CN104884455B - 丙型肝炎病毒抑制剂 - Google Patents

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Abstract

本申请涉及用于治疗丙型肝炎病毒(HCV)感染的化合物、组合物和方法。本申请还公开了包含所述化合物的组合物和使用这些化合物治疗HCV感染的方法。

Description

丙型肝炎病毒抑制剂
本申请大体上涉及抗病毒化合物且更具体地涉及可抑制丙型肝炎病毒(HCV)所编码的NS5A蛋白的功能的化合物、包含上述化合物的组合物及抑制NS5A蛋白的功能的方法。
HCV是主要的人类病原体，其在世界范围内感染约1.7亿人—约为1型人类免疫缺陷病毒感染数量的5倍。这些感染有HCV的个体中相当大的部分发展成严重的进行性肝脏疾病，其包括肝硬化和肝细胞癌。
目前护理HCV的标准使用PEG化的干扰素与利巴韦林的组合，其在实现持续的病毒响应不具有最优的成功率并引起多种副作用。因此，就开发用于设法解决这种尚未满足的医学需要的有效疗法而言，存在明显和长期以来的需要。
HCV是正链RNA病毒。基于对所推断的氨基酸序列进行的比较和5’-非翻译区的广泛类似性，已将HCV归类为黄病毒科(Flaviviridae family)中独立的属。黄病毒科的所有成员都具有包封的病毒体，其所含有的正链RNA基因组通过翻译单一的连续的开放读码框而编码所有已知的病毒专属性蛋白。
由于缺乏校对能力的所编码的依赖于RNA的RNA聚合酶的高错误率，在整个HCV基因组的核苷酸序列和所编码的氨基酸序列中发现了相当程度的异质性。已表征了至少6种主要的基因型且已描述了多于50种的在世界范围内分布的亚型。HCV遗传异质性的临床重要性已经证明单一疗法治疗过程中发生突变的倾向，因此需要使用其它治疗选择。基因型对发病和治疗的可能的调节效应仍是难以确定的。
单链HCV RNA基因组的长度为约9500个核苷酸且具有单一的开放读码框(ORF)，其编码由约3000个氨基酸组成的单一的大的多蛋白。在被感染的细胞中，该多蛋白在多个位点被细胞蛋白酶和病毒蛋白酶所裂解，从而产生结构蛋白和非结构(NS)蛋白。就HCV而言，成熟的非结构蛋白(NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B)的产生受到两种病毒蛋白酶的影响。第一种病毒蛋白酶被认为是金属蛋白酶且在NS2-NS3接合处进行裂解；第二种病毒蛋白酶是包含在NS3的N-端区域内的丝氨酸蛋白酶(在本申请中也称为NS3蛋白酶)且介导NS3下游的所有随后裂解，既在NS3-NS4A裂解位点以顺式进行裂解，又在其余的NS4A-NS4B、NS4B-NS5A和NS5A-NS5B位点以反式进行裂解。NS4A蛋白似乎发挥多种功能，其充当NS3蛋白酶的辅因子且可能有助于NS3及其它病毒复制酶组分的膜定位。NS3-NS4A复合物的形成对于适当的蛋白酶活性是必要的，其导致裂解事件的蛋白水解效率增加。NS3蛋白还显示出三磷酸核苷酶和RNA解螺旋酶活性。NS5B(在本申请中也称为HCV聚合酶)是依赖于RNA的RNA聚合酶，其在复制酶复合物中参与HCV与其它HCV蛋白(其包括NS5A)的复制。
需要用于治疗感染HCV患者的化合物，其选择性地抑制HCV病毒复制。具体地，需要有效抑制NS5A蛋白功能的化合物。HCV NS5A蛋白参见例如下列参考文献：S.L.Tan,et al.,Virology,284:1-12(2001)；K.-J.Park,et al.,J.Biol.Chem.,30711-30718(2003)；T.L.Tellinghuisen,et al.,Nature,435,374(2005)；R.A.Love,et al.,J.Virol,83,4395(2009)；N.Appel,et al.,J.Biol.Chem.,281,9833(2006)；L.Huang,J.Biol.Chem.,280,36417(2005)；C.Rice,et al.,WO2006093867。
在第一个方面，本申请提供式(I)化合物或其药用盐：
其中
L选自键、
A和A’独立选自
条件是A和A’中的至少一个不是
其中表示与X和X’的连接点且表示与L的连接点；且其中
Z为任选含有一个、两个或三个氮原子的六元芳族环；
R2选自氢、烷基和卤素；且
R3选自氢、烷氧基、烷基、氰基、卤素和卤代烷氧基；
X和X’独立选自
其中每个基团被画成碳原子与A或A’连接且氮原子与羰基连接且其中
n为0、1或2；
s为0、1、2、3或4；
Y选自Si(R4)2、NR4、O、S、S(O)、SO2、CH2、CHR4和C(R4)2；条件是当n为0时，Y选自CH2、CHR4和C(R4)2；且
每个R4独立选自烷氧基、烷基、芳基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、羟基、-NRaRb和烷硫基，其中所述烷基可任选与环上的另一个碳原子形成稠合的三元至六元环或桥接的四元或五元环；或可任选与它所连接的碳形成螺环的三元至六元环，其中每个所形成的环系统任选含有一个或两个氧原子，且其中每个所形成的环系统任选取代有一个或两个独立选自烷基和卤素的基团；条件是当Y为NR4时，R4不是卤素、羟基或-NRaRb；
R为(NRcRd)烷基，其中所述(NRcRd)烷基中的烷基部分取代有二环烷基、稠合的二环杂环基、经环烷基取代的杂环基、乙烯基环烷基、杂环基乙烯基、氧代环烷基或螺环杂环基，其中所述二环烷基、二环杂环基、氧代环烷基和螺环杂环基任选取代有一个或两个独立选自以下的基团：烷基、卤素和卤代烷基；
R’为(NRcRd)烷基，其中所述(NRcRd)烷基中的烷基部分取代有二环烷基、稠合的二环杂环基、经环烷基取代的杂环基、乙烯基环烷基、杂环基乙烯基、氧代环烷基或螺环杂环基，其中所述二环烷基、二环杂环基、氧代环烷基和螺环杂环基任选取代有一个或两个独立选自以下的基团：烷基、卤素和卤代烷基；
Ra和Rb独立选自氢和烷基；
Rc和Rd独立选自氢、烯基氧基羰基、烷氧基烷基羰基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、烷基磺酰基、芳基、芳基烷氧基羰基、芳基烷基、芳基烷基羰基、芳基羰基、芳基氧基羰基、芳基磺酰基、环烷基、环烷基氧基羰基、环烷基磺酰基、甲酰基、卤代烷氧基羰基、杂环基、杂环基烷氧基羰基、杂环基烷基、杂环基烷基羰基、杂环基羰基、杂环基氧基羰基、羟基烷基羰基、(NReRf)烷基、(NReRf)烷基羰基、(NReRf)羰基、(NReRf)磺酰基、-C(NCN)OR”和-C(NCN)NRxRy，其中R”选自烷基和未取代的苯基，且其中所述芳基烷基、芳基烷基羰基、杂环基烷基和杂环基烷基羰基中的烷基部分进一步任选取代有一个-NReRf基团；且其中所述芳基、所述芳基烷氧基羰基、芳基烷基、芳基烷基羰基、芳基羰基、芳基氧基羰基和芳基磺酰基中的芳基部分、所述杂环基及所述杂环基烷氧基羰基、杂环基烷基、杂环基烷基羰基、杂环基羰基和杂环基氧基羰基中的杂环基部分进一步任选取代有一个、两个或三个独立选自以下的取代基：烷氧基、烷基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基和硝基；
Re和Rf独立选自氢、烷基、未取代的芳基、未取代的芳基烷基、未取代的环烷基、未取代的(环烷基)烷基、未取代的杂环基、未取代的杂环基烷基、(NRxRy)烷基和(NRxRy)羰基；且
Rx和Ry独立选自氢、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、未取代的芳基、未取代的芳基烷氧基羰基、未取代的芳基烷基、未取代的环烷基、未取代的杂环基和(NRx’Ry’)羰基，其中Rx’和Ry’独立选自氢和烷基。
在第一个方面的第一个实施方案中，本申请提供式(I)化合物或其药用盐，其中L为
在第一个方面的第二个实施方案中，本申请提供式(I)化合物或其药用盐，其中L选自
在第一个方面的第三个实施方案中，本申请提供式(I)化合物或其药用盐，其中L为键。
在第一个方面的第四个实施方案中，本申请提供式(I)化合物或其药用盐，其中L为键且A和A’各自为其中Z为任选含有一个氮原子的六元芳族环。
在第一个方面的第五个实施方案中，本申请提供式(I)化合物或其药用盐，其中L为键；A和A’各自为其中Z为任选含有一个氮原子的六元芳族环；且X和X’各自为其中n、s和Y如就式(I)所述。
在第一个方面的第六个实施方案中，本申请提供式(I)化合物或其药用盐，其中L为键；A和A’各自为其中Z为任选含有一个氮原子的六元芳族环；且X和X’各自为其中n为1或2；s为1、2或3；且Y选自O、CH2、CHR4和C(R4)2。
在第一个方面的第七个实施方案中，本申请提供式(I)化合物或其药用盐，其中L为键；A和A’各自为其中Z为任选含有一个氮原子的六元芳族环；且X和X’各自为其中n为1；s为1、2或3；且Y选自CH2、CHR4和C(R4)2。在第一个方面的第八个实施方案中，R和R’各自为(NRcRd)烷基，其中每个(NRcRd)烷基中的烷基部分取代有二环烷基、稠合的二环杂环基、经环烷基取代的杂环基或螺环杂环基，其中所述二环烷基和二环杂环基任选取代有一个或两个卤素基团。在第一个方面的第九个实施方案中，每个(NRcRd)烷基中的烷基部分取代有螺环杂环基，其中螺环杂环基为经由一个碳原子与三元饱和碳环邻接的含有一个氧原子的六元饱和环。
在第二个方面，本申请提供式(II)化合物或其药用盐：
其中
L选自键、
A和A’独立选自
其中每个基团被画成咪唑环与X连接且六元环与L连接，且其中
Z为任选含有一个、两个或三个氮原子的六元芳族环；
R2选自氢、烷基和卤素；且
R3选自氢、烷氧基、烷基、氰基、卤素和卤代烷氧基；
X和X’独立选自
其中每个基团被画成碳原子与A或A’连接且氮原子与羰基连接且其中
n为0、1或2；
s为0、1、2、3或4；
Y选自NH、NR4、O、S、S(O)、SO2、CH2、CHR4和C(R4)2；
条件是当n为0时，Y选自CH2、CHR4和C(R4)2；且
每个R4独立选自烷氧基、烷基、芳基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、羟基和-NRaRb，其中所述烷基可任选与环上的另一个碳原子形成稠合的三元至六元环或桥接的四元或五元环；或可任选与它所连接的碳形成螺环的三元至六元环，其中所形成的环系统任选取代有一个或两个独立选自烷基和卤素的基团；条件是当Y为NR4时，R4不是卤素、羟基或-NRaRb；
R为(NRcRd)烷基，其中所述(NRcRd)烷基中的烷基部分取代有二环烷基、稠合的二环杂环基、氧代环烷基或螺环杂环基，其中所述二环烷基、二环杂环基、氧代环烷基和螺环杂环基任选取代有一个或两个独立选自以下的基团：烷基、卤素和卤代烷基；
R’为(NRcRd)烷基，其中所述(NRcRd)烷基中的烷基部分取代有二环烷基、稠合的二环杂环基、氧代环烷基或螺环杂环基，其中所述二环烷基、二环杂环基、氧代环烷基和螺环杂环基任选取代有一个或两个独立选自以下的基团：烷基、卤素和卤代烷基；
Ra和Rb独立选自氢和烷基；
Rc和Rd独立选自氢、烯基氧基羰基、烷氧基烷基羰基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、烷基磺酰基、芳基、芳基烷氧基羰基、芳基烷基、芳基烷基羰基、芳基羰基、芳基氧基羰基、芳基磺酰基、环烷基、环烷基氧基羰基、环烷基磺酰基、甲酰基、卤代烷氧基羰基、杂环基、杂环基烷氧基羰基、杂环基烷基、杂环基烷基羰基、杂环基羰基、杂环基氧基羰基、羟基烷基羰基、(NReRf)烷基、(NReRf)烷基羰基、(NReRf)羰基、(NReRf)磺酰基、-C(NCN)OR”和-C(NCN)NRxRy，其中R”选自烷基和未取代的苯基，且其中所述芳基烷基、芳基烷基羰基、杂环基烷基和杂环基烷基羰基中的烷基部分进一步任选取代有一个-NReRf基团；且其中所述芳基、所述芳基烷氧基羰基、芳基烷基、芳基烷基羰基、芳基羰基、芳基氧基羰基和芳基磺酰基中的芳基部分、所述杂环基及所述杂环基烷氧基羰基、杂环基烷基、杂环基烷基羰基、杂环基羰基和杂环基氧基羰基中的杂环基部分进一步任选取代有一个、两个或三个独立选自以下的取代基：烷氧基、烷基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基和硝基；
Re和Rf独立选自氢、烷基、未取代的芳基、未取代的芳基烷基、未取代的环烷基、未取代的(环烷基)烷基、未取代的杂环基、未取代的杂环基烷基、(NRxRy)烷基和(NRxRy)羰基；且
Rx和Ry独立选自氢、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、未取代的芳基、未取代的芳基烷氧基羰基、未取代的芳基烷基、未取代的环烷基、未取代的杂环基和(NRx’Ry’)羰基，其中Rx’和Ry’独立选自氢和烷基。
在第三个方面，本申请提供一种组合物，其包含式(I)化合物或其药用盐和药用载体。在第三个方面的第一个实施方案中，所述组合物还包含至少一种具有抗HCV活性的其它化合物。在第三个方面的第二个实施方案中，所述其它化合物中的至少一种为干扰素或利巴韦林。在第三个方面的第三个实施方案中，所述干扰素选自干扰素α2B、聚乙二醇化干扰素α、聚乙二醇化干扰素λ、同感干扰素、干扰素α2A和成淋巴细胞样干扰素τ。
在第三个方面的第四个实施方案中，本申请提供一种组合物，其包含式(I)化合物或其药用盐、药用载体和至少一种具有抗HCV活性的其它化合物，其中所述其它化合物中的至少一种选自白介素2、白介素6、白介素12、增强1型辅助T细胞应答发展的化合物、干扰RNA、反义RNA、咪奎莫特、利巴韦林、肌苷-5’-单磷酸脱氢酶抑制剂、金刚烷胺和金刚乙胺。
在第三个方面的第五个实施方案中，本申请提供一种组合物，其包含式(I)化合物或其药用盐、药用载体和至少一种具有抗HCV活性的其它化合物，其中所述其它化合物中的至少一种可有效抑制选自以下的靶标的功能以治疗HCV感染：HCV金属蛋白酶、HCV丝氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解旋酶、HCV NS4B蛋白、HCV进入、HCV组装、HCV释出、HCV NS5A蛋白和IMPDH。
在第四个方面，本申请提供在患者中治疗HCV感染的方法，其包括向所述患者给药治疗有效量的式(I)化合物或其药用盐。在第四个方面的第一个实施方案中，所述方法还包括在给药式(I)化合物或其药用盐前、在给药式(I)化合物或其药用盐后或与给药式(I)化合物或其药用盐同时给药至少一种具有抗HCV活性的其它化合物。在第四个方面的第二个实施方案中，所述其它化合物中的至少一种为干扰素或利巴韦林。在第四个方面的第三个实施方案中，所述干扰素选自干扰素α2B、聚乙二醇化干扰素α、同感干扰素、干扰素α2A和成淋巴细胞样干扰素τ。
在第四个方面的第四个实施方案中，本申请提供在患者中治疗HCV感染的方法，其包括向所述患者给药治疗有效量的式(I)化合物或其药用盐且在给药式(I)化合物或其药用盐前、在给药式(I)化合物或其药用盐后或与给药式(I)化合物或其药用盐同时给药至少一种具有抗HCV活性的其它化合物，其中所述其它化合物中的至少一种选自白介素2、白介素6、白介素12、增强1型辅助T细胞应答发展的化合物、干扰RNA、反义RNA、咪奎莫特、利巴韦林、肌苷-5’-单磷酸脱氢酶抑制剂、金刚烷胺和金刚乙胺。
在第四个方面的第五个实施方案中，本申请提供在患者中治疗HCV感染的方法，其包括向所述患者给药治疗有效量的式(I)化合物或其药用盐且在给药式(I)化合物或其药用盐前、在给药式(I)化合物或其药用盐后或与给药式(I)化合物或其药用盐同时给药至少一种具有抗HCV活性的其它化合物，其中所述其它化合物中的至少一种可有效抑制选自以下的靶标的功能以治疗HCV感染：HCV金属蛋白酶、HCV丝氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解旋酶、HCV NS4B蛋白、HCV进入、HCV组装、HCV释出、HCV NS5A蛋白和IMPDH。
本申请其它方面可包括本申请所述实施方案的适合组合。
其它方面和实施方案可参见本申请提供的描述。
在此对本申请的描述应当被视为符合化学成键规则和原理。在一些情况下，可能需要移除氢原子以在任何给定位置容纳取代基。
应当理解的是，本申请所涵盖的化合物为就用作药物而言具有适当稳定性的那些化合物。
预期分子中特定位置处的任何取代基或变量的定义与其在该分子的其它位置的定义无关。例如，当s为2时，则两个R4基团可相同或不同。
将本说明书中所引用的所有专利、专利申请和参考文献以引用的方式全部并入本申请中。在不一致的情况下，以本发明(包括定义)为准。
如本说明书中所用，以下术语具有如下指定的含义：
除非上下文另有明确说明，本申请使用的单数形式“不定冠词(a)”、“不定冠词(an)”和“定冠词(the)”包括复数指代。
除非另有说明，否则本申请所有芳基、环烷基和杂环基均可如其各自定义中的每种情况中所述而被取代。例如，芳基烷基中的芳基部分可如术语“芳基”的定义中所述而被取代。
本申请使用的术语“烯基”是指具有二个至六个碳原子、含有至少一个碳-碳双键的直链或支链基团。
本申请使用的术语“烯基氧基”是指通过氧原子与母体分子部分连接的烯基。
本申请使用的术语“烯基氧基羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的烯基氧基。
本申请使用的术语“烷氧基”是指通过氧原子与母体分子部分连接的烷基。
本申请使用的术语“烷氧基烷基”是指取代有一个、两个或三个烷氧基的烷基。
本申请使用的术语“烷氧基烷基羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的烷氧基烷基。
本申请使用的术语“烷氧基羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的烷氧基。
本申请使用的术语“烷基”是指衍生自含有一个至六个碳原子的直链或支链饱和烃的基团。在本申请化合物中，当R4为烷基时，所述烷基可任选与相邻碳原子形成三元至六元稠合环，得到如下所示的结构：
其中m选自1、2、3和4，其中z为0、1或2，且其中每个Rs为独立选自烷基、卤素和卤代烷基；
或其中所述烷基可任选与环上的另一个碳原子形成四元或五元桥接环，得到如下所示的结构：
其中m选自0或1，其中z为0、1或2，且其中每个Rs为独立选自烷基、卤素和卤代烷基；
或其中所述烷基可任选与其连接的碳原子形成三元至六元螺环，得到如下所示的结构：
其中m选自1、2、3或4，其中z为0、1或2，且其中每个Rs为独立选自烷基、卤素和卤代烷基的Rs。
本申请使用的术语“烷基羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的烷基。
本申请使用的术语“烷基羰基氧基”是指通过氧原子与母体分子部分连接的烷基羰基。
本申请使用的术语“烷基硫基”是指通过硫原子与母体分子部分连接的烷基。
本申请使用的术语“烷基磺酰基”是指通过磺酰基与母体分子部分连接的烷基。
本申请使用的术语“芳基”是指苯基或二环稠环系统(其中所述环中的一者或两者为苯基)。二环稠环系统由与四至六元芳族或非芳族碳环稠合的苯基组成。本申请芳基可通过基团中的任何可取代碳原子与母体分子部分连接。芳基的代表性实例包括但不限于茚满基、茚基、萘基、苯基和四氢萘基。本申请芳基任选取代有一个、两个、三个、四个或五个独立选自以下的取代基：烯基、烷氧基、烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、第二个芳基、芳基烷氧基、芳基烷基、芳基羰基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、杂环基、杂环基烷基、杂环基羰基、羟基、羟基烷基、硝基、-NRxRy、(NRxRy)烷基、氧代和-P(O)OR2，其中每个R独立选自氢和烷基；且其中所述芳基烷基和所述杂环基烷基中的烷基部分为未取代的，且其中所述第二个芳基、所述芳基烷基中的芳基部分、所述芳基羰基中的芳基部分、所述杂环基及所述杂环基烷基与所述杂环基羰基中的杂环基部分进一步任选取代有一个、两个或三个独立选自以下的取代基：烷氧基、烷基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基和硝基。
本申请使用的术语“芳基烷氧基”是指通过烷氧基与母体分子部分连接的芳基。
本申请使用的术语“芳基烷氧基羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的芳基烷氧基。
本申请使用的术语“芳基烷基”是指取代有一个、两个或三个芳基的烷基。所述芳基烷基中的烷基部分进一步任选取代有一个或两个独立选自以下的其它基团：烷氧基、烷基羰基氧基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、杂环基、羟基和-NRcRd，其中所述杂环基进一步任选取代有一个或两个独立选自以下的取代基：烷氧基、烷基、未取代的芳基、未取代的芳基烷氧基、未取代的芳基烷氧基羰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、羟基、-NRxRy和氧代。
本申请使用的术语“芳基烷基羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的芳基烷基。
