CN102741242A - 丙型肝炎病毒抑制剂 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及用于治疗丙型肝炎病毒(HCV)感染的化合物、组合物及方法。还披露含有所述化合物的药物组合物及使用所述化合物治疗HCV感染的方法。

Description

丙型肝炎病毒抑制剂
对相关申请的交叉参考
本申请要求2009年12月16日提交的美国临时申请61/286,942的优先权。
技术领域
本发明一般涉及抗病毒化合物，且更具体而言涉及可抑制由丙型肝炎病毒(HCV)编码的NS5A蛋白的功能的化合物、包含所述化合物的组合物及抑制NS5A蛋白的功能的方法。
背景技术
丙型肝炎病毒(HCV)是主要的人类病原体，其在世界范围内感染估计一亿七千万人—大致是1型人类免疫缺陷病毒感染数量的5倍。这些HCV感染个体中相当大的部分发展成严重的进行性肝脏疾病，包括肝硬化(cirrhosis)和肝细胞癌(hepatocellular carcinoma)。
目前采用聚乙二醇化(pegylated)干扰素与利巴韦林(ribavirin)的组合的HCV护理标准在获得持续病毒响应方面成功率并非最佳且产生诸多副作用。因此，显而易见且盼望已久的是，需要开发可有效解决该尚未得到满足的医学需要的治疗剂。
HCV是正链RNA病毒。基于对所推断氨基酸序列进行的比较和5’-非翻译区的广泛相似性，已经把HCV归类为黄病毒科(Flaviviridae family)中独立的属。黄病毒科的所有成员都具有包封的病毒体(enveloped virion)，其含有的正链RNA基因组通过翻译单一的连续的可读框而编码所有已知的病毒特异性蛋白。
由于缺乏校正(proof-reading)能力的所编码的RNA依赖性RNA聚合酶的错误率较高，在整个HCV基因组的核苷酸和所编码的氨基酸序列中发现了相当程度的异质性。已经表征了至少6种主要的基因型，并且已经描述了多于50种的亚型，其分布在世界范围内。HCV遗传异质性的临床意义已表明，在单一疗法治疗期间，易发生突变，因此，希望有其它治疗选项供使用。基因型对发病机制及疗法的可能的调节作用仍难以捉摸。
单链HCV RNA基因组的长度大约是9500个核苷酸，并且具有单一的可读框(ORF)，其编码由大约3000个氨基酸组成的单一的大的多聚蛋白。在被感染的细胞中，这种多聚蛋白在多个位点被细胞蛋白酶和病毒蛋白酶裂解，从而产生结构蛋白和非结构(NS)蛋白。就HCV来说，成熟的非结构蛋白(NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B)的产生受到两种病毒蛋白酶的影响。认为第一种病毒蛋白酶是金属蛋白酶，并且在NS2-NS3接合处进行裂解；第二种病毒蛋白酶是包含在NS3的N-末端区域内的丝氨酸蛋白酶(也称为NS3蛋白酶)，并且介导NS3下游的所有随后裂解，既在NS3-NS4A裂解位点以顺式进行裂解，又在其余的NS4A-NS4B、NS4B-NS5A、NS5A-NS5B位点以反式进行裂解。NS4A蛋白似乎具有多种功能，其充当NS3蛋白酶的辅因子，并且可能有助于NS3和其它病毒复制酶组分的膜定位。NS3-NS4A复合物的形成是裂解事件的蛋白质水解效率的适当蛋白酶活性所必需的。NS3蛋白还显示出三磷酸核苷酶和RNA解螺旋酶活性。NS5B(也称为HCV聚合酶)是复制酶复合物中依赖于RNA的RNA聚合酶，在HCV和其它HCV蛋白质(包括NS5A)的复制中涉及所述酶。
需要可选择性抑制HCV病毒复制且适用于治疗HCV感染患者的化合物。具体而言，需要可有效抑制NS5A蛋白的功能的化合物。HCV NS5A蛋白例如描述于以下参考文献中：S.L.Tan等人,Virology,284:1-12(2001)；K.-J.Park等人,J.Biol.Chem.,30711-30718(2003)；T.L.Tellinghuisen等人,Nature,435,374(2005)；R.A.Love等人,J.Virol,83,4395(2009)；N.Appel等人,J.Biol.Chem.,281,9833(2006)；L.Huang,J.Biol.Chem.,280,36417(2005)；C.Rice等人,WO 2006093867。
发明内容
在一个方面中，本发明提供一种式(I)化合物：
Figure BDA00001954398800031
或其药学上可接受的盐，其中：
n为0、1或2；
X选自氢、烯基、氰基、环烷基、(环烷基)烷基、卤素及杂环基；
R1选自氢及卤素；
R2选自氢、烯基、氰基、环烷基、(环烷基)烷基、卤素及杂环基；或
R1与R2与它们所连接的碳原子一起形成任选取代有一个卤素的六元芳族环；
条件是X及R2中至少一个选自烯基、氰基、环烷基、(环烷基)烷基、卤素及杂环基；
各R3为烷基，其中该烷基可任选与相邻碳原子一起形成三元或四元稠合环或与其连接的碳原子一起形成三元或四元螺环；其中该稠合环及该螺环任选经一或两个烷基取代；
各R4独立地选自氢及-C(O)R5；及
各R5独立地选自烷氧基、烷基、芳基烷氧基、芳基烷基、环烷基、杂环基、杂环基烷基、(NRcRd)烯基及(NRcRd)烷基。
在第一个方面的第一个实施方案中，本发明提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中各R5独立地选自烷氧基、杂环基及(NRcRd)烷基。
在第一个方面的第二个实施方案中，本发明提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中X为卤素。在第一个方面的第三个实施方案中，R2为卤素。
在第一个方面的第四个实施方案中，本发明提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中R1与R2与它们所连接的碳原子一起形成任选取代有一个卤素的六元芳族环。
在第一个方面的第五个实施方案中，本发明提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中X为氢。
在第二个方面中，本发明提供一种组合物，其包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐及药学上可接受的载体。在该第二个方面的第一个实施方案中，该组合物进一步包含至少一种具有抗HCV活性的其它化合物。在该第二个方面的第二个实施方案中，所述其它化合物中至少一种为干扰素或利巴韦林。在该第二个方面的第三个实施方案中，干扰素选自干扰素α2B、聚乙二醇化干扰素α、同感干扰素、干扰素α2A及淋巴细胞样干扰素τ。
在该第二个方面的第四个实施方案中，本发明提供一种组合物，其包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐、药学上可接受的载体及至少一种具有抗HCV活性的其它化合物，其中所述其它化合物中至少一种选自白介素2、白介素6、白介素12、提高1型辅助T细胞应答发展的化合物、干扰RNA、反义RNA、咪奎莫特(Imiqimod)、利巴韦林、肌苷5'-单磷酸脱氢酶抑制剂、金刚烷胺(amantadine)及金刚乙胺(rimantadine)。
在该第二个方面的第五个实施方案中，本发明提供一种组合物，其包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐、药学上可接受的载体及至少一种具有抗HCV活性的其它化合物，其中所述其它化合物中至少一种可有效抑制选自以下的靶标的功能以治疗HCV感染：HCV金属蛋白酶、HCV丝氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解旋酶、HCV NS4B蛋白、HCV进入、HCV组装、HCV释出(egress)、HCV NS5A蛋白及IMPDH。
在第三个方面中，本发明提供一种治疗患者的HCV感染的方法，其包含向该患者给药治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。在该第三个方面的第一个实施方案中，该方法进一步包含在给药式(I)化合物或其药学上可接受的盐之前、之后或同时给药至少一种具有抗HCV活性的其它化合物。在该第三个方面的第二个实施方案中，所述其它化合物中至少一种为干扰素或利巴韦林。在该第三个方面的第三个实施方案中，干扰素选自干扰素α2B、聚乙二醇化干扰素α、同感干扰素、干扰素α2A及淋巴细胞样干扰素τ。
在该第三个方面的第四个实施方案中，本发明提供一种治疗患者的HCV感染的方法，其包含向该患者给药治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，且在给药式(I)化合物或其药学上可接受的盐之前、之后或同时给药至少一种具有抗HCV活性的其它化合物，其中所述其它化合物中至少一种选自白介素2、白介素6、白介素12、提高1型辅助T细胞应答发展的化合物、干扰RNA、反义RNA、咪奎莫特、利巴韦林、肌苷5'-单磷酸脱氢酶抑制剂、金刚烷胺及金刚乙胺。
在该第三个方面的第五个实施方案中，本发明提供一种治疗患者的HCV感染的方法，其包含向该患者给药治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，且在给药式(I)化合物或其药学上可接受的盐之前、之后或同时给药至少一种具有抗HCV活性的其它化合物，其中所述其它化合物中至少一种可有效抑制选自以下的靶标的功能以治疗HCV感染：HCV金属蛋白酶、HCV丝氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解旋酶、HCV NS4B蛋白、HCV进入、HCV组装、HCV释出、HCV NS5A蛋白及IMPDH。
本发明的其它个方面可包括本文中所揭示的实施方案的适合的组合。
其它方面及实施方案可见于本文提供的说明中。
本文中对本发明的说明应理解为符合化学键合的规则及原理。在一些情况下，可能必需移除氢原子以在任何既定位置容纳取代基。
应了解，本发明所涵盖的化合物为那些对于用作药剂而言具有适当稳定性的化合物。
预期分子中特定位置处的任何取代基或变量的定义与其在该分子的他处的定义无关。举例而言，当R1及R2均含有R4基团时，则该两个R4基团可相同或不同。
本说明书中所引用的所有专利、专利申请及参考文献以引用的方式全部并入本文中。在不一致的情况下，以本发明(包括定义)为准。
如本说明书中所用，以下术语具有如下指定的含义。
除非上下文明确另作规定，否则如本文中所用的单数形式一("a"、"an")和那个("the")包括复数含义。
除非另作说明，否则本发明的所有芳基、环烷基及杂环基均可如其各自定义中的每种情况中所述经取代。举例而言，芳基烷基的芳基部分可如术语“芳基”的定义中所述经取代。
如本文中所用的术语“烯基”是指具有二至六个碳原子、含有至少一个碳-碳双键的直链或支链基团。
如本文中所用的术语“烯氧基”是指经由氧原子与母体分子部分连接的烯基。
如本文中所用的术语“烯氧基羰基”是指经由羰基与母体分子部分连接的烯氧基。
如本文中所用的术语“烷氧基”是指经由氧原子与母体分子部分连接的烷基。
如本文中所用的术语“烷氧基烷基”是指经一个、两个或三个烷氧基取代的烷基。
如本文中所用的术语“烷氧基烷基羰基”是指经由羰基与母体分子部分连接的烷氧基烷基。
如本文中所用的术语“烷氧基羰基”是指经由羰基与母体分子部分连接的烷氧基。
如本文中所用的术语“烷基”是指源自含有一至六个碳原子的直链或支链饱和烃的基团。在本发明的化合物中，当R3为烷基时，该烷基可任选与相邻碳原子形成三元或四元稠合环，得到如下所示的结构：
Figure BDA00001954398800061
其中m选自1及2，其中z为0、1或2，且其中Rs为烷基；或其中该烷基可任选与其连接的碳原子一起形成三元或四元螺环，得到如下所示的结构：
Figure BDA00001954398800062
其中m选自1及2；其中z为0、1或2，且其中Rs为烷基。
如本文中所用的术语“烷基羰基”是指经由羰基与母体分子部分连接的烷基。
如本文中所用的术语“烷基羰基氧基”是指经由氧原子与母体分子部分连接的烷基羰基。
如本文中所用的术语“烷硫基”是指经由硫原子与母体分子部分连接的烷基。
如本文中所用的术语“烷基磺酰基”是指经由磺酰基与母体分子部分连接的烷基。
如本文中所用的术语“芳基”是指苯基或二环稠环系统(其中所述环中的一者或两者为苯基)。二环稠环系统由与四至六元芳族或非芳族碳环稠合的苯基组成。本发明的芳基可经由基团中的任何可取代碳原子与母体分子部分连接。芳基的代表性实例包括(但不限于)茚满基、茚基、萘基、苯基及四氢萘基。本发明的芳基任选经一个、两个、三个、四个或五个独立地选自以下的取代基取代：烯基、烷氧基、烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、另一个芳基、芳基烷氧基、芳基烷基、芳基羰基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、杂环基、杂环基烷基、杂环基羰基、羟基、羟基烷基、硝基、-NRxRy、(NRxRy)烷基、氧代及-P(O)OR2，其中各R独立地选自氢及烷基；且其中该芳基烷基及该杂环基烷基的烷基部分未经取代，且其中该另一个芳基、该芳基烷基的芳基部分、该芳基羰基的芳基部分、该杂环基以及该杂环基烷基与该杂环基羰基的杂环基部分任选另外经一个、两个或三个独立地选自以下的取代基取代：烷氧基、烷基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基及硝基。
如本文中所用的术语“芳基烷氧基”是指经由烷氧基与母体分子部分连接的芳基。
如本文中所用的术语“芳基烷氧基羰基”是指经由羰基与母体分子部分连接的芳基烷氧基。
如本文中所用的术语“芳基烷基”是指经一个、两个或三个芳基取代的烷基。该芳基烷基的烷基部分任选另外经一或两个独立地选自以下的其它基团取代：烷氧基、烷基羰基氧基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、杂环基、羟基及-NRcRd，其中该杂环基任选另外经一或两个独立地选自以下的取代基取代：烷氧基、烷基、未取代的芳基、未取代的芳基烷氧基、未取代的芳基烷氧基羰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、羟基、-NRxRy及氧代。
如本文中所用的术语“芳基烷基羰基”是指经由羰基与母体分子部分连接的芳基烷基。
如本文中所用的术语“芳基羰基”是指经由羰基与母体分子部分连接的芳基。
如本文中所用的术语“芳基氧基”是指经由氧原子与母体分子部分连接的芳基。
如本文中所用的术语“芳基氧基羰基”是指经由羰基与母体分子部分连接的芳基氧基。
如本文中所用的术语“芳基磺酰基”是指经由磺酰基与母体分子部分连接的芳基。
如本文中所使用的术语“羰基”是指-C(O)-。
如本文中所使用的术语“羧基”是指-CO2H。
如本文中所使用的术语“氰基”是指-CN。
如本文中所用的术语“环烷基”是指具有三至七个碳原子及零个杂原子的饱和单环烃环系统。环烷基的代表性实例包括(但不限于)环丙基、环丁基、环戊基及环己基。本发明的环烷基任选经一个、两个、三个、四个或五个独立地选自以下的取代基取代：烷氧基、烷基、芳基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、杂环基、羟基、羟基烷基、硝基及-NRxRy，其中该芳基及该杂环基任选另外经一个、两个或三个独立地选自以下的取代基取代：烷氧基、烷基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、羟基及硝基。
如本文中所用的术语“(环烷基)烷基”是指经一个、两个或三个环烷基取代的烷基。
如本文中所用的术语“环烷基氧基”是指经由氧原子与母体分子部分连接的环烷基。
如本文中所用的术语“环烷基氧基羰基”是指经由羰基与母体分子部分连接的环烷基氧基。
如本文中所用的术语“环烷基磺酰基”是指经由磺酰基与母体分子部分连接的环烷基。
如本文中所用的术语“甲酰基”是指-CHO。
如本文中所使用的术语“卤素”是指Cl、Br、F或I。
如本文中所用的术语“卤代烷氧基”是指经由氧原子与母体分子部分连接的卤代烷基。
如本文中所用的术语“卤代烷氧基羰基”是指经由羰基与母体分子部分连接的卤代烷氧基。
如本文中所用的术语“卤代烷基”是指经一个、两个、三个或四个卤素原子取代的烷基。
如本文中所用的术语“杂环基”是指含有一个、两个、三个或四个独立地选自氮、氧及硫的杂原子的四元、五元、六元或七元环。四元环具有零个双键，五元环具有零至两个双键，且六元及七元环具有零个至三个双键。术语“杂环基”亦包括如下二环基团，其中杂环基环与另一单环杂环基或四至六元芳族或非芳族碳环稠合；以及桥接二环基团，诸如7-氮杂二环[2.2.1]庚-7-基、2-氮杂二环[2.2.2]辛-2-基、2,5-二氮杂二环[2.2.1]庚-2-基及2-氮杂二环[2.2.2]辛-3-基。本发明的杂环基可经由基团中的任何碳原子或氮原子与母体分子部分连接。杂环基的实例包括(但不限于)苯并噻吩基、呋喃基、咪唑基、二氢吲哚基、吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、异噁唑基、吗啉基、噁唑基、氧杂环丁基、哌嗪基、哌啶基、吡唑基、吡啶基、吡咯烷基、吡咯并吡啶基、吡咯基、喹啉基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、噻唑基、噻吩基及硫吗啉基。本发明的杂环基任选经一个、两个、三个、四个或五个独立地选自以下的取代基取代：烯基、烷氧基、烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、芳基、芳基烷氧基羰基、芳基烷基、芳基羰基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、另一个杂环基、杂环基烷基、杂环基羰基、羟基、羟基烷基、硝基、-NRxRy、(NRxRy)烷基及氧代，其中该芳基烷基及该杂环基烷基的烷基部分未经取代，且其中该芳基、该芳基烷基的芳基部分、该芳基羰基的芳基部分、该另一个杂环基及该杂环基烷基与该杂环基羰基的杂环基部分任选另外经一个、两个或三个独立地选自以下的取代基取代：烷氧基、烷基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基及硝基。
如本文中所用的术语“杂环基烷氧基”是指经由烷氧基与母体分子部分连接的杂环基。
如本文中所用的术语“杂环基烷氧基羰基”是指经由羰基与母体分子部分连接的杂环基烷氧基。
如本文中所用的术语“杂环基烷基”是指经一个、两个或三个杂环基取代的烷基。该杂环基烷基的烷基部分任选另外经一或两个独立地选自以下的其它基团取代：烷氧基、烷基羰基氧基、芳基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、羟基及-NRcRd，其中该芳基任选另外经一或两个独立地选自以下的取代基取代：烷氧基、烷基、未取代的芳基、未取代的芳基烷氧基、未取代的芳基烷氧基羰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、羟基及-NRxRy。
如本文中所用的术语“杂环基烷基羰基”是指经由羰基与母体分子部分连接的杂环基烷基。
如本文中所用的术语“杂环基羰基”是指经由羰基与母体分子部分连接的杂环基。
如本文中所用的术语“杂环基氧基”是指经由氧原子与母体分子部分连接的杂环基。
如本文中所用的术语“杂环基氧基羰基”是指经由羰基与母体分子部分连接的杂环基氧基。
如本文中所用的术语“羟基”是指-OH。
如本文中所用的术语“羟基烷基”是指经一个、两个或三个羟基取代的烷基。
如本文中所用的术语“羟基烷基羰基”是指经由羰基与母体分子部分连接的羟基烷基。
如本文中所用的术语“硝基”是指-NO2。
如本文中所用的术语“-NRcRd”是指经由氮原子与母体分子部分连接的两个基团Rc及Rd。Rc及Rd独立地选自氢、烯氧基羰基、烷氧基烷基羰基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、烷基磺酰基、芳基、芳基烷氧基羰基、芳基烷基、芳基烷基羰基、芳基羰基、芳基氧基羰基、芳基磺酰基、环烷基、环烷基氧基、环烷基氧基羰基、环烷基磺酰基、甲酰基、卤代烷氧基羰基、杂环基、杂环基烷氧基羰基、杂环基烷基、杂环基烷基羰基、杂环基羰基、杂环基氧基羰基、羟基烷基羰基、(NReRf)烷基、(NReRf)烷基羰基、(NReRf)羰基、(NReRf)磺酰基、-C(NCN)OR'及-C(NCN)NRxRy，其中R'选自烷基及未取代的苯基，且其中该芳基烷基、该芳基烷基羰基、该杂环基烷基及该杂环基烷基羰基的烷基部分任选另外经一个-NReRf基团取代；且其中该芳基、该芳基烷氧基羰基、该芳基烷基、该芳基烷基羰基、该芳基羰基、该芳基氧基羰基及该芳基磺酰基的芳基部分、该杂环基以及该杂环基烷氧基羰基、该杂环基烷基、该杂环基烷基羰基、该杂环基羰基及该杂环基氧基羰基的杂环基部分任选另外经一个、两个或三个独立地选自以下的取代基取代：烷氧基、烷基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基及硝基。
如本文中所用的术语“(NRcRd)烯基”是指
其中Rc及Rd如本文中所定义，且各Rq独立地为氢或C1-3烷基。
如本文中所用的术语“(NRcRd)烷基”是指经一个、两个或三个-NRcRd基团取代的烷基。该(NRcRd)烷基的烷基部分任选另外经一或两个选自以下的其它基团取代：烷氧基、烷氧基烷基羰基、烷氧基羰基、烷硫基、芳基烷氧基羰基、羧基、环烷基、杂环基、杂环基羰基、羟基及(NReRf)羰基；其中该杂环基任选另外经一个、两个、三个、四个或五个独立地选自以下的取代基取代：烷氧基、烷基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基及硝基。
如本文中所用的术语“-NReRf”是指经由氮原子与母体分子部分连接的两个基团Re及Rf。Re及Rf独立地选自氢、烷基、未取代的芳基、未取代的芳基烷基、未取代的环烷基、未取代的(环烷基)烷基、未取代的杂环基、未取代的杂环基烷基、(NRxRy)烷基及(NRxRy)羰基。
如本文中所用的术语“(NReRf)烷基”是指经一个、两个或三个-NReRf基团取代的烷基。
如本文中所用的术语“(NReRf)烷基羰基”是指经由羰基与母体分子部分连接的(NReRf)烷基。
如本文中所用的术语“(NReRf)羰基”是指经由羰基与母体分子部分连接的-NReRf基团。
如本文中所用的术语“(NReRf)磺酰基”是指经由磺酰基与母体分子部分连接的-NReRf基团。
如本文中所用的术语“-NRxRy”是指经由氮原子与母体分子部分连接的两个基团Rx及Ry。Rx及Ry独立地选自氢、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、未取代的芳基、未取代的芳基烷氧基羰基、未取代的芳基烷基、未取代的环烷基、未取代的杂环基及(NRx'Ry')羰基，其中Rx′及Ry′独立地选自氢及烷基。
如本文中所用的术语“(NRxRy)烷基”是指经一个、两个或三个-NRxRy基团取代的烷基。
如本文中所用的术语“(NRxRy)羰基”是指经由羰基与母体分子部分连接的-NRxRy基团。
如本文中所用的术语“-NRxRy”是指经由氮原子与母体分子部分连接的两个基团Rx及Ry。Rx及Ry独立地选自氢及烷基。
如本文中所用的术语“(NRx'Ry')羰基”是指经由羰基与母体分子部分连接的-NRx′Ry'基团。
如本文中所用的术语“氧代”是指=O。
如本文中所用的术语“磺酰基”是指-SO2-。
在本发明的化合物中存在不对称中心。视手性碳原子周围的取代基的构型而定，所述中心以符号“R”或“S”表示。应了解，本发明涵盖具有抑制NS5A的能力的所有立体化学异构形式或其混合物。化合物的单独立体异构体可由含有手性中心的市售原料以合成方式制备，或通过制备对映异构产物的混合物继而分离(诸如转化为非对映异构体的混合物继而分离或重结晶、色谱技术或直接在手性色谱柱上分离对映异构体)来制备。特定立体化学的起始化合物可为市售的或可通过本领域已知的技术来制备且解析。
本发明的某些化合物亦可以可分离的不同稳定构象形式存在。由于围绕不对称单键的限制性旋转(例如由于位阻或环间张力)所产生的扭转不对称性可允许分离不同构象异构体。本发明包括所述化合物的各构形异构体及其混合物。
本发明的化合物亦以互变异构体形式存在；因此，本发明亦涵盖所有互变异构形式。
术语“本发明的化合物”及等效表述意欲涵盖式(I)化合物及其药学上可接受的对映异构体、非对映异构体及盐。类似地，若上下文许可，则对中间体的提及意欲涵盖其盐。
本发明意欲包括存在于本发明化合物中的原子的所有同位素。同位素包括具有相同原子序数但具有不同质量数的原子。通过一般举例而非限制，氢的同位素包括氘及氚。碳的同位素包括13C及14C。本发明的同位素标记的化合物可一般通过本领域技术人员已知的常规技术或通过与本文描述类似的方法，使用适当的同位素标记的试剂代替其它情况下采用的未标记的试剂来制备。所述化合物具有多种潜在用途，例如在生物活性测定中作为标准物及试剂。在稳定的同位素的情况下，所述化合物可具有有利地改变生物学、药理学或药物动力学性质的潜能。
本发明的化合物可以药学上可接受的盐存在。如本文中所用的术语“药学上可接受的盐”表示本发明的化合物的水溶性或油溶性或可分散的盐或两性离子形式，其在合理的医学判断的范畴内适于与患者组织接触使用而无过度毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的效益/风险比相符，且对于其预期用途而言为有效的。所述盐可在化合物的最终分离及纯化期间加以制备或独立地通过使适合的氮原子与适合的酸反应来制备。代表性酸加成盐包括乙酸盐、己二酸盐、海藻酸盐、柠檬酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐；二葡糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、甲酸盐、反丁烯二酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙烷磺酸盐、乳酸盐、顺丁烯二酸盐、均三甲苯磺酸盐、甲烷磺酸盐、亚萘基磺酸盐、烟酸盐、2-萘磺酸盐、草酸盐、扑酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、丁二酸盐、酒石酸盐、三氯乙酸盐、三氟乙酸盐、磷酸盐、谷氨酸盐、碳酸氢盐、对甲苯磺酸盐及十一碳酸盐。可用于形成药学上可接受的加成盐的酸的实例包括诸如盐酸、氢溴酸、硫酸及磷酸的无机酸及诸如草酸、顺丁烯二酸、丁二酸及柠檬酸的有机酸。
碱加成盐可在化合物的最终分离及纯化期间，通过使羧基与适合的碱(诸如金属阳离子的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐)或与氨或有机伯、仲或叔胺反应来制备。药学上可接受的盐的阳离子包括锂、钠、钾、钙、镁及铝以及无毒胺阳离子，诸如铵、四甲基铵、四乙基铵、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、二乙胺、乙胺、三丁胺、吡啶、N,N-二甲基苯胺、N-甲基哌啶、N-甲基吗啉、二环己基胺、普鲁卡因(procaine)、二苯甲基胺、N,N-二苯甲基苯乙基胺及N,N'-二苯甲基亚乙基二胺。适用于形成碱加成盐的其它代表性有机胺包括乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌啶及哌嗪。
若有可能在用于疗法时，可将治疗有效量的式(I)化合物以及其药学上可接受的盐以化学原料的形式给药，亦可能以药物组合物形式提供活性成份。因此，本发明另外提供药物组合物，其包括治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐及一或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。如本文中所用的术语“治疗有效量”是指足以显示有意义的患者益处(例如病毒载量持续减少)的各活性组份的总量。当应用于单独给药的单独活性成份时，该术语是指单独该成份。当应用于组合时，该术语是指无论组合、连续抑或同时给药均产生治疗效应的活性成份的组合量。式(I)化合物及其药学上可接受的盐如上所述。载体、稀释剂或赋形剂必须在与制剂的其它成份兼容的意义上为可接受的且对其接受者无害。根据本发明的另一个方面，亦提供一种用于制备药物制剂的方法，其包括将式(I)化合物或其药学上可接受的盐与一或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂混合。如本文中所用的术语“药学上可接受”是指在合理的医学判断的范畴内适于与患者组织接触使用而无过度毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，并具有合理的效益/风险比，且可有效用于其预期用途的那些化合物、物质、组合物及/或剂型。
药物制剂可以每单位剂量含有预定量的活性成份的单位剂型来提供。用于预防及治疗HCV介导的疾病的单一疗法中的典型剂量水平为每日每公斤体重(“mg/kg”)约0.01毫克至约250毫克本发明的化合物、优选每日每公斤体重约0.05mg至约100mg本发明的化合物。通常，本发明的药物组合物将每日给药约1次至约5次或者以连续输注形式给药。该给药可用作慢性或急性治疗。可与载体物质组合以产生单一剂型的活性成份的量将视以下因素而变化：所治疗的病状、病状的严重性、给药时间、给药途径、所用化合物的排泄速率、治疗持续时间及患者的年龄、性别、体重及身体状况。优选单位剂量制剂为那些含有如本文以上所述的日剂量或亚剂量或其适当一部分的活性成份的制剂。一般，治疗先以基本上小于化合物的最佳剂量的小剂量开始。此后，以小幅增量增加剂量直至在该情况下达至最佳效应。一般而言，化合物最适宜以通常不会造成任何有害或不利副作用的情况下提供抗病毒有效结果的浓度水平来给药。
当本发明的组合物包含本发明的化合物与一或多种其它治疗剂或预防剂的组合时，该化合物与该其它药剂通常均以单一治疗方案中通常所给药的剂量的约10%至150%之间且更佳为约10%与80%之间的剂量来提供。
药物制剂可适合于通过任何适合的途径来给药，例如通过经口(包括口腔或舌下)、经直肠、经鼻、局部(包括口腔、舌下或经皮)、经阴道或肠胃外(包括皮下、皮内、肌肉内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、病灶内、静脉内或皮内注射或输注)途径来给药。所述制剂可通过药学技术中已知的任何方法(例如通过使活性成份与载体或赋形剂结合)来制备。经口给药或通过注射来给药为优选的。
适合于经口给药的药物制剂可以离散单位形式来提供，所述离散单位诸如胶囊或片剂；粉末或颗粒；于水性或非水性液体中的溶液或悬浮液；可食用泡沫或搅打剂(whip)；或水包油型液体乳液或油包水型乳液。
例如，就以片剂或胶囊剂形式进行的口服给药而言，可将活性药物组分与口服的无毒的药用惰性载体如乙醇、甘油、水等混合。粉末剂如下制备：将化合物研磨至合适的微细尺寸，然后与经类似研磨的药物载体如可食用的碳水化合物(如淀粉或甘露醇)混合。矫味剂、防腐剂、分散剂和着色剂也可存在。
胶囊剂如下制备：如上所述制备粉末混合物，然后填充到成形的明胶壳中。可将助流剂和润滑剂如胶体二氧化硅、滑石、硬脂酸镁、硬脂酸钙或固体聚乙二醇加到粉末混合物中，然后进行填充操作。也可加入崩解剂或增溶剂如琼脂、碳酸钙或碳酸钠以改善胶囊剂被摄入时的药物利用度。
此外，当期望或需要时，也可将合适的粘合剂、润滑剂、崩解剂和着色剂掺到混合物中。合适的粘合剂包括淀粉、明胶、天然糖(如葡萄糖或β-乳糖)、玉米甜味剂、天然胶和合成胶(如阿拉伯胶、西黄蓍胶或海藻酸钠)、羧甲基纤维素、聚乙二醇等。在这些剂型中使用的润滑剂包括油酸钠、氯化钠等。崩解剂包括但不限于淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、黄原胶等。片剂如下配制：例如制备粉末混合物，制粒或预压，加入润滑剂和崩解剂，然后压制成片剂。粉末混合物如下制备：将经合适研磨的化合物与上述稀释剂或基质以及任选的粘合剂(如羧甲基纤维素、海藻酸盐、凝胶或聚乙烯吡咯烷酮)、溶液延迟剂(solution retardant)(如石蜡)、吸收促进剂(如季胺盐)和/或吸收剂(如膨润土、高岭土或磷酸二钙)混合。粉末混合物可与粘合剂如糖浆、淀粉糊、阿拉伯胶液、纤维素溶液或聚合物溶液一起湿法制粒，然后挤压过筛。作为可选择的制粒方法，粉末混合物可通过压片机来处理，结果是不完全成形的预压片破裂成颗粒。可通过加入硬脂酸、硬脂酸盐、滑石或矿物油来对颗粒进行润滑以防止与片剂成形模粘连。然后将经润滑的混合物压制成片剂。本发明的化合物也可与自由流动的惰性载体组合，并在不经历制粒或预压步骤的情况下直接压制成片剂。可提供透明的或不透明的保护性包衣，所述包衣由以下包衣层构成：由虫胶形成的隔离包衣层、由糖或聚合物形成的包衣层和由蜡形成的光亮包衣层。可将染料加到这些包衣中以区分不同的单位剂量。
口服流体如溶液剂、糖浆剂和酏剂可按剂量单位形式来制备，从而使给定的量含有预定量的化合物。糖浆剂可通过将化合物溶于经合适矫味的水溶液中来制备，而酏剂通过使用无毒的媒介物来制备。也可加入增溶剂和乳化剂(如乙氧基化的异硬脂醇和聚氧乙烯山梨醇醚)、防腐剂、矫味添加剂(如薄荷油、天然甜味剂、糖精或其它人造甜味剂)等。
当适当时，可对用于口服给药的剂量单位制剂进行微囊化。也可例如通过将颗粒物质用聚合物、蜡等包衣或包埋到聚合物、蜡等中来制备制剂以延长或维持释放。
式(I)化合物及其药用盐也可按脂质体递送系统的形式给药，所述脂质体递送系统为例如小单层脂囊(small unilamellar vesicle)、大单层脂囊(largeunilamellar vesicle)和多层脂囊(multilamellar vesicle)。脂质体可由各种磷脂如胆固醇、硬脂酰胺或磷脂酰胆碱来形成。
式(I)化合物及其药用盐也可通过使用单克隆抗体作为与化合物分子偶联的单独载体来递送。化合物也可与作为靶向药物载体的可溶性聚合物偶联。这些聚合物可包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羟基丙基甲基丙烯酸酰胺苯酚(polyhydroxypropylmethacrylamidephenol)、聚羟基乙基天冬氨酸酰胺苯酚(polyhydroxyethylaspartamidephenol)或取代有棕榈酰基的聚氧化乙烯聚赖氨酸(polyethyleneoxidepolylysine substituted with palitoyl residue)。此外，化合物可与可用于实现药物的控制释放的一类生物可降解的聚合物偶联，这类聚合物为例如聚乳酸、聚ξ-己内酯、聚羟基丁酸、聚原酸酯、聚缩醛、聚二氢吡喃、聚氰基丙烯酸酯和水凝胶的交联共聚物或水凝胶的两亲性嵌段共聚物。
针对透皮给药而调整的药物制剂可按离散的贴剂形式存在，其意在与接受者的表皮紧密接触且保持延长的时段。例如，如Pharmaceutical Research1986,3(6),318中所一般描述，活性成分可通过离子电渗法(iontophoresis)从贴剂中递送。
可将针对局部给药而调整的药物制剂配制成软膏剂、乳膏剂、混悬剂、洗液、粉末剂、溶液剂、糊剂、凝胶剂、喷雾剂、气雾剂或油剂。
就治疗眼部或其它外部组织如口和皮肤而言，制剂优选以软膏剂或乳膏剂的形式施用。当配制成软膏剂时，活性成分可与石蜡或水可混溶性软膏剂基质一起使用。可选择地，可将活性成分与水包油型乳膏剂基质或油包水型基质一起配制成乳膏剂。
进行调整以适于局部给药至眼部的药物制剂包括滴眼剂，其中将活性成分溶于或悬浮于合适的载体尤其是含水溶剂中。
进行调整以适于在口中局部给药的药物制剂包括锭剂、含锭剂(pastille)和口腔洗剂。
进行调整以适于直肠给药的药物制剂可按栓剂或灌肠剂的形式提供。
进行调整以适于鼻部给药的药物制剂(其中载体为固体)包括粒度范围为例如20至500微米的一系列粉末，其按照吸入的方式来给药，即从接近鼻的装有粉末的容器中经由鼻道而快速吸入。用于以鼻喷雾剂或滴鼻剂的形式给药的合适制剂(其中载体为液体)包括活性成分的含水溶液或油溶液。
进行调整以适于吸入给药的药物制剂包括微细颗粒的粉尘或气雾，其可通过各种类型的计量剂量的加压的气雾器、喷雾器或吸入器来产生。
进行调整以适于阴道给药的药物制剂可按阴道栓剂、棉塞剂、乳膏剂、凝胶剂、糊剂、泡沫剂或喷雾剂的形式提供。
进行调整以适于肠胃外给药的药物制剂包括：含水和不含水的无菌注射溶液剂，其可含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使制剂与所预期接受者的血液等渗的溶质；和含水和不含水的无菌混悬剂，其可包含助悬剂和增稠剂。所述制剂可存在于单位剂量容器或多剂量容器例如密封的安瓿和小瓶中，并可在冷冻干燥的(冻干的)状态下贮存，其在立即使用前仅需要加入无菌液态载体例如注射用水。现用现配的注射溶液剂和混悬剂可从无菌粉末、颗粒或片剂来制备。
应该理解的是，除了上文具体提及的成分之外，在已考虑到所涉及制剂的类型的情况下，所述制剂还可包括本领域中的其它常规物质，例如适于口服给药的那些制剂可包括矫味剂。
术语“患者”既包括人类也包括其它哺乳动物。
术语“治疗”是指：(i)在可能易患疾病、障碍和/或病症但尚未诊断患有所述疾病、障碍和/或病症的患者中预防所述疾病、障碍和/或病症；(ii)抑制所述疾病、障碍和/或病症，即阻止其发展；以及(iii)减轻所述疾病、障碍和/或病症，即引起所述疾病、障碍和/或病症的消退。
本发明的化合物也可与环孢菌素例如环孢菌素A一起给药。已在临床试验中显示出环孢菌素A具有抗HCV活性(Hepatology,38:1282(2003);Biochem.Biophys.Res.Commun.,313:42(2004);J.Gastroenterol.,38:567(2003))。
下表1列出了可与本发明的化合物一起给药的化合物的一些示例性实例。本发明的化合物可在组合疗法中与其它具有抗HCV活性的化合物同时给药或分开给药，或通过将各化合物组合成组合物来给药。
表1
Figure BDA00001954398800191
Figure BDA00001954398800201
本发明的化合物也可用作实验室试剂。所述化合物在提供以下研究工具中是有帮助的，这些研究工具用于设计病毒复制测定、验证动物测定系统和进行结构生物学研究以进一步提高对HCV疾病机理的认识。此外，本发明的化合物可例如通过竞争性抑制作用而用于建立或确定其它抗病毒化合物的结合位点。
本发明的化合物也可用于处理或预防物质的病毒污染，因此降低了与这些物质(例如血液、组织、手术器械和手术外衣、实验室仪器和实验室外衣以及血液采集装置和物质或输血装置和物质)发生接触的实验室人员或医务人员或患者感染病毒的风险。
当具有式(I)的化合物通过合成性过程或通过代谢性过程(包括发生在人类或动物体(体内)的那些代谢性过程或发生在体外的过程)来制备时，本发明旨在包括具有式(I)的化合物。
具体实施方式
在本申请中(尤其包括在以下示例性实施例中)使用的缩写是本领域技术人员公知的。所使用的一些缩写如下：ca.为约；min或mins为分钟；h或hr或hrs为小时；rt或RT为室温或保留时间(视上下文而定)；Rt为保留时间；TFA为三氟乙酸；DMSO为二甲亚砜；Me为甲基；THF为四氢呋喃；t-Bu或t-Bu为叔丁基；EDCI为1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐；DMAP为4-二甲基氨基吡啶；DBU为1,8-二氮杂二环十一-7-烯；Ph为苯基；DEA为二乙胺；Et为乙基；DMF为N,N-二甲基甲酰胺；OAc为乙酸根/乙酸酯基；HMDS为六甲基二甲硅烷基氮烷(hexamethyldisilazide)；pTsOH为对甲苯磺酸；iPr2EtN、DIEA或DIPEA为二异丙基乙胺；EtOAc或EtOAc或EA为乙酸乙酯；Et3SiH为三乙基硅烷；MeOH为甲醇；TMSCHN2为三甲基甲硅烷基重氮甲烷；H-D-Ser-OBzl.HCl为D-丝氨酸苯甲基酯盐酸盐；EtOH为乙醇；Me2S为二甲基硫醚；TEA或Et3N为三乙胺；LiHMDS为六甲基二甲硅烷基氨基锂；DIBAL为二异丁基氢化铝；TBDMS-Cl为叔丁基二甲基甲硅烷基氯；i-PrOH为异丙醇；Boc、boc或BOC为叔丁氧基羰基；Cbz-Cl为氯甲酸苯甲酯；Bn为苯甲基；DEAD为偶氮二甲酸二乙酯；mCPBA为间氯过氧苯甲酸；DCM为二氯甲烷；TMSCN为氰化三甲基硅烷；ACN或MECN为乙腈；dpppe为1,5-双(二苯基膦基)戊烷；TMEDA为四甲基乙二胺；DMA为N,N-二甲基乙酰胺；MeOD为CD3OD；Hex为己烷；NaOEt为乙醇钠；MTBE为甲基叔丁基醚；NCS为N-氯丁二酰亚胺；Et2O为乙醚；DME为1,2-二甲氧基乙烷；及EEDQ为N-乙氧基羰基-2-乙氧基-1,2-二氢喹啉。
现在，本发明将结合某些实施方案来描述，所述实施方案不欲限制本发明的范畴。相反，本发明覆盖权利要求范畴内可包括的所有替代物、修改形式及等效物。因此，包括特定实施方案的以下实施例将说明本发明的一种实践，应了解，所述实施例出于说明某些实施方案的目的，且呈现于此以提供据信对本发明的程序及概念方面的最适用且最容易理解的描述。
起始物质可自商业来源获得，或用本领域技术人员已知的既定的文献方法制备。
常见CAP的合成
化合物分析条件
用与Waters
Figure BDA00001954398800211
ZQ MS系统偶联的Shimadzu LC系统进行纯度评估及低分辨率质量分析。应注意，保留时间在机器之间可能略有变化。除非另作说明，否则其它LC条件适用于本章节。
条件-MS-W 1
Figure BDA00001954398800212
起始%B=0
最终%B=100
梯度时间=2min
终止时间=3min
流速=5mL/min
波长=220nm
溶剂A=含0.1%TFA的10%甲醇/90%H2O
溶剂B=含0.1%TFA的90%甲醇/10%H2O
条件-MS-W2
Figure BDA00001954398800221
起始%B=0
最终%B=100
梯度时间=3min
终止时间=4min
流速=4mL/min
波长=220nm
溶剂A=含0.1%TFA的10%甲醇/90%H2O
溶剂B=含0.1%TFA的90%甲醇/10%H2O
条件-MS-W5
Figure BDA00001954398800222
起始%B=0
最终%B=30
梯度时间=2min
终止时间=3min
流速=5mL/min
波长=220nm
溶剂A=含0.1%TFA的10%甲醇/90%H2O
溶剂B=含0.1%TFA的90%甲醇/10%H2O
条件-D1
Figure BDA00001954398800223
起始%B=0
最终%B=100
梯度时间=3min
终止时间=4min
流速=4mL/min
波长=220nm
溶剂A=含0.1%TFA的10%甲醇/90%H2O
溶剂B=含0.1%TFA的90%甲醇/10%H2O
条件-D2
Figure BDA00001954398800231
起始%B=0
最终%B=100
梯度时间=3min
终止时间=4min
流速=4mL/min
波长=220nm
溶剂A=含0.1%TFA的10%甲醇/90%H2O
溶剂B=含0.1%TFA的90%甲醇/10%H2O
条件-M3
Figure BDA00001954398800232
起始%B=0
最终%B=40
梯度时间=2min
终止时间=3min
流速=5mL/min
波长=220nm
溶剂A=含0.1%TFA的10%甲醇/90%H2O
溶剂B=含0.1%TFA的90%甲醇/10%H2O
条件I
起始%B=0
最终%B=100
梯度时间=2min
终止时间=3min
流速=4mL/min
波长=220nm
溶剂A=含0.1%TFA的10%甲醇/90%H2O
溶剂B=含0.1%TFA的90%甲醇/10%H2O
条件II
Figure BDA00001954398800234
起始%B=0
最终%B=100
梯度时间=2min
终止时间=3min
流速=5mL/min
波长=220nm
溶剂A=含0.1%TFA的10%甲醇/90%H2O
溶剂B=含0.1%TFA的90%甲醇/10%H2O
条件III
起始%B=0
最终%B=100
梯度时间=3min
终止时间=4min
流速=4mL/min
波长=220nm
溶剂A=含0.1%TFA的10%甲醇/90%H2O
溶剂B=含0.1%TFA的90%甲醇/10%H2O
Cap-1
Figure BDA00001954398800242
(R)-2-(二甲基氨基)-2-苯基乙酸
将10%Pd/C(2.0g)于甲醇(10mL)中的悬浮液添加至(R)-2-苯基甘氨酸(10g，66.2mmol)、甲醛(33mL 37wt%水溶液)、1N HCl(30mL)及甲醇(30mL)的混合物中，且暴露于H2(60psi)中3小时。经硅藻土(
Figure BDA00001954398800243
)过滤反应混合物，且在真空中浓缩滤液。将所得粗物质自异丙醇中重结晶，得到白色针状的Cap-1的盐酸盐(4.0g)。旋光度：-117.1°[c=9.95mg/mL(于H2O中)；λ＝589nm]。1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5ppm,500MHz):δ7.43-7.34(m,5H),4.14(s,1H),2.43(s,6H)；LC(条件I):RT=0.25；LC-MS:[M+H]+C10H14NO2的分析计算值为180.10；实测值为180.17；HRMS:[M+H]+C10H14NO2的分析计算值为180.1025；实测值为180.1017。
Cap-2
Figure BDA00001954398800251
(R)-2-(二乙基氨基)-2-苯基乙酸
经数分钟将NaBH3CN(6.22g，94mmol)逐份添加至(R)-2-苯基甘氨酸(6.02g，39.8mmol)及甲醇(100mL)的经冷却(冰/水)混合物中且搅拌5分钟。经10分钟逐滴添加乙醛(10mL)，且在相同冷却温度下继续搅拌45分钟且在环境温度下搅拌约6.5小时。以冰水浴冷却反应混合物回原温度，以水(3mL)处理且随后通过经约45分钟逐滴添加浓盐酸直至混合物的pH值为约1.5-2.0来淬灭反应。移除冷却浴且继续搅拌，同时添加浓盐酸以维持混合物的pH值为约1.5-2.0。搅拌反应混合物过夜，过滤以移除白色悬浮物，且在真空中浓缩滤液。将粗物质自乙醇重结晶，得到两批亮白色固体状的Cap-2的盐酸盐(第1批：4.16g；第2批：2.19g)。1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5ppm,400MHz):10.44(1.00，br s,1H),7.66(m,2H),7.51(m,3H),5.30(s,1H),3.15(br m,2H),2.98(br m,2H),1.20(表观宽单峰,6H)。第1批：[α]25-102.21°(c=0.357,H2O)；第2批：[α]25-99.7°(c=0.357,H2O)。LC(条件I):RT=0.43min；LC-MS:[M+H]+C12H18NO2的分析计算值为208.13；实测值为208.26。
Cap-3
将乙醛(5.0mL，89.1mmol)及10%Pd/C(720mg)于甲醇/H2O(4mL/1mL)中的悬浮液依次添加至(R)-2-苯基甘氨酸(3.096g，20.48mmol)、1N HCl(30mL)及甲醇(40mL)的经冷却(约15℃)混合物中。移除冷却浴且在H2气球下搅拌反应混合物17小时。再添加乙醛(10mL，178.2mmol)，且在H2气氛下继续搅拌24小时[注意：在整个反应中视需要补充H2的供应]。经硅藻土(
Figure BDA00001954398800253
)过滤反应混合物，且在真空中浓缩滤液。将所得粗物质自异丙醇重结晶，得到亮白色固体状的(R)-2-(乙基氨基)-2-苯基乙酸的盐酸盐(2.846g)。1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5ppm,400MHz):δ14.15(br s,1H),9.55(br s,2H),7.55-7.48(m,5H),2.88(br m,1H),2.73(br m,1H),1.20(表观三重峰,J＝7.2,3H)。LC(条件I):RT=0.39min;>95%的同质性指数；LC-MS:[M+H]+C10H14NO2的分析计算值为180.10；实测值为180.18。
将10%Pd/C(536mg)于甲醇/H2O(3mL/1mL)中的悬浮液添加至(R)-2-(乙基氨基)-2-苯基乙酸/HCl(1.492g，6.918mmol)、甲醛(20mL于水中的37wt%)、1N HCl(20mL)及甲醇(23mL)的混合物中。在H2气球下搅拌反应混合物约72小时，其中视需要补充H2的供应。经硅藻土(
Figure BDA00001954398800261
)过滤反应混合物，且在真空中浓缩滤液。将所得粗物质自异丙醇(50mL)重结晶，得到白色固体状的Cap-3的盐酸盐(985mg)。1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5ppm,400MHz):δ10.48(br s,1H),7.59-7.51(m,5H),5.26(s,1H),3.08(表观宽单峰,2H),2.65(br s,3H),1.24(br m,3H)。LC(条件I):RT=0.39min;>95%的同质性指数(homogeneity index)；LC-MS:[M+H]+C11H16NO2的分析计算值为194.12；实测值为194.18；HRMS:[M+H]+C11H16NO2的分析计算值为194.1180；实测值为194.1181。
Cap-4
Figure BDA00001954398800262
(R)-2-(甲氧基羰基氨基)-2-苯基乙酸
将ClCO2Me(3.2mL，41.4mmol)经6分钟逐滴添加至(R)-2-氨基-2-苯基乙酸叔丁酯/HCl(9.877g，40.52mmol)及二异丙基乙胺(14.2mL，81.52mmol)的经冷却(冰/水)THF(410mL)半溶液中，且在类似温度下搅拌5.5小时。在真空中移除挥发性组分，且将残余物分配在水(100mL)与乙酸乙酯(200mL)之间。以1N HCl(25mL)及饱和NaHCO3溶液(30mL)洗涤有机层，干燥(MgSO4)，过滤，且在真空中浓缩。用己烷研磨所得无色油状物，过滤且以己烷(100mL)洗涤，得到白色固体状的(R)-2-(甲氧基羰基氨基)-2-苯基乙酸叔丁酯(7.7g)。1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5ppm,400MHz):7.98(d,J＝8.0,1H),7.37-7.29(m,5H),5.09(d,J＝8,1H),3.56(s,3H),1.33(s,9H)。LC(条件I):RT=1.53min；约90%的同质性指数；LC-MS:[M+Na]+C14H19NNaO4的分析计算值为288.12；实测值为288.15。
经7分钟将TFA(16mL)逐滴添加至上述产物的经冷却(冰/水)CH2Cl2(160mL)溶液中，且移除冷却浴且搅拌反应混合物20小时。由于去保护仍不完全，故再添加TFA(1.0mL)且再继续搅拌2小时。在真空中移除挥发性组分且以乙醚(15mL)及己烷(12mL)处理所得油状残余物，得到析出物。过滤析出物且以乙醚/己烷(约1:3比率；30mL)洗涤且在真空中干燥，得到松散白色固体状的Cap-4(5.57g)。旋光度：-176.9°[c=3.7mg/mL(于H2O中)；λ=589nm]。1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5ppm,400MHz):δ12.84(br s,1H),7.96(d,J＝8.3,1H),7.41-7.29(m,5H),5.14(d,J＝8.3,1H),3.55(s,3H)。LC(条件I):RT=1.01min;>95%的同质性指数；LC-MS:[M+H]+C10H12NO4的分析计算值为210.08；实测值为210.17；HRMS:[M+H]+C10H12NO4的分析计算值为210.0766；实测值为210.0756。
Cap-5
Figure BDA00001954398800271
将(R)-2-苯基甘氨酸(1.0g，6.62mmol)、1,4-二溴丁烷(1.57g，7.27mmol)及Na2CO3(2.10g，19.8mmol)于乙醇(40mL)中的混合物在100℃下加热21小时。冷却反应混合物至环境温度且过滤，且在真空中浓缩滤液。将残余物溶解于乙醇中且以1N HCl酸化至pH值为3-4，且在真空中移除挥发性组分。将所得粗物质通过反相HPLC(水/甲醇/TFA)纯化，得到半黏性白色泡沫状的Cap-5的三氟乙酸盐(1.0g)。1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5,500MHz)δ10.68(br s,1H),7.51(m,5H),5.23(s,1H),3.34(表观宽单峰,2H),3.05(表观宽单峰,2H),1.95(表观宽单峰,4H)；RT=0.30分钟(条件I);>98%的同质性指数；LC-MS:[M+H]+C12H16NO2的分析计算值为206.12；实测值为206.25。
Cap-6
Figure BDA00001954398800272
通过使用Cap-5的制备方法自(R)-2-苯基甘氨酸及1-溴-2-(2-溴乙氧基)乙烷合成Cap-6的三氟乙酸盐。1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5,500MHz)δ12.20(br s,1H),7.50(m,5H),4.92(s,1H),3.78(表观宽单峰,4H),3.08(表观宽单峰,2H),2.81(表观宽单峰,2H)；RT=0.32分钟(条件I)；>98%；LC-MS:[M+H]+C12H16NO3的分析计算值为222.11；实测值为222.20；HRMS:[M+H]+C12H16NO3的分析计算值为：222.1130；实测值为222.1121。
Cap-7
Figure BDA00001954398800281
将对甲苯磺酰基氯(8.65g，45.4mmol)的CH2Cl2(200mL)溶液逐滴添加至(S)-2-羟基-2-苯基乙酸苯甲酯(10.0g，41.3mmol)、三乙胺(5.75mL，41.3mmol)及4-二甲基氨基吡啶(0.504g，4.13mmol)的经冷却(-5℃)CH2Cl2(200mL)溶液中，同时保持温度在-5℃与0℃之间。在0℃下搅拌反应混合物9小时，且随后储存于冷冻器(-25℃)中14小时。将其解冻至环境温度且以水(200mL)、1N HCl(100mL)及盐水(100mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤且在真空中浓缩，得到黏性油状的2-苯基-2-(甲苯磺酰基氧基)乙酸苯甲酯(16.5g)，其在静置之后固化。未检验产物的手性完整性且该产物不经进一步纯化即用于下一步骤。1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5,500MHz)δ7.78(d,J＝8.6,2H),7.43-7.29(m,10H),7.20(m,2H),6.12(s,1H),5.16(d,J＝12.5,1H),5.10(d,J＝12.5,1H),2.39(s,3H)。RT=3.00(条件III);>90%的同质性指数；LC-MS:[M+H]+C22H20NaO5S的分析计算值为419.09；实测值为419.04。
将2-苯基-2-(甲苯磺酰基氧基)乙酸苯甲酯(6.0g，15.1mmol)、1-甲基哌嗪(3.36mL，30.3mmol)及N,N-二异丙基乙胺(13.2mL，75.8mmol)的THF(75mL)溶液在65℃下加热7小时。冷却反应混合物至环境温度且在真空中移除挥发性组分。将残余物分配在乙酸乙酯与水之间，且以水及盐水洗涤有机层，干燥(MgSO4)，过滤且在真空中浓缩。将所得粗物质通过快速色谱法(硅胶，乙酸乙酯)纯化，得到橘褐色黏性油状的2-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-苯基乙酸苯甲酯(4.56g)。手性HPLC分析(
Figure BDA00001954398800282
OD-H)表明样品为比率为38.2:58.7的立体异构体的混合物。如下实现立体异构体的分离：将产物溶解于120mL乙醇/庚烷(1:1)中且注于(每次注射5mL)手性HPLC柱(Chiracel OJ,5cm ID×50cm L,20μm)上，以85:15庚烷/乙醇在75mL/min下洗脱且在220nm下监测。获得黏性油状的立体异构体-1(1.474g)及立体异构体-2(2.2149g)。1H NMR(CDCl3,δ=7.26,500MHz)7.44-7.40(m,2H),7.33-7.24(m,6H),7.21-7.16(m,2H),5.13(d,J＝12.5,1H),5.08(d,J＝12.5,1H),4.02(s,1H),2.65-2.38(表观宽单峰,8H),2.25(s,3H)。RT=2.10(条件III);>98%的同质性指数；LC-MS:[M+H]+C20H25N2O2的分析计算值为325.19；实测值为325.20。
将2-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-苯基乙酸苯甲酯的任一立体异构体(1.0g，3.1mmol)的甲醇(10mL)溶液添加至10%Pd/C(120mg)于甲醇(5.0mL)中的悬浮液中。将反应混合物在小心监控下暴露于氢气气球<50分钟。完成反应之后，立即经硅藻土(
Figure BDA00001954398800291
)过滤催化剂且在真空中浓缩滤液，得到被苯基乙酸污染的棕褐色泡沫状的Cap-7(867.6mg；质量高于理论收率)。该产物不经进一步纯化即用于下一步骤。1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5,500MHz)δ7.44-7.37(m,2H),7.37-7.24(m,3H),3.92(s,1H),2.63-2.48(表观宽单峰,2H),2.48-2.32(m,6H),2.19(s,3H)；RT=0.31(条件II);>90%的同质性指数；LC-MS:[M+H]+C13H19N2O2的分析计算值为235.14；实测值为235.15；HRMS:[M+H]+C13H19N2O2的分析计算值为235.1447；实测值为235.1440。
如下所述，根据Cap-7的合成，通过使用适当胺进行SN2置换步骤(亦即对于Cap-8而言为4-羟基哌啶且对于Cap-9而言为(S)-3-氟吡咯烷)且使用改变的条件进行各自立体异构中间体的分离来进行Cap-8及Cap-9的合成。
Cap-8
Figure BDA00001954398800292
通过使用以下条件来实现中间体2-(4-羟基哌啶-1-基)-2-苯基乙酸苯甲酯的立体异构分离：将化合物(500mg)溶解于乙醇/庚烷(5mL/45mL)中。将所得溶液注于(每次注射5mL)手性HPLC柱(Chiracel OJ,2cm ID×25cm L,10μm)上，以80:20庚烷/乙醇在10mL/min下洗脱，在220nm下监测，得到淡黄色黏性油状的186.3mg立体异构体-1及209.1mg立体异构体-2。根据Cap-7的制备氢解所述苯甲酯，得到Cap-8：1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5,500MHz)7.40(d,J＝7,2H),7.28-7.20(m,3H),3.78(s 1H),3.46(m,1H),2.93(m,1H),2.62(m,1H),2.20(m,2H),1.70(m,2H),1.42(m,2H)。RT=0.28(条件II);>98%的同质性指数；LC-MS:[M+H]+C13H18NO3的分析计算值为236.13；实测值为236.07；HRMS:[M+H]+C13H18NO3的计算值为236.1287；实测值为236.1283。
Cap-9
Figure BDA00001954398800301
通过使用以下条件来实现中间体2-((S)-3-氟吡咯烷-1-基)-2-苯基乙酸苯甲酯的非对映异构分离：将该酯(220mg)在手性HPLC柱(Chiracel OJ-H,0.46cm ID×25cm L,5μm)上以含有0.1%TFA的95%CO2/5%甲醇在10巴压力、70mL/min流速及35℃的温度下洗脱来分离。浓缩各自立体异构体的HPLC洗脱物，且将残余物溶解于CH2Cl2(20mL)中且以水性介质(10mL水+1mL饱和NaHCO3溶液)洗涤。干燥(MgSO4)有机相，过滤且在真空中浓缩，得到92.5mg级份-1及59.6mg级份-2。根据Cap-7的制备氢解所述苯甲酯以制备Cap-9a及Cap-9b。Cap-9a(非对映异构体-1；样品由于用反相HPLC使用H2O/甲醇/TFA溶剂纯化而为三氟乙酸盐)：1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5,400MHz)7.55-7.48(m,5H),5.38(双重多重峰(d of m)，J＝53.7,1H),5.09(br s,1H),3.84-2.82(br m,4H),2.31-2.09(m,2H)。RT=0.42(条件I);>95%的同质性指数；LC-MS:[M+H]+C12H15FNO2的分析计算值为224.11；实测值为224.14;Cap-9b(非对映异构体-2):1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5,400MHz)7.43-7.21(m,5H),5.19(双重多重峰，J＝55.9,1H),3.97(s,1H),2.95-2.43(m,4H),2.19-1.78(m,2H)。RT=0.44(条件I)；LC-MS:[M+H]+C12H15FNO2的分析计算值为224.11；实测值为224.14。
Cap-10
Figure BDA00001954398800302
向D-脯氨酸(2.0g，17mmol)及甲醛(2.0mL于H2O中的37wt%)于甲醇(15mL)中的溶液中添加10%Pd/C(500mg)于甲醇(5mL)中的悬浮液。在氢气气球下搅拌混合物23小时。经硅藻土(
Figure BDA00001954398800303
)过滤反应混合物且在真空中浓缩，得到灰白色固体状的Cap-10(2.15g)。1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5,500MHz)3.42(m,1H),3.37(dd,J＝9.4,6.1,1H),2.85-2.78(m,1H),2.66(s,3H),2.21-2.13(m,1H),1.93-1.84(m,2H),1.75-1.66(m,1H)。RT=0.28(条件II);>98%的同质性指数；LC-MS:[M+H]+C6H12NO2的分析计算值为130.09；实测值为129.96。
Cap-11
Figure BDA00001954398800311
将(2S,4R)-4-氟吡咯烷-2-甲酸(0.50g，3.8mmol)、甲醛(0.5mL于H2O中的37wt%)、12N HCl(0.25mL)及10%Pd/C(50mg)于甲醇(20mL)中的混合物在氢气气球下搅拌19小时。经硅藻土(
Figure BDA00001954398800312
)过滤反应混合物，且在真空中浓缩滤液。将残余物自异丙醇重结晶，得到白色固体状的Cap-11的盐酸盐(337.7mg)。1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5,500MHz)5.39(d m,J＝53.7,1H),4.30(m,1H),3.90(ddd,J＝31.5,13.5,4.5,1H),3.33(dd,J＝25.6,13.4,1H),2.85(s,3H),2.60-2.51(m,1H),2.39-2.26(m,1H)。RT=0.28(条件II);>98%的同质性指数；LC-MS:[M+H]+C6H11FNO2的分析计算值为148.08；实测值为148.06。
Cap-12(与Cap-52相同)
Figure BDA00001954398800313
(S)-2-(甲氧基羰基氨基)丙酸
