ES2575215T3 - Derivados de imidazolidindiona - Google Patents

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ES2575215T3 ES10788314.2T ES10788314T ES2575215T3 ES 2575215 T3 ES2575215 T3 ES 2575215T3 ES 10788314 T ES10788314 T ES 10788314T ES 2575215 T3 ES2575215 T3 ES 2575215T3
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Abstract

Un compuesto de fórmula (la)**Fórmula** en la que: R1 es halo, alquiloC1-4, alcoxiC1-4, halo-alquiloC1-4, halo-alcoxiC1-4, o ciano; R2 es H, halo, ciano, alquiloC1-4 o alcoxiC1-4; con la condición de que cuando R2 es H, R1 no está en la posición para; X es C o N; Y es C o N; R3 es alquiloC1-4; R4 es H, deuterio, o alquiloC1-4; o R3 y R4 pueden fusionarse para formar un grupo espiro carbociclilo C3-4; o una sal farmacéuticamente aceptable de éste.

Description

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DESCRIPCION
Derivados de imidazolidindiona
Esta invencion se refiere a nuevos compuestos, a composiciones farmaceuticas que los contienen y a su uso en terapia, en particular como agentes antipsicoticos.
Antecedentes de la invencion
La familia de canales de potasio regulados por voltaje Kv3 incluye cuatro miembros, Kv3.1, Kv3.2, Kv3.3, y Kv3.4. Los genes para cada uno de estos subtipos pueden generar multiples isoformas por corte y empalme alternativo, produciendo versiones con diferentes dominios C-terminales. Se han identificado trece isoformas en mairnferos hasta la fecha, pero las corrientes expresadas por estas variantes parecen identicas (Rudy y McBain, 2001, Trends in Neurosciences 24, 517-526). Los canales Kv3 son activados por despolarizacion de la membrana plasmatica a voltajes mas positivos que -20 mV; ademas, los canales se desactivan rapidamente tras la repolarizacion de la membrana. Estas propiedades bioffsicas aseguran que los canales se abren hacia el pico de la fase de despolarizacion del potencial de accion neuronal para iniciar la repolarizacion. La terminacion rapida del potencial de accion mediada por los canales Kv3 permite que la neurona se recupere mas rapidamente para alcanzar los potenciales de membrana por debajo del umbral, a partir de los cuales se pueden desencadenar mas potenciales de accion. Como resultado, la presencia de canales Kv3 en determinadas neuronas contribuye a su capacidad para disparar a altas frecuencias (Rudy y McBain, 2001, Trends in Neurosci. 24, 517-526). Los subtipos Kv3.1-3 son predominantes en el SNC, mientras que los canales Kv3.4 se encuentran predominantemente en el musculo esqueletico y neuronas simpaticas (Weiser et al., 1994, J. Neurosci. 14, 949-972). Los subtipos de canales Kv3.1-3 son expresados de forma diferencial por subclases de interneuronas en las zonas cerebrales cortical y del hipocampo (por ejemplo, Chow et al., 1999, J.Neurosci. 19, 9332-9345; Martina et al., 1998, J.Neurosci. 18, 81118125; McDonald y Mascagni, 2006, Neurosci. 138, 537-547, Chang et al., 2007, J. Comp. Neurol. 502, 953-972), en el talamo (por ejemplo, Kasten et al., 2007, J. Physiol. 584, 565-582), cerebelo (por ejemplo, Sacco et al., 2006, Mol. Cell. Neurosci. 33, 170-179), y nucleos auditivos del tronco cerebral (Li et al., 2001, J. Comp. Neurol. 437, 196-218).
La caracterizacion de ratones en los que se ha delecionado uno o mas subtipos de Kv3 muestra que la ausencia de Kv3.1 da lugar a actividad locomotora aumentada, actividad electroencefalografica alterada, y un patron de sueno fragmentado (Joho et al., 1999, J. Neurophysiol. 82, 1855-1864). La delecion de Kv3.2 conduce a una reduccion en el umbral convulsivo y actividad electroencefalografica cortical alterada (Lau et al., 2000, J.Neurosci. 20, 9071-9085). La delecion de Kv3.3 esta asociada con ataxia leve y deficiencias motoras (McMahon et al., 2004, Eur. J. Neurosci. 19, 3317-3327). La delecion doble de Kv3.1 y Kv3.3 da lugar a un fenotipo grave caracterizado por convulsiones espontaneas, ataxia, y una mayor sensibilidad a los efectos del etanol (Espinosa et al., 2001, J. Neurosci. 21, 66576665; Espinosa et al., 2008, J. Neurosci. 28, 5570-5581).
La farmacologfa conocida de los canales Kv3 es limitada. Se ha mostrado que el tetraetilamonio (TEA) inhibe los canales en concentraciones milimolares bajas (Rudy y McBain, 2001, Trends in Neurosci. 24, 517-526), y se ha mostrado que las toxinas sustancias depresoras de la sangre (BDS) de la anemona de mar, Anemonia sulcata (Diochot et al., 1998, J. Biol. Chem. 273, 6744-6749) inhiben selectivamente los canales Kv3 con una alta afinidad (Yeung et al., 2005, J.Neurosci. 25, 8735-8745). Ademas de los compuestos que actuan directamente en los canales Kv3, se ha mostrado que los agonistas de receptores que activan la protema quinasa A (PKA) y protema quinasa C (PKC) modulan las corrientes mediadas por Kv3 en zonas del cerebro espedficas, conduciendo a una reduccion en la capacidad de las neuronas para disparar a alta frecuencia (Atzori et al., 2000, Nat. Neurosci. 3, 791-798; Song et al., 2005, Nat Neurosci. 8, 1335-1342); estos estudios sugieren que la PKA y PKC pueden fosforilar espedficamente canales Kv3 de una forma espedfica de neurona, produciendo una reduccion en las corrientes mediadas por Kv3. No hay descripciones en la bibliograffa de compuestos o mecanismos bioqmmicos que modulen positivamente o activen los canales Kv3.
El trastorno bipolar, esquizofrenia, ansiedad y epilepsia son trastornos graves del sistema nervioso central que se han asociado con la funcion reducida de interneuronas inhibidoras y transmision del acido gamma-aminobutmco (GABA) (Reynolds et al., 2004, Neurotox. Res. 6, 57-61; Benes et al., 2008, PNAS, 105, 20935-20940; Brambilla et al., 2003, Mol. Psychiatry. 8, 721-37, 715; Aroniadou-Anderjaska et al., 2007, Amino Acids 32, 305-315; Ben-Ari, 2006, Crit. Rev. Neurobiol. 18, 135-144). Las celulas en cesta positivas para parvalbumina que expresan canales Kv3 en la corteza y el hipocampo tienen una funcion clave en la generacion de retroinhibicion en circuitos locales (Markram et al., 2004, Nat.Rev.Neurosci. 5, 793-807). Dada la dominancia relativa de entrada sinaptica excitadora frente a entrada inhibidora a las neuronas piramidales glutamatergicas en estos circuitos, el disparo rapido de interneuronas que suministran entrada inhibidora es esencial para asegurar la inhibicion equilibrada. Ademas, es necesaria la sincronizacion exacta de la entrada inhibidora para mantener la sincronizacion de la red, por ejemplo, en la generacion de oscilaciones de los potenciales de campo de frecuencia gamma que se han asociado con la funcion cognitiva (Fisahn et al., 2005, J. Physiol 562, 65-72; Engel et al., 2001, Nat. Rev. Neurosci. 2, 704-716). De forma notable, se ha observado una reduccion de las oscilaciones gamma en pacientes con esquizofrenia (Spencer et al., 2004, PNAS 101, 17288-17293). Por consiguiente, se pude esperar que los moduladores positivos de los canales Kv3 potencien las capacidades de disparo de grupos espedficos de neuronas de disparo rapido en el cerebro. Estos efectos pueden ser beneficiosos en trastornos asociados con la actividad anomala de estos grupos
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neuronales. US 4.675.403 describe compuestos, incluyendo aquellos con funcionalidad imidazolidindiona, como agentes antipsicoticos.
Ademas, se ha mostrado que los canales Kv3.2 son expresados por neuronas del nucleo supraquiasmatico (NSQ) el principal marcapasos circadiano en el SNC (Schulz y Steimer, 2009, CNS Drugs 23 Supl 2, 3-13). Hemos mostrado que la expresion de los canales Kv3.2 vana sobre un periodo de 24 horas; asf, la expresion de los canales Kv3.2 puede contribuir a cambios en las propiedades de disparo de neuronas en el NSQ y asf influir en el ritmo circadiano. Consecuentemente, los farmacos que modulan la actividad de los canales Kv3.2 podnan influir en el ritmo circadiano y asf ser utiles en el tratamiento de trastornos relacionados.
La hipoacusia representa una epidemia que afecta a aproximadamente 16% de la poblacion en Europa y Estados Unidos (Goldman y Holme, 2010, Drug Discovery Today 15, 253-255), con una prevalencia estimada de 250 millones de personas en todo el mundo (B.Shield, 2006, Evaluation of the social and economic costs of hearing impairment. Un artmulo para Hear-It AISBL:
www.hear-it.org/multimedia/Hear_It_Report_October_2006.pdf). A medida que la esperanza de vida continua aumentando, tambien lo hara el numero de personas que padecen trastornos auditivos. Ademas, se cree que el estilo de vida moderno puede exacerbar esta carga a medida que envejece la generacion mas joven. Las afecciones auditivas, incluyendo acufenos, tienen un efecto profundo en la calidad de vida, produciendo aislamiento social, depresion, dificultades en el trabajo y las relaciones, baja autoestima y discriminacion. Los canales ionicos regulados por voltaje de la familia de Kv3 son expresados en niveles altos en los nucleos auditivos del tronco cerebral (Li et al., 2001, J. Comp. Neurol. 437, 196-218) donde permiten el disparo rapido de neuronas que transmiten la informacion auditiva de las regiones coclear a la cerebral superior. Se observa la perdida de la expresion del canal Kv3.1 en neuronas auditivas centrales en ratones con deterioro auditivo (von Hehn et al., 2004, J. Neurosci. 24, 1936-1940), y se puede asociar una disminucion de la expresion de Kv3.1 con la hipoacusia en ratones envejecidos (Jung et al. 2005 Neurol. Res. 27, 436-440). Ademas, es probable que la plasticidad patologica de las redes del tronco cerebral auditivo contribuya a los smtomas de acufenos que experimentan muchas personas que padecen hipoacusia de distintos tipos. Estudios recientes han mostrado que la regulacion de la funcion y expresion de los canales Kv3.1 tiene una funcion principal en el control de la excitabilidad neuronal auditiva (Kaczmarek et al., 2005, Hearing Res. 206,133-145), sugiriendo que este mecanismo podna dar cuenta de algunos de los cambios plasticos que dan lugar a los acufenos. Finalmente, el smdrome del cromosoma X fragil y el autismo, a menudo estan asociados con hipersensibilidad a la entrada sensorial, incluyendo estfmulos auditivos. Descubrimientos recientes sugieren que la protema codificada por el gen FMR-I, cuya mutacion o ausencia da lugar al smdrome del cromosoma X fragil, puede regular directamente la expresion de los canales Kv3.1 en los nucleos auditivos del tronco cerebral (Strumbos et al., 2010, J. Neuroscience, en imprenta), sugiriendo que la mala regulacion de los canales Kv3.1 podna dar lugar a hiperacusia en pacientes que padecen el smdrome del cromosoma X fragil o autismo. Por consiguiente, proponemos que moleculas pequenas moduladoras de canales Kv3 en nucleos auditivos del tronco cerebral podnan tener un beneficio en el tratamiento de trastornos auditivos, incluyendo acufenos e hiperagudeza auditiva asociados con el smdrome del cromosoma X fragil y el autismo.
En un primer aspecto, por lo tanto, la invencion proporciona un compuesto de formula (la)
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en la que:
R1 es halo, alquiloC-M, alcoxiC-M, halo-alquiloC-M, halo-alcoxiC-M, o ciano;
R2 es H, halo, ciano, alquiloC-M o alcoxiCM; con la condicion de que cuando R2 es H, R1 no esta en la posicion para; X es C o N;
Y es C o N;
R3 es alquiloCM;
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R4 es H, deuterio, o alquiloCi-4; o R3 y R4 pueden fusionarse para formar un grupo espiro carbociclilo C3-4; o una sal farmaceuticamente aceptable de este.
En un segundo aspecto, la invencion proporciona un compuesto de formula (Ib)
imagen2
en la que:
R1 es halo, alquiloCi-4 o alcoxiCi-4, halo-alcoxiCi-4, ciano;
R2 es H, halo, alquiloCi-4 y alcoxiCi-4; con la condicion de que cuando R2 es H, Ri no esta en la posicion para; X es C o N;
Y es C o N;
R3 es alquiloCi-4;
R4 es H, deuterio, alquiloCi-4; o R3 y R4 pueden fusionarse para formar un grupo espiro carbociclilo C3-4; o una sal farmaceuticamente aceptable de este.
En un tercer aspecto, por lo tanto, la invencion proporciona un compuesto de formula (Ic)
imagen3
en la que:
R1 es halo, alquiloCi-4 o alcoxiCi-4;
R2 es H, halo, alquiloCi-4 y alcoxiCi-4; con la condicion de que cuando R2 es H, Ri no esta en la posicion para; X es C o N;
Y es C o N;
R3 es alquiloCi-4;
R4 es H, deuterio, alquiloCi-4; o R3 y R4 pueden fusionarse para formar un grupo espiro carbociclilo C3-4; o una sal farmaceuticamente aceptable de este.
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Tal y como se usa en la presente memoria mas adelante, "Formula (I)" significa una cualquiera de las Formulas (la), (lb), o (Ic).
En una realizacion de la invencion R1 es alcoxiCi-4. En otra realizacion de la invencion R1 es metoxi.
En una realizacion de la invencion R1 es alquiloCi-4. En otra realizacion de la invencion R1 es metilo. En una realizacion adicional de la invencion R1 es etilo. En una realizacion mas de la invencion R1 es propilo. En una realizacion mas de la invencion R1 es butilo.
En una realizacion de la invencion R1 es halo. En otra realizacion de la invencion R1 es cloro. En una realizacion adicional de la invencion R1 es fluor.
En una realizacion de la invencion R1 es halo-alcoxiC1-4. En otra realizacion de la invencion R1 es trifluorometoxi.
En una realizacion de la invencion R1 es halo-alquiloC1-4. En otra realizacion de la invencion R1 es trifluorometilo.
En una realizacion de la invencion R1 es ciano.
En una realizacion de la invencion, R2 es H.
En una realizacion de la invencion R2 es alquiloC1-4. En otra realizacion de la invencion R2 es metilo.
En una realizacion de la invencion R2 es halo. En otra realizacion de la invencion R2 es cloro. En una realizacion adicional de la invencion R2 es fluor.
En una realizacion de la invencion R2 es alquiloC1-4.
En una realizacion de la invencion R2 es ciano.

En una realizacion de la invencion X es C e Y es C.

En una realizacion de la invencion X es N e Y es C.

En una realizacion de la invencion X es N e Y es N.
En una realizacion de la invencion R3 es metilo. En otra realizacion de la invencion R3 es etilo. En una realizacion adicional de la invencion R3 es propilo. En una realizacion mas de la invencion R3 es butilo.
En una realizacion de la invencion R4 es H.
En una realizacion de la invencion R4 es deuterio.
En una realizacion de la invencion R4 es alquiloC1-4. En otra realizacion de la invencion R4 es metilo.
En una realizacion de la invencion R3 y R4 forman conjuntamente un espiro carbociclilo C3-4. En otra realizacion de la invencion R3 y R4 forman conjuntamente un espiro carbociclilo C3. En una realizacion mas de la invencion R3 y R4 forman conjuntamente un espiro carbociclilo C4.
En una realizacion de la invencion R3 es alquiloC1-4, R4 es H y la configuracion absoluta del centro estereogenico es R.
En una realizacion de la invencion R1 es alquiloC1-4, alcoxiC1-4, o halo-alcoxiC1-4; R2 es H, ciano o alquilo; X es N, Y es N o C, R3 es alquiloC1-4, y R4 es alquiloC1-4 o H; o una sal farmaceuticamente aceptable de este.
En una realizacion de la invencion R1 es propilo, butilo, metoxi, propoxi, o trifluorometoxi; R2 es H, ciano o metilo; X es N, Y es N o C, R3 es etilo, y R4 es metilo o H; o una sal farmaceuticamente aceptable de este.
En una realizacion de la invencion R1 es metoxi y R2 es metilo. En otra realizacion de la invencion R1 es metoxi en la posicion meta y R es metilo en la posicion para. En una realizacion mas de la invencion R es metoxi en la posicion meta, R2 es metilo en la posicion para, R3 es alquiloC1-4, R4 es H, R3 esta en la configuracion R. En una realizacion adicional de la invencion R1 es metoxi en la posicion meta, R2 es metilo en la posicion para, X es N, Y es C, R3 es alquiloC1-4, R4 es H y la configuracion absoluta del centro estereogenico es R. En una realizacion adicional mas de la invencion R1 es metoxi en la posicion meta, R2 es metilo en la posicion para, X es N, Y es C, R3 es etilo, R4 es H y la configuracion absoluta del centro estereogenico es R.
En una realizacion de la invencion el compuesto se selecciona del grupo que consiste en:
(5R)-5-metil-3-{4-[(3-metilfenil)oxi]fenil}-2,4-imidazolidindiona;
(5R)-5-metil-3-(4-{[3-(metiloxi)fenil]oxi}fenil)-2,4-imidazolidindiona;
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(5R)-3-(4-{[3-(etiloxi)feml]oxi}feml)-5-metil-2,4-imidazolidindiona;
(5R)-3-{4-[(3-cloro-5-fluorofeml)oxi]feml}-5-metil-2,4-imidazolidindiona;
(5R)-3-{4-[(3-cloro-4-fluorofeml)oxi]feml}-5-metil-2,4-imidazolidindiona;
(5S)-3-{4-[(3-cloro-4-fluorofenil)oxi]fenil}-5-metil-2,4-imidazolidindiona;
(5R)-5-metil-3-(4-{[2-metil-5-(metiloxi)feml]oxi}fenil)-2,4-imidazolidindiona;
(5R)-5-metil-3-(4-{[4-metil-3-(metiloxi)feml]oxi}feml)-2,4-imidazolidindiona;
(5R)-5-metil-3-(6-{[3-(1-metiletil)feml]oxi}-3-piridiml)-2,4-imidazolidindiona;
(5R)-5-metil-3-[6-({3-[(1-metiletil)oxi]feml}oxi)-3-pindiml]-2,4-imidazolidindiona;
(5R)-3-{6-[(2,5-dimetilfenil)oxi]-3-piridinil}-5-metil-2,4-imidazolidindiona;
(5R)-3-{6-[(2,3-dimetilfenil)oxi]-3-piridinil}-5-metil-2,4-imidazolidindiona;
(5R)-3-{6-[(2,6-dimetilfenil)oxi]-3-piridinil}-5-metil-2,4-imidazolidindiona;
(5R)-3-{6-[(2-etilfeml)oxi]-3-piridiml}-5-metil-2,4-imidazolidindiona;
(5R)-5-metil-3-(6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)-2,4-imidazolidindiona;
(5R)-5-metil-3-(6-{[2-metil-5-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)-2,4-imidazolidindiona;
(5R)-5-metil-3-(6-{[2-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)-2,4-imidazolidindiona;
(5R)-5-etil-3-(4-{[3-(metiloxi)fenil]oxi}fenil)-2,4-imidazolidindiona;
(5R)-5-etil-3-(6-{[4-metil-3-(metiloxi)feml)]oxi)-3-pindiml)-2,4-imidazolidindiona;
(5S)-5-etil-3-(6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)-2,4-imidazolidindiona;
(5R)-5-etil-3-(6-{[3-(1-metiletil)fenil]oxi}-3-piridinil)-2,4-imidazolidindiona;
5.5- dimetil-3-(4-{[3-(metiloxi)fenil]oxi}fenil)-2,4-imidazolidindiona; 3-{4-[(2,3-dimetilfenil)oxi]fenil}-5,5-dimetil-2,4-imidazolidindiona; 3-{6-[(2-etilfenil)oxi]-3-piridinil}-5,5-dimetil-2,4-imidazolidindiona;
3- {6-[(2,6-dimetilfenil)oxi]-3-piridinil}-5,5-dimetil-2,4-imidazolidindiona; (5R)-5-(1-metiletil)-3-(4-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}fenil)-2,4-imidazolidindiona; (5R)-5-metil-3-(2-{[3-(1-metiletil)fenil]oxi]-5-pirimidinil)-2,4-imidazolidindiona; (5R)-5-etil-3-(2-{[3-(etiloxi)-4-metilfenil]oxi}-5-pirimidinil)-2,4-imidazolidindiona; (5R)-5-(1,1-dimetiletil)-3-(6-{[4-metil-3-(metiloxi)feml]oxi}-3-pindiml)-2,4-imidazolidindiona; (5R)-5-etil-5-metil-3-(6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)-2,4-imidazolidindiona; 7-(6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)-5,7-diazaespiro[3.4]octano-6,8-diona; 6-(6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)-4,6-diazaespiro[2.4]heptano-5,7-diona;
4- {[5-(4,4-dimetil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil)-2-piridinil]oxi}-2-(1-metiletil)benzonitrilo; 4-{[5-(4,4-dimetil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil)-2-piridinil]oxi}-2-[(trifluorometil)oxi]benzonitrilo; 3-{6-[(4-fluoro-3-metilfenil)oxi]-3-piridinil}-5,5-dimetil-2,4-imidazolidindiona; 3-{6-[(4-fluoro-2-metilfenil)oxi]-3-piridinil}-5,5-dimetil-2,4-imidazolidindiona;
5.5- dimetil-3-(6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)-2,4-imidazolidindiona; (5R)-5-(1-metiletil)-3-(6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)-2,4-imidazolidindiona; 3-(6-{[2-(1,1-dimetiletil)fenil]oxi}-3-piridinil-5,5-dimetil-2,4-imidazolidindiona;
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3- (2-{[2-(1,1-dimetiletil)fenil]oxi}-5-pirimidinil)-5,5-dimetil-2,4-imidazolidindiona; (5R)-5-etil-5-metil-3-(2-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-5-pinmidiml)-2,4-imidazolidindiona; (5R)-5-etil-3-(2-{[3-(etiloxi)-4-metilfeml]oxi}-5-pinmidinil)-5-metil-2,4-imidazolidindiona;
5.5- dimetil-3-[6-({3-[(trifluorometil)oxi]fenil}oxi)-3-piridinil]-2,4-imidazolidindiona;
4- {[5-(4,4-dimetil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil)-2-piridinil]oxi}-3-etilbenzonitrilo;
2- cloro-4-{[5-(4,4-dimetil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil)-2-piridinil]oxi}benzonitrilo;
5.5- dimetil-3-[6-({4-metil-3-[(trifluorometil)oxi]fenil}oxi)-3-piridinil]-2,4-imidazolidindiona; 4-{[5-(4,4-dimetil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil)-2-piridinil]oxi}-2-(metiloxi)benzonitrilo; 4-{[5-(4,4-dimetil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil)-2-piridinil]oxi}-3-metilbenzonitrilo; 4-{[5-(4,4-dimetil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil)-2-piridinil]oxi}-3-(trifluorometil)benzonitrilo; 4-{[5-(4,4-dimetil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil)-2-piridinil]oxi)-2-etilbenzonitrilo; 4-{[5-(4,4-dimetil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil)-2-pirimidinil]oxi}-2-etilbenzonitrilo;
3- ciclopropil-4-{[5-(4,4-dimetil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil)-2-piridinil]oxi}benzonitrilo;
4- {[5-(4,4-dimetil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil)-2-piridinil]oxi}-3-(1,1 -dimetiletil)benzonitr^ilo;
2-[(ciclopropilmetil)oxi]-4-{[5-(4,4-dimetil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil)-2-piridinil]oxi}benzonitrilo; 4-{[5-(4,4-dimetil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil)-2-piridinil]oxi}-2-(etiloxi)benzonitrilo;
2- ciclopropil-4-{[5-(4,4-dimetil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil)-2-piridinil]oxi}benzonitrilo;
5.5- dimetil-3-[2-({4-metil-3-[(trifluorometil)oxi]fenil}oxi)-5-pirimidinil]-2,4-imidazolidindiona; 4-{[5-(4,4-dimetil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil)-2-pirimidinil]oxi}-3-(1,1 -dimetiletil)benzonitrilo; 4-{[5-(4,4-dimetil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil)-2-piridinil]oxi}-2-[(1-metiletil)oxi]benzonitrilo; 4-({5-[(4R)-4-etil-4-metil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil]-2-piridinil}oxi)-2-[(1-metiletil)oxi]benzomtrilo;
3- ciclopropil-4-({5-[(4R)-4-etil-4-metil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil]-2-piridinil}oxi)benzonitrilo;
4- ({5-[(4R)-4-etil-4-metil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil)-2-piridinil}oxi)-2-[(trifluorometil)oxi]benzonitrilo;
2- ciclopropil-4-({5-[(4R)-4-etil-4-metil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil]-2-piridinil}oxi)benzonitrilo; (5R)-5-etil-5-metil-3-[2-({4-metil-3-[(tnfluorometil)oxi]fenil}oxi)-5-pinmidiml]-2,4-imidazolidindiona;
3- (1,1-dimetiletil)-4-({5-[(4R)-4-etil-4-metil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil]-2-pirimidinil}oxi)benzonitrilo;
3- (1,1-dimetiletil)-4-({5-[(4R)-4-etil-4-metil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil]-2-piridinil}oxi)benzonitrilo;
4- {[4-(4,4-dimetil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil)fenil]oxi}-2-(metiloxi)benzonitrilo;
4-{[4-(4,4-dimetil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil)fenil]oxi}-2-(etiloxi)benzonitrilo; 4-({4-[(4R)-4-etil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil]fenil}oxi)-2-(etiloxi)benzonitrilo; 3-ciclopropil-4-({5-[(4R)-4-etil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil]-2-piridinil}oxi)benzonitrilo;
3- (1,1-dimetiletil)-4-({5-[(4R)-4-etil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil]-2-piridinil}oxi)benzonitrilo;
4- ({5-[(4R)-4-etil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil]-2-piridinil}oxi)-2-(metiloxi)benzonitrilo; 4-({4-[(4R)-4-etil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil]fenil}oxi)-2-(metiloxi)benzonitrilo;
2-[(ciclopropilmetil)oxi]-4-({5-[(4R)-4-etil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil]-2-piridinil}oxi)benzonitrilo; (5R)-5-etil-3-[6-({4-metil-3-[(trifluorometil)oxi]fenil}oxi)-3-piridinil]-2,4-imidazolidindiona;
2-ciclopropil-4-({5-[(4R)-4-etil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil]-2-piridinil}oxi)benzonitrilo;
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4-({5-[(4R)-4-etil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil)]-2-piridinil)}oxi)-2-(1-metiletil)benzonitrilo;
4-({5-[(4R)-4-etil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil]-2-piridinil}oxi)-2-(1-metiletil)benzonitrilo;
(5R)-5-etil-3-[2-({4-metil-3-[(trifluorometil)oxi]fenil}oxi)-5-pirimidinil]-2,4-imidazolidindiona;
4-({5-[(4R)-4-etil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil]-2-piridinil}oxi)-2-[(1-metiletil)oxi]benzonitrilo;
4-({5-[(4R)-4-etil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil]-2-piridinil}oxi)-3-metilbenzonitrilo;
4-({5-[(4R)-4-etil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil]-2-piridinil}oxi)-2-[(trifluorometil)oxi]benzonitrilo;
3- etil-4-({5-[(4R)-4-etil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil]-2-pirimidinil}oxi)benzonitrilo;
4- ({5-[(4R)-4-etil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil]-2-pirimidinil}oxi)-3-metilbenzonitrilo;
3- (1,1-dimetiletil)-4-({5-[(4R)-4-etil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil]-2-pirimidinil}oxi)benzonitrilo y
4- ({5-[(4R)-4-etil-4-metil)-2,5-dioxo-1-imidazolidinil]-2-piridinil}oxi)-2-(1-metiletil)benzonitrilo o una sal farmaceuticamente aceptable de este.
En una realizacion de la invencion, el compuesto se selecciona del grupo que consiste en: (5R)-5-etil-3-(6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinilo;
(5R)-5-etil-5-metil-3-(6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)-2.4-imidazolidindiona;
4-({5-[(4R)-4-etil-4-metil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil]-2-piridinil}oxi)-2-[(trifluorometil)oxi]benzonitrilo;
(5R)-5-etil-5-metil-3-[2-({4-metil-3-[(trifluorometil)oxi]fenil}oxi)-5-pirimidinil]-2,4-imidazolidindiona;
3- (1,1-dimetiletil)-4-({5-[(4R)-4-etil-4-metil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil]-2-piridinil}oxi)benzonitrilo; (5R)-5-etil-3-[6-({4-metil-3-[(trifluorometil)oxi]fenil}oxi)-3-piridinil]-2,4-imidazolidindiona;
4- ({5-[(4R)-4-etil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil]-2-piridinil}oxi)-2-(1-metiletil)benzonitrilo; 4-({5-[(4R)-4-etil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil]-2-piridinil}oxi)-2-(1-metiletil)benzonitrilo; (5R)-5-etil-3-[2-({4-metil-3-[(trifluorometil)oxi]fenil}oxi)-5-pirimidinil]-2,4-imidazolidindiona; 4-({5-[(4R)-4-etil)-2,5-dioxo-1-imidazolidinil]-2-piridinil}oxi)-2-[(1-metiletil)oxi]benzonitrilo; 4-({5-[(4R)-4-etil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil]-2-piridinil}oxi)-2-[(trifluorometil)oxi]benzonitrilo; 3-(1,1-dimetiletil)-4-({5-[(4R)-4-etil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil]-2-pirimidinil}oxi)benzonitrilo; o una sal farmaceuticamente aceptable de este.
Para evitar dudas, las realizaciones de una cualquiera de las caractensticas de los compuestos de la invencion se puede combinar con cualquier realizacion de otra caractenstica de los compuestos de la invencion para crear una realizacion adicional.
El termino "halo" o "halogeno" tal y como se usa en la presente memoria, se refiere a un atomo de fluor, cloro, bromo o yodo.
Cuando el compuesto contiene un grupo alquilo(C1-4), sea solo o formando parte de un grupo mayor, por ejemplo, alcoxi(C-i-4), el grupo alquilo puede ser de cadena lineal, ramificada, cfclica o una combinacion de los mismos. Los ejemplos de alquilo(C1-4) son metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo, terc-butilo, ciclopropilo y ciclobutilo. Un ejemplo de alcoxi(C-i_4) es metoxi. Un ejemplo de halo-alquiloC-M es trifluorometilo. Un ejemplo de halo-alcoxiC-M es trifluorometoxi.
Se apreciara que para usar en medicina, las sales de los compuestos de formula (I) deben ser farmaceuticamente aceptables. Las sales farmaceuticamente aceptables adecuadas seran evidentes para los expertos en la tecnica. Las sales farmaceuticamente aceptables incluyen las descritas por Berge, Bighley y Monkhouse J.Pharm.Sci. (1977) 66, p 1-19. Dichas sales farmaceuticamente aceptables incluyen sales de adicion de acido formadas con acidos inorganicos, por ejemplo, acido clorhidrico, bromtndrico, sulfurico, mtrico o fosforico y acidos organicos, por ejemplo, acido succmico, maleico, acetico, fumarico, cftrico, tartarico, benzoico, p-toluenosulfonico, metanosulfonico o naftalenosulfonico. Otras sales, por ejemplo, oxalatos o formatos, se pueden usar, por ejemplo, para aislar los compuestos de formula (I) y estan incluidas dentro del alcance de esta invencion.
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Algunos de los compuestos de formula (I) pueden formar sales de adicion de acido con uno o mas equivalentes del acido. La presente invencion incluye en su alcance todas las posibles formas estequiometricas y no estequiometricas.
Los compuestos de formula (I) se pueden preparar en forma cristalina o no cristalina y, si es cristalina, pueden estar opcionalmente solvatados, por ejemplo, como el hidrato. Esta invencion incluye en su alcance solvatos estequiometricos (por ejemplo, hidratos) asf como compuestos que contienen cantidades variables del disolvente (por ejemplo, agua).
Se entendera que la invencion incluye derivados farmaceuticamente aceptables de los compuestos de formula (I) y que estos estan incluidos en el alcance de la invencion.
Tal y como se usa en la presente memoria "derivado farmaceuticamente aceptable" incluye cualquier ester o sal farmaceuticamente aceptable de dicho ester de un compuesto de formula (I) que, tras la administracion al receptor, es capaz de proporcionar (directa o indirectamente) un compuesto de formula (I) o un metabolito activo o resto del mismo.
Debe entenderse que la presente invencion abarca todos los isomeros de formula (I) y sus derivados farmaceuticamente aceptables, incluyendo todas las formas geometricas, tautomeras y opticas, y mezclas de las mismas (por ejemplo, mezclas racemicas). Cuanto estan presentes centros quirales adicionales en los compuestos de formula (I), la presente invencion incluye en su alcance todos los posibles diastereoisomeros, incluyendo mezclas de los mismos. Las diferentes formas isomeras se pueden separar o resolver unas de otras por metodos convencionales, o cualquier isomero dado se puede obtener por metodos sinteticos convencionales o por smtesis estereoespedfica o asimetrica.
La presente invencion tambien incluye compuestos isotopicamente marcados que son identicos a los citados en la formula (I) salvo por el hecho de que uno o mas atomos son reemplazados por un atomo que tiene una masa atomica o numero masico diferente de la masa atomica o numero masico encontrado mas habitualmente en la naturaleza. Los ejemplos de isotopos que se pueden incorporar en los compuestos de la invencion incluyen isotopos de hidrogeno, carbono, nitrogeno, oxfgeno, fluor, yodo y cloro tales como 3H, 11C, 14C, 18F, 123I o 125I.
Los compuestos de la presente invencion y sales farmaceuticamente aceptables de dichos compuestos que contienen los isotopos mencionados antes y/u otros isotopos de otros atomos estan dentro del alcance de la presente invencion. Los compuestos marcados con isotopos de la presente invencion, por ejemplo aquellos en los que se han incorporado isotopos radiactivos tales como 3H o 14C, son utiles en ensayos de distribucion tisular de farmaco y/o sustrato. Los isotopos tritiados, es decir, 3H, y carbono-14, es decir 14C, se prefieren particularmente por su facilidad de preparacion y detectabilidad. Los isotopos 11C y 18F son particularmente utiles en PET (tomograffa de emision de positrones).
Puesto que los compuestos de formula (I) estan destinados a uso en composiciones farmaceuticas, se entendera facilmente que cada uno se proporciona preferiblemente en forma sustancialmente pura, por ejemplo, al menos60% puros, mas adecuadamente al menos 75% puros y preferiblemente al menos 85%, en especial al menos 98% puros (los % estan en peso por peso). Las preparaciones impuras de los compuestos se pueden usar para preparar las formas mas puras usadas en las composiciones farmaceuticas.
Tambien se describe un proceso para la preparacion de compuestos de formula (I) y derivados de estos. Los siguientes esquemas detallan algunas rutas sinteticas para los compuestos de la invencion. En los siguientes esquemas, los grupos reactivos se pueden proteger con grupos protectores y desproteger de acuerdo con tecnicas bien establecidas.
En general, los compuestos de formula (I) pueden prepararse segun tecnicas de smtesis organica conocidas por los expertos en este campo, asf como por metodos representativos expuestos en los Ejemplos.
Los compuestos de formula (I), y sales y solvatos de los mismos, se pueden preparar por los metodos generales senalados en lo sucesivo en la presente memoria. En la siguiente descripcion, los grupos Ri, R2, X, Y, R3, R4tienen los significados previamente definidos para los compuestos de formula (I) salvo que se indique otra cosa.
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etapa (ii): Los compuestos de formula (I) se pueden preparar por ciclacion de los compuestos de formula (II) en un disolvente, por ejemplo, diclorometano con un agente de carbonilacion, por ejemplo, trifosgeno, preferiblemente prediluido en el mismo disolvente y anadido en un segundo tiempo a 0°C en presencia de una base, por ejemplo, trietilamina. En algunos casos, se podna usar acetato de etilo como disolvente. Opcionalmente, se puede anadir una 5 cantidad catalttica de DMAP.
etapa (i): Los compuestos de formula (II) se pueden preparar a partir de compuestos de formula (III) por eliminacion del grupo protector BOC en condiciones acidas, por ejemplo, TFA en un disolvente, por ejemplo, diclorometano por ejemplo a 0°C, RT.
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10 etapa (ii): Los compuestos de formula (III) se pueden preparar a partir de anilinas de formula (IV) y aminoacidos N- protegidos de formula (V) por acoplamiento amfdico en presencia de una base, por ejemplo, DIPEA y un agente de acoplamiento, por ejemplo, HATU, TBTU, HBTU en un disolvente tal como N,N-dimetilformamida.
etapa (i): Algunos aminoacidos protegidos con Boc en N de formula (V) estan disponibles comercialmente, por ejemplo, A/-{[(1,1-dimetiletil)oxi]carbonil}-2-metilalanina, por ejemplo, en Aldrich, A/-{[(1,1-dimetiletil)oxi]carbonil}-D- 15 alanina, por ejemplo, en Aldrich, acido (2R)-2-({[(1,1-dimetiletil)oxi]carbonil}amino)butanoico, por ejemplo, en Bachem UK Ltd, W-{[(1,1-dimetiletil)oxi]carbonil}-D-isovalina, por ejemplo, en Nagase & Co Ltd. Los aminoacidos protegidos en N de formula (V) tambien pueden prepararse a partir de compuestos de formula (VI) por ejemplo con Boc-anhndrido en presencia de una base, por ejemplo, NaHCO3 acuoso, hidroxido de sodio acuoso en un disolvente tal como THF, metanol, dioxano. Estan disponibles muchas descripciones en la bibliograffa (por ejemplo, 20 Tetrahedron, 2006, 62(42), 9966 - 9972)
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Algunas anilinas (IV) estan disponibles comercialmente, por ejemplo, 4-{[3-(metiloxi)fenil]oxi}anilina, por ejemplo, en ChemBridge Corporation.
Otras anilinas pueden prepararse a partir de los compuestos nitro (VII). Las condiciones de reaccion adecuadas para 25 transformar (VII) en (IV) son, por ejemplo:
- reduccion en presencia de Fe en polvo y cloruro de amonio en un disolvente tal como etanol o una mezcla de THF/agua con calentamiento o no
- reduccion en presencia de Zn en polvo y cloruro de amonio en un disolvente tal como etanol o una mezcla de THF/agua con calentamiento o no
30 - reduccion con cloruro de estano hidrato en un disolvente tal como acetato de etilo, etanol con calentamiento, por
ejemplo, a reflujo.
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Las anilinas de formula (IVa), en la que R1 es (alquiloC-M o alcoxiC1-4), R2 es (H, alquiloC1-4 o alcoxiCi-4) y (X,Y) t (N,N) pueden prepararse a partir de los compuestos nitro (Vila) con las condiciones descritas en el esquema 3 o con las condiciones siguientes:
5 - hidrogenacion con H2 con un catalizador tal como Pd/C en un disolvente tal como metanol, etanol, THF, una
mezcla metanol/acetato de etilo con calentamiento o no
- reduccion con hidrazina hidrato y una cantidad catalttica de Pd/C en un disolvente tal como etanol con calentamiento
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10 Los compuestos de formula (Vllb) en la que X=Y=C o (X=C, Y=N) o (X=N, Y=C) pueden prepararse por sustitucion aromatica nucleofflica. En esta reaccion se usan un derivado nitro de formula (Vlllb) en el que Z=F (habitualmente cuando [X=C, Y=C]) o Z=CI (habitualmente cuando [X=N, Y=C] o [X=C, Y=N]) y un fenol de formula (IX) en presencia de una base en un disolvente tal como
- carbonato de potasio, por ejemplo, en N,N-dimetilformamida o en acetonitrilo con calentamiento regular o con 15 microondas
- butoxido terciario de potasio, por ejemplo, en DMSO,
- hidruro de sodio, por ejemplo, en N,N-dimetilformamida con calentamiento regular, por ejemplo, a reflujo, o con irradiacion microondas. Opcionalmente, antes de la adicion del derivado nitro (VIII), el fenol (IX) puede pre-agitarse en presencia del disolvente y la base.
20 Los compuestos de formula (VIIc) en la que X=Y=N pueden prepararse por sustitucion aromatica nucleofflica a partir de fenol (IX) y compuesto nitro (VIIIc) en el que habitualmente Z=CI. La base usada es, por ejemplo
- carbonato de potasio, por ejemplo, en N,N-dimetilformamida o acetonitrilo a temperatura ambiente
- trietilamina, por ejemplo, en acetonitrilo a reflujo
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25 Los fenoles de formula (IXa), en la que R1 y R2 son grupos compatibles con condiciones de nitrosacion tfpicas, pueden prepararse usando las anilinas (X) correspondientes con nitrito de sodio en presencia de un exceso de acido tal como acido sulfurico en un disolvente tal como agua, a 0°C o 0°C- 5°C en un primer momento y con calentamiento en un segundo momento, por ejemplo, a 40°C - 90°C.
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Las anilinas de formula (Xa) (en la que R1 y R2 son grupos no sensibles a condiciones de nitrosacion t^picas) pueden prepararse a partir de los derivados nitro de formula (XI) (en la que R1 y R2 son grupos no sensibles a condiciones de nitrosacion tipicas) usando, por ejemplo, las condiciones de reduccion habituales
5 - hidrogenacion con H2 en un disolvente, tal como metanol en presencia de un catalizador metalico tal como Nfquel
de Raney o Pd/C tipicamente a temperatura ambiente.
- reduccion en presencia de Fe en polvo y cloruro de amonio en un disolvente tal como una mezcla de THF agua o etanol, por ejemplo a temperatura ambiente.
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10 Algunos derivados nitro de formula (XI) estan disponibles comercialmente.
Algunos otros derivados nitro tales como el compuesto de formula (Xla) en la que R2 es un grupo etoxi pueden prepararse a partir del derivado nitro-fenol correspondiente de formula (XII) por alquilacion, por ejemplo, con yoduro de etilo en presencia de una base tal como carbonato de potasio en acetona con calentamiento, por ejemplo, a reflujo.
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Los fenoles de formula (IXb), en la que R1 es H y R2 es un grupo alcoxiCi-4 (R5 es un grupo alquiloCi-4) pueden prepararse por monoalquilacion a partir de los compuestos de formula (XIII) usando, por ejemplo, el yodo-alquilo adecuado en presencia de una base tal como hidroxido de potasio en un disolvente tal como etanol.
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20 etapa (iii): Los compuestos de formula (Ia), correspondientes a los compuestos de formula (I) en la que X=C, Y=C pueden prepararse a partir de los compuestos de formula (XIV) por calentamiento, por ejemplo, a 100°C en HCl acuoso.
etapa (ii): Los compuestos de formula (XIV) pueden prepararse a partir de los isocianatos de formula (XV) en la que X=C, Y=C por adicion de aminoacidos de formula (VI) en presencia de una base, por ejemplo, DIPEA en un disolvente, por ejemplo, THF, por ejemplo, a temperature ambiente.
etapa (i): Algunos isocianatos de formula (XV) estan disponibles comercialmente, otros pueden prepararse a partir 5 de las anilinas de formula (IVb) usando trifosgeno y opcionalmente trietilamina en un disolvente tal como diclorometano a temperatura ambiente. Las anilinas (IVb) correspondientes a las anilinas de formula (IV) con X=C, Y=C pueden prepararse con condiciones similares a las descritas previamente.
Opcionalmente las dos etapas (ii) y (iii) pueden llevarse a cabo en un solo recipiente; en un primer momento, una adicion de isocianatos (XV) sobre aminoacidos de formula (VI) en presencia de una base, por ejemplo, piridina o 10 trietilamina en un disolvente, por ejemplo, N.N-dimetilformamida o una mezcla diclorometano/DMF (por ejemplo, a 35°C), despues en un segundo momento adicion de HCl con calentamiento (por ejemplo, a 100°C). Los isocianatos pueden prediluirse en un disolvente o no, por ejemplo, en THF.
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Los compuestos de formula (Ib) correspondientes a los compuestos de formula (I) en la que X=C, Y=C y R3=H 15 pueden prepararse a partir de anilinas (IVb) [correspondientes a las anilinas de formula (IV) en la que X=C, Y=C] en un protocolo con un solo recipiente.
En un primer momento, el amino ester de formula (XVI) puede protegerse en N por un grupo Boc por reaccion con Boc-anhndrido en presencia de una base, por ejemplo, DMAP en un disolvente, por ejemplo, diclorometano. En un segundo momento, esta disolucion puede hacerse reaccionar con anilinas (IVb) con calentamiento, por ejemplo, a 20 35°C y en un tercer momento la ciclacion puede estimularse por la adicion de HCl y calentamiento, por ejemplo, a
100°C.
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etapa (ii): Puede usarse una sustitucion nucelofflica para preparar compuestos de formula (Ic) correspondientes a compuestos de formula (I) en la que X=N, Y=C R3=R4=Me y (R1, R2) son combinaciones de grupos tales como, por 25 ejemplo, (p-CN, m-iPr), (H, m-OCF3), (p-F, m-CH3), (p-F, o-CH3), (p-CN, m-CI), (p-CN, o-Et), (p-Me, m-OCF3), (p-CN, m-OMe). Esta reaccion usa el fenol correspondiente de formula (IXc), un compuesto fluoro de formula (XVII) en presencia de una base, por ejemplo, carbonato de potasio calentando, por ejemplo, a 120°C en un disolvente con alto punto de ebullicion, por ejemplo, DMF.
etapa (i): El compuesto fluoro de formula (XVII) puede prepararse por N-arilacion de 5,5-dimetil-2,4- 30 imidazolidindiona (XVIII) con el acido arilboronico (XIX), estimulado, por ejemplo, por acetato de cobre (II) usando una base, por ejemplo, piridina y un disolvente tal como diclorometano, por ejemplo, a temperatura ambiente, abierto al aire.
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etapa (ii): Los compuestos de formula (Id) correspondientes a los compuestos de formula (I) en la que X=N, Y=C o X=C, Y=C o X=N, Y=N y R3=R4=Me pueden prepararse a partir de ureas de formula (XXa) por ciclacion en presencia de una base, por ejemplo, metoxido de sodio calentando, por ejemplo, a 65°C en disolvente tal como metanol.
5 etapa (i): Las ureas de formula (XXa) pueden prepararse por adicion de una disolucion que contiene una anilina de formula (IVc) (correspondiente a las anilinas de formula IV en la que X=N, Y=C o X=C, Y=C o X=N, Y=N) y una base tal como trietilamina en un disolvente tal como EtOAc a una disolucion de un agente de carbonilacion tal como trifosgeno en un disolvente tal como EtOAc, por ejemplo, a 0°C, seguido de la adicion de trietilamina y ester (XXIa). Opcionalmente, el ester (XXIa) puede pre-disolverse en un disolvente tal como EtOAc, anadiendose la trietilamina a 10 esta pre-disolucion. Opcionalmente, puede anadirse algo de trietilamina adicional y ester (XXIa) o algo de trifosgeno adicional. El ester (XXIa) necesario puede prepararse a partir del aminoacido correspondiente, usando metanol, calentando la mezcla de reaccion, por ejemplo, a reflujo, despues de la adicion de cloruro de tionilo.
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etapa (ii): Los compuestos de formula (Ie) correspondientes a compuestos de formula (I) en la que X=N, Y=C o 15 X=C, Y=C o X=N, Y=N y R3=Me, R4=Et pueden prepararse a partir de ureas de formula (XXb) por ciclacion en presencia de una base, por ejemplo, metoxido de sodio calentando, por ejemplo, a 65°C en disolvente tal como metanol.
etapa (i): Las ureas de formula (XXb) pueden prepararse por adicion de una disolucion que contiene una anilina de formula (IVc) (correspondiente a las anilinas de formula IV en la que X=N, Y=C o X=C, Y=C o X=N, Y=N) y una base 20 tal como trietilamina o diisopropiletilamina en un disolvente tal como EtOAc o diclorometano a una disolucion de un agente de carbonilacion tal como trifosgeno en un disolvente tal como EtOAc o diclorometano, por ejemplo, a 0°C, seguido de la adicion de trietilamina o diisopropiletilamina y ester (XXIb). Opcionalmente, el ester (XXIb) puede pre- disolverse en un disolvente tal como EtOAc o diclorometano, anadiendose la trietilamina o diisopropiletilamina a esta pre-disolucion. Opcionalmente, puede anadirse algo de trietilamina o diisopropiletilamina adicional y ester (XXIb) o 25 algo de trifosgeno adicional. El ester (XXIb) necesario puede prepararse a partir del aminoacido correspondiente, usando metanol, calentando la mezcla de reaccion, por ejemplo, a reflujo, despues de la adicion de cloruro de tionilo.
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etapa (iii): Los fenoles de formula (IX) pueden prepararse a partir de compuestos de formula (XXII) por eliminacion del grupo bencilo por ejemplo en presencia de hidrogeno (por ejemplo, P= 1 atm) con un catalizador tal como Pd/C 30 en un disolvente tal como metanol, una mezcla de acetato de etilo/etanol etc.
etapa (ii): Los compuestos de formula (XXIIa) correspondientes a compuestos de formula (XXII) en la que [R1; R2] son por ejemplo [(p-CN; o-Me o o-Et) o (p-Me o p-Et; m-OCF3)] pueden prepararse por acoplamiento de Negishi usando el intermedio organocinc pre-formado adecuado en disolucion (por ejemplo, en THF), entonces Pd(tBu3P)2 y el compuesto bromo correspondiente (XXIII) en un disolvente tal como THF. El intermedio organocinc puede 5 prepararse por adicion de una disolucion de dicloruro de cinc en la disolucion de bromuro de alquil magnesio adecuada o por adicion inversa de la disolucion de bromuro de alquil magnesio en la disolucion de dicloruro de cinc, por ejemplo, a -15°C, 0°C o r.t. en disolventes tales como THF, dietil eter. Una disolucion del compuesto bromo (XXIII), por ejemplo, en THF puede anadirse, por ejemplo, a 0°C al intermedio organocinc o inversamente la disolucion del intermedio organocinc puede anadirse a una disolucion del compuesto bromo (XXIII) pre-calentada, 10 por ejemplo, a 60°C. Opcionalmente, puede anadirse algo de Pd(tBu3P)2 adicional o algo de intermedio organocinc pre-formado adicional.
etapa (i): El compuesto bromo de formula (XXIII) puede prepararse a partir de compuestos de formula (XXIV) por bencilacion con haluro de bencilo, por ejemplo, bromuro de bencilo en presencia de una base, por ejemplo, carbonato de potasio, en un disolvente tal como acetona calentando, por ejemplo, a 50°C.
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Los compuestos de formula (VIIc) [correspondientes a compuestos de formula (VII) en la que X=N, Y=C o X=N, Y=N, R1=CN y R2= meta- u orto- (Me, Et o ciclopropilo)] pueden prepararse por acoplamiento de Negishi usando el intermedio organocinc pre-formado adecuado en disolucion (por ejemplo, en THF), entonces Pd(tBu3P)2 y los compuestos halo correspondientes (VIId) [correspondientes a compuestos de formula (VII) en la que R1=CN y R2= 20 meta- u orto-halogeno tal como bromo y yodo)] en un disolvente tal como THF. El intermedio organocinc puede
prepararse por adicion de una disolucion de dicloruro de cinc en la disolucion de bromuro de alquil magnesio adecuada o por adicion inversa de la disolucion de bromuro de alquil magnesio en la disolucion de dicloruro de cinc, por ejemplo, a -15°C, 0°C o temperatura ambiente en disolventes tales como THF, dietil eter. Una disolucion del compuesto halo (VIId), por ejemplo, en THF puede anadirse, por ejemplo, a 0°C al intermedio organocinc o 25 inversamente la disolucion del intermedio organocinc puede anadirse a una disolucion del compuesto halo (VIId) pre- calentada, por ejemplo, a 60°C. Opcionalmente, puede anadirse algo de Pd(tBu3P)2 adicional o algo de intermedio organocinc pre-formado adicional.
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Los compuestos de formula (XXV) en la que X=N, Y=C, R- para-CN y R5= meta-(ciclopropilo), meta-isopropenilo] 30 pueden prepararse por acoplamiento de Suzuki usando el acido boronico o ester boronico correspondiente, una base tal como trifosfato de potasio, un sistema que contiene un catalizador de paladio y un ligando tal como (Pd(OAc)2 / PCy3) o (Pd(tBu3)2, en un disolvente tal como DMF, una mezcla (tolueno/agua) etc calentando, por ejemplo, a 110°C opcionalmente con irradiacion microondas.
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35 El fenol de formula (IXc) [correspondiente a compuesto de formula (IX) en la que R1- para-CN y R6= meta-I u orto- Me] puede prepararse a partir de fluoroaromaticos de formula (XXVI), usando trimetilsilanolato de potasio calentando, por ejemplo, a una temperatura que vana de r.t. a 70°C en un disolvente tal como acetonitrilo.
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etapa ii: El fenol de formula (IXd) [correspondiente a compuesto de formula (IX) en la que R1= para-CN y R2=orfo- tBu] puede prepararse a partir de compuestos de formula (XXVII) usando hidrocloruro de hidroxilamina en acido acetico, calentando, por ejemplo, a reflujo.
5 etapa i: El compuesto de formula (XXVII) puede prepararse por una formilacion de Reimer-Tiemann empezando a partir del compuesto de formula (XXVIII) en un disolvente tal como una mezcla MeOH/agua, usando una base hidroxido tal como hidroxido de sodio en agua, calentando, por ejemplo, a 60°C y anadiendo cloroformo.
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etapa ii: Los compuestos de formula (Vllf) [correspondientes a compuestos de formula (VII) en la que X=C, Y=N o 10 X=C, Y=C y R1= para-CN y R2=OR7 con R7=alquiloCi-4] pueden prepararse a partir de compuestos de formula (XXIX) usando como agente alquilante un derivado halo adecuado, una base tal como carbonato de potasio en un disolvente tal como DMF, por ejemplo, a temperatura que vana de r.t. a 60°
etapa i: Los compuestos de formula (XXIX) pueden prepararse a partir de compuestos de formula (XXX) y electrofilos (VIII), en la que Z= F o CI de una manera similar a la descrita en el esquema 5.
15 Esquema 21
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El fenol de formula (IXe) puede prepararse a partir del compuesto de formula (XXXI), usando un agente desmetilante tal como BBr3, en un disolvente tal como diclorometano o dicloroetano a una temperatura adecuada que vana de r.t. a 100°C opcionalmente con irradiacion microondas.
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etapa iii: Los compuestos de formula (IIIa) [correspondiente a compuestos de formula (III) en la que X=C, Y=N y R1 = para-CN y R2=iPr] pueden prepararse a partir de compuestos de formula (XXXII) por reduccion con hidrogeno (P= 1 atm) en presencia de un catalizador tal como Pd/C, en un disolvente tal como metanol.
etapa ii, i: Los compuestos de formula (XXXII) pueden prepararse en 2 etapas a partir de compuestos nitro de 25 formula (XXXIII) usando una manera similar a la descrita en los esquemas 3, 2 (por ejemplo, reduccion con Fe/cloruro de amonio y acoplamiento).
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etapa i: Los compuestos de formula (XXXIV) en la que X=N, Y=N pueden prepararse por acoplamiento de Suzuki usando el acido metil boronico, una base tal como trifosfato de potasio, un sistema que contiene un catalizador de paladio y un ligando tal como (Pd(OAc)2 / PCy3) o (Pd(fBu3^) en un disolvente tal como DMF calentando, por ejemplo a 110°C opcionalmente con irradiacion microondas.
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etapa i: Los compuestos de formula (le) pueden prepararse a partir de compuestos de formula (XXXV) por reduccion con hidrogeno (P= 1 atm) en presencia de un catalizador tal como Pd/C, en un disolvente tal como metanol.
La presente invencion proporciona compuestos de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable de estos para usar en terapia.
Los compuestos de formula (I) o sus sales farmaceuticamente aceptables se pueden usar para el tratamiento o profilaxis de una enfermedad o trastorno donde se requiere un modulador de los canales Kv3.1 o Kv3.2 o Kv3.1 y Kv3.2. Tal y como se usa en la presente memoria, un modulador de Kv3.1 o Kv3.2 o Kv 3.1 y Kv3.2 es un compuesto que altera las propiedades de estos canales, sea de forma positiva o negativa.
Las enfermedades o afecciones que se pueden mediar por modulacion de los canales Kv3.1 y/o Kv3.1 se pueden seleccionar de la siguiente lista. Los numeros entre parentesis despues de las enfermedades citadas a continuacion, se refieren al codigo de clasificacion en el Manual diagnostico y estadfstico de los trastornos mentales ("Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders"), 4a edicion, publicado por la Asociacion de psiquiatna americana (American Psychiatric Association) (DSM-IV) y/o la Clasificacion internacional de enfermedades, 10a edicion (ICD- 10).
Los compuestos de formula (I) o sus sales farmaceuticamente aceptables se pueden usar para el tratamiento o profilaxis de trastornos de depresion y del estado de animo, que incluyen episodio de depresion mayor, episodio maniaco, episodio mixto y episodio hipomaniaco; trastornos depresivos que incluyen trastorno depresivo mayor, trastorno distfmico (300.4), trastorno depresivo no especificado de otra manera (311); trastornos bipolares que incluyen trastorno bipolar I, trastorno bipolar II (episodios depresivos mayores recurrentes con episodios hipomaniacos) (296.89), trastorno ciclotfmico (301.13) y trastorno bipolar no especificado de otra manera (296.80); otros trastornos del estado de animo incluyendo trastorno del estado de animo debido a una afeccion medica general (293.83) (que incluye los subtipos con smtomas depresivos, con episodio similar al depresivo mayor, con smtomas maniacos y con smtomas mixtos), trastorno del estado de animo inducido por sustancias (que incluye los subtipos con smtomas depresivos, con smtomas maniacos y con smtomas mixtos) y trastorno del estado de animo no especificado de otra manera (296.90); trastorno afectivo estacional.
Los compuestos de formula (I) o sus sales farmaceuticamente aceptables se pueden usar para el tratamiento o profilaxis de la esquizofrenia que incluye los subtipos de tipo paranoide (295.30), de tipo desorganizado (295.10), de tipo catatonico (295.20), de tipo no diferenciado (295.90) y de tipo residual (295.60); trastorno esquizofreniforme (295.40); trastorno esquizoafectivo (295.70) que incluye los subtipos de tipo bipolar y de tipo depresivo; trastorno delirante (297.1) que incluye los subtipos de tipo erotomamaco, de tipo delirio de grandeza, celotipia, de tipo persecutorio, de tipo somatico, de tipo mixto y de tipo no especificado; trastorno psicotico breve (298.8); trastorno psicotico compartido (297.3); trastorno psicotico debido a una afeccion medica generalizada que incluye los subtipos con delirios y con alucinaciones; trastorno psicotico inducido por sustancias, que incluye los subtipos con delirios
(293.81) y con alucinaciones (293.82); y trastorno psicotico no especificado de otra manera (298.9).
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Los compuestos de formula (I) o sus sales farmaceuticamente aceptables se pueden usar para el tratamiento o profilaxis de trastornos de ansiedad que incluyen crisis de angustia; trastorno de angustia que incluye trastorno de angustia sin agorafobia (300.01) y trastorno de angustia con agorafobia (300.21); agorafobia; agorafobia sin antecedentes de trastorno de angustia (300.22), fobia espedfica (300.29, anteriormente fobia simple) que incluye los subtipos de tipo animal, de tipo ambiental, de tipo sangre-inyecciones-dano, de tipo situacional y otros tipos), fobia social (trastorno de ansiedad social (300.23), trastorno obsesivo-compulsivo (300.3), trastorno por estres postraumatico (309.81), trastorno por estres agudo (308.3), trastorno de ansiedad generalizada (300.02), trastorno de ansiedad debido a afeccion medica general (293.84), trastorno de ansiedad inducido por sustancias, trastorno de ansiedad por separacion (309.21), trastorno de adaptacion con ansiedad (309.24) y trastorno de ansiedad no especificado de otra manera (300.00).
Los compuestos de formula (I) o sus sales farmaceuticamente aceptables se pueden usar para el tratamiento o profilaxis de trastornos relacionados con sustancias que incluye trastornos por uso de sustancias tales como dependencia de sustancias, deseo de consumo de sustancias y abuso de sustancias; trastornos inducidos por sustancias tales como intoxicacion por sustancias, abstinencia de sustancias, delirio inducido por sustancias, demencia persistente inducida por sustancias, trastorno amnesico persistente inducido por sustancias, trastorno psicotico inducido por sustancias, trastorno del estado de animo inducido por sustancias, trastorno de ansiedad inducido por sustancias, disfuncion sexual inducida por sustancias, trastorno del sueno inducido por sustancias y trastorno con percepcion alucinogena persistente (escenas retrospectivas); trastornos relacionados con el alcohol tales como dependencia del alcohol (303.90), abuso de alcohol (305.00), intoxicacion por alcohol (303.00), abstinencia del alcohol (291.81), delirio por intoxicacion por alcohol, delirio por abstinencia de alcohol, demencia persistente inducida por el alcohol, trastorno amnesico persistente inducido por alcohol, trastorno psicotico inducido por el alcohol, trastorno del estado de animo inducido por el alcohol, trastorno del estado de ansiedad inducido por el alcohol, disfuncion sexual inducida por el alcohol, trastorno de sueno inducido por el alcohol y trastorno relacionado con el alcohol no especificado de otra manera (291.9); trastornos relacionados con las anfetaminas (o sustancias similares a anfetaminas) tales como la dependencia de anfetaminas (304.40), adiccion a las anfetaminas (305.70), intoxicacion por anfetaminas (292.89), abstinencia de anfetaminas (292.0), delirio por intoxicacion de anfetaminas, trastorno psicotico inducido por anfetaminas, trastorno del estado de animo inducido por anfetaminas, trastorno de ansiedad inducido por anfetaminas, disfuncion sexual inducida por anfetaminas, trastorno del sueno inducido por anfetaminas y trastorno no especificado relacionado con las anfetaminas (292.9); trastornos relacionados con la cafema tales como la intoxicacion por cafema (305.90), trastorno de ansiedad inducido por cafema, trastorno del sueno inducido por cafema y trastorno no especificado relacionado con la cafema (292.9); trastornos relacionados con cannabis, tales como la dependencia de cannabis (304.30), abuso de cannabis (305.20), intoxicacion por cannabis (292.89), delirio por intoxicacion por cannabis, trastorno psicotico inducido por cannabis, trastorno de ansiedad inducido por cannabis y trastorno relacionado con cannabis no especificado de otra manera (292.9); trastornos relacionados con cocama, tales como la dependencia de cocama (304.20), abuso de cocama (305.60), intoxicacion por cocama (292.89), abstinencia de cocama (292.0), delirio por intoxicacion por cocama, trastorno psicotico inducido por cocama, trastorno del estado emocional inducido por cocama, trastorno de ansiedad inducido por cocama, disfuncion sexual inducida por cocama, trastorno del sueno inducido por cocama y trastorno relacionado con la cocama no especificado de otra manera (292.9); trastornos relacionados con alucinogenos, tales como la dependencia de alucinogenos (304.50), abuso de alucinogenos (305.30), intoxicacion por alucinogenos (292.89), trastorno alucinogeno con percepcion persistente (escenas retrospectivas) (292.89), delirio por intoxicacion con alucinogenos, trastorno psicotico inducido por alucinogenos, trastorno del estado de animo inducido por alucinogenos, trastorno de ansiedad inducido por consumo de alucinogenos y trastorno relacionado con alucinogenos no especificado de otra manera (292.9); trastornos relacionados con inhalantes tales como la dependencia de inhalantes (304.60), abuso de inhalantes (305.90), intoxicacion por inhalantes (292.89), delirio por intoxicacion por inhalantes, demencia persistente inducida por inhalantes, trastorno psicotico inducido por inhalantes, trastorno del estado de animo inducido por inhalantes, trastorno de ansiedad inducido por inhalantes y trastorno relacionado con inhalantes no especificado de otra manera (292.9); trastornos relacionados con la nicotina tales como la dependencia de nicotina (305.1), abstinencia de nicotina (292.0) y trastorno relacionado con la nicotina no especificado de otra manera (292.9); trastornos relacionados con opiaceos, tales como la dependencia de opiaceos (304.00), abuso de opiaceos (305.50), intoxicacion por opiaceos (292.89), abstinencia de opiaceos (292.0), delirio por intoxicacion por opiaceos, trastorno psicotico inducido por opiaceos, trastorno del estado de animo inducido por opiaceos, disfuncion sexual inducida por opiaceos, trastorno del sueno inducido por opiaceos y trastorno relacionado con opiaceos no especificado de otra manera (292.9); trastornos relacionados con la fenciclidina (o analogos de fenciclidina) tales como dependencia de fenciclidina (304.60), abuso de fenciclidina (305.90), intoxicacion por fenciclidina (292.89), delirio por intoxicacion por fenciclidina, trastorno psicotico inducido por fenciclidina, trastorno del estado de animo inducido por fenciclidina, trastorno de ansiedad inducido por fenciclidina y trastorno relacionado con fenciclidina no especificado de otra manera (292.9); trastornos relacionados con sedantes, hipnoticos o ansiolfticos, tales como la dependencia de sedantes, hipnoticos o ansiolfticos (304.10), abuso de sedantes, hipnoticos o ansiolfticos (305.40), intoxicacion por sedantes, hipnoticos o ansiolfticos (292.89), abstinencia de sedantes, hipnoticos o ansiolfticos (292.0), delirio por intoxicacion por sedantes, hipnoticos o ansiolfticos, delirio por abstinencia de sedantes, hipnoticos o ansiolfticos, demencia persistente por sedantes, hipnoticos o ansiolfticos, trastorno amnesico persistente por sedantes, hipnoticos o ansiolfticos, trastorno psicotico inducido por sedantes, hipnoticos o ansiolfticos, trastorno del estado de animo inducido por sedantes, hipnoticos o ansiolfticos, trastorno de ansiedad inducido por sedantes, hipnoticos o ansiolfticos, disfuncion sexual inducida por sedantes, hipnoticos o
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ansiolfticos, trastorno del sueno inducido por sedantes, hipnoticos o ansiolfticos, y trastorno relacionado con sedantes, hipnoticos o ansiolfticos no especificado de otra manera (292.9); trastorno relacionado con varias sustancias tal como la dependencia de varias sustancias (304.80); y trastornos relacionados con otras sustancias (o desconocidas) tales como esteroides anabolizantes, inhalantes de nitrato y oxido nitroso.