本申请使用的术语“芳基羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的芳基。
本申请使用的术语“芳基氧基”是指通过氧原子与母体分子部分连接的芳基。
本申请使用的术语“芳基氧基羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的芳基氧基。
本申请使用的术语“芳基磺酰基”是指通过磺酰基与母体分子部分连接的芳基。
本申请使用的术语“二环烷基”是指具有五个至十二个碳原子和零个杂原子的饱和的稠合、桥接或螺环二环烃环系统。本申请二环烷基任选取代有一个或两个独立选自以下的基团：烷基、卤素和卤代烷基。
如本文中所使用的术语“羰基”是指-C(O)-。
如本文中所使用的术语“羧基”是指-CO2H。
如本文中所使用的术语“氰基”是指-CN。
本申请使用的术语“环烷基”是指具有三个至七个碳原子和零个杂原子的饱和单环烃环系统。环烷基的代表性实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基和环己基。本申请环烷基任选取代有一个、两个、三个、四个或五个独立选自以下的取代基：烷氧基、烷基、芳基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、杂环基、羟基、羟基烷基、硝基和-NRxRy，其中所述芳基和所述杂环基进一步任选取代有一个、两个或三个独立选自以下的取代基：烷氧基、烷基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、羟基和硝基。
本申请使用的术语“(环烷基)烷基”是指取代有一个、两个或三个环烷基的烷基。
本申请使用的术语“环烷基氧基”是指通过氧原子与母体分子部分连接的环烷基。
本申请使用的术语“环烷基氧基羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的环烷基氧基。
本申请使用的术语“环烷基磺酰基”是指通过磺酰基与母体分子部分连接的环烷基。
本申请使用的术语“环烷基取代的杂环基”是指取代有一个或两个环烷基的饱和单环杂环基。
本申请使用的术语“乙烯基环烷基”是指：
其中m为1、2或3。
本申请使用的术语“甲酰基”是指-CHO。
本申请使用的术语“稠合二环杂环基”是指含有一个、两个或三个独立选自氮、氧和硫的杂原子，与三元至五元饱和碳环稠合的四元、五元、六元或七元饱和或不饱和环。本申请杂环基可通过基团中的碳原子或氮原子与母体分子部分连接。本申请二环杂环基任选取代有一个或两个独立选自以下的基团：烷基、螺环基、卤素和卤代烷基。
如本文中所使用的术语“卤素”是指Cl、Br、F或I。
本申请使用的术语“卤代烷氧基”是指通过氧原子与母体分子部分连接的卤代烷基。
本申请使用的术语“卤代烷氧基羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的卤代烷氧基。
本申请使用的术语“卤代烷基”是指取代有一个、两个、三个或四个卤素原子的烷基。
本申请使用的术语“杂环基”是指含有一个、两个、三个或四个独立选自氮、氧和硫的杂原子的四元、五元、六元或七元环。四元环具有零个双键，五元环具有零个至两个双键，且六元和七元环具有零个至三个双键。术语“杂环基”还包括如下二环基团，其中杂环基环与另一单环杂环基或四至六元芳族或非芳族碳环稠合；及桥接二环基团，诸如7-氮杂二环[2.2.1]庚-7-基、2-氮杂二环[2.2.2]辛-2-基、2,5-二氮杂二环[2.2.1]庚-2-基和2-氮杂二环[2.2.2]辛-3-基。本申请杂环基可通过基团中的任何碳原子或氮原子与母体分子部分连接。杂环基的实例包括但不限于苯并噻吩基、呋喃基、咪唑基、二氢吲哚基、吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、异噁唑基、吗啉基、噁唑基、氧杂环丁基、哌嗪基、哌啶基、吡唑基、吡啶基、吡咯烷基、吡咯并吡啶基、吡咯基、喹啉基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、噻唑基、噻吩基和硫吗啉基。本申请杂环基任选取代有一个、两个、三个、四个或五个独立选自以下的取代基：烯基、烷氧基、烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、芳基、芳基烷氧基羰基、芳基烷基、芳基羰基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、第二个杂环基、杂环基烷基、杂环基羰基、羟基、羟基烷基、硝基、-NRxRy、(NRxRy)烷基和氧代，其中所述芳基烷基和所述杂环基烷基中的烷基部分为未取代的，且其中所述芳基、所述芳基烷基中的芳基部分、所述芳基羰基中的芳基部分、所述第二个杂环基和所述杂环基烷基与所述杂环基羰基中的杂环基部分进一步任选取代有一个、两个或三个独立选自以下的取代基：烷氧基、烷基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基和硝基。
本申请使用的术语“杂环基烷氧基”是指通过烷氧基与母体分子部分连接的杂环基。
本申请使用的术语“杂环基烷氧基羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的杂环基烷氧基。
本申请使用的术语“杂环基烷基”是指取代有一个、两个或三个杂环基的烷基。所述杂环基烷基中的烷基部分进一步任选取代有一个或两个独立选自以下的其它基团：烷氧基、烷基羰基氧基、芳基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、羟基和-NRcRd，其中所述芳基进一步任选取代有一个或两个独立选自以下的取代基：烷氧基、烷基、未取代的芳基、未取代的芳基烷氧基、未取代的芳基烷氧基羰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、羟基和-NRxRy。
本申请使用的术语“杂环基烷基羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的杂环基烷基。
本申请使用的术语“杂环基羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的杂环基。
本申请使用的术语“杂环基乙烯基”是指：
其中A为含零个其它双键的五元至七元单环杂环，且其中和表示与-NRcRd基团和母体分子部分的连接点。
本申请使用的术语“杂环基氧基”是指通过氧原子与母体分子部分连接的杂环基。
本申请使用的术语“杂环基氧基羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的杂环基氧基。
本申请使用的术语“羟基”是指-OH。
本申请使用的术语“羟基烷基”是指取代有一个、两个或三个羟基的烷基。
本申请使用的术语“羟基烷基羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的羟基烷基。
本申请使用的术语“硝基”是指-NO2。
本申请使用的术语“-NRcRd”是指通过氮原子与母体分子部分连接的两个基团Rc和Rd。Rc和Rd独立选自氢、烯基氧基羰基、烷氧基烷基羰基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、烷基磺酰基、芳基、芳基烷氧基羰基、芳基烷基、芳基烷基羰基、芳基羰基、芳基氧基羰基、芳基磺酰基、环烷基、环烷基氧基、环烷基氧基羰基、环烷基磺酰基、甲酰基、卤代烷氧基羰基、杂环基、杂环基烷氧基羰基、杂环基烷基、杂环基烷基羰基、杂环基羰基、杂环基氧基羰基、羟基烷基羰基、(NReRf)烷基、(NReRf)烷基羰基、(NReRf)羰基、(NReRf)磺酰基、-C(NCN)OR’和-C(NCN)NRxRy，其中R’选自烷基和未取代的苯基，且其中所述芳基烷基、芳基烷基羰基、杂环基烷基和杂环基烷基羰基中的烷基部分进一步任选取代有一个-NReRf基团；且其中所述芳基、所述芳基烷氧基羰基、芳基烷基、芳基烷基羰基、芳基羰基、芳基氧基羰基和芳基磺酰基中的芳基部分、所述杂环基和所述杂环基烷氧基羰基、杂环基烷基、杂环基烷基羰基、杂环基羰基和杂环基氧基羰基中的杂环基部分进一步任选取代有一个、两个或三个独立选自以下的取代基：烷氧基、烷基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基和硝基。
本申请使用的术语“(NRcRd)烯基”是指
其中Rc及Rd如本申请中所定义且各Rq独立地为氢或C1-3烷基。
本申请使用的术语“(NRcRd)烷基”是指取代有一个、两个或三个-NRcRd基团的烷基。所述(NRcRd)烷基中的烷基部分进一步任选取代有一个或两个选自以下的其它基团：烷氧基、烷氧基烷基羰基、烷氧基羰基、烷基硫烷基、芳基烷氧基羰基、羧基、环烷基、杂环基、杂环基羰基、羟基和(NReRf)羰基；其中所述杂环基进一步任选取代有一个、两个、三个、四个或五个独立选自以下的取代基：烷氧基、烷基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基和硝基。
本申请使用的术语“-NReRf”是指通过氮原子与母体分子部分连接的两个基团Re和Rf。Re和Rf独立选自氢、烷基、未取代的芳基、未取代的芳基烷基、未取代的环烷基、未取代的(环烷基)烷基、未取代的杂环基、未取代的杂环基烷基、(NRxRy)烷基和(NRxRy)羰基。
本申请使用的术语“(NReRf)烷基”是指取代有一个、两个或三个-NReRf基团的烷基。
本申请使用的术语“(NReRf)烷基羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的(NReRf)烷基。
本申请使用的术语“(NReRf)羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的-NReRf基团。
本申请使用的术语“(NReRf)磺酰基”是指通过磺酰基与母体分子部分连接的-NReRf基团。
本申请使用的术语“-NRxRy”是指通过氮原子与母体分子部分连接的两个基团Rx和Ry。Rx和Ry独立选自氢、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、未取代的芳基、未取代的芳基烷氧基羰基、未取代的芳基烷基、未取代的环烷基、未取代的杂环基和(NRx’Ry’)羰基，其中Rx’及Ry’独立选自氢和烷基。
本申请使用的术语“(NRxRy)烷基”是指取代有一个、两个或三个-NRxRy基团的烷基。
本申请使用的术语“(NRxRy)羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的-NRxRy基团。
本申请使用的术语“(NRx’Ry’)羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的-NRx’Ry’基团。
本申请使用的术语“氧代”是指＝O。
本申请使用的术语“氧代环烷基”是指取代有氧代的环烷基。
本申请使用的术语“螺环杂环基”是指分别经由一个或两个单个碳原子与一个或两个任选含有一个氧原子的三元至五元饱和环邻接的含有一个、两个或三个独立选自氮、氧或硫的杂原子的四元、五元、六元或七元饱和或不饱和环。本申请杂环基可通过基团中的任意碳原子或氮原子与母体分子部分连接。本申请螺环杂环基任选取代有一个或两个独立选自以下的基团：烷基、卤素和卤代烷基。
本申请使用的术语“螺环基”是指通过单个碳原子与母体分子部分邻接的三元、四元或五元饱和环。
本申请使用的术语“磺酰基”是指-SO2-。
本申请使用的术语“烷硫基”表示通过硫原子与母体分子部分连接的烷基。
在本申请化合物中存在不对称中心。取决于手性碳原子周围的取代基的构型，这些中心以符号“R”或“S”表示。应当理解的是，本申请涵盖具有抑制NS5A的能力的所有立体化学异构形式或其混合物。化合物的单独立体异构体可由含有手性中心的市售原料以合成方式制备，或通过制备对映异构产物的混合物继而分离(诸如转化为非对映异构体的混合物继而分离或重结晶、色谱技术或直接在手性色谱柱上分离对映异构体)来制备。特定立体化学的起始化合物可为市售的或可通过本领域已知的技术来制备且解析。
本申请某些化合物还可按不同的稳定的可分离的构象形式存在。由于围绕不对称单键的受限旋转(例如因为位阻或环张力)而导致的扭转不对称性可使不同的构象异构体得以分离。本申请包括这些化合物的每种构象异构体及其混合物。
本申请化合物也可按互变异构体存在；因此本申请也包括所有互变异构体形式。
术语“本申请化合物”及等同表达方式意在包括式(I)化合物及其药用对映异构体、非对映异构体和盐。类似地，在上下文允许的情况下，当提及中间体时，其意在包括它们的盐。
本申请意欲包括存在于本申请化合物中的原子的所有同位素。同位素包括具有相同原子序数但具有不同质量数的原子。通过一般举例而非限制的方式，氢的同位素包括氘和氚。碳的同位素包括13C和14C。本申请同位素标记的化合物可如下制备：一般通过本领域技术人员已知的常规技术或通过与本申请描述类似的方法，使用适当的同位素标记的试剂代替其它情况下使用的未标记的试剂。上述化合物具有多种潜在用途，例如在生物活性测定中作为标准物和试剂。在稳定的同位素的情况下，上述化合物可具有有利地改变生物学、药理学或药物动力学性质的潜能。
本申请化合物可按药用盐的形式存在。本申请使用的术语“药用盐”表示本申请化合物的盐或两性离子形式，其是水溶性或水可分散性的或是油溶性或油可分散性的且在合理的医药判断范围内适用于与患者的组织接触而不引起过度的毒性、刺激性、变态反应或其它问题或并发症(这与合理的益处/风险比是相称的)且就其所预期的用途而言是有效的。盐可在化合物的最终分离和纯化期间制备或可通过使合适的碱性官能团与合适的酸反应来单独制备。代表性酸加成盐包括乙酸盐、己二酸盐、海藻酸盐、枸橼酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、二葡萄糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、甲酸盐、富马酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、均三甲苯磺酸盐、甲磺酸盐、萘磺酸盐、烟酸盐、萘-2-磺酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、三氯乙酸盐、三氟乙酸盐、磷酸盐、谷氨酸盐、碳酸氢盐、对甲苯磺酸盐和十一烷酸盐。可用于形成药用加成盐的酸的实例包括无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸和磷酸及有机酸例如草酸、马来酸、琥珀酸和枸橼酸。
碱加成盐可在化合物的最终分离和纯化期间如下制备：使羧酸基团与合适的碱例如金属阳离子的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐反应或与氨或有机伯、仲或叔胺反应。药用盐中的阳离子包括锂离子、钠离子、钾离子、钙离子、镁离子和铝离子及无毒的胺阳离子例如铵、四甲基铵、四乙基铵、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、二乙胺、乙胺、三丁胺、吡啶、N,N-二甲基苯胺、N-甲基哌啶、N-甲基吗啉、二环己胺、普鲁卡因、二苄胺、N,N-二苄基苯乙胺和N,N’-二苄基乙二胺。可用于形成碱加成盐的其它代表性有机胺包括乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌啶和哌嗪。
当治疗有效量的式(I)化合物及其药用盐可按化学原料的形式来给药而用于治疗时，活性成分可按药物组合物的形式来提供。因此，本申请还提供了药物组合物，其包含治疗有效量的式(I)化合物或其药用盐及一种或多种药用载体、稀释剂或赋形剂。式(I)化合物及其药用盐如上所述。载体、稀释剂或赋形剂就与制剂中的其它成分相容而言必须是可接受的且对其接受者必须是没有害处的。本申请另一个方面还提供了制备药物制剂的方法，其包括将式(I)化合物或其药用盐与一种或多种药用载体、稀释剂或赋形剂混合。术语“治疗有效量”是指各种活性组分的总量，所述总量足以显示出有意义的患者益处例如病毒载量的持续减少。所述术语当用于单独给药的一种活性成分时是指该成分的单独量。所述术语当用于组合时是指各种活性成分引起治疗效果的组合量而不论是组合给药、先后给药或同时给药。式(I)化合物及其药用盐如上所述。一种或多种载体、一种或多种稀释剂或一种或多种赋形剂就与制剂中的其它成分相容而言必须是可接受的且对其接受者必须是没有害处的。本申请另一个方面还提供了制备药物制剂的方法，其包括将式(I)化合物或其药用盐与一种或多种药用载体、稀释剂或赋形剂混合。本申请使用的术语“药用盐”表示这样的化合物、物质、组合物和/或剂型：其在合理的医药判断范围内适用于与患者的组织接触而不引起过度的毒性、刺激性、变态反应或其它问题或并发症(这与合理的益处/风险比是相称的)且就其所预期的用途而言是有效的。
药物制剂可按单位剂量形式来提供，其在每个单位剂量中含有预定量的活性成分。本申请化合物的以下剂量水平即约0.01至约150毫克/千克(“mg/kg”)体重/天且优选约0.05至约100mg/kg体重/天在对由HCV介导的疾病进行预防和治疗的单一疗法中是典型的。通常，本申请药物组合物将每天给药约1次至约5次或可按连续输注的形式来给药。上述给药可用作慢性或急性疗法。可与载体物质组合以制备单一剂型的活性成分的量将随以下因素而变化：所治疗的病症、所述病症的严重程度、给药时间、给药途径、所用化合物的排泄速率、治疗的持续时间及患者的年龄、性别、体重和状态。优选的单位剂量制剂是以下那些单位剂量制剂，其含有上述每天剂量或亚剂量或其合适分数的活性成分。通常，治疗始于基本小于化合物最佳剂量的小剂量。然后剂量以小的增幅增加直到实现对病情的最佳效果。通常，化合物按以下浓度水平来给药是最期望的，所述浓度水平通常将提供有效的抗病毒结果而不引起任何有害或有毒的副作用。
当本申请组合物包含本申请化合物与一种或多种其它治疗药物和/或预防药物的组合时，所述化合物和所述其它药物通常都可按以下剂量水平存在，所述剂量水平为在单一疗法给药方案中通常给药的剂量的约10至150％，且更优选为约10至80％。
可对药物制剂进行调整以通过任何合适的途径来给药，所述途径为例如口服(包括口腔或舌下)途径、直肠途径、经鼻途径、局部(包括口腔、舌下或透皮)途径、阴道途径或胃肠外(包括皮下注射或输注、皮内注射或输注、肌内注射或输注、关节内注射或输注、滑膜内注射或输注、胸骨内注射或输注、鞘内注射或输注、病灶内注射或输注、静脉内注射或输注或皮内注射或输注)途径。上述制剂可通过药学领域已知的任何方法例如通过将活性成分与一种或多种载体或一种或多种赋形剂组合来制备。优选口服给药或经注射给药。
适于口服给药的药物制剂可按以下形式来提供：离散的单位形式例如胶囊剂或片剂；粉末剂或颗粒剂；在水性或非水性液体中的溶液剂或混悬剂；可食用的泡沫剂或搅打剂；或水包油型液体乳剂或油包水型乳剂。
例如，就以片剂或胶囊剂的形式进行口服给药而言，可将活性药物组分与口服无毒的药用惰性载体例如乙醇、甘油、水等组合。粉末剂如下制备：将化合物研磨至合适的微细尺寸，然后与经类似研磨的药物载体例如可食用的碳水化合物例如淀粉或甘露醇混合。矫味剂、防腐剂、分散剂和着色剂也可存在。
胶囊剂如下制备：如上所述制备粉末混合物，然后填充到成形的明胶壳中。可将助流剂和润滑剂例如胶体二氧化硅、滑石、硬脂酸镁、硬脂酸钙或固体聚乙二醇加到粉末混合物中，然后进行填充操作。还可加入崩解剂或增溶剂例如琼脂、碳酸钙或碳酸钠以改善胶囊剂被摄入时的药物利用度。
另外，当期望或需要时，也可将合适的粘合剂、润滑剂、崩解剂和着色剂掺到混合物中。合适的粘合剂包括淀粉、明胶、天然糖例如葡萄糖或β-乳糖、玉米增甜剂、天然胶和合成胶例如阿拉伯胶、西黄蓍胶或海藻酸钠、羧甲基纤维素、聚乙二醇等。用于这些剂型的润滑剂包括油酸钠、氯化钠等。崩解剂包括但不限于淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、黄原胶等。片剂例如如下配制：制备粉末混合物，制粒或预压，加入润滑剂和崩解剂，然后压制成片剂。粉末混合物如下制备：将经合适研磨的化合物与上述稀释剂或基质及任选的粘合剂(例如羧甲基纤维素、海藻酸盐、凝胶或聚乙烯基吡咯烷酮)、溶解延迟剂(例如石蜡)、吸收促进剂(例如季胺盐)和/或吸收剂(例如膨润土、高岭土或磷酸二钙)混合。粉末混合物可如下制粒：用粘合剂例如糖浆、淀粉糊、阿拉伯胶液、纤维素溶液或聚合物溶液润湿且挤压过筛。作为可选择的制粒方法，粉末混合物可通过压片机来处理且结果是不完全成形的预压片破裂成颗粒。颗粒可通过加入硬脂酸、硬脂酸盐、滑石或矿物油来润滑以防止与片剂成形模具粘附。然后将经润滑的混合物压制成片剂。也可将本申请化合物与可自由流动的惰性载体组合且在不经历制粒或预压步骤的情况下直接压制成片剂。可提供透明或不透明的由以下包衣层构成的保护性包衣：由虫胶形成的隔离包衣层、由糖或聚合物形成的包衣层和由蜡形成的光亮包衣层。可将染料加到这些包衣中以区分不同的单位剂量。
