乙醇胺、二乙胺、赖氨酸、葡甲胺、哌嗪和氨丁三醇。
本公开的药学上可接受的盐可以通过常规化学方法由含有碱性或酸性部分的母体化合物合成。通常，这样的盐可以通过使这些化合物的游离酸或碱形式与化学计量的适当的碱或酸在水中或在有机溶剂中，或在两者的混合物中反应来制备；通常，优选非水介质如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈。合适的盐的列表可在英国伦敦的药物出版社(Pharmaceutical Press)Allen,L.V.,Jr.,编的《雷明顿：药物科学和实践》(Remington:The Science and Practice of Pharmacy)第22版中找到，其公开内容在此引入作为参考。
含有能够作为氢键供体和/或受体的基团的本公开的化合物可以与合适的共晶形成剂(former)形成共晶。这些共晶可以通过已知的共晶形成方法由本公开的化合物制备。这样的方法包括在结晶条件下研磨、加热、共升华、共熔本公开的化合物与共晶形成剂或使式(I)化合物与共晶形成剂在溶液中接触并分离由此形成的共晶。合适的共晶形成剂包括述于WO 2004/078163的那些。因此本公开还提供包括本公开的化合物的共晶。
本文给出的任何式也旨在表示化合物的未标记的形式以及同位素标记形式。同位素标记的化合物具有由本文给出的式表示的结构，除了一个或多个原子被具有选定原子质量或质量数的原子取代。可掺入本公开的化合物的同位素的示例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟、氯和碘的同位素，分别例如2H、3H、11C、13C、14C、15N、18F 31P、32P、35S、36Cl、125I。本公开包括如本文所述各种同位素标记的化合物，例如，存在诸如3H和14C的放射性同位素的那些，或存在诸如2H和13C的非放射性同位素的那些。这类同位素标记的化合物可用于代谢研究(使用14C)、反应动力学研究(使用例如2H或3H)、包括检测或成像技术(如正电子发射断层成像术(PET)或单光子发射计算体层成像术(SPECT))的药物或底物组织分布试验、或对患者的放射性治疗中。具体地，可能特别需要18F或标记的化合物来用于PET或SPECT研究。
另外，用较重同位素，特别是氘(即2H或D)取代能提供因代谢稳定性较高而产生的某些治疗优势，例如体内半衰期延长或剂量要求降低或改善治疗指标。应当理解的是，此处所述的氘被认为是本公开的化合物的取代基。这类较重同位素(具体是氘)的浓度可以通过同位素富集因子定义。本文所用术语“同位素富集因子”表示特定同位素的同位素丰度和自然丰度之间的比例。如果在本公开的化合物中的取代基表示为氘，那么这类化合物针对各指定的氘原子具有的同位素富集因子是至少3500(各指定氘原子52.5％氘掺入)，至少4000(60％氘掺入)，至少4500(67.5％氘掺入)，至少5000(75％氘掺入)，至少5500(82.5％氘掺入)，至少6000(90％氘掺入)，至少6333.3(95％氘掺入)，至少6466.7(97％氘掺入)，至少6600(99％氘掺入)，或至少6633.3(99.5％氘掺入)。
本公开的同位素标记的化合物通常可以通过本领域技术人员已知的常规技术或通过方案或实施例中公开的方法和下面描述的制法(或与本文所述类似的工艺)来制备：通过用适当的或容易获得的同位素标记的试剂代替另外使用的非同位素标记的试剂。这种化合物具有多种潜在用途，例如，作为用于确定潜在的药物化合物与靶蛋白质或受体结合的能力的标准和试剂，或用于在体内或体外成像与该公开的生物受体结合的物质。
术语“溶剂合物”是指该公开的化合物与一种或多种溶剂分子的物理结合，无论是有机的还是无机的。该物理结合包括氢键。在某些情况下，溶剂合物将能够分离，例如当一个或多个溶剂分子掺入结晶固体的晶格中时。溶剂合物中的溶剂分子可以以规则排列和/或非有序排列存在。溶剂合物可包含化学计量或非化学计量量的溶剂分子。“溶剂合物”包括溶液相和可分离的溶剂合物。示例性的溶剂合物包括但不限于水合物、乙醇化物、甲醇化物和异丙醇化物。溶剂化的方法是本领域通常已知的。
如本文所用，“多晶型”是指具有相同化学结构/组合物但形成晶体的分子和/或离子的不同空间排列的结晶形式。本公开的化合物可以作为无定形固体或结晶固体提供。冻干可用于提供作为固体的本公开的化合物。
术语“听力损失”是指受试者的听力突然或逐渐减少。
术语“平衡失调”是指控制平衡系统，使得受试者知道他/她的身体在环境中的位置的迷路(内耳器官)的破坏。这种破坏通常会使受试者感到不稳和/或头晕。
术语“部分或完全听力损失”是指感知声音的能力的不同程度的降低。
术语“获得性听力损失”是指在生命周期中发生或发展但在出生时不存在的听力损失。
术语“感觉神经性听力损失”是指由内耳的感觉细胞和/或神经纤维的损伤引起的听力损失。
如本文所用，术语“患者”包括所有哺乳动物的物种。
如本文所用，术语“对象”指动物。通常，动物是哺乳动物。对象还指例如灵长类动物(例如，人)、牛、绵羊、山羊、马、狗、猫、兔、大鼠、小鼠、鱼、鸟等。在某些实施方式中，该对象是灵长类动物。在其它实施方式中，该对象是人。示例性受试者包括具有癌症疾病风险因素的任何年龄的人。
如本文所用，如果对象将在生物学上、医学上或在生活质量方面受益于治疗，那么这样的对象“需要”这样的治疗(优选人)。
本文所用术语“抑制”、“抑制作用”或“抑制的”指减少或遏制给定病症、症状或紊乱或疾病，或显著降低生物活动或过程的基线活性。
如本文所用，术语“治疗”，“治疗的”或“治疗作用”任何疾病/病症是指哺乳动物，特别是人类中的疾病/病症的治疗，包括：(a)改善疾病/病症(即，减缓或阻止或减少疾病/病症的发展，或至少其中一种临床症状)；(b)在身体上(例如，可辨别症状的稳定)、生理上(例如，物理参数的稳定)、或两者上减轻或调节疾病/病症(即，导致疾病/病症消退)；(c)减轻或改善至少一个物理参数，包括受试者可能无法辨别的物理参数；和/或(d)预防或延迟疾病或病症的发作或发展或进展在哺乳动物中发生，特别是当这样的哺乳动物易患疾病或病症但尚未被诊断为患有该疾病或病症时。
术语本公开的化合物的“治疗有效量”指这样量的本公开的化合物，其能够引起对象生物或药学反应，例如，减少或抑制酶或蛋白质活性，或改善症状，减轻病症，延缓或延迟疾病进展，或预防疾病等。在一个非限制性实施方案中，术语“治疗有效量”是指本公开的化合物在给予受试者时有效至少部分缓解、抑制、预防和/或改善听力损失和/或平衡障碍的量。
有效量可以根据诸如受试者的尺寸和体重、疾病的类型或特定的本公开的化合物等因素而变化。本领域普通技术人员将能够研究本文包含的因素并且无需过度实验就可以确定本公开的化合物的有效量。
给药方案可以影响有效量的构成。本公开的化合物可以在听力损失和/或平衡失调发作之前或之后给予受试者。此外，可以每天或依次施用几种分开的剂量以及交错剂量，或者可以连续输注剂量，或者可以是推注注射。此外，如治疗或预防情况的紧急情况所示，本公开的化合物的剂量可以按比例增加或减少。
化合物的制备
考虑到本文提供的方法、反应方案和实施例，本公开的化合物可以以有机合成领域的技术人员已知的多种方式制备。本公开的化合物可以使用下面描述的方法、以及合成有机化学领域中已知的合成方法、或通过本领域技术人员所理解的变化来合成。优选的方法包括但不限于下面描述的那些。反应在适合于所用试剂和材料的溶剂或溶剂混合物中进行，并适于进行转化。有机合成领域的技术人员将理解，分子上存在的功能应该与所提出的变换一致。这有时需要判断以修改合成步骤的顺序或选择一个特定的工艺方案而不是另一个，以获得本公开的所需化合物。
起始原料通常可从商业来源如西格玛奥德里奇公司(Sigma Aldrich)或其它商业供应商获得，或者如该公开中所述制备，或者使用本领域技术人员熟知的方法容易地制备(例如，参见以下文献中通常描述的方法：Louis F.Fieser和Mary Fieser，有机合成试剂，v.1-19，Wiley，纽约(1967-1999年编)，Larock，R.C.，《综合有机转化(ComprehensiveOrganic Transformations)》，第2版，Wiley-VCH Weinheim，德国(1999)，或《贝尔斯坦的有机化学手册(Beilsteins Handbuch derorganischen Chemie)》，4，Aufl编，Springer-Verlag，柏林，包括增刊(也可通过Beilstein在线数据库获得))。
出于例示的目的，下面描述的反应方案提供了合成本公开的化合物以及关键中间体的潜在途径。有关各个反应步骤的更详细说明，请参阅下面的“实施例”部分。本领域技术人员将理解，可以使用其他合成路线来合成本发明的化合物。尽管在方案中描述了具体的起始原料和试剂并在下面进行了讨论，但是其他起始原料和试剂可以容易地代替以提供各种衍生物和/或反应条件。此外，根据本公开内容，使用本领域技术人员熟知的常规化学方法，可以进一步修改/修饰通过下述方法制备的许多化合物。
在本公开的化合物的制备中，可能需要保护中间体的远端官能团。这种保护的需要取决于远端官能团的性质和制备方法的条件。本领域技术人员容易确定对这种保护的需要。有关保护基团及其使用的一般描述，参见Greene,T.W.等《有机合成中的保护基团(Protecting Groups in Organic Synthesis)》第四版(2007)。保护基团在制备本公开的化合物时(例如三苯甲基保护基)可以显示为一种区域异构体，但也可以作为区域异构体的混合物存在。
以下使用的以下缩写具有相应的含义：
用于表征实施例的LC/MS方法
使用安捷伦公司(Agilent)1100HPLC系统和Waters Micromass ZQ，或WatersACQUITY UPLC和Waters SQ检测器或Waters ACQUITY QDa检测器记录LC/MS数据。
用于表征实施例的NMR
使用布鲁克公司(Bruker)傅里叶变换光谱仪以如下频率操作获得1H NMR光谱：1HNMR：400MHz(布鲁克公司)。13C NMR：100MHz(布鲁克公司)。光谱数据以以下格式报告：化学位移(多重性，氢原子数)。化学位移表示为四甲基硅烷内标的低磁场ppm(δ单位，四甲基硅烷＝0ppm)和/或以溶剂峰为参考，1H NMR光谱中CD3SOCD3出现在2.50ppm，CD3OD出现在3.31ppm，CD3CN出现在1.94，D2O出现在4.79，CD2Cl2出现在5.32，并且CDCl3出现在7.26ppm，在13C NMR光谱中CD3SOCD3出现在39.7ppm，CD3OD出现在49.0ppm，CD3CN出现在1.32和/或118.26，CD2Cl2出现在53.84，并且CDCl3出现在77.0ppm。所有13C NMR光谱都是质子解耦的。
实施例的纯化中使用的方法
中间体和最终产物的纯化通过正相或反相色谱进行。使用预填充的SiO2柱(例如，来自泰勒迪埃克有限公司(Teledyne Isco,Inc)的RediSep Rf柱)进行正相色谱，用适当溶剂体系的梯度洗脱(例如，己烷和乙酸乙酯；DCM和MeOH；或除非另有说明)。使用在个别实施例实验方法中描述的方法进行反相制备型HPLC，其具有关于柱、碱性/中性/酸性条件和乙腈梯度范围的相应信息。
通常合成方案
方案1-4(如下所示)描述了制备本公开的化合物(包括式(I)和其子式的化合物)的可能途径。以下反应方案的起始原料可商购获得，或者可根据本领域技术人员已知的方法或本文公开的方法制备。式(I)的化合物可以通过使用基本上光学纯的原料或通过本领域熟知的分离色谱、重结晶或其它分离技术制成基本上光学纯的。有关更详细的说明，请参见下面的示例部分。
方案1
如方案1中所示，用强碱(例如t-BuOK)和草酸二乙酯处理芳族甲基酮1，得到α-羰基酯2，其与盐酸羟胺环化，得到异噁唑酯3。随后通过LiOH水解化合物3得到酸4，其通过草酰氯转化为相应的酰氯，然后与5-氨基戊-1-醇偶联以产生酰胺5。通过戴斯-马丁高碘烷进一步氧化化合物5的醇，得到醛6，其在NaCNBH3或NaBH(OAc)3存在下与各种胺9(R'和R”各自代表胺9的N上的各种取代基)进行还原胺化，产生相应的叔胺7。取决于胺9的结构，化合物7可以通过保护基团和/或官能团操作以提供目标分子8。
方案2
或者，在方案2中，通过NBS将醇5转化为相应的溴化物10，其在弱碱(例如K2CO3)存在下与各种胺11进行烷基化，得到目标分子8。
方案3
另外，如方案3所示，仲胺9(R'和R”各自代表胺9的N上的各种取代基)在碱(例如Cs2CO3)存在下与2-(5-溴戊基)异吲哚啉-1,3-二酮进行烷化，或者在催化碘化铜存在下与2-(丁-3-炔-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮和甲醛进行三组分偶联反应，形成叔胺12。用肼对化合物12进行脱保护，得到伯胺13，然后在一般的酰胺偶联条件下(如HATU、EDCI/HOBt等)与酸4反应，得到叔胺7。取决于胺9的结构，化合物7可以通过保护基团和/或官能团操作以提供目标分子8。
方案4
如方案4中所示，通过草酰氯将酸4转化为相应的酰氯，然后与3-氨基丙酸叔丁酯偶联，得到酰胺14，其在酸性条件下(例如TFA)水解以产生酸15。在一般的酰胺偶联条件下(例如EDCI/HOBt、HATU等)，用N,O-二甲基羟胺将化合物15转化为Weinreb酰胺16。化合物16与乙烯基格氏试剂进行亲核加成，形成α,β不饱和酮17，其作为迈克尔受体起作用，可以通过各种胺9(R'和R”各自代表胺9的N上的各种取代基)加成，形成β-羰基胺18。化合物18的羰基通过DAST进行氟化以提供化合物19，其可以进行保护和/或官能团操作以提供二-F取代的目标分子20。
实施例
使用本文公开的方法制备、分离和表征以下实施例。以下实施例说明了本发明的部分范围，并不意味着限制本发明的范围。
除非另有说明，原料通常可从非限制性的商业来源获得，如TCI精细化学公司(TCIFine Chemicals)(日本)、上海凯美赫有限公司(Shanghai Chemhere Co.,Ltd.)(中国上海)、极光精细化学有限责任公司(Aurora Fine Chemicals LLC)(加利福尼亚州圣迭戈)、FCH集团(FCHGroup)(乌克兰)、奥德里奇化学公司(Aldrich Chemicals Co.)(威斯康星州密尔沃基)、兰开斯特合成有限公司(新罕不什尔州温德姆)，阿克罗有机物公司(AcrosOrganics)(新泽西州费尔劳恩)、梅布里奇化工有限公司(Maybridge Chemical Company，Ltd.)(英格兰康沃尔郡)、泰格科学公司(Tyger Scientific)(新泽西州普林斯顿)、阿斯利康制药公司(AstraZeneca Pharmaceuticals)(英格兰伦敦)、卡布里奇公司(ChembridgeCorporation)(美国)，矩阵科学公司(Matrix Scientific)(美国)、科尼尔化学与制药公司(Conier Chem&Pharm Co.，Ltd)(中国)、烯胺有限公司(Enamine Ltd)(乌克兰)、康比布洛克有限公司(Combi-Blocks，Inc.)(美国圣迭戈)、奥克伍德产品有限公司(OakwoodProducts，Inc.)(美国)、阿波罗科学有限公司(Apollo Scientific Ltd.)(英国)、奥莉化学有限责任公司(Allichem LLC.)(美国)和乌克兰有机合成有限责任公司(UkrorgsyntezLtd)(拉脱维亚)。
中间体
中间体A：5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-羧酸
步骤1：2,4-二氧代-4-(噻吩-2-基)丁酸乙酯
在15-25℃下，向1-(噻吩-2-基)乙-1-酮(50g，396.2mmol，1.0当量)和(COOEt)2(72.39g，495.3mmol，1.25当量)在无水THF(2.0L)中的溶液中分小份加入t-BuOK(57.8g，515.1mmol，1.3当量)。然后室温搅拌该混合物2小时(h)。将混合物倒入水(800mL)中，用1NHCl酸化至pH 2，然后用乙酸乙酯(3×500mL)萃取混合物。分离有机层并用盐水(1L)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并浓缩，得到粗制标题产物(100g)，为黄色固体，其不经进一步纯化而使用。
步骤2：5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-羧酸乙酯
向化合物A-1(89g，393.3mmol，1.0当量)的无水乙醇(2L)溶液中加入化合物NH2OH.HCl(54.64g，786.7mmol，2当量)。将混合物在60℃下搅拌16小时。将反应混合物浓缩。添加水(200mL)，并使用EtOAc(3×200mL)萃取混合物。在真空下浓缩有机层，得到粗标题产物(90g)，其无需进一步纯化即可使用。
步骤3：5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-羧酸
向化合物A-2(80g，358.3mmol，1.0当量)的THF(200mL)溶液中加入LiOH.H2O(17.16g，716.6mmol，2.0当量)的水(358.3mL)溶液。将得到的混合物在15-22℃下搅拌2小时。将反应混合物减压浓缩以去除THF。用1N HCl将残余物酸化至pH 1并用EtOAc(3×300mL)萃取。将合并的有机层在真空下浓缩。将固体用EtOAc研磨，过滤并干燥，得到标题化合物(42.6g，60.9％产率)，为白色固体。
1H NMR(400M Hz,CDCl3)δppm 7.60-7.59(dd,J＝3.6,1.2Hz,1H),7.54-7.52(dd,J＝4.8,1.2Hz,1H),7.18-7.16(dd,J＝4.8,3.6Hz,1H),6.84(s,1H)。
中间体B：N-(5-氧代戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺
步骤1：N-(5-羟基戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺
在N2保护下化合物中间体A(10g，51.23mmol，1.0当量)的无水CH2Cl2(100mL)溶液中滴加(COCl)2(19.5g 13.1mL，153.6mmol，3.0当量)，然后在0℃下加入一滴DMF。室温搅拌该混合物2小时。然后将混合物在真空下浓缩，并将残余物用CH2Cl2(50mL)稀释，然后在0℃下将混合物滴加到5-氨基戊-1-醇(7.93g，76.85mmol，1.5当量)和Et3N(15.5g，153.69mmol，3.0当量)在CH2Cl2(100mL)的溶液中。室温搅拌得到的混合物1小时。然后将反应用水(50mL)淬灭并用CH2Cl2(3×50mL)萃取。有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩，得到标题化合物(12.5g，87.03％产率)，为白色固体。
MS(ESI)m/z 302.9[M+Na]+。
步骤2：N-(5-氧代戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺
向化合物B-1(10g，35.67mmol，1.0当量)的CH2Cl2(200mL)溶液中加入NaHCO3(13.48g，160.5mmol，4.5当量)，然后加入DMP。室温搅拌得到的混合物3小时。将混合物缓慢倒入饱和NaHCO3水溶液(100mL)中并用CH2Cl2(3×100mL)萃取。合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，残余物通过硅胶色谱法纯化，用石油/EtOAc从100/0至1/1洗脱，得到标题化合物(4.5g，45.3％产率)，作为白色固体。MS(ESI)m/z 300.9[M+Na]+。
中间体C：5-(4-氟苯基)-N-(5-氧代戊基)异噁唑-3-甲酰胺
通过使用类似于B的中间体的方法，通过用5-(4-氟苯基)异噁唑-3-羧酸(使用与中间体A类似的方法制成)代替中间体A，以28％的收率制备标题化合物，作为白色固体。MS(ESI)m/z 312.9[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 9.81(t,J＝1.2Hz,1H),7.82-7.78(m,2H),7.23-7.16(m,2H),6.92(s,1H),3.50(q,J＝6.4Hz,2H),2.59-2.50(m,2H),1.80-1.64(m,4H)。
中间体D：N-甲基氮杂环丁烷-3-甲酰胺
步骤1：1-二苯甲基-N-甲基氮杂环丁烷-3-甲酰胺