Los compuestos de formula (I) o sus sales farmaceuticamente aceptables se pueden usar para el tratamiento o profilaxis de la potenciacion de la cognicion que incluye el tratamiento del deterioro cognitivo en otras enfermedades tales como la esquizofrenia, trastorno bipolar, depresion, otros trastornos psiquiatricos y afecciones psicoticas, asociadas con el deterioro cognitivo, por ejemplo, la enfermedad de Alzheimer.
Los compuestos de formula (I) o sus sales farmaceuticamente aceptables se pueden usar para el tratamiento o profilaxis de trastornos del sueno que incluyen trastornos primarios del sueno tales como disomnias tales como insomnio primario (307.42), hipersomnia primaria (307.44), narcolepsia (347), trastornos del sueno relacionado con la respiracion (780.59), trastorno del ritmo circadiano (307.45) y disomnia no especificada de otra manera (307.47); trastornos primarios del sueno tales como parasomnias tales como trastorno de pesadillas (307.47), trastorno de terrores nocturnos (307.46), trastorno de sonambulismo (307.46) y parasomnia no especificada de otra manera (307.47); trastornos del sueno relacionados con otro trastorno mental tal como insomnio relacionado con otro trastorno mental (307.42) e hipersomnia relacionada con otro trastorno mental (307.44); trastornos del sueno debidos a una afeccion medica general, en particular alteraciones del sueno asociadas con trastornos neurologicos, dolor neuropatico, smdrome de piernas inquietas, enfermedades cardiacas y pulmonares; y trastorno del sueno inducido por sustancias que incluye los subtipos de tipo insomnio, tipo hipersomnia, tipo parasomnia y tipo mixto; apnea del sueno y smdrome de jet-lag:
Los compuestos de formula (I) o sus sales farmaceuticamente aceptables se pueden usar para el tratamiento o profilaxis de trastornos de la conducta alimentaria tales como la anorexia nerviosa (307.1) que incluye los subtipos de tipo restrictivo y de tipo compulsivo/purgativo; bulimia nerviosa (307.51) que incluye los subtipos de tipo purgativo y de tipo no purgativo; obesidad; trastorno de alimentacion compulsiva; trastorno por atracon; y trastorno de alimentacion no especificado de otra manera (307.50):
Los compuestos de formula (I) o sus sales farmaceuticamente aceptables se pueden usar para el tratamiento o profilaxis de trastornos del espectro del autismo que incluyen el trastorno autista (299.00), trastorno de Asperger (299.80), trastorno de Rett (299.80), trastorno desintegrativo infantil (299.10) y trastorno generalizado del desarrollo no especificado de otra manera (299.80, que incluye autismo atfpico).
Los compuestos de formula (I) o sus sales farmaceuticamente aceptables se pueden usar para el tratamiento o profilaxis del trastorno por deficit de atencion con hiperactividad que incluye los subtipos de trastorno por deficit de atencion con hiperactividad de tipo combinado (314.01), trastorno por deficit de atencion con hiperactividad de tipo con predominio del deficit de atencion (314.00), trastorno por deficit de atencion con hiperactividad de tipo con predominio hiperactivo-impulsivo (314.01) y trastorno por deficit de atencion con hiperactividad no especificado de otra manera (314.9); trastorno hipercinetico; trastornos de comportamiento perturbador tales como trastorno de comportamiento que incluye los subtipos de tipo de inicio en la infancia (321.81), de tipo de inicio en la adolescencia
(312.82) y de inicio no especificado (312.89), trastorno negativista desafiante (313.81) y trastorno de comportamiento perturbador no especificado de otra manera; y trastornos de tics y trastorno de la Tourette (307.23):
Los compuestos de formula (I) o sus sales farmaceuticamente aceptables se pueden usar para el tratamiento o profilaxis de trastornos de la personalidad que incluyen los subtipos de trastorno paranoide de la personalidad (301.0), trastorno esquizoide de la personalidad (301.20), trastorno esquizotfpico de la personalidad (301.22), trastorno antisocial de la personalidad (301.7), trastorno ftmite de la personalidad (301.83), trastorno histrionico de la personalidad (301.50), trastorno narcisista de la personalidad (301,81), trastorno de la personalidad por evitacion
(301.82) , trastorno de la personalidad por dependencia (301.6), trastorno obsesivo-compulsivo de la personalidad (301.4) y trastorno de la personalidad no especificado de otra manera (301.9).
Los compuestos de formula (I) o sus sales farmaceuticamente aceptables se pueden usar para el tratamiento o profilaxis de disfunciones sexuales que incluyen trastornos del deseo sexual tales como trastorno del deseo sexual hipoactivo (302.71), y trastorno por aversion al sexo (302.79); trastornos de la excitacion sexual tales como trastorno de excitacion sexual en la mujer (302.72) y trastorno de la ereccion en el varon (302.72); trastornos orgasmicos tales como trastorno orgasmico femenino (302.73), trastorno orgasmico masculino (302.74) y eyaculacion precoz (302.75); trastorno sexual por dolor tales como dispareunia (302.76) y vaginismo (306.51); disfuncion sexual no especificada de otra manera (302.70); parafilias tales como exhibicionismo (302.4), fetichismo (302.81), frotteurismo (302.89), pedofilia (302.2), masoquismo sexual (302.83), sadismo sexual (302.84), fetichismo transvestista (302.3), voyeurismo (302.82) y parafilia no especificada de otra forma (302.9); trastornos de la identidad sexual tales como trastorno de la identidad sexual en ninos (302.6) y trastorno de la identidad sexual en adolescentes o adultos (302.85); y trastorno sexual no especificado de otra forma (302.9).
Los compuestos de formula (I) o sus sales farmaceuticamente aceptables se pueden usar para el tratamiento o profilaxis de trastorno del control de los impulsos incluyendo: trastorno explosivo intermitente (312.34), cleptomania (312.32), juego patologico (312.31), piromama (312.33), tricotilomama (312.39), trastornos del control de los
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impulsos no especificados de otra manera (312.3), atracon, compras compulsivas, comportamiento sexual compulsivo y acumulacion compulsiva.
Los compuestos de formula (I) o sus sales farmaceuticamente aceptables se pueden usar para el tratamiento o profilaxis de trastornos del ofdo que incluyen neuropatia auditiva, trastorno del procesamiento auditivo, hipoacusia que incluye hipoacusia subita, hipoacusia inducida por ruido, hipoacusia inducida por sustancias, e hipoacusia en adultos mayores de 60 (presbiacusia), y acufenos.
Los compuestos de formula (I) o sus sales farmaceuticamente aceptables se pueden usar para el tratamiento o profilaxis de la enfermedad de Meniere, trastornos del equilibrio, y trastornos del ofdo interno.
Los compuestos de formula (I) o sus sales farmaceuticamente aceptables se pueden usar para el tratamiento o profilaxis de la hiperacusia y alteraciones de la percepcion de intensidad sonora, que incluye el smdrome del cromosoma X fragil y autismo.
Los compuestos de formula (I) o sus sales farmaceuticamente aceptables se pueden usar para el tratamiento o profilaxis de la epilepsia, (que incluye, pero no se limita a epilepsias relacionadas con la localizacion, epilepsias generalizadas, epilepsias con crisis tanto generalizadas como locales), crisis asociadas con el smdrome de Lennox- Gastaut, crisis como complicacion de una enfermedad o afeccion (tales como crisis asociadas con encefalopatfa, fenilcetonuria, enfermedad de Gaucher juvenil, epilepsia mioclonica progresiva de Lundborg, accidente cerebrovascular, traumatismo craneal, estres, cambios hormonales, consumo de drogas o abstinencia, consumo de alcohol o abstinencia, falta de sueno, fiebre, infeccion, y similares), temblor esencial, smdrome de piernas inquietas, crisis parciales y generalizadas (que incluyen crisis tonicas, clonicas, tonico-clonicas, atonicas, mioclonicas, de ausencia), crisis generalizadas secundarias, epilepsia del lobulo temporal, epilepsias de ausencia (que incluyen de la infancia, juvenil, mioclonica, fotoinducida e inducida con patron), encefalopatfas epilepticas graves (que incluyen relacionadas con hipoxia y smdrome de Rasmussen), convulsiones febriles, epilepsia parcial continua, epilepsia mioclonica progresiva (que incluye la enfermedad Unverricht-Lundborg y la enfermedad de Lafora), crisis/epilepsia postraumaticas incluidos los relacionados con lesiones en la cabeza, epilepsias reflejas simples (que incluyen fotosensible, somatosensorial y propioceptiva, audiogenico y vestibular), trastornos metabolicos comunmente asociados con la epilepsia como la epilepsia dependiente de piridoxina, enfermedad de Menkes del rizado el pelo, enfermedad de Krabbe, epilepsia debida al abuso de alcohol y drogas (por ejemplo, la cocama), malformaciones corticales asociadas con la epilepsia (por ejemplo, smdrome de doble corteza o heterotopia subcortical en banda), anomalfas cromosomicas asociadas con crisis o epilepsia tales como monosomfa parcial (15Q) /smdrome de Angelman) y similares.
En una realizacion de la invencion, se proporciona un compuesto de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable de este para el tratamiento o profilaxis de depresion y trastornos del estado de animo, trastornos auditivos, esquizofrenia, trastornos de abuso de sustancias, trastornos del sueno o epilepsia.
En una realizacion de la invencion, se proporciona un compuesto de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable de este para el tratamiento o profilaxis de trastorno bipolar o mama.
El termino "tratamiento" o "tratar" tal y como se usa en la presente memoria incluye el control, mitigacion, reduccion o modulacion del estado patologico o sus smtomas.
El termino "profilaxis" se usa en la presente memoria para indicar la prevencion de smtomas de una enfermedad o trastorno en un sujeto o la prevencion de la reaparicion de smtomas de una enfermedad o trastorno en un sujeto aquejado, y no se limita a la prevencion completa de una afliccion.
Tambien se describe un metodo para tratar o prevenir una enfermedad o trastorno donde se requiere un modulador de Kv3, por ejemplo, aquellas enfermedades y trastornos mencionados en lo que antecede, que comprende administrar a un sujeto que lo necesite una cantidad eficaz de un compuesto de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable de este.
La invencion tambien proporciona un compuesto de formula (I), o una sal farmaceuticamente aceptable de este, para usar en el tratamiento o profilaxis de una enfermedad o trastorno donde se requiere un modulador de Kv3, por ejemplo, las enfermedades y trastornos mencionados en lo que antecede.
La invencion tambien proporciona el uso de un compuesto de formula (I), o una sal farmaceuticamente aceptable de este, en la fabricacion de un medicamento para el tratamiento o profilaxis de una enfermedad o trastorno donde se requiere un modulador de Kv3, por ejemplo, las enfermedades y trastornos mencionados en lo que antecede.
Tambien se describe un metodo para tratar la depresion y trastornos del estado de animo, esquizofrenia, trastornos de abuso de sustancias, trastornos del sueno o epilepsia, por ejemplo, para las indicaciones mencionadas en lo que antecede, que comprende administrar a un sujeto que lo necesite, una cantidad eficaz de un modulador de KV3 o una sal farmaceuticamente aceptable de este.
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Para usar en terapia, los compuestos de la invencion normalmente se administran como una composicion farmaceutica. La invencion tambien proporciona una composicion farmaceutica que comprende un compuesto de formula (I), o una sal farmaceuticamente aceptable de este, y un vehnculo farmaceuticamente aceptable.
Los compuestos de formula (I) o sus sales farmaceuticamente aceptables se pueden administrar por cualquier metodo conveniente, por ejemplo, por administracion oral, parenteral, bucal, sublingual, nasal, rectal o transdermica, y las composiciones farmaceuticas adaptadas en consecuencia.
Los compuestos de formula (I) o sus sales farmaceuticamente aceptables que son activos cuando se administran por via oral, se pueden formular como lfquidos o solidos, por ejemplo, como jarabes, suspensiones, emulsiones, comprimidos, capsulas o pastillas.
Una formulacion lfquida en general consistira en una suspension o disolucion del ingrediente activo en un vehnculo o vehnculos lfquidos adecuados, por ejemplo, un disolvente acuoso tal como agua, etanol o glicerina, o un disolvente no acuoso, tal como polietilenglicol o un aceite. La formulacion tambien puede contener un agente de suspension, conservante, saponfero y/o agente colorante.
Una composicion en forma de un comprimido se puede preparar usando cualquier o cualesquiera vehfculos farmaceuticos adecuados usados para preparar formulaciones solidas, tales como estearato magnesico, almidon, lactosa, sacarosa y celulosa.
Una composicion en forma de una capsula se puede preparar usando procedimientos de encapsulacion rutinarios, por ejemplo, se pueden preparar granulos que contienen el ingrediente activo usando vehfculos convencionales y despues llenar la capsula de gelatina dura; alternativamente, se puede preparar una dispersion o suspension usando cualquier vehfculo o vehfculos farmaceuticos adecuados, por ejemplo, gomas acuosas, celulosas, silicatos o aceites y despues llenar con la dispersion o suspension una capsula de gelatina blanda.
Las composiciones parenterales tfpicas consisten en una disolucion o suspension del ingrediente activo en un vehfculo acuoso esteril o aceite aceptable por via parenteral, por ejemplo, polietilenglicol, polivinilpirrolidona, lecitina, aceite de cacahuete o aceite de sesamo. Alternativamente, la disolucion se puede liofilizar y despues reconstituir con un disolvente adecuado, justo antes de la administracion.
Las composiciones para administracion nasal se pueden formular convenientemente como aerosoles, gotas, geles y polvos. Las formulaciones en aerosol comprenden tfpicamente una disolucion o suspension fina del ingrediente activo en un disolvente acuoso o no acuoso, farmaceuticamente aceptable, y normalmente se presentan en cantidades individuales o multiples dosis, en forma esteril en un envase hermeticamente cerrado que puede tener forma de un cartucho o recarga para usar con un dispositivo de atomizacion. Alternativamente, el envase hermeticamente cerrado puede ser un dispositivo de dispensacion desechable tal como un inhalador nasal de una sola dosis, o un dispensador de aerosol provisto de una valvula dosificadora. Cuando la forma farmaceutica comprende un dispensador de aerosol, contendra un propulsor que puede ser un gas comprimido, por ejemplo, aire, o un propulsor organico tal como fluoroclorohidrocarbono o hidrofluorocarbono. Las formas farmaceuticas de aerosol tambien pueden tener forma de atomizadores de bomba.
Las composiciones adecuadas para la administracion bucal o sublingual incluyen comprimidos, pastillas para chupar y pastillas donde el principio activo esta formulado con un vehfculo tal como azucar o goma arabiga, tragacanto o gelatina y glicerina.
Las composiciones para la administracion rectal estan convenientemente en forma de supositorios que contienen una base de supositorio convencional tal como manteca de cacao.
Las composiciones adecuadas para la administracion transdermica incluyen pomadas, geles y parches.
En una realizacion, la composicion esta en forma de dosis unitaria tal como un comprimido, capsula o ampolla.
La composicion puede contener de 0,1% a 100% en peso, por ejemplo de 10 a 60% en peso, del material activo, dependiendo del metodo de administracion. La composicion puede contener de 0% a 99% en peso, por ejemplo de 40% a 90% en peso, del vehfculo, dependiendo del metodo de administracion. La composicion puede contener de 0,05 mg a 1.000 mg, por ejemplo de 1,0 mg a 500 mg, del material activo, dependiendo del metodo de administracion. La composicion puede contener de 50 mg a 1.000 mg, por ejemplo de 100 mg a 400 mg, del vehfculo, dependiendo del metodo de administracion. La dosis del compuesto usada en el tratamiento de los trastornos mencionados antes, variara de la forma habitual con la gravedad de los trastornos, el peso del que lo padece y otros factores similares. Sin embargo, como grna general, las dosis unitarias adecuadas pueden ser de 0,05 a 1.000 mg, mas adecuadamente de 1,0 a 500 mg, y dichas dosis unitarias se pueden administrar mas de una vez al dfa, por ejemplo dos o tres veces al dfa. Dicha terapia se puede prolongar durante una serie de semanas o meses.
La invencion proporciona, en un aspecto adicional, una combinacion que comprende un compuesto de formula (I) o un derivado farmaceuticamente aceptable de este junto con un agente o agentes terapeuticos adicionales.
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Cuando los compuestos se usan en combinacion con otros agentes terapeuticos, los compuestos se pueden administrar de forma secuencial o simultanea por cualquier ruta conveniente.
Las combinaciones mencionadas antes se pueden presentar de forma conveniente para usar en la forma de una formulacion farmaceutica y por lo tanto las formulaciones farmaceuticas que comprenden una combinacion como se ha definido antes junto con un vehmulo o excipiente farmaceuticamente aceptable, comprenden un aspecto adicional de la invencion. Los componentes individuales de dichas combinaciones se pueden administrar de forma secuencial o simultanea en formulaciones farmaceuticas separadas o combinadas.
Cuando un compuesto de formula (I) o un derivado farmaceuticamente aceptable de este, se usa en combinacion con un segundo agente terapeutico activo contra la misma enfermedad, la dosis de cada compuesto puede diferir de aquella cuando el compuesto se usa solo. Las dosis adecuadas seran facilmente apreciadas por los expertos en la tecnica.
Una composicion farmaceutica de la invencion, que se puede preparar mediante mezcla, adecuadamente a temperatura ambiente y presion atmosferica, normalmente esta adaptada para la administracion oral, parenteral o rectal y, como tal, puede estar en forma de comprimidos, capsulas, preparaciones lfquidas orales, polvos, granulos, pastillas, polvos reconstituibles, disoluciones o suspensiones inyectables o infundibles o supositorios. En general se prefieren las composiciones administrables por via oral.
Tambien se describen moduladores de Kv3, o sus sales farmaceuticamente aceptables, para usar en el tratamiento o profilaxis de la depresion y trastornos del estado de animo, trastornos auditivos, esquizofrenia, trastornos de abuso de sustancias, trastornos del sueno o epilepsia.
En particular, los moduladores de Kv3 o sus sales farmaceuticamente aceptables pueden ser particularmente utiles en el tratamiento o profilaxis de la depresion y trastornos del estado de animo, que incluyen episodio de depresion mayor, episodio maniaco, episodio mixto y episodio hipomaniaco; trastornos depresivos que incluyen trastorno depresivo mayor, trastorno distfmico (300.4), trastorno depresivo no especificado de otra manera (311); trastornos bipolares que incluyen trastorno bipolar I, trastorno bipolar II (episodios depresivos mayores recurrentes con episodios hipomaniacos) (296.89), trastorno ciclotfmico (301.13) y trastorno bipolar no especificado de otra manera (296.80); otros trastornos del estado de animo incluyendo trastorno del estado de animo debido a una afeccion medica general (293.83) (que incluye los subtipos con smtomas depresivos, con episodio similar al depresivo mayor, con smtomas maniacos y con smtomas mixtos), trastorno del estado de animo inducido por sustancias (que incluye los subtipos con smtomas depresivos, con smtomas maniacos y con smtomas mixtos) y trastorno del estado de animo no especificado de otra manera (296.90), trastorno afectivo estacional
Tambien se describe un metodo para tratar la depresion y trastornos del estado de animo, trastornos auditivos, esquizofrenia, trastornos de abuso de sustancias, trastornos del sueno o epilepsia, incluyendo, por ejemplo, los trastornos mencionados en lo que antecede, que comprende administrar a un sujeto que lo necesite, una cantidad eficaz de un modulador de KV3 o una sal farmaceuticamente aceptable de este.
Tambien se describe un modulador de Kv3, o una sal farmaceuticamente aceptable de este, para usar en el tratamiento o profilaxis de la depresion y trastornos del estado de animo, trastornos auditivos, esquizofrenia, trastornos de abuso de sustancias, trastornos del sueno o epilepsia, que incluyen, por ejemplo, los trastornos mencionados en lo que antecede.
Tambien se describe el uso de un modulador de Kv3, o una sal farmaceuticamente aceptable de este, para la fabricacion de un medicamento para el tratamiento o profilaxis de la depresion y trastornos del estado de animo, trastornos auditivos, esquizofrenia, trastornos de abuso de sustancias, trastornos del sueno o epilepsia, que incluye, por ejemplo, los trastornos mencionados en lo que antecede.
Para usar en terapia, los moduladores de Kv3 normalmente se administran como una composicion farmaceutica, por ejemplo, una composicion que comprende un modulador de Kv3 o una sal farmaceuticamente aceptable de este, y un vehnculo farmaceuticamente aceptable. Los ejemplos de dichas composiciones y metodos de administracion de las mismas, composiciones que comprenden un compuesto de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable de este, se han descrito en lo que antecede. Dichas composiciones y metodos de administracion tambien se pueden usar para otros moduladores de Kv3 o sales farmaceuticamente aceptables de estos, en el tratamiento de la depresion y trastornos del estado de animo, trastornos auditivos, esquizofrenia, trastornos de abuso de sustancias, trastornos del sueno o epilepsia, que incluyen, por ejemplo, los trastornos mencionados en lo que antecede
Descripcion breve de los dibujos
La presente invencion se ilustra, solo a modo de ejemplo, con referencia a las siguientes figuras en las que:
Figura 1a corrientes de hKv3.2 registradas usando el ensayo descrito en el Ejemplo 89. Los datos mostrados son las corrientes individuales a lo largo del periodo del paso de voltaje despolarizante a -15 mV registradas de 4 celulas diferentes en dos concentraciones del compuesto del Ejemplo 19. Los datos se ajustan por una sola curva exponencial (lmeas negras) usando el procedimiento de ajuste de Prism version 5 (Graphpad Software Inc).
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Figura 1b corrientes de hKv3.2 registradas usando el ensayo descrito en el Ejemplo 89. Los datos mostrados son las corrientes individuales a lo largo del periodo del paso de voltaje despolarizante a -15 mV registradas de 2 celulas diferentes en dos concentraciones del compuesto del Ejemplo 71. Los datos se ajustan por una sola curva exponencial (lmeas negras) usando el procedimiento de ajuste de Prism version 5 (Graphpad Software Inc).
Figura 2 Registros hechos de interneuronas identificadas de "disparo rapido" en la corteza somatosensorial del raton.
Figura 3 Frecuencia de los potenciales de accion registrados de las interneuronas positivas para parvalbumina en la corteza somatosensorial de raton, provocado por pasos de corrientes despolarizantes.
Figura 4 La semianchura de los potenciales de accion provocados a partir de interneuronas positivas para parvalbumina en la corteza somatosensorial de raton
Figura 5 Corrientes de potasio activadas por alto voltaje registradas de neuronas MNTB identificadas visualmente en el raton, in vitro
Parte experimental
La invencion se ilustra por los compuestos descritos a continuacion. En los procedimientos que siguen, despues de cada material de partida, se proporciona tipicamente una referencia a una descripcion. Esto se proporciona simplemente para asistencia al qmmico experto. El material de partida puede no haberse preparado necesariamente a partir de la Descripcion a la que se hace referencia.
Equipamiento analitico
Los materiales de partida, reactivos y disolventes se obtuvieron a partir de proveedores comerciales y se usaron sin purificacion adicional salvo que se exponga otra cosa. Salvo que se exponga otra cosa, todos los compuestos con centros quirales son racemicos. Cuando se describe que las reacciones se han llevado a cabo de una forma similar a reacciones descritas de forma mas completa anteriormente, las condiciones de reaccion generales usadas eran esencialmente las mismas. Las condiciones de tratamiento usadas fueron de los tipos convencionales en la tecnica, pero se pueden haber adaptado de una reaccion a otra. El material de partida puede no haberse preparado necesariamente a partir del lote al que se hace referencia. Los compuestos sintetizados, pueden tener diferentes purezas en el intervalo de por ejemplo 85% a 98%.
Los espectros de resonancia magnetica de proton (RMN) se registraron en instrumentos Varian a 300, 400, 500 o 600 MHz, o en instrumentos Bruker a 400 MHz. Los desplazamientos qmmicos se dan en ppm (6) usando la lmea del disolvente residual como la referencia interna. Los patrones de desdoblamientos se designan como s (singlete), br. s (singlete ancho), d (doblete), t (triplete), q (cuartete), dd (doblete de dobletes), dt (doblete de tripletes) y m (multiplete). Los espectros de RMN se registraron a temperaturas en el intervalo de 25 a 30°C.
Los espectros de masas (MS) de infusion directa se realizaron en un espectrometro de masas LC/MSD Agilent Serie 1100, que trabajaba en el modo de ionizacion ES (+) y ES (-) [ES (+): Intervalo de masas: 100-1.000 uma. Disolvente de infusion: agua + HCO2H al 0,1% / CH3Cn 50/50. ES (-): Intervalo de masas: 100-1.000 uma. Disolvente de infusion: agua + NH4OH al 0,05% / CH3CN 50/50]. El uso de esta metodologfa se indica por "MS_1 (ESI)" en la caracterizacion analttica de los compuestos descritos. Alternativamente, se ejecutaron espectros de masa (MS) en un espectrometro de masa, operando en modo de ionizacion ES (+) y ES (-) acoplado con un instrumento HPLC Agilent Serie 1100 [Los analisis LC/MS-ESI(+) se realizaron en un Supelcosil ABZ+Plus (33x4,6 mm, 3 pm) (fase movil: de 10% de [CH3CN+TFA al 0,05%] a 90% de [CH3CN+TFA al 0,05%] y 10% [agua] en 2,2 min, en estas condiciones durante 2,8 min. T= 45°C, flujo = 0,9 mL/min)]. El uso de esta metodologfa se indica por "MS_2 (ESI)" en la caracterizacion analftica de los compuestos descritos.
Los espectros HPLC-masas (HPLC-MS) se tomaron de un espectrometro de masas LC/MSD Agilent Serie 1100 acoplado con un instrumento de HPLC Agilent Serie 1100, trabajando en modo de ionizacion por electropulverizacion positiva o negativa y tanto en condiciones de gradiente acidas como basicas. Gradiente acido: Los analisis de LC/MS-ES (+ o -) se llevaron a cabo en una columna Supelcosil ABZ + Plus (33 x 4,6 mm, 3 pm). Fase movil: A: (agua+ HCO2H al 0,1%) / B: CH3CN. Gradiente (metodo convencional): t=0 min 0% (B), de 0% (B) a 95% (B) en 5 min permaneciendo durante 1,5 min, de 95% (B) a 0% (B) en 0,1 min, tiempo de parada 8,5 min. T de la columna = r.t. Caudal = 1 mL/min. El uso de esta metodologfa se indica por "LC-MS_A" en la caracterizacion analftica de los compuestos descritos.
Cromatoarafia liauida de ultra-alto rendimiento con un gradiente acido:
Se tomaron la corriente ionica total (TIC) y los barridos cromatograficos de DAD UV junto con los espectros de MS y UV asociados con los picos, en un sistema de UPLC/MS AcquityTM equipado con un detector PDA 2996 y acoplado con un espectrometro de masas Waters Micromass ZQTm que trabaja en el modo de ionizacion por electropulverizacion positivo o negativo [LC/MS - ES (+ o -): los analisis se llevaron a cabo usando una columna AcquityTM UPLC BEH C18 (50 x 2,1 mm, tamano de partfculas 1,7 pm).
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40
Metodo general: Fase movil: A: (agua+ HCO2H al 0,1%) / B: (CH3CN + HCO2H al 0,06%). Gradiente: t = 0 min 3% (B), t = 0,05 min 6% (B), t = 0,57 min 70% (B), t = 1,06 min 99% (B) permaneciendo durante 0,389 min, t = 1,45 min 3% (B), tiempo de detencion 1,5 min. T de la columna = 40°C. Caudal = 1,0 mL/min. Intervalo de masas: ES (+): 100-1.000 uma. ES (-): 100-800 uma. Intervalo de deteccion UV: 210-350 nm. El uso de esta metodologfa se indica por "UPLC" en la caracterizacion analttica de los compuestos descritos.
1er Metodo centrado: Fase movil: A: (agua+ HCO2H al 0,1%) / B: (CH3CN + HCO2H al 0,1%). Gradiente: t = 0 min 3% (B), t = 1,06 min 99% (B), t = 1,45 min 99% (B), t = 1,46 min 3% (B), tiempo de detencion 1,5 min. T de la columna = 40°C. Caudal = 1,0 mL/min. Intervalo de masas: ES (+): 100-1.000 uma. ES (-): 100-800 uma. Intervalo de deteccion UV: 210-350 nm. El uso de esta metodologfa se indica por "UPLC_s" en la caracterizacion analttica de los compuestos descritos.
2° Metodo centrado: Fase movil: A: (agua+ HCO2H al 0,1%) / B: (CH3CN + HCO2H al 0,1%). Gradiente: t = 0 min 3% (B), t = 1,5 min 100% (B), t = 1,9 min 100% (B), t = 2 min 3% (B), tiempo de detencion 2 min. T de la columna = 40°C. Caudal = 1,0 mL/min. Intervalo de masas: eS (+): 100-1.000 uma. eS (-): 100-800 uma. Intervalo de deteccion UV: 210-350 nm. El uso de esta metodologfa se indica por "UPLC_ipqc" en la caracterizacion analttica de los compuestos descritos.
Cromatografia liauida de ultra-alto rendimiento con un gradiente basico:
Se tomaron la corriente ionica total (TIC) y las senales cromatograficas de DAD UV junto con los espectros de MS y UV asociados con los picos, en un sistema de UPLC/MS AcquityTM equipado con un detector PDA y acoplado con un espectrometro de masas Waters SQD que trabaja en el modo de ionizacion por electropulverizacion alternado positivo y negativo [LC/MS - ES +/-: los analisis se llevaron a cabo usando una columna AcquityTM UPLC BEH C18 (50 x 2,1 mm, tamano de partfculas 1,7 pm). Fase movil: A: (disolucion acuosa de NH4HCO3 10 mM (ajustada a pH 10 con amoniaco)) / B: cH3CN. Gradiente: t = 0 min 3% (B), t = 1,06 min 99% (B) permaneciendo durante 0,39 min, t = 1,46 min 3% (B), tiempo de detencion 1,5 min. T de la columna = 40°C. Caudal = 1,0 mL/min. Intervalo de masas: ES (+): 100-1.000 uma. Es (-): 100-1.000 uma. Intervalo de deteccion UV: 220-350 nm. El uso de esta metodologfa se indica por "UPLC_B" en la caracterizacion analftica de los compuestos descritos.
Para reacciones que implican irradiacion con microondas, se uso un Personal Chemistry Emrys™ Optimizer o un Biotage Initiator
En una serie de preparaciones, la purificacion se llevo a cabo usando sistemas de cromatograffa ultrarrapida manual de Biotage (Flash+), cromatograffa ultrarrapida automatica de Biotage (Horizon, SP1 y SP4), cromatograffa ultrarrapida automatica Companion CombiFlash (ISCO), Flash Master Personal o Vac Master.
Las cromatograffas ultrarrapidas se llevaron a cabo en gel de sflice de n° de malla 230-400 (suministrado por Merck AG Darmstadt, Alemania) o en gel de sflice de n° de malla 300-400 (suministrado por Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.), cartuchos preempaquetados Varian Mega Be-Si, cartuchos de sflice preempaquetados Biotage (por ejemplo, cartucho SNAP Biotage), cartuchos ultrarrapidos preempaquetados KP-NH, cartuchos preempaquetados iSoLUTE NH2 o cartuchos ISCO RediSep Silica.
Los cartuchos de SPE-Si son columnas de extraccion en fase solida de sflice suministrados por Varian.
En una serie de preparaciones, la purificacion se llevo a cabo en un sistema de autopurificacion de masa dirigida (MDAP) Fractionlynx™ equipado con un detector Waters 2996 PDA y acoplado con el espectrometro de masas ZQ™ (Waters) que trabaja en el modo de ionizacion por electropulverizacion positiva y negativa ES+, ES- (intervalo de masas 100-1.000 o 100-900)
Se ha usado un conjunto de gradientes semipreparativos:
Metodo A:
Condiciones cromatograficas basicas
Columna:
XTerra Prep MS C18 OBD (150 mm x 30 mm, tamano de partfculas 10 pm) a temperatura ambiente
Fase movil
A: (agua + disolucion acuosa de bicarbonato de amonio 10 mM (ajustada a pH 10 con amoniaco)), B: Acetonitrilo
Caudal:
40 mL/min
Gradiente:
10% (B) durante 0,5 min, de 10% (B) a 95% (B) en 12,5 min, de 95% (B) a 100%(B) en 3 min
Metodo B:
Condiciones cromatograficas basicas
Columna:
XTerra Prep MS C18 OBD (150 mm x 30 mm, tamano de partfculas 10 pm) a temperatura ambiente
Fase movil:
A: agua + disolucion acuosa de bicarbonato de amonio 10 mM (ajustada a pH 10 con amoniaco), B: Acetonitrilo
Caudal:
40 mL/min
Gradiente:
de 20% a 25% (B) en 1 min, de 25% (B) a 65% (B) en 12 min, de 65% (B) a 100% (B) en 0,5 min
Metodo C:
Condiciones cromatograficas basicas
Columna:
Waters Xbridge C18 OBD (50 mm x 19 mm, tamano de partfculas 5 pm) a temperatura ambiente
Fase movil:
A: agua + disolucion acuosa de bicarbonato de amonio 10 mM (ajustada a pH 10 con amoniaco), B: Acetonitrilo
Caudal:
17 mL/min
Gradiente:
de 20% (B) a 25% (B) en 1 min, de 25% (B) a 55% (B) en 9 min, de 55% (B) a 100% (B) en 2 min, vuelta a 20% (B) en 0,1 min
Metodo D:
Condiciones cromatograficas acidas
Columna:
Waters Xbridge C18 OBD (50 mm x 19 mm, tamano de partfculas 5 pm) a temperatura ambiente
Fase movil:
A: (agua + acido formico al 0,1% en agua); B: Acetonitrilo
Caudal:
17 mL/min
Gradiente:
de 20% (B) a 25% B en 1 min, de 25% (B) a 55% (B) en 9 min, de 55% (B) a
100% (B) en 2 min, vuelta a 20% (B) en 0,1 min
Metodo E:
Condiciones cromatograficas basicas
Columna:
Waters Xbridge C18 OBD (50 mm x 19 mm, tamano de partfculas 5 pm) a temperatura ambiente
Fase movil:
A: (agua + disolucion acuosa de bicarbonato de amonio 10 mM (ajustada a pH 10 con amoniaco)), B: Acetonitrilo
Caudal:
17 mL/min
Gradiente:
de 10% (B) a 15% (B) en 1 min, de 15% (B) a 70% (B) en 7 min, de 70% (B)
a 100% (B) en 1 min, 100% (B) durante 2 min, vuelta a 10% (B) en 0,1 min
Metodo F:
Condiciones cromatograficas basicas
Columna:
Phenomenex Gemini AXIA C18 (50 x 21,2 mm, tamano de partfculas 5 pm)
Fase movil:
A: agua + disolucion acuosa de bicarbonato de amonio 10 mM (ajustada a pH 10 con amoniaco), B: Acetonitrilo
Caudal:
17 mL/min
Gradiente:
de 10% (B) a 15% (B) en 1 min, de 15% (B) a 65% (B) en 8 min, de 65% (B) a 100% (B) en 1 min, vuelta a 10% (B) en 1 min.
Metodo G:
Condiciones cromatograficas basicas
Columna:
Phenomenex Gemini AXIA C18 (50 x 21,2 mm, tamano de partfculas 5 pm)
Fase movil:
A: agua + disolucion acuosa de bicarbonato de amonio 10 mM (ajustada a pH 10 con amoniaco), B: Acetonitrilo
Caudal:
17 mL/min
Gradiente:
de 10% (B) a 15% (B) en 1 min, de 15% (B) a 70% (B) en 7 min, de 70% (B) a 100% (B) en 1 min, 100% (B) durante 2 min, vuelta a 10% (B) en 0,1 min
METODO H:
Condiciones cromatograficas acidas
Columna:
Waters Xbridge C18 OBD (100mm x19 mm tamano de partfculas 5pm) a temperatura ambiente
Fase movil:
A: (agua + acido formico al 0,1% en agua); B: Acetonitrilo
Caudal:
17 mL/min
Gradiente:
5% (B) durante 1 min, de 5% (B) a 90% (B) en 9 min, de 90% (B) a 100% (B) en 0,1 min, 100% (B) durante 0,8 min, vuelta a 5% (B) en 0,1 min
METODO I:
Condiciones cromatograficas acidas
Columna:
Waters Sunfire OBD (100 mm x 19 mm, tamano de partfculas 5 pm) a temperatura ambiente
Fase movil:
A: (agua + acido formico al 0,1% en agua); B: Acetonitrilo
Caudal:
17 mL/min
Gradiente:
de 30% (B) a 70% (B) en 9 min, de 70% (B) a 100% (B) en 1 min, vuelta a 30% (B) entonces 30% (B) durante 1 min
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METODO J:
Condiciones cromatograficas acidas
Columna:
Waters Sunfire OBD (100 mm x 19 mm, tamano de partfculas 5 pm) a temperatura ambiente
Fase movil:
A: (agua + acido formico al 0,1% en agua); B: Acetonitrilo
Caudal:
17 mL/min
Gradiente:
10% (B) durante 1 min, de 10% (B) a 95% (B) en 10 min, 95% (B) durante 1,5 min, vuelta a 10% (b) en 0,1 min.
Los cartuchos SPE-SCX son columnas de extraccion en fase solida de intercambio ionico, suministradas por Varian. El eluyente usado con los cartuchos SPE-SCX es DCM y MeOH o MeCN o MeOH seguido de disolucion de amoniaco en MeOH (tfpicamente 2 N). Las fracciones recogidas son las eluidas con la disolucion de amoniaco en MeOH, salvo que se exponga otra cosa.
Abreviaturas
Boc
t-butiloxicarbonilo
CDCl3
cloroformo deuterado
CH3CN
acetonitrilo
(CH2O)n
paraformaldel'ndo
cHex
ciclohexano
VC
volumen de columna
(Cy)3P
Triciclohexilfosfina
DCM
diclorometano
DIPEA
N,N-diisopropiletilamina
DMAP
4-dimetilaminopiridina
DMF
N,N-dimetilformamida
DMSO
dimetilsulfoxido
DMSO-de
dimetilsulfoxido deuterado
EDC.HCI
hidrocloruro de N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida
Et2O
eter dietnico
EtOAc
acetato de etilo
h
horas
H2
hidrogeno gaseoso
HATU
hexafluorofosfato de (O-7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio)
HBTU
hexafluorofosfato de O-benzotriazol-1-il-tetrametiluronio
HCO2H
acido formico
HCI
cloruro de hidrogeno
HNO3
acido mtrico
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35
HOBt.H2O 1-hidroxibenciltriazol hidrato
H2SO4 acido sulfurico
K2CO3 carbonato de potasio
KOH hidroxido de potasio
MeCN /CH3CN acetonitrilo
MeOH
metanol-d4
MDAP
N2
NaBH(OAc)3
NaHCO3
NaNO2
Na2CO3
NaOH
NH4OH
NH4 HCO3H
RMN
Pd/C
Pd(OAc)2
Pd(fBu3P)2
PE
r.t.
tBuOK
TBTU
TEA
TFA
THF
TsOH*H2O
metanol
etanol deuterado
autopurificacion dirigida por masa nitrogeno gaseoso triacetoxiborohidruro de sodio hidrogenocarbonato de sodio nitrito de sodio carbonato de sodio hidroxido de sodio hidroxido de amonio bicarbonato de amonio resonancia magnetica nuclear paladio sobre carbon acetato de paladio(II) bis (tri-terc-butilfosfina) paladio (0) eter de petroleo temperatura ambiente terc-butoxido de potasio
tetrafluoroborato de o-benzotriazol-1-il-n,n,n',n'-tetrametiluronio trietilamina acido trifluoroacetico tetrahidrofurano
acido 4-metilbencenosulfonico hidrato, acido p-toluenosulfonico hidrato Ejemplos e intermedios de soporte
Intermedio 1
{(1R)-1-metil-2-[(4-{[3-(metiloxi)fenil]oxi}fenil)amino]-2-oxoetil}carbamato de 1.1-dimetiletilo
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A una disolucion de N-{[(1,1-dimetiletil)oxi]carbonil}-D-alanina (250 mg, 1,321 mmoles) en N,N-dimetilformamida seca (5 mL), se anadieron DIPEA (0,346 mL, 1,982 mmoles) y despues TBTU (467 mg, 1,453 mmoles) y la mezcla de reaccion se agito durante 15 minutos a temperatura ambiente. (Se anadio 4-{[3-(metiloxi)fenil]oxi}fenil)amina (313
mg, 1,453 mmoles) y la mezcla de reaccion se agito durante 30 minutos a temperatura ambiente. La reaccion se paro con salmuera (10 mL), se diluyo con agua (5 mL) y se extrajo con dietil eter (3 veces con 20 mL). La capa organica se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se evaporo y el residuo se purifico por cromatograffa en gel de sflice (sistema Biotage, 25g, columna SNAP) usando como eluyentes un gradiente de ciclohexano/acetato de etilo 5 de 100/0 a 70/30 para rendir el compuesto del tftulo (440 mg) como una goma amarilla clara.
RMN-1H (400 MHz, DMSO-da) 8 ppm: 9,96 (1H, s), 7,62 (2H, m), 7,25 (1H, t), 7,04-7,11 (1H, m), 7,01 (2H, m), 6,68 (1H, dd), 6,44 -6,55 (2H, m), 4,04 -4,16 (1H, m), 3,70 - 3,76 (3H, m), 1,29 - 1,46 (9H, m), 1,19 -1,29 (3H, m); UPLC: 0,76 min, 387 [M+H]+.
Intermedio 2
10 W1-(4-{[3-(metiloxi)fenil]oxi}fenil)-D-alaninamida
imagen29
A una disolucion de {(1R)-1-metil-2-[(4-{[3-(metiloxi)fenil]oxi}fenil)amino]-2-oxoetil}carbamato de 1,1 -dimetiletilo (Intermedio 1, 435 mg) en diclorometano seco (6 mL), se anadio TFA (2 mL, 26,0 mmoles) y la mezcla de reaccion se agito durante 1 hora a temperatura ambiente. Se evaporaron el disolvente y el exceso de TFA, y el residuo se 15 purifico por cartucho de SCX para rendir el compuesto del tftulo como una goma amarilla (320 mg).
RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6) 8 ppm: 7,67 (2H, m); 7,25 (1H, t), 7,00 (2H, m), 6,68 (1H, dd), 6,53 (1H, t), 6,49 (1H, dd), 3,73 (3H, s), 3,39 - 3,46 (1H, m), 1,22 (3H, d); UPLC: 0,51 min, 287 [M+H]+.
Intermedio 3
1-(etiloxi)-3-[(4-nitrofenil)oxi]benceno
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Las dos reacciones se realizaron en paralelo. Se dispusieron dos viales de microondas en paralelo. En un vial de microondas grande de 30 mL, se disolvio 3-(etiloxi)fenol (2 veces 1,25 g, 9,045 mmoles) en 6 mL de dimetilformamida. Se anadieron 1-fluoro-4-nitrobenceno (2 veces 1,28 g, 9,045 mmoles) y carbonato de potasio (2 veces 3,75 g, 27,15 mmoles). La mezcla de reaccion se calento con irradiacion de microondas durante 1 hora a 25 120°C. Las mezclas de reaccion combinadas se filtraron. El solido filtrado se lavo con diclorometano. Los
compuestos volatiles se evaporaron en vado. Se anadieron algo de diclorometano y salmuera a este crudo. El compuesto se extrajo con diclorometano (2 veces) y acetato de etilo (2 veces). Las fases organicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio. Esto rindio el compuesto del tftulo (4 g).
1H RMN (400 MHz, metanol-d4): 8 ppm 8,38 - 8,05 (2H, m), 7,46 - 7,31 (1H, m), 7,20 - 7,05 (2H, m), 6,94 - 6,81 (1H, 30 m), 6,77 - 6,63 (2H, m), 4,08 (2H, q), 1,42 (3H, t); UPLC: 0,89 min, 260 [M+H]+.
Intermedio 4
4-{[3-(etiloxi)fenil]oxi}anilina
imagen30
Una disolucion de 1-(etiloxi)-3-[(4-nitrofenil)oxi]benceno (Intermedio 3, 4 g) y cloruro de estano monohidrato (28,8 g, 35 139 mmoles) en acetato de etilo (200 mL) se calento a reflujo toda la noche (15 horas). La mezcla de reaccion se
enfrio. Se diluyo con acetato de etilo (50 mL), se lavo con NaHCO3 saturado (100 mL), salmuera (100 mL) y se seco sobre sulfato de sodio. Despues de evaporar los volatiles, el residuo se purifico por una SCX (lavado de la columna con metanol, adsorcion del compuesto, lavado con metanol (3VC), desorcion con 2N amoniaco metanolico (3VC)). La evaporacion rindio el compuesto del tftulo (2,9 g).
40 1HRMN (400 MHz, CDCla): 8 ppm 6,50 (1H, t), 6,21 (2H, d), 6,06 (2H, d), 5,91 - 5,84 (3H, m), 3,34 - 3,29 (4H, m),
0,72 (3H, t); UPLC: 0,89 min, 260 [M+H]+.
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3-cloro-5-fluorofenil 4-nitrofenil eter
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A una disolucion de 3-cloro-5-fluorofenol (1,46 g, 10 mmoles) y 1-fluoro-4-nitrobenceno (1,41 g, 10 mmoles) en acetonitrilo (40 mL) se anadio carbonato de potasio (2,76 g, 20 mmoles) y la mezcla de reaccion se calento hasta reflujo durante 4 horas. Despues de filtrar, el disolvente se elimino. El residuo obtenido se lavo con n-hexano (2 veces 15 mL) y se seco para rendir el compuesto del tftulo (2,38 g) que se uso directamente en la etapa siguiente.
Intermedio 6
4-[(3-cloro-5-fluorofenil)oxi]anilina
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A una disolucion de 3-cloro-5-fluorofenil 4-nitrofenil eter (Intermedio 5, 2,38 g) en THF (40 mL) y agua (10 mL) se anadio Fe en polvo (11,2 g, 200 mmoles) y cloruro de amonio (10,7g, 200 mmoles). La mezcla de reaccion se calento a reflujo durante 4 horas. Despues de filtrar, el disolvente se concentro para proporcionar un residuo y se vertio en 50 mL de agua. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (3 veces 50 mL) y las fases organicas combinadas se lavaron y se secaron sobre sulfato de magnesio. La eliminacion del disolvente rindio el compuesto del tftulo (2,02 g) que se uso directamente en la etapa siguiente.
Intermedio 7
3-cloro-4-fluorofenil 4-nitrofenil eter
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A una disolucion de 3-cloro-4-fluorofenol (1,46 g, 10 mmoles) y 1-fluoro-4-nitrobenceno (1,41 g, 10 mmoles) en acetonitrilo (40 mL) se anadio carbonato de potasio (2,76 g, 20 mmoles). La mezcla de reaccion se calento a reflujo durante 4 horas. Despues de filtrar, el disolvente se elimino para proporcionar un residuo. El residuo se lavo con n- hexano (2 veces 15 mL) y se seco para rendir el compuesto del tftulo (2,48 g) que se uso directamente en la etapa siguiente.
Intermedio 8
4-[(3-cloro-4-fluorofenil)oxi]anilina
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ci
A una disolucion de 3-cloro-4-fluorofenil 4-nitrofenil eter (Intermedio 7, 2,48 g) en THF/ agua (40 mL/ 10 mL) se anadio Fe en polvo (11,2 g, 200 mmoles) y cloruro de amonio (10,7 g, 200 mmoles) y la mezcla se calento a reflujo durante 4 horas. Despues de filtrar, el disolvente se concentro para proporcionar un residuo y se vertio en 50 mL de agua. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (3 veces 50 mL) y las fases organicas combinadas se lavaron y se secaron sobre sulfato de magnesio. La eliminacion del disolvente rindio el compuesto del tftulo (2,15 g) que se uso directamente en la etapa siguiente.
Intermedio 9
W-[({4-[(3-cloro-4-fluorofenil)oxi]fenil}amino)carbonil]-D-alanina
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A una disolucion de 4-[(3-cloro-4-fluorofenil)oxi]anilina (Intermedio 8, 237mg) y trifosgeno (99 mg, 0,33 mmoles) en 15 mL de diclorometano se anadio DIPEA (155 mg, 1,2 mmoles) y la mezcla se agito a temperatura ambiente durante 2 horas. Despues, el disolvente se evaporo para proporcionar un residuo. El residuo se disolvio en 5 mL de THF y se transfirio a una mezcla de DIPEA (65 mg, 0,5 mmoles, Acros) y D-Alanina (89 mg, 1 mmol) en 5 mL de 5 THF. La mezcla de reaccion completa se agito a temperatura ambiente durante 16 horas. La eliminacion del disolvente rindio el compuesto del tftulo (352 mg) que se uso directamente en la etapa siguiente.
MS_2 (ESI): 353 [M+H]+
Intermedio 10
W-[({4-[(3-cloro-4-fluorofenil)oxi]fenil}amino)carbonil]-L-alanina
10
El compuesto del tftulo se preparo de una forma similar a la preparacion del intermedio 9 reemplazando D-alanina con L-alanina (89 mg, 1 mmol) para rendir el compuesto del tftulo (325 mg), que se uso directamente en la etapa siguiente.
MS_2 (ESI): 353 [M+H]+
15 Intermedio 11
2-metil-5-(metiloxi)anilina
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Una suspension de 1-metil-4-(metiloxi)-2-nitrobenceno (20,0 g, 119,8 mmoles) y Pd/C (10%, 3 g) en metanol (100 mL) se agito bajo atmosfera de H2 a temperatura ambiente toda la noche. La mezcla se filtro a traves de una 20 almohadilla de celite y el filtrado se evaporo en vacfo para rendir el compuesto del tftulo como un solido (16,1 g).
MS_2 (ESI): 138 [M+H]+.
Intermedio 12
2-metil-5-(metiloxi)fenol
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25 A una disolucion de 2-metil-5-(metiloxi)anilina (Intermedio 11, 6,0 g) en H2SO4 (5 M, 20 mL) se anadio por partes NaNO2 (3,4 g, 49,3 mmoles) a 0-5°C. La mezcla se agito a 50°C durante 1 hora y se extrajo con acetato de etilo (4 veces 30 mL). Las capas de acetato de etilo combinadas se secaron sobre sulfato de sodio y se concentraron en vacfo para proporcionar un residuo, que se purifico por cromatograffa en columna en gel de sflice (con EtOAc:PE = 1:20 como eluyentes) para rendir el compuesto del tftulo como un solido.
30 MS_2 (ESI): 139 [M+H]+.
Intermedio 13
1-metil-4-(metiloxi)-2-[(4-nitrofenil)oxi]benceno
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A una disolucion de 2-metil-5-(metiloxi)fenol (Intermedio 12, 1,5 g) y 1-fluoro-4-nitrobenceno (1,4 g, 10,0 mmoles) en acetonitrilo (100 mL) se anadio carbonato de potasio (2,1 g, 15,2 mmoles) y la mezcla se agito a reflujo durante 5 horas. La mezcla resultante se concentro y se repartio entre acetato de etilo (3 veces 30 mL) y agua (100 mL). Las capas de acetato de etilo combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron en vado. El producto crudo asf obtenido se purifico por cromatograffa en columna en gel de sflice (EtOAc: PE = 1:20) para rendir el compuesto del tftulo como un solido (2,5 g).
Intermedio 14
4-{[2-metil-5-(metiloxi)fenil]oxi}anilina
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Una suspension de 1-metil-4-(metiloxi)-2-[(4-nitrofenil)oxi]benceno (Intermedio 13, 2,5 g) y Pd/C (10%, 1 g) en MeOH (100 mL) se agito bajo atmosfera de H2 toda la noche a temperatura ambiente y se filtro a traves de una almohadilla de celite. El filtrado se evaporo para rendir el compuesto del tftulo como un solido (2,0 g).
1HRMN (400 MHz, CDCla): 6 ppm 7,14 -7,12 (1H, d), 6,85 -6,82 (2H, d), 6,68 -6,66 (2H, d), 6,59 - 6,56 (1H, d), 6,40 (1H, s), 3,74 - 3,71 (5H, m), 2,25 (3H, s); MS_2 (ESI): 230 [M+H]+
Intermedio 15
{(1R)-1-metil-2-[(4-{[2-metil-5-(metiloxi)fenil]oxi}fenil)amino]-2-oxoetil}carbamato de 1,1 -dimetiletilo
imagen42
A una disolucion de N-{[(1,1-dimetiletil)oxi]carbonil}-D-alanina (89 mg, 0,471 mmoles) en N,N-dimetilformamida seca (5 mL), se anadieron DiPEA (0,103 mL, 0,589 mmoles), despues HATU (179 mg, 0,471 mmoles) y la mezcla de reaccion se agito durante 15 minutos a temperatura ambiente bajo argon. Despues, se anadio 4-{[2-metil-5- (metiloxi)fenil]oxi}anilina (Intermedio 14, 90 mg) y la mezcla de reaccion se agito a 60°C bajo argon durante 1 hora 30 min. La mezcla de reaccion se evaporo. Los residuos obtenidos se purificaron por cromatograffa en gel de sflice (instrumento Companion, cartucho de 40 g de sflice) eluyendo con un gradiente cHex/EtOAc 100/0 a 75/25 durante 15 min y despues 75/25 durante 30 min para rendir el compuesto del tftulo (155 mg).
1H-RMN (400 MHz, metanol^): 6 ppm 7,52 (2H, d), 7,13 (1H, d), 6,85 (2H, d), 6,64 (1H, dd), 6,42 (1H, d), 4,22 (1H, dd), 3,57 - 3,78 (3H, m), 2,12 (3H, s), 1,46 (9H, s), 1,41 (3H, d); UPLC_B: 1,04 min, 401 [M+H]+.
Intermedio 16
W1-(4-{[2-metil-5-(metiloxi)fenil]oxi}fenil)-D-alaninamida
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Se disolvio {(1R)-1-metil-2-[(4-{[2-metil-5-(metiloxi)fenil]oxi}fenil)amino]-2-oxoetil}carbamato de 1,1 -dimetiletilo (Intermedio 15, 150 mg) en 3 mL de diclorometano seco. A esta disolucion a 0°C bajo argon se anadieron gota a gota 30 equivalentes de TFA (0,866 mL, 11,24 mmoles). La reaccion se agito a 0°C durante 4 horas. La mezcla de reaccion se evaporo. El residuo obtenido se purifico con un cartucho SCX (el cartucho se lavo con 3 VC de metanol, despues el compuesto se adsorbio en el cartucho, se lavo con 5 VC de metanol y se desorbio con 2 VC de amoniaco metanolico (1N)). La evaporacion de los volatiles, rindio el compuesto del tftulo (129 mg).
1H-RMN (400 MHz, metanol-c/4): 6 ppm 7,48 (2H, m), 7,10 (1H, d), 6,81 (2H, m), 6,60 (1H, dd), 6,36 (1H, d), 3,64 (3H, s), 3,54 (1H, m), 2,06 (3H, s), 1,33 (3H, d); UPLC_B: 0,77 min, 301 [M+H]+.
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Intermedio 17 4-metil-3-(metiloxi)anilina
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A una disolucion de 1-metil-2-(metiloxi)-4-nitrobenceno (2,5 g, 14,96 mmoles) en metanol (50 mL) se anadio Ni- Raney (~2 g) y la mezcla de reaccion se agito toda la noche a temperature ambiente bajo atmosfera de H2 (1 atm). El catalizador se separo por filtracion y el residuo se purifico por cartucho de SCX (50 g) para rendir el compuesto del tftulo (1,86 g) como un aceite incoloro.
1H-RMN (400 MHz, DMSOds) 6 ppm: 6,73 (1H, d), 6,19 (1H, d), 6,05 (1H, dd), 4,85 (2H, s), 3,68 (3H, s), 1,97 (3H, s); UPLC_B: 0,62 min, 138 [M+H]+.
Intermedio 18
4-metil-3-(metiloxi)fenol
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A una suspension de 4-metil-3-(metiloxi)anilina (Intermedio 17, 1,86 g) en agua (100 mL)/H2SO4 (30 mL, 563 mmoles) a 0°C se anadio lentamente una disolucion de nitrito de sodio (1,029 g, 14,91 mmoles) en agua (10 mL) y la mezcla de reaccion se agito durante 30 minutos a 0°C. La mezcla de reaccion se anadio lentamente a una disolucion de H2SO4 al 98% (20 mL) en agua (80 mL) precalentada a 90°C y se agito a esta temperatura durante 1 h. Despues de enfriar, la mezcla se extrajo con Et2O (2x200 mL), la capa organica se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se evaporo para rendir el compuesto del tftulo (1,86 g) como un aceite rojo/marron.
1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) 6 ppm: 9,14 (1H, s ancho), 6,87 (1H, d), 6,35 (1H, d), 6,24 (1H, dd), 3,71 (3H, s), 2,01 (3H, s); UPLC_B: 0,63 min, 137 [M-H]-.
Intermedio 19
1-metil-2-(metiloxi)-4-[(4-nitrofenil)oxi]benceno
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A una disolucion de 4-metil-3-(metiloxi)fenol (Intermedio 18, 0,800 g) en acetonitrilo seco (60 mL) se anadieron carbonato de potasio (1,600 g, 11,58 mmoles) y 1-fluoro-4-nitrobenceno (817 mg, 5,79 mmoles) y la mezcla de reaccion se puso a reflujo durante 6 horas. El solido se retiro por filtracion y el disolvente se evaporo rindiendo el compuesto del tftulo (1,43 g) como un solido naranja.
1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) 6 ppm: 8,24 (2H, m), 7,23 (1H, d), 7,11 (2H, m), 6,82 (1H, d), 6,66 (1H, dd), 3,78 (3H, s), 2,16 (3H, s); UPLC_B: 1,03 min, 260 [M+H]+.
Intermedio 20
4-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}anilina
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A una disolucion de 1-metil-2-(metiloxi)-4-[(4-nitrofenil)oxi]benceno (Intermedio 19, 1,43 g) en tetrahidrofurano (65 mL) / agua (32,5 mL) se anadieron hierro (1,540 g, 27,6 mmoles) y cloruro de amonio (1,475 g, 27,6 mmoles) y la mezcla de reaccion se agito durante 5 horas a temperatura ambiente. El catalizador se separo por filtracion y la disolucion se diluyo con una disolucion saturada de Na2CO3 (10 mL) y se extrajo con acetato de etilo (2 veces 60
mL). Las capas organicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se evaporaron hasta el compuesto del tftulo (1,25 g) como un solido marron/rojo.
1H-RMN (400 MHz, DMSO-da) 8 ppm: 7,00 (1H, d), 6,77 - 6,70 (2H, m), 6,60 - 6,51 (3H, m), 6,24 (1H, dd), 4,94 (2H, br, s), 3,71 (3H, s), 2,06 (3H, s); UPLC_B: 0,86 min, 230 [M+H]+.
5 Intermedio 21
{(1R)-1-metil-2-[(4-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}fenil)amino]-2-oxoetil}carbamato de 1,1 -dimetiletilo
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A una disolucion de N-{[(1,1-dimetiletil)oxi]carbonil}-D-alanina (182 mg, 0,960 mmoles) en N,N-Dimetilformamida seca (DMF) (4 mL) se anadieron DIPeA (0,305 mL, 1,745 mmoles) y despues TBTU (336 mg, 1,047 mmoles) y la 10 mezcla de reaccion se agito durante 15 minutos a r.t. Se anadio 4-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}anilina (Intermedio 20, 200 mg) y la mezcla de reaccion se agito durante 1 hora a la misma temperatura. La reaccion se paro con agua (2 mL), se diluyo con salmuera (10 mL) y se extrajo con acetato de etilo (2 veces 20 mL). La capa organica se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se evaporo y el residuo se purifico por cromatograffa ultrarrapida (sistema Biotage, columna SNAP de 10 g) usando como eluyente un gradiente de ciclohexano/acetato de etilo de 100/0 a 80/20 para 15 rendir el compuesto del tftulo como un solido amarillo claro (304 mg).
1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) 8 ppm: 9,93 (s, 1H), 7,60 (m, 2H), 7,09 (d, 2H), 6,97 (m, 2H), 6,63 (d, 1H), 6,39 (dd, 1H), 4,15 - 4,03 (m, 1H), 3,74 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,39 (s, 9H), 1,26 (d, 3H), UPLC_B: RT 0,96 min, m/z 401 [M+H]+.
Intermedio 22
20 W1-(4-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}fenil)-D-alaninamida
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A una disolucion de {(1R)-1-metil-2-[(4-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}fenil)amino]-2-oxoetil}carbamato de 1,1- dimetiletilo (Intermedio 21, 300 mg) en diclorometano seco (7,5 mL), se anadio lentamente TFA (2,5 mL, 32,4 mmoles) y la mezcla de reaccion se agito durante 1,5 horas a temperatura ambiente. Se evaporaron el disolvente y 25 el exceso de TFA, y el residuo se purifico por cartucho de SCX (10 g) para rendir el compuesto del tftulo como un aceite naranja (219 mg).
1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) 8 ppm: 7,64 (2H, m), 7,08 (1H, s), 6,96 (2H, m), 6,63 (1H, d), 6,39 (1H, dd), 3,74 (3H, s), 3,41 (1H, q), 2,10 (3H, s), 1,21 (3H, d); UPLC_B: 0,80 min, 301 [M+H]+.
Intermedio 23
30 2-{[3-(1-metiletil)fenil]oxi}-5-nitropiridina
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En un vial de microondas grande de 30 mL, se disolvio 2-cloro-5-nitropiridina (1,041 g, 6,57 mmoles, 1 equiv) en 5,5 mL de dimetilformamida. Se anadieron 3-(1-metiletil)fenol (0,90 mL, 6,57 mmoles, 1 equiv) y carbonato de potasio (4,54 g, 32,8 mmoles, 5 equiv). La mezcla de reaccion se calento con irradiacion de microondas durante 1 hora a 35 110°C (Biotage Initiator). La mezcla de reaccion se filtro. El solido filtrado se lavo con diclorometano (30 mL). Los
volatiles se evaporaron en vacfo. El compuesto crudo se disolvio en diclorometano (20 mL) y se anadio salmuera (20 mL). El compuesto se extrajo 2 veces con diclorometano (2 x 20 mL) y 2 veces con acetato de etilo (2 x 20 mL). La fase organica se seco sobre sulfato de sodio. La evaporacion rindio el compuesto del tftulo (1,402 g).