将L-丙氨酸(2.0g，22.5mmol)溶解于10%碳酸钠水溶液(50mL)中，且向其中添加氯甲酸甲酯(4.0mL)的THF(50mL)溶液。在环境条件下搅拌反应混合物4.5小时且在真空中浓缩。将所得白色固体溶解于水中且以1N HCl酸化至pH值为约2-3。以乙酸乙酯(3×100mL)萃取所得溶液，且干燥(Na2SO4)合并的有机相，过滤，且在真空中浓缩，得到无色油状物(2.58g)。将500mg该物质通过反相HPLC(H2O/甲醇/TFA)纯化，得到150mg无色油状的Cap-12。1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5,500MHz)7.44(d,J＝7.3,0.8H),7.10(br s,0.2H),3.97(m,1H),3.53(s,3H),1.25(d,J＝7.3,3H)。
Cap-13
Figure BDA00001954398800314
将L-丙氨酸(2.5g，28mmol)、甲醛(8.4g，37wt％)、1N HCl(30mL)及10%Pd/C(500mg)于甲醇(30mL)中的混合物在氢气气氛(50psi)下搅拌5小时。经硅藻土(
Figure BDA00001954398800321
)过滤反应混合物且在真空中浓缩滤液，得到油状的Cap-13的盐酸盐，其在真空下静置之后固化(4.4g；该质量高于理论收率)。该产物无需进一步纯化即可使用。1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5,500MHz)δ12.1(br s,1H),4.06(q,J＝7.4,1H),2.76(s,6H),1.46(d,J＝7.3,3H)。
Cap-14
(R)-2-苯基-2-(哌啶-1-基)乙酸
步骤1：在0℃下于甲醇中搅拌(R)-(-)-D-苯基甘氨酸叔丁酯(3.00g，12.3mmol)、NaBH3CN(0.773g，12.3mmol)、KOH(0.690g，12.3mmol)及乙酸(0.352mL，6.15mmol)的混合物。向该混合物中经5分钟逐滴添加戊二醛(2.23mL，12.3mmol)。在温热至环境温度的同时搅拌反应混合物且在相同温度下继续搅拌16小时。随后移除溶剂且将残余物分配在10%NaOH水溶液及乙酸乙酯之间。分离有机相，干燥(MgSO4)，过滤且浓缩至干，得到澄清油状物。将该物质通过反相制备型HPLC(Primesphere C-18，30×100mm；CH3CN-H2O-0.1% TFA)纯化，得到澄清油状的中间体酯(2.70g，56%)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.53-7.44(m,3H),7.40-7.37(m,2H),3.87(d,J＝10.9Hz,1H),3.59(d,J＝10.9Hz,1H),2.99(t,J＝11.2Hz,1H),2.59(t,J＝11.4Hz,1H),2.07-2.02(m,2H),1.82(d,J＝1.82Hz,3H),1.40(s,9H)。LC-MS:C17H25NO2的分析计算值为275；实测值为276(M+H)+。
步骤2：向中间体酯(1.12g，2.88mmol)于二氯甲烷(10mL)中的经搅拌溶液中添加TFA(3mL)。在环境温度下搅拌反应混合物4小时且随后浓缩至干，得到淡黄色油状物。将该油状物使用反相制备型HPLC(PrimesphereC-18，30×100mm；CH3CN-H2O-0.1%TFA)纯化。合并适当级份且在真空中浓缩至干。随后将残余物溶解于最小量的甲醇中且施加于MCX LP萃取柱(2×6g)。以甲醇(40mL)冲洗萃取柱且随后使用于甲醇(50mL)中的2M氨洗脱所需化合物。合并含产物的级份且浓缩且将残余物吸收于水中。冻干该溶液，得到淡黄色固体状的标题化合物(0.492g，78%)。1H NMR(DMSO-d6)δ7.50(s,5H),5.13(s,1H),3.09(br s,2H),2.92-2.89(m,2H),1.74(m,4H),1.48(br s,2H)。LC-MS:C13H17NO2的分析计算值为219；实测值为220(M+H)+。
Cap-15
Figure BDA00001954398800331
步骤1：2-溴-2-苯基乙酸(S)-1-苯基乙酯：向α-溴苯基乙酸(10.75g，0.050mol)、(S)-(-)-1-苯基乙醇(7.94g，0.065mol)及DMAP(0.61g，5.0mmol)于无水二氯甲烷(100mL)中的混合物中一次性添加固体EDCI(12.46g，0.065mol)。在室温下在Ar下搅拌所得溶液18小时，且随后以乙酸乙酯稀释，洗涤(H2O×2、盐水)，干燥(Na2SO4)，过滤且浓缩，得到浅黄色油状物。将该油状物进行快速色谱(SiO2/己烷-乙酸乙酯，4:1)，得到白色固体状的标题化合物(11.64g，73%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.53-7.17(m,10H),5.95(q,J＝6.6Hz,0.5H),5.94(q,J＝6.6Hz,0.5H),5.41(s,0.5H),5.39(s,0.5H),1.58(d,J＝6.6Hz,1.5H),1.51(d,J＝6.6Hz,1.5H)。
步骤2：(R)-2-(4-羟基-4-甲基哌啶-1-基)-2-苯基乙酸(S)-1-苯基乙酯：向2-溴-2-苯基乙酸(S)-1-苯基乙酯(0.464g，1.45mmol)于THF(8mL)中的溶液中添加三乙胺(0.61mL，4.35mmol)，继而添加碘化四丁基铵(0.215g，0.58mmol)。在室温下搅拌反应混合物5分钟且随后添加4-甲基-4-羟基哌啶(0.251g，2.18mmol)于THF(2mL)中的溶液。在室温下搅拌混合物1小时且随后在55-60℃(油浴温度)下加热4小时。随后以乙酸乙酯(30mL)稀释经冷却反应混合物，洗涤(H2O×2，盐水)，干燥(MgSO4)，过滤且浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(0-60%乙酸乙酯-己烷)纯化而首先得到白色固体状的标题化合物的(S,R)-异构体(0.306g，60%)且随后得到亦为白色固体状的相应(S,S)-异构体(0.120g，23%)。(S,R)-异构体：1H NMR(CD3OD)δ7.51-7.45(m,2H),7.41-7.25(m,8H),5.85(q,J＝6.6Hz,1H),4.05(s,1H),2.56-2.45(m,2H),2.41-2.29(m,2H),1.71-1.49(m,4H),1.38(d,J＝6.6Hz,3H),1.18(s,3H)。LC-MS:C22H27NO3的分析计算值为353；实测值为354(M+H)+。(S,S)-异构体：1H NMR(CD3OD)δ7.41-7.30(m,5H),7.20-7.14(m,3H),7.06-7.00(m,2H),5.85(q,J＝6.6Hz,1H),4.06(s,1H),2.70-2.60(m,1H),2.51(dt,J＝6.6,3.3Hz,1H),2.44-2.31(m,2H),1.75-1.65(m,1H),1.65-1.54(m,3H),1.50(d,J＝6.8Hz,3H),1.20(s,3H)。LC-MS:C22H27NO3的分析计算值为353；实测值为354(M+H)+。
步骤3：(R)-2-(4-羟基-4-甲基哌啶-1-基)-2-苯基乙酸：向(R)-2-(4-羟基-4-甲基哌啶-1-基)-2-苯基乙酸(S)-1-苯基乙酯(0.185g，0.52mmol)于二氯甲烷(3mL)中的溶液中添加三氟乙酸(1mL)且在室温下搅拌混合物2小时。随后在真空中移除挥发物且将残余物通过反相制备型HPLC (Primesphere C-18，20×100mm；CH3CN-H2O-0.1%TFA)纯化，得到浅蓝色固体状的标题化合物(三氟乙酸盐形式)(0,128g，98%)。LC-MS:C14H19NO3的分析计算值为249；实测值为250(M+H)+。
 Cap-16
Figure BDA00001954398800341
步骤1：2-(2-氟苯基)乙酸(S)-1-苯基乙酯：将2-氟苯基乙酸(5.45g，35.4mmol)、(S)-1-苯基乙醇(5.62g，46.0mmol)、EDCI(8.82g，46.0mmol)及DMAP(0.561g，4.60mmol)于CH2Cl2(100mL)中的混合物在室温下搅拌12小时。随后浓缩溶剂且将残余物分配在H2O-乙酸乙酯中。使各相分离且以乙酸乙酯(2×)反萃取水层。洗涤(H2O、盐水)合并的有机相，干燥(Na2SO4)，过滤且在真空中浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(
Figure BDA00001954398800342
/0-20%乙酸乙酯-己烷)纯化，得到无色油状的标题化合物(8.38g，92%)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.32-7.23(m,7H),7.10-7.04(m,2),5.85(q,J＝6.5Hz,1H),3.71(s,2H),1.48(d,J＝6.5Hz,3H)。
步骤2：(R)-2-(2-氟苯基)-2-(哌啶-1-基)乙酸((S)-1-苯基乙基)酯：在0℃下向2-(2-氟苯基)乙酸(S)-1-苯基乙酯(5.00g，19.4mmol)于THF(1200mL)中的溶液中添加DBU(6.19g，40.7mmol)且将溶液温热至室温，同时搅拌30分钟。随后冷却溶液至-78℃且添加CBr4(13.5g，40.7mmol)于THF(100mL)中的溶液，且将混合物温热至-10℃且在该温度下搅拌2小时。以饱和NH4Cl水溶液淬灭反应混合物，且分离各层。以乙酸乙酯(2×)反萃取水层且洗涤(H2O、盐水)合并的有机相，干燥(Na2SO4)，过滤且在真空中浓缩。向残余物中添加哌啶(5.73mL，58.1mmol)且在室温下搅拌溶液24小时。随后在真空中针对挥发物进行浓缩，且将残余物通过硅胶色谱法(
Figure BDA00001954398800351
/0-30%乙醚-己烷)纯化，得到黄色油状的纯的非对映异构体混合物(通过1H NMR测得比率为2:1)(2.07g，31%)以及未反应的原料(2.53g，51%)。进一步对非对映异构混合物进行色谱纯化(
Figure BDA00001954398800352
/0-10%乙醚-甲苯)，得到无色油状的标题化合物(0.737g，11%)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.52(ddd,J＝9.4,7.6,1.8Hz,1H),7.33-7.40(m,1),7.23-7.23(m,4H),7.02-7.23(m,4H),5.86(q,J＝6.6Hz,1H),4.45(s,1H),2.39-2.45(m,4H),1.52-1.58(m,4H),1.40-1.42(m,1H),1.38(d,J＝6.6Hz,3H)。LC-MS:C21H24FNO2的分析计算值为341；实测值为342(M+H)+。
步骤3：(R)-2-(2-氟苯基)-2-(哌啶-1-基)乙酸：使(R)-2-(2-氟苯基)-2-(哌啶-1-基)乙酸((S)-1-苯基乙基)酯(0.737g，2.16mmol)及20%Pd(OH)2/C(0.070g)于乙醇(30mL)中的混合物在室温及大气压力(H2气球)下氢化2小时。随后以Ar净化溶液，经硅藻土(
Figure BDA00001954398800353
)过滤且在真空中浓缩。这得到无色固体状的标题化合物(0.503g，98%)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.65(ddd,J＝9.1,7.6,1.5Hz,1H),7.47-7.53(m,1H),7.21-7.30(m,2H),3.07-3.13(m,4H),1.84(br s,4H),1.62(br s,2H)。LC-MS:C13H16FNO2的分析计算值为237；实测值为238(M+H)+。
Cap-17
Figure BDA00001954398800354
步骤1：(R)-2-(4-羟基-4-苯基哌啶-1-基)-2-苯基乙酸(S)-1-苯基乙酯：向2-溴-2-苯基乙酸(S)-1-苯基乙酯(1.50g，4.70mmol)于THF(25mL)中的溶液中添加三乙胺(1.31mL，9.42mmol)，继而添加碘化四丁基铵(0.347g，0.94mmol)。在室温下搅拌反应混合物5分钟且随后添加4-苯基-4-羟基哌啶(1.00g，5.64mmol)于THF(5mL)中的溶液。搅拌混合物16小时且随后以乙酸乙酯(100mL)稀释，洗涤(H2O×2，盐水)，干燥(MgSO4)，过滤且浓缩。将残余物在硅胶柱(0-60%乙酸乙酯-己烷)上纯化，得到非对映异构体的约2:1混合物(通过1H NMR判断)。使用超临界流体色谱法(CHIRAL
Figure BDA00001954398800361
OJ-H，30×250mm；于CO2中在35℃下的20%乙醇)进行所述异构体的分离而首先得到黄色油状的标题化合物的(R)-异构体(0.534g，27%)且随后得到亦为黄色油状的相应(S)-异构体(0.271g，14%)。(S,R)-异构体：1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.55-7.47(m,4H),7.44-7.25(m,10H),7.25-7.17(m,1H),5.88(q,J＝6.6Hz,1H),4.12(s,1H),2.82-2.72(m,1H),2.64(dt,J＝11.1,2.5Hz,1H),2.58-2.52(m,1H),2.40(dt,J＝11.1,2.5Hz,1H),2.20(dt,J＝12.1,4.6Hz,1H),2.10(dt,J＝12.1,4.6Hz,1H),1.72-1.57(m,2H),1.53(d,J＝6.5Hz,3H)。LC-MS:C27H29NO3的分析计算值为415；实测值为416(M+H)+；(S,S)-异构体：H1NMR(400MHz,CD3OD)δ7.55-7.48(m,2H),7.45-7.39(m,2H),7.38-7.30(m,5H),7.25-7.13(m,4H),7.08-7.00(m,2H),5.88(q,J＝6.6Hz,1H),4.12(s,1H),2.95-2.85(m,1H),2.68(dt,J＝11.1,2.5Hz,1H),2.57-2.52(m,1H),2.42(dt,J＝11.1,2.5Hz,1H),2.25(dt,J＝12.1,4.6Hz,1H),2.12(dt,J＝12.1,4.6Hz,1H),1.73(dd,J＝13.6,3.0Hz,1H),1.64(dd,J＝13.6,3.0Hz,1H),1.40(d,J＝6.6Hz,3H)。LC-MS:C27H29NO3的分析计算值为415；实测值为416(M+H)+。
以类似方式制备以下酯：
Figure BDA00001954398800371
用于测定保留时间的手性SFC条件：
条件I
Figure BDA00001954398800372
溶剂：含0.1%DEA的90%CO2-10%甲醇
温度：35℃
压力：150巴
流速：2.0mL/min.
在220nm下进行紫外线监测
进样：1.0mg/3mL甲醇
条件II
Figure BDA00001954398800373
溶剂：含0.1%DEA的90%CO2-10%甲醇
温度：35℃
压力：150巴
流速：2.0mL/min.
在220nm下进行紫外线监测
进样：1.0mg/mL甲醇
Cap-17，步骤2：(R)-2-(4-羟基-4-苯基哌啶-1-基)-2-苯基乙酸：向(R)-2-(4-羟基-4-苯基哌啶-1-基)-2-苯基乙酸(S)-1-苯基乙酯(0.350g，0.84mmol)于二氯甲烷(5mL)中的溶液中添加三氟乙酸(1mL)且在室温下搅拌混合物2小时。随后在真空中移除挥发物且将残余物通过反相制备型HPLC(PrimesphereC-18，20×100mm；CH3CN-H2O-0.1%TFA)纯化，得到白色固体状标题化合物(三氟乙酸盐形式)(0.230g，88%)。LC-MS:C19H21NO3的分析计算值为311.15；实测值为312(M+H)+。
以类似方式制备光学纯形式的以下羧酸：
Figure BDA00001954398800381
用于测定保留时间的LC-MS条件：
条件I
Figure BDA00001954398800391
起始%B=0
最终%B=100
梯度时间=4min
流速=4mL/min
波长=220
溶剂A=10%甲醇-90%H2O-0.1%TFA
溶剂B=90%甲醇-10%H2O-0.1%TFA
条件II
柱：Waters-Sunfire 4.6×50mm S5
起始%B=0
最终%B=100
梯度时间=2min
流速=4mL/min
波长=220
溶剂A=10%甲醇-90%H2O-0.1%TFA
溶剂B=90%甲醇-10%H2O-0.1%TFA
条件III
Figure BDA00001954398800392
起始%B=0
最终%B=100
梯度时间=2min
流速=4mL/min
波长=220
溶剂A=10%甲醇-90%H2O-0.1%TFA
溶剂B=90%甲醇-10%H2O-0.1%TFA
Cap-18
步骤1：(R,S)-2-(吡啶-4-基)-2-溴乙酸乙酯。在0℃下在氩气下向吡啶-4-基乙酸乙酯(1.00g，6.05mmol)于无水THF(150mL)中的溶液中添加DBU(0.99mL，6.66mmol)。将反应混合物经30分钟温热至室温且随后冷却至-78℃。向该混合物中添加CBr4(2.21g，6.66mmol)且在-78℃下继续搅拌2小时。随后以饱和NH4Cl水溶液淬灭反应反应混合物且分离各相。洗涤(盐水)有机相，干燥(Na2SO4)，过滤且在真空中浓缩。将所得黄色油状物立即通过快速色谱法(SiO2/己烷-乙酸乙酯，1:1)纯化，得到略不稳定的黄色油状的标题化合物(1.40g，95%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.62(dd,J＝4.6,1.8Hz,2H),7.45(dd,J＝4.6,1.8Hz,2H),5.24(s,1H),4.21-4.29(m,2H),1.28(t,J＝7.1Hz,3H)。LC-MS:C9H10BrNO2的分析计算值为242,244；实测值为243,245(M+H)+。
步骤2：(R,S)-2-(吡啶-4-基)-2-(N,N-二甲基氨基)乙酸乙酯。在室温下向(R,S)-2-(吡啶-4-基)-2-溴乙酸乙酯(1.40g，8.48mmol)于DMF(10mL)中的溶液中添加二甲胺(于THF中2M，8.5mL，17.0mmol)。在反应完成(通过薄层色谱法判断)之后，在真空中移除挥发物且将残余物通过快速色谱法(
Figure BDA00001954398800402
40+M SiO2柱；50%-100%乙酸乙酯-己烷)纯化，得到淡黄色油状的标题化合物(0.539g，31%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.58(d,J＝6.0Hz,2H),7.36(d,J＝6.0Hz,2H),4.17(m,2H),3.92(s,1H),2.27(s,6H),1.22(t,J＝7.0Hz)。LC-MS:C11H16N2O2的分析计算值为：208；实测值为209(M+H)+。
步骤3：(R,S)-2-(吡啶-4-基)-2-(N,N-二甲基氨基)乙酸：在室温下向(R,S)-2-(吡啶-4-基)-2-(N,N-二甲基氨基)乙酸乙酯(0.200g，0.960mmol)于THF-甲醇-H2O(1∶1:1，6mL)的混合物中的溶液中添加粉末状LiOH(0.120g，4.99mmol)。搅拌溶液3小时且随后使用1N HCl酸化至pH值为6。以乙酸乙酯洗涤水相且随后冻干，得到黄色固体状的标题化合物的二盐酸盐(含有LiCl)。将产物按原样用于后续步骤中。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.49(d,J＝5.7Hz,2H),7.34(d,J＝5.7Hz,2H),3.56(s,1H),2.21(s,6H)。
以类似方式使用上述方法制备以下实施例：
Figure BDA00001954398800411
Figure BDA00001954398800421
Cap-37
Figure BDA00001954398800422
步骤1：(R,S)-2-(喹啉-3-基)-2-(N,N-二甲基氨基)-乙酸乙酯：将N,N-二甲基氨基乙酸乙酯(0.462g，3.54mmol)、K3PO4(1.90g，8.95mmol)、Pd(t-Bu3P)2(0.090g，0.176mmol)、3-溴喹啉及甲苯(10mL)的混合物以Ar气流脱气15分钟。随后在100℃下加热反应混合物12小时，之后冷却至室温且倒入H2O中。以乙酸乙酯(2×)萃取混合物且洗涤(H2O、盐水)合并的有机相，干燥(Na2SO4)，过滤且在真空中浓缩。将残余物首先通过反相制备型HPLC(Primesphere C-18，30×100mm；CH3CN-H2O-5mM NH4OAc)纯化且随后通过快速色谱法(SiO2/己烷-乙酸乙酯，1:1)纯化，得到橙色油状的标题化合物(0.128g，17%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.90(d,J＝2.0Hz,1H),8.32(d,J＝2.0Hz,1H),8.03-8.01(m,2H),7.77(ddd,J＝8.3,6.8,1.5Hz,1H),7.62(ddd,J＝8.3,6.8,1.5Hz,1H),4.35(s,1H),4.13(m,2H),2.22(s,6H),1.15(t,J＝7.0Hz,3H)。LC-MS:C15H18N2O2的分析计算值为258；实测值为259(M+H)+。
步骤2：(R,S)-2-(喹啉-3-基)-2-(N,N-二甲基氨基)乙酸：将(R,S)-2-(喹啉-3-基)-2-(N,N-二甲基氨基)乙酸乙酯(0.122g，0.472mmol)及6M HCl(3mL)的混合物在100℃下加热12小时。在真空中移除溶剂，得到淡黄色泡沫状的标题化合物的二盐酸盐(0.169g，>100%)。该未经纯化的物质不经进一步纯化即可用于后续步骤中。LC-MS:C13H14N2O2的分析计算值为230；实测值为231(M+H)+。
Cap-38
Figure BDA00001954398800431
步骤1：(R)-2-(二甲基氨基)-2-(2-氟苯基)乙酸((S)-1-苯基乙基)酯及(S)-2-(二甲基氨基)-2-(2-氟苯基)乙酸((S)-1-苯基乙基)酯：向(R,S)-2-(二甲基氨基)-2-(2-氟苯基)乙酸(2.60g，13.19mmol)、DMAP(0.209g，1.71mmol)及(S)-1-苯基乙醇(2.09g，17.15mmol)于CH2Cl2(40mL)中的混合物中添加EDCI(3.29g，17.15mmol)，且在室温下搅拌混合物12小时。随后在真空中移除溶剂且将残余物分配在乙酸乙酯-H2O中。分离各层，以乙酸乙酯(2×)反萃取水层且洗涤(H2O、盐水)合并的有机相，干燥(Na2SO4)，过滤且在真空中浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(
Figure BDA00001954398800432
/0-50%乙醚-己烷)纯化。然后将所得纯非对映异构混合物通过反相制备型HPLC(Primesphere C-18，30×100mm；CH3CN-H2O-0.1%TFA)分离而首先得到(R)-2-(二甲基氨基)-2-(2-氟苯基)乙酸(S)-1-苯乙酯(0.501g，13%)且随后得到(S)-2-(二甲基氨基)-2-(2-氟苯基)乙酸(S)-1-苯乙酯(0.727g，18%)，两者均为其三氟乙酸盐形式。(S,R)-异构体：1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.65-7.70(m,1H),7.55-7.60(ddd,J＝9.4,8.1,1.5Hz,1H),7.36-7.41(m,2H),7.28-7.34(m,5H),6.04(q,J＝6.5Hz,1H),5.60(s,1H),2.84(s,6H),1.43(d,J＝6.5Hz,3H)。LC-MS:C18H20FNO2的分析计算值为301；实测值为302(M+H)+；(S,S)-异构体：1HNMR(400MHz,CD3OD)δ7.58-7.63(m,1H),7.18-7.31(m,6H),7.00(dd,J＝8.5,1.5Hz,2H),6.02(q,J＝6.5Hz,1H),5.60(s,1H),2.88(s,6H),1.54(d,J＝6.5Hz,3H)。LC-MS:C18H20FNO2的分析计算值为301；实测值为302(M+H)+。
步骤2：(R)-2-(二甲基氨基)-2-(2-氟苯基)乙酸：使(R)-2-(二甲基氨基)-2-(2-氟苯基)乙酸((S)-1-苯基乙基)酯的三氟乙酸盐(1.25g，3.01mmol)及20%Pd(OH)2/C(0.125g)于乙醇(30mL)中的混合物在室温及大气压力(H2气球)下氢化4小时。随后以Ar净化溶液，经硅藻土(
Figure BDA00001954398800441
)过滤且在真空中浓缩。这得到无色固体状的标题化合物(0.503g，98%)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.53-7.63(m,2H),7.33-7.38(m,2H),5.36(s,1H),2.86(s,6H)。LC-MS:C10H12FNO2的分析计算值为197；实测值为198(M+H)+。
可以类似方式由(S)-2-(二甲基氨基)-2-(2-氟苯基)乙酸((S)-1-苯基乙基)酯的三氟乙酸盐获得S-异构体。
Cap-39
Figure BDA00001954398800442
使(R)-(2-氯苯基)甘氨酸(0.300g，1.62mmol)、甲醛(35%水溶液，0.80mL，3.23mmol)及20%Pd(OH)2/C(0.050g)的混合物在室温及大气压力(H2气球)下氢化4小时。随后以Ar净化溶液，经硅藻土(
Figure BDA00001954398800443
)过滤且在真空中浓缩。将残余物通过反相制备型HPLC(Primesphere C-18，30×100mm；CH3CN-H2O-0.1%TFA)纯化，得到无色油状的标题化合物(R)-2-(二甲基氨基)-2-(2-氯苯基)乙酸的三氟乙酸盐(0.290g，55%)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.59-7.65(m,2H),7.45-7.53(m,2H),5.40(s,1H),2.87(s,6H)。LC-MS:C10H12ClNO2的分析计算值为213；实测值为214(M+H)+。
Cap-40
Figure BDA00001954398800451
向(R)-(2-氯苯基)甘氨酸(1.00g，5.38mmol)及NaOH(0.862g，21.6mmol)于H2O(5.5mL)中的冰冷溶液中逐滴添加氯甲酸甲酯(1.00mL，13.5mmol)。在0℃下搅拌混合物1小时且随后通过添加浓盐酸(2.5mL)酸化。以乙酸乙酯(2×)萃取混合物且洗涤(H2O、盐水)合并的有机相，干燥(Na2SO4)，过滤且在真空中浓缩，得到黄橙色泡沫状的标题化合物(R)-2-(甲氧基羰基氨基)-2-(2-氯苯基)乙酸(1.31g，96%)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.39-7.43(m,2H),7.29-7.31(m,2H),5.69(s,1H),3.65(s,3H)。LC-MS:C10H10ClNO4的分析计算值为243；实测值为244(M+H)+。
Cap-41
向2-(2-(氯甲基)苯基)乙酸(2.00g，10.8mmol)于THF(20mL)中的悬浮液中添加吗啉(1.89g，21.7mmol)，且在室温下搅拌溶液3小时。随后以乙酸乙酯稀释反应混合物且以H2O(2×)萃取。冻干水相且将残余物通过硅胶色谱法(
Figure BDA00001954398800453
/0-10%甲醇-CH2Cl2)纯化，得到无色固体状的标题化合物2-(2-(吗啉基甲基)苯基)乙酸(2.22g，87%)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.37-7.44(m,3H),7.29-7.33(m,1H),4.24(s,2H),3.83(br s,4H),3.68(s,2H),3.14(br s,4H)。LC-MS:C13H17NO3的分析计算值为235；实测值为236(M+H)+。
使用对于Cap-41所述的方法类似地制备以下实施例：
Figure BDA00001954398800454
Figure BDA00001954398800461
Cap-45a
Figure BDA00001954398800462
将HMDS(1.85mL，8.77mmol)添加至(R)-2-氨基-2-苯基乙酸对甲苯磺酸盐(2.83g，8.77mmol)于CH2Cl2(10mL)中的悬浮液中且在室温下搅拌混合物30分钟。一次性添加异氰酸甲酯(0.5g，8.77mmol)，继续搅拌30分钟。通过添加H2O(5mL)淬灭反应且过滤所得析出物，以H2O及正己烷洗涤，且在真空下干燥。回收到白色固体状的(R)-2-(3-甲基脲基)-2-苯基乙酸(1.5g；82%)且其无需进一步纯化即可使用。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm2.54(d,J＝4.88Hz,3H)5.17(d,J＝7.93Hz,1H)5.95(q,J＝4.48Hz,1H)6.66(d,J＝7.93Hz,1H)7.26-7.38(m,5H)12.67(s,1H)。LC-MS:C10H12N2O3的分析计算值为208.08；实测值为209.121(M+H)+；HPLC
Figure BDA00001954398800463
C-183.0×46mm，0至100%B经2分钟，1分钟保持时间，A=90%水，10%甲醇，0.1%TFA，B=10%水，90%甲醇，0.1%TFA，RT=1.38min，90%的同质性指数。
Cap-46
Figure BDA00001954398800471
根据对于Cap-45a所述的方法制备所需产物。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 0.96(t,J＝7.17Hz,3H)2.94-3.05(m,2H)5.17(d,J＝7.93Hz,1H)6.05(t,J＝5.19Hz,1H)6.60(d,J＝7.63Hz,1H)7.26-7.38(m,5H)12.68(s,1H)。LC-MS:C11H14N2O3的分析计算值为222.10；实测值为223.15(M+H)+。HPLC
Figure BDA00001954398800472
C-18 3.0×506mm，0至100%B经2分钟，1分钟保持时间，A=90%水，10%甲醇，0.2%H3PO4，B=10%水，90%甲醇，0.2%H3PO4，RT=0.87min，90%的同质性指数。
Cap-47
Figure BDA00001954398800473
步骤1：(R)-2-(3,3-二甲基脲基)-2-苯基乙酸叔丁酯：向(R)-叔丁基-2-氨基-2-苯基乙酸酯(1.0g，4.10mmol)及许尼希碱(Hunig’s base)(1.79mL，10.25mmol)于DMF(40mL)中的经搅拌溶液中经10分钟逐滴添加二甲基氨甲酰基氯(0.38mL，4.18mmol)。在室温下搅拌3小时之后，在减压下浓缩反应混合物且将所得残余物溶解于乙酸乙酯中。以H2O、1N HCl水溶液及盐水洗涤有机层，干燥(MgSO4)，过滤且在减压下浓缩。获得白色固体状的(R)-2-(3,3-二甲基脲基)-2-苯基乙酸叔丁酯(0.86g；75%)且其无需进一步纯化即可使用。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 1.33(s,9H)2.82(s,6H)5.17(d,J＝7.63Hz,1H)6.55(d,J＝7.32Hz,1H)7.24-7.41(m,5H)。LC-MS:C15H22N2O3的分析计算值为278.16；实测值为279.23(M+H)+；HPLC
Figure BDA00001954398800474
LUNAC-18 4.6×50mm，0至100%B经4分钟，1分钟保持时间，A=90%水，10%甲醇，0.1%TFA，B=10%水，90%甲醇，0.1%TFA，RT=2.26min，97%的同质性指数。
步骤2：(R)-2-(3,3-二甲基脲基)-2-苯基乙酸：向(R)-2-(3,3-二甲基脲基)-2-苯基乙酸叔丁酯(0.86g，3.10mmol)于CH2Cl2(250mL)中的经搅拌溶液中逐滴添加TFA(15mL)且在室温下搅拌所得溶液3小时。随后以EtOAC:己烷(5:20)的混合物使所需化合物自溶液析出，滤出且在减压下干燥。分离出白色固体状的(R)-2-(3,3-二甲基脲基)-2-苯基乙酸(0.59g；86%)且其无需进一步纯化即可使用。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 2.82(s,6H)5.22(d,J＝7.32Hz,1H)6.58(d,J＝7.32Hz,1H)7.28(t,J＝7.17Hz,1H)7.33(t,J＝7.32Hz,2H)7.38-7.43(m,2H)12.65(s,1H)。LC-MS:C11H14N2O3的分析计算值为222.24；实测值为223.21(M+H)+。HPLC
Figure BDA00001954398800481
C-18 3.0×50mm，0至100%B经2分钟，1分钟保持时间，A=90%水，10%甲醇，0.2%H3PO4，B=10%水，90%甲醇，0.2%H3PO4，RT=0.75min，93%的同质性指数。
Cap-48
Figure BDA00001954398800482
步骤1：(R)-2-(3-环戊基脲基)-2-苯基乙酸叔丁酯：向(R)-2-氨基-2-苯基乙酸盐酸盐(1.0g，4.10mmol)及许尼希碱(1.0mL，6.15mmol)于DMF(15mL)中的经搅拌溶液中经10分钟逐滴添加异氰酸环戊酯(0.46mL，4.10mmol)。在室温下搅拌3小时之后，在减压下浓缩反应混合物且将所得残余物溶解于乙酸乙酯中。以H2O及盐水洗涤有机层，干燥(MgSO4)，过滤且在减压下浓缩。获得不透明油状的(R)-2-(3-环戊基脲基)-2-苯基乙酸叔丁酯(1.32g；100%)且其无需进一步纯化即可使用。1H NMR(500MHz,CD3Cl-D)δppm1.50-1.57(m,2H)1.58-1.66(m,2H)1.87-1.97(m,2H)3.89-3.98(m,1H)5.37(s,1H)7.26-7.38(m,5H)。LC-MS:C18H26N2O3的分析计算值为318.19；实测值为319.21(M+H)+；HPLCC-18 3.0×50mm，0至100%B经4分钟，1分钟保持时间，A=90%水，10%甲醇，0.1%TFA，B=10%水，90%甲醇，0.1%TFA，RT=2.82min，96%的同质性指数。
步骤2：(R)-2-(3-环戊基脲基)-2-苯基乙酸：向(R)-2-(3-环戊基脲基)-2-苯基乙酸叔丁酯(1.31g，4.10mmol)于CH2Cl2(25mL)中的经搅拌溶液中逐滴添加TFA(4mL)及三乙基硅烷(1.64mL；10.3mmol)，且在室温下搅拌所得溶液6小时。在减压下移除挥发性组分且使粗产物在乙酸乙酯/戊烷中重结晶，得到白色固体状的(R)-2-(3-环戊基脲基)-2-苯基乙酸(0.69g，64%)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 1.17-1.35(m,2H)1.42-1.52(m,2H)1.53-1.64(m,2H)1.67-1.80(m,2H)3.75-3.89(m,1H)5.17(d,J＝7.93Hz,1H)6.12(d,J＝7.32Hz,1H)6.48(d,J＝7.93Hz,1H)7.24-7.40(m,5H)12.73(s,1H)。LC-MS:C14H18N2O3的分析计算值为262.31；实测值为263.15(M+H)+。HPLC
Figure BDA00001954398800491
C-18 3.0×50mm，0至100%B经2分钟，1分钟保持时间，A=90%水，10%甲醇，0.2%H3PO4，B=10%水，90%甲醇，0.2%H3PO4，RT=1.24min，100%的同质性指数。
Cap-49
Figure BDA00001954398800492
向2-(苯甲基氨基)乙酸(2.0g，12.1mmol)在甲酸(91mL)中的经搅拌溶液中添加甲醛(6.94mL，93.2mmol)。在70℃下5小时之后，在减压下浓缩反应混合物至20mL且析出白色固体。过滤之后，收集母液且在减压下进一步浓缩，得到粗产物。通过反相制备型HPLC纯化(
Figure BDA00001954398800493
30×100mm，在220nm下检测，流速35mL/min，0至35%B经8分钟；A=90%水，10%甲醇，0.1%TFA，B=10%水，90%甲醇，0.1%TFA)，得到无色蜡状的三氟乙酸盐形式的标题化合物2-(苯甲基(甲基)-氨基)乙酸(723mg，33%)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm 2.75(s,3H)4.04(s,2H)4.34(s,2H)7.29-7.68(m,5H)。LC-MS:C10H13NO2的分析计算值为179.09；实测值为180.20(M+H)+。
Cap-50
Figure BDA00001954398800494
向3-甲基-2-(甲基氨基)丁酸(0.50g，3.81mmol)于水(30mL)中的经搅拌溶液中添加K2CO3(2.63g，19.1mmol)及苯甲基氯(1.32g，11.4mmol)。在环境温度下搅拌反应混合物18小时。以乙酸乙酯(30mL×2)萃取反应混合物且在减压下浓缩水层，得到粗产物，将其通过反相制备型HPLC(X
Figure BDA00001954398800501
30×100mm，在220nm下检测，流速40mL/min，20至80%B经6分钟；A=90%水，10%甲醇，0.1%TFA，B=10%水，90%甲醇，0.1%TFA)纯化，得到无色蜡状的2-(苯甲基(甲基)氨基)-3-甲基丁酸的三氟乙酸盐(126mg，19%)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 0.98(d,3H)1.07(d,3H)2.33-2.48(m,1H)2.54-2.78(m,3H)3.69(s,1H)4.24(s,2H)7.29-7.65(m,5H)。LC-MS:C13H19NO2的分析计算值为221.14；实测值为222.28(M+H)+。
Cap-51
Figure BDA00001954398800502
(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-3-甲基丁酸
将Na2CO3(1.83g，17.2mmol)添加至L-缬氨酸(3.9g，33.29mmol)的NaOH(33mL 1M/H2O，33mmol)溶液中且以冰水浴冷却所得溶液。经15分钟逐滴添加氯甲酸甲酯(2.8mL，36.1mmol)，移除冷却浴且在环境温度下搅拌反应混合物3.25小时。以乙醚(50mL，3×)洗涤反应混合物，且以冰水浴冷却水相且以浓盐酸酸化至1-2的pH值范围，且以CH2Cl2(50mL，3×)萃取。干燥(MgSO4)有机相且在真空中蒸发，得到白色固体状的Cap-51(6g)。主要旋转异构体的1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5ppm,500MHz):12.54(s,1H),7.33(d,J＝8.6,1H),3.84(dd,J＝8.4,6.0,1H),3.54(s,3H),2.03(m,1H),0.87(m,6H)。HRMS:[M+H]+C7H14NO4的分析计算值为176.0923；实测值为176.0922。
Cap-51(替代途径)
(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-3-甲基丁酸
将DIEA(137.5mL，0.766mol)添加至(S)-2-氨基-3-甲基丁酸叔丁基酯盐酸盐(75.0g，0.357mol)于THF(900mL)中的悬浮液中，且冷却混合物至0℃(冰/水浴)。经45分钟，逐滴添加氯甲酸甲酯(29.0mL，0.375mol)，移除冷却浴且在环境温度下搅拌异质混合物3小时。在减压下移除溶剂，且将残余物分配在EtOAc与水(各1L)之间。用H2O(1L)及盐水(1L)洗涤有机层，干燥(MgSO4)，过滤且在减压下浓缩。使粗物质通过硅胶塞(1kg)，用己烷(4L)及15:85EtOAc/己烷(4L)洗脱，得到呈澄清油状的(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-3-甲基丁酸叔丁酯(82.0g，收率99%)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6,δ=2.5ppm)7.34(d,J＝8.6,1H),3.77(dd,J＝8.6,6.1,1H),3.53(s,3H),1.94-2.05(m,1H),1.39(s,9H),0.83-0.92(m,6H)。13C-NMR(126MHz,DMSO-d6,δ=39.2ppm)170.92,156.84,80.38,60.00,51.34,29.76,27.62,18.92,17.95。LC-MS:[M+Na]+254.17。
将三氟乙酸(343mL，4.62mol)及Et3SiH(142mL，0.887mol)依次添加至(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-3-甲基丁酸叔丁酯(82.0g，0.355mol)于CH2Cl2(675mL)中的溶液中，且在环境温度下搅拌混合物4小时。在减压下移除挥发性组分，且用石油醚(600mL)研磨所得油状物，得到白色固体，将其过滤且用己烷(500mL)及石油醚(500mL)洗涤。自EtOAc/石油醚重结晶得到呈白色片状晶体的Cap-51(54.8g，收率88%)。MP=108.5-109.5℃。1H NMR(500MHz,DMSO-d6,δ=2.5ppm)12.52(s,1H),7.31(d,J＝8.6,1H),3.83(dd,J＝8.6,6.1,1H),3.53(s,3H),1.94-2.07(m,1H),0.86(dd,J＝8.9,7.0,6H)。13CNMR(126MHz,DMSO-d6,δ=39.2ppm)173.30,156.94,59.48,51.37,29.52,19.15,17.98。LC-MS:[M+H]+=176.11。C7H13NO4的分析计算值：C,47.99;H,7.48;N,7.99。实测值：C,48.17;H,7.55;N,7.99。旋光度：[α]D=-4.16(12.02mg/mL；MeOH)。光学纯度：>99.5%ee。注意：对Cap-51的甲酯衍生物进行光学纯度评估，该甲酯衍生物系根据标准TMSCHN2(苯/MeOH)酯化方案制备。HPLC分析条件：柱，
Figure BDA00001954398800511
AD-H(4.6×250mm，5μm)；溶剂，95%庚烷/5%IPA(等度)；流速，1mL/min；温度，35℃；在205nm下紫外线监测。
[注意：Cap-51亦可自Flamm购得。]
Cap-52(与Cap-12相同)
Figure BDA00001954398800512
(S)-2-(甲氧基羰基氨基)丙酸
根据对于合成Cap-51所述的操作自L-丙氨酸合成Cap-52。出于表征的目的，将一部分粗物质通过反相HPLC(H2O/甲醇/TFA)纯化，得到无色黏性油状的Cap-52。1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5ppm,500MHz):12.49(br s,1H),7.43(d,J＝7.3,0.88H),7.09(表观宽单峰,0.12H),3.97(m,1H),3.53(s,3H),1.25(d,J＝7.3,3H)。
Cap-53至Cap-64
根据对于合成Cap-51所述的操作，同时作出所提及的改变(若存在时)自适当原料制备Cap-53至Cap-64。
Figure BDA00001954398800521
Figure BDA00001954398800531
Figure BDA00001954398800541
Cap-65
Figure BDA00001954398800551
将氯甲酸甲酯(0.65mL，8.39mmol)经5分钟逐滴添加至Na2CO3(0.449g，4.23mmol)、NaOH(8.2mL 1M/H2O，8.2mmol)及(S)-2-氨基-3-羟基-3-甲基丁酸(1.04g，7.81mmol)的经冷却(冰水)混合物中。搅拌反应混合物45分钟，且随后移除冷却浴且再继续搅拌3.75小时。以CH2Cl2洗涤反应混合物，且以冰水浴冷却水相且以浓盐酸酸化至1-2的pH值范围。在真空中移除挥发性组分且将残余物溶解于MeOH/CH2Cl2的2:1混合物(15mL)中且过滤，且旋转蒸发(rotervap)滤液，得到白色半黏性泡沫状的Cap-65(1.236g)。1HNMR(DMSO-d6,δ=2.5ppm,400MHz):δ6.94(d,J＝8.5,0.9H),6.53(br s,0.1H),3.89(d,J＝8.8,1H),2.94(s,3H),1.15(s,3H),1.13(s,3H)。
通过使用对于合成Cap-65所述的操作自适当市售原料制备Cap-66及Cap-67。
Cap-66
1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5ppm,400MHz):δ12.58(br s,1H),7.07(d,J＝8.3,0.13H),6.81(d,J＝8.8,0.67H),4.10-4.02(m,1.15H),3.91(dd,J＝9.1,3.5,0.85H),3.56(s,3H),1.09(d,J＝6.2,3H)。[注意：仅注明主要NH信号]。
Cap-67
Figure BDA00001954398800553
1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5ppm,400MHz):12.51(br s,1H),7.25(d,J＝8.4,0.75H),7.12(br d,J＝0.4,0.05H),6.86(br s,0.08H),3.95-3.85(m,2H),3.54(s,3H),1.08(d,J＝6.3,3H)。[注意：仅注明主要NH信号]。
Cap-68
将氯甲酸甲酯(0.38ml，4.9mmol)逐滴添加至1N NaOH(水溶液)(9.0ml，9.0mmol)、1M NaHCO3(水溶液)(9.0ml，9.0mol)、L-天冬氨酸β-苯甲酯(1.0g，4.5mmol)及二噁烷(9ml)的混合物中。在环境条件下搅拌反应混合物3小时，且随后以乙酸乙酯(50ml，3×)洗涤。以12N HCl酸化水层至pH值为约1-2，且以乙酸乙酯(3×50ml)萃取。以盐水洗涤合并的有机层，干燥(Na2SO4)，过滤且在真空中浓缩，得到淡黄色油状的Cap-68(1.37g；质量高于理论收率，且该产物无需进一步纯化即可使用)。1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5ppm,500MHz):δ12.88(br s,1H),7.55(d,J＝8.5,1H),7.40-7.32(m,5H),5.13(d,J＝12.8,1H),5.10(d,J＝12.9,1H),4.42-4.38(m,1H),3.55(s,3H),2.87(dd,J＝16.2,5.5,1H),2.71(dd,J＝16.2,8.3,1H)。LC(条件2):RT=1.90min；LC-MS:[M+H]+C13H16NO6的分析计算值为282.10；实测值为282.12。
Cap-69a及Cap-69b
Figure BDA00001954398800562
将NaCNBH3(2.416g，36.5mmol)分批添加至丙氨酸(1.338g，15.0mmol)的冰冻(约15℃)水(17mL)/MeOH(10mL)溶液中。数分钟之后，经4分钟逐滴添加乙醛(4.0mL，71.3mmol)，移除冷却浴，且在环境条件下搅拌反应混合物6小时。再添加乙醛(4.0mL)且搅拌反应混合物2小时。将浓盐酸缓慢添加至反应混合物中直至pH值达至约1.5，且在40℃下加热所得混合物1小时。在真空中移除大多数挥发性组分，且将残余物以50WX8-100离子交换树脂(以水洗涤柱，且将化合物以通过将18ml NH4OH与282ml水混合来制备的稀NH4OH洗脱)纯化，得到灰白色软吸湿性固体状的Cap-69(2.0g)。1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5ppm,400MHz):δ3.44(q,J＝7.1,1H),2.99-2.90(m,2H),2.89-2.80(m,2H),1.23(d,J＝7.1,3H),1.13(t,J＝7.3,6H)。
Cap-70至Cap-74x
根据对于合成Cap-69所述的操作通过使用适当原料来制备Cap-70至Cap-74x。
Figure BDA00001954398800571
Cap-75
Figure BDA00001954398800572
Cap-75，步骤a
Figure BDA00001954398800581
将NaBH3CN(1.6g，25.5mmol)添加至H-D-丝氨酸-OBzl HCl(2.0g，8.6mmol)的经冷却(冰/水浴)的水(25ml)/甲醇(15ml)溶液中。经5分钟逐滴添加乙醛(1.5mL，12.5mmol)，移除冷却浴，且在环境条件下搅拌反应混合物2小时。以12N HCl小心地淬灭反应且在真空中浓缩。将残余物溶解于水中且以反相HPLC(MeOH/H2O/TFA)纯化，得到无色黏性油状的(R)-2-(二乙氨基)-3-羟基丙酸苯甲酯的三氟乙酸盐(1.9g)。1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5ppm,500MHz):δ9.73(br s,1H),7.52-7.36(m,5H),5.32(d,J＝12.2,1H),5.27(d,J＝12.5,1H),4.54-4.32(m,1H),4.05-3.97(m,2H),3.43-3.21(m,4H),1.23(t,J＝7.2,6H)。LC-MS(条件2):RT=1.38min；LC-MS:[M+H]+C14H22NO3的分析计算值为252.16；实测值为252.19。
Cap-75
将NaH(0.0727g，1.82mmol，60%)添加至以上所制备的(R)-2-(二乙氨基)-3-羟基丙酸苯甲酯的三氟乙酸盐(0.3019g，0.8264mmol)的经冷却(冰-水)THF(3.0mL)溶液中，且搅拌混合物15分钟。添加甲基碘(56μL，0.90mmol)且继续搅拌18小时，同时将冷却浴解冻至环境条件。以水淬灭反应且装载于经MeOH预调节(pre-conditioned)的MCX(6g)柱筒上，且以甲醇洗涤，继而以2N NH3/甲醇进行化合物洗脱。在真空中移除挥发性组分，得到被(R)-2-(二乙氨基)-3-羟基丙酸污染的黄色半固体状的Cap-75(100mg)。该产物无需进一步纯化即可按原样加以使用。
Cap-76
Figure BDA00001954398800582
将NaCNBH3(1.60g，24.2mmol)分批添加至(S)-4-氨基-2-(叔丁氧基羰基氨基)丁酸(2.17g，9.94mmol)的冰冻(约15℃)水/MeOH(各12mL)溶液中。数分钟之后，经2分钟逐滴添加乙醛(2.7mL，48.1mmol)，移除冷却浴，且在环境条件下搅拌反应混合物3.5小时。再添加乙醛(2.7mL，48.1mmol)且搅拌反应混合物20.5小时。在真空中移除大多数MeOH组分，且以浓盐酸处理剩余混合物直至其pH值达至约1.0，且随后在40℃下加热2小时。在真空中移除挥发性组分，且将残余物以4M HCl/二噁烷(20mL)处理且在环境条件下搅拌7.5小时。在真空中移除挥发性组分，且将残余物以
Figure BDA00001954398800591
50WX8-100离子交换树脂(以水洗涤柱，且将化合物以由18ml NH4OH及282ml水制备的稀NH4OH洗脱)纯化，得到灰白色固体状的中间体(S)-2-氨基-4-(二乙氨基)丁酸(1.73g)。
将氯甲酸甲酯(0.36mL，4.65mmol)经11分钟逐滴添加至Na2CO3(0.243g，2.29mmol)、NaOH(4.6mL 1M/H2O，4.6mmol)及上述产物(802.4mg)的经冷却(冰水)混合物中。搅拌反应混合物55分钟，且随后移除冷却浴且再继续搅拌5.25小时。以等体积水稀释反应混合物且以CH2Cl2(30mL，2×)洗涤，且以冰水浴冷却水相且以浓盐酸酸化至2的pH值范围。随后在真空中移除挥发性组分且用MCX树脂(6.0g；以水洗涤柱，且将样品以2.0M NH3/MeOH洗脱)将粗物质游离碱化(free-based)，得到灰白色固体状的不纯的Cap-76(704mg)。1H NMR(MeOH-d4,δ=3.29ppm,400MHz):δ3.99(dd,J＝7.5,4.7,1H),3.62(s,3H),3.25-3.06(m,6H),2.18-2.09(m,1H),2.04-1.96(m,1H),1.28(t,J＝7.3,6H)。LC-MS:[M+H]+C10H21N2O4的分析计算值为233.15；实测值为233.24。
Cap-77a及Cap-77b
根据对于Cap-7所述的操作，通过使用7-氮杂二环[2.2.1]庚烷进行SN2置换步骤，且通过使用以下条件来实现中间体2-(7-氮杂二环[2.2.1]庚烷-7-基)-2-苯基乙酸苯甲酯的立体异构分离来进行Cap-77的合成：将该中间体(303.7mg)溶解于乙醇中，且将所得溶液注于手性HPLC柱(Chiracel AD-H柱，30×250mm，5μm)上，以90%CO2-10%EtOH在70mL/min下及35℃的温度下洗脱，得到124.5mg立体异构体-1及133.8mg立体异构体-2。根据Cap-7的制备将所述苯甲酯氢解，得到Cap-77：1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5ppm,400MHz):δ7.55(m,2H),7.38-7.30(m,3H),4.16(s,1H),3.54(表观宽单峰,2H),2.08-1.88(m,4H),1.57-1.46(m,4H)。LC(条件1):RT=0.67min；LC-MS:[M+H]+C14H18NO2的分析计算值为232.13；实测值为232.18。HRMS:[M+H]+C14H18NO2的分析计算值为232.1338；实测值为232.1340。
Cap-78
Figure BDA00001954398800601
将NaCNBH3(0.5828g，9.27mmol)添加至(R)-2-(乙基氨基)-2-苯基乙酸的HCl盐(Cap-3的合成中的中间体；0.9923mg，4.60mmol)及(1-乙氧基环丙氧基)三甲基硅烷(1.640g，9.40mmol)于MeOH(10mL)中的混合物中，且用油浴在50℃下加热该半非均质混合物20小时。再添加(1-乙氧基环丙氧基)三甲基硅烷(150mg，0.86mmol)及NaCNBH3(52mg，0.827mmol)且再加热反应混合物3.5小时。随后冷却至环境温度且以浓盐酸酸化至约2的pH值范围，且过滤混合物且旋转蒸发滤液。将所得粗物质吸收于i-PrOH(6mL)中且加热以实现溶解，且滤除未溶解部分且在真空中浓缩滤液。将约1/3的所得粗物质以反相HPLC(H2O/MeOH/TFA)纯化，得到无色黏性油状的Cap-78的三氟乙酸盐(353mg)。1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5ppm,400MHz;D2O交换之后):δ7.56-7.49(m,5H),5.35(S,1H),3.35(m,1H),3.06(表观宽单峰,1H),2.66(m,1H),1.26(t,J＝7.3,3H),0.92(m,1H),0.83-0.44(m,3H)。LC(条件1):RT=0.64min；LC-MS:[M+H]+C13H18NO2的分析计算值为220.13；实测值为220.21。HRMS:[M+H]+C13H18NO2的分析计算值为220.1338；实测值为220.1343。
Cap-79
Figure BDA00001954398800602
使臭氧鼓泡通过Cap-55(369mg，2.13mmol)的经冷却(-78℃)CH2Cl2(5.0mL)溶液约50分钟直至反应混合物达到蓝色色泽。添加Me2S(10滴(移液管))，且搅拌反应混合物35分钟。将-78℃浴替换为-10℃浴且再继续搅拌30分钟，且随后在真空中移除挥发性组分，得到无色黏性油。
将NaBH3CN(149mg，2.25mmol)添加至上述粗物质及吗啉(500μL，5.72mmol)的MeOH(5.0mL)溶液中，且在环境条件下搅拌混合物4小时。冷却至冰水温度，且以浓盐酸处理以使其pH值为约2.0，且随后搅拌2.5小时。在真空中移除挥发性组分，且将残余物以MCX树脂(MeOH洗涤；2.0NNH3/MeOH洗脱)与反相HPLC(H2O/MeOH/TFA)的组合纯化，得到含有未知量的吗啉的Cap-79。
为耗尽吗啉污染物，将上述物质溶解于CH2Cl2(1.5mL)中且以Et3N(0.27mL，1.94mmol)继而乙酸酐(0.10mL，1.06mmol)处理，且在环境条件下搅拌18小时。添加THF(1.0mL)及H2O(0.5mL)且继续搅拌1.5小时。在真空中移除挥发性组分，且使所得残余物通过MCX树脂(MeOH洗涤；2.0NNH3/MeOH洗脱)，得到棕色黏性油状的不纯的Cap-79，其不经进一步纯化即用于下一步骤。
Cap-80a及Cap-80b
Figure BDA00001954398800611
将SOCl2(6.60mL，90.5mmol)经15分钟逐滴添加至(S)-3-氨基-4-(苯甲基氧基)-4-氧代丁酸(10.04g，44.98mmol)及MeOH(300mL)的经冷却(冰-水)混合物中，移除冷却浴且在环境条件下搅拌反应混合物29小时。在真空中移除大多数挥发性组分，且使残余物小心地分配在EtOAc(150mL)与饱和NaHCO3溶液之间。以EtOAc(150mL，2×)萃取水相，且干燥(MgSO4)合并的有机相，过滤，且在真空中浓缩，得到无色油状的(S)-2-氨基丁二酸1-苯甲酯4-甲酯(9.706g)。1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5ppm,400MHz):δ7.40-7.32(m,5H),5.11(s,2H),3.72(表观三重峰,J＝6.6,1H),3.55(s,3H),2.68(dd,J＝15.9,6.3,1H),2.58(dd,J＝15.9,6.8,1H),1.96(s,2H)。LC(条件1):RT=0.90min；LC-MS:[M+H]+C12H16NO4的分析计算值为238.11；实测值为238.22。
将Pb(NO3)2(6.06g，18.3mmol)经1分钟添加至(S)-2-氨基丁二酸1-苯甲酯4-甲酯(4.50g，19.0mmol)、9-溴-9-苯基-9H-芴(6.44g，20.0mmol)及Et3N(3.0mL，21.5mmol)的CH2Cl2(80mL)溶液中，且在环境条件下搅拌非均质混合物48小时。过滤混合物且以MgSO4处理滤液且再次过滤，且浓缩最终滤液。对所得粗物质进行
Figure BDA00001954398800621
纯化(350g硅胶，CH2Cl2洗脱)，得到高黏性无色油状的(S)-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁二酸1-苯甲酯4-甲酯(7.93g)。1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5ppm,400MHz):δ7.82(m,2H),7.39-7.13(m,16H),4.71(d,J＝12.4,1H),4.51(d,J＝12.6,1H),3.78(d,J＝9.1,NH),3.50(s,3H),2.99(m,1H),2.50-2.41(m,2H，与溶剂部分重叠)。LC(条件1):RT=2.16min；LC-MS:[M+H]+C31H28NO4的分析计算值为478.20；实测值为478.19。
将LiHMDS(9.2mL 1.0M/THF，9.2mmol)经10分钟逐滴添加至(S)-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁二酸1-苯甲酯4-甲酯(3.907g，8.18mmol)的经冷却(-78℃)THF(50mL)溶液中且搅拌约1小时。将MeI(0.57mL，9.2mmol)经8分钟逐滴添加至混合物中，且继续搅拌16.5小时，同时将冷却浴解冻至室温。以饱和NH4Cl溶液(5mL)淬灭反应之后，在真空中移除大多数有机组分且将残余物在分配CH2Cl2(100mL)与水(40mL)之间。干燥(MgSO4)有机层，过滤且在真空中浓缩，且将所得粗物质以
Figure BDA00001954398800622
(350g硅胶；25%EtOAc/己烷)纯化，得到3.65g 3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁二酸1-苯甲酯4-甲酯的2S/3S及2S/3R非对映异构混合物(比率为约1.0:0.65(1HNMR))。此时并未测定主要异构体的立体化学，且该混合物无需分离即可进行下一步骤。部分1H NMR数据(DMSO-d6,δ=2.5ppm,400MHz)：主要非对映异构体，δ4.39(d,J＝12.3,CH2的1H),3.33(s,3H，与H2O信号重叠),3.50(d,J＝10.9,NH),1.13(d,J＝7.1,3H)；次要非对映异构体，δ4.27(d,J＝12.3,CH2的1H),3.76(d,J＝10.9,NH),3.64(s,3H),0.77(d,J＝7.0,3H)。LC(条件1):RT=2.19min；LC-MS:[M+H]+C32H30NO4的分析计算值为492.22；实测值为492.15。
将氢化二异丁基铵(20.57ml于己烷中1.0M，20.57mmol)经10分钟逐滴添加至以上所制备的(2S)-3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁二酸1-苯甲酯4-甲酯(3.37g，6.86mmol)的经冷却(-78℃)THF(120mL)溶液中，且在-78℃下搅拌20小时。自冷却浴移出反应混合物且在搅拌下迅速倒入约1MH3PO4/H2O(250mL)中，且以乙醚(100mL，2×)萃取混合物。以盐水洗涤合并的有机相，干燥(MgSO4)，过滤且在真空中浓缩。制备粗物质的硅胶筛且进行色谱纯化(25%EtOAc/己烷；重力洗脱)，得到1.1g被苯甲醇污染的无色黏性油状的(2S,3S)-4-羟基-3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁酸苯甲酯及含有(2S,3R)立体异构体作为杂质的(2S,3R)-4-羟基-3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁酸苯甲酯。使后一样品再经受相同柱色谱纯化条件，得到750mg白色泡沫状的经纯化物质。[注意：在上述条件下(2S,3S)异构体在(2S,3R)异构体之前洗脱]。(2S,3S)异构体：1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5ppm,400MHz):7.81(m,2H),7.39-7.08(m,16H),4.67(d,J＝12.3,1H),4.43(d,J＝12.4,1H),4.21(表观三重峰,J＝5.2,OH),3.22(d,J＝10.1,NH),3.17(m,1H),3.08(m,1H),~2.5(m,1H，与溶剂信号重叠),1.58(m,1H),0.88(d,J＝6.8,3H)。LC(条件1):RT=2.00min；LC-MS:[M+H]+C31H30NO3的分析计算值为464.45；实测值为464.22。(2S,3R)异构体：1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5ppm,400MHz):7.81(d,J＝7.5,2H),7.39-7.10(m,16H),4.63(d,J＝12.1,1H),4.50(表观三重峰,J＝4.9,1H),4.32(d,J＝12.1,1H),3.59-3.53(m,2H),3.23(m,1H),2.44(dd,J＝9.0,8.3,1H),1.70(m,1H),0.57(d,J＝6.8,3H)。LC(条件1):RT=1.92min；LC-MS:[M+H]+C31H30NO3的分析计算值为464.45；实测值为464.52。