向1-二苯甲基氮杂环丁烷-3-羧酸(4.0g，14.96mmol，1.0当量)和CH3NH2(8.98mL，17.96mmol，1.2当量，2M在THF中)在CH2Cl2(60mL)中的溶液中依次加入EDCI(5.74g，29.93mmol，2.0当量)、HOBt(3.03g，22.44mmol，1.5当量)和DIEA(9.89mmol，59.85mmol，4.0当量)。在23℃下搅拌得到的混合物1小时。将混合物用水(60mL)稀释，然后将有机相用盐水(3×60mL)洗涤，经无水Na2SO4,干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法纯化粗产物，用DCM/甲醇洗脱，得到标题化合物(3.70g，88.2％产率)，作为白色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm7.36-7.34(m,4H),7.24-7.22(m,4H),7.18-7.14(m,2H),6.06(s,1H),4.39(s,1H),3.32(t,J＝8.0Hz,2H),3.25(t,J＝6.0Hz,2H),3.06-2.98(m,1H),2.82(d,J＝4.8Hz,3H)。
步骤2：N-甲基氮杂环丁烷-3-甲酰胺
向中间体D-1(3.0g，10.70mmol，1.0当量)的甲醇(50mL)溶液中加入Pd(OH)/C(300mg，10％wt)，并将所得混合物在50℃、H2(50psi)下搅拌12小时。过滤混合物，浓缩滤液，粗产物用硅胶色谱法纯化，用DCM/甲醇洗脱，得到标题化合物(1.10g，90.1％收率)，作为棕色油。1H NMR(CDCl3,400M Hz)δppm 6.29(s,1H),5.05(s,1H),3.84(t,J＝8.0Hz,2H),3.65(t,J＝8.4Hz,2H),3.37-3.29(m,1H),2.79(d,J＝4.8Hz,3H)。
中间体E：N-环丙基氮杂环丁烷-3-甲酰胺
通过使用类似于中间体D的方法，通过用环丙胺替换甲胺，制备标题化合物，为浅黄色油。MS(ESI)m/z 141.0[M+H]+。
中间体F：3-(甲基磺酰基)氮杂环丁烷
步骤1：3-((甲基磺酰基)氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯
在0℃，向3-羟基氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(3.0g，17.32mmol，1.0)的CH2Cl2(40mL)溶液中加入Et3N(2.63g，25.98mmol，1.5当量)，然后加入MsCl(2.38g，20.78mmol，1.2当量)。室温搅拌该混合物14小时。用CH2Cl2(40mL)稀释反应混合物。依次用水(40mL)、1.0N HCl(20mL)和盐水(20mL)洗涤有机相。将有机层用Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到粗标题化合物(4.2g，96.5％产率)，为浅黄色油，其不经进一步纯化而使用。
步骤2：3-(甲硫基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯
向化合物F-1(2.17g，8.64mmol，1.0当量)的EtOH(12mL)溶液中加入甲硫醇钠(907.8mg，12.9mmol，1.5当量)。在回流下将混合物加热2小时。用水(30mL)稀释混合物。用EtOAc(3×20mL)萃取水相。用Na2SO4干燥合并的有机相，过滤。减压浓缩滤液。通过硅胶色谱法纯化残余物，用石油/EtOAc从50/1至5/1洗脱，得到标题化合物(1.2g，68％产率)，为浅黄色油。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 4.23(t,J＝8.8Hz,1H),3.84-3.81(m,2H),3.58-3.54(m,1H),2.11(s,3H),1.43(s,9H)。
步骤3：3-(甲基磺酰基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯
在0-5℃下，向冰冷却的化合物F-2(0.7g，3.44mmol，1.0当量)的CH2Cl2(10mL)溶液中分批加入m-CPBA(1.54g，7.57mmol，2.2当量)。将混合物在0℃下搅拌3小时。将混合物用饱和NaHCO3水溶液(20mL)淬灭。将有机相用饱和Na2SO3水溶液(2×20mL)洗涤，用Na2SO4干燥并过滤。减压浓缩滤液，通过硅胶色谱法纯化残余物，用石油/EtOAc洗脱，得到标题化合物(0.6g，74％收率)，为灰白色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 4.26-4.19(m,4H),3.91-3.89(m,1H),2.90(s,3H),1.44(s,9H)。
步骤4：3-(甲基磺酰基)氮杂环丁烷
在25℃下，向化合物F-3(0.6g，2.55mmol，1.0当量)在CH2Cl2(4mL)中的溶液中加入TFA(1.48g，13.0mmol，5.1当量)。将混合物在25℃下搅拌14小时。减压除去挥发物，得到粗标题化合物，将其直接用于下一步骤。
中间体G：氮杂环丁烷-3-磺酰胺
步骤1：3-(硫代乙酰基)氮杂环丁烷-1-羧酸苄酯
在-78℃下，向PPh3(7.91g，30.16mmol，1.25当量)的THF(30mL)溶液中加入DIAD(5.95g，29.44mmol，1.22当量)的THF(20mL)溶液。搅拌10分钟后，加入硫代乙酸(2.39g，2.24mL，31.37mmol，1.3当量)的THF(20mL)溶液。再过10分钟后，加入3-羟基氮杂环丁烷-1-羧酸苄酯(5g，24.13mmol，1.0当量)的THF(30mL)溶液。将反应在-78℃下搅拌1小时，然后温热至25℃，保持14小时。将反应混合物用盐水(30mL)淬灭。用EtOAc(3×20mL)萃取水相。合并的有机相通过Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化残余物，用石油/EtOAc从50/1至5/1洗脱，得到标题化合物(2.0g，31％产率)，为浅黄色油。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.38-7.28(m,5H),5.11(s,2H),4.49-4.45(m,2H),4.24-4.21(m,1H),3.94-3.90(m,2H),2.35(s,3H)。
步骤2：3-(氯代磺酰基)氮杂环丁烷-1-羧酸苄酯
向化合物G-1(1.1g，4.15mmol，1.0当量)在CH2Cl2(20mL)的溶液中加入水(5mL)。将混合物冷却至0℃并在0-5℃下鼓入氯气并搅拌1小时。分离各层，含有化合物G-2(4.15mmol)的DCM层直接用于下一步骤。
步骤3：3-氨磺酰基氮杂环丁烷-1-羧酸苄酯
在0-5℃下，向NH3.H2O(40mL，0.34mol，28％wt，82.7当量)的溶液中加入化合物G-2(4.15mmol，1.0当量)在CH2Cl2(20mL)中的溶液。将混合物在26℃下搅拌14小时。用CH2Cl2(2×40mL)萃取水相。用Na2SO4干燥合并有机相，过滤，浓缩。通过酸性制备型HPLC(BostonGreen ODS 150*305u，梯度：22-32％B(A＝0.1％TFA/水)，B＝CH3CN)，流速：30mL/分钟)纯化残余物，得到标题化合物(0.35g，31.2％产率)，为浅黄色固体。MS(ESI)m/z 292.9[M+23]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.36-7.31(m,5H),5.13(s,2H),5.10(s,2H),4.32-4.22(m,4H),4.02-4.00(m,1H)。
步骤4：氮杂环丁烷-3-磺酰胺
向化合物G-3(0.35g，1.29mmol，1.0当量)的MeOH(3mL)溶液中加入Pd/C(0.1g，10％wt)。将混合物在25℃、氢气氛(15psi)下搅拌4小时。过滤混合物，滤饼用MeOH(2×5mL)洗涤。浓缩滤液以生成浅黄色固体状的标题化合物(160mg，90.7％产率)。MS(ESI)m/z136.9[M+1]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 6.90(brs,2H),4.10-4.04(m,1H),3.74-3.70(m,2H),3.60-3.56(m,2H)。
实施例1：N-(5-(3-苯基哌嗪-1-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺
步骤1：4-(5-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)戊基)-2-苯基哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
在微波小瓶中，将2-苯基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(500mg，1.906mmol，1当量)、碳酸铯(1863mg，5.72mmol，3当量)和2-(5-溴戊基)异吲哚啉-1,3-二酮(564mg，1.906mmol，1当量)溶解在DMF(3mL)中。将反应混合物在110℃下放入微波炉中25分钟。将混合物溶于EtOAc中，用EtOAc萃取水。将合并的有机物用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩，并通过硅胶色谱纯化，得到标题化合物(460mg，50.5％产率)，为无色油。
步骤2：4-(5-氨基戊基)-2-苯基哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
将4-(5-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)戊基)-2-苯基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(450mg，0.942mmol，1当量)和肼(0.148mL，4.71mmol，5当量)在EtOH(10mL)中的溶液在室温下搅拌过夜。浓缩混合物，残余物用DCM研磨，过滤，浓缩，得到标题化合物，为白色固体，无需进一步纯化即可使用。
步骤3：2-苯基-4-(5-(5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺基)戊基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
将5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-羧酸(172mg，0.883mmol，1当量)溶于DMF中，向其中加入HATU(403mg，1.060mmol，1.2当量)。然后加入DIPEA(617μl，3.53mmol，4当量)和4-(5-氨基戊基)-2-苯基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(307mg，0.883mmol，1当量)的DMF(2mL)溶液。将微波小瓶加盖并在110℃下在微波炉中放置15分钟。将反应混合物溶于EtOAc中并用水洗涤数次。将合并的有机物用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤，并旋转蒸发，并通过硅胶色谱纯化，用庚烷/EtOAc洗脱，得到标题化合物，其不经进一步纯化而使用。
步骤4：N-(5-(3-苯基哌嗪-1-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺的制备
将2-苯基-4-(5-(5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺基)戊基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(258mg，0.492mmol，1当量)溶于DCM(5mL)中，向其中加入TFA(0.758mL，9.83mmol，20当量)。将反应混合物在室温下搅拌数小时，然后旋转蒸发并通过中性制备型HPLC纯化，得到标题化合物(98.23mg，47.1％产率)。MS(ESI)m/z 425.3[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm8.53(t,J＝5.56Hz,1H),7.84(dd,J＝5.05,1.01Hz,1H),7.75(dd,J＝3.79,1.26Hz,1H),7.39-7.29(m,5H),7.25(dd,J＝5.05,3.54Hz,1H),7.07(s,1H),3.41(dd,J＝11.37,2.78Hz,1H),3.32(d,J＝11.62Hz,1H),3.22-3.02(m,6H),2.92-2.83(m,1H),2.42-2.27(m,2H),1.94(dt,J＝12.63,6.32Hz,1H),1.46-1.28(m,4H),1.27-0.99(m,2H)。
实施例2：4-(5-(5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺基)戊基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯
通过使用类似于实施例1的方法制备标题化合物。MS(ESI)m/z 449.3[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.59(brs,1H),7.84(dd,J＝4.80,1.26Hz,1H),7.75(dd,J＝3.54,1.01Hz,1H),7.25(dd,J＝4.80,3.79Hz,1H),7.09(s,H),3.36(brs,4H),3.30-3.23(m,2H),3.16(brs,4H),1.62-1.47(m,4H),1.39(s,9H),1.37-1.22(m,4H)。
实施例3：N-(5-(哌嗪-1-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺
通过使用类似于实施例1的方法制备标题化合物。MS(ESI)m/z 349.1[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.61(t,J＝5.56Hz,1H),7.84(dd,J＝5.05,1.01Hz,1H),7.75(dd,J＝3.54,1.01Hz,1H),7.25(dd,J＝5.05,3.54Hz,1H),7.09(s,1H),3.27(q,J＝6.57Hz,2H),3.22-3.13(m,4H),2.84(brs,4H),2.61(brs,2H),1.55(tt,J＝13.96,7.26Hz,4H),1.41-1.26(m,2H)。
实施例4：N-(5-(2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚-2-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺
通过使用类似于实施例1的方法制备标题化合物。MS(ESI)m/z 361.1[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.63(t,J＝5.56Hz,1H),7.84(dd,J＝4.80,1.26Hz,1H),7.75(dd,J＝3.79,1.26Hz,1H),7.25(dd,J＝5.05,3.54Hz,1H),7.09(s,1H),4.40(d,J＝4.55Hz,1H),4.29(brs,1H),3.52(d,J＝12.63Hz,1H),3.39-3.22(m,4H),3.15-2.91(m,2H),2.25(brs,1H),1.98(d,J＝11.62Hz,1H),1.67-1.52(m,4H),1.47-1.29(m,3H),0.84(t,J＝7.33Hz,1H)。
实施例5：(R)-N-(5-(2-甲基哌嗪-1-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺
通过使用类似于实施例1的方法制备标题化合物。HRMS:362.1776.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.58(t,J＝5.05Hz,1H),7.84(dd,J＝5.05,1.01Hz,1H),7.75(dd,J＝3.79,1.26Hz,1H),7.25(dd,J＝5.05,3.54Hz,1H),7.08(s,1H),3.30-3.22(m,2H),3.04(dd,J＝19.20,11.12Hz,2H),2.92-2.81(m,2H),2.75-2.62(m,2H),2.60-2.52(m,2H),2.38-2.21(m,2H),1.55(quin,J＝7.07Hz,2H),1.48-1.37(m,2H),1.36-1.24(m,2H),1.01(d,J＝6.06Hz,3H)。
实施例6：(S)-N-(5-(3-异丁基哌嗪-1-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺
通过使用类似于实施例1的方法制备标题化合物。MS(ESI)m/z 405.3[M+H]+.HRMS:424.1933.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.60(t,J＝5.56Hz,1H),7.84(dd,J＝5.05,1.01Hz,1H),7.75(dd,J＝3.79,1.26Hz,1H),7.25(dd,J＝5.05,4.04Hz,1H),7.09(s,1H),3.32-3.14(m,5H),3.11-2.92(m,4H),2.47-2.42(m,1H),2.42-2.30(m,1H),2.26-2.08(m,1H),1.70(dquin,J＝13.48,6.73,6.73,6.73,6.73Hz,1H),1.61-1.45(m,4H),1.43-1.26(m,4H),0.88(t,J＝6.32Hz,6H)。
实施例7：N-(5-(吡咯烷-1-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺
步骤1：2-(5-(吡咯烷-1-基)戊-3-炔-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮的制备向带有磁力搅拌棒的40mL小瓶中加入2-(丁-3-炔-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(1g，5.02mmol，1当量)，然后加入CuI(0.019g，0.100mmol，0.02当量)。将烧瓶抽空并置于氮气氛下。将固体悬浮在二甲亚砜(10.04mL)中，向其中加入吡咯烷(0.498mL，6.02mmol，1.2当量)和甲醛(2mL，26.9mmol，5.35当量)。将反应混合物在40℃下搅拌过夜，此时将绿色溶液用硅藻土过滤并浓缩。将剩余的液体溶于乙酸乙酯中并用盐水洗涤三次。有机层经MgSO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法纯化粗物质，用0-10％甲醇/二氯甲烷洗脱，得到标题化合物(1.42g，100％收率)。MS(ESI)m/z 283.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.94-7.79(d,2H),7.80-7.67(d,2H),3.96-3.81(t,2H),3.32(s,2H),2.72-2.56(t,2H),2.57-2.41(m,4H),1.79–1.65(m,4H)
步骤2：5-(吡咯烷-1-基)戊-3-炔-1-胺的制备
通过使用类似于实施例1的步骤2的方法，通过用2-(5-(吡咯烷-1-基)戊-3-炔-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮替换4-(5-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)戊基)-2-苯基哌嗪-1-羧酸叔丁酯，以100％的产率制备标题化合物。MS(ESI)m/z 153.2[M+H]+。
步骤3：N-(5-(吡咯烷-1-基)戊-3-炔-1-基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺的制备
通过使用类似于实施例1的步骤3的方法，通过用5-(吡咯烷-1-基)戊-3-炔-1-胺替换4-(5-氨基戊基)-2-苯基哌嗪-1-羧酸叔丁酯，制备标题化合物。MS(ESI)m/z 330.2[M+H]+.1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 7.69(ddd,J＝9.47,4.42,1.26Hz,2H),7.22(dd,J＝5.05,4.04Hz,1H),6.93(s,1H),3.53(d,J＝13.64Hz,3H),3.38(d,J＝4.55Hz,2H),2.70-2.60(m,4H),2.58-2.47(m,2H),1.79(dt,J＝6.95,3.35Hz,4H)。