口服流体例如溶液剂、糖浆剂和酏剂可按剂量单位形式来制备，从而使给定的量含有预定量的化合物。糖浆剂可通过将化合物溶解在经合适矫味的水溶液中来制备，而酏剂通过使用无毒的媒介物来制备。还可加入增溶剂和乳化剂(例如乙氧基化的异硬脂醇和聚氧乙烯山梨醇醚)、防腐剂、矫味添加剂(例如薄荷油或天然甜味剂或糖精或其它人造甜味剂)等。
当合适时，可对用于口服给药的剂量单位制剂进行微囊化。制剂也可例如如下制备以延长或维持释放：将颗粒物质包衣或包埋到聚合物、蜡等中。
式(I)化合物及其药用盐也可按脂质体递送系统的形式来给药，所述脂质体递送系统为例如小单层脂囊、大单层脂囊和多层脂囊。脂质体可由各种磷脂例如胆固醇、硬脂酰胺或磷脂酰胆碱来形成。
式(I)化合物及其药用盐也可通过使用单克隆抗体作为与化合物分子偶联的单独载体来递送。化合物也可与作为靶向药物载体的可溶性聚合物偶联。上述聚合物可包括聚乙烯基吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羟基丙基甲基丙烯酸酰胺苯酚、聚羟基乙基天冬酰胺苯酚或取代有棕榈酰基的聚氧化乙烯聚赖氨酸。另外，化合物可与可用于实现药物受控释放的一类生物可降解的聚合物偶联，所述聚合物为例如聚乳酸、聚ξ-己内酯、聚羟基丁酸、聚原酸酯、聚缩醛、聚二氢吡喃、聚氰基丙烯酸酯和水凝胶的交联或两亲性嵌段共聚物。
适于透皮给药的药物制剂可按离散的贴剂形式来提供，其意在与接受者的表皮保持紧密接触以保持延长的时段。例如，如在Pharmaceutical Research 1986,3(6),318中所一般描述的，活性成分可从贴剂中通过离子电渗法来递送。
可将适于局部给药的药物制剂配制成软膏剂、乳膏剂、混悬剂、洗剂、粉末剂、溶液剂、糊剂、凝胶剂、喷雾剂、气雾剂或油剂。
就治疗眼部或其它外部组织例如口和皮肤而言，制剂优选以局部用软膏剂或乳膏剂的形式来施用。当配制成软膏剂时，活性成分可与石蜡或水可混溶性软膏剂基质一起使用。可选择地，可将活性成分与水包油型乳膏剂基质或油包水型基质一起配制成乳膏剂。
适于局部给药至眼部的药物制剂包括滴眼剂，其中将活性成分溶解或混悬在合适的载体尤其是水性溶剂中。
适于在口中局部给药的药物制剂包括锭剂、含锭剂和口腔洗剂。
适于直肠给药的药物制剂可按栓剂或灌肠剂的形式来提供。
适于鼻部给药的其中载体为固体的药物制剂包括一系列粉末，其以吸入方式来给药即从接近鼻部的装有粉末的容器中经由鼻道而快速吸入，所述粉末的粒径为例如20-500微米。适于以鼻喷雾剂或滴鼻剂的形式进行给药的其中载体为液体的制剂包括活性成分的水溶液或油溶液。
适于吸入给药的药物制剂包括由微细颗粒构成的粉尘或气雾，其可通过各种类型的计量剂量的加压的气雾器、喷雾器或吸入器来产生。
适于阴道给药的药物制剂可按阴道栓剂、棉塞剂、乳膏剂、凝胶剂、糊剂、泡沫剂或喷雾剂的形式来提供。
适于胃肠外给药的药物制剂包括：水性和非水性无菌注射溶液剂，其可含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使制剂与所预期的接受者的血液等渗的溶质；及水性和非水性无菌混悬剂，其可包含助悬剂和增稠剂。所述制剂可按单位剂量或多剂量容器例如密封的安瓿和小瓶的形式来提供且可在冷冻干燥的(冻干的)状态下贮存，其仅需要在使用前即时加入无菌液体载体例如注射用水。现用现配的注射溶液剂和混悬剂可由无菌粉末剂、颗粒剂和片剂来制备。
应当理解的是，除以上具体提及的成分外，在考虑到所涉及的制剂类型的情况下，制剂还可包含本领域常规的其它物质，例如适于口服给药的那些制剂可包含矫味剂。
术语“患者”包括人类及其它哺乳动物。
术语“治疗”是指：(i)在可能易患疾病、障碍和/或病症但尚未诊断患有所述疾病、障碍和/或病症的患者中预防所述疾病、障碍和/或病症的发生；(ii)抑制所述疾病、障碍和/或病症即阻止其发展；及(iii)缓解所述疾病、障碍和/或病症即引起所述疾病、障碍和/或病症的消退。
本申请化合物还可与环孢菌素给药，例如环孢菌素A。环孢菌素A在临床试验中已显示对HCV具有活性(Hepatology 2003,38,1282；Biochem.Biophys.Res.Commun.2004,313,42；J.Gastroenterol.2003,38,567)。
下表1列出了可与本申请化合物一起给药的化合物的一些示例性实例。本申请化合物可在联合疗法中与其它具有抗HCV活性的化合物同时或分开给药或通过将各种化合物组合成组合物来给药。
表1
本申请化合物还可用作实验室试剂。化合物可用于提供以下研究工具，所述研究工具用于设计病毒复制测定、验证动物测定系统和进行结构生物学研究以进一步提高对HCV疾病机理的认识。另外，本申请化合物可用于建立或确定其它抗病毒化合物的结合位点(例如通过竞争性抑制)。
本申请化合物还可用于处理或防止物质的病毒污染且因此降低了与这些物质(例如血液、组织、手术器械和手术外衣、实验室仪器和实验室外衣及采血或输血装置和物质)发生接触的实验室人员或医务人员或患者感染病毒的风险。
当式(I)化合物通过合成性过程或通过代谢性过程(包括发生在人体或动物体内(在体内)的那些代谢性过程或发生在体外的过程)来制备时，本申请意在包括这样的式(I)化合物。
本申请使用的缩写(尤其包括在以下示例性方案和实施例中使用的缩写)是本领域技术人员公知的。所使用的一些缩写如下：ca.表示约；ACN或MECN表示乙腈；TFA表示三氟乙酸；min或mins表示分钟；EtOAc或EtOAc或EA表示乙酸乙酯；DCM表示二氯甲烷；Hex表示己烷；THF表示四氢呋喃；DMSO表示二甲基亚砜；Et3N或TEA表示三乙胺；TBS-Cl表示叔丁基二甲基氯甲硅烷；Et2O表示乙醚；MeOH表示甲醇；EtOH表示乙醇；rt或RT表示室温或保留时间(上下文决定)；Rt表示保留时间；Ts表示对甲苯磺酰基；Ph表示苯基；LiHMDS表示二(三甲基甲硅烷基)氨基锂；Me表示甲基；iPr2EtN、DIEA或DiPEA表示二异丙基乙基胺；h或hr或hrs表示小时；ON表示过夜；TBS表示叔丁基二甲基甲硅烷基；DMF表示N,N-二甲基甲酰胺；pTsOH表示对甲苯磺酸；AcOH表示乙酸；HATU表示O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐；BOC表示叔丁氧基羰基；DME表示1,2-二甲氧基乙烷；DMAP表示N,N-二甲基氨基吡啶；HOBT表示1-羟基苯并三唑；及EDC表示1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺。
本申请现将连同某些实施方案来描述，而这些实施方案不是意在限制本申请范围。相反地，本申请涵盖可包括在权利要求书范围内的所有可选形式、变化形式和等价形式。因此，包括具体实施方案在内的以下实施例将说明本申请一种具体实施，其中应当理解的是，所述实施例意在说明某些实施方案且被呈现以提供据信是关于其操作和概念性方面的最有用和容易理解的描述。
原料是从商业来源得到的或通过本领域普通技术人员已知的公认文献方法制备的。
条件1
起始％B＝0
结束％B＝100
梯度时间＝2min
停止时间＝3min
流速＝1mL/min
波长＝220nm
溶剂A＝10％ACN/90％H2O/0.1％TFA
溶剂B＝90％ACN/10％H2O/0.1％TFA
柱＝Phenomenex-Luna C18,30×2,3μ
条件2
起始％B＝0
结束％B＝100
梯度时间＝2min
停止时间＝3min
流速＝4mL/min
波长＝220nm
溶剂A＝0.1％TFA/10％甲醇/90％水
溶剂B＝0.1％TFA/90％甲醇/10％水
柱＝Phenomenex-Luna 3.0×50mm S10
条件3
起始％B＝0
结束％B＝100
梯度时间＝4min
停止时间＝5min
流速＝0.8mL/min
波长＝220nm
溶剂A＝10％ACN/90％H2O/0.1％TFA
溶剂B＝90％ACN/10％H2O/0.1％TFA
柱＝Phenomenex-Luna C18,50×2,3μ
条件4
起始％B＝2
结束％B＝98
梯度时间＝1min
停止时间＝1.5min
流速＝0.8mL/min
波长＝220nm
溶剂A＝100％H2O/0.05％TFA
溶剂B＝100％ACN/0.05％TFA
柱＝Waters Acquity SDS
条件5
起始％B＝0
结束％B＝100
梯度时间＝2min
停止时间＝3min
流速＝1mL/min
波长＝220nm
溶剂A＝0.1％TFA/10％甲醇/90％水
溶剂B＝0.1％TFA/90％甲醇/10％水
柱＝Phenomenex-Luna 2.0×30mm 3μm
条件6
起始％B＝10
结束％B＝100
梯度时间＝30min
停止时间＝33min
流速＝1mL/min
波长＝220nm
溶剂A＝10mM amm.bicarb(pH＝9.5)/95％水/5％甲醇
溶剂B＝10mM amm.bicarb(pH＝9.5)/5％水/95％甲醇
柱＝Xbridge Phenyl 3.5μm,3.0×150mm
条件7
起始％B＝10
结束％B＝100
梯度时间＝15min
停止时间＝18min
流速＝1mL/min
波长＝220nm
溶剂A＝0.1％TFA/95％水/5％乙腈
溶剂B＝0.1％TFA/5％水/95％乙腈
柱＝Xbridge C18 3.5μm,3.0×150mm
条件8
起始％B＝0
结束％B＝100
梯度时间＝4min
停止时间＝5min
流速＝0.8mL/min
波长＝220nm
溶剂A＝10％MeOH/90％H2O/0.1％TFA
溶剂B＝90％MeOH/10％H2O/0.1％TFA
柱＝Phenomenex-Luna C18,50×2,3μ
柱温箱＝40℃
条件9
起始％B＝10
结束％B＝50
梯度时间＝20min
停止时间＝25min
流速＝1mL/min
波长1＝220nm
波长2＝254nm
溶剂A＝5％ACN/95％H2O/0.1％TFA
溶剂B＝95％ACN/5％H2O/0.1％TFA
柱＝Waters Sunfire C18,150×4.6,3.5μ(低pH)
条件10
UPLC
起始％B＝2
结束％B＝98
梯度时间＝1.5min
停止时间＝2min
流速＝0.8mL/min
波长＝220nm
溶剂A＝100％H2O/0.05％TFA
溶剂B＝100％ACN/0.05％TFA
柱＝Waters Acquity UPLC BEH C18 2.1×50mm,1.7μm
Cap-1
Cap-1步骤a
历时5h通过注射泵将重氮基乙酸叔丁酯(1.832mL,13.22mmol)在50mL CH2Cl2中的溶液滴加到2,5-二氢呋喃(9.76mL,132mmol)和乙酸铑(II)二聚体(0.058g,0.132mmol)在40mL CH2Cl2中的混合物中。然后将所得混合物在室温搅拌过夜。真空除去溶剂。将残余物通过色谱(硅胶,0％-15％EtOAc/Hex)来纯化，得到Cap-1步骤a(反式异构体)(720mg)和Cap-1步骤a(顺式异构体)(360mg)，其为澄清油状物。Cap-1步骤a(反式异构体):1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 3.88(2H,d,J＝8.55Hz),3.70(2H,d,J＝8.55Hz),2.03-2.07(2H,m),1.47(1H,t,J＝3.20Hz),1.41(9H,s)；Cap-1步骤a(顺式异构体):1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 4.06(2H,d,J＝8.53Hz),3.73(2H,d,J＝8.03Hz),1.81-1.86(2H,m),1.65-1.71(1H,m),1.43-1.47(9H,m)。
Cap-1步骤b
在-10℃历时1h向(Cap-1步骤a(反式异构体))(700mg,3.80mmol)在15mL乙醚中的溶液中滴加LiAlH4(7.60mL,7.60mmol)(1M在THF中)。将所得混合物在-10℃搅拌1h，然后在室温搅拌1h。然后将混合物冷却至-5℃。滴加10mL罗谢尔盐(酒石酸钾钠)水溶液以淬灭反应。将混合物在室温搅拌30min，然后用EtOAc(3×)萃取。将合并的有机层用MgSO4干燥并浓缩，得到Cap-1步骤b(380mg)，其为浅黄色油状物。产物用于下一步而无需纯化。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 3.85(2H,d,J＝8.28Hz),3.68(2H,d,J＝8.53Hz),3.45-3.55(2H,m),1.50-1.56(2H,m),1.02-1.11(1H,m)。
Cap-1步骤c
在-78℃向DMSO(4.82mL,67.9mmol)在CH2Cl2(70mL)中的溶液中缓慢滴加草酰氯(3.14mL,35.8mmol)。将所得混合物在-78℃搅拌15min。加入Cap-1步骤b(3.10g,27.2mmol)在35mL CH2Cl2中的溶液且将混合物在-78℃搅拌1h。然后滴加Et3N(18.93mL,136mmol)。30min后，将冷却浴移开并将反应混合物用冷的20％K2HPO4水溶液(10mL)和水淬灭。将混合物在室温搅拌15min，然后用Et2O稀释。分离各层。将水层用Et2O(2×)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用MgSO4干燥并浓缩。将残余物通过快速色谱(硅胶,100％CH2Cl2)来纯化，得到Cap-1步骤c(2.71g)，其为浅黄色油状物。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 9.41(1H,d,J＝4.27Hz),3.96(2H,d,J＝8.85Hz),3.80(2H,d,J＝8.55Hz),2.27-2.33(2H,m),1.93(1H,m)。
Cap-1步骤d
在0℃向Cap-1步骤c(2.7g,24.08mmol)在50mL水中的混合物中加入亚硫酸氢钠(2.506g,24.08mmol)和KCN(1.631g,25.04mmol)，然后加入(R)-2-氨基-2-苯基乙醇(3.30g,24.08mmol)在18mL MeOH中的溶液。将所得混合物在室温搅拌2h，然后加热至回流过夜。将混合物冷却至室温。加入100mL EtOAc。混合15min后，分离各层。将水层用EtOAc(2×)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用MgSO4干燥并浓缩。将粗非对映异构体混合物通过反相HPLC(柱:Water Sunfire 30×150mm,乙腈/水/NH4OAc)来纯化，得到Cap-1步骤d的两种非对映异构体。未确定每种异构体的绝对立体化学。非对映异构体1(靠后的级份)(570mg)：LC(条件1)：RT＝0.97min；LC/MS：[M+H]+C15H19N2O2分析计算值259.14；实测值259.2。
Cap-1步骤e
在0℃向Cap-1步骤d(非对映异构体1)(570mg,2.207mmol)在20mL CH2Cl2和20mLMeOH中的溶液中加入四乙酸铅(1174mg,2.65mmol)。将所得橙色混合物在0℃搅拌10min。然后将水(20mL)加到混合物中并将混合物用硅藻土过滤。将滤液浓缩并用25mL 6NHCl水溶液稀释。将所得混合物回流4h。将混合物过滤并用CH2Cl2洗涤。将水层浓缩，得到Cap-1步骤e(盐酸盐)。粗产物用于下一步而无需进一步纯化。1H NMR(500MHz,MeOD)δppm3.87-3.91(2H,m),3.73(2H,dd,J＝8.70,2.90Hz),3.55(1H,d,J＝10.07Hz),2.02-2.07(1H,m),1.94-1.99(1H,m),1.03-1.10(1H,m)。
Cap-1
向上述粗Cap-1步骤e在1N NaOH水溶液(10mL)中的混合物中加入碳酸氢钠(371mg,4.42mmol)。然后滴加氯甲酸甲酯(0.342mL,4.42mmol)。将所得混合物在室温搅拌3h。将混合物用1N HCl水溶液中和，然后用EtOAc(3×)萃取。将合并的有机层用MgSO4干燥并浓缩，得到Cap-1(100mg,两步收率21.1％)，其为浅黄色油状物。LC(条件1)：RT＝0.54min；LC/MS：[M+H]+C9H14NO5分析计算值216.09；实测值216.1；1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 5.29(1H,宽单峰),3.53-4.02(8H,m),1.66-1.92(2H,m),1.08(1H,宽单峰)。
Cap-2
外消旋混合物
Cap-2步骤a
将环戊-3-烯醇(5g,59.4mmol)和Et3N(9.94mL,71.3mmol)在50mL CH2Cl2中的溶液在室温搅拌15min。然后滴加苯甲酰氯(8.28mL,71.3mmol)并将混合物在室温搅拌过夜。然后将混合物用水洗涤。将有机层用MgSO4干燥并浓缩。将残余物通过快速色谱(硅胶,EtOAc/Hex 0-10％)来纯化，得到Cap-2步骤a(9.25g)，其为澄清油状物。LC(条件1)：RT＝1.77min；1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 8.01-8.07(2H,m),7.55(1H,t,J＝7.40Hz),7.43(2H,t,J＝7.65Hz),5.79(2H,s),5.64(1H,tt,J＝6.93,2.60Hz),2.87(2H,dd,J＝16.56,6.78Hz),2.52-2.63(2H,m)。
Cap-2步骤b
向具有磁力搅拌棒的圆底烧瓶中加入纯态氟化钠(5.02mg,0.120mmol)和Cap-2步骤a(2.25g,11.95mmol)。将烧瓶加热至100℃并历时5h通过注射泵缓慢加入纯态2,2-二氟-2-(氟磺酰基)乙酸三甲基甲硅烷基酯(5.89mL,29.9mmol)。将混合物在100℃搅拌过夜。然后将混合物用CH2Cl2稀释，用水、饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤，用MgSO4干燥并浓缩。将粗产物通过快速色谱(硅胶,0-5％EtOAc/Hex)来纯化，得到Cap-2步骤b(异构体1)(750mg)和Cap-2步骤b(异构体2)(480mg)，其为澄清油状物。相对立体化学归属通过NOE研究来进行。Cap-2步骤b(异构体1)：LC(条件1)：RT＝1.83min；LC/MS：[M+H]+C13H13F2O2分析计算值239.09；实测值239.2；
1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 7.99-8.04(2H,m),7.56(1H,t,J＝7.32Hz),7.43(2H,t,J＝7.63Hz),5.25-5.33(1H,m),2.50(2H,dd,J＝14.04,6.71Hz),2.14-2.22(2H,m),2.08-2.14(2H,m)；Cap-2步骤b(异构体2)：LC(条件1)：RT＝1.79min；LC/MS：[M+H]+C13H13F2O2分析计算值239.09；实测值239.2；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.98-8.08(2H,m),7.53-7.59(1H,m),7.41-7.48(2H,m),5.53-5.62(1H,m),2.59-2.70(2H,m),2.01-2.11(4H,m)。
Cap-2步骤c
向Cap-2步骤b(异构体2)(480mg,2.015mmol)在4mL MeOH中的溶液中加入KOH(4mL,2.015mmol)(10％水溶液)。将所得混合物在室温搅拌过夜。然后将混合物用CH2Cl2(3×)萃取。将合并的有机层用MgSO4干燥并浓缩，得到Cap-2步骤c(220mg)，其为浅黄色固体。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 4.41-4.54(1H,m),2.38-2.50(2H,m),1.89-1.99(2H,m),1.81(2H,dd,J＝14.50,5.04Hz)。
Cap-2步骤d
将Tosyl-Cl(甲苯磺酰氯)(625mg,3.28mmol)加到Cap-2步骤c(220mg,1.640mmol)和吡啶(0.531mL,6.56mmol)在7mL CH2Cl2中的溶液中。将混合物在室温搅拌过夜，然后用CH2Cl2稀释，用水和1N HCl水溶液洗涤。将有机层干燥(MgSO4)并浓缩。将残余物通过快速色谱(硅胶,0-15％EtOAc/己烷)来纯化，得到Cap-2步骤d(325mg)，其为澄清油状物。LC(条件1)：RT＝1.72min；LC/MS：[M+Na]+C13H14F2NaO3S分析计算值311.05；实测值311.2；1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 7.76(2H,d,J＝8.24Hz),7.34(2H,d,J＝8.24Hz),4.99-5.08(1H,m),2.45(3H,s),2.31-2.41(2H,m),1.84-1.94(4H,m)。
Cap-2步骤e
外消旋混合物