基于针对通过使用以下方案自各异构体制备的内酯衍生物进行的NOE研究来进行DIBAL还原产物的相对立体化学分配：将LiHMDS(50μL 1.0M/THF，0.05mmol)添加至(2S,3S)-4-羟基-3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁酸苯甲酯(62.7mg，0.135mmol)的经冷却(冰-水)THF(2.0mL)溶液中，且在类似温度下搅拌反应混合物约2hr。在真空中移除挥发性组分，且将残余物分配在CH2Cl2(30mL)、水(20mL)及饱和NH4Cl水溶液(1mL)之间。干燥(MgSO4)有机层，过滤且在真空中浓缩，且对所得粗物质进行
Figure BDA00001954398800631
纯化(40g硅胶；10-15%EtOAc/己烷)，得到无色固体薄膜状的(3S,4S)-4-甲基-3-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)二氢呋喃-2(3H)-酮(28.1mg)。类似于(3S,4R)-4-甲基-3-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)二氢呋喃-2(3H)-酮制备(2S,3R)-4-羟基-3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁酸苯甲酯。(3S,4S)-内酯异构体：1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5ppm,400MHz),7.83(d,J＝7.5,2H),7.46-7.17(m,11H),4.14(表观三重峰,J＝8.3,1H),3.60(d,J＝5.8,NH),3.45(表观三重峰,J＝9.2,1H),~2.47(m,1H，与溶剂信号部分重叠),2.16(m,1H),0.27(d,J＝6.6,3H)。LC(条件1):RT=1.98min；LC-MS:[M+Na]+C24H21NNaO2的分析计算值为378.15；实测值为378.42。(3S,4R)-内酯异构体：1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5ppm,400MHz),7.89(d,J＝7.6,1H),7.85(d,J＝7.3,1H),7.46-7.20(m,11H),3.95(dd,J＝9.1,4.8,1H),3.76(d,J＝8.8,1H),2.96(d,J＝3.0,NH),2.92(dd,J＝6.8,3,NCH),1.55(m,1H),0.97(d,J＝7.0,3H)。LC(条件1):RT=2.03min；LC-MS:[M+Na]+C24H21NNaO2的分析计算值为378.15；实测值为378.49。
将TBDMS-Cl(48mg，0.312mmol)继而咪唑(28.8mg，0.423mmol)添加至(2S,3S)-4-羟基-3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁酸苯甲酯(119.5mg，0.258mmol)的CH2Cl2(3ml)溶液中，且在环境条件下搅拌混合物14.25小时。随后以CH2Cl2(30mL)稀释反应混合物且以水(15mL)洗涤，且干燥(MgSO4)有机层，过滤且在真空中浓缩。将所得粗物质以
Figure BDA00001954398800641
(40g硅胶；5%EtOAc/己烷)纯化，得到被基于TBDMS的杂质污染的无色黏性油状的(2S,3S)-4-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)-3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁酸苯甲酯(124.4mg)。类似于(2S,3R)-4-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)-3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁酸苯甲酯制备(2S,3R)-4-羟基-3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁酸苯甲酯。(2S,3S)-甲硅烷基醚异构体：1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5ppm,400MHz),7.82(d,J＝4.1,1H),7.80(d,J＝4.0,1H),7.38-7.07(m,16H),4.70(d,J＝12.4,1H),4.42(d,J＝12.3,1H),3.28-3.19(m,3H),2.56(dd,J＝10.1,5.5,1H),1.61(m,1H),0.90(d,J＝6.8,3H),0.70(s,9H),-0.13(s,3H),-0.16(s,3H)。LC(条件1,其中运行时间延长至4分钟):RT=3.26min；LC-MS:[M+H]+C37H44NO3Si的分析计算值为578.31；实测值为578.40。(2S,3R)-甲硅烷基醚异构体：1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5ppm,400MHz),7.82(d,J＝3.0,1H),7.80(d,J＝3.1,1H),7.39-7.10(m,16H),4.66(d,J＝12.4,1H),4.39(d,J＝12.4,1H),3.61(dd,J＝9.9,5.6,1H),3.45(d,J＝9.5,1H),3.41(dd,J＝10,6.2,1H),2.55(dd,J＝9.5,7.3,1H),1.74(m,1H),0.77(s,9H),0.61(d,J＝7.1,3H),-0.06(s,3H),-0.08(s,3H)。
将氢气气球与(2S,3S)-4-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)-3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁酸苯甲酯(836mg，1.447mmol)及10%Pd/C(213mg)于EtOAc(16mL)中的混合物连接，且在室温下搅拌混合物约21小时，其中视需要向气球再充填H2。以CH2Cl2稀释反应混合物且经硅藻土垫(
Figure BDA00001954398800642
-545)过滤，且以EtOAc(200mL)、EtOAc/MeOH(1:1混合物，200mL)及MeOH(750mL)洗涤该硅藻土垫。浓缩合并的有机相，且自所得粗物质制备硅胶筛且进行快速色谱(EtOAc/i-PrOH/H2O的8:2:1混合物)，得到白色松散固体状的(2S,3S)-2-氨基-4-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)-3-甲基丁酸(325mg)。类似于(2S,3R)-2-氨基-4-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)-3-甲基丁酸制备(2S,3R)-4-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)-3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁酸苯甲酯。(2S,3S)-氨基酸异构体：1H NMR(甲醇-d4,δ=3.29ppm,400MHz),3.76(dd,J＝10.5,5.2,1H),3.73(d,J＝3.0,1H),3.67(dd,J＝10.5,7.0,1H),2.37(m,1H),0.97(d,J＝7.0,3H),0.92(s,9H),0.10(s,6H)。LC-MS:[M+H]+C11H26NO3Si的分析计算值为248.17；实测值为248.44。(2S,3R)-氨基酸异构体：1H NMR(甲醇-d4,δ=3.29ppm,400MHz),3.76-3.75(m,2H),3.60(d,J＝4.1,1H),2.16(m,1H),1.06(d,J＝7.3,3H),0.91(s,9H),0.09(s,6H)。[M+H]+C11H26NO3Si的分析计算值为248.17；实测值为248.44。
将水(1mL)及NaOH(0.18mL 1.0M/H2O，0.18mmol)添加至(2S,3S)-2-氨基-4-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)-3-甲基丁酸(41.9mg，0.169mmol)及Na2CO3(11.9mg，0.112mmol)的混合物中，且超声处理约1分钟以实现反应混合物的溶解。随后以冰水浴冷却混合物，经30秒添加氯甲酸甲酯(0.02mL，0.259mmol)，且在类似温度下持续剧烈搅拌40分钟且随后在环境温度下剧烈搅拌2.7小时。以水(5mL)稀释反应混合物，以冰水浴冷却且以1.0NHCl水溶液(约0.23mL)逐滴处理。进一步以水(10mL)稀释混合物且以CH2Cl2(15mL，2×)萃取。干燥(MgSO4)合并的有机相，过滤，且在真空中浓缩，得到灰白色固体状的Cap-80a。类似于Cap-80b制备(2S,3R)-2-氨基-4-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)-3-甲基丁酸。Cap-80a：1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5ppm,400MHz),12.57(br s,1H),7.64(d,J＝8.3,0.3H),7.19(d,J＝8.8,0.7H),4.44(dd,J＝8.1,4.6,0.3H),4.23(dd,J＝8.7,4.4,0.7H),3.56/3.53(两个单峰，3H),3.48-3.40(m,2H),2.22-2.10(m,1H),0.85(s,9H),~0.84(d,0.9H，与t-Bu信号重叠),0.79(d,J＝7,2.1H),0.02/0.01/0.00(三个重叠单峰，6H)。LC-MS:[M+Na]+C13H27NNaO5Si的分析计算值为328.16；实测值为328.46。Cap-80b：1H NMR(CDCl3,δ=7.24ppm,400MHz),6.00(br d,J＝6.8,1H),4.36(dd,J＝7.1,3.1,1H),3.87(dd,J＝10.5,3.0,1H),3.67(s,3H),3.58(dd,J＝10.6,4.8,1H),2.35(m,1H),1.03(d,J＝7.1,3H),0.90(s,9H),0.08(s,6H)。LC-MS:[M+Na]+C13H27NNaO5Si的分析计算值为328.16；实测值为328.53。粗产物无需进一步纯化即可使用。
Cap-81
Figure BDA00001954398800661
根据Falb等人，Synthetic Communications,23,2839(1993)所述的方案制备。
Cap-82至Cap-85
根据对于Cap-51或Cap-13所述的操作自适当原料合成Cap-82至Cap-85。所述样品展现类似于其立体异构体(亦即分别为Cap-4、Cap-13、Cap-51及Cap-52)的光谱。
Figure BDA00001954398800662
Cap-86
Figure BDA00001954398800663
(2S,3R)-3-甲氧基-2-(甲氧基羰基氨基)丁酸
在0℃下向O-甲基-L-苏氨酸(3.0g，22.55mmol)、NaOH(0.902g，22.55mmol)于H2O(15mL)中的混合物中逐滴添加ClCO2Me(1.74mL，22.55mmol)。搅拌混合物12小时且使用1N HCl酸化至pH值为1。以EtOAc(2×250mL)及于CH2Cl2(250mL)中的10%MeOH萃取水相且在真空中浓缩合并的有机相，得到无色油状物(4.18g，97%)，其具有足够纯度而适用于后续步骤。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.19(s,1H),3.92-3.97(m,1H),3.66(s,3H),1.17(d,J＝7.7Hz,3H)。LC-MS:C7H13NO5的分析计算值为191；实测值为190(M-H)-。
Cap-87
Figure BDA00001954398800664
在0℃下向L-高丝氨酸(2.0g，9.79mmol)、Na2CO3(2.08g，19.59mmol)于H2O(15mL)中的混合物中逐滴添加ClCO2Me(0.76mL，9.79mmol)。搅拌混合物48小时且使用1N HCl酸化至pH值为1。以EtOAc(2×250mL)萃取水相且在真空中浓缩合并的有机相，得到无色固体(0.719g，28%)，其具有足够纯度而适用于后续步骤。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.23(dd,J＝4.5,9.1Hz,1H),3.66(s,3H),3.43-3.49(m,2H),2.08-2.14(m,1H),1.82-1.89(m,1H)。LC-MS:C7H13NO5的分析计算值为191；实测值为192(M+H)+。
Cap-88
Figure BDA00001954398800671
将L-缬氨酸(1.0g，8.54mmol)、3-溴吡啶(1.8mL，18.7mmol)、K2CO3(2.45g，17.7mmol)及CuI(169mg，0.887mmol)于DMSO(10mL)中的混合物在100℃下加热12小时。冷却反应混合物至室温，倒入H2O(约150mL)中且以EtOAc(×2)洗涤。以少量H2O萃取有机层且以6N HCl酸化合并的水相至pH值为约2。将体积减少至约三分之一且添加20g阳离子交换树脂(Strata)。将浆料静置20分钟且装载于阳离子交换树脂(Strata)(约25g)垫上。以H2O(200mL)、MeOH(200mL)洗涤树脂垫，且随后以NH3(于MeOH中，3M，2×200mL)洗涤。在真空中浓缩适当级份且将残余物(约1.1g)溶解于H2O中，冷冻且冻干。获得泡沫状的标题化合物(1.02g，62%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.00(s,br,1H),7.68-7.71(m,1H),7.01(s,br，1H),6.88(d,J＝7.5Hz,1H),5.75(s,br,1H),3.54(s,1H),2.04-2.06(m,1H),0.95(d,J＝6.0Hz,3H),0.91(d,J＝6.6Hz,3H)。LC-MS:C10H14N2O2的分析计算值为194；实测值为195(M+H)+。
Cap-89
Figure BDA00001954398800672
将L-缬氨酸(1.0g，8.54mmol)、5-溴嘧啶(4.03g，17.0mmol)、K2CO3(2.40g，17.4mmol)及CuI(179mg，0.94mmol)于DMSO(10mL)中的混合物在100℃下加热12小时。冷却反应混合物至室温，倒入H2O(约150mL)中且以EtOAc(×2)洗涤。以少量H2O萃取有机层且以6N HCl酸化合并的水相至pH值为约2。将体积减少至约三分之一且添加20g阳离子交换树脂(Strata)。将浆料静置20分钟且装载于阳离子交换树脂(Strata)(约25g)垫上。以H2O(200mL)、MeOH(200mL)洗涤树脂垫，且随后以NH3(于MeOH中，3M，2×200mL)洗涤。在真空中浓缩适当级份且将残余物(约1.1g)溶解于H2O中，冷冻且冻干。获得泡沫状的标题化合物(1.02g，62%)。1H NMR(400MHz,CD3OD)显示该混合物含有缬氨酸且纯度不能估算。将该物质按原样用于后续反应中。LC-MS:C9H13N3O2的分析计算值为195；实测值为196(M+H)+。
Cap-90
Figure BDA00001954398800681
根据对于制备Cap-1所述的方法制备Cap-90。粗物质按原样用于后续步骤。LC-MS:C11H15NO2的分析计算值为193；实测值为192(M-H)-。
Cap-91至Cap-116
除非另作说明，否则根据用于制备Cap-51的方法制备以下Cap：
Figure BDA00001954398800682
Figure BDA00001954398800691
Figure BDA00001954398800701
Figure BDA00001954398800711
Cap-117至Cap-123
为制备Cap-117至Cap-123，由商业来源获得Boc氨基酸且通过以于CH2Cl2中的25%TFA处理来去保护。在通过LCMS判断完全反应之后，在真空中移除溶剂，且根据对于Cap-51所述的操作将氨基酸的相应三氟乙酸盐以氯甲酸甲酯进行氨甲酰基化。
Cap-124
Figure BDA00001954398800722
根据对于Cap-51所述的操作将L-苏氨酸叔丁酯的盐酸盐进行氨甲酰基化。以1N HCl酸化粗反应混合物至pH值为约1且将混合物以EtOAc(2×50mL)萃取。在真空中浓缩合并的有机相，得到无色油状物，其在静置时固化。在真空中浓缩水层且以EtOAc-CH2Cl2-MeOH(1:1:0.1)研磨所得的产物与无机盐的混合物，且随后在真空中浓缩有机相，得到无色油状物，其经LCMS证明为所需产物。合并两批产物，得到0.52g固体。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ4.60(m,1H),4.04(d,J＝5.0Hz,1H),1.49(d,J＝6.3Hz,3H)。LC-MS:C5H7NO4的分析计算值为145；实测值为146(M+H)+。
Cap-125
Figure BDA00001954398800731
向Pd(OH)2(20%，100mg)、甲醛水溶液(37wt%，4ml)、乙酸(0.5mL)于甲醇(15mL)中的悬浮液中添加(S)-4-氨基-2-(叔丁氧基羰基氨基)丁酸(1g，4.48mmol)。以氢气吹洗反应混合物数次且在氢气气球下在室温下搅拌过夜。经硅藻土(
Figure BDA00001954398800732
)垫过滤反应混合物，且在真空中移除挥发性组分。将所得粗物质按原样用于下一步骤。LC-MS:C11H22N2O4的分析计算值为246；实测值为247(M+H)+。
Cap-126
该操作为用于制备Cap-51的操作的变化形式。在0℃下向3-甲基-L-组氨酸(0.80g，4.70mmol)于THF(10mL)及H2O(10mL)中的悬浮液中添加NaHCO3(0.88g，10.5mmol)。以ClCO2Me(0.40mL，5.20mmol)处理所得混合物且在0℃下搅拌混合物。搅拌约2小时之后，LCMS显示无原料剩余。以6N HCl酸化反应混合物至pH值为2。
在真空中移除溶剂且将残余物悬浮于20mL于CH2Cl2中的20%MeOH中。过滤混合物且浓缩，得到淡黄色泡沫(1.21g)。LCMS及1H NMR显示该物质为甲酯与所需产物的9:1混合物。将该物质吸收于THF(10mL)及H2O(10mL)中，冷却至0℃且添加LiOH(249.1mg，10.4mmol)。搅拌约1小时之后，LCMS显示无酯剩余。因此，以6N HCl酸化混合物且在真空中移除溶剂。LCMS及1H NMR证实不存在酯。获得被无机盐污染的HCl盐形式的标题化合物(1.91g,>100%)。该化合物无需进一步纯化即可按原样用于后续步骤中。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.84,(s,1H),7.35(s,1H),4.52(dd,J＝5.0,9.1Hz,1H),3.89(s,3H),3.62(s,3H),3.35(dd,J＝4.5,15.6Hz,1H,由于溶剂而部分模糊),3.12(dd,J＝9.0,15.6Hz,1H)。LC-MS:C9H13N3O4的分析计算值为227.09；实测值为228.09(M+H)+。
Cap-127
Figure BDA00001954398800741
根据以上关于Cap-126的方法，由(S)-2-氨基-3-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)丙酸(1.11g,6.56mmol)、NaHCO3(1.21g,14.4mmol)及ClCO2Me(0.56mL,7.28mmol)开始制备Cap-127。获得被无机盐污染的HCl盐形式的标题化合物(1.79g,>100%)。LCMS及1H NMR显示存在约5%甲酯。粗混合物无需进一步纯化即可按原样加以使用。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.90(s,1H),7.35(s,1H),4.48(dd,J＝5.0,8.6Hz,1H),3.89(s,3H),3.62(s,3H),3.35(m,1H),3.08(m,1H)；LC-MS:C9H13N3O4的分析计算值为227.09；实测值为228(M+H)+。
制备Cap-128
Figure BDA00001954398800742
步骤1：制备(S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)戊-4-炔酸苯甲酯(cj-27b)
在0℃下向cj-27a(1.01g,4.74mmol)、DMAP(58mg,0.475mmol)及iPr2NEt(1.7mL,9.8mmol)于CH2Cl2(100mL)中的溶液中添加Cbz-Cl(0.68mL,4.83mmol)。在0℃下搅拌溶液4小时，洗涤(1N KHSO4、盐水)，干燥(Na2SO4)，过滤且在真空中浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(TLC 6:1己烷：EtOAc)纯化，得到无色油状的标题化合物(1.30g,91%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.35(s,5H),5.35(d,br,J＝8.1Hz,1H),5.23(d,J＝12.2Hz,1H),5.17(d,J＝12.2Hz,1H),4.48-4.53(m,1H),2.68-2.81(m,2H),2.00(t,J＝2.5Hz,1H),1.44(s,9H)。LC-MS:C17H21NO4的分析计算值为303；实测值为304(M+H)+。
步骤2：制备(S)-3-(1-苯甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丙酸苯甲酯(cj-28)
在室温下向(S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)戊-4-炔酸苯甲酯(0.50,1.65mmol)、抗坏血酸钠(0.036g,0.18mmol)、CuSO4-5H2O(0.022g,0.09mmol)及NaN3(0.13g,2.1mmol)于DMF-H2O(5mL,4:1)中的混合物中添加BnBr(0.24mL，2.02mmol)，且将混合物温热至65℃。在5小时之后，LCMS表明低转化率。添加另一部分的NaN3(100mg)且继续加热12小时。将反应混合物倒入EtOAc及H2O中且震荡。分离各层且以EtOAc萃取水层3次且洗涤(H2O×3、盐水)合并的有机相，干燥(Na2SO4)，过滤且浓缩。将残余物通过快速色谱法(
Figure BDA00001954398800753
40+M，于CH2Cl2中的0-5%MeOH；TLC：于CH2Cl2中的3%MeOH)纯化，得到淡黄色油状物(748.3mg，104%)，其在静置后固化。NMR与所需产物一致但表明存在DMF。该物质无需进一步纯化即可按原样加以使用。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.84(s,1H),7.27-7.32(m,10H),5.54(s,2H),5.07(s,2H),4.25(m,1H),3.16(dd,J＝1.0,5.3Hz,1H),3.06(dd,J＝5.3,14.7Hz),2.96(dd,J＝9.1,14.7Hz,1H),1.31(s,9H)。LC-MS:C24H28N4O4的分析计算值为436；实测值为437(M+H)+。
步骤3：制备(S)-3-(1-苯甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)-2-(甲氧基羰基氨基)丙酸苯甲酯(cj-29)
Figure BDA00001954398800761
向(S)-3-(1-苯甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丙酸苯甲酯(0.52g,1.15mmol)于CH2Cl2中的溶液中添加TFA(4mL)。在室温下搅拌混合物2小时。在真空中浓缩混合物，得到无色油状物，其在静置后固化。将该物质溶解于THF-H2O中且冷却至0℃。添加固体NaHCO3(0.25g,3.00mmol)继而添加ClCO2Me(0.25mL,3.25mmol)。在搅拌1.5小时之后，以6NHCl酸化混合物至pH值为约2且随后倒入H2O-EtOAc中。分离各层且以EtOAc萃取水相两次。洗涤(H2O、盐水)合并的有机层，干燥(Na2SO4)，过滤且在真空中浓缩，得到无色油状物(505.8mg,111%，NMR表明存在未经鉴别的杂质)，其在泵上静置时固化。该物质无需进一步纯化即可按原样加以使用。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.87(s,1H),7.70(d,J＝8.1Hz,1H),7.27-7.32(m,10H),5.54(s,2H),5.10(d,J＝12.7Hz,1H),5.06(d,J＝12.7Hz,1H),4.32-4.37(m,1H),3.49(s,3H),3.09(dd,J＝5.6,14.7Hz,1H),2.98(dd,J＝9.6,14.7Hz,1H)。LC-MS:C21H22N4O4的分析计算值为394；实测值为395(M+H)+。
步骤4：制备(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-3-(1H-1,2,3-三唑-4-基)丙酸(Cap-128)
Figure BDA00001954398800762
在大气压力下，在Pd-C(82mg)存在下，于MeOH(5mL)中使(S)-3-(1-苯甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)-2-(甲氧基羰基氨基)丙酸苯甲酯(502mg,1.11mmol)氢化12小时。经硅藻土(
Figure BDA00001954398800763
)过滤混合物，且在真空中浓缩。获得被约10%甲酯污染的无色胶状的(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-3-(1H-1,2,3-三唑-4-基)丙酸(266mg,111%)。该物质无需进一步纯化即可按原样加以使用。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.78(s,br,1H),7.59(s,1H),7.50(d,J＝8.0Hz,1H),4.19-4.24(m,1H),3.49(s,3H),3.12(dd,J＝4.8Hz,14.9Hz,1H),2.96(dd,J＝9.9,15.0Hz,1H)。LC-MS:C7H10N4O4的分析计算值为：214；实测值为215(M+H)+。
制备Cap-129
Figure BDA00001954398800771
步骤1：制备(S)-2-(苯甲基氧基羰基氨基)-3-(1H-吡唑-1-基)丙酸(cj-31)
将(S)-2-氧代氧杂环丁烷-3-基氨基甲酸苯甲酯(0.67g，3.03mmol)及吡唑(0.22g，3.29mmol)于CH3CN(12mL)中的悬浮液在50℃下加热24小时。冷却混合物至室温过夜且过滤固体，得到(S)-2-(苯甲基氧基羰基氨基)-3-(1H-吡唑-1-基)丙酸(330.1mg)。在真空中浓缩滤液且随后以少量CH3CN(约4mL)研磨，得到第二批产物(43.5mg)。总产量为370.4mg(44%)。熔点为165.5-168℃。文献报导的熔点为168.5-169.5[Vederas等人，J.Am.Chem.Soc.,107,7105(1985)]。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.51(d,J＝2.0,1H),7.48(s,J＝1.5Hz,1H),7.24-7.34(m,5H),6.23m,1H),5.05(d,12.7H,1H),5.03(d,J＝12.7Hz,1H),4.59-4.66(m,2H),4.42-4.49(m,1H)。LC-MS:C14H15N3O4的分析计算值为289；实测值为290(M+H)+。
步骤2：制备(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-3-(1H-吡唑-1-基)丙酸(Cap-129)
Figure BDA00001954398800773
在大气压力下，在Pd-C(45mg)存在下，于MeOH(5mL)中使(S)-2-(苯甲基氧基羰基氨基)-3-(1H-吡唑-1-基)丙酸(0.20g，0.70mmol)氢化2小时。产物显现不溶于MeOH，因此以5mL H2O及数滴6N HCl稀释反应混合物。经硅藻土()过滤均质溶液，且在真空中移除MeOH。冷冻剩余溶液且冻干，得到黄色泡沫(188.9mg)。将该物质悬浮于THF-H2O(1:1，10mL)中且随后冷却至0℃。向冷却混合物中小心添加NaHCO3(146.0mg，1.74mmol)(释放CO2)。气体逸出停止(约15分钟)之后，逐滴添加ClCO2Me(0.06mL，0.78mmol)。搅拌混合物2小时且以6N HCl酸化至pH值为约2且倒入EtOAc中。分离各层且以EtOAC(×5)萃取水相。洗涤(盐水)合并的有机层，干燥(Na2SO4)，过滤且浓缩，得到无色固体状的标题化合物(117.8mg，79%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.04(s,1H),7.63(d,J＝2.6Hz,1H),7.48(d,J＝8.1Hz,1H),7.44(d,J＝1.5Hz,1H),6.19(表观三重峰,J＝2.0Hz,1H),4.47(dd,J＝3.0,12.9Hz,1H),4.29-4.41(m,2H),3.48(s,3H)。LC-MS:C8H11N3O4的分析计算值为213；实测值为214(M+H)+。
Cap-130
Figure BDA00001954398800781
Cap-130系通过类似于Calmes,M.等人,Tetrahedron,43(10),2285(1987)中所给的操作来酰基化市售(R)-苯基甘氨酸而制备。
Cap-131
步骤a：将二甲基氨甲酰基氯(0.92mL，10mmol)缓慢添加至(S)-2-氨基-3-甲基丁酸苯甲酯盐酸盐(2.44g；10mmol)及许尼希碱(3.67mL，21mmol)于THF(50mL)中的溶液中。在室温下搅拌所得白色悬浮液过夜(16小时)且在减压下浓缩。将残余物分配在乙酸乙酯与水之间。以盐水洗涤有机层，干燥(MgSO4)，过滤且在减压下浓缩。将所得黄色油状物通过快速色谱法以乙酸乙酯:己烷(1:1)洗脱来纯化。在真空下浓缩所收集级份，得到2.35g(85%)澄清油状物。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm 0.84(d,J＝6.95Hz,3H),0.89(d,J＝6.59Hz,3H),1.98-2.15(m,1H),2.80(s,6H),5.01-5.09(m,J＝12.44Hz,1H),5.13(d,J＝12.44Hz,1H),6.22(d,J＝8.05Hz,1H),7.26-7.42(m,5H)。LC(条件1):RT=1.76min；MS:[M+H]+C16H22N2O3的分析计算值为279.17；实测值为279.03。
步骤b：向以上所制备的中间体(2.35g；8.45mmol)的MeOH(50mL)溶液中添加Pd/C(10%；200mg)且以N2(3×)冲洗所得黑色悬浮液且置于1atm H2下。在室温下搅拌混合物过夜且经微纤维过滤器过滤以除去催化剂。随后在减压下浓缩所得澄清溶液以获得1.43g(89%)白色泡沫状的Cap-131，其无需进一步纯化即可使用。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 0.87(d,J＝4.27Hz,3H),0.88(d,J＝3.97Hz,3H),1.93-2.11(m,1H),2.80(s,6H),3.90(dd,J＝8.39,6.87Hz,1H),5.93(d,J＝8.54Hz,1H),12.36(s,1H)。LC(条件1):RT=0.33min；MS:[M+H]+C8H17N2O3的分析计算值为189.12；实测值为189.04。
Cap-132
Figure BDA00001954398800791
根据对于Cap-131所述的方法自(S)-2-氨基丙酸苯甲酯盐酸盐制备Cap-132。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 1.27(d,J＝7.32Hz,3H),2.80(s,6H),4.06(qt,1H),6.36(d,J＝7.32Hz,1H),12.27(s,1H)。LC(条件1):RT=0.15min；MS:[M+H]+C6H13N2O3的分析计算值为：161.09；实测值为161.00。
Cap-133
Figure BDA00001954398800792
根据对于Cap-47所述的方法自(S)-2-氨基-3-甲基丁酸叔丁酯盐酸盐及氯甲酸2-氟乙酯制备Cap-133。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 0.87(t,J＝6.71Hz,6H),1.97-2.10(m,1H),3.83(dd,J＝8.39,5.95Hz,1H),4.14-4.18(m,1H),4.20-4.25(m,1H),4.50-4.54(m,1H),4.59-4.65(m,1H),7.51(d,J＝8.54Hz,1H),12.54(s,1H)。
Cap-134
Figure BDA00001954398800793
根据对于Cap-51所述的方法自(S)-丙氨酸二乙酯及氯甲酸甲酯制备Cap-134。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 0.72-0.89(m,6H),1.15-1.38(m,4H),1.54-1.66(m,1H),3.46-3.63(m,3H),4.09(dd,J＝8.85,5.19Hz,1H),7.24(d,J＝8.85Hz,1H),12.55(s,1H)。LC(条件2):RT=0.66min；LC-MS:[M+H]+C9H18NO4的分析计算值为204.12；实测值为204.02。
Cap-135
Figure BDA00001954398800801
使D-2-氨基-(4-氟苯基)乙酸(338mg，2.00mmol)、于乙醚中的1NHCl(2.0mL，2.0mmol)及福尔马林(37%，1mL)于甲醇(5mL)中的溶液在25℃下在10%钯/碳(60mg)上进行气球氢化(balloon hydrogenation)，历时16小时。随后经
Figure BDA00001954398800802
过滤混合物，得到白色泡沫状的Cap-135的HCl盐(316mg，80%)。1H NMR(300MHz,MeOH-d4)δ7.59(dd,J＝8.80,5.10Hz,2H),7.29(t,J＝8.6Hz,2H),5.17(s,1H),3.05(非常宽的单峰,3H),2.63(非常宽的单峰,3H)；Rt=0.19min(条件-MS-W5);95%的同质性指数；LRMS:[M+H]+C10H13FNO2的分析计算值为198.09；实测值为198.10。
Cap-136
在氮气下向1-苯甲基-1H-咪唑(1.58g,10.0mmol)于无水乙醚(50mL)中的冷却(-50℃)悬浮液中逐滴添加正丁基锂(于己烷中2.5M,4.0mL,10.0mmol)。在-50℃下搅拌20分钟之后，用无水二氧化碳(通过Drierite)将反应混合物鼓泡10分钟，随后温热至25℃。过滤添加二氧化碳至反应混合物中后所形成的较重析出物，得到吸湿性、白色固体，将其吸收于水(7mL)中，酸化至pH值=3，冷却且在刮擦(scratch)下诱导结晶。过滤该析出物得到白色固体，将其悬浮于甲醇中，以1N HCl/乙醚(4mL)处理且在真空中浓缩。自水(5mL)中冻干残余物，得到白色固体状的Cap-136的HCl盐(817mg,40%)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.94(d,J＝1.5Hz,1H),7.71(d,J＝1.5Hz,1H),7.50-7.31(m,5H),5.77(s,2H)；Rt=0.51min(条件-MS-W5);95%的同质性指数；LRMS:[M+H]+C11H12N2O2的分析计算值为203.08；实测值为203.11。
Cap-137
Cap-137，步骤a
Figure BDA00001954398800812
将1-氯-3-氰基异喹啉(188mg,1.00mmol；根据WO 2003/099274中的操作制备)(188mg,1.00mmol)、氟化铯(303.8mg,2.00mmol)、双(三-叔丁基膦)二氯化钯(10mg,0.02mmol)及2-(三丁基锡烷基)呋喃(378μL,1.20mmol)于无水二噁烷(10mL)中的悬浮液在氮气下在80℃下加热16小时，随后冷却至25℃且在剧烈搅拌下以饱和氟化钾水溶液处理1h。将该混合物分配在乙酸乙酯与水之间，且分离有机相，以盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且浓缩。以硅胶(以0%至30%乙酸乙酯/己烷洗脱)纯化残余物，得到白色固体状的Cap-137，步骤a(230mg,105%)，其可按原样使用。Rt=1.95min(条件-MS-W2);90%的同质性指数；LRMS:[M+H]+C14H8N2O的分析计算值为221.07；实测值为221.12。
Cap-137
Figure BDA00001954398800813
向Cap-137，步骤a(110mg,0.50mmol)及高碘酸钠(438mg,2.05mmol)于四氯化碳(1mL)、乙腈(1mL)及水(1.5mL)中的悬浮液中添加水合三氯化钌(2mg，0.011mmol)。在25℃下搅拌混合物2小时且随后分配在二氯甲烷与水之间。分离水层，再以二氯甲烷萃取两次，且经Na2SO4干燥合并的二氯甲烷萃取物，过滤且浓缩。以己烷研磨残余物提供浅灰色固体状的Cap-137(55mg,55%)。Rt=1.10min(条件-MS-W2);90%的同质性指数；LC-MS:[M+H]+C11H8N2O2的分析计算值为200.08；实测值为200.08。
Cap-138至Cap-158
合成策略：方法A：
Figure BDA00001954398800821
Cap-138
Figure BDA00001954398800822
Cap-138，步骤a
向5-羟基异喹啉(根据WO 2003/099274中的操作制备)(2.0g,13.8mmol)及三苯基膦(4.3g,16.5mmol)于无水四氢呋喃(20mL)中的经搅拌悬浮液中逐份添加无水甲醇(0.8mL)及偶氮二甲酸二乙酯(3.0mL，16.5mmol)。在室温下搅拌混合物20小时，随后以乙酸乙酯稀释且以盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且浓缩。使残余物预吸收于硅胶上且进行纯化(以40%乙酸乙酯/己烷洗脱)，得到淡黄色固体状的Cap-138，步骤a(1.00g,45%)。1H NMR(CDCl3,500MHz)δ9.19(s,1H),8.51(d,J＝6.0Hz,1H),7.99(d,J＝6.0Hz,1H),7.52-7.50(m,2H),7.00-6.99(m,1H),4.01(s,3H)；Rt=0.66min(条件D2);95%的同质性指数；LC-MS:[M+H]+C10H10NO的分析计算值为160.08；实测值为160.10。
Cap-138，步骤b
Figure BDA00001954398800824
在室温下向Cap-138，步骤a(2.34g,14.7mmol)于无水二氯甲烷(50mL)中的经搅拌溶液中一次性添加间氯过苯甲酸(77%,3.42g,19.8mmol)。搅拌20小时之后，添加粉末状碳酸钾(2.0g)且在室温下搅拌混合物1小时，随后过滤且浓缩，得到浅黄色固体状的Cap-138，步骤b(2.15g,83.3%)，其为足够纯的而可直接进行下一步骤。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.73(d,J＝1.5Hz,1H),8.11(dd,J＝7.3,1.7Hz,1H),8.04(d,J＝7.1Hz,1H),7.52(t,J＝8.1Hz,1H),7.28(d,J＝8.3Hz,1H),6.91(d,J＝7.8Hz,1H),4.00(s,3H)；Rt=0.92min,(条件-D1);90%的同质性指数；LC-MS:[M+H]+C10H10NO2的分析计算值为176.07；实测值为176.0。
Cap-138，步骤c
在室温下在氮气下向Cap-138，步骤b(0.70g，4.00mmol)及三乙胺(1.1mL，8.00mmol)于无水乙腈(20mL)中的经搅拌溶液中添加氰化三甲基硅烷(1.60mL，12.00mmol)。在75℃下加热混合物20小时，随后冷却至室温，以乙酸乙酯稀释且以饱和碳酸氢钠溶液及盐水洗涤，随后经Na2SO4干燥且针对溶剂进行浓缩。对残余物进行硅胶快速色谱(以5%乙酸乙酯/己烷至25%乙酸乙酯/己烷洗脱)，得到白色结晶固体状的Cap-138，步骤c(498.7mg)以及自滤液中回收的223mg额外的Cap-138，步骤c。1H NMR(CDCl3,500MHz)δ8.63(d,J＝5.5Hz,1H),8.26(d,J＝5.5Hz,1H),7.88(d,J＝8.5Hz,1H),7.69(t,J＝8.0Hz,1H),7.08(d,J＝7.5Hz,1H),4.04(s,3H)；Rt=1.75min,(条件-D1);90%的同质性指数；LC-MS:[M+H]+C11H9N2O的分析计算值为185.07；实测值为185.10。
Cap-138
Figure BDA00001954398800832
以5N氢氧化钠溶液(10mL)处理Cap-138，步骤c(0.45g,2.44mmol)且在85℃下加热所得悬浮液4小时，冷却至25℃，以二氯甲烷稀释且以1N盐酸酸化。分离有机相，以盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩至1/4体积且过滤，得到黄色固体状的Cap-138(0.44g,88.9%)。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ13.6(br s,1H),8.56(d,J＝6.0Hz,1H),8.16(d,J＝6.0Hz,1H),8.06(d,J＝8.8Hz,1H),7.71-7.67(m,1H),7.30(d,J＝8.0Hz,1H),4.02(s,3H)；Rt=0.70min(条件-D1);95%的同质性指数；LC-MS:[M+H]+C11H10NO3的分析计算值为204.07；实测值为204.05。
合成策略：方法B(来源于Tetrahedron Letters,42,6707(2001))
Figure BDA00001954398800841
Cap-139
Figure BDA00001954398800842
Cap-139，步骤a
Figure BDA00001954398800843
向含有1-氯-6-甲氧基异喹啉(1.2g,6.2mmol；根据WO 2003/099274中的操作制备)、氰化钾(0.40g，6.2mmol)、1,5-双(二苯基膦基)戊烷(0.27g,0.62mmol)及乙酸钯(II)(70mg,0.31mmol)于无水甲苯(6mL)中的经氩气脱气的悬浮液的厚壁、螺旋盖小瓶中添加N,N,N',N'-四甲基乙二胺(0.29mL,2.48mmol)。密封小瓶，在150℃下加热22小时且随后冷却至25℃。以乙酸乙酯稀释反应混合物，以水及盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且浓缩。将残余物于硅胶上以5%乙酸乙酯/己烷至25%乙酸乙酯/己烷洗脱来纯化，得到白色固体状的Cap-139，步骤a(669.7mg)。1H NMR(CDCl3,500MHz)δ8.54(d,J＝6.0Hz,1H),8.22(d,J＝9.0Hz,1H),7.76(d,J＝5.5Hz,1H),7.41-7.39(m,1H),7.13(d,J＝2.0Hz,1H),3.98(s,3H)；Rt=1.66min(条件-D1);90%的同质性指数；LC-MS:[M+H]+C11H9N2O的分析计算值为185.07；实测值为185.20。
Cap-139
Figure BDA00001954398800844
根据对于Cap-138所述的操作，通过以5N NaOH碱水解Cap-139，步骤a来制备Cap-139。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.63(非常宽的单峰,1H),8.60(d,J＝9.3Hz,1H),8.45(d,J＝5.6Hz,1H),7.95(d,J＝5.9Hz,1H),7.49(d,J＝2.2Hz,1H),7.44(dd,J＝9.3,2.5Hz,1H),3.95(s,3H)；Rt=0.64min(条件-D1);90%的同质性指数；LC-MS:[M+H]+C11H10NO3的分析计算值为204.07；实测值为204.05。
Cap-140
Figure BDA00001954398800851
Cap-140，步骤a
Figure BDA00001954398800852
在25℃下在氮气下向1,3-二氯-5-乙氧基异喹啉(482mg,2.00mmol；根据WO 2005/051410中的操作制备)、乙酸钯(II)(9mg,0.04mmol)、碳酸钠(223mg,2.10mmol)及1,5-双(二苯基膦基)戊烷(35mg,0.08mmol)于无水二甲基乙酰胺(2mL)中的经剧烈搅拌的混合物中添加N,N,N',N'-四甲基乙二胺(60mL,0.40mmol)。10分钟之后，加热混合物至150℃，且随后使用注射泵以1mL份经18小时添加丙酮氰醇的储备溶液(由4.34mL DMA中的457μL丙酮氰醇制备)。随后将混合物分配在乙酸乙酯与水之间，且分离有机层，以盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且浓缩。将残余物于硅胶上以10%乙酸乙酯/己烷至40%乙酸乙酯/己烷洗脱来纯化，得到黄色固体状的Cap-140，步骤a(160mg,34%)。Rt=2.46min(条件-MS-W2);90%的同质性指数；LC-MS:[M+H]+C12H9ClN2O的分析计算值为233.05；实测值为233.08。
Cap-140
Figure BDA00001954398800853
如以下关于制备Cap-141的操作中所述，通过以12N HCl酸水解Cap-140，步骤a来制备Cap-140。Rt=2.24min(条件-MS-W2);90%的同质性指数；LC-MS:[M+H]+C12H11ClNO3的分析计算值为252.04；实测值为252.02。
Cap-141
Figure BDA00001954398800854
Cap-141，步骤a
如关于制备Cap-140，步骤a的操作(见上)中所述，自1-溴-3-氟异喹啉(使用J.Med.Chem.,13,613(1970)中所述的操作自3-氨基-1-溴异喹啉制备)制备Cap-141，步骤a。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.35(d,J＝8.5Hz,1H),7.93(d,J＝8.5Hz,1H),7.83(t,J＝7.63Hz,1H),7.77-7.73(m,1H),7.55(s,1H)；Rt=1.60min(条件-D1);90%的同质性指数；LC-MS:[M+H]+C10H6FN2的分析计算值为173.05；实测值为172.99。
Cap-141
Figure BDA00001954398800861
以12N HCl(3mL)处理Cap-141，步骤a(83mg,0.48mmol)且在80℃下加热所得浆料16小时，随后冷却至室温且以水(3mL)稀释。搅拌混合物10分钟且随后过滤，得到灰白色固体状的Cap-141(44.1mg,47.8%)。以二氯甲烷稀释滤液且以盐水洗涤，经Na2SO4干燥，且浓缩，得到额外Cap-141，其为足够纯的而可直接进行下一步骤(29.30mg,31.8%)。1H NMR(DMSO-d6,500MHz)δ14.0(br s,1H),8.59-8.57(m,1H),8.10(d,J＝8.5Hz,1H),7.88-7.85(m,2H),7.74-7.71(m,1H)；Rt=1.33min(条件-D1);90%的同质性指数；LC-MS:[M+H]+C10H7FNO2的分析计算值为192.05；实测值为191.97。
Cap-142
Figure BDA00001954398800862
Cap-142，步骤a
Figure BDA00001954398800863
如关于制备Cap-138，步骤b及c的两步操作中所述，自N-氧化4-溴异喹啉制备Cap-142，步骤a。Rt=1.45min(条件-MS-W1);90%的同质性指数；LC-MS:[M+H]+C10H6BrN2的分析计算值为232.97；实测值为233.00。
Cap-142，步骤b
Figure BDA00001954398800871
向Cap-142，步骤a(116mg，0.50mmol)、磷酸三钾(170mg,0.80mmol)、乙酸钯(II)(3.4mg,0.015mmol)及2-(二环己基膦基)联苯(11mg,0.03mmol)于无水甲苯(1mL)中的经氩气脱气的悬浮液中添加吗啉(61μL，0.70mmol)。在100℃下加热混合物16小时，冷却至25℃且经硅藻土(
Figure BDA00001954398800872
)过滤。于硅胶上以10%至70%乙酸乙酯/己烷洗脱来纯化残余物，得到黄色固体状的Cap-142，步骤b(38mg,32%)，其可直接进行下一步骤。Rt=1.26min(条件-MS-W1);90%的同质性指数；LC-MS:[M+H]+C14H14N3O的分析计算值为240.11；实测值为240.13。
Cap-142
Figure BDA00001954398800873
如关于Cap-138的操作所述，以5N氢氧化钠自Cap-142，步骤b制备Cap-142。Rt=0.72min(条件-MS-W1);90%的同质性指数；LC-MS:[M+H]+C14H15N2O3的分析计算值为259.11；实测值为259.08。
Cap-143
Figure BDA00001954398800874
Cap-143，步骤a
Figure BDA00001954398800875
向3-氨基-1-溴异喹啉(444mg，2.00mmol)于无水二甲基甲酰胺(10mL)中的经搅拌溶液中一次性添加氢化钠(60%，未经洗涤，96mg，2.4mmol)。在25℃下搅拌混合物5分钟，随后添加2-溴乙醚(90％，250μL，2.00mmol)。再在25℃下搅拌混合物5小时且在75℃下搅拌72小时，随后冷却至25℃，以饱和氯化铵溶液淬灭反应且以乙酸乙酯稀释。分离有机层，以水及盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且浓缩。将残余物于硅胶上以0%至70%乙酸乙酯/己烷洗脱来纯化，得到黄色固体状的Cap-143，步骤a(180mg，31%)。Rt=1.75min(条件-MS-W1);90%的同质性指数；LC-MS:[M+H]+C13H14BrN2O的分析计算值为293.03；实测值为293.04。
Cap-143
向Cap-143，步骤a(154mg，0.527mmol)于无水四氢呋喃(5mL)中的冷(-60℃)溶液中添加正丁基锂于己烷(2.5M，0.25mL，0.633mmol)中的溶液。10分钟之后，用无水二氧化碳将反应混合物鼓泡10分钟，随后以1N HCl淬灭反应且温热至25℃。随后以二氯甲烷(3×30mL)萃取混合物且在真空中浓缩合并的有机萃取物。通过反相HPLC(MeOH/水/TFA)纯化残余物，得到Cap-143(16mg，12%)。Rt=1.10min(条件-MS-W1);90%的同质性指数；LC-MS:[M+H]+C14H15N2O3的分析计算值为259.11；实测值为259.08。
Cap-144
Cap-144，步骤a
Figure BDA00001954398800883
将1,3-二氯异喹啉(2.75g，13.89mmol)以小份添加至发烟硝酸(10mL)及浓硫酸(10mL)的冷(0℃)溶液中。在0℃下搅拌混合物0.5小时，随后逐渐温热至25℃，同时搅拌16小时。随后将混合物倒入含有碎冰及水的烧杯中且在0℃下搅拌所得悬浮液1小时，随后过滤，得到黄色固体状的Cap-144，步骤a(2.73g，81%)，其可直接使用。Rt=2.01min(条件-D1);95%的同质性指数；LC-MS:[M+H]+C9H5Cl2N2O2的分析计算值为242.97；实测值为242.92。
Cap-144，步骤b
Figure BDA00001954398800891
将Cap-144，步骤a(0.30g，1.23mmol)吸收于甲醇(60mL)中且以氧化铂(30mg)处理，且使悬浮液在7psi H2下进行帕尔氢化(Parr hydrogenation)历时1.5小时。随后添加福尔马林(5mL)及额外氧化铂(30mg)，且使悬浮液在45psi H2下再进行帕尔氢化历时13小时。随后经硅藻土(
Figure BDA00001954398800892
)抽滤且浓缩至1/4体积。抽滤所得析出物提供黄色固体状的标题化合物，对其进行硅胶快速色谱，以于己烷中的5%乙酸乙酯至于己烷中的25%乙酸乙酯洗脱，得到浅黄色固体状的Cap-144，步骤b(231mg，78%)。Rt=2.36min(条件-D1);95%的同质性指数；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.02(s,1H),7.95(d,J＝8.6Hz,1H),7.57-7.53(m,1H),7.30(d,J＝7.3Hz,1H),2.88(s,6H)；LC-MS:[M+H]+C11H11Cl2N2的分析计算值为241.03；实测值为241.02。HRMS:[M+H]+C11H11Cl2N2的分析计算值为241.0299；实测值为241.0296。
Cap-144，步骤c
Figure BDA00001954398800893
根据对于制备Cap-139，步骤a所述的操作自Cap-144，步骤b制备Cap-144，步骤c。Rt=2.19min(条件-D1);95%的同质性指数；LC-MS:[M+H]+C12H11ClN3的分析计算值为232.06；实测值为232.03。HRMS:[M+H]+C12H11ClN3的分析计算值为232.0642；实测值为232.0631。
Cap-144
Figure BDA00001954398800894
根据对于Cap-141所述的操作制备Cap-144。Rt=2.36min(条件-D1)；90%；LC-MS:[M+H]+C12H12ClN2O2的分析计算值为238.01；实测值为238.09。
Cap-145至Cap-162
除非另有说明，否则根据对于制备Cap-138(方法A)或Cap-139(方法B)所述的操作自适当1-氯异喹啉制备Cap-145至Cap-162，如下文所概述。
Figure BDA00001954398800901
Figure BDA00001954398800921
Cap-163
Figure BDA00001954398800932
向2-酮丁酸(1.0g，9.8mmol)于乙醚(25ml)中的溶液中逐滴添加苯基溴化镁(22ml，于THF中1M)。在约25℃下在氮气下搅拌反应混合物17.5小时。以1N HCl酸化反应混合物且以乙酸乙酯(3×100ml)萃取产物。依次以水及盐水洗涤合并的有机层，且经MgSO4干燥。在真空中浓缩之后，获得白色固体。将固体自己烷/乙酸乙酯重结晶，得到白色针状的Cap-163(883.5mg)。1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5ppm,500MHz):12.71(br s,1H),7.54-7.52(m,2H),7.34-7.31(m,2H),7.26-7.23(m,1H),5.52-5.39(br s,1H),2.11(m,1H),1.88(m,1H),0.79(表观三重峰,J=7.4Hz,3H)。
Cap-164
Figure BDA00001954398800933
将2-氨基-2-苯基丁酸(1.5g，8.4mmol)、甲醛(14mL，37%的水溶液)、1N HCl(10mL)及10%Pd/C(0.5mg)于MeOH(40mL)中的混合物暴露于帕尔瓶中50psi下的H242小时。经
Figure BDA00001954398800934
过滤反应混合物且在真空中浓缩，将残余物吸收于MeOH(36mL)中，且将产物以反相HPLC(MeOH/H2O/TFA)纯化，得到白色固体状的Cap-164的三氟乙酸盐(1.7g)。1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5ppm,500MHz)7.54-7.47(m,5H),2.63(m,1H),2.55(s,6H),2.31(m,1H),0.95(表观三重峰,J=7.3Hz,3H)。
Cap-165
Figure BDA00001954398800941
向2-氨基-2-茚满甲酸(258.6mg，1.46mmol)及甲酸(0.6ml，15.9mmol)于1,2-二氯乙烷(7ml)中的混合物中添加甲醛(0.6ml，37%的水溶液)。在约25℃下搅拌混合物15分钟，随后在70℃下加热8小时。在真空中移除挥发性组分，且将残余物吸收于DMF(14mL)中且通过反相HPLC(MeOH/H2O/TFA)纯化，得到黏性油状的Cap-165的三氟乙酸盐(120.2mg)。1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5ppm,500MHz):7.29-7.21(m,4H),3.61(d,J=17.4Hz,2H),3.50(d,J=17.4Hz,2H),2.75(s,6H)。LC-MS:[M+H]+C12H16NO2的分析计算值为206.12；实测值为206.07。
Cap-166a及Cap-166b
Figure BDA00001954398800942
根据对于合成Cap-7a及Cap-7b所述的方法，自(1S,4S)-(+)-2-甲基-2,5-二氮杂二环[2.2.1]庚烷(2HBr)制备Cap-166a及Cap-166b，其例外之处为使用半制备型Chrialcel OJ柱，20×250mm，10μm以85:15庚烷/乙醇混合物在10mL/min洗脱速率下洗脱25分钟来分离苯甲酯中间体。Cap-166b：1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5ppm,500MHz):7.45(d,J=7.3Hz,2H),7.27-7.19(m,3H),4.09(s,1H),3.34(表观宽单峰,1H),3.16(表观宽单峰,1H),2.83(d,J＝10.1Hz,1H),2.71(m,2H),2.46(m,1H),2.27(s,3H),1.77(d,J=9.8Hz,1H),1.63(d,J=9.8Hz,1H)。LC-MS:[M+H]+C14H19N2O2的分析计算值为247.14；实测值为247.11。
Cap-167
将外消旋Boc-1,3-二氢-2H-异吲哚甲酸(1.0g，3.8mmol)于20%TFA/CH2Cl2中的溶液在约25℃下搅拌4小时。在真空中移除所有挥发性组分。将所得粗物质、甲醛(15mL，37%的水溶液)、1N HCl(10mL)及10%Pd/C(10mg)于MeOH中的混合物暴露于帕尔瓶中的H2(40PSI)23小时。经
Figure BDA00001954398800951
过滤反应混合物且在真空中浓缩，得到黄色泡沫状的Cap-167(873.5mg)。1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5ppm,500MHz)7.59-7.38(m,4H),5.59(s,1H),4.84(d,J=14Hz,1H),4.50(d,J=14.1Hz,1H),3.07(s,3H)。LC-MS:[M+H]+C10H12NO2的分析计算值为178.09；实测值为178.65。
Cap-168
Figure BDA00001954398800952
根据对于制备Cap-167所述的操作自外消旋Boc-氨基茚满-1-甲酸制备外消旋Cap-168。粗物质可按原样使用。
Cap-169
将2-氨基-2-苯基丙酸盐酸盐(5.0g，2.5mmol)、甲醛(15ml，37%的水溶液)、1N HCl(15ml)及10%Pd/C(1.32g)于MeOH(60mL)中的混合物置于帕尔瓶中且在氢气(55PSI)下震荡4日。经
Figure BDA00001954398800954
过滤反应混合物且在真空中浓缩。将残余物吸收于MeOH中且通过反相制备型-HPLC(MeOH/水/TFA)纯化，得到黏性半固体状的Cap-169的三氟乙酸盐(2.1g)。1H NMR(CDCl3,δ=7.26ppm,500MHz):7.58-7.52(m,2H),7.39-7.33(m,3H),2.86(brs,3H),2.47(br s,3H),1.93(s,3H)。LC-MS:[M+H]+C11H16NO2的分析计算值为194.12；实测值为194.12。
Cap-170
Figure BDA00001954398800955
(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸
向于水(15ml)中的(S)-2-氨基-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸(505mg；3.18mmol；由Astatech获得)中添加碳酸钠(673mg；6.35mmol)，且冷却所得混合物至0℃，且随后经5分钟逐滴添加氯甲酸甲酯(0.26ml；3.33mmol)。搅拌反应混合物18小时，同时将冷却浴解冻至环境温度。随后将该反应混合物分配在1N HCl与乙酸乙酯之间。移除有机层且将水层再以2份乙酸乙酯进一步萃取。以盐水洗涤合并的有机层，经硫酸镁干燥，过滤且在真空中浓缩，得到无色残余物形式的Cap-170。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm12.65(1H，br s),7.44(1H,d,J＝8.24Hz),3.77-3.95(3H,m),3.54(3H,s),3.11-3.26(2H,m),1.82-1.95(1H,m),1.41-1.55(2H,m),1.21-1.39(2H,m)；LC-MS:[M+H]+C9H16NO5的分析计算值为218.1；实测值为218.1。
Cap-171
Figure BDA00001954398800961