1HRMN (400 MHz, metanol-d4): 8 ppm 8,94 (1H, d), 8,52 (1H, dd), 7,33 (1H, t), 7,15 (1H, d), 7,06 (1H, d), 7,02 (1H, 40 t), 6,90-6,97 (1H, m), 2,81 (3H, s); UPLC: 0,93 min, 259 [M+H]+.
6-{[3-(1-metiletil)fenil]oxi}-3-piridinamina
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Se disolvio 2-{[3-(1-metiletil)fenil]oxi}-5-nitropiridina (Intermedio 23, 1,39 g) en etanol (25 mL). Se anadieron hidrazina 5 monohidrato (0,524 mL, 1.076 mmoles) y paladio sobre carbon (401 mg, 0,377 mmoles). La mezcla de reaccion se calento a reflujo bajo argon durante 1 hora. La reaccion se enfrio y despues se filtro en Celite. La fase organica se evaporo en vado. El residuo se purifico por cromatograffa ultrarrapida en sflice (instrumento Companion, cartucho de 120 g de sflice, gradiente ciclohexano / acetato de etilo de 100/0 a 30/70 en 15 min despues 30/70 durante 30 min). La evaporacion rindio el compuesto del tftulo como un aceite amarillo (821 mg).
10 1HRMN (400 MHz, metanol-ck): 6 ppm 7,65 (1H, d), 7,29 -7,15 (2H, m), 6,99 (1H, d), 6,81 -6,86 (1 H, m), 6,68 -6,78
(2H, m), 2,97 - 2,75 (1H, m), 1,23 (3H, s), 1,22 (3H, s); UPLC: 0,70 min, 229 [M+H]+.
Intermedio 25
{(1R)-1-metil-2-[(6-{(3-(1-metiletil)fenil]oxi}-3-piridinil)amino]-2-oxoetil}carbamato de 1,1 -dimetiletilo
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15 A una disolucion de N-{[(1,1-dimetiletil)oxi]carbonil}-D-alanina (69,6 mg, 0,368 mmoles) en N,N-dimetilformamida seca (4 mL), se anadieron DIPEA (0,080 mL, 0,460 mmoles), HATU (140 mg, 0,368 mmoles) y la mezcla de reaccion se agito durante 15 minutos a temperatura ambiente bajo argon. Despues, se anadio 6-{[3-(1-metiletil)fenil]oxi}-3- piridinamina (Intermedio 24, 70 mg) y la mezcla de reaccion se agito toda la noche a 60°C bajo argon. La mezcla de reaccion se evaporo. El residuo obtenido se purifico por cromatograffa en gel de sflice (sistema Companion, cartucho 20 de 12 g) con un gradiente ciclohexano/acetato de etilo de 100/0 a 65/35 para rendir el compuesto del tftulo (59 mg).
1HRMN (400 MHz, metanol-c/4): 6 ppm 8,33 (1H, d), 8,05 (1H, dd), 7,30 (1H, t), 7,08 (1H, d), 6,92 - 6,98 (1H, m), 6,83 - 6,91 (2H, m), 4,12 - 4,29 (1 H, m), 2,79 - 2,97 (1 H, m), 1,45 (9H, s), 1,38 (3H, d), 1,25 (6 H, d); UPLC: 0,85 min, 400 [M+1]+
Intermedio 26
25 W1-(6-{[3-(1-metiletil)fenil]oxi}-3-piridinil)-D-alaninamida
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Se disolvio {(1R)-1-metil-2-[(6-{[3-(1-metiletil)fenil]oxi}-3-piridinil)amino]-2-oxoetil}carbamato de 1,1 -dimetiletilo (Intermedio 25, 56 mg) en 3 mL de diclorometano seco. A esta disolucion a 0°C se anadieron gota a gota 30 equivalentes de TFA (0,324 mL). La reaccion se agito a 0°C durante 3 horas. La mezcla de reaccion se evaporo. El 30 crudo obtenido se purifico por SCX en un cartucho de 5g. En primer lugar se usaron 3 VC de metanol, despues el residuo se adsorbio en el cartucho, se lavo con 5 VC de metanol y se desorbio con 2 VC de amoniaco metanolico (1N). La evaporacion de los volatiles, rindio el compuesto del tftulo (38 mg).
1HRMN (400 MHz, metanol^): 6 ppm 8,40 (1H, d), 8,10 (1H, dd), 7,33 (1H, t), 7,10 (1H, d), 6,98 (1H, t), 6,85 -6,92 (2H, m), 3,52 - 3,69 (1H, m), 2,78 - 3,02 (1H, m), 1,39 (3H, d), 1,27 (6H, d) ; UPLC: 0,59 min, 300 [M+1]+
35 Intermedio 27
3-[(1-metiletil)oxi]fenol
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A una disolucion de 1,3-bencenodiol (8 g, 72,7 mmoles) y 2-yodopropano (12 g, 70,6 mmoles) en etanol (100 mL precalentado a reflujo) se anadio una disolucion de KOH (83%, 5,3 g, 77,6 mmoles) en agua (20 mL) durante un periodo de 30 minutos. La mezcla se puso a reflujo durante 3 horas y se vertio en NaOH (1 N, 100 mL). La mezcla resultante se extrajo con acetato de etilo (3 veces 50 mL) y la capa acuosa se acidifico con 10% HCl para ajustar el pH=5 y se extrajo con acetato de etilo (3 veces 50 mL). Los extractos combinados se lavaron con salmuera (50 mL), se secaron y se concentraron en vado. El residuo se purifico por cromatograffa en columna de gel de sflice (PE: EtOAc = 5:1) para rendir el compuesto del tftulo como un aceite incoloro (2,1 g).
MS 1 (ESI): 151 [M-H]-
Intermedio 28
2-({3-[(1-metiletil)oxi]fenil}oxi)-5-nitropiridina
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A una disolucion de 3-[(1-metiletil)oxi]fenol (Intermedio 27, 456 mg) en DMSO (8 mL) se anadio t-BuOK (336 mg, 3 mmoles, Acros). La mezcla de reaccion se agito a 20°C durante 30 minutos. Se anadio 2-cloro-5-nitropiridina (474 mg, 3 mmoles, Aldrich) y la mezcla resultante se agito a 120°C durante 2 horas. La mezcla de reaccion se enfrio hasta temperatura ambiente, se vertio en hielo-agua (50 mL) y se extrajo con diclorometano (3 veces 50 mL). Las capas organicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron. El residuo se purifico por cromatograffa en columna de gel de sflice eluyendo con (PE: EtOAc = 50:1) para rendir el compuesto del tftulo como un solido amarillo claro (670 mg).
MS 1 (ESI): 275 [M+H]+
Intermedio 29
6-({3-[(1-metiletil)oxi]fenil}oxi)-3-piridinamina
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A una disolucion de 2-({3-[(1-metiletil)oxi]fenil}oxi)-5-nitropiridina (Intermedio 28, 670 mg, 2,45 mmoles) en metanol (50 mL) se anadio Pd/C (10%, 100 mg, 0,1 humedo e.q.) y el matraz se relleno con H2. La mezcla resultante se agito a temperatura ambiente bajo atmosfera de H2 toda la noche y se filtro. El filtrado se concentro en vado para rendir el compuesto del tftulo como un solido marron (560 mg).
MS 1 (ESI): 245 [M+H]+
Intermedio 30
W-{[(1,1-dimetiletil)oxi]carbonil}-D-alanina
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-i
A una disolucion de D-alanina (4,45 g, 50 mmoles) en THF (100 mL) y agua (50 mL) se anadio una disolucion de NaHCO3 (4,2 g, 50 mmoles) en agua (30 mL). Despues de agitar durante 15 minutos, se anadio una disolucion de Boc-anlddrido (16,35 g, 75 mmoles) en THF (20 mL) y la mezcla se agito a temperatura ambiente durante 4 horas. El disolvente se evaporo y se uso 2N HCl para ajustar el pH=3-4. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (3 veces 200 mL) y las capas de acetato de etilo combinadas se lavaron con salmuera (50 mL), se secaron y se concentraron. El residuo se recristalizo con acetato de etilo/hexano para rendir el compuesto del tftulo como un solido blanco (5 g). 1
1HRMN (DMSO-cfe): 6 ppm 12,38 (1 H, s), 7,11 -7,09 (1 H, d), 3,94 -3,88 (1 H, m), 1,38 (9H, s), 1,22 -1,21 (3H, d).
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((1R)-1-metil-2-{[6-({3-[{1-metiletil)oxi]fenil}oxi)-3-piridinil]amino}-2-oxoetil)carbamato de 1,1-dimetiletilo
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Una disolucion de 6-({3-[(1-metiletil)oxi]fenil}oxi)-3-piridinamina (Intermedio 29, 244 mg, 1 mmol), W-{[(1,1- dimetiletil)oxi]carbonil}-D-alanina (Intermedio 3o, 284 mg), HBTU (567 mg, 1,5 mmoles) y DIPEA (194 mg, 1,5 mmoles, Acros) en DMF (8 mL) se calento en microondas (instrumento Biotage) a 110°C durante 3 horas. El disolvente se retiro por destilacion para rendir el compuesto del tftulo como un aceite marron, que se uso directamente en la etapa siguiente (400 mg, rendimiento 96%).
MS_2 (ESI): 416 [M+H]+
Intermedio 32
W1-[6-({3-[(1-metiletil)oxi]fenil}oxi)-3-piridinil]-D-alaninamida
imagen60
o i
A una disolucion de ((1R)-1-metil-2-{[6-({3-[(1-metiletil)oxi]fenil}oxi)-3-piridinil]amino}-2-oxoetil)carbamato de 1,1- dimetiletilo (Intermedio 31, 400 mg, 0,96 mmoles) en diclorometano (14 mL) se anadio TFA (6 mL) por partes durante 15 minutos a 0°C. La mezcla resultante se agito a temperatura ambiente durante 2 horas. El disolvente se retiro por destilacion para rendir el compuesto del tftulo (260 mg, 85%) como un aceite gris.
MS 1 (ESI): 316 [M+H]+
Intermedio 33
2-[(2,5-dimetilfenil)oxi]-5-nitropiridina
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En un vial de microondas, se disolvio 2-cloro-5-nitropiridina (80 mg, 0,505 mmoles) en 2 mL de dimetilformamida seca. Se anadieron 2,5-dimetilfenol (80 mg, 0,505 mmoles, 1 equiv) y carbonato de potasio (418 mg, 3,03 mmoles, 6 equiv). La mezcla de reaccion se calento con irradiacion de microondas durante 1 hora a 110°C (Biotage Initiator). La mezcla de reaccion se filtro. El solido filtrado se lavo con diclorometano (5 mL). Los volatiles se evaporaron. El residuo se disolvio en diclorometano (10 mL) y se anadio salmuera (10 mL). La capa organica se extrajo 2 veces con diclorometano (2 x 15 mL) y 2 veces con acetato de etilo (2 x 15 mL). La fase organica se seco sobre sulfato de sodio. El disolvente se elimino para rendir el compuesto del tftulo (112 mg)
1HRMN (400 MHz, metanol-d4): 6 ppm 8,97 (1H, d), 8,58 (1H, dd), 7,20 - 6,90 (4H, m), 2,32 (3H, s), 2,07 (3H, s); UPLC: 0,87 mins, 245 [M+H]+.
Intermedio 34
6-[(2,5-dimetilfenil)oxi]-3-piridinamina
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Se disolvio 2-[(2,5-dimetilfenil)oxi]-5-nitropiridina (Intermedio 33, 140 mg, 0,450 mmoles) en etanol (3 mL). Se anadieron hidrazina hidrato (83 pL, 0,884 mmoles) y paladio sobre carbon (47 mg, 0,044 mmoles). La mezcla de reaccion se calento a reflujo bajo argon. Despues de calentar toda la noche, la reaccion se enfrio. La mezcla de
reaccion se filtro. La fase organica se evaporo en vado. El residuo se purifico por SCX (lavado con MeOH, desadsorcion con 2N amoniaco metanolico). La evaporacion rindio el compuesto del tftulo (85 mg).
UPLC: 0,68 min, 215 [M+H]+.
Intermedio 35
5 [(1R)-2-({6-[(2,5-dimetilfenil)oxi]-3-piridinil]}amino)-1-metil-2-oxoetil]carbamato de 1,1-dimetiletilo
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o
El compuesto del tftulo se preparo de una forma similar a la preparacion del Intermedio 25 reemplazando 6-{[3-(1- metiletil)fenil]oxi}-3-piridinamina con 6-[(2,5-dimetilfenil)oxi]-3-piridinamina (Intermedio 34) y usando las condiciones siguientes para la cromatograffa en gel de sflice: Instrumento Companion, cartucho de 12g, un gradiente cHex/ 10 EtOAc como eluyente de 100/0 a 70/30. Esto rindio el compuesto del tftulo como un aceite marron claro (63 mg).
1HRMN (400 MHz, metanol-c/4): 6 ppm 8,31 (1H, d), 8,05 (1H, dd), 7,18 (1H, d), 6,98 (1H, d), 6,76 - 6,87 (2H, m), 4,02 -4,34 (1H, m), 2,35 (3 H, s), 2,12 (3 H, s) 1,47 (9 H, s) 1,41 (3 H, d); UPLC: 0,84 min, 386 [M+1]+
Intermedio 36
W1-{6-[(2,5-dimetilfenil)oxi]-3-piridinil}-D-alaninamida
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15
Se disolvio [(1R)-2-({6-[(2,5-dimetilfenil)oxi]-3-piridinil}amino)-1-metil-2-oxoetil]carbamato de 1,1-dimetiletilo (Intermedio 35, 60 mg) en 4 mL de diclorometano seco. A esta disolucion, a 0C, se anadieron gota a gota 40 equivalentes de TFA (0,480 mL). La reaccion se agito durante 3 horas a 0°C. La mezcla de reaccion se evaporo y se purifico por SCX en un cartucho de 5g. En primer lugar se usaron 3 VC de metanol, despues el residuo se adsorbio 20 en el cartucho, se lavo con 5 VC de metanol y se desorbio con VC de amoniaco metanolico (1N). La evaporacion de los volatiles, rindio el compuesto del tftulo (49 mg).
1HRMN (400 MHz, metanol-c/4): 6 ppm 8,34 (1H, d), 8,07 (1H, dd), 7,18 (1H, d), 6,99 (1H, d), 6,69 - 6,90 (2H, m), 3,60 (1H, q), 2,32 (3H, s), 2,12 (3H, s), 1,39 (3H, d); UPLC: 0,54 min, 286 [M+1]+
Intermedio 37
25 2-[(2,3-dimetilfenil)oxi]-5-nitropiridina
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En un vial de microondas de 20 mL, se disolvieron 2-cloro-5-nitropiridina (500 mg, 3,15 mmoles), 2,3-dimetilfenol (385 mg, 3,15 mmoles) y carbonato de potasio (1.308 mg, 9,46 mmoles) en N,N-Dimetilformamida (10 mL) para proporcionar una suspension marron oscura. El recipiente de reaccion se sello y se calento en Biotage Initiator a 30 110°C durante 1 h. Despues de enfriar la reaccion se diluyo con 25 mL de Et2O. La fase organica se lavo con 3x25
mL de agua, 10 mL de salmuera, se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se evaporo en vado para rendir el compuesto del tftulo como un aceite naranja claro. (640 mg). 1H RMN (400 MHz, CDCh): 6 ppm 9,07 (1H, d), 8,50 (1H, dd), 7,24 - 7,19 (1H, m), 7,18 - 7,14 (1H, m), 7,04 (1H, d), 6,95 (1H, d), 2,38 (3H, s), 2,09 (3H, s); UPLC: 0,81 min, 245 [M+H]+.
35
6-[(2,3-dimetilfenil)oxi]-3-piridinamina
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En un matraz de fondo redondo de 50 mL se disolvio 2-[(2,3-dimetilfenil)oxi]-5-nitropiridina (Intermedio 37, 640 mg) 5 en etanol (10 mL) para proporcionar una disolucion amarilla clara. Se anadieron hidrazina hidrato (0,463 mL, 4,72 mmoles) y paladio sobre carbon (25,10 mg, 0,236 mmoles). La mezcla de reaccion se agito a 90°C. Despues de 1 hora, la reaccion se completo. La mezcla de reaccion se filtro y la fase organica se evaporo en vado rindiendo el compuesto del tftulo como un aceite amarillo claro (573 mg).
1H RMN (400 MHz, CDCla): 6 ppm 7,72 (1H, d), 7,05 - 7,16 (2H, m), 7,01 (1H, d), 6,86 (1H, d), 6,71 (1H, d), 3,48 (2H, 10 br, s), 2,34 (3H, s), 2,16 (3H, s); UPLC: 0,62 min, 215 [M+H]+.
Intermedio 39
[(1R)-2-({6-[(2,3-dimetilfenil)oxi]-3-piridinil}amino)-1-metil-2-oxoetil]carbamato de 1,1-dimetiletilo
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A una disolucion de N-{[(1,1-dimetiletil)oxi]carbonil}-D-alanina (26,5 mg, 0,140 mmoles) en N,N-dimetilformamida 15 seca (4 mL), se anadieron DIPEA (31 pL, 0,175 mmoles, 1,5 equiv) y despues HATU (53,2 mg, 0,140 mmoles, 1,2 equiv) y la mezcla de reaccion se agito durante 15 minutos a temperatura ambiente bajo argon. Despues, se anadio 6-[(2,3-dimetilfenil)oxi]-3-piridinamina (Intermedio 38, 25 mg) y la mezcla de reaccion se agito a 60°C bajo argon. La mezcla de reaccion se dejo toda la noche con calentamiento. Despues, se evaporo. El residuo obtenido se purifico directamente en cromatograffa en gel de sflice (instrumento Companion, 2 x cartucho de 4g) con un gradiente 20 ciclohexano/ acetato de etilo 100/0 a 70/30 durante 15 min y 70/30 durante 20 min. Esto rindio el compuesto del tftulo (31 mg).
1HRMN (400 MHz, metanol^): 6 ppm 8,29 (1H, d), 8,02 (1H, dd), 7,20 - 6,99 (3H, m), 6,81 (2H, dd), 4,21 (1H, m), 2,32 (3H, s), 2,08 (3H, s), 1,45 (9H, s), 1,40 (3H, d); UPLC: 0,80 min, 386 [M+1]+
Intermedio 40
25 W1-{6-[(2,3-dimetilfenil)oxi]-3-piridinil}-D-alaninamida
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Se disolvio [(1R)-2-({6-[(2,3-dimetilfenil)oxi]-3-piridinil}amino)-1-metil-2-oxoetil]carbamato de 1,1-dimetiletilo (Intermedio 39, 29 mg) en 3 mL de diclorometano seco. A esta disolucion a 0°C bajo argon se anadieron gota a gota 30 equivalentes de TFA (168 pL, 2,179 mmoles). La reaccion se agito durante 1 hora a 0°C y 2 horas a temperatura 30 ambiente. La mezcla de reaccion se evaporo. El residuo obtenido se purifico por SCX (en primer lugar se usaron 3 VC de metanol, despues el residuo se adsorbio en el cartucho, se lavo con 5 VC de metanol y se desorbio con 2 VC de amoniaco metanolico (1N)). La evaporacion de los volatiles, rindio el compuesto del tftulo (21 mg).
UPLC: 0,52 min, 286 [M+1]+
Intermedio 41
35 2-[(2,6-dimetilfenil)oxi]-5-nitropiridina
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En un vial de microondas de 20 mL, se disolvio 2-cloro-5-nitropiridina (500 mg, 3,15 mmoles) en N,N- dimetilformamida (10 mL) para proporcionar una disolucion amarilla clara. Se anadieron 2,6-dimetilfenol (385 mg,
3,15 mmoles) y carbonato de potasio (1.308 mg, 9,46 mmoles). El recipiente de reaccion se sello hermeticamente y se calento con irradiacion de microondas (instrumento Biotage) a 110°C durante 1 hora. La mezcla de reaccion se paro con 10 mL de agua y se diluyo con 10 mL de Et2O. Las fases se separaron mediante un embudo de separacion. La fase organica se lavo 3 veces con 10 mL de agua, 10 mL de salmuera, se seco sobre sulfato de 5 sodio, se filtro y se evaporo en vado para rendir el compuesto del tftulo como un aceite naranja claro (555,9 mg).
1H RMN (400 MHz, CDCls): 6 ppm 9,04 (1H, d), 8,50 (1H, dd), 7,16 (3H, s), 7,03 (1H, d), 2,12 (6H, s); UPLC_B: 0,95 mins, 245 [M+H]+.
Intermedio 42
6-[(2,6-dimetilfenil)oxi]-3-piridinamina
10
En un matraz de fondo redondo de 50 mL se disolvio 2-[(2,6-dimetilfenil)oxi]-5-nitropiridina (Intermedio 41, 555,9 mg) en etanol (10 mL) para proporcionar una disolucion naranja clara. Se anadieron paladio sobre carbon (230 mg, 0,216 mmoles) e hidrazina hidrato (0,416 mL, 4,32 mmoles). La mezcla de reaccion se agito a 90°C. Despues de 3 horas, la reaccion se completo. La mezcla de reaccion se filtro y la fase organica se evaporo en vado para rendir 929,9 mg 15 de un solido naranja oscuro que se cargo en un cartucho de SCX de 10 g. Despues se hizo un barrido con 200 mL de etanol seguido de 50 mL de una disolucion de amoniaco 2 M en MeOH. El eluato de amoniaco se evaporo en vado para rendir el compuesto del tftulo como un solido naranja oscuro (447,6 mg).
1H RMN (400 MHz, CDCla): d ppm 7,64 (1H, d), 7,02 - 7,12 (4H, m), 6,62 (1H, d), 3,50 (2H, br, s), 2,14 (6H, s); UPLC_B: 0,74 mins, 215 [M+H]+.
20 Intermedio 43
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[(1R)-2-({6-[(2,6-dimetilfenil)oxi]-3-piridinil}amino)-1-metil-2-oxoetil]carbamato de 1,1-dimetiletilo
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En un vial de 8 mL se disolvio N-{[(1,1-dimetiletil)oxi]carbonil}-D-alanina (190 mg, 1,003 mmoles) en N,N- dimetilformamida (4 mL) para proporcionar una disolucion incolora. Se anadieron W-etil-W-(1-metiletil)-2-propanamina 25 (0,219 mL, 1,253 mmoles) y hexafluorofosfato de W-[(dimetilamino)(3H-[1,2,3]triazolo[4,5-b]piridin-3-iloxi)metiliden]-
W-metilmetanaminio (381 mg, 1,003 mmoles). La mezcla de reaccion se volvio inmediatamente amarilla y se agito a temperatura ambiente durante 15 minutos. Se anadio 6-[(2,6-dimetilfenil)oxi]-3-piridinamina (Intermedio 42, 223,8 mg) y la mezcla de reaccion se calento hasta 60°C. Despues de 4 horas, el disolvente se evaporo en vado usando el Genevac rindiendo un aceite marron oscuro. Este residuo se purifico por cromatografta en gel de sflice 30 (instrumento Biotage, columna de sflice SNAP de 25g) eluyendo con Ciclohexano/EtOAc de 3:1 Ciclohexano/EtOAc a 1:1 Ciclohexano/EtOAc en 10 VC; despues 1:1 Ciclohexano/EtOAc para 5 VC. Las fracciones recogidas rindieron el compuesto del tftulo como un aceite naranja claro (282 mg).
1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) d ppm 10,03 (1H, br, s), 8,22 (1H, d), 8,07 (1H, dd), 7,02 - 7,19 (4H, m), 6,97 (1H, dd), 4,03 -4,18 (1H, m), 2,04 (6H, s), 1,40 (9H, s), 1,27 (3H, d); UPLC_B: 0,89 min, 386 [M+H]+.
35 Intermedio 44
W1-{6-[(2,6-dimetilfenil)oxi]-3-piridinil}-D-alaninamida
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En un matraz de fondo redondo de 50 mL se disolvio [(1R)-2-({6-[(2,6-dimetilfenil)oxi]-3-piridinil}amino)-1 -metil-2- oxoetil]carbamato de 1,1-dimetiletilo (Intermedio 43, 282 mg) en diclorometano (2 mL) para proporcionar una 40 disolucion amarilla. Se anadio acido trifluoroacetico (2 mL, 26,0 mmoles). La mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente. Despues de 20 min, el disolvente se evaporo en vado rindiendo un aceite amarillo que se
cargo en un cartucho SCX de 5 g. Despues se hizo un barrido con 25 mL de MeOH seguido de 25 mL de una disolucion de amoniaco 2 M en MeOH. El eluato de amoniaco se evaporo en vado para rendir el compuesto del tftulo como un aceite amarillo que solidifico (173,8 mg).
1H RMN (400 MHz, CDCls) d ppm 9,51 (1H, br, s), 8,23 - 8,12 (2H, m), 7,17 - 7,01 (3H, m), 6,85 -6,75 (1H, m), 3,64 5 (1H, q), 2,13 (6H, s), 1,83 (2H, br, s), 1,44 (3H, d); UPLC_B: 0,70 mins, 286 [M+H]+.
Intermedio 45
2-[(2-etilfenil)oxi]-5-nitropiridina
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En un vial de microondas de 20 mL, se disolvio 2-cloro-5-nitropiridina (500 mg, 3,15 mmoles) en N,N- 10 dimetilformamida (10 mL) para proporcionar una disolucion marron clara. Se anadieron 2-etilfenol (0,378 mL, 3,15 mmoles) y K2CO3 (1.308 mg, 9,46 mmoles). El recipiente de reaccion se cerro hermeticamente y se calento en un Biotage Initiator a 110°C durante 1 hora. Despues de enfriar, la reaccion se completo. La mezcla de reaccion se paro con 10 mL de agua y se diluyo con 10 mL de Et2O. Las fases se separaron mediante un embudo de separacion. La fase organica se lavo con 3x10 mL de agua, 10 mL de salmuera, se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se 15 evaporo en vado para proporcionar el compuesto del tftulo como un aceite naranja claro. (623 mg).
1H RMN (400 MHz, CDCla) 8 ppm 9,06 (1 H, d), 8,49 (1 H, dd), 7,40 - 7,34 (1H, m), 7,33 - 7,28 (2H, m), 7,10 - 7,05 (1H, m), 7,04 (1H, d), 2,55 (2H, q), 1,18 (3H, t); UPLC_B: 0,95 min, 245 [M+H]+.
Intermedio 46
6-[(2-etilfenil)oxi]-3-piridinamina
20
En un matraz de fondo redondo de 50 mL se disolvio 2-[(2-etilfenil)oxi]-5-nitropiridina (Intermedio 45, 623 mg) en etanol (10 mL) para proporcionar una disolucion naranja clara. Se anadieron paladio sobre carbon (244 mg, 0,230 mmoles) e hidrazina hidrato (0,442 mL, 4,59 mmoles). La mezcla de reaccion se agito a 90°C. Despues de 3 horas, la reaccion se completo. La mezcla de reaccion se filtro y la fase organica se evaporo en vado rindiendo 1,1408 g de 25 un solido naranja oscuro que se cargo en un cartucho de SCX de 10 g. Despues se hizo un barrido con 200 mL de etanol seguido de 50 mL de una disolucion de amoniaco 2 M en MeOH. El eluato de amoniaco se evaporo en vado para rendir el compuesto del tftulo como un solido naranja oscuro (456,1 mg). 1
1H RMN (400 MHz, CDCls) 8 ppm 7,71 (d, 1 H), 7,26 - 7,31 (m, 1 H), 7,16 - 7,22 (m, 1 H), 7,10 - 7,15 (m, 1 H), 7,07 (dd, 1 H), 6,96 (dd, 1 H), 6,70 (d, 1 H), 3,52 (br. s., 2 H), 2,64 (q, 2 H), 1,20 (t, 3 H); UPLC_B: 0,75 mins, 215 [M+H]+.
30 Intermedio 47
[(1R)-2-({6-[(2-etilfenil)oxi]-3-pindinil}amino)-1-metil-2-oxoetil]carbamato de 1,1-dimetiletilo
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En un vial de 8 mL se disolvio N-{[(1,1-dimetiletil)oxi]carbonil}-D-alanina (193 mg, 1,022 mmoles) en N,N- dimetilformamida (4 mL) para proporcionar una disolucion incolora. Se anadieron W-etil-W-(1-metiletil)-2-propanamina 35 (0,223 mL, 1,277 mmoles) y tetrafluoroborato de W-[(1H-1,2,3-benzotriazol-1-iloxi)(dimetilamino)metiliden]-A/-
metilmetanaminio (328 mg, 1,022 mmoles). La mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente durante 15 min. Se anadio 6-[(2-etilfenil)oxi]-3-piridinamina (Intermedio 46, 228 mg) y la mezcla de reaccion se calento hasta 60°C durante 32 horas. El disolvente se evaporo en vado usando el Genevac rindiendo un aceite marron oscuro, que se purifico por cromatograffa en gel de sflice (sistema Biotage, columna SNAP de 25g) eluyendo con un gradiente 40 Ciclohexano/EtOAc de 3:1 C a 1:1 en 10 VC; despues 1:1 para 5V. Las fracciones recogidas rindieron el compuesto del tftulo (251,1 mg).
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1H RMN (400 MHz, CDCI3): 6 ppm 8,70 (1H, br, s), 8,17 (1H, d), 8,05 (1H, dd), 7,31 (1H, dd), 7,14 - 7,27 (2H, m), 7,02 (1H, dd), 6,82 (1H, d), 5,11 (1H, d), 4,22 -4,52 (1H, m), 2,60 (2H, q), 1,47 (9H, s), 1,44 - 1,46 (3H, m), 1,18 (3H, t); UPLC_B: 0,90 min, 386 [M+H]+.
Intermedio 48
W1-{6-[(2-etilfenil)oxi]-3-piridinil}-D-alaninamida
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En un matraz de fondo redondo de 50 mL se disolvio [(1R)-2-({6-[(2-etilfenil)oxi]-3-piridinil}amino)-1 -metil-2- oxoetil]carbamato de 1,1 -dimetiletilo (Intermedio 47, 251,1 mg) en diclorometano (2 mL) para proporcionar una disolucion naranja clara. Se anadio acido trifluoroacetico (2 mL, 26,0 mmoles). La mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente. Despues de 20 minutos, el disolvente se evaporo en vado rindiendo un aceite amarillo que se cargo en un cartucho SCX de 5 g y se lavo con 25 mL de MeOH seguido de 25 mL de disolucion 2M de amoniaco en MeOH. El eluato de amoniaco se evaporo en vado para rendir el compuesto del tftulo como un aceite amarillo que solidifico (170,0 mg).
1H RMN (400 MHz, CDCla): 6 ppm 9,58 (1H, br, s), 8,24 (1H, d), 8,20 (1H, dd), 7,30 - 7,35 (1H, m), 7,15 - 7,27 (2H, m), 7,03 (1H, dd), 6,85 (1H, d), 3,69 (1H, q), 2,61 (2H, q), 2,31 (2H, br. s), 1,46 (3H, d), 1,20 (3H, t); UPLC_B: 0,71 mins, 286 [M+H]+.
Intermedio 49
2-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-5-nitropiridina
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A una disolucion de 4-metil-3-(metiloxi)fenol (Intermedio 18, 400 mg) en N,N-dimetilformamida seca (15 mL), se anadieron carbonato de potasio (1.200 mg, 8,69 mmoles) y despues 2-cloro-5-nitropiridina (551 mg, 3,47 mmoles) y la mezcla de reaccion se agito durante 2 horas a 115°C. La reaccion se paro con agua (10 mL), se diluyo con salmuera (20 mL) y se extrajo con acetato de etilo (3 veces 30 mL). La capa organica se lavo con salmuera enfriada con hielo (2 veces 30 mL), se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se evaporo. El residuo se purifico por cromatograffa en gel de sflice (sistema Biotage, columna SNAP de 100 g) con un gradiente de ciclohexano/acetato de etilo de 10/0 a 8/2. La evaporacion rindio el compuesto del tftulo como un aceite amarillo claro (570 mg).
1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) 6 ppm: 2,16 (3H, s), 3,76 (3H, s), 6,68 - 6,73 (1H, m), 6,83 - 6,86 (1H, m), 7,24 - 7,18 (2H, m), 8,64 - 8,58 (1H, m), 9,08 - 9,02 (1H, m); UPLC_B: 0,93 min, 261 [M+H]+.
Intermedio 50
6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinamina
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A una disolucion de 2-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-5-nitropiridina (Intermedio 49, 568 mg) en tetrahidrofurano (25 mL)/agua (12,50 mL), se anadieron hierro (609 mg, 10,91 mmoles) y despues cloruro de amonio (584 mg, 10,91 mmoles) y la mezcla de reaccion se agito durante 8 horas a temperatura ambiente. El catalizador se separo por filtracion y la disolucion se diluyo con disolucion acuosa saturada de Na2C03 (5 mL) y se extrajo con acetato de etilo (2 veces 40 mL). Las capas organicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se evaporaron, y el residuo se purifico por cromatograffa en gel de sflice (sistema Biotage con una columna SNAP de 50 g) usando como eluyente un gradiente de ciclohexano/acetato de etilo de 8/2 a 1/1. La evaporacion rindio el compuesto del tftulo como un aceite amarillo claro (465 mg).
1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) 6 ppm: 7,54 (1H, d), 7,06 (2H, ddd), 6,72 (1H, d), 6,59 (1H, d), 6,38 (1H, dd), 5,07 (2H, s), 3,73 (3H, s), 2,10 (3H, s); UPLC_B: 0,72 min, 231 [M+H]+.
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{(1R)-1-metil-2-[(6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)amino]-2-oxoetil}carbamato de 1,1-dimetiletilo
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A una disolucion de N-{[(1,1-dimetiletil)oxi]carbonil}-D-alanina (181 mg, 0,955 mmoles) en N,N-dimetilformamida seca (3 mL), se anadieron DIPEA (0,303 mL, 1,737 mmoles) y despues TBTU (335 mg, 1,042 mmoles) y la mezcla de reaccion se agito durante 15 minutos a temperatura ambiente. Despues se anadio 6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}- 3-piridinamina (Intermedio 50, 200 mg) y la mezcla de reaccion se agito durante 1 hora a la misma temperatura. La reaccion se paro con agua (2 mL), se diluyo con salmuera (10 mL) y se extrajo con acetato de etilo (2 x 20 mL). La capa organica se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se evaporo y el residuo se purifico por cromatograffa en gel de sflice (sistema Biotage, columna SNAP de 10 g) usando un gradiente cHex/EtOAc como eluyente de 100/0 a 70/30. Esto rindio el compuesto del tftulo (350 mg).
1H RMN (400 MHz, DMSO-da) d ppm 10,09 (1H, br, s), 8,38 - 8,29 (1H, m), 8,09 - 8,03 (1H, m), 7,12 (2H, d), 6,97 (1H, d), 6,70 (1H, d), 6,57 - 6,51 (1H, m), 4,16 - 4,04 (1H, m), 3,74 (3H, s), 2,13 (3H, s), 1,39 (9H, s), 1,26 (3H, d); UPLC_B: 0,87 min, 402 [M+H]+
Intermedio 52
W1-(6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)-D-alaninamida
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A una disolucion de {(1R)-1-metil-2-[(6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)amino]-2-oxoetil}carbamato de 1,1- dimetiletilo (Intermedio 51, 350 mg) en diclorometano seco (7,5 mL), se anadio lentamente TFA (2,5 mL, 32,4 mmoles) y la mezcla de reaccion se agito durante 1,5 horas a temperatura ambiente. Se evaporaron el disolvente y el exceso de TFA, y el residuo se purifico con un cartucho de SCX (10 g) para rendir el compuesto del tftulo como un aceite incoloro (258 mg).
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 8,40 (1H, d), 8,11 (1H, dd), 7,13 (1H, d), 6,96 (1H, d), 6,70 (1H, d), 6,54 (1H, dd), 3,75 (3H, s), 3,44 (1H, q), 3,33 (2H, br. s), 2,13 (3H, s), 1,22 (3H, d); UPLCB: 0,70 min, 302 [M+H]+
Intermedio 53
2-{[2-metil-5-(metiloxi)fenil]oxi}-5-nitropiridina
imagen81
A una disolucion de 2-metil-5-(metiloxi)fenol (Intermedio 12, 2 g) y 2-cloro-5-nitropiridina (2,1 g, 13,2 mmoles) en DMF (50 mL) se anadio carbonato de potasio (2,76 g, 20 mmoles) y la mezcla de reaccion se agito a 100°C toda la noche. La mezcla se evaporo en vado y se anadio agua (100 mL). Se extrajo con acetato de etilo (3 veces 100 mL) y las capas organicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio y se evaporaron para rendir un aceite marron, que se purifico por cromatograffa en columna en gel de sflice (fase movil: EtOAc/PE= 1/50-1/20) para proporcionar el compuesto del tftulo (1,5 g).
MS_2 (ESI): 261 [M+H]+
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6-{[2-metil-5-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinamina
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A una disolucion de 2-{[2-metil-5-(metiloxi)fenil]oxi}-5-nitropiridina (Intermedio 53, 1,5 g) en etanol (100 mL) se anadio Pd/C (5%, 200 mg) y la mezcla se agito a temperatura ambiente bajo atmosfera de H2 toda la noche. La mezcla se filtro a traves de una almohadilla de celite y el filtrado se evaporo para rendir un aceite amarillo, que se purifico por cromatograffa en columna en gel de sflice (fase movil: EtOAc/PE =1/5-1/2). Esto rindio el compuesto del tftulo (850 mg).
1HRMN (400 MHz, CDCla): 6 7,70 (1H, s), 7,12 (1H, d), 7,05 -7,08 (1H, d), 6,69 (1H, d), 6,63 -6,66 (1H, d), 6,54 (1H, s), 3,74 (3H, s), 3,45 (2H, s), 2,12 (3H, s); MS_2 (ESI): 231 [M+H]+
Intermedio 55
{(1R)-1-metil-2-[(6-(2-metil-5-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)amino]-2-oxoetil}carbamato de 1,1-dimetiletilo
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El compuesto del tftulo se preparo de una forma similar a la preparacion del Intermedio 15 reemplazando 4-{[2-metil- 5-(metiloxi)fenil]oxi}anilina con 6-{[2-metil-5-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinamina (Intermedio 54, 90 mg) para rendir el compuesto del tftulo (152 mg).
1H RMN (400 MHz, metanol-d4): 6 ppm 8,32 (1H, d), 8,05 (1H, d), 7,18 (1H, d), 6,86 (1H, d), 6,76 (1H, d), 6,61 (1H, d), 4,25 (1H, m), 3,13 (3H, s), 2,08 (3H, s), 1,46 (9H, s), 1,41 (3H, d); UPLC_B: 0,85 min, 402 [M+H]+
Intermedio 56
W1-(6-{[2-metil-5-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)-D-alaninamida
imagen84
El compuesto del tftulo se preparo de una forma similar a la preparacion del Intermedio 16 reemplazando {(1R)-1- metil-2-[(4-{[2-metil-5-(metiloxi)fenil]oxi}fenil)amino]-2-oxoetil}carbamato con {(1R)-1-metil-2-[(6-{[2-metil-5-(metiloxi) fenil]oxi}-3-piridinil)amino]-2-oxoetil}carbamato de 1,1-dimetiletilo (Intermedio 55, 150 mg) para rendir el compuesto del tftulo (120 mg).
1H RMN (400 MHz, metanol-d4): 6 ppm 8,32 (1H, d), 8,05 (1H, dd), 7,17 (1H, d), 6,83 (1H, d), 6,73 (1H, d), 6,58 (1H, d), 3,74 (3H, s), 3,63-3,50 (1H, m), 2,06 (3H, s), 1,36 (3H, d); UPLC_B: 0,66 min, 302 [M+H]+
Intermedio 57
2-metil-1-(metiloxi)-3-nitrobenceno
imagen85
A una disolucion de 2-metil-3-nitrofenol (15,3 g, 100 mmoles) en DMF (150 mL) se anadio hidruro de sodio (60% en aceite mineral, 2,6 g, 110 mmoles) a 0°C y la mezcla se agito durante 30 minutos a temperatura ambiente. Se anadio yoduro de metilo (28,4 g, 200 mmoles) y la mezcla se calento hasta 80°C durante 5 horas. Se anadio agua
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(100 mL) y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (3 veces 100 mL). Las fases de acetato de etilo combinadas se secaron sobre sulfato de sodio y se concentraron en vado para proporcionar un residuo, que se purifico por cromatograffa en columna en gel de s^lice (PE:EtOAc = 5:1). La evaporacion rindio el compuesto del tftulo como un solido amarillo (14,4 g).
Intermedio 58
2-metil-3-(metiloxi)anilina
imagen86
A una disolucion de 2-metil-1-(metiloxi)-3-nitrobenceno (Intermedio 57, 1,67 g) en metanol (50 mL) se anadio Pd/C (10%, 50 mg) y la mezcla de reaccion se agito bajo atmosfera de H2 durante 1 hora. La mezcla se filtro a traves de una almohadilla de celite. La evaporacion rindio el compuesto del tftulo como un solido (1,31 g).
Intermedio 59
2-metil-3-(metiloxi)fenol
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A una disolucion de 2-metil-3-(metiloxi)anilina (Intermedio 58, 1,31 g) en H2SO4 (6 M, 100 mL) se anadio por partes NaNO2 (794 mg, 11 mmoles) a 0°C. La mezcla se agito durante otras 2 horas a 40°C y se anadio agua (100 mL). La mezcla resultante se extrajo con acetato de etilo (3 veces 100 mL) y las fases de acetato de etilo combinadas se secaron y se evaporaron. El residuo se purifico por cromatograffa en columna en gel de sflice (PE: EtOAc= 5:1) para rendir el compuesto del tftulo como un solido (569 mg).
Intermedio 60
2-{[2-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-5-nitropiridina
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A una disolucion de 2-metil-3-(metiloxi)fenol (Intermedio 59, 1,3 g) en DMF (50 mL) se anadio hidruro de sodio (60% en aceite mineral, 480 mg, 0,012 moles) a 0°C y la mezcla se agito durante 30 minutos. Se anadio 2-cloro-5- nitropiridina (1.9 g, 0.012 moles, Aldrich) y la mezcla se calento a 60°C durante 3 horas. La mezcla se vertio en H2O (100 mL) y se extrajo con acetato de etilo (4 veces 100 mL). Las fases de acetato de etilo combinadas se secaron sobre sulfato de sodio y se concentraron en vacfo para proporcionar un residuo, que se purifico por cromatograffa en columna en gel de sflice (PE:EtOAc= 10:1) para rendir el compuesto del tftulo (2,3 g) como un ftquido.
MS_2 (ESI): 261 [M+H]+.
Intermedio 61
6-{[2-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinamina sal hidrocloruro
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A una disolucion de 2-{[2-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-5-nitropiridina (Intermedio 60, 2,3 g) en metanol (30 mL) se anadio Pd/C (10%, 0,3 g) y se burbujeo H2 en la mezcla durante 2 horas a temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se filtro a traves de una almohadilla de Celite. El filtrado se burbujeo en HCl gas. La mezcla resultante se concentro para rendir el compuesto del tftulo como un solido blanco (2 g).
5
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1HRMN (DMSO-da): 6 ppm 10,0 - 8,5 (3H, m), 8,03 - 8,02 (1H, s), 7,73 - 7,71 (1H, d), 7,22- 7,18 (1H, t), 7,05 - 7,02 (1H, d), 6,87 - 6,85 (1H, d), 6,65 - 6,63 (1H, d), 3,82 (3H, s), 1,90 (3H, s); MS_2 (ESI): 231 [M-(HCI)+H]+.
Intermedio 62
{(1R)-1-metil-2-[(6-{[2-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)amino]-2-oxoetil}carbamato de 1,1-dimetiletilo
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o
El compuesto del tftulo (307 mg) se preparo de una forma similar a la preparacion del Intermedio 25 reemplazando 6-{[3-(1-metiletil)fenil]oxi}-3-piridinamina con 6-{[2-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinamina (Intermedio 61,201 mg).
1H RMN (400 MHz, metanol-d4) : 6 ppm 8,75 (1H, d), 8,44 (1H, dd), 7,93 - 8,11 (1H, m), 7,53 (1H, dd), 7,19 (1H, t), 6,83 (2H, t), 6,62 (1H, d), 4,09 - 4,33 (1H, m), 3,87 (3H, s), 2,02 (3H, s), 1,44 - 1,51 (9H, m), 1,42 (3H, d); UPLC_B: 0,86 min, 402 [M+H]+
Intermedio 63
W1-(6-{[2-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)-D-alaninamida
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El compuesto del tftulo (268 mg) se preparo de una forma similar a la preparacion del Intermedio 26 reemplazando {(1R)-1-metil-2-[(6-{[3-(1-metiletil)fenil]oxi}-3-piridinil)amino]-2-oxoetil}carbamato de 1,1-dimetiletilo con {(1R)-1-metil- 2-[(6-{[2-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)amino]-2-oxoetil}carbamato de 1,1-dimetiletilo (Intermedio 62, 304 mg). En lugar de agitarse a 0°C durante 3 horas, la reaccion se agito a 0°C durante 1 hora y a temperatura ambiente durante 2 horas.
1H RMN (400 MHz, metanol-d4): 6 ppm 8,33 (1H, d), 8,03 (1H, dd), 7,18 (1H, t), 6,81 (2H, t), 6,60 (1H, d), 3,85 (3H, s), 3,66 (1H, q), 2,00 (3H, s), 1,40 (3H, d); UPLC_B: 0,67 min, 302 [M+H]+
Intermedio 64
((1R)-1-{[(6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)amino]carbonil}propil)carbamato de 1,1-dimetiletilo
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A una disolucion de acido (2R)-2-({[(1,1-dimetiletil)oxi]carbonil}amino)butanoico (106 mg, 0,521 mmoles) en N,N- dimetilformamida seca (2 mL) se anadieron DIPEA (0,152 mL, 0,869 mmoles) y despues TBTU (181 mg, 0,565 mmoles) y la mezcla de reaccion se agito durante 15 minutos a temperatura ambiente. Despues se anadio 6-{[4- metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinamina (Intermedio 50, 100 mg) y la mezcla de reaccion se agito toda la noche a la misma temperatura. La reaccion se paro con agua (1 mL), se diluyo con salmuera (1 mL) y se extrajo con acetato de etilo (3 veces 5 mL). La capa organica se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se evaporo y el residuo se purifico por cromatograffa en gel de sflice (sistema Biotage, columna SNAP de 10 g) usando como eluyente un gradiente de ciclohexano/acetato de etilo de 100/0 a 70/30 para rendir el compuesto del tftulo como un solido blanco (180 mg).
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 6 ppm: 10,13 (1H, s ancho), 8,31 - 8,37 (1H, m), 8,02 - 8,10 (1H, m), 7,09 - 7,16 (1H, m), 7,01 - 7,08 (1H, m), 6,96 (1H, d), 6,70 (1H, d), 6,51 - 6,58 (1H, m), 3,91 - 4,03 (1H, m), 3,75 (3H, s), 2,13 (3H, s), 1,50-1,76 (2H, m), 1,39 (9H, s), 0,90 (3H, t); UPLC_B: 0,91 min, 416 [M+H]+.
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(2R)-2-amino-N-(6-([4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)butanamida
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A una disolucion de ((1R)-1-{[(6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)amino]carbonil}propil)carbamato de 1,1- dimetiletilo (Intermedio 64, 175 mg) en diclorometano seco (DCM) (6 mL), se anadio lentamente TFA (2 mL, 26,0 mmoles) y la mezcla de reaccion se agito durante 1 h a temperature ambiente. Se evaporaron el disolvente y el exceso de TFA, y el residuo se purifico por cartucho de SCX (5 g) para rendir el compuesto del tftulo como un solido incoloro (122 mg).
1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) 6 ppm: 8,36 - 8,42 (1H, m), 8,11 (1H, dd), 7,12 (1H, d), 6,95 (1H, d), 6,67 - 6,73 (1H, m), 6,54 (1H, dd), 3,75 (3H, s), 3,24 (1H, m), 2,13 (3H, s), 1,59 - 1,73 (1H, m), 1,42 - 1,56 (1 H, m), 0,90 (3H, t); UPLC_B: 0,74 min, 316 [M+H]+.
Intermedio 65b (sal 2HCl del Intermedio 65)
(2R)-2-amino-N-(6-([4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)butanamida^2HCl
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Se mezclan 6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinamina (Intermedio 50, 500 g), acido (2R)-2-({[(1,1-
dimetiletil)oxi]carbonil}amino)butanoico (530 g) y Et3N (905 mL) conjuntamente en acetato de etilo (2 L) y se agitan a 0°C hasta la disolucion completa. Se anadio ®T3P (2,15 L) gota a gota en 30 minutos manteniendo la temperatura a ~0°C. Se anadio acetato de etilo (500 mL) para lavar la lmea. Procesamiento: se anadio disolucion acuosa al 10% p/p de carbonato de sodio (2,5 L) y la mezcla se agito durante 20 minutos. Despues, se anadieron agua (1,5 L) y acetato de etilo (1 L) y las dos fases se separaron. La capa organica se lavo con disolucion acuosa al 10% p/p de carbonato de sodio (2,5 L), agitando la mezcla durante 10 minutos antes de la separacion de las fases, despues con disolucion acuosa al 28% de acido malico (2,5 L) y finalmente con disolucion acuosa al 20% de NaCl (2,5 L). La disolucion organica se concentro hasta el volumen menor (<2 L), se anadio acetonitrilo (5 L), la disolucion se concentro hasta el volumen menor (<2L) y se anadio acetonitrilo hasta 12,5 L (es una disolucion del Intermedio 64 en acetonitrilo). A esta disolucion, se anadio disolucion 5-6N de HCl en Isopropanol (2,5 L) a 20°C y la mezcla de reaccion resultante se agito a 45°C durante 1,5 horas. La suspension obtenida se enfrio hasta 20°C, se agito durante 1 hora y se filtro. El solido recogido se lavo con 5/1 acetonitrilo/lsopropanol (3x1,5L), despues se seco en vacfo a 40°C, hasta un peso constante, obteniendo el compuesto del tftulo (817 g).
1H-RMN (400 MHz, DMSO-cfe): 6 ppm 11,13 (1H, s), 8,30-8,50 (m, 4H), 8,07 (1H, dd), 7,10 (1H, d), 6,98 (1H, d), 6,69 (1H, d), 6,53 (1H, dd), 3,99 (1H, m), 3,72 (3H, s), 2,10 (3H, s), 1,80-1,95 (2H m), 0,92 (3H, t).
Se uso un metodo generico de Cromatograffa Ionica con el fin de determinar la cantidad de Cloruro. Condiciones del Metodo: Equipo Dionex ICS2000, Tipo de columna Dionex AS18 2mm*250mm; Fase Movil KOH 41mM; Caudal 0,47 mL/min; Deteccion Conductimetrica. Resultado: Cloruro 17,5% p/p. A partir de este resultado se confirmo que el Intermedio 65b era una sal di-hidrocloruro.
Intermedio 66
((1S)-1-{[(6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)amino]carbonil}propil)carbamato de 1.1-dimetiletilo
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A una disolucion de acido (2S)-2-({[(1,1-dimetiletil)oxi]carbonil}amino)butanoico (66,2 mg, 0,326 mmoles) en N,N- dimetilformamida seca (1 mL) se anadieron DIPEA (0,095 mL, 0,543 mmoles) y despues TBTU (112 mg, 0,347 mmoles) y la mezcla de reaccion se agito durante 15 minutos a temperatura ambiente. Despues se anadio 6-{[4- metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinamina (Intermedio 50, 50 mg) y la mezcla de reaccion se agito a temperatura
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ambiente toda la noche. La mezcla se diluyo con acetato de etilo (10 mL) y se lavo con salmuera (3 veces 8 mL). La fase organica se separo, se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se evaporo. El residuo se purifico por cromatograffa ultrarrapida en gel de sflice usando una columna SNAP de 10 g y ciclohexano/acetato de etilo de 100/0 a 60/40 como eluyente. Esto rindio el compuesto del tftulo como un solido blanco (73 mg).
1H RMN (400 MHz, DMSO): 6 ppm 10,13 (1H, s), 8,33 (1H, d), 8,06 (1H, dd), 7,11 (1H, d), 7,05 (1H, d), 6,95 (1H, d), 6,69 (1H, d), 6,53 (1H, dd), 4,00 - 3,91 (1H, m), 3,73 (3H, s), 2,13 (3H, s), 1,74 - 1,51 (2H, m), 1,38 (9H, s), 0,89 (3H, t); UPLC_B: 0,92 min, 414 [M-H]-
Intermedio 67
(2S)-2-amino-W-(6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)butanamida
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A una disolucion de ((1S)-1-{[(6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)amino]carbonil}propil)carbamato de 1,1- dimetiletilo (Intermedio 66, 70 mg) en diclorometano (2,5 mL) enfriada hasta 0°C, se anadio TFA (0,779 mL, 10,11 mmoles) gota a gota. La mezcla de reaccion se agito a 0°C durante 1,5 horas y se evaporo. El residuo se diluyo con diclorometano (10 mL) y se neutralizo con una disolucion acuosa saturada de NaHCO3 (15 mL). La fase organica se separo, se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se evaporo para rendir el compuesto del tftulo como un aceite amarillo claro (53,1 mg).
1H RMN (400 MHz, DMSO): 6 ppm 8,39 (1H, d), 8,11 (1H, dd), 7,12 (1H, d), 6,95 (1H, d), 6,70 (1H, d), 6,54 (1H, dd), 3,74 (3H, s), 3,52 - 3,21 (1H, m), 2,12 (3H, s), 1,71 -1,44 (2H, m), 0,89 (3H, t). UPLC_B: 0,75 min, 314 [M-H]-
Intermedio 68
acido (2R)-2-({[(1,1-dimetiletil)oxi]carbonil}amino)butanoico
OH
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A una disolucion de acido (2R)-2-aminobutmco 5 (1,95 g, 18,91 mmoles) en 19 mL de 1 M hidroxido de sodio acuoso y 13 mL de metanol se anadio Boc-antftdrido (4,95 g, 22,69 mmoles) a 0°C. La mezcla de reaccion se calento hasta temperatura ambiente y se agito durante 12 horas. Despues de evaporar la mayor parte del metanol, la disolucion se acidifico a pH 2 con HCl 1 M y se extrajo con acetato de etilo (3 veces 60 mL). Los extractos organicos se combinaron y se lavaron con salmuera (2 veces 12 mL). La evaporacion del disolvente rindio el compuesto del tftulo (3,48 g). 1
1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): 6 ppm 12,35 (1H, s), 7,02 (1H, d), 3,71 - 4,07 (1H, m), 1,47 - 1,79 (2H, m), 1,38 (9H, s), 0,88 (3H, t); UPLC: 0,60 min, 204 [M+H] ]+.
Intermedio 69
{(1R)-1-metil-2-[(6-{[3-(1-metiletil)fenil]oxi}-3-piridinil)amino]-2-oxoetil}carbamato de 1,1 -dimetiletilo
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A una disolucion de acido (2R)-2-({[(1,1-dimetiletil)oxi]carbonil}amino)butanoico (Intermedio 68, 875 mg) en N,N- dimetilformamida seca (50 mL), se anadieron DIPEA (0,935 mL, 5,36 mmoles, 1,5 equiv) y despues HATU (1,629 g, 4,28 mmoles, 1,2 equiv) y la mezcla de reaccion se agito durante 15 minutos a temperatura ambiente bajo argon.
Despues, se anadio (4-{[3-(metiloxi)fenil]oxi}fenil)amina 4-{[3-(metiloxi)fenil]oxi}anilina (Intermedio 24, 815 mg) y la mezcla de reaccion se agito a 63°C bajo argon. La reaccion se dejo con calentamiento 17 horas. Despues de evaporar, el residuo obtenido se purifico por cromatograffa en gel de sflice (sistema Companion, cartucho de 120 g) con un gradiente de ciclohexano/ acetato de etilo de 100/0 a 70/30. El compuesto del tftulo se obtuvo como un polvo amarillo (1,282 g)
1H RMN (400 MHz, metanol^): 6 ppm 8,37 (1H, d), 8,10 (1H, dd), 7,34 (1H, t), 7,13 (1H, d), 6,98 (1H, t), 6,92 (2H, m), 4,11 (1H, t), 2,94 - 2,89 (1H, m), 2,02-1,77 (1 H, m), 1,75-1,72 (1H, m), 1,48 (9H, s), 1,27 (6H, d), 1,04 (3H, t); UPLC: 0,91 min, 414 [M+1]+
Intermedio 70
(2R)-2-amino-W-(6-{[3-(1-metiletil)fenil]oxi}-3-piridinil)butanamida
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Se disolvio ((1R)-1-{[(6-{[3-(1-metiletil)fenil]oxi}-3-piridinil)amino]carbonil}propil)carbamato de 1,1 -dimetiletilo
(Intermedio 69, 1,28 g) en 18 mL de diclorometano seco. A esta disolucion a 0°C bajo argon se anadieron gota a gota 30 equivalentes de TFA (7,15 mL, 93 mmoles). La reaccion se agito durante 3 horas a 0°C. La mezcla de 10 reaccion se evaporo. El residuo obtenido se purifico por SCX en un cartucho de 50g. El cartucho se lavo con 3 VC de metanol, despues el compuesto se adsorbio en el cartucho, se lavo con 5 VC de metanol y se desorbio con 2 VC de amoniaco en metanol (1 N). Despues de evaporar los volatiles, se obtuvo el compuesto del tftulo (932 mg).
1H RMN (400 MHz, metanol^): 6 ppm 8,36 (1H, d), 8,08 (1H, dd), 7,30 (1H, t), 7,08 (1H, d), 6,98 - 6,78 (3H, m), 3,39 (1H, t), 2,94 - 2,84 (1H, m), 2,81 (2H, s), 1,87 - 1,74 (1H, m), 1,73 - 1,59 (1H, m), 1,25 (6H, d), 1,00 (3H, t); 15 UPLC: 0,60 min, 314 [M+1]+
Intermedio 71
{1,1dimetil-2-[(4-{[3-(metiloxi)fenil]oxi}fenil)amino]-2-oxoetil}carbamato de 1,1 -dimetiletilo
imagen102
A una disolucion de N-{[(1,1-dimetiletil)oxi]carbonil}-2-metilalanina (1,7 g, 8,36 mmoles) en N,N-dimetilformamida 20 seca (35 mL), se anadieron DIPEA (2,434 mL, 13,94 mmoles) y despues TBTU (2,80 g, 8,71 mmoles) y la mezcla de reaccion se agito durante 15 minutos a temperatura ambiente. (Se anadio 4-{[3-(metiloxi)fenil]oxi}fenil)amina (1,5 g, 6,97 mmoles) y la mezcla de reaccion se agito toda la noche a la misma temperatura. La reaccion se paro con salmuera (100 mL) y se extrajo con acetato de etilo (dos veces 150 mL). La capa organica se lavo con salmuera enfriada con hielo (3 veces 100 mL), se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se evaporo. El residuo se purifico por 25 cromatograffa en gel de sflice (sistema Biotage, columna SNAP de 100 g) usando como eluyente un gradiente y
ciclohexano/acetato de etilo de 100/0 a 70/30 para rendir el compuesto del tftulo como un solido blanco (1,90 g).
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 9,47 (1H, br, s), 7,50 - 7,76 (2H, m), 7,24 (1H, t), 6,97 (3H, d), 6,67 (1H, dd), 6,44 -6,55 (2H, m), 3,72 (3H, s), 1,25 - 1,47 (15H, m); UPLC_B: 0,91 min, 401 [M+1]+.
Intermedio 72
30 2-metil-W1-(4-{[3-(metiloxi)fenil]oxi}fenil)alaninamida
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A una disolucion de {1,1-dimetil-2-[(4-{[3-(metiloxi)fenil]oxi}fenil)amino]-2-oxoetil}carbamato de 1,1 -dimetiletilo (Intermedio 71, 1,89 g) en diclorometano seco (60 mL) a 0°C, se anadio TFA (20mL, 260 mmoles) gota a gota y la mezcla de reaccion se agito durante 2 horas a la misma temperatura. Se evaporaron el disolvente y el exceso de 35 TFA, y el residuo se purifico por cartucho de SCX (50 g) para rendir el compuesto del tftulo como un aceite marron claro (1,34 g). 1
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 6 ppm 7,73 - 7,64 (2H, m), 7,25 (1H, t), 6,95 - 7,03 (2H, m), 6,64 - 6,70 (1H, m), 6,45 - 6,55 (2H, m), 3,72 (3H, s), 1,28 (6H, s); UPLC_B: 0,79 min, 301 [M+1]+
2,3-dimetilfenil 4-nitrofenil eter
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En un vial de microondas, se disolvio 1-fluoro-4-nitrobenceno (500 mg, 3,54 mmoles) en N,N-Dimetilformamida (10 5 mL) para proporcionar una disolucion amarilla clara. Se anadieron carbonato de potasio (1.469 mg, 10,63 mmoles) y 2,3-dimetilfenol (433 mg, 3,54 mmoles). El recipiente de reaccion se sello y se calento en un Biotage Initiator a 100°C durante 1 hora. Despues de enfriar, la reaccion se diluyo con 25 mL de Et2O. La fase organica se lavo 3 veces con 25 mL de agua, 10 mL de salmuera saturada, se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se evaporo en vado para rendir el compuesto del tftulo como un solido amarillo (865,1 mg).
10 1H RMN (400 MHz, CDCls): 6 ppm 8,25 - 8,14 (2H, m), 7,17 (1H, t), 7,13 - 7,08 (1H, m), 6,96 - 6,83 (3H, m), 2,36
(3H, s), 2,10 (3H, s); UPLC: 0,90 min, 244 [M+H]+.
Intermedio 74
4-[(2,3-dimetilfenil)oxi]anilina
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15 Se disolvio 2,3-dimetilfenil 4-nitrofenil eter (intermedio 73, 865 mg) en etanol (10 mL) para proporcionar una disolucion amarilla clara. Se anadieron hidrazina hidrato al 50% (0,698 mL, 7,1 mmoles) y Pd/C (37,8 mg, 0,36 mmoles). La mezcla de reaccion se agito a 90°C durante 1 hora. La mezcla de reaccion se filtro y la fase organica se evaporo en vado para rendir el compuesto del tftulo como un aceite amarillo claro (796 mg).
1H-RMN (400 MHz, CDCla): 6 ppm 7,07 - 6,96 (1H, m), 6,90 (1H, d), 6,83 - 6,73 (2H, m), 6,72 - 6,61 (3H, m), 2,33 20 (3H, s), 2,22 (3H, s); UPLC: 0,60 min, 214 [M+H]+.
Intermedio 75
[2-({4-[(2,3-dimetilfenil)oxi]fenil}amino)-1,1-dimetil-2-oxoetil]carbamato de 1.1 -dimetiletilo
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Se disolvio 4-[(2,3-dimetilfenil)oxi]anilina (Intermedio 74, 200 mg) en 5,0 mL de DMF. Despues, se anadieron DIPEA 25 (0,246 mL, 1,41 mmoles) y hAtU (428 mg, 1,13 mmoles). Despues de agitar durante 15 minutos, se anadio W-{[(1,1-
dimetiletil)oxi]carbonil}-2-metilalanina (229 mg, 1,13 mmoles) y la mezcla de reaccion se agito a 40°C toda la noche. Despues de retirar los volatiles, el crudo se purifico por cromatograffa en gel de sflice eluyendo con un gradiente de cHex/EtOAc de 100/0 a 0/100 para rendir el compuesto del tftulo (109 mg).
1H RMN (400 MHz, CDCh): 6 ppm 7,51 - 7,41 (2H, m), 7,12 - 6,95 (2H, m), 6,93 - 6,84 (2H, m), 6,82 - 6,73 (1H, m), 30 2,35 (3H, s), 2,19 (3H, s), 1,60 (3H, s), 1,57 (3H, s), 1,49 (9H, s); UPLC: 0,83 min, 399 [M+H]+.
Intermedio 76
N1-{4-[(2,3-dimetilfenil)oxi]fenil}-2-metilalaninamida
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Se disolvio [2-({4-[(2,3-dimetilfenil)oxi]fenil}amino)-1,1-dimetil-2-oxoetil]carbamato de 1,1 -dimetiletilo (Intermedio 75, 35 109 mg) en 4,0 mL de diclorometano y despues se anadio TFA (1,0 mL). La mezcla de reaccion se agito a
temperatura ambiente durante 1 hora. Despues de retirar los volatiles, el residuo se cargo en un cartucho de SCX y se eluyo con DCM/MeOH/NH3 (disolucion 2,0 M en MeOH). La evaporacion rindio 68 mg del compuesto del tttulo.