向微波管中加入N-(二苯基亚甲基)甘氨酸乙酯(241mg,0.902mmol)和Cap-2步骤d(260mg,0.902mmol)在2mL甲苯中的溶液。将管密封并在N2下滴加LiHMDS(1.082mL,1.082mmol)(1N在THF中)。将所得深棕色溶液在微波中在100℃加热5h。然后将混合物用水淬灭并用EtOAc(3×)萃取。将合并的有机层用水洗涤，用MgSO4干燥并浓缩。将粗产物通过快速色谱(硅胶,0-5％EtOAc/Hex)来纯化，得到Cap-2步骤e的外消旋混合物(240mg)，其为浅黄色油状物。将混合物用于下一步而无需分离。LC(条件2)：RT＝1.91min；LC/MS：[M+Na]+C23H24F2NO2分析计算值384.18，实测值384.35。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 7.63-7.70(2H,m),7.43-7.51(3H,m),7.38-7.43(1H,m),7.31-7.38(2H,m),7.13-7.22(2H,m),4.13-4.22(2H,m),3.95(1H,d,J＝6.41Hz),2.67-2.79(1H,m),2.07-2.16(1H,m),1.97-2.07(2H,m),1.90(2H,m),1.65-1.76(1H,m),1.25(3H,t,J＝7.17Hz)。
Cap-2步骤f
外消旋混合物
向Cap-2步骤e(240mg,0.626mmol)在4mL THF中的溶液中加入HCl(1mL,2.0mmol)(2N水溶液)。将所得混合物在室温搅拌2h。然后将混合物用EtOAc洗涤，用饱和NaHCO3水溶液中和，然后用EtOAc(3×)萃取。将合并的有机层用MgSO4干燥并浓缩，得到Cap-2步骤f(120mg)，其为澄清油状物。LC(条件2)：RT＝0.85min；LC/MS：[M+H]+C10H16F2NO2分析计算值220.11；实测值220.26；1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 4.14-4.25(2H,m),3.26(1H,d,J＝6.71Hz),2.22-2.35(1H,m),1.90-2.11(5H,m),1.79-1.90(1H,m),1.22-1.34(3H,m)。
Cap-2步骤g
外消旋混合物
向Cap-2步骤f(120mg,0.547mmol)在2mL CH2Cl2中的溶液中加入氯甲酸甲酯(0.085mL,1.095mmol)。将所得混合物在室温搅拌1h。将混合物用CH2Cl2稀释并用水洗涤。将有机层用Na2SO4干燥并浓缩，得到Cap-2步骤g(150mg)，其为白色固体。LC(条件1)：RT＝1.45min；LC/MS：[M+H]+C12H18F2NO4分析计算值278.12；实测值278.2；1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 5.23(1H,d,J＝8.24Hz),4.29(1H,t,J＝7.48Hz),4.15-4.23(2H,m),3.68(3H,s),2.37(1H,宽单峰),2.02-2.10(1H,m),1.85-2.00(4H,m),1.75-1.84(1H,m),1.27(3H,t,J＝7.02Hz)。
Cap-2
外消旋混合物
向Cap-2步骤g(150mg,0.541mmol)在2mL THF和1mL水中的混合物中加入LiOH(0.811mL,1.623mmol)(2N水溶液)。将所得混合物在室温搅拌过夜。将混合物用1N HCl水溶液中和并用EtOAc(3×)萃取。将合并的有机层用MgSO4干燥并浓缩，得到Cap-2(133mg)，其为白色固体。LC(条件2)：RT＝1.07min；LC/MS：[M+H]+C10H14F2NO4分析计算值250.09；实测值250.13；1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 5.18-5.36(1H,m),4.28-4.44(1H,m),3.70(3H,s),2.37-2.56(1H,m),1.74-2.31(6H,m)。
Cap-3
外消旋混合物
按照针对Cap-2所述的程序由Cap-2步骤b(异构体1)合成Cap-3。LC(条件2)：RT＝1.08min；LC/MS：[M+H]+C10H14F2NO4分析计算值250.09，实测值249.86。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 5.15(1H,d,J＝8.24Hz),4.32(1H,t,J＝7.48Hz),3.69(3H,s),2.83-2.99(1H,m),1.96-2.26(4H,m),1.70(1H,t,J＝11.75Hz),1.59(1H,t,J＝12.05Hz)。
Cap-4
外消旋混合物
Cap-4步骤a
外消旋混合物
将2-氨基-2-((1R,3r,5S)-二环[3.1.0]己-3-基)乙酸乙酯(使用与针对制备Cap-2所述相同的程序由市售(1R,3r,5S)-二环[3.1.0]己-3-醇制备；350mg,1.910mmol)、DiPEA(0.667mL,3.82mmol)和氯甲酸甲酯(0.296mL,3.82mmol)在5mL CH2Cl2中的混合物在室温搅拌1h。然后将混合物用CH2Cl2稀释并用水洗涤。将有机层用MgSO4干燥并浓缩，得到Cap-4步骤a(461mg)，其为黄色油状物。LC(条件1)：RT＝1.43min；LC/MS：[M+H]+C12H20NO4分析计算值242.14；实测值242.2；1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 5.04(1H,d,J＝7.63Hz),4.09-4.20(2H,m),4.05(1H,t,J＝8.39Hz),3.63(3H,s),2.55-2.70(1H,m),1.96-2.09(2H,m),1.37-1.60(4H,m),1.24(3H,t,J＝7.17Hz),0.66-0.76(1H,m),-0.03-0.06(1H,m)。
Cap-4
外消旋混合物
向乙酯Cap-4步骤a(461mg,1.911mmol)在5mL THF和2mL水中的混合物中加入LiOH(2.87mL,5.73mmol)(2N水溶液)。将所得混合物在室温搅拌过夜。然后将混合物用1N HCl水溶液中和并用EtOAc(3×)萃取。将合并的有机层用MgSO4干燥并浓缩，得到Cap-4(350mg)，其为澄清油状物。LC(条件1)：RT＝1.04min；LC/MS：[2M+Na]+C20H30N2NaO8分析计算值449.19；实测值449.3；1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 5.07(1H,d,J＝8.85Hz),4.13(1H,t,J＝8.24Hz),3.68(3H,s),2.64-2.79(1H,m),2.04-2.21(2H,m),1.23-1.49(4H,m),0.71-0.81(1H,m),0.03-0.12(1H,m)。
Cap 5.1和Cap 5.2
Cap 5步骤a
将3,3-二甲氧基丙酸甲酯(10g,68mmol)和LiOH(8.08g,337mmol)在MeOH(40mL)、THF(40mL)和水(40mL)中的混合物在80℃加热2h。然后将混合物冷却下来至室温并用1NHCl水溶液酸化(pH>3)。然后将混合物用CH2Cl2(3×)萃取。将合并的有机层用MgSO4干燥并浓缩，得到Cap 5步骤a，其为澄清油状物(6.3g)。将产物用于下一步而无需进一步纯化。1HNMR(500MHz,CDCl3)δ4.82(t,J＝5.8Hz,1H),3.36(s,6H),2.69(d,J＝5.8Hz,2H)；13C NMR(125MHz,CDCl3)δ175.22,101.09,53.68,38.76。
Cap 5步骤b
向Cap5步骤a(4.55g,33.9mmol)在THF(40mL)中的溶液中滴加N,N’-羰基二咪唑(6.60g,40.7mmol)在THF(40mL)中的混悬液。溶液变为黄色并观察到气体放出。将混合物在室温搅拌2h。与此同时将具有丙二酸单甲酯单钾盐(7.95g,50.9mmol)和氯化镁(3.55g,37.3mmol)在THF(80mL)中的溶液的另一个烧瓶在室温搅拌2h。然后通过注射器将咪唑叶利德(imidazolide)溶液转移到Mg(OOCCH2COOMe)2溶液中并将所得混合物在室温搅拌16h。然后将混合物用2M NaHSO4(60mL)酸化并用EtOAc(3×)萃取。将合并的有机层用饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤，用MgSO4干燥并浓缩，得到Cap 5步骤b，其为浅紫色油状物(4.9g)。将油状物用于下一步而无需进一步纯化。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ4.75(t,J＝5.5Hz,1H),3.72(s,3H),3.50(s,2H),3.35(s,6H),2.84(d,J＝5.5Hz,2H)。
Cap 5步骤c
向Cap5步骤b(4.9g,26mmol)在MeOH(70mL)中的溶液中缓慢加入硼氢化钠(1.07g,28.3mmol)。将所得混合物在室温搅拌3h，然后用1N HCl(15mL)淬灭。将混合物用EtOAc(3×)萃取。将合并的有机层用MgSO4干燥并浓缩，得到Cap 5步骤c，其为浅黄色油状物(4.4g)。将产物用于下一步而无需进一步纯化。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.60(t,J＝5.5Hz,1H),4.25-4.16(m,1H),3.70(s,3H),3.38(s,3H),3.37(s,3H),2.52-2.48(m,2H),1.83-1.77(m,2H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ172.21,102.73,64.61,53.22,52.95,51.30,41.00,38.65。
Cap 5步骤d
向Cap5步骤c(4.4g,22.89mmol)在DMF(50mL)中的溶液中加入咪唑(3.12g,45.8mmol)和TBS-Cl(5.52g,36.6mmol)。将所得混合物在室温搅拌3天。然后将反应混合物用CH2Cl2稀释并用水洗涤。将有机相用盐水洗涤，用MgSO4干燥并浓缩。将粗产物通过快速色谱(硅胶,0-15％EtOAc/Hex)来纯化，得到Cap 5步骤d，其为澄清油状物(5.0g)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.55-4.50(m,1H),4.30-4.21(m,1H),3.67(s,3H),3.32(s,3H),3.31(s,3H),2.51(d,J＝6.3Hz,2H),1.89-1.77(m,2H),0.88(s,9H),0.08(s,3H),0.06(s,3H)；13CNMR(100MHz,CDCl3)δ171.41,101.24,65.85,52.35,52.09,51.04,42.40,39.92,25.37,25.27,17.55,-3.95,-5.15。
Cap 5步骤e
在冰/水浴中向Cap 5步骤d(5.0g,16mmol)在乙醚(50mL)中的溶液中加入钛酸四异丙酯(0.971mL,3.26mmol)在乙醚(10mL)中的溶液。然后历时1h通过注射泵滴加乙基溴化镁(48.9mL,48.9mmol)(1M在THF中)。然后将混合物在冰/水浴中搅拌2h。将混合物用乙醚稀释并缓慢用饱和NH4Cl水溶液淬灭。将所得白色析出物滤出。将滤液用Et2O(3×)萃取。将合并的有机层用MgSO4干燥并浓缩。然后将粗产物通过快速色谱(硅胶,0-20％EtOAc/Hex)来纯化，得到Cap 5步骤e，其为澄清油状物(4.02g)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ4.47(t,J＝5.6Hz,1H),4.21-4.14(m,1H),3.71(s,1H),3.32(s,3H),3.31(s,3H),2.05-1.88(m,3H),1.66-1.58(m,1H),0.90(s,9H),0.83-0.76(m,1H),0.71-0.65(m,1H),0.47(m,1H),0.40-0.34(m,1H),0.14(s,3H),0.11(s,3H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ102.09,69.97,54.44,52.97,52.84,43.27,40.00,25.92,17.96,14.04,12.06,-4.32,-4.61。
Cap 5步骤f
将Cap5步骤e(4.02g,13.2mmol)和对甲苯磺酸一水合物(3.01g,15.8mmol)在MeOH(120mL)中的溶液在室温搅拌过夜。向混合物中加入饱和NaHCO3水溶液(100mL)并将混合物用CH2Cl2(3×)萃取。将合并的有机层用MgSO4干燥并浓缩。将粗产物如下纯化：使其通过用70％EtOAc/Hex洗脱的硅胶床，得到Cap 5步骤f，其为非对映异构体的混合物(1.7g；澄清油状物)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ4.79(t,J＝3.7Hz,1H),4.59(dd,J＝5.3,2.9Hz,1H),4.30-4.22(m,1H),4.03(宽单峰,1H),3.37(s,3H),3.31(s,3H),2.09-2.03(m,1H),2.00(dtd,J＝13.1,4.0,1.5Hz,1H),1.86(dd,J＝13.1,3.7Hz,1H),1.81-1.61(m,7H),0.94-0.87(m,1H),0.83-0.77(m,1H),0.74-0.69(m,1H),0.65-0.56(m,2H),0.48-0.40(m,2H),0.37-0.30(m,1H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ100.86,100.27,65.75,64.35,56.24,55.92,53.80,52.35,40.86,39.92,39.28,38.05,12.10,12.06,9.91,9.37。
Cap 5步骤g
向Cap 5步骤f(1.7g,11mmol)在CH2Cl2(20mL)中的溶液中加入二(三甲基甲硅烷基)三氟乙酰胺(2.14mL,8.06mmol)。将混合物在室温搅拌2h。然后将混合物冷却至-10℃且先后滴加三乙基甲硅烷(6.87mL,43.0mmol)和三氟化硼乙醚络合物(3.40mL,26.9mmol)。然后将混合物缓慢温热至0℃并在0℃搅拌30min。然后将反应混合物用水淬灭并用EtOAc(3×)萃取。将合并的有机层用MgSO4干燥并浓缩。将粗产物如下纯化：使其通过用70％EtOAc/Hex洗脱的硅胶床，得到Cap 5步骤g，其为澄清油状物(1.5g)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.43(宽单峰,1H),3.96(tt,J＝9.5,4.7Hz,1H),3.86(dt,J＝11.5,4.0Hz,1H),3.51(td,J＝11.1,2.7Hz,1H),1.98-1.84(m,2H),1.66-1.50(m,2H),0.86-0.79(m,1H),0.66-0.59(m,1H),0.53-0.46(m,1H),0.34(m,1H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ67.41,64.37,57.99,41.28,35.22,11.74,11.32。
Cap 5步骤h
在78℃向草酰氯(1.090mL,12.45mmol)在CH2Cl2(30mL)中的溶液中滴加DMSO(1.767mL,24.90mmol)在CH2Cl2(20mL)中的溶液。将混合物搅拌20min且滴加Cap 5步骤g(1.33g,10.4mmol)在CH2Cl2(20mL)中的溶液。将混合物在-78℃搅拌20min。然后加入Et3N(7.52mL,54.0mmol)并历时30min将混合物缓慢温热至室温。然后将混合物用水淬灭并用CH2Cl2(3×)萃取。将有机层合并且用MgSO4干燥并浓缩，得到Cap 5步骤h，其为澄清油状物(1.3g)。将粗产物用于下一步而无需纯化。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ3.95(t,J＝6.0Hz,2H),2.55-2.50(m,2H),2.46(s,2H),0.84(m,2H),0.50(m,2H)。
Cap 5步骤i
在-20℃向2-(((苄基氧基)羰基)氨基)-2-(二甲氧基磷酰基)乙酸甲酯(3.41g,10.3mmol)在THF(20mL)中的溶液中加入1,1,3,3-四甲基胍(2.85mL,22.7mmol)。将所得混合物在-20℃搅拌1h。然后加入Cap 5步骤h(1.3g,10.30mmol)在THF(10mL)中的溶液。将所得棕色混合物在室温搅拌6天。然后将反应混合物浓缩并将粗产物通过快速色谱(硅胶,0-25％EtOAc/Hex)来纯化，得到Cap 5步骤i(异构体的混合物)，其为白色固体(850mg)。LC(条件2)：RT＝1.88min；LC/MS：[M+H]+C18H22NO5分析计算值332.15；实测值332.14；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.45-7.29(m,5H),6.09-5.81(m,1H),5.18-5.08(m,2H),3.88-3.49(m,5H),3.06-2.82(m,2H),2.52-2.36(m,2H),0.82-0.64(m,2H),0.58-0.32(m,2H)。
Cap 5.1和Cap 5.2步骤j
在500mL氢化压力瓶中将Cap 5步骤i(异构体的混合物)(730mg,2.20mmol)在MeOH(5mL)中的溶液用N2鼓泡30min。向混合物中加入(-)-1,2-二((2S,5S)-2,5-二甲基磷杂环戊烷-1-基)乙烷(环辛二烯)四氟硼酸铑(I)(24.5mg,0.044mmol)，然后将瓶置于帕尔(Parr)振摇器上并在60psi氢化3天。将混合物浓缩并将粗产物通过手性HPLC(ChiralpakAD柱,21×250mm,10μm,用85％0.1％二乙胺/庚烷-15％EtOH以15mL/min洗脱)来分离，得到Cap 5.1步骤j(220mg)(第一洗脱级份)和Cap 5.2步骤j(290mg)(第二洗脱级份)，其为澄清油状物。未确定异构体的绝对立体化学。
Cap 5.1步骤j：LC(条件2)：RT＝1.89min；LC/MS：[M+Na]+C18H23NNaO5分析计算值356.15；实测值356.16；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.41-7.28(m,5H),5.34(d,J＝8.9Hz,1H),5.10(s,2H),4.37(dd,J＝9.0,5.0Hz,1H),3.89-3.82(m,1H),3.75(s,3H),3.48(td,J＝11.1,3.1Hz,1H),2.29-2.17(m,1H),1.96(t,J＝12.7Hz,1H),1.57-1.43(m,2H),1.07-0.98(m,1H),0.87-0.78(m,1H),0.66-0.56(m,1H),0.56-0.47(m,1H),0.37-0.27(m,1H)。
Cap 5.2步骤j：LC(条件2)：RT＝1.90min；LC/MS：[M+Na]+C18H23NNaO5分析计算值356.15；实测值356.17；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.40-7.28(m,5H),5.33(d,J＝8.5Hz,1H),5.10(s,2H),4.36(dd,J＝8.9,5.8Hz,1H),3.86(dd,J＝11.0,3.1Hz,1H),3.74(s,3H),3.53-3.43(m,1H),2.25-2.14(m,1H),1.94(t,J＝12.5Hz,1H),1.67-1.44(m,2H),0.97-0.90(m,1H),0.86-0.79(m,1H),0.66-0.57(m,1H),0.53-0.44(m,1H),0.33-0.24(m,1H)。
[注：绝对立体化学归属参见下文]
Cap 5.1步骤k
在氢化烧瓶中向Cap 5.1步骤j(210mg,0.630mmol)在MeOH(10mL)中的溶液中加入一缩二碳酸二甲酯(0.135mL,1.26mmol)和10％Pd/C(33.5mg,0.031mmol)。将烧瓶置于帕尔振摇器上并将混合物在50psi氢化4h。然后将混合物用硅藻土过滤并将滤液浓缩，得到Cap 5.1步骤k，其为澄清油状物(165mg)。LC(条件2)：RT＝1.56min；LC/MS：[M+H]+C12H20NO5分析计算值258.13；实测值258.16；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ5.39(d,J＝8.5Hz,1H),4.30(dd,J＝8.9,5.2Hz,1H),3.84-3.78(m,1H),3.70(s,3H),3.63(s,3H),3.47-3.39(m,1H),2.23-2.12(m,1H),1.91(t,J＝12.5Hz,1H),1.49-1.39(m,2H),0.97(dd,J＝13.1,2.4Hz,1H),0.81-0.74(m,1H),0.61-0.52(m,1H),0.46(dt,J＝10.1,6.0Hz,1H),0.32-0.24(m,1H)。