将2-(苯甲基氧基羰基氨基)-2-(氧杂环丁烷-3-亚基)乙酸甲酯(200mg，0.721mmol；Il Farmaco(2001),56,609-613)于乙酸乙酯(7ml)及CH2Cl2(4.00ml)中的溶液通过氮气鼓泡10分钟来脱气。随后添加二碳酸二甲酯(0.116ml，1.082mmol)及Pd/C(20mg，0.019mmol)，且向反应混合物装备氢气气球且在环境温度下搅拌过夜，此时TLC(95:5 CH2Cl2/MeOH：以由1gCe(NH4)2SO4、6g钼酸铵、6ml硫酸及100ml水制得的着色剂来显现)表明完全转化。经过滤反应混合物且浓缩。将残余物经由
Figure BDA00001954398800963
(在25Samplet上装载二氯甲烷；在25S柱上以二氯甲烷洗脱3CV，随后以0至5%MeOH/二氯甲烷洗脱250ml，随后在5%MeOH/二氯甲烷下保持250ml；9ml级份)纯化。收集含有所需物质的级份且浓缩，得到120mg(81%)无色油状的2-(甲氧基羰基氨基)-2-(氧杂环丁烷-3-基)乙酸甲酯。1H NMR(500MHz,氯仿-d)δppm 3.29-3.40(m,J＝6.71Hz,1H)3.70(s,3H)3.74(s,3H)4.55(t,J＝6.41Hz,1H)4.58-4.68(m,2H)4.67-4.78(m,2H)5.31(br s,1H)。LC-MS:[M+H]+C8H14NO5的分析计算值为204.2；实测值为204.0。
向于THF(2mL)及水(0.5mL)中的2-(甲氧基羰基氨基)-2-(氧杂环丁烷-3-基)乙酸甲酯(50mg，0.246mmol)中添加氢氧化锂一水合物(10.33mg，0.246mmol)。在环境温度下搅拌所得溶液过夜。TLC(1∶1 EA/Hex；Hanessian着色剂)[1g Ce(NH4)2SO4，6g钼酸铵，6ml硫酸及100ml水])表明约10%原料剩余。再添加3mg LiOH，且搅拌过夜，此时TLC显示无原料剩余。在真空中浓缩且置于高真空过夜，得到55mg无色固体状的2-(甲氧基羰基氨基)-2-(氧杂环丁烷-3-基)乙酸锂。1H NMR(500MHz,MeOD)δppm 3.39-3.47(m,1H)3.67(s,3H)4.28(d,J＝7.93Hz,1H)4.64(t,J＝6.26Hz,1H)4.68(t,J＝7.02Hz,1H)4.73(d,J＝7.63Hz,2H)。
Cap-172
Figure BDA00001954398800971
Cap-172步骤a
Figure BDA00001954398800972
以下重氮化步骤是从Barton,A.等人,J.C.S.Perkin Trans I，159-164(1982)修改而来：将NaNO2(166mg，2.4mmol)于水(0.6mL)中的溶液缓慢添加至2-氨基-5-乙基-1,3-噻唑-4-甲酸甲酯(186mg，1.0mmol)、CuSO4·5H2O(330mg，1.32mmol)、NaCl(260mg，4.45mmol)及H2SO4(5.5mL)于水(7.5mL)中的经搅拌的冷(0℃)溶液中。在0℃下搅拌混合物45分钟，且温热至室温，此时再搅拌1小时，随后添加CuCl(118mg)。再在室温下搅拌该混合物16小时，随后用盐水稀释，且用乙醚萃取两次。合并有机层，经MgSO4干燥且浓缩，得到呈橙色油状的2-氯-5-乙基噻唑-4-甲酸甲酯(亦即Cap-172步骤a)(175mg，85%)(80%纯)，其直接用于下一反应中。Rt=1.99min(条件-MD1)；LC-MS:[M+H]+C7H9ClNO2S的分析计算值为206.01；实测值为206.05。
Cap-172
向2-氯-5-乙基噻唑-4-甲酸甲酯(175mg)于THF/H2O/MeOH(20mL/3mL/12mL)中的溶液中添加LiOH(305mg，12.76mmol)。在室温下搅拌混合物过夜，随后浓缩减小体积，且用1N HCl的乙醚溶液(25mL)中和。用乙酸乙酯萃取残余物两次，且合并有机层，经MgSO4干燥且蒸发，得到呈红色固体状的Cap-172(60mg，74%)，其不经进一步纯化即使用。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm 13.03-13.42(1H,m),3.16(2H,q,J＝7.4Hz),1.23(3H,t,J＝7.5Hz)。Rt=1.78min(条件-MD1)；LC-MS:[M+H]+C6H7ClNO2S的分析计算值为191.99；实测值为191.99。
Cap-173
Figure BDA00001954398800981
Cap-173步骤a
Figure BDA00001954398800982
以下重氮化步骤是从Barton,A.等人,J.C.S.Perkin Trans I，159-164(1982)修改而来：将NaNO2(150mg，2.17mmol)于水(1.0mL)中的溶液逐滴添加至2-氨基-5-乙基-1,3-噻唑-4-甲酸甲酯(186mg，1.0mmol)于50%H3PO2(3.2mL)中的经搅拌的冷(0℃)溶液中。在0℃下搅拌混合物1小时，且温热至室温，此时再搅拌2小时。再冷却至0℃后，用NaOH(85mg)于水(10mL)中的溶液缓慢处理该混合物。随后，用饱和NaHCO3溶液稀释混合物，且用乙醚萃取两次。合并有机层，经MgSO4干燥且浓缩，得到呈橙色油状的5-乙基噻唑-4-甲酸甲酯(亦即Cap-173步骤a)(134mg，78%)(85%纯)，其直接用于下一反应中。Rt=1.58min(条件-MD1)；LC-MS:[M+H]+C7H10NO2S的分析计算值为172.05；实测值为172.05。
Cap-173
向5-乙基噻唑-4-甲酸甲酯(134mg)于THF/H2O/MeOH(18mL/2.7mL/11mL)中的溶液中添加LiOH(281mg，11.74mmol)。在室温下搅拌混合物过夜，随后浓缩减小体积，且用1N HCl的乙醚溶液(25mL)中和。用乙酸乙酯萃取残余物两次，且合并有机层，经MgSO4干燥且蒸发，得到呈橙色固体状的Cap-173(90mg，73%)，其不经进一步纯化即使用。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm 12.74-13.04(1H,m),3.20(2H,q,J＝7.3Hz),1.25(3H,t,J＝7.5Hz)。Rt=1.27min(条件-MD1)；LC-MS:[M+H]+C6H8NO2S的分析计算值为158.03；实测值为158.04。
Cap-174
Figure BDA00001954398800983
Cap-174步骤a
Figure BDA00001954398800991
将三氟甲磺酸酐(5.0g,18.0mmol)逐滴添加至3-羟基吡啶-2-甲酸甲酯(2.5g,16.3mmol)及TEA(2.5mL,18.0mmol)于CH2Cl2(80mL)中的冷(0℃)溶液中。在0℃下搅拌混合物1小时，随后温热至室温，此时再搅拌1小时。随后用饱和NaHCO3溶液(40mL)淬灭混合物且分离有机层，用盐水洗涤，经MgSO4干燥且浓缩，得到呈暗棕色油状的3-(三氟甲基磺酰氧基)吡啶-2-甲酸甲酯(亦即Cap-174步骤a)(3.38g，73%)(>95%纯)，其不经纯化即直接使用。1H NMR(300MHz,CDCl3)δppm 8.72-8.79(1H,m),7.71(1H,d,J＝1.5Hz),7.58-7.65(1H,m),4.04(3H,s)。Rt=1.93min(条件-MD1)；LC-MS:[M+H]+C8H7F3NO5S的分析计算值为286.00；实测值为286.08。
Cap-174
向3-(三氟甲基磺酰氧基)吡啶-2-甲酸甲酯(570mg，2.0mmol)于DMF(20mL)中的溶液中添加LiCl(254mg，6.0mmol)、三丁基(乙烯基)锡烷(761mg，2.4mmol)及双(三苯基膦)二氯化钯(42mg，0.06mmol)。在100℃下加热混合物过夜，随后在室温下向反应混合物中添加饱和KF溶液(20mL)。搅拌该混合物4小时，随后经
Figure BDA00001954398800992
过滤，且用乙酸乙酯洗涤
Figure BDA00001954398800993
垫。随后分离滤液水相且在真空中浓缩减小体积。用4N HCl的二噁烷溶液(5mL)处理残余物，且用甲醇萃取所得混合物，过滤且蒸发，得到呈绿色固体状的Cap-174(260mg)，其略受无机盐污染但不经进一步纯化即使用。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm 8.21(1H,d,J＝3.7Hz),7.81-7.90(1H,m),7.09(1H,dd,J＝7.7,4.8Hz),6.98(1H,dd,J＝17.9,11.3Hz),5.74(1H,dd,J＝17.9,1.5Hz),5.20(1H,d,J＝11.0Hz)。Rt=0.39min(条件-MD1)；LC-MS:[M+H]+C8H8NO2的分析计算值为150.06；实测值为150.07。
Cap-175
Figure BDA00001954398800994
Cap-175步骤a
Figure BDA00001954398801001
向Cap-174制备中的中间体3-(三氟甲基磺酰氧基)吡啶-2-甲酸甲酯(亦即Cap-174步骤a)(570mg，2.0mmol)于DMF(20mL)中的溶液中添加LiCl(254mg，6.0mmol)、三丁基(乙烯基)锡烷(761mg，2.4mmol)及双(三苯基膦)二氯化钯(42mg，0.06mmol)。在100℃下加热混合物4小时，随后在真空中移除溶剂。将残余物吸收于乙腈(50mL)及己烷(50mL)中，且用己烷洗涤所得混合物两次。随后分离乙腈层，经
Figure BDA00001954398801002
过滤且蒸发。利用快速色谱在Horizon仪器上纯化残余物(用含25%乙酸乙酯的己烷至含65%乙酸乙酯的己烷梯度洗脱)，得到呈黄色油状的3-乙烯基吡啶-2-甲酸甲酯(亦即Cap-175步骤a)(130mg，40%)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δppm 8.60(1H,dd,J＝4.6,1.7Hz),7.94(1H,d,J＝7.7Hz),7.33-7.51(2H,m),5.72(1H,d,J＝17.2Hz),5.47(1H,d,J＝11.0Hz),3.99(3H,s)。Rt=1.29min(条件-MD1)；LC-MS:[M+H]+C9H10NO2的分析计算值为164.07；实测值为164.06。
Cap-175步骤b
Figure BDA00001954398801003
将钯/碳(10%，25mg)添加至3-乙烯基吡啶-2-甲酸甲酯(120mg，0.74mmol)于乙醇(10mL)中的溶液中。在室温下在氢气氛围中搅拌悬浮液1小时，随后经
Figure BDA00001954398801004
过滤，且用甲醇洗涤
Figure BDA00001954398801005
垫。浓缩滤液至干燥，得到3-乙基吡啶-2-甲酸甲酯(亦即Cap-175步骤b)，其直接用于下一反应中。Rt=1.15min(条件-MD1)；LC-MS:[M+H]+C9H12NO2的分析计算值为166.09；实测值为166.09。
Cap-175
向3-乙基吡啶-2-甲酸甲酯于THF/H2O/MeOH(5mL/0.75mL/3mL)中的溶液中添加LiOH(35mg，1.47mmol)。在室温下搅拌混合物2天，随后添加额外的LiOH(80mg)。再处于室温下24小时后，过滤混合物且在真空中移除溶剂。随后用4N HCl的二噁烷溶液(5mL)处理残余物，且浓缩所得悬浮液至干燥，得到呈黄色固体状的Cap-175，其不经进一步纯化即使用。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm 8.47(1H,dd,J＝4.8,1.5Hz),7.82-7.89(1H,m),7.53(1H,dd,J＝7.7,4.8Hz),2.82(2H,q,J＝7.3Hz),1.17(3H,t,J＝7.5Hz)。Rt=0.36min(条件-MD1)；LC-MS:[M+H]+C8H10NO2的分析计算值为152.07；实测值为152.10。
Cap-176
Figure BDA00001954398801011
(S)-2-(4,4-二氟环己基)-2-(甲氧基羰基氨基)乙酸
Cap-176步骤a
Figure BDA00001954398801012
将1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-酮(15g,96mmol)于EtOAc(150mL)中的溶液添加至2-(苯甲氧基羰基氨基)-2-(二甲氧基磷酰基)乙酸甲酯(21.21g,64.0mmol)于1,1,3,3-四甲基胍(10.45mL,83mmol)及EtOAc(150mL)中的溶液中。在环境温度下搅拌所得溶液72小时，随后用EtOAc(25ml)稀释。用1NHCl(75mL)、H2O(100mL)及盐水(100mL)洗涤有机层，干燥(MgSO4)，过滤且浓缩。经由
Figure BDA00001954398801013
(5%至25%EtOAc/己烷；300g柱)纯化残余物。随后在真空下浓缩含产物的合并部分，且将残余物自己烷/EtOAc重结晶，得到对应于2-(苯甲氧基羰基氨基)-2-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-亚基)乙酸甲酯(6.2g)的白色晶体。1H NMR(400MHz,CDCl3-d)δppm 7.30-7.44(5H,m),6.02(1H,br.s.),5.15(2H,s),3.97(4H,s),3.76(3H,br.s.),2.84-2.92(2H,m),2.47(2H,t,J＝6.40Hz),1.74-1.83(4H,m)。LC(条件OL1):Rt=2.89min。LC-MS:[M+Na]+C19H23NNaO6的分析计算值为745.21；实测值为745.47。
Cap-176步骤b
Figure BDA00001954398801014
自烯烃Cap-176步骤a根据Burk,M.J.等人(J.Am.Chem.Soc.,117:9375-9376(1995))及其中的参考文献的方法制备酯Cap-176步骤b：在N2氛围下，在500mL高压瓶中装入烯烃Cap-176步骤a(3.5g,9.68mmol)/脱气MeOH(200mL)。随后向该溶液中装入四氟硼酸(-)-1,2-双((2S,5S)-2,5-二甲基磷杂环戊基)乙烷(环辛二烯)铑(I)((-)-1,2-Bis((2S,5S)-2,5-dimethylphospholano)ethane(cyclooctadiene)rhodium(I)tetrafluoroborate)(0.108g，0.194mmol)，且用N2(3×)上冲洗所得混合物且充入H2(3×)。在70psi H2下在环境温度下剧烈摇动溶液72小时。在减压下移除溶剂且将剩余残余物吸收于EtOAc中。随后经硅胶塞过滤淡棕色溶液，且用EtOAc洗脱。在真空下浓缩溶剂，得到对应于酯Cap-176步骤b(3.4g)的澄清油状物。1H NMR(500MHz,CDCl3-d)δppm 7.28-7.43(5H,m),5.32(1H,d,J＝9.16Hz),5.06-5.16(2H,m),4.37(1H,dd,J＝9.00,5.04Hz),3.92(4H,t,J＝3.05Hz),3.75(3H,s),1.64-1.92(4H,m),1.37-1.60(5H,m)。LC(条件OL1):Rt=1.95min。LC-MS:[M+H]+C19H26NO6的分析计算值为364.18；实测值为364.27。
Cap-176步骤c
Figure BDA00001954398801021
将酯Cap-176步骤b(4.78g,13.15mmol)溶解于THF(15mL)中，接着依次添加水(10mL)、冰乙酸(26.4mL，460mmol)及二氯乙酸(5.44mL，65.8mmol)。在环境温度下搅拌所得混合物72小时，且通过在剧烈搅拌下减缓添加固体Na2CO3淬灭反应直至不再有明显的气体释放。将粗产物萃取于10%乙酸乙酯-二氯甲烷中，且合并有机层，干燥(MgSO4)，过滤且浓缩。经由
Figure BDA00001954398801022
(0至30%EtOAc/Hex；25g柱)纯化所得残余物，得到呈澄清油状的酮Cap-176步骤c(3.86g)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d)δppm 7.28-7.41(5H,m),5.55(1H,d,J＝8.28Hz),5.09(2H,s),4.46(1H,dd,J＝8.16,5.14Hz),3.74(3H,s),2.18-2.46(5H,m),1.96-2.06(1H,m),1.90(1H,ddd,J＝12.99,5.96,2.89Hz),1.44-1.68(2H,m,J＝12.36,12.36,12.36,12.36,4.77Hz)。LC(条件OL1):Rt=1.66min。LC-MS:[M+Na]+C17H21NNaO5的分析计算值为342.13；实测值为342.10。
Cap-176步骤d
Figure BDA00001954398801031
将DEOXO-
Figure BDA00001954398801032
(3.13ml，16.97mmol)添加至酮Cap-176步骤c(2.71g，8.49mmol)于CH2Cl2(50ml)中的溶液中，接着添加催化量的EtOH(0.149ml，2.55mmol)。在室温下搅拌所得微黄色溶液过夜。通过添加饱和NaHCO3水溶液(25mL)淬灭反应，且用EtOAc(3×75mL)萃取混合物。干燥(MgSO4)合并的有机层，过滤且干燥，得到微黄色油状物。经由色谱(2%至15%EtOAc/Hex；90g柱)纯化残余物且回收对应于二氟氨基酸二氟化物Cap-176步骤d(1.5g)的白色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3-d)δppm 7.29-7.46(5H,m),5.34(1H,d,J＝8.28Hz),5.12(2H,s),4.41(1H,dd,J＝8.66,4.89Hz),3.77(3H,s),2.06-2.20(2H,m),1.83-1.98(1H,m),1.60-1.81(4H,m),1.38-1.55(2H,m)。19F NMR(376MHz,CDCl3-d)δppm-92.15(1F,d,J＝237.55Hz),-102.44(1F,d,J＝235.82Hz)。LC(条件OL1):Rt=1.66min。LC-MS:[2M+Na]+C34H42F4N2NaO8的分析计算值为705.28；实测值为705.18。
Cap-176步骤e
Figure BDA00001954398801034
将二氟化物Cap-176步骤d(4g，11.72mmol)溶解于MeOH(120mL)中，且装入Pd/C(1.247g，1.172mmol)。用N2(3×)冲洗悬浮液，且将反应混合物放置在1atm H2(气球)下。在环境温度下搅拌混合物48小时。随后经
Figure BDA00001954398801035
塞过滤悬浮液，且在真空下浓缩得到油状物，该油状物对应于氨基Cap-176步骤e(2.04g)且不经进一步纯化即使用。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 3.62(3H,s),3.20(1H,d,J＝5.77Hz),1.91-2.09(2H,m),1.50-1.88(7H,m),1.20-1.45(2H,m)。19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δppm-89.39(1F,d,J＝232.35Hz),-100.07(1F,d,J＝232.35Hz)。13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δppm 175.51(1C,s),124.10(1C,t,J＝241.21,238.90Hz),57.74(1C,s),51.39(1C,s),39.23(1C,br.s.),32.02-33.83(2C,m),25.36(1C,d,J＝10.02Hz),23.74(1C,d,J＝9.25Hz)。LC(条件OL2):Rt=0.95min。LC-MS:[2M+H]+C18H31F4N2O2的分析计算值为415.22；实测值为415.40。
Cap-176步骤f
Figure BDA00001954398801041
将氯甲酸甲酯(1.495mL，19.30mmol)添加至氨基酸Cap-176步骤e(2g，9.65mmol)及DIEA(6.74mL，38.6mmol)于CH2Cl2(100mL)中的溶液中。在室温下搅拌所得溶液3小时，且在减压下移除挥发性物质。经由
Figure BDA00001954398801042
(0%至20%EtOAc/Hex；90g柱)纯化残余物。回收在真空下静置后固化且对应于氨基甲酸酯Cap-176步骤f的澄清油状物(2.22g)。1H NMR(500MHz,CDCl3-d)δppm 5.27(1H,d,J＝8.55Hz),4.39(1H,dd,J＝8.85,4.88Hz),3.77(3H,s),3.70(3H,s),2.07-2.20(2H,m),1.84-1.96(1H,m),1.64-1.82(4H,m),1.39-1.51(2H,m)。19F NMR(471MHz,CDCl3-d)δppm-92.55(1F，d,J＝237.13Hz),-102.93(1F,d,J＝237.12Hz)。13C NMR(126MHz,CDCl3-d)δppm 171.97(1C,s),156.69(1C,s),119.77-125.59(1C,m),57.24(1C,br.s.),52.48(1C,br.s.),52.43(1C,s),39.15(1C,s),32.50-33.48(2C,m),25.30(1C,d,J＝9.60Hz),24.03(1C,d,J＝9.60Hz)。LC(条件OL1):Rt=1.49min。LC-MS:[M+Na]+C11H17F2NNaO4的分析计算值为288.10；实测值为288.03。
Cap-176
Figure BDA00001954398801043
(S)-2-(4,4-二氟环己基)-2-(甲氧基羰基氨基)乙酸
将LiOH(0.379g，15.83mmol)于水(25mL)中的溶液添加至氨基甲酸酯Cap-176步骤f(2.1g，7.92mmol)于THF(75mL)中的溶液中，且在环境温度下搅拌所得混合物4小时。在真空下移除THF，且用1N HCl溶液(2mL)使剩余水相酸化，然后用EtOAc(2×50mL)萃取。干燥(MgSO4)合并的有机层，过滤且浓缩，得到对应于Cap-176的白色泡沫(1.92g)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 12.73(1H,s),7.50(1H,d,J＝8.78Hz),3.97(1H,dd,J＝8.53,6.02Hz),3.54(3H,s),1.92-2.08(2H,m),1.57-1.90(5H,m),1.34-1.48(1H,m),1.27(1H,qd,J＝12.72,3.26Hz)。19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δppm-89.62(1F,d,J＝232.35Hz),-99.93(1F,d,J＝232.35Hz)。LC(条件OL2):Rt=0.76min。LC-MS:[M-H]+C10H14F2NO4的分析计算值为250.09；实测值为250.10。
Cap-177a-d
Figure BDA00001954398801051
Cap-177a-d步骤a
Figure BDA00001954398801052
将1,1,3,3-四甲基胍(0.985mL，7.85mmol)添加至2-(苯甲氧基羰基氨基)-2-(二甲氧基磷酰基)乙酸甲酯(2.0g，6.0mmol)于EtOAc(40mL)中的经搅拌溶液中，且在室温下在N2下搅拌混合物10分钟。随后，添加二氢-2H-吡喃-3(4H)-酮[23462-75-1](0.604g，6.04mmol)，且在室温下搅拌混合物16小时。随后在致冷器中冷却反应混合物10分钟，且用柠檬酸水溶液(1.5g于20mL水中)中和。分配两相，且用0.25N盐酸水溶液及盐水洗涤有机层，随后干燥(MgSO4)且浓缩成无色油状物。将粗物质通过快速硅胶色谱(负载溶剂：DCM，用EtOAc/己烷洗脱，梯度为20%至30%EtOAc)纯化，得到两种异构产物：第一洗脱产物为(Z)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-2-(2H-吡喃-3(4H,5H,6H)-亚基)乙酸甲酯(490mg)(白色固体)及第二产物为(E)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-2-(2H-吡喃-3(4H,5H,6H)-亚基)乙酸甲酯(433mg)(白色固体)。LC-MS保留时间：1.398min(Z异构体)及1.378min(E异构体)；m/z 304.08(Z异构体)及304.16(E异构体)(MH-)。在装备有
Figure BDA00001954398801053
Luna 10u C183.0×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱仪上使用SPD-10AV UV-Vis检测器在220nM检测波长下记录LC数据。洗脱条件采用：流速：4mL/min，梯度：100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间：3min，保持时间：1min，及分析时间：4min，其中溶剂A为5%MeOH/95%H2O/10mM乙酸铵且溶剂B为5%H2O/95%MeOH/10mM乙酸铵。使用用于LC的
Figure BDA00001954398801054
Platform在电喷雾模式下测定MS数据。1H NMR(400MHz,氯仿-d)(Z异构体)δppm 7.30-7.44(m,5H),6.18(br.s.,1H),5.10-5.17(m,2H),4.22(s,2H),3.78(br.s.,3H),2.93-3.02(m,2H),1.80(dt,J＝11.7,5.8Hz,2H),1.62(s,2H)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)(E异构体)δppm 7.31-7.44(m,5H),6.12(br.s.,1H),5.13-5.17(m,2H),4.64(br.s.,2H),3.70-3.82(m,5H),2.49(t,J＝6.5Hz,2H),1.80(br.s.,2H)。(注意：绝对区域选择性化学由1HNMR位移及耦合常数决定)。
Cap-177a-d步骤b
将四氟硼酸(-)-1,2-双((2S,5S)-2,5-二甲基磷杂环戊基)乙烷(环辛二烯)-铑(I)(28.2mg，0.051mmol)添加至(Z)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-2-(2H-吡喃-3(4H,5H,6H)-亚基)乙酸甲酯(310mg，1.015mmol)于MeOH(10mL)中的经搅拌溶液中，且依次用N2及H2真空冲洗该混合物，随后在室温下在H2(60psi)下搅拌反应混合物2天。浓缩反应混合物，且将残余物通过快速硅胶色谱(负载溶剂：DCM，用含20%EtOAc的己烷洗脱)纯化，得到呈澄清无色油状的(S)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-2-((S)-四氢-2H-吡喃-3-基)乙酸甲酯(204mg)。LC-MS保留时间：1.437min；m/z 307.89(MH+)。在装备有
Figure BDA00001954398801062
Luna 10μ C18 3.0×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱仪上使用SPD-10AV UV-Vis检测器在220nM检测波长下记录LC数据。洗脱条件采用：流速：4mL/min，梯度：100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间：3min，保持时间：1min，及分析时间：4min，其中溶剂A为5%MeOH/95%H2O/10mM乙酸铵且溶剂B为5%H2O/95%MeOH/10mM乙酸铵。使用用于LC的Platform在电喷雾模式下测定MS数据。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm 7.30-7.46(m,5H),5.32(d,J＝8.8Hz,1H),5.12(s,2H),4.36(dd,J＝8.9,5.6Hz,1H),3.84-3.98(m,2H),3.77(s,3H),3.28-3.37(m,1H),3.23(dd,J＝11.3,10.5Hz,1H),2.04-2.16(m,1H),1.61-1.75(m,3H),1.31-1.43(m,1H)。
另一立体异构体((E)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-2-(2H-吡喃-3(4H,5H,6H)-亚基)乙酸甲酯)(360mg，1.18mmol)以类似方式还原，得到呈澄清油状的(S)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-2-((R)-四氢-2H-吡喃-3-基)乙酸甲酯(214mg)。LC-MS保留时间：1.437min；m/z 308.03(MH+)。在装备有Luna 10μ C18 3.0×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱仪上使用SPD-10AV UV-Vis检测器在220nM检测波长下记录LC数据。洗脱条件采用：流速：4mL/min，梯度：100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间：3min，保持时间：1min，及分析时间：4min，其中溶剂A为5%MeOH/95%H2O/10mM乙酸铵且溶剂B为5%H2O/95%MeOH/10mM乙酸铵。使用用于LC的
Figure BDA00001954398801072
Platform在电喷雾模式下测定MS数据。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm 7.30-7.44(m,5H),5.31(d,J＝9.0Hz,1H),5.12(s,2H),4.31(dd,J＝8.7,6.9Hz,1H),3.80-3.90(m,2H),3.77(s,3H),3.37(td,J＝10.8,3.5Hz,1H),3.28(dd,J＝11.3,9.8Hz,1H),1.97-2.10(m,1H),1.81(d,J＝11.5Hz,1H),1.61-1.72(m,2H),1.33-1.46(m,1H)。
利用四氟硼酸(-)-1,2-双((2R,5R)-2,5-二甲基磷杂环戊基)乙烷(环辛二烯)-铑(I)作为使单独立体异构体起始物质烯烃还原的氢化催化剂，以相同方式且以类似收率制备单独对映异构体Cap-177a步骤b(Cap-177c步骤b)及Cap-177b步骤b(Cap-177d步骤b)。
Cap-177aC及ap-177b步骤c
将10%Pd/C(69.3mg，0.065mmol)添加至(S)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-2-((S)-四氢-2H-吡喃-3-基)乙酸甲酯(200mg，0.651mmol)及二碳酸二甲酯[4525-33-1](0.104mL，0.976mmol)于MeOH(10mL)中的溶液中。依次用N2及H2真空冲洗该反应混合物，随后在室温下在H2(55psi)下搅拌反应混合物5小时。经
Figure BDA00001954398801074
/二氧化硅垫过滤反应混合物，且浓缩滤液为无色油状物。将粗油状物通过快速硅胶色谱(负载溶剂：DCM，用含30%EtOAc的己烷洗脱)纯化，得到呈无色油状的产物(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-2-((S)-四氢-2H-吡喃-3-基)乙酸甲酯(132mg)。LC-MS保留时间：0.92min；m/z 231.97(MH+)。在装备有
Figure BDA00001954398801075
Luna 10μC18 3.0×50mm柱的ShimadzuLC-10AS液相色谱仪上使用SPD-10AV UV-Vis检测器在220nM检测波长下记录LC数据。洗脱条件采用：流速：4mL/min，梯度：100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间：3min，保持时间：1min，及分析时间：4min，其中溶剂A为5%MeOH/95%H2O/10mM乙酸铵且溶剂B为5%H2O/95%MeOH/10mM乙酸铵。使用用于LC的
Figure BDA00001954398801081
Platform在电喷雾模式下测定MS数据。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm5.24(d,J＝8.5Hz,1H),4.34(dd,J＝8.9,5.6Hz,1H),3.84-3.97(m,2H),3.77(s,3H),3.70(s,3H),3.29-3.38(m,1H),3.23(dd,J＝11.2,10.4Hz,1H),2.03-2.14(m,1H),1.56-1.75(m,3H),1.32-1.43(m,1H)。
以类似方式使另一非对映异构体((S)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-2-((R)-四氢-2H-吡喃-3-基)乙酸甲酯)转化，得到呈澄清无色油状的(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-2-((R)-四氢-2H-吡喃-3-基)乙酸甲酯。LC-MS保留时间：0.99min；m/z231.90(MH+)。在装备有
Figure BDA00001954398801082
Luna 10μ C18 3.0×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱仪上使用SPD-10AV UV-Vis检测器在220nM检测波长下记录LC数据。洗脱条件采用：流速：4mL/min，梯度：100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间：3min，保持时间：1min，及分析时间：4min，其中溶剂A为5%MeOH/95%H2O/10mM乙酸铵且溶剂B为5%H2O/95%MeOH/10mM乙酸铵。使用用于LC的Platform在电喷雾模式下测定MS数据。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm5.25(d,J＝8.0Hz,1H),4.29(dd,J＝8.4,7.2Hz,1H),3.82-3.90(m,2H),3.77(s,3H),3.70(s,3H),3.37(td,J＝10.8,3.3Hz,1H),3.28(t,J＝10.5Hz,1H),1.96-2.08(m,1H),1.81(dd,J＝12.9,1.6Hz,1H),1.56-1.72(m,2H),1.33-1.46(m,1H)。
使用来自Cap-177a-d步骤b的适当起始物质，以类似方式且以类似收率制备单独对映异构体Cap-177a步骤c(Cap-177c步骤c)及Cap-177b步骤c(Cap-177d步骤c)。
Cap-177a及Cap-177b步骤d
Figure BDA00001954398801084
在室温下在搅拌下，向(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-2-((S)-四氢-2H-吡喃-3-基)乙酸甲酯(126mg，0.545mmol)于THF(4mL)中的溶液中添加1MLiOH(1.090mL，1.090mmol)于水中的溶液。在室温下搅拌反应混合物3小时，用1M HCl(1.1mL)中和且用EtOAc(3×10mL)萃取。干燥有机物，过滤且浓缩，得到呈澄清无色油状的(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-2-((S)-四氢-2H-吡喃-3-基)乙酸(Cap-177a)(125mg)。LC-MS保留时间：0.44min；m/z 218.00(MH+)。在装备有
Figure BDA00001954398801091
Luna 10μC18 3.0×50mm柱的ShimadzuLC-10AS液相色谱仪上使用SPD-10AV UV-Vis检测器在220nM检测波长下记录LC数据。洗脱条件采用：流速：4mL/min，梯度：100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间：3min，保持时间：1min，及分析时间：4min，其中溶剂A为5%MeOH/95%H2O/10mM乙酸铵且溶剂B为5%H2O/95%MeOH/10mM乙酸铵。使用用于LC的
Figure BDA00001954398801092
Platform在电喷雾模式下测定MS数据。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm5.28(d,J＝8.8Hz,1H),4.38(dd,J＝8.7,5.6Hz,1H),3.96-4.04(m,1H),3.91(d,J＝11.0Hz,1H),3.71(s,3H),3.33-3.41(m,1H),3.24-3.32(m,1H),2.10-2.24(m,1H),1.74-1.83(m,1H),1.63-1.71(m,2H),1.35-1.49(m,1H)。
以类似方式使另一非对映异构体((S)-2-(甲氧基羰基氨基)-2-((R)-四氢-2H-吡喃-3-基)乙酸甲酯)转化，得到呈澄清无色油状的(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-2-((R)-四氢-2H-吡喃-3-基)乙酸(Cap-177b)。LC-MS保留时间：0.41min；m/z 217.93(MH+)。在装备有
Figure BDA00001954398801093
Luna 10μC18 3.0×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱仪上使用SPD-10AV UV-Vis检测器在220nM检测波长下记录LC数据。洗脱条件采用：流速：4mL/min，梯度：100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间：3min，保持时间：1min，及分析时间：4min，其中溶剂A为5%MeOH/95%H2O/10mM乙酸铵且溶剂B为5%H2O/95%MeOH/10mM乙酸铵。使用用于LC的
Figure BDA00001954398801094
Platform在电喷雾模式下测定MS数据。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm6.18(br.s.,1H),5.39(d,J＝8.5Hz,1H),4.27-4.37(m,1H),3.82-3.96(m,2H),3.72(s,3H),3.42(td,J＝10.8,3.3Hz,1H),3.35(t,J＝10.4Hz,1H),2.01-2.18(m,1H),1.90(d,J＝11.8Hz,1H),1.59-1.76(m,2H),1.40-1.54(m,1H)。
使用来自Cap-177a-d步骤c的适当起始物质，以类似方式且以类似收率制备单独对映异构体Cap-177a步骤c(Cap-177c)及Cap-177b(Cap-177d)。
Cap-178
Cap-178步骤a
Figure BDA00001954398801102
向于氢化槽中的二乙酸(2S,3S,4S)-2-甲基-3,4-二氢-2H-吡喃-3,4-二酯(5g，23.34mmol)于20mL MeOH中的溶液中添加Pd/C(150mg，0.141mmol)。在帕尔振荡器上在40psi下氢化所得混合物1小时。随后过滤混合物，且浓缩滤液，得到呈澄清油状的Cap-178步骤a(5.0g)，其在静置时固化。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 4.85-4.94(1H,m),4.69(1H,t,J＝9.46Hz),3.88-3.94(1H,m),3.44(1H,td,J＝12.21,1.83Hz),3.36(1H,dq,J＝9.42,6.12Hz),2.03-2.08(1H,m),2.02(3H,s),2.00(3H,s),1.70-1.80(1H,m),1.16(3H,d,J＝6.10Hz)。
Cap-178步骤b
Figure BDA00001954398801103
向Cap-178步骤a(5.0g，23mmol)于50mL MeOH中的溶液中添加数滴甲醇钠。在室温下搅拌30分钟后，添加甲醇钠(0.1mL，23.12mmol)，且在室温下搅拌溶液过夜。随后在真空下移除溶剂。用苯稀释残余物且浓缩，得到呈黄色固体状的相应二醇。将固体溶解于50mL吡啶中，且在-35℃向该溶液中逐滴添加苯甲酰氯(2.95mL，25.4mmol)。在-35℃下搅拌所得混合物1小时，随后在室温下搅拌过夜。用Et2O稀释混合物且用水洗涤。用EtOAc(2×)萃取水层。用MgSO4干燥合并的有机层且浓缩。将粗产物通过快速色谱(硅胶，5%-15%EtOAc/Hex)纯化，得到呈澄清油状的Cap-178步骤b(4.5g)，其在长期静置后缓慢结晶。LC-MS:[M+Na]+C13H16NaO4的分析计算值为259.09；实测值为259.0；1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 8.02-8.07(2H,m),7.55-7.61(1H,m),7.45(2H,t,J＝7.78Hz),5.01(1H,ddd,J＝11.44,8.70,5.49Hz),3.98(1H,ddd,J＝11.90,4.88,1.53Hz),3.54(1H,td,J＝12.36,2.14Hz),3.41(1H,t,J＝9.00Hz),3.31-3.38(1H,m),2.13-2.19(1H,m),1.83-1.94(1H,m),1.36(3H,d,J＝5.80Hz)。
Cap-178步骤c
Figure BDA00001954398801111
经15分钟，向NaH(1.143g，28.6mmol)(60%于矿物油中)于6mL CS2中的混合物中逐滴添加含Cap-178步骤b(4.5g，19mmol)的40mL CS2。在室温下搅拌所得混合物30分钟。混合物变成淡橙色，且析出一些固体。随后经20分钟逐滴添加MeI(14.29mL，229mmol)。随后在室温下搅拌混合物过夜。用饱和NH4Cl溶液小心淬灭反应混合物。用EtOAc(3×)萃取混合物。用MgSO4干燥合并的有机层且浓缩。将粗产物通过快速色谱(硅胶，6%EtOAc/Hex)纯化，得到呈澄清油状的Cap-178步骤c(3.13g)。LC-MS:[M+Na]+C15H18NaO4S2的分析计算值为349.05；实测值为349.11；1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 7.94-8.00(2H,m),7.50-7.58(1H,m),7.41(2H,t,J＝7.78Hz),5.96(1H,t,J＝9.46Hz),5.28(1H,ddd,J＝11.37,9.38,5.49Hz),4.02(1H,ddd,J＝11.98,4.96,1.68Hz),3.54-3.68(2H,m),2.48(3H,s),2.31(1H,dd),1.88-1.99(1H,m),1.28(3H,d)。
Cap-178步骤d
Figure BDA00001954398801112
在80℃下向Cap-178步骤c(3.13g，9.59mmol)及AIBN(120mg，0.731mmol)于40mL苯中的混合物中添加氢化三正丁基锡(10.24mL，38.4mmol)。在回流温度下搅拌所得混合物20分钟，随后冷却至室温。用乙醚稀释混合物，且添加100mL KF(10g)，且剧烈搅拌混合物30分钟。随后分离两层，且用EtOAc(2×)萃取水相。用MgSO4干燥有机层且浓缩。将粗产物通过快速色谱(硅胶，用含3%Et3N的己烷失活，且用含3%Et3N的己烷冲洗以移除三丁基锡衍生物，随后用15%EtOAc/Hex洗脱)纯化，得到呈澄清油状的Cap-178步骤d(1.9g)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 7.98-8.07(2H,m),7.52-7.58(1H,m),7.43(2H,t,J＝7.63Hz),5.08-5.17(1H,m),4.06(1H,ddd,J＝11.90,4.88,1.53Hz),3.50-3.59(2H,m),2.08-2.14(1H,m),1.99-2.06(1H,m),1.69-1.80(1H,m),1.41-1.49(1H,m),1.24(3H,d,J＝6.10Hz)。
Cap-178步骤e
Figure BDA00001954398801121
向Cap-178步骤d(1.9g，8.63mmol)于10mL MeOH中的混合物中添加甲醇钠(2mL，4.00mmol)(2M于甲醇中)。在室温下搅拌所得混合物5小时。在真空下移除溶剂。用饱和NH4Cl溶液中和混合物，且用EtOAc(3×)萃取。用MgSO4干燥有机层且浓缩，得到呈澄清油状的Cap-178步骤e(0.8g)。该产物不经进一步纯化即用于下一步骤中。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm4.01(1H,ddd,J＝11.80,5.02,1.76Hz),3.73-3.83(1H,m),3.36-3.46(2H,m),1.92-2.00(1H,m),1.88(1H,m),1.43-1.56(1H,m),1.23(3H,d),1.15-1.29(1H,m)。
Cap-178步骤f
Figure BDA00001954398801122
将甲苯磺酰氯(2.63g，13.77mmol)添加至Cap-178步骤e(0.8g，6.89mmol)及吡啶(2.23mL，27.5mmol)于100mL CH2Cl2中的溶液中。在室温下搅拌所得混合物3天。随后向该反应混合物中添加10mL水，且在室温下搅拌混合物1小时。分离两层，且用水及1N盐酸水溶液洗涤有机相。用MgSO4干燥有机相且浓缩，得到呈淡黄色固体状的Cap-178步骤f(1.75g)。该产物不经进一步纯化即用于下一步骤中。[M+H]+C13H19O4S的分析计算值为271.10；实测值为270.90；1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 7.79(2H,d,J＝8.24Hz),7.34(2H,d,J＝7.93Hz),4.53-4.62(1H,m),3.94(1H,ddd,J＝12.13,4.96,1.83Hz),3.29-3.41(2H,m),2.45(3H,s),1.90-1.97(1H,m),1.79-1.85(1H,m),1.64-1.75(1H,m),1.38-1.48(1H,m),1.17(3H,d,J＝6.10Hz)。
Cap-178步骤g
Figure BDA00001954398801131
在微波管中放置2-(二苯基亚甲基氨基)乙酸乙酯(1.6g，5.92mmol)及Cap-178步骤f(1.6g，5.92mmol)。添加10mL甲苯。密封管且在N2下逐滴添加LiHMDS(7.1mL，7.10mmol)(1N于甲苯中)。在微波辐射下在100℃下加热所得暗棕色溶液6小时。随后向混合物中添加水，且用EtOAc(3×)萃取混合物。用盐水洗涤合并的有机层，用MgSO4干燥且浓缩，得到呈橙色油状的Cap-3步骤g(3.1g)的非对映异构混合物。粗混合物不经分离即用于下一步骤中。LC-MS:[M+H]+C23H28NO3的分析计算值为366.21；实测值为366.3。
Cap-178步骤h
Figure BDA00001954398801132
向乙基Cap-178步骤g的非对映异构混合物于20mL THF中的溶液中添加HCl(30ml,60.0mmol)(2N水溶液)。在室温下搅拌所得混合物1小时。用EtOAc萃取混合物，且浓缩水层，得到呈橙色油状的Cap-178步骤h的盐酸盐(1.9g)。该盐不经进一步纯化即用于下一步骤中。LC-MS:[M+H]+C10H20NO3的分析计算值为202.14；实测值为202.1。
Cap-178步骤i
Figure BDA00001954398801133
在室温下搅拌1.9g Cap-178步骤h(盐酸盐)、DiPEA(4.19mL，24.0mmol)及氯甲酸甲酯(1.24mL，16.0mmol)于20mL CH2Cl2中的溶液1小时。用CH2Cl2稀释混合物且用水洗涤。用Na2SO4干燥有机层且浓缩。将粗产物通过快速色谱(硅胶，0-20%EtOAc/Hex)纯化，得到呈黄色油状的Cap-178步骤i(1.1g)。[M+Na]+C12H21NNaO5的分析计算值为282.13；实测值为282.14；1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 5.16(1H,br.s.),4.43-4.58(1H,m),4.17-4.28(2H,m),3.89-4.03(1H,m),3.72-3.78(2H,m),3.67-3.72(3H,m),2.07-2.19(1H,m),1.35-1.77(4H,m),1.30(3H,td,J＝7.09,2.89Hz),1.19(3H,d,J＝6.53Hz)。
Cap-178步骤j
向Cap-178步骤i(1.1g，4.2mmol)于5mL THF及2mL水中的混合物中添加LiOH(6.36mL，12.7mmol)(2N水溶液)。在室温下搅拌所得混合物过夜。随后用1N HCl水溶液中和混合物，且用EtOAc(3×)萃取。用MgSO4干燥合并的有机层且浓缩，得到呈澄清油状的Cap-178步骤j(0.8g)。LC-MS:[M+H]+C10H18NO5的分析计算值为232.12；实测值为232.1；1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 5.20(1H,d,J＝8.28Hz),4.54(1H,t,J＝8.16Hz),3.95-4.10(1H,m),3.66-3.85(5H,m),2.15-2.29(1H,m),1.41-1.85(4H,m),1.23(3H,dd,J＝6.53,1.76Hz)。
Cap-178步骤k
Figure BDA00001954398801142
向Cap-178步骤j(240mg，1.04mmol)、(S)-1-苯基乙醇(0.141mL，1.142mmol)及EDC(219mg，1.14mmol)于10mL CH2Cl2中的溶液中添加DMAP(13.95mg，0.114mmol)。在室温下搅拌所得溶液过夜，且在真空下移除溶剂。将残余物吸收于EtOAc中，用水洗涤，经MgSO4干燥且浓缩。将粗产物通过色谱(硅胶，0-15%EtOAc/己烷)纯化，得到呈两种非对映异构体的混合物的Cap-178步骤k。通过手性HPLC(
Figure BDA00001954398801143
AS柱，21×250mm，10μm)用90%0.1%二乙胺/庚烷-10%EtOH以15mL/min洗脱来分离混合物，得到呈白色固体状的Cap-178步骤k立体异构体1(第一个洗脱)及Cap-178步骤k立体异构体2(第二个洗脱)。未指定异构体的立体化学。
Cap-178步骤k立体异构体1(130mg):LC-MS:[M+Na]+C18H25NNaO5的分析计算值为358.16；实测值为358.16；1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm7.28-7.38(5H,m),5.94(1H,q,J＝6.71Hz),5.12(1H,d,J＝9.16Hz),4.55(1H,t,J＝9.00Hz),3.72-3.81(1H,m),3.67(3H,s),3.60-3.70(2H,m),1.98-2.08(1H,m),1.59(3H,d,J＝6.71Hz),1.38-1.47(2H,m),1.30(2H,t,J＝5.34Hz),0.93(3H,d,J＝6.41Hz)。
Cap-178，立体异构体1
向Cap-178步骤k立体异构体1((S)-2-(甲氧基羰基氨基)-2-((2S,4R)-2-甲基四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸)(150mg，0.447mmol)于10mL EtOH中的溶液中添加Pd/C(20mg，0.188mmol)，且在帕尔振荡器上在40psi下氢化混合物过夜。随后过滤混合物，且浓缩滤液，得到呈黏性白色固体状的Cap-178，立体异构体1(100mg)。LC-MS:[M+H]+C10H18NO5的分析计算值为232.12；实测值为232.1；1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 5.14-5.27(1H,m),4.51(1H,t,J＝8.39Hz),3.90-4.07(1H,m),3.60-3.83(5H,m),2.06-2.27(1H,m),1.45-1.77(4H,m),1.21(3H,d,J＝6.41Hz)。
Cap-179(对映异构体-1及对映异构体-2)
Cap-179步骤a
Figure BDA00001954398801152
将2,6-二甲基-4H-吡喃-4-酮(10g，81mmol)溶解于乙醇(125mL)中，且添加Pd/C(1g，0.94mmol)。在室温下在帕尔振荡器中在H2(0.325g，161mmol)(70psi)下氢化混合物12小时。经
Figure BDA00001954398801153
垫过滤催化剂，且用乙醇洗涤。真空浓缩滤液，且将残余物经由
Figure BDA00001954398801154
(2%至25%EtOAc/Hex；160g柱)纯化。分离澄清油状物的两个级份。第一洗脱物对应于(2R,6S)-2,6-二甲基二氢-2H-吡喃-4(3H)-酮(1.8g)，而第二洗脱物对应于Cap-179步骤a(1.8g)。
(2R,6S)-2,6-二甲基二氢-2H-吡喃-4(3H)-酮数据：1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 3.69(2H,ddd,J＝11.29,5.95,2.29Hz),2.24-2.36(2H,m),2.08-2.23(2H,m),1.18-1.34(6H,m);13C NMR(126MHz,CDCl3)δppm206.96(1C,br.s.),72.69(2C,s),48.70(2C,s),21.72(2C,s)。
Cap-179步骤a数据：1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 3.69-3.78(1H,m),3.36-3.47(2H,m),2.10(1H,br.s.),1.88(2H,dd,J＝12.05,4.73Hz),1.19(6H,d,J＝6.10Hz),1.10(2H,q,J＝10.70Hz);13C NMR(126MHz,CDCl3)δppm 71.44(2C,s),67.92(1C,s),42.59(2C,s),21.71(2C,s)。
Cap-179步骤b
Figure BDA00001954398801161
将DEAD(2.311mL，14.59mmol)逐滴添加至Cap-179步骤a(0.38g，2.92mmol)、4-硝基苯甲酸(2.195g，13.14mmol)及Ph3P(3.83g，14.59mmol)于苯(25mL)中的溶液中。检测到放热，且在环境温度下搅拌所得琥珀色溶液6小时。在减压下移除溶剂，且将残余物经由(0%至15%EtOAc/Hex；80g柱)纯化。分离对应于Cap-179步骤b(0.77g)的白色固体。LC-MS:[M]+C14H17NO5的分析计算值为279.11；实测值为279.12。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 8.27-8.32(2H,m),8.20-8.24(2H,m),5.45(1H,quin,J＝2.82Hz),3.92(2H,dqd,J＝11.90,6.10,6.10,6.10,1.53Hz),1.91(2H,dd,J＝14.80,2.29Hz),1.57(3H,dt,J＝14.65,3.05Hz),1.22(6H,d,J＝6.10Hz)。
Cap-179步骤c
Figure BDA00001954398801163
将LiOH(0.330g，13.8mmol)于水(8mL)中的溶液添加至Cap-179步骤b(0.77g，2.76mmol)于THF(30mL)中的溶液中，且在环境温度下搅拌所得混合物16小时。在减压下移除THF，且再用水(20mL)稀释水层且用EtOAc(3×15mL)萃取。干燥(MgSO4)合并的有机层，过滤且在真空下浓缩。回收油状残余物及白色固体。用己烷研磨混合物，且滤出固体，得到对应于Cap-179步骤c的澄清油状物(0.34g)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 4.21(1H,quin,J＝2.82Hz),3.87-3.95(2H,m),1.72(1H,br.s.),1.63(2H,dd,J＝14.34,2.14Hz),1.39-1.47(2H,m),1.17(6H,d,J＝6.41Hz)。
Cap-179步骤d
Figure BDA00001954398801171
在室温下，将对甲苯磺酰氯(3.98g，20.89mmol)添加至Cap-179步骤c(1.36g，10.5mmol)及吡啶(3.38mL，41.8mmol)于CH2Cl2(150mL)中的溶液中，且搅拌24小时，随后浓缩成黄色油状物。将剩余残余物添加至吡啶(20mL)及水(30mL)中，且在环境温度下搅拌所得混合物11/2小时。用Et2O(75mL)萃取混合物，且用1N盐酸水溶液(4×50mL)澈底洗涤分离的有机层。随后干燥(MgSO4)有机层，过滤且浓缩。分离对应于Cap-179步骤d(2.2g)的白色固体。LC-MS:[2M+H]+C28H41O8S2的分析计算值为569.22；实测值为569.3。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.80(2H,d,J＝8.28Hz),7.35(2H,d,J＝8.03Hz),4.89(1H,quin,J＝2.82Hz),3.77-3.88(2H,m),2.46(3H,s),1.77(2H,dd,J＝14.93,2.89Hz),1.36(2H,ddd,J＝14.31,11.54,2.76Hz),1.13(6H,d,J＝6.27Hz)。
Cap-179步骤e
在室温下，在密封微波小瓶中，将LiHMDS(4.30mL，4.30mmol)添加至Cap-179步骤d(1.02g，3.59mmol)及2-(二苯基亚甲基氨基)乙酸苯甲酯(1.181g，3.59mmol)于甲苯(25mL)中的溶液中，随后在100℃下在微波辐射下搅拌所得混合物5小时。用水(10mL)淬灭反应混合物，用EtOAc萃取，用水洗涤，经MgSO4干燥，过滤且真空浓缩。经由
Figure BDA00001954398801173
色谱(0%至6%EtOAc/Hex；80g柱)纯化残余物且分离对应于Cap-179步骤e(1.2g)的黄色油状物。[2M+Na]+C58H62N2NaO6的分析计算值为905.45；实测值为905.42。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.64-7.70(4H,m),7.29-7.44(29H,m),7.06(4H,dd,J＝7.65,1.63Hz),5.18(2H,d,J＝2.01Hz),3.89(2H,d,J＝6.53Hz),3.79-3.87(1H,m),3.46(5H,d quind,J＝11.26,5.87,5.87,5.87,5.87,1.88Hz),2.47(2H,s),2.35-2.46(2H,m),1.78(1H,dd,J＝14.81,3.01Hz),1.62-1.65(1H,m),1.61(2H,s),1.36-1.43(3H,m),1.19(7H,d,J＝6.27Hz),1.14(11H,dd,J＝6.15,2.89Hz),0.86-0.96(3H,m)。
Cap-179步骤f(对映异构体-1及对映异构体-2)
Figure BDA00001954398801181
将Cap-179步骤e(2.08g，4.71mmol)溶解于THF(100mL)中，且用2NHCl(9.42mL，18.84mmol)处理。在环境温度下搅拌所得澄清溶液4小时，随后在减压下移除THF。用己烷(3×20mL)萃取剩余水层，且在用H2O(20mL)稀释之后，用1N NaOH碱化水相至pH=10且用EtOAc(3×10mL)萃取。干燥(MgSO4)合并的有机层，过滤且在真空下浓缩。将所得残余物吸收于CH2Cl2(100mL)中，且装入DIEA(2.468mL，14.13mmol)及氯甲酸甲酯(0.401mL，5.18mmol)。在环境温度下搅拌所得溶液2小时。用水(10mL)淬灭反应混合物，且在减压下移除有机层。随后用EtOAc(3×10mL)萃取水层，且干燥(MgSO4)合并的有机层，过滤且浓缩。经由
Figure BDA00001954398801182
(10%EtOAc/Hex；25g柱)纯化残余物。回收对应于Cap-179步骤f(1.05g)的澄清无色油状物。LC-MS:[M+H]+C18H26NO5的分析计算值为336.18；实测值为336.3。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 7.32-7.40(5H,m),5.26(1H,d,J＝8.24Hz),5.13-5.24(2H,m),4.36(1H,dd,J＝8.85,4.88Hz),3.68(3H,s),3.32-3.46(2H,m),2.02-2.14(1H,m),1.52(1H,d,J＝12.82Hz),1.32(1H,d,J＝12.51Hz),1.11-1.18(6H,m),0.89-1.07(2H,m)。
研究手性SFC方法以通过使用12%甲醇作为调节剂在AD-H柱(30×250mm，5μm)(温度=35℃，压力=150巴，波长=210nm，流速=70mL/min，8min，溶剂A=CO2，溶剂B=MeOH)上分离外消旋混合物。两种分离的异构体Cap-179步骤f(对映异构体-1)(第一个洗脱)及Cap-179步骤f(对映异构体-2)(第二个洗脱)展现与对应的混合物(参见上文)相同的分析数据。
Cap-179(对映异构体-1及对映异构体-2)
在帕尔瓶中，将Cap-179步骤f(对映异构体-1)(0.35g，1.044mmol)溶解于MeOH(50mL)中，且装入Pd/C(0.111g，1.044mmol)。随后，将悬浮液放置于帕尔振荡器中，且用N2(3×)冲洗混合物，放置于40psi H2(2.104mg，1.044mmol)下，且在室温下振荡2小时。经
Figure BDA00001954398801191
垫滤出催化剂，且在减压下移除溶剂，得到对应于Cap-179对映异构体-1的琥珀色固体(0.25g)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 12.74(4H,br.s.),7.35(4H,d,J＝6.10Hz),3.85(4H,br.s.),3.53(3H,s),3.35(2H,ddd,J＝15.95,9.99,6.10Hz),1.97(1H,br.s.),1.48(2H,t,J＝13.28Hz),1.06(6H,d,J＝6.10Hz),0.82-1.00(2H,m)