1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 6 ppm 7 62 (2H, d), 7,17 - 6,96 (2H, m), 6,84 (2H, d), 6,78 - 6,68 (1H, m), 2,30 (3H, s), 2,11 (3H, s), 1,29 (6 H, s); UPLC: 0,57 min, 299 [M+H]+.
5 Intermedio 77
[2-({6-[(2-etilfenil)oxi]-3-piridinil}amino)-1,1-dimetil-2-oxoetil]carbamato de 1,1 -dimetiletilo
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En un vial de 8 mL, se disolvio N-{[(1,1-dimetiletil)oxi]carbonil}-2-metilalanina (208 mg, 1,022 mmoles) en N,N- dimetilformamida (4 mL) para proporcionar una disolucion incolora. Se anadieron N-etil-N-(1-metiletil)-2-propanamina 10 (0,223 mL, 1,277 mmoles) y tetrafluoroborato de N-[(1H-1,2,3-benzotriazol-1-iloxi)(dimetilamino)metiliden]-N-
metilmetanaminio (328 mg, 1,022 mmoles). La mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente durante 15 min. Se anadio 6-[(2-etilfenil)oxi]-3-piridinamina (Intermedio 46, 228 mg) y la mezcla de reaccion se calento hasta 60°C. Despues de 24 horas, se anadieron 150 mg adicionales de tetrafluoroborato de N-[(1H-1,2,3-benzotriazol-1- iloxi)(dimetilamino)metiliden]-N-metilmetanaminio. Despues de 8 horas adicionales, el disolvente se evaporo en 15 vado usando el Genevac rindiendo un aceite marron oscuro que se purifico por cromatograffa en gel de sflice
(sistema Biotage, columna SNAP de 25g) con como eluyente un gradiente Ciclohexano/EtOAc de 3:1 a 1:1 en 10 VC, despues 1:1 para 5VC. Las fracciones recogidas rindieron el compuesto del tttulo como un solido naranja claro (88,6 mg).
1H RMN (400 MHz, CDCla): 6 ppm 9,06 (1H, br, s), 8,17 - 8,10 (2H, m), 7,33 (1H, dd), 7,29 - 7,15 (2H, m), 7,04 (1H, 20 dd), 6,91 - 6,82 (1H, m), 4,91 (1H, br, s), 2,62 (2H, q), 1,60 (6H, s), 1,47 (9H, s), 1,20 (3H, t); UPLC_B: 0,92 min, 400 [M+H]+.
Intermedio 78
N1-{6-[(2-etilfenil)oxi]-3-piridinil}-2-metilalaninamida
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/ \
25 En un matraz de fondo redondo de 50 mL, se disolvio [2-({6-[(2-etilfenil)oxi]-3-piridinil}amino)-1,1 -dimetil-2- oxoetil]carbamato de 1,1 -dimetiletilo (Intermedio 77, 88,6 mg) en diclorometano (2 mL) para proporcionar una disolucion amarilla. Se anadio acido trifluoroacetico (2 mL, 26,0 mmoles). La mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente. Despues de 20 minutos, el disolvente se evaporo en vado rindiendo un aceite amarillo que se cargo en un cartucho SCX de 5 g y se lavo con 25 mL de MeOH seguido de 25 mL de disolucion 2M de amoniaco 30 en MeOH. El eluato de amoniaco se evaporo en vado para rendir el compuesto del tftulo como un aceite amarillo que solidifico (67,1 mg).
1H RMN (400 MHz, CDCla): 6 ppm 9,90 (1H, br, s), 8,18 - 8,27 (2H, m), 7,33 (1H, dd), 7,15 - 7,28 (2H, m), 7,03 (1H, dd), 6,80 - 6,90 (1H, m), 2,62 (2H, q), 1,84 (2H, br, s), 1,49 (6H, s), 1,20 (3H, t); UPLC_B: 0,78 min, 300 [M+H]+.
Intermedio 79
35 [2-({6-[(2,6-dimetilfenil)oxi]-3-piridinil}amino)-1,1-dimetil-2-oxoetil]carbamato de 1,1 -dimetiletilo
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En un vial de 8 mL, se disolvieron N-{[(1,1-dimetiletil)oxi]carbonil}-2-metilalanina (204 mg, 1,003 mmoles) y N-etil-N- (1-metiletil)-2-propanamina (0,219 mL, 1,253 mmoles) en N,N-Dimetilformamida (4 mL) para proporcionar una disolucion amarilla clara. Se anadio hexafluorofosfato de W-[(dimetilamino)(3H-[1,2,3]triazolo[4,5-6]piridin-3-
iloxi)metiliden]-W-metilmetanaminio (381 mg, 1,003 mmoles). La mezcla de reaccion se volvio amarilla brillante y se agito a temperatura ambiente durante 15 minutos. Se anadio 6-[(2,6-dimetilfenil)oxi]-3-piridinamina (Intermedio 42, 223,8 mg) y la mezcla de reaccion se calento a 60°C. Despues de 4 horas, la reaccion se completo. El disolvente se evaporo en vado usando el Genevac rindiendo un aceite marron oscuro que se purifico por cromatograffa en gel de 5 sflice (sistema Biotage, columna SNAP de 25g) usando como eluyentes un gradiente Ciclohexano/EtOAc de 3:1 a 1:1 en 10 VC; despues 1:1 para 5 VC. Las fracciones recogidas rindieron el compuesto del tftulo como un solido amarillo claro (202,1 mg).
1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 8 ppm 9,55 (1H, br, s), 8,15 - 8,28 (1H, m), 7,99 - 8,11 (1H, m), 7,10 - 7,18 (2H, m), 7,04 - 7,10 (1H, m), 6,97 - 7,05 (1H, m), 6,94 (1H, d), 2,04 (6H, s), 1,38 (15H, br. s); UPLC_B: 0,91 min, 400 [M+H]+.
10 Intermedio 80
W1-{6-[(2,6-dimetilfenil)oxi]-3-piridinil}-2-metilalaninamida
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En un matraz de fondo redondo de 50 mL, se disolvio [2-({6-[(2,6-dimetilfenil)oxi]-3-piridinil}amino)-1,1 -dimetil-2- oxoetil]carbamato de 1,1 -dimetiletilo (Intermedio 79, 202,1 mg) en diclorometano (2 mL) para proporcionar una 15 disolucion amarilla clara. Se anadio acido trifluoroacetico (2 mL, 26,0 mmoles). La mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente durante 20 minutos. El disolvente se evaporo en vado para rendir un aceite amarillo que se cargo en un cartucho SCX de 5 g. Despues se hizo un barrido con 25 mL de MeOH seguido de 25 mL de una disolucion de amoniaco 2 M en MeOH. El eluato de amoniaco se evaporo en vado para rendir el compuesto del tftulo como un aceite amarillo que solidifico (144,4 mg).
20 1H RMN (400 MHz, CDCla): 8 ppm 9,87 (1H, br, s), 8,21 (1H, dd), 8,17 (1H, d), 7,03 - 7,16 (3H, m), 6,79 (1H, d), 2,14
(6H, s), 1,85 (2H, br. s), 1,47 (6H, s). UPLC_B: 0,77 min, 300 [M+H]+.
Intermedio 81
N-{[(1,1-dimetiletil)oxi]carbonil-D-valina
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25 A una disolucion de D-valina (1 g, 8,54 mmoles) en tetrahidrofurano (40 mL) se anadio una disolucion de NaOH (0,376 g, 9,39 mmoles) en agua (10 mL) seguido de la adicion de Boc-Anddrido (2,180 mL, 9,39 mmoles). La mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente toda la noche. Se anadio HCI al 5% en agua mientras se dejo que el pH alcanzara ~5-6 y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (50 mL). Las capas organicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se evaporaron para rendir el compuesto del tftulo como un aceite 30 incoloro (1,85 g).
1H-RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 8 ppm: 12,53 (1H, br,s), 6,91 - 6,80 (1H, m), 3,76 (1H, dd), 2,06 - 1,92 (1H, m), 1,38 (9H, s), 0,86 (6H, t).
Intermedio 82
((1R)-2-metil-1-{[(4-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}fenil)amino]carbonil}propil)carbamato de 1,1 -dimetiletilo
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A una disolucion de N-{[(1,1-dimetiletil)oxi]carbonil}-D-valina (Intermedio 81, 120 mg) en N,N-dimetilformamida seca (1 mL), se anadieron DIPEA (0,152 mL, 0,872 mmoles) y despues TBTU (182 mg, 0,567 mmoles) y la mezcla de reaccion se agito durante 5 minutos a temperatura ambiente. Despues se anadio 4-{[4-metil-3- (metiloxi)fenil]oxi}anilina (Intermedio 50, 100 mg) y la mezcla de reaccion se agito durante 3 horas a la misma 40 temperatura. La reaccion se paro con salmuera (2 mL) y se extrajo con acetato de etilo (3 veces 3 mL), la capa organica se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se evaporo. El residuo se purifico por cromatograffa en gel de
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s^lice (sistema Biotage, columna SNAP de 10 g) usando como eluyente un gradiente ciclohexano/acetato de etilo de 100/0 a 80/20 para rendir el compuesto del tftulo (113 mg) como un solido blanco.
UPLC_B: 1,04 min, 429 [M+H]+.
Intermedio 83
W1-(4-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}fenil)-D-valinamida
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A una disolucion de ((1R)-2-metil-1-{[(4-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}fenil)amino]carbonil}propil)carbamato de 1,1- dimetiletilo (Intermedio 82, 110 mg) en diclorometano seco (3 mL), se anadio TFA (1 mL, 12,98 mmoles) y la mezcla de reaccion se agito durante 1 hora a temperatura ambiente. El disolvente y el exceso de TFA se evaporaron, y el residuo se purifico por cartucho de SCX (5 g) para rendir el compuesto del tftulo como un solido amarillo claro (68 mg).
1H-RMN (400 MHz, DMSO-da) 8 ppm: 0,89 (dd, 6H), 7,66 - 7,60 (2H, m), 7,12 - 7,06 (1H, m), 7,00 - 6,92 (2H, m), 6,67 -6,61 (1H, m), 6,42 -6,36 (1H, m), 3,74 (3H, s), 3,13 -3,07 (1H, m), 2,11 (3H, s), 1,98 - 1,88 (1 H, m); UPLC_B: 0,89 min, 329 [M+H]+.
Intermedio 84
2-{[3-(1-metiletil)fenil]oxi}-5-nitropirimidina
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A una disolucion de 3-(1-metiletil)fenol (680 mg, 5 mmoles, Aldrich) en acetonitrilo (50 mL) se anadieron 2-cloro-5- nitropirimidina (800 mg, 5 mmoles) y trietilamina (1,01 g, 10 mmoles) y la mezcla resultante se calento a reflujo y se agito durante 3 horas. La mezcla de reaccion se concentro en vado y se anadio agua al residuo (80 mL). Se extrajo con acetato de etilo (3 veces 50 mL) y las capas organicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio y se evaporaron para rendir un aceite marron, que se purifico por cromatograffa en gel de sflice (fase movil: acetato de etilo: eter de petroleo = 0~20%) para rendir el compuesto del tftulo (900 mg).
MS_2 (ESI): 260 [M+H]+
Intermedio 85
2-{[3-(1-metiletil)fenil]oxi}-5-pirimidinamina
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A una disolucion de 2-{[3-(1-metiletil)fenil]oxi}-5-nitropirimidina (Intermedio 84, 520 mg) en metanol (50 mL) se anadio Pd/C. (10% en peso., 100 mg) y la mezcla se agito bajo atmosfera de H2 durante 3 horas. La mezcla resultante se filtro a traves de una almohadilla de celite y el filtrado se concentro en vado para rendir el compuesto del tftulo (400 mg).
MS_2 (ESI): 230 [M+H]+
Intermedio 86
{(1R)-1-metil-2-[(2-{[3-(1-metiletil)fenil]oxi}-5-pirimidinil)amino]-2-oxoetil}carbamato de 1,1-dimetiletilo
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A una disolucion de 2-{[3-(1-metiletil)fenil]oxi}-5-pirimidinamina (Intermedio 85, 229 mg) en acetonitrilo (20 mL) se anadieron W-{[(1,1-dimetiletil)oxi]carbonil}-D-alanina (378 mg, 2 mmoles), HBTU (474 mg, 1,25 mmoles) y DIPEA (387 mg, 3 mmoles) y la mezcla se calento a reflujo y se agito toda la noche. La mezcla resultante se concentro en vado y se anadio agua (100 mL). Se extrajo con acetato de etilo (3 veces 100 mL) y las capas organicas 5 combinadas se secaron sobre sulfato de sodio y se evaporaron para rendir un aceite marron, que se purifico por cromatograffa en gel de sflice (fase movil: acetato de etilo: eter de petroleo =1/5-1/2) para rendir el compuesto del tftulo (300 mg).
Intermedio 87
W1-(2-{[3-(1-metiletil)fenil]oxi}-5-pirimidinil)-D-alaninamida
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A una disolucion de {(1R)-1-metil-2-[(2-{[3-(1-metiletil)fenil]oxi}-5-pirimidinil)amino]-2-oxoetil}carbamato de 1,1- dimetiletilo (Intermedio 86, 300 mg) en acetato de etilo (50 mL) se burbujeo HCI (gas). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla resultante se concentro en vado y se neutralizo con una disolucion acuosa saturada de NaHCO3 hasta pH= 8 y se extrajo con diclorometano (5 veces 30 mL). Las capas organicas 15 combinadas se secaron sobre sulfato de sodio y se evaporaron para rendir el compuesto del tftulo (200 mg).
MS_2 (ESI): 301 [M+H]+
Intermedio 88
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etil 2-metil-5-nitrofenil eter
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20 Una mezcla de 2-metil-5-nitrofenol (450 mg, 2,94 mmoles), yoduro de etilo (356 pl, 4,41 mmoles) y carbonato de potasio (609 mg, 4,41 mmoles) en 15 mL de acetona se calento a reflujo durante 2 dfas. La mezcla de reaccion se filtro, se concentro en vado, y el residuo se repartio entre acetato de etilo y agua. La capa organica se seco sobre sulfato de sodio y se concentro en vado para proporcionar el compuesto del tftulo (397 mg), que se uso directamente en la siguiente etapa.
25 1H RMN (400 MHz, metanol-d4): 6 ppm 7,78 (1H, dd), 7,72 (1H, d), 7,40 (1H, dd), 4,22 - 4,17 (2H, q), 2,35 (3H, s),
1,53 (3H, t); UPLC: 0,82 min, 182 [M+H]+.
Intermedio 89
3-(etiloxi)-4-metilanilina
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30 Se anadio Fe en polvo (609 mg, 10,90 mmoles) a una disolucion de etil 2-metil-5-nitrofenil eter (Intermedio 88, 395 mg) en una mezcla THF/agua (15 mL/ 5 mL) seguido de cloruro de amonio (583 mg, 10,90 mmoles). La mezcla de reaccion se agito toda la noche bajo nitrogeno. La mezcla de reaccion se vertio en agua (20 mL) y el hierro se filtro. Se uso acetato de etilo para lavar el solido filtrado. El filtrado se extrajo con acetato de etilo (3 veces). Las capas combinadas de acetato de etilo se secaron sobre sulfato de sodio y se concentraron para proporcionar el compuesto 35 del tftulo (303 mg), que se uso directamente en la siguiente etapa.
1H RMN (400 MHz, CDCla): 6 ppm 6,90 (1H, d), 6,35 -6,02 (2 H, m), 3,97 (2 H, q), 2,11 (3 H, s), 1,41 (3 H, t); UPLC: 0,44 min, 152 [M+H]+.
Intermedio 90 3-(etiloxi)-4-metilfenol
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Una suspension de 3-(etiloxi)-4-metilanilina (Intermedio 89, 300 mg) en una mezcla de agua/acido sulfurico 5 concentrado al 98% (20 mL/ 7 mL) bajo argon se enfrio a 0°C. Se anadio lentamente una disolucion de nitrito de sodio (151 mg, 2,182 mmoles) en 4 mL de agua. La mezcla de reaccion se agito a 0°C durante 1 hora 30. La mezcla de reaccion se anadio lentamente a una disolucion de agua/acido sulfurico concentrado (18 mL/ 5 mL) pre-calentada a 90°C. La mezcla de reaccion se agito a 90°C durante 1 hora 15. Despues de enfriar, la mezcla de reaccion se extrajo con etil eter (4 veces). Las fases organicas reunidas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se 10 concentraron en vado para rendir el compuesto (276 mg).
1H RMN (400 MHz, metanol-d4): 6 ppm 6,87 (1H, d), 6,34 (1 H, d), 6,25 (1 H, dd), 3,97 (2 H, q), 2,06 (3 H, s), 1,40 - 1,37 (3 H, t); UPLC: 0,66 min, 153 [M+H]+.
Intermedio 91
2-{[3-(etiloxi)-metilfenil]oxi}-5-nitropirimidina
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Se disolvio 2-cloro-5-nitropiridina (114 mg, 0,716 mmoles, 1 equiv) en 3 mL de dimetilformamida. Se anadieron 3- (etiloxi)-4-metilfenol (Intermedio 90, 109 mg) y carbonato de potasio (198 mg, 1,432 mmoles). La mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente 3 horas. La mezcla de reaccion se filtro. El solido filtrado se lavo con diclorometano. Los volatiles se evaporaron en vado. Se anadieron al residuo acetato de etilo y salmuera. El compuesto se extrajo 2 20 veces con acetato de etilo y 2 veces con diclorometano. Las fases organicas reunidas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se evaporaron para rendir el compuesto del tttulo que se uso directamente en la siguiente etapa (113 mg). 1
1H RMN (400 MHz, CDCla): 6 ppm 9,33 (2H, s), 7,21 (1H, d), 6,72 - 6,72 (2H, m), 4,02 (2H, q), 2,25 (3H, s), 1,44 (3H, t); UPLC: 0,79 min, 276 [M+H]+
25 Intermedio 92
2-{[3-(etiloxi)-4-metilfenil]oxi}-5-pirimidinamina
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Se anadio Fe en polvo (89 mg, 1,598 mmoles) a una disolucion de 2-{[3-(etiloxi)-4-metilfenil]oxi}-5-nitropirimidina (Intermedio 91, 110 mg) en una mezcla THF/agua (9 mL/3 mL) seguido de cloruro de amonio (86 mg, 1,598 30 mmoles). La mezcla de reaccion se agito toda la noche bajo nitrogeno. La mezcla de reaccion se vertio en agua y se filtro el hierro. Se uso acetato de etilo para lavar el solido filtrado. El filtrado se extrajo con acetato de etilo (3 veces). Las capas combinadas de acetato de etilo se secaron sobre sulfato de sodio y se concentraron para proporcionar el compuesto del tftulo (94 mg) que se uso directamente en la siguiente etapa.
UPLC: 0,64 min, 246 [M+H]+
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((1R)-1-{[(2-{[3-(etiloxi)-4-metilfenil]oxi}-5 pirimidinil)amino]carbonil}propil)carbamato de 1,1-dimetiletilo
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A una disolucion de acido (2R)-2-({[(1,1-dimetiletil)oxi]carbonil}amino)butanoico (90 mg, 0,445 mmoles) en N,N- dimetilformamida (7 mL) se anadieron DIPEA (97 pl, 0,557 mmoles) y HATU (169 mg, 0,445 mmoles). La mezcla de reaccion se agito durante 10 minutos a temperatura ambiente, despues se anadio 2-{[3-(etiloxi)-4-metilfenil]oxi}-5- pirimidinamina (Intermedio 92, 91 mg). La mezcla de reaccion se agito durante 48 horas a temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se evaporo y se purifico por cromatograffa en gel de sflice (sistema Companion) con un gradiente Ciclohexano/EtOAc de 100/0 a 40/60 en 20 minutos y despues 40/60 durante 15 min para rendir el compuesto del tttulo (83 mg).
1H RMN (400 MHz, CDCls): 6 ppm 8,73 (2H, s), 7,13 (1H, d), 6,75 - 6,52 (2H, m), 4,17 - 4,09 (1H, m), 3,98 (2H, q), 2,20 (3H, s), 2,04 - 1,88 (1 H, m), 1,81 - 1,61 (1 H, m), 1,46 (9H, s), 1,40 (3H, t), 1,02 (3H, t); UPLC: 0,79 min, 431 [M+H]+
Intermedio 94
(2R)-2-amino-W-(2-{[3-(etiloxi)-4-metilfenil]oxi}-5-pirimidinil)butanamida
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A una disolucion de ((1R)-1-{[(2-{[3-(etiloxi)-4-metilfenil]oxi}-5-pirimidinil)amino]carbonil}propil)carbamato de 1,1- dimetiletilo (Intermedio 93, 80 mg) en diclorometano (1 mL) enfriada a 0°C, se anadio TFA (573 pl, 7,43 mmoles) gota a gota.. La mezcla de reaccion se agito a 0°C durante 1,5. El disolvente y el TFA se evaporaron. La mezcla se diluyo con diclorometano y una disolucion acuosa saturada de NaHCO3. La capa organica se separo, se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se evaporo para rendir el compuesto del tttulo (65 mg) que se uso directamente en la siguiente etapa.
1H RMN (400 MHz, CDCla): 6 ppm 9,39 (1H, s), 8,82 (2H, s), 7,14 (1H, d), 6,78 - 6,49 (2H, m), 3,98 (2 H, q), 3,47 (1H, dd), 2,20 (3H, s), 2,09 - 1,91 (1 H, m), 1,81 (2H, sb), 1,76 -1,56 (1 H, m), 1,02 (3H, t); UPLC: 0,54 min, 331 [M+H]+
Intermedio 95
N-{[(1,1-dimetiletil)oxi]carbonil}-3-metil-D-valina
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A una disolucion de 3-metil-D-valina (900 mg, 6,86 mmoles) en 7 mL de hidroxido de sodio acuoso 1 M y 7 mL de metanol se anadio Boc-antndrido (1,797 g, 8,23 mmoles) a 0°C. La mezcla de reaccion se calento a temperatura ambiente y se agito durante toda la noche. Despues de evaporar la mayor parte del metanol, la disolucion se acidifico a pH 2 con una disolucion acuosa de HCl (1 M) y se extrajo 3 veces con acetato de etilo (3 x 20 mL). Las capas organicas se combinaron y lavaron con salmuera (2 x 5mL). La evaporacion del disolvente rindio el compuesto del tftulo como un solido blanco con un rendimiento del 83% (1,36 g). 1
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 6 ppm 12,44 (1H, s), 6,82 (1H, d), 3,76 (1H, d), 1,38 (9H, s), 0,93 (9H, s); UPLC: 0,64 min, 232 [M+H]+
Intermedio 96
((1R)-2,2-dimetil-1-{[(6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)amino]carbonil}propil)carbamato de 1,1-dimetiletilo
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A una disolucion de N-{[(1,1-dimetiletil)oxi]carbonil}-3-metil-D-valina (Intermedio 95, 20,1 mg) en N,N- dimetilformamida seca (1 mL), se anadieron DIPEA (0,015 mL, 0,087 mmoles) y despues HATU (38,0 mg, 0,100 mmoles) y la mezcla de reaccion se agito durante 15 minutos a temperatura ambiente bajo argon. Despues, se anadio 6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinamina (Intermedio 50, 10 mg) y la mezcla de reaccion se agito a 50°C bajo argon durante 3 horas. La reaccion se dejo a temperatura ambiente toda la noche. La mezcla de reaccion se
evaporo. El residuo obtenido se disolvio en diclorometano. La fase organica se lavo con salmuera y despues con una disolucion acuosa saturada de NaHCO3. Se seco sobre sulfato de sodio. El residuo obtenido se purifico en gel de sflice (instrumento Companion) con ciclohexano/acetato de etilo como eluyentes de 100/0 a 70/30. Esto rindio el compuesto del tftulo (9,2 mg).
5 1H RMN (400 MHz, CDCls): 6 ppm 8,53 (1H, s), 8,21 (1H, d), 7,87 (1H, d), 7,09 (1H, d), 6,76 (1H, d), 6,59 (2H, m),
5,43 (1H, d), 4,10 (1H, d), 3,75 (3H, s), 2,17 (3H, s), 1,42 (9H, s), 1,07 (9H, s); UPLC ipqc: 0,87 min, 444 [M+H]+
Intermedio 97
3-metil-W1-(6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)-D-valinamida
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NH
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10 A una disolucion de ((1R)-2,2-dimetil-1-{[(6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)amino]carbonil}propil)carbamato de 1,1 -dimetiletilo (Intermedio 96, 8,2 mg) en diclorometano seco (0,5 mL) enfriada hasta 0°C, se anadio TFA (57 pl, 0,740 mmoles) gota a gota y la disolucion se agito durante 3 horas a esta temperatura. Los volatiles se evaporaron. El residuo se disolvio con diclorometano (2 mL) y se anadio una disolucion acuosa saturada de NaHCO3 (4 mL). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo dos veces con diclorometano. Las capas organicas reunidas se 15 secaron sobre sulfato de sodio y se evaporaron para rendir el compuesto del tftulo (6,2 mg).
RMN 1H (400 MHz, CDCla): 6 ppm 9,13 (1H, br s), 8,18 (2H, m), 7,11 (1H, d), 6,87 (1H, d), 6,60 (2H, m), 3,78 (3H, s), 3,27 (1H, s), 2,19 (3H, s), 1,69 (2H, br s), 1,06 (9H, s); UPLC_ipqc: 0,73 min, 344 [M+H]+
Intermedio 98
((1R)1-metil-1-{[(6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)amino]carbonil}propil)carbamato de 1,1-dimetiletilo
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A una disolucion de W-{[(1,1-dimetiletil)oxi]carbonil}-D-isovalina (94 mg, 0,434 mmoles) en N,N-dimetilformamida seca (1 mL) se anadieron DIPEA (0,114 mL, 0,651 mmoles) y HaTu (165 mg, 0,434 mmoles). La reaccion se agito a temperatura ambiente durante 15 minutos. Despues se anadio 6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinamina (Intermedio 50, 50 mg). Despues de agitar 1 hora a temperatura ambiente, la mezcla se calento a 50°C y se agito a 25 esa temperatura durante 4 horas, despues se enfrio a temperatura ambiente y se agito toda la noche a esa temperatura. La mezcla se paro con salmuera (2 mL) y se extrajo con acetato de etilo (3x2 mL). Las capas organicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se evaporaron. El residuo se purifico por cromatograffa ultrarrapida en gel de sflice usando una columna SNAP de 10 g y de ciclohexano/acetato de etilo como eluyentes de 100/0 a 60/40 (sistema Biotage) para rendir el compuesto del tftulo como un solido blanco (65 mg). 1H RMN (400 30 MHz, DMSO-cfe) 6 ppm 9,60 (1H, s ancho), 9,10 (1H, s ancho), 8,31 (1H, s ancho), 8,03 (1H, s ancho), 7,12 (1H, d), 6,93 (1H, d), 6,69 (1H, d), 6,53 (1H, dd), 3,74 (3H, s), 2,11 (3H, s), 1,72-1,86 (1H, m), 1,60-1,72 (1H, m), 1,41 (9H, s), 1,33 (3H, s), 0,78 (3H, t); UPLC: 0,87 min, 430 [M+H]+
Intermedio 99
W1-(6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)-D-isovalinamida
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A una disolucion de ((1R)-1-metil-1-{[(6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi]-3-piridinil)amino]carbonil}propil)carbamato de 1,1-dimetiletilo (Intermedio 98, 65 mg) en diclorometano seco (3 mL) enfriada hasta 0°C, se anadio TFA (0,700 mL, 9,08 mmoles) gota a gota. La reaccion se agito a esta temperatura durante 2 horas. La reaccion se paro con una disolucion acuosa saturada de NaHCO3 (20 mL) anadida a 0°C, y se extrajo con diclorometano (3x7 mL). Las capas
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organicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se evaporaron para rendir el compuesto del tftulo como un solido blanco (44 mg).
Intermedio 100
acido 1-({[(1,1-dimetiletil)oxi]carbonil}amino)ddobutanocarbox^lico
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A una disolucion de acido 1-aminoddobutanocarbox^lico (626 mg, 5,44 mmoles) en 5,6 mL de hidroxido de sodio acuoso 1 M y 4 mL de metanol se anadio Boc-antftdrido (1,425 g, 6,53 mmoles) a 0°C. La mezcla de reaccion se calento a temperatura ambiente y se agito durante 12 horas. Despues de evaporar la mayor parte del metanol, la disolucion se acidifico a pH 2 con HCl 1 M y se extrajo con acetato de etilo. Los extractos organicos se combinaron y lavaron con salmuera. La evaporacion del disolvente rindio el compuesto del tftulo (1,09 g).
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 6 ppm 12,21 (1H, s), 7,44 (1H, s), 2,29 - 2,47 (2H, m), 2,09 (2H, q), 1,74 - 1,94 (2H, m), 1,36 (9H, s); UPLC: 0,56 min, 216 [M+H]+
Intermedio 101
(1-{[(6-{[4-metil-3(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)amino]carbonil}ciclobutil)carbamato de 1,1 -dimetiletilo
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A una disolucion de acido 1-({[(1,1-dimetiletil)oxi]carbonil}amino)ciclobutanocarboxflico (Intermedio 100, 70,1 mg) en N,N-dimetilformamida seca (2 mL) se anadieron DIPEA (0,095 mL, 0,543 mmoles) y TBTU (112 mg, 0,347 mmoles). La mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente durante 15 minutos, despues se anadio 6-{[4-metil-3- (metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinamina (Intermedio 50, 50 mg) y la mezcla se agito a temperatura ambiente durante 1 dfa. La reaccion se paro con agua (5 mL) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 5 mL). La capa organica combinada se lavo con salmuera (3x8 mL), se separo, se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se evaporo. El residuo se purifico por cromatograffa ultrarrapida en gel de sflice usando una columna SNAP de 25g y ciclohexano:acetato de etilo como eluyentes de 10:0 a 7:3. Esto rindio el compuesto del tftulo como un polvo blanco (80 mg).
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 6 ppm 9,52 (1H, s), 8,34 (1H, s), 7,96 (1H, m), 7,51 (1 H, s), 7,13 (1 H, d), 6,95 (1 H, d), 6,70 (1 H, d), 6,54 (1 H, dd), 3,75 (3H, s), 2,13 (3H, s), 2,11 (2 H, br, s,), 1,76 - 1,97 (2H, m), 1,39 (9H, s), 1,26 (2 H, s); UPLC_B: 0,93 min, 426 [M-H]-
Intermedio 102
1-amino-W-(6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)ciclobutanocarboxamida
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A una disolucion de (1-{[(6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)amino]carbonil}ciclobutil)carbamato de 1,1- dimetiletilo (Intermedio 101, 80 mg) en diclorometano seco (2 mL) enfriada hasta 0°C se anadio TFA (0,865 mL, 11,23 mmoles) gota a gota. La mezcla de reaccion se agito a 0°C durante 2 horas, despues se dejo alcanzar temperatura ambiente. Se evaporaron el diclorometano y el exceso de TFA. El residuo se diluyo con diclorometano (5 mL) y se neutralizo con una disolucion saturada de NaHCO3. La capa organica se separo, se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se evaporo para rendir el compuesto del tftulo como un solido blanco (60 mg). 1
1H RMN (400 MHz, CDCla) d ppm 9,43 (1H, br. s.), 8,37 - 7,89 (2H, m), 7,09 (1H, d), 6,85 (1H, d), 6,67 - 6,39 (2H, m), 3,77 (3H, s), 2,92 - 2,62 (2H, m), 2,18 (3H, s), 1,97 - 2,06 (2H, m), 1,97 - 1,74 (2H, m); UPLC: 0,54 min, 328 [M+H]+
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Intermedio 103
acido 1-({(1,1-dimetiletil)oxi]carbonil}amino)ddopropanocarbox^lico
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El compuesto del tftulo (998 mg) se prepare de una forma similar a la preparacion del Intermedio 100 reemplazando el acido 1-aminoddobutanocarbox^lico con acido 1-aminoddopropanocarboxflico (550 mg, 5,44 mmoles).
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 6 ppm 12,26 (1H, s), 7,40 (1H, s), 1,38 (9H, s), 1,26 (2H, m), 0,96 (2H, m); UPLC: 0,52 min, 202 [M+H]+.
Intermedio 104
(1-{[(6-{[4-metil-3(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)amino]carbonil}ciclopropil)carbamato de 1,1-dimetiletilo
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El compuesto del tftulo (80 mg) se prepare de una forma similar a la preparacion del Intermedio 101 reemplazando el acido 1-({[(1,1-dimetiletil)oxi]carbonil}amino)cidobutanocarboxflico con acido 1-({[(1,1-dimetiletil)oxi]carbonil}amino) ciclopropanocarboxflico (Intermedio 103, 65,5 mg).
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 9,56 - 9,76 (1H, m), 8,34 (1 H, d), 8,04 (1 H, dd), 7,31 - 7,51 (1H, m), 7,13 (1H, d), 6,94 (1H, d), 6,71 (1H, d), 6,55 (1H, dd), 3,75 (3H, s), 2,13 (3H, s), 1,42 (9H, s), 1,26 - 1,39 (2H, m), 0,75 - 1,07 (2H, m); UPLC_B: 0,89 min, 412 [M-H]-
Intermedio 105
1-amino-W-(6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)ciclopropanocarboxamida
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El compuesto del tftulo (58 mg) se prepare de una forma similar a la preparacion del Intermedio 102 reemplazando (1-{[(6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)amino]carbonil}ciclobutil)carbamato de 1,1-dimetiletilo con (1-{[(6-{[4- metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)amino]carbonil}ciclopropii)carbamato de 1,1-dimetiletilo (Intermedio 104, 80 mg)
1H RMN (400 MHz, CDCla) d ppm 9,85 (1H, s), 8,23 (1H, d), 8,14 (1H, dd), 7,09 (1H, d), 6,85 (1H, d), 6,67 -6,45 (2H, m), 3,77 (3H, s), 2,18 (3H, s), 1,85 (2H, br. s.), 1,47 - 1,57 (2H, m), 0,96 - 0,85 (2H, m); UPLC: 0,52 min, 314 [M+H]+
Intermedio 106
3-(6-fluoro-3-piridinil)-5,5-dimetil-2,4-imidazolidindiona
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Se establecieron dos reacciones en paralelo. Para cada una de ellas, a una disolucion de 5,5-dimetil-2,4- imidazolidindiona (1,5 g, 11,71 mmoles) en diclorometano seco (100 mL), se anadieron acido (6-fluoro-3- piridinil)boronico (1,980 g, 14,05 mmoles), acetato de cobre(II) (2,126 g, 11,71 mmoles) y piridina (1,420 mL, 17,56 mmoles). La reaccion se dejo con agitacion bajo atmosfera de aire a temperatura ambiente toda la noche. Las dos mezclas de reaccion se combinaron y el solido se retiro por filtracion. La disolucion resultante se lavo con agua (90 mL). La fase acuosa se extrajo dos veces con diclorometano (dos veces 90 mL). Las fases organicas se combinaron y se lavaron con salmuera y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro. La eliminacion del disolvente rindio un residuo que se purifico por cromatograffa en gel de sflice (sistema Biotage, columna SNAP de 100g) usando como eluyente un gradiente y ciclohexano/acetato de etilo de 65/35 a 50/50 para rendir el compuesto del tftulo como un solido blanco (1,27 g).
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1H RMN (400 MHz, CDCI3): 6 ppm 8,40 (1H, m), 7,94 (1H, m), 7,06 (1H, dd), 6,18 (1H, br. s), 1,57 (6H, s); UPLC ipqc: 0,56 min, 224 [M+H]+
Intermedio 107
hidrodoruro de 2-metilalaninato
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H—Cl
Se disolvio acido 2-amino-2-metilpropionico (25 g, 242,43 mmoles) en metanol (150 mL). Se anadio cloruro de tionilo (25 mL) gota a gota a 0°C a la mezcla de reaccion. La reaccion se puso a reflujo durante 3 horas, se evaporo y se seco en vado. El solido se lavo varias veces con Et2O y se seco, para rendir el compuesto del tttulo (37 g) como un solido blanco.
1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 6 ppm 8,71 (3H, s), 3,77 (3H, s), 1,5 (6H, s).
Intermedio 108
3-(1,1-dimetiletil)-4-hidroxibenzaldel'ndo
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Se disolvio 2-(1,1-dimetiletil)fenol (10 g, 66,67 mmoles) en 40 mL de MeOH y se anadio gota a gota NaOH (40 g, 1 mol) disuelto en 40 mL de agua. Despues se anadieron 40 mL de CHCh (durante el transcurso de 1 h) a 60°C. La mezcla de reaccion se agito a esa temperatura durante 3 h. Despues de enfriar hasta r.t., la mezcla se enfrio a 0°C y se anadio HCl 4 M hasta que la disolucion alcanzo pH 5-6. La mezcla se extrajo con DCM (tres veces) y los extractos organicos recogidos se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se evaporaron. El crudo se cargo en una columna de gel de sflice y se eluyo con ciclohexano/EtOAc (ciclohexano/EtOAc de 100:0 a 80:20, despues plato a 80:20) rindiendo 766 mg del compuesto del tttulo.
1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe): 6 ppm 10,62 (1H, s), 9,79 (1H, s), 7,73 (1H, m), 1,38 (9H, s); UPLC ipqc: 0,97 min, 177 [M-H]-.
br. s), 7,67-7,57 (1H, m), 7,01 - 6,90 (1H,
Intermedio 109
3-(1,1-dimetiletil)-4-hidroxibenzonitrilo
imagen142
Se agitaron 3-(1,1-dimetiletil)-4-hidroxibenzaldel'ndo (Intermedio 108, 550 mg) e hidrocloruro de hidroxilamina (322 mg, 4,63 mmoles) en 8,0 mL de acido acetico a reflujo durante 1 h. Despues de enfriar hasta 0°C, la mezcla se vertio en Et2O y se lavo una vez con agua y una vez con NaOH (disolucion acuosa al 5%). Las fases acuosas recogidas se extrajeron con Et2O (dos veces) y las fases organicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron, se evaporaron y se trituraron con pentano, rindiendo 540 mg del compuesto del tttulo.
1H-RMN (400 MHz, DMSO-cfe): 6 ppm 10,92 (1H, s ancho), 7,53 - 7,45 (2H, m), 6,92 (1H, d), 1,34 (9H, s); UPLC ipqc: 1,03 min, 174 [M-H]-.
Intermedio 110
3-bromo-4-[(fenilmetil)oxi]benzonitrilo
imagen143
Se disolvio 3-bromo-4-hidroxibenzonitrilo (5,94 g, 0,03 moles) en 100 mL de acetona seca. Se anadio carbonato de potasio (8,29 g, 0,06 moles). A la mezcla de reaccion, se anadio bromuro de bencilo gota a gota (5 g, 0,03 moles). La mezcla de reaccion se agito a 50°C toda la noche. Despues, se enfrio hasta temperatura ambiente, se filtro y se
evaporo. El residuo obtenido se disolvio en acetato de etilo (300 mL) y se anadio agua (200 mL). Las fases se separaron y las fases organicas reunidas se secaron sobre sulfato de sodio. La evaporacion rindio el compuesto del tttulo (7,6 g) como un solido amarillo claro.
1H RMN (400 MHz, CDCI3): 6 ppm 7,85 (1H, d), 7,57 (1H, dd), 7,45 - 7,36 (5H, m), 6,99 (1H, d), 5,23 (2H, s); UPLC 5 ipqc: 1,24 min.
Los compuestos siguientes se prepararon usando la metodologfa anterior, reemplazando 3-bromo-4- hidroxibenzonitrilo con el fenol sustituido apropiadamente, como se describe en los Esquemas de Reaccion anteriores.
Int.
Estructura Nombre Fenol Caracterizacion por RMN Caracterizacion por UPLC_ipqc
111
>F° 1-bromo-4- [(fenilmetil)oxi]-2- (trifluorometil)oxi]benceno 4-bromo-3- [(trifluorometil)oxi]fenol 1H RMN (400 MHz, CDCI3): 6 ppm 7,19 - 7,78 (6H, m), 6,73 - 7,14 (2H, m), 5,06 (2H, br. s.) 1,44 min
10 Intermedio 112
3-etil-4-[(fenilmetil)oxi]benzonitrilo
imagen144
A una disolucion 1M de bromuro de etil magnesio (2 mL, 1,5 equiv), se anadio THF (10 mL) y la mezcla de reaccion se enfrio hasta 0°C. Se anadio lentamente una disolucion de 0,5 M en THF de dicloruro de cinc (4 mL, 1,5 equiv) y la 15 mezcla de reaccion se agito durante 30 min a la misma temperatura. Se anadio Pd(fBu3P)2 (102 mg, 0,1 equiv) seguido de la adicion de una disolucion de 3-bromo-4-[(fenilmetil)oxi]benzonitrilo (Intermedio 110, 576 mg) en tHf y la reaccion se dejo que alcanzara temperatura ambiente. Despues de agitar 30 minutos, se anadio algo de Pd(fBu3P)2 adicional (51 mg, 0,05 equiv), despues 30 min de agitacion, despues la tercera adicion de Pd(fBu3P)2 (51 mg, 0,05 equiv) y agitacion 30 min. La mezcla de reaccion se paro con una disolucion acuosa saturada de NH4CI 20 (100 mL) y se extrajo 3 veces con acetato de etilo (3 x 150 mL). Las fases organicas reunidas se filtraron en celite,
se secaron sobre sulfato de sodio. El residuo obtenido se purifico por cromatograffa en gel de silice (sistema Companion, cartucho de Si de 40g) usando como eluyente un gradiente ciclohexano/acetato de etilo 100:0, despues 100:0 a 90:10. La evaporacion rindio el compuesto del tttulo (336 mg) como un solido blanco.
1H RMN (400 MHz, CDCI3): 6 ppm 7,49 - 7,27 (7H, m), 6,94 (1H, d), 5,15 (2H, s), 2,72 (2H, q), 1,23 (3H, t); UPLC 25 ipqc: 1,30 min, 236 [M-H]-.
Intermedio 113
1-metil-4-[(fenilmetil)oxi]-2-[(trifluorometil)oxi]benceno
imagen145
Preparacion de la disolucion de organometalico: A una disolucion de 1M ZnCl2 en Et2O (6 mL) se anadio lentamente 30 a temperatura ambiente una disolucion de disolucion 1,4M de bromuro de metil magnesio en THF (4,3 mL) y la mezcla de reaccion se agito durante 20 minutos a temperatura ambiente.
A una disolucion de 1-bromo-4-[(fenilmetil)oxi]-2-[(trifluorometil)oxi]benceno (Intermedio 111, 537 mg, 1,55 mmoles) y Pd(fBu3P)2 (208 mg, 0,4 mmoles), calentada a 60°C, se anadieron 5,15 mL de la disolucion de organometalico previamente formada y la mezcla de reaccion se agito durante 1 hora a 60°C. Se anadieron 5,15 mL adicionales de 35 la disolucion de organometalico y la mezcla de reaccion se agito durante 30 minutos a 60°C. Despues de enfriar, la reaccion se paro con agua (1 mL), se diluyo con una disolucion acuosa saturada de cloruro de amonio (20 mL) y se
extrajo con acetato de etilo (2x50 mL). La capa organica se lavo con salmuera (2x20mL), se seco (Na2SO4), se filtro y se evaporo. El crudo se purifico por cromatograffa ultrarrapida (silice, de 100:0 a 80:20 Ciclohexano/EtOAc) para proporcionar el compuesto del tttulo (203 mg) como solido.
1H RMN (400 MHz, CDCI3): 8 ppm 7,30 - 7,49 (5H, m), 7,15 (1H, d), 6,79 - 6,90 (2H, m), 5,05 (2H, s), 2,25 (3H, s); 5 UPLC ipqc: 1,43 min, 281 [M-H]-.
Los compuestos siguientes se prepararon usando la metodologfa anterior, reemplazando 1-bromo-4-[(fenilmetil)oxi]-
2-[(trifluorometil)oxi]benceno con el compuesto halo sustituido apropiadamente, como se describe en los Esquemas de Reaccion anteriores.
Int.
Estructura Nombre Compuesto halo Caracterizacion por RMN Caracterizacion por UPLC_ipqc
114
jfY 3-metil-4-[(5-nitro-2- pirimidinil)oxi]benzonitrilo 3-bromo-4-[(5-nitro-2- pirimidinil)oxi]benzonitrilo] (Intermedio 130) 1H RMN (400 MHz, CDCI3): 8 ppm 9,36 (2H, s), 7,68 (1H, s), 7,64 (1H, d), 7.25 (1H, d), 2.26 (3H, s) 0,94 min
10 Intermedio 115
3-etil-4-hidroxibenzonitrilo
imagen146
Se disolvio 3-etil-4-[(fenilmetil)oxi]benzonitrilo (Intermedio 112, 334 mg) en 15 mL de EtOAc/EtOH (2/1) y se anadio 10% en moles de Pd/C (0,1 equiv) a la disolucion. La mezcla resultante se agito toda la noche a temperatura 15 ambiente bajo atmosfera de hidrogeno gas. La mezcla de reaccion se filtro bajo argon y el disolvente se elimino. El residuo obtenido se purifico por cromatograffa en gel de sflice (sistema Companion, cartucho de Si de 40g) usando como eluyente un gradiente ciclohexano/acetato de etilo de 100:0 a 80:20. La evaporacion rindio el compuesto del fftulo (148 mg) como un solido blanco.
1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 8 ppm 10,50 (1H, br s), 7,50 (2H, m), 6,92 (1H, d), 2,55 (2H, q), 1,12 (3H, t); UPLC 20 ipqc: 0,84 min, 146 [M-H]-
Los compuestos siguientes se prepararon usando la metodologfa anterior, reemplazando 3-etil-4- [(fenilmetil)oxi]benzonitrilo con el fenol bencilado apropiado.
Int
Estructura Nombre Fenol bencilado Caracterizacion por RMN Caracterizacion por UPLC_ipqc
116
-K 4-metil-3- [(trifluorometil)oxi]fenol 1-metil-4- [(fenilmetil)oxi]-2- [(trifluorometil)oxi] (Intermedio 113) 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 8 ppm 9,77 (1H, br. s.), 7,15 (1 H, d), 6,63 - 6,75 (2H, m), 2,13 (3H, s) 1,01 min, 192 [M-H]-
Intermedio 117
25 4-hidroxi-2-yodobenzonitrilo
imagen147
A una disolucion de 2-fluoro-4-yodobenzonitrilo (5,0 g, 20,24 mmoles) en acetonitrilo seco (100 mL) se anadio trimetilsilanolato de potasio (1,18 g) y la mezcla de reaccion se agito toda la noche a 50°C. El disolvente se elimino bajo presion reducida y el residuo se disolvio en acetato de etilo (100 mL) y se anadio una disolucion acuosa de tampon de pH 3 hasta pH ~ 5. Se separaron dos fases y la capa organica se seco (Na2SO4), se filtro y se evaporo 5 para rendir el compuesto del tttulo (4,90 g) como un solido marron.
1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 8 ppm 10,92 (1H, s), 7,65 (1H, d), 7,39 (1H, d), 6,93 (1H, dd); UPLC ipqc: 0,81 min, 244 [M-H]-.
Los compuestos siguientes se prepararon usando la metodologfa anterior, reemplazando 4-fluoro-2-yodobenzonitrilo con el fluoro benzonitrilo sustituido apropiadamente, como se describe en los Esquemas de Reaccion anteriores.
Int.
Estructura Nombre Fluoro benzonitrilo Caracterizacion por UPLC_ipqc
118
r y°h 4-hidroxi-3-metilbenzonitrilo 4-fluoro-3-metilbenzonitrilo 0,74 min, 134 [M+H]+, 132 [M-
N H]-
10
Intermedio 119
4-hidroxi-2-[(trifluorometil)oxi]benzonitrilo
imagen148
Se llevaron a cabo dos reacciones en paralelo (A y B) y despues se combinaron las dos mezclas de reaccion para 15 llevar a cabo el tratamiento y purificacion.
Reaccion A: A una disolucion de 4-metoxi-2-(trifluorometoxi)benzonitrilo (50 mg, 0,23 mmoles) en 1,2-dicloroetano (1 mL) se anadio gota a gota disolucion de BBr31M en DCM (0,69 mL, 0,69 mmoles). La mezcla de reaccion resultante se agito con irradiacion de microondas cinco veces (parametros de ajuste: T= 100°C, t= 1 hora) anadiendo disolucion adicional de BBr31M en DCM (1 mL) cada vez. La cantidad total de disolucion de BBr31M en DCM usada 20 fue 4,69 mL.
Reaccion B: En un vial se anadieron gota a gota 4-metoxi-2-(trifluorometoxi)benzonitrilo (750 mg, 3,45 mmoles), 1,2- dicloroetano (5 mL) y despues disolucion de BBr3 1M en DCM (10,36 mL, 10,36 mmoles). La mezcla de reaccion resultante se agito con irradiacion de microondas durante 1 hora (ajuste T= 100°C). A la mezcla de reaccion se anadio disolucion adicional de BBr31M en DCM (1 mL) y la mezcla de reaccion resultante se agito con irradiacion de 25 microondas tres veces mas (parametros de ajuste: T= 100°C, t= 1,5 horas), anadiendo disolucion adicional de BBr3 1M en DCM (0,8 mL) cada vez. La cantidad total de disolucion de BBr31M en DCM usada fue 13,76 mL.
Las dos mezclas de reaccion A y B se anadieron gota a gota a una disolucion acuosa saturada de NaHCO3 y el pH se ajusto a 7 con la adicion de NaHCO3 solido. Se separaron las dos fases y la fase acuosa se extrajo con dCm (1x) y con EtOAc (2x). Las fases organicas combinadas se secaron y evaporaron hasta sequedad, para proporcionar el 30 compuesto del tttulo en mezcla con material de partida sin reaccionar (1,48 g) como un aceite negro. La mezcla se uso en la siguiente etapa sin purificacion adicional.
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 8 ppm 11,35 (1H, s), 7,82 (1 H, d), 6,91 - 6,98 (2H, m); UPLC ipqc: 0,88 min, 204 [M+H]+, 202 [M-H]-.
Intermedio 120
35 4-[(5-nitro-2-piridinil)oxi]-3-(trifluorometil)benzonitrilo
imagen149
Una mezcla de 2-cloro-5-nitropiridina (70 mg, 0,44 mmoles), 4-hidroxi-3-(trifluorometil)benzonitrilo (91 mg, 0,49 mmoles), K2CO3 (92 mg, 0,66 mmoles) en DMF (2 mL) se agito a 50°C toda la noche. Se anadio agua (4 mL) y se
formo un precipitado. El solido se separo por filtracion y se trituro con MeOH para proporcionar el compuesto del t^tulo (85 mg) como un solido parduzco.
1H RMN (400 MHz, CDCls): 8 ppm 8,99 (1H, d), 8,60 (1 H, dd), 8,07 (1 H, s), 7,95 (1 H, d), 7,48 (1 H, d), 7,19 - 7,32 (1 H, m); UPLC ipqc: 1,1 min, 310 [M+H]+.
5 Los siguientes compuestos se prepararon usando la metodologfa anterior, haciendo reaccionar el halo nitroarilo apropiado tal como 2-cloro-5-nitropiridina, 2-cloro-5-nitropirimidina, 1-fluoro-4-nitrobenceno etc. con el fenol sustituido apropiadamente a una temperatura adecuada, opcionalmente con irradiacion de microondas, como se describe en los Esquemas de Reaccion anteriores. Algunos productos finales se purificaron por cromatograffa ultrarrapida (Silice; ciclohexano/EtOAc u otro sistema de disolventes apropiado).
Int.
Estructura Nombre Halo nitroarilo Fenol Caracterizacion por RMN Caracterizacion por UPLC_ipqc
121
i 2-yodo-4- [(5-nitro-2- pirimidinil) oxi] benzonitrilo 2-cloro-5- nitropirimidina 4-hidroxi-2- yodobenzonitrilo (intermedio 117) "H-RMN (400 MHz, DMSO- cfe): 8 ppm 9,50 (2H, br. s), 8,14 (1H, br. s), 8,05 - 7,99 (1H, m), 7,57 - 7,63 (1H, m) 1,03 min, 369 [M+H]+
122
3-bromo-4- [(5-nitro-2- piridinil)oxi] benzonitrilo 2-cloro-5- nitropiridina 3-bromo-4- hidroxibenzonitrilo "H-RMN (400 MHz, CDCla): 8 ppm 9,01 (1 H, s ancho), 8,65 - 8,56 (1 H, m), 8,02 (1H, s), 7,75 (1 H, d), 7,38 (1H, d), 7,25 (1H, d) 1,08 min, 320 [M]+, patron de Br
123
3- (1,1- dimetiletil)- 4- [(5-nitro- 2-piridinil) oxi] benzonitrilo 2-cloro-5- nitropiridina 3- (1,1-dimetiletil)- 4- hidroxi benzonitrilo (Intermedio 109) 1H RMN (400 MHz, DMSO- cfe) 8 ppm 9,09 - 9,04 (1H, m), 8,74 - 8,64 (1H, m), 7,87 (1H, br. s), 7,83 - 7,77 (1H, m), 7,44 (1H, d), 7,33 (1H, d), 1,32 (9H,s) 1,23 min, 298 [M+H]+
124
F 2- ({4-metil- 3- [(trifluorome til)oxi]fenil} oxi)-5- nitropiridina 2-cloro-5- nitropiridina 4-metil-3- [(trifluorometil)oxi] fenol 1H RMN (400 MHz, CDCh): 8 ppm 9,02 (1 H, d), 8,49 (1H, dd), 7,33 (1 H, d), 6,97 - 7,14 (3 H, m), 2,34 (3 H, s) 1,29 min, 315 [M+H]+.
125
N\A| rf'^c'N°2 2-(metiloxi)- 4-[(5-nitro- 2-piridinil) oxi] benzonitrilo 2-cloro-5- nitropiridina 4-hidroxi-2- (metiloxi) benzonitrilo 1H RMN (400 MHz, CDCh): 8 ppm 9,05 (1H, dd) 8,56 (1H, dd) 7,65 (1H, d) 7,14 (1H, dd) 6,80 - 6,87 (2H, m) 3,94 (3H, s) 0,99 min, 272 [M+H]+
Int.
Estructura Nombre Halo nitroarilo Fenol Caracterizacion por RMN Caracterizacion por UPLC_ipqc
126
QX V) rr 2-(metiloxi)- 4-[(4- nitrofenil)oxi ]benzonitrilo 1-fluoro-4- nitrobenceno 4-hidroxi-2- (metiloxi) benzonitrilo 1H RMN (400 MHz, CDCI3): 8 ppm : 8,24 - 8,35 (2H, m) 7,59 (1H, d) 7,10 - 7,20 (2H, m) 6,69 (1H, d) 6,65 (1H, dd) 3,92 (3H, s) 1,10 min
127
-O. / 1 1 ') H OH 2-hidroxi-4- [(4-nitro fenil)oxi] benzonitrilo 1-fluoro-4- nitrobenceno 2,4-dihidroxi benzonitrilo 1H RMN (400 MHz, DMSO- cfe) 8 ppm 11,41 (1H, br. s.) 8,26 - 8,34 (2H, m) 7,71 (1H, d) 7,25 - 7,40 (2H, m) 6,69 (1H, dd) 6,67 (1H, d) 0,97 min, 255 [M-H]-
128
,N0. m iy HO O' N‘ 2-hidroxi-4- [(5-nitro-2- piridinil)oxi] benzonitrilo 2-cloro-5- nitropiridina 2,4-dihidroxi benzonitrilo 1H RMN (400 MHz, DMSO- cfe) 8 ppm 11,45 (1H, br. s.), 9,06 (1H, d), 8,66 (1H, dd), 7,72 (1H, d), 7,34 (1H, d), 6,77 - 6,85 (2H, m) 0,87 min, 256 [M-H]-
129
1 J N. 'no2 i 2-yodo-4- [(5-nitro-2- piridinil)oxi] benzonitrilo 2-cloro-5- nitropiridina 4-hidroxi-2- yodobenzonitrilo (Intermedio 117) 1H RMN (400 MHz, DMSO- cfe):8 ppm 9,08 (1H, d), 8,70 (1H, dd), 8,03 (1H, d), 7,98 (1H, d), 7,52 (1H, dd), 7,41 (1H, d) 1,10 min
130
/n. °. M 1 N. rl^y^ Br N02 3-bromo-4- [(5-nitro-2- pirimidinil) oxi] benzonitrilo 2-cloro-5- nitropirimidina 3-bromo-4- hidroxibenzonitrilo 1H RMN (400 MHz, DMSO- cfe) 8 ppm 9,51 (2H, s), 8,44 - 8,47 (1H, m), 8,03 - 8,10 (1H, m), 7,74 (1 H, d).
131
XT°lO. ^ '~ ^ NO, 3-metil-4- [(5-nitro-2- piridinil)oxi] benzonitrilo 2-cloro-5- nitropiridina 4-hidroxi-3- metilbenzonitrilo (Intermedio 118) 1H RMN (400 MHz, CDCl3): 8 ppm 9,02 (1H, d), 8,57 (1H, dd), 7,50 - 7,71 (2H, m), 7,13 - 7,25 (2H, m), 2,23 (3 H, s) 1,04 min, 256 [M+H]+.
5
10
15
20
25
30
Int.
Estructura Nombre Halo nitroarilo Fenol Caracterizacion por RMN Caracterizacion por UPLC_ipqc
132
iD'°i J. ^ NO. N " F ' F^„0 F 4-[(5-nitro- 2-piridinil) oxi]-2- [(trifluoro metil)oxi] benzonitrilo 2-cloro-5- nitropiridina 4-hidroxi-2- [(trifluorometil)oxi] benzonitrilo (Intermedio 119) 1H RMN (400 MHz, CDCl3): 8 ppm 9,02 - 9,11 (1H, m), 8,55 - 8,65 (1H, m), 7,82 (1 H, d), 7,25 - 7,35 (2 H, m), 7,20 (1 H, d) 1,14 min, 326 [M+H]+
Intermedio 133
2-etil-4-[(5-nitro-2-pirimidinil)oxi]benzonitrilo
imagen150
En un matraz con llama de 2 bocas, bajo N2, a una disolucion de ZnCl2 (0,82 mL de una disolucion 0,5 M en THF, 0,41 mmoles) en 1,0 mL de THF, enfriada a -15°C, se anadio lentamente EtMgBr (0,41 mL de una disolucion 1,0 M en THF, 0,41 mmoles) y la mezcla de reaccion se agito a esta temperatura durante 1 h. Despues, se anadio Pd(fBu3P)2 (7,0 mg, 0,03 mmoles), seguido de 2-yodo-4-[(5-nitro-2-pirimidinil)oxi]benzonitrilo (Intermedio 121, 50,0 mg) en THF (1,0 mL) y la mezcla de reaccion se agito a -15°C durante 1h y despues se retiro el bano de NaCl/hielo. Despues de 2 horas a r.t. se anadieron 3,5 mg adicionales (0,015 mmoles) de (tBu3P)2. La reaccion se paro con NH4Cl (disolucion acuosa saturada) y se extrajo con EtOAc (tres veces). Las capas organicas recogidas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se evaporaron. El residuo obtenido se cargo en una columna de gel de sflice y se eluyo con Ciclohexano/EtOAc (de 100:0 a 90:10 Ciclohexano/EtOAc, plato a 90:10) rindiendo 25 mg del compuesto del tftulo.
1H-RMN (400 MHz, DMSO-da): 8 ppm 9,47 (2H, br. s), 7,94 (1H, d), 7,49 (1H, br. s), 7,41 - 7,33 (1H, m), 2,84 (2H, q), 1,24 (3H, t); UPLC_ipqc: 1,06 min, 271 [M+H]+.
Intermedio 134
2-ciclopropil-4-[(5-nitro-2-piridinil)oxi]benzonitrilo
imagen151
Preparacion de la disolucion de organometalico: A una disolucion de ZnCl2 0,5M en THF (9 mL) se anadio lentamente una disolucion de bromuro de ciclopropilmagnesio 0,5M en THF (9 mL) a r.t. y la mezcla de reaccion se agito durante 20 minutos a r.t.
A una disolucion de 2-yodo-4-[(5-nitro-2-piridinil)oxi]benzonitrilo (Intermedio 129, 550 mg) y Pd(fBu3P)2 (76 mg, 0,15 mmoles), calentada a 60°C, se anadieron 6 mL de la disolucion de organometalico previamente formado y la mezcla de reaccion se agito durante 1 hora a 60°C. Se anadieron 6 mL adicionales de disolucion de organometalico y la mezcla de reaccion se agito durante 1 hora adicional a 60°C. Se anadieron 6 mL adicionales de disolucion de organometalico y la mezcla de reaccion se agito durante 1 hora adicional a 60°C. Despues de enfriar, la reaccion se paro con agua (1 mL), se diluyo con una disolucion acuosa saturada de cloruro de amonio (20 mL) y se extrajo con acetato de etilo (2x50 mL). La capa organica se lavo con salmuera (2x20 mL), se seco (Na2SO4), se filtro y se evaporo y el residuo se purifico por cromatograffa ultrarrapida en gel de silice (SNAP 50 g), eluyendo con n- hexano/acetato de etilo de 100:0 a 80:20 rindiendo el compuesto del tftulo (400 mg) como solido blanco.
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 8 ppm 9,06 (1H, d), 8,67 (1H, dd), 7,88 (1H, d), 7,35 (1H, d), 7,23 (1H, dd), 7,01 (1H, dd), 2,17 -2,27 (1H, m), 1,10 -1,19 (2H, m), 0,82 -0,90 (2H, m); UPLC_ipqc: 1,13 min, 282 [M+H]+.
Los compuestos siguientes se prepararon usando la metodologfa anterior, reemplazando Bromuro de ciclopropil magnesio con el reactivo de Grignard apropiado para formar el reactivo organocinc, como se describe en los Esquemas de Reaccion anteriores.
Int.
Estructura Nombre Reactivo de Grignard Caracterizacion por RMN Caracterizacion por UPLC_ipqc
135
2-etil-4-[(5-nitro-2- piridinil)oxi] benzonitrilo Bromuro de etilmagnesio 'H-RMN (400 MHz, CDCl3): 8 ppm 9,06 (1H, d) 8,56 (1H, dd) 7,72 (1H, d) 7,18 (1H, d) 7,10 - 7,17 (2H, m) 2,95 (2H, q) 1,35 (3H, t) 1,12 min, 270 [M+H]+
136
[ fl It 1 ^ ^ NO, 3-etil-4-[(5-nitro-2- pirimidinil)oxi] benzonitrilo Bromuro de etilmagnesio 1H RMN(400 MHz, CDCl3): 8 ppm 9,35 (2H, s), 7,70 (1H, s), 7,64 (1H, dd), 7,23 (1H, d), 2,62 (2H, q), 1,25 (3H, t) 1,02 min
5 Intermedio 137
3-ciclopropil-4-[(5-nitro-2-piridinil)oxi]benzonitrilo
imagen152
En un vial se disolvio 3-bromo-4-[(5-nitro-2-piridinil)oxi]benzonitrilo (Intermedio 122, 800 mg) en 16,0 mL de tolueno. Se anadio acido ciclopropilboronico (1.073,8 mg, 12,5 mmoles) seguido de Pd(OAc)2 (56,1 mg, 0,25 mmoles) y 10 (Cy)3P (70,0 mg 0,25 mmoles). Despues, se anadio una disolucion acuosa (8,0 mL de agua) de K3PO4 (1.855,0 mg,
8,75 mmoles). La mezcla de reaccion se calento a 80°C toda la noche. Despues de enfriar a r.t., la mezcla se repartio entre salmuera y EtOAc y la fase acuosa separada se extrajo con EtoAc (tres veces). Las capas organicas recogidas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se evaporaron. El crudo obtenido se cargo en una columna de gel de silice y se eluyo con ciclohexano/EtOAc (ciclohexano/EtOAc de 100:0 a 80:20) rindiendo 634 mg del compuesto 15 del tftulo.
1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 8 ppm 9,04 (1H, s ancho), 8,69 (1H, dd), 7,75 (1H, d), 7,58 (1H, s), 7,41 (2H, t), 1,90 - 1,80 (1H, m), 0,90 - 0,73 (4H, m); UPLC_ipqc: 1,12 min, 282 [M+H]+.