Cap 5.1
向Cap 5.1步骤k(165mg,0.641mmol)在THF(2mL)和水(1mL)中的混合物中加入2MLiOH(1mL,2.0mmol)(水溶液)。将所得混合物在室温搅拌过夜。然后将混合物用乙醚(1mL)洗涤。将水相用1N HCl水溶液酸化并用乙醚萃取(6×)。将合并的有机层用MgSO4干燥并浓缩，得到Cap 5.1，其为白色固体(150mg)。LC(条件2)：RT＝1.10min；LC/MS：[M+H]+C11H18NO5分析计算值244.12；实测值244.09；1H NMR(500MHz,CDCl3-d)δ5.27(d,J＝8.9Hz,1H),4.39(dd,J＝8.5,4.9Hz,1H),3.94-3.86(m,1H),3.70(s,3H),3.56-3.46(m,1H),2.36-2.24(m,1H),2.01(t,J＝12.7Hz,1H),1.63-1.48(m,2H),1.14-1.05(m,1H),0.92-0.80(m,1H),0.69-0.60(m,1H),0.58-0.49(m,1H),0.40-0.31(m,1H)。
注：将Cap 5.1与(S)-1-(萘-2-基)乙胺经由HATU偶联进行偶联并使所得酰胺结晶。对该类似物进行的X射线晶体分析确定了所示Cap 5.1的相对和绝对立体化学。
Cap 5.2
按照针对Cap 5.1所述的程序由Cap 5.2步骤j制备Cap 5.2。LC(条件2)：RT＝1.12min；LC/MS：[M+H]+C11H18NO5分析计算值244.12；实测值244.09；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ5.27(d,J＝8.9Hz,1H),4.38(dd,J＝8.2,4.9Hz,1H),3.91(dd,J＝11.1,3.2Hz,1H),3.69(s,3H),3.52(t,J＝11.0Hz,1H),2.34-2.23(m,1H),2.07-1.97(m,1H),1.72-1.61(m,1H),1.54(qd,J＝12.6,4.7Hz,1H),1.04-0.96(m,1H),0.90-0.82(m,1H),0.68-0.61(m,1H),0.56-0.49(m,1H),0.39-0.30(m,1H)。
Cap-6
Cap-6步骤a
将1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-酮(15g,96mmol)在EtOAc(150mL)中的溶液加到2-(苄基氧基羰基氨基)-2-(二甲氧基磷酰基)乙酸甲酯(21.21g,64.0mmol)在1,1,3,3-四甲基胍(10.45mL,83mmol)和EtOAc(150mL)中的溶液中。将所得溶液在环境温度搅拌72h，然后将其用EtOAc(25mL)稀释。将有机层用1N HCl(75mL)、H2O(100mL)和盐水(100mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。将残余物经由Biotage(5％-25％EtOAc/己烷；300g柱)来纯化。然后将含有产物的合并级份真空浓缩并将残余物从己烷/EtOAc中重结晶，得到白色晶体，其对应于2-(苄基氧基羰基氨基)-2-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-亚基)乙酸甲酯(6.2g)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d)δppm 7.30-7.44(5H,m),6.02(1H,宽单峰),5.15(2H,s),3.97(4H,s),3.76(3H,宽单峰),2.84-2.92(2H,m),2.47(2H,t,J＝6.40Hz),1.74-1.83(4H,m).LC(条件OL1)：Rt＝2.89min。LC/MS:[M+Na]+C19H23NNaO6分析计算值745.21；实测值745.47。
Cap-6步骤b
按照Burk,M.J.、Gross,M.F.和Martinez J.P.(J.Am.Chem.Soc.,1995,117,9375-9376及其中参考文献)的方法由烯Cap-176步骤a制备酯Cap-176步骤b：在N2气氛下向500mL高压瓶中加入烯Cap-176步骤a(3.5g,9.68mmol)在脱气的MeOH(200mL)中的溶液。然后向溶液中加入(-)-1,2-二((2S,5S)-2,5-二甲基磷杂环戊烷-1-基)乙烷(环辛二烯)四氟硼酸铑(I)(0.108g,0.194mmol)并将所得混合物用N2(3×)冲洗并充入H2(3×)。将溶液在70psi H2下在环境温度剧烈振摇72h。减压除去溶剂并将剩余残余物吸收在EtOAc中。然后将淡棕色溶液用硅胶垫过滤并用EtOAc洗脱。将溶剂真空浓缩，得到澄清油状物，其对应于酯Cap-176步骤b(3.4g)。1H NMR(500MHz,CDCl3-d)δppm 7.28-7.43(5H,m),5.32(1H,d,J＝9.16Hz),5.06-5.16(2H,m),4.37(1H,dd,J＝9.00,5.04Hz),3.92(4H,t,J＝3.05Hz),3.75(3H,s),1.64-1.92(4H,m),1.37-1.60(5H,m).LC(条件OL1)：Rt＝1.95min。LC/MS:[M+H]+C19H26NO6分析计算值364.18；实测值364.27。
Cap-6步骤c
将Cap-6步骤b(6.68g,18.38mmol)溶解在MeOH(150mL)中且加入Pd/C(0.039g,0.368mmol)并将混悬液置于1大气压H2下。将反应混合物在室温搅拌6h且经由硅藻土垫过滤并将挥发物减压除去。将对应于Cap-6步骤c的琥珀色油状物(3.8g,16.57mmol,90％产率)回收并使用而无需进一步纯化。1H NMR(400MHz,CDCl3-d)δ3.92(宽单峰,4H),3.71(s,3H),3.31(d,J＝4.0Hz,1H),1.87-1.44(m,9H).13C NMR(101MHz,CDCl3-d)δ176.1,108.7,64.5(2C),59.1,52.0,41.1,34.7,34.6,27.2,25.4。
Cap-6步骤d
将氯甲酸甲酯(2.57mL,33.1mmol)加到Cap 6步骤c(3.8g,16.57mmol)和DIEA(23.16mL,133mmol)在CH2Cl2(200mL)中的溶液中。将所得溶液在室温搅拌3h并将挥发物减压除去。将残余物经由Biotage(30％EtOAc/Hex；160g柱)来纯化。将对应于Cap-6步骤d的琥珀色油状物(3g,10.44mmol,63.0％产率)回收。1H NMR(500MHz,CDCl3-d)δ5.24(d,J＝8.5Hz,1H),4.34(dd,J＝8.9,4.9Hz,1H),3.92(s,4H),3.74(s,3H),3.67(s,3H),1.89-1.73(m,3H),1.67(d,J＝12.5Hz,1H),1.62-1.33(m,5H).13C NMR(126MHz,CDCl3-d)172.4,156.7,108.1,64.2,64.2,57.7,52.3,52.2,39.6,34.2(2C),26.5,25.0。
Cap-6步骤e
将Cap-6步骤d(1.15g,4.00mmol)溶解在THF(50mL)中，然后按序加入水(30mL)、冰醋酸(8.02mL,140mmol)和二氯乙酸(1.985mL,24.02mmol)。将混合物在室温搅拌过夜并如下淬灭反应混合物：在剧烈搅拌下缓慢加入固体碳酸钠直到不再观察到气体释放。将粗产物萃取到10％乙酸乙酯/二氯甲烷中并将有机层合并，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。将残余物经由Biotage(0-30％EtOAc/Hex；40g柱)来纯化并将对应于Cap-6步骤e的澄清油状物(0.72g,2.96mmol,73.9％产率)回收。1H NMR(500MHz,CDCl3-d)δ5.36(d,J＝8.2Hz,1H),4.46(dd,J＝8.4,5.0Hz,1H),3.77(s,3H),3.68(s,3H),2.46-2.39(m,2H),2.38-2.29(m,2H),2.09-2.03(m,1H),1.96-1.88(m,1H),1.64-1.51(m,2H).13C NMR(126MHz,CDCl3-d)δ210.1,171.9,156.7,57.2,52.5(2C),40.2,40.2,39.4,28.7,27.6。
Cap-6
将Cap-6步骤e(0.68g,2.80mmol)在THF(7.5mL)和MeOH(7.50mL)中的溶液冷却至0℃。滴加2N NaOH水溶液(1.9mL,3.80mmol)并将所得溶液在室温搅拌2h。加入己烷:Et2O的1:1混合物(20mL)并将有机层弃去。然后将水层用10％KHSO4水溶液酸化至pH～1并将混合物用EtOAc(2×)萃取。将合并的有机层干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。将对应于Cap-6的白色泡沫状物(0.55g)回收并使用而无需进一步纯化。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.70(宽单峰,1H),7.49(d,J＝8.5Hz,1H),4.01(dd,J＝8.2,6.7Hz,1H),3.54(s,3H),2.45-2.30(m,2H),2.23-2.13(m,3H),1.94-1.79(m,3H),1.57(qd,J＝12.7,4.1Hz,1H),1.47(qd,J＝12.7,4.4Hz,1H).13C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ210.2,173.0,156.8,57.6,51.5,39.7(2C),36.9,28.6,27.5。
Cap-7
在0℃向(S)-2-氨基-2-(3-(三氟甲基)二环[1.1.1]戊-1-基)乙酸(由市售来源得到；0.5151g,2.463mmol)和碳酸钠(0.131g,1.231mmol)在1M氢氧化钠水溶液(2.4ml,2.400mmol)中的混合物中滴加氯甲酸甲酯(0.2ml,2.59mmol)。然后将反应混合物在室温搅拌4小时。然后将其在冰/水浴中冷却且加入乙醚(25mL)并搅拌且分离各层。将水层用乙醚(2×25mL)洗涤。将水层用冰/水浴冷却并用12N HCl酸化至pH范围为1-2。将其用CH2Cl2(3×50mL)萃取，用MgSO4干燥并真空浓缩，得到Cap-7，其为灰白色固体(480.7mg)且无需进一步纯化即使用。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.86(宽单峰,1H),7.61(宽二重峰,J＝8.0Hz,1H),4.16(d,J＝8.0Hz,1H),3.57(s,3H),2.00(d,J＝8.3Hz,3H),1.93(d,J＝9.3,3H)。
Cap 8.1和Cap 8.2(两种立体异构体)
Cap 8步骤a
将4-氧代缬草酸甲酯(6g,46.1mmol)、二苯基二硒醚(14.39g,46.1mmol)和过硫酸铵(15.92mL,138mmol)在MeOH(200mL)中的混合物在回流温度搅拌3h。然后将混合物倒入水中并用CH2Cl2(3×75mL)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用MgSO4干燥并浓缩。将粗产物通过快速色谱(硅胶,0-15％EtOAc/Hex)来纯化，得到Cap 8步骤a(7.1g)，其为黄色油状物。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ4.53(s,1H),3.67(s,3H),3.42(s,6H),2.89(t,J＝6.6Hz,2H),2.60(t,J＝6.6Hz,2H)。
Cap 8步骤b
向Cap8步骤a(7.1g,37.3mmol)在MeOH(100mL)中的溶液中缓慢加入硼氢化钠(1.554g,41.1mmol)。将所得混合物在室温搅拌2h。向混合物中加入1N HCl水溶液直到酸性，然后用CH2Cl2(3×50mL)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用MgSO4干燥并浓缩，得到Cap 8步骤b，其为橙色油状物(7.1g)且以1:1.7的比例掺杂有对应的环化副产物5-(二甲氧基甲基)二氢呋喃-2(3H)-酮。混合物无需纯化即使用。
Cap 8步骤c
向Cap8步骤b(7.1g,36.9mmol)在DMF(50mL)中的溶液中加入咪唑(5.03g,73.9mmol)和TBS-Cl(8.91g,59.1mmol)。将所得混合物在室温搅拌16h。然后将反应混合物用CH2Cl2稀释，用水和盐水洗涤，用MgSO4干燥并浓缩。将粗产物通过快速色谱(硅胶,0-5％然后10％EtOAc/Hex)来纯化，得到Cap 8步骤c，其为澄清油状物。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ4.07(d,J＝5.5Hz,1H),3.72-3.67(m,1H),3.66(s,3H),3.40(s,3H),3.39(s,3H),2.48-2.35(m,2H),1.92(dddd,J＝13.8,9.3,6.9,4.1Hz,1H),1.82-1.71(m,1H),0.88(s,9H),0.07(s,3H),0.05(s,3H)。
Cap 8步骤d
在水浴中向Cap 8步骤c(4.4g,14.36mmol)在Et2O(50mL)中的溶液中加入钛酸四异丙酯(0.855mL,2.87mmol)在乙醚(10mL)中的溶液且溶液变为黄色。然后历时1h通过注射泵滴加乙基溴化镁(14.36mL,43.1mmol,1M在THF中)。溶液变为深棕色伴有一些析出物。然后将混合物在水浴中搅拌2h。将混合物用乙醚稀释并通过缓慢加入饱和NH4Cl水溶液来淬灭。将混合物过滤以除去所形成的白色析出物。分离两层并将水层用Et2O(3×50mL)萃取。将合并的有机层用MgSO4干燥并浓缩。然后将粗产物通过快速色谱(硅胶,0-20％EtOAc/Hex)来纯化，得到Cap 8步骤d，其为澄清油状物(2.9g)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ4.26(d,J＝6.1Hz,1H),3.81-3.72(m,1H),3.46(s,3H),3.43(s,3H),1.90-1.75(m,3H),1.52-1.43(m,1H),0.90(s,9H),0.82-0.74(m,1H),0.73-0.67(m,1H),0.47-0.40(m,2H),0.11-0.10(m,6H)。
Cap 8步骤e
将Cap 8步骤d(2.9g,9.52mmol)和p-TsOH·H2O(2.174g,11.43mmol)在MeOH(40mL)中的溶液在室温搅拌16h。向混合物中加入200mL饱和NaHCO3溶液并将混合物用CH2Cl2(3×50mL)萃取。将合并的有机层用MgSO4干燥并浓缩。将粗产物用硅胶垫过滤(用70％EtOAc/Hex洗脱)，得到Cap 8步骤e(1g)，其为澄清油状物且由非对映异构体的混合物构成且不进行分离。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ4.16(d,J＝7.3Hz,1H),3.55-3.46(m,1H),3.44-3.38(m,2H),2.50-2.22(m,1H),2.13-2.00(m,1H),1.71-1.59(m,1H),1.22-1.14(m,1H),0.99-0.77(m,1H),0.70-0.59(m,1H),0.57-0.46(m,1H),0.45-0.30(m,1H)。
Cap 8步骤f
向Cap 8步骤e(1g,6.32mmol)在CH2Cl2(15mL)中的溶液中加入二(三甲基甲硅烷基)三氟乙酰胺(1.26mL,4.74mmol)。将混合物在室温搅拌2h，在此期间其变为橙色。然后将混合物冷却下来至-10℃并滴加三乙基甲硅烷(4.04mL,25.3mmol)，然后加入三氟化硼乙醚络合物(2.00mL,15.80mmol)。加入三氟化硼乙醚络合物后，混合物立即变为浅紫色。然后将混合物缓慢温热至0℃并在0℃搅拌30min。然后将反应混合物用水淬灭并用EtOAc(3×20mL)萃取。将合并的有机层用MgSO4干燥并浓缩。将粗产物用硅胶垫过滤(用70％EtOAc/Hex洗脱)并将滤液浓缩，得到Cap 8步骤f(0.8g)，其为澄清油状物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.19(d,J＝6.8Hz,1H),3.77(dd,J＝11.3,2.5Hz,1H),3.55(d,J＝6.0Hz,1H),2.14-2.06(m,2H),1.75-1.62(m,1H),1.44(dd,J＝12.4,7.2Hz,1H),0.97-0.88(m,2H),0.65(dddd,J＝10.8,6.2,4.8,1.5Hz,1H),0.59-0.51(m,1H),0.48-0.40(m,2H)。
Cap 8步骤g
在-78℃向草酰氯(0.664mL,7.58mmol)在CH2Cl2(10mL)中的溶液中滴加DMSO(1.076mL,15.17mmol)在CH2Cl2(7mL)中的溶液。将混合物搅拌20min并滴加Cap 8步骤f(810mg,6.32mmol)在CH2Cl2(7mL)中的溶液。将混合物在-78℃搅拌20min。然后加入Et3N(4.58mL,32.9mmol)并历时30min将混合物缓慢温热至室温。然后将混合物用水淬灭并用CH2Cl2(3×10mL)萃取。将有机层合并且用MgSO4干燥并浓缩，得到Cap 8步骤g(0.8g)，其为澄清油状物。产物无需进一步纯化即使用。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ4.56(s,1H),4.00(s,1H),2.53-2.46(m,1H),2.40-2.32(m,1H),2.08(t,J＝6.9Hz,1H),1.82(dt,J＝13.5,5.8Hz,1H),1.09-0.99(m,1H),0.89-0.82(m,1H),0.70(ddd,J＝10.2,6.9,5.8Hz,1H),0.54(ddd,J＝10.2,6.7,5.6Hz,1H)。
Cap 8步骤h
在-20℃向2-(((苄基氧基)羰基)氨基)-2-(二甲氧基磷酰基)乙酸甲酯(3.19g,9.63mmol)在THF(10mL)中的溶液中加入1,1,3,3-四甲基胍(2.42mL,19.26mmol)。将所得混合物在-20℃搅拌1h且混合物变为乳白色。加入Cap 8步骤g(810mg,6.42mmol)在THF(5mL)中的溶液，然后将所得棕色混合物在室温搅拌2天。然后将反应混合物浓缩并将粗产物通过快速色谱(硅胶,0-5％EtOAc/CH2Cl2)来纯化，得到Cap 8步骤h(顺式/反式异构体的混合物)，其为澄清油状物(400mg)。LC(条件3)：RT＝1.74min；LC/MS：[M+Na]+C18H21NNaO5分析计算值354.13；实测值354.04。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.42-7.31(m,10H),5.19-5.10(m,4H),4.66(宽单峰,1H),4.23(s,1H),3.84-3.70(m,5H),3.39(s,3H),2.68-2.53(m,2H),1.81-1.74(m,2H),1.30-1.21(m,2H),0.96-0.80(m,4H),0.76(dt,J＝11.1,5.7Hz,1H),0.56-0.39(m,4H)。
Cap 8步骤i
在500mL氢化压力管中将Cap 8步骤h(异构体的混合物)(400mg,1.207mmol)在MeOH(10mL)中的溶液用N2鼓泡30min。向混合物中加入(-)-1,2-二((2S,5S)-2,5-二甲基磷杂环戊烷-1-基)乙烷(环辛二烯)四氟硼酸铑(I)(13.43mg,0.024mmol)，然后将混合物置于帕尔振摇器上并在60psi氢化3天。然后将混合物浓缩。然后粗产物通过手性HPLC(Chiralpak OJ柱,21×250mm,10μm)来分离(用90％0.1％二乙胺/庚烷-10％EtOH以15mL/min洗脱)，得到Cap 8步骤i.1(55mg；第一洗脱级份)和Cap 8步骤i.2(65mg；第二洗脱级份)，其为澄清油状物。未确定异构体的绝对立体化学。