步骤4：N-(5-(吡咯烷-1-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺的制备
向带有磁力搅拌棒的30mL小瓶中加入N-(5-(吡咯烷-1-基)戊-3-炔-1-基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺(22mg，0.067mmol)和乙醇(2mL)，将小瓶用氮气吹扫并加入钯碳(14.21mg，0.013mmol)。将反应混合物置于氮气氛下，然后用氢气吹扫。通过LC/MS确认反应在2小时内完成。将反应小瓶用氮气吹扫，将反应混合物用二氯甲烷稀释，并用硅藻土过滤。通过旋转蒸发器除去挥发物，并通过反相HPLC15-40％乙腈/水3.5分钟梯度，Sunfire 30×50mm 5um柱乙腈/水w/0.1％甲酸75mL/分钟1.5mL注射三次来纯化粗物质。MS(ESI)m/z334.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 7.67(ddd,J＝10.11,4.55,1.01Hz,2H),7.21(dd,J＝4.80,3.79Hz,1H),6.91(s,1H),3.40(t,J＝7.07Hz,2H),2.83(brs,4H),2.77-2.66(m,2H),1.90(dt,J＝6.69,3.47Hz,4H),1.73-1.59(m,4H),1.50-1.36(m,2H)。
实施例8：N-(5-(4-甲基哌嗪-1-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺
将中间体A(1.27g，6.51mmol，1.2)、5-(4-甲基哌嗪-1-基)戊烷-1-胺盐酸盐(2.01g，7.16mmol，1.1当量)、DIEA(4.2g，32.53mmol，5.0当量)、HATU(4.95g，13.01mmol，2.0当量)在DMF(40mL)中的溶液在15℃下搅拌14小时。通过碱性制备型HPLC(PhenomenexGemini C18 250*50mm*10um，梯度：25-55％B(A＝0.05％氢氧化铵/水，B＝甲醇)，流速：120mL/分钟)纯化反应混合物，得到标题化合物(1.926g，81.6％产率)，为浅黄色固体。MS(ESI)m/z 363.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.09(t,J＝6.0Hz,1H),8.16(d,J＝5.6Hz,1H),8.08(dd,J＝4.0Hz,2.8Hz,1H),7.56(d,J＝4.8Hz,1H),7.46(s,1H),3.55-3.50(m,2H),2.79-2.58(m,12H),2.50(s,3H),1.88-1.71(m,4H),1.59-1.57(m,2H)。
实施例9：N-(5-吗啉代戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺
通过使用类似于实施例8的方法制备标题化合物。MS(ESI)m/z 350.1[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.63(t,J＝5.56Hz,1H),7.84(dd,J＝5.05,1.01Hz,1H),7.75(dd,J＝3.54,1.01Hz,1H),7.25(dd,J＝5.05,3.54Hz,1H),7.09(s,1H),3.94(brs,2H),3.43(brs,4H),3.32-3.25(m,2H),3.12-3.04(m,4H),1.68(dt,J＝15.66,7.83Hz,2H),1.59(quin,J＝7.20Hz,2H),1.36(quin,J＝7.58Hz,2H)。
实施例10：5-(4-氟苯基)-N-(5-(4-甲基哌嗪-1-基)戊基)异噁唑-3-甲酰胺
向5-(4-氟苯基)异噁唑-3-羧酸(150mg，0.723mmol，1.0当量)的DCM(5mL)溶液中加入(COCl)2(186mg，1.45mmol，2.0当量)和DMF(1滴)。将混合物在7-11℃下搅拌1小时。在N2下使溶剂挥发。将残余物溶于DCM(3mL)中，并加入到5-(4-甲基哌嗪-1-基)戊烷-1-胺盐酸盐(213mg，0.723mmol，1.0当量)和Et3N(438mg，4.33mmol，6.0当量)在DCM(10mL)中的溶液中。将混合物在7-11℃下搅拌16小时。浓缩混合物，得到粗产物，将其通过制备型HPLC(Kromasil 150*25mm*10um，梯度：25-55％B(A＝0.05％氢氧化铵/水，B＝MeCN)，流速：30mL/分钟)纯化，得到标题化合物(115.5mg，42.6％)，为白色固体。MS(ESI)m/z 375.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 7.95-7.89(m,2H),7.31-7.24(m,2H),7.04(s,1H),3.40(t,J＝7.2Hz,2H),3.00-2.00(m,13H),1.68-1.64(m,2H),1.61-1.51(m,2H),1.45-1.36(m,2H)。
实施例11：N-(5-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺
步骤1：3-(5-(5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺基)戊基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯的制备
在6℃下，将NaBH(OAc)3加入到中间体B(300mg，1.08mmol，1.0当量)、3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯(343.2mg，1.62mmol，1.5当量)和HOAc(64.73mg，1.08mmol，1.0当量)在1,2-二氯乙烷(12mL)中的搅拌溶液中。然后将混合物在6℃下搅拌14小时。将混合物用饱和NaHCO3水溶液碱化至pH 8。用CH2Cl2(3×3mL)萃取水相。将合并的有机层用无水硫酸钠干燥并减压浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物，用石油醚/EtOAc从20/1至1/1洗脱，得到标题化合物(450mg，81.2％产率)，为无色油。MS(ESI)m/z 475.2[M+H]+.1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.56(d,J＝3.2Hz,1H),7.52(d,J＝4.8Hz,1H),7.18-7.16(m,1H),6.84(s,1H),4.19-4.10(m,2H),3.50-3.45(m,2H),2.64-2.62(m,2H),2.33-2.29(m,2H),2.25-2.18(m,2H),1.85-1.82(m,4H),1.65-1.61(m,4H),1.48(s,9H),1.44-1.42(m,2H)。
步骤2：N-(5-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺的制备
在4℃下向搅拌的3-(5-(5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺基)戊基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯(0.25g，0.5267mmol，1.0当量)在CH2Cl2(2mL)中的溶液中加入TFA(0.744mg，7.8mmol，6.53mmol，12.4当量)。将混合物在4℃下搅拌5小时。减压去除溶剂。通过碱性制备型HPLC(Kromasil 150*25mm*10um，梯度：22-52％B(A＝0.05％氢氧化铵/水)，B＝MeCN)，流速：30mL/分钟)纯化残余物，得到标题化合物(34.6mg，35％产率)，为白色固体。MS(ESI)m/z 375.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.79(t,J＝5.6Hz,1H),7.88(d,J＝5.2Hz,1H),7.80(d,J＝3.2Hz,1H),7.27(t,J＝4.8Hz,1H),7.18(s,1H),3.38-3.34(m,3H),3.25-3.24(m,2H),2.59-2.57(m,2H),2.21-2.19(m,2H),2.06-2.04(m,2H),1.71-1.69(m,2H),1.57-1.51(m,4H),1.41-1.38(m,2H),1.31-1.29(m,2H)。
实施例12：N-(5-(8-甲基-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺
向化合物实施例11(103.5mg，0.267mmol，1.0当量)的MeOH(2mL)溶液中加入多聚甲醛(48mg，0.534mmol，2.0当量)、NaBH3CN(67mg，1.1mmol，4.0当量)、DIEA(103.5mg，0.801mmol，3.0当量)。将混合物在7℃下搅拌5小时。用水(5mL)稀释混合物。用CH2Cl2(3×3mL)萃取水相。用Na2SO4干燥合并有机相，过滤，并浓缩。通过碱性制备型HPLC(WatersXbridge Prep OBD C18 150*30 5u，梯度：38-68％B(A＝0.05％氢氧化铵/水)，B＝CH3CN)，流速：25mL/分钟)纯化残余物，得到标题化合物(25.2mg，24.3％产率)，为白色固体。MS(ESI)m/z 389.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.80(t,J＝5.6Hz,1H),7.88(d,J＝4.8Hz,1H),7.80(d,J＝3.2Hz,1H),7.27(q,J＝4.0Hz,4.8Hz,1H),7.17(s,1H),3.26-3.23(m,2H),2.93(s,2H),2.47-2.45(m,2H),2.17-2.13(m,2H),2.10(s,3H),2.09-2.06(m,2H),1.76-1.75(m,2H),1.60-1.58(m,2H),1.51-1.50(m,2H),1.37-1.28(m,4H)。
实施例13：N-(5-(3-甲基-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺
通过使用类似于实施例11和实施例12的方法制备标题化合物。MS(ESI)m/z 389.2[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.80(t,J＝5.2Hz,1H),7.87(dd,J＝4.8Hz,0.8Hz,1H),7.79(dd,J＝4.0Hz,0.8Hz,1H),7.28-7.26(m,1H),7.17(s,1H),3.26-3.21(m,2H),3.06(brs,2H),2.46-2.43(m,2H),2.23(t,J＝6.4Hz,2H),2.10-2.05(m,2H),2.07(s,3H),1.75-1.72(m,2H),1.65-1.57(m,2H),1.56-1.47(m,2H),1.44-1.36(m,2H),1.35-1.25(m,2H)。
实施例14：N-(5-(3,5-二甲基哌嗪-1-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺
通过使用类似于实施例11的方法制备标题化合物。MS(ESI)m/z 377.0[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.80(t,J＝5.6Hz,1H),7.88(d,J＝5.2Hz,1H),7.80(d,J＝2.8Hz,1H),7.28(t,J＝4.8Hz,1H),7.18(s,1H),3.27-3.24(m,2H),2.73-2.66(m,4H),2.22-2.18(m,2H),1.55-1.51(m,2H),1.43-1.36(m,4H),1.29-1.28(m,2H),0.91(d,J＝6.0Hz,6H)。
实施例15：5-(噻吩-2-基)-N-(5-(3,4,5-三甲基哌嗪-1-基)戊基)异噁唑-3-甲酰胺
通过使用类似于实施例12的方法制备标题化合物。MS(ESI)m/z 391.2[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.80(t,J＝5.6Hz,1H),7.88(d,J＝4.4Hz,1H),7.80(d,J＝3.6Hz,1H),7.27(dd,J＝5.2Hz,4.0Hz,1H),7.18(s,1H),3.26-3.21(m,2H),2.67-2.50(m,2H),2.17-2.13(m,2H),2.10-2.06(m,5H),1.65-1.59(m,2H),1.52-1.50(m,2H),1.49-1.41(m,2H),1.29-1.27(m,2H),0.94(d,J＝6.0Hz,6H)。
实施例16：N-(5-(3-乙酰氨基氮杂环丁-1-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺
步骤1：(1-(5-(5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺基)戊基)氮杂环丁-3-基)氨基甲酸叔丁酯的制备
通过使用类似于实施例11的步骤1的方法制备标题化合物，并以100％产率获得无色油。MS(ESI)m/z 435.2[M+H]+。
步骤2：N-(5-(3-氨基氮杂环丁-1-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺的制备
通过使用类似于实施例11的方法制备标题化合物，并且不经进一步纯化地使用。
步骤3：N-(5-(3-乙酰氨基氮杂环丁-1-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺的制备
在15℃下向(1-(5-(5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺基)戊基)氮杂环丁-3-基)氨基甲酸叔丁酯(246.3mg，0.736mmol，1.0当量)在DMF(2mL)中的溶液中加入DIEA(380.7mg，2.95mmol，4.0当量)、HOAc(53.1mg，0.883mmol，1.2当量)、HATU(560mg，1.47mmol，2.0当量)。将混合物在15℃下搅拌14小时。通过碱性制备型HPLC(Waters Xbridge Prep OBD C18150*30 5u，梯度：55-85％B(A＝0.05％氢氧化铵/水，B＝MeOH)，流速：25mL/分钟)纯化反应，得到标题化合物(118.6mg，42.7％产率)，为白色固体。
MS(ESI)m/z 377.2[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.79(t,J＝5.6Hz,1H),8.24(d,J＝7.2Hz,1H),7.86(d,J＝5.2Hz,1H),7.79-7.78(m,1H),7.28-7.26(m,1H),7.17(s,1H),4.22-4.20(m,2H),3.49-3.33(m,2H),3.25-3.20(m,2H),2.77-2.75(m,2H),2.49-2.35(m,2H),1.77(s,3H),1.51-1.48(m,2H),1.28-1.25(m,4H)。
实施例17：(1-(5-(5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺基)戊基)氮杂环丁-3-基)氨基甲酸甲酯
向化合物16-2(289mg，0.864mmol，1.0当量)在CH2Cl2(5mL)中的溶液中加入Et3N(437.2mg，4.32mmol，5.0当量)。将混合物在15℃下搅拌10分钟，然后加入CDI(1.4g，8.64mmol，10.0当量)。将上述混合物再搅拌4小时。加入MeOH(5mL)。在回流下将混合物加热2小时。减压去除溶剂。通过碱性制备型HPLC(Waters Xbridge Prep OBD C18 150*30 5u，梯度：55-85％B(A＝0.05％氢氧化铵/水)，B＝MeOH)，流速：25mL/分钟)纯化残余物，得到标题化合物(178.4mg，47.2％产率)，为白色固体。MS(ESI)m/z 393.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.79(t,J＝5.6Hz,1H),7.86(d,J＝5.2Hz,1H),7.78(d,J＝5.2Hz,1H),7.58-7.57(m,1H),7.28-7.25(m,1H),7.16(s,1H),4.02-4.00(m,2H),3.49-3.41(m,4H),3.22-3.20(m,2H),2.70-2.68(m,2H),2.33-2.29(m,2H),1.50-1.47(m,2H),1.27-1.23(m,4H)。
实施例18：N-(5-(3-(3-甲基脲基)氮杂环丁-1-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺
通过用甲胺替代甲醇，用类似于实施例17的方法制备标题化合物，以产率25.6％得到白色固体。MS(ESI)m/z 392.2[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.80(t,J＝6.0Hz,1H),7.86(d,J＝6.0Hz,1H),7.78(t,J＝2.4Hz,1H),7.26(dd,J＝5.2Hz,4.0Hz,1H),7.15(s,1H),6.31(d,J＝8.0Hz,1H),5.69-5.67(m,1H),4.12-4.06(m,1H),3.30-3.25(m,2H),3.24-3.21(m,2H),2.65-2.52(m,2H),2.51(s,3H),2.33-2.31(m,2H),1.51-1.47(m,2H),1.26-1.22(m,4H)。
实施例19：N-(5-(3-(甲基磺酰胺基)氮杂环丁-1-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺
在0-5℃下，向化合物16-2(97mg，0.29mmol，1.0当量)在吡啶(3mL)中的溶液中加入MsCl(49.8mg，0.435mmol，1.5当量)。将混合物升温至25℃并搅拌14小时。将混合物用饱和NaHCO3水溶液(2mL)淬灭。减压去除溶剂。将残余物在水(5mL)和EtOAc(5mL)之间分配。用EtOAc(3×5mL)萃取水相。将合并的有机相用Na2SO4干燥，过滤，浓缩并通过碱性制备型HPLC(Waters Xbridge Prep OBD C18 150*30 5u，梯度：30-60％B(A＝0.05％氢氧化铵/水)，B＝CH3CN)，流速：25mL/分钟)纯化，得到标题化合物(17.6mg，14.7％产率)，为白色固体。MS(ESI)m/z 413.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 10.72-10.69(m,1H),8.85(t,J＝5.6Hz,1H),8.12(d,J＝7.8Hz,1H),7.87-7.78(m,2H),7.28-7.18(m,3H),4.46-3.90(m,5H),3.27-2.90(m,4H),2.96(s,3H),1.50-1.47(m,4H),1.32-1.29(m,2H)。
实施例20：(1-(5-(5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺基)戊基)氮杂环丁-3-基)氨基甲酸2-羟乙酯
通过用乙烷-1,2-二醇替代甲醇，用类似于实施例17的方法制备标题化合物，得到白色固体。MS(ESI)m/z 423.2[M+H]+.1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 7.71-7.68(m,2H),7.22(t,J＝4.8Hz,1H),6.92(s,1H),4.26-4.25(m,1H),4.10-4.09(m,2H),3.71-3.68(m,4H),3.41-3.38(m,2H),2.97-2.95(m,2H),2.53-2.50(m,2H),1.67-1.63(m,2H),1.43-1.40(m,4H).