Intermedio 138
2-(1-metiletenil)-4-[(5-nitro-2-piridinil)oxi]benzonitrilo
20
A una disolucion de 2-yodo-4-[(5-nitro-2-piridinil)oxi]benzonitrilo (Intermedio 129, 5,0 g) en DMF (50 mL) se anadieron K3PO4 (5,77 g, 27,24 mmoles), Pd(fBu3)2 (696 mg, 1,36 mmoles) y 4,4,5,5-tetrametil-2-(1-metiletenil)- 1,3,2-dioxaborolano (3,84 mL, 20,43 mmoles) y la mezcla de reaccion se agito durante 4 horas a 110°C. Despues de enfriar, la reaccion se diluyo con agua (100 mL) y se extrajo con acetato de etilo (3x100 mL). La capa organica se 25 lavo con salmuera enfriada con hielo (3x50 mL), se seco (Na2SO4), se filtro y se evaporo y el residuo se purifico por cromatograffa ultrarrapida en gel de silice (SNAP 100 g) eluyendo con ciclohexano/acetato de etilo de 100:0 a 80:20 para rendir el compuesto del tftulo (1,8 g) como solido blanco.
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 8 ppm 9,08 (1H, d), 8,69 (1H, dd), 7,97 (1H, d), 7,47 (1H, d), 7,40 (2H, d), 5,46 (1H, s), 5,32 (1H, s), 2,16 (3H, s); UPLC_ipqc: 1,14 min, 282 [M+H]+.
imagen153
2-(etiloxi)-4-[(4-nitrofenM)oxi]benzonitrMo
imagen154
Se disolvio 2-mdroxi-4-[(4-nitrofenil)oxi]benzonitrilo (Intermedio 127, 87,2 mg) en DMF (5 mL). Se anadieron K2CO3 5 (92,2 mg, 0,67 mmoles) y yodoetano (32 jL, 0,40 mmoles). La mezcla de reacciOn se agito a r.t.. Despues de 16 h,
la mezcla de reacciOn se evaporO a sequedad para proporcionar el producto crudo que se purificO por cromatograffa en gel de silice (ciclohexano/EtOAc de 100:0 a 50:50 en 10 VC; despues ciclohexano/EtOAc 50:50 para 10 VC) para obtener 84,9 mg del compuesto del fftulo como un sOlido amarillo.
1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 8 ppm 8,26 - 8,35 (2H, m) 7,82 (1H, d) 7,26 - 7,35 (2H, m) 7,09 (1H, d) 6,80 (1H, dd) 10 4,18 (2H, q) 1,36 (3H, t);,UPLC_ipqc: 1,16 min, [M+H]+.
Los compuestos siguientes se prepararon usando la metodologfa anterior, reemplazando 2-hidroxi-4-[(4- nitrofenil)oxi]benzonitrilo con el fenol sustituido apropiadamente y yodoetano con el electrOfilo apropiado, como se describe en los Esquemas de ReacciOn anteriores. Algunos productos finales se purificaron por cromatograffa ultrarrapida (sflice; ciclohexano/EtOAc u otro sistema de disolventes apropiado).
Int.
Estructura Nombre Fenol ElectrOfilo CaracterizaciOn por RMN CaracterizaciOn por UPLC_ipqc
140
2-[(ciclopropil metil)oxi]-4- [(5-nitro-2- piridinil)oxi] benzonitrilo 2-hidroxi-4-[(5- nitro-2-piridinil) oxi]benzonitrilo (Intermedio 128) (bromometil) ciclopropano 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 8 ppm 9,06 (1H, d), 8,67 (1H, dd), 7,83 (1H, d), 7,36 (1H, d), 7,19 (1H, d), 6,97 (1H, dd), 3,97 (2H, d), 1,17 - 1,35 (1H, m), 0,53 - 0,65 (2H, m), 0,29 - 0,40 (2H, m) 1,14 min, 312 [M+H]+
141
T j [1 1 NT 2-(etiloxi)-4- [(5-nitro-2- piridinil)oxi] benzonitrilo 2-hidroxi-4-[(5- nitro-2-piridinil) oxi]benzonitrilo (Intermedio 128) yodoetano 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 8 ppm 9,06 (1H, d), 8,67 (1H, dd), 7,83 (1H, d), 7,36 (1H, d), 7,20 (1H, d), 6,97 (1H, dd), 4,17 (2H, q), 1,35 (3H, t) 1,06 min, 286 [M+H]+.
15
Intermedio 142
2-[(1 -metiletil)oxi]-4-[(5-nitro-2-piridinil)oxi]benzonitrilo
imagen155
En un vial se disolvieron 2,4-dihidroxibenzonitrilo (300 mg, 2,2 mmoles), 2-cloro-5-nitropiridina (351,96 mg, 2,22 20 mmoles) y K2CO3 (920 mg, 6,62 mmoles) en DMF (5 mL). La reacciOn se calentO durante 1 hora con irradiaciOn de microondas (temperatura de ajuste: 110°C). La mezcla de reacciOn se diluyO con Et2O y agua, se acidificO con disoluciOn acuosa de HCl 1N hasta pH= 2, se separaron las fases y las organicas se secaron sobre Na2SO4. Se filtrO el sOlido y el disolvente se eliminO rindiendo 2-hidroxi-4-[(5-nitro-2-piridinil)oxi]benzonitrilo crudo (664 mg) como un
5
10
15
20
25
solido marron. A una disolucion de este crudo en DMF seca (5 mL) se anadieron carbonato de potasio (460 mg, 3,33 mmoles) y bromuro de isopropilo (313 pl, 3,33 mmoles) y la mezcla de reaccion se agito toda la noche a 50°C. La reaccion se diluyo con salmuera (10 mL) y se extrajo con acetato de etilo (2x20 mL). La capa organica se seco (Na2SO4), se filtro y se evaporo y el residuo se purifico por cromatograffa ultrarrapida en gel de s^lice (SNAP 25 g) eluyendo con ciclohexano/acetato de etilo de 100:0 a 75:25, rindiendo el compuesto del fftulo (260 mg) como solido blanco.
1H-RMN (400 MHz, CDCh): 8 ppm 9,06 (1H, d), 8,56 (1H, dd), 7,61 - 7,67 (1H, m), 7,15 (1H, d), 6,76 - 6,84 (2H, m), 4,56 -4,68 (1H, m), 1,44 (6H, d).
Intermedio 143
4-[(5-amino-2-piridinil)oxi]-3-(trifluorometil)benzonitrilo
imagen156
A una disolucion de 4-[(5-nitro-2-piridinil)oxi]-3-(trifiuorometil)benzonitrilo (Intermedio 120, 83 mg) en THF (3 mL) / agua (1,5 mL) se anadio a temperatura ambiente, hierro (75 mg, 1,34 mmoles) y NH4Cl (72 mg, 1,34 mmoles) y la mezcla de reaccion resultante se agito toda la noche. La mezcla se filtro a traves de una almohadilla pequena de Celite lavando con EtOAc y agua. A la mezcla filtrada se anadio una disolucion acuosa saturada de NaHCO3 y se separaron las dos fases. La fase acuosa se extrajo con EtOAc y las fases organicas combinadas se secaron y se evaporaron hasta sequedad. El crudo se purifico por cromatograffa ultrarrapida (sistema Companion, cartucho de Si 2 x 12 g, ciclohexano/EtOAc de 100:0 a 70:30) para rendir el compuesto del tftulo (72 mg).
1H RMN (400 MHz, CDCla): 8 ppm 7,97 (1H, s), 7,69 - 7,79 (2H, m), 7,23 (1H, d), 7,16 (1H, dd), 6,93 (1 H, d); UPLC_ipqc: 0,91 min, 280 [M+H]+.
Los compuestos siguientes se prepararon usando la metodologfa anterior, reemplazando 4-[(5-nitro-2-piridinil)oxi]-3- (trifluorometil)benzonitrilo (Intermedio 120) con el derivado nitro apropiado, como se describe en los Esquemas de Reaccion anteriores. Algunos productos finales se purificaron por cromatograffa ultrarrapida (cartucho de silice o NH; ciclohexano/EtOAc u otro sistema de disolventes apropiado). En algunos casos se llevo a cabo la purificacion por SCX (MeOH y despues disolucion de amoniaco 2M en MeOH) antes de la cromatograffa ultrarrapida habitual.
Int.
Estructura
Nombre
Derivado nitro
Caracterizacion
RMN
por
Caracterizacion
UPLC_ipqc
por
144
imagen157
4-[(5-amino-2-
pirimidinil)oxi]-2-
etilbenzonitrilo
2-etil-4-[(5-nitro-2- pirimidinil)oxi]benzoni trilo (Intermedio 133)
'H-RMN (400 MHz, DMSO-cfe): 8 ppm
8,03 (2 H, br, s), 7,79 (1H, d), 7,19 (1 H, br. s), 7,07 (1H, d), 5,41 (2H, br. s), 2,80 (2H, q), 1,22 (3H, t)
0,78 min, 241 [M+H]+
145
imagen158
4-[(5-amino-2-
piridinil)oxi]-3-
ciclopropilbenzo
nitrilo
3-ciclopropil-4-[(5- nitro-2-piridinil) oxi]benzonitrilo (Intermedio 137)
1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 8 ppm
7,61 - 7,52 (2H, m), 7,42 (1H, s), 7,16 - 7,09 (1H, m), 6,89 (2H, t), 5,19 (2H, br. s), 2,14 - 2,04 (1H, m), 0,97 - 0,89 (2H, m), 0,82 -0,75 (2H, m)
0,86 min, 252 [M+H]+
146
imagen159
4-[(5-amino-2- piridinil)oxi]-3- (1,1 -dimetiletil) benzonitrilo
3-(1,1-dimetiletil)-4- [(5-nitro-2-piridinil) oxi]benzonitrilo (Intermedio 123)
1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 8 ppm
7,72 (1H, br. s), 7,65 - 7,57 (2H, m), 7,16 - 7,08 (1H, m), 6,89 - 6,78 (2H, m), 5,28 - 5,19 (2H, m), 1,39
1,02 min, 268 [M+H]+
Int.
Estructura Nombre Derivado nitro Caracterizacion por RMN Caracterizacion por UPLC_ipqc
(9H, s)
147
XXl, °^F F 6-({4-metil-3- [(trifluorometil) oxi]fenil)oxi)-3- piridinamina 2-({4-metil-3- [(trifluorometil)oxi] fenil}oxi)-5- nitropiridina (Intermedio 124) 1H RMN (400 MHz, CDCla): 8 ppm 7,70 (1H, d), 7,20 (1H, d), 7,09 (1H, dd), 6,95 (1H, br. s.), 6,91 (1H, dd), 6,78 (1H, d), 2,27 (3H, s) 1,04 min, 285 [M+H]+
148
,NH, ]X [1 J 4-[(5-amino-2- piridininil)oxi]-2- (metiloxi) benzonitrilo 2-(metiloxi)-4-[(5- nitro-2-piridinil) oxi]benzonitrilo (Intermedio 125) 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 8 ppm 7,64 (1H, d) 7,61 (1H, d) 7,11 (1H, dd) 6,87 (1H, d) 6,83 (1H, d) 6,52 (1H, dd) 5,27 (2H, br. s.) 3,86 (3H, s) 0,74 min, 242 [M+H]+
149
*,.u0€r 4-[(4- aminofenil)oxi]- 2-(metiloxi) benzonitrilo 2-(metiloxi)-4-[(4- nitrofenil)oxi] benzonitrilo (Intermedio 126) 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 8 ppm 7,63 (1 H, d) 6,81 - 6,87 (2 H, m) 6,76 (1 H, d) 6,60 -6,67 (2 H, m) 6,42 (1 H, dd) 5,12 (2 H, br. s.) 3,86 (3H, s) 0,70 min, 241 [M+H]+
150
jO"TX N T NM- yO 4-[(4- aminofenil)oxi]- 2-(etiloxi) benzonitrilo 2-(etiloxi)-4-[(4- nitrofenil)oxi] benzonitrilo (Intermedio 139) 1H RMN (400 MHz, CDCla): 8 ppm 7,42 (1H, d) 6,85 - 6,90 (2H, m) 6,68 - 6,75 (2H, m) 6,48 (1H, d) 6,44 (1H, dd) 4,04 (2H, q) 3,70 (2H, br. s.) 1,45 (3H, t) 0,80 min, 255 [M+H]+
151
,x,.. ^nh, N'" 1 ? ,o r A 4-[(5-amino-2- piridinil)oxi]-2- [(ciclopropilmetil) oxi]benzonitrilo 2-[(ciclopropil metil)oxi]-4-[(5-nitro- 2-piridinil)oxi] benzonitrilo (Intermedio 140) 1H RMN (400 MHz, CDCh): 8 ppm 7,74 (1H, dd), 7,47 (1H, d), 7,13 (1H, dd), 6,83 (1H, d), 6,61 (1H, d), 6,57 (1H, dd), 3,85 (2H, d), 3,70 (2H, br. s.), 1,21 - 1,35 (1H, m), 0,60 - 0,70 (2H, m), 0,32 -0,40 (2H, m) 0,91 min, 282 [M+H]+
152
^xx rr 0 -■ 0 N 4-[(5-amino-2- piridinil)oxi]-2- (etiloxi) benzonitrilo 2-(etiloxi)-4-[(5-nitro- 2-piridinil)oxi] benzonitrilo (Intermedio 141) 1H RMN (400 MHz, CDCh): 8 ppm 7,75 (1H, dd), 7,48 (1H, d), 7,13 (1H, dd), 6,84 (1H, d), 6,63 (1H, d), 6,58 (1H, dd), 4,08 (2H, q), 3,68 (2H, br. s.), 1,46 (3H, t) 0,81 min, 256 [M+H]+
Int.
Estructura
Nombre
Derivado nitro
Caracterizacion
RMN
por
Caracterizacion
UPLC_ipqc
por
153
imagen160
4-[(5-amino-2-
piridinil)oxi]-2-
ciclopropil
benzonitrilo
2-ciclopropil-4-[(5- nitro-2-piridinil)oxi] benzonitrilo (Intermedio 134)
1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 8 ppm
7,70 (1 H, d), 7,60 (1 H, d), 7,12 (1 H, dd), 6,85 (1 H, d), 6,80 (1
H, dd), 6,65 (1 H, d), 5,26 (2 H, br. s.), 2,11 - 2,22 (1 H, m), 1,07 -
I, 15 (2 H, m), 0,75 - 0,82 (2 H, m)
0,86 min, 252 [M+H]+
154
imagen161
4-[(5-amino-2-
piridinil)oxi]-2-(1-
metiletenil)
benzonitrilo
2-(1-metiletenN)-4-[(5- nitro-2-piridinil)oxi] benzonitrilo (Intermedio 138)
'H-RMN (400 MHz, DMSO-cfe): 8 ppm
7,79 (1H, d), 7,62 (1H, d), 7,12 (1H, dd), 7,05 (1H, d), 6,98 (1H, dd), 6,89 (1H, d), 5,40 (1H, s), 5,28 (2H, s ancho), 5,23 (1H, s), 2,12 (3H, s)
0,90 min, 252 [M+H]+
155
imagen162
4-[(5-amino-2-
piridinil)oxi]-2-
etilbenzonitrilo
2-etil-4-[(5-nitro-2- piridinil)oxi] benzonitrilo (Intermedio 135)
'H-RMN (400 MHz, CDCla): 8 ppm 7,77 (1H, d) 7,58 (1H, d) 7,15 (1H, dd) 7,00 (1H, d) 6,92 (1H, dd) 6,86 (1H, d) 3,62 (2H, s ancho), 2,86 (2H, q) 1,29 (3H, t)
0,86 min, 240 [M+H]+
156
imagen163
4-[(5-amino-2-
piridinil)oxi]-2-
[(1-metiletil)oxi]
benzonitrilo
2-[(1-metiletil)oxi]-4- [(5-nitro-2-piridinil)oxi] benzonitrilo (Intermedio 142)
'H-RMN (400 MHz, DMSO-cfe): 8 ppm
7,63 (1H, d), 7,61 (1H, d), 7,12 (1H, dd), 6,88 (1H, d), 6,84 (1H, d), 6,51 (1H, dd),
5.29 (2H, s ancho), 4,66 - 4,77 (1H, m),
1.29 (6H, d)
0,89 min, 270 [M+H]+
157
imagen164
4-[(5-amino-2-
piridinil)oxi]-2-
etilbenzonitrilo
2-etil-4-[(5-nitro-2- piridinil)oxi] benzonitrilo (Intermedio 135)
1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 8 ppm
7,73 (1H, d), 7,60 (1H, m), 7,13 - 7,10 (1H, m), 7,02 (1 H, d), 6,89 - 6,86 (2H, m), 5,28 (2H, br. s.),
2,79-2,73 (2H, q),
1,21 -1,17 (3H, t)
0,85 min, 240 [M+H]+
158
imagen165
4-[(5-amino-2-
pirimidinil)oxi]-3-
etilbenzonitrilo
3-etil-4-[(5-nitro-2- pirimidinil)oxi] benzonitrilo (Intermedio 136)
1H RMN (400 MHz, CDCh): 8 ppm 8,09 (2H, s), 7,62 (1H, s), 7,55 (1H, dd), 7,15 (1 H, d), 3,62 (2H, br. s.), 2,68 (2 H, q), 1,24 (3 H, t)
0,77 min, 241 [M+H]+
Int.
Estructura Nombre Derivado nitro Caracterizacion por RMN Caracterizacion por UPLC_ipqc
159
/TV'S ™ 2 4-[(5-amino-2- pirimidinil)oxi]-3- metilbenzonitrilo 3-metil-4-[(5-nitro-2- pirimidinil)oxi] benzonitrilo (Intermedio 114) 1H RMN (400 MHz, CDCl3): 8 ppm 8,08 (2H, s), 7,60 (1H, s), 7,55 (1H, d), 7,17 (1H, d), 3,59 (2H, br. s.), 2,27 (3H, s) 0,68 min, 227 [M+H]+
160
/TV] N>- l>,n? 4-[(5-amino-2- piridinil)oxi]-3- metilbenzonitrilo 3-metil-4-[(5-nitro-2- piridinil)oxi] benzonitrilo (Intermedio 131) 1H RMN (400 MHz, CDCl3): 8 ppm 7,71 (1H, d), 7,54 (1H, s), 7,45 (1H, dd), 7,14 (1H, dd), 6,95 (1H, d), 6,83 (1 H, d), 3,61 (2H, br. s.), 2,29 (3H,s) 0,75 min, 226 [M+H]+
161
jpr°vs F 1 f 4-[(5-amino-2- piridinil)oxi]-2- [(trifluorometil) oxi]benzonitrilo 4-[(5-nitro-2- piridinil)oxi]-2- [(trifluorometil)oxi] benzonitrilo (Intermedio 132) 1H RMN (400 MHz, CDCl3): 8 ppm 7,77 (1H, d), 7,66 (1H, d), 7,17 (1 H, dd), 7,11 (1 H, s), 7,06 (1 H, dd), 6,89 (1 H, d) 0,94 min, 296 [M+H]+
Intermedio 162
2-({4-bromo-3-[(trifluorometil)oxi]fenil}oxi)-5-pirimidinamina
imagen166
5 A una disolucion de 4-bromo-3-[(trifluorometil)oxi]fenol (257 mg, 1,0 mmol) en DMF seco (4 mL) se anadieron carbonato de potasio (276 mg, 2 mmoles) y despues 2-cloro-5-nitropirimidina (319 mg, 2,0 mmoles) y la mezcla de reaccion se agito durante 2 horas a r.t. La reaccion se paro con agua (1 mL), se diluyo con salmuera (5 mL) y se extrajo con acetato de etilo (2x15mL). La capa organica se seco (Na2SO4), se filtro y se evaporo para proporcionar 2- ({4-bromo-3-[(trifluorometil)oxi]fenil}oxi)-5-nitropirimidina cruda. Este crudo se disolvio en THF/agua (2:1) (6 mL) y se 10 anadieron hierro (279 mg, 5 mmoles) y NH4Cl (267,5 mg, 5 mmoles) y la mezcla de reaccion se agito toda la noche a r.t. El solido se retiro por filtracion y la disolucion se diluyo con una disolucion acuosa saturada de NaHCO3 (5 mL) y se extrajo con acetato de etilo (2x20mL). La capa organica se seco (Na2SO4), se filtro y se evaporo y el residuo se purifico por cromatograffa ultrarrapida en gel de silice (SNAP 25 g) eluyendo con ciclohexano/acetato de etilo de 75:25 a 40:60, para rendir el compuesto del tftulo (280 mg) como solido amarillo claro.
15 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 8 ppm 8,00 (2H, s), 7,81 (1H, d), 7,34 - 7,40 (1H, m), 7,14 (1H, dd), 5,37 (2H, br. s.);
UPLC_ipqc: 1,02 min, 350 [M]+ patron Br.
Los compuestos siguientes se prepararon usando la metodologfa anterior, reemplazando 4-bromo-3- [(trifluorometil)oxi]fenol con el fenol sustituido apropiadamente, como se describe en los Esquemas de Reaccion anteriores.
Int.
Estructura Nombre Fenol Caracterizacion por RMN Caracterizacion por UPLC_ipqc
163
xCOX n !\ ‘ 4-[(5-amino-2- pirimidinil)oxi]-3-(1,1- dimetiletil)benzonitrilo (3-(1,1- dimetiletil)-4- hidroxibenzonitrilo (Intermedio 109) 'H-RMN (400 MHz, DMSO-cfe): 8 ppm 8,01 (2H, s) 7,76 (1H, d) 7,67 (1H, dd) 7,05 (1H, d) 5,35 - 5,41 (2H, m) 1,35 (9H, s) 0,92 min, 269 [M+H]+
2-({4-metil-3-[(trifluorometil)oxi]fenil}oxi)-5-pirimidinamina
imagen167
A una disolucion de 2-({4-bromo-3-[(trifluorometil)oxi]fenil}oxi)-5-pirimidinamina (Intermedio 162, 270 mg) en DMF (4 5 mL) se anadieron K3PO4 (490 mg, 2,31 mmoles), Pd(fBu3)2 (197 mg, 0,385 mmoles) y acido metil boronico (276 mg, 4,62 mmoles) y la mezcla de reaccion se agito durante 30 minutos a 110°C con irradiacion microondas. Despues de enfriar, la reaccion se diluyo con agua (10 mL) y se extrajo con acetato de etilo (3x10mL). La capa organica se lavo con salmuera enfriada con hielo (2x5mL), se seco (Na2SO4), se filtro y se evaporo y el residuo se purifico por cromatograffa ultrarrapida en gel de sflice (SNAP 10 g) eluyendo con ciclohexano/acetato de etilo de 80:20 a 50:50 10 para rendir el compuesto del tftulo como un solido blanco (135 mg).
UPLC_ipqc: 0,97 min, 286 [M+H]+.
Intermedio 165
W-{[(6-{[4-ciano-2-(trifluorometil)fenil]oxi}-3-piridinil)amino]carbonil}-2-metilalaninato de metilo
imagen168
15 A una disolucion de trifosgeno (32 mg, 0,11 mmoles) en EtOAc (1 mL) a 0°C se anadio gota a gota una disolucion de 4-[(5-amino-2-piridinil)oxi]-3-(trifluorometil)benzonitrilo (Intermedio 143, 69,8 mg) en trietilamina (60 pL) / EtOAc (4 mL) y despues una suspension de hidrocloruro de 2-metilalaninato de metilo (Intermedio 107, 46 mg) en trietilamina (120 pL) / EtOAc (4 mL). La mezcla de reaccion resultante se agito durante 1 hora. Se anadio una disolucion acuosa de tampon pH 3 a la mezcla de reaccion y las dos fases se separaron. La fase acuosa se extrajo 3 veces con EtOAc 20 y las fases organicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio y se evaporaron a sequedad para proporcionar el compuesto del tftulo (49 mg) como crudo. Este crudo se uso en la siguiente etapa sin purificacion adicional.
UPLC_ipqc: 1,01 min, 423 [M+H]+.
Los compuestos siguientes se prepararon usando la metodologfa anterior, reemplazando 4-[(5-amino-2-piridinil)oxi]- 3-(trifluorometil)benzonitrilo (Intermedio 143) con la anilina apropiada, como se describe en los Esquemas de 25 Reaccion anteriores. Los productos finales se aislaron como crudos.
Int.
Estructura Nombre Anilina Caracterizacion por UPLC_ipqc
166
|l ] if I N- J J O 'NH V Ca N-[({6-[(4-ciano-3-etilfenil)oxi]-3- piridinil}amino)carbonil]-2- metilalaninato de metilo 4-[(5-amino-2-piridinil)oxi]-2- etilbenzonitrilo (Intermedio 157) 0,99 min, 383 [M+H]+
167
..era 'v v'"' NH N " F I F^''° 0^''NH F ^Y° W-({[6-({4-ciano-3-[(trifluorometil) oxi]fenil}oxi)-3-piridinil]amino} carbonil)-2-metilalaninato de metilo 4-[(5-amino-2-piridinil)oxi]-2- [(trifluorometil)oxi]benzonitrilo (Intermedio 161) 1,05 min, 439 [M+H]+
{(1R)-1-[({(6-[(4-ciano-2-ciclopropilfenil)oxi]-3-piridinil}amino)carbonil]propil}carbamato de 1,1-dimetiletilo
imagen169
Se disolvio acido (2R)-2-({[(1,1-dimetiletil)oxi]carbonil}amino)butanoico (121,4 mg, 0,60 mmoles) en N,N- 5 Dimetilformamida (1 mL). Se anadieron N,N-Diisopropiletilamina (0,126 mL, 0,72 mmoles) y hexafluorofosfato de O- (7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (227,2 mg, 0,60 mmoles). La mezcla de reacciOn se agito a r.t. durante 30 min. Se disolvio 4-[(5-amino-2-piridinil)oxi]-3-ciclopropilbenzonitrilo (Intermedio 145, 100 mg) en 1,0 mL de DMF y la disoluciOn obtenida se anadiO a la mezcla de reacciOn. La mezcla de reacciOn se agitO y se calentO a 60°C durante 2 h. Despues de enfriar a r.t., la mezcla de reacciOn se evaporO en vado y el crudo se cargO en una 10 columna de gel de sflice y se eluyO con ciclohexano/EtOAc (ciclohexano/EtOAc de 100:0 a 50:50, despues platO a 50:50) rindiendo 133 mg del compuesto del tttulo.
1H-RMN (400 MHz, CDCla): 8 ppm 8,42 (1 H, br. s), 8,20 - 8,10 (2H, m), 7,51 - 7,44 (1 H, m), 7,32 - 7,23 (1H, m), 7,08 (1H, d), 7,03 -6,95 (1H, m), 4,95 (1H, br. s), 4,16 - 4,05 (1H, m), 2,07 - 1,95 (2H, m), 1,77 - 1,68 (1H, m), 1,47 (9H, s), 1,04 (3H, t), 0,95 - 0,88 (2H, m), 0,71 - 0,64 (2H, m); UPLC_ipqc: 1,14 min, 437 [M+H]+.
15 Los compuestos siguientes se prepararon usando la metodologfa anterior, reemplazando el acido (2R)-2-({[(1,1- dimetiletil)oxi]carbonil}amino)butanoico con el aminoacido apropiado y 4-[(5-amino-2-piridinil)oxi]-3- ciclopropilbenzonitrilo (Intermedio 145) con la anilina apropiada, como se describe en los Esquemas de ReacciOn anteriores. La reacciOn se llevO a cabo a una temperatura adecuada en el intervalo de r.t. a temperatura alta. Los productos finales se purificaron por cromatograffa ultrarrapida (silice; ciclohexano/EtOAc u otro sistema de 20 disolventes apropiado).
Int.
Estructura Nombre Aminoacido Anilina CaracterizaciOn por RMN CaracterizaciOn por UPLC_ipqc
169
P1< ° > NC ((1R)-1-{[(6-{[4- ciano-2-1,1- dimetil etil)enil]oxi}-3- piridinil)amino] carbonil} propil) carbamato de 1.1 -dimetiletilo acido (2R)-2- ({[(1,1- dimetiletil) oxi]carbonil) amino) butanoico 4-[(5-amino- 2-piridinil) oxi]-3-(1,1- dimetiletil) benzonitrilo (Intermedio 146) 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 8 ppm 10,20 (1H, br. s), 8,38 (1H, br. s), 8,20 - 8,11 (1H, m), 7,77 (1H, br. s), 7,70 - 7,64 (1H, m), 7,15 (1H, d), 7,05 (2H, d), 4,04 - 3,91 (1H, m), 1,77 - 1,55 (2H, m), 1,41 - 1,34 (18H, m), 0,93 - 0,87 (3H, m) 1,25 min, 453 [M+H]+.
170
r "n xrs/"^ a ^ a 'n ((1R)-1-{[(6-{[4- ciano-3- (metiloxi)fenil] oxi}-3-piridinil) amino]carbonil} propil) carbamato de 1,1-dimetiletilo acido (2R)-2- ({[(1,1- dimetiletil) oxi]carbonil} amino) butanoico 4-[(5-amino- 2-piridinil) oxi]-2- (metiloxi) benzonitrilo (Intermedio 148) 1H RMN (400 MHz, CDCla): 8 ppm 8,81 (1H, br. s.) 8,26 (1H, d) 8,09 (1H, br. s.) 7,46 - 7,62 (1H, m) 6,84 - 7,00 (1H, m) 6,62 - 6,79 (2H, m) 5,13 (1H, br. s.) 4,09 - 4,30 (1H, m) 3,88 (3H, s) 1,89 -2,04 (1H, m) 1,73 - 1,81 (1H, m) 1,47 (9H, s) 0,97 - 1,12 (3H, m) 1,04 min, 427 [M+H]+
Int.
Estructura Nombre Aminoacido Anilina Caracterizacion por RMN Caracterizacion por UPLC_ipqc
171
•vJ , , o" X Y N ° {2-[(4-{[4-ciano-3- (metiloxi)fenil) amino]-1,1- dimetil-2-oxoetil} carbamato de 1,1 -dimetiletilo N-{[(1,1- dimetiletil) oxi]carbonil}- 2- metilalanina 4-[(4- aminofenil)o xi]-2- (metiloxi) benzonitrilo (Intermedio 149) 1H RMN (400 MHz, CDCla): 8 ppm 9,02 (1H, br. s.) 7,54 - 7,61 (2H, m) 7,45 (1H, d) 6,99 - 7,09 (2H, m) 6,55 (1H, d) 6,49 (1H, dd) 4,94 (1H, br. s.) 3,85 (3H, s) 1,59 (6H, s) 1,46 (9H, s) 1,11 min, 426 [M+H]+.
172
S' o'"- '{S’ ~, '1^ '< N O nAMJ s ((1R)-1-{[(4-{[4- ciano-3-(metiloxi) fenil]oxi}fenil) amino]carbonil} propil)carbamato de 1,1 -dimetiletilo acido (2R)-2- ({[(1,1- dimetiletil) oxi]carbonil} amino) butanoico 4-[(4- aminofenil) oxi]-2- (metiloxi) benzonitrilo (Intermedio 149) 1H RMN (400 MHz, CDCla): 8 ppm 8,66 (1H, br. s.) 7,50 - 7,59 (2H, m) 7,44 (1H, d) 6,92 - 7,04 (2H, m) 6,54 (1H, d) 6,42 (1H, dd) 5,04 - 5,25 (1H, m) 4,15 - 4,27 (1H, m) 3,86 (3H, s) 1,90 -2,04 (1H, m) 1,73 - 1,82 (1H, m) 1,47 (9H, s) 1,04 (3H, t) 1,13 min, 426 [M+H]+
173
■vj, H V ? JXX -U I N 0 {2-[(4-{(4-ciano-3- (etiloxi)fenil]oxi} fenil)amino]-1,1- dimetil-2-oxoetil} carbamato de 1,1 -dimetiletilo N-{[(1,1- dimetiletil) oxi]carbonil}- 2- metilalanina 4-[(4- aminofenil) oxi]-2- (etiloxi) benzonitrilo (Intermedio 150) 1H RMN (400 MHz, CDCla): 8 ppm 9,05 (1H, br. s.) 7,54 - 7,60 (2H, m) 7,45 (1H, d) 6,97 - 7,09 (2H, m) 6,50 - 6,54 (1H, m) 6,48 (1H, dd) 4,99 (1H, br. s.) 4,05 (2H, q) 1,58 (15H, s) 1,45 (3H, t) 1,17 min, 440 [M+H]+
174
r ^ H^s H I J^OJX^'^0 ((1R)-1-{[(4-{[4- ciano-3-(etiloxi) fenil]oxi}fenil) amino]carbonil} propil)carbamato de 1,1 -dimetiletilo acido (2R)-2- ({[(1,1- dimetiletil) oxi]carbonil} amino) butanoico 4-[(4- aminofenil) oxi]-2- (etiloxi) benzonitrilo (Intermedio 150) 1H RMN (400 MHz, CDCH): 8 ppm 8,56 (1H, br. s.), 7,51 - 7,59 (2H, m), 7,44 (1H, d), 6,94 - 7,03 (2H, m), 6,52 (1H, d), 6,43 (1H, dd), 5,02 - 5,18 (1H, m), 4,12 - 4,23 (1H, m), 4,05 (2H, q), 1,90 - 2,05 (1H, m), 1,69 - 1,81 (1H, m), 1,47 (9H, s), 1,46 (3H, t), 1,04 (3H, t) 1,19 min, 440 [M+H]+
Int.
Estructura Nombre Aminoacido Anilina Caracterizacion por RMN Caracterizacion por UPLC_ipqc
175
... >J. N>. H | f aa rrY^° 'VJ ° [(1R)-1-({[6-({4- ciano-3- [(ciclopropilmetil) oxi]fenil}oxi)-3- piridinMjamino} carbonil)propil] carbamato de 1,1 -dimetiletilo acido (2R)-2- ({[(1,1- dimetiletil) oxi]carbonil} amino) butanoico 4-[(5-amino- 2-piridinil) oxi]-2- [(ciclopropil metil)oxi] benzonitrilo (Intermedio 151) 1H RMN (400 MHz, CDCla): 8 ppm 8,86 (1H, br. s.), 8,25 (1H, d), 8,00-8,11 (1H, m), 7,52 (1H, d), 6,84 - 6,95 (1H, m), 6,68 (1H, d), 6,65 (1H, dd), 5,14 (1H, d), 4,15 - 4,28 (1H, m), 3,86 (2H, d), 1,88 - 2,03 (1H, m), 1,73 (1H, s), 1,46 (9H, s), 1,25 - 1,35 (1H, m), 1,04 (3H, t), 0,61 - 0,70 (2H, m), 0,32 - 0,42 (2H, m) 1,17 min, 467 [M+H]+.
176
|-'" o'"- H 1 ' 'ri rr"i...A ,/i\ v-y x x v, -y •J ■ F ^ O - O N [(1R)-1-({[6-({4- metil-3- [(trifluorometil)oxi] fenil}oxi)-3- piridinil]amino} carbonil)propil] carbamato de 1,1 -dimetiletilo acido (2R)-2- ({[(1,1- dimetiletil) oxi]carbonil} amino) butanoico 6-({4-metil-3- [(trifluorometi l)oxi]fenil} oxi)-3- piridinamina (Intermedio 147) 1H RMN (400 MHz, CDCla): 8 ppm 8,84 (1H, br. s.), 8,19 (1H, d), 7,94 - 8,08 (1H, m), 7,22 (1H, d), 6,98 - 7,02 (1H, m), 6,95 (1H, dd), 6,83 (1H, d), 5,22 (1H, d), 4,08 - 4,33 (1H, m), 2,28 (3H, s), 1,87 - 2,01 (1H, m), 1,65 - 1,78 (1H, m), 1,45 (9H, s), 1,03 (3H, t) 1,29 min, 470 [M+H]+
177
lA' °YA N A A-ky°V Y 0 {(1R)-1-[({6-[(4- ciano-3- ciclopropilfenil) oxi]-3-piridinil} amino)carbonil] propil}carbamato de 1,1 -dimetiletilo acido (2R)-2- ({[(1,1- dimetiletil) oxi]carbonil} amino) butanoico 4-[(5-amino- 2-piridinil) oxi]-2- ciclopropil benzonitrilo (Intermedio 153) Y-RMN (400 MHz, CDCla): 8 ppm 8,54 (1H, br. s.) 8,22 (1H, d) 8,15 (1H, dd) 7,60 (1H, d) 6,91 - 6,99 (2H, m) 6,68 (1 H, d) 4,98 (1H, br. s.) 4,09 - 4,19 (1H, m) 2,26 - 2,35 (1H, m) 1,94 - 2,07 (1H, m) 1,69 - 1,80 (1H, m) 1,49 (9H, s) 1,12 - 1,19 (2H, m) 1,06 (3H, t) 0,75 - 0,82 (2H, m) 1,15 min, 437 [M+H]+.
Int.
Estructura Nombre Aminoacido Anilina Caracterizacion por RMN Caracterizacion por UPLC_ipqc
178
aaa N'A N A, 0Vy°V . ^ o' 1 ((1R)-1-{[(6-{[4- ciano-3-(1- metiletenil)fenil] oxi}-3-piridinil) amino]carbonil} propil)carbamato de 1.1 -dimetiletilo acido (2R)-2- ({[(1,1- dimetiletil) oxi]carbonil} amino) butanoico 4-[(5-amino- 2- piridinil)oxi]- 2-(1- metiletenil) benzonitrilo (Intermedio 154) "H-RMN (400 MHz, DMSO-cfe): 8 ppm 10,21 (1 H, br. s.), 8,39 - 8,47 (1 H, m), 8,17 (1 H, dd), 7,86 (1 H, d), 7,24 (1 H, d), 7,17 (2 H, d), 7,01 - 7,10 (1 H, m), 5,43 (1 H, s), 5,27 (1 H, s), 3,95 - 4,05 (1 H, m), 2,14 (3 H, s), 1,57 - 1,79 (2 H, m), I, 40 (9 H, s), 0,92 (3 H, t) 1,16 min, 437 [M+H]+.
179
r’5Y°"ir^i <A A ^ N “ J A'"y°V y ° {(1R)-1-[({6-[(4- ciano-3-etilfenil) oxi]-3-piridinil} amino)carbonil] propil}carbamato de 1,1 -dimetiletilo acido (2R)-2- ({[(11- dimetiletil) oxi]carbonil} amino) butanoico 4-[(5-amino- 2-piridinil) oxi]-2-etil benzonitrilo (Intermedio 155) 'H-RMN (400 MHz, DMSO-da): 8 ppm 10,25 (1H, s) 8,43 (1H, d) 8,16 (1H, dd) 7,80 (1H, d) 7,20 (1H, d) 7,15 (1H, d) 7,05-7,11 (2H, m) 3,94 - 4,02 (1H, m) 2,79 (2H, q) 1,53 - 1,76 (2H, m) 1,39 (9H, s) 1,21 (3H, t) 0,91 (3H, t)
180
Af fY°f o^V'Y0 F ' °7( [(1R)-1-({[2-({4- metil-3- [(trifluorometil)oxi] fenil}oxi)-5- pirimidinil]amino} carbonil)propil] carbamato de 1,1-dimetiletilo acido (2R)-2- ({[(1,1- dimetiletil) oxi]carbonil} amino) butanoico 2-({4-metil-3- [(trifluorometi l)oxi]fenil} oxi)-5- pirimidinami na (Intermedio 164) 1,21 min, 471 [M+H]+.
181
rf'A) A A nv A A A A ^ 1 I V Y •‘‘tvy i x ° 1 [(1R)-1-({[6-({4- ciano-3-[(1- metiletil)oxi]fenil} oxi)-3- piridinil]amino} carbonil)propil] carbamato de 1,1-dimetiletilo acido (2R)-2- ({[(1,1- dimetiletil) oxi]carbonil} amino) butanoico 4-[(5-amino- 2-piridinil) oxi]-2-[(1- metiletil)oxi] benzonitrilo (Intermedio 156) 'H-RMN (400 MHz, DMSO-cfe): 8 ppm 10,24 (1H, br. s.), 8,42 (1H, d), 8,16 (1H, dd), 7.70 (1H, d), 7,15 (1H, d), 7,09 (1H, d), 7,02 (1H, d), 6,72 (1H, dd), 4.70 - 4,81 (1H, m), 3,94 - 4,02 (1H, m), 1,54 - 1,77 (2H, m), 1,39 (9H, s), 1,30 (6H, d), 0,91 (3H, t) 1,15 min, 455 [M+H]+
Int.
Estructura Nombre Aminoacido Anilina Caracterizacion por RMN Caracterizacion por UPLC_ipqc
182
,jCX°tX N ^ O {(1R)-1-[({6-[(4- ciano-2-metilfenil) oxi]-3-piridinil} amino)carbonil] propil}carbamato de 1,1 -dimetiletilo acido (2R)-2- ({[(1,1- dimetiletil) oxi]carbonil} amino) butanoico 4-[(5-amino- 2-piridinil) oxi]-3-metil benzonitrilo (Intermedio 160) 1H RMN (400 MHz, CDCl3): 8 ppm 8,48 (1H, br. s.), 8,12 - 8,21 (2H, m), 7,59 (1H, s), 7,52 (1H, d), 7,09 (1H, d), 6,99 (1H, d), 4,98 (1H, br. s.), 4,07-4,20 (1H, m), 2,26 (3H, s), 1,94 - 2,09 (1H, m), 1,671,81 (1H, m), 1,42 - 1,66 (9H, m), 1,05 (3H, t) 1,09 min, 411 [M+H]+, 409 [M- H]-
183
/O nL-,1. n<T ■ T T 0 T ' F HN^o O / [(1R)-1-({[6-({4- ciano-3- [(trifluorometil)oxi] fenil}oxi)-3- piridinil]amino} carbonil)propil] carbamato de 1,1 -dimetiletilo acido (2R)-2- ({[(1,1- dimetiletil) oxi]carbonil} amino) butanoico 4-[(5-amino- 2-piridinil) oxi]-2- [(trifluoro metil)oxi] benzonitrilo (Intermedio 161) 1H RMN (400 MHz, CDCla): 8 ppm 8,64 (1H, br. s.), 8,26 (1 H, d), 8,15 - 8,23 (1H, m), 7,70 (1H, d), 7,20 (1H, s), 7,12 - 7,18 (1H, m), 7,02 (1H, d), 4,93 -5,06(1H,m), 4,10-4,21 (1H, m), 1,93 - 2,12 (1H, m), 1,67 - 1,83 (1H, m), 1,49 (9H, s), 1,06 (3H, t) 1,18 min, 481 [M+H]+, 479 [M- H]-
184
JL nL 0Xny° {(1R)-1-[({2-[(4- ciano-2-etilfenil) oxi]-5-pirimidinil} amino)carbonil] propil}carbamato de 1,1 -dimetiletilo acido (2R)-2- ({[(1,1- dimetiletil) oxi]carbonil} amino) butanoico 4-[(5-amino- 2-pirimidinil) oxi]-3-etil benzonitrilo (Intermedio 158) 'H-RMN (400 MHz, DMSO-cfe): 8 ppm 10,38 (1H, s) , 8,84 (2H, s), 7,87 (1H, d), 7,75 (1H, dd), 7,34 (1H, d), 7,14 (1H, d), 3,94-4,02 (1H, m), 2,52 - 2,58 (2H, m), 1,54 - 1,76 (2H, m), 1,39 (9H, s), 1,11 (3H, t) , 0,91 (3H, t)
185
JL n' 1 oS=k^Y° > V {(1R)-1-[({2-[(4- ciano-2-metilfenil) oxi]-5-pirimidinil} amino)carbonil] propil}carbamato de 1,1 -dimetiletilo acido (2R)-2- ({[(1,1- dimetiletil) oxi]carbonil} amino) butanoico 4-[(5-amino- 2-pirimidinil) oxi]-3-metil benzonitrilo (Intermedio 159) 'H-RMN (400 MHz, DMSO-cfe): 8 ppm 10,38 (1H, s), 8,83 (2H, s), 7,87 (1H, d), 7,75 (1H, dd), 7,35 (1H, d), 7,14 (1H, d), 3,95 - 4,01 (1H, m), 2,14 (3H, s), 1,54 - 1,76 (2H, m), 1,39 (9H, s), 0,91 (3H, t)
Int.
Estructura Nombre Aminoacido Anilina Caracterizacion por RMN Caracterizacion por UPLC_ipqc
186
py°A , M- r o-y 1 p ((1R)-1-{[(2-{[4- ciano-2-1,1- dimetiletil)fenil] oxi}-5-pirimidinil) amino]carbonil} propil)carbamato de 1.1 -dimetiletilo acido (2R)-2- ({[(1,1- dimetiletil) oxi]carbonil} amino) butanoico 4-[(5-amino- 2-pirimidinil) oxi]-3-(1,1- dimetiletil) benzonitrilo (Intermedio 163) 1,17 min, 454 [M+H]+
Intermedio 187
((1R)-1-{[(6-{[4-ciano-3-(1-metiletil)fenil]oxi}-3-piridinil)amino]carbonil}propil)carbamato de 1,1 -dimetiletilo
imagen170
5 A una disolucion de ((1R)-1-{[(6-{[4-ciano-3-(1-metiletenil)fenil]oxi}-3-piridinil)amino]carbonil}propil)carbamato de 1,1- dimetiletilo (Intermedio 178, 73 mg) en MeOH (10 mL) se anadio Pd al 10% p/p sobre carbon activado (14 mg) y la mezcla de reaccion se agito durante 30 minutos bajo atmosfera de H2 (P= 1 atm). El catalizador se elimino por filtracion y el disolvente se elimino bajo presion reducida. El residuo se purifico por cromatograffa ultrarrapida en gel de sflice (SNAP 10 g) eluyendo con ciclohexano/acetato de etilo de 75:25 a 40:60, rindiendo el compuesto del tttulo 10 (62 mg) como solido blanco.
1H-RMN (400 MHz, DMSO-da): 8 ppm 10,24 (1H, s ancho), 8,42 (1H, d), 8,16 (1H, dd), 7,78 (1H, d), 7,24 (1H, d), 7,15 (1H, d), 7,07 - 7,11 (1H, m), 7,05 (1H, dd), 3,95 - 4,02 (1H, m), 3,19 - 3,27 (1H, m), 1,57 - 1,76 (2H, m), 1,39 (9H, s), 1,26 (6H, d), 0,91 (3H, t); UPLC_ipqc: 1,20 min, 439 [M+H]+.
Intermedio 188
15 (2R)-2-amino-W-{6-[(4-ciano-2-ciclopropilfenil)oxi]-3-piridinil}butanamida
imagen171
Se disolvio {(1R)-1-[({6-[(4-ciano-2-ciclopropilfenil)oxi]-3-piridinil}amino)carbonil]propil}carbamato de 1,1 -dimetiletilo (Intermedio 168, 133 mg) en DCM (6 mL) y, a 0°C, se anadio TFA (3,0 mL) lentamente. La mezcla de reaccion se agito a esa temperatura durante 2 h. Despues de separar los volatiles, el crudo obtenido se cargo en un cartucho de 20 SCX y se eluyo con MeOH y despues NH3 2M en MeOH, rindiendo 102 mg del compuesto del tttulo.
1H-RMN (400 MHz, CDCla): 8 ppm 9,68 (1H, br. s), 8,32 - 8,18 (2H, m), 7,51- 7,43 (1H, m), 7,25-7,31 (1H, m), 7,08 (1H, d), 6,99 (1H, d), 3,59 - 3,51 (1H, m), 2,06- 1,95 (2H, m), 1,73- 1,63 (1H, m), 1,03 (3H, t), 0,95 - 0,89 (2H, m), 0,74 - 0,63 (2H, m); UPLC_ipqc: 0,68 min, 337 [M+H]+.
Los compuestos siguientes se prepararon usando la metodologfa anterior, reemplazando {(1R)-1-[({6-[(4-ciano-2- 25 ciclopropilfenil)oxi]-3-piridinil}amino)carbonil]propil}carbamato de 1,1 -dimetiletilo (Intermedio 168) con la amina protegida N-BOC apropiada, como se describe en los Esquemas de Reaccion anteriores. Los productos finales se purificaron por SCX (MeOH y despues disolucion de amoniaco 2M en MeOH) y las fracciones eluidas con amoniaco, que conteman el producto, se concentraron para proporcionar la base libre. Alternativamente, despues de eliminar los volatiles, se anadio al crudo recogido en un disolvente organico apropiado, disolucion acuosa saturada de 30 NaHCO3, se separaron las dos fases y la capa organica se seco, se filtro y se evaporo rindiendo el compuesto final
como la base libre.
Int.
Estructura Nombre Amina protegida N- BOC Caracterizacion por RMN Caracterizacion por UPLC_ipqc
189
^0 O 0 I (2R)-2-amino-W- (6-{[4-ciano-2- (1,1-dimetiletil) fenil]oxi}-3- piridinil) butanamida ((1R)-1-{[(6-{[4- ciano-2-(1,1- dimetiletil) fenil]oxi}- 3-piridinil)amino] carbonil}propil) carbamato de 1,1- dimetiletilo (Intermedio 169) 1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 8 ppm 8,43 (1H, br. s) , 8,25 - 8,15 (1H, m), 7,78 (1H, br. s), 7,70 - 7,65 (1H, m), 7,14 (1H, d), 7,05 (1H, d), 3,20 - 3,15 (1H, m), 1,74 - 1,61 (1H, m), 1,57 - 1,45 (1H, m), 1,36 (9H, s), 0,93 (3H, t) 0,79 min, 353 [M+H]+
190
H 1 XX IXT""' 0 0 N* (2R)-2-amino-N- (6-{[4-ciano-3- (metiloxi)fenil] oxi}-3-piridinil) butanamida ((1R)-1-{[(6-{[4- ciano-3-(metiloxi) fenil]oxi}-3- piridinil) amino]carbonil} propil) carbamato de 1,1 -dimetiletilo (Intermedio 170) 1H RMN (400 MHz, CDCla): 8 ppm 9,67 (1H, br. s.) 8,25 - 8,39 (2H, m) 7,53 (1H, d) 7,00 (1H, d) 6,63 - 6,85 (2H, m) 3,89 (3H, s) 3,40 - 3,57 (1H, m) 1,94 - 2,10 (1H, m) 1,66 - 1,75 (1H, m) 1,04 (3H, t) 0,61 min, 327 [M+H]+
191
t! \/ ^X XV'NH“ o - 1 c " ■ 0 N1-(4-{[4-ciano-3- (metiloxi)fenil] oxi}fenil)-2- metilalaninamida {2-[(4-{[4-ciano-3- (metiloxi)fenil]oxi} fenil)amino]-1,1- dimetil-2-oxoetil} carbamato de 1,1- dimetiletilo (Intermedio 171) 1H RMN (400 MHz, CDCla): 8 ppm 9,96 (1 H, s ancho), 7,62 - 7,71 (2 H, m) 7,45 (1 H, d) 6,99 - 7,09 (2 H, m) 6,54 (1 H, d) 6,49 (1 H, dd) 3,85 (3 H, s) 1,47 (6 H, s) 0,65 min, 326 [M+H]+
192
Ncv ■ H f ..-Xv ,A. . Xi J J s NHi '0^-0 v (2R)-2-amino-N- (4-{[4-ciano-3- (metiloxi) fenil]oxi}fenil) butanamida ((1R)-1-{[(4-{[4- ciano-3-(metiloxi) fenil]oxi}fenil)amino] carbonil}propil) carbamato de 1,1- dimetiletilo (Intermedio 172) 1H RMN (400 MHz, CDCla): 8 ppm 9,59 (1H, br. s.) 7,66 (2H, d) 7,44 (1H, d) 7,04 (2H, d) 6,41 - 6,62 (2H, m) 3,85 (3H, s) 3,41 - 3,54 (1H, m) 1,92 - 2,11 (1H, m) 1,65 - 1,79 (1H, m) 0,97 - 1,11 (3H, m) 0,67 min, 326 [M+H]+
193
Ns-. H \/ '-X. -N „ , r i ]i j o N ■ ■' "O' "O'' ''-r N1-(4-{[4-ciano-3- (etiloxi)fenil]oxi] fenil)-2- {2-[(4-{[4-ciano-3- (etiloxi)fenil]oxi} fenil) amino]-1,1- dimetil-2- 1H RMN (400 MHz, CDCh): 8 ppm 9,99 (1H, br. s.) 7,61 - 7,74 0,73 min, 340 [M+H]+
Int.
Estructura Nombre Amina protegida N- BOC Caracterizacion por RMN Caracterizacion por UPLC_ipqc
metilalaninamida oxoetil}carbamato de 1,1 -dimetiletilo (Intermedio 173) (2H, m) 7,46 (1H, d) 7,01 - 7,12 (2H, m) 6,53 (1H, d) 6,49 (1H, dd) 4,06 (2H, q) 1,49 (6H, s) 1,47 (3H, t)
194
H 1 XX\JO'"r"- (2R)-2-amino-N- (4-{[4-ciano-3- (etiloxi)fenil]oxi} fenil) butanamida ((1R)-1-{[(4-{[4- ciano-3-(etiloxi)fenil] oxi}fenil)amino] carbonil}propil) carbamato de 1,1- dimetiletilo (Intermedio 174) 1H RMN (400 MHz, CDCla): 8 ppm 9,61 (1H, br. s.), 7,61 - 7,69 (2H, m), 7,45 (1H, d), 7,00 - 7,08 (2H, m), 6,52 (1H, d), 6,47 (1H, dd), 4,05 (2H, q), 3,48 (1H, dd), 1,95 - 2,07 (1H, m), 1,63 - 1,69 (1H, m), 1,45 (3H, t), 1,04 (3H, t) 0,74 min, 340 [M+H]+.
195
0 " (2R)-2-amino-N- [6-({4-ciano-3- [(ciclopropilmetil) oxi]fenil}oxi)-3- piridinil] butanamida [(1R)-1-({[6-({4- ciano-3- [(ciclopropilmetil) oxi]fenil}oxi)-3- piridinil]amino} carbonil)propil] carbamato de 1,1- dimetiletilo (Intermedio 175) 1H RMN (400 MHz, CDCla): 8 ppm 9,70 (1H, br. s.), 8,27 - 8,34 (2H, m), 7,54 (1H, d), 7,00 (1H, d), 6,67 - 6,72 (2H, m), 3,89 (2H, d), 3,50 (1H, dd), 1,96 - 2,10 (1H, m), 1,62 - 1,73 (1H, m), 1,24 - 1,38 (1H, m), 1,06 (3H, t), 0,63 - 0,71 (2H, m), 0,35 - 0,43 (2H, m) 0,73 min, 367 [M+H]+
196
H ( £ XX IXY'- F J O - 0 N' (2R)-2-amino-N- [6-({4-metil-3- [(trifluorometil) oxi]fenil}oxi)-3- piridinil] butanamida [(1R)-1-({[6-({4- metil-3- [(trifluorometil) oxi]fenil}oxi)-3- piridinil]amino} carbonil)propil] carbamato de 1,1- dimetiletilo (Intermedio 176) 1H RMN (400 MHz, CDCh): 8 ppm 9,61 (1H, br. s.), 8,19 - 8,26 (2H, m), 7,24 (1H, d), 6,99 - 7,03 (1H, m), 6,97 (1H, dd), 6,92 (1H, d), 3,43 - 3,52 (1H, m), 2,29 (3H, s), 1,92 - 2,06 (1H, m), 1,81 (2H, br. s.), 1,59 - 1,73 (1H, m), 1,03 (3H, t) 0,83 min, 370 [M+H]+.
Int.
Estructura Nombre Amina protegida N- BOC Caracterizacion por RMN Caracterizacion por UPLC_ipqc
197
" I o<X (2R)-2-amino-N- {6-[(4-ciano-3- ciclopropilfenil)ox i]-3-piridinil} butanamida {(1R)-1-[({6-[(4- ciano-3- ciclopropilfenil)oxi]- 3-piridinil}amino) carbonil]propil} carbamato de 1,1- dimetiletilo (Intermedio 177) 1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 8 ppm 8,46 (1H, d), 8,21 (1H, dd), 7,77 (1H, d), 7,11 (1H, d), 7,00 (1H, dd), 6,81 (1H, d), 3,23 - 3,29 (1H, m), 2,14 - 2,24 (1H, m), 1,63 - 1,75 (1H, m),1,45 - 1,57 (1H, m), 1,09 - 1,16 (2H, m), 0,92 (3H, t), 0,79 - 0,87 (2H, m) 0,71 min, 337 [M+H]+
198
jXtX. X 0Jv» X (2R)-2-amino-N- (6-{[4-ciano-3-(1- metNetil)fenN]oxi}- 3-piridinil) butanamida ((1R)-1-{[(6-{[4- ciano-3-(1-metiletil) fenil]oxi}-3- piridinil)amino] carbonil}propil) carbamato de 1,1- dimetiletilo (Intermedio 187) X-RMN (400 MHz, DMSO-cfe): 8 ppm 8,48 (1H, d) 8,22 (1H, dd) 7,79 (1H, d) 7,24 (1H, d) 7,15 (1H, d) 7,05 (1H, dd) 3,19 - 3,30 (2H, m) 1,61 - 1,74 (1H, m) 1,45 - 1,56 (1H, m) 1,26 (6H, d) 0,91 (3H, t) 0,76 min, 339 [M+H]+
199
JTO, " X oX" X (2R)-2-amino-N- {6-[(4-ciano-3- etilfenil)oxi]-3- piridinil} butanamida {(1R)-1-[({6-[(4- ciano-3-etilfenil)oxi]- 3-piridinil}amino) carbonil]propil} carbamato de 1,1- dimetiletilo (Intermedio 179) X-RMN (400 MHz, DMSO-cfe): 8 ppm 8,48 (1H, d) 8,22 (1H, dd) 7,80 (1H, d) 7,19 (1H, d) 7,15 (1H, d) 7,07 (1H, dd) 3,22 - 3,29 (1H, m) 2,79 (2H, q) 1,60 - 1,74 (1H, m) 1,44 - 1,56 (1H, m) 1,21 (3H, t) 0,91 (3H, t)
200
xL^-sJ fY? o^X'"' F X (2R)-2-amino-N- [2-({4-metil-3- [(trifluorometil) oxi]fenil)oxi)-5- pirimidinil] butanamida [(1R)-1-({[2-({4- metil-3- [(trifluorometil)oxi] fenil}oxi)-5- pirimidinil]amino} carbonil)propil] carbamato de 1,1- dimetiletilo (Intermedio 180) 0,78 min, 371 [M+H]+.
201
J nL ^ Y — N 1 ] Y° qX^mh, X (2R)-2-amino-N- [6-({4-ciano-3-[(1- metiletil)oxi]fenil} oxi)-3-piridinil] [(1R)-1-({[6-({4- ciano-3-[(1- metiletil)oxi]fenil}oxi) -3-piridinil]amino} carbonil)propil] 1H-RMN (400 MHz, CDCla): 8 ppm 9,70 (1H, br. s.), 8,26 - 8,38 (2H, m), 7,54 (1H,
Int.
Estructura Nombre Amina protegida N- BOC Caracterizacion por RMN Caracterizacion por UPLC_ipqc
butanamida carbamato de 1,1- dimetiletilo (Intermedio 181) d), 7,01 (1H, d), 6,74 (1H, d), 6,68 (1H, dd), 4,52 - 4,66 (1H, m), 3,45 -3,54 (1H, m), 1,97 - 2,10 (1H, m), 1,65 - 1,76 (1H, m), 1,41 (6H, d), 1,06 (3H, t)
202
o \ NH? (2R)-2-amino-W- {6-[(4-ciano-2- metilfenil)oxi]-3- piridinil} butanamida {(1R)-1-[({6-((4- ciano-2-metilfenil) oxi]-3-piridinil} amino)carbonil] propil}carbamato de 1,1 -dimetiletilo (Intermedio 182) 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 8 ppm 8,35 - 8,41 (1H, m), 8,15 - 8,25 (1H, m), 7,84 (1H, s), 7,69 (1H, d), 7,14 (2H, t), 3,23 - 3,39 (1H, m), 2,16 (3H, s), 1,58 - 1,75 (1H, m), 1,43 - 1,58 (1H, m), 0,90 (3 H, t) 0,63 min, 311 [M+H]+, 309 [M-H]-.
203
/Y°"0 "Y NH N"' F 1 I F'Y° 0-;iLY'x F ' NH2 (2R)-2-amino-W- [6-({4-ciano-3- [(trifluorometil) oxi]fenil}oxi)-3- piridinil] butanamida [(1R)-1-({[6-({4- ciano-3- [(trifluorometil)oxi] fenil}oxi)-3- piridinil]amino} carbonil)propil] carbamato de 1,1- dimetiletilo (Intermedio 183) 1H RMN (400 MHz, CDCla): 8 ppm 9,76 (1H, s), 8,25 - 8,43 (2H, m), 7,70 (1H, d), 7,20 (1H, s), 7,16 (1H, dd), 7,06 (1H, d), 3,44 - 3,59 (1H, m), 1,53 - 2,12 (2H, m), 1,07 (3H, t) 0,72 min, 381 [M+H]+, 379 [M-H]-.
204
>5v/,0>.N JL N. Jv. 1 o^Yn y (2R)-2-amino-N- {2-[(4-ciano-2- etilfenil)oxi]-5- pirimidinil} butanamida {(1R)-1-[({2-[(4- ciano-2-etilfenil)oxi]- 5-pirimidinil} amino)carbonil] propil}carbamato de 1,1 -dimetiletilo (Intermedio 184) 'H-RMN (400 MHz, DMSO-cfe): 8 ppm 8,90 (2H, s) 7,87 (1H, d) 7,75 (1H, dd) 7,34 (1H, d) 4,72 (2H, br. s.) 3,24 - 3,30 (1H, m) 2,52 - 2,58 (2H, m) 1,62 - 1,75 (1H, m) 1,45 - 1,57 (1H, m) 1,11 (3H, t) 0,91 (3H, t)
205
N* Jy (2R)-2-amino-N- {2-[(4-ciano-2- metilfenil)oxi]-5- pirimidinil} butanamida {(1R)-1-[({2-[(4- ciano-2-metilfenil) oxi]-5-pirimidinil} amino)carbonil] propil}carbamato de 1,1 -dimetiletilo (Intermedio 185) 'H-RMN (400 MHz, DMSO-cfe): 8 ppm 8,90 (2H, s) 7,87 (1H, d) 7,75 (1H, dd) 7,35 (1H, d) 4,71 (2H, br. s.) 3,23 - 3,30 (1H, m) 2,14 (3H, s) 1,62 - 1,75 (1H, m)1,44-1,57 (1H,
5
10
15
20
25
Int.
Estructura Nombre Amina protegida N- BOC Caracterizacion por RMN Caracterizacion por UPLC_ipqc
m) 0,91 (3H, t)
206
4" \_• % 2 (2R)-2-amino-N- (2-{[4-ciano-2- (1,1 -dimetiletil) fenil]oxi}-5- pirimidinil) butanamida ((1R)-1-{[(2-{[4- ciano-2-(1,1- dimetiletil)fenil]oxi}- 5-pirimidinil) amino]carbonil} propil)carbamato de 1,1-dimetiletilo (Intermedio 186) 0,73 min, 354 [M+H]+.
Intermedio 207
4-({5-[(4R)-4-etil)-4-metil)-2,5-dioxo-1-imidazolidinil]-2-piridinil}oxi)-2-(1-metMetenM)benzonitrMo
imagen172
/
A una disolucion de trifosgeno (118 mg, 0,40 mmoles) en DCM seco (3 mL) a 0°C se anadio DIPEA (0,695 mL, 4,0 mmoles) seguido de una disolucion de 4-[(5-amino-2-piridinil)oxi]-2-(1-metiletenil)benzonitrilo (Intermedio 154, 100 mg) en DCM seco (6 mL) lentamente (5 minutos). Despues de esto, se anadio cloruro de (2R)-2-metil-1-(metiloxi)-1- oxo-2-butanaminio (268 mg, 1,6 mmoles) disuelto en DCM seco (3 mL) a la misma temperatura y la mezcla de reaccion se agito durante 45 minutos a 0°C. La reaccion se paro con agua y se anadio tampon acuoso (pH 3) mientras se dejaba que el pH alcanzara ~5-6. Se anadio acetato de etilo (40 mL) y las dos fases se separaron. La capa organica se lavo con salmuera (2x10 mL), se seco (Na2SO4), se filtro y se evaporo rindiendo el intermedio urea como una espuma amarilla. Esta urea se disolvio en MeOH (10 mL), se anadio NaOMe (10 mg) y la mezcla de reaccion se puso a reflujo durante 45 minutos con agitacion. Despues de enfriar, la mezcla se paro con una disolucion acuosa saturada de cloruro de amonio (10 mL) y se diluyo con acetato de etilo (20 mL). Las dos fases se separaron y la capa organica se seco (Na2SO4), se filtro y se evaporo y el residuo se purifico por cromatograffa ultrarrapida en gel de silice (SNAP de 10 g) eluyendo con ciclohexano/acetato de etilo de 75:25 a 50:50 rindiendo el compuesto del tftulo como un solido blanco (100 mg). 1
1H RMN (400 MHz, CDCla) 8 ppm 8,31 (1H, d), 7,87 (1H, dd), 7,71 (1H, d), 7,14 - 7,20 (2H, m), 7,12 (1H, d), 5,94 (1H, br. s.), 5,42 (1H, s), 5,34 (1H, s), 2,20 (3H, s), 1,95 - 2,05 (1H, m), 1,79 (1H, dd), 1,56 (3H, s), 1,00 (3H, t); UPLC_ipqc: 1,04 min, 377 [M+H]+.