Cap 8步骤i.1：LC(条件3)：RT＝1.93min；LC/MS：[M+Na]+C18H23NNaO5分析计算值356.15；实测值356.04；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.45-7.30(m,5H),5.38-5.30(m,1H),5.18-5.06(m,2H),4.41(dd,J＝8.9,5.8Hz,1H),3.83(d,J＝11.0Hz,1H),3.77(s,3H),3.35(t,J＝10.8Hz,1H),2.21-2.09(m,1H),2.07-1.98(m,1H),1.70(d,J＝11.0Hz,2H),1.54(qd,J＝12.1,4.1Hz,1H),1.19(dt,J＝13.6,3.4Hz,1H),0.83(dt,J＝11.1,5.7Hz,1H),0.63(dt,J＝10.5,5.1Hz,1H),0.49(dt,J＝10.1,6.0Hz,1H),0.36-0.29(m,1H)。
Cap 8步骤i.2：LC(条件5)：RT＝1.55min；LC/MS：[M+Na]+C18H23NNaO5分析计算值356.15；实测值356.06；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.40-7.32(m,5H),5.31(d,J＝8.5Hz,1H),5.12(s,2H),4.39-4.33(m,1H),3.77(s,3H),3.74(d,J＝2.1Hz,1H),3.39(t,J＝10.5Hz,1H),2.07(d,J＝4.0Hz,1H),2.04-1.95(m,1H),1.82(d,J＝10.7Hz,1H),1.34-1.21(m,2H),0.82(dt,J＝11.0,5.8Hz,1H),0.68-0.61(m,1H),0.49(dt,J＝9.9,5.9Hz,1H),0.34(ddd,J＝10.1,6.4,4.9Hz,1H)。
Cap 8步骤j.1
在氢化烧瓶中向Cap 8步骤i.1(55mg,0.165mmol)在10mL MeOH中的溶液中加入一缩二碳酸二甲酯(0.035mL,0.33mmol)和Pd/C(8.78mg,08.25μmol)。将烧瓶置于帕尔振摇器上并将混合物在50psi氢化4h。然后将混合物用硅藻土过滤并将滤液浓缩，得到Cap 8步骤j.1，其为澄清油状物(50mg)。LC(条件1)：RT＝1.09min；LC/MS：[M+H]+C12H20NO5分析计算值258.13；实测值258.05；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ4.39(dd,J＝8.7,6.0Hz,1H),3.85-3.80(m,1H),3.79-3.76(m,3H),3.71(s,3H),3.36(t,J＝10.8Hz,1H),2.14(d,J＝4.9Hz,1H),2.03(t,J＝13.0Hz,1H),1.71(ddd,J＝12.7,3.7,2.0Hz,1H),1.55(td,J＝12.1,4.1Hz,1H),1.20(d,J＝13.4Hz,1H),0.83(dt,J＝11.0,5.8Hz,1H),0.67-0.60(m,1H),0.49(dt,J＝9.9,6.0Hz,1H),0.37-0.29(m,1H)。将氨基甲酸苄酯Cap 8步骤i.2类似地加工成其氨基甲酸甲酯Cap 8步骤j.2。
Cap 8.1和Cap 8.2
向Cap 8步骤j.1(50mg,0.194mmol)在THF(1mL)和水(0.5mL)中的混合物中加入LiOH(0.292mL,0.583mmol)(2M水溶液)。将所得混合物在室温搅拌过夜。将混合物用Et2O(5mL)萃取。将水相用1N HCl水溶液酸化并用Et2O(6×)萃取。将合并的有机层用MgSO4干燥并浓缩，得到Cap 8.1，其为白色固体(35mg)。LC(条件1)：RT＝0.95min；LC/MS：[M+H]+C11H18NO5分析计算值244.12；实测值244.02；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.24(d,J＝7.5Hz,1H),4.43(宽单峰,1H),3.89(d,J＝12.0Hz,1H),3.73(s,3H),3.41(t,J＝10.8Hz,1H),2.22(d,J＝4.3Hz,1H),2.11-2.00(m,1H),1.78(dt,J＝12.6,1.9Hz,1H),1.65-1.54(m,1H),1.30-1.18(m,2H),0.85(dt,J＝11.1,5.9Hz,1H),0.70-0.61(m,1H),0.50(dt,J＝10.0,5.9Hz,1H),0.40-0.31(m,1H)。
按照针对Cap-8.1所述的程序由Cap 8步骤j.2合成Cap 8.2。LC(条件1)：RT＝0.96min；LC/MS：[M+H]+C11H18NO5分析计算值244.12；实测值244.02；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ5.44(d,J＝8.5Hz,1H),4.35(t,J＝7.6Hz,1H),3.81(d,J＝8.9Hz,1H),3.71(s,3H),3.49-3.41(m,1H),2.14(宽单峰,1H),2.04-1.86(m,2H),1.69-1.55(m,1H),1.34-1.25(m,2H),0.83(dt,J＝11.0,5.8Hz,1H),0.67(dt,J＝10.5,5.1Hz,1H),0.54-0.45(m,1H),0.40-0.34(m,1H)。
Cap 9.1-Cap 9.4(四种立体异构体)
Cap 9步骤a
将甲磺酸(3.89mL,59.9mmol)加到丁-3-烯-1-醇(2.06g,28.5mmol)和环丁酮(2.00g,28.5mmol)在DCM(20mL)中的搅拌溶液中并将反应混合物搅拌过夜。将反应混合物用饱和NaHCO3(水溶液)缓慢淬灭(直到碱性)，分离各层并将水相用DCM(20mL)萃取。将合并的有机物干燥(MgSO4)，过滤并浓缩，得到粗黄色油状物。将粗油状物用Biotage Horizon(90g SiO2,0-40％EtOAc/己烷)纯化，得到Cap 9步骤a(5.3g)，其为橙色油状物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.93-4.81(m,1H),3.84(dt,J＝12.1,4.1Hz,1H),3.50(ddd,J＝12.1,10.9,2.6Hz,1H),3.05(s,3H),2.28(ddd,J＝12.7,4.4,1.8Hz,1H),2.22-2.12(m,1H),2.09-1.96(m,4H),1.90-1.64(m,4H)。
Cap 9步骤b
在35mL压力容器中将2-((二苯基亚甲基)氨基)乙酸苄酯(972mg,2.95mmol)和Cap9步骤a(500mg,2.270mmol)溶解在甲苯(10mL)和THF(2mL)中并将澄清无色溶液在氮气下搅拌5min。然后加入1M LiHMDS/THF(2.95mL,2.95mmol)且将容器密封，然后在100℃加热9h。将反应混合物冷却且倒入1/2饱和NH4Cl(水溶液)(～40mL)中，然后用EtOAc(～40mL)萃取。将有机相用盐水(～40mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。将粗橙色油状物用BiotageHorizon(0-30％EtOAc/Hex,40g SiO2)纯化，得到Cap 9步骤b(四种立体异构体的混合物)(350mg)，其为橙黄色油状物。LC-MS保留时间1.920min；m/z 454.32(MH+)。在配备有Phenomenex-Luna 3μC18 2.0×50mm柱且使用检测波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器的Shimadzu LC-10AS液相色谱仪上记录LC数据。使用以下洗脱条件：流速为0.8mL/min，梯度为100％溶剂A/0％溶剂B至0％溶剂A/100％溶剂B，梯度时间为2min，保持时间为1min，分析时间为3min，其中溶剂A为10％乙腈/90％H2O/0.1％三氟乙酸且溶剂B为10％H2O/90％乙腈/0.1％三氟乙酸。使用针对LC的Micromass Platform(电喷雾模式)来确定MS数据。
Cap 9步骤c
将Cap 9步骤b(345mg,0.761mmol)在THF(8mL)中的溶液用1.5M HCl(3.04mL,4.56mmol)(水溶液)处理并搅拌1.5h。然后将反应混合物在高真空下浓缩。将残余物溶解在DCM(4mL)中，用DIPEA(0.531mL,3.04mmol)和氯甲酸甲酯(0.088mL,1.14mmol)处理并在室温搅拌过夜。将反应混合物用水(～10mL)和DCM(10mL)稀释，分离并将水层用DCM(10mL)萃取。将合并的有机层干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。将残余物通过制备型HPLC(具有TFA缓冲剂的水/ACN)来纯化，得到Cap 9步骤c(四种立体异构体的混合物；108mg)，其为橙色玻璃状物。LC-MS保留时间2.833min；m/z 348.3(MH+)。在配备有Phenomenex-Luna 3μC18 2.0×50mm柱且使用检测波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器的Shimadzu LC-10AS液相色谱仪上记录LC数据。使用以下洗脱条件：流速为0.8mL/min，梯度为100％溶剂A/0％溶剂B至0％溶剂A/100％溶剂B，梯度时间为4min，保持时间为1min，分析时间为5min，其中溶剂A为10％乙腈/90％H2O/0.1％三氟乙酸且溶剂B为10％H2O/90％乙腈/0.1％三氟乙酸。使用针对LC的Micromass Platform(电喷雾模式)来确定MS数据。
将立体异构体的混合物通过手性制备型SFC纯化来分离：
Chiralpak AD-H制备型柱,30×250mm,5μm
流动相：15％2:1庚烷:EtOH在150巴CO2中
温度：35℃
流速：70.0mL/min且保持14min
在220nm进行UV监测
注射量：0.35mL～27mg/mL在EtOH中(经由叠加注射总计～108mg)
得到：
Cap 9步骤c.1：第一洗脱峰：22.3mg；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.47-7.32(m,5H),5.37-5.21(m,2H),5.10(d,J＝12.0Hz,1H),4.42(dd,J＝9.0,4.8Hz,1H),3.79-3.65(m,4H),3.38(td,J＝11.5,3.3Hz,1H),2.15-2.01(m,2H),1.98-1.65(m,4H),1.56-1.14(m,5H)。
Cap 9步骤c.2：第二洗脱峰：20.6mg；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.45-7.32(m,5H),5.26(d,J＝9.0Hz,1H),5.20(s,2H),4.37(dd,J＝9.0,5.0Hz,1H),3.77-3.67(m,4H),3.41-3.29(m,1H),2.16-1.99(m,2H),1.96-1.68(m,4H),1.58-1.19(m,5H)。
Cap 9步骤c.3：第三洗脱峰：25.0mg；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.44-7.31(m,5H),5.27(d,J＝8.8Hz,1H),5.20(s,2H),4.37(dd,J＝9.0,5.0Hz,1H),3.77-3.66(m,4H),3.40-3.28(m,1H),2.14-2.00(m,2H),1.97-1.69(m,4H),1.62-1.23(m,5H)。
Cap 9步骤c.4：第四洗脱峰：22.4mg；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.45-7.32(m,5H),5.37-5.21(m,2H),5.10(d,J＝12.0Hz,1H),4.42(dd,J＝9.0,4.8Hz,1H),3.78-3.66(m,4H),3.38(td,J＝11.5,3.3Hz,1H),2.06(q,J＝10.1Hz,2H),1.96-1.67(m,4H),1.56-1.14(m,5H)。
基于1H NMR分析，Cap 9步骤c.1和Cap 9步骤c.4为对映异构体且Cap 9步骤c.2和Cap 9步骤c.3为对映异构体。对每种立体异构体独立进行加工。
Cap 9.1-Cap 9.4
将Cap 9步骤c.1(22.3mg,0.064mmol)溶解在MeOH(3mL)中并加到10％Pd/C(5.46mg,5.14μmol)中。将反应混合物先后用氮气(4×)和氢气(4×)抽空冲洗并在氢气气囊下搅拌过夜。将反应混合物用硅藻土处理，然后用硅藻土过滤并浓缩，得到Cap 9.1(16.8mg)，其为无色玻璃状物。LC-MS保留时间1.008min；m/z 258.2(MH+)。在配备有Phenomenex-Luna 3μC18 2.0×50mm柱且使用检测波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器的Shimadzu LC-10AS液相色谱仪上记录LC数据。使用以下洗脱条件：流速为0.8mL/min，梯度为100％溶剂A/0％溶剂B至0％溶剂A/100％溶剂B，梯度时间为2min，保持时间为1min，分析时间为3min，其中溶剂A为10％乙腈/90％H2O/0.1％三氟乙酸且溶剂B为10％H2O/90％乙腈/0.1％三氟乙酸。使用针对LC的Micromass Platform(电喷雾模式)来确定MS数据。使用上述程序独立对其它相关立体异构体Cap 9步骤c.2-c.4都进行脱苄基。
Cap 9.2:LC-MS保留时间1.011min；m/z 258.15(MH+)。
Cap 9.3:LC-MS保留时间1.054min；m/z 258.2(MH+)。
Cap 9.4:LC-MS保留时间1.045min；m/z 258.2(MH+)。
Cap 10.1-10.4(四种立体异构体)
Cap 10步骤a
将甲磺酸(3.89mL,59.9mmol)加到丁-3-烯-1-醇(2.058g,28.5mmol)和环戊酮(2.40g,28.5mmol)在DCM(20mL)中的搅拌溶液中并将反应混合物搅拌过夜(ON)。将反应混合物用饱和NaHCO3(水溶液)缓慢淬灭(直到碱性)，分离各层并将水层用DCM(20mL)萃取。将合并的有机物干燥(MgSO4)，过滤并浓缩，得到粗橙色油状物。将粗油状物用BiotageHorizon(90g SiO2,0-40％EtOAc/己烷)纯化，得到Cap 10步骤a(4.68g)，其为橙色油状物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.02-4.82(m,1H),3.85(dt,J＝12.4,4.2Hz,1H),3.60(ddd,J＝12.4,10.7,3.0Hz,1H),3.04(s,3H),2.11-1.97(m,2H),1.95-1.54(m,9H),1.52-1.40(m,1H)。
Cap 10步骤b
在48mL压力容器中将2-((二苯基亚甲基)氨基)乙酸苄酯(1.46g,4.44mmol)和Cap10步骤a(800mg,3.41mmol)溶解在甲苯(15mL)和THF(3mL)中并将澄清无色溶液在氮气下搅拌5min。然后加入1M LiHMDS(4.44mL,4.44mmol)在THF中的溶液且将容器密封，然后在100℃加热9h。将反应混合物冷却，然后倒入1/2饱和NH4Cl(水溶液)(～60mL)中并用EtOAc(～60mL)萃取。将有机相用盐水(～40mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。将粗橙色油状物用Biotage Horizon(0-40％EtOAc/Hex,90g SiO2)纯化，得到Cap 10步骤b(四种立体异构体的混合物)(480mg)，其为粘性橙色油状物。LC-MS保留时间1.991min；m/z 468.4(MH+)。在配备有Phenomenex-Luna 3μC182.0×50mm柱且使用检测波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器的Shimadzu LC-10AS液相色谱仪上记录LC数据。使用以下洗脱条件：流速为0.8mL/min，梯度为100％溶剂A/0％溶剂B至0％溶剂A/100％溶剂B，梯度时间为2min，保持时间为1min，分析时间为3min，其中溶剂A为10％乙腈/90％H2O/0.1％三氟乙酸且溶剂B为10％H2O/90％乙腈/0.1％三氟乙酸。使用针对LC的Micromass Platform(电喷雾模式)来确定MS数据。
Cap 10步骤c
将Cap 10步骤b(475mg,1.02mmol)溶解在THF(12mL)中，然后用1.5M HCl(4.06mL,6.09mmol)(水溶液)处理并搅拌1.5h。将反应混合物在高真空下浓缩。然后将残余物溶解在DCM(6mL)中且用DIPEA(0.710mL,4.06mmol)和氯甲酸甲酯(0.118mL,1.52mmol)处理并在室温搅拌1.5天。将反应混合物用水(～10mL)和DCM(10mL)稀释，分离并将水层再用DCM(10mL)萃取。将合并的有机物干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。将残余物用Biotage Horizon(12g SiO2,0-25％EtOAc/Hex)纯化，得到284mg橙色油状物。将该物质通过制备型HPLC(具有TFA缓冲剂的水/ACN)来进一步纯化，得到Cap 10步骤c(四种立体异构体的混合物)(200mg)，其为几乎无色的澄清玻璃状物。LC-MS保留时间3.025min；m/z 362.3(MH+)。在配备有Phenomenex-Luna 3μC18 2.0×50mm柱且使用检测波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器的ShimadzuLC-10AS液相色谱仪上记录LC数据。使用以下洗脱条件：流速为0.8mL/min，梯度为100％溶剂A/0％溶剂B至0％溶剂A/100％溶剂B，梯度时间为4min，保持时间为1min，分析时间为5min，其中溶剂A为10％乙腈/90％H2O/0.1％三氟乙酸且溶剂B为10％H2O/90％乙腈/0.1％三氟乙酸。使用针对LC的Micromass Platform(电喷雾模式)来确定MS数据。
将立体异构体的混合物通过手性半制备型纯化来分离：
Chiralpak AD-H制备型柱,30×250mm,5μm
流动相：具有0.1％Et2NH的8％EtOH/庚烷
在220nm进行UV监测
注射量：0.5mL～30mg/mL在EtOH中的溶液(总计～200mg)
得到：
Cap 10步骤c.1：第一洗脱峰：30.5mg；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.45-7.31(m,5H),5.34-5.19(m,2H),5.10(d,J＝12.0Hz,1H),4.39(dd,J＝9.0,4.8Hz,1H),3.78-3.66(m,4H),3.51(td,J＝12.0,2.6Hz,1H),2.20-2.06(m,1H),1.92-1.79(m,1H),1.76-1.11(m,11H)。
Cap 10步骤c.2：第二洗脱峰：29.6mg；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.43-7.31(m,5H),5.28-5.15(m,3H),4.34(dd,J＝9.0,5.3Hz,1H),3.78-3.66(m,4H),3.53-3.40(m,1H),2.10(td,J＝10.6,5.4Hz,1H),1.94-1.82(m,1H),1.76-1.62(m,3H),1.59-1.24(m,8H)。
Cap 10步骤c.3：第三洗脱峰：27.8mg；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.46-7.31(m,5H),5.30-5.14(m,3H),4.34(dd,J＝8.9,5.1Hz,1H),3.79-3.63(m,4H),3.53-3.40(m,1H),2.10(td,J＝10.4,5.5Hz,1H),1.95-1.82(m,1H),1.76-1.63(m,3H),1.60-1.22(m,8H)。
Cap 10步骤c.4：第四洗脱峰：21.7mg；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.45-7.32(m,5H),5.36-5.18(m,2H),5.10(d,J＝12.0Hz,1H),4.39(dd,J＝9.0,4.8Hz,1H),3.79-3.67(m,4H),3.51(td,J＝12.0,2.6Hz,1H),2.19-2.06(m,1H),1.92-1.79(m,1H),1.77-1.10(m,11H)。