类似地制备Cap-179对映异构体-2：1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm12.50(1H,br.s.),7.31(1H,br.s.),3.84(1H,t,J＝7.32Hz),3.53(3H,s),3.29-3.41(2H,m),1.99(1H,s),1.48(2H,t,J＝14.34Hz),1.06(6H,d,J＝6.10Hz),0.95(1H,q,J＝12.21Hz),0.87(1H,q,J＝11.80Hz)。[注意：对映异构体的1H NMR谱图中的微小变化很可能由样品浓度差异所致。]
Cap-180(外消旋混合物)
Figure BDA00001954398801192
Cap-180步骤a
Figure BDA00001954398801193
在室温下，将甲苯磺酰氯(4.39g，23.0mmol)添加至Cap-179步骤a(1.50g，11.5mmol)及吡啶(3.73mL，46.1mmol)于CH2Cl2(50mL)中的溶液中，且搅拌2天。用CH2Cl2稀释反应混合物，依次用水及1N HCl洗涤。干燥(MgSO4)有机层，且浓缩成黄色油状物，经由
Figure BDA00001954398801194
(5%至20%EtOAc/Hex；40g柱)纯化。分离在真空下固化且对应于Cap-180步骤a的澄清油状物(2.89g)。LC-MS:[2M+Na]+C28H40NaO8S2的分析计算值为591.21；实测值为591.3。1HNMR(500MHz,CDCl3)δppm 7.80(2H,d,J＝8.24Hz),7.35(2H,d,J＝7.93Hz),4.59(1H,tt,J＝11.37,4.96Hz),3.36-3.46(2H,m),2.46(3H,s),1.91(2H,dd,J＝12.05,5.04Hz),1.37(2H,dt,J＝12.67,11.52Hz),1.19(6H,d,J＝6.10Hz)。
Cap-180步骤b
Figure BDA00001954398801201
在室温下，将LiHMDS 1N(7.09mL，7.09mmol)添加至Cap-180步骤a(1.68g，5.91mmol)及2-(二苯基亚甲基氨基)乙酸乙酯(1.579g，5.91mmol)于甲苯(30mL)中的溶液中，随后在85℃下搅拌所得混合物16小时。用水(50mL)淬灭反应混合物，用EtOAc萃取，用水洗涤，经MgSO4干燥，过滤且真空浓缩。经由
Figure BDA00001954398801202
(0%至15%EtOAc/Hex；40g柱)纯化残余物。分离对应于Cap-180步骤b(外消旋混合物；0.64g)的澄清微黄色油状物。LC-MS:[M+H]+C24H30NO3的分析计算值为380.22；实测值为380.03。1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.64-7.70(2H,m),7.45-7.51(3H,m),7.38-7.44(1H,m),7.31-7.37(2H,m),7.13-7.19(2H,m),4.39(1H,d,J＝10.54Hz),4.16-4.26(2H,m),3.29-3.39(1H,m),2.93-3.03(1H,m),2.70(1H,m,J＝9.41,4.14Hz),1.42-1.49(2H,m),1.31-1.37(1H,m),1.29(4H,t,J＝7.15Hz),1.04(6H,dd,J＝7.78,6.27Hz)。
Cap-180步骤c
Figure BDA00001954398801203
将Cap-180步骤b(0.36g，0.949mmol)溶解于THF(10mL)中，且用2NHCl(1.897mL，3.79mmol)处理。在环境温度下搅拌所得澄清溶液20小时，且在减压下移除THF。用己烷(3×20mL)萃取剩余水层，且在用H2O(20mL)稀释之后，用1N NaOH碱化水相至pH=10且用EtOAc(3×10mL)萃取。干燥(MgSO4)合并的有机层，过滤且在真空下浓缩。将所得残余物吸收于CH2Cl2(10.00mL)中，且装入DIEA(0.497mL，2.85mmol)及氯甲酸甲酯(0.081mL，1.044mmol)。在环境温度下搅拌所得溶液2小时，且用水(10mL)淬灭反应混合物，且在减压下移除有机层。用EtOAc(3×10mL)萃取水层，且干燥(MgSO4)合并的有机层，过滤且浓缩。回收对应于Cap-180步骤c(0.21g)的琥珀色油状物，且其不经进一步纯化即使用。LC-MS:[M+H]+C13H24NO5的分析计算值为273.17；实测值为274.06。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm5.20(1H,d,J＝8.03Hz),4.59(1H,t,J＝10.16Hz),4.11-4.27(3H,m),3.69-3.82(2H,m),3.64(3H,s),1.95-2.07(1H,m),1.63(1H,d,J＝13.80Hz),1.41(2H,dd,J＝8.03,4.02Hz),1.31-1.37(1H,m),1.26(3H,t,J＝7.15Hz),1.16(1H,d,J＝6.27Hz),1.12(6H,dd,J＝6.15,3.89Hz)。
Cap-180(外消旋混合物)
在0℃下，将Cap-180步骤c(0.32g，1.2mmol)溶解于THF(10mL)中，且装入LiOH(0.056g，2.342mmol)于水(3.33mL)中的溶液。在室温下搅拌所得溶液2小时。在减压下移除THF，且用水(15mL)稀释剩余残余物且用Et2O(2×10mL)洗涤。随后用1N HCl酸化水层至pH值为约2，且用EtOAc(3×15mL)萃取。干燥(MgSO4)合并的有机层，过滤且在真空下浓缩，得到呈白色泡沫状的Cap-180(外消旋混合物)(0.2g)。LC-MS:[M+H]+C11H20NO5的分析计算值为246.13；实测值为246.00。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 5.14(1H,d,J＝9.03Hz),4.65(1H,t,J＝9.91Hz),3.63-3.89(5H,m),1.99-2.13(1H,m),1.56-1.73(2H,m),1.48-1.55(1H,m),1.35-1.48(1H,m),1.27(1H,br.s.),1.17(6H,d,J＝6.02Hz)。
Cap-185(对映异构体-1及对映异构体-2)
Figure BDA00001954398801211
Cap-185步骤a
Figure BDA00001954398801212
在避光条件下，在1小时期间，向呋喃(1.075mL，14.69mmol)及锌(1.585g，24.24mmol)于1mL THF中的混合物中逐滴添加1,1,3,3-四溴丙-2-酮(8.23g，22.03mmol)及硼酸三乙酯(5.25mL，30.8mmol)于4mL THF中的溶液。在避光条件下，在室温下搅拌所得混合物17小时。冷却所得暗棕色混合物至-15℃，且添加6mL水。将混合物温热至0℃，且在此温度下搅拌30分钟。随后过滤混合物且用乙醚洗涤。用水稀释滤液，且用乙醚(3×)萃取。经MgSO4干燥合并的有机层且浓缩，得到暗棕色油状物。将暗棕色油状物吸收于6mLMeOH中，且将溶液逐滴添加至锌(4.99g，76mmol)、氯化亚铜(I)(0.756g，7.64mmol)及氯化铵(5.4g，101mmol)于20mL MeOH的混合物中。在添加期间，将反应温度维持在15℃以下。随后在室温下搅拌混合物20小时，过滤，且用水稀释滤液，且用CH2Cl2(3×)萃取。用MgSO4干燥合并的有机层且浓缩。将粗产物通过快速色谱(硅胶，0-14%EtOAc/Hex)纯化，得到呈白色固体状的Cap-185步骤a(1.0g)，其不久即变黄。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 6.24(2H,s),5.01(2H,d,J＝4.88Hz),2.73(2H,dd,J＝16.94,5.04Hz),2.31(2H,d,J＝16.79Hz)。
Cap-185步骤b
Figure BDA00001954398801221
在-78℃下，经100分钟，向Cap-185步骤a(240mg，1.933mmol)于2mLTHF中的溶液中逐滴添加三仲丁基硼氢化锂(L-selectride)(3.87mL，3.87mmol)(1M于THF中)。在-78℃下搅拌所得混合物1小时，随后在室温下搅拌过夜。随后冷却混合物至0℃，依次逐滴添加4mL 20%NaOH水溶液及2mL H2O2(30%水溶液)。搅拌所得混合物1小时，随后用6N HCl(约5mL)中和。用NaCl使水层饱和，且用CH2Cl2(3×)萃取。用MgSO4干燥合并的有机层且浓缩。将粗产物通过快速色谱(硅胶，0-40%EtOAc/Hex)纯化，得到呈澄清油状的Cap-185步骤b(180mg)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 6.49(2H,s),4.76(2H,d,J＝4.27Hz),3.99(1H,t,J＝5.77Hz),2.29(2H,ddd,J＝15.18,5.65,4.02Hz),1.70-1.78(2H,m)。
Cap-185步骤c
Figure BDA00001954398801222
将甲苯磺酰氯(544mg，2.85mmol)添加至Cap-185步骤b(180mg，1.427mmol)及吡啶(0.462mL，5.71mmol)于5mL CH2Cl2中的溶液中，且在室温下搅拌混合物2天。用CH2Cl2稀释反应混合物，且用1N HCl水溶液洗涤。用CH2Cl2(2×)萃取水层。用MgSO4干燥合并的有机层且浓缩。将粗产物通过快速色谱(硅胶，0-15%EtOAc/Hex)纯化，得到呈白色固体状的Cap-185步骤c(210mg)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 7.73(2H,d,J＝8.24Hz),7.32(2H,d,J＝8.24Hz),6.25(2H,s),4.76(1H,t,J＝5.65Hz),4.64(2H,d,J＝3.66Hz),2.44(3H,s),2.18(2H,td,J＝10.07,5.49Hz),1.71(2H,d,J＝15.56Hz)。
Cap-185步骤d
Figure BDA00001954398801231
在微波管中装入2-(二苯基亚甲基氨基)乙酸苯甲酯(1.5g，4.57mmol)及Cap-185步骤c(1.28g，4.57mmol)于5mL甲苯中的溶液。密封管且在N2下逐滴添加LiHMDS(5.5mL，5.5mmol)(1N于甲苯中)。在微波中在100℃下加热所得暗棕色溶液5小时。随后向混合物中添加水及EtOAc。分离各层，且用EtOAc(2×)萃取水相。浓缩合并的有机层，得到呈外消旋混合物的Cap-185步骤d。粗混合物不经纯化或分离即用于下一步骤中。LC-MS:[M+H]+C29H28NO3的分析计算值为438.21；实测值为438.4。
Cap-185步骤e
Figure BDA00001954398801232
向Cap-185步骤d的外消旋混合物于30mL THF中的溶液中添加HCl(20mL)(2N水溶液)。在室温下搅拌所得混合物2小时。在根据TLC判断反应已完成之后，分离两层。用EtOAc洗涤水层，用饱和NaHCO3水溶液中和，随后用EtOAc(3×)萃取。经MgSO4干燥合并的有机层且浓缩，得到Cap-185步骤e。LC-MS:[M+H]+C16H20NO3的分析计算值为274.14；实测值为274.12。
Cap-185步骤f
Figure BDA00001954398801233
在室温下搅拌粗Cap-185步骤e、DiPEA(1.24mL，7.1mmol)及氯甲酸甲酯(0.55mL，7.1mmol)于5mL CH2Cl2中的溶液1小时。随后用CH2Cl2稀释混合物且用水洗涤。用Na2SO4干燥有机层且浓缩。将粗产物通过快速色谱(硅胶，0-40%EtOAc/Hex)纯化，得到700mg外消旋混合物。随后通过手性HPLC(
Figure BDA00001954398801234
AD-H柱，20×250mm，5μm)用88%CO2-12%EtOH以70mL/min洗脱来分离混合物，得到呈白色固体状的Cap-1步骤f的对映异构体-1(240mg)及对映异构体-2(310mg)。对映异构体-1：LC-MS:[M+H]+C18H22NO5的分析计算值为332.15；实测值为332.3。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 7.30-7.40(5H,m),6.03-6.16(2H,m),5.09-5.26(3H,m),4.65-4.74(2H,m),4.33(1H,dd,J＝9.16,4.88Hz),3.67(3H,s),2.27-2.38(1H,m),1.61-1.69(1H,m),1.45-1.56(1H,m),1.34(1H,dd,J＝13.43,5.19Hz),1.07(1H,dd,J＝13.12,5.19Hz)。对映异构体-2：LC-MS:[M+H]+C18H22NO5的分析计算值为332.15；实测值为332.06。
Cap-185(对映异构体-1及对映异构体-2)
在氮气氛围下，向含有Cap-185步骤f(对映异构体-2)(300mg，0.905mmol)于10mL MeOH中的溶液的氢化瓶中添加Pd/C(15mg，0.141mmol)。在帕尔振荡器上在40psi下氢化混合物3小时。随后过滤混合物，且浓缩滤液，得到呈白色固体状的Cap-185(对映异构体-2)(200mg)。LC-MS:[M+H]+C11H18NO5的分析计算值为244.12；实测值为244.2。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 5.33(1H,br.s.),4.46(2H,d),4.28(1H,br.s.),3.68(3H,s),2.35(1H,br.s.),1.91-2.03(2H,m),1.56-1.80(4H,m),1.36-1.55(2H,m)。[注意：Cap-185(对映异构体-1)可以类似方式获得。]
Cap-186
Figure BDA00001954398801241
向酯Cap-185步骤f(对映异构体-2)(150mg，0.453mmol)于4mL MeOH中的溶液中添加NaOH(4mL 1N水溶液，4.00mmol)。在室温下搅拌所得混合物3小时。随后在真空下移除甲醇，且用1N HCl溶液中和残余物，且用EtOAc(3×)萃取。经MgSO4干燥合并的有机层且浓缩，得到受一些苯甲醇污染的Cap-186(黏性白色固体；115mg)。LC-MS:[M+H]+C11H16NO5的分析计算值为242.10；实测值为242.1。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 6.10-6.19(2H,m),5.36(1H,d,J＝8.85Hz),4.75-4.84(2H,m),4.28(1H,dd,J＝8.55,4.58Hz),3.68(3H,s),2.33-2.45(1H,m),1.60-1.72(2H,m),1.30-1.48(2H,m)。
Cap-187
Figure BDA00001954398801251
Cap-187步骤a
Figure BDA00001954398801252
向Cap-178步骤e(2.2g，18.94mmol)、PPh3(24.84g，95mmol)及4-硝基苯甲酸(14.24g，85mmol)于30mL苯中的溶液中逐滴添加DEAD(42.9mL，95mmol)。在室温下搅拌所得淡橙色溶液过夜。随后在真空下移除溶剂，且将残余物通过快速色谱(硅胶，0-15%EtOAc/Hex)纯化，得到呈白色固体状的Cap-187步骤a(2.3g)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 8.27-8.34(2H,m),8.20-8.26(2H,m),5.45(1H,t,J＝2.90Hz),3.83-3.96(3H,m),1.90-2.03(2H,m),1.80-1.88(1H,m),1.61-1.70(1H,m),1.21(3H,d,J＝6.10Hz)。
Cap-187步骤b
向Cap-187步骤a(2.3g，8.67mmol)于10mL MeOH中的溶液中添加甲醇钠(2.372mL，8.67mmol)(25%甲醇溶液)。在室温下搅拌所得混合物3小时。添加水，且用EtOAc(5×)萃取混合物。用MgSO4干燥合并的有机层且浓缩。将粗产物通过快速色谱(硅胶，0-15%EtOAc/Hex，随后15-50%EtOAc/Hex)纯化，得到呈澄清油状的Cap-187步骤b(0.85g)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 4.19-4.23(1H,m),3.82-3.91(2H,m),3.73-3.79(1H,m),1.79-1.88(1H,m),1.62-1.68(1H,m),1.46-1.58(2H,m),1.14(3H,d,J＝6.10Hz)。
Cap-187
根据关于Cap-178描述的操作，自Cap-187步骤b合成Cap-187的单独对映异构体。LC-MS:[M+H]+C10H18NO5的分析计算值为232.12；实测值为232.1。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 5.26(1H,d,J＝7.78Hz),4.32-4.43(1H,m),4.07(1H,dd,J＝11.54,3.51Hz),3.72(3H,s),3.39-3.50(2H,m),2.08-2.23(1H,m),1.54-1.68(1H,m),1.38-1.52(1H,m),1.11-1.32(5H,m)。
Cap-188(四种立体异构体)
Figure BDA00001954398801261
Cap-188步骤a
向2,2-二甲基二氢-2H-吡喃-4(3H)-酮(2g，15.60mmol)于50mL MeOH中的溶液中缓慢添加硼氢化钠(0.649g，17.16mmol)。在室温下搅拌所得混合物3小时。随后向混合物中添加1N HCl水溶液直至其变至酸性pH值范围内，随后用EtOAc(3×)萃取。经MgSO4干燥合并的有机层且浓缩，得到呈澄清油状的Cap-188步骤a(1.9g)。该产物不经纯化即用于下一步骤中。1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm 3.91-4.02(1H,m),3.79-3.86(1H,m),3.63(1H,td,J＝12.05,2.51Hz),1.82-1.93(2H,m),1.40-1.53(1H,m),1.29-1.38(1H,m),1.27(3H,s),1.20(3H,s)。
Cap-188.1及Cap-188.2步骤b
Figure BDA00001954398801263
将对甲苯磺酰氯(5.56g，29.2mmol)添加至Cap-188步骤a(1.9g，14.59mmol)及吡啶(4.72mL，58.4mmol)于100mL CH2Cl2中的溶液中。在室温下搅拌所得混合物3天。向反应混合物中添加10mL水，且再在室温下搅拌混合物1小时。分离两层，且用水及1N盐酸水溶液洗涤有机相。经MgSO4干燥有机相且浓缩，得到呈淡黄色固体状的两个对映异构体的混合物。随后通过手性HPLC(
Figure BDA00001954398801264
AD柱，21×250mm，10μm)用92%0.1%二乙胺/庚烷-8%EtOH以15mL/min洗脱来分离混合物，得到Cap-188.1步骤b(1.0g)及Cap-188.2步骤b(1.0g)。未指定两个对映异构体的绝对立体化学。Cap-188.1步骤b：LC-MS:[2M+Na]+C28H40NaO8S2的分析计算值为591.21；实测值为591.3。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 7.79(2H,d,J＝8.24Hz),7.34(2H,d,J＝8.24Hz),4.72-4.81(1H,m),3.78(1H,dt,J＝12.44,4.16Hz),3.53-3.61(1H,m),2.45(3H,s),1.75-1.86(2H,m),1.61-1.71(1H,m),1.52-1.60(1H,m),1.22(3H,s),1.14(3H,s)。Cap-188.2步骤b：LC-MS:[2M+Na]+C28H40NaO8S2的分析计算值为591.21；实测值为591.3；
Cap-188
可根据关于Cap-178的制备描述的操作，自Cap-188.1步骤b及Cap-188.2步骤b合成Cap-188的四个对映异构体。Cap-188(立体异构体-1)：LC-MS:[M+Na]+C11H19NNaO5的分析计算值为268.12；实测值为268.23。1HNMR(500MHz,CDCl3)δppm 5.32(1H,d,J＝8.55Hz),4.26-4.35(1H,m),3.57-3.82(5H,m),2.11-2.34(1H,m),1.25-1.58(4H,m),1.21(6H,d,J＝6.10Hz)。Cap-188(立体异构体-2)：LC-MS:[M+H]+C11H20NO5的分析计算值为246.13；实测值为246.1。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 5.25(1H,d,J＝8.55Hz),4.33(1H,dd,J＝8.39,5.04Hz),3.80(1H,dd,J＝11.90,3.97Hz),3.62-3.76(4H,m),2.20-2.32(1H,m),1.52-1.63(1H,m),1.27-1.49(3H,m),1.22(6H,d,J＝14.04Hz)。
Cap-189
Figure BDA00001954398801271
Cap-189步骤a
Figure BDA00001954398801272
向苯基溴化镁(113mL，340mmol)(3M于乙醚中)于100mL乙醚中的溶液中逐滴添加外-2,3-环氧基降冰片烷(25g，227mmol)于50mL乙醚中的溶液。最初放热之后，加热混合物至回流过夜。随后冷却反应混合物至室温，且小心地用水(约10mL)淬灭。用乙醚稀释混合物，且用3N HCl水溶液(约160mL)洗涤。用乙醚(2×)萃取水层，且经MgSO4干燥合并的有机层且浓缩。将粗产物通过快速色谱(硅胶，0-18%EtOAc/Hex)纯化，得到Cap-189步骤a(11g)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 6.03-6.11(2H,m),3.76(1H,d,J＝11.29Hz),2.72-2.81(2H,m),1.98(1H,d,J＝11.29Hz),1.67-1.76(2H,m),0.90-0.97(2H,m)。
Cap-189步骤b
在-78℃下，向草酰氯(59.9mL，120mmol)于200mL CH2Cl2中的溶液中添加DMSO(17.01mL，240mmol)于100mL CH2Cl2中的溶液。搅拌混合物10分钟，且依次添加Cap-189步骤a(11g，100mmol)于150mL CH2Cl2中的溶液及Et3N(72.4mL，519mmol)于30mL CH2Cl2中的溶液。在-78℃下搅拌混合物30分钟，随后温热至室温。添加水(150mL)且在室温下搅拌混合物30分钟。随后分离两层，且用CH2Cl2(2×)萃取水层。合并有机层，经MgSO4干燥且浓缩。将粗产物通过快速色谱(硅胶，0-5%EtOAc/Hex)纯化，得到呈淡黄色油状的Cap-189步骤b(5.3g)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm6.50-6.55(2H,m),2.78-2.84(2H,m),1.92-1.99(2H,m),1.17-1.23(2H,m)。
Cap-189步骤c
Figure BDA00001954398801282
将Cap-189步骤b(5.3g，49.0mmol)、对甲苯磺酸一水合物(1.492g，7.84mmol)及乙二醇(4.10mL，73.5mmol)于100mL苯中的混合物回流4小时，随后在室温下搅拌过夜。将反应混合物分配在Et2O与饱和NaHCO3水溶液之间，且分离两层。用盐水洗涤有机层，经MgSO4干燥且浓缩。将粗产物通过快速色谱(硅胶，0-6%EtOAc/Hex)纯化，得到呈澄清油状的Cap-189步骤c(5.2g)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 6.20(2H,t,J＝2.13Hz),3.90-3.97(2H,m),3.81-3.89(2H,m),2.54(2H,m),1.89-1.99(2H,m),0.95-1.03(2H,m)。
Cap-189步骤d
Figure BDA00001954398801283
冷却Cap-189步骤c(5.2g，34.2mmol)于60mL MeOH及50mL CH2Cl2中的溶液至-78℃，且用臭氧气体处理直至明显的淡蓝色。随后用N2向反应混合物鼓泡以移除过量臭氧气体(蓝色消失)且向反应混合物中添加硼氢化钠(1.939g，51.3mmol)。随后将反应混合物温热至0℃。向混合物中添加丙酮以淬灭过量硼氢化钠。浓缩混合物，且将残余物通过快速色谱(硅胶，100%EtOAc)纯化，得到呈澄清油状的Cap-189步骤d(5.0g)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 3.99-4.09(4H,m),3.68(4H,m),2.17-2.29(2H,m),1.92-2.10(2H,m),1.77-1.88(2H,m),1.57-1.70(2H,m)。
Cap-189步骤e
Figure BDA00001954398801291
向Cap-189步骤d(1g，5.31mmol)于20mL CH2Cl2中的溶液中添加氧化银(3.8g)、p-Ts-Cl(1.215g，6.38mmol)及KI(0.176g，1.063mmol)。在室温下搅拌所得溶液3天。随后过滤混合物且浓缩滤液。将粗产物通过快速色谱(硅胶，60%EtOAc/Hex)纯化，得到呈澄清油状的Cap-189步骤e(0.79g)。LC-MS:[M+Na]+C16H22NaO6S的分析计算值为365.10；实测值为365.22。1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.80(2H,d,J＝8.28Hz),7.36(2H,d,J＝8.03Hz),4.11-4.17(1H,m),3.85-4.06(5H,m),3.64-3.71(1H,m),3.55-3.63(1H,m),2.47(3H,s),2.32-2.43(1H,m),2.15-2.27(1H,m),1.70-1.89(2H,m),1.52-1.66(1H,m),1.35-1.47(1H,m)。
Cap-189步骤f
Figure BDA00001954398801292
向Cap-189步骤e(2.2g，6.43mmol)于40mL MeOH中的溶液中添加碳酸钾(1.776g，12.85mmol)。在室温下搅拌所得混合物过夜。随后用水及EtOAc稀释混合物。分离两层。用EtOAc(2×)萃取水层。用盐水洗涤合并的有机层，经MgSO4干燥且浓缩。将粗产物通过快速色谱(硅胶，0-15%EtOAc/Hex)纯化，得到呈澄清油状的Cap-189步骤f(0.89g，5.23mmol，81%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 3.89-4.02(6H,m),3.58(2H,dd,J＝10.79,2.51Hz),1.69-1.89(6H,m)。
Cap-189步骤g
Figure BDA00001954398801293
向Cap-189步骤f(890mg，5.23mmol)于15mL THF中的溶液中添加HCl(15mL，45.0mmol)(3M水溶液)。在室温下搅拌所得混合物过夜。随后用乙醚稀释混合物，且分离两层。用乙醚(2×)萃取水相，且经MgSO4干燥合并的有机层且浓缩，得到Cap-189步骤g(0.95g，含有一些残余溶剂)。该产物不经纯化即用于下一步骤中。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 3.95-4.00(2H,m),3.85(2H,d,J＝10.68Hz),2.21-2.28(2H,m),1.99-2.04(2H,m),1.90-1.96(2H,m)。
Cap-189步骤h(对映异构体-1及对映异构体-2)
在-20℃下，向(+/-)-苯甲氧基羰基-α-膦酰基甘氨酸三甲酯(1733mg，5.23mmol)于6mL THF中的溶液中添加1,1,3,3-四甲基胍(0.723mL，5.75mmol)。在-20℃下搅拌所得淡黄色混合物1小时，且添加Cap-189步骤g(660mg，5.23mmol)于3mL THF中的溶液，且随后在室温下搅拌混合物3天。随后用EtOAc稀释反应混合物，用0.1N HCl水溶液洗涤。用EtOAc(2×)萃取水层，且经MgSO4干燥合并的有机层且浓缩。将粗产物通过快速色谱(硅胶，0-4%EtOAc/CH2Cl2)纯化，得到960mg外消旋混合物。通过手性HPLC(
Figure BDA00001954398801302
AD柱，21×250mm，10um)用90%0.1%二乙胺/庚烷-10%EtOH以15mL/min洗脱来分离混合物，得到呈白色固体状的Cap-189步骤h(对映异构体-1；300mg)及Cap-189步骤h(对映异构体-2；310mg)。Cap-189步骤h(对映异构体-1)：LC-MS:[M+H]+C18H22NO5的分析计算值为332.15；实测值为332.2。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 7.29-7.41(5H,m),6.00(1H,br.s.),5.13(2H,s),3.63-3.87(8H,m),2.84(1H,br.s.),1.84-2.02(2H,m),1.63-1.84(2H,m)。Cap-189步骤h(对映异构体-2)：LC-MS:[M+H]+C18H22NO5的分析计算值为332.15；实测值为332.2。
Cap-189步骤i
Figure BDA00001954398801303
在500mL氢化瓶中，将N2鼓泡通过Cap-189步骤h(对映异构体-2；290mg，0.875mmol)于10mL MeOH中的溶液30分钟。向该溶液中添加(S,S)-Me-BPE-Rh(9.74mg，0.018mmol)，且随后在60psi下使混合物氢化6天。浓缩混合物，且手性分析HPLC(
Figure BDA00001954398801311
OJ柱)指示，存在少量剩余起始物质及一种主要产物。随后通过手性HPLC(
Figure BDA00001954398801312
OJ柱，21×250mm，10um)用70%0.1%二乙胺/庚烷-30%EtOH以15mL/min洗脱来分离残余物，得到呈澄清油状的Cap-189步骤i(150mg)。LC-MS:[M+H]+C18H24NO5的分析计算值为334.17；实测值为334.39。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 7.28-7.41(5H,m),5.12-5.18(1H,m),5.09(2H,s),4.05(1H,t,J＝10.07Hz),3.75(3H,s),3.60-3.72(2H,m),3.41-3.50(2H,m),2.10(1H,br.s.),1.72-1.99(6H,m)。
Cap-189步骤j
Figure BDA00001954398801313
在氮气氛围下，向氢化瓶中的Cap-189步骤i(150mg，0.450mmol)于10mL MeOH中的溶液中添加二碳酸二甲酯(0.072mL，0.675mmol)及10%Pd/C(23.94mg，0.022mmol)。随后在帕尔振荡器上在45psi下使混合物氢化过夜。过滤混合物，且浓缩滤液，得到呈澄清油状的Cap-189步骤j(110mg)。LC-MS:[M+H]+C12H20NO5的分析计算值为258.13；实测值为258.19。1HNMR(500MHz,CDCl3)δppm 5.08(1H,d,J＝9.16Hz),4.03(1H,t,J＝10.07Hz),3.75(3H,s),3.60-3.72(5H,m),3.46(2H,t,J＝10.38Hz),2.11(1H,br.s.),1.72-1.99(6H,m)。
Cap-189
向Cap-189步骤j(110mg，0.428mmol)于2mL THF及1mL水中的混合物中添加LiOH(0.641mL，1.283mmol)(2N水溶液)。在室温下搅拌所得混合物过夜。用1N HCl水溶液中和混合物，且用EtOAc(3×)萃取。经MgSO4干燥合并的有机层且浓缩，得到呈白色固体状的Cap-189(100mg)。LC-MS:[M+Na]+C11H17NNaO5的分析计算值为266.10；实测值为266.21。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 5.10(1H,d,J＝9.16Hz),4.02(1H,t,J＝10.07Hz),3.62-3.78(5H,m),3.49(2H,d,J＝10.68Hz),2.07-2.22(2H,m),1.72-1.98(6H,m)。
Cap-190(非对映异构混合物)
Figure BDA00001954398801321
Cap-190步骤a
Figure BDA00001954398801322
在0℃下，向环庚-3-烯醇(2.93g，34.8mmol)及咪唑(5.22g，77mmol)于30mL DMF中的混合物中添加叔丁基二甲基氯硅烷(6.30g，41.8mmol)。在室温下搅拌所得无色混合物过夜。随后将己烷及水添加至混合物中，且分离两层。用EtOAc(2×)萃取水层，且用盐水洗涤合并的有机层，经MgSO4干燥且浓缩。将粗产物通过快速色谱(硅胶，2%EtOAc/Hex)纯化，得到呈澄清油状的Cap-190步骤a(6.3g)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 5.65(2H,s),4.49-4.56(1H,m),2.56(2H,dd,J＝15.26,7.02Hz),2.27(2H,dd,J＝15.26,3.36Hz),0.88(9H,s),0.06(6H,s)。
Cap-190步骤b
Figure BDA00001954398801323
在0℃下，分5份向Cap-190步骤a(2.3g，11.59mmol)于40mL CH2Cl2中的溶液中添加m-CPBA(5.60g，16.23mmol)。在室温下搅拌反应混合物过夜。随后将己烷及水添加至混合物中，且分离两层。用50mL 10%NaHSO3水溶液及盐水洗涤有机层，经MgSO4干燥且浓缩。将粗产物通过快速色谱(硅胶，3%-6%EtOAc/Hex)纯化，得到呈澄清油状的Cap-190步骤b(1.42g)及其反式非对映异构体(0.53g)。Cap-190步骤b(顺式):1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 4.39-4.47(1H,m),3.47(2H,s),2.01-2.10(2H,m),1.93-2.00(2H,m),0.88(9H,s),0.04(6H,s)。Cap-190步骤b(反式):1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 4.04-4.14(1H,m),3.47(2H,s),2.41(2H,dd,J＝14.05,7.28Hz),1.61(2H,dd,J＝14.18,6.90Hz),0.87(9H,s),0.03(6H,s)。
Cap-190步骤c
Figure BDA00001954398801324
在0℃下，向(S)-1,2'-亚甲基二吡咯烷(0.831g，5.39mmol)于15mL苯中的溶液中逐滴添加正丁基锂(4.90mL，4.90mmol)(1M于己烷中)。溶液变成亮黄色。在0℃下搅拌混合物30分钟，且随后添加Cap-190步骤b(顺式异构体；0.7g，3.27mmol)于10mL苯中的溶液，且在0℃下搅拌所得混合物3小时。向混合物中添加EtOAc及饱和NH4Cl水溶液，且分离两层。用水及盐水洗涤有机层，经MgSO4干燥且浓缩。将粗产物通过快速色谱(硅胶，15%EtOAc/Hex)纯化，得到呈淡黄色油状的Cap-190步骤c(400mg)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 5.84-5.98(2H,m),4.53-4.69(2H,m),2.63-2.73(1H,m),1.51(1H,dt,J＝13.73,4.43Hz),0.89(9H,s),0.08(6H,s)。
Cap-190步骤d
Figure BDA00001954398801331
在0℃下，向Cap-190步骤c(400mg，1.866mmol)、MeI(1.866mL，3.73mmol)(2M/叔丁基甲基醚)于5mL THF中的溶液中添加NaH(112mg，2.80mmol)(60%于矿物油中)。将所得混合物温热至室温且在室温下搅拌过夜。随后用水淬灭反应，且用EtOAc(3×)萃取。用盐水洗涤合并的有机层，经MgSO4干燥且浓缩。将粗产物通过快速色谱(硅胶，5%EtOAc/Hex)纯化，得到呈淡黄色油状的Cap-190步骤d(370mg)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm5.92-5.96(1H,m),5.87-5.91(1H,m),4.64-4.69(1H,m),4.23-4.28(1H,m),3.32(3H,s),2.62-2.69(1H,m),1.54(1H,dt,J＝13.12,5.49Hz),0.89(9H,s),0.07(5H,d,J＝1.83Hz)。
Cap-190步骤e
Figure BDA00001954398801332
向氢化瓶中的Cap-190步骤d(400mg，1.751mmol)于10mL EtOAc中的溶液中添加氧化铂(IV)(50mg，0.220mmol)。在帕尔振荡器上在50psi下使所得混合物氢化2小时。随后经
Figure BDA00001954398801333
过滤混合物，且浓缩滤液，得到呈澄清油状的Cap-190步骤e(400mg)。LC-MS:[M+H]+C12H27O2Si的分析计算值为231.18；实测值为231.3。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 4.10-4.17(1H,m),3.65-3.74(1H,m),3.27(3H,s),1.43-1.80(6H,m),0.90(9H,s),0.09(6H,s)。
Cap-190步骤f
Figure BDA00001954398801341
向Cap-190步骤e(400mg，1.736mmol)于5mL THF中的溶液中添加TBAF(3.65mL，3.65mmol)(1N于THF中)。在数分钟之后，混合物变成棕色，且在室温下搅拌过夜。在真空下移除挥发性组分，且将残余物通过快速色谱(硅胶，0-25%EtOAc/Hex)纯化，得到呈淡黄色油状的Cap-190步骤f(105mg)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 4.25(1H,br.s.),3.84-3.92(1H,m),3.29(3H,s),1.67-2.02(6H,m)。
Cap-190
随后根据关于Cap-182描述的操作，自Cap-190步骤f合成Cap-190。LC-MS:[M+Na]+C10H17NNaO5的分析计算值为254.10；实测值为254.3。1HNMR(500MHz,CDCl3)δppm 5.25(1H,d,J＝8.55Hz),4.27-4.41(1H,m),3.81-3.90(1H,m),3.69(3H,s),3.26(3H,s),2.46-2.58(1H,m),1.76-1.99(3H,m),1.64-1.73(1H,m),1.40-1.58(1H,m),1.22-1.38(1H,m)。
Cap-191(对映异构体-1)
Figure BDA00001954398801342
Cap-191步骤a
在-78℃下在氮气下，向二异丙基胺(3ml，21.05mmol)于THF(3mL)中的溶液中添加正丁基锂(2.5M于己烷中；8.5ml，21.25mmol)。在-78℃下搅拌反应混合物10分钟，随后升至0℃后持续25分钟。再冷却反应混合物至-78℃，添加四氢-2H-吡喃-4-甲酸甲酯(3g，20.81mmol)于THF(3mL)中的溶液。在-78℃下搅拌反应混合物15分钟，随后升至0℃后持续30分钟。冷却反应混合物至-78℃，添加甲基碘(1.301ml，20.81mmol)。添加之后，移除冷却浴，且将反应混合物缓慢温热至约25℃，且搅拌22小时。添加乙酸乙酯及HCl水溶液(0.1N)，且分离有机层，且用盐水洗涤且干燥(MgSO4)，过滤，且真空浓缩。将残余物负载于用10%乙酸乙酯/己烷洗脱的Thomson硅胶柱筒上，得到淡黄色油状物(2.83g)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm3.73-3.66(m,2H),3.66(s,3H),3.40-3.30(m,2H),1.95-1.93(dm,1H),1.92-1.90(dm,1H),1.43(ddd,J=13.74,9.72,3.89,2H),1.18(s,3H)。
Cap-191步骤b
在-78℃下在氮气下，向Cap-191步骤a(3g，18.96mmol)于甲苯(190mL)中的溶液中逐滴添加二异丁基氢化铝(1.5M于甲苯中；26.5ml，39.8mmol)。在-78℃下继续搅拌反应混合物1.5小时，且移除冷却浴且搅拌18小时。用MeOH(20mL)淬灭反应。添加HCl(1M，150mL)，且用EtOAc(4×40mL)萃取混合物。用盐水洗涤合并的有机相，干燥(MgSO4)，过滤且真空浓缩。将残余物通过快速色谱(硅胶，40%乙酸乙酯/己烷)纯化，得到无色油状物(1.36g)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 3.77(dt,J=11.73,4.55,2H),3.69-3.60(m,2H),3.42(s,2H),1.71-1.40(bs,1H)1.59(ddd,J=13.74,9.72,4.39,2H),1.35-1.31(m,1H),1.31-1.27(m,1H),1.06(s,3H)。
Cap-191步骤c
Figure BDA00001954398801352
在-78℃下在氮气下，向DMSO(5.9ml,83mmol)于CH2Cl2(85mL)中的溶液中添加草酰氯(3.8ml，43.4mmol)且搅拌40分钟。随后添加Cap-191步骤b(4.25g，32.6mmol)于CH2Cl2(42.5mL)中的溶液。在-78℃下在氮气下，继续搅拌反应混合物2小时。用冷20%K2HPO4(水溶液)(10mL)及水淬灭反应混合物。在约25℃下搅拌混合物15分钟，用乙醚(50mL)稀释且分离各层。用乙醚(2×50mL)萃取水层。用盐水洗涤合并的有机层，干燥(MgSO4)，过滤且真空浓缩。将残余物吸收于CH2Cl2(4mL)中，且用快速色谱(硅胶，用CH2Cl2洗脱)纯化，得到无色油状物(2.1g)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm9.49(s.1H),3.80(dt,J=11.98,4.67,2H),3.53(ddd,J=12.05,9.41,2.89,2H),1.98(ddd,J=4.71,3.20,1.38,1H),1.94(ddd,J=4.71,3.20,1.38,1H),1.53(ddd,J=13.87,9.60,4.14,2H),1.12(s,3H)。
Cap-191步骤d
Figure BDA00001954398801361
在氮气下在约25℃下，向Cap 191c(2.5g，19.51mmol)于CHCl3(20mL)中的溶液中添加(R)-2-氨基-2-苯基乙醇(2.94g，21.46mmol)，且搅拌5小时。冷却反应混合物至0℃，逐滴添加氰化三甲基硅烷(3.8ml，30.4mmol)。移除冷却浴，且在约25℃下在氮气下，搅拌反应混合物15.5小时。用3N HCl(20mL)及水(20mL)处理反应混合物，且用CHCl3(3×50mL)萃取产物。干燥(NaSO4)合并的有机层，过滤且真空浓缩。将残余物通过快速色谱(硅胶，40%乙酸乙酯/己烷)纯化，得到两种非对映异构体：呈无色油状的Cap-191步骤d1(非对映异构体1)，其在静置后固化成白色固体(3g)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.42-7.26(m,5H),5.21(t,J=5.77,1H),3.87(dd,J=8.53,4.52,1H),3.61-3.53(m,1H),3.53-3.37(m,5H),3.10(d,J=13.05,1H),2.65(d,J=13.05,1H),1.64-1.55(m,1H),1.55-1.46(m,1H),1.46-1.39(m,1H),1.31-1.23(m,1H),1.11(s,3H)。LC-MS:[M+H]+C16H23N2O2的分析计算值为275.18；实测值为275.20。呈淡黄色油状的Cap-191步骤d2(非对映异构体2)(0.5g)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.44-7.21(m,5H),4.82(t,J=5.40,1H),3.82-3.73(m,1H),3.73-3.61(m,3H),3.61-3.37(m,5H),2.71(dd,J=9.29,4.77,1H),1.72-1.55(m,2H),1.48-1.37(m,1H),1.35-1.25(m,1H),1.10(s,3H)。LC-MS:[M+H]+C16H23N2O2的分析计算值为275.18；实测值为275.20。
Cap-191步骤e
Figure BDA00001954398801362
在0℃下在氮气下，向Cap-191步骤d2(非对映异构体2)(0.4472g，1.630mmol)于CH2Cl2(11mL)及MeOH(5.50mL)中的溶液中添加四乙酸铅(1.445g，3.26mmol)。搅拌反应混合物1.5小时，移除冷却浴且继续搅拌20小时。用磷酸盐缓冲液(pH=7；6mL)处理反应混合物且搅拌45分钟。以
Figure BDA00001954398801363
过滤反应混合物，用CH2Cl2洗涤，且分离各层。用CH2Cl2(3×25mL)萃取水层，且用盐水洗涤合并的有机层，干燥(MgSO4)，过滤且真空浓缩。将残余物通过快速色谱(硅胶，15%乙酸乙酯/己烷)纯化，得到无色油状的亚胺中间体(181.2mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.55(d,J=1.00,1H),7.89-7.81(m,2H),7.61-7.46(m,3H),4.80(d,J=1.00,1H),3.74(tt,J=11.80,4.02,2H),3.62-3.46(m,2H),1.79-1.62(m,2H),1.46-1.30(m,2H),1.15(s,3H)。
将亚胺中间体吸收于6N HCl(10mL)中且在90℃下加热10天。自热源除反应混合物，冷却至室温，且用乙酸乙酯(3×25mL)萃取。真空浓缩水层，得到灰白色固体。将固体吸收于MeOH中，且负载于预处理MCX(6g)柱筒，用MeOH洗涤，接着用2N NH3/MeOH溶液洗脱且真空浓缩，得到灰白色固体(79.8mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 14.33-13.51(bs,1H),8.30(bs,3H),3.82-3.75(m,1H),3.70(dt,J=11.80,4.02,2H),3.58-3.43(m,2H),1.76-1.60(m,2H),1.47-1.36(m,1H),1.36-1.27(m,1H),1.08(s,3H)。LC-MS:[M+H]+C8H16NO3的分析计算值为174.11；实测值为174.19。
Cap-191(对映异构体-1)
在0℃下，向Cap-191步骤e(0.0669g，0.386mmol)及碳酸钠(0.020g，0.193mmol)于氢氧化钠(1M水溶液，0.4ml，0.40mmol)中的溶液中逐滴添加氯甲酸甲酯(0.035ml，0.453mmol)。自冷却浴移除反应混合物，且在约25℃下搅拌3小时。用乙醚(3×20mL)洗涤反应混合物。用12N HCl酸化水层(pH值为约1-2)，且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取。干燥(MgSO4)合并的有机层，过滤，且真空浓缩，得到呈无色膜状的Cap-191(66.8mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 13.10-12.37(bs,1H),7.37(d,J=9.04,1H),4.02(d,J=9.29,1H),3.72-3.57(m,2H),3.56(s,3H),3.54-3.44(m,2H),1.65(ddd,J=13.61,9.72,4.27,1H),1.53(ddd,J=13.68,9.66,4.27,1H),1.41-1.31(m,1H),1.31-1.22(m,1H),1.00(s,3H)。LC-MS:[M+Na]+C10H17NO5Na的分析计算值为254.10；实测值为254.11。
Cap-192(对映异构体-2)
Figure BDA00001954398801371
根据对于对映异构体Cap-191的制备描述的操作，自Cap-191步骤d1制备Cap-192(对映异构体-2)。
Cap-193
Cap-193步骤a
Figure BDA00001954398801382
向2-(苯甲氧基羰基氨基)-2-(二甲氧基磷酰基)乙酸甲酯(1.45g，4.2mmol)于DCM中的溶液中添加DBU(0.70ml，4.7mmol)。搅拌反应混合物10分钟，接着添加1,3-二甲氧基丙-2-酮(0.5g，4.2mmol)于DCM中的溶液。在室温下搅拌反应混合物18小时。将反应混合物装入80g硅胶柱筒中，用含0-70%EtOAc的己烷的18分钟梯度洗脱，得到呈稠密油状物的Cap-193步骤a(0.8g)。1H NMR(400MHz,MeOD)ppm 7.23-7.43(5H,m),4.99-5.18(2H,m),4.16(2H,s),4.06(2H,s),3.66-3.78(3H,s),3.26(3H,s),3.23(3H,s)。LC-MS:[M+Na]+C16H21NNaO6的分析计算值为346.14；实测值为346.12。
Cap-193步骤b
Figure BDA00001954398801383
在55psi H2下搅拌酯Cap-193步骤a(0.5g)及四氟硼酸(+)-1,2-双((2S,5S)-2,5-二乙基磷杂环戊基)苯(环辛二烯)铑(I)(0.1g)于MeOH中的反应混合物18小时。浓缩反应混合物至干燥。将残余物装入25g硅胶柱筒中，且用含0-80%EtOAc的己烷的18分钟梯度洗脱，得到呈澄清油状的Cap-193步骤b(0.49g)。LC-MS:[M+Na]+C16H23NNaO6的分析计算值为348.15；实测值为348.19。
Cap 193步骤c
Figure BDA00001954398801391
在H2下在室温下，搅拌Cap 193步骤b(0.16g)、二碳酸二甲酯(0.13g)及10%Pd/C(0.026g)于EtOAc中的反应混合物2小时。过滤反应混合物且浓缩，得到氨基甲酸甲酯Cap 193步骤c。LC-MS:[M+Na]+C10H19NNaO6的分析计算值为272.12；实测值为272.07。
Cap 193
向酯Cap 193步骤c于THF(1mL)及MeOH(0.25mL)中的溶液中添加1N NaOH(1mL)。在室温下搅拌反应混合物2小时。浓缩反应混合物，且用EtOAc及1N HCl稀释。用EtOAc萃取水相，且用饱和NaCl洗涤合并的有机相，经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到Cap-193(0.082g)。1H NMR(400MHz,CDCl3)5.99(1H,d,J＝8.56Hz),4.57(1H,dd,J＝8.56,3.27Hz),3.67(3H,s),3.49(2H,d,J＝4.28Hz),3.45-3.44(2H,m),3.26-3.35(6H,m)。LC-MS:[M+Na]+C9H17NNaO6的分析计算值为258.11；实测值为258.13。
Cap-194
Figure BDA00001954398801392
将哌啶(1.0mL，10mmol)添加至(S)-2-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基氨基)-4-甲氧基丁酸(0.355g，1mmol)于DMF(3mL)中的溶液中，且在室温下搅拌混合物3小时。移除挥发物，且将残余物分配在饱和NaHCO3(水溶液)(5mL)与EtOAc(5mL)之间。再用EtOAc及Et2O洗涤水层。依次向水溶液中添加Na2CO3(212mg，2.0mmol)及氯甲酸甲酯(0.16mL，2.0mmol)，且在室温下搅拌反应混合物16小时。用1N HCl(水溶液)酸化反应混合物直至pH<7，随后用EtOAc(2×10mL)萃取。干燥(MgSO4)合并的有机层，过滤且浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱(EtOAc/己烷，梯度为20%至70%)纯化，得到呈黏性无色油状的(S)-4-甲氧基-2-(甲氧基羰基氨基)丁酸(Cap-194)(91.5mg)。LC-MS保留时间=0.61min；m/z 214[M+Na]+。(柱：Phenonenex-Luna 3.0×50mm S10。溶剂A=90%水：10%甲醇：0.1%TFA。溶剂B=10%水：90%甲醇：0.1%TFA。流速=4mL/min。起始%B=0。最终%B=100。梯度时间=3min。波长=220)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm 7.41(br.s.,1H),5.74-6.02(m,1H),4.32-4.56(m,1H),3.70(s,3H),3.54(t,J＝5.0Hz,2H),3.34(s,3H),1.99-2.23(m,2H)。
【实施方式】
实施例部分
用与Waters Micromass ZQ MS系统偶联的Shimadzu LC系统(条件1)或与Waters PDA UV-Vis检测及Waters ZQ MS偶联的Waters Acquity HPLC(条件2)进行低分辨率质量分析。通过采用以下条件得出保留时间(Rt)，且应注意，保留时间在仪器之间可略有变化：
条件1a
柱=Phenomenex-Luna 4.6×30mm S10
起始%B=0
最终%B=100
梯度时间=3min
终止时间=4min
流速=4mL/min
波长=220nm
溶剂A=含0.1%TFA的10%甲醇/90%H2O
溶剂B=含0.1%TFA的90%甲醇/10%H2O
条件1b
柱=Waters Acquity BEH C18；1.7μm；150×2.1mm ID；(35℃)
保持10%B 0-1min
10-50%B 0-25min
50-98%B 25-33min
保持98%B 32-35min
98-10%B 35.0-35.5min
保持10%B 35.5-40min
流速=0.35ml/min
波长=254nm
溶剂A=含0.05%TFA的水
溶剂B=含0.05%TFA的CH3CN
条件1c
柱=Waters Acquity BEH C18；1.7μm；150×2.1mm ID；(35℃)
保持10%B 0-1min
10-60%B 1-4min
60-98%B 4-21min
保持98%B 21-21.5min
98-10%B 21.5-22min
保持10%B 22-25min
流速=0.35ml/min
波长=315nm
溶剂A=含0.05%TFA的水
溶剂B=含0.05%TFA的CH3CN
条件2a
柱=Waters Sunfire C18，4.6×150mm，3.5μm
起始%B=10
最终%B=50
梯度时间=20min
终止时间=25至40min不等
流速=1mL/min
波长=220及254nm
溶剂A=含0.1%TFA的5%CH3CN/95%H2O
溶剂B=含0.1%TFA的95%CH3CN/5%H2O
条件2b
柱=Waters Xbridge phenyl，4.6×150mm，3μm
起始%B=10
最终%B=50
梯度时间=20min
终止时间=25至40min不等
流速=1mL/min
波长=220及254nm
溶剂A=含0.1%TFA的5%CH3CN/95%H2O
溶剂B=含0.1%TFA的95%CH3CN/5%H2O
条件3
柱=Phenomenex Luna C18(2)，3u，150×4.6mm
起始%B=0
最终%B=100
梯度时间=10min
流速=1mL/min
波长=220及256nm
溶剂A=H2O/CH3CN(95:5)+0.05%TFA
溶剂B=H2O/CH3CN(5:95)+0.05%TFA
条件OL1
柱=Phenomenex-Luna 3.0×50mm S10
起始%B=0
最终%B=100
梯度时间=4min
终止时间=5min
流速=4mL/min
波长=220nm
溶剂A=含0.1%TFA的10%甲醇/90%H2O
溶剂B=含0.1%TFA的90%甲醇/10%H2O
条件OL2
柱=Phenomenex-Luna 50×2mm 3u
起始%B=0
最终%B=100
梯度时间=4min
终止时间=5min
流速=0.8mL/min
烘箱温度=40℃
波长=220nm
溶剂A=含0.1%TFA的10%乙腈/90%H2O
溶剂B=含0.1%TFA的90%乙腈/10%H2O
条件OL3
柱=Waters Acquity BEH C18；1.7μm；150×2.1mm ID；(35℃)
保持10%B 0-1min
10-60%B 1-4min
60-98%B 4-21min
保持98%B 21-21.5min
98-10%B 21.5-22min
保持10%B 22-25min
流速=0.35ml/min
波长=315nm
溶剂A=含0.05%TFA的水
溶剂B=含0.05%TFA的CH3CN
条件OL4a
柱=Waters Sunfire C18，4.6×150mm，3.5μm
起始%B=10
最终%B=100
梯度时间=15min
终止时间=18min
流速=1mL/min
波长=220及254nm
溶剂A=含0.1%TFA的5%CH3CN/95%H2O
溶剂B=含0.1%TFA的95%CH3CN/5%H2O
条件OL4b
柱=Waters Xbridge phenyl，4.6×150mm，3μm
起始%B=10
最终%B=50
梯度时间=15min
终止时间=18min
流速=1mL/min
波长=220及254nm
溶剂A=含0.1%TFA的5%CH3CN/95%H2O
溶剂B=含0.1%TFA的95%CH3CN/5%H2O
条件OL4c
柱=Waters Acquity BEH C18；1.7μm；50×2.1mm ID；(35℃)
保持2%B 0-1min
2-98%B 1-1.5min
98%B 1.5-2.2min
流速=0.8ml/min
波长=2nm
溶剂A=含0.05%TFA的水
溶剂B=含0.05%TFA的CH3CN
条件OL5a
柱=Phenomenex-Luna 3.0×50mm S10
起始%B=0
最终%B=100
梯度时间=3min
终止时间=4min
流速=4mL/min
波长=220nm
溶剂A=含0.1%TFA的10%甲醇/90%H2O
溶剂B=含0.1%TFA的90%甲醇/10%H2O
条件OL5b
柱=Phenomenex-Luna 3.0×50mm S10
起始%B=0
最终%B=100
梯度时间=3min
终止时间=4min
流速=4mL/min
波长=220nm
溶剂A=含10mM NH4OAc的5%甲醇/95%H2O
溶剂B=含10mM NH4OAc的95%甲醇/5%H2O
条件-D4
柱=Phenomenex-Luna，3.0×50mm S10
起始%B=0
最终%B=100
梯度时间=3min
终止时间=4min
流速=4mL/min
波长=220nm
溶剂A=含0.1%TFA的10%甲醇/90%H2O
溶剂B=含0.1%TFA的90%甲醇/10%H2O
条件J4
柱=Phenomenex-Luna 4.6×50mm S10
起始%B=0
最终%B=100
梯度时间=4min
终止时间=5min
流速=4mL/min
波长=220nm
溶剂A=含0.1%TFA的10%甲醇/90%H2O
溶剂B=含0.1%TFA的90%甲醇/10%H2O
条件PY1
柱=PHENOMENEX，2.0×50mm，3μm
起始%B=0；最终%B=100
梯度时间=4min；终止时间=5min
流速=0.8mL/min；波长=220nm
溶剂A=含0.1%TFA的10%甲醇/90%水
溶剂B=含0.1%TFA的90%甲醇/10%水
烘箱温度=40℃
实施例1及实施例2
Figure BDA00001954398801461
实施例1步骤a
Figure BDA00001954398801462
根据专利WO 2004052850中关于对映异构体的合成描述的操作制备酰胺1a(.CH3SO3H)。
实施例1步骤b
Figure BDA00001954398801463
向装备有氮气入口、顶置式(overhead)搅拌器、热电偶及加热套的1L圆底烧瓶中装入50g(225mmol)酰胺1a(.CH3SO3H)及250mL异丙醇。随后向所得浆料中装入252mL 23wt％NaOEt的EtOH溶液(2.68M，675mmol，3.0当量)且在50℃下搅拌约1小时。向混合物中装入12.2mL(675mmol，3当量)水且加热至60℃。在60℃下搅拌所得浆料约18小时。冷却浆料至室温且向其中装入250mL水及98.2g(450mmol，2.0当量)一缩二碳酸二叔丁酯。经由真空蒸馏移除乙醇及异丙醇，且冷却水性混合物至0℃。用76mL(456mmol)6M HCl水溶液中和混合物，同时维持内部温度<5℃。用500mL MTBE萃取产物，且用100mL水洗涤富集有机层。经由真空蒸馏浓缩澄清溶液至150mL，且向所得浆料中装入600mL庚烷，同时维持内部温度>45℃。经约30分钟冷却浆料至室温，且在室温下搅拌约2小时。过滤产物，用250mL4:1庚烷:MTBE洗涤且在70℃下真空干燥，得到40.5g(178mmol，79%收率，205nm下99.8AP)的酸1b：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.48(s,1H),4.02-3.80(m,1H),3.45-3.15(m,1H),2.40-2.19(m,1H),2.19-2.0(m,1H),1.70-1.50(m,1H),1.50-1.20(m,9H),0.83-0.60(m,1H),0.33-0.55(m,1H)；13CNMR(100MHz,DMSO-d6)δ173.7,173.2,155.0,154.3,79.4,60.5,60.2,37.6,32.6,31.8,28.4,28.2,15.6,15.2,14.4；HRMS:C11H18NO4(M+H;ESI+)的计算值为228.1236。实测值为228.1234。
酸1b的替代合成
Figure BDA00001954398801471