实施例21：2-氰乙基(1-(5-(5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺基)戊基)氮杂环丁-3-基)氨基甲酸酯
通过用3-羟基丙腈替代甲醇，用类似于实施例17的方法制备标题化合物，得到白色固体。
MS(ESI)m/z 432.2[M+H]+.1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 7.69-7.66(m,2H),7.21(t,J＝3.6Hz,1H),6.90(s,1H),4.26-4.19(m,3H),3.70-3.68(m,2H),3.40-3.38(m,2H),2.97-2.95(m,2H),2.80-2.77(m,2H),2.51-2.49(m,2H),1.65-1.61(m,2H),1.43-1.40(m,4H).
实施例22：5-(4-氟苯基)-N-(5-(3-(甲基磺酰胺基)氮杂环丁-1-基)戊基)异噁唑-3-甲酰胺
通过使用类似于实施例19的方法由中间体C制备标题化合物，为白色固体。MS(ESI)m/z 425.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 7.97-7.93(m,2H),7.32-7.28(m,2H),7.07(s,1H),4.08-4.03(m,1H),3.76-3.72(m,2H),3.43-3.39(m,2H),2.98-2.94(m,2H),2.91(s,3H),2.54-2.50(m,2H),1.67-1.64(m,2H),1.44-1.42(m,4H).
实施例23：5-(4-氟苯基)-N-(5-(3-(3-甲基脲基)氮杂环丁-1-基)戊基)异噁唑-3-甲酰胺
通过使用类似于实施例18的方法由中间体C制备标题化合物，为灰白色固体。MS(ESI)m/z 404.2[M+H]+.1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 7.97-7.93(m,2H),7.32-7.28(m,2H),7.07(s,1H),4.34-4.32(m,1H),3.68-3.66(m,2H),3.43-3.39(m,2H),2.93-2.91(m,2H),2.68(s,3H),2.51-2.47(m,2H),1.67-1.64(m,2H),1.44-1.42(m,4H).
实施例24：4-(5-(5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺基)戊基)哌嗪-1-羧酸甲酯
通过使用类似于实施例11和实施例17的方法，通过用哌嗪-1-羧酸叔丁酯代替5-(4-甲基哌嗪-1-基)戊烷-1-胺盐酸盐，制备标题化合物，并得到白色固体。MS(ESI)m/z407.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6+2滴D2O)δppm 8.80(t,J＝5.6Hz,1H),7.87(d,J＝4.8Hz,1H),7.79(d,J＝2.8Hz,1H),7.27(t,J＝4.0Hz,1H),7.17(s,1H),3.57(s,3H),3.31(s,4H),3.23(q,J＝6.4Hz,2H),2.28-2.23(m,6H),1.54-1.48(m,2H),1.47-1.40(m,2H),1.32-1.27(m,2H).
实施例25：N-(5-(4-(甲基氨基甲酰基)哌嗪-1-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺
通过使用类似于实施例11和实施例18的方法，通过用哌嗪-1-羧酸叔丁酯代替5-(4-甲基哌嗪-1-基)戊烷-1-胺盐酸盐，制备标题化合物，并得到白色固体。MS(ESI)m/z406.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm8.80(t,J＝6.0Hz,1H),7.87(dd,J＝4.8,0.8Hz,1H),7.79(dd,J＝4.0,1.2Hz,1H),7.26(dd,J＝4.8,3.6Hz,1H),7.17(s,1H),6.38(d,J＝4.4Hz,1H),3.31-3.26(m,6H),2.54(d,J＝4.4Hz,3H),2.27-2.22(m,6H),1.56-1.48(m,2H),1.47-1.40(m,2H),1.32-1.24(m,2H).
实施例26：N-(5-(3-氧代吡咯烷-1-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺
步骤1：N-(5-溴戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺的制备
在氮气氛下，在0-5℃下，向化合物B-1(1.0g，3.57mmol，1.0当量)的无水CH2Cl2(50mL)混合物中加入PPh3(1.12g，4.28mmol，1.2当量)和NBS(716.8mg，4.28mmol，1.2当量)。将混合物升温至25℃并搅拌14小时。将反应混合物倒入饱和NaHCO3水溶液(50mL)中。用CH2Cl2(3×20mL)萃取水层。将合并的有机相经Na2SO4干燥，过滤，浓缩并通过硅胶色谱法纯化，用石油醚/EtOAc从20/1至5/1洗脱，得到标题化合物(0.64g，52.4％产率)，为浅黄色油。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.55(d,J＝3.6Hz,1H),7.50(d,J＝5.2Hz,1H),7.14(dd,J＝5.2Hz,3.6Hz,1H),6.87-6.86(m,1H),6.82(s,1H),3.49-3.40(m,4H),1.93-1.89(m,2H),1.68-1.64(m,2H),1.58-1.54(m,2H).
步骤2：N-(5-(3-氧代吡咯烷-1-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺的制备
向化合物26-1(0.1g，0.291mmol，1.0当量)的CH3CN(2mL)溶液中加入KI(58mg，0.349mmol，1.2当量)、吡咯烷-3-酮盐酸盐(70.8mg，0.582mmol，2.0当量)、K2CO3(120.8mg，0.874mmol，3.0当量)。将混合物在25℃下搅拌14小时。向反应混合物中加入吡咯烷-3-酮盐酸盐(71mg，0.582mmol，2.0当量)和K2CO3(121mg，0.874mmol，3.0当量)。将混合物在25℃下搅拌14小时。然后加入另一部分吡咯烷-3-酮盐酸盐(71mg，0.582mmol，2.0当量)和K2CO3(121mg，0.874mmol，3.0当量)，并将混合物在25℃下搅拌62小时。混合物用水(5mL)稀释，并用EtOAc(3×10mL)萃取。将合并的有机相用Na2SO4干燥，过滤，浓缩并通过碱性制备型HPLC(Waters Xbridge Prep OBD C18 150*30 5u，梯度：50-80％B(A＝0.05％氢氧化铵/水)，B＝MeOH)，流速：25mL/分钟)纯化，得到标题化合物(9.7mg，9.58％产率)，为淡黄色固体。
MS(ESI)m/z 347.9[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.81(s,1H),7.88(d,J＝4.8Hz,0.8Hz,1H),7.80(d,J＝4.4Hz,1.2Hz,1H),7.28(t,J＝4.8Hz,3.6Hz,1H),7.18(s,1H),3.34-3.26(m,2H),2.86(s,2H),2.83-2.80(m,2H),2.49-2.48(m,2H),2.33-2.29(m,2H),1.55-1.46(m,4H),1.35-1.34(m,2H).
实施例27：N-(5-(3-氨基甲酰基氮杂环丁-1-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺
在8℃下，向中间体B(283.1mg，2.07mmol，1.0当量)的MeOH(10mL)混合物中加入Et3N(230.7mg，2.28mmol，1.1当量)。将混合物在8℃下搅拌5分钟，然后一次性加入氮杂环丁烷-3-甲酰胺盐酸盐(0.577g，2.07mmol，1.0当量)。将混合物在8℃下搅拌1.5小时。在8℃下向混合物中加入NaBH3CN(260.5mg，4.15mmol，2.0当量)。将混合物在8℃下搅拌14小时。用水(20mL)淬灭反应混合物并减压去除MeOH。用EtOAc(3×10mL)萃取水相。合并的有机相通过Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩。通过酸性制备型HPLC(Phenomenex luna C18 250*50mm*10um，梯度：10-40％B(A＝0.1％TFA/water)，B＝MeCN)，流速：120mL/分钟)纯化残余物。将获得的组分用饱和NaHCO3水溶液碱化至pH 8，并用EtOAc(3×200mL)萃取水相。用Na2SO4干燥合并有机相，浓缩。将残余物冻干，得到标题化合物(350mg，22.4％产率)，为白色固体。MS(ESI)m/z 363.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.79(t,J＝5.6Hz,1H),7.87(d,J＝4.0Hz,1H),7.79(d,J＝2.8Hz,1H),7.26(t,J＝4.0Hz,1H),7.16(s,1H),6.82(s,1H),3.30-3.21(m,4H),3.02-2.98(m,3H),2.32-2.28(m,2H),1.49-1.47(m,2H),1.28-1.23(m,4H).
使用一般方法以及来自上述实施例的方法，用适当的原料和试剂制备如表1中所示的下列化合物。
表1
实施例73：5-(5-氟噻吩-2-基)-N-(5-(4-甲基哌嗪-1-基)戊基)异噁唑-3-甲酰胺
步骤1：5-氟-N-甲氧基-N-甲基噻吩-2-甲酰胺的制备
在0℃下，在N2保护下，向THF(300mL)的5-氟噻吩-2-羧酸(3.0g，20.4mmol，1.0当量)溶液中加入N,O-二甲基盐酸羟胺(3.99g，40.8mmol，2.0当量)、HOBt(4.11g，30.6mmol，1.5当量)、DIEA(10.5g，81.6mmol，4.0当量)和EDCI(7.83g，40.8mmol，2.0当量)。将混合物升温至20℃并搅拌8小时。然后用H2O(100mL)淬灭混合物，用EtOAc萃取。将合并的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到粗产物，将其通过硅胶色谱纯化，用15％EtOAc的己烷溶液洗脱，得到标题化合物(3.5g，90％产率)，为黄色油。MS(ESI)m/z 189.8[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppmδ7.60(t,J＝4.4Hz,1H),7.95(d,J＝7.2Hz,1H),3.77(s,3H),3.26(s,3H)。
步骤2：1-(5-氟噻吩-2-基)乙-1-酮的制备
向搅拌的5-氟-N-甲氧基-N-甲基噻吩-2-甲酰胺(3.5g，18.5mmol，1.0当量)在THF(30mL)中的溶液中加入化合物MeMgCl(THF中的3M溶液，9.25mL，27.75mmol，1.5当量)，历时25分钟，在0℃、N2保护下，同时保持内部温度低于10℃。移去冷却浴，用1小时将溶液温热至室温。然后用饱和氯化铵溶液(30mL)淬灭反应混合物并搅拌10分钟。用EtOAc萃取混合物，合并的萃取液用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到粗产物，为黄色油，经硅胶色谱纯化，用15％EtOAc的己烷溶液洗脱，得到标题化合物(2.0g，75％产率)，为黄色油。MS(ESI)m/z144.8[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.67(t,J＝4.0Hz,1H),7.95(dd,J＝1.2Hz,4.4Hz,1H),2.48(s,3H)。
步骤3：4-(5-氟噻吩-2-基)-2,4-二氧代丁酸乙酯的制备
向1-(5-氟噻吩-2-基)乙-1-酮(1.5g，10mmol，1.0当量)和(CO2Et)2(1.75g，12mmol，1.2当量)的甲苯(30mL)溶液中加入t-BuOK(1.35g，12mmol，1.2当量)。将反应混合物在25℃下搅拌4小时。将混合物用1N HCl至pH4进行淬灭。将溶液转移到分液漏斗中。将有机层用H2O洗涤，然后用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到粗化合物，将其通过HPLC纯化，得到化合物(1.5g，60％产率)，为黄色固体。MS(ESI)m/z 244.8[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.15(s,1H),7.05(br s,1H),7.02(d,J＝3.2Hz,1H),4.30(q,J＝6.8Hz,2H),1.30(t,J＝6.8Hz,3H)。
步骤4：5-(5-氟噻吩-2-基)异噁唑-3-羧酸乙酯的制备
向4-(5-氟噻吩-2-基)-2,4-二氧代丁酸乙酯(500mg，5.10mmol，1.0当量)的EtOH(60mL)溶液中加入NH2OH.HCl(285mg，8.2mmol，2.0当量)。将反应混合物在90℃下搅拌16小时。浓缩反应混合物，将残余物溶于EtOAc(30mL)中。将混合物用H2O(30mL)和盐水(30mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到粗产物，将其通过硅胶色谱纯化，用6％EtOAc的己烷溶液洗脱，得到标题化合物(400mg，81％产率)，为黄色油。MS(ESI)m/z 241.8[M+H]+.
]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.60(t,J＝8.0Hz,1H),7.33(s,1H),6.98(dd,J＝2.0Hz,4.0Hz,1H),4.38(q,J＝6.8Hz,2H),1.33(t,J＝7.2Hz,3H).
步骤5：5-(5-氟噻吩-2-基)-N-(5-(4-甲基哌嗪-1-基)戊基)异噁唑-3-甲酰胺的制备
5-(5-氟噻吩-2-基)异噁唑-3-羧酸乙酯(500mg，2.07mmol，1.0当量)和5-(4-甲基哌嗪-1-基)戊烷-1-胺(382.6mg，2.07mmol，1.0当量)的THF(30mL)溶液中加入TEA(626.3mg，6.21mmol，3.0当量)。将混合物冷却至0℃，滴加Me3Al(2M in toluene，10mL，20.7mmol，10.0当量)，然后将混合物在22-29℃下搅拌16小时。将混合物用H2O(30mL)淬灭并通过硅藻土垫过滤。浓缩滤液，得到粗产物，将其通过制备型HPLC纯化，得到标题化合物(261mg，33％产率)，为白色固体。MS(ESI)m/z 241.8[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.17(t,J＝4.0Hz,1H),6.81(br s,1H),6.73(s,1H),6.56(dd,J＝1.2Hz,4.0Hz,1H),3.44(q,J＝6.4Hz,2H),2.48-2.33(m,10H),2.29(s,3H),1.67-1.60(m,2H),1.58-1.51(m,2H),1.43-1.36(m,2H).
实施例74：N-(3,3-二氟-5-(4-甲基哌嗪-1-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺
步骤1：3-(5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺基)丙酸叔丁酯的制备
向DCM(10mL无水)中的中间体A(1.0g，5.12mmol，1.0当量)的溶液中加入(COCl)2(779.2mg，6.14mmol，1.2当量)和DMF(0.1mL，无水，催化量)。然后将混合物在18℃下搅拌1小时，浓缩混合物，得到黄色固体。然后将固体溶解在DCM(5.0mL，无水)中，并在3分钟内将混合物滴加到3-氨基丙酸叔丁酯(743.4mg，5.12mmol，1.0当量)和三乙胺(1.04g，10.24mmol，2.0当量)的DCM(5.0mL，无水)溶液中。然后，将混合物在18℃下搅拌16小时。将混合物浓缩，得到粗产物，将其通过硅胶色谱纯化，用20％EtOAc的石油醚溶液洗脱，得到标题化合物(1.5g，90.9％产率)，为黄色固体。MS(ESI)m/z 344.9[M+Na]+.