通过1H NMR，Cap 10步骤c.1和Cap 10步骤c.4为对映异构体对且Cap 10步骤c.2和Cap 10步骤c.3为对映异构体对。每种立体异构体独立使用。
Cap 10.1-10.4
将Cap 10步骤c.1(24.4mg,0.068mmol)溶解在MeOH(3mL)中并加到10％Pd/C(5.8mg,5.40μmol)中。将反应混合物先后用氮气(4×)和氢气(4×)抽空冲洗并在氢气气囊下搅拌过夜。将反应混合物用硅藻土处理，然后用硅藻土过滤并浓缩，得到Cap 10.1(16.3mg)，其为无色玻璃状物。LC-MS保留时间1.139min；m/z 272.2(MH+)。在配备有Phenomenex-Luna 3μC18 2.0×50mm柱且使用检测波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器的Shimadzu LC-10AS液相色谱仪上记录LC数据。使用以下洗脱条件：流速为0.8mL/min，梯度为100％溶剂A/0％溶剂B至0％溶剂A/100％溶剂B，梯度时间为2min，保持时间为1min，分析时间为3min，其中溶剂A为10％乙腈/90％H2O/0.1％三氟乙酸且溶剂B为10％H2O/90％乙腈/0.1％三氟乙酸。使用针对LC的Micromass Platform(电喷雾模式)来确定MS数据。1H NMR(400MHz,MeOH-d4)δ4.11-4.03(m,1H),3.77-3.70(m,1H),3.66(s,3H),3.65-3.56(m,1H),3.37-3.34(m,1H),2.22-2.08(m,1H),2.02-1.93(m,1H),1.77-1.28(m,11H)。
使用上述程序独立对其它三种立体异构体Cap 10步骤c.2-c.4都进行脱苄基。
Cap 10.2(无色玻璃状物):LC-MS保留时间1.018min；m/z 272.2(MH+)。1H NMR(400MHz,MeOH-d4)δ4.10-4.03(m,1H),3.78-3.71(m,1H),3.66(s,3H),3.59(td,J＝12.1,2.4Hz,1H),3.38-3.34(m,1H),2.22-2.09(m,1H),2.06-1.96(m,1H),1.79-1.27(m,11H)。
Cap 10.3(无色玻璃状物):1H NMR(400MHz,MeOH-d4)δ4.10-4.03(m,1H),3.78-3.70(m,1H),3.66(s,3H),3.59(td,J＝12.1,2.4Hz,1H),3.38-3.35(m,1H),2.23-2.09(m,1H),2.05-1.94(m,1H),1.79-1.26(m,11H)。
Cap 10.4(无色玻璃状物):1H NMR(400MHz,MeOH-d4)δ4.06(d,J＝6.0Hz,1H),3.77-3.70(m,1H),3.69-3.57(m,4H),3.36(s,1H),2.22-2.06(m,1H),2.02-1.92(m,1H),1.79-1.26(m,11H)。
Cap-11(外消旋混合物)
Cap-11步骤a
在0℃在氮气下向3-(苄基氧基)环丁酮(5g,28.4mmol)在CH2Cl2(200ml)中的溶液中先后加入2-(二甲氧基磷酰基)-2-(甲氧基羰基氨基)乙酸甲酯(14.48g,56.7mmol)和1,1,3,3-四甲基胍(7.33ml,62.4mmol)。将反应混合物从冷却浴中取出并在～25℃在氮气下搅拌24.5h。将反应混合物用饱和NH4Cl(水溶液,100mL)处理。分离各层并将水层用CH2Cl2(2×100mL)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。将粘性油状物用氯仿(5mL)稀释并加载到Thomson硅胶柱(用25％乙酸乙酯/己烷洗脱)上，得到Cap-11步骤a(6.84g)，其为浅黄色粘性油状物。LC/MS:[M+Na]+C16H19NNaO5分析计算值328.12；实测值328.00。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.49(宽单峰,1H),7.41-7.26(m,5H),4.43(s,2H),4.20-4.10(m,1H),3.65(s,3H),3.56(s,3H),3.35-3.24(m,1H),3.01(ddt,J＝17.4,6.8,3.5Hz,1H),2.96-2.84(m,1H),2.72-2.62(m,1H)。
Cap-11步骤b
在氮气下向Cap-11步骤a(6.84g,22.40mmol)在MeOH(100mL)中的溶液中加入10％钯/碳(2.384g,2.240mmol)在MeOH(20mL)中的混悬液。然后将混合物在气囊下暴露于氢气26h。将反应混合物用硅藻土过滤并真空浓缩，得到Cap-11步骤b(4.84g)，其为浅黄色粘性油状物。LC/MS:[M+Na]+C9H15NNaO5分析计算值240.08；实测值240.01。1H NMR(400MHz,MeOH-d4)δ7.40-7.25(m,1H),4.91(s,2H),4.19-3.99(m,2H),3.72(s,3H),3.67(s,3H),2.42-2.25(m,2H),2.24-2.02(m,1H),1.91-1.61(m,1H)。
Cap-11步骤c
在-78℃在氮气下向DMSO(4.0ml,56.4mmol)在CH2Cl2(70ml)中的溶液中滴加2M草酰氯在CH2Cl2中的溶液(15.3ml,30.6mmol)。将反应混合物搅拌1h。将Cap-11步骤b(4.814g,22.16mmol)在CH2Cl2(35.0ml)中的溶液加到反应混合物中且在-78℃在氮气下保持搅拌。将反应混合物搅拌1.5h。将三乙胺(15.5ml,111mmol)滴加到反应混合物中且将反应混合物在-78℃在氮气下保持搅拌。将反应混合物搅拌16h。将反应混合物用冷的20％K2HPO4(水溶液)(50mL)和水(50mL)淬灭。将混合物在～25℃搅拌15min。将反应混合物用乙酸乙酯(50mL)稀释并分离各层。将水层用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物加载到Thomson硅胶柱(用40％乙酸乙酯/己烷洗脱)上，得到Cap-11步骤c(3.71g)，其为浅黄色粘性油状物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.86(d,J＝8.0Hz,1H),4.27(t,J＝8.4Hz,1H),3.65(s,3H),3.57(s,3H),3.16,2.86(m,4H),2.82-2.61(m,1H)。
Cap-11步骤d
将甲基三苯基溴化鏻(3g,8.40mmol)和叔丁醇钾(1g,8.91mmol)在1,4-二噁烷(35mL)中的混合物在40℃在氮气下加热3h。将反应混合物从热环境中取出并在冷却浴中冷却至10℃。滴加Cap-11步骤c(1.48g,6.88mmol)在1,4-二噁烷(7mL)中的溶液并将反应混合物继续在10℃在氮气下搅拌45h。真空除去所有溶剂。将残余物吸收在乙酸乙酯(50mL)和饱和NH4Cl(水溶液,50mL)中。分离各层并将水层再用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将合并的有机层用饱和NaCl(水溶液,50mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物吸收在CHCl3(1mL)中并加载到Thomson硅胶柱(用～4L 5％至15％乙酸乙酯/己烷洗脱)上，得到Cap-11步骤d(533mg)，其为无色粘性油状物且在静置后固化成白色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.21(d,J＝7.8Hz,1H),4.83-4.74(m,2H),4.41(t,J＝7.7Hz,1H),3.74(s,3H),3.70(s,3H),2.82-2.52(m,5H)。
Cap-11步骤e
在0℃在氮气下向CH2Cl2(2.5ml)中加入1M二乙基锌在己烷中的溶液(6.69ml,6.69mmol)，然后历时10min滴加三氟乙酸(在1mL CH2Cl2中)(0.516ml,6.69mmol)。1h后，历时10min滴加二碘甲烷(在1mL CH2Cl2中)(0.540ml,6.69mmol)，然后滴加Cap-11步骤d(在1mL CH2Cl2中)(0.2378g,1.115mmol)。加入后，将反应混合物从冷却浴中取出并在～25℃在氮气下搅拌12.5h。将反应混合物用0.1N HCl(水溶液,50mL)淬灭。将产物用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。将合并的有机层用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物加载到Thomson硅胶柱(用15％乙酸乙酯/己烷洗脱)上，得到Cap-11步骤e(206.1mg,81％产率)，其为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.65(d,J＝7.8Hz,1H),4.08(dd,J＝9.5,8.0Hz,1H),3.62(s,3H),3.56(s,3H),2.76-2.57(m,1H),2.11-2.00(m,3H),2.00-1.90(m,1H),0.48-0.28(m,4H)。
Cap-11(外消旋混合物)
在～25℃向Cap-11步骤e(0.2804g,1.234mmol)在MeOH(4mL)中的溶液中加入氢氧化锂(0.035g,1.481mmol)在水(2mL)中的溶液。将反应混合物搅拌4h，真空除去所有挥发物组分。将残余物用水(25mL)稀释并用6N HCl酸化至pH～1-2。将产物用乙酸乙酯(3×25mL)萃取，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩，得到Cap-11(258.1mg)，其为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.52(s,1H),7.48(d,J＝8.3Hz,1H),3.99(dd,J＝9.3,8.3Hz,1H),3.55(s,3H),2.74-2.57(m,1H),2.17-1.89(m,4H),0.49-0.25(m,4H)。
Cap-12(外消旋混合物)
向Cap-11步骤d(0.200g,0.938mmol)在MeOH(3mL)中的溶液中滴加氢氧化锂(0.027g,1.126mmol)在水(1.5mL)中的溶液。将反应混合物在～25℃搅拌6h。真空除去所有挥发物组分。将残余物用水(10mL)稀释并用6N HCl酸化至pH～1-2。将产物用乙酸乙酯(3×25mL)萃取。将合并的有机层用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩，得到Cap-12(178mg)，其为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.59(s,1H),7.54(d,J＝8.0Hz,1H),4.75(宽单峰,2H),3.95(t,J＝8.2Hz,1H),3.55(s,3H),2.76-2.51(m,4H),2.51-2.42(m,1H)。
Cap 13.1和13.2
Cap 13步骤a
在氮气下将三氟硼酸(二乙基)[(diethyloxonio)trifluoroborate](3.64mL,29.0mmol)滴加(历时10min)到环丙烷甲醛(4.25mL,56.9mmol)和(E)-((4-甲氧基丁-1,3-二烯-2-基)氧基)三甲基甲硅烷(4.90g,28.4mmol)在Et2O(100mL)中的溶液(所述溶液已被冷却至-78℃)中。将反应混合物在-78℃搅拌2.5h，然后加入饱和NaHCO3(水溶液)(50mL)且使反应混合物缓慢达到室温并搅拌过夜。分离各层，将水层用Et2O(100mL)萃取并将合并的有机层用盐水(～50mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩，得到粗橙色油状物。将粗油状物用Biotage Horizon(80g SiO2,0-30％EtOAC/己烷)纯化，得到Cap 13步骤a(2.826g)，其为黄色油状物。物质无需进一步纯化即使用。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.37(d,J＝6.0Hz,1H),5.40(dd,J＝6.0,1.0Hz,1H),3.70(ddd,J＝13.1,8.8,3.8Hz,1H),2.74-2.63(m,1H),2.60-2.52(m,1H),1.24-1.14(m,1H),0.75-0.61(m,2H),0.54-0.46(m,1H),0.35-0.28(m,1H)。
Cap 13步骤b
将Cap 13步骤a(800mg,5.79mmol)溶解在甲醇(50mL)中，然后用10％Pd/C(185mg,0.174mmol)处理。将反应混合物搅拌并先后用氮气(4×)和氢气(4×)抽空冲洗。然后将反应混合物在氢气气囊下搅拌2h。将硅藻土加到反应混合物中并搅拌，然后将反应混合物用硅藻土过滤并浓缩，得到粗油状物。将粗油状物用Biotage Horizon(25gSiO2,0-50％EtOAc/己烷)纯化，得到Cap 13步骤b(650mg,掺杂有25％w/w EtOAc)，其为无色非粘性油状物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ3.92(ddd,J＝11.5,5.1,1.8Hz,1H),3.56-3.45(m,1H),3.23(s,3H),3.16(s,3H),2.70(ddd,J＝11.2,8.7,2.1Hz,1H),2.10(dt,J＝13.4,2.6Hz,1H),1.93-1.84(m,1H),1.68-1.57(m,1H),1.46(dd,J＝13.3,11.5Hz,1H),0.96-0.85(m,1H),0.63-0.45(m,2H),0.37(dq,J＝9.4,4.8Hz,1H),0.19(dq,J＝9.5,4.8Hz,1H)。
Cap 13步骤c
将Cap 13步骤b(650mg,2.65mmol,掺杂有25％w/w EtOAc)溶解在THF(7mL)中，然后用1.5M HCl(水溶液)(7.07mL,10.61mmol)处理并搅拌30min。将反应混合物用盐水(～30mL)稀释，用DCM(3×25mL)萃取并将合并的有机物干燥(MgSO4)，过滤并浓缩，得到Cap 13步骤c(543mg,掺杂有12％w/w THF及其它次要杂质)，其为澄清无色油状物。物质无需进一步纯化即使用。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.31(ddd,J＝11.5,7.4,1.6Hz,1H),3.67-3.57(m,1H),2.98-2.88(m,1H),2.68-2.42(m,3H),2.37-2.28(m,1H),1.03(qt,J＝8.1,4.8Hz,1H),0.69-0.52(m,2H),0.49-0.40(m,1H),0.30-0.21(m,1H)。
Cap 13步骤d.1和d.2
将2-异氰基乙酸乙酯(390mg,3.45mmol)用Et2O(15mL)稀释，然后用氧化亚铜(76mg,0.530mmol)处理。将浆液搅拌10min，然后加入Cap 13步骤c(371mg,2.65mmol)在Et2O(10mL)中的溶液并将反应混合物在室温搅拌3h。然后将反应混合物冷却至0℃，用1M叔丁醇钾(3.45mL,3.45mmol)在THF中的溶液逐滴处理并在0℃搅拌1h。加入乙酸(0.197mL,3.45mmol)在DCM(2mL)中的溶液且将反应混合物温热至室温并搅拌过夜。将粗反应混合物用水(～20mL)稀释并用EtOAc(3×25mL)萃取。将合并的有机物干燥(MgSO4)，过滤并浓缩，得到深红色油状物。将油状物用Biotage Horizon(25g SiO2,50-75％EtOAc/己烷)纯化，得到外消旋的Cap 13步骤d.1((Z)-异构体；250mg)和Cap 13步骤d.2((E)-异构体；243mg)，其各自为灰白色固体。基于NOE研究来进行E/Z归属。Cap 13步骤d.1：LC-MS保留时间1.007min；m/z 254.2(MH+)。1H NMR(400MHz,MeOH-d4)δ8.10(s,1H),4.20(q,J＝7.0Hz,2H),4.08(ddd,J＝11.2,5.6,1.8Hz,1H),3.45-3.36(m,1H),3.35-3.29(m,1H),2.75-2.67(m,2H),2.30(ddd,J＝13.9,12.4,5.5Hz,1H),2.07(dd,J＝14.1,11.0Hz,1H),1.34-1.22(m,3H),0.95(qt,J＝8.1,4.8Hz,1H),0.57-0.47(m,2H),0.40-0.23(m,2H)。Cap 13步骤d.2：LC-MS保留时间1.067min；m/z 254.2(MH+)。在配备有Phenomenex-Luna 3μC18 2.0×50mm柱且使用检测波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器的Shimadzu LC-10AS液相色谱仪上记录LC数据。使用以下洗脱条件：流速为0.8mL/min，梯度为100％溶剂A/0％溶剂B至0％溶剂A/100％溶剂B，梯度时间为2min，保持时间为1min，分析时间为3min，其中溶剂A为10％乙腈/90％H2O/0.1％三氟乙酸且溶剂B为10％H2O/90％乙腈/0.1％三氟乙酸。使用针对LC的Micromass Platform(电喷雾模式)来确定MS数据。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.08(s,1H),4.21(q,J＝7.0Hz,2H),4.08(ddd,J＝11.1,5.6,1.9Hz,1H),3.51(dt,J＝14.0,2.0Hz,1H),3.42(td,J＝11.5,2.5Hz,1H),2.70(ddd,J＝10.6,8.2,2.3Hz,1H),2.49(dq,J＝14.1,2.2Hz,1H),2.26-2.12(m,2H),1.34-1.24(m,3H),0.96(qt,J＝8.1,4.9Hz,1H),0.58-0.49(m,2H),0.37(dddd,J＝7.8,6.3,3.0,1.3Hz,1H),0.26(dddd,J＝5.2,4.0,2.9,1.4Hz,1H)。
Cap 13步骤e.1和e.2
将外消旋的Cap 13步骤d.1(625mg)溶解在16mL EtOH中并以多次注射的形式通过制备型手性HPLC(ChiralPak AS柱,10％EtOH/庚烷/0.1％二乙胺)来分离，得到Cap 13步骤e.1(450mg,第一洗脱峰)和Cap 13步骤e.2(360mg,第二洗脱峰)，其各自为灰白色固体。对映异构体清楚地分开且虽然每种样品如LC/MS和手性分析型HPLC所示是洁净的，但是根据1H NMR仍存在未鉴定的杂质。每种物质无需进一步纯化即使用。1H NMR(400MHz,MeOH-d4)δ8.08(s,1H),4.21(q,J＝7.0Hz,2H),4.08(ddd,J＝11.1,5.6,1.9Hz,1H),3.51(dt,J＝13.9,2.1Hz,1H),3.46-3.38(m,1H),2.70(ddd,J＝10.7,8.2,2.3Hz,1H),2.49(dq,J＝14.1,2.2Hz,1H),2.26-2.12(m,2H),1.34-1.22(m,3H),0.96(qt,J＝8.2,5.0Hz,1H),0.58-0.48(m,2H),0.37(dddd,J＝7.7,6.3,2.9,1.4Hz,1H),0.28-0.22(m,1H)。
Cap 13步骤f.1和f.2