在500mL反应器中，将酯1b.1(市售，17.5g，1.00当量)溶解于THF(87.5mL)中。冷却所得溶液至-75℃，且向其中装入1.5M DIBAL-H的甲苯溶液(61.3ml，1.5当量)，同时将温度维持在-70℃以下。在-70℃下搅拌所得溶液1小时。经10分钟装入三氟乙酸(2.3mL，0.5当量)，将内部温度维持在-70℃以下。随后经15分钟装入三乙胺(51.3mL，6当量)，将内部温度维持在-70℃以下。经10分钟装入三氟乙酸酐(11.2mL，1.3当量)，将内部温度维持在-70℃以下。随后经90分钟将反应混合物温热至室温，且经由反向添加至20wt%柠檬酸一水合物水溶液(96.6g，1.5当量)中来淬灭，同时将温度维持在15℃以下。在室温下搅拌所得混合物2小时，随后弃去下部水层。用70mL饱和碳酸氢钠水溶液洗涤产物富集的有机层两次。装入固体碳酸氢钠(1.7g，0.1g/g实施例146)，且在真空下，将溶液的溶剂换成纯甲苯，得到呈2L/kg甲苯的溶液形式的1b.2。
将1b.2(自实施例151计算的理论值为16.5g)于33mL甲苯中的溶液精密过滤至250mL反应器中。随后装入三氟甲苯(50mL)及氯碘甲烷(43.2g，4.0当量)，且冷却所得溶液至-20℃。装入1.1M二乙基锌的甲苯溶液(111mL，2.0当量)，同时将内部温度维持在<-8℃。在-15℃至-20℃下，搅拌所得溶液14小时。将反应混合物温热至0℃，随后经由反向添加至20wt%柠檬酸水溶液(135.7g，2.3当量)中来淬灭。用甲苯(82mL)清洗反应器，且将清洗液添加至淬灭溶液中。搅拌所得双相混合物20分钟，随后分离下部水层并弃去。依次用60mL 13wt%NaCl水溶液及60mL饱和NaHCO3洗涤富集的有机物两次。在真空下，将所得溶液的溶剂换成纯IPA，得到呈10L/kg IPA的溶液形式的1b.3。
向250mL反应器中装入1b.3(自酯1b.1计算的理论值为147mL，14.7g)于IPA中的溶液。将溶液温热至35℃，且添加固体氢氧化钠(6.2g，3.0当量)。在35℃下搅拌所得混合物过夜。添加水(44mL)且在真空下移除有机溶剂。添加MTBE(145mL)，且用6N HCl水溶液调节pH值为3.0。分离水层并弃去。用60mL水洗涤产物富集的有机物，随后经由添加等体积MTBE在真空下共沸干燥。浓缩溶液至55mL，且在50℃下搅拌30分钟。经1小时冷却溶液至室温，在此期间，形成浆料。经90分钟装入庚烷(90mL)且使所得浆料老化1小时。将固体收集于中等玻璃料漏斗上，且依次用22.5mL 3:1庚烷:MTBE及22.5mL庚烷洗涤。在50℃真空烘箱中干燥黄褐色固体，得到5.48g(46%)94.9LCAP纯的酸1b。在50℃下，将粗酸1b溶解于55mLMTBE中。浓缩所得溶液至20mL，且经1小时冷却至室温。随后经90分钟添加庚烷(33mL)。将所得固体收集于中等玻璃料漏斗上，用庚烷(15mL)洗涤，且在50℃真空烘箱中干燥，得到4.45g呈黄褐色粉末状的酸1b(98.8AP，98.8%手性纯，自酯1b.1计算的收率为37%)。
实施例1步骤c
Figure BDA00001954398801481
向装备有氮气入口、顶置式搅拌器及热电偶的250mL圆底烧瓶中装入20.0g(88.0mmol，2.11当量)酸1b、16.5g(41.7mmol，1当量)1,1'-(联苯-4,4'-二基)双(2-溴乙酮)、110mL乙腈及55mL四氢呋喃。随后装入二异丙基乙胺(15.1mL，86.6mmol，2.08当量)，同时将内部温度维持在<25℃。在20-25℃下搅拌混合物约5小时，且装入83mL乙酸乙酯及90mL 13wt%NaCl水溶液。分离所得双相混合物，且再用90mL 13wt%NaCl水溶液洗涤富集的有机层。用20mL四氢呋喃稀释富集的有机层，且用NaHCO3及NaCl的水性混合物(45mL 1M NaHCO3水溶液及45mL 26%NaCl水溶液)洗涤。经由真空蒸馏将富集的有机层的溶剂换成甲苯，至目标体积为约160mL。所得酮酯1c的甲苯溶液直接用于下一步骤中。
[注意：关于1,1'-(联苯-4,4'-二基)双(2-溴乙酮)的制备，参见方法专利申请WO 2009/020825]。
实施例1步骤d
向上述酮酯1c的甲苯溶液中装入64.2g(832.9mmol，20.0当量)NH4OAc，且在90-100℃下搅拌约18小时。冷却至60℃且装入255mL 2:1AcOH:水。分离所得双相混合物，且用58mL 1∶1 AcOH:水洗涤甲苯层。合并富集的水层，且经由真空蒸馏移除残余甲苯。用60mL甲醇稀释水溶液且加热至50-60℃。装入106mL(1060mmol，25.4当量)10N NaOH，同时将内部温度维持在<60℃。随后冷却所得浆料至室温。过滤浆料，且依次用100mL水及400mL甲醇洗涤，得到26.1g粗咪唑1d。随后将湿的粗咪唑1d装入500mL装备有氮气入口、顶置式搅拌器及热电偶的圆底烧瓶中。装入165mLN-甲基吡咯烷-2-酮，且加热至50℃。向所得澄清溶液中装入30mL甲醇，且在50℃下搅拌约18小时。向所得浆料中再装入130mL甲醇，同时将内部温度维持在>45℃。在50℃下搅拌浆料约30分钟且冷却至室温。过滤浆料，且依次用90mL1∶1甲醇：N-甲基吡咯烷-2-酮及200mL甲醇洗涤固体。在70℃下真空干燥固体，得到22.7g(31.5mmol，收率76%，在254nm下为95AP)咪唑1d：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.95(s,2H),7.89-7.76(d,4H),7.74-7.60(d,4H),7.50(s,2H)4.62(s,2H),3.55-3.30(m,2H),2.45-2.20(m,4H),1.70-1.59(m,2H),1.59-0.90(s,18H),0.83-0.69(m,2H),0.65-0.49(m,2H)；HRMS:C38H45N6O4(M+H;ESI+)的计算值为649.3502，实测值为649.3524。
实施例1步骤e
Figure BDA00001954398801492
向装备有氮气入口及顶置式搅拌器的250mL圆底烧瓶中装入7.0g(10.8mmol)咪唑1d、105mL甲醇及3.7mL(20.8mmol，1.93当量)5.6M HCl的异丙醇溶液。用炭处理所得溶液且过滤。用140mL甲醇洗涤炭且与滤液合并。浓缩富集的有机流至约70mL且装入装备有氮气入口、顶置式搅拌器及热电偶的圆底烧瓶中。随后向溶液中装入14.75mL(88.5mmol，8.2当量)6M HCl且在50℃下搅拌。在50℃下约12小时后，向混合物中装入50mL异丙醇，且在50℃下搅拌所得浆料1小时。冷却浆料至室温且老化约15小时。过滤产物且依次用35mL 4:1异丙醇：甲醇及70mL异丙醇洗涤。在55℃下在真空下干燥固体，得到5.3g(8.9mmol，83%，在254nm为99.8AP)吡咯烷1e/4HCl：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ14.00-9.38(bs,8H),8.31(s,2H),8.06-7.96(d,4H),7.94-7.84(d,4H),5.05-4.89(dd,2H),3.55-3.42(m,2H),2.87-2.69(dt,2H),2.64-2.53(dd,2H),2.05-1.89(m,2H),1.17-0.98(m,2H),0.96-0.82(dd,2H)；13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ140.0,139.3,133.6,127.2,126.6,125.8,116.6,49.8,34.3,29.9,15.2,5.3；HRMS:C28H29N6(M+H;ESI+)的计算值为449.2454，实测值为449.2470。
实施例1步骤f
Figure BDA00001954398801501
向装备有氮气入口、顶置式搅拌器及热电偶的250mL夹套反应器中装入4.24g(24.2mmol，2.4当量)(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-3-甲基丁酸、3.86g(25.21mmol，2.5当量)1-羟基苯并三唑一水合物、4.55g(23.73mmol，2.35当量)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐及60mL乙腈。搅拌混合物约1小时，且向其中装入6g(10.1mmol)吡咯烷1e/4HCl。冷却所得浆料至10℃且向其中装入7.92mL(45.41mmol，4.5当量)二异丙基乙胺。将混合物温热至室温且搅拌约19小时。用36mL 13wt%NaCl水溶液洗涤所得有机溶液。向富集的有机物中装入12mL乙腈且用36mL含有13wt%NaCl水溶液及1M NaOH的水溶液洗涤。随后向富集的有机物中装入12mL甲醇且加热至50℃。在2小时期间，添加水(60mL)，且冷却所得浆料至室温且老化约2小时。过滤固体，用36mL 1:1乙腈:水洗涤且在真空下干燥。向装备有氮气入口、顶置式搅拌器及热电偶的250mL夹套反应器中装入上述固体且用240mL SDA3A级乙醇溶解。经由真空蒸馏浓缩溶液至约50mL，且向其中装入4.24mL(23.19mmol，2.30当量)5.47M HCl的异丙醇溶液及额外的30mL SDA3A乙醇。浓缩混合物至约50mL，用40mL SDA3A乙醇稀释，且用炭处理。过滤炭且用90mL SDA3A乙醇洗涤。合并富集的滤液及洗涤液，且浓缩至40mL。装入16mL乙酸乙酯且加热至40℃。装入60mg酰胺1f/2HCl晶种，且在40℃下搅拌1小时。经1.5小时装入额外68mL乙酸乙酯，同时将内部温度维持在40℃。在40℃下搅拌所得浆料约18小时，且冷却至室温。过滤浆料且用24mL 3:1乙酸乙酯:SDA3A乙醇及30mL乙酸乙酯洗涤。在真空下在50℃下干燥固体，得到6.83g(8.17mmol，81%，在300nm下99.5AP)酰胺1f/2HCl：1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ15.51(s,2H),14.95(s,2H)8.19(s,2H),8.05(d,4H),7.91(d,4H),7.25(d,2H),5.18(t,2H),4.44(t,2H),3.77(s,2H),3.55(s,6H),2.50(m,2H),2.39(m,2H),2.24(m,2H),1.91(m,2H),0.95(m,2H),0.92(d,6H),0.81(d,6H),0.75(s,2H)；13CNMR(125MHz,DMSO-d6)δ172.7,156.9,148.5,139.1,131.7,127.1,126.5,125.9,115.1,57.8,54.5,51.5,37.3,32.9,29.2,19.7,17.5,17.5,15.7；元素分析(就0.81%水进行校正)的计算值：C=59.86%,H=6.30%,N=13.29%,Cl=8.41%；实测值：C=59.99%,H=6.27%,N=13.12%,Cl=8.42%。
酰胺1f/2HCl的晶种的制备：根据上述基本操作使用504mg(0.8mmol)吡咯烷1e.4HCl制备酰胺1f。反应完成后，用3mL 13%NaCl水溶液、2×3mL含有13%NaCl及1M NaOH的水溶液及3mL 13%NaCl水溶液洗涤富集的乙腈溶液。浓缩富集的有机物成残余物且用10mL乙腈稀释。过滤混浊的混合物且浓缩澄清滤液成残余物。用10mL SDA3A乙醇稀释残余物，且向其中装入2.1mL(1.9mmol，2.4当量)0.88M HCl的乙醇溶液。浓缩混合物成残余物且用1.8mL异丙醇稀释。加热所得溶液至50℃且搅拌约18小时。冷却所得浆料至室温，过滤且用2:1丙酮:乙醇洗涤，得到476mg(0.57mmol，78%)酰胺1f/2HCl。
[注意：(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-3-甲基丁酸是从Flamma购得]
实施例1及2
对酰胺1f/2HCl的样品(106.9mg)(2g MCX柱；MeOH洗涤液；2NNH3/MeOH洗脱)进行游离碱化且在真空中干燥。将NCS(0.0195g，0.146mmol)添加至所得物质的DMF(2.5mL)溶液中，且用油浴在50℃下加热16.5小时。在真空中移除大部分挥发性组分，且将残余物吸收于MeOH中，且进行反相HPLC纯化(MeOH/水/TFA；柱：Phenomenex Luna，30×100mm S10Axia)，得到实施例-1(白色泡沫；56.1mg)及实施例-2(白色泡沫；22.3mg)的三氟乙酸盐。实施例-1：1H NMR(DMSO-d6,δ=2.50ppm,400MHz):12.61(brs,1H),8.13(s,1H),7.93(d,J＝8.5,2H),7.90-7.86(m,4H),7.82(d,J＝8.5,2H),7.27(d,J＝8.3,1H),7.17(d,J＝8.5,1H),5.02-4.94(m,2H),4.44-4.38(m,1.80H),4.31(表观宽单峰,0.2H),3.75(m,1H),3.62(m,1H),3.55(s,3H),3.54(s,3H),2.56-2.50(‘m’与溶剂信号部分重叠,1H),2.41-2.23(m,3H),2.17-2.09(m,1H),2.07-2.00(m,1H),1.97-1.91(m,1H),1.88-1.81(m,1H),1.01-0.81(m,15H),0.71(m,1H)。LC(条件2a及2b):>95%同质性指数。LC-MS(条件1a):Rt=1.80min。LC-MS:[M+H]+C42H50ClN8O6的分析计算值为797.35；实测值为797.33。实施例-2：1H NMR(DMSO-d6,δ=2.50ppm,400MHz):7.86(d,J＝8.6,4H),7.80(d,J＝8.5,4H),7.17(d,J＝8.5,2H),4.96(dd,J＝7.5,6.0,2H),4.40(表观三重峰,J＝7.8,2H),3.61(m,2H),3.54(s,6H),2.33-2.23(m,4H),2.09-1.98(m,2H),1.90-1.82(m,2H),1.01-0.82(‘m’与0.96ppm及0.87ppm处的两个‘d’重叠，其中分别为J＝6.8及J＝6.5；14H);0.71(m,1.7H),0.62(m,0.3H)。LC(条件2a及2b):>95%同质性指数。LC/MS(条件1a):Rt=2.79min。LC/MS:[M+H]+C42H49Cl2N8O6的分析计算值为831.32；实测值为831.26。
实施例3
Figure BDA00001954398801521
实施例3步骤a
Figure BDA00001954398801522
关于酰胺3a/2HCl的合成，参见方法专利申请WO 2009/020825。
实施例3
向酰胺3a(32mg，0.043mmol)于乙酸(2mL)中的溶液中添加2当量1M溴的乙酸溶液，且搅拌反应混合物30分钟。再添加1当量溴(固体形成)，且用5%NaHCO3中和反应混合物且用EtOAc(2×10mL)萃取。用饱和Na2S2O3溶液及盐水洗涤合并的萃取物且浓缩。在高真空下干燥残余物，得到实施例3(41mg)。LC/MS(条件J4):RT=3.54min。LC/MS[M+H]+C40H49Br2N8O6的分析计算值为897.22；实测值为897.28。
实施例4及实施例5
将二异丙基乙胺(100ul，74.2mg，0.574mmol)添加至酰胺3a(197mg，0.243mmol)及N-氯丁二酰胺(39mg，0.292mmol)于乙腈(2mL)中的混合物且搅拌过夜。随后向反应混合物中再添加一份N-氯丁二酰胺(66mg，0.494mmol)且搅拌直至由HPLC分析证实起始物质耗尽。随后将粗反应混合物通过反相HPLC(溶剂A=H2O/CH3CN(95:5)+0.05%TFA；溶剂B=H2O/CH3CN(5:95)+0.05%TFA；柱：Luna C18，5μ，100×21.5mm；流速：20mL/min)纯化，得到实施例4(微黄色无定形粉末，60mg)及实施例3(微黄色无定形粉末，115mg)的三氟乙酸盐。实施例5：LC/MS(条件3):Rt=6.13min。1H NMR(DMSO-d6,TMS,600MHz):8.16(s,1H),7.95-7.91(m,7H),7.85(d,J＝8.8,2H),7.35(d,J＝8.4,1H),7.32(d,J＝8.4,1H),5.19(t,J＝7.3,1H),5.05(m,1H),4.15(t,J＝7.7,1H),4.08(t,J＝8.1,1H),3.88-3.81(m,4H),3.56(s,6H),2.43(m,1H),2.21-2.11(m,4H),2.08-2.05(m,2H),1.97(m,3H),0.91(d,J＝6.5,3H),0.87(d,J＝7.0,3H),0.85(d,J＝7.0,3H),0.80(d,J＝6.6,3H)。HRMS:[M+H]+C40H50ClN8O6的计算值为773.3542；实测值为773.3530。实施例4：LC/MS(条件3):Rt=8.61min。1H NMR(DMSO-d6,TMS,600MHz):7.89(d,J＝8.3,4H),7.83(d,J＝8.3,4H),7.33(d,J＝8.4,2H),5.05(m,2H),4.09(t,J＝8.3,2H),3.84-3.81(m,4H),3.56(s,6H),2.24-2.15(m,4H),2.00-1.95(m,6H),0.91(d,J＝6.7,6H),0.87(d,J＝6.6,6H)。HRMS:[M+H]+C40H49Cl2N8O6的计算值为807.3152；实测值为807.3138。
实施例-6及实施例-7
Figure BDA00001954398801541
实施例-6步骤a
Figure BDA00001954398801542
向吡咯烷1e/4HCl(0.104g，0.174mmol)、HATU(0.133g，0.349mmol)及Cap-193(0.082g，0.349mmol)于DMF中的混合物中添加DIEA(0.183mL)。在室温下搅拌反应混合物3小时。将反应混合物通过制备型HPLC(Phenomenex AXIA 5u柱，0-90%B的35分钟梯度。A=H2O/CH3CN/10mM NH4OAc,95:5。B=CH3CN/H2O/10mM NH4OAc 95:5)纯化，得到实施例6步骤a(0.064g)。LC/MS:[M+H]+C46H59N8O10的分析计算值为883.43；实测值为883.26。1H NMR(400MHz,MeOD)ppm 7.90(2H,s),7.78-7.86(8H,m),5.13(2H,dd,J＝9.2,6.9Hz),4.96(2H,d,J＝5.0Hz),3.73-3.79(2H,m),3.63(6H,s),3.39-3.49(6H,m),3.35(1H,d,J＝4.8Hz),3.32-3.34(1H,m),3.30(6H,s),3.15(6H,s),2.66(2H,dd,J＝13.5,9.4Hz),2.37-2.51(4H,m),2.02-2.09(2H,m),1.03-1.14(2H,m),0.81-0.93(2H,m)。
实施例6及实施例7
向实施例6步骤a(0.057g)于DMF中的溶液中添加NCS(10.34mg，0.077mmol)。在60℃下加热反应混合物3小时。将反应混合物通过制备型HPLC(Phenomenex AXIA 5u 30×100mm柱，0-100%B的20分钟梯度。A=H2O/CH3OH/TFA 90:10:0.1；B=CH3OH/H2O/TFA 90:10:0.1)纯化，得到实施例6(0.022g)及实施例7(0.017g)。实施例6：LC(条件J5):Rt=3.46min。LC/MS:[M+H]+C46H58ClN8O10的分析计算值为917.39；实测值为917.12。1HNMR(400MHz,MeOD)ppm 7.87-7.91(1H,m),7.77-7.86(8H,m),5.14(1H,dd,J＝9.2,6.9Hz),5.05(1H,dd,J＝8.1,6.3Hz),4.96(2H,t,J＝5.7Hz),3.73-3.79(1H,m),3.67-3.72(1H,m),3.57-3.66(6H,m),3.32-3.51(8H,m),3.29(6H,d,J＝1.8Hz),3.19(3H,s),3.12-3.16(3H,m),2.60-2.72(1H,m),2.32-2.54(5H,m),2.02(2H,d,J＝6.3Hz),1.00-1.19(2H,m),0.88(1H,br.s.),0.82(1H,br.s.)。实施例7：LC(条件PY1):Rt=4.083min。LC/MS:[M+H]+C46H56Cl2N8O10的分析计算值为951.35；实测值为951.09。1H NMR(400MHz,MeOD)ppm 7.74-7.84(8H,m),5.05(2H,t,J＝7.2Hz),4.95(2H,d,J＝5.5Hz),3.66-3.72(2H,m),3.63(6H,s),3.37-3.53(8H,m),3.30(6H,s),3.19(6H,s),2.32-2.51(6H,m),1.92-2.06(2H,m),1.08(2H,dt,J＝8.6,5.8Hz),0.81(2H,d,J＝1.8Hz)。
实施例V1
Figure BDA00001954398801551
实施例V1步骤a
Figure BDA00001954398801552
在50℃下加热氨基甲酸酯1d(0.80g，1.23mmol)及NCS(0.214g，1.603mmol)于DMF(12mL)中的溶液17小时。冷却至环境温度后，在真空中移除挥发性组分。将残余物吸收于MeOH(36mL)中，且通过制备型HPLC(柱：XTERRA，30×100mm，S5；起始%B=50，最终%B=100；梯度时间=10min；终止时间=12min；流速=30ml/min；波长=220；溶剂A=10%MeOH-90%H2O-0.1%TFA；溶剂B=90%MeOH-10%H2O-0.1%TFA)分离该两种产物。用过量2N NH3/MeOH溶液中和两种级份中的每种，且真空浓缩以移除大部分甲醇，且将残余物分配在20%MeOH/CHCl3与水之间。干燥(MgSO4)有机层，过滤且真空浓缩，得到氯化物(淡黄色泡沫V1a-1；288.4mg)及二氯化物V1a-2(淡黄色固体；400.4mg)。氯化物V1a-1：1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5ppm,400MHz):12.62-12.60(m,1H),12.23(s,0.2H),11.92(s,0.8H),7.85-7.32(m,9H),4.68-4.42(m,2H),3.47-3.38(m,2H),2.40-2.35(m,2H),2.26-2.20(m,2H),1.71-1.58(m,2H),1.55-0.96(表观宽单峰,18H),0.82-0.69(m,2H),0.64-0.51(m,2H)。LC(V-条件1):Rt=2.44min。LC/MS:[M+H]+C38H44ClN6O4的分析计算值为683.31；实测值为683.31。二氯化物V1a-2：1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5ppm,400MHz):12.62(s,2H),7.85(d,J＝8.8,4H),7.82(d,J＝8.9,4H),4.61-4.42(m,2H),3.53-3.38(m,2H),2.41-2.35(m,2H),2.27-2.20(m,2H),1.70-1.59(m,2H),1.53-0.94(表观宽单峰,18H),0.80-0.70(m,2H),0.64-0.53(m,2H)。LC(条件1a):Rt=2.89min。LC/MS:[M+H]+C38H43Cl2N6O4的分析计算值为717.27；实测值为717.31。
实施例V1步骤b
Figure BDA00001954398801561
向氯化物V1a-1(0.2741g，0.401mmol)于MeOH(1mL)中的悬浮液中添加4M HCl的二噁烷(4mL)溶液。在室温下搅拌混合物7小时，随后在真空中移除挥发性组分，得到呈黄褐色固体状的V1b的盐酸盐(231.7mg)。该产物不经进一步纯化即使用。1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5ppm,400MHz):13.51(br s,1H),10.53-10.30(m,2H),9.87-9.72(m,1H),8.02-7.85(m,9H),4.72-4.68(m,1H),4.65-4.53(m,1H),3.42-3.30(m,2H),2.68-2.37(‘m’与溶剂信号部分重叠,4H),1.97-1.87(m,2H),1.16-1.07(m,2H),0.89-0.80(m,2H)。LC(条件1a):Rt=1.66min。LC/MS:[M+H]+C28H28ClN6的分析计算值为483.21；实测值为483.20。[注意：产物的确切盐酸盐含量未测定]。
实施例V1
向氯化物V1b/4HCl(0.045g，0.072mmol)、(S)-2-(甲氧基羰基氨基)丁酸(0.025g，0.157mmol)及N,N-二异丙基乙胺(0.075mL，0.429mmol)于DMF(1.5mL)中的溶液中添加HATU(0.057g，0.150mmol)。在约25℃下搅拌反应混合物1小时。用MeOH(2.5mL)稀释且通过制备型HPLC(柱：XTERRA，30×100mm，S5；起始%B=30，最终%B=90；梯度时间=10min；终止时间=12min；流速=30ml/min；波长=220；溶剂A=10%MeOH-90%H2O-0.1%TFA；溶剂B=90%MeOH-10%H2O-0.1%TFA)纯化产物，得到呈淡黄色固体状的实施例V1的三氟乙酸盐(39.4mg)。1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5ppm,400MHz):14.80-14.36(br m,1.4H),12.58(表观宽单峰,0.6H),8.14(s,1H),7.94(d,J＝8.5,2H),7.89(d,J＝8.3,2H),7.87(d,J＝8.4,2H),7.82(d,J＝8.6,2H),7.38(d,J＝7.8,0.9H),7.28(d,J＝7.8,0.9H),7.07(表观宽单峰,0.1H),6.96(表观宽单峰,0.1H),5.02(dd,J＝8.8,6.8,1H),4.96(dd,J＝7.0,6.0,1H),4.50-4.39(m,2H),3.74-3.67(m,1H),3.59-3.48(m,7H),2.60-2.47(‘m’与溶剂信号部分重叠,1H),2.42-2.22(m,3H),2.01-1.65(m,4H),1.65-1.52(m,2H),1.06-0.84(m,8H),0.83-0.77,(m,1H),0.74-0.66(m,1H)。LC(条件2a及2b):>95%同质性指数。LC(条件1a):Rt=1.66min。LC/MS:[M+H]+C40H46ClN8O6的分析计算值为769.32；实测值为769.35。
实施例V2
自吡咯烷V1b/4HCl及(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸根据关于实施例V1的合成描述的操作制备实施例V2(三氟乙酸盐)。
Figure BDA00001954398801571
Figure BDA00001954398801572
实施例V3
Figure BDA00001954398801573
实施例V3步骤a
Figure BDA00001954398801574
自氨基甲酸酯V1a-2根据关于吡咯烷V1b的制备描述的操作制备呈盐酸盐形式的实施例V3a。1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5ppm,400MHz):10.62-10.48(m,2H),9.92-9.75(m,2H),7.92(d,J＝8.8,4H),7.89(d,J＝9.1,4H),4.68-4.57(m,2H),3.40-3.31(m,2H),2.54-2.50(‘m’与溶剂信号部分重叠,2H),2.46-2.39(m,2H),1.91-1.85(m,2H),1.16-1.07(m,2H),0.85-080(m,2H)。LC(条件1a):Rt=2.01min。LC/MS:[M+H]+C28H27Cl2N6的分析计算值为517.17；实测值为517.06.。[注意：产物的确切盐酸盐含量未测定]。
实施例V3
自吡咯烷V3a的盐酸盐根据关于实施例V1的合成描述的操作制备实施例V3(三氟乙酸盐)。1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5ppm,400MHz):12.59(非常宽的单峰,~2H),7.86(d,J＝8.5,4H),7.80(d,J＝8.3,4H),7.46(表观宽单峰,0.13H),7.37(d,J＝7.6,1.73H),6.97(表观宽单峰,0.14H),4.97-4.94(m,2H),4.52-4.35(m,2H),3.63-3.45(m,8H),2.36-2.23(m,4H),1.96-1.83(m,2H),1.82-1.67(m,2H),1.64-1.49(m,2H),1.13-0.82(m,8H),0.78-0.61(m,2H)。LC(条件2a及2b):>95%同质性指数。LC(条件1a):Rt=2.66min。LC/MS:[M+H]+C40H45Cl2N8O6的分析计算值为803.28；实测值为803.28。
实施例V4-V6
自吡咯烷V3a的盐酸盐及适当酸根据关于实施例V1的合成描述的操作制备实施例V4-V6(三氟乙酸盐)。
Figure BDA00001954398801581
Figure BDA00001954398801582
实施例V7及V8
Figure BDA00001954398801601
实施例V7步骤a
Figure BDA00001954398801602
向吡咯烷1e/4HCl(0.350g，0.589mmol)、(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-3-甲基丁酸(0.103g，0.589mmol)、(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸(0.128g，0.589mmol)及N,N-二异丙基乙胺(0.720mL，4.12mmol)于DMF(3mL)中的溶液中添加HATU(0.493g，1.295mmol)。在约25℃下搅拌反应混合物4小时，随后用MeOH稀释且通过制备型HPLC(柱：XTERRA，30×100mm，S5；起始%B=30，最终%B=75；梯度时间=15min；终止时间=15min；流速=30ml/min；波长=220；溶剂A=10%MeOH-90%H2O-0.1%TFA；溶剂B=90%MeOH-10%H2O-0.1%TFA)纯化，从三种可能的产物中分离出产物V7a。将产物V7a溶解于MeOH中，且进行游离碱化(6g MCX柱筒；MeOH洗涤液；2N NH3/MeOH洗脱)且真空浓缩，得到黄褐色固体(103.2mg)。LC(条件1a):Rt=1.63min。LC/MS:[M+H]+C44H53N8O7的分析计算值为805.40；实测值为805.49。
实施例V7及V8
在50℃下加热产物V7a(0.103g，0.128mmol)及NCS(0.022g，0.167mmol)于DMF(1.5mL)中的溶液24小时。冷却至环境温度后，用MeOH稀释反应混合物且通过制备型HPLC(柱：XTERRA,30×100mm，S5；起始%B=40，最终%B=100；梯度时间=15min；终止时间=17min；流速=30ml/min；波长=220；溶剂A=10%MeOH-90%H2O-0.1%TFA；溶剂B=90%MeOH-10%H2O-0.1%TFA)纯化以分离区域选择性异构体V7及V8的混合物。将混合物溶解于MeOH中，且经受不同制备型HPLC纯化条件(柱：Waters-SunFire，30×100mm，S5；起始%B=10，最终%B=50；梯度时间=20min；终止时间=20min；流速=30ml/min；波长=220；溶剂A=10%乙腈-90%H2O-0.1%TFA；溶剂B=90%乙腈-10%H2O-0.1%TFA)，分离两种呈三氟乙酸盐形式的区域选择性异构体。实施例V7(灰白色固体，17.3mg)：1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5ppm,400MHz):14.52(表观宽单峰,太宽而不能积分),12.64(表观宽单峰,太宽而不能积分),8.14(s,1H),7.95-7.79(m,8H),7.26(两个重叠的‘d’,J＝~8.6,1.70H),7.10(表观宽单峰,0.08H),6.98(表观宽单峰,0.22H),5.01-4.97(m,1H),4.96-4.92(m,1H),4.50-4.46(m,1H),4.43-4.40(m,1H),3.90-3.81(m,2H),3.79-3.72(m,1H),3.71-3.64(m,1H),3.54(表观单峰,6H),3.31-3.18(m,2H),2.65-2.50(‘m’与溶剂信号部分重叠,1H),2.45-2.19(m,3H),2.18-2.08(m,1H),2.04-1.89(m,2H),1.89-1.79(m,1H),1.69-1.59(m,1H),1.55-1.41(m,2H),1.38-1.23(m,1H),1.04-0.77(m,9H),0.74-0.67(m,1H)。LC(条件2a及2b):>95%同质性指数。LC(条件1a):Rt=2.15min。LC/MS:[M+H]+C44H51Cl1N8O7的分析计算值为839.36；实测值为839.35。实施例V8(灰白色固体，16.8mg)：1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5ppm,400MHz):14.53(br s,太宽而不能积分),12.61(br s,太宽而不能积分),8.13(s,1H),7.94(d,J＝8.3,2H),7.90(d,J＝8.6,2H),7.85(d,J＝8.5,2H),7.82(d,J＝8.6,2H),7.36(d,J＝8.8,~1H),7.17(d,J＝8.5,~1H),5.00-4.94(m,2H),4.49(表观三重峰,J＝7.7,1H),4.40(表观三重峰,J＝7.9,1H),3.90-3.78(m,3H),3.65-3.59(m,1H),3.55(s,3H),3.54(s,3H),3.35-3.19(m,2H),2.64-2.50(‘m’与溶剂信号部分重叠,1H),2.41-2.34(m,1H),2.33-2.22(m,2H),2.12-1.99(m,2H),1.99-1.90(m,1H),1.89-1.81(m,1H),1.52-1.27(m,4H),1.07-0.84(m,8H),0.84-0.77(m,1H),0.75-0.65(m,1H)。LC(条件2a及2b):>95%同质性指数。LC(条件1a):Rt=2.15min。LC/MS:[M+H]+C44H51Cl1N8O7的分析计算值为839.36；实测值为839.38。
实施例V9
Figure BDA00001954398801611
实施例V9步骤a
Figure BDA00001954398801621
依次将Boc2O(0.734g，3.36mmol)及DMAP(0.021g，0.168mmol)添加至吡咯烷1e/4HCl(2.00g，3.36mmol)及Et3N(2.3ml,16.82mmol)于DMF(60mL)中的混合物中，且在环境条件下搅拌4.5小时。在真空中移除挥发性组分，且将残余物分配在1.0N NaOH(20mL)与20%MeOH/CHCl3(50mL)之间。用20%MeOH/CHCl3(50mL，2×)洗涤水相。干燥(MgSO4)合并的有机相且真空浓缩。自所得粗物质制备硅胶筛且经受BIOTAGE纯化(160g硅胶)，其中首先用EtOAc洗脱柱直至所有较高Rf斑点(亦即双-Boc衍生物1d；0.28g)洗脱出，随后经2.5L用5-10%MeOH/CH2Cl2洗脱柱以洗脱残余双-Bocx(接着为单-Boc V9a(0.81g；含约1.1mol当量Et3N)。LC/MS:[M+H]+C33H37N6O2的分析计算值为549.30；实测值为549.45。
实施例V9步骤b
Figure BDA00001954398801622
向氨基甲酸酯V9a(1g，1.823mmol)、(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸(0.400g，1.841mmol)及N,N-二异丙基乙胺(0.65mL，3.72mmol)于DMF(8mL)中的溶液中添加HATU(0.770g，2.026mmol)，且在约25℃下搅拌反应混合物3小时。在真空中移除挥发性组分，且将残余物吸收于20%MeOH/CHCl3(250mL)中，用水(3×40mL)洗涤，经MgSO4干燥，过滤且真空浓缩。将残余物吸收于CHCl3(4mL)中，且负载于Thomson硅胶柱筒上，且用10%MeOH/EtOAc洗脱，得到呈黄褐色泡沫的产物V9b(1.15g)。LC(条件1a):Rt=1.70min；LC/MS:[M+H]+C42H50N7O6的分析计算值为748.38；实测值为748.40。
实施例V9步骤c
Figure BDA00001954398801631
在50℃下加热V9b(0.9387g，1.255mmol)及NCS(0.335g，2.51mmol)于DMF(13mL)中的溶液24.5小时。在真空中移除挥发性组分，且将残余物吸收于CH2Cl2(200mL)中，依次用水(3×50mL)及盐水(50mL)洗涤，经MgSO4干燥，过滤且真空浓缩。将残余物吸收于CH2Cl2(6mL)中，且经受硅胶纯化(100%乙酸乙酯)，得到呈黄色固体状的化合物V9c(720.7mg)。LC(条件1a):Rt=3.19min。LC/MS:[M+H]+C42H48Cl2N7O6的分析计算值为816.30；实测值为816.35。
实施例V9步骤d
Figure BDA00001954398801632
自氨基甲酸酯V9c根据关于V1b的合成描述的操作制备呈盐酸盐形式的吡咯烷V9d。1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5ppm,400MHz):10.49-10.38(m,1H),9.84-9.72(m,1H),7.90-7.81(m,8H),7.27(d,J＝8.6,0.89H),6.99(表观宽单峰,0.11H),4.98-4.95(m,1H),4.65-4.55(m,1H),4.50-4.46(m,1H),3.90-3.80(m,2H),3.76-3.64(m,1H),3.54(s,3H),3.41-3.32(m,1H),3.32-3.19(m,2H),2.54-2.40(‘m’与溶剂信号部分重叠,2H),2.36-2.24(m,2H),2.06-1.95(m,1H),1.94-1.78(m,2H),1.69-1.57(m,1H),1.55-1.40(m,2H),1.39-1.27(m,1H),1.17-1.07(m,1H),1.04-0.92(m,1H),0.88-0.78(m,1H),0.76-0.66(m,1H)。LC(条件1a):Rt=2.66min；>95%同质性指数。LC/MS:[M+H]+C37H40Cl2N7O4的分析计算值为716.25；实测值为716.28。
实施例V9
自中间体V9d的盐酸盐及(S)-2-(甲氧基羰基氨基)丁酸根据关于实施例V1的合成描述的操作制备实施例V9(三氟乙酸盐)。1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5ppm,400MHz):12.59(br s,~2H),7.87-7.77(m,8H),7.29/7.26(两个部分重叠的‘d’,J＝8.6/7.8,1.82H),6.97(表观宽单峰,0.18H),4.97-4.93(m,2H),4.50-4.42(m,2H),3.90-3.81(m,2H),3.72-3.65(m,1H),3.60-3.46(m与两个s重叠,s位于3.54及3.53处,7H),3.32-3.18(m,2H),2.38-2.18(m,4H),2.05-1.23(‘m’的集合,9H),1.09-0.85(m,5H),0.76-0.59(m,2H)。LC(条件2a及2b):>95%同质性指数。LC(条件1a):Rt=2.66min。LC/MS:[M+H]+C43H49Cl2N8O7的分析计算值为859.31；实测值为859.43。
实施例V10-V16
自吡咯烷V9d的盐酸盐及适当酸根据关于实施例V1的制备描述的操作制备实施例V10-V16(三氟乙酸盐)。实施例V13-16额外需要反相HPLC纯化，该HPLC采用以下条件：柱：Waters-SunFire，30×100mm，S5；起始%B=10，最终%B=50；梯度时间=20min；终止时间=20min；流速=30ml/min；波长=220；溶剂A=10%乙腈-90%H2O-0.1%TFA；溶剂B=90%乙腈-10%H2O-0.1%TFA。
Figure BDA00001954398801642
Figure BDA00001954398801651
实施例GW1-1至GW1-3
Figure BDA00001954398801652
实施例GW1步骤a
关于氨基甲酸酯GW1a的制备，参见美国专利申请2009/0068140。
实施例GW1步骤b
向氨基甲酸酯GQ1a(0.830g，1.271mmol)于DMF(9mL)中的溶液中添加NCS(0.221g，1.653mmol)。在50℃下加热反应混合物16小时。再添加NCS(0.1g，0.75mmol)且再继续加热4小时。冷却至环境温度且分配在DCM与水(各20mL)之间。用DCM(20mL)萃取水层，且干燥(Na2SO4)合并的有机相且真空浓缩。将所得粗物质溶解于MeOH中，且经受反相HPLC纯化(MeOH/水/TFA；柱：Phenomenex Luna,30×100mm S10 Axia)，得到呈淡黄色泡沫的GW1b的三氟乙酸盐(0.25g)。1H NMR(MeOD,δ=3.30ppm,400MHz):7.82(表观单峰,8H),4.95-4.85(‘m’与溶剂信号部分重叠,2H),4.04(m,2H),2.36-2.14(m,6H),1.77(m,2H),1.50-1.20(‘br s’与‘d’重叠,24H)。LC(条件Ia):RT=3.0min。LC/MS:[M+H]+C38H47Cl2N6O4的分析计算值为721.30；实测值为721.32。
实施例GW1步骤c
Figure BDA00001954398801661
将4N HCl的二噁烷溶液(10mL)添加至氨基甲酸酯GW1b(0.29g，0.306mmol)中，且在室温下搅拌反应混合物4小时。移除溶剂且在真空下干燥过夜，得到呈棕色固体状的产物GW1c的盐酸盐(0.21g)。1H NMR(MeOD,δ=3.30ppm,400MHz):7.85(d,J＝8.6,4H),7.80(d,J＝8.8,4H),4.95-4.85(m,2H),3.89-3.80(m,2H),2.58-2.31(m,6H),2.01-1.91(m,2H),1.50(d,6.5Hz,6H)。LC(条件1a):RT=3.0min。LC/MS:[M+H]+C28H31Cl2N6的分析计算值为521.20；实测值为521.20。
实施例GW1-1至实施例GW1-3
向GW1c的盐酸盐(150mg，0.225mmol)、(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸(57.6mg，0.265mmol)及(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-3-甲基丁酸(48.0mg，0.274mmol)于DMF(10mL)中的溶液中添加DIEA(0.236mL，1.349mmol)及HATU(176mg，0.463mmol)，且在室温下搅拌混合物1小时。在真空中移除大部分挥发性组分，且将残余物溶解于MeOH中，且经受反相HPLC纯化(MeOH/水/TFA；柱：Phenomenex Luna,30×100mm S10Axia)以分离三种呈三氟乙酸盐的产物。实施例GW1-1(淡黄色泡沫，25mg)受未鉴别的杂质污染。1H NMR(MeOD,δ=3.30ppm,400MHz):8.05-7.93(m,1.54H),7.87-7.56(m,6.46H),5.42(br d,J＝6.6,0.68H),4.97(m,1.32H),4.76-4.69(m,1.2H),4.31-4.14(m,2.8H),3.98-3.84(m,4H),3.68/3.67/3.63(三个‘s’,6H),3.40-3.21(‘m’与溶剂信号部分重叠,4H),2.72(m,0.7H),2.45-1.14(多个‘m’与两个‘d’重叠，‘d’在1.51及1.18处，其中分别为J＝6.5及6.3;23.3H)。LC(条件2a及2b):>91.8%同质性指数。LC(条件1c):RT=6.22min。LC/MS:[M+H]+C46H57Cl2N8O8的分析计算值为919.37；实测值为919.9。实施例GW1-2(淡黄色泡沫，39mg)；LC(条件2a及2b):>95%同质性指数。LC(条件1a):RT=2.97min。LC/MS:[M+H]+C44H55Cl2N8O7的分析计算值为877.36；实测值为877.35。实施例GW1-3(淡黄色泡沫，22mg)，LC(条件2a及2b):>95%同质性指数。LC(条件1a):RT=3.07min。LC/MS:[M+H]+C42H53Cl2N8O6的分析计算值为835.35；实测值为835.34。
实施例GW2
Figure BDA00001954398801671
实施例GW2步骤a
向氨基甲酸酯GW1a(0.830g，1.271mmol)于DMF(9mL)中的溶液中添加NCS(0.221g，1.653mmol)。在50℃下加热反应混合物16小时。再添加NCS(0.1g，0.75mmol)且在50℃下再继续加热4小时。将混合物分配在DCM与水(各20mL)之间。用DCM(20mL)萃取水相，且经Na2SO4干燥合并的相且真空浓缩。将所得粗产物溶解于MeOH中，且经受反相HPLC纯化(MeOH/水/TFA；柱：Phenomenex Luna,30×100mm S10 Axia)，得到呈淡黄色泡沫的氨基甲酸酯GW2a(0.03g)。1H NMR(MeOD,δ=3.30ppm,400MHz):7.76-7.64(m,8H),7.34(s,1H),5.10-4.65(与HOD信号重叠,m,2H),3.99(m,2H),2.31-2.01(m,6H),1.78-1.76(m,2H),1.55-1.15(表观宽多重峰,24H)。LC(条件1a):RT=2.55min。LC/MS:[M+H]+C38H48ClN6O4的分析计算值为687.34；实测值为687.39。
实施例GW2步骤b
将4N HCl的二噁烷溶液(10mL)添加至氨基甲酸酯GW2a(0.19g，0.208mmol)中，且在室温下搅拌4小时。移除溶剂且在真空下干燥过夜，得到呈棕色固体状的吡咯烷GW2b的盐酸盐(0.16g)。1H NMR(MeOD,δ=3.30ppm,400MHz):8.11(s,1H),7.95(d,J＝8.5,2H),7.87(表观‘d’,4H),7.82(d,J＝8.8,2H),5.22(m,1H),4.92-4.83(与HOD信号重叠,m,1H),3.99(m,1H),3.84(m,1H),2.78-2.62(m,2H),2.57-2.31(m,4H),2.12-1.91(m,2H),1.55(d,J＝6.8,3H),1.50(d,J＝6.8,3H)。LC(条件Ia):RT=1.74min。LC/MS:[M+H]+C28H32ClN6的分析计算值为487.24；实测值为487.21。
实施例GW2
向吡咯烷GW2b的盐酸盐(80mg，0.126mmol)及(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-3-甲基丁酸(48.7mg，0.278mmol)于DMF(3mL)中的溶液中添加DIEA(0.132mL，0.758mmol)及HATU(99mg，0.260mmol)，且在室温下搅拌混合物1小时。在真空中移除大部分挥发性组分，且将残余物溶解于MeOH中，且经受反相HPLC纯化(MeOH/水/TFA；柱：Phenomenex Luna,30×100mmS10 Axia)，得到GW2的三氟乙酸盐(淡黄色泡沫；50mg)。1H NMR(MeOD,δ=3.30ppm,400MHz):8.00-7.75(m,9H),5.71(表观宽多重峰,0.2H),5.40(d,J＝6.3,0.45H),5.15-5.11(m,0.87H),5.00-4.96(m,0.92H),4.81-4.68(m,1.56H),4.26-4.03(m,2H),3.71/3.70/3.64/3.63(四个‘s’,6H),2.77-1.87(m,9.24H),1.65-1.48(重叠的‘m’与‘d’,4.66H),1.28(d,J＝0.62H),1.17(d,J＝6.3H,1.23H),1.06-0.82(m,12.15H)。LC(条件2a及2b):>95%同质性指数。LC/MS(条件1a):RT=2.46min。LC/MS[M+H]+C42H54ClN8O5的分析计算值为801.39；实测值为801.41。
实施例GW2-1
自吡咯烷GW2b及(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸根据关于实施例GW2的制备描述的操作制备实施例GW2-1(三氟乙酸盐)。
Figure BDA00001954398801681
Figure BDA00001954398801682
Figure BDA00001954398801691
实施例GW3
Figure BDA00001954398801692
实施例GW3步骤a
Figure BDA00001954398801693
自(S)-5-氧代吡咯烷-1,2-二甲酸1-叔丁酯2-甲酯根据Tetrahedon Letters,2003,3203-3205中所述的操作制备上述三种酯。
实施例GW3步骤b
Figure BDA00001954398801694
将硼烷二甲基硫醚复合物(5.44mL，10.88mmol)添加至酯GW3a-2(1.4g，5.44mmol)于THF(25mL)中的溶液中，且在40℃下加热反应混合物7小时。在真空中移除挥发性组分，且将残余物分配在EtOAc与水(各50mL)之间。用EtOAc(30mL)萃取水层，且经Na2SO4干燥合并的有机相且真空浓缩。将所得无色油状物通过快速色谱(0-50%EtOAc/己烷)纯化，得到呈无色油状的酯GW3b(0.77g)。1H NMR(CDCl3,δ=7.24ppm,400MHz):4.29-4.18(m,1H),3.78-3.66(m,4H),2.99(表观三重峰,J＝10.1,1H),2.43-2.97(m,1H),2.43-2.37(m,1H),2.30-2.18(m,1H),1.60-1.52(m,1H),1.47/1.42(两个‘s’,9H),1.08-1.05(m,3H)。
实施例GW3步骤c
Figure BDA00001954398801701
向酯GW3b(1.69g，6.95mmol)于乙醇(10mL)中的溶液中添加LiOH(0.250g，10.42mmol)于水(5.00mL)中的溶液，且在室温下搅拌反应混合物5小时。在真空中蒸发有机溶剂，且用水(10mL)稀释残余物且用乙醚(10mL)洗涤。于冰水浴中冷却，且用1N HCl酸化至约2的pH值范围。随后用EtOAc(20mL，3×)萃取。经Na2SO4干燥有机层且真空浓缩，得到呈无色油状的酸GW3c，其在长时间暴露于高真空之后变成白色固体(1.38g)。1HNMR(CDCl3,δ=7.24ppm,400MHz):4.39-4.22(m,1H),3.80-3.69(m,0.91H),3.59-3.35(m,0.18H),3.03-2.89(m,0.91H),2.51-2.22(m,2H),1.98-1.91(m,0.71H),1.68-1.60(0.29H),1.50/1.44(两个‘s’,9H),1.09(表观多重峰,3H)。
实施例GW3步骤d
Figure BDA00001954398801702
向GW3c(1.83g，7.98mmol)及1,1'-(联苯-4,4'-二基)双(2-溴乙酮)(1.581g，3.99mmol)于CH3CN(30mL)中的悬浮液中添加DIEA(1.436mL，8.22mmol)，且在室温下搅拌混合物4小时。在真空中蒸发溶剂，且将残余物分配在EtOAc与水(各50mL)之间。用饱和NaHCO3(20mL)洗涤有机层，经Na2SO4干燥且真空浓缩，得到呈淡黄色固体状的二酯GW3d(2.67g)，其直接用于下一步骤中。
实施例GW3步骤e
Figure BDA00001954398801703
向二酮酯GW3d(2.67g，3.85mmol)于二甲苯(30mL)中的溶液中添加乙酸铵(2.97g，38.5mmol)，且在140℃下加热混合物6小时。在真空中移除挥发性组分，且将残余物分配在DCM(50mL)与水(50mL)之间。用饱和NaHCO3(20mL)洗涤有机层，经Na2SO4干燥且真空浓缩。将所得粗物质用快速色谱(50-100%EtOAc/己烷，100%EtOAc-10%MeOH/EtOAc)纯化，得到呈橙色固体状的咪唑GW3e(1.3g)。1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5ppm,400MHz):12.21-11.87(三个宽单峰,2H),7.82-7.51(m,9.2H),7.30(m,0.6H),6.88-6.81(m,0.2H),4.9-4.67(m,1.81H),3.98-3.93(m,0.19H),3.77-3.54(m,2H),3.07-2.76(m,2H),2.43-2.04(m,4H),1.80-1.56(m,2H),1.41-1.33(m,8H),1.10-1.04(m,16H)。LC/MS(条件1a):RT=2.09min。LC/MS[M+H]+C38H49N6O4的分析计算值为653.38；实测值为653.51。
实施例GW3步骤f
Figure BDA00001954398801711
将4N HCl的二噁烷溶液(12.10mL，48.4mmol)添加至氨基甲酸酯GW3e(1.3g，1.99mmol)中，且在室温下搅拌混合物5小时。在真空中移除挥发性组分，且在真空下干燥产物过夜，得到呈黄色固体状的吡咯烷GW3f的盐酸盐(1.14g)。1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5ppm,400MHz):10.32(表观宽单峰,2H),9.79(表观宽单峰,2H),8.13(s,2H),8.02(d,J＝8.3,4H),7.99(d,J＝8.3,4H),5.01(br m,2H),3.47(br m,2H),3.05(br m,2H),2.62(m,2H),2.45(m,2H),2.21(m,2H),1.13(d,J＝6.3,6H)。LC/MS(条件1a):RT=2.09min。LC/MS[M+H]+C28H33N6的分析计算值为453.28；实测值为453.17。
实施例GW3步骤g
向吡咯烷GW3f的盐酸盐(1.14g，1.905mmol)、(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸(0.488g，2.248mmol)及(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-3-甲基丁酸(0.407g，2.324mmol)于DMF(15mL)中的悬浮液中添加DIEA(1.996mL，11.43mmol)。借助于超声处理进行全部溶解，随后添加HATU(1.478g，3.89mmol)，且在室温下搅拌反应混合物2小时。在真空中移除大部分挥发性组分，且将残余物溶解于MeOH中，且进行反相HPLC纯化(MeOH/水/TFA；柱：Phenomenex Luna，30×100mm S10 Axia)，得到呈淡黄色泡沫的三种产物的三氟乙酸盐：GW3g-1(0.28g)、GW3g-2(0.64g)及GW3g-3(0.36g)。产物GW3g-3：1H NMR(DMSO,δ=2.5ppm,400MHz):14.74(表观宽单峰,不可积分),8.16(s,2H),7.97(d,J＝8.6,4H),7.88(d,J＝8.3,4H),7.29(d,J＝8.0,<2H),5.23(br m,0.1H),5.07(dd,J＝10.6,7,1.9H),4.18(m,2H),4.09(m,2H),3.53(s,6H),3.39(m,2H),2.56-2.35(‘m’与溶剂信号部分重叠,2H),1.95(m,2H),1.82(m,2H),1.13(d,J＝6.3,6H),0.79(d,J＝6.5,6H),0.76(d,J＝6.5,6H)[注意：最后三个积分包括信号位于1.1-0.85ppm区中次要旋转异构体，亦即未选取的峰]。LC/MS(条件1a):RT=1.79min。LC/MS[M+H]+C42H55N8O6的分析计算值为767.42；实测值为767.30。产物GW3g-1，LC/MS(条件Ia):RT=1.62min。LC/MS[M+H]+C46H59N8O8的分析计算值为851.45；实测值为851.33。产物GW3g-2，LC/MS(条件1a):RT=1.70min。LC/MS[M+H]+C44H57N8O7的分析计算值为809.44；实测值为809.30。
实施例GW3
向GW3g-3/2TFA(160mg，0.174mmol)于DMF(2mL)中的溶液中添加NCS(30.6mg，0.229mmol)。加热混合物至50℃后维持5.5小时。将残余物溶解于MeOH中，且经受反相HPLC纯化(MeOH/水/TFA；柱：PhenomenexLuna,30×100mm S10 Axia)，得到呈淡黄色泡沫的GW3的三氟乙酸盐(40mg)。[注意：对于类似情况，对呈游离碱形式的起始物质进行氯化。]1H NMR(MeOD,δ=3.30ppm,400MHz):7.88(s,1H),7.84-7.76(m,8H),5.19(dd,J＝11.1,7.1,1H),4.98(dd,J＝10.4,7.3,1H),4.32(m,1H),4.24-4.17(m,3H),3.63(s,3H),3.62(s,3H),3.40-3.33(m,2H),2.65(m,1H),2.50(m,2H),2.37(m,1H),1.99(m,2H),1.82(m,2H),1.22(d,J＝6.3,2.85H),1.18(d,J＝6.3,2.85H),1.09(m,0.3H),0.92-0.85(m,12H)。LC(条件2a及2b):>95%同质性指数。LC/MS(条件Ia):RT=2.32min。LC/MS[M+H]+C42H54ClN8O6的分析计算值为801.39；实测值为801.25。
实施例GW4
Figure BDA00001954398801731
自GW3g-1根据关于实施例GW3的制备描述的操作制备实施例GW4(三氟乙酸盐)。LC(条件2a及2b):>95%同质性指数。LC/MS(条件Ia):RT=2.17min(条件1a)。LC/MS:[M+H]+C46H58ClN8O8的分析计算值为885.41；实测值为885.26。
实施例GW5至GW7
Figure BDA00001954398801732
向GW3g-2(565mg,0.588mmol)于DMF(2mL)中的溶液中添加NCS(0.021g，0.161mmol)，且在50℃下加热反应混合物17小时。在真空中移除大部分挥发性组分，且将残余物溶解于MeOH中，且经受反相HPLC纯化(MeOH/水/TFA；柱：Phenomenex Luna,30×100mm S10 Axia)，得到两种级份(一个为GW5且第二个为GW6与GW7的混合物)。在真空中干燥所述级份且得到淡黄色固体。分别将该两种级份溶解于甲醇中，且经受反相HPLC纯化(ACN/TFA/水；Water-Sunfire 30×100mm S5)，得到实施例GW5、GW6及GW7的三氟乙酸盐。实施例GW5：1H NMR(MeOD,δ=3.30ppm,400MHz):7.74(m,8H),5.02(m,2H),4.29-4.18(m,4H),3.90(m,2H),3.63(s,6H),3.41-3.33(m,4H),2.52(m,2H),2.39(br m,2H),2.01-1.79(m,4H),1.58-1.27(m,4H),1.18(d,J＝6.5,5.63H),1.09(m,0.37H),0.93(d,J＝6.8,3H),0.88(d,J＝6.5,3H)。LC(条件2a及2b):>95%同质性指数。LC/MS(条件1a):RT=2.81min。LC/MS[M+H]+C44H55Cl2N8O7的分析计算值为877.36；实测值为877.30。实施例GW6：1H NMR(MeOD,δ=3.30ppm,400MHz):7.86(s,1H),7.82-7.73(m,8H),5.19(dd,J＝11,7,1H),4.98(dd,J＝10.4,7.3,1H),4.33-4.19(m,4H),3.90(m,2H),3.67(m,0.35H),3.63/3.62(两个重叠的‘s’,5.65H),3.41-3.31(m,4H),2.65(m,1H),2.49(m,2H),2.38(m,1H),2.00-1.79(m,4H),1.57-1.27(m,4H),1.22/1.18(两个重叠的‘d’,分别为J＝6.5/6.3,5.69H),1.09(m,0.31H),0.90/0.86(两个重叠的‘d’,J＝6.8/6.8,6H)。LC(条件2a及2b):>95%同质性指数。LC/MS(条件Ia):RT=2.25min。LC/MS[M+H]+C44H56ClN8O7的分析计算值为843.40；实测值为843.24。实施例GW7：1H NMR(MeOD,δ=3.30ppm,400MHz):7.87-7.75(m,9H),5.19(dd,J＝11.7.0,1H),4.99(dd,J＝10.3,7.3,1H),4.38-4.17(m,4H),3.90(m,2H),3.64/3.62(两个‘s’,6H),3.41-3.26(‘m’与溶剂信号部分重叠,4H),2.64(m,1H),2.50(m,2H),2.37(m,1H),2.03-1.79(m,4H),1.60-1.08(m,10H),0.92(d,J＝6.8,3H),0.86(d,J＝6.8,3H)。LC(条件2a及2b):>95%同质性指数。LC/MS(条件1a):RT=2.24min。LC/MS[M+H]+C44H56ClN8O7的分析计算值为843.40；实测值为843.24。
实施例GW8
Figure BDA00001954398801741
实施例GW8步骤a
向GW3e(0.360g，0.551mmol)于DMF(9mL)中的溶液中添加NCS(0.096g，0.717mmol)，且在50℃下加热反应混合物15小时。用MeOH稀释残余物，且经受反相HPLC纯化(MeOH/水/TFA；柱：Phenomenex Luna,30×100mmS10 Axia)，得到呈淡黄色泡沫的氨基甲酸酯GW8a的三氟乙酸盐(20mg)。亦分离GW3e的三氟乙酸盐(60mg)及单氯代类似物(70mg)。氨基甲酸酯GW8a：1H NMR(MeOD,δ=3.30ppm,400MHz):7.83(表观单峰,8H),4.95-4.79(‘m’与溶剂信号部分重叠,2H),3.85-3.75(m,2H),3.14(m,2H),2.58-2.48(m,2H),2.44-2.30(m,2H),1.80-1.71(m,2H),1.43(s,6H),1.23(s,12H),1.14/1.12(两个重叠的‘s’,6H)。LC/MS(条件Ia):RT=2.98min。LC/MS[M+H]+C38H47ClN6O4的分析计算值为721.30；实测值为721.39。
实施例GW8步骤b
Figure BDA00001954398801751
将4N HCl的二噁烷溶液(3mL)添加至GW8a的三氟乙酸盐(55mg，0.063mmol)中，且在室温下搅拌混合物5小时。在真空中移除溶剂，且在真空下干燥残余物过夜，得到呈棕色固体状的吡咯烷GW8b的盐酸盐(50mg)。LC/MS(条件Ia):RT=2.20min。LC/MS[M+H]+C28H31Cl2N6的分析计算值为521.20；实测值为521.20。
实施例GW8