1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.53(d,J＝3.6Hz,1H),7.48(d,J＝4.8Hz,1H),7.35(br,1H),7.13(t,J＝4.0Hz,1H),6.80(s,1H),3.71-3.66(m,2H),2.56(t,J＝6.0Hz,2H),1.46(s,9H).
步骤2：3-(5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺基)丙酸的制备
向化合物74-1(500mg，1.55mmol，1.0当量)在DCM(6.0mL，无水)中的溶液中加入TFA(2.0mL)并将混合物在15℃下搅拌1.5小时。浓缩混合物，得到标题化合物(412.8mg，100％产率)，为黄色固体，将其用于下一步，不进行一步纯化。MS(ESI)m/z 267.0[M+H]+.
步骤3：N-(3-(甲氧基(甲基)氨基)-3-氧代丙基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺的制备
向化合物74-2(825.5mg，3.1mmol，1.0当量)、N,O-二甲基盐酸羟胺(362.7mg，3.72mmol，1.2当量)和DIEA(2.0g，15.5mmol，5.0当量)的DCM(30mL无水)溶液中加入EDCI(892.8mg，4.65mmol，1.5当量)和HOBt(628.2mg，4.65mmol，1.5当量)。然后将混合物在15℃下搅拌16小时。用水(20mL)淬灭混合物并分离有机相，用盐水洗涤(20mL)，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩以得到粗产物，用硅胶色谱纯化，用1％甲醇的DCM洗脱，得到标题化合物(1.1g，76.4％产率)，为黄色固体。MS(ESI)m/z 309.9[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm7.53-7.47(m,3H),7.13(t,J＝4.0Hz,1H),6.79(s,1H),3.78-3.73(m,2H),3.67(s,3H),3.19(s,3H),2.77(brs,2H).
步骤4：N-(3-氧代戊-4-烯-1-基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺的制备
在0℃下，在5分钟内，向化合物74-3(1.1g，3.56mmol，1.0当量)的THF(10mL无水)溶液中滴加乙烯基溴化镁(14.2mL，14.2mmol，4.0当量，1.0M在四氢呋喃中)。然后将混合物在0℃下搅拌2小时。在0℃下用NH4Cl(20mL无水)淬灭混合物，并用EtOAc(2×30mL)萃取。合并的有机相用盐水(30mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到粗产物，将其用硅胶色谱纯化，用石油醚/EtOAc从6/1至3/1洗脱，得到标题化合物(450mg，45.7％产率)，为黄色固体。MS(ESI)m/z 276.9[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.53(dd,J＝3.6Hz,1.2Hz,1H),7.48(dd,J＝5.2Hz,1.2Hz,1H),7.32(brs,1H),7.15-7.12(m,1H),6.79(s,1H),6.39-6.34(m,1H),6.26(dd,J＝18.0Hz,1.2Hz,1H),5.91(dd,J＝10.4Hz,1.2Hz,1H),3.79-3.74(m,2H),2.97(t,J＝5.6Hz,2H).
步骤5：4-(3-氧代-5-(5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺基)戊基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
在3分钟内向THF(10.0mL无水)和乙醇(10.0mL无水)中的74-4(2.69mg，14.45mmol，5.0当量)、AcOH(0.5mL，催化量)的溶液中滴加哌嗪-1-羧酸叔丁酯(800mg，2.89mmol，1.0当量)的THF(10.0mL无水)溶液。然后，将混合物在30℃下搅拌3小时。浓缩混合物，将残余物用EtOAc(40mL)溶解，用碳酸氢钠(20mL，饱和)、盐水(40mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到粗产物，将其通过硅胶色谱纯化，用DCM/MeOH从200/1至50/1洗脱，得到标题化合物(1.2g，90.2％产率)，为黄色固体。MS(ESI)m/z 463.1[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.53(dd,J＝4.0Hz,1.2Hz,1H),7.48(dd,J＝5.2Hz,1.6Hz,1H),7.27(brs,1H),7.15-7.12(m,1H),6.78(s,1H),3.72-3.67(m,2H),3.38(t,J＝4.8Hz,4H),2.81(t,J＝6.0Hz,2H),2.70-2.68(m,2H),2.63-2.59(m,2H),2.38-2.36(m,4H),1.43(s,9H).
步骤6：4-(3,3-二氟-5-(5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺基)戊基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
向化合物74-5(130mg，0.28mmol，1.0当量)在DCM(10.0mL，无水)中的溶液中加入DAST(902.7mg，5.6mmol，20.0当量)并将混合物在-78℃至24℃下搅拌16小时。将混合物倒入冰冷的NaHCO3(饱和水溶液，200mL)中并过滤。之后，分离有机相，用DCM(2×50mL)萃取水相。合并的有机相用盐水(30mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到粗产物，将其用制备型HPLC(柱：Kromasil 150*25mm*10um，梯度：50-60％B(A＝.05％氢氧化铵/水，B＝乙腈))纯化，得到标题化合物(18mg，13.2％产率)，为黄色固体。MS(ESI)m/z 485.1[M+H]+.1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.55(dd,J＝3.6Hz,1.2Hz,1H),7.50(dd,J＝5.2Hz,1.2Hz,1H),7.16-7.14(m,1H),7.05(t,J＝6.0Hz,1H),6.81(s,1H),3.72-3.67(m,2H),3.44-3.42(m,4H),2.58(t,J＝7.6Hz,2H),2.42-2.40(m,4H),2.27-2.05(m,4H),1.45(s,9H).19F NMR(400MHz,CDCl3)δppm-97.54.
步骤7：N-(3,3-二氟-5-(哌嗪-1-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺的制备
向化合物74-6(100mg，0.20mmol，1.0当量)在DCM(3.0mL，无水)中的溶液中加入TFA(1.5mL)并将混合物在32℃下搅拌30分钟。浓缩混合物，得到粗标题化合物(76.8mg，100％产率)，为黄色油，将其用于下一步，不进行一步纯化。MS(ESI)m/z 385.1[M+H]+.
步骤8：N-(3,3-二氟-5-(4-甲基哌嗪-1-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺
向化合物74-7(76.8mg，0.20mmol，1.0当量)、多聚甲醛(30mg，1.0mmol，5.0当量)和DIEA(77.5mg，0.6mmol，3.0当量)的MeOH(5.0mL，无水)溶液中加入氰基硼氢化钠(62.8mg，1.0mmol，5.0当量)，并将混合物在32℃下搅拌1小时。然后用水(5.0mL)淬灭混合物并用DCM(2×20mL)萃取。浓缩合并的有机相以得到粗产物，将其用制备型HPLC(柱：Xtimate C18 150*25mm*5um，梯度：25-55％B(A＝0.05％氢氧化铵/水，B＝乙腈))纯化，得到标题化合物(34.2mg，42.9％产率)，为浅黄色固体。MS(ESI)m/z 399.2[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.54(dd,J＝4.0Hz,1.2Hz,1H),7.49(dd,J＝5.2Hz,1.2Hz,1H),7.16-7.14(m,1H),7.06(t,J＝6.0Hz,1H),6.81(s,1H),3.72-3.67(m,2H),2.58-2.40(m,10H),3.29(s,3H),2.27-2.04(m,4H).19F NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm-94.41.
实施例75：N-(5-(3-氨基甲酰基氮杂环丁-1-基)-3,3-二氟戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺
步骤1：1-(3-氧代-5-(5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺基)戊基)氮杂环丁烷-3-羧酸甲酯的制备
通过使用与化合物74-5类似的方法，用氮杂环丁烷-3-羧酸甲酯盐酸盐替换哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物，为黄色油。MS(ESI)m/z 392.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.53(dd,J＝3.6Hz,0.8Hz,1H),7.48(dd,J＝5.2Hz,1.6Hz,1H),7.42(brs,1H),7.15-7.13(m,1H),6.79(s,1H),3.72-3.68(m,2H),3.69(s,3H),3.54-3.50(m,2H),3.33-3.24(m,3H),2.79-2.72(m,4H),2.46(t,J＝6.8Hz,2H).
步骤2：1-(3,3-二氟-5-(5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺基)戊基)氮杂环丁烷-3-羧酸甲酯的制备
通过使用类似于化合物74-6的方法，通过用化合物75-1替换化合物74-5，制备标题化合物，为黄色固体。MS(ESI)m/z 414.0[M+H]+.
步骤3：1-(3,3-二氟-5-(5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺基)戊基)氮杂环丁烷-3-羧酸的制备
将氢氧化铵(3.0mL，25％-28％wt)中的化合物75-2(50mg，0.12mmol，1.0当量)的混合物在微波辐射下在60℃下搅拌1小时。浓缩混合物，得到粗标题化合物(40mg，83.6％产率)，为黄色固体，将其用于下一步，不进行一步纯化。MS(ESI)m/z 400.1[M+H]+.
步骤4：N-(5-(3-氨基甲酰基氮杂环丁-1-基)-3,3-二氟戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺的制备
向化合物75-3(40mg，0.10mmol，1.0当量)、NH4Cl(16.0mg,0.30mmol,3.0当量)和DIEA(38.7mg,0.30mmol,3.0当量)的DMF(3.0mL，无水)溶液中加入HATU(57.3mg,0.15mmol,1.5当量)，并将混合物在34℃下搅拌16小时。浓缩混合物，用制备型HPLC(柱：Xtimate C18150*25mm*5um，梯度：23-53％B(A＝0.05％氢氧化铵/水，B＝乙腈))纯化残余物，得到标题化合物(8.8mg，22.1％产率)，为白色固体。MS(ESI)m/z 399.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.90(t,J＝4.8Hz,1H),7.87(d,J＝4.4Hz,1H),7.80(d,J＝3.2Hz,1H),7.28-7.26(m,2H),7.19(s,1H),6.84(br,1H),3.45-3.41(m,2H),3.28(br,2H),3.05-3.01(m,3H),2.46-2.44(m,2H),2.25-2.05(m,2H),1.98-1.82(m,2H).19F NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm94.48.
实施例76：N-(5-(3-氨基甲酰基氮杂环丁-1-基)-3,3-二氟戊基)-5-(4-氟苯基)异噁唑-3-甲酰胺
通过使用类似于化合物74-4和实施例75的方法，通过用5-(4-氟苯基)异噁唑-3-羧酸代替5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-羧酸制备标题化合物，为白色固体。MS(ESI)m/z 411.2[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.81-7.77(m,2H),7.21-7.13(m,3H),6.90(s,1H),6.19(br,1H),5.30(br,1H),3.72-3.67(m,2H),3.46-3.42(m,2H),3.40-3.36(m,2H),3.13-3.06(m,1H),2.66(t,J＝7.6Hz,2H),2.28-2.16(m,2H),2.00-1.89(m,2H).19F NMR(400MHz,CDCl3)δppm-108.36,97.18.
实施例77：N-(5-(3-((氰基甲基)氨基甲酰基)氮杂环丁-1-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺
步骤1：1-(5-(5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺基)戊基)氮杂环丁烷-3-羧酸甲酯的制备
在0℃下向化合物26-1(2g，5.83mmol，1当量)在CH3CN(20mL)中的悬浮液中加入K2CO3(2.42g，17.48mmol，3当量)和KI(968mg，5.83mmol，1当量)。加入后，加入盐酸氮杂环丁烷-3-羧酸甲酯(1.80g，11.65mmol，2.0当量)，混合物在30℃下搅拌18小时。过滤混合物。减压浓缩滤液，得到粗标题化合物(2.41g)，为浅黄色油。MS(ESI)m/z 378.0[M+H]+.
步骤2：1-(5-(5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺基)戊基)氮杂环丁烷-3-羧酸的制备
在0℃下向搅拌的化合物77-1(2.38g，6.31mmol，1.0当量)在H2O/MeOH(8mL/16mL)中的溶液中加入LiOH·H2O(529mg，12.61mmol，2.0当量)。然后将混合物在28℃下搅拌1.5小时。通过在搅拌下加入14mL1N HCl以将反应混合物酸化至pH 5-6，然后用EtOAc(3×25mL)萃取。用Na2SO4干燥合并的有机相，过滤并减压浓缩，得到粗标题化合物(1.8g，78.55％产率)，为浅黄色油，其不经进一步纯化而使用。MS(ESI)m/z 364.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 7.71-7.68(m,2H),7.23(dd,J＝3.6Hz,4.8Hz,1H),6.93(s,1H),4.23-4.21(m,4H),3.45-3.34(m,3H),3.20-3.18(m,2H),1.71-1.61(m,4H),1.47-1.44(m,2H).
步骤3：N-(5-(3-((氰基甲基)氨基甲酰基)氮杂环丁-1-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺的制备
向77-2(70mg，0.192mmol，1.0当量)的DMF(1mL)溶液中加入化合物2-氨基乙腈(53.5mg,0.577mmol,3.0当量)、DIEA(124.5mg,0.963mmol,5.0当量)、HATU(146.4mg,0.385mmol,2.0当量)。将混合物在27℃下搅拌14小时。过滤混合物，通过制备型HPLC(Xtimate C18 150*25mm*5um，梯度：20-50％B(A＝0.05％HCl/水，B＝CH3CN)，流速：25mL/分钟)纯化滤液，以得到标题化合物(23.2mg，30％产率)，为灰白色固体。
MS(ESI)m/z 402.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 7.71-7.68(m,2H),7.24-7.22(m,1H),6.92(s,1H),4.17(s,2H),3.55-3.54(m,2H),3.42-3.40(m,2H),3.33-3.29(m,3H),2.53-2.49(m,2H),1.67-1.63(m,2H),1.433-1.40(m,4H).
实施例78：N-(5-(3-((2-羟乙基)氨基甲酰基)氮杂环丁-1-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺
通过用2-氨基乙-1-醇替代2-氨基乙腈，用类似于实施例77的方法制备标题化合物，得到浅黄色固体。MS(ESI)m/z 407.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.55(dd,J＝1.6Hz,4Hz,1H),7.50(d,J＝5.2Hz,1H),7.16(d,J＝5.2Hz,1H),6.97(m,2H),6.82(s,1H),3.78-3.75(m,2H),3.47-3.45(m,4H),3.35-3.33(m,4H),3.07-3.05(m,1H),2.46-2.42(m,2H),1.43-1.41(m,2H)1.40-1.39(m,2H).
实施例79：N-(5-(3-(((1,3-顺)-3-羟基环丁基)氨基甲酰基)氮杂环丁-1-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺
通过用(1,3-顺)-3-氨基环丁-1-醇替代1.3-氨基乙腈，用类似于实施例77的方法制备标题化合物，得到白色固体。MS(ESI)m/z 433.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm7.55(dd,J＝1.2Hz,4Hz,1H),7.51(dd,J＝0.8Hz,4.8Hz,1H),7.15(dd,J＝1.2Hz,4.8Hz,1H),6.95(brs,1H),6.84(brs,1H),6.83(s,1H),4.08-4.06(m,1H),3.96-3.95(m,1H),3.58-3.42(m,2H),3.34-3.30(m,4H),2.95-2.90(m,1H)2.84-2.81(m,2H),2.47-2.44(m,2H),1.89-1.87(m,2H),1.63-1.60(m,2H),1.42-1.40(m,4H).
实施例80：N-(5-(3-(((1,3-反)-3-羟基环丁基)氨基甲酰基)氮杂环丁-1-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺
通过用(1,3-反)-3-氨基环丁-1-醇替代1.3-氨基乙腈，用类似于实施例77的方法制备标题化合物，得到白色固体。
MS(ESI)m/z 433.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.55(dd,J＝1.2Hz,2.4Hz,1H),7.51(dd,J＝1.2Hz,5.2Hz,1H),7.15(dd,J＝1.2Hz,5.2Hz,1H),6.92(brs,1H),6.82(s,1H),6.59(brs,1H),4.54-4.44(m,2H),3.48-3.43(m,2H),3.38-3.36(m,2H),3.29-3.26(m,2H),3.02-2.98(m,1H),2.44-2.34(m,4H),2.28-2.24(m,2H),1.51-1.50(m,2H)1.42-1.38(m,4H).
实施例81：N-(5-(3-((3-羟丙基)氨基甲酰基)氮杂环丁-1-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺
通过用3-氨基丙-1-醇替代2-氨基乙腈，用类似于实施例77的方法制备标题化合物，得到浅黄色固体。MS(ESI)m/z 421.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 7.69-7.66(m,2H),7.20(dd,J＝4.0Hz,4.8Hz,1H),6.90(s,1H),3.58-3.54(m,2H),3.53-3.49(m,2H),3.32-3.31(m,2H),3.30-3.29(m,5H),2.50-2.46(m,2H),1.71-1.61(m,4H),1.40-1.39(m,4H).