在帕尔振摇器500mL反应容器中将Cap 13步骤e.1(310mg,掺杂有未知的杂质)溶解在MeOH(20mL)中，然后加入(-)-1,2-二((2S,5S)-2,5-二甲基磷杂环戊烷-1-基)乙烷(环辛二烯)四氟硼酸铑(I)(17.0mg,0.031mmol)。将氮气鼓泡通过反应混合物10min，然后将反应混合物先后用氮气(4×)和氢气(4×)抽空冲洗。然后将反应混合物在60psi氢气下振摇2.5天。将反应混合物浓缩，得到棕黄色油状物，然后用Biotage Horizon(12g SiO2,60-80％EtOAc/Hex)纯化，得到Cap 13步骤f.1(201mg)，其为澄清无色油状物。LC-MS保留时间1.681min；m/z 256.25(MH+)。在配备有Phenomenex-Luna 3μC18 2.0×50mm柱且使用检测波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器的Shimadzu LC-10AS液相色谱仪上记录LC数据。使用以下洗脱条件：流速为0.8mL/min，梯度为100％溶剂A/0％溶剂B至0％溶剂A/100％溶剂B，梯度时间为4min，保持时间为1min，分析时间为5min，其中溶剂A为10％乙腈/90％H2O/0.1％三氟乙酸且溶剂B为10％H2O/90％乙腈/0.1％三氟乙酸。使用针对LC的MicromassPlatform(电喷雾模式)来确定MS数据。通过1H NMR，物质以酰胺旋转异构体的12:1混合物形式存在。主要旋转异构体：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.26(s,1H),6.09(d,J＝7.8Hz,1H),4.88(t,J＝8.7Hz,1H),4.25(q,J＝7.0Hz,2H),3.89-3.72(m,2H),2.89(ddd,J＝9.5,6.2,3.9Hz,1H),2.32-2.20(m,1H),1.80-1.70(m,1H),1.69-1.58(m,2H),1.50(dt,J＝6.8,3.4Hz,1H),1.33(t,J＝7.2Hz,3H),1.13-1.03(m,1H),0.63-0.49(m,2H),0.44-0.35(m,1H),0.18-0.10(m,1H)。
按照上述程序由Cap 13步骤e.2制备Cap 13步骤f.2(无色油状物)。LC-MS保留时间1.753min；m/z 256.25(MH+)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.28(s,1H),6.16(d,J＝8.8Hz,1H),4.72(dd,J＝8.9,4.6Hz,1H),4.25(q,J＝7.1Hz,2H),4.09-4.02(m,1H),3.41-3.29(m,1H),2.54(ddd,J＝10.9,8.5,2.0Hz,1H),2.15-2.04(m,1H),1.80(dd,J＝13.2,1.9Hz,1H),1.49-1.42(m,2H),1.32(t,J＝7.2Hz,3H),0.94-0.82(m,1H),0.60-0.45(m,2H),0.39-0.31(m,1H),0.21-0.13(m,1H)。基于所选THP质子的NMR偶合级数对反式立体异构体(Cap 13步骤f.1)和顺式立体异构体(Cap 13步骤f.2)进行试验性归属。
Cap 13步骤g
将Cap 13步骤f.1(213mg,0.834mmol)溶解在MeOH(5mL)中，然后加入1.5M HCl(1.11mL,1.67mmol)并将反应混合物用隔膜密封，然后将隔膜用针刺穿并开放于空气。然后将反应混合物在50℃加热过夜。将反应混合物浓缩，溶解在DCM(5mL)中，然后用DIPEA(0.583mL,3.34mmol)和氯甲酸甲酯(0.13mL,1.7mmol)处理并在室温搅拌3h。将反应混合物用水(～5mL)淬灭，搅拌，分离并将水层再用DCM(3×5mL)萃取。将合并的有机物干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。将粗浅棕色油状物用Biotage Horizon(12g SiO2,25-25％EtOAc/己烷)化，得到Cap 13步骤g.1(131mg)。LC-MS保留时间2.020min；m/z 286.2(MH+)。在配备有Phenomenex-Luna 3μC18 2.0×50mm柱且使用检测波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器的Shimadzu LC-10AS液相色谱仪上记录LC数据。使用以下洗脱条件：流速为0.8mL/min，梯度为100％溶剂A/0％溶剂B至0％溶剂A/100％溶剂B，梯度时间为4min，保持时间为1min，分析时间为5min，其中溶剂A为10％乙腈/90％H2O/0.1％三氟乙酸且溶剂B为10％H2O/90％乙腈/0.1％三氟乙酸。使用针对LC的Micromass Platform(电喷雾模式)来确定MS数据。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ5.17(d,J＝9.3Hz,1H),4.49(t,J＝8.7Hz,1H),4.30-4.18(m,2H),3.89-3.80(m,1H),3.79-3.67(m,1H),3.69(s,3H),2.94-2.83(m,1H),2.26-2.16(m,1H),1.78-1.47(m,4H),1.33(t,J＝7.2Hz,3H),1.08(dt,J＝8.6,4.4Hz,1H),0.63-0.47(m,2H),0.44-0.36(m,1H),0.18-0.09(m,1H)。
按照上述程序由Cap 13步骤f.2制备Cap 13步骤g.2。LC-MS保留时间2.053min；m/z 286.25(MH+)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.27(d,J＝8.8Hz,1H),4.34(dd,J＝9.0,4.8Hz,1H),4.23(q,J＝7.3Hz,2H),4.05(dt,J＝11.2,3.2Hz,1H),3.71(s,3H),3.41-3.30(m,1H),2.55(ddd,J＝10.7,8.5,1.9Hz,1H),2.09-1.96(m,1H),1.77(d,J＝12.8Hz,1H),1.48-1.38(m,2H),1.35-1.22(m,1H),1.31(t,J＝7.3Hz,3H),0.89(qt,J＝8.2,4.9Hz,1H),0.61-0.44(m,2H),0.39-0.30(m,1H),0.17(dq,J＝9.4,4.7Hz,1H)。
Cap 13.1和13.2
将Cap 13步骤g.1(131mg,0.459mmol)溶解在THF(5.5mL)中，然后用0.5M LiOH水溶液(3.67mL,1.836mmol)处理并搅拌5h。将反应混合物用1N HCl(1.9mL)淬灭，然后在氮气气流下浓缩。将物质用水(～4mL)稀释，然后用DCM:MeOH(～5:1,3×3mL)萃取。将合并的有机物浓缩，得到Cap 13.1(117mg)，其为无色玻璃状物。物质无需进一步纯化即使用。LC-MS保留时间2.441min；m/z 258.2(MH+)。在配备有Phenomenex-Luna 3μC18 2.0×50mm柱且使用检测波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器的Shimadzu LC-10AS液相色谱仪上记录LC数据。使用以下洗脱条件：流速为0.8mL/min，梯度为100％溶剂A/0％溶剂B至0％溶剂A/100％溶剂B，梯度时间为4min，保持时间为1min，分析时间为5min，其中溶剂A为10％乙腈/90％H2O/0.1％三氟乙酸且溶剂B为10％H2O/90％乙腈/0.1％三氟乙酸。使用针对LC的Micromass Platform(电喷雾模式)来确定MS数据。
使用上述程序由Cap 13步骤g.2制备Cap 13.2。LC-MS保留时间2.553min；m/z258.2(MH+)。
Cap 14
Cap 14步骤a
在500mL氢化压力管中将2-(苄基氧基羰基氨基)-2-(二甲氧基磷酰基)乙酸甲酯(300mg,0.906mmol)在MeOH(10mL)中的溶液用N2鼓泡30min。向混合物中加入一缩二碳酸二甲酯(0.146mL,1.358mmol)和Pd/C(48.2mg,0.045mmol)(10％)，然后置于帕尔振摇器上并在60psi氢化5h。将混合物用硅藻土垫过滤并将滤液浓缩，得到Cap 14步骤a(230mg)，其为浅黄色油状物且不经进一步纯化即使用。LC(条件1)：RT＝1.60min；LC/MS：[M+H]+C7H15NO7P分析计算值256.06；实测值256.20。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.54(d,J＝8.0Hz,1H),5.00-4.86(m,1H),3.87-3.82(m,9H),3.73(s,3H)。
Cap 14步骤b
在-20℃向Cap 14步骤a(230mg,0.901mmol)在THF(1mL)中的溶液中加入1,1,3,3-四甲基胍(0.125mL,0.992mmol)。将所得浅黄色混合物在-20℃搅拌1h。然后加入二氢-2H-吡喃-4(3H)-酮(99mg,0.992mmol)在THF(0.5mL)中的溶液并将所得混合物在室温搅拌16h。将反应混合物用EtOAc(5mL)稀释并用0.1N HCl溶液洗涤。将水层用EtOAc(2×10mL)萃取并将合并的有机层用MgSO4干燥并浓缩。将粗产物通过快速色谱(硅胶,50％EtOAc/Hex)来纯化，得到Cap 14步骤b，其为白色固体。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ5.93(宽单峰,1H),3.81-3.75(m,7H),3.73(s,3H),2.95(t,J＝5.5Hz,2H),2.44(t,J＝5.2Hz,2H)。
Cap 14
向Cap 14步骤b(150mg,0.654mmol)在THF(2mL)和水(1mL)中的混合物中加入LiOH(0.982mL,1.963mmol)(2M水溶液)。将所得混合物在室温搅拌过夜。将混合物用Et2O(5mL)萃取。将水相用1N HCl水溶液酸化并用EtOAc(6×)萃取。将合并的有机层用MgSO4干燥并浓缩，得到Cap 14，其为白色固体(100mg)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.34(宽单峰,1H),3.73-3.67(m,4H),3.65(s,3H),3.29(dt,J＝3.3,1.7Hz,2H),2.38(t,J＝5.3Hz,2H)。
Cap 15.1、15.2、15.3和15.4
Cap 15步骤a
外消旋体
将1.6M甲基锂(27.1mL,43.4mmol)在乙醚中的溶液加到已经在氮气下冷却至0℃的碘化亚铜(I)(5.51g,29.0mmol)在乙醚(30mL)中的搅拌浆液中并将反应混合物在0℃搅拌30min。然后历时20min加入Cap 13步骤a(2.00g,14.5mmol)在乙醚(10mL)中的溶液。将反应混合物温热至室温并搅拌2h。然后将反应混合物冷却至0℃，缓慢用冷的NH4Cl水溶液(>10g)淬灭并搅拌过夜。将反应混合物用盐水稀释，分离各层并将水层再用乙醚(2×100mL)萃取。将合并的有机物干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱(160g硅胶,加载溶剂:DCM,0-20％Et2O/己烷)来纯化，得到外消旋的Cap 15步骤a(1.24g)，其为澄清黄色油状物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.45-4.36(m,1H),3.36(dt,J＝8.8,5.5Hz,1H),2.63(ddd,J＝14.1,5.3,1.5Hz,1H),2.56(ddd,J＝14.1,4.5,1.5Hz,1H),2.45(ddd,J＝14.1,5.8,1.5Hz,1H),2.25(ddd,J＝14.1,7.3,1.4Hz,1H),1.28(d,J＝6.5Hz,3H),1.05-0.95(m,1H),0.65-0.55(m,2H),0.46-0.36(m,1H),0.27-0.17(m,1H)。
Cap 15Z和Cap 15E步骤b
将2-异氰基乙酸乙酯(0.868mL,7.78mmol)加到氧化亚铜(0.056g,0.389mmol)在Et2O(30mL)中的搅拌混悬液中并将反应混合物在室温搅拌10min。然后加入Cap 15步骤a(1.2g,7.8mmol)在Et2O(10mL)中的溶液并将反应混合物在室温搅拌2.5h。将反应混合物冷却至0℃，用1M KOtBu(7.78mL,7.78mmol)在THF中的溶液处理并搅拌1h。然后加入乙酸(0.535mL,9.34mmol)在20mL DCM中的溶液且将反应混合物温热至室温并搅拌过夜。将粗反应混合物用EtOAc(60mL)和DCM(40mL)稀释，用饱和盐水(100mL)分配，将水层再用EtOAc(50mL)萃取。将合并的有机物干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱(80g硅胶,加载溶剂:DCM,0-50％EtOAc/己烷)来纯化，得到外消旋的Cap 15Z步骤b(710mg,第一洗脱产物)和外消旋的Cap 15E步骤b(970mg,第二洗脱产物)，其各自为白色固体。双键几何构型通过对每种烯烃异构体进行NOE分析来确定。
Cap 15Z步骤b Z-异构体：1H NMR呈现为酰胺旋转异构体的7:3混合物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.25(d,J＝1.3Hz,0.7H),7.99(d,J＝11.5Hz,0.3H),6.84(宽单峰,0.7H),6.73(d,J＝11.0Hz,0.3H),4.29-4.15(m,3H),3.20(dd,J＝14.3,3.8Hz,0.3H),3.11-3.02(m,1H),2.99(dd,J＝14.2,4.1Hz,0.7H),2.82(dd,J＝14.1,6.3Hz,0.7H),2.70-2.61(m,0.6H),2.57-2.48(m,1H),2.32(dd,J＝13.9,7.4Hz,0.7H),1.35-1.28(m,3H),1.26-1.20(m,3H),1.04-0.94(m,1H),0.61-0.46(m,2H),0.37(tt,J＝9.3,4.5Hz,1H),0.20-0.12(m,1H)。LC-MS保留时间1.90min；m/z＝290[M+Na]+。柱：Phenomenex LUNAC18,50×2,3μ。溶剂A＝90％水/10％乙腈/0.1％TFA；溶剂B＝10％水/90％乙腈/0.1％TFA。起始％B＝10,结束％B＝40。梯度时间＝4min。流速＝0.8ml/min。波长＝220。
Cap 15E步骤b E-异构体：1H NMR呈现为酰胺旋转异构体的7:3混合物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.24(d,J＝1.3Hz,0.7H),7.97(d,J＝11.3Hz,0.3H),6.85(宽单峰,0.7H),6.75(d,J＝11.3Hz,0.3H),4.31-4.22(m,2H),4.21-4.08(m,1H),3.24-3.15(m,1H),3.14-3.03(m,1.6H),2.91(ddd,J＝13.8,4.5,0.8Hz,0.7H),2.66(dd,J＝14.1,3.8Hz,0.3H),2.47(dd,J＝14.1,3.3Hz,0.7H),2.21(dd,J＝14.1,7.5Hz,0.3H),2.07(dd,J＝14.1,8.3Hz,0.7H),1.35-1.29(m,3H),1.23-1.19(m,3H),1.17-1.08(m,0.7H),1.06-0.96(m,0.3H),0.61-0.51(m,2H),0.43-0.34(m,1H),0.26-0.15(m,1H)。LC-MS保留时间1.98min；m/z＝290[M+Na]+。柱：Phenomenex LUNA C18,50×2,3μ。溶剂A＝90％水/10％乙腈/0.1％TFA；溶剂B＝10％水/90％乙腈/0.1％TFA。起始％B＝10,结束％B＝40。梯度时间＝4min。流速＝0.8ml/min。波长＝220。
Cap 15.1和Cap 15.2步骤c
在帕尔振摇器容器中将(-)-1,2-二((2S,5S)-2,5-二甲基磷杂环戊烷-1-基)乙烷(环辛二烯)四氟硼酸铑(I)(120mg,0.216mmol)加到Cap 15Z步骤b(0.68g,2.5mmol)在MeOH(20mL)中的溶液中。将反应容器密封，先后用氮气(4×)和氢气(4×)抽空冲洗并将反应混合物在55psi氢气下在室温振摇2天。将粗反应混合物浓缩至干并将残余物通过快速硅胶色谱(25g硅胶,加载溶剂:DCM,0-50％EtOAc/己烷)来纯化，得到Cap 15.1和Cap 15.2步骤c的非对映异构体混合物(607mg)，其为澄清无色凝胶状物。物质用于下一步而无需分离非对映异构体。LC-MS保留时间2.11min；m/z＝270[M+H]+。柱：Phenomenex LUNA C18,50×2,3μ。溶剂A＝90％水/10％乙腈/0.1％TFA；溶剂B＝10％水/90％乙腈/0.1％TFA。起始％B＝10,结束％B＝50。梯度时间＝4min。流速＝0.8ml/min。波长＝220nm。
Cap 15.3和Cap 15.4步骤c
在帕尔振摇器容器中将(-)-1,2-二((2S,5S)-2,5-二甲基磷杂环戊烷-1-基)乙烷(环辛二烯)四氟硼酸铑(I)(120mg,0.216mmol)加到Cap 15E步骤b(0.94g,3.5mmol)在MeOH(20mL)中的溶液中。将反应容器密封，先后用氮气(4×)和氢气(4×)抽空冲洗并在55psi氢气下在室温振摇2天。将粗反应混合物浓缩至干并将残余物通过快速硅胶色谱(25g硅胶,加载溶剂:DCM,0-50％EtOAc/己烷)来纯化，得到Cap 15.3和Cap 15.4步骤c的非对映异构体混合物(889mg)，其为无色凝胶状物。将该混合物中的一部分(390mg)通过制备型HPLC(具有0.1％TFA缓冲液的H2O-MeCN)来纯化，得到Cap 15.3步骤c(0.19g,其为第一洗脱产物)和Cap 15.4步骤c(0.19g,其为第二洗脱产物)。对由后续步骤得到的产物进行NOE和2D NMR分析以确定每种产物的相对立体化学。
Cap 15.3步骤c:LC-MS保留时间1.14min；m/z＝270[M+H]+。柱：Phenomenex LUNAC18,50×2,3μ。溶剂A＝90％水/10％乙腈/0.1％TFA；溶剂B＝10％水/90％乙腈/0.1％TFA。起始％B＝20,结束％B＝40。梯度时间＝4min。流速＝0.8ml/min。波长＝220。
Cap 15.4步骤c:LC-MS保留时间1.61min；m/z＝270[M+H]+。柱：Phenomenex LUNAC18,50×2,3μ。溶剂A＝90％水/10％乙腈/0.1％TFA；溶剂B＝10％水/90％乙腈/0.1％TFA。起始％B＝20,结束％B＝40。梯度时间＝4min。流速＝0.8ml/min。波长＝220。
Cap 15.1和Cap 15.2步骤d
将1.5N HCl水溶液(5.5mL,8.25mmol)加到Cap 15.1和Cap 15.2步骤c的非对映异构体混合物(590mg,2.19mmol)在EtOH(6mL)中的溶液中并将反应混合物在52℃搅拌16h。然后将反应混合物浓缩至干，得到粗白色固体，将其溶解在DCM(10mL)中，冷却至0℃并先后用氯甲酸甲酯(0.26mL,3.3mmol)和DIPEA(1.15mL,6.57mmol)处理。将反应混合物在室温搅拌16h，浓缩并将残余物通过快速硅胶色谱(25g硅胶,加载溶剂:DCM,0-25％EtOAc/己烷)来纯化和部分分离。将含有期望产物的非对映异构体混合物的级份进一步通过快速硅胶色谱(25g硅胶,加载溶剂:DCM,0-40％EtOAc/己烷)来分离。将来自各次色谱的相应单一立体异构体级份合并并浓缩，得到Cap 15.1步骤d(230mg,第一洗脱立体异构体)和Cap 15.2步骤d(240mg,第二洗脱立体异构体)，其各自为澄清无色凝胶状物。使用NOE和2D NMR分析来确定每种产物的相对立体化学。
Cap 15.1步骤d:1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.26(d,J＝9.0Hz,1H),4.33(dd,J＝9.0,4.8Hz,1H),4.29-4.18(m,2H),3.92-3.81(m,1H),3.69(s,3H),3.00(dd,J＝9.8,5.5Hz,1H),2.38(ddt,J＝12.4,8.4,4.0Hz,1H),1.74-1.64(m,1H),1.63-1.52(m,1H),1.47(d,J＝12.3Hz,1H),1.35-1.24(m,4H),1.16(d,J＝6.0Hz,3H),1.11-0.99(m,1H),0.60-0.50(m,2H),0.44-0.37(m,1H),0.15-0.07(m,1H)。LC-MS保留时间3.58min；m/z＝322[M+Na]+。柱：Phenomenex LUNA C18,50×2,3μ。溶剂A＝90％水/10％甲醇/0.1％TFA；溶剂B＝10％水/90％甲醇/0.1％TFA。起始％B＝0，结束％B＝100。梯度时间＝4min。流速＝0.8ml/min。波长＝220。
Cap 15.2步骤d:1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.25(d,J＝8.8Hz,1H),4.37-4.15(m,4H),3.70(s,3H),2.78(ddd,J＝11.1,8.7,2.0Hz,1H),2.24(td,J＝12.4,3.8Hz,1H),1.74(d,J＝12.8Hz,