向GW8b的盐酸盐(50mg，0.075mmol)于DMF(3mL)中的悬浮液中添加(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-3-甲基丁酸(28.9mg，0.165mmol)、DIEA(0.079mL，0.450mmol)及HATU(58.7mg，0.154mmol)，且在室温下搅拌混合物2小时。在真空中移除大部分挥发性组分，且将残余物溶解于MeOH中，且经受反相HPLC纯化(MeOH/水/TFA；柱：Phenomenex Luna,30×100mm S10Axia)，得到GW8的三氟乙酸盐(淡黄色泡沫；40mg)。1H NMR(MeOD,δ=3.30ppm,400MHz):7.80-7.75(m,8H),5.01(dd,J＝10.4,7.4,2H),4.26-4.17(m,4H),3.63(s,6H),3.38-3.33(m,2H),2.52-2.49(m,2H),2.45-2.33(m,2H),2.03-1.95(m,2H),1.87-1.79(m,2H),1.19(d,J＝6.3,6H),0.92(d,J＝6.8,6H),0.87(d,J＝6.8,6H)。LC(条件2a及2b):>95%同质性指数。LC/MS(条件Ia):RT=2.89min。LC/MS[M+H]+C42H53Cl2N8O6的分析计算值为835.35；实测值为835.41。
实施例GW9及实施例GW10
Figure BDA00001954398801752
实施例GW9步骤a
在-40℃(干冰/丙酮浴)下，向GW3a-2(1.31g，5.09mmol)于THF(25mL)中的溶液中逐滴添加甲基溴化镁(2.037mL，6.11mmol)。在相同温度下搅拌2小时，随后移除冷却浴且再继续搅拌1小时。添加乙酸(1mL)、水(10mL)及乙醚(50mL)，振荡混合物且分离有机层。用水洗涤有机层，经Na2SO4干燥且真空浓缩。将所得粗物质通过快速色谱(5-95%EtOAc/己烷)纯化，得到呈无色油状的酯GW9a(0.6g)。1H NMR(CDCl3,δ=7.24ppm,400MHz):4.97(br d,J＝8.3,1H),4.29(m,1H),3.74/3.73(重叠的‘s’,3H),2.66(m,1H),2.27-2.22(m,0.21H),2.17(s,2.58H),2.10-2.02(m,1.22H),1.80-1.1.74(m,1H),1.43/1.40(重叠的‘s’,9H),1.16(d,J＝7.1,2.6H),1.05(d,J＝6.8,0.4H)。
实施例GW9步骤b
Figure BDA00001954398801762
向酮GW9a(0.6g，2.195mmol)于DCM(15mL)中的溶液中添加TFA(0.846mL，10.98mmol)，且在室温下搅拌混合物7小时。在真空中移除挥发性组分，且在真空下干燥过夜，得到淡黄色油状物(0.63g)。
将上述粗产物(0.5g,1.8mmol)于甲醇(20mL)中的溶液添加至含有Pd/C(0.025g，0.234mmol)的500mL帕尔振荡瓶中。抽真空且用氮气重新填充(3×)后，在60psi下振荡混合物24小时。经滤纸过滤反应混合物，且在真空中移除挥发性组分，得到淡黄色油状物(0.41g)。
向上述粗产物(0.48g，1.77mmol)于CH2Cl2(7mL)中的溶液中添加DMAP(10.81mg，0.088mmol)、三乙胺(0.740mL，5.31mmol)。经15分钟分数份添加一缩二碳酸二叔丁酯(0.386g，1.77mmol)，且在室温下搅拌混合物18小时。在真空中移除挥发性组分后，将粗物质通过快速色谱(0-22%EtOAc/己烷)纯化，得到两个主要产物。第一个洗脱的是GW9b-1(0.54g)。1HNMR(CDCl3,δ=7.24ppm,400MHz)4.41/4.30(br m,1H),3.74(s,3H),3.48/3.33(br m,1H),2.37-2.22(m,0.2H),2.10-2.04(m,0.9H),1.98-1.19(m,0.9H),1.79(m,1H),1.46-1.32(m,12H),1.05/1.01/0.97(三个重叠的‘d’,分别为J＝6.8/6.6/6.3,3H)。第二个洗脱的是GW9b-2，受未鉴别的杂质污染(0.48g)。使用GW9b-2的洁净级份获得以下光谱数据：1H NMR(CDCl3,δ=7.24ppm,400MHz)4.23-4.12(两个重叠的‘dd’,1H),4.00-3.85(两个重叠的‘m’,1H),3.72/3.71(重叠的‘s’,3H),2.34-2.20(m,2H),1.69-1.55(1H),1.45/1.39(重叠的‘s’,9H),1.13-1.01(m,3.13H),0.97(d,J＝6.3,2.87H)。
实施例GW9步骤c
向GW9b-1(3.73g，14.50mmol)于乙醇(40mL)中的溶液中添加LiOH(0.417g，17.39mmol)于水(20.00mL)中的溶液，且在室温下搅拌混合物6小时。再添加LiOH(0.1g，4.3mmol)，且再继续搅拌2小时。蒸发大部分有机组分，且用乙醚(20mL)洗涤剩余级份。用冰水浴冷却水层，用1N HCl酸化至pH值为2-3，用EtOAc(50mL，4×)萃取，经Na2SO4干燥且浓缩，得到无色油状物，其在暴露于高真空之后变成白色固体(3.43g)。借助于使少量EtOAc处于回流条件的加热枪，将固体溶解于少量EtOAc中。冷却至室温后，添加5滴己烷且在环境温度下静置过夜，得到呈白色针状的酸GW9c，过滤且用己烷洗涤，在真空下干燥(2.02g)。1H NMR(CDCl3,δ=7.24ppm,400MHz)4.40(表观双二重峰,J＝8.3,2.8,1H),3.30(br m,1H),2.50(br m,1H),2.01-1.93(m,1H),1.68-1.59(m,1H),1.52(s,9H),1.29(d,J＝6.0,3H),1.07(d,J＝6.8,3H)。
实施例GW9步骤d
Figure BDA00001954398801772
自酸GW9c根据关于自酸GW3c制备前体GW3g描述的操作制备化合物GW9d(三氟乙酸盐；淡黄色泡沫)，其中例外为最终步骤采用(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-3-甲基丁酸。1H NMR(MeOD,δ=3.30ppm,400MHz):7.97-7.96(m,2H),7.88-7.82(m,8H),5.70(br d,J＝6.7,0.6H),5.29(dd,J＝10.3,1.2H),5.19-5.14(m,0.2H),~4.90(与HOD信号重叠,1H),4.38(m,1H),4.12-4.06(m,2H),3.71/3.67/3.64(重叠的‘s’,6H),2.73-2.68(m,0.6H),2.53-2.45(m,1.4H),2.35-2.18(m,2.5H),2.07-1.82(m,3.5H),1.53(d,J＝6.8,3.6H),1.40(d,J＝7.1,0.5H),1.30(d,J＝7.1,1.9H),1.17-0.83(重叠的‘d’的集合,18H)。LC(条件2a及2b):>95%同质性指数。LC/MS(条件Ia):RT=2.07min。LC/MS[M+H]+C44H59N8O6的分析计算值为795.46；实测值为795.44。
实施例GW9及实施例GW10
向GW9d(三氟乙酸盐；310mg，0.328mmol)于DMF(6mL)中的溶液中添加NCS(62.5mg，0.468mmol)，且在50℃下加热混合物9小时。在真空中移除大部分挥发性组分，且将残余物溶解于MeOH中，且经受反相HPLC纯化(MeOH/水/TFA；柱：Phenomenex Luna,30×100mm S10 Axia)以分离单氯代产物及二氯代产物。将单氯代产物用不同反相HPLC条件(ACN/TFA/水，Water-Sunfire 30×100mm S5)进一步纯化。得到呈三氟乙酸盐的实施例GW9(淡黄色泡沫；36mg)及实施例GW10(淡黄色泡沫；60mg)。实施例GW9：1H NMR(DMSO,δ=2.50ppm,400MHz):12.71-12.64(br m,1H),8.10(br s,1H),7.95-7.83(m,8H),7.64-7.58(m,1.4H),7.51(d,J＝8.6,0.6H),5.56(m,0.22H),5.33(m,0.33H),5.16(m,0.78H),5.04(m,0.67H),4.27-4.11(m,2H),3.93-3.86(‘m’与H2O信号重叠,2H),3.56-3.53(m,6H),2.62-1.64(‘m’的集合,8H),1.50-0.75(‘d’的集合,24H)。LC(条件2a及2b):>95%同质性指数。LC/MS(条件Ia):RT=2.66min。LC/MS[M+H]+C44H58ClN8O6的分析计算值为829.42；实测值为829.44。实施例GW10：1H NMR(DMSO,δ=2.50ppm,400MHz):12.7(br m,2H),8.00-7.80(m,8H),7.63(m,0.76H),7.51(d,J＝8.6,1.09H),7.08(m,0.09H),6.57(m,0.05H),5.33(d,J＝6.3,0.74H),5.05(表观三重峰,1.26H),4.25-4.12(m,2H),3.90-3.85(‘m’与H2O信号重叠,2H),3.58-3.49(m,6H),2.59-2.55(m,0.5H),2.33-2.13(m,2.7H),1.98-1.88(m,4.05H),1.71-1.63(m,0.75H),1.43(d,J＝6.6,3.7H),1.18(d,J＝6.3,2.05H),1.05-0.76(‘d’的集合,18.25H)。LC(条件2a及2b):>95%同质性指数。LC/MS(条件Ia):RT=3.29min。LC/MS[M+H]+C44H57Cl2N8O6的分析计算值为863.38；实测值为863.38。
实施例GW11及实施例GW12
Figure BDA00001954398801791
根据关于实施例GW9及实施例GW10的制备描述的操作制备实施例GW11及实施例GW12，其中例外为使用(S)-2-(甲氧基羰基氨基)丁酸替代(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-3-甲基丁酸。实施例GW11(三氟乙酸盐)：LC/MS(条件Ia):RT=2.57min。LC/MS[M+H]+C42H54ClN8O6的分析计算值为801.39；实测值为801.38。实施例GW12(三氟乙酸盐)：LC/MS(条件Ia):RT=3.24min。LC/MS[M+H]+C42H53Cl2N8O6的分析计算值为835.35；实测值为835.31。
实施例-OL1及实施例-OL2
Figure BDA00001954398801792
实施例-OL1步骤a
Figure BDA00001954398801793
将吡咯烷1e/4HCl(455mg，0.766mmol)、(S)-2-(4,4-二氟环己基)-2-(甲氧基羰基氨基)乙酸(385mg，1.532mmol)、HATU(612mg，1.609mmol)及DIEA(0.803mL，4.60mmol)混合于DMF(30mL)中，且在环境温度下搅拌所得黄色溶液3小时。在减压下移除溶剂且将残余物再溶解于甲醇中且通过制备型HPLC纯化。(溶剂A：10%乙腈/90%水/10mM NH4OAc；溶剂B：90%乙腈/10%水/10mM NH4OAc；柱：Sunfire Prep MS C18 30×150mm S10；波长：220nM；流速：40ml/min；Gradient：10%B至75%B，30分钟，保持时间为30分钟)。回收对应于产物OL1a的灰白色固体(0.37g，0.396mmol)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 11.67-12.26(2H,m),7.80(4H,d,J＝7.93Hz),7.67-7.76(1H,m),7.65(4H,d,J＝8.24Hz),7.54(2H,s),7.23-7.35(2H,m),5.07(2H,dd,J＝8.24,3.66Hz),4.54(2H,t,J＝7.93Hz),3.62(2H,d,J＝4.27Hz),3.55(6H,s),2.36(2H,t,J＝10.99Hz),2.20-2.30(2H,m),2.01(4H,br.s.),1.57-1.85(9H,m),1.19-1.53(6H,m),0.92-1.08(2H,m),0.71(2H,br.s.)。LC(条件OL3):Rt=0.79min。LC/MS:[M+H]+C48H55F4N8O6的分析计算值为915.42；实测值为915.8。HPLC纯度评估(条件OL4a):Rt=23.12min，同质性指数=98.4%。
实施例OL1及实施例OL2
将NCS(6.83mg，0.051mmol)添加至酰胺OL1a(39mg，0.043mmol)于DMF(2mL)中的溶液，且加热所得混合物至50℃后维持5小时。将反应混合物随后通过制备型HPLC纯化。溶剂A：10%MeOH/90%水/0.1%TFA；溶剂B：90%MeOH/10%水/0.1%TFA；柱：Sunfire Prep MS C18 30×100mm 5μ；波长：220nM；流速：40ml/min；梯度：0%B至75%B，30分钟，保持时间为2分钟。浓缩所述级份之后，分离实施例OL1(15mg)及实施例OL2(16mg)的三氟乙酸盐。实施例OL1：1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 8.11(1H,s),7.74-8.00(8H,m),7.40(1H,d,J＝8.55Hz),7.28(1H,d,J＝8.24Hz),4.91-5.05(2H,m),4.48-4.59(2H,m),3.74-3.87(2H,m),3.62-3.71(1H,m),3.55(3H,s),3.54(3H,s),2.19-2.43(6H,m),1.66-2.07(19H,m),1.56(1H,d,J＝10.38Hz),1.26-1.48(5H,m),0.89-1.02(2H,m),0.81(1H,s),0.70(1H,br.s.)。LC(条件OL3):Rt=0.87min。LC/MS:[M+H]+C48H54ClF4N8O6的分析计算值为949.38；实测值为949.6。HPLC纯度评估(条件OL4a):Rt=9.16min，同质性指数=94.7%。实施例OL2：1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 7.86(4H,d,J＝8.55Hz),7.79(4H,d,J＝8.24Hz),7.29(2H,d,J＝8.55Hz),4.95(2H,dd,J＝8.55,4.88Hz),4.52(2H,t,J＝7.63Hz),3.67(2H,t,J＝4.58Hz),3.54(6H,s),2.21-2.40(4H,m),2.01(4H,br.s.),1.67-1.95(13H,m),1.27-1.46(4H,m),0.94-1.02(2H,m),0.70(2H,d)。LC(条件OL3):Rt=1.01min。LC/MS:[M+H]+C48H53Cl2F4N8O6的分析计算值为983.34；实测值为983.7。HPLC纯度评估(条件OL4a):Rt=12.25min，同质性指数=94.7%。
实施例OL3、实施例OL4及实施例OL5
Figure BDA00001954398801811
实施例OL3步骤a
Figure BDA00001954398801812
将吡咯烷V9a(207mg，0.377mmol)、(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸(82mg，0.377mmol)、HATU(158mg，0.415mmol)及DIEA(0.132mL，0.755mmol)混合于DMF(5mL)中，且在环境温度下搅拌所得黄色溶液3小时。将混合物通过制备型HPLC纯化。溶剂A：10%MeOH/90%水/0.1%TFA；溶剂B：90%MeOH/10%水/0.1%TFA；柱：SunfirePrep MS C18 30×100mm 5μ；波长：220nM；流速：40ml/min；梯度：20%B至80%B，30分钟，保持时间为2分钟。回收对应于氨基甲酸酯OL3a的三氟乙酸盐的白色固体(0.19g)[注意：除形式状态以外，氨基甲酸酯OL3a与V9b相同]。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 8.18(1H,br.s.),8.12(1H,s),7.80-8.00(8H,m),7.34(1H,d,J＝8.55Hz),5.01(1H,t,J＝8.09Hz),4.79-4.90(1H,m),4.49(1H,t,J＝7.48Hz),3.74-3.87(3H,m),3.55(4H,s),3.18-3.32(2H,m),2.52-2.59(2H,m),2.37(2H,ddd,J＝19.99,13.43,6.26Hz),2.07(1H,br.s.),1.92(1H,dt,J＝13.20,6.68Hz),1.73(1H,ddd,J＝13.20,6.49,6.26Hz),1.06-1.52(17H,m),0.80(2H,br.s.),0.74(1H,br.s.)。LC(条件OL1):Rt=1.98min。LC/MS:[M+H]+C42H50N7O6的分析计算值为748.38；实测值为748.52。
实施例OL3步骤b
将氨基甲酸酯OL3a(0.19g，0.195mmol)溶解于CH2Cl2(15mL)中，且向其中装入4N HCl的二噁烷溶液(3mL，12.00mmol)。在环境温度下搅拌所得悬浮液2小时，且在减压下移除挥发物。回收对应于吡咯烷OL3b的盐酸盐(3×)的微黄色固体(0.12g)，其不经进一步纯化即使用。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 8.14(1H,s),7.83-8.01(10H,m),7.34(1H,d,J＝8.55Hz),5.06(1H,t,J＝7.93Hz),4.73(1H,t,J＝8.24Hz),4.50(1H,t,J＝7.48Hz),3.78-3.87(3H,m),3.64-3.74(2H,m),3.56(3H,s),3.44-3.51(1H,m),3.39-3.44(1H,m),3.20-3.35(2H,m),2.55-2.64(2H,m),2.34-2.43(1H,m),2.06-2.16(1H,m),1.87-1.97(2H,m),1.27-1.51(4H,m),1.12(1H,d,J＝4.58Hz),0.90-0.98(1H,m),0.82-0.89(1H,m),0.78(1H,br.s.)。LC(条件OL2):Rt=2.51min。LC/MS:[M+H]+C37H42N7O4的分析计算值为648.33；实测值为648.4。
实施例OL3步骤c
Figure BDA00001954398801822
将(S)-2-(4,4-二氟环己基)-2-(甲氧基羰基氨基)乙酸(87mg，0.345mmol)、吡咯烷OL3b的盐酸盐(3×)(261mg，0.345mmol)、HATU(144mg，0.379mmol)及DIEA(0.301mL，1.724mmol)混合于DMF(10mL)中，且在环境温度下搅拌所得淡棕色溶液2小时。将样品直接通过制备型HPLC纯化。溶剂A：10%MeOH/90%水/0.1%TFA；溶剂B：90%MeOH/10%水/0.1%TFA；柱：SunfirePrep MS C1830×100mm 5μ；波长：220nM；流速：40ml/min；梯度：30%B至70%B，30分钟，保持时间为2分钟。回收对应于酰胺OL3c的三氟乙酸盐(2×)的白色固体(132mg，0.117mmol，率产33.8%)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 11.68-12.18(2H,m),7.78(3H,t,J＝8.39Hz),7.73(1H,d,J＝9.46Hz),7.66(4H,d,J＝8.55Hz),7.54(2H,dd,J＝4.12,1.68Hz),7.28(2H,dd,J＝19.68,8.39Hz),5.08(2H,ddd,J＝8.39,4.12,3.97Hz),4.46-4.58(2H,m),3.82-3.94(2H,m),3.61-3.67(2H,m),3.54(6H,d,J＝1.53Hz),3.24(2H,t,J＝11.29Hz),2.33-2.41(2H,m),2.21-2.31(2H,m),1.91-2.08(4H,m),1.75-1.89(6H,m),1.58(1H,d,J＝13.43Hz),1.40-1.52(2H,m),1.26-1.40(3H,m),0.97-1.07(2H,m),0.67-0.79(2H,m)。LC(条件OL1):Rt=1.94min。LC/MS:[M+H]+C47H55N8O7的分析计算值为881.42；实测值为881.58。
实施例OL3、实施例OL4及实施例OL5
将NCS(22.66mg，0.170mmol)添加至实施例OL3c的三氟乙酸盐(115mg，0.131mmol)于DMF(3mL)中的溶液中，且加热所得混合物至50℃后维持5小时。将混合物通过制备型HPLC纯化。溶剂A：5%MeCN/95%水/10mMNH4Ac；溶剂B：95%MeCN/5%水/10mM NH4Ac；柱：Sunfire Prep MS C1830×100mm S10；波长：220nM；流速：35ml/min；梯度：10%B至100%B，30分钟，保持时间为2分钟。分离两种级份，其中第一个洗脱物对应于单氯代类似物(实施例OL4及OL5)的混合物且第二个洗脱物对应于二氯代类似物(实施例OL3)。浓缩对应的级份后，将混合物再溶解于甲醇中，且通过制备型HPLC分离单氯代区域选择性异构体。溶剂A：10%乙腈/90%水/0.1%TFA；溶剂B：90%乙腈/10%水/0.1%TFA；柱：Phenomenex-Luna 21×100mmS10；波长：220nM；流速：25ml/min；梯度：10%B至50%B，60分钟，保持时间为2分钟。分离呈三氟乙酸形式的对应于实施例OL4及实施例OL5的两种级份，且其相对区域选择性化学未测定。回收呈白色固体状的实施例OL3(36mg)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 12.55(2H,d,J＝1.22Hz),7.87(4H,d,J＝8.24Hz),7.78(4H,d,J＝7.02Hz),7.27(2H,dd,J＝18.62,8.55Hz),5.76(1H,s),4.91-5.01(2H,m),4.45-4.58(2H,m),3.85(2H,d,J＝9.77Hz),3.64-3.71(2H,m),3.54(6H,s),3.20-3.31(2H,m),2.21-2.35(4H,m),2.02(3H,d,J＝3.97Hz),1.59-1.93(9H,m),1.21-1.55(7H,m),0.93-1.02(2H,m),0.71(2H,m)。LC(条件OL3):Rt=0.95min。LC/MS:[M+H]+C47H53Cl2F2N8O7的分析计算值为949.34；实测值为949.8。HPLC纯度评估(条件OL4b):Rt=11.10min，同质性指数=100%。回收呈白色固体状的实施例OL4(10mg)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 14.62(1H,br.s.),12.59(1H,br.s.),8.12(1H,br.s.),7.87(8H,dd,J＝19.38,8.09Hz),7.80(2H,d,J＝7.63Hz),7.40(1H,d,J＝8.85Hz),7.26(1H,d,J＝8.24Hz),5.00(1H,t,J＝7.93Hz),4.95(1H,dd,J＝8.39,5.04Hz),4.54(1H,t,J＝7.48Hz),4.49(1H,t,J＝7.93Hz),3.86(3H,dd,J＝11.44,2.59Hz),3.79(1H,br.s.),3.65-3.72(2H,m),3.55(6H,d,J＝5.19Hz),3.19-3.28(2H,m),2.20-2.43(4H,m),1.89-2.07(5H,m),1.30-1.89(10H,m),0.92-1.03(2H,m),0.80(1H,br.s.),0.72(1H,br.s.)。LC(条件OL3):Rt=0.85min。LC/MS:[M+H]+C47H54ClF2N8O7的分析计算值为915.38；实测值为915.9。HPLC纯度评估(条件OL4a):Rt=9.03min，同质性指数=100%。回收呈白色固体状的实施例OL5(12mg，收率7.96%)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 14.62(1H,br.s.),12.59(1H,br.s.),8.09(1H,br.s.),7.87-7.98(4H,m),7.84(2H,d,J＝8.24Hz),7.80(2H,d,J＝8.24Hz),7.35(1H,d,J＝8.24Hz),7.29(1H,d,J＝8.55Hz),4.91-5.03(2H,m),4.51(2H,ddd,J＝15.64,7.71,7.48Hz),3.78-3.90(4H,m),3.64-3.71(1H,m),3.54(6H,s),3.16-3.31(2H,m),2.19-2.44(3H,m),2.02(3H,br.s.),1.64-1.95(7H,m),1.27-1.54(6H,m),0.96(2H,dd,J＝12.21,7.32Hz),0.81(1H,br.s.),0.70(1H,br.s.)。LC(条件OL3):Rt=0.86min。LC/MS:[M+H]+C47H54ClF2N8O7的分析计算值为915.38；实测值为915.9。HPLC纯度评估(条件OL4a):Rt=8.11min，同质性指数=100%。
实施例OL6
Figure BDA00001954398801841
可以吡咯烷V1b/4HCl及Cap 179(对映异构体-1)为起始物质根据关于实施例V1的合成描述的操作制备实施例OL6(三氟乙酸盐)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.11(1H,br.s.),7.74-8.01(8H,m),7.22-7.35(1H,m),7.14(1H,d,J＝7.53Hz),4.87-5.15(2H,m),4.47(2H,d,J＝7.03Hz),3.80(1H,br.s.),3.65(1H,br.s.),3.55(6H,br.s.),3.36(4H,br.s.),2.20-2.37(3H,m),2.13(1H,br.s.),1.90-2.05(2H,m),1.85(1H,br.s.),1.63-1.80(1H,m),1.38-1.61(2H,m),0.62-1.14(25H,m)。LC(条件2a及2b):>95%同质性指数。LC(条件OL4c):Rt=0.85min。LC/MS:[M+H]+C50H62ClN8O8的分析计算值为937.44；实测值为937.5。
实施例OL7
Figure BDA00001954398801851
实施例OL7步骤a
Figure BDA00001954398801852
经10分钟，向(2S,2'S)-2,2'-(5,5'-(联苯-4,4'-二基)双(1H-咪唑-5,2-二基))二吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(500mg，0.800mmol)于AcOH(30mL)中的溶液中逐滴添加溴(0.041mL，0.800mmol)的AcOH(0.8mL)溶液。在室温下搅拌所得反应混合物过夜，用饱和NaHCO3中和，随后用CH2Cl2萃取。经MgSO4干燥有机层且真空浓缩。将所得粗物质通过快速色谱(硅胶；依次为1:1EtOAc/Hex及2:1EtOAc/Hex)纯化，得到呈白色固体状的溴化物OL7a.1(200mg)及二溴化物OL7a.2(140mg)(注意：二溴化物首先自柱中洗脱)。
实施例OL7步骤b.1
Figure BDA00001954398801853
在室温下搅拌环丙基硼酸(13.49mg，0.157mmol)、磷酸三钾(90mg，0.423mmol)于水(0.03mL)中的混合物15分钟。随后添加溴化物OL7a.1(85mg，0.121mmol)、乙酸铅(II)(2.71mg，0.012mmol)、三环己基膦(6.8mg，0.024mmol)及甲苯(1mL)，且在110℃下搅拌反应混合物过夜。在真空中移除挥发性组分，且将残余物通过制备型HPLC使用以下条件纯化。柱：WATERS-Sunfire OBD 19×100mm S5；溶剂A=10%ACN-90%H2O-0.1%TFA；溶剂B=90%ACN-10%H2O-0.1%TFA；起始%B=10；最终%B=75；流速=20ml/min；梯度时间=20min。得到呈淡黄色固体状的偶联产物OL7b.1的三氟乙酸盐(79mg)。
实施例OL7步骤b.2
Figure BDA00001954398801861
用微波在110℃下加热二溴化物OL7a.2(140mg，0.179mmol)、环丙基硼酸(40.0mg，0.465mmol)、乙酸铅(II)(8.03mg，0.036mmol)、磷酸三钾(266mg，1.252mmol)、三环己基膦(20.07mg，0.072mmol)于甲苯(1.5mL)及水(0.05mL)中的混合物1.5小时。LCMS显示无反应发生。过滤混合物，且真空浓缩滤液，且将所得粗产物通过制备型HPLC纯化：柱=WATERS-SunfireOBD 19×100mm S5；溶剂A=10%ACN-90%H2O-0.1%TFA；溶剂B=90%ACN-10%H2O-0.1%TFA；起始%B=10。最终%B=70；流速=20ml/min；梯度时间=20min。获得呈淡黄色固体状的偶联产物OL7b.2的三氟乙酸盐。
实施例OL7步骤c
Figure BDA00001954398801862
向以上制备的氨基甲酸酯OL7b(79mg)于CH2Cl2(2mL)中的溶液中添加HCl(2mL，8.00mmol)(4N二噁烷溶液)，且在室温下搅拌所得混合物30分钟。在真空中移除挥发性组分，得到OL7c的盐酸盐(69mg)，其不经进一步纯化即用于下一步骤中。
实施例OL7
向(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-3-甲基丁酸(20.09mg，0.115mmol)、吡咯烷OL7/4HCl(35mg，0.057mmol)于DMF(1mL)中的混合物中添加DiPEA(0.06mL，0.34mmol)及HATU(43.6mg，0.115mmol)。在室温下搅拌反应混合物1小时，随后添加氨(2mL，2M甲醇溶液)，且再继续搅拌1小时。在真空中移除挥发性组分，且将残余物通过制备型HPLC纯化：柱=WATERS SunfireC18 19×100mm 5μ；溶剂A=10%MeOH-90%H2O-0.1%TFA；溶剂B=90%MeOH-10%H2O-0.1%TFA；起始%B=10；最终%B=75；流速=25ml/min；梯度时间=18min。获得呈灰白色固体状的实施例OL7的三氟乙酸盐(24mg)。Rt=1.68min(条件OL5a)。(M+H)+779.47。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 8.12(1H,br.s.),7.97(4H,dd,J＝12.97,8.39Hz),7.86-7.92(2H,m),7.80(2H,d,J＝8.24Hz),7.32(2H,t,J＝8.70Hz),5.14(1H,t,J＝7.02Hz),5.05(1H,t,J＝7.48Hz),4.12(2H,t,J＝6.71Hz),3.76-3.92(4H,m),3.54(6H,s),2.39(2H,d,J＝6.10Hz),1.95-2.21(9H,m),1.08(2H,d,J＝8.24Hz),0.84(7H,t,J＝7.17Hz),0.79(6H,d,J＝6.41Hz),0.67-0.74(1H,m)
实施例OL8-OL14
通过采用适当的前体及关于实施例OL7的制备描述的操作制备呈三氟乙酸盐形式的实施例OL8-OL14。
Figure BDA00001954398801871
实施例OL15
Figure BDA00001954398801881
实施例OL15步骤a
Figure BDA00001954398801882
在140℃下在微波中，加热溴化物OL7a.1(200mg，0.284mmol)、CsF(0.021mL，0.568mmol)、Pd(Ph3P)4(19.71mg，0.017mmol)及2-烯丙基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(0.107mL，0.568mmol)于THF(3mL)中的混合物1小时。在真空中移除溶剂，且将残余物通过制备型HPLC纯化。柱：Phenomenex Luna 10μ(30×100mm)；溶剂A=5%CH3CN-95%H2O-10mmNH4Oac；溶剂B=95%CH3CN-5%H2O-10mm NH4OAc；起始%B=30；最终%B=00；流速=25ml/min；梯度时间=48min。获得呈白色固体状的产物OL15a(90mg)。
实施例OL15
根据关于实施例OL7的合成描述的操作将氨基甲酸酯OL15a制备成实施例OL15的三氟乙酸盐。Rt=1.73min(条件OL5a)。(M+H)+779.53。
实施例OL16
自适当的前体根据关于实施例OL15的合成描述的操作制备实施例OL16(三氟乙酸盐)。Rt=1.73min(条件OL5a)。(M+H)+863.11。
实施例OL17-OL18
Figure BDA00001954398801884
在0℃下，向OL15a(70mg，0.105mmol)、二碘甲烷(0.102mL，1.263mmol)于甲苯(0.5mL)中的溶液中快速添加二乙基锌(1.263mL，1.263mmol)(1M庚烷溶液)。在0℃下搅拌所得混合物1.5小时，随后在室温下搅拌4小时。向混合物中添加饱和NaHCO3水溶液，且用CH2Cl2萃取混合物。经MgSO4干燥合并的有机层且浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化：柱：PhenomenexLuna 10μ(30×100mm)；溶剂A=5%CH3CN-95%H2O-10mm NH4Oac；溶剂B=95%CH3CN-5%H2O-10mm NH4OAc；起始%B=30；最终%B=100；流速=25ml/min；梯度时间=25min。将所得物质(白色固体，40mg)溶解于CH2Cl2(1mL)中，且用HCl(1mL，4.00mmol)(4N二噁烷溶液)处理。在室温下搅拌混合物1小时。在真空中移除挥发性组分，得到产物(35mg)，根据关于实施例OL7的合成描述的操作使其与(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-3-甲基丁酸偶联。将所获得的粗残余物通过制备型HPLC纯化：柱=WATERS Sunfire C18 19×100mm 5μ；溶剂A=10%MeOH-90%H2O-0.1%TFA；溶剂B=90%MeOH-10%H2O-0.1%TFA；起始%B=20；最终%B=85；流速=25ml/min；梯度时间=27min。分离两种级份，其中第一个洗脱物对应于实施例OL18的三氟乙酸盐(Rt=1.74min(条件OL5a)。(M+H)+793.54)且第二个洗脱物对应于实施例OL17的三氟乙酸盐(Rt=1.77min(条件OL5a)。(M+H)+793.53)
实施例OL19
Figure BDA00001954398801891
实施例OL19步骤a
Figure BDA00001954398801892
在室温下搅拌1-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑(59.1mg，0.284mmol)、磷酸三钾(121mg，0.568mmol)于水(0.2mL)中的混合物15分钟。随后添加溴化物OL7a.1(100mg，0.142mmol)、Pd(Ph3P)4(9.85mg，0.008mmol)及DMF(2mL)，且在130℃下在微波辐射下搅拌反应混合物40分钟。在真空中移除挥发性组分，且将残余物通过制备型HPLC使用以下条件纯化。柱：Phenomenex Luna 10μ(30×100mm)；溶剂A=10%ACN-90%H2O-10mm NH4OAc；溶剂B=90%ACN-10%H2O-10mmNH4OAc；起始%B=10；最终%B=80；流速=25ml/min；梯度时间=15min。得到呈淡黄色固体状的偶联产物OL19a(120mg)。
实施例OL19步骤b
Figure BDA00001954398801901
向以上制备的氨基甲酸酯OL19a(120mg)于CH2Cl2(1mL)中的溶液中添加HCl(1mL，4.00mmol)(4N二噁烷溶液)，且在室温下搅拌所得混合物1小时。在真空中移除挥发性组分，得到OL19b的盐酸盐(87mg)，其不经进一步纯化即用于下一步骤中。
实施例OL19
向(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-3-甲基丁酸(15.30mg，0.087mmol)、吡咯烷OL19b/4HCl(30mg，0.044mmol)于DMF(1mL)中的混合物中添加DiPEA(0.053mL，0.306mmol)及HATU(33.2mg，0.087mmol)。在室温下搅拌反应混合物1小时，在真空中移除挥发性组分，且将残余物通过制备型HPLC纯化：柱=WATERS Atlantis OBD 30×100mm 5μ；溶剂A=10%MeOH-90%H2O-0.1%TFA；溶剂B=90%MeOH-10%H2O-0.1%TFA；起始%B=20；最终%B=75；流速=25ml/min；梯度时间=25min。获得呈白色固体状的实施例OL19的三氟乙酸盐(33mg)。Rt=1.63min(条件OL5a)。(M+H)+819.40。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 8.13(1H,s),7.88-7.96(2H,m),7.78-7.88(4H,m),7.57(1H,br.s.),7.43-7.51(2H,m),7.33(2H,dd,J＝8.39,3.51Hz),6.42(1H,br.s.),5.10-5.18(2H,m),4.11(2H,td,J＝7.93,2.75Hz),3.78-3.91(4H,m),3.59-3.66(3H,m),3.54(6H,d,J＝1.53Hz),2.35-2.45(1H,m),2.30(1H,d,J＝7.32Hz),2.13-2.22(2H,m),1.93-2.13(6H,m),0.89(5H,d,J＝6.71Hz),0.83(6H,t,J＝6.87Hz),0.78(3H,d,J＝6.71Hz)。
实施例OL20-OL25
通过采用适当的前体及关于实施例OL19的制备描述的操作制备呈三氟乙酸盐形式的实施例OL20-OL25。
Figure BDA00001954398801911
实施例DSTL-1
Figure BDA00001954398801913
实施例DSTL-1步骤a
将二苯基磷酰基叠氮化物(17.09mL，79mmol)添加至6-溴萘-2-甲酸(16.5g，65.7mmol)、三乙胺(18.32mL，131mmol)及叔丁醇(7.54mL，79mmol)于甲苯(225mL)中的溶液中，且在100℃下搅拌4小时。通过旋转蒸发移除挥发物，且将残余物吸收于EtOAc(500mL)中，且用水及盐水洗涤。浓缩后形成析出物，通过过滤分离且用1:1Et2O/Hex洗涤，得到实施例DSTL-1步骤a(10.5g)。浓缩母液后，分离第二批次纯度较小产物(9.8g)；综合收率(93%)。LC/MS(条件J4):RT=3.44min。LC/MS[M+Na]+C15H16BrNO2的分析计算值为345.02；实测值为345.03。
实施例DSTL-1步骤b
Figure BDA00001954398801922
用乙酸(50mL)稀释实施例DSTL-1步骤a(5g，15.52mmol)，且经20分钟逐滴添加发烟硝酸(2.3mL)。搅拌反应混合物2小时，且通过过滤分离产物，分配在DCM与饱和NaHCO3溶液之间。浓缩有机层，且获得5.7g实施例DSTL-1步骤b(定量)。LC/MS(条件J4):RT=3.52min。LC/MS[M+Na]+C15H15BrN2O4的分析计算值为390.02.；实测值为390.99。
实施例DSTL-1步骤c
Figure BDA00001954398801923
将脱水氯化锡(II)(3g，16.34mmol)添加至实施例DSTL-1步骤b(2g，5.47mmol)于MeOH(100mL)中的溶液中，且在70℃下搅拌溶液18小时。通过旋转蒸发移除溶剂，且在高真空下干燥实施例DSTL-1步骤c(假定理论值为1.25g)。LC/MS(条件J4):RT=1.49min。LC/MS[M+H]+C10H9BrN2的分析计算值为237.00；实测值为236.96。
实施例DSTL-1步骤d
Figure BDA00001954398801931
将HATU(2.085g，5.48mmol)添加至实施例DSTL-1步骤c(1.25g，5.48mmol)、实施例1步骤b(1.246g，5.48mmol)及许尼希碱(Hunig's base)(7.09g，54.8mmol)于DMF(70mL)中的溶液中，且搅拌反应混合物6小时，随后分配在EtOAc(500mL)与饱和NaHCO3(150mL)之间。通过经由硅藻土过滤移除析出的锡盐，且浓缩有机相，得到残余物，将残余物吸收于AcOH(100mL)中，且在60℃下加热18小时。通过在高真空下旋转蒸发移除溶剂，且将残余物吸收于CH2Cl2中，且用饱和NaHCO3溶液洗涤。浓缩后，将粗产物装载(DCM)于Thompson硅胶柱筒(110g)且进行梯度洗脱；15-100%B，1L，得到实施例DSTL-1步骤d(420mg，44%)。LC/MS(条件J4):RT=2.51min。LC/MS[M+H]+C21H22BrN3O2的分析计算值为430.10；实测值为430.06。
实施例DSTL-1步骤d.1
Figure BDA00001954398801932
自实施例1步骤b根据专利申请WO 2008/021927中关于脱亚甲基(desmethano)类似物的合成描述的操作制备实施例DSTL-1步骤d.1。
实施例DSTL-1步骤e
Figure BDA00001954398801933
向实施例DSTL-1步骤d.1(560mg，1.39mmol)于DMF(15mL)中的溶液中添加NCS(203mg，1.52mmol)。在50℃下加热反应混合物16小时。用氮气吹洗溶液以蒸发DMF，且将粗残余物装载(DCM)于ThompsonSiO2柱(80g)且进行梯度洗脱(BIOTAGE)。区段1：10-100%B，1.5L。区段2：保持100%B 300mL。(A/B己烷/EtOAc)。得到分离的实施例DSTL-1步骤e(589.1mg，收率92%)。LC/MS(条件-D4):RT=2.61min。LC/MS[M+Na]+C19H22ClN3O2的分析计算值为462.04；实测值为462.07。
实施例DSTL-1步骤f
Figure BDA00001954398801941
将四(三苯基膦)钯(76mg，0.066mmol)一次性添加至于螺旋盖压力容器中的实施例DSTL-1步骤e(580mg，1.32mmol)、双(频那醇合)二硼烷(671mg，2.64mmol)及乙酸钾(324mg，3.30mmol)于二噁烷(12mL)溶液中的经搅拌悬浮液中。将反应混合物抽真空，且用氩气(3×)冲洗并放置于预热油浴(80℃)中且搅拌16小时。冷却后，用EtOAc稀释反应混合物，用饱和NaHCO3溶液、盐水洗涤且经Na2SO4干燥。将粗残余物装载(DCM)于ThompsonSiO2柱(80g)且进行梯度洗脱(BIOTAGE)。区段1：5-100%B，1.5L。区段2：保持100%B 300mL。(A/B CH2Cl2/EtOAc)。得到呈黄色泡沫的分离的实施例DTSL-1步骤f(714.7mg，95%)。LC/MS(条件-D4):RT=2.69min。LC/MS[M+H]+C25H34BClN3O4的分析计算值为486.24；实测值为486.26。
实施例DSTL-1步骤g
在氩气下，将四(三苯基膦)钯(27.0mg，0.023mmol)一次性添加至于螺旋盖压力容器中的实施例DSTL-1步骤d(200mg，0.467mmol)、实施例DSTL-1步骤f(250mg，0.514mmol)及NaHCO3(196mg，2.335mmol)于DME(4mL)及水(1mL)的经脱气溶液中的经搅拌悬浮液中。将溶液抽真空，且装入氩气(3×)并放置于预热油浴(80℃)中且搅拌14小时。用EtOAc(10mL)、THF(2mL)及MeOH(1mL)稀释混合物，用盐水洗涤且经Na2SO4干燥。浓缩移除溶剂后，将残余物装载于ThompsonSiO2柱(80g)且梯度洗脱(BIOTAGE)。区段1：20-100%B，1.5L。区段2：保持100%B 300mL；A/B己烷/EtOAc。得到呈黄褐色固体状的分离的DSTL-1步骤g(195.0mg，52.6%)。LC/MS(条件-D4):RT=2.40min。LC/MS[M+H]+C40H44ClN6O4的分析计算值为707.31；实测值为707.43。
实施例DSTL-1步骤h
Figure BDA00001954398801951
将冷的(0℃)4N HCl的二噁烷(4mL)添加至实施例DSTL-1步骤g(65mg，0.092mmol)于MeOH(1mL)中的经搅拌溶液中。在室温下搅拌混合物3小时，浓缩，且放置于高真空下，得到呈橙褐色固体状且呈四盐酸盐的DSTL-1步骤h。LC/MS(条件-D4):RT=1.63min。LC/MS[M+H]+C30H28ClN6的分析计算值为507.21；实测值为507.26。
实施例DSTL-1
自实施例DSTL-1步骤h根据关于实施例GW2的制备描述的操作制备实施例DSTL-1。通过制备型HPLC(0-50%B)经25分钟的梯度(40ml/min)使用Waters-SunFire柱(30×100mm，S5)实现纯化，其中溶剂B=90%CH3CN-10%H2O-0.1%TFA且A=5%CH3CN-95%H2O-0.1%TFA)。得到呈白色固体状的分离的实施例DSTL-1(70.4mg，67.7%)。1H NMR(MeOD,500MHz,δ):8.47(d,J＝8.6Hz,1H),8.44(s,1H),8.15(s,1H),8.13(s,1H),7.91(d,J＝8.6Hz,2H),7.85(d,J＝8.6Hz,2H),7.80(d,J＝8.6Hz,1H),5.34-5.31(m,1H),5.07(t,J＝7.32Hz,1H),4.61-4.58(m,2H),3.39-3.31(m,1H),3.75-3.72(m,1H),3.69(s,3H),3.68(s,3H),2.83-2.81(m,1H),2.64-2.59(m,1H),2.49-2.48(m,2H),2.23-2.14(m,3H),2.05-2.03(m,1H),1.18-1.12(m,2H),1.05-0.92(m,13H),0.83-0.81(m,1H)。LC/MS(条件-D4):RT=2.24min。LC/MS[M+H]+C44H50ClN8O6的分析计算值为821.36；实测值为821.54。
实施例DSTL-2
Figure BDA00001954398801952
自实施例DSTL-1步骤h根据关于实施例GW2的制备描述的操作制备实施例DSTL-2，其中例外为使用(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸代替Cap-51。通过制备型HPLC(0-50%B)经25分钟的梯度(40ml/min)使用Waters-SunFire柱(30×100mm，S5)实现纯化，其中溶剂B=90%CH3CN-10%H2O-0.1%TFA且A=5%CH3CN-95%H2O-0.1%TFA。得到呈白色固体状的分离的实施例DSTL-2(18.0mg)。LC/MS(条件-D4):RT=2.04min。LC/MS[M+H]+C48H54ClN8O6的分析计算值为905.38；实测值为905.60。
实施例DSTL-3及DSTL-4
Figure BDA00001954398801961
实施例DSTL-3步骤a及DSTL-4步骤a
Figure BDA00001954398801962
将溴(0.079mL，1.54mmol)于AcOH(1mL)中的溶液逐份添加至实施例1步骤d(1.0g，1.541mmol)于AcOH(40mL)中的经搅拌溶液中，且在室温下搅拌混合物3小时。在真空中移除溶剂，且将残余物吸收于DCM中，且用饱和NaHCO3溶液洗涤。再用DCM萃取水层两次，且用盐水洗涤合并的有机萃取物且干燥(Na2SO4)。将残余物装载(DCM)于Thompson硅胶柱筒(160g)且用30-100%B，2L洗脱。区段2：保持100%B，800mL。A/B己烷/EtOAc。得到分离的3种组分；起始物质(303.6mg)；实施例DSTL-3步骤a(X=H；382.1mg)；黄色固体。LC/MS(条件-D4):RT=2.21min。LC/MS[M+H]+C38H44BrN6O4的分析计算值为729.26；实测值为729.28；实施例DTSL-4步骤a(X=Br；287.2mg)；淡黄色固体。LC/MS(条件-D4):RT=2.62min。LC/MS[M+H]+C38H43Br2N6O4的分析计算值为807.17；实测值为807.33。
实施例DSTL-3步骤b及DSTL-4步骤b
Figure BDA00001954398801971
将实施例DSTL-3步骤b及DSTL-4步骤b的产物分别进行进一步操作。如实施例DSTL-1步骤h的操作中所述，进行保护基的脱除。X=H；实施例DTSL-3步骤b：黄色固体，33.1mg(97%纯)；LC/MS(条件-D4):RT=1.49min。LC/MS[M+H]+C28H28BrN6的分析计算值为529.16；实测值为529.24。X=Br；实施例DTSL-4步骤b：黄色固体，33mg(96%纯)；LC/MS(条件-D4):RT=1.82min。LC/MS[M+H]+C28H27Br2N6的分析计算值为607.07；实测值为607.16。
实施例DSTL-3
自实施例DSTL-3步骤b根据关于实施例GW2的制备描述的操作制备实施例DSTL-3。通过制备型HPLC(0-50%B)经30分钟的梯度(40ml/min)使用Waters-SunFire柱(30×100mm，S5)实现纯化，其中B=90%CH3CN-10%H2O-0.1%TFA且A=5%CH3CN-95%H2O-0.1%TFA。得到呈白色固体状的分离的实施例DSTL-3(29.0mg)。LC/MS(条件-D4):RT=2.07min。LC/MS[M+H]+C42H50BrN8O6的分析计算值为843.30；实测值为843.39。
实施例DSTL-4
自实施例DSTL-4步骤b根据关于实施例GW2的制备描述的操作制备实施例DSTL-4。通过制备型HPLC(0-50%B)经30分钟的梯度(40ml/min)使用Waters-SunFire柱(30×100mm，S5)实现纯化，其中B=90%CH3CN-10%H2O-0.1%TFA且A=5%CH3CN-95%H2O-0.1%TFA。得到呈白色固体状的分离的实施例DSTL-4(30.2mg)。1H NMR(MeOD,500MHz,δ):7.82(s,8H),5.08-5.05(m,2H),4.58(表观双峰,J＝6.7Hz,2H),3.76-3.74(m,2H),3.67(s,6H),2.57-2.52(m,2H),2.50-2.44(m,2H),2.22-2.17(m,2H),2.06-2.01(m,2H),1.12-1.08(m,2H),1.04(d,J＝6.7Hz,6H),0.95(d,J＝6.7Hz,6H),0.84-0.82(m,2H)。LC/MS(条件D4):RT=2.56min。LC/MS[M+H]+C42H49BrN8O6的分析计算值为921.31；实测值为921.30。
实施例DSTL-5
Figure BDA00001954398801981
实施例DSTL-5步骤a
Figure BDA00001954398801982
在室温下，将Accufluor(45-50%于氧化铝(alumina)上)(345mg，1.2mmol)一次性添加至实施例1步骤d(1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(5,5'-(联苯-4,4'-二基)双(1H-咪唑-5,2-二基))双(2-氮杂二环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯)(500mg，0.77mmol)于无水DMF(5mL)中的经搅拌悬浮液中。将混合物放置于60℃的预热油浴中且搅拌4小时，随后在高真空下通过旋转蒸发移除溶剂。将粗产物装载于Thompson90g硅胶柱筒，且用10-100%B，2L洗脱，且保持100%B，1L(溶剂B=EtOAc；溶剂A=己烷)。应用第二梯度，用0-100%B，2L洗脱(溶剂B=甲醇；溶剂A=EtOAc)。收集三个级份：呈黄色固体状的实施例DSTL-5步骤a(X=F)(1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(5,5'-(联苯-4,4'-二基)双(4-氟-1H-咪唑-5,2-二基))双(2-氮杂二环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯)(45.0mg，7%)；呈黄色固体状的实施例DSTL-5步骤a(X=H)((1R,3S,5R)-3-(5-(4'-(2-((1R,3S,5R)-2-(叔丁氧基羰基)-2-氮杂二环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)联苯-4-基)-4-氟-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂二环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(193mg，32%)，及回收的起始物质(153mg，24%)。
实施例DSTL-5步骤a X=F：将第一洗脱化合物的样品(约10mg)通过制备型HPLC(0-100%B)经30分钟的梯度(40ml/min)使用Phenomenex Luna柱(30×100mm，10μ)进一步纯化，其中溶剂B=90%CH3CN-10%H2O-0.1%TFA且A=5%CH3CN-95%H2O-0.1%TFA。分离得到淡黄色固体(4.6mg)。LC/MS(条件-D4):RT=4.43min。LC/MS[M+H]+C38H43F2N6O4的分析计算值为685.33；实测值为685.38。
实施例DSTL-5步骤a X=H：将第二洗脱化合物的样品(约15mg)通过制备型HPLC(0-100%B)经30分钟的梯度(40ml/min)使用Phenomenex Luna柱(30×100mm，10μ)进一步纯化，其中溶剂B=90%CH3CN-10%H2O-0.1%TFA且A=5%CH3CN-95%H2O-0.1%TFA。分离得到灰白色固体(11.2mg)。LC/MS(条件-D4):RT=4.43min。LC/MS[M+H]+C38H44FN6O4的分析计算值为667.34；实测值为667.40。
实施例DSTL-5步骤b
Figure BDA00001954398801991
将实施例DSTL-5步骤a(X=F)及(X=H)的产物分别进行进一步操作。如实施例DSTL-1步骤h的操作所述，进行保护基的脱除。
实施例DTSL-5步骤b(X=F)：黄色固体，23.4mg；LC/MS(条件-D4):RT=2.89min。LC/MS[M+H]+C28H27F2N6的分析计算值为485.22；实测值为485.25。
实施例DTSL-5步骤b(X=H)：18mg(95%纯)；LC/MS(条件-D4):RT=2.55min。LC/MS[M+H]+C28H28FN6的分析计算值为467.25；实测值为467.27。
实施例DSTL-5
自实施例DSTL-5步骤b(X=H)根据关于实施例GW2的制备描述的操作制备实施例DSTL-5。通过制备型HPLC(0-50%B)经30分钟的梯度(40ml/min)使用Waters-SunFire柱(30×100mm，S5)实现纯化，其中B=90%CH3CN-10%H2O-0.1%TFA且A=5%CH3CN-95%H2O-0.1%TFA。得到呈浅黄色固体状的分离的实施例DSTL-5(37.3mg，39%)。1H NMR(MeOD,500MHz,δ):7.88(s,1H),7.84(d,J＝8.5Hz,2H),7.80(d,J＝8.5Hz,2H),7.77(d,J＝8.5Hz,2H),7.68(d,J＝8.5,2H),5.13(t,J＝7.0Hz,1H),5.04(t,J＝6.1Hz,1H),4.56(d,J＝6.7Hz,2H)3.82(br.s,1H),3.68-3.67(m,7H),2.72-2.68(m,1H),2.51-2.43(m,3H),2.21-2.14(m,2H),2.09(br.s,1H),2.03(br.s,1H),1.15-1.09(m,2H),1.02(d,J＝6.7Hz,6H),0.94(t,J=7.0Hz,6H),0.90(br.s,1H),0.81(br.s,1H)。LC/MS(条件-D4):RT=3.45min。LC/MS:[M+H]+C42H50FN8O6的分析计算值为781.39；实测值为781.54。
实施例DSTL-6
Figure BDA00001954398802001
自实施例DSTL-5步骤b(X=H)根据关于实施例GW2的制备描述的操作制备实施例DSTL-6，其中例外为使用(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸代替Cap-51。通过制备型HPLC(0-50%B)经25分钟的梯度(40ml/min)使用Waters-SunFire柱(30×100mm，S5)实现纯化，其中溶剂B=90%CH3CN-10%H2O-0.1%TFA且A=5%CH3CN-95%H2O-0.1%TFA。得到呈白色固体状的分离的实施例DSTL-6(37.1mg，36%)。LC/MS(条件-D4):RT=3.17min。LC/MS[M+H]+C48H54FN8O6的分析计算值为865.41；实测值为865.55。
实施例DSTL-7
自实施例DSTL-5步骤b(X=F)根据关于实施例GW2的制备描述的操作制备实施例DSTL-7，其中例外为使用(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸代替Cap-51。通过制备型HPLC(0-50%B)经25分钟的梯度(40ml/min)使用Waters-SunFire柱(30×100mm，S5)实现纯化，其中溶剂B=90%CH3CN-10%H2O-0.1%TFA且A=5%CH3CN-95%H2O-0.1%TFA。得到呈白色固体状的分离的实施例DSTL-7(14mg，25%)。1H NMR(MeOD,500MHz,δ)7.72(d,J＝8.5Hz,4H),7.64(d,J＝8.5Hz,4H),5.03(t,J＝6.7Hz,2H),4.63(d,J＝7.6Hz,2H),3.97-3.93(m,4H),3.72(br.s,2H),3.67(s,6H),3.42-3.37(m,4H),2.44-2.42(m,4H),2.02(br.s,4H),1.63-1.57(m,6H),1.46-1.43(m,2H),1.14-1.19(m,2H),0.80(br.s,2H)：LC/MS(条件-D4):RT=3.17min。LC/MS[M+H]+C46H53F2N8O6的分析计算值为883.40；实测值为883.57。
实施例DSTL-8
Figure BDA00001954398802011
实施例DSTL-8步骤a
在室温下，将Accufluor(45-50%于氧化铝上)(274mg，0.92mmol)一次性添加至实施例GW1步骤a(2S,2'S,5S,5'S)-5,5'-(5,5'-(联苯-4,4'-二基)双(1H-咪唑-5,2-二基))双(2-甲基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯)(400mg，0.6mmol)于无水DMF(4mL)中的经搅拌悬浮液中。将混合物放置于60℃的预热油浴中且搅拌4小时，随后再添加135mg Accufluor，且在60℃下继续搅拌16小时。通过在高真空下旋转蒸发移除溶剂，且将粗产物装载于Thompson90g硅胶柱筒，且用10-100%B，2L洗脱，且保持100%B，1L(溶剂B=EtOAc；溶剂A=己烷)。应用第二梯度，用0-100%B，2L洗脱(溶剂B=甲醇；溶剂A=EtOAc)。收集三个级份：呈黄橙色固体状的实施例DSTL-8步骤a(X=F)(2S,2'S,5S,5'S)-5,5'-(5,5'-(联苯-4,4'-二基)双(4-氟-1H-咪唑-5,2-二基))双(2-甲基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯)(33mg，5.1%)。LC/MS(条件-D4):RT=4.64min。LC/MS[M+H]+C38H47F2N6O4的分析计算值为689.36；实测值为689.50。呈黄橙色固体状的实施例DSTL-8步骤a(X=H)(2S,5S)-2-(5-(4'-(2-((2S,5S)-1-(叔丁氧基羰基)-5-甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)联苯-4-基)-4-氟-1H-咪唑-2-基)-5-甲基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(108.6mg，17%)。LC/MS(条件-D4):RT=3.83min。LC/MS[M+H]+C38H48FN6O4的分析计算值为671.37；实测值为671.48。回收呈红橙色固体状的起始物质(321.2mg，80%)。
实施例DSTL-8步骤b
将实施例DSTL-8步骤a(X=F)及(X=H)的产物分别进行进一步操作。如实施例DSTL-1步骤h的操作所述，进行保护基的脱除。
实施例DTSL-8步骤b(X=F)：黄色固体，22.7mg；LC/MS(条件-D4):RT=3.03min。LC/MS[M+H]+C28H30F2N6的分析计算值为489.26；实测值为489.35。
实施例DTSL-8步骤b(X=H)：35mg(95%纯)；LC/MS(条件-D4):RT=2.63min。LC/MS[M+H]+C28H31FN6的分析计算值为471.27；实测值为471.33。
实施例DSTL-8
自实施例DSTL-8步骤b(X=H)根据关于实施例GW2的制备描述的操作制备实施例DSTL-5。通过制备型HPLC(0-50%B)经30分钟的梯度(40ml/min)使用Waters-SunFire柱(30×100mm，S5)实现纯化，其中B=90%CH3CN-10%H2O-0.1%TFA且A=5%CH3CN-95%H2O-0.1%TFA。得到呈淡桃红色固体状的分离的实施例DSTL-8(31.9mg，41%)。LC/MS(条件-D4):RT=3.66min。LC/MS[M+H]+C42H54FN8O6的分析计算值为785.42；实测值为785.48。
实施例DSTL-9
Figure BDA00001954398802022
自实施例DSTL-8步骤b(X=H)根据关于实施例GW2的制备描述的操作制备实施例DSTL-9，其中例外为使用(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸代替Cap-51。通过制备型HPLC(0-50%B)经25分钟的梯度(40ml/min)使用Waters-SunFire柱(30×100mm，S5)实现纯化，其中溶剂B=90%CH3CN-10%H2O-0.1%TFA且A=5%CH3CN-95%H2O-0.1%TFA。得到呈浅黄色固体状的分离的实施例DSTL-9(27.2mg，32%)。LC/MS(条件-D4):RT=3.37min。LC/MS[M+H]+C46H58FN8O8的分析计算值为869.44；实测值为869.54.