Ejemplo 1
(5R)-5-metil-3-{4-[(3-metilfenil)oxi]fenil}-2,4-imidazolidindiona
imagen173
A Boc-anhndrido (0,522 g, 2,394 mmoles) en diclorometano (4 mL) se anadio DMAP (0,248 g, 2,033 mmoles) seguido de la adicion lenta con jeringa de una disolucion de ester tercbutilico de D-Alanina e diclorometano (4 mL) (preparado a partir de la sal HCl del ester tercbutilico de D-Alanina) (0,410 g) que se repartio entre DCM y una disolucion acuosa de Na2CO3. La capa organica se seco (K2CO3), los volatiles se evaporaron en vado y se re- disolvio en diclorometano. La mezcla se agito durante 10 minutos y se dividio en tres alicuotas iguales (disolucion 1).
A 4-[(3-metilfenil)oxi]anilina (90 mg, 0,45 mmoles) en diclorometano (1 mL) se anadio con agitacion a 35°C una alicuota de aproximadamente 1/3 de disolucion 1 lentamente con jeringa (durante aproximadamente 1 min). Despues de 30 min, se anadio HCl (aproximadamente 0,8 mL) y la mezcla heterogenea se calento a 100°C durante 2 horas con agitacion, permitiendo que el diclorometano se elimine por destilacion a traves de un capilar de vidrio. Despues de enfriar hasta temperatura ambiente, el HCl acuoso se elimino por pipeteo y el residuo se seco en vacfo.
El residuo se purifico por cromatograffa en gel de s^lice (instrumento Biotage, columna de 10 g) eluyendo con EtOAc/cHex 0-100% para proporcionar despues de secar el compuesto del tftulo como un solido (30 mg).
1H RMN (400 MHz, CDCls): 8 ppm 7,40 - 7,34 (2H, m), 7,28 - 7,22 (1H, m), 7,12 - 7,05 (2H, m), 6,98 (1H, d), 6,91 - 6,84 (2H, m), 5,75 (1H, br. s), 4,28 (1H, m), 2,34 - 2,39 (3H, s), 1,59 (3H, m); LC-MS-A: 2,44 min, 295 [M-H]-
5 Ejemplo 2
(5R)-5-metil-3-(4-{[3-(metiloxi)fenil]oxi}fenil)-2,4-imidazolidindiona
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A una disolucion de N1-(4-{[3-(metiloxi)fenil]oxi}fenil)-D-alaninamida (Intermedio 2, 315 mg) y trietilamina (0,307 mL, 2,200 mmoles) en acetato de etilo seco (5 mL), se anadio trifosgeno (163 mg, 0,550 mmoles) y la mezcla de 10 reaccion se agito durante 5 minutos. Se anadio DMAP (67,2 mg, 0,550 mmoles) y la mezcla de reaccion se agito durante 10 minutos mas. La reaccion se paro con una disolucion saturada de carbonato de sodio (5 mL), se diluyo con agua (10 mL) y se extrajo con acetato de etilo (3 veces 20 mL). La capa organica se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se evaporo. El residuo se purifico por cromatograffa en gel de sflice (sistema Biotage, columna SNAP de 10 g) eluyendo con un gradiente ciclohexano/acetato de etilo de 100/0 a 60/40 para rendir el compuesto del tftulo 15 como un solido blanco (115 mg).
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 8 ppm: 8,46 (1H, s), 7,27 - 7,42 (3H, m), 7,09 (2H, d), 6,77 (1H, dd), 6,65 (1H, t), 6,60 (1H, dd), 4,26 (1H, m), 3,76 (3H, s), 1,36 (3H, d); LC-MS_A: 2,31 min, 311 [M-H]-
Ejemplo 3
(5R)-3-(4-{[3-(etiloxi)fenil]oxi}fenil)-5-metil-2,4-imidazolidindiona
20
El compuesto del tftulo se preparo de una forma similar a la preparacion del Ejemplo 1 reemplazando 4-[(3- metilfenil)oxi]anilina con 4-[(3-etiloxifenil)oxi]anilina (Intermedio 4, 0,104 g). Despues de cromatograffa en gel de sflice, se obtuvo una goma marron y se trituro con Et2O:cHex (aproximadamente 1:2, aproximadamente 1,5 mL). Esto rindio despues de secar, el compuesto del tftulo como un solido marron tenue (9 mg).
25 1H RMN (400 MHz, CDCla): 8 ppm 7,38 (2H, m), 7,28 - 7,22 (1H, m), 7,14 - 7,07 (2H, m), 6,73 - 6,67 (1H, m), 6,66 -
6,60 (2H, m), 5,56 (1H, br. s), 4,29 (1H, m), 4,02 (2H, q), 1,61 - 1,57 (3H, m), 1,47 - 1,39 (3H, m); LC-MS_A: 2,46 min, 325 [M-H]-
Ejemplo 4
(5R)-3-{4-[(3-cloro-5-fluorofenil)oxi]fenil}-5-metil-2,4-imidazolidindiona
30
A trifosgeno (0,052 g, 0,177 mmoles) se anadio una disolucion de 4-[(3-cloro-5-fluorofenil)oxi]anilina (Intermedio 6, 0,12 g) en tolueno (1 mL) y trietilamina (0,16 g) con agitacion. Se formo inmediatamente una suspension de solidos espesa y se anadio tolueno adicional (1 mL). La mezcla se agito durante 3 horas a temperatura ambiente y despues se anadieron D-alanina (0,067 g, 0,757 mmoles) en N,N-dimetilformamida (2 mL) y agua (aproximadamente 2 mL) 35 (disuelto apenas) rapidamente con pipeta. Se formo un sistema de dos capas que se agito vigorosamente durante 2 horas y se mantuvo toda la noche a temperatura ambiente. Los volatiles se evaporaron, se anadio acido clorhffdrico (2 mL, 24,35 mmoles) y la mezcla heterogenea se calento a 100°C durante 2 horas, despues se dejo enfriar hasta temperatura ambiente. Despues de enfriar hasta temperatura ambiente, el HCl acuoso se elimino por pipeteo y el residuo se seco en vacfo. El residuo se purifico por cromatograffa en gel de sflice (instrumento Biotage, columna de 40 10 g) eluyendo con EtOAc/cHex 0-100% para proporcionar el compuesto del tftulo como un solido incoloro (7 mg).
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1H RMN (400 MHz, CDCI3): 8 ppm 7,52 - 7,41 (2H, m), 7,21 - 7,11 (2H, m), 6,92 -6,79 (2H, m), 6,72 - 6,58 (1H, m), 5,57 (1H, s), 4,31 (1H, dd), 1,61 (3H, d); LC-MS_A: 2,58 min, 333 [M-H]-
Ejemplo 5
(5R)-3-{4-[(3-cloro-4-fluorofenil)oxi]fenil}-5-metil-2,4-imidazolidindiona
5
Una mezcla de W-[({4-[(3-cloro-4-fluorofenil)oxi]fenil}amino)carbonil]-D-alanina (Intermedio 9, 352 mg) en 15 mL de 3N HCl se calento a 100°C durante 16 horas. Despues, se anadio carbonato de sodio y la mezcla se ajusto a pH=8. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (3 veces 50 mL) y las fases organicas combinadas se lavaron con salmuera y se secaron sobre sulfato de magnesio. La eliminacion del disolvente rindio una residuo que se purifico 10 por cromatograffa en columna (MeOH /DCM=1/50) para proporcionar 42 mg del compuesto del tttulo como un solido
blanco.
1HRMN (300 MHz, DMSO): 8 ppm 8,47 (1H, s), 7,50 - 7,45 (1H, t), 7,38 - 7,36 (3H, m), 7,13 - 7,09 (3H, m), 4,28 - 4,23 (1 H, q), 1,36 - 1,34 (3H, d); MS_2 (ESI): 335 [M+H]+
Ejemplo 6
15 (5S)-3-{4-[(3-cloro-4-fluorofenil)oxi]fenil}-5-metil-2,4-imidazolidindiona
NH
o' \
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Una mezcla de W-[({4-[(3-cloro-4-fluorofenil)oxi]fenil}amino)carbonil]-L-alanina (Intermedio 10, 352 mg) en 15 mL de 3N HCl se calento a 100°C durante 16 horas. Despues, se anadio carbonato de sodio y la mezcla se ajusto a pH=8. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (3 * 50mL). Las fases organicas combinadas se lavaron con salmuera y se 20 secaron con sulfato de magnesio. La eliminacion del disolvente rindio compuesto crudo que se purifico por cromatograffa en columna (MeOH /DCM=1/50) para proporcionar 40 mg del compuesto del tttulo como un solido blanco.
1HRMN (300 MHz, CDCla): 8 ppm 7,41 - 7,31 (2H, m), 7,15 - 7,09 (2H, m), 7,08 - 7,03 (2H, m), 6,94 - 6,90 (1H, m), 5,70 (1H, s), 4,30 -4,25 (1H, q), 1,59 - 1,57 (3H, d); MS 1 (ESI): 335 [M+H]+
25 Ejemplo 7
(5R)-5-metil-3-(4-{[2-metil-5-(metiloxi)fenil]oxi}fenil)-2,4-imidazolidindiona
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Se disolvio W1-(4-{[2-metil-5-(metiloxi)fenil]oxi}fenil)-D-alaninamida (Intermedio 16, 118 mg) en diclorometano seco (18 mL). La mezcla de reaccion se enfrio en un bano de hielo. Se anadio trietilamina 0,327 mL, 2,350 mmoles). 30 Despues, se anadio una disolucion de trifosgeno en diclorometano seco (46,5 mg, 0,157 mmoles) disuelto en 7 mL de diclorometano. La reaccion se agito a 0°C durante 10 min bajo argon. Se anadio una disolucion acuosa saturada de NaHCO3 (18 mL) y la capa acuosa se extrajo con diclorometano 4 veces (4 * 15 mL). Despues de secar sobre sulfato de sodio, los disolventes se eliminaron en vado. El residuo se purifico por cromatograffa en gel de sflice (sistema Companion, cartucho de 12 g) eluyendo con un gradiente cHex/EtOAc de 100/0 a 60/40 durante 20 min y 35 60/40 durante 30 min. Esto rindio el compuesto del tftulo (91 mg).
1H RMN (400 MHz, CDCla): 8 ppm 7,34 - 7,28 (2H, m), 7,15 (1H, d), 7,01 -6,92 (2H, m), 6,68 (1H, dd), 6,53 (1H, d), 5,63 (1H, s), 4,25 (1H, dd), 3,74 (3H, s), 2,14 (3H, s), 1,56 (3H, d); UPLC_B: 0,79 min, 326 [M+1]+
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A una disolucion de N1-(4-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}fenil)-D-alaninamida (Intermedio 22, 215 mg) en diclorometano seco (15 mL) se anadio trietilamina (0,499 mL, 3,58 mmoles) y la mezcla de reaccion se enfrio hasta 0°C. Se anadio lentamente una disolucion de trifosgeno (96 mg, 0,322 mmoles) en diclorometano seco (5 mL) y la mezcla de reaccion se agito durante 30 minutos a la misma temperatura. La reaccion se paro con agua (10 mL) y se extrajo con diclorometano (20 mL). La capa organica se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se evaporo y el residuo se purifico por cromatograffa ultrarrapida (sistema Biotage, columna SNAP) en gel de sflice usando como eluyente un gradiente ciclohexano/acetato de etilo de 80/20 a 40/60 para rendir el compuesto del tftulo como un solido blanco (165 mg).
1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 8 ppm 8,45 (1H, s), 7,32 (2H, m), 7,16 (1H, d), 7,05 (2H, m), 6,74 (1H, d), 6,52 (1H, dd), 4,25 (1H, dd), 3,77 (3H, s), 2,14 (3H, s), 1,35 (3H, d); UPLC_B: RT 0,82 min, 327 [M+H]+
Ejemplo 9
(5R)-5-metil-3-(6-{[3-(1-metiletil)fenil]oxi}-3-piridinil)-2,4-imidazolidindiona
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Se disolvio N1-(6-{[3-(1-metiletil)fenil]oxi}-3-piridinil)-D-alaninamida (Intermedio 26, 35 mg) en diclorometano seco (3 mL). La mezcla de reaccion se enfrio en un bano de hielo. Se anadio trietilamina (98 pl, 0,701 mmoles). Despues, se anadio gota a gota una disolucion de trifosgeno en diclorometano seco (13,88 mg, 0,047 mmoles disuelto en 1 mL de diclorometano). La mezcla de reaccion se agito a 0°C, bajo argon, durante 10 min. Se anadio una disolucion acuosa saturada de NaHCO3 (4 mL) y la capa acuosa se extrajo con diclorometano 4 veces (4 x 5 mL). Despues de secar sobre sulfato de sodio, los disolventes se eliminaron en vado. El residuo obtenido se purifico por cromatograffa en gel de sflice (sistema Companion, 2 x cartuchos de sflice de 4g) con un gradiente ciclohexano/ acetato de etilo de 100/0 a 50/50 durante 10 min y 50/50 durante 20 min. Esto rindio el compuesto del tftulo como una peftcula (27 mg).
1H RMN (400 MHz, CDCla): 8 ppm 8,32 (1H, d), 7,78-7,75 (1H, dd), 7,36 (1H, t), 7,14 (1H, d), 7,05 (1H, t), 7,01-6,99 (2 H, m), 6,55 (1H, s), 4,27 (1H, q), 2,96 (1H, m), 1,59 (3H, d), 1,30 (6H, d); UPLC: 0,78 min, 326 [M+1]+
Ejemplo 10
(5R)-5-metil-3-[6-({3-[(1-metiletil)oxi]fenil}oxi)-3-piridinil]-2,4-imidazolidindiona
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A una disolucion de N1-[6-({3-[(1-metiletil)oxi]fenil}oxi)3-piridinil]-D-alaninamida (Intermedio 32, 229 mg) y trietilamina (442 mg, 4,38 mmoles) en diclorometano (20 mL) se anadio una disolucion de trifosgeno (216 mg, 0,73 mmoles) en diclorometano (10 mL) gota a gota a 0°C durante 5 minutos. La mezcla resultante se agito a temperatura ambiente durante 2 horas. El disolvente se elimino por destilacion y el residuo se repartio entre diclorometano (3 veces 50 mL) y agua (50 mL). Las capas organicas combinadas se lavaron con salmuera (3 veces 10 mL), se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron para rendir un solido gris, que se purifico por cromatograffa en gel de sflice (PE: EtOAc= 2:1) para rendir el compuesto del tftulo como un solido blanco (120 mg).
1H RMN (300MHz, DMSO-d6): 8 ppm 8,54 (1H, s), 8,15 - 8,14 (1H, d), 7,86 - 784 (1H, dd), 7,33 - 7,28 (1H, t), 7,13 - 7,10 (1 H, d), 6,80 - 6,77 (1 H, dd), 6,71 - 6,67 (2H, m), 4,64 - 4,58 (1H, m), 4,30 - 4,25 (1 H, q), 1,37 - 1,35 (3H, d), 1,27 - 1,25 (6H, d).
MS 1 (ESI): 342 [M+H]+
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El compuesto del fftulo se preparo de una forma similar a la preparacion del Ejemplo 9 reemplazando N1-(6-{[3-(1- metiletil)fenil]oxi}-3-piridinil)-D-alaninamida con N1-{6-[(2,5-dimetilfenil)oxi]-3-piridinil}-D-alaninamida (Intermedio 36, 48 mg) para rendir el compuesto del fftulo como un polvo amarillo (31 mg).
1H RMN (400 MHz, CDCls): 8 ppm 8,25 (1H, d), 7,74 - 7,71 (1H, dd), 7,17 (1H, d), 6,98 - 6,88 (3H, m), 6,16 (1H, s), 4,25 (1H, q), 2,32 (3H, s), 2,14 (3H, s), 1,56 (3H, d); UPLC: 0,77 min, 312 [M+1]+
Ejemplo 12
(5R)-3-{6-[(2,3-dimetilfenil)oxi]-3-piridinil}-5-metil-2,4-imidazolidindiona
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Se disolvio N1-{6-[(2,3-dimetilfenil)oxi]-3-piridinil}-D-alaninamida (Intermedio 40, 13 mg) en diclorometano seco (2 mL). La mezcla de reaccion (bajo argon) se enfrio en un bano de hielo. Se anadio trietilamina (38,1 pl, 0,273 mmoles). Despues, se anadio una disolucion de trifosgeno en diclorometano seco (5,41 mg, 0,018 mmoles, 0,40 equiv disuelto en 1 mL de DCM) gota a gota. La mezcla de reaccion se agito a 0C, bajo argon, durante 10 min. Se anadio una disolucion acuosa saturada de NaHCO3 (3 mL) y la capa acuosa se extrajo con diclorometano 4 veces (4 x 4 mL). Despues de secar sobre sulfato de sodio, los disolventes se eliminaron en vado. El residuo se purifico por cromatograffa en gel de sflice (sistema Companion, cartucho de sflice de 4 g) con un gradiente ciclohexano/acetato de etilo de 100:0 a 55:45 durante 10 min y 55:45 durante 20 min. Esto rindio el compuesto del fftulo (9 mg).
1H RMN (400 MHz, CDCla): 8 ppm 8,26 (1 H, d), 7,75 - 7,54 (2H, m), 7,16 - 6,92 (3H, m), 5,63 (1H, s), 4,24 (1H,m), 2,34 (3H, s), 2,11 (3H, s), 1,60 (3H, d); UPLC: 0,70 min, 312 [M+H]+
Ejemplo 13
(5R)-3-(6-[(2,6-dimetilfenil)oxi]-3-piridinil}-5-metil-2,4-imidazolidindiona
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En un matraz de fondo redondo de 50 mL se disolvio N1-{6-[(2,6-dimetilfenil)oxi]-3-piridinil}-D-alaninamida (Intermedio 44, 173,8 mg) en diclorometano (5 mL) para proporcionar una disolucion amarilla. La mezcla de reaccion se enfrio a 0°C. Se anadieron W,A/-dimetil-4-piridinamina (36,5 mg, 0,298 mmoles), trietilamina (0,208 mL, 1,492 mmoles) y trifosgeno (89 mg, 0,298 mmoles). La mezcla de reaccion se agito a 0°C. Despues de 20 min, el disolvente se evaporo en vado para rendir un solido amarillo. Este residuo se purifico por cromatograffa en gel de sflice (instrumento Biotage, columna de sflice SNAP de 10g) eluyendo con Ciclohexano/EtOAc de 2:1 Ciclohexano/EtOAc a 1:3 Ciclohexano/EtOAc en 20 VC; despues 1:3 Ciclohexano/EtOAc para 5 VC. Las fracciones recogidas rindieron el compuesto del fftulo como un aceite incoloro (162 mg).
1H RMN (400 MHz, CDCh) d ppm 8,26 (1H, d), 7,76 (1H, dd), 7,07 -7,19 (3H, m), 6,95 (1H, d), 6,67 (1H, br. s), 4,32 - 4,22 (1H, m), 2,17 (6H, s), 1,57 (3H, d); UPLC_s: 0,80 min, 312 [M+H]+.
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En un matraz de fondo redondo de 50 mL se disolvio N1-{6-[(2-etilfenil)oxi]-3-piridinil}-D-alaninamida (Intermedio 48, 170,0 mg) en diclorometano (5 mL) para proporcionar una disolucion amarilla clara. La mezcla de reaccion se enfrio a 0°C. Se anadieron A/,W-dimetil-4-piridinamina (35,7 mg, 0,292 mmoles), trietilamina (0,203 mL, 1,460 mmoles) y trifosgeno (87 mg, 0,292 mmoles). La mezcla de reaccion se agito a 0°C. Despues de 20 min, la mezcla de reaccion se evaporo en vacfo rindiendo un solido amarillo que se purifico por cromatograffa en gel de sflice (sistema Biotage, columna SNAP de 10g) eluyendo con un gradiente Ciclohexano/EtOAc de 2:1 a 1:3 en 20 VC; despues 1:3 durante 5 VC. Las fracciones recogidas rindieron el compuesto del fftulo como un aceite incoloro (153,2 mg).
1H RMN (400 MHz, CDCla): 8 ppm 8,29 (1H, d), 7,76 (1H, dd), 7,36 (1H, dd), 7,31 - 7,20 (2H, m), 7,08 (1H, dd), 6,99 (1 H, d), 6,68 - 6,52 (1H, m), 4,32 - 4,23 (1H, m), 2,62 (2H, q), 1,57 (3H, d), 1,26 - 1,18 (3H, m); UPLC_B: 0,76 mins, 312 [M+H]+.
Ejemplo 15
(5R)-5-metil-3-(6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)-2,4-imidazolidindiona
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A una disolucion de N1-(6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)-D-alaninamida (Intermedio 52, 255 mg) en diclorometano seco (15 mL), se anadio TEA (0,590 mL, 4,23 mmoles) y la mezcla de reaccion se enfrio hasta 0°C. Se anadio lentamente una disolucion de trifosgeno (113 mg, 0,381 mmoles) en diclorometano seco (DCM) (5 mL) y la mezcla de reaccion se agito durante 30 minutos a la misma temperatura. La reaccion se paro con agua (10 mL) y se extrajo con diclorometano (20mL). La capa organica se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se evaporo y el residuo se purifico por cromatograffa en gel de sflice (sistema Biotage, columna SNAP de 10 g) usando como eluyente un gradiente ciclohexano/acetato de etilo de 70/30 a 30/70. Esto rindio el compuesto del fftulo como un solido blanco (172 mg, 0,525 moles).
1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 8 ppm 8,54 (1H, br. s), 8,13 (1H, d), 7,81 - 7,86 (1H, m), 7,17 (1H, d), 7,09 (1H, d), 6,79 (1H, d), 6,63 (1H, dd), 4,27 (1H, q), 3,77 (3H, s), 2,15 (3H, s), 1,37 (3H, d); UPLC_B: 0,75 min, 328 [M+1]+
Ejemplo 16
(5R)-5-metil-3-(6-{[2-metil-5-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)-2,4-imidazolidindiona
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El compuesto del fftulo se preparo de una forma similar a la preparacion del Ejemplo 7 reemplazando W1-(4-{[2-metil- 5-(metiloxi)fenil]oxi}fenil)-D-alaninamida con N1-(6-{[2-metil-5-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)-D-alaninamida (Intermedio 56, 118 mg) para rendir el compuesto del fftulo (78 mg)
1H RMN (400 MHz, CDCla): 8 ppm 8,26 (1H, d), 7,73 (1H, dd), 7,17 (1H, d), 6,94 (1H, d), 6,74 (1H, dd), 6,64 (1H, d),
5,88 (1H, s), 4,36 -4,14 (1H, m), 3,82 -3,71 (3H, s), 2,10 (3H, s), 1,57 (3H, d); UPLC_B: 0,71 min, 328 [M+1]+
Ejemplo 17
(5R)-5-metil-3-(6-{[2-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)-2,4-imidazolidindiona
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El compuesto del tftulo se preparo de una forma similar a la preparacion del Ejemplo 9 reemplazando N1-(6-{(3-(1- metiletil)fenil]oxi}-3-piridinil)-D-alaninamida con W1-(6-{[2-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)-D-alaninamida
(Intermedio 63, 200 mg) para rendir el compuesto del tftulo (184 mg).
1H RMN (400 MHz, CDCls): 8 ppm 8,28 (1H, d), 7,77 (1H, m), 7,23 (1H, m), 6,98 (1H, d), 6,80 - 6,73 (2H, m), 6,49 (1H, s), 4,29 -4,27 (1H, m), 3,89 (3H, s), 2,09 (3H, s), 1,58 (3H, d); UPLC_B: 0,72 min, 328 [M+1]+
Ejemplo 18
(5R)-5-etil-3-(4-{[3-(metiloxi)fenil]oxi}fenil)-2,4-imidazolidindiona
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A acido D-2-aminobutftico (60,4 mg, 0,586 mmoles) en diclorometano (1 mL) se anadio DIPEA (0,236 mL, 1,352 mmoles) y N-Metil-N-trifluoroacetamida (269 mg, 1,352 mmoles) y la suspension se agito a 40°C en un vial cerrado durante 2,5 horas, resultando en una disolucion virtualmente clara (Disolucion 1).
A Boc-antndrido (138 mg, 0,631 mmoles) en diclorometano (1 mL) se anadio DMAP (55,1 mg, 0,451 mmoles) seguido de una disolucion de 4-{[3-(metiloxi)fenil]oxi}anilina (97 mg, 0,451 mmoles) en diclorometano (1 mL). La mezcla se agito durante 10 min. La disolucion marron asf obtenida se anadio a la Disolucion 1 con jeringa con agitacion a 35°C y la agitacion se continuo a esta temperatura durante 2 horas. La disolucion se mantuvo a temperatura ambiente durante aproximadamente 64 horas. Se anadio HCl ac. conc.(aproximadamente 0,8 mL) y la mezcla heterogenea se calento a 100°C durante 2 horas con agitacion, permitiendo que el DCM se elimine por destilacion a traves de un capilar de vidrio. Despues de enfriar hasta temperatura ambiente, el residuo se diluyo con agua (aproximadamente 3 mL) y se extrajo con diclorometano (2 veces aproximadamente 2 mL). Los extractos de diclorometano se concentraron en vado. El residuo se purifico por cromatograffa en gel de sflice (sistema Biotage, columna de 10 g) eluyendo con un gradiente cHex/EtOAc de 95/5 a 0/100 para proporcionar un aceite marron viscoso que se disolvio en Et2O (aproximadamente 0,7 mL) y cHex (aproximadamente 0,1 mL) y se guardo toda la noche. La disolucion marron palido en la parte superior se decanto de una pequena cantidad de un aceite marron que se habfa separado. Al dejar que el disolvente se evaporara de esta disolucion se inicio la cristalizacion. El material asf obtenido se dejo secar y se trituro con Et2O (2 veces aproximadamente 0,5 mL) para rendir, despues de secar, el compuesto del tftulo como un solido (28 mg).
1H RMN (400 MHz, CDCla): 8 ppm 7,40 - 7,33 (2H, m), 7,28 - 7,23 (1H, m), 7,15 - 7,07 (2H, m), 6,75 - 6,69 (1H, m), 6,67 - 6,61 (2H, m), 5,64 (1H, br, s), 4,25 - 4,18 (1H, m), 3,81 (3H, s), 2,10 - 1,88 (2H, m), 1,09 (3H, t); LC-MS_A: 2,43 min, 325 [M-H]-
Ejemplo 19
(5R)-5-etil-3-(6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)-2,4-imidazolidindiona
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Metodo A
A una solucion de (2R)-2-amino-N-(6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)butanamida (Intermedio 65, 120 mg) en diclorometano seco (8 mL) se anadio TEA (0,265 mL, 1,903 mmoles) y la mezcla de reaccion se enfrio hasta 0°C. Se anadio lentamente una disolucion de trifosgeno (50,8 mg, 0,171 mmoles) en diclorometano seco (DCM) (2 mL) y la mezcla de reaccion se agito durante 30 minutos a la misma temperatura. La reaccion se paro con agua (2 mL) y se separaron dos fases. La capa organica se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se evaporo y el residuo se purifico por cromatograffa en gel de sflice (sistema Biotage, columna SNAP de 10 g) con, como eluyente, un gradiente de ciclohexano/acetato de etilo 80/20 a ciclohexano/acetato de etilo 50/50, para rendir el compuesto del tftulo como un solido blanco (108 mg).
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 8 ppm 8,61 (1H, s), 8,12 (1H, d), 7,82 (1H, dd), 7,17 (1H, d), 7,08 (1H, d), 6,79 (1H, d), 6,63 (1H, dd), 4,25 - 4,18 (1H, m), 3,77 (3H, s), 2,15 (3H, s), 1,89 - 1,62 (2H, m), 0,95 (3H, t): UPLC_B: 0,79 min, 342 [M+H]+.
Metodo B
Se suspendio (2R)-2-amino-N-(6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)butanamida2HCl (Intermedio 65b) (750 g) en diclorometano (7,5 L) y se anadio una disolucion acuosa al 7,5% de carbonato de sodio (6 L) y se agito hasta la
disolucion. Se separaron dos fases, la organica se lavo con disolucion acuosa al 10% de NaCI (6 L) y se concentro en vado a 45°C hasta aproximadamente 3,75 L para eliminar el agua mediante el azeotropo (agua ~0,05%). Se anadio diclorometano hasta 15 L y despues se anadio Et3N (1,35 L). Esta disolucion se enfrio hasta 0°C.
Se disolvio trifosgeno (201 g) en diclorometano (4,5 L) y esta disolucion se anadio en aproximadamente 10 minutos 5 a la disolucion previa manteniendo la temperatura interna a aproximadamente 10°C. La lmea se lavo con diclorometano (375 mL). Procesamiento: la mezcla organica se lavo con una disolucion acuosa al 28% de acido malico (7,5 L) despues con una disolucion acuosa al 2% p/p de carbonato de sodio (7,5 L) y finalmente con una disolucion acuosa al 20% de NaCl (7,5 L): La fase organica se concentro hasta el menor volumen (aproximadamente 3,75 L), se anadio tolueno (2,25 L) y se concentro hasta un volumen menor (3 L). Se anadio tolueno adicional (1 L), y 10 se concentro hasta un volumen menor (3 L) para eliminar todo el DCM. Se obtuvo una suspension y se agito durante 3 horas despues se filtro y se lavo con tolueno (2 x 1L). El solido se seco en vado a 45°C hasta peso constante (471g) del compuesto del tftulo. El solido se re-cristalizo como sigue: 459 g del compuesto del tftulo se suspendieron en Isopropanol (1.400 mL) y se calento hasta la disolucion completa (~70°C) despues se enfrio hasta 20°C, se agito durante 3 horas despues se filtro y se lavo con IPA (2 * 700 mL). El solido se seco en vado a 45°C hasta peso 15 constante (412g) del compuesto del tftulo. El solido se trituro adicionalmente como sigue: 412 g del compuesto del tftulo se suspendieron en tolueno (1.200 mL) a 20°C, se agito durante 2 horas despues se filtro y se lavo con tolueno (2 * 420 mL). El solido se seco en vado a 45°C hasta peso constante (404g) del compuesto del tftulo como un solido blanco.
13C-RMN (150,81 MHz, DMSO-cfe): 8 ppm 173,7, 162,7, 158,6, 155,9, 153,1, 145,8, 138,9, 131,1, 124,7, 122,6, 20 113,0, 111,3, 104,9, 58,0, 55,9, 24,9, 16,0, 9,3.
Cromatograffa Quiral: (Tipo de columna: Chiralpack OJ-H 4,6 mm * 250 mm, 5pm; Temperatura de la columna a 40°C; Fase movil: n-Hexano/Etanol en la proporcion 55/45% v/v; Caudal 0,8 mL/min; detector UV DAD a 220 nm) 11,26 minutos, exceso enantiomerico: 99,58%.
Ejemplo 20
25 (5S)-5-etil-3-(6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)-2,4-imidazolidindiona
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A una disolucion de (2S)-2-amino-N-(6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)butanamida (Intermedio 67, 43 mg) en diclorometano seco (3 mL), se anadio trietilamina (0,095 mL, 0,682 mmoles). La mezcla de reaccion se enfrio con un bano de hielo. Se anadio gota a gota una disolucion de trifosgeno (18,21 mg, 0,061 mmoles) en diclorometano 30 (0,750 mL) y la mezcla de reaccion se agito durante 30 minutos a 0°C. La reaccion se paro con agua (10 mL). La
fase organica se separo, se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se evaporo. El residuo se purifico por cromatograffa ultrarrapida en gel de sflice usando una columna SNAP de 10g y ciclohexano/acetato de etilo de 80/20 a 40/60 como eluyente, para rendir el compuesto del tftulo como un solido blanco (37,2 mg).
1H RMN (400 MHz, DMSO): 8 ppm 8,60 (1H, s), 8,12 (1H, d), 7,82 (1H, dd), 7,16 (1H, d), 7,08 (1H, d), 6,78 (1H, d), 35 6,63 (1H, dd), 4,21 - 4,19 (1H, m), 3,76 (3H, s), 2,14 (3H, s), 1,84 - 1,66 (2H, m), 0,95 (3H, t): UPLC: 0,76 min, 342
[M+H]+
Ejemplo 21
(5R)-5-etil-3-(6-{[3-(1-metiletil)fenil]oxi}-3-piridinil)-2,4-imidazolidindiona
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40 Se disolvio (2R)-2-amino-N-(6-{(3-(1-metiletil)fenil]oxi}-3-piridinil)butanamida (Intermedio 70, 930 mg) en
diclorometano seco (100 mL). La mezcla de reaccion, bajo argon, se enfrio en un bano de hielo. Se anadio trietilamina (2,482 mL, 17,81 mmoles). Despues, se anadio gota a gota una disolucion de trifosgeno en diclorometano seco (352 mg, 1,187 mmoles disuelto en 40 mL de diclorometano). La mezcla de reaccion se agito a 0°C, bajo argon, durante 10 min. Se anadio una disolucion acuosa saturada de NaHCO3 (100 mL) y la capa acuosa 45 se extrajo con diclorometano 4 veces (4 x 80 mL). Despues de secar sobre sulfato de sodio, el disolvente se elimino en vado. El residuo obtenido se purifico por cromatograffa en gel de sflice (sistema Companion, cartucho de 120 g de sflice) con un gradiente de ciclohexano/ acetato de etilo de 100/0 a 55/45. El compuesto del tftulo (5R)-5-etil-3-(6- {[3-(1-metiletil)fenil]oxi}-3-piridinil)-2,4-imidazolidindiona se obtuvo como un polvo beige (768 mg).
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1H RMN (400 MHz, CDCI3): 8 ppm 8,27 (1H, d), 7,74 (1H, dd), 7,32 (1H, t), 7,11 (1H, d), 7,01 (1H, t), 6,98 -6,95 (2H, m), 6,40 (1 H, s), 4,18 (1 H, t), 2,96 - 2,89 (1 H, m), 1,99 - 1,97 (1 H, m), 1,93-1,63 (1H, m), 1,27 (3H, s), 1,25 (3H, s), 1,05 (3H, t); UPLC: 0,81 min, 340 [M+H]+.
Ejemplo 22
5,5-dimetil-3-(4-{[3-(metiloxi)fenil]oxi}fenil)-2,4-imidazolidindiona
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A una disolucion de 2-metil-N1-(4-{[3-(metiloxi)fenil]oxi}fenil)alaninamida (Intermedio 72, 1,33 g) y trietilamina (3,70 mL, 26,6 mmoles) en diclorometano seco (80 mL) a 0°C se anadio gota a gota una disolucion de trifosgeno (600 mg, 2,022 mmoles) en diclorometano seco (20 mL) y la mezcla de reaccion se agito durante 30 minutos a la misma temperatura. La reaccion se paro con una disolucion saturada de cloruro de amonio (100 mL) y las dos fases se separaron. La capa acuosa se extrajo con diclorometano (100 mL) y las dos fases organicas se recogieron, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se evaporaron. El residuo se purifico por cromatograffa en gel de sflice (sistema Biotage, cartucho SNAP de 100g) usando como eluyente un gradiente y ciclohexano/acetato de etilo de 80/20 a 40/60 para rendir el compuesto del fftulo como un solido blanco (950 mg).
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 8 ppm 8,54 (1H, br. s), 7,34 - 7,40 (2H, m), 7,31 (1H, t), 7,09 (2H, m), 6,73 - 6,79 (1H, m), 6,65 (1H, t), 6,56 -6,62 (1H, m), 3,75 (3H, s), 1,40 (6H, s); UPLC_B-MS: 0,79 min, 327 [M+H]+
El compuesto del tftulo tambien se obtuvo con la ruta alternativa siguiente. A acido 2-aminoisobuffrico (120 mg, 1,164 mmoles) en diclorometano (2 mL) se anadio DIPEA (0,467 mL, 2,68 mmoles) y N-metil-N-trifluoroacetamida (533 mg, 2,68 mmoles) y la suspension se agito a 40°C durante 3,5 horas y despues a 50°C en un vial cerrado durante 1 hora, resultando en una disolucion clara (Disolucion 1). A Boc20 (406 mg, 1,862 mmoles) en diclorometano (8 mL) se anadio con enfriamiento en un bano de hielo DMAP (163 mg, 1,338 mmoles) seguido de la adicion lenta (durante aproximadamente 5 min) con jeringa de una disolucion de 4-{[3-(metiloxi)fenil]oxi}anilina (288 mg, 1,338 mmoles) en diclorometano (2 mL). La mezcla se agito durante 15 min a temperatura ambiente. La disolucion marron asf obtenida se anadio a la Disolucion 1 con jeringa con agitacion y la agitacion se continuo durante 1 hora. Los volatiles se evaporaron en vado.
Se anadio HCl acuoso concentrado (aproximadamente 2 mL) y la mezcla heterogenea se calento a 100°C durante 2 horas. Despues de enfriar hasta temperatura ambiente, el residuo se diluyo con agua (aproximadamente 10 mL) y se extrajo con diclorometano (3 veces aproximadamente 5 mL). Los extractos de diclorometano se concentraron en vado. El residuo se purifico por cromatograffa en gel de sflice (sistema Biotage, columna SNAP de 25 g) eluyendo con un gradiente de cHex/EtOAc de 95/5 a 0/100. Se recogieron fracciones con buena pureza, se trituraron con Et2O (2 veces aproximadamente 0,5 mL) y se secaron para proporcionar el compuesto del fftulo como un solido (40 mg)
Las fracciones que conteman producto pero menos puras (por TLC) se combinaron para proporcionar 0,14 g de material marron. Esto se purifico de nuevo por cromatograffa en gel de sflice (sistema Biotage, 95/5 a 40/60) y se dejo cristalizar de Et2O (aproximadamente 2 mL) y se lavo con algo de Et2O (2 veces aproximadamente 0,5 mL). Esto rindio despues de secar en vado una cantidad adicional del compuesto del fftulo (15 mg).
1H RMN (400 MHz, CDCla): 8 ppm 7,43 - 7,35 (2H, m), 7,28 - 7,24 (1H, m), 7,11 (2H, d), 6,75 - 6,69 (1H, m), 6,67 - 6,61 (2H, m), 5,59 - 5,66 (1H, br, s), 3,81 (3H, s), 1,61 -1,54 (6H, s); UPLC: 0,69 min, 325 [M-H]-
Ejemplo 23
3-{4-[(2,3-dimetilfenil)oxi]fenil)-5,5-dimetil-2,4-imidazolidindiona
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Se disolvio N1-{4-[(2,3-dimetilfenil)oxi]fenil}-2-metilalaninamida (Intermedio 76, 68 mg) en 2 mL de acetato de etilo bajo atmosfera de nitrogeno. Se anadio TEA (0,070 mL, 0,50 mmoles) seguido de una disolucion de trifosgeno (33,8 mg, 0,11 mmoles) en 1,0 mL de acetato de etilo. Despues de agitacion durante 5 minutos, se anadio DMAP (13,9 mg, 0,11 mmoles) y la mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente durante 10 minutos. Despues de parar con una disolucion saturada de NaHCO3, la mezcla se extrajo dos veces con acetato de etilo, y los organicos recogidos se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se evaporaron. El residuo obtenido se purifico por
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cromatograffa en gel de s^lice eluyendo con un gradiente cHex/EtOAc de 100/0 a 0/100. Esto rindio el compuesto del fftulo (74 mg).
1H-RMN (400 MHz, DMSO-cfe): 6 ppm 8,49 (1H, br. s), 7,38 - 7,28 (2H, m), 7,22 - 7,05 (2H, m), 6,99 - 6,87 (2H, m),
6,88 -6,81 (1H, m), 2,31 (3H, s), 2,10 (3H, s), 1,41 (6H, s); UPLC: 0,74 min, 325 [M+H]+.
Ejemplo 24
3-{6-[(2-etilfenil)oxi]-3-piridinil}-5,5-dimetil-2,4-imidazolidindiona
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En un matraz de fondo redondo de 50 mL se disolvio N1-{6-[(2-etilfenil)oxi]-3-piridinil}-2-metilalaninamida (Intermedio 78, 67,1 mg) en diclorometano (5 mL) para proporcionar una disolucion amarilla clara. La mezcla de reaccion se enfrio a 0°C. Se anadieron W,A/-dimetil-4-piridinamina (13,28 mg, 0,109 mmoles), trietilamina (0,076 mL, 0,544 mmoles) y trifosgeno (32.3 mg, 0,109 mmoles). La mezcla de reaccion se agito a 0°C. Despues de 20 minutos, la mezcla de reaccion se evaporo en vado para rendir un solido amarillo que se purifico por cromatograffa en gel de sflice (sistema Biotage, columna SNAP de 10g) eluyendo con un gradiente Ciclohexano/EtOAc de 2:1 a 1:3 en 20 VC; despues 1:3 durante 5 VC. Las fracciones recogidas dieron el compuesto del fftulo como un solido blanco (60,9 mg).
1H RMN (400 MHz, CDCla): 6 ppm 8,30 (1H, d), 7,78 (1H, dd), 7,33 - 7,39 (1H, m), 7,20 - 7,31 (2H, m), 7,06 - 7,12 (1H, m), 6,98 (1H, d), 6,25 (1H, br. s), 2,62 (2H, q), 1,58 (6H, s), 1,22 (3H, t); UPLC_B: 0,80 min, 326 [M+H]+.
Ejemplo 25
3-{6-[(2,6-dimetilfenil)oxi]-3-piridinil}-5,5-dimetil-2,4-imidazolidindiona
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En un matraz de fondo redondo de 50 mL se disolvio N1-{6-[(2,6-dimetilfenil)oxi]-3-piridinil)-2-metilalaninamida (Intermedio 80, 144,4 mg) en diclorometano (5 mL) para proporcionar una disolucion amarilla clara. La mezcla de reaccion se enfrio a 0°C. Se anadieron W,W-dimetil-4-piridinamina (27,7 mg, 0,227 mmoles), trietilamina (0,158 mL, 1,134 mmoles) y trifosgeno (67.3 mg, 0,227 mmoles). La mezcla de reaccion se agito a 0°C. Despues de 20 min, el disolvente se evaporo en vado para rendir un solido amarillo que se purifico mediante cromatograffa en gel de sflice (sistema Biotage, columna SNAP de 10g) usando como eluyente un gradiente Ciclohexano/EtOAc de 2:1 a 1:3 en 20 VC; despues 1:3 durante 5 VC. Las fracciones recogidas rindieron el compuesto del fftulo como un solido blanco (139,7 mg).
1H RMN (400 MHz, CDCla)): 6 ppm 8,30 - 8,26 (1H, m), 7,78 (1H, dd), 7,20 - 7,07 (3H, m), 6,94 (1H, d), 6,33 (1H, br. s), 2,17 (6H, s), 1,58 (6H, s): UPLC_s: 0,84 min, 326 [M+H]+.
Ejemplo 26
(5R)-5-(1-metiletil)-3-(4-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}fenil)-2,4-imidazolidindiona
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A una disolucion de N1-(4-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}fenil)-D-valinamida (Intermedio 83, 65 mg) en diclorometano seco (10 mL) se anadio tEa (0,138 mL, 0,990 mmoles) y la mezcla de reaccion se enfrio hasta 0°C. Se anadio lentamente una disolucion de trifosgeno (26,4 mg, 0,089 mmoles) en diclorometano seco (3 mL) y la mezcla de reaccion se agito durante 1 hora a 0°C. La reaccion se paro con agua (2 mL) y una disolucion acuosa saturada de cloruro de amonio (5 mL), y se extrajo con diclorometano (2 veces 10 mL). La capa organica se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se evaporo y el residuo se purifico por cromatograffa ultrarrapida en gel de sflice (sistema Biotage, columna SNAP de 10 g) usando como eluyente un gradiente de ciclohexano/acetato de etilo de 100/0 a 60/40 para rendir el compuesto del fftulo como un solido blanco (55 mg).
1H-RMN (400 MHz, DMSO-da) 8 ppm: 8,52 (1H, s), 7,29 (2H, m), 7,16 (1H, d), 7,05 (2H, m), 6,74 (1H, d), 6,52 (1H, dd), 4,13 (1H, dd), 3,77 (3H, s), 2,14 (4H, s), 1,02 (3H, d), 0,88 (3H, d); UPLC_B: 0,91 min, 355 [M+H]+.
Ejemplo 27
(5R)-5-metil-3-(2-{[3-(1-metiletil)fenil]oxi}-5-pirimidinil)-2,4-imidazolidindiona
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A una disolucion de W1-(2-{[3-(1-metiletil)fenil]oxi}-5-pirimidinil)-D-alaninamida (Intermedio 87, 100 mg) en diclorometano (30 mL) se anadieron trifosgeno (40 mg, 0,133 mmoles) y trietilamina (51 mg, 0,5 mmoles). La mezcla resultante se agito a 0°C durante 30 minutos y se anadio agua (30 mL). Se extrajo con diclorometano (3 veces 30 mL) y la capa organica combinada se seco sobre sulfato de sodio y se evaporo para rendir el compuesto del tttulo 10 (100 mg).
1HRMN (400 MHz, CDCla): 8 ppm 8,62 (2H, s), 7,26 - 7,30 (1H, t), 7,08 - 7,05 (2H, m), 6,99-6,92 (2H, m), 4,22 - 4,20 (1H, d), 2,88 -2,84 (1H, m), 1,47 - 1,45 (3H, d), 1,19 -1,18 (6H, d); MS_2 (ESI): 326 [M+H]+.
Ejemplo 28
(5R)-5-etil-3-(2-{[3-(etiloxi)-4-metilfenil]oxi}-5-pirimidinil)-2,4-imidazolidindiona
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A una disolucion de ((2R)-2-amino-W-(2-{[3-(etiloxi)-4-metilfenil]oxi}-5-pirimidinil)butanamida (Intermedio 94, 62 mg) en diclorometano seco (4 mL), se anadio TEA (158 pl, 1,13 mmoles) y la mezcla de reaccion se enfrio hasta 0°C. Se anadio gota a gota una disolucion de trifosgeno (25,2 mg, 0,085 mmoles) en diclorometano seco (2 mL) y la mezcla de reaccion se agito a 0°C durante 20 minutos. La mezcla de reaccion se evaporo en vado. El residuo obtenido se 20 purifico por cromatograffa en gel de sflice (sistema Companion, cartucho de sflice de 12g) con ciclohexano/EtOAc como eluyentes de 100/0 a 50/50 en 20 minutos y despues 50/50 durante 15 minutos para rendir el compuesto del tttulo como un solido blanco (40 mg).
1H RMN (400 MHz, CDCla): 8 ppm 8,68 (1H, s), 7,16 (1H, d), 6,82 -6,59 (2H, m), 6,29 (1H, s), 4,23 (1H, t), 4,12 (1H, q), 2,22 (3H, s), 2,04 (2H, s), 2,02 - 1,95 (1H, m), 1,96 - 1,80 (1H, m), 1,26 (3H, t), 1,06 (3H, t); UPLC: 0,72 min, 357 25 [M+H]+
Ejemplo 29
(5R)-5-(1,1-dimetiletil)-3-(6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)-2,4-imidazolidindiona
imagen200
imagen201
Se disolvio 3-metil-W1-(6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil}-D-valinamida (Intermedio 97, 5,2 mg) en
30 diclorometano seco (0,5 mL). La mezcla de reaccion se enfrio en un bano de hielo. Se anadio trietilamina (12,6 pl, 0,091 mmoles) a 0°C. Despues se anadieron gota a gota 0,5 mL de una disolucion de trifosgeno en diclorometano seco (2,47 mg, 0,0083 mmoles). La mezcla de reaccion se agito bajo argon durante 20 min a 0°C. Se anadio algo de agua y la capa acuosa se extrajo con diclorometano 4 veces. Despues de secar sobre sulfato de sodio, los disolventes se eliminaron en vado. El residuo obtenido se purifico por cromatograffa ultrarrapida en gel de sflice 35 (sistema Companion, cartucho de sflice de 4 g) con ciclohexano/acetato de etilo como eluyentes de 100/0 a 60/40 durante 15 min y 60/40 durante 10 min. Esto rindio el compuesto del tttulo (5,9 mg).
1H RMN (400 MHz, CDCh): 8 ppm 8,24 (1H, d), 7,69 (1H, dd), 7,17 (1H, d), 7,00 (1H,d), 6,66 (2H, m), 6,46 (1H, br s),
3,89 (1H, s), 3,82 (3H, s), 2,23 (3H, s),1,13 (9H, s); UPLC_ipqc: 1,11 min, 370 [M+H]+
(5R)-5-etil-5-metil-3-(6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)-2,4-imidazolidindiona
imagen202
A una solucion de N1-(6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)-D-isovalinamida (Intermedio 99, 42 mg) en 5 diclorometano seco (6 mL), se anadio TEA (0,089 mL, 0,638 mmoles). La mezcla se enfrio a 0°C y se anadio gota a gota una disolucion de trifosgeno (17,03 mg, 0,057 mmoles) en diclorometano seco (1,500 mL). La mezcla se agito a esa temperatura durante 1 hora, despues se anadio gota a gota otra vez una disolucion de trifosgeno (17,03 mg, 0,057 mmoles) en diclorometano seco (DCM) (1,500 mL). La reaccion se agito durante 30 minutos, se mantuvo en el bano de hielo y se paro con agua (10 mL). Se dejo que la mezcla alcanzara la temperatura ambiente y despues se 10 extrajo con diclorometano (3x7 mL). Las capas organicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se evaporaron. El residuo obtenido se purifico por cromatograffa ultrarrapida en gel de sflice usando una columna SNAP de 10 g y ciclohexano/acetato de etilo de 80/20 a 50/50 como eluyentes (sistema Biotage). Esto rindio el compuesto del tftulo como un solido blanco (24 mg).
1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 8 ppm 8,57 (1H, s), 8,13 (1H, d), 7,83 (1H, dd), 7,17 (1H, d), 7,07 (1H, d), 6,79 (1H, 15 d), 6,62 (1H, dd), 3,76 (3H, s), 2,14 (3H, s), 1,57-1,86 (2H, m), 1,39 (3H, s), 0,86 (3H, t); UPLC_B: 0,83 min, 354 [M-
H]+.
Ejemplo 31
7-(6-([4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)-5,7-diazaespiro[3.4]octano-6,8-diona
imagen203
20 A una disolucion de 1-amino-N-(6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)ciclobutanocarboxamida (Intermedio 102, 60 mg) en diclorometano seco (2 mL) se anadio TEA (0,128 mL, 0,916 mmoles). La mezcla de reaccion se enfrio en un bano de hielo, despues se anadio gota a gota una solucion de trifosgeno (24,47 mg, 0,082 mmoles) en diclorometano seco (0,500 mL). La mezcla se agito a 0°C durante 30 minutos. La reaccion se mantuvo a 0°C y se paro con agua (10 mL). La mezcla se extrajo con diclorometano (3x4 mL). Las capas organicas combinadas se 25 secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se evaporaron. El residuo se purifico por cromatograffa ultrarrapida en gel de sflice usando una columna SNAP de 25 g y usando como eluyentes ciclohexano/acetato de etilo de 100:0 a 50:50. Esto rindio el compuesto del tftulo (52 mg) como un solido blanco.
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 8 ppm 8,96 (1H, s), 8,14 (1H, d), 7,84 (1H, dd), 7,17 (1H, d), 7,08 (1H, d), 6,79 (1H, d), 6,63 (1H, dd), 3,77 (3H, s), 2,61 -2,72 (2H, m), 2,42 -2,26 (3H, m), 2,15 (3 H, s), 1,82 -2,02 (1H, m); UPLC: 0,72 30 min, 354 [M+H]+.
Ejemplo 32
6-(6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)-4,6-diazaespiro[2.4]heptano-5,7-diona
imagen204
A una disolucion de 1-amino-N-(6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)ciclopropanocarboxamida (Intermedio 105,
35 58 mg) en diclorometano seco (2 mL) se anadio TEA (0,129 mL, 0,925 mmoles). La mezcla de reaccion se enfrio en
un bano de hielo, despues se anadio gota a gota una disolucion de trifosgeno (24,72 mg, 0,083 mmoles) en diclorometano seco (0,500 mL). La mezcla de reaccion se agito a 0°C durante 30 minutos, despues se anadio de nuevo la disolucion de trifosgeno (24,72 mg, 0,083 mmoles) en diclorometano seco (0,500 mL). La mezcla de reaccion se agito a 0°C durante 30 minutos. La reaccion se mantuvo en el bano de hielo y se paro con agua (10 mL).
40 La capa organica se separo, se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se evaporo. El residuo se purifico por cromatograffa ultrarrapida en gel de sflice usando una columna SNAP de 25 g y ciclohexano/acetato de etilo como eluyentes de 100:0 a 50:50. Esto rindio el compuesto del tftulo como un solido blanco (20 mg).
1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 8 ppm 8,71 (1H, s), 8,18 (1H, d), 7,88 (1H, dd), 7,18 (1H, d), 7,09 (1H, d), 6,79 (1H, d), 6,64 (1H, dd), 3,77 (3H, s), 2,15 (3H, s), 1,20 - 1,47 (4H, m) ; UPLC: 0,68 min, 340 [M+H]+.
Ejemplo 33
5,5-dimetil-3-(6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)-2,4-imidazolidindiona 5
Ejemplo 34
(5R)-5-(1-metiletil)-3-(6-{[4-metil-3-(metiloxi)feml]oxi}-3-pindiml)-2,4-imidazolidmdiona
imagen205
Ejemplo 35
10 3-(6-{[2-(1,1-dimetiletil)fenil]oxi}-3-piridinil)-5,5-dimetil-2,4-imidazolidindiona
imagen206
Ejemplo 36
3-(2-{[2-(1,1-dimetiletil)fenil]oxi)-5-pirimidinil)-5,5-dimetil-2,4-imidazolidindiona
imagen207
15 Ejemplo 37
(5R)-5-etil-5-metil-3-(2-{[4-metil-3-(metiloxi)feml]oxi)-5-pinmidiml)-2,4-imidazolidmdiona
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Ejemplo 38
(5R)-5-etil-3-(2-{[3-(etiloxi)-4-metilfenil]oxi}-5-pirimidinil)-5-metil-2,4-imidazolidindiona
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imagen210
4-{[5-(4,4-dimetil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil)-2-piridinil]oxi}-2-(1-metiletil)benzonitrilo
imagen211
Se disolvio 4-hidroxi-2-(1-metiletil)benzonitrilo (30 mg) en 1 mL de dimetilformamida. Se anadieron 3-(6-fluoro-3- 5 piridinil)-5,5-dimetil-2,4-imidazolidindiona (Intermedio 106, 41,5 mg) y carbonato de potasio (51,4 mg, 0,372 mmoles). La mezcla de reaccion se agito a 120°C durante 40 horas. Se anadio algo de dietileter (4 mL) y agua (4 mL). La capa acuosa se extrajo 4 veces con dietileter. Las capas organicas reunidas se secaron sobre sulfato de sodio y se evaporaron proporcionando un residuo que se purifico por purificacion dirigida a masa (METODO H). Despues de evaporar la fraccion, adicion de una disolucion de NaHCO3 saturado (3 mL) y extraccion con 10 diclorometano (cuatro veces 4 mL), evaporacion rindio el compuesto del tftulo (13 mg).
1H RMN (400 MHz, CDCls): 8 ppm 8,32 (1H,d), 7,88 (1H, dd), 7,66 (1H, d), 7,17 (1H, dd), 7,08 (2H, m); 5,57 (s, 1H), 3,40 (1H, m), 1,57 (6H, s), 1,33 (6H, d); UPLC_ipqc: 1,01 min, 365 [M+H]+.
Ejemplo 40
5,5-dimetil-3-[6-({3-[trifluorometil)oxi]fenil}oxi)-3-piridinil]-2,4-imidazolidindiona
15
Se disolvio 3-[(trifluorometil)oxi]fenol (19,95 mg, 0,112 mmoles) en 1 mL de dimetilformamida. Se anadieron 3-(6- fluoro-3-piridinil)-5,5-dimetil-2,4-imidazolidindiona (Intermedio 106, 25 mg) y carbonato de potasio (31,0 mg, 0,224 mmoles). La mezcla de reaccion se agito a 120°C durante 22 horas. Se anadio algo de dietileter (4 mL) y agua (4 mL). La capa acuosa se extrajo 4 veces con dietileter. Las capas organicas reunidas se secaron sobre sulfato de 20 sodio y se evaporaron proporcionando un residuo que se purifico por purificacion dirigida a masa (METODO I). Despues de evaporar la fraccion, adicion de una disolucion de NaHCO3 saturado (3 mL) y extraccion con diclorometano (cuatro veces 4 mL), la evaporacion rindio el compuesto del tftulo como un solido blanco (23 mg).
1H RMN (400 MHz, CDCla): 8 ppm 8,30 (1 H,d), 7,83 (1H, dd), 7,42 (1 H, t), 7,06 (4H, m), 6,36 (s br, 1H), 1,55 (6H, s); UPLC_ipqc: 1,01 min, 382 [M+H]+
25 Ejemplo 41
3-{6-[(4-fluoro-3-metilfenil)oxi]-3-piridinil}-5,5-dimetil-2,4-imidazolidindiona
imagen212
El compuesto del tftulo se preparo de una forma similar a la preparacion del Ejemplo 39 reemplazando 4-hidroxi-2- (1-metiletil)benzonitrilo con 4-fluoro-3-metilfenol (11,30 mg, 0,090 mmoles)). Para la purificacion dirigida a masa se 30 uso el METODO J (en lugar del METODO H). Esto rindio el compuesto del tftulo como un solido blanco (17 mg).
1H RMN (400 MHz, CDCh): 8 ppm 8,26 (1H,d), 7,77 (1H, dd), 7,03-6,92 (4H, m), 5,50 (1H, s br), 2,29 (3H, s), 1,57 (6H, s); UPLC_ipqc: 0,96 min, 330 [M+H]+.
Ejemplo 42
imagen213
3-{6-[(4-fluoro-2-metilfenil)oxi]-3-piridinil}-5,5-dimetil-2,4-imidazolidindiona
imagen214
5
10
15
20
25
El compuesto del titulo se preparo de una forma similar a la preparacion del Ejemplo 40 reemplazando 3- [(trifluorometil)oxi]fenol con 4-fluoro-2-metilfenol (14,13 mg, 0,112 mmoles) para rendir el compuesto del tftulo como un solido blanco (13 mg).
1H RMN (400 MHz, CDCl3): 8 ppm 8,26 (1H,d), 7,77 (1H, dd), 7,03-6,93 (4H, m), 5,50 (1H, s br), 2,29 (3H, s), 1,57 (6H, s); UPLC_ipqc: 0,94 min, 330 [M+H]+.
Ejemplo 43
4-{[5-(4,4-dimetil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil)-2-piridinil]oxi}-3-etilbenzonitrilo
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Se disolvio 3-etil-4-hidroxibenzonitrilo (Intermedio 115, 70 mg) en 2 mL de dimetilformamida. Se anadieron 3-(6- fluoro-3-piridinil)-5,5-dimetil-2,4-imidazolidindiona (Intermedio 106, 102 mg) y carbonato de potasio (126 mg, 0,915 mmoles). La mezcla de reaccion se agito a 120°C durante 96 horas. Se anadio algo de dietil eter (4 mL) y agua (4 mL). La capa acuosa se extrajo 4 veces con dietil eter. Las capas organicas reunidas se secaron sobre sulfato de sodio y se evaporaron proporcionando un residuo que se purifico por cromatograffa ultrarrapida en gel de silice (sistema Companion, cartucho de Si de 12 g) usando como eluyente un gradiente ciclohexano/acetato de etilo 100/0, despues de 100/0 a 55/45. La evaporacion rindio el compuesto del tftulo (54 mg) como un solido blanco.
1H RMN (400 MHz, CDCla): 8 ppm 8,27 (1H,d), 7,87 (1H, dd), 7,62 (1H, d), 7,55 (1H, dd), 7,16 (1H, dd); 6,40 (1H, s), 5,58 (1H, s), 2,65 (2H, q), 1,56 (6H, s),1,21 (3H, t); UPLC_ipqc: 0,97 min, 349 [M-H]-.
Los compuestos siguientes se prepararon usando la metodologfa anterior, haciendo reaccionar 3-(6-fluoro-3- piridinil)-5,5-dimetil-2,4-imidazolidindiona (Intermedio 106) con el fenol sustituido apropiadamente durante un tiempo que vario de 12 a 96 hrs, como se describe en los Esquemas de Reaccion anteriores. Algunos productos finales se purificaron por cromatograffa ultrarrapida (cartucho de sflice o NH; Ciclohexano/EtOAc u otro sistema de disolvente apropiado) y se aislaron como la base libre; alternativamente, algunos productos se purificaron por purificacion dirigida a masa (METODO K condiciones cromatograficas acidas: Columna= Waters Sunfire OBD (150mm x 30mm, tamano de partfcula de 5pm) a temperatura ambiente; Fase movil= A (agua + acido formico al 0,1% en agua), B (acetonitrilo+ acido formico al 0,1% en acetonitrilo); Caudal= 40 mL/min; Gradiente= de 1% (B) a 100% (B) en 8,5 min,100% (B) durante 6,5 min, vuelta a 1% (B) en 0,5 min) y las fracciones que conteman el producto se basificaron con NaHCO3 y se extrajeron con un disolvente organico apropiado, se secaron y se concentraron para proporcionar la base libre. Finalmente, en un caso (Ejemplo 77) se opero una purificacion adicional por SCX (dCm y MeOH como disolventes).
Ej.
Estructura Nombre Fenol Caracterizacion por RMN Caracterizacion por UPLC_ipqc
44
JJ XXJ n'-" i 1 ,NH Cl O / N 2-cloro-4-{[5-(4,4- dimetil-2,5-dioxo-1- imidazolidinil)-2- piridinil]oxi} benzonitrilo 2-cloro-4- hidroxibenzonitrilo 1H RMN (400 MHz, CDCl3): 8 ppm 8,35 (1H, d), 7,92 (1H, dd), 7,71 (1H, d), 7,38 (1H, d), 7,21 (1H, dd); 7,14 (1H, d), 5,58 (s, 1H), 1,59 (6H, s) 1,94 min, 357 [M+H]+
45
F 1 1 NH X° 0'-H- F F J i 5,5-dimetil-3-[6-({4- metil-3- [(trifluorometil)oxi] fenil}oxi)-3-piridinil]- 2,4-imidazolidindiona 4-metil-3- [(trifluorometil)oxi] fenol (Intermedio 116) 1H RMN (400 MHz, CDCl3): 8 ppm 8,28 (1H, d), 7,80 (1H, dd), 7,23 - 7,34 (1H, m), 7,00 - 7,09 (2H, m), 6,19 (1H, br. s.), 2,32 (3H, s), 1,56 (6H, s) 1,13 min, 396 [M+H]+.
Ej.