实施例82：N-(5-(3-((3-羟基环戊基)氨基甲酰基)氮杂环丁-1-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺
通过用3-氨基环戊-1-醇替代2-氨基乙腈，用类似于实施例77的方法制备标题化合物，得到红色固体。MS(ESI)m/z 447.2[M+H]+.1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 7.71-7.68(m,2H),7.24-7.22(dd,J＝3.6Hz,4.8Hz,1H),6.92(s,1H),4.34-4.13(m,2H),3.59-3.31(m,2H),3.40-3.38(m,2H),3.30-3.29(m,3H),2.55-2.51(m,2H),2.27-2.15(m,1H),2.00-1.96(m,1H),1.67-1.55(m,5H),1.44-1.41(m,5H).
实施例83：N-(5-(3-((2-羟基环戊基)氨基甲酰基)氮杂环丁-1-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺
通过用2-氨基环戊-1-醇替代2-氨基乙腈，用类似于实施例77的方法制备标题化合物，得到棕色固体。MS(ESI)m/z 447.2[M+H]+.1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 7.71-7.67(m,2H),7.24-7.22(dd,J＝3.6Hz,5.2Hz,1H),6.92(s,1H),3.95-3.93(m,2H),3.53-3.50(m,2H),3.42-3.40(m,2H),3.29-3.24(m,3H),2.53-2.49(m,2H),2.10-2.08(m,1H),1.95-1.90(m,1H),1.78-1.59(m,5H),1.47-1.41(m,5H).
实施例84：N-(5-(3-((2-氰乙基)氨基甲酰基)氮杂环丁-1-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺
通过用3-氨基丙腈替代2-氨基乙腈，用类似于实施例77的方法制备标题化合物，得到白色固体。MS(ESI)m/z 416.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,CD Cl3)δppm 7.55(dd,J＝1.2Hz,4Hz,1H),7.51(dd,J＝1.2Hz,5.2Hz,1H),7.21(brs,1H),7.15(dd,J＝5.2Hz,4Hz,1H),6.97(brs,1H),6.82(s,1H),3.57-3.52(m,2H),3.47-3.42(m,2H),3.36-3.32(m,4H),3.04(m,1H),2.67-2.65(m,2H),2.45-2.42(m,2H),1.64-1.59(m,2H),1.41-1.39(m,4H).
实施例85：5-(4-氟苯基)-N-(5-(3-(甲基氨基甲酰基)氮杂环丁-1-基)戊基)异噁唑-3-甲酰胺
步骤1：5-(4-氟苯基)-N-(5-羟基戊基)异噁唑-3-甲酰胺的制备
通过用5-(4-氟苯基)异噁唑-3-羧酸替代中间体A，用类似于中间体d B-1的方法制备标题化合物，得到白色固体。MS(ESI)m/z 293.0[M+H]+.
步骤2：N-(5-溴戊基)-5-(4-氟苯基)异噁唑-3-甲酰胺的制备
通过使用类似于26-1的方法制备标题化合物，为灰白色固体。MS(ESI)m/z 355.0[M+H]+.
步骤3：1-(5-(5-(4-氟苯基)异噁唑-3-甲酰胺基)戊基)氮杂环丁烷-3-羧酸甲酯的制备
通过使用类似于化合物77-1的方法制备标题化合物，为白色固体。MS(ESI)m/z390.2[M+Na]+.
步骤4：1-(5-(5-(4-氟苯基)异噁唑-3-甲酰胺基)戊基)氮杂环丁烷-3-羧酸的制备
通过使用类似于化合物77-2的方法制备标题化合物。
步骤5：5-(4-氟苯基)-N-(5-(3-(甲基氨基甲酰基)氮杂环丁-1-基)戊基)异噁唑-3-甲酰胺的制备
通过用甲胺替代2-氨基乙腈，用类似于实施例77的方法制备标题化合物，得到白色固体。MS(ESI)m/z 389.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 7.94-7.91(m,2H),7.27(t,J＝8.8Hz,2H),7.04(s,1H),3.51-3.50(m,2H),3.41-3.39(m,2H),3.24-3.23(m,3H),2.71(s,3H),2.48-2.46(m,2H),1.63-1.62(m,2H),1.41-1.39(m,4H).
实施例86：N-(5-(3-(乙基氨基甲酰基)氮杂环丁-1-基)戊基)-5-(4-氟苯基)异噁唑-3-甲酰胺
通过用乙胺替代甲胺，用类似于实施例85的方法制备标题化合物，得到白色固体。MS(ESI)m/z 403.2[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 7.97-7.93(m,2H),7.30(t,J＝8.8Hz,2H),7.07(s,1H),3.55-3.54(m,2H),3.42-3.41(m,2H),3.30-3.25(m,3H),3.22-3.20(m,2H),2.52-2.50(m,2H),1.67-1.64(m,2H),1.43-1.42(m,4H),1.12(t,J＝7.2Hz,3H).
实施例87：N-(5-(3-((2-氰乙基)氨基甲酰基)氮杂环丁-1-基)戊基)-5-(4-氟苯基)异噁唑-3-甲酰胺
通过用3-氨基丙腈替代甲胺，用类似于实施例85的方法制备标题化合物，得到白色固体。MS(ESI)m/z 428.2[M+H]+.1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 7.96-7.93(m,2H),7.30(t,J＝8.8Hz,2H),7.07(s,1H),3.55-3.54(m,2H),3.44-3.39(m,4H),3.29-3.28(m,3H),2.70-2.67(m,2H),2.51-2.49(m,2H),1.67-1.64(m,2H),1.43-1.41(m,4H).
实施例88：N-(5-(3-((氰基甲基)氨基甲酰基)氮杂环丁-1-基)戊基)-5-(4-氟苯基)异噁唑-3-甲酰胺
通过用2-氨基乙腈替代甲胺，用类似于实施例85的方法制备标题化合物，得到黄色固体。MS(ESI)m/z 436.3[M+Na]+.1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 7.94-7.90(m,2H),7.27(t,J＝8.8Hz,2H),7.04(s,1H),4.14(s,2H),3.54-3.50(m,2H),3.40-3.37(m,2H),3.30-3.29(m,3H),2.51-2.48(m,2H),1.65-1.61(m,2H),1.41-1.39(m,4H).
实施例89：5-(4-氟苯基)-N-(5-(3-(((1,3-反)-3-羟基环丁基)氨基甲酰)氮杂环丁-1-基)戊基)异噁唑-3-甲酰胺
通过用盐酸(1,3-反)-3-氨基环丁-1-醇替代甲胺，用类似于实施例85的方法制备标题化合物，得到白色固体。MS(ESI)m/z 445.3[M+H]+.1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 7.93-7.90(m,2H),7.26(t,J＝8.8Hz,2H),7.04(s,1H),4.35-4.28(m,2H),3.54-3.53(m,2H),3.42-3.39(m,2H),3.27-3.26(m,3H),2.48-2.46(m,2H),2.24-2.20(m,4H),1.62-1.60(m,2H),1.40-1.38(m,4H).
实施例90：5-(4-氟苯基)-N-(5-(3-((2-羟乙基)氨基甲酰)氮杂环丁-1-基)戊基)异噁唑-3-甲酰胺
通过用2-氨基乙-1-醇替代甲胺，用类似于实施例85的方法制备标题化合物，得到灰白色固体。MS(ESI)m/z 419.2[M+H]+.1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 7.93-7.90(m,2H),7.26(t,J＝8.8Hz,2H),7.04(s,1H),3.58-3.56(m,4H),3.41-3.32(m,5H),3.29-3.28(m,2H),2.55-2.52(m,2H),1.64-1.61(m,2H),1.41-1.39(m,4H).
实施例91：5-(4-氟苯基)-N-(5-(3-(((1S,2S)-2-羟基环戊基)氨基甲酰)氮杂环丁-1-基)戊基)异噁唑-3-甲酰胺
通过用盐酸(1S,2S)-2-氨基环戊-1-醇替代甲胺，用类似于实施例85的方法制备标题化合物，得到灰白色固体。MS(ESI)m/z 459.3[M+H]+.1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm7.97-7.93(m,2H),7.30(t,J＝8.8Hz,2H),7.08(s,1H),4.27-4.20(m,4H),3.98-3.93(m,2H),3.58-3.55(m,1H),3.46-3.42(m,2H),3.23-3.19(m,2H),2.18-2.10(m,1H),1.98-1.94(m,1H),1.78-1.60(m,7H),1.48-1.45(m,3H).
实施例92：5-(4-氟苯基)-N-(5-(3-(((1,3-顺)-3-羟基环丁基)氨基甲酰)氮杂环丁-1-基)戊基)异噁唑-3-甲酰胺
通过用盐酸(1,3-顺)-3-氨基环丁-1-醇替代甲胺，用类似于实施例85的方法制备标题化合物，得到灰白色固体。MS(ESI)m/z 445.2[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm7.81-7.78(m,2H),7.19(t,J＝8.8Hz,2H),7.00-6.95(m,1H),6.93(s,1H),6.84-6.78(m,1H),4.10-3.97(m,2H),3.51-3.46(m,2H)3.30-3.28(m,4H),2.85-2.84(m,1H),2.82-2.81(m,2H),2.72-2.71(m,1H),2.45-2.42(m,2H),1.90-1.87(m,2H),1.66-1.63(m,2H),1.45-1.37(m,4H).
实施例93：N-(5-(3-乙酰基氮杂环丁-1-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺
步骤1：N-(5-(3-(甲氧基(甲基)氨基甲酰)氮杂环丁-1-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺的制备
向化合物77-2(0.2g，0.55mmol，1.0当量)的DMF(2mL)溶液中加入N,O-二甲基盐酸羟胺(161mg，1.65mmol，3.0当量)、HATU(419mg，1.1mmol，2.0当量)和DIEA(356mg，2.75mmol，5.0当量)。将混合物在25℃下搅拌14小时。将混合物用水(10mL)稀释并用DCM(3×10mL)萃取水相。通过Na2SO4干燥合并的有机相，过滤，并浓缩滤液。通过硅胶色谱法纯化残余物，用DCM/MeOH从30/1至10/1洗脱，得到标题化合物(0.2g，89.4％产率)，为浅黄色油。MS(ESI)m/z 407.1[M+H]+.
步骤2：N-(5-(3-乙酰基氮杂环丁-1-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺的制备
在0℃下，向93-1(0.15g，0.369mmol，1当量)在THF(2mL)中的溶液中加入CH3MgBr(1.23mL，3.69mmol，10当量)。将混合物在0℃下搅拌4小时。将反应混合物倒入10mL饱和NH4Cl水溶液中。用EtOAc(3×10mL)萃取水相。用Na2SO4干燥合并有机相，并过滤。减压浓缩滤液。通过碱性制备型HPLC(Kromasil 150*25mm*10um，梯度：25-55％B(A＝0.05％氢氧化铵/水)，B＝CH3CN)，流速：30mL/分钟)纯化残余物，得到标题化合物(14.5mg，10.8％产率)，为白色固体。MS(ESI)m/z 362.2[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.78(t,J＝5.2Hz,1H),7.86(dd,J＝1.2Hz,5.2Hz,1H),7.79(d,J＝2.8Hz,1H),7.26(dd,J＝4.0Hz,5.2Hz,1H),7.16(s,1H),3.30-3.29(m,3H),3.23-3.21(m,2H),3.07-3.06(m,2H),2.28-2.26(m,2H),2.06(s,3H),1.51-1.47(m,2H),1.26-1.24(m,4H).
实施例94：N-(5-(5,6-二氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺
向中间体B(150mg，0.54mmol，1.0当量)的CH2ClCH2Cl(10mL)溶液中加入咪唑并[1,5-a]吡嗪,5,6,7,8-四氢-(9Cl)(132.7g，1.07mmol，2.0当量)、NaBH(OAc)3(685.3mg，3.24mmol，6.0当量)、乙酸(97.1mg，1.62mmol，3.0当量)。然后将混合物在15℃下搅拌12小时。用水(10mL)淬灭混合物。用DCM提取混合物。浓缩合并的有机相以得到粗产物，将其用制备型HPLC(柱：Xtimate C18 150*25mm*5um，梯度：33-63％B(A＝0.05％氢氧化铵/水，B＝乙腈))纯化，得到标题化合物(95mg，45.7％产率)，为浅黄色固体。MS(ESI)m/z 386.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.80(t,J＝5.6Hz,1H),7.86(dd,J＝5.2,0.8Hz,1H),7.78(dd,J＝4.0,1.2Hz,1H),7.49(s,1H),7.27-7.25(m,1H),7.16(s,1H),6.61(s,1H),3.97(t,J＝5.6Hz,2H),3.53(s,2H),3.28-3.23(m,2H),2.73(t,J＝5.6Hz,2H),2.45(t,J＝6.8Hz,2H),1.58-1.48(m,4H),1.36-1.30(m,2H).
实施例95：N-(5-(3-(1H-咪唑-2-基)氮杂环丁-1-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺
步骤1：3-(1H-咪唑-2-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯的制备
将氨气在0℃下鼓泡通过3-甲酰基氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(1.0g，5.4mmol，1.0当量)和乙二醛(10.9g，40wt％在水中，75.59mmol，14当量)的混合物10分钟，直至溶液的重量增加1.84g(约107.98mmol NH3)。将混合物升温至26℃并搅拌14小时。用CH2Cl2萃取水层。合并的有机相通过Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩。硅胶色谱纯化残余物，用己烷中70％EtOAc洗脱，得到标题化合物(0.51g，42％产率)，为浅黄色固体。MS(ESI)m/z 224.0[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.01(s,2H),4.28(t,J＝8.8Hz,2H),4.16-4.11(m,2H),3.88-3.86(m,1H),1.44(s,9H).
步骤2：2-(氮杂环丁-3-基)-1H-咪唑的制备
3-(1H-咪唑-2-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(0.3g，1.34mmol，1.0当量)在CH2Cl2(2mL)中的溶液中加入TFA(0.5mL)。将混合物在27℃下搅拌48小时。减压除去挥发物，得到标题化合物(0.5g，100％产率，94.3％wt)，为浅黄色油，不经进一步纯化使用。
步骤3：N-(5-(3-(1H-咪唑-2-基)氮杂环丁-1-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺的制备
通过使用类似于实施例94的方法，通过用2-(氮杂环丁-3-基)-1H-咪唑代替咪唑并[1,5-a]吡嗪,5,6,7,8-四氢-(9Cl)以13％的产率制备标题化合物，为白色固体。MS(ESI)m/z 386.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.71-7.68(m,2H),7.23(dd,J＝4Hz,5.2Hz,1H),6.79(s,2H),6.92(s,1H),3.79-3.76(m,3H),3.41-3.33(m,4H),2.62-2.58(m,2H),1.69-1.65(m,2H),1.48-1.43(m,4H).