实施例DSTL-10
Figure BDA00001954398802031
自实施例DSTL-8步骤b(X=F)根据关于实施例GW2的制备描述的操作制备实施例DSTL-10，其中例外为使用(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸代替Cap-51。通过制备型HPLC(0-50%B)经25分钟的梯度(40ml/min)使用Waters-SunFire柱(30×100mm，S5)实现纯化，其中溶剂B=90%CH3CN-10%H2O-0.1%TFA且A=5%CH3CN-95%H2O-0.1%TFA。得到呈浅黄色固体状的分离的实施例DSTL-10(13.8mg，25%)。LC/MS(条件-D4):RT=4.28min。LC/MS[M+H]+C46H57F2N8O8的分析计算值为887.43；实测值为887.50。
实施例DSTL-11
Figure BDA00001954398802032
实施例DSTL-11步骤a
以与专利申请20080213US 10889A USCIP中化合物J5类似的方式进行DSTL-11步骤a的制备。LC/MS(条件-D4):RT=2.22min。LC/MS[M+H]+C22H27BrN3O4的分析计算值为476.12；实测值为478.17。
实施例DSTL-11步骤b
Figure BDA00001954398802041
将5N氢氧化钠(1.469mL，7.4mmol)添加至DSTL-11步骤a(1R,3S,5R)-3-(4-(4-溴苯基)-5-(乙氧基羰基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂二环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(1.75g，3.7mmol)于乙醇(40mL)中的溶液中。在50℃下搅拌混合物16小时且再添加5N NaOH(1.5mL)。在60℃下搅拌混合物6小时，且再添加5N NaOH(0.75mL)且在60℃下继续搅拌16小时。通过旋转蒸发移除乙醇，且将残余物吸收于乙酸乙酯中，且中和至pH=5(约20mL 1NHCl直至接近于pH=7，随后用pH=5的磷酸盐缓冲液中和)。分离有机层，用盐水洗涤，干燥且浓缩。得到呈白色固体状的分离的实施例DSTL-11步骤b(1.6g，92%)。LC/MS(条件-D4):RT=1.78min。LC/MS[M+H]+C20H22BrN3O4的分析计算值为448.09；实测值为447.97。
实施例DSTL-11步骤c
Figure BDA00001954398802042
将CDI(0.58g，3.57mmol)一次性添加至DSTL-11步骤b 4-(4-溴苯基)-2-((1R,3S,5R)-2-(叔丁氧基羰基)-2-氮杂二环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-甲酸(1.6g，3.57mmol)于无水THF(30mL)中的经搅拌溶液中。在50℃下搅拌混合物4小时，随后冷却至室温且添加NH4OH(浓)(4.96mL，35.7mmol)。先搅拌混合物16小时，用EtOAc稀释，用饱和NaHCO3溶液、盐水洗涤且干燥。将粗产物装载于Thompson160g硅胶柱筒且用40-100%B，3L洗脱，接着保持在100%B，1L。(溶剂B=EtOAc；溶剂A=己烷)。分离实施例DSTL-11步骤c(1.76g，99%)。LC/MS(条件-D4):RT=1.75min。LC/MS[M+H]+C20H24BrN4O3的分析计算值为449.10；实测值为449.06。
实施例DSTL-11步骤d
将2,4,6-三氯-1,3,5-三嗪(氰尿酰氯)(168mg，0.91mmol)一次性添加至实施例DSTL-11步骤c(1R,3S,5R)-3-(4-(4-溴苯基)-5-氨甲酰基-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂二环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(903mg，1.82mmol)于无水DMF(4mL)中的经搅拌溶液中。搅拌混合物2小时，随后温热至50℃后维持16小时。再添加氰尿酰氯(20mg)，且再在50℃下进一步搅拌混合物24小时，用EtOAc及水稀释，且用饱和NaHCO3溶液、盐水洗涤有机层且干燥(Na2SO4)。将粗产物装载于Thompson90g硅胶柱筒，且用25-100%B，1.5L洗脱，接着保持在100%B，500mL。(溶剂B=EtOAc；溶剂A=己烷)。得到呈黄褐色泡沫的分离的实施例DSTL-11步骤d(346g，60%)。LC/MS(条件-D4):RT=3.93min。LC/MS[M+H]+C20H22BrN4O2的分析计算值为431.09；实测值为431.01。
实施例DSTL-11步骤e
Figure BDA00001954398802052
将四(三苯基)钯(45.8mg，0.04mmol)添加至于厚壁式有螺旋盖管中的实施例DSTL-11步骤d(1R,3S,5R)-3-(5-(4-溴苯基)-4-氰基-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂二环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(340mg，0.79mmol)、(1R,3S,5R)-3-(4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂二环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(393mg，0.871mmol)及NaHCO3(333mg，3.96mmol)于DME(6mL)及水(1.5mL)中的经氩气吹洗的悬浮液中。用氩气吹洗反应混合物，密封且浸于预热油浴(80℃)中且搅拌14小时。用EtOAc稀释混合物，用饱和NaHCO3溶液、盐水洗涤且干燥(Na2SO4)。将粗产物装载于Thompson90g硅胶柱筒，且用35-100%B，1.5L洗脱，接着保持在100%B，0.5L。(溶剂B=EtOAc；溶剂A=己烷)。得到呈淡黄色泡沫的分离的实施例DSTL-11步骤e(200mg，36%)。
将小份样品(约20mg)通过制备型HPLC(0%B-100%B，经25分钟的梯度，40ml/min)使用Phenomenex Gemini柱(30×100mm，10μ)进行进一步纯化，其中溶剂B=95%CH3CN-5%H2O-10mM NH4OAc且A=5%CH3CN-95%H2O-10mM NH4OAc。(12.9mg)。LC/MS(条件-D4):RT=3.51min。LC/MS[M+H]+C39H44N7O4的分析计算值为674.35；实测值为674.29。
实施例DSTL-11步骤f
Figure BDA00001954398802061
如实施例DSTL-1步骤h的操作所述，脱除保护基后获得实施例DSTL-11步骤f的产物。LC/MS(条件-D4):RT=2.36min。LC/MS[M+H]+C29H28N7的分析计算值为474.24；实测值为474.13。
实施例DSTL-11
自实施例DSTL-11步骤f根据关于实施例GW2的制备描述的操作制备实施例DSTL-11。通过制备型HPLC(0-50%B)经30分钟的梯度(40ml/min)使用Waters-SunFire柱(30×100mm，S5)实现纯化，其中B=90%CH3CN-10%H2O-0.1%TFA且A=5%CH3CN-95%H2O-0.1%TFA。得到呈灰白色固体状的分离的实施例DSTL-11(21.5mg，31%)。1H NMR(MeOD,500MHz,δ):7.93-7.82(m,9H),5.15-5.08(m,2H),4.58-4.56(m,2H),3.82(br.s,1H),3.72(br.s,1H)3.67(s,6H),2.73-2.67(m,1H),2.50-2.46(m,3H),2.21-2.14(m,2H),2.09(br.s,1H),2.03(br.s,1H),1.14-1.10(m,2H),1.05-1.02(m,6H),0.97-0.93(m,6H),0.90(br.s,1H),0.83(br.s,1H)。LC/MS(条件-D4):RT=3.25min。LC/MS[M+H]+C43H50N9O6的分析计算值为780.39；实测值为788.31。
实施例DSTL-12
Figure BDA00001954398802062
自实施例DSTL-11步骤f根据关于实施例GW2的制备描述的操作制备实施例DSTL-12，其中例外为使用(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸代替Cap-51。通过制备型HPLC(0-50%B)经25分钟的梯度(40ml/min)使用Waters-SunFire柱(30×100mm，S5)实现纯化，其中溶剂B=90%CH3CN-10%H2O-0.1%TFA且A=5%CH3CN-95%H2O-0.1%TFA。得到呈灰白色固体状的分离的实施例DSTL-12(26.7mg，35%)。LC/MS(条件-D4):RT=2.98min。LC/MS[M+H]+C47H54N9O8的分析计算值为872.41；实测值为872.35。
实施例JLR-1
Figure BDA00001954398802071
实施例JLR-1步骤a
Figure BDA00001954398802072
关于实施例JLR-1步骤a的合成，参见方法专利申请WO 2009/020825。
实施例JLR-1步骤b
将1M溴于AcOH(0.4mL)中的溶液添加至实施例JLR-1步骤a(250mg，0.40mmol)于乙酸(15mL)中的溶液中，且搅拌3小时。将反应混合物倾入DCM(100mL)上且用饱和NaHCO3溶液及固体NaHCO3处理直至pH=中性。浓缩有机相且在真空下干燥。反应得到起始物质:单溴化物:二溴化物的1:1:1混合物，施加(DCM)于ThompsonSiO2柱(25g)后分离。梯度洗脱(BIOTAGE)(15-100%B，500mL)得到实施例JLR-1步骤b(180mg)。LC/MS(条件J4):RT=2.75min。LC/MS[M+H]+C36H44BrN6O4的分析计算值为705.26；实测值为705.22。
实施例JLR-1步骤c
Figure BDA00001954398802081
将4N HCl于二噁烷中的溶液(4mL)添加至实施例JLR-1步骤b(38mg，0.054mmol)的MeOH(4mL)溶液中且搅拌4小时。在真空下移除溶剂，且在高真空下干燥四盐酸盐。LC/MS(条件J4):RT=1.75min。LC/MS[M+H]+C26H28BrN6的分析计算值为503.16；实测值为503.26。
实施例JLR-1
自实施例JLR-1步骤c根据关于实施例GW2的制备描述的操作制备实施例JLR-1。通过制备型HPLC phenonmenex-Luna柱(30×100mm，S10)经25分钟的梯度自15-100%B(40ml/min)进行纯化，其中溶剂B=90%MeOH-10%H2O-0.1%TFA且A=5%MeOH-95%H2O-0.1%TFA。LC/MS(条件J4):RT=2.61min。LC/MS[M+H]+C40H50BrN8O6的分析计算值为819.31；实测值为819.23。
实施例JLR-2
Figure BDA00001954398802082
实施例JLR-2步骤a
将碘(162mg，0.640mmol)添加至实施例JLR-1步骤a(400mg，0.640mmol)及NaHCO3(161mg，1.921mmol)于二噁烷(15mL)及水(15mL)中的溶液中，且搅拌反应混合物6小时，用10%Na2S2O3溶液(40mL)淬灭且用EtOAc/THF(2:1)稀释。浓缩有机相，且将粗产物施用(DCM)于Thompson硅胶柱(40g)且用35-100%B，1L(A/B DCM/EtOAc)洗脱，得到起始物质、二碘化物(255mg)及实施例JLR-2步骤a(46mg，9%)的混合物。LC/MS(条件J4):RT=2.45min。LC/MS[M+H]+C36H44IN6O4的分析计算值为751.24；实测值为751.18。
实施例JLR-2步骤b
Figure BDA00001954398802091
将4N HCl于二噁烷中的溶液(5mL)添加至JLR-2步骤a(46mg，0.061mmol)的MeOH(5mL)溶液中且搅拌4小时。在真空下移除溶剂，且在高真空下干燥四盐酸盐。LC/MS(条件J4):RT=1.70min。LC/MS[M+H]+C26H28IN6的分析计算值为551.13；实测值为551.09。
实施例JLR-2
自实施例JLR-2步骤b根据关于实施例GW2的制备描述的操作制备实施例JLR-2。通过半制备型HPLC；Dynamax 6A半制备型C8柱；5%-95%B经30分钟(20ml/min)进行纯化，其中溶剂B=90%CH3CN-10%H2O-1%NH4OAc且A=5%CH3CN-95%H2O-1%NH4OAc。LC/MS(条件J4):RT=2.35min。LC/MS[M+H]+C40H50IN8O6的分析计算值为865.29；实测值为865.31。
实施例JLR-3
Figure BDA00001954398802092
实施例JLR-3步骤a
将NCS(175mg，1.310mmol)添加至实施例DSTL-1步骤d(510mg，1.191mmol)于DMF(10mL)中的溶液中，且在50℃下搅拌18小时。通过在高真空下旋转蒸发移除溶剂，且将残余物装载(DCM)于Thomson硅胶柱筒(80g)。自25-100%B，750mL(A/B Hex/EtOAc)进行梯度洗脱，得到实施例JLR-3步骤a(250mg，46%)。1H NMR(MeOD,500MHz,δ):8.58(s,1H),8.39(d,J＝8.6Hz,1H),7.97(s,1H),7.93(d,J＝7.6Hz,1H),4.98(s,1H),3.70(s,1H),2.76-2.71(m,1H),2.50-2.45(m,1H),1.86(s,1H),1.48/1.12(s,9H),0.96-0.92(m,1H),0.79-0.77(m,1H)。LC/MS(条件J4):RT=3.13min。LC/MS[M+H]+C21H22BrClN3O2的分析计算值为464.06；实测值为464.05。
实施例JLR-3步骤a.1
Figure BDA00001954398802101
自实施例DSTL-1步骤d.1根据专利申请WO 2008/021927中关于其脱亚甲基类似物的制备描述的操作制备实施例JLR-3步骤a.1。
实施例JLR-3步骤b
Figure BDA00001954398802102
自实施例JLR-3步骤a及实施例JLR-3步骤a.1根据关于实施例DSTL-1步骤g的制备描述的操作制备实施例JLR-3步骤b来得到实施例JLR-3步骤b。LC/MS(条件J4):RT=2.72min。LC/MS[M+H]+C40H44ClN6O4的分析计算值为707.31；实测值为707.44。
实施例JLR-3步骤c
Figure BDA00001954398802103
自实施例JLR-3步骤b根据关于DSTL-3步骤a的制备描述的操作制备实施例JLR-3步骤c来得到实施例JLR-3步骤c。LC/MS(条件J4):RT=3.30min。LC/MS[M+H]+C40H43BrClN6O4的分析计算值为787.21；实测值为787.34。
实施例JLR-3步骤d
Figure BDA00001954398802111
自实施例JLR-3步骤c根据实施例JLR-1步骤b的操作中描述的操作制备实施例JLR-3步骤d。LC/MS(条件J4):RT=2.37min。LC/MS[M+H]+C30H27BrClN6的分析计算值为587.12；实测值为587.14。
实施例JLR-3
自实施例JLR-3步骤d根据关于实施例GW2的制备描述的操作制备实施例JLR-3。通过制备型HPLC phenonmenex-Luna柱(30×100mm，S10)经18分钟的梯度自15-100%B(40ml/min)进行纯化，其中溶剂B=90%MeOH-10%H2O-0.1%TFA且A=5%MeOH-95%H2O-0.1%TFA。1H NMR(MeOD,500MHz,δ):8.69-8.68(m,1H),8.52-8.50(m,1H),8.18-8.16(m,1H),7.98-7.96(m,1H),7.91-7.90(m,4H),5.34-5.34(m,1H),5.09-5.06(m,1H),4.62-4.58(m,2H),3.91(br s,1H),3.76(br s,1H)3.69(s,6H),2.77-2.73(m,1H),2.64-2.59(m,1H),2.51-2.48(m,2H),2.23-2.16(m,3H),2.06(br s,1H),1.17-1.12(m,2H),1.06-0.92(m,13H),0.83(m,1H)。LC/MS(条件J4):RT=3.14min。LC/MS[M+H]+C44H4BrClN8O6的分析计算值为901.27；实测值为901.45。
实施例JLR-4
Figure BDA00001954398802112
实施例JLR-4步骤a
Figure BDA00001954398802113
将许尼希碱(1.2g，9mmol)添加至2-溴-1-(4-溴苯基)乙酮(2.5g，8.99mmol)及(2S,5S)-1-(叔丁氧基羰基)-5-甲基吡咯烷-2-甲酸(1.9g，8.29mmol)于乙腈(75mL)中的溶液中，且在24℃下搅拌6小时。浓缩反应混合物，且将残余物吸收于EtOAc中且用水洗涤。浓缩得到白色固体，其溶解于二甲苯(90mL)中。添加乙酸铵(4.23g，70.4mmol)，且在135℃下在螺旋盖压力容器中搅拌溶液3.5小时。用EtOAc(400mL)稀释反应混合物且用饱和NaHCO3溶液洗涤且浓缩。将粗产物装载(DCM)于80gThomson硅胶柱筒，且自15-100%B，1L(A/B Hex/EtOAc)进行梯度洗脱，得到实施例JLR-4步骤a(收率未测定)。LC/MS(条件J4):RT=2.21min。LC/MS[M+H]+C19H25BrN3O2的分析计算值为406.12；实测值为406.10。[注意：关于起始甲酸的合成，参见专利申请US2009/0068140]
实施例JLR-4步骤b
Figure BDA00001954398802121
将NCS(161mg，1.21mmol)添加至实施例JLR-4步骤a(700mg，1.7mmol)于DMF(10mL)中的溶液中，且在50℃下搅拌18小时。再添加NCS(50mg)，且继续反应6小时，随后通过氮气吹洗移除溶剂。将粗产物装载(DCM)于40gThompson硅胶柱筒，且自15-100%B，750mL(A/B Hex/EtOAc)进行梯度洗脱，得到实施例JLR-4步骤b(580mg，70%)。1H NMR(MeOD,500MHz,δ):7.62(表观单峰,4H),4.77(br.s,1H),4.03(br.s,1H),2.24(br s,2H),2.16-2.11(m,1H)1.79(br.s,1H),1.47-1.25(m,12H)。LC/MS(条件J4):RT=3.33min。LC/MS[M+H]+C19H24BrClN3O2的分析计算值为440.08；实测值为440.0。
实施例JLR-4步骤c
将EEDQ(1.67g，6.75mmol)添加至实施例DSTL-1步骤c(1.6g，6.75mmol)及(2S,5S)-1-(叔丁氧基羰基)-5-甲基吡咯烷-2-甲酸(1.55g，6.75mmol)于DCM(100mL)中的溶液中，且搅拌6小时。(注意：双苯胺不完全可溶)。用DCM(1体积)稀释反应混合物且用一半饱和NaHCO3溶液洗涤。浓缩得到固体(2.5g)。LC/MS(条件J4):RT=3.07min。LC/MS[M+H]+C21H27BrN3O3的分析计算值为448.13；实测值为448.11。
将粗固体(2.5g，5.58mmol)吸收于AcOH(200mL)中，且在60℃下搅拌18小时。在高真空下浓缩移除溶剂。将残余物吸收于DCM中，用饱和NaHCO3溶液洗涤且浓缩。将残余物装载(DCM)于80gThompson硅胶柱筒且自15%至100%B，750mL(A/B Hex/EtOAc)进行梯度洗脱，得到实施例JLR-4步骤c(2.6g)。1H NMR(MeOD,500MHz,δ):8.36-8.35(m,2H),8.0(d,J＝9Hz,1H),7.91(dd,J＝9,2Hz,1H),7.87(d,J＝9Hz,1H),5.31-5.28(m,1H),4.17(br.s,1H),2.59-2.56(m,1H),2.39-2.31(m,2H)1.86-1.83(m,1H),1.52-1.19(m,12H)。LC/MS(条件J4):RT=2.57min。LC/MS[M+H]+C21H25BrN3O2的分析计算值为430.12；实测值为430.09。
实施例JLR-4步骤d
Figure BDA00001954398802131
自实施例JLR-4步骤c根据关于实施例DSTL-1步骤f的制备描述的操作制备实施例JLR-4步骤d。LC/MS(条件J4):RT=2.86min。LC/MS[M+H]+C27H37BN3O4的分析计算值为478.29；实测值为478.25。
实施例JLR-4步骤e
Figure BDA00001954398802132
自实施例JLR-4步骤d及实施例JLR-4步骤b根据关于DSTL-1步骤g的制备描述的操作制备实施例JLR-4步骤e来得到实施例JLR-4步骤e。1HNMR(MeOD,500MHz,δ):8.53(d,J＝8.6Hz,1H),8.49(s,1H),8.20(dd,J＝8.6,2Hz,2H),7.97(d,J＝8.6Hz,2H),7.92(d,J＝8.6Hz,2H),7.88(d,J＝8.9Hz,1H),5.32(t,J＝6.4Hz,1H),4.85(br.s,1H),4.20(br.s,1H),4.06(br.s,1H),2.59-2.58(m,1H),2.44-2.28(m,4H),2.19-2.15(m,1H),1.89-1.84(m,1H),1.83-1.79(m,1H),1.54-1.20(m,24H)。LC/MS(条件J4):RT=3.18min。LC/MS[M+H]+C40H48ClN6O4的分析计算值为711.34；实测值为711.31。
实施例JLR-4步骤f
自实施例JLR-4步骤e根据关于实施例JLR-1步骤b的制备描述的操作制备实施例JLR-4步骤f来得到实施例JLR-4步骤f。LC/MS(条件J4):RT=2.19min。LC/MS[M+H]+C30H32ClN6的分析计算值为511.24；实测值为711.23。
实施例JLR-4
自实施例JLR-4步骤f根据关于实施例GW2的制备描述的操作制备实施例JLR-4。通过制备型HPLC LunaAxia柱(30×100mm，C18)经25分钟的梯度自15-100%B(40ml/min)进行纯化，其中溶剂B=90%MeOH-10%H2O-0.1%TFA且A=5%MeOH-95%H2O-0.1%TFA。LC/MS(条件J4):RT=3.12min。LC/MS[M+H]+C44H54ClN8O6的分析计算值为825.39；实测值为825.31。
实施例JLR-5
Figure BDA00001954398802142
自实施例实施例JLR-4步骤f根据关于实施例GW2的制备描述的操作制备实施例JLR-5，其中例外为使用(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸。通过制备型HPLC Luna Axia柱(30×100mm，C18)经25分钟的梯度自15-100%B(40ml/min)进行纯化，其中溶剂B=90%MeOH-10%H2O-0.1%TFA且A=5%MeOH-95%H2O-0.1%TFA。LC/MS(条件J4):RT=2.85min。LC/MS[M+H]+C48H58ClN8O6的分析计算值为909.41；实测值为909.39。
实施例ZY1
Figure BDA00001954398802151
实施例ZY1步骤a
Figure BDA00001954398802152
将HATU(151mg，0.40mmol)添加至4,4'-双(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂二环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)联苯的盐酸盐(实施例1e)(107mg，0.18mmol)及(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-2-((S)-四氢-2H-吡喃-3-基)乙酸(cap-177a)(86mg，0.40mmol)于DMF(1.5mL)及DIPEA(0.25mL，1.4mmol)中的溶液中，且在室温下搅拌混合物2小时。用MeOH稀释反应混合物，且通过制备型HPLC(含0.1%TFA缓冲液的H2O-MeOH)纯化，得到呈淡黄色固体状的(S,1S,1'S)-2,2'-((1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(4,4'-(联苯-4,4'-二基)双(1H-咪唑-4,2-二基))双(2-氮杂二环[3.1.0]己烷-3,2-二基))双(2-氧代-1-((S)-四氢-2H-吡喃-3-基)乙烷-2,1-二基)二氨基甲酸二甲酯的三氟乙酸盐(148.5mg)。LC/MS保留时间=1.61min；m/z=847[M+H]+。(柱：Phenonenex-Luna 3.0×50mm S10。溶剂A=90%水：10%甲醇：0.1%TFA。溶剂B=10%水：90%甲醇：0.1%TFA。流速=4mL/min。起始%B=0。最终%B=100。梯度时间=3min。波长=220)。1H NMR(400MHz,MeOD)δppm 7.80-7.91(m,10H),5.13(dd,J＝9.3,7.0Hz,2H),4.79(d,J＝8.3Hz,2H),3.84-3.97(m,2H),3.70-3.80(m,4H),3.68(s,6H),3.52-3.63(m,2H),3.34-3.42(m,2H),2.61-2.75(m,2H),2.43-2.54(m,2H),1.98-2.15(m,4H),1.67-1.84(m,4H),1.48-1.65(m,4H),0.98-1.16(m,2H),0.77-0.93(m,2H)。
实施例ZY1
将NCS(8.2mg，0.061mmol)添加至(S,1S,1'S)-2,2'-((1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(4,4'-(联苯-4,4'-二基)双(1H-咪唑-4,2-二基))双(2-氮杂二环[3.1.0]己烷-3,2-二基))双(2-氧代-1-((S)-四氢-2H-吡喃-3-基)乙烷-2,1-二基)二氨基甲酸二甲酯的三氟乙酸盐(实施例ZY1步骤a)(33mg，0.031mmol)于DMF(1mL)中的溶液中，且在50℃下搅拌混合物16小时。用MeOH稀释反应混合物，过滤且通过制备型HPLC(含0.1%TFA缓冲液的H2O-MeOH)纯化，得到呈白色固体状的(S,1S,1'S)-2,2'-((1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(4,4'-(联苯-4,4'-二基)双(5-氯-1H-咪唑-4,2-二基))双(2-氮杂二环[3.1.0]己烷-3,2-二基))双(2-氧代-1-((S)-四氢-2H-吡喃-3-基)乙烷-2,1-二基)二氨基甲酸二甲酯的三氟乙酸盐(实施例ZY1)(25mg)。LC/MS保留时间=1.92min；m/z=458[M/2+H]+。(柱：Phenonenex-Luna3.0×50mm S10。溶剂A=95%水/5%甲醇/10mM乙酸铵。溶剂B=5%水/95%甲醇/10mM乙酸铵。流速=4mL/min。起始%B=0。最终%B=100。梯度时间=2min。波长=220)。1H NMR(400MHz,MeOD)δppm 7.77-7.85(m,8H),5.03(dd,J＝8.8,6.0Hz,2H),4.75-4.86(m,2H),3.71-3.89(m,6H),3.67(s,6H),3.36-3.62(m,4H),2.38-2.57(m,4H),1.94-2.12(m,4H),1.69-1.87(m,4H),1.46-1.65(m,4H),1.03-1.17(m,2H),0.77-0.85(m,2H)。
实施例ZY2
Figure BDA00001954398802161
实施例ZY2步骤a
Figure BDA00001954398802162
将HATU(140mg，0.37mmol)添加至4,4'-双(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂二环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)联苯的盐酸盐(实施例1e)(100mg，0.17mmol)及(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-2-((R)-四氢-2H-吡喃-3-基)乙酸(cap-177b)(80mg，0.37mmol)于DMF(1.5mL)及DIPEA(0.23mL，1.3mmol)中的溶液中，且在室温下搅拌混合物3小时。随后用MeOH稀释反应混合物，且通过制备型HPLC(含0.1%三氟乙酸缓冲液的H2O-MeOH)纯化，得到呈白色固体状的(R,1S,1'S)-2,2'-((1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(4,4'-(联苯-4,4'-二基)双(1H-咪唑-4,2-二基))双(2-氮杂二环[3.1.0]己烷-3,2-二基))双(2-氧代-1-((R)-四氢-2H-吡喃-3-基)乙烷-2,1-二基)二氨基甲酸二甲酯的三氟乙酸盐(实施例ZY2步骤a)(76.2mg)。LC/MS保留时间=1.53min；m/z=847[M+H]+。(柱：Phenonenex-Luna 3.0×50mm S10。溶剂A=90%水：10%甲醇：0.1%TFA。溶剂B=10%水：90%甲醇：0.1%TFA。流速=4mL/min。起始%B=0。最终%B=100。梯度时间=3min。波长=220)。1H NMR(400MHz,MeOD)δppm7.75-7.96(m,10H),5.13(dd,J＝9.3,7.0Hz,2H),4.60(d,J＝8.3Hz,2H),3.77-3.95(m,6H),3.67(s,6H),3.24-3.47(m,4H),2.62-2.76(m,2H),2.40-2.57(m,2H),1.97-2.19(m,4H),1.54-1.82(m,6H),1.36-1.54(m,2H),1.00-1.17(m,2H),0.79-0.93(m,2H)。
实施例ZY2
将NCS(5.2mg，0.039mmol)添加至(R,1S,1'S)-2,2'-((1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(4,4'-(联苯-4,4'-二基)双(1H-咪唑-4,2-二基))双(2-氮杂二环[3.1.0]己烷-3,2-二基))双(2-氧代-1-((R)-四氢-2H-吡喃-3-基)乙烷-2,1-二基)二氨基甲酸二甲酯的三氟乙酸盐(实施例ZY2步骤a)(21mg，0.020mmol)于DMF(1mL)中的溶液中，且在50℃下搅拌混合物16小时。随后用MeOH稀释反应混合物，过滤且通过制备型HPLC(含0.1%TFA缓冲液的H2O-MeOH)纯化，得到呈白色固体状的(R,1S,1'S)-2,2'-((1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(4,4'-(联苯-4,4'-二基)双(5-氯-1H-咪唑-4,2-二基))双(2-氮杂二环[3.1.0]己烷-3,2-二基))双(2-氧代-1-((R)-四氢-2H-吡喃-3-基)乙烷-2,1-二基)二氨基甲酸二甲酯的三氟乙酸盐(实施例ZY2)(10.8mg)。LC/MS保留时间=1.92min；m/z=458[M/2+H]+。(柱：Phenonenex-Luna 3.0×50mm S10。溶剂A=95%水/5%甲醇/10mM乙酸铵。溶剂B=5%水/95%甲醇/10mM乙酸铵。流速=4mL/min。起始%B=0。最终%B=100。梯度时间=2min。波长=220)。1H NMR(400MHz,MeOD)δppm7.76-7.87(m,8H),5.04(dd,J＝8.8,6.0Hz,2H),4.61(d,J＝8.3Hz,2H),3.75-3.95(m,6H),3.66(s,6H),3.35-3.48(m,4H),2.39-2.58(m,4H),1.97-2.16(m,4H),1.73-1.87(m,2H),1.40-1.73(m,6H),1.01-1.16(m,2H),0.81(d,J＝1.8Hz,2H)。
实施例ZY3
实施例ZY3步骤a
Figure BDA00001954398802181
将HATU(82mg，0.22mmol)添加至4,4'-双(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂二环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)联苯的盐酸盐(实施例1e)(58.3mg，0.098mmol)及(R)-2-(甲氧基羰基氨基)-2-((R)-四氢-2H-吡喃-3-基)乙酸(cap 117c)(49mg，0.23mmol)于DMF(1mL)及DIPEA(0.14mL，0.79mmol)中的溶液中，且在室温下搅拌混合物3小时。随后用MeOH稀释反应混合物，过滤且通过制备型HPLC(含0.1%三氟乙酸缓冲液的H2O-MeOH)纯化，得到呈白色固体状的(R,1R,1'R)-2,2'-((1R,1'R,3S,3′S,5R,5'R)-3,3'-(4,4'-(联苯-4,4'-二基)双(1H-咪唑-4,2-二基))双(2-氮杂二环[3.1.0]己烷-3,2-二基))双(2-氧代-1-((R)-四氢-2H-吡喃-3-基)乙烷-2,1-二基)二氨基甲酸二甲酯的三氟乙酸盐(实施例ZY3步骤a)(79.8mg)。LC/MS保留时间=1.63min；m/z=847[M+H]+。(柱：Phenonenex-Luna 3.0×50mm S10。溶剂A=90%水：10%甲醇：0.1%TFA。溶剂B=10%水：90%甲醇：0.1%TFA。流速=4mL/min。起始%B=0。最终%B=100。梯度时间=3min。波长=220)。
实施例ZY3
将NCS(6.7mg，0.050mmol)添加至(R,1R,1'R)-2,2'-((1R,1'R,3S,3′S,5R,5'R)-3,3'-(4,4'-(联苯-4,4'-二基)双(1H-咪唑-4,2-二基))双(2-氮杂二环[3.1.0]己烷-3,2-二基))双(2-氧代-1-((R)-四氢-2H-吡喃-3-基)乙烷-2,1-二基)二氨基甲酸二甲酯的三氟乙酸盐(实施例ZY3步骤a)(27mg，0.025mmol)于DMF(1mL)中的溶液中，且在50℃下搅拌混合物16小时。随后用MeOH稀释反应混合物，过滤且通过制备型HPLC(含0.1%三氟乙酸缓冲液的H2O-MeOH)纯化，得到呈白色固体状的(R,1R,1'R)-2,2'-((1R,1'R,3S,3′S,5R,5'R)-3,3'-(4,4'-(联苯-4,4'-二基)双(5-氯-1H-咪唑-4,2-二基))双(2-氮杂二环[3.1.0]己烷-3,2-二基))双(2-氧代-1-((R)-四氢-2H-吡喃-3-基)乙烷-2,1-二基)二氨基甲酸二甲酯的三氟乙酸盐(实施例ZY3)(15.8mg)。LC/MS保留时间=1.93min；m/z=458[M/2+H]+。(柱：Phenonenex-Luna 3.0×50mm S10。溶剂A=95%水/5%甲醇/10mM乙酸铵。溶剂B=5%水/95%甲醇/10mM乙酸铵。流速=4mL/min。起始%B=0。最终%B=100。梯度时间=2min。波长=220)。
实施例ZY4
Figure BDA00001954398802191
实施例ZY4步骤a
Figure BDA00001954398802192
将HATU(75mg，0.20mmol)添加至4,4'-双(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂二环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)联苯的盐酸盐(实施例1e)(53.5mg，0.090mmol)及(R)-2-(甲氧基羰基氨基)-2-((S)-四氢-2H-吡喃-3-基)乙酸(cap117d)(45mg，0.21mmol)于DMF(1mL)及DIPEA(0.13mL，0.72mmol)溶液中，且在室温下搅拌混合物3小时。随后用MeOH稀释反应混合物，过滤且通过制备型HPLC(含0.1%三氟乙酸缓冲液的H2O-MeOH)纯化，得到呈白色固体状的(S,1R,1'R)-2,2'-((1R,1'R,3S,3′S,5R,5'R)-3,3'-(4,4'-(联苯-4,4'-二基)双(1H-咪唑-4,2-二基))双(2-氮杂二环[3.1.0]己烷-3,2-二基))双(2-氧代-1-((S)-四氢-2H-吡喃-3-基)乙烷-2,1-二基)二氨基甲酸二甲酯的三氟乙酸盐(实施例ZY4步骤a)(78.5mg)。LC/MS保留时间=1.57min；m/z=847[M+H]+。(柱：Phenonenex-Luna 3.0×50mm S10。溶剂A=90%水：10%甲醇：0.1%TFA。溶剂B=10%水：90%甲醇：0.1%TFA。流速=4mL/min。起始%B=0。最终%B=100。梯度时间=3min。波长=220)。
实施例ZY4
将NCS(9.2mg，0.069mmol)添加至(S,1R,1'R)-2,2'-((1R,1'R,3S,3′S,5R,5'R)-3,3'-(4,4'-(联苯-4,4'-二基)双(1H-咪唑-4,2-二基))双(2-氮杂二环[3.1.0]己烷-3,2-二基))双(2-氧代-1-((S)-四氢-2H-吡喃-3-基)乙烷-2,1-二基)二氨基甲酸二甲酯的三氟乙酸盐(实施例ZY4步骤a)(37mg，0.034mmol)于DMF(1mL)中的溶液中，且在50℃下搅拌混合物16小时。随后用MeOH稀释反应混合物，过滤且通过制备型HPLC(含0.1%三氟乙酸缓冲液的H2O-MeOH)纯化，得到呈白色固体状的(S,1R,1'R)-2,2'-((1R,1'R,3S,3′S,5R,5'R)-3,3'-(4,4'-(联苯-4,4'-二基)双(5-氯-1H-咪唑-4,2-二基))双(2-氮杂二环[3.1.0]己烷-3,2-二基))双(2-氧代-1-((S)-四氢-2H-吡喃-3-基)乙烷-2,1-二基)二氨基甲酸二甲酯的三氟乙酸盐(实施例ZY4)(25mg)。LC/MS保留时间=1.93min；m/z=458[M/2+H]+。(柱：Phenonenex-Luna 3.0×50mm S10。溶剂A=95%水/5%甲醇/10mM乙酸铵。溶剂B=5%水/95%甲醇/10mM乙酸铵。流速=4mL/min。起始%B=0。最终%B=100。梯度时间=2min。波长=220)。
实施例ZY5
Figure BDA00001954398802201
将NCS(5.3mg，0.039mmol)添加至(S,1S,1'S)-2,2'-((1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(4,4'-(联苯-4,4'-二基)双(1H-咪唑-4,2-二基))双(2-氮杂二环[3.1.0]己烷-3,2-二基))双(2-氧代-1-((S)-四氢-2H-吡喃-3-基)乙烷-2,1-二基)二氨基甲酸二甲酯的三氟乙酸盐(实施例ZY1步骤a)(42.4mg，0.039mmol)的DMF(1mL)溶液中，且在50℃下搅拌混合物16小时。随后用MeOH稀释反应混合物，过滤且通过制备型HPLC(含0.1%三氟乙酸缓冲液的H2O-MeOH)纯化，得到呈三氟乙酸盐形式的实施例ZY5(11.7mg，白色固体)。LC/MS保留时间=2.04min；m/z=881[M+H]+。(柱：Phenonenex-Luna 3.0×50mm S10。溶剂A=90%水：10%甲醇：0.1%TFA。溶剂B=10%水：90%甲醇：0.1%TFA。流速=4mL/min。起始%B=0。最终%B=100。梯度时间=3min。波长=220)。1H NMR(400MHz,MeOD)δppm7.76-7.92(m,9H),5.13(dd,J＝9.2,6.9Hz,1H),5.04(dd,J＝8.0,6.5Hz,1H),4.74-4.80(m,2H),3.71-3.94(m,6H),3.68(s,3H),3.67(s,3H),3.36-3.63(m,4H),2.63-2.75(m,1H),2.40-2.55(m,3H),1.95-2.15(m,4H),1.67-1.86(m,4H),1.45-1.65(m,4H),1.03-1.18(m,2H),0.84-0.91(m,1H),0.75-0.83(m,1H)。
实施例ZY6
Figure BDA00001954398802202
将NCS(1.1mg，8.4μmol)添加至(R,1S,1'S)-2,2'-((1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(4,4'-(联苯-4,4'-二基)双(1H-咪唑-4,2-二基))双(2-氮杂二环[3.1.0]己烷-3,2-二基))双(2-氧代-1-((R)-四氢-2H-吡喃-3-基)乙烷-2,1-二基)二氨基甲酸二甲酯的三氟乙酸盐(实施例ZY2步骤a)(8.1mg，8.4μmol)的DMF(1mL)溶液中，且在50℃下搅拌混合物16小时。随后用MeOH稀释反应混合物，过滤且通过制备型HPLC(含0.1%三氟乙酸缓冲液的H2O-MeOH)纯化，得到呈白色固体状的实施例ZY6的三氟乙酸盐(2.2mg)。LC/MS保留时间=2.01min；m/z=881[M+H]+。(柱：Phenonenex-Luna3.0×50mm S10。溶剂A=90%水：10%甲醇：0.1%TFA。溶剂B=10%水：90%甲醇：0.1%TFA。流速=4mL/min。起始%B=0。最终%B=100。梯度时间=3min。波长=220)。1H NMR(400MHz,MeOD)δppm 7.77-7.90(m,9H),5.12(dd,J＝9.2,6.9Hz,1H),5.05(dd,J＝7.9,6.1Hz,1H),4.58-4.96(m,2H),3.71-3.94(m,6H),3.68(s,3H),3.66(br.s.,3H),3.34-3.46(m,4H),2.64-2.75(m,1H),2.40-2.54(m,3H),1.96-2.16(m,4H),1.40-1.85(m,8H),1.04-1.18(m,2H),0.84-0.92(m,1H),0.79(m,1H)。
实施例ZY7
Figure BDA00001954398802211
实施例ZY7步骤a
将HATU(95mg，0.25mmol)添加至4,4'-双(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂二环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)联苯的盐酸盐(实施例1e)(67.6mg，0.114mmol)及(S)-4-甲氧基-2-(甲氧基羰基氨基)丁酸(实施例ZY7步骤a)(50mg，0.26mmol)于DMF(1mL)及DIPEA(0.16mL，0.91mmol)中的溶液中，且在室温下搅拌混合物3小时。用MeOH稀释反应混合物，过滤且通过制备型HPLC(含0.1%三氟乙酸缓冲液的H2O-MeOH)纯化，得到呈白色固体状的(2S,2'S)-1,1'-((1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(4,4'-(联苯-4,4'-二基)双(1H-咪唑-4,2-二基))双(2-氮杂二环[3.1.0]己烷-3,2-二基))双(4-甲氧基-1-氧代丁烷-2,1-二基)二氨基甲酸二甲酯的三氟乙酸盐(实施例ZY7步骤a)(96.4mg)。LC/MS保留时间=1.53min；m/z 795[M+H]+。(柱：Phenonenex-Luna 3.0×50mm S10。溶剂A=90%水：10%甲醇：0.1%TFA。溶剂B=10%水：90%甲醇：0.1%TFA。流速=4mL/min。起始%B=0。最终%B=100。梯度时间=3min。波长=220)。1H NMR(400MHz,MeOD)δppm 7.78-7.97(m,10H),5.16(dd,J＝9.2,6.7Hz,2H),4.76-4.83(m,2H),3.75-3.84(m,2H),3.66(s,6H),3.45-3.56(m,4H),3.32(s,6H),2.68(dd,J＝13.4,9.4Hz,2H),2.42-2.53(m,2H),2.01-2.23(m,4H),1.80-1.95(m,2H),1.05-1.18(m,2H),0.78-0.98(m,2H)。
实施例ZY7
将NCS(9.7mg，0.073mmol)添加至(2S,2'S)-1,1'-((1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(4,4'-(联苯-4,4'-二基)双(1H-咪唑-4,2-二基))双(2-氮杂二环[3.1.0]己烷-3,2-二基))双(4-甲氧基-1-氧代丁烷-2,1-二基)二氨基甲酸二甲酯的三氟乙酸盐(实施例ZY7步骤a)(29mg，0.036mmol)于DMF(1mL)中的溶液中，且在50℃下搅拌混合物16小时。用MeOH稀释反应混合物，过滤且通过制备型HPLC(含0.1%三氟乙酸缓冲液的H2O-MeOH)纯化，得到呈白色固体状的(2S,2'S)-1,1'-((1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(4,4'-(联苯-4,4'-二基)双(5-氯-1H-咪唑-4,2-二基))双(2-氮杂二环[3.1.0]己烷-3,2-二基))双(4-甲氧基-1-氧代丁烷-2,1-二基)二氨基甲酸二甲酯的三氟乙酸盐(实施例ZY7)(7.9mg)。LC/MS保留时间=2.51min；m/z=863[M+H]+。(柱：Phenonenex-Luna 3.0×50mm S10。溶剂A=90%水：10%甲醇：0.1%TFA。溶剂B=10%水：90%甲醇：0.1%TFA。流速=4mL/min。起始%B=0。最终%B=100。梯度时间=3min。波长=220)。1H NMR(400MHz,MeOD)δppm 7.82(s,8H),5.07(dd,J＝8.5,5.8Hz,2H),4.75-4.83(m,2H),3.70-3.76(m,2H),3.66(s,6H),3.44-3.54(m,4H),3.32(s,6H),2.39-2.57(m,4H),1.98-2.21(m,4H),1.82-1.94(m,2H),1.05-1.19(m,2H),0.78-0.92(m,2H)。
实施例ZY8
Figure BDA00001954398802221
将NCS(5.6mg，0.042mmol)添加至(2S,2'S)-1,1'-((1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(4,4'-(联苯-4,4'-二基)双(1H-咪唑-4,2-二基))双(2-氮杂二环[3.1.0]己烷-3,2-二基))双(4-甲氧基-1-氧代丁烷--2,1-二基)二氨基甲酸二甲酯的三氟乙酸盐(实施例ZY7步骤b)(33.3mg，0.042mmol)于DMF(1mL)中的溶液中，且在50℃下搅拌混合物16小时。用MeOH稀释反应混合物，过滤且通过制备型HPLC(含0.1%三氟乙酸缓冲液的H2O-MeOH)纯化，得到呈白色固体状的实施例ZY8的三氟乙酸盐(9.4mg)。LC/MS保留时间=1.99min；m/z=829[M+H]+。(柱：Phenonenex-Luna 3.0×50mm S10。溶剂A=90%水：10%甲醇：0.1%TFA。溶剂B=10%水：90%甲醇：0.1%TFA。流速=4mL/min。起始%B=0。最终%B=100。梯度时间=3min。波长=220)。1H NMR(400MHz,MeOD)δppm 7.77-7.91(m,9H),5.15(dd,J＝9.2,6.7Hz,1H),5.07(t,J＝7.0Hz,1H),4.77-4.83(m,2H),3.76-3.83(m,1H),3.68-3.75(m,1H),3.66(s,6H),3.44-3.56(m,4H),3.33(s,6H),2.63-2.75(m,1H),2.41-2.56(m,3H),1.97-2.23(m,4H),1.80-1.95(m,2H),1.06-1.19(m,2H),0.87-0.96(m,1H),0.84(m,1H)。
生物学活性
在本发明中使用HCV复制子测定，且如共同拥有的PCT/US2006/022197及O'Boyle等人，Antimicrob Agents Chemother.49(4):1346-1353(2005年4月)中所述进行制备、实施及验证。亦如(Apath.com)所描述，使用合并荧光素酶报告基因的测定方法。
使用HCV-neo复制子细胞及于NS5A区中含有抗性取代(resistancesubstitution)的复制子细胞测试当前所述的化合物家族。经测定，相对于针对野生型细胞的对应抑制效能，该化合物对含有突变的细胞的抑制活性有不同程度的减小。因此，本发明的化合物可有效抑制HCV NS5A蛋白的功能，且应了解其组合的效力与先前于申请PCT/US2006/022197及共同拥有的WO04/014852中所述的相同。应了解，本发明的化合物可抑制HCV的多种基因型。表2显示本发明的代表性化合物针对HCV 1b基因型的EC50(有效50%抑制浓度)值。在一个实施方案中，本发明的化合物针对1a、1b、2a、2b、3a、4a及5a基因型具有抑制性。针对HCV 1b的EC50值如下：A=0.2pM-<1pM；B=1pM-<10pM；及C=10pM-<100pM；及D=100pM-0.15μM。
本发明化合物抑制HCV的机制可为除了NS5A抑制性以外其他的机制或不同于NS5A抑制性的机制。在一个实施方案中，本发明的化合物抑制HCV复制子，且在另一实施方案中，本发明的化合物抑制NS5A。
表2
  实施例   EC50(uM)   EC50范围
  M1   B
  M2   B
  M4   B
  M5   B
  M6   4.08E-06   B
  M7   2.13E-06   B
  V1   B
  V2   8.88E-05   C
  V3   B
  V4   3.22E-05   C
  V5   6.58E-07   A
  V5.1   3.90E-06   B
  V5.2   3.06E-05   C
  V5.3   1.33E-04   D
  V6   A
  V7   B
  V8   B
  V9   2.70E-06   B
  V10   B
  V11   B
  V12   B
  V13   B
  V14   B
  V15   C
  V16   9.66E-07   A
  GW1-1   B
  GW1-2   B
  GW1-3   B
  GW2   B
  GW2-1   1.27E-05   C
  GW3   B
  GW4   C
  GW5   B
  GW6   B
  GW7   B
  GW8   B
  GW9   A
  GW10   B
  GW11   A
  GW12   A
  OL1   3.06E-06   B
  OL2   B
  OL3   B
  OL4   B
  OL5   B
  OL6   B
  OL7   B
  OL8   2.09E-04   D
  OL9   6.08E-06   B
  OL10   D
  OL11   B
  OL12   C
  OL13   B
  OL14   C
  OL15   B
  OL16   C
  OL17   B
  OL18   B
  OL19   C
  OL20   D
  OL21   C
  OL22   4.08E-04   D
  OL23   D
  OL24   B
  OL25   D
  DSTL-1   A
  DSTL-2   C
  DSTL-3   1.25E-06   B
  DSTL-4   A
  DSTL-5   5.59E-07   A
  DSTL-6   B
  DSTL-7   B
  DSTL-8   A
  DSTL-9   B
  DSTL-10   B
  DSTL-11   A
  DSTL-12   C
  JLR-1   B
  JLR-2   B
  JLR-3   A
  JLR-4   7.69E-07   A
  JLR-5   B
  ZY1   B
  ZY2   B
  ZY3   B
  ZY4   B
  ZY5   B
  ZY6   1.08E-05   C
  ZY7   B
  ZY8   B
本领域技术人员将显而易见的是，本发明并不限于上述说明性实施例，且其可在不背离其基本属性的情况下以其它特定形式来实施。因此，期望的是，所述实施例自各个方面而言皆应视为说明性而非限制性的，参考随附申请权利要求而不是上述实施例，因此本发明意欲涵盖在权利要求范围内的等效性意义及范围内的所有变化。

Claims (20)

1.一种式(I)化合物或其药学上可接受的盐，
Figure FDA00001954398700011
其中：
n为0、1或2；
X选自氢、烯基、氰基、环烷基、(环烷基)烷基、卤素及杂环基；
R1选自氢及卤素；
R2选自氢、烯基、氰基、环烷基、(环烷基)烷基、卤素及杂环基；或
R1与R2与它们所连接的碳原子一起形成任选取代有一个卤素的六元芳族环；
条件是X及R2中至少一个选自烯基、氰基、环烷基、(环烷基)烷基、卤素及杂环基；
各R3为烷基，其中该烷基可任选与相邻碳原子一起形成三元或四元稠合环或与其连接的碳原子一起形成三元或四元螺环；其中该稠合环及该螺环任选经一或两个烷基取代；
各R4独立地选自氢及-C(O)R5；及
各R5独立地选自烷氧基、烷基、芳基烷氧基、芳基烷基、环烷基、杂环基、杂环基烷基、(NRcRd)烯基及(NRcRd)烷基。
2.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中各R5独立地选自烷氧基、杂环基及(NRcRd)烷基。
3.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中X为卤素。
4.权利要求3的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2为卤素。
5.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1与R2与它们所连接的碳原子一起形成任选取代有一个卤素的六元芳族环。
6.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中X为氢。
7.一种化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物选自：
Figure FDA00001954398700031
Figure FDA00001954398700041
Figure FDA00001954398700051
Figure FDA00001954398700071
Figure FDA00001954398700081
Figure FDA00001954398700091
Figure FDA00001954398700101
Figure FDA00001954398700121
Figure FDA00001954398700131
Figure FDA00001954398700141
Figure FDA00001954398700151
Figure FDA00001954398700161
Figure FDA00001954398700181
8.一种化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物选自：
Figure FDA00001954398700182
Figure FDA00001954398700191
Figure FDA00001954398700193
9.一种组合物，其包含权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐、及药学上可接受的载体。
10.权利要求9的组合物，其进一步包含至少一种具有抗HCV活性的其它化合物。
11.权利要求10的组合物，其中所述其它化合物中至少一种为干扰素或利巴韦林。
12.权利要求11的组合物，其中该干扰素选自干扰素α2B、聚乙二醇化干扰素α、同感干扰素、干扰素α2A及淋巴细胞样干扰素τ。
13.权利要求10的组合物，其中所述其它化合物中至少一种选自白介素2、白介素6、白介素12、提高1型辅助T细胞应答发展的化合物、干扰RNA、反义RNA、咪奎莫特、利巴韦林、肌苷5'-单磷酸脱氢酶抑制剂、金刚烷胺及金刚乙胺。
14.权利要求10的组合物，其中所述其它化合物中至少一种可有效抑制选自以下的靶标的功能，以治疗HCV感染：HCV金属蛋白酶、HCV丝氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解旋酶、HCV NS4B蛋白、HCV进入、HCV组装、HCV释出、HCV NS5A蛋白及IMPDH。
15.治疗患者的HCV感染的方法，其包括给予患者治疗有效量的权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐。
16.权利要求15的方法，其还包括在给予权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐之前、之后或同时给予至少一种具有抗HCV活性的其它化合物。
17.权利要求16的方法，其中所述其它化合物中至少一种为干扰素或利巴韦林。
18.权利要求17的方法，其中该干扰素选自干扰素α2B、聚乙二醇化干扰素α、同感干扰素、干扰素α2A及淋巴细胞样干扰素τ。
19.权利要求16的方法，其中所述其它化合物中至少一种选自白介素2、白介素6、白介素12、提高1型辅助T细胞应答发展的化合物、干扰RNA、反义RNA、咪奎莫特、利巴韦林、肌苷5'-单磷酸脱氢酶抑制剂、金刚烷胺及金刚乙胺。
20.权利要求16的方法，其中所述其它化合物中至少一种可有效抑制选自以下的靶标的功能，以治疗HCV感染：HCV金属蛋白酶、HCV丝氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解旋酶、HCV NS4B蛋白、HCV进入、HCV组装、HCV释出、HCVNS5A蛋白及IMPDH。
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