Estructura Nombre Fenol CaracterizaciOn por RMN CaracterizaciOn por UPLC_ipqc
46
O —N I 1 J 0 O O N 4-{[5-(4,4-dimetil-2,5- dioxo-1- imidazolidinil)-2- piridinil]oxi}-2- (metiloxi)benzonitrilo 4-hidroxi-2- (metiloxi) benzonitrilo 1H RMN (400 MHz, CDCla): 8 ppm 8,33 (1H, d) 7,88 (1H, dd) 7,58 (1H, d) 7,10 (1H, d) 6,76 - 6,83 (2H, m) 5,92 (1H, br. s.) 3,92 (3H, s) 1,58 (6H, s) 0,86 min, 353 [M+H]+
47
'jf"y ,9 4-{[5-(4,4-dimetil-2,5- dioxo-1-imidazolidinil- 2-piridinil]oxi}-3- metilbenzonitrilo 4-hidroxi-3- metilbenzonitrilo (Intermedio 118) 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 8 ppm 8,66 (1H, s), 8,11 - 8,19 (1H, m), 7,91 - 8,00 (1H, m), 7,87 (1H, s), 7,76 (1H, d), 7,29 (2H, t), 2,17 (3H, s), 1,41 (6H, s) 0,89 min, 337 [M+H]+, 335 [M-H]-
Ejemplo 48
4-{[5-(4,4-dimetil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil)-2-piridinil]oxi}-3-(trifluorometM)benzonitrMo
imagen216
5 Una disolucion de ™-{[(6-{[4-ciano-2-(trifluorometil)feml]oxi}-3-piridiml)ammo]carboml}-2-metilalamnato de metilo (Intermedio 165, 49 mg) en MeOH (10 mL) se calento a reflujo durante 10 min. Se anadiO metOxido de sodio (4 mg) a la mezcla de reacciOn caliente y se dejO con reflujo durante 2,5 horas. El disolvente se evaporO a sequedad y el residuo obtenido se purificO por cromatograffa ultrarrapida (sistema companion, cartucho de Si de 12 g), con ciclohexano/EtOAc como eluyentes de 70/30 a 50/50, para proporcionar dos lotes. El segundo lote se purificO de 10 nuevo por purificaciOn dirigida a masa (METODO K), dando lugar al compuesto deseado que se reuniO con el primer lote, para rendir el compuesto del tttulo como un sOlido blanco (8,2 mg).
1H RMN (400 MHz, CDCla): 8 ppm 8,30 (1H, d), 8,02 (1H, s), 7,90 - 7,99 (1H, m), 7,87 (1H, d), 7,46 (1H, d), 7,21 (1H, d), 5,68 (1H, br. s.), 1,59 (6H, s); UPLC_ipqc: 0,98 min, 391 [M+H]+.
Los compuestos siguientes se prepararon usando la metodologfa anterior, reemplazando W-{[(6-{[4-ciano-2- 15 (trifluorometil)fenil]oxi}-3-piridinil)amino]carbonil}-2-metilalaninato de metilo (Intermedio 165) con la urea apropiada, como se describe en los Esquemas de ReacciOn anteriores. Los productos finales se purificaron por cromatograffa ultrarrapida (cartucho de silice; Ciclohexano/EtOAc u otro sistema de disolvente apropiado) y se aislaron como la base libre.
Ej.
Estructura Nombre Urea CaracterizaciOn por RMN CaracterizaciOn por UPLC_ipqc
49
OTij j 1 NH 4-{[5-(4,4-dimetil- 2,5-dioxo-1- imidazolidinil)-2- piridinil]oxi}-2- etilbenzonitrilo N-[({6-[(4-ciano-3- etilfenil)oxi]-3- piridinil}amino) carbonil]-2- metilalaninato de metilo (Intermedio 166) 1H RMN (400 MHz, CDCl3): 8 ppm 8,32 (1H, d), 7,84 - 7,90 (1H, m), 7,65 (1H, d), 7,04 - 7,16 (3H, m), 5,49 (1H, s), 2,90 (2H, q), 1,57 - 1,59 (6H, s), 1,32 (3H, t) 0,97 min, 351 [M+H]+.
5
10
15
20
25
Ej.
Estructura Nombre Urea Caracterizacion por RMN Caracterizacion por UPLC_ipqc
50
xTrx j N-': F 1 I »« F 4-{[5-(4,4-dimetil- 2,5-dioxo-1- imidazolidinil)-2- piridinil]oxi}-2- [(trifluorometil)oxi] benzonitrilo N-({[6-({4-ciano-3- [(trifluorometil)oxi] fenil}oxi)-3-piridinil] amino}carbonil)-2- metilalaninato de metilo (Intermedio 167) 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 8 ppm 8,66 (1H, s), 8,21 - 8,28 (1H, m), 8,13 (1H, d), 7,97 - 8,05 (1H, m), 7,64 (1H, s), 7,41 - 7,49 (1H, m), 7,35 (1H, d), 1,41 (6H, s) 1,01 min, 407 [M+H]+, 405 [M-H]-.
Ejemplo 51
4-([5-(4,4-dimetil-2,5-dioxo-1-imidazolidinM)-2-pirimidinil]oxi}-2-etilbenzonitrMo
imagen217
A una disolucion de trifosgeno (20,8 mg, 0,07 mmoles) en EtOAc (0,5 mL) a 0°C, se anadio una disolucion de 4-[(5- amino-2-pirimidinil)oxi]-2-etilbenzonitrilo (Intermedio 144, 35 mg) / TEA (0,037 mL, 0,27 mmoles) en EtOAc (1,0 mL) gota a gota con agitacion. Despues, se anadio lentamente una disolucion de hidrocloruro de 2-metilalaninato de metilo (Intermedio 107, 33,6 mg) / TEA (0,073 mL, 0,52 mmoles) en 1.0 mL de EtOAc a 0°C y la mezcla de reaccion se agito a esta temperatura durante 10 minutos. La mezcla se paro con una disolucion acuosa de tampon pH 3 a pH
5-6 y se extrajo con EtOAc (tres veces). Las capas organicas recogidas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se evaporaron. El crudo obtenido se disolvio en MeOH (1,0 mL) y se anadieron 3,0 mg (0,056 mmoles) de metoxido de sodio y la mezcla se calento a 60°C durante 5 minutos. Despues de enfriar hasta r.t., la mezcla se evaporo, se diluyo con EtOAc y se lavo con NH4Cl (disolucion acuosa saturada) y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (tres veces). Las capas organicas recogidas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se evaporaron. El crudo obtenido se cargo en una columna de gel de sflice y se eluyo con ciclohexano/EtOAc (de 70:30 ciclohexano/EtOAc a 60:40 en 20 VC, plato a 60:40 en 20 VC) rindiendo 11,5 mg del compuesto del tttulo.
1H-RMN (400 MHz, CDCla): 8 ppm 8,77 (2H, br. s), 7,69 (1H, d), 7,21 (1 H, br. s), 7,16 (1H, d), 5,89 (1H, br. s), 2,91 (2H, q), 1,60 (6H, s), 1,33 (3H, t); UPLC_ipqc: 0,92 min, 352 [M+H]+.
Los compuestos siguientes se prepararon usando la metodologfa anterior, reemplazando 4-[(5-amino-2- pirimidinil)oxi]-2-etilbenzonitrilo (Intermedio 144) con la anilina apropiada, como se describe en los Esquemas de Reaccion anteriores. Los productos finales se purificaron por cromatograffa ultrarrapida (cartucho de sflice o NH; ciclohexano/EtOAc, diclorometano/metanol u otro sistema de disolvente apropiado); alternativamente, algunos productos se purificaron por purificacion dirigida a masa y las fracciones que conteman el producto se basificaron con NaHCO3 y se extrajeron con un disolvente organico apropiado, se secaron y se concentraron para proporcionar el producto deseado.
Ej.
Estructura Nombre Anilina Caracterizacion por RMN Caracterizacion por UPLC_ipqc
52
f |T T n ° 3-ciclopropil-4- {[5-(4,4-dimetil- 2,5-dioxo-1- imidazolidinil)-2- piridinil]oxi} benzonitrilo 4-[(5-amino-2- piridinil)oxi]-3- ciclopropilbenzonitrilo (Intermedio 145) 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 8 ppm 8.65 (1H, br. s), 8,16 (1H, br. s), 7,99 - 7,91 (1 H, m), 7,73 - 7.66 (1H, m), 7,52 (1H, br. s), 7,29 (2H, d), 1,97 - 1,86 (1H, m), 1,41 (6H, s), 0,91 - 0,83 (2H, m), 0,80 - 0,74 (2H, m) 0,97 min, 363 [M+H]+
Ej.
Estructura Nombre Anilina Caracterizacion por RMN Caracterizacion por UPLC_ipqc
53
rr°r> © ncJU»Aj(n ^ oH- 4-5-{[4,4-dimetil- 2,5-dioxo-1- imidazolidinil)-2- piridinil]oxi}-3- (1,1-dimetiletil) benzonitrilo 4-[(5-amino-2- piridinil)oxi]-3-(1,1- dimetiletil)benzonitrilo (Intermedio 146) 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 8 ppm 8,66 (1H, br. s), 8,25 - 8,19 (1H, m), 8,02 - 7,95 (1H, m), 7,83 (1H, br. s), 7,76 - 7,70 (1H, m), 7,31 (1H, d), 7,19 (1H, d), 1,42 (6H, s), 1,36 (9H, m) 1,08 min, 379 [M+H]+
54
\Cr°ri ? yr N V> k o / - 2- [(ciclopropilmetil) oxi]-4-{[5-(4,4- dimetil-2,5-dioxo- 1 -imidazolidinil)- 2-piridinil]oxi} benzonitrilo 4-[(5-amino-2- piridinil)oxi]-2- [(ciclopropilmetil)oxi] benzonitrilo (Intermedio 151) 1H RMN (400 MHz, CDCh): 8 ppm 8,32 (1H, d), 7,86 (1H, dd), 7,58 (1H, d), 7,09 (1H, d), 6,74 - 6,79 (2H, m), 6,00 (1H, br. s.), 3,91 (2H, d), 1,58 (6H, s), 1,29 - 1,39 (1H, m), 0,63 - 0,72 (2H, m), 0,36 - 0,44 (2H, m) 1,01 min, 393 [M+H]+
55
JO 12,1 r - n> > i . ° / 4-{[5-(4,4-dimetil- 2,5-dioxo-1- imidazolidinil)-2- piridinil]oxi}-2- (etiloxi) benzonitrilo 4-[(5-amino-2- piridinil)oxi]-2- (etiloxi)benzonitrilo (Intermedio 152) 1H RMN (400 MHz, CDCh): 8 ppm 8,32 (1H, dd), 7,87 (1H, dd), 7,58 (1H, d), 7,09 (1H, d), 6,74 - 6,80 (2H, m), 5,88 (1H, br. s.), 4,12 (2H, q), 1,58 (6H, s), 1,49 (3H, t) 0,93 min, 367 [M+H]+
56
-to 2-ciclopropil-4- {[5-(4,4-dimetil- 2,5-dioxo-1- imidazolidinil)-2- piridinil]oxi} benzonitrilo 4-[(5-amino-2- piridinil)oxi]-2- ciclopropilbenzonitrilo (Intermedio 153) 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 8 ppm 8,64 (1H, s), 8,22 (1H, d), 7,96 (1 H, dd), 7,82 (1 H, d), 7,25 (1H, d), 7,13 (1H, dd), 6,93 (1H, d), 2,16 - 2,26 (1H, m), 1,43 (6H, s), 1,09 - 1,18 (2 H, m), 0,86 (2 H, dd) 0,98 min, 363 [M+H]+
57
J j-Xa 'Y- oH" F 5,5-dimetil-3-[2- ({4-metil-3- [(trifluorometil) oxi]fenil}oxi)-5- pirimidinil]-2,4- imidazolidindiona 2-({4-metil-3- [(trifluorometil)oxi] fenil}oxi)-5- pirimidinamina (Intermedio 164) 'H-RMN (400 MHz, CDCh): 8 ppm 8,76 (2H, s), 7,33 (1H, d), 7.12 - 7,16 (1H, m), 7.12 (1H, dd), 4,68 (1H, br. s.), 2,36 (3H, s), 1,61 (6H, s). 1,08 min, 397 [M+H]+.
58
As/°v/ny ■N' ^ oH 4-{[5-(4,4-dimetil- 2,5-dioxo-1- imidazolidinil)-2- pirimidinil]oxi}-3- (1,1-dimetiletil) benzonitrilo 4-[(5-amino-2- pirimidinil)oxi]-3-(1,1- dimetiletil)benzonitrilo (Intermedio 163) 1H-RMN (400 MHz, DMSO-cfe): 8 ppm 8,80 (2H, s) 7,79 (1H, d) 7,58 (1H, dd) 7,16 (1H, d) 5,59 (1 H, br. s.) 1,62 (6H, s) 1,03 min, 380 [M+H]+.
5
10
15
20
25
Ej.
Estructura Nombre Anilina Caracterizacion por RMN Caracterizacion por UPLC_ipqc
1,41 (9H, s)
59
V 4-{[5-(4,4-dimetil- 2,5-dioxo-1- imidazolidinil)-2- piridinil]oxi}-2-[(1- metiletil)oxi] benzonitrilo 4-[(5-amino-2- piridinil)oxi]-2-[(1- metiletil)oxi] benzonitrilo (Intermedio 156) 'H-RMN (400 MHz, DMSO-cfe): 8 ppm 8,66 (1H, s), 8,23 (1H, d), 7,96 (1H, dd), 7,76 (1 H, d), 7,27 (1 H, d), 7,16 (1 H, d), 6,83 (1H, dd), 4,74 - 4,85 (1H, m), I, 42 (6H, s), 1,31 (6H, d) 0,98 min, 381 [M+H]+
Ejemplo 60
4-({5-[(4R)-4-etil-4-metil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil]-2-piridinil]oxi)-2-[(1 -metMetM)oxi]benzonitrMo
imagen218
En un matraz de fondo redondo de 2 bocas, se disolvio carbonato de bis(triclorometilo) (174,5 mg, 0,59 mmoles) en DCM (10 mL). Se anadio a esto N,N-dietiletanamina (0,651 mL, 3,74 mmoles). La disolucion obtenida se enfrio hasta 0°C. En un vial separado, se disolvio 4-[(5-amino-2-piridinil)oxi]-2-[(1 -metiletil)oxi]benzonitrilo (Intermedio 156, 145,4 mg) en DCM (10 mL). La disolucion obtenida se anadio gota a gota en 5 min a la disolucion enfriada de carbonato de bis(triclorometilo). Al final de la adicion, a 0°C, habiendo comprobado que el 4-[(5-amino-2-piridinil)oxi]-2-[(1 - metiletil)oxi]benzonitrilo habfa desaparecido completamente, se anadio una disolucion en DCM (5 mL) de N,N- dietiletanamina (0,280 mL, 1,60 mmoles) y cloruro de (2R)-2-metil-1-(metiloxi)-1-oxo-2-butanaminio (Tetrahedron 1988, 44(15), 4793-6, 179.2 mg, 1,07 mmoles) a la mezcla de reaccion y se agito durante 25 min. La mezcla de reaccion se paro con 10 mL de agua, se diluyo con 50 mL de DCM, y se acidifico hasta pH ~5-6 usando una disolucion acuosa de tampon pH 3. Las fases se separaron. La capa organica se lavo con 15 mL de salmuera, se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se evaporo en vado para obtener una espuma blanca. Esta espuma se disolvio en 8 mL de metanol y se anadio metoxido de sodio (17,3 mg, 0,32 mmoles) a la mezcla de reaccion. El vial se sello y se agito en PLS a 60°C. Despues de 15 min, se anadio mas metoxido de sodio (17,3 mg, 0,32 mmoles) por partes a la mezcla de reaccion y se agito hasta 1,5 hr. La mezcla de reaccion se evaporo en vado usando un aparato biotage V10 para obtener un solido amarillo claro. Este crudo se purifico por Biotage SP1 (Sflice; de 100:0 a 50:50 ciclohexano/EtOAc en 10 VC) para proporcionar el compuesto del tftulo (116,5 mg).
1H RMN (400 MHz, CDCh) 8 ppm 8,30 (1H, d), 7,84 (1H, dd), 7,56 (1H, d), 7,08 (1H, d), 6,78 (1H, d), 6,75 (1H, dd), 6,10 (1H, br. s.), 4,49 - 4,69 (1H, m), 1,91 - 2,04 (1H, m), 1,71 - 1,83 (1H, m), 1,55 (3H, s), 1,41 (3H, s), 1,40 (3H, s), 0,98 (3H, t); UPLC_ipqc: 1,03 min, 395 [M+H]+.
Los compuestos siguientes se prepararon usando la metodologfa anterior, reemplazando 4-[(5-amino-2-piridinil)oxi]- 2-[(1-metiletil)oxi]benzonitrilo (Intermedio 156) con la anilina apropiada, como se describe en los Esquemas de Reaccion anteriores.
Ej.
Estructura Nombre Anilina Caracterizacion RMN por Caracterizacion por UPLC_ipqc
61
"vV, -Ov0'' • 3-ciclopropil-4-({5- [(4R)-4-etil-4-metil- 2,5-dioxo-1- imidazolidinil]-2- piridinil}oxi)benzoni trilo 4-[(5-amino-2- piridinil)oxi]-3- ciclopropilbenzonitrilo (Intermedio 145) 1H RMN (400 MHz, CDCla) 8 ppm 8,27 (1H, d), 7,85 (1H, dd), 7,52 (1H, dd), 7,30 (1H, d), 7,17 (1H, d), 7,11 (1H, d), 5,41 (1H, br. s.), 1,95 - 2,07 (2H, m), 1,73 - 1,84 (1H, m), 1,57 1,02 min, 377 [M+H]+.
Ej.
Estructura Nombre Anilina Caracterizacion por RMN Caracterizacion por UPLC_ipqc
(3H, s), 1,00 (3H, t), 0,92 - 0,98 (2H, m), 0,68 -0,75 (2H, m)
62
O 'J— N f % x (i 1' N 0 -p r F 4-({5-[(4R)-4-etil-4- metil-2,5-dioxo-1- imidazolidinil]-2- piridinil}oxi)-2- [(trifluorometil)oxi] benzonitrilo 4-[(5-amino-2- piridinil)oxi]-2- [(trifluorometil)oxi] benzonitrilo (Intermedio 161) 1H RMN (400 MHz, CDCh) 8 ppm 8,34 (1H, d), 7,92 (1H, dd), 7,75 (1H, d), 7,29 - 7,32 (1H, m), 7,25 (1H, dd), 7,16 (1H, d), 5,49 (1H, br. s.), 1,96 - 2,08 (1H, m), 1,74 - 1,85 (1H, m), 1,58 (3H, s), 1,01 (3H, t) 1,06 min, 421 [M+H]+.
63
ir'Y0r^] N^' n An ,, «' I iM-' la o' V 2-ciclopropil-({5- [(4R)-4-etil-4-metil- 2,5-dioxo-1- imidazolidinil]-2- piridinil}oxi) benzonitrilo 4-[(5-amino-2- piridinil)oxi]-2- ciclopropilbenzonitrilo (Intermedio 153) 1H RMN (400 MHz, CDCh) 8 ppm 8,29 (1H, dd), 7,84 (1H, dd), 7,64 (1H, d), 7,08 (1H, d), 7,02 (1H, dd), 6,75 (1H, d), 5,47 (1H, br. s.), 2,28 - 2,37 (1H, m), 1,96 - 2,07 (1H, m), 1,73 - 1,84 (1H, m), 1,57 (3H, s), 1,14 - 1,21 (2H, m), 1,00 (3H, t), 0,79 - 0,85 (2H, m) 1,02 min, 377 [M+H]+.
64
°'V- N ^ F V5"',l ,1 XJl x J o P / 0 ^ 0 N F (5R)-5-etil-5-metil- 3-[2-({4-metil-3- [(trifluorometil)oxi]f enil}oxi)-5- pirimidinil]-2,4- imidazolidindiona 2-({4-metil-3- [(trifluorometil)oxi]feni l}oxi)-5- pirimidinamina (Intermedio 164) 1H RMN (400 MHz, CDCh) 8 ppm 8,73 (2H, s), 7,32 (1H, d), 7,12 - 7,16 (1H, m), 7,11 (1H, dd), 5,51 (1H, br. s.), 2,35 (3H, s), 1,95 - 2,07 (1H, m), 1,74 - 1,85 (1H, m), 1,00 (3H, t) 1,12 min, 411 [M+H]+.
65
O. H TV. 9^7'’- ' 3-(1,1-dimetMetM)-4- ({5-[(4R)-4-etil-4- metil-2,5-dioxo-1- imidazolidinil]-2- pirimidinil}oxi) benzonitrilo 4-[(5-amino-2- pirimidinil)oxi]-3-(1,1- dimetiletil)benzonitrilo (Intermedio 163) 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 8 ppm 8,78 (2H, s), 8,74 (1H, br. s.), 7,86 (1H, d), 7,78 (1H, dd), 7,41 (1H, d), 1,74 - 1,86 (1H, m), 1,62 - 1,74 (1H, m), 1,41 (3H, s), 1,33 (9H, s), 0,88 (3H, t) 1,08 min, 394 [M+H]+.
66
0. H ••:. : V j 0 N A- 3-(1,1-dimetiletil)-4- ({5-[(4R)-etil-4- metil-2,5-dioxo-1- imidazolidinil]-2- piridinil}oxi) benzonitrilo 4-[(5-amino-2- piridinil)oxi]-3-(1,1- dimetiletil)benzonitrilo (Intermedio 146) 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 8 ppm 8,62 (1H, s), 8,21 (1H, d), 7,96 (1H, dd), 7,84 (1H, d), 7.74 (1H, dd), 7,31 (1H, d), 7,21 (1H, d), 1.74 - 1,86 (1H, m), 1,13 min, 393 [M+H]+.
Ej.
Estructura Nombre Anilina Caracterizacion por RMN Caracterizacion por UPLC_ipqc
1,62 - 1,73 (1H, m), 1,41 (3H, s), 1,37 (9H, s), 0,88 (3H, t)
Ejemplo 67
4-{(4-(4.4-dimetil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil)fenil]oxi}-2-(metiloxi)benzonitrilo
imagen219
5 Se disolvio N1-(4-{[4-ciano-3-(metiloxi)fenil]oxi}fenil)-2-metilalaninamida (Intermedio 191, 77,0 mg) en DCM (10 mL). Se anadio trietilamina (0,218 mL, 1,57 mmoles) y la mezcla obtenida se enfrio a 0°C. Se disolvio el carbonato de bis(triclorometilo) (68,1 mg, 0,22 mmoles) en 5 mL de DCM y la disolucion obtenida se anadio gota a gota a la mezcla de reaccion. La mezcla de reaccion se agito a 0°C. Despues de 15 min, la mezcla de reaccion se evaporo en vado para obtener el producto crudo que se purifico por cromatograffa en gel de silice (ciclohexano/EtOAc de 100:0 10 a 50:50 en 10 VC; despues ciclohexano/EtOAc 50:50 durante 10 VC) para obtener 65,1 mg del compuesto del fftulo como un solido blanco.
1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 8 ppm 8,56 (1 H, s ancho), 7,72 (1 H, d) 7,42 - 7,49 (2 H, m) 7,19 - 7,29 (2 H, m) 6,97 (1 H, d) 6,57 (1 H, dd) 3,89 (3 H, s) 1,41 (6 H, s); UPLC_ipqc: 0,93 min, 352 [M+H]+.
Los compuestos siguientes se prepararon usando la metodologfa anterior, reemplazando N1-(4-{[4-ciano-3- 15 (metiloxi)fenil]oxi}fenil)-2-metilalaninamida (Intermedio 191) con la amina apropiada, como se describe en los Esquemas de Reaccion anteriores. Los productos finales se purificaron por cromatograffa ultrarrapida (cartucho de sflice; ciclohexano/EtOAc u otro sistema de disolventes apropiado).
Ej.
Estructura Nombre Amina Caracterizacion por RMN Caracterizacion por UPLC_ipqc
68
v"- - 4-{[4-(4,4-dimetil- 2,5-dioxo-1- imidazolidinil)fenil] oxi}-2-(etiloxi) benzonitrilo N1-(4-{[4-ciano-3- (etiloxi)fenil]oxi} fenil)-2- metilalaninamida (Intermedio 193) 1H RMN (400 MHz, CDCh): 8 ppm 7,50 (1H, d) 7,45 - 7,50 (2H, m) 7,12 - 7,17 (2H, m) 6,60 (1H, d) 6,55 (1 H, dd) 5,77 (1H, br. s.) 4,08 (2H, q) 1,58 (6H, s) 1,47 (3H, t) 1,00 min, 366 [M+H]+
69
Nx l >.., V) ' 4-({4-[(4R)-4-etil- 2,5-dioxo-1- imidazolidinil]fenil} oxi)-2-(etiloxi) benzonitrilo (2R)-2-amino-N-(4- {[4-ciano-3- (etiloxi)fenil]oxi} fenil)butanamida (Intermedio 194) 1H RMN (400 MHz, CDCla): 8 ppm 7,49 (1H, d), 7,43 - 7,48 (2H, m), 7,12 - 7,18 (2H, m), 6,61 (1H, d), 6,55 (1H, dd), 5,64 (1H, br. s.), 4,22 (1H, ddd), 4,09 (2H, q), 1,98 - 2,09 (1H, m), 1,88 - 1,98 (1H, m), 1,48 (3H, t), 1,08 (3H, t) 1,00 min, 366 [M+H]+.
Ej.
Estructura Nombre Amina Caracterizacion por RMN Caracterizacion por UPLC_ipqc
70
o H T\..x 3-ciclopropil-4-({5- [(4R)-4-etil-2,5- dioxo-1- imidazolidinil]-2- piridinil}oxi) benzonitrilo (2R)-2-amino-N-{6- [(4-ciano-2- ciclopropilfenil)oxi]- 3-piridinil} butanamida (Intermedio 188) 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 8 ppm 8,64 (1H, br. s), 8,14 - 8,11 (1H, m), 7,96 - 7,84 (1H, m), 7,71 - 7,66 (1H, m), 7,52 (1H, br. s), 7,29 (2H, d), 4,24 - 4,18 (1H, m), 1,97 - 1,89 (1H, m), 1,86 - 1,78 (1H, m), 1,75 - 1,67 (1H, m), 0,95 (3H, t), 0,91 - 0,85 (2H, m), 0,81 - 0,75 (2H, m) 0,98 min, 363 [M+H]+.
71
n H Y\..v yxxri 3- (1,1-dimetMetM)- 4- ({5-[(4R)-4-etil- 2,5-dioxo-1- imidazolidinN]-2- piridinil}oxi) benzonitrilo (2R)-2-amino-N-(6- {[4-ciano-2-(1,1- dimetiletil)fenil]oxi}- 3-piridinil) butanamida (Intermedio 189) 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 8 ppm 8,64 (1H, br. s), 8,19 (1H, br. s), 7,96 - 7,90 (1H, m), 7,82 (1H, br. s), 7,76 - 7,68 (1H, m), 7,30 (1H, d), 7,19 (1H, d), 4,25-4,17 (1H, m), 1,86 - 1,77 (1H, m), 1,76 - 1,66 (1H, m), 1,35 (9H, s), 0,95 (3H, t) 1,10 min, 379 [M+H]+.
72
0M0 x=\ o 0 / /° 4-({5-[(4R)-4-etil- 2,5-dioxo-1- imidazolidinil]-2- piridinil}oxi)-2- (metiloxi) benzonitrilo (2R)-2-amino-N-(6- {[4-ciano-3- (metiloxi)fenil]oxi}- 3-piridinil) butanamida (Intermedio 190) 1H RMN (400 MHz, CDCI3): 8 ppm 8,30 (1H, dd) 7,85 (1H, dd) 7,58 (1H, dt) 7,10 (1H, dd) 6,74 - 6,84 (2H, m) 6,22 (1H, br. s.) 4,20 - 4,26 (1H, m) 3,92 (3H, s) 1,97 - 2,08(1H,m) 1,851,97 (1H, m) 1,07 (3H, t) 0,87 min, 353 [M+H]+.
73
N,-s 1 ?..-, "O jT^ "'o'* ^ ''o ^ 4-({4-[(4R)-4-etil- 2,5-dioxo-1- imidazolidinil]fenil) oxi)-2-(metiloxi) benzonitrilo (2R)-2-amino-N-(4- {[4-ciano-3- (metiloxi)fenil]oxi} fenil)butanamida (Intermedio 192) 1H RMN (400 MHz, CDCl3): 8 ppm 7,50 (1H, d) 7,43 - 7,48 (2H, m) 7,12 - 7,19 (2H, m) 6,64 (1H, d) 6,56 (1H, dd) 6,08 (1H, br. s.) 4,18 - 4,24 (1H, m) 3,89 (3H, s) 1,98 -2,08 (1H, m) 1,87-1,98 (1H, m) 1,08 (3H, t) 0,94 min, 352 [M+H]+.
74
o. K ^ T":... _ TC i] I' ') o v-y' *0 v 0 'N 2-[(ciclopropilmetil) oxi]-4-({5-[(4R)-4- etil-2,5-dioxo-1- imidazolidinN]-2- piridinil)oxi) benzonitrilo (2R)-2-amino-N-[6- ({4-ciano-3- [(ciclopropilmetil) oxi]fenil}oxi)-3- piridinil]butanamida (Intermedio 195) 1H RMN (400 MHz, CDCl3): 8 ppm 8,29 (1H, dd), 7,83 (1H, dd), 7,58 (1H, dd), 7,09 (1H, dd), 6,75 - 6,79 (2H, m), 6,07 (1H, br. s.), 4,23 (1H, 1,01 min, 393 [M+H]+.
Ej.
Estructura Nombre Amina Caracterizacion por RMN Caracterizacion por UPLC_ipqc
ddd), 3,91 (2H, d), 1,97 - 2,08 (1H, m), 1,86 - 1,98 (1H, m), 1,25 - 1,37 (1H, m), 1,07 (3H, t), 0,62 - 0,72 (2H, m), 0,35 - 0,46 (2H, m)
75
0, H r\ rxx .rr* F ' 0 0 N F (5R)-5-etil-3-[6-({4- metil-3- [(trifluorometil)oxi] fenil}oxi)-3- piridinil]-2,4- imidazolidindiona (2R)-2-amino-N-[6- ({4-metil-3- [(trifluorometil)oxi] fenil}oxi)-3- piridinil]butanamida (Intermedio 196) 1H RMN (400 MHz, CDCh): 8 ppm 8,26 (1H, dd), 7,77 (1H, dd), 7,28 (1H, m), 7,05 - 7,10 (1H, m), 7,00 - 7,05 (2H, m), 6,36 (1H, br. s.), 4,21 (1H, ddd), 2,32 (3H, s), 1,96 - 2,05 (1H, m), 1,84-1,96 (1H, m), 1,06 (3H, t) 1,14 min, 396 [M+H]+.
76
'T0A / 2-ciclopropil-4-({5- [(4R)-4-etil-2,5- dioxo-1- imidazolidinil]-2- piridinil}oxi) benzonitrilo (2R)-2-amino-N-{6- [(4-ciano-3- ciclopropilfenil)oxi]- 3-piridinil} butanamida (Intermedio 197) 'H-RMN (400 MHz, DMSO-cfe): 8 ppm 8,63 (1H, br. s.), 8,19 (1H, d), 7,92 (1H, dd), 7,82 (1H, d), 7,25 (1H, d), 7,13 (1H, dd), 6,93 (1H, d), 4,19 - 4.26 (1H, m), 2,16 - 2.26 (1H, m), 1,78 - 1,88 (1H, m), 1,67 - 1,77 (1H, m), 1,09 - 1,18 (2H, m), 0,97 (3H, t), 0,82 - 0,90 (2H, m) 0,99 min, 363 [M+H]+
77
0 y 4-({5-[(4R)-4-etil- 2,5-dioxo-1- imidazolidinil]-2- piridinil}oxi)-2-(1- metiletil) benzonitrilo (2R)-2-amino-N-(6- {[4-ciano-3-(1- metiletil)fenil]oxi)-3- piridinil)butanamida (Intermedio 198) 'H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): 8 ppm 8,66 (1H, s) 8,19 (1H, d) 7,93 (1H, dd) 7,84 (1H, d) 7,36 (1H, d) 7,28 (1H, d) 7,18 (1H, dd) 4,19 - 4,25 (1H, m) 3,21 - 3,30 (1H, m) 1,77 - 1,87 (1H, m) 1,65 - 1,76 (1H, m) 1,27 (6H, d) 0,96 (3H, t) 1,03 min, 365 [M+H]+
78
j&'Ckx ) 4-({5-[(4R)-4-etil- 2,5-dioxo-1- imidazolidinN]-2- piridinil}oxi)-2-(1- metiletil) benzonitrilo (2R)-2-amino-N-{6- [(4-ciano-3-etilfenil) oxi]-3-piridinil} butanamida (Intermedio 199) 'H-RMN (400 MHz, DMSO-cfe): 8 ppm 8,66 (1H, s) 8,19 (1H, dd) 7,93 (1H, dd) 7,85 (1H, d) 7,32 (1H, d) 7,28 (1H, dd) 7,19 (1H, dd) 4,19 - 4,25 (1H, m) 2,82 (2H, q) 1,77 - 1,88 (1H, m) 1,65 - 1,77 (1H, m) 1,23 (3H, t) 0,96 (3H, 0,98 min, 351 [M+H]+
Ej.
Estructura Nombre Amina Caracterizacion por RMN Caracterizacion por UPLC_ipqc
t)
79
.0. .N. fr y ^ ? sJ j~r f, O } (5R)-5-etil-3-[2-({4- metil-3- [(trifluorometil)oxi] fenil}oxi)-5- pirimidinil]-2,4- imidazolidindiona (2R)-2-amino-N-[2- ({4-metil-3- [(trifluorometil)oxi] fenil}oxi)-5- pirimidinil] butanamida (Intermedio 200) 'H-RMN (400 MHz, DMSO-cfe): 8 ppm 8,76 (1 H, br. s.), 8,70 (2 H, s), 7,48 (1 H, d), 7,33 - 7,37 (1 H, m), 7.26 (1 H, dd), 4,20 - 4.27 (1 H, m), 2,31 (3 H, s), 1,77 - 1,90 (1 H, m), 1,65 - 1,77 (1 H, m), 0,98 (3 H, t) 1,08 min, 397 [M+H]+
80
iYV'Y'Y o Yy°~a Y Y 4-({5-[(4R)-4-etil- 2,5-dioxo-1- imidazolidinil]-2- piridinil}oxi)-2-[(1 - metiletil)oxi] benzonitrilo (2R)-2-amino-N-[6- ({4-ciano-3-[(1- metiletil)oxi]fenil} oxi)-3-piridinil] butanamida (Intermedio 201) 'H-RMN (400 MHz, DMSO-cfe): 8 ppm 8,65 (1H, s), 8,20 (1H, d), 7,93 (1H, dd), 7.76 (1H, d), 7,27 (1H, d), 7,16 (1H, d), 6.84 (1H, dd), 4,74 - 4.85 (1H, m), 4,17 - 4,26 (1H, m), 1,76 - 1,89 (1H, m), 1,65 - 1.76 (1H, m), 1,31 (6H, d), 0,96 (3H, t) 1,00 min, 381 [M+H]+.
81
/°-, ...^ 0-,Y n'A l^.nh o' \_ 4-({5-[(4R)-4-etil- 2,5-dioxo-1- imidazolidinil]-2- piridinil}oxi)-3- metilbenzonitrilo (2R)-2-amino-W-{6- [(4-ciano-2- metilfenil)oxi]-3- piridinil}butanamida (Intermedio 202) 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 8 ppm 8,64 (1H, s), 8,08 - 8.14 (1H, m), 7,88 - 7,95 (1H, m), 7,86 (1H, s), 7,70 - 7,77 (1H, m), 7,28 (2H, t), 4.15 - 4,26 (1H, m), 2,17 (3H, s), 1,62 - 1,89 (2H, m), 0,95 (3H, t) 0,90 min, 337 [M+H]+
82
,0, .■ -v H 1 '!' "1 ° . Av .;.-J N., A n'' f 1 ^ .NH FT° oM F 4-({5-[(4R)-4-etil- 2,5-dioxo-1- imidazolidinN]-2- piridinil}oxi)-2- [(trifluorometil)oxi] benzonitrilo (2R)-2-amino-N-[6- ({4-ciano-3- [(trifluorometil)oxi] fenil}oxi)-3-piridinil] butanamida (Intermedio 203) 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 8 ppm 8,67 (1H, s), 8,19 - 8.26 (1H, m), 8,14 (1H, d), 7,94 - 8,02 (1H, m), 7,66 (1H, s), 7,43 - 7,51 (1H, m), 7,36 (1H, d), 4,18 - 4.27 (1H, m), 1,63 - 1,91 (2H, m), 0,96 (3H, t) 1,02 min, 407 [M+H]+, 405 [M-H]-
83
XJXNJc " 1 /Y / 3-etil-4-({5-[(4R)-4- etil-2,5-dioxo-1- imidazolidinil]-2- pirimidinil}oxi) benzonitrilo (2R)-2-amino-N-{2- [(4-ciano-2-etilfenil) oxi]-5-pirimidinil} butanamida (Intermedio 204) 'H-RMN (400 MHz, DMSO-cfe): 8 ppm 8,78 (1H, s) 8,73 (2H, s) 7,91 (1H, d) 7,79 (1H, dd) 7,45 (1H, d) 4,21 - 4,27 (1H, m) 2,53 - 2,58 (2H, m) 1,77 - 1,88 (1H, m) 1,66 - 1,76 (1H, m) 1,12 (3H, t) 0,97 (3H, 0,93 min, 352 [M+H]+
Ej.
Estructura Nombre Amina Caracterizacion por RMN Caracterizacion por UPLC_ipqc
t)
84
^XXXXNJ. N oK / 4-({5-[(4R)-4-etil- 2,5-dioxo-1- imidazolidinil]-2- pirimidinil}oxi)-3- metilbenzonitrilo (2R)-2-amino-N-{2- [(4-ciano-2- metilfenil)oxi]-5- pirimidinil} butanamida (Intermedio 205) 'H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): 8 ppm 8.77 (1H, s) 8,73 (2H, s) 7,91 (1H, d) 7,79 (1H, dd) 7,45 (1H, d) 4,21 - 4,27 (1H, m) 2,16 (3H, s) 1,77 - 1,88 (1H, m) 1,65 - 1.77 (1H, m) 0,97 (3H, t) 0,85 min, 338 [M+H]+
85
XL -N rr f ■ > o^ > 3- (1,1-dimetiletil)- 4- ({5-[(4R)-4-etil- 2,5-dioxo-1- imidazolidinil]-2- pirimidinil}oxi) benzonitrilo (2R)-2-amino-N-(2- {[4-ciano-2-(1,1- dimetiletil)fenil]oxi}- 5-pirimidinil) butanamida (Intermedio 206) 'H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): 8 ppm 8.78 (1H, br. s.), 8,75 (2H, s), 7,86 (1H, d), 7.79 (1H, dd), 7,42 (1H, d), 4,21 - 4,27 (1H, m), 1,78 - 1,89 (1H, m), 1,65 - 1,78 (1H, m), 1,33 (9H, s), 0,98 (3H, t) 1,03 min, 380 [M+H]+
Ejemplo 86
4-({5-[(4R)-4-etil-4-metil-2,5-dioxo-1-imidazoMdinil]-2-piridinil}oxi)-2-(1 -metiletil)benzonitrilo
imagen220
5 A una disolucion de 4-({5-[(4R)-4-etil-4-metil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil]-2-piridinil}oxi)-2-(1 -metiletenil)benzonitrilo
(Intermedio 207, 98 mg) en MeOH (10 mL) se anadio Pd al 10% p/p sobre carbon activado (10 mg) y la mezcla de reaccion se agito durante 1 hora bajo atmosfera de H2 (P= 1 atm). El catalizador se elimino por filtracion y el disolvente se elimino bajo presion reducida. El residuo se purifico por cromatograffa ultrarrapida en gel de s^lice (SNAP 10 g) eluyendo con ciclohexano/acetato de etilo de 75:25 a 40:60, rindiendo el compuesto del tftulo (80 mg) 10 como solido blanco.
1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 8 ppm 8,61 (1H, br. s.), 8,21 (1H, d), 7,94 (1H, dd), 7,84 (1H, d), 7,35 (1H, d), 7,27 (1H, d), 7,18 (1H, dd), 3,21 - 3,30 (1H, m), 1,73 - 1,85 (1H, m), 1,60 - 1,72 (1H, m), 1,40 (3H, s), 1,28 (6H, d), 0,88 (3H, t); UPLC_ipqc: 1,08 min, 379 [M+H]+.
Intermedio de referencia 208
15 1,3-bis{(metiloxi)metil]oxi}benceno
imagen221
A una disolucion de 1,3-bencenodiol (1,5 g, 13,62 mmoles) en N,N-Dimetilformamida seca (13,62 mL) a 0°C se anadio hidruro de sodio (0,981 g, 40,9 mmoles) y la mezcla de reaccion se agito durante 15 minutos a la misma
temperatura. Se anadio rapidamente MOM-Cl (3,10 mL, 40,9 mmoles) y la mezcla de reaccion se agito durante 1 hora mientras se dejaba que la temperatura alcanzara la temperatura ambiente. La reaccion se paro con salmuera (20 mL) y se extrajo con acetato de etilo (3x50 mL). La capa organica se lavo con salmuera (2x30 mL), se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se evaporo y el residuo se purifico por cromatograffa ultrarrapida (sistema Biotage) 5 en gel de sflice usando una columna SNAP de 50 g y ciclohexano a ciclohexano/acetato de etilo 8:2 como eluyentes rindiendo el compuesto del fftulo (1,59 g, 8,02 mmoles) como un aceite incoloro.
1H RMN (400MHz, DMSO): 8 ppm 7,16-7,23 (1H,d), 6,69-6,64 (3H, m), 5,17 (4H, s), 3,38 (6H, s).
Intermedio de referencia 209
(2,6-bis{(metiloxi)metil]oxi}fenil)(oxo)acetato de etilo
10
A una disolucion de 1,3-bis{[(metiloxi)metil]oxi}benceno (Intermedio de referencia 208, 2,19 g) en tetrahidrofurano seco (10 mL) a temperatura ambiente se anadio BuLi 1,6 M en hexano (8,29 mL, 13,26 mmoles) y la mezcla de reaccion se agito durante 30 minutos a la misma temperatura. La mezcla se enfrio a -78 °C y se anadio (mediante canula) a una disolucion de cloro(oxo)acetato de etilo (2,263 g, 16,57 mmoles) en tetrahidrofurano seco (10 mL) a 15 -78°C. La mezcla de reaccion se agito a -78°C durante 30 minutos. La reaccion se paro con una disolucion acuosa
saturada de cloruro de amonio (10 mL) y se extrajo con acetato de etilo (2x30 mL). Las capas organicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se evaporaron. El residuo se purifico por cromatograffa ultrarrapida (sistema Biotage) en gel de sflice usando una columna SNAP de 100 g y ciclohexano a ciclohexano/acetato de etilo 8:2 como eluyente rindiendo el compuesto del fftulo como un aceite amarillo claro (1,75 g).
20 1H RMN (400MHz, DMSO): 8 ppm 7,46 (1H, t), 6,87 (2H, d), 5,20 (4H, s), 4,29 (2H, q), 3,34 (6H, s), 1,27 (3H, t).
Intermedio de referencia 210
2-(2,6-bis{(metiloxi)metil]oxi}fenil)-2-propenoato de etilo
imagen222
A una suspension de bromuro de metiltrifenilfosfonio (3,13 g, 8,75 mmoles) en tetrahidrofurano seco (30 mL) a 0°C 25 se anadio lentamente KHMDS (1,745 g, 8,75 mmoles) y la mezcla de reaccion se agito durante 15 minutos a 0°C y durante 45 minutos a temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se enfrio hasta 0°C y se anadio lentamente una disolucion de (2,6-bis{[(metiloxi)metil]oxi}fenil)(oxo)acetato de etilo (Intermedio de referencia 209, 1,74 g) en tetrahidrofurano seco (10 mL) y la mezcla de reaccion se agito durante 2 horas a 0°C. La reaccion se paro con una disolucion acuosa saturada de cloruro de amonio (10 mL), se diluyo con agua (20 mL) y se extrajo con acetato de 30 etilo (2x50 mL). La capa organica se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se evaporo. El residuo se purifico por cromatograffa ultrarrapida (sistema Biotage) en gel de sflice usando una columna SNAP de 100 g y ciclohexano a ciclohexano/acetato de etilo 8:2 como eluyentes rindiendo el compuesto del fftulo como un aceite incoloro (1,37 g).
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 8 ppm 7,21 (1H, t), 6,78 (2H, d), 6,44 (1H, d), 5,74 (1H, d), 5,12 (4H, s), 4,12 (2H, q), 3,32 (6H, s), 1,17 (3H, t).
imagen223
1-(2,6-bis{[(metiloxi)metil]oxi}fenil)ciclopropanocarboxilato de etilo
imagen224
A una disolucion de yoduro de trimetilsulfoxonio (1,805 g, 8,20 mmoles) en dimetilsulfoxido seco (20 mL) se anadio 5 dispersion de hidruro de sodio al 60% en aceite mineral (0,310 g, 7,75 mmoles) y la mezcla de reaccion se agito durante 1 hora a temperature ambiente. Se anadio lentamente una disolucion de 2-(2,6-bis{[(metiloxi)metil]oxi}fenil)- 2-propenoato de etilo (Intermedio de referencia 210, 1,35 g) en dimetilsulfoxido seco (10 mL) y la mezcla de reaccion se agito durante 1hora a temperatura ambiente. La reaccion se paro con una disolucion acuosa saturada de cloruro de amonio (10 mL), se diluyo con agua (20 mL) y se extrajo con acetato de etilo (2x50 mL). La capa organica se lavo 10 con agua (50 mL), se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se evaporo. El residuo se purifico por cromatograffa ultrarrapida (sistema Biotage) en gel de sflice usando una columna SNAP de 50 g y ciclohexano a ciclohexano/acetato de etilo 8:2 como eluyentes rindiendo el compuesto del fftulo como un aceite incoloro (1,14 g).
1H RMN (400MHz, DMSO): 8 ppm 7,15 (1H, t), 6,71 (2H, d), 5,18 (4H, s), 3,97 (2H, q), 3,36 (6H, s), 1,53-1,58 (2H, m), 1,09-1,14 (2H, m), 1,04 (3H, t).
15 Intermedio de referencia 212
2-[1-(hidroximetil)ciclopropil]-3-{[(metiloxi)metil]oxi}fenol
imagen225
A una disolucion de 1-(2,6-bis{[(metiloxi)metil]oxi}fenil)ciclopropanocarboxilato de etilo (intermedio de Referencia 211, 490 mg) en etanol (10 mL) se anadio HCl 2 N en agua (0,789 mL, 1,579 mmoles) y la mezcla de reaccion se 20 agito toda la noche a 50°C. Se anadio tolueno (20 mL) y los disolventes combinados se separaron bajo presion reducida. El residuo se volvio a suspender en tolueno (20 mL) y el disolvente se evaporo. El residuo obtenido se disolvio en tetrahidrofurano seco (20 mL), la mezcla se enfrio hasta 0°C y se anadio dispersion de NaH al 60% en aceite mineral (126 mg, 3,16 mmoles) y la mezcla de reaccion se agito durante 30 minutos a la misma temperatura. Despues se anadio MOM-Cl (0,120 mL, 1,579 mmoles) y la mezcla de reaccion se agito durante 2 horas a 0°C. Se 25 anadio LiAlH4 (1 M en THF, 1,579 mL, 1,579 mmoles) y la mezcla de reaccion se agito mas durante 1 hora a la misma temperatura. La reaccion se paro con una disolucion acuosa saturada de cloruro de amonio (10 mL), se diluyo con agua (10 mL) y se extrajo con acetato de etilo (2x50 mL). Las capas organicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se evaporaron y el residuo se purifico por cromatograffa ultrarrapida (sistema Biotage) en gel de sflice usando una columna SNAP de 25 g y ciclohexano a ciclohexano/acetato de etilo 7:3 como 30 eluyentes rindiendo el compuesto del fftulo como un aceite incoloro (191 mg).
1H RMN (400MHz, DMSO): 8 ppm 8,90 (1H, s ancho) 6,96 (1H, t), 6,50 (1H, d), 6,45 (1H, d), 5,16 (2H, s), 4,93 (1H, s ancho), 3,45 (2H, s), 3,40 (3H, s), 0,86-0,93 (2H, m), 0,56-0,62 (2H, m); UPLC: 0,59 min, 225 [M+H]+.
Intermedio de referencia 213
4-{[(metiloxil)metil]oxi}espiro[1-benzofuran-3,1'-ciclopropano]
35
A una disolucion de 2-[1-(hidroximetil)ciclopropil]-3-{[(metiloxi)metil]oxi}fenol (Intermedio de referencia 212, 190 mg) en tetrahidrofurano seco (10 mL) se anadio trifenilfosfina (333 mg, 1,271 mmoles) y la mezcla de reaccion se agito hasta disolucion completa de PPh3. Despues se anadio gota a gota DIAD (0,198 mL, 1,017 mmoles) y la mezcla de reaccion se agito durante 30 minutos a temperatura ambiente. El disolvente se elimino bajo presion reducida. El
imagen226
residuo se purifico por cromatograffa ultrarrapida (sistema Biotage) en gel de s^lice usando una columna SNAP de 25 g y ciclohexano a ciclohexano/acetato de etilo 9:1 como eluyentes dando el compuesto del tftulo como un aceite amarillo claro (120 mg).
1H RMN (400MHz, DMSO): 8 ppm 6,97 (1H, t), 6,51 (1H, d), 6,43 (1H, d), 5,12 (2H, s), 4,40 (2H, s), 3,35 (3H, s), 5 1,43-1,48 (2H, m), 0,85-0,90 (2H, m); UPLC_B: 0,88 min, 207 [M+H]+.
Intermedio de referencia 214
espiro[1-benzofuran-3,1'-ciclopropan]-4-ol
imagen227
A una disolucion de 4-{[(metiloxi)metil]oxi}espiro[1-benzofuran-3,1'-ciclopropano] (Intermedio de referencia 213, 118 10 mg) en metanol (5 mL), se anadio HCl 2N en agua (0,286 mL, 0,572 mmoles) y la mezcla de reaccion se agito toda la noche a 50°C. Los disolventes combinados se eliminaron bajo presion reducida y el residuo se volvio a disolver en tolueno (10 mL) y se elimino el disolvente. El residuo se purifico por cromatograffa ultrarrapida (sistema Biotage) en gel de sflice usando una columna SNAP de 10 g y ciclohexano a ciclohexano/acetato de etilo 7:3 como eluyentes dando el compuesto del tftulo como un solido blanco (70 mg).
15 1H RMN (400MHz, DMSO): 8 ppm 9,28 (1H, s), 6,81 (1H, t), 6,24 (1H, d), 6,22 (1H, d), 4,34 (2H, s), 1,40-1,45 (2H,
m), 0,77-0,82 (2H, m).
Intermedio de referencia 215
5-nitro-2-(espiro[1-benzofuran-3,1'-ciclopropan]-4-iloxi)piridina
imagen228
20 A una solucion de espiro[1-benzofuran-3,1'-ciclopropan]-4-ol (Intermedio de referencia 214, 70 mg) en N,N- dimetilformamida seca (2 mL) se anadieron carbonato de potasio (89 mg, 0,647 mmoles) y despues 2-cloro-5- nitropiridina (75 mg, 0,475 mmoles) y la mezcla de reaccion se agito durante 3 horas a 100°C. La reaccion se paro con salmuera (1 mL), se diluyo con agua (2 mL) y se extrajo con acetato de etilo (3x10 mL). La capa organica se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se evaporo. El residuo se purifico por cromatograffa ultrarrapida (sistema 25 Biotage) en gel de sflice usando una columna SNAP de 10 g y ciclohexano a ciclohexano/acetato de etilo 9:1 como eluyentes rindiendo el compuesto del tftulo como un solido blanco (100 mg).
1H RMN (400MHz, DMSO): 8 ppm 9,05 (1H, d), 8,63 (1H, dd), 7,23 (1H, d), 7,13 (1H, t), 6,73 (1H, d), 6,60 (1H, d), 4,45 (2H, s), 1,05-1,10 (2H, m), 0,88-0,93 (2H, m); UPLC: 0,79 min, 285 [M+H]+.
Intermedio de referencia 216
30 6-(espiro[1-benzofuran-3,1'-ciclopropan]-4-iloxi)-3-piridinamina
imagen229
A una disolucion de 5-nitro-2-(espiro[1-benzofuran-3,1'-ciclopropan]-4-iloxi)piridina (Intermedio de referencia 215, 99 mg) en tetrahidrofurano (5 mL)/agua (2,5 mL) se anadieron hierro (97 mg, 1,741 mmoles) y despues cloruro de amonio (93 mg, 1,741 mmoles) y la mezcla de reaccion se agito durante 4 horas a temperatura ambiente. El
35 catalizador se elimino por filtracion y el residuo se diluyo con una disolucion acuosa saturada de NaHCO3 (5 mL) y se extrajo con acetato de etilo (3x10 mL). La capa organica se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se evaporo y el residuo se purifico por cromatograffa ultrarrapida (sistema Biotage) en gel de sflice usando una columna SNAP de 10 g y ciclohexano/acetato de etilo 8:2 a ciclohexano/acetato de etilo 1:1 como eluyentes rindiendo el compuesto del tftulo como un solido amarillo claro (85 mg).
40 1H RMN (400MHz, DMSO): 8 ppm 7,52 (1H, d), 7,06 (1H, dd), 6,97 (1H, t), 6,70 (1H, d), 6,53 (1H, d), 6,23 (1H, d), 5,08 (2H, s), 4,43 (2H, s), 1,28-1,33 (2H, m), 0,86-0,91 (2H, m); UPLC: 0,62 min, 255 [M+H]+.
[(1R)-1-({[6-(espiro[1-benzofuran-3,1'-ciclopropan]-4-iloxi)-3-piridinil]amino}carbonil)propil]carbamato de 1,1- dimetiletilo
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5 A una disolucion de acido (2R)-2-({[(1,1-dimetiletil)oxi]carbonil}amino)butanoico (94 mg, 0,462 mmoles) en N,N- Dimetilformamida seca (2 mL) se anadieron DIPeA (0,115 mL, 0,661 mmoles) y despues TBTU (159 mg, 0,496 mmoles) y la mezcla de reaccion se agito durante 15 minutos a temperatura ambiente. Se anadio 6-(espiro[1- benzofuran-3,1'-ciclopropan]-4-iloxi)-3-piridinamina (Intermedio de referencia 216, 84 mg) y la mezcla de reaccion se agito durante 6 horas a la misma temperatura. La reaccion se paro con salmuera (2 mL), se diluyo con agua (5 mL) y 10 se extrajo con acetato de etilo (2x10 mL). La capa organica se lavo con salmuera enfriada con hielo (2x5 mL), se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se evaporo. El residuo se purifico por cromatograffa ultrarrapida (sistema Biotage) en gel de sflice usando una columna SNAP de 10 g y ciclohexano a ciclohexano/acetato de etilo 7:3 como eluyentes rindiendo el compuesto del tftulo como un aceite incoloro (130 mg).
1H RMN (400MHz, DMSO): 8 ppm 10,14 (1H, s ancho), 8,32 (1H, d), 8,08 (1H, dd), 7,02-7,09 (2H, m), 6,96 (1H, d), 15 6,63 (1H, d), 6,42 (1H, d), 4,44 (2H, s), 3,93-4,01 (1H, m), 1,52-1,75 (2H, m), 1,39 (9H, s), 1,15-1,22 (2H, m), 0,85
0,95 (5H, m); UPLC: 0,80 min, 440 [M+H]+.
Intermedio de referencia 218
(2R)-2-amino-W-[6-(espiro[1-benzofuran-3,1'-ciclopropan]-4-iloxi)-3-piridinil]butanamida
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20 A una disolucion de [(1R)-1-({[6-(espiro[1-benzofuran-3,1'-ciclopropan]-4-iloxi)-3-piridinil]amino}carbonil)propil]
carbamato de 1,1 -dimetiletilo (Intermedio de referencia 217, 128 mg) en diclorometano seco (3 mL) a 0°C se anadio lentamente TFA (0,9 mL, 11,68 mmoles) y la mezcla de reaccion se agito durante 2 horas a la misma temperatura. La reaccion se diluyo con diclorometano (10 mL) y se anadio una disolucion acuosa saturada de NaHCO3 mientras se dejaba que el pH llegara a ~8. Se separaron dos fases y la capa acuosa se volvio a extraer con diclorometano (10 25 mL). Las capas organicas se combinaron, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se evaporaron rindiendo el compuesto del tftulo como un aceite incoloro (92 mg).
1H RMN (400MHz, DMSO): 8 ppm 8,37 (1H, d), 8,13 (1H, dd), 7,05 (1H, t), 6,95 (1H, d), 6,63 (1H, d), 6,42 (1H, d), 4,44 (2H, s), 3,24 (1H, m), 1,61-1,72 (1H, m), 1,44-1,55 (1H, m), 1,16-1,21 (2H, m), 0,91 (3H, t), 0,86-0,91 (2H, m); UPLC_B: 0,74 min, 340 [M+H]+.
30 Intermedio de referencia 219
(1,1-dimetil-2-oxo-2-{[f6-(espiro[1-benzofuran-3,1'-ciclopropan]-4-iioxi)-3-piridinil]amino}etil)carbamato de 1,1- dimetiletilo.
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A una disolucion de N-{[(1,1-dimetiletil)oxi]carbonil}-2-metilalanina (80 mg, 0,393 mmoles) en N,N-dimetilformamida seca (1,5 mL) se anadieron DIPEA (0,096 mL, 0,551 mmoles) y despues HATU (150 mg, 0,393 mmoles) y la mezcla de reaccion se agito durante 15 minutos a temperatura ambiente. Esta disolucion se anadio a una disolucion de 6- (espiro[1-benzofuran-3,1'-ciclopropan]-4-iloxi)-3-piridinamina (Intermedio de referencia 218, 40 mg) en N,N- 5 dimetilformamida seca (0,5 mL) y la mezcla de reaccion se agito toda la noche a temperatura ambiente. La reaccion se paro con agua (2 mL), se diluyo con salmuera (10 mL) y se extrajo con acetato de etilo (2x20 mL). La capa organica se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se evaporo y el residuo se purifico por cromatograffa ultrarrapida (sistema Biotage) en gel de sflice usando una columna SNAP de 10 g y ciclohexano/acetato de etilo 8:2 a ciclohexano/acetato de etilo 1:1 como eluyentes rindiendo el compuesto del fftulo como un solido blanco (52 mg).
10 1H RMN (400MHz, DMSO): 8 ppm 9,62 (1H, s ancho), 8,24-8,42 (1H, m ancho), 8,05 (1H, d), 6,98-7,10 (2H, m), 6,92 (1H, d), 6,61 (1H, d), 6,40 (1H, d), 4,44 (2H, s), 1,42 (6H, s), 1,36 (9H, s), 1,15-1,21 (2H, m), 0,85-0,91 (2H, m); UPLC: 0,81 min, 440 [M+H]+.
Intermedio de referencia 219
2-metil-W1-[6-(espiro[1-benzofuran-3.1'-ciclopropan]-4-iloxi)-3-piridinil]alaninamida
15
A una disolucion de (1,1-dimetil-2-oxo-2-{[6-(espiro[1-benzofuran-3,1'-ciclopropan]-4-iloxi)-3-piridinil]amino} etil)carbamato de 1,1 -dimetiletilo (Intermedio de referencia 219, 50 mg) en diclorometano seco (4 mL) a 0°C se anadio lentamente TFA (1 mL, 12,98 mmoles) y la mezcla de reaccion se agito durante 2 horas a la misma temperatura. La reaccion se diluyo con diclorometano (10 mL) y se anadio una disolucion acuosa saturada de 20 NaHCO3 mientras se dejaba que el pH llegara a ~8. Se separaron dos fases y la capa organica se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se evaporo rindiendo el compuesto del fftulo (35 mg) como un aceite incoloro.
1H RMN (400MHz, DMSO): 8 ppm 8,40 (1H, d), 8,15 (1H, dd), 7,04 (1H, t), 6,94 (1H, d), 6,62 (1H, d), 6,41 (1H, d), 4,43 (2H, s), 1,28 (6H, s), 1,15-1,20 (2H, m), 0,86-0,91 (2H, m); UPLC: 0,56 min, 340 [M+H]+.
Ejemplo de Referencia 87
25 (5R)-5-etil-3-[6-(espiro[1-benzofuran-3,1'-ciclopropan]-4-iloxi)-3-piridinil]-2,4-imidazolidindiona
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A una disolucion de (2R)-2-amino-N-[6-(espiro[1-benzofuran-3,1'-ciclopropan]-4-iloxi)-3-piridinil]butanamida (Intermedio de referencia 218, 90 mg) en diclorometano seco (15 mL) se anadio TEA (0,185 mL, 1,326 mmoles) y la mezcla de reaccion se enfrio hasta 0°C. Se anadio lentamente una disolucion de trifosgeno (35,4 mg, 0,119 mmoles)
30 en diclorometano seco (5 mL) y la mezcla de reaccion se agito durante 30 minutos a la misma temperatura. La reaccion se paro con agua (10 mL) y se separaron dos fases. La capa organica se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se evaporo. El residuo se purifico por cromatograffa ultrarrapida (sistema Biotage) en gel de sflice usando una columna SNAP de 10 g y ciclohexano/acetato de etilo 8:2 a ciclohexano/acetato de etilo 1:1 como eluyentes rindiendo el compuesto del fftulo (65 mg, 0,178 mmoles) como un solido blanco.
35 1H RMN (400MHz, DMSO): 8 ppm 8,63 (1H, s), 8,14 (1H, d), 7,85 (1H, dd), 7,11 (1H, s), 7,09 (1H, t), 6,68 (1H, dd), 6,52 (1H, dd), 4,45 (2H, s), 4,18-1,24 (1H, m), 1,76-1,88 (1H, m), 1,64-1,76 (1H, m), 1,13-1,18 (2H, m), 0,96 (3H, t), 0,89-0,94 (2H, m); UPLC_B: 0,78 min, 366 [M+H]+.
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5,5-dimetil-3-[6-(espiro[1-benzofuran-3,1'-ciclopropan]-4-iloxi)-3-piridinil]-2,4-imidazolidindiona
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A una disolucion de 2-metil-N1-[6-(espiro[1-benzofuran-3,1'-cidopropan]-4-iloxi)-3-piridinil]alaninamida (Intermedio 5 de referencia 219, 34 mg) en diclorometano seco (6 mL) se anadio TEA (0,070 mL, 0,501 mmoles) y la mezcla se enfrio hasta 0°C. Se anadio lentamente una disolucion de trifosgeno (13,38 mg, 0,045 mmoles) en diclorometano seco (2 mL) y la mezcla de reaccion se agito durante 1 hora a la misma temperatura. La reaccion se paro con agua (3 mL) y se separaron dos fases. La capa organica se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se evaporo. El residuo se purifico por cromatograffa ultrarrapida (sistema Biotage) en gel de sflice usando una columna SNAP de 10 g y 10 ciclohexano/acetato de etilo 7:3 a ciclohexano/acetato de etilo 3:7 como eluyentes rindiendo el compuesto del tttulo como un solido blanco (23 mg).
1H RMN (400MHz, DMSO): 8 ppm 8,63 (1H, s), 8,17 (1H, d), 7,88 (1H, d), 7,06-7,12 (2H, m), 6,67 (1H, d), 6,51 (1H, d), 4,45 (2H, s), 1,41 (6H, s), 1,12-1,17 (2H, m), 0,88-0,93 (2H, m); UPLC: 0,73 min, 366 [M+H]+.
Ejemplo 89
15 Ensayo Biologico
La capacidad de los compuestos de la invencion para modular los subtipos de canales de potasio regulados por voltaje Kv3.2/3.1, se puede determinar usando el siguiente ensayo.
Biologfa celular
Se creo una lmea estable que expresa canales Kv3.2 humanos (hKv3.2) transfectando celulas de ovario de hamster 20 chino (CHO)-K1 con un vector pCIH5-hKv3.2. Las celulas se cultivaron en medio DMEM/F12 complementado por suero bovino fetal al 10%, 1X aminoacidos no esenciales (Invitrogen) y 500 ug/mL de higromicina B (Invitrogen). Las celulas se crecieron y mantuvieron a 37°C en un entorno humidificado que contema 5% de CO2 en aire.
Para evaluar los efectos de los compuestos en los canales Kv3.1 humanos (hKv3.1), celulas CHO/Gam/E1A-clon22 alias CGE22 se transdujeron usando un reactivo de hKv3.1 de BacMam. Esta lmea celular se diseno para ser un 25 huesped basado en CHO-K1 mejorado, para la expresion de protemas recombinantes potenciada comparada con la CHO-K1 de tipo salvaje. La lmea celular se genero despues de transduccion de celulas CHO-K1 con un virus BacMam que expresaba la protema Gam1 de adenovirus y seleccion con Geneticina-G418, para generar una lmea celular estable, CHO/Gam-A3. Las celulas CHO/Gam-A3 se transfectaron con pCDNA3-E1A-Hygro, seguido de seleccion con higromicina B y separacion por FACS para obtener clones de celulas individuales. Despues se usaron 30 virus BacMam-Luciferasa y BacMam-GFP en estudios de transduccion transitorios para seleccionar el clon basado en la mayor transduccion de BacMam y expresion de protemas recombinantes. Se cultivaron celulas CGE22 en el mismo medio usado para la lmea celular estable CHO-K1 hKv3.2 con la adicion de higromicina B 300 ug/mL y G418 300 ug/mL. Todas las demas condiciones eran identicas a las de las celulas CHO-K1 hKv3.2. El dfa antes de un experimento, se sembraron 10 millones de celulas CGE22 en un matraz de cultivo T175 y se anadio el reactivo 35 BacMam hKv3.1 (pFBM/Kv3.1 humano) (MOI de 50). Las celulas transducidas se usaron 24 horas mas tarde.