药物组合物和组合
本公开的化合物典型地用作药物组合物(例如，本公开的化合物和至少一种药学上可接受的载体)。“药学上可接受的载体(稀释剂或赋形剂)”是指本领域通常接受的用于向动物(特别是哺乳动物)递送生物活性剂的介质，包括通常视为安全(GRAS)溶剂、分散介质、包衣、表面活性剂、抗氧化剂、防腐剂(例如，抗菌剂、抗真菌剂)、等渗剂、吸收延迟剂、盐、防腐剂、药物稳定剂、粘合剂、缓冲剂(例如，马来酸、酒石酸、乳酸、柠檬酸、乙酸、碳酸氢钠、磷酸钠等)、崩解剂、润滑剂、甜味剂、调味剂、染料等及其组合，其如本领域技术人员所知(参见，例如，Allen,L.V.,Jr.等，《雷明顿：药物科学和实践》(Remington:The Scienceand Practice of Pharmacy)(2卷)，第22版，药物出版社(Pharmaceutical Press)(2012)。
在一个方面，本公开提供了一种药物组合物，其包括本公开的化合物、或其药学上可接受的盐、和药学上可接受的载体。在另一个实施方式中，该组合物包括至少两种药学上可接受的载体，例如本文所述的那些。出于本公开的目的，除非另有说明，否则溶剂合物和水合物通常被认为是组合物。优选地，药学上可接受的载体是无菌的。可配制用于具体给药途径的药物组合物，例如口服给药、胃肠外给药、和直肠给药等。另外，本公开的药物组合物可制成固体形式(包括但不限于胶囊、片剂、丸剂、粒剂、粉末或栓剂)，或液体形式(包括但不限于溶液、悬液或乳液)。可对药物组合物进行常规药学操作(例如灭菌)和/或其可包含常规惰性稀释剂、润滑剂或缓冲剂，以及辅佐剂，例如防腐剂、稳定剂、湿润剂、乳化剂和缓冲剂等。通常，药物组合物是片剂或明胶胶囊，其包含活性成分以及一种或多种：
a)稀释剂，例如乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纤维素和/或甘油；
b)润滑剂，例如二氧化硅、滑石、硬脂酸、其镁盐或钙盐，和/或聚乙二醇；对于片剂还包括
c)粘合剂，例如硅酸镁铝、淀粉糊剂、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮；如果需要
d)崩解剂，例如淀粉、琼脂、海藻酸或其钠盐，或泡腾混合物；和
e)吸附剂、着色剂、调味剂和甜味剂。
可根据本领域已知的方法用薄膜包裹或肠衣包裹片剂。
口服给药的合适组合物包括片剂、锭剂、水性或油性悬液、可分散粉末或粒剂、乳液、硬或软胶囊、或糖浆或酏剂形式的有效量的本公开的化合物。根据药物组合物制造领域已知的任意方法来制备用于口服使用的组合物，所述组合物可以包含一种或多种试剂，所述试剂选自：甜味剂、调味剂、着色剂和防腐剂，以提供药学上精良的和可口的制剂。片剂可含有活性成分和药学上可接受的无毒赋形剂的混合物，所述赋形剂适合用于制备片剂。这些赋形剂是：例如，惰性稀释剂，如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；成粒剂和崩解剂，如玉米淀粉或藻酸；粘合剂，如淀粉、明胶或阿拉伯胶；和润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉。片剂可以是未包衣的，也可通过已知技术进行包衣，以延迟胃肠道中的崩解和吸收，从而在较长时间内提供持续作用。例如，可采用延时材料如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。口服使用的制剂可制备成其中混有活性成分与惰性固体稀释剂(如碳酸钙、磷酸钙或高岭土)的硬明胶胶囊，或其中混有活性成分与水或油性介质(如花生油、液体石蜡或橄榄油)的软明胶胶囊。
一些可注射组合物为等渗水性溶液或悬浮液，并且栓剂有利地由脂肪乳剂或悬浮液制备。所述组合物可以是灭菌的和/或含有辅助试剂，如防腐剂、稳定剂、润湿剂或乳化剂、溶液促进剂、调节渗透压的盐和/或缓冲液。另外，其还可以含有其它有治疗价值的物质。所述组合物分别根据常规的混合、制粒或包衣方法制备，并含有约0.1-75％、或含有约1-50％的活性成分。
用于透皮施用的合适组合物包含有效量的本公开的化合物和合适载体。适用于透皮递送的运载体包括可吸收的药理学上可接受的溶剂，以帮助穿透宿主皮肤。例如，透皮装置为含背衬部件的绷带形式、含所述化合物和任选运载体的储库、以受控且预定的速率长期递送所述化合物到宿主皮肤的任选速率控制屏障、以及将所述设备固定在皮肤上的部件。
局部施用(例如对皮肤和眼睛)的合适组合物包括水性溶液、悬液、软膏、乳霜、凝胶或可喷洒制剂，例如通过气溶胶递送等。这种局部递送系统特别适用于皮肤施用，例如，用于防晒霜、乳液、喷雾剂等的预防性使用。因此，它们特别适用于本领域熟知的局部用制剂，包括化妆品制剂。这类制剂可以包含增溶剂、稳定剂、张度增强剂、缓冲液和防腐剂。
如本文所用，局部施用还可以涉及吸入或鼻内施用。其可以干粉形式(或单独、或作为混合物(例如与乳糖的干混合物)，或混合组分颗粒(例如与磷脂))，通过来自加压容器、泵、喷雾器、雾化器或喷雾器的气溶胶喷雾形式或干粉吸入器常规递送，可使用或不使用合适的推进剂。
本公开还提供了无水药物组合物和剂型，其包含作为活性成分的本公开的化合物，因为水可能促进一些化合物的崩解。
可用无水或含水量低的组分和低水分或低湿度条件制备本公开的无水药物组合物和剂型。可制备和储存无水药物组合物，使其维持无水性质。因此，用已知能防止接触水的材料包装无水组合物，使其包含在合适的制剂盒中。合适的包装的示例包括但不限于，气密性密封的箔、塑料、单位剂量容器(例如，小瓶)、泡罩包装和条状包装。
本公开还提供了药物组合物和剂型，其包含一种或多种能够降低本公开作为活性成分的化合物分解速率的试剂。这些制剂在本文中称作“稳定剂”，包括但不限于抗氧化剂(例如抗坏血酸)、pH缓冲剂或缓冲盐等。
通常将本公开的化合物配制成药物剂型，以提供易于控制的药物剂量，并为患者提供雅致且易于处理的产品。当然，本公开的化合物的剂量方案将根据已知因素而变化，如特定药剂的药效学特征及其给药方式和途径；接受者的物种、年龄、性别、健康状况、医疗状况和体重；症状的性质和程度；伴随进行的治疗；治疗频率；给药途径、患者的肾和肝功能以及所需的效果。本公开的化合物可以以单日剂量给予，或者每日总剂量可以每日两次、三次或四次的分开剂量给予。
本公开还提供药物组合物，其可以局部递送至受试者，包括以固体、半固体、液体、凝胶和微球等形式施用到外耳、中耳或内耳中。本公开的组合物可通过足以将组合物递送至内耳的许多方法给予。这些方法包括但不限于耳部给予(例如通过经鼓膜的芯或导管)、耳内给予、鼓室内给予、耳蜗内给予、前庭内给予和迷路内给予。
如本文所用，术语“耳部给予”是指使用导管或芯吸装置将组合物穿过鼓膜给予受试者的内耳的方法。为了便于插入芯或导管，可以使用合适尺寸的注射器刺穿鼓膜。还可以使用本领域技术人员已知的任何其他方法插入装置，例如装置的手术植入。在特定实施方式中，芯或导管装置可以是独立装置，意味着它被插入受试者的耳朵中，然后可控制地将组合物释放到内耳。在其他特定实施方式中，芯或导管装置可以附接或耦合到泵或其他装置，其允许给予另外的组合物。泵可以自动编程以递送剂量单位，或可以由受试者或医学专业人员控制。
如本文所用，术语“耳内”给予是指通过直接注射组合物将组合物给予受试者的外耳、中耳或内耳。“鼓室内”给予是指将组合物注射或灌注穿过鼓膜进入中耳，使得组合物可以通过圆窗膜扩散到内耳中。“耳蜗内”给予是指将组合物直接递送到耳蜗中。“前庭内”给予是指将组合物直接递送到前庭器官中。“迷路内”给予是指将组合物直接递送到内耳液隔室中以使内耳暴露于组织中，所述内耳包括半规管、前庭和耳蜗。
在一个实施方式中，使用注射器和针头装置使用耳部给予将组合物给予受试者。使用合适尺寸的针刺穿鼓膜，并将包含组合物的芯或导管插入穿过的鼓膜并进入受试者的中耳。该装置可以以使其与圆窗接触或紧邻圆窗的方式被插入。用于耳部给予的示例性装置包括但不限于经鼓膜的芯、经鼓膜的导管、经鼓膜的泵、圆窗微导管(将药物送到圆窗的小导管)和Silverstein MicrowicksTM(允许受试者或医疗专业人员调节的、具有从管穿到圆窗的“芯”的小管)。
在另一实施方式中，注射器和针头装置用于以进入中间和/或内耳的方式将组合物给予受试者。制剂可通过鼓室内注射被直接给予在圆窗膜上，或可通过耳蜗内注射被直接给予耳蜗，或通过前庭内注射被直接给予前庭器官，或通过迷路内注射被直接给予半规管、前庭和耳蜗。
在再一个实施方式中，递送装置可以是设计用于将组合物给予中耳和/或内耳的装置。仅作为示例：佳乐医疗股份有限公司(GYRUS Medical Gmbh)提供微型耳镜，用于圆窗龛的可视化和药物输送；Arenberg在美国专利第5,421,818号、第5,474,529号和第5,476,446号中描述了一种将液体输送到内耳结构的医疗设备，其每一个都通过引用并入本文。美国专利申请公开2007/0167918，其通过引用并入本文的公开内容，进一步描述了用于经鼓膜的流体取样和药物应用的组合耳用抽吸器和药物分配器。
在一个实施方式中，组合物可以局部施用于受试者。在另一实施方式中，组合物可以通过耳部给予给予受试者。在再一实施方式中，可以通过耳内给予将组合物给予受试者。在又一实施方式中，可以通过鼓室内给予将组合物给予受试者。在又一实施方式中，可以通过耳蜗内给予将组合物给予受试者。在又一实施方式中，可以通过前庭内给予将组合物给予受试者。在又一实施方式中，可以通过迷路内给予将组合物给予受试者。
在一个实施方式中，组合物包括一种或多种成分，其增强所述组合物的活性成分对耳蜗的可用性，和/或提供所述组合物的活性成分向内耳的延迟或立即释放。在一个实施方式中，所述一种或多种成分是药学上可接受的载体。
在另一个实施方式中，组合物包括一种或多种药学上可接受的载体，其将促进组合物通过分隔中耳和内耳的生物屏障(例如，圆窗)的递送，从而有效地将治疗有效量的组合物递送至内耳。有效地输送到耳蜗，螺旋器，前庭器官，和/或内耳外淋巴或内淋巴液空间是期望的，因为当用本公开的组合物处理或接触时，这些组织/器官承载促进感觉毛细胞再生的支持细胞。
可以通过将组合物注射或灌注到中耳来进行向内耳的鼓室内递送，目的是使组合物通过圆窗膜扩散到内耳中。适用于鼓室内给与的递送系统是众所周知的并且可以在例如，Liu等，《药学学报(Acta Pharmaceutica Sinica B)》2013；3(2)：86-96；Kechai等，《国际药剂学杂志(International Journal of Pharmaceutics)》2015；494：83–101；和Ayoob等，《药物传递专家意见(Expert Opinion on Drug Delivery)》，2015；12(3)：465-479中找到。
在某些情况下，将本公开的化合物与一种或多种治疗活性剂组合给予可能是有利的，例如，与相关毛细胞发育/再生途径有关的那些治疗活性剂，所述相关毛细胞发育/再生途径包括但不限于，Notch信号传导、FGF信号传导、Wnt信号传导、Shh信号传导、细胞周期/干细胞衰老、miRNA和表观遗传调控。
术语“联合疗法”是指给予两种或多种治疗剂以治疗本公开描述的治疗性疾病、病症或紊乱。这种给药包括以基本上同时的方式共同给予这些治疗剂，例如在具有固定活性成分比率的单一胶囊中。或者，这种给予包括在每种活性成分的多个或分开的容器(例如胶囊、粉末和液体)中共同给予。本公开的化合物和其他治疗剂可以通过相同或通过不同的给予途径进行给予。在给予之前，可以将粉剂和/或液体重建或稀释至所需剂量。此外，这种给予还包括以近似相同的时间或在不同的时间以先后的方式使用每种类型的治疗剂。在任一种情况下，治疗方案将提供药物组合在治疗本文所述的疾病、紊乱或病症中的有益作用。
在一个实施方式，本公开提供药物组合物，其包括至少一种本公开的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体，单独或与一种或多种其他治疗活性剂一起给予人或动物受试者，所述其他治疗活性剂与如上所述的那些相关的毛细胞发育/再生途径有关。
在另一个实施方式中，本公开提供治疗人或动物对象的听力损失或平衡失调的方法，其包括单独或与一种或多种其他治疗活性剂一起给予对象治疗有效量的本公开的化合物或其药学上可接受的盐，所述其他治疗活性剂与如上所述的那些相关的毛细胞发育/再生途径有关。
具体说，组合物将作为组合治疗剂一起配制或分开给予。
在用于听力损失或平衡失调的治疗的联合疗法中，本公开的化合物和其他治疗活性剂可以同时、伴随或先后给予，没有特定的时间限制，其中这样的给予在受试者体内提供治疗有效水平的两种化合物。
在优选的实施方式中，本公开的化合物和其他治疗活性剂通常通过输注、口服或局部以任何顺序依次施用。给药方案可能根据疾病的阶段、患者的身体状况、个体药物的安全性、个体药物的耐受性、以及给予该组合的主治医师和医师所熟知的其他标准而变化。本公开的化合物和其它治疗活性剂可以间隔几分钟、几小时、几天或甚至几周内给予，这取决于用于治疗的特定循环。此外，该循环可包括在治疗周期期间，比一种药物更频繁地给予一种药物，并且每次给予药物时的剂量不同。
本公开的另一个方面中，提供了包含两种或更多种单独的药物组合物的试剂盒，其中至少一种包括本公开的化合物。在一个实施方式中，试剂盒包含独立容纳所述组合物的器具，例如容器、分装瓶、或分装箔片包装。这样的试剂盒的例子是泡罩包装，其典型用于包装片剂、胶囊等。
本公开的试剂盒可用于施用不同剂型，例如口服或胃肠外，用于以不同剂量间隔施用独立的组合物，或用于彼此单独滴定独立的组合物。为了有助于合规/顺应性，本公开的试剂盒通常包括给药说明。
在本公开的联合治疗中，本公开的化合物和其他治疗剂可以由相同或不同的制造者制备和/或配制。另外，可在如下阶段将本公开的化合物和其他治疗剂(药剂)集合入联合治疗：(i)在对医师开放联合产品之前(例如当试剂盒包含本公开的化合物和其他治疗剂时)；(ii)由医师自发(或在医师指导下)在给予前不久；(iii)病人本身，例如在本公开的化合物和其他治疗剂的依次给予过程中。
用于施用的药物组合物(或制剂)可以以多种方式包装，这取决于用于给予药物的方法。通常，用于分配的制品包括其中以适当的形式沉积药物制剂的容器。合适的容器是本领域技术人员公知的，包括诸如瓶子(塑料和玻璃)、小袋、安瓿、塑料袋、金属圆筒等材料。该容器还可以包括防干扰装置以防止对包装的内容物不慎进入。此外，容器上具有描述容器的内容物的标签。标签还可能包含适当的警告。
本公开的药物组合物或组合可以是：对于约50-70kg的对象为约1-10000mg、或约1-500mg、或约1-250mg、或约1-150mg、或约0.5-100mg、或约1-50mg活性成分的单位剂型。化合物、药物组合物或其组合的治疗有效量由对象物种、体重、年龄和个体状态、要治疗的病症或疾病或其严重程度决定。具有一般技术水平的医师、临床医师或兽医可轻易决定预防、治疗或抑制病症或疾病的进程的每种活性成分的有效量。
优选使用哺乳动物(例如，小鼠、大鼠、狗、猴)或分离的器官、组织和其制备，在体外和体内测试中证明上述剂量的性质。本公开的化合物可以溶液(例如水溶液)形式体外施用，在体内以肠内、胃肠外形式施用，有利地在静脉内施用，例如，作为悬浮液或以水溶液施用。体外剂量范围可以是约10-3摩尔至10-9摩尔浓度。体内治疗有效量范围可根据给药途径而定，在约0.1-500mg/kg或约1-100mg/kg之间。
药理学和效用
本公开一般涉及用于通过在内耳中增加、促进、刺激或诱导感觉毛细胞的再生来治疗与内耳中感觉毛细胞损伤或损失相关的听力损失和平衡失调的化合物、组合物和方法。因此，对耳部解剖学的简要回顾可能有助于理解本公开。
耳部的解剖结构是本领域普通技术人员所熟知的(参见，例如，《格氏解剖学(Gray's Anatomy)》，美国修订版(1977)，859-867页)。耳部通常分为三个部分：外耳、中耳、和内耳。外耳由耳廓(耳壳)、耳道和鼓膜(耳鼓)的朝外部分组成。外耳的功能部分地是收集和引导声波通过耳道朝向鼓膜和中耳。
中耳是一个充满空气的腔，包括鼓室、三个耳骨(听小骨)：锤骨、砧骨和镫骨，椭圆形窗口和连接中耳和内耳的圆窗。听小骨以在鼓膜和椭圆形窗口之间提供到充满流体的内耳的机械连接的方式布置，其中声音被转换并转换到内耳以进行进一步处理。
内耳包含用于听觉和平衡的感觉器官。耳蜗感知声音；平衡器官包括半规管，可以感知角加速度；以及耳石器官(椭圆囊和球状囊)，感知线性加速度。圆窗将耳蜗连接到中耳。在这些感觉部分的每一个中，专门的感觉毛细胞排列在内耳支持细胞的一层或多层上。支撑细胞位于内耳下方，至少部分地围绕并物理支撑感觉毛细胞。感觉毛细胞上的静纤毛受到声音或运动的物理偏转，并且它们的偏转传递给将神经冲动传递给大脑进行处理和解释的神经。
特别地，耳蜗包括螺旋器，其主要负责感知声音。螺旋器包括基底膜，其上放置有多种支撑细胞，包括边缘细胞、内柱细胞、外柱细胞、内指状细胞、Dieter细胞和Hensen细胞。支持细胞围绕并分离内毛细胞和外毛细胞。盖膜位于内毛细胞和外毛细胞上方。
听力损失和平衡失调主要是由耳蜗中感觉毛细胞的损伤或损失引起的。在哺乳动物中，感觉毛细胞的丢失或损伤导致永久性的听力损失或平衡失调，因为它们仅在胚胎发育期间产生，并且在一生的时间内不会在损伤或细胞减损时自发再生。普遍认为，虽然内耳中存在能够产生感觉毛细胞的细胞，但内耳中的天然感觉毛细胞再生水平较低(Li等，《分子医学趋势(Trends Mol.Med.)》，10，309-315(2004)；Li等，《自然医学(Nat.Med.)》，9，1293-1299(2003)；Rask-Andersen等，《听力研究(Hear.Res.)》，203，180-191(2005))。其结果是，丢失或损坏的感觉毛细胞可能不能被自然生理过程(例如，细胞分化)充分替换，发生毛细胞的减损。在许多个体中，这种感觉毛细胞减损可导致例如感觉神经听力损失和平衡失调。因此，增加内耳中感觉毛细胞数量的治疗策略将使具有感觉毛细胞减损或损伤的患者受益。
内耳中的感觉毛细胞命运决定由特定的基因和途径控制。Atonal蛋白同源物1(Atoh1或atonal)是内耳毛细胞发育和再生的主要调节因子。Atoh1在毛细胞发生中的重要性已被充分记录。例如，Math1(小鼠中的Atoh1同源物)是毛细胞发育和内耳祖细胞分化为内耳支持细胞和/或感觉毛细胞所必需的(Bermingham等，《科学(Science)》，284：1837-1841，1999)。此外，腺病毒介导的成熟豚鼠内淋巴中的Math1过表达导致成熟耳蜗中非感受细胞分化为未成熟毛细胞(Kawamoto等，《神经科学杂志(J.Neurosci.)》，23：4395-4400，2003)。这些研究的意义是双重的。首先，他们证明成熟耳蜗的非感觉细胞保留分化成感觉细胞的能力，例如感觉毛细胞。其次，他们证明Math1过表达是必要并足以指挥支持细胞转分化为毛细胞。后来的一项研究通过证明腺病毒介导的Atoh1过表达所诱导的感觉毛细胞再生并在实验性聋动物模型中显著改善了听力阈值进一步推进了这些发现(Izumikawa等，《自然医学》，11：271-276，2005)。
这表明尽管哺乳动物的耳蜗感觉上皮已经丧失了自发再生的能力，但诱导毛细胞命运所需的分子活性仍然存在并且在成熟支持细胞中起作用。这些研究结果还表明，通过药理学干预激活内源性Atoh1表达可能是刺激感觉毛细胞再生、治疗听力损失和平衡失调的有效方法。
本公开提供能够增加对象中的Atoh1表达和/或活性的化合物、组合物和方法。本公开还提供可增加或促进感觉毛细胞再生的化合物、组合物和方法。本公开还提供增加对象的内耳中的感觉毛细胞数量的化合物、组合物和方法。同时，本文描述的化合物、组合物和方法可用于治疗对象的感觉毛细胞的损伤或损失导致的听力损失和/或平衡失调。
本公开的化合物以游离形式或药学上可接受的盐形式表现出有价值的药理学性质，这可以至少通过使用以下任何一种测试方法来证明。评估了本公开的化合物增加小鼠小脑神经前体细胞中Atoh1表达的能力。使用具有毛细胞损伤的6天出生后小鼠耳蜗外植体，在离体毛细胞诱导测定中评估本公开的化合物诱导新毛细胞形成的能力。
小鼠小脑神经前体细胞(NPC)中的Atoh1诱导试验
用从新生转基因Atoh1-GFP小鼠分离的体外培养的小脑神经前体细胞进行Atoh1诱导试验。Atoh1表达主要受增强子调控，核GFP由Atoh1的3'的克隆增强子序列驱动，其在哺乳动物中具有高保守性。因此，Atoh1诱导可以通过小脑神经前体细胞中的GFP活化来反映(Helms等，《发育(Development)》2000；127：1185-1196；Lumpkin等，《基因表达模式(GeneExpression Patterns)》2003；3：389–395)。解剖出生后3天的幼仔用于小脑组织分离。将小脑组织切成小块，用0.05％胰蛋白酶在37℃下解离约10分钟，然后用70uM细胞滤网过滤。在具有1％P/S，20ng/ml rhFGF2和20ng/ml rhEGF(R&D系统公司(R&D Systems))的DMEM/F12+1％N2和2％B27的超低附着盘/孔板中，将细胞作为神经球培养最初2天。然后将球体接种到基质胶(在DMEM/F12中稀释1:30)涂覆的组织培养皿中进行单层培养。在体外培养4.5-5.5天(DIV)后，将细胞用0.05％胰蛋白酶解离成单细胞，并在细胞数计算后冷冻。
将小脑神经前体细胞(NPC)从原种中再解冻并再培养2天，然后用于Atoh1诱导试验。在试验的第一天，将NPC以2500个细胞/孔接种到基质胶涂覆的384孔板(黑色视野板(Black view-plate)，PE)中。在过夜培养后，用代表性的本公开的化合物以1：2连续稀释液处理NPC，剂量为50μM至200nM，DMSO作为阴性对照。在没有培养基更换的72小时处理后，用4％福尔马林固定细胞用于染色。试验板用GFP抗体(Abcam，#13970,1：1000)染色以扩增内源性GFP信号，然后通过Cellomics读取。计算由测试的化合物的DAPI染色定义的细胞核素中的GFP平均强度，并与DMSO对照比较，根据(测试化合物的GFP平均强度/DMSO对照)的等式，以倍数差异格式表示差异。每种测试的化合物相对于DMSO对照的最大倍数差异在下表2中描述(参见标题“倍数差异”的列)。注意，DMSO对照的值在等式中是1，并且任何大于5的倍数差异被认为具有显著差异。如表2中所示，所有测试的本公开的化合物在GFP平均强度方面已显示出相对于DMSO对照的显著倍数差异。因此，所有测试的化合物对Atoh1的活化都有活性并显著增加Atoh1表达。
表2
使用具有毛细胞损伤的6天出生后小鼠耳蜗外植体的离体毛细胞诱导试验
在该试验中使用P6(出生后6天)的Atoh1-GFP小鼠，其是与之前描述的用于Atoh1诱导试验的相同的小鼠品系。暴露听软骨囊并对耳蜗进行微切割。将基底膜与螺旋器分离，并在37℃、湿润空气/5％CO2的标准气体气氛下，在无血清培养基(培养基：DMEM/F12+1％N2+2％B27+5μg/ml氨苄青霉素)中体外培养。用1mM新霉素处理1.25h，损伤内耳毛细胞。在新霉素处理后，将外植体在空白培养基中培养7天，然后用所选择的化合物进行处理。
对于化合物给予，将耳蜗外植体用3至10μM的本公开的化合物处理，用DMSO作为阴性对照，持续8天，同时进行一次化合物/培养基更换。处理8天后，去除测试的化合物。将外植体在空白培养基中再培养4天。然后用4％w/v福尔马林固定耳蜗外植体培养物，并使用兔抗Myo7a抗体(普罗透斯生物科学公司(Protus Biosci)#25-6790，在含有3％BSA的PBS中稀释1：250)处理Myo7a免疫荧光(Myo7a是感觉毛细胞的特异性标志物)。罗丹明标记的山羊抗兔IgG(分子探针公司(Molecular Prob.)#R6394，在含有3％BSA的PBS中稀释1：1000)用作二抗以显现Myo7a阳性细胞。使用EVOS图像系统(赛默飞世尔科技公司(Thermo FisherScientific))收集和分析图像。发现用测试化合物处理显著增加了Atoh1-GFP和Myo7a阳性细胞的数量。通过用多个毛细胞标记物染色细胞来确认异位形成的细胞的毛细胞特性。
在该测定中的毛细胞诱导的功效由化合物处理后受损的整个外植体中Atoh1和Myo7a双阳性细胞的响应长度百分比表示。根据(Atoh1和Myo7a双阳性细胞的外植体长度/耳蜗外植体的全长)×100％的等式计算响应长度百分比。注意，由于毛细胞的总损伤，DMSO对照的值为0％，并且任何超过20％的响应长度百分比被认为是显著的毛细胞诱导。如表3中所示，本公开的代表性化合物已经证明了显著的毛细胞诱导。
表3
注意：响应长度％是平均值±SD。SD：标准差。

Claims (15)

1.一种式(I)的化合物
或其药学上可接受的盐，其中：
R1选自苯基、噻吩基和呋喃基，其每个独立地被1-2个F任选取代；
L是被独立地选自C1-6烷基和卤素的1-4个取代基所任选取代的C5-C6亚烷基，其中任选地，C1-6烷基取代基与其所连接的碳原子一起形成3-元环烷基环；
R2和R3与它们所连接的氮原子一起形成包括碳原子和独立地选自N和O的1-3个杂原子的4-至10-元杂环基，其被1-4个R4所任选取代；
每个R4独立地选自C1-6烷基、C3-8环烷基、卤素、(C0-C3亚烷基)-CN、C1-6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基、(C0-C6亚烷基)-OR5、(＝O)、NH(C＝O)R5、NH(C＝O)OR7、NH(C＝O)N(R5)2、(C＝O)N(R7)2、(C＝O)R5、(C＝O)O(C1-6烷基)、(C＝O)O(C3-8环烷基)、S(＝O)2R5、S(＝O)2N(R7)2、NHS(＝O)2R5、被1-3个R6所任选取代的苯基和包括碳原子和独立地选自N、O和S的1-3个杂原子且被1-3个R6所任选取代的5-至6-元杂芳基；
每个R5独立地选自H、C1-6烷基和C3-8环烷基；
每个R6独立地选自C1-6烷基、C3-8环烷基、卤素、CN、C1-6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基、OR5、N(R5)2、NH(C＝O)R5、(C＝O)N(R5)2、(C＝O)R5、(C＝O)OR5、S(＝O)2R5和S(＝O)2N(R5)2；和
每个R7独立地选自H、C1-6烷基、被1-2个OR5所任选取代的C3-8环烷基、(C0-C3亚烷基)-CN和(C0-C3亚烷基)-OR5。
2.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1选自苯基、被一个F所取代的苯基、2-噻吩基、3-噻吩基、2-呋喃基和3-呋喃基。
3.根据权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1是
4.根据权利要求所述1的化合物或其药学上可接受的盐，其中L是被1-4个卤素所任选取代的C5亚烷基。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中L是被两个F所任选取代的C5亚烷基。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2和R3与它们所连接的氮原子一起形成具有选自以下结构的4-至10-元杂环基：
其每个独立地被1-2个R4所任选取代。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2和R3与它们所连接的氮原子一起形成具有选自以下结构的4-至10-元杂环基：
其每个独立地被1-2个R4所任选取代。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中每个R4独立地选自C1-6烷基、卤素、(C0-C3亚烷基)-CN、(C0-C6亚烷基)-OR5、(＝O)、NH(C＝O)R5、NH(C＝O)OR7、NH(C＝O)N(R5)2、(C＝O)N(R7)2、(C＝O)R5、(C＝O)O(C1-6烷基)、(C＝O)O(C3-8环烷基)、S(＝O)2N(R7)2、NHS(＝O)2R5、被1-3个R6所任选取代的苯基和包括碳原子和独立地选自N、O和S的1-3个杂原子且被1-3个R6所任选取代的5-至6-元杂芳基。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中每个R4独立地选自CH3、CH2CH(CH3)2、F、CN、CH2-CN、OH、OCH3、CH2-OH、(CH2)2-OH、NH(C＝O)OCH3、NH(C＝O)CH3、NH(C＝O)NHCH3、(C＝O)NH2、(C＝O)NHCH3、(C＝O)NH(环戊基-OH)、(C＝O)NH(CH2-CN)、(C＝O)NH(CH2CH2-CN)、(C＝O)NH(CH2CH2-OH)、C(＝O)CH3、S(＝O)2NH2、NHS(＝O)2CH3、苯基和咪唑基。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中每个R4独立地选自CH3、F、(CH2)2-OH、(C＝O)NH2、S(＝O)2NH2、(C＝O)NH(CH2-CN)、(C＝O)NH(CH2CH2-CN)、(C＝O)NH(环戊基-OH)和NHS(＝O)2CH3。
11.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其选自：
实施例8：N-(5-(4-甲基哌嗪-1-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺；
实施例19：N-(5-(3-(甲基磺酰胺基)氮杂环丁-1-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺；
实施例27：N-(5-(3-氨基甲酰基氮杂环丁-1-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺；
实施例45：(S)-N-(5-(3-氟吡咯烷-1-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺；
实施例51：N-(5-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺；
实施例52：N-(5-(5-甲基-2,5-二氮杂双环[2.2.2]辛-2-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺；
实施例54：N-(5-(4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺；
实施例61：N-(5-(3-(甲基氨基甲酰基)氮杂环丁-1-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺；
实施例65：N-(5-(3-氨基甲酰基氮杂环丁-1-基)戊基)-5-(4-氟苯基)异噁唑-3-甲酰胺；
实施例72：N-(5-(3-氨磺酰基氮杂环丁-1-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺；
实施例73：5-(5-氟噻吩-2-基)-N-(5-(4-甲基哌嗪-1-基)戊基)异噁唑-3-甲酰胺；
实施例74：N-(3,3-二氟-5-(4-甲基哌嗪-1-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺；
实施例77：N-(5-(3-((氰基甲基)氨基甲酰基)氮杂环丁-1-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺；
实施例83：N-(5-(3-((2-羟基环戊基)氨基甲酰基)氮杂环丁-1-基)戊基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺；
实施例85：5-(4-氟苯基)-N-(5-(3-(甲基氨基甲酰基)氮杂环丁-1-基)戊基)异噁唑-3-甲酰胺；和
实施例88：N-(5-(3-((氰基甲基)氨基甲酰基)氮杂环丁-1-基)戊基)-5-(4-氟苯基)异噁唑-3-甲酰胺。
12.一种药物组合物，其包括：
治疗有效量的根据权利要求1-11中任一项所述的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，和
一种或多种药学上可接受的载体。
13.一种药物组合，其包括：
治疗有效量的根据权利要求1-11中任一项所述的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，和
一种或多种治疗活性剂。
14.一种治疗听力损失或平衡失调的方法，其包括向有该需要的对象给予治疗有效量的根据权利要求1-11中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、根据权利要求12所述的药物组合物、或根据权利要求13所述的药物组合。
15.根据权利要求1-11中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、根据权利要求12所述的药物组合物、或根据权利要求13所述的药物组合，其用作药物。
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Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019148067A1 (en) 2018-01-26 2019-08-01 Massachusetts Eye And Ear Infirmary Treatment of hearing loss
CA3113573A1 (en) * 2018-09-21 2020-03-26 Novartis Ag Isoxazole carboxamide compounds and uses thereof
WO2020072601A1 (en) 2018-10-02 2020-04-09 Frequency Therapeutics, Inc. Pharmaceutical compositions comprising otic therapeutic agents and related methods
TW202103692A (zh) 2019-04-08 2021-02-01 美商頻率醫療公司 用於治療聽力損失之組合物及方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101990433A (zh) * 2008-02-07 2011-03-23 马萨诸塞眼科耳科诊所 提高Atoh1表达的化合物
WO2014210159A1 (en) * 2013-06-26 2014-12-31 Proteostasis Therapeutics, Inc. Methods of modulating cftr activity
WO2016054560A1 (en) * 2014-10-02 2016-04-07 Flatley Discovery Lab Isoxazole compounds and methods for the treatment of cystic fibrosis
WO2017007702A1 (en) * 2015-07-07 2017-01-12 Eli Lilly And Company Notch pathway signaling inhibitor compounds

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US1295799A (en) * 1918-06-14 1919-02-25 Samuel Gordon Sanborn Rotary wrench.
US5421818A (en) 1993-10-18 1995-06-06 Inner Ear Medical Delivery Systems, Inc. Multi-functional inner ear treatment and diagnostic system
WO2004078163A2 (en) 2003-02-28 2004-09-16 Transform Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical co-crystal compositions of drugs such as carbamazepine, celecoxib, olanzapine, itraconazole, topiramate, modafinil, 5-fluorouracil, hydrochlorothiazide, acetaminophen, aspirin, flurbiprofen, phenytoin and ibuprofen
WO2005115527A2 (en) 2004-05-24 2005-12-08 Auris Medical, Llc. Combined otic aspirator and medication dispenser
JP6773645B2 (ja) * 2014-09-03 2020-10-21 ザ ブリガム アンド ウィミンズ ホスピタル，インコーポレイテッド 聴覚障害の治療のための内耳毛細胞を生成するための組成物、システムおよび方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101990433A (zh) * 2008-02-07 2011-03-23 马萨诸塞眼科耳科诊所 提高Atoh1表达的化合物
WO2014210159A1 (en) * 2013-06-26 2014-12-31 Proteostasis Therapeutics, Inc. Methods of modulating cftr activity
WO2016054560A1 (en) * 2014-10-02 2016-04-07 Flatley Discovery Lab Isoxazole compounds and methods for the treatment of cystic fibrosis
WO2017007702A1 (en) * 2015-07-07 2017-01-12 Eli Lilly And Company Notch pathway signaling inhibitor compounds

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