Preparacion de las celulas para experimentos en el sistema lonworks Quattro™
El dfa del experimento se retiraron las celulas del incubador y se separo el medio de cultivo. Las celulas se lavaron con 5 mL de PBS de Dulbecco (DPBS) exento de calcio y magnesio y se desprendieron por la adicion de 3 mL de Versene (Invitrogen, Italia) seguido de una breve incubacion a 37°C durante 5 minutos. El matraz se golpeo 40 ligeramente para soltar las celulas y se anadieron 10 mL de DPBS que contema calcio y magnesio para preparar una suspension celular. La suspension celular despues se puso en un tubo de centnfuga de 15 mL y se centrifugo durante 2 min a 1.200 rpm. Despues de centrifugar, el sobrenadante se separo y el sedimento celular se volvio a suspender en 4 mL de DPBS que contema calcio y magnesio usando una pipeta de 5 mL para romper el sedimento. El volumen de suspension celular despues se corrigio para proporcionar una concentracion de celulas para el 45 ensayo de aproximadamente 3 millones de celulas por mL.
Todas las disoluciones anadidas a las celulas se calentaron previamente a 37°C.
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Los experimented se llevaron a cabo a temperatura ambiente usando la tecnolog^a de electrofisiolog^a de matrices planas IonWorks Quattro™ (Molecular Devices Corp.) con PatchPlate™ PPC. Los protocolos de estimulacion y la adquisicion de datos se llevaron a cabo usando un microordenador (Dell Pentium 4). Las resistencias de huecos de electrodos planos (Rp) se determinaron aplicando un paso de voltaje 10 mV a lo largo de cada pocillo. Estas mediciones se llevaron a cabo antes de la adicion de las celulas. Despues de la adicion de las celulas y formacion de sello, se llevo a cabo un ensayo de sello aplicando un paso de voltaje de -80 mV a -70 mV durante 160 ms. Despues de esto, se anadio disolucion de anfotericina B a la cara intracelular del electrodo para lograr el acceso intracelular. Las celulas se mantuvieron a -70mV. La sustraccion de fugas se llevo a cabo en todos los experimentos aplicando prepulsos de hiperpolarizacion de 50 ms (10 mV) para producir corrientes de fuga seguido de un periodo de 20 ms en el potencial de mantenimiento antes de los pulsos de ensayo. Desde el potencial de mantenimiento de -70 mV, se aplico un primer pulso a -15 mV durante l00 ms y despues de otros 100 ms a -70 mV, se aplico un segundo pulso a 40 mV durante 50 ms. Despues las celulas se mantuvieron durante otros 100 ms a -100 mV y despues se aplico una rampa de voltaje de -100 mV a 40 mV a lo largo de 200 ms. En todos los experimentos, el protocolo de pulsos de ensayo se llevo a cabo en ausencia (lectura previa) y presencia (lectura posterior) del compuesto de ensayo. Las lecturas previas y posteriores estaban separadas por la adicion de compuesto seguido de una incubacion de 3 minutos.
Disoluciones y farmacos
La disolucion intracelular contema lo siguiente (en mM): gluconato K 100, KCI 54, MgCl2 3,2, HEPES 5, ajustado a pH 7,3 con KOH. La disolucion de anfotericina B se preparo como disolucion madre de 50 mg/mL en dMsO y se diluyo hasta una concentracion de trabajo final de 0,1 mg/mL en la disolucion intracelular. La disolucion externa era disolucion salina tamponada con fosfato Dulbecco (DPBS) y contema lo siguiente (en mM): CaCl2 0,90, KCI 2,67, KH2PO4 1,47, MgCl.6H2O 0,493, NaCl 136,9, Na3PO4 8,06, con un pH de 7,4.
Los compuestos de la invencion (o compuestos de referencia tales como W-ciclohexil-W-[(7,8-dimetil-2-oxo-1,2- dihidro-3-quinolinil)metil]-W-fenilurea se disolvieron en dimetilsulfoxido (DMSO) en una concentracion de disolucion madre 10 mM. Estas disoluciones se diluyeron mas con DMSO usando un Biomek FX (Beckman Coulter) en una placa de 384 compuestos. Cada dilucion (1 pl) se transfirio a otra placa de compuestos y se anadio disolucion externa que contema acido pluronico al 0,05% (66 pl). Se anadieron 3,5 pl de cada placa que contema un compuesto de la invencion, y se incubaron con las celulas durante el experimento de IonWorks Quattro™. La dilucion de ensayo final era 200 y las concentraciones de compuestos finales estaban en el intervalo de 50 pM a 50 nM.
Analisis de datos
Los registros se analizaron y filtraron usando tanto la resistencia de sello (>20 MQ) como la amplitud de la corriente maxima (>500 pA en el paso de voltaje de 40 mV) en ausencia de compuestos para eliminar las celulas no adecuadas del posterior analisis. Se usaron comparaciones por pares entre las adiciones pre- y post-farmaco medidas para el paso de voltaje -15 mV para determinar el efecto de modulacion positiva de cada compuesto. Los datos se normalizaron respecto al efecto maximo del compuesto de referencia (50 microM de W-ciclohexil-A/-[(7,8- dimetil-2-oxo-1,2-dihidro-3-quinolinil)metil]-W-fenilurea) y respecto al efecto de un control de vehteulo (DMSO al 0,5%). Los datos normalizados se analizaron usando el software ActivityBase. La concentracion de compuesto requerida para incrementar las corrientes un 50% (pCE50) se determino ajustando los datos de respuesta a la concentracion usando una funcion logfstica de cuatro parametros en ActivityBase. La A/-ciclohexil-W-[(7,8-dimetil-2- oxo-1,2-dihidro-3-quinolinil)metil]-W-fenilurea se obtuvo de ASINEX (numero de registro: 552311-06-5).
Todos los compuestos de Ejemplo se ensayaron en el ensayo anterior y se demostro potenciacion de las corrientes de celula entera de Kv3.1 o Kv3.2 o Kv3.1 y Kv3.3.2 (en la presente memoria "Kv3.1 y/o Kv3.2") de, como media, al menos 20% de la observada con 50microM de W-ciclohexil-A/-[(7,8-dimetil-2-oxo-1,2-dihidro-3-quinolinil)metil]-W- fenilurea. Por lo tanto, en los ensayos de celulas recombinantes del Ejemplo x, todos los Ejemplos actuan como moduladores positivos. Tal y como se usa en la presente memoria, un modulador positivo de Kv3.1 y/o Kv3.2 es un compuesto que se ha mostrado que produce al menos 20% de potenciacion de las corrientes de celula entera mediadas por canales Kv3.1 humanos y/o Kv3.2 humanos expresados de forma recombinante en celulas de mairnfero, determinado usando los ensayos descritos en el Ejemplo 89 (Ensayos Biologicos).
Un analisis secundario de los datos de los ensayos descritos en el Ejemplo 89, investiga el efecto de los compuestos en la velocidad de elevacion de la corriente desde el inicio de los pulsos de voltaje despolarizantes. La magnitud del efecto de un compuesto se puede determinar a partir de la constante de tiempo (Tauact) obtenida a partir de un ajuste no lineal, usando la ecuacion dada a continuacion, de la elevacion en las corrientes de Kv3.1 o Kv3.2 despues del inicio del pulso de voltaje despolarizante.
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en la que:
5
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15
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25
Y0 es el valor de la corriente al inicio del pulso de voltaje despolarizante;
Ymax es la corriente plato;
K es la constante de velocidad, y Tauact es la constante de tiempo de activacion, que es el redproco de K.
Igualmente, tambien se puede investigar el efecto de los compuestos sobre el tiempo que tardan las corrientes de Kv3.1 y Kv3.2 en decaer hasta el cierre de los canales al final de los pulsos de voltaje despolarizantes. En este ultimo caso, la magnitud del efecto de un compuesto en el cierre de los canales se puede determinar a partir de la constante de tiempo (Taudesact) de un ajuste no lineal del decaimiento de la corriente ("corriente de cola") inmediatamente despues del final del pulso de voltaje despolarizante.
Se ha determinado la constante de tiempo para la activacion (Tauact) para varios de los compuestos de los Ejemplos. La Figura 1 muestra los datos para dos compuestos de la invencion. La Tabla 1 proporciona los datos de Tauact para todos los Ejemplos analizados de esta forma.
La Figura 1a muestra corrientes de hKv3.2 registradas usando el ensayo descrito en el Ejemplo 89. Los datos mostrados son las corrientes individuales a lo largo del periodo del paso de voltaje despolarizante a -15 mV registradas de 4 celulas diferentes en dos concentraciones del compuesto (Ejemplo 19). Los datos se ajustan por una sola curva exponencial (lmeas negras) usando el procedimiento de ajuste de Prism version 5 (Graphpad Software Inc).
La Figura 1b muestra corrientes de hKv3.2 registradas usando el ensayo descrito en el Ejemplo 89. Los datos mostrados son las corrientes individuales a lo largo del periodo del paso de voltaje despolarizante a -15 mV registradas de 2 celulas diferentes en dos concentraciones del compuesto del Ejemplo 71. Los datos se ajustan por una sola curva exponencial (lmeas negras) usando el procedimiento de ajuste de Prism version 5 (Graphpad Software Inc).
Tabla 1: Resumen de los datos de hKv3.2 del analisis del tiempo de activacion (Tauact). Para permitir la comparacion entre compuestos, la concentracion de compuesto elegida era la que produda una corriente similar (~0,3 nA) al final del pulso de voltaje, con la excepcion del veldculo, donde las corrientes maximas eran <0,1 nA.
Ejemplo
Concentracion (|jM) Tauact medio (ms) Desviacion estandar Numero de experimentos
Veldculo
- 7,1 1,7 6 (celulas)
19
6,25 9,9 2,2 5
30
12,5 7,3 1,8 4
87
0,2 50,1 7,5 5
88
0,4 19,3 1,0 4
71
0,2 23,0 6,2 4
77
0,8 9,2 2,3 2
70
3,1 13,0 2,3 2
76
3,1 7,6 1,9 2
78
3,1 8,2 2,0 2
82
3,1 10,4 2,8 2
80
3,1 9,7 1,0 2
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Como puede observarse de la Tabla 1, los Ejemplos 87, 88 y 71 incrementan de forma marcada el valor de Tauact. Mientras. los demas compuestos analizados no tuvieron un efecto marcado en Tauact comparado con el control de vehmulo (DMSO al 0,5%).
Los canales Kv3.1 y Kv3.2 deben activarse y desactivarse muy rapidamente con el fin de permitir que todas las neuronas disparen potenciales de accion a frecuencia alta (Rudy y McBain, 2001, Trends in Neurosciences 24, 517526). La ralentizacion de la activacion retrasara el inicio de la repolarizacion del potencial de accion; la ralentizacion de la desactivacion dara lugar a corrientes de hiperpolarizacion que reducen la excitabilidad de la neurona y retrasan el tiempo antes de que la neurona pueda disparar otro potencial de accion. Conjuntamente, estos dos efectos de ralentizacion daran lugar a una reduccion en lugar de una facilitacion de la capacidad de las neuronas para disparar a altas frecuencias. Asf, los compuestos que tienen este efecto de ralentizacion en los canales Kv3.1 y/o Kv3.2 se comportaran efectivamente como moduladores negativos de los canales, dando lugar a una ralentizacion del disparo neuronal. Este ultimo efecto puede observarse a partir de registros hechos de interneuronas "de disparo rapido" en la corteza del cerebro de rata, usando tecnicas electrofisiologicas, in vitro (Figura 2).
La Figura 2 muestra registros hechos de interneuronas identificadas de "disparo rapido" en la corteza somatosensorial del raton. Las neuronas son inducidas a disparar a altas frecuencias por trenes de pulsos de corrientes despolarizantes de alta frecuencia a 100, 200 y 300Hz. Se determina la capacidad de la neurona para disparar un potencial de accion en cada pulso. Una probabilidad de potencial de accion de 1 en el eje y de la grafica indica que es generado un potencial de accion por la neurona en cada uno de los pulsos de corriente despolarizante. En ausencia de farmaco (drculos negros, n=9) las neuronas manteman una probabilidad de potencial de accion de 1 hasta 300 Hz. Sin embargo, en presencia del Ejemplo 87 (1microM; drculos blancos, n=6), las neuronas no eran capaces de seguir trenes a la frecuencia mas alta. * p < 0,05, ANOVA para mediciones repetidas.
Por lo tanto, aunque todos los Ejemplos identificados en la presente memoria actuan como moduladores positivos en el ensayo de celulas recombinantes del Ejemplo 89, aquellos compuestos que incrementan notablemente el valor del Tauact reducen la capacidad de las neuronas en los tejidos nativos para disparar a velocidades altas, y como resultado actuan como moduladores negativos.
Los compuestos que actuan como moduladores positivos incluyen los Ejemplos 19, 30, 77, 70, 76, 78, 82 y 80
Los compuestos que actuan como moduladores negativos incluyen los Ejemplos 87, 88, y 71.
En un aspecto de la invencion, se proporciona un compuesto que potencia el Kv3, que esta asociado con un valor de tau medio que no es mayor que 2 desviaciones estandar mayor que el valor medio obtenido en presencia del vehmulo (DMSO al 0,5%), para usar en el tratamiento de trastornos donde es beneficiosa la modulacion positiva de la funcion de los canales Kv3.1 y/o Kv3.2, incluyendo esquizofrenia, trastorno bipolar, trastornos auditivos, trastornos del sueno, trastornos relacionados con sustancias y epilepsia.
En un aspecto de la invencion, se proporciona un compuesto que potencia el Kv3 que esta asociado con un valor de tau medio que es mayor que 2 desviaciones estandar mayor que el valor medio obtenido en presencia del vehmulo (DMSO al 0,5%), para uso en el tratamiento de trastornos donde es beneficiosa la inhibicion de la funcion de los canales Kv3.1 y/o Kv3.2, incluyendo hiperacusia, smdrome del cromosoma X fragil, y autismo.
Experimentos preclmicos
Todos los estudios in vivo se llevaron a cabo en cumplimiento de Licencias de Proyecto de acuerdo con la ley italiana (art. 7, Decreto Legislativo n° 116, 27 de enero de 1992), que reconoce la Directiva Europea 86/609/EEC, y la polttica de la empresa GlaxoSmithKline en el cuidado y uso de animales de laboratorio y los codigos de practica relacionados.
En los estudios siguientes, el Compuesto 19 es el compuesto del Ejemplo 19.
Ejemplo 90
Evaluacion de los efectos de los compuestos en el disparo de interneuronas en la corteza somatosensorial de ratones, in vitro
Animales
Se adquirieron ratones transgenicos [CB6-Tg (Gad1-EGFP) G42Zjh/J] en The Jackson Laboratory (Maine, EE.UU.). Estos ratones expresan selectivamente la protema verde fluorescente potenciada (EGFP) en la subclase de interneuronas en cesta que expresan la protema parvalbumina (Pv) ligadora de calcio. No se ha descrito la expresion de la EGFP en otras clases de interneuronas positivas para la somatostatina (SOM), colecistoquinina (CCK), calretinina (CR), y VIP. Por lo tanto, estos ratones son utiles para la identificacion del subconjunto de neuronas GABAergicas que expresan Pv que expresan canales Kv3.1 y Kv3.2 y son capaces de disparar a frecuencia alta.
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Preparacion de los cortes
Los experimentos se llevaron a cabo en cortes de cerebro de 250 pm de grosor que conteman la corteza somatosensorial. Brevemente, los cerebros se retiraron de ratones de 25-35 dfas de edad Gad1-EGFP profundamente anestesiados (isoflurano). Se hicieron cortes usando una microcortadora DTK 1000 (DSK, Japon) en la siguiente disolucion (en mM): KCI (2,5), CaCl2 (0,1), NaH2PO4 (1,2), MgCh (5), NaHCO3 (26), sacarosa (189) y glucosa (10), mantenida a 2-6°C y pasando gases 95% de 02-5% de CO2. Despues de cortar, los cortes se dejaron equilibrar en una camara de recuperacion durante al menos una hora en un lfquido cefalorraqmdeo artificial (LCRA) que contema (en mM): NaCl (120), KCI (2,5), CaCl2 (2), NaH2P04 (2,5), MgCh (1,5), NaHC03 (26), y glucosa (10), a temperatura ambiente y saturado con 95% de 02-5% de CO2.
Registros electrofisiologicos
Para los registros electrofisiologicos, se transfirio un corte a una camara de sumersion montada en la platina de un microscopio vertical (Axioskop, Carl Zeiss, Alemania) y se superfundio con LCRA oxigenado. La visualizacion de las neuronas en los cortes se llevo a cabo con un objetivo 40x usando un microscopio de video de contraste de interferencia diferencial de infrarrojos (IR-DIC) (Hamamatsu C5985, Hamamatsu City, Japon). Las interneuronas positivas para la parvalbumina se identificaron iluminando la preparacion con una lampara fluorescente con un filtro para GFP y cambiando entre microscopio de fluorescencia y video de IR-DIC. Se registraron solo las neuronas positivas para la GFP. Los registros de celulas enteras se hicieron usando pipetas de patch de vidrio de borosilicato que se extraen usando un extractor de electrodos Sutter P-97 y cargadas con una disolucion interna que contema (en mM): gluconato K (125), EGTA (10), HEPES (10), MgCh (1), KCI (10) y MgATP (2); pH 7,3 ajustado con KOH. Cuando se cargaron con esta disolucion interna, los electrodos patch teman una resistencia en la punta de 4-7 MQ. Los registros se llevaron a cabo a temperatura ambiente (20-22°C) usando un amplificador Multiclamp 700B (Axon Instruments, Foster City, CA, EE.UU.). Los protocolos de instrucciones de corrientes (indicados mas adelante) y la adquisicion de datos se llevaron a cabo usando el software pClamp 10.0 y un interfaz Digidata 1320A (Axon Instruments, Foster City, CA, EE.UU.). Los transitorios capacitivos se neutralizaron y se siguieron de forma continua la resistencia serie a lo largo del experimento. Si cambiaba > 20% la celula era descartada. Los datos se filtraron a 3 kHz y se probaron a 10 kHz.
Farmacos
Los compuestos de la invencion se disolvieron en DMSO (100%), el tetraetilamonio (TEA) y tetrodotoxina (TTX), (ambos de Sigma, Italia) se disolvieron en agua destilada y se almacenaron a -20°C hasta su uso. Los farmacos se diluyeron a la concentracion final el dfa del experimento. La concentracion final mas alta de DMSO usada era 0,1%.
Procedimiento experimental
La actividad de disparo de las interneuronas registradas se evaluo aplicando pasos de corriente largos con diferentes intensidades. Por lo tanto, despues de la formacion de un gigasello, el amplificador se cambio a modo de corriente de pinzamiento, permitiendo que la neurona alcanzara su potencial de membrana en reposo. Despues se inyecto una corriente negativa en la celula con el fin de obtener un potencial de reposo cercano a -80 mV. A partir de este estado, se aplicaron inyecciones de corriente por pasos (incrementos de 50 pA, 600 ms) para producir los potenciales de accion. Este protocolo se repitio al menos 2 veces para cada celula.
Se llevo a cabo la compensacion puente-equilibrio y se siguio continuamente el valor de Rm a lo largo del experimento.
Aplicacion de farmaco
Los cortes se incubaron en la camara de recuperacion durante al menos 1 hora en presencia de vetnculo (DMSO al 0,1%), TEA (0,5 mM) + 0,1% de DMSO, o tEa (0,5 mm) + Ejemplo 19 (1 o 10 microM). Despues de transferir un corte a la camara de registro, se mantuvo el mismo estado del farmaco por superfusion de los farmacos apropiados en el LCRA circulante.
Adquisicion y analisis de datos
Los datos no procesados se adquirieron usando Clampex 10.0 (Molecular Devices, EE.UU.). Los datos se analizaron usando el software Clampfit 10.0 (Molecular Devices, EE.UU.). La frecuencia del disparo de potencial de accion (expresada en Hz) en respuesta a inyecciones de pasos de corriente, se calculo a partir del numero de potenciales de accion detectados a lo largo del paso de corriente de 600 ms. Los valores de frecuencia obtenidos en cada paso de corriente en las mismas condiciones experimentales y en la misma celula se promediaron. Puesto que el umbral para producir potenciales de accion difena de una celula a otra, la intensidad del paso de corriente se expreso como pA del umbral de corriente para la generacion de potencial de accion, en lugar de en valores absolutos.
Para cada potencial de accion se calculo la semianchura del potencial de accion usando Clampfit. Los valores del 2°- 5° o los ultimos diez potenciales de accion producidos por un paso de corriente no saturante (tfpicamente 100-150 pA desde el umbral) se promediaron para cada una de las condiciones experimentales en cada celula analizada.
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Las diferencias estad^sticas entre el efecto de los tratamientos en la frecuencia del disparo de accion se evaluaron usando un ANOVA de doble via para mediciones repetidas y, si es necesario usando comparaciones planeadas a posteriori (las diferencias se consideraron significativas cuando p<0,05). El efecto del tratamiento con el farmaco en la semianchura del potencial de accion y en su primera amplitud derivada se evaluo usando un ANOVA. Todos los analisis estadfsticos se realizaron usando el software Statistica (StatSoft version 8). Cuando era apropiado, los resultados se dieron como la media ± EEM.
Criterios para la inclusion/exclusion de datos
Los criterios usados para incluir o excluir una celula del analisis se basaron en las condiciones de corriente- pinzamiento precisas y la estabilidad del registro a lo largo del experimento. La evaluacion en lmea permitia la exclusion de una celula cuando los valores de Rs y/o Rm cambiaban en > 20%.
Resultados
Las interneuronas registradas de cortes incubados con TEA 0,5 mM disparaban a una frecuencia maxima menor en respuesta a pasos de corrientes comparadas con neuronas registradas de los cortes de control (Figura X). Este efecto se invertfa de forma significativa en los cortes incubados con TEA (0,5 mM) mas el Ejemplo 19 a 1 jM o 10 |jM (ANOVA de una via para mediciones repetidas, * p<0,05 con respecto a la TEA sola).
Figura 3. La frecuencia de los potenciales de accion registrada de interneuronas positivas para parvalbumina en la corteza somatosensorial del raton, producidos por pasos de corrientes despolarizantes (duracion de 600 ms e incremento A de 50 pA) despues de al menos 1 hora con vehnculo (DMSO al 0,1%; drculos negros, n=6), TEA (0,5 mM) + 0,1% de DmSo (drculos blancos, n=7), TEA (0,5 mM) + Ejemplo 19 (1 jM; triangulos negros, n=9), o Tea (0,5 mM) + Ejemplo 19 (10 jM; triangulos blancos, n=5). * p<0,05; ANOVA de una via para mediciones repetidas.
Ademas, la semianchura del potencial de accion era significativamente mayor en celulas registradas de cortes incubados con TEA (0,5 mM) comparados con cortes control (DMSO al 0,1%) (Figura Y). En los cortes incubados con TEA (0,5 mM) mas Ejemplo 19 a 1 jM o 10 jM, la semianchura del potencial de accion medio disminrna significativamente un 24% y 36%, respectivamente, comparado con los cortes incubados con TEA (0,5 mM) solo (ANOVA y ensayo de Dunnett, * p<0,05, n=9; ** p<0,01, n=5, respectivamente).
Figura 4. La semianchura de los potenciales de accion producidos a partir de interneuronas positivas para parvalbumina en la corteza somatosensorial de raton. Antes de los registros, los cortes se incubaron durante al menos 1 hora con vetnculo (Control; DMSO al 0,1%, n=6), TEA (0,5 mM) + 0,1% de DMSO (n=7), TEA (0,5 mM) + Ejemplo 19 (1 jM; n=9), o TEA (0,5 mM) + EJEMPLO 19 (10 jM; n=5). * p<0,05; ** p<0,01, *** p<0,001, ANOVA seguido de ensayo de Dunnett.
Estos resultados demuestran la capacidad de los compuestos de la invencion para modular el comportamiento de interneuronas de disparo rapido en el cerebro de raton de una manera consistente con la modulacion positiva de los canales Kv3. La capacidad de aumentar la funcion de Kv3 en areas cerebrales corticales tambien es consistente con el potencial de estos compuestos para tratar esquizofrenia, trastorno bipolar, y epilepsia.
Ejemplo 91
Evaluacion de los efectos de los compuestos en las corrientes de potasio registradas de neuronas en el nucleo medial del cuerpo trapezoide en ratones, in vitro
Animales
Se usaron ratones CBA/Ca macho (de 12 - 16 dfas de edad) en estos experimentos (de acuerdo con el Acta de procedimientos cientfficos con animales de Reino Unido, 1986). Los cortes de cerebro que conteman el nucleo medial del cuerpo trapezoide (MNTB) se prepararon como se ha descrito previamente (Brew y Forsythe, 2005).
Farmacos
Los productos qmmicos y reactivos se adquirieron en Sigma, (Poole, Reino Unido) salvo que se indique otra cosa. El EJEMPLO 19 se disolvio en DMSO y se diluyo en LCRA hasta la concentracion requerida.
Registro electrofisiologico
Los registros de neuronas del MNTB identificadas se llevaron a cabo como se ha descrito previamente (Brew y Forsythe, 2005). Los cortes se pusieron en una camara de superfusion en una platina de microscopio invertido y se perfundieron continuamente con LCRA gasificado (95% de O2-5% de CO2) a una velocidad de 1 mL.min-1 a temperatura ambiente. Los registros de celula entera se hicieron de neuronas de MNTB identificadas visualmente usando un amplificador Axopatch 700B (Molecular Devices, Union City, CA, EE.UU.). La disolucion de patch contema (en mM) gluconato de potasio (97,5), KCI (32,5), Hepes (40), EgTa (5), MgCh (1), Na2fosfocreatina (5), pH
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7,2 con KOH. Las pipetas teman resistencias de 3-5 MQ y las resistencias serie eran 6-10 MQ (compensadas por 70%, 10 |js de retraso). La resistencia de acceso se siguio con frecuencia y se descarto el registro si los aumentos eran mayores que 2 MQ.
Una vez obtenida una configuracion de celula entera, las celulas se mantuvieron a -60 mV antes de la aplicacion de los protocolos de voltaje como sigue: las celulas se pasaron del potencial de mantenimiento a -90 durante 700 ms y se pasaron a -40mV durante 25 ms y despues se aplico un pulso de voltaje a un intervalo de voltajes de -100 a +40 mV (incrementos de 10 mV) durante 220 ms antes de volver al potencial de mantenimiento. Despues de completar este protocolo, se anadio TEA (1 mM) al medio de superfusion. Despues de 5 minutos, se llevo a cabo un segundo conjunto de registros usando el mismo protocolo de voltajes. Despues de esto, se anadio el Compuesto 19 (10 microM) al LCRA, en presencia continua de TEA (1 mM), y despues de otros 5 minutos, se hizo un conjunto final de registros con el protocolo de voltaje.
Analisis estadfstico
Las corrientes producidas por el paso de voltaje a +40 mV se compararon entre los tratamientos con farmaco para cada una de las celulas usando una prueba t para datos no pareados.
Resultados
La TEA (1 mM) redujo significativamente la amplitud de las corrientes de potasio activadas por alto voltaje, de salida, producidas por pasos de voltaje a +40 mV (Figura 5). Este efecto se invirtio por la aplicacion posterior del EJEMPLO 19 (10 microM).
Figura 5. Corrientes de potasio activadas por alto voltaje registradas de neuronas MNTB identificadas visualmente en el raton, in vitro. Los datos mostrados son la media (+/- d.e.) de la amplitud de corriente producida por pasos de voltaje a +40 mV en diferentes condiciones de farmacos. TEA (1 mM), TEA (1 mM) + EJEMPLO 19 (10 microM). El analisis estadfstico se llevo a cabo usando una prueba t para datos no pareados.
Estos datos indican que los compuestos de la invencion pueden modular corrientes de potasio activadas por alto voltaje (que se presume que esta mediado por canales Kv3.1; Brew y Forsythe, 2005) en neuronas del MNTb, una region del tronco cerebral que procesa la informacion auditiva. Este resultado apoya la utilidad de los compuestos de la invencion para el tratamiento de trastornos auditivos.
Ejemplo 92
Modelo de convulsiones por electrochoque en ratas Preparacion experimental
Las ratas CD macho (85-130 g) fueron proporcionadas por Charles River, Italia. Los animales se albergaron en grupo con acceso libre a alimento (alimento para roedores estandar) y agua con un ciclo de luz/oscuridad de 12 h (las luces se encienden a las 06:00 h). En todos los casos se dejo un periodo de al menos 5 dfas entre la llegada a GSK y el estudio.
Protocolo Experimental
Se administro a los animales un compuesto de ensayo con la dosis, por la via y tiempo de pretratamiento apropiados y se devolvieron a sus jaulas. El ensayo se hizo en una sala separada de la usada para albergarlos. El ensayo implicaba determinar el umbral para las convulsiones extensoras tonicas de las patas traseras usando un estimulador Hugo Sachs Electronik que suministra una corriente constante de 0,3 segundos de duracion, 50 Hz, forma de onda sinusoidal, completamente ajustable entre 1 y 300 mA. Los estfmulos se suministraron mediante electrodos corneales (Stean TO, Atkins AR, Heidbreder CA, Quinn LP, Trail BK, Upton N. (2005) Br J Pharmacol, 144(5):628-35). El umbral de convulsiones se determino usando el metodo de "arriba y abajo" de Kimball et al. (1957) (Kimball AW, Burnett WT Jr, Doherty DG. (1957) Radiat Res. 7(1):1-12). El primer animal ensayado en cada grupo se estimulo con una corriente que se podfa esperar que fuera cercana al umbral para la induccion de una convulsion. Si no se induda una convulsion tonica, entonces el siguiente animal del grupo recibfa un estfmulo 5 mA mayor. Si se induda una convulsion tonica, entonces el siguiente animal recibfa un estfmulo 5 mA menor. Esto se repite para todos los animales dentro del grupo de control (veldculo). En el caso de grupos tratados con un compuesto de ensayo, se usaron pasos de 5 a 10 mA. Al final del estudio, se tomaron muestras de sangre para el analisis de las concentraciones de farmaco en este compartimento (n=4/grupo).
Farmacos y materiales
Todas las dosis se calcularon como base. Se suspendio valproato de sodio en Methocell al 1% (p/v) y se administro por via oral (p.o.) a 5 mL/kg 1 hora antes del ensayo. El compuesto 19 se disolvio en DMSO y despues se suspendio en Methocell al 1% (p/v) a una concentracion final en DMSO de 5% (v/v). Despues se administro el compuesto 19 via p.o. a 5 mL/kg 2 horas antes del ensayo.
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La induccion de convulsiones se mide como un efecto de todo o nada puntuado como presente (+) o ausente (0) para cada animal. Los datos para cada grupo de tratamiento se registraron como el numero de + y de 0 en cada nivel de corriente usado y esta informacion despues se uso para calcular el valor de CC50 (corriente requerida para que 50% de los animales muestren comportamiento de convulsiones) + error estandar de la media, segun el metodo de Kimball et al. (1957). Los efectos de los farmacos se calcularon como el % de cambio de la CC50. Las diferencias significativas entre animales tratados con farmaco y grupos tratados con el vehuculo apropiado, se evaluaron segun los metodos de Litchfield y Wilcoxon (1949).
Resultados
El tratamiento previo con el Compuesto 19 se asocio con un aumento significativo del umbral de convulsiones a ambas dosis ensayadas: A la dosis de 30 mg/kg p.o., el Compuesto 19 produda un aumento de 91% del umbral de convulsiones, mientras que a la dosis de 60 mg/kg p.o., el aumento del umbral de convulsiones era +218%. El aumento producido por la dosis mayor del Compuesto 19 era similar al aumento producido por el control positivo, el valproato de sodio 300 mg/kg p.o. (+ 258%).
Las concentraciones en la sangre del Compuesto 19 medidas en animales satelite 2 horas despues de la administracion de la dosis eran 5,3 y 9,1 pg/mL despues de dosis de 30 y 60 mg/kg p.o., respectivamente. Estas concentraciones son equivalentes a las concentraciones no unidas en la sangre de 1,3 y 2,2 pM, respectivamente, y por lo tanto estan de acuerdo con las concentraciones del Compuesto 19 que producen un aumento significativo en las corrientes mediadas por Kv3 observadas en el ensayo de electrofisiologfa de Kv3 humano recombinante in vitro, descrito antes.
Conclusiones
Estos resultados sugieren que el Compuesto 19 tiene eficacia anticonvulsiva, y que este efecto es probable que este mediado por la modulacion positiva de los canales de potasio Kv3.
Ejemplo 93
Hiperactividad inducida por psicoestimulantes en ratones Preparacion experimental
Los ratones macho CD-1 (25-35 g) fueron proporcionados por Charles River, Italia. Los animales se albergaron en grupo con acceso libre a alimento (alimento para roedores estandar) y agua con un ciclo de luz/oscuridad de 12 h (las luces se encienden a las 06:00 h). En todos los casos se dejo un periodo de al menos 5 dfas entre la llegada a GSK y el estudio.
Protocolo Experimental
Se administro a los animales un compuesto de ensayo con la dosis, por la via y tiempo de pretratamiento apropiados y se devolvieron a sus jaulas. El ensayo se hizo en una sala separada de la usada para albergarlos. Los ratones se trataron por via oral (p.o.) con el compuesto de ensayo y se pusieron individualmente en una caja de Perspex (longitud 20,5 cm, anchura 20,5 cm, altura 34 cm) cubierta con una tapa perforada. Se colocaron sensores de seguimiento por infrarrojos alrededor de las paredes del penmetro (sensores horizontales). Se colocaron dos sensores adicionales 2,5 cm por encima del suelo en lados opuestos (sensores verticales). Los datos se recogieron y analizaron usando un sistema VersaMax System (Accuscan Instruments Inc., Columbus, OH) que a su vez transfena la informacion a un ordenador. Despues de 30 min de habituacion, los ratones se trataron con anfetamina administrada por via intraperitoneal (i.p.) a 2 mg/kg a 10 mL/kg, y posteriormente se evaluo la actividad locomotora en el campo de ensayo a lo largo de otros 60 minutos. La actividad locomotora se determino como la distancia total (cm) recorrida por cada raton en el campo de ensayo en el periodo de ensayo de 60 minutos.
Farmacos y materiales
Todas las dosis se calcularon como base. La clozapina se disolvio en agua destilada y se administraron 3 mg/kg via intraperitoneal (i.p.) a 10 mL/kg. El compuesto 19 (10, 30 o 60 mg/kg) o vehfculo (HPMC al 0,5% p/v, Tween80 al 0,1% v/v en agua) se administraron p.o. a 10 mL/kg. Tanto la clozapina como el Compuesto 19 se administraron inmediatamente antes poniendo el animal en el campo de ensayo (30 minutos antes de la administracion de anfetamina).
Resultados
La anfetamina sola produda un aumento grande y significativo de la distancia total recorrida. Una dosis de 30 mg/kg p.o. del Compuesto 19 reduda significativamente el aumento de la distancia total recorrida producido por la anfetamina. Una dosis mayor, de 60 mg/kg p.o. del Compuesto 19, reduda mas el aumento de la actividad
locomotora inducido por la anfetamina de una forma similar al control positivo, la clozapina (3 mg/kg i.p.). Los datos se resumen en la Tabla 1.
Tabla 1: Efectos del Compuesto 19 en la hiperlocomocion inducida por anfetamina en el raton. El Compuesto 19 se administro p.o. 30 minutos antes de la anfetamina (2 mg/kg i.p.). La clozapina se administro i.p. 30 minutos antes de 5 la anfetamina (2 mg/kg i.p.). La distancia total se evaluo a lo largo de 60 minutos empezando inmediatamente despues de la administracion de anfetamina. Los datos se expresan como media ± eem. Los datos se sometieron a un analisis de varianza de una via (ANOVA) seguido de ensayo de Dunnett (** = p<0,01 frente a tratamiento solo con anfetamina).
Tratamiento
Distancia total recorrida (cm)
Vehfculo
1.049 ± 522**
Anfetamina (AMPH) 2,0 mg/kg
16.304 ± 3.309
AMPH 2mg/kg + Compuesto 19 10 mg/kg
15.267 ± 3.166
AMPH 2mg/kg + Compuesto 19 30 mg/kg
5.790 ± 1.436**
AMPH 2mg/kg + Compuesto 19 60 mg/kg
1.494 ± 378**
AMPH 2 mg/kg + Clozapina 3 mg/kg
932 ± 362**
10 Conclusiones
Estos resultados muestran que el Compuesto 19, a dosis similares a las que muestran eficacia anticonvulsiva, es capaz de prevenir la hiperactividad inducida por el psicoestimulante, anfetamina. El Compuesto 19 y otros compuestos que modulan de forma positiva los canales Kv3.1 y/o Kv3.2 pueden ser asf utiles en el tratamiento de trastornos asociados con hiperactividad, tales como mama bipolar, o disrupcion del sistema de la dopamina, tal 15 como puede ocurrir en la dependencia de drogas, trastornos de deficit de atencion con hiperactividad (ADHD), o esquizofrenia.
Ejemplo 94
Comportamiento del titi comun
Los efectos ansioltticos centrales de un compuesto de ensayo pueden evaluarse a partir de la capacidad del 20 compuesto de reducir las posturas defensivas caractensticas de titfes en respuesta a una estrategia amenazante por un ser humano. El ensayo tambien puede usarse para evaluar los efectos sedantes o hipnoticos de un compuesto de ensayo a partir de su capacidad de reducir el numero de saltos hechos por los animales. El estudio se baso en el metodo descrito en Costall, B. et al (1988) Br. J. Pharmac. 95 p475P. Se usaron en el estudio titles comunes macho y hembra criados en el laboratorio (GSK SpA, Italia) con mas de 2 anos de edad, que pesaban 300-500 g. Los 25 animales se pusieron en jaulas en parejas, en una habitacion de estabulacion mantenida a 25 ± 1°C, 60% de humedad, y un ciclo de luz/oscuridad de 12 horas (las luces se encienden a las 06:00, con 30 minutos de amanecer y atardecer simulados). Se implico en el ensayo a los dos animales en cada pareja, y se llevo a cabo con los animales en su jaula.
Como puede haber variabilidad en la respuesta de comportamiento entre diferentes titles, los animales 30 "respondedores" se pre-seleccionaron para cumplir los criterios de lmea base de al menos 10 posturas presentadas en el periodo de tiempo de 2 minutos despues de la aproximacion del operador humano.
Las posturas registradas en el ensayo fueron las descritas por Costall et al supra;
- Presentacion genital ("Postura de la Cola"): la espalda del animal se vuelve hacia el observador con elevacion de la cola para exponer la region genital;
35 - Marcaje por olor: el animal marca con olor las superficies de la jaula usando glandulas de olor circun-anales y
circun-genitales;
- Mirada fija con ojos entrecerrados: el animal mira fijamente al observador con los mechones de las orejas aplanados y los ojos reducidos a "rendijas"
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- Arco-piloereccion: el animal se mueve alrededor de la jaula con la espalda arqueada back y piloereccion de cuerpo completo, sin establecer contacto visual con el observador
El numero de saltos desde la parte posterior de la jaula hacia la parte frontal de la jaula proporciono un mdice de la actividad locomotora, que podna usarse para evaluar el potencial de un efecto hipnotico, sedacion, o estimulacion locomotora producida por el compuesto de ensayo.
Farmacos y materiales
Una unica dosis del Compuesto 19 (0,3, 1 o 3mg/kg) o vehnculo (HPMC al 0,5% (p/v), Tween80 al 0,1% (v/v) en agua) se administro oralmente (p.o.) 2 horas antes del ensayo (n=5 - 6 animales por grupo).
Resultados
El Compuesto 19 (1 y 3mg/kg p.o.) redujo significativamente el numero de saltos hechos por los animales durante el periodo de ensayo de 2 minutos, sin ningun efecto en las posturas a ninguna dosis, indicativo de efecto sedante o hipnotico. Los datos se resumen en la Tabla 2.
Tabla 2: Efectos del Compuesto 19 en el comportamiento del tith El Compuesto 19 se administro p.o. 2 horas antes del ensayo. Los datos se expresan como media ± eem. Los datos se sometieron a un analisis de varianza de una via (ANOVA) seguido de ensayo de Dunnett, comparando cada dosis de compuesto con el tratamiento de vehnculo relacionado (* = p<0,05 frente a los animales tratados con vehnculo; ** = p<0,01 frente a los animales tratados con vehnculo).
Tratamiento
Numero de posturas Numeros de Saltos
Vehnculo
12,2 ± 0,3 22,3 ± 2,5
Compuesto 19
0,3 mg/kg 12,2 ± 1,03 21,3 ± 2,7
Compuesto 19
1 mg/kg 10,0 ± 1,2 15,3 ± 2,5*
Compuesto 19
3 mg/kg 9,7 ± 1,1 11,5 ± 1,9**
Conclusiones
Estos resultados sugieren que el Compuesto 19 tiene un perfil hipnotico o sedante en primates no humanos, e indica asf que el Compuesto 19 y otros compuestos que modulan de forma positiva los canales Kv3.1 y/o Kv3.2 podnan ser utiles en el tratamiento de trastornos del sueno.
Ejemplo 95
Farmaco-electroencefalograffa (fEEG) en el titi comun Animales y cirugfa
Se usaron en este estudio titfes comunes (Callithrix jacchus) macho (con vasectoirna) y hembras criados en el laboratorio con mas de 2 anos de edad, que pesaban 250-500 g. Los animales se pusieron en jaulas en parejas, en una habitacion mantenida a 25 ± 1°C, 60% de humedad y un ciclo de luz/oscuridad de 12 horas (las luces se encienden a las 06:00, con 30 min de amanecer y atardecer simulados). Los animales recibfan una dieta estandar y agua para beber a voluntad. Solo un animal de cada pareja estaba implicado en el ensayo, que se llevo a cabo con el animal situado en la jaula.
El efecto de los compuestos de la invencion se evaluo usando registro telemetrico de la EEG cortical (ECoG). Se implanta un transmisor de telemetna de multicanal (DSI modelo TL11M2-F40-EET) de forma intraperitoneal usando tecnicas quirurgicas convencionales en titfes anestesiados. Los electrodos de registro se fijaron de forma permanente, con cemento dental, al craneo directamente en contacto con la duramadre mediante dos agujeros taladrados en la region fronto-parietal. Despues de cirugfa, los animales se albergaron por parejas (uno de la pareja con implante y uno no operado) en sus jaulas con acceso a alimento y agua a voluntad. Los animales demostraron un repertorio de comportamientos normal inmediatamente despues de recuperarse de la cirugfa; sin embargo, el fEEG se evaluo al menos 3 semanas mas tarde. Todos los estudios in vivo se llevaron a cabo de acuerdo con las leyes italianas y conforme a los estandares eticos de GlaxoSmithkline.
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Procedimiento experimental
Los animales se pusieron en las cajas nido en sus jaulas y se registraron las senales del EEG usando el software Dataquest ART durante un periodo de 5 min para cada tiempo de medicion y se analizaron usando el software Spike2 (CED, Reino Unido). Se determino la potencia espectral en cada banda de frecuencia para cada generacion de 2 segundos durante el periodo de pretratamiento y se promediaron; de forma similar se determino la potencia espectral en cada banda para generaciones de 2 segundos sucesivas de cada periodo de 5 min de registro despues del tratamiento con veldculo o farmaco. El cambio en la potencia espectral absoluta, para cada una de las diferentes bandas (delta, theta, alfa y beta) se calculo fuera de lmea.
Los tratamientos con farmacos se asignaron de acuerdo con un diseno cruzado completo: Todos los tratamientos se distribuyeron aleatoriamente entre animales, en sesiones experimentales separadas, cada animal recibio vehmulo y cada dosis de farmaco, despues de un periodo de lavado apropiado.
Seis animales se trataron por via oral con el EJEMPLO 30 a las dosis de 0,3, 1 y 3 mg/kg (1 mL/kg) y las senales del EEG se registraron a los +15, 30, 60, 90, 120 y 180 minutos despues del tratamiento. El EJEMPLO 30 se suspendio en disolucion acuosa de captisol al 12,5% (p/v) que contema Tween80 al 0,1% (p/v) y HPMC al 0,5% (p/v).
Analisis de datos
Se consideraron cuatro bandas de frecuencia diferentes: delta (1,50-6,00 Hz), theta (6,00-8,00 Hz), alfa (8,00-12,00 Hz) y beta (12,00-30,00 Hz). Los valores de la potencia espectral en cada banda en cada tiempo de medicion primero se transformaron con el logaritmo y despues se analizaron con un modelo de efecto mixto con el tiempo como el efecto fijo, el nivel base como covariable, y animal como termino aleatorio. Los datos se resumen como la media de los cambios de porcentaje desde el valor de lmea base y error estandar.
Resultados
Los cambios farmaco-EEG observados en estos estudios muestran que, comparado con el vehmulo, el EJEMPLO 30 a la dosis mas alta (3 mg/kg) induda un incremento estadfsticamente significativo de la potencia absoluta en la banda delta entre 30 y 120 minutos (p<0,05) y un incremento estadfsticamente significativo en la potencia de la banda theta a los 60 minutos (p<0,05). A la dosis intermedia (1 mg/kg) el EJEMPLO 30 induda un incremento ligeramente significativo (p<0,10) en la potencia absoluta en la banda delta a los 30 minutos y una reduccion significativa simultanea en la banda beta (p<0,05). No se observaron efectos significativos en la banda alfa a ninguna de las dosis del EJEMPLO 30.
Estos resultados sugieren que los compuestos de la invencion pueden tener un perfil semejante a antipsicotico, ya que puede observarse un patron similar de cambios en EEG con agentes antipsicoticos en seres humanos.

Claims (27)

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    1. Un compuesto de formula (la)
    imagen1
    en la que:
    R1 es halo, alquiloCM, alcoxiC1-4, halo-alquiloCM, halo-alcoxiC1-4, o ciano;
    R2 es H, halo, ciano, alquiloCM o alcoxiCM; con la condicion de que cuando R2 es H, R1 no esta en la posicion para; X es C o N;
    Y es C o N;
    R3 es alquiloCM;
    R4 es H, deuterio, o alquiloC-M; o R3 y R4 pueden fusionarse para formar un grupo espiro carbociclilo C3-4; o una sal farmaceuticamente aceptable de este.
  2. 2. Un compuesto segun la reivindicacion 1 en el que R1 es halo, alquiloC1-4, alcoxiCM, halo-alcoxiC1-4 o ciano y R2 es H, halo, alquiloC1-4 o alcoxiCM; con la condicion de que cuando R2 es H, R1 no esta en la posicion para; o una sal farmaceuticamente aceptable de este.
  3. 3. Un compuesto segun la reivindicacion 1 o 2 en el que R1 es halo, alquiloCM o alcoxiCM; o una sal farmaceuticamente aceptable de este.
  4. 4. Un compuesto segun la reivindicacion 1 en el que R1 es alquiloCM, alcoxiCM, o halo-alcoxiCM; R2 es H, ciano o alquilo; X es N, Y es N o C, R3 es alquiloCM, y R4 es alquiloCM o H; o una sal farmaceuticamente aceptable de este.
  5. 5. Un compuesto segun la reivindicacion 1 o la reivindicacion 4 en el que R1 es propilo, butilo, metoxi, propoxi, o trifluorometoxi; R2 es H, ciano o metilo; X es N, Y es N o C, R3 es etilo, y R4 es metilo o H; o una sal farmaceuticamente aceptable de este.
  6. 6. Un compuesto segun la reivindicacion 1, en el que R1 es alquiloCM, alcoxiCM, halo-alquiloCM o halo-alcoxiCM.
  7. 7. Un compuesto segun la reivindicacion 1, en el que R2 es alquiloCM o alcoxiCM.
  8. 8. Un compuesto segun la reivindicacion 1, en el que R3 es metilo.
  9. 9. Un compuesto segun la reivindicacion 1, en el que R4 es H o alquiloCM.
  10. 10. Un compuesto segun la reivindicacion 1 seleccionado del grupo que consiste en: (5R)-5-metil-3-{4-[(3-metilfenil)oxi]fenil}-2,4-imidazolidindiona; (5R)-5-metil-3-(4-{[3-(metiloxi)fenil]oxi}fenil)-2,4-imidazolidindiona; (5R)-3-(4-{[3-(etiloxi)fenil]oxi}fenil)-5-metil-2,4-imidazolidindiona; (5R)-3-{4-[(3-cloro-5-fluorofenil)oxi]fenil}-5-metil-2,4-imidazolindiona; (5R)-3-{4-[(3-cloro-4-fluorofenil)oxi]fenil}-5-metil-2,4-imidazolidindiona; (5S)-3-{4-[(3-cloro-4-fluorofenil)oxi]fenil}-5-metil-2,4-imidazolidindiona;
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    (5R)-5-metil-3-(4-{[4-metil-3-(metiloxi)feml]oxi}fenil)-2,4-imidazolidindiona;
    (5R)-5-metil-3-(6-{[3-(1-metiletil)feml]oxi}-3-piridiml)-2,4-imidazolidindiona;
    (5R)-5-metil-3-[6-({3-[(1-metiletil)oxi]feml}oxi)-3-pindiml]-2,4-imidazolidindiona;
    (5R)-3-{6-[(2,5-dimetilfeml)oxi]-3-piridiml}-5-metil-2,4-imidazolidindiona;
    (5R)-3-{6-[(2,3-dimetilfenil)oxi]-3-piridinil}-5-metil-2,4-imidazolidindiona;
    (5R)-3-{6-[(2,6-dimetilfeml)oxi]-3-piridiml}-5-metil-2,4-imidazolidindiona;
    (5R)-3-{6-[(2-etilfenil)oxi]-3-piridinil}-5-metil-2,4-imidazolidindiona;
    (5R)-5-metil-3-(6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)-2,4-imidazolidindiona;
    (5R)-5-metil-3-(6-{[2-metil-5-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)-2,4-imidazolidindiona;
    (5R)-5-metil-3-(6-{[2-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)-2,4-imidazolidindiona;
    (5R)-5-etil-3-(4-{[3-(metiloxi)feml]oxi}fenil)-2,4-imidazolidindiona;
    (5R)-5-etil-3-(6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)-2,4-imidazolidindiona;
    (5S)-5-etil-3-(6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)-2,4-imidazolidindiona;
    (5R)-5-etil-3-(6-{[3-(1-metiletil)fenil]oxi}-3-piridinil)-2,4-imidazolidindiona;
  11. 5.5- dimetil-3-(4-{[3-(metiloxi)fenil]oxi}fenil)-2,4-imidazolidindiona; 3-{4-[(2,3-dimetilfenil)oxi]fenil}-5,5-dimetil-2,4-imidazolidindiona; 3-{6-[(2-etilfenil)oxi]-3-piridinil}-5,5-dimetil-2,4-imidazolidindiona;
    3- {6-[(2,6-dimetilfenil)oxi]-3-piridinil}-5,5-dimetil-2,4-imidazolidindiona; (5R)-5-(1-metiletil)-3-(4-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}fenil)-2,4-imidazolidindiona; (5R)-5-metil-3-(2-{[3-(1-metiletil)fenil]oxi]-5-pirimidinil)-2,4-imidazolidindiona; (5R)-5-etil-3-(2-{[3-(etiloxi)-4-metilfeml]oxi}-5-pinmidiml)-2,4-imidazolidindiona; (5R)-5-(1,1-dimetiletil)-3-(6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)-2,4-imidazolidindiona; (5R)-5-etil-5-metil-3-(6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)-2,4-imidazolidindiona; 7-(6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)-5,7-diazaespiro[3.4]octano-6,8-diona; 6-(6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)-4,6-diazaespiro[2.4]heptano-5,7-diona;
    4- {[5-(4,4-dimetil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil)-2-piridinil]oxi}-2-(1-metiletil)benzonitrilo; 4-{[5-(4,4-dimetil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil)-2-piridinil]oxi}-2-[(trifluorometil)oxi]benzonitrilo; 3-{6-[(4-fluoro-3-metilfenil)oxi]-3-piridinil}-5,5-dimetil-2,4-imidazolidindiona; 3-{6-[(4-fluoro-2-metilfenil)oxi]-3-piridinil}-5,5-dimetil-2,4-imidazolidindiona;
  12. 5.5- dimetil-3-(6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)-2,4-imidazolidindiona; (5R)-5-(1-metiletil)-3-(6-{[4-metil-3-(metiloxi)feml]oxi}-3-pindiml)-2,4-imidazolidindiona; 3-(6-{[2-(1,1-dimetiletil)fenil]oxi}-3-piridinil)-5,5-dimetil-2,4-imidazolidindiona; 3-(2-{[2-(1,1-dimetiletil)fenil]oxi}-5-pirimidinil)-5,5-dimetil-2,4-imidazolidindiona; (5R)-5-etil-5-metil-3-(2-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-5-pirimidinil)-2,4-imidazolidindiona; (5R)-5-etil-3-(2-{[3-(etiloxi)-4-metilfenil]oxi}-5-pirimidinil)-5-metil-2,4-imidazolidindiona;
  13. 5.5- dimetil-3-[6-({3-[(trifluorometil)oxi]fenil}oxi)-3-piridinil]-2,4-imidazolidindiona;
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    2- cloro-4-{[5-(4,4-dimetil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil)-2-piridinil]oxi}benzonitrilo;
  14. 5.5- dimetil-3-[6-({4-metil-3-[(trifluorometil)oxi]fenil}oxi)-3-piridinil]-2,4-imidazolidindiona; 4-{[5-(4,4-dimetil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil)-2-piridinil]oxi}-2-(metiloxi)benzonitrilo; 4-{[5-(4,4-dimetil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil)-2-piridinil]oxi}-3-metilbenzonitrilo; 4-{[5-(4,4-dimetil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil)-2-piridinil]oxi}-3-(trifluorometil)benzonitrilo; 4-{[5-(4,4-dimetil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil)-2-piridinil]oxi}-2-etilbenzonitrilo; 4-{[5-(4,4-dimetil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil)-2-pirimidinil]oxi}-2-etilbenzonitrilo;
    3- ciclopropil-4-{[5-(4,4-dimetil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil)-2-piridinil]oxi}benzonitrilo;
    4- {[5-(4,4-dimetil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil)-2-piridinM]oxi}-3-(1,1 -dimetiletil)benzonitr^ilo;
    2-[(cidopropilmetil)oxi]-4-{[5-(4,4-dimetil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil)-2-piridinil]oxi}benzonitrilo; 4-{[5-(4,4-dimetil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil)-2-piridinil]oxi}-2-(etiloxi)benzonitrilo;
    2- ciclopropil-4-{[5-(4,4-dimetil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil)-2-piridinil]oxi}benzonitrilo;
  15. 5.5- dimetil-3-[2-({4-metil-3-[(trifluorometil)oxi]fenil}oxi)-5-pirimidinil]-2,4-imidazolidindiona; 4-{[5-(4,4-dimetil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil)-2-pirimidinil]oxi}-3-(1,1-dimetiletil)benzonitrilo; 4-{[5-(4,4-dimetil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil)-2-piridinil]oxi}-2-[(1-metiletil)oxi]benzonitrilo; 4-({5-[(4R)-4-etil-4-metil-2,5-dioxo-1-imidazolidiml]-2-piridmN}oxi)-2-[(1-metNetN)oxi]benzomtrNo;
    3- ddopropil-4-({5-[(4R)-4-etil-4-metil-2,5-dioxo-1-imidazolidiml]-2-pindiml}oxi)benzomtnlo;
    4- ({5-[(4R)-4-etil-4-metil-2,5-dioxo-1-imidazolidiml]-2-piridinil}oxi)-2-[(trifluorometil)oxi]benzomtrilo;
    2- ddopropil-4-({5-[(4R)-4-etil-4-metil-2,5-dioxo-1-imidazolidiml]-2-pindiml}oxi)benzomtnlo; (5R)-5-etil-5-metil-3-[2-({4-metil-3-[(tnfluorometil)oxi]feml}oxi)-5-pinmidiml]-2,4-imidazoNdindiona;
    3- (1,1-dimetiletil)-4-({5-[(4R)-4-etil-4-metil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil]-2-pirimidinil}oxi)benzonitrilo;
    3- (1,1-dimetiletil)-4-({5-[(4R)-4-etil-4-metil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil]-2-piridinil}oxi)benzonitrilo;
    4- {[4-(4,4-dimetil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil)fenil]oxi}-2-(metiloxi)benzonitrilo;
    4-{[4-(4,4-dimetil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil)fenil]oxi}-2-(etiloxi)benzonitrilo; 4-({4-[(4R)-4-etil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil]fenil}oxi)-2-(etiloxi)benzonitrilo; 3-ciclopropil-4-({5-[(4R)-4-etil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil]-2-piridinil}oxi)benzonitrilo;
    3- (1,1-dimetiletil)-4-({5-[(4R)-4-etil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil]-2-piridinil}oxi)benzonitrilo;
    4- ({5-[(4R)-4-etil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil]-2-piridinil}oxi)-2-(metiloxi)benzonitrilo; 4-({4-[(4R)-4-etil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil]fenil}oxi)-2-(metiloxi)benzonitrilo;
    2-[(ciclopropilmetil)oxi]-4-({5-[(4R)-4-etil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil]-2-piridinil}oxi)benzonitrilo; (5R)-5-etil-3-[6-({4-metil-3-[(trifluorometil)oxi]fenil}oxi)-3-piridinil]-2,4-imidazolidindiona;
    2-ciclopropil-4-({5-[(4R)-4-etil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil]-2-piridinil}oxi)benzonitrilo; 4-({5-[(4R)-4-etil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil]-2-piridinil}oxi)-2-(1-metiletil)benzonitrilo; (5R)-5-etil-3-[2-({4-metil-3-[(tnfluorometil)oxi]feml}oxi)-5-pinmidiml]-2,4-imidazolidindiona; 4-({5-[(4R)-4-etil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil]-2-piridinil}oxi)-2-[(1-metiletil)oxi]benzonitrilo; 4-({5-[(4R)-4-etil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil]-2-piridinil}oxi)-3-metilbenzonitrilo;
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    3- etil-4-({5-[(4R)-4-etil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil]-2-pinmidinil}oxi)benzonitnlo;
    4- ({5-[(4R)-4-etil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil]-2-pirimidinil}oxi)-3-metilbenzonitrilo;
    3- (1,1-dimetiletil)-4-({5-[(4R)-4-etil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil]-2-pinmidinil}oxi)benzonitrilo y
    4- ({5-[(4R)-4-etil-4-metil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil]-2-piridinil}oxi)-2-(1-metiletil)benzonitrilo; o una sal farmaceuticamente aceptable de este.
  16. 11. Un compuesto segun la reivindicacion 10, en el que el compuesto se selecciona del grupo que consiste en: (5R)-5-etil-3-(6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)-2,4-imidazolidindiona; (5R)-5-etil-5-metil-3-(6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)-2,4-imidazolidindiona; 4-({5-[(4R)-4-etil-4-metil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil]-2-piridinil}oxi)-2-[(trifluorometil)oxi]benzonitrilo; (5R)-5-etil-5-metil-3-[2-({4-metil-3-[(tnfluorometil)oxi]fenil}oxi)-5-pinmidinil]-2,4-imidazolidindiona;
    3- (1,1-dimetiletil)-4-({5-[(4R)-4-etil-4-metil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil]-2-pindinil}oxi)benzonitnlo; (5R)-5-etil-3-[6-({4-metil-3-[(tnfluorometil)oxi]fenil}oxi)-3-piridinil]-2,4-imidazolidindiona;
    4- ({5-[(4R)-4-etil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil]-2-piridinil}oxi)-2-(1-metiletil)benzonitrilo; (5R)-5-etil-3-[2-({4-metil-3-[(tnfluorometil)oxi]fenil}oxi)-5-pinmidinil]-2,4-imidazolidindiona; 4-({5-[(4R)-4-etil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil]-2-piridinil}oxi)-2-[(1-metiletil)oxi]benzonitrilo; 4-({5-[(4R)-4-etil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil]-2-piridinil}oxi)-2-[(trifluorometil)oxi]benzonitrilo; 3-(1,1-dimetiletil)-4-({5-[(4R)-4-etil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil]-2-pinmidinil}oxi)benzonitnlo; o una sal farmaceuticamente aceptable de este.
  17. 12. Un compuesto segun la reivindicacion 1, seleccionado del grupo que consiste en (5R)-5-etil-3-(6-{[4-metil-3- (metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)-2,4-imidazolidindiona
    imagen2
    (5R)-5-etil-3-(2-{[3-(etiloxi)-4-metilfenil]oxi}-5-pinmidinil)-2,4-imidazolidindiona
    imagen3
    (5R)-5-etil-5-metil-3-(6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)-2,4-imidazolidindiona
    imagen4
    imagen5
    5,5-dimetil-3-[2-({4-metil-3-[(trifluorometil)oxi]fenil}oxi)-5-pirimidinil]-2,4-imidazolidindiona
    imagen6
    5 (5R)-5-etil-5-metil-3-[2-({4-metil-3-[(tnfluorometil)oxi]fenil}oxi)-5-pinmidinil]-2,4-imidazolidindiona
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    (5R)-5-etil-3-[6-({4-metil-3-[(tnfluorometil)oxi]fenil}oxi)-3-piridinil]-2,4-imidazolidindiona
    imagen8
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    y (5R)-5-etil-3-[2-({4-metil-3-[(trifluorometil)oxi]fenil}oxi)-5-pinmidinil]-2,4-imidazolidindiona
    imagen9
  18. 13. Un compuesto segun la reivindicacion 12, en el que el compuesto es: (5R)-5-etil-3-(6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)-2,4-imidazolidindiona
    imagen10
  19. 14. Un compuesto segun la reivindicacion 12, en el que el compuesto es:
    15 (5R)-5-etil-5-metil-3-[2-({4-metil-3-[(tnfluorometil)oxi]fenil}oxi)-5-pinmidinil]-2,4-imidazolidindiona
    imagen11
  20. 15. Un compuesto segun la reivindicacion 12, en el que el compuesto es: (5R)-5-etil-3-[2-({4-metil-3-[(tnfluorometil)oxi]fenil}oxi)-5-pinmidinil]-2,4-imidazolidindiona
    imagen12
  21. 16. Una composicion farmaceutica que comprende un compuesto segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15 o una sal farmaceuticamente aceptable de este, y un vehfculo farmaceuticamente aceptable.
  22. 17. Un compuesto segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, o una sal farmaceuticamente aceptable de 5 este, o una composicion farmaceutica segun la reivindicacion 16, para uso en terapia.
  23. 18. Un compuesto segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, o una sal farmaceuticamente aceptable de este, o una composicion farmaceutica segun la reivindicacion 16, para uso para el tratamiento o profilaxis de una enfermedad o trastorno seleccionado del grupo que consiste en depresion y trastornos del estado de animo, trastornos auditivos, esquizofrenia, trastornos de abuso de sustancias, trastornos del sueno y epilepsia.
    10 19. Uso de un compuesto segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, o una sal farmaceuticamente
    aceptable de este, en la fabricacion de un medicamento para el tratamiento o profilaxis de una enfermedad o trastorno seleccionado del grupo que consiste en depresion y trastornos del estado de animo, trastornos auditivos, esquizofrenia, trastornos de abuso de sustancias, trastornos del sueno y epilepsia.
  24. 20. Un compuesto, sal farmaceuticamente aceptable o composicion farmaceutica para uso segun la reivindicacion
    15 18, en el que la enfermedad o trastorno es esquizofrenia.
  25. 21. Un compuesto, sal farmaceuticamente aceptable o composicion farmaceutica para uso segun la reivindicacion 18, en el que la enfermedad o trastorno es un trastorno auditivo.
  26. 22. El uso segun la reivindicacion 19, en el que la enfermedad o trastorno es esquizofrenia.
  27. 23. El uso segun la reivindicacion 19, en el que la enfermedad o trastorno es un trastorno auditivo.
    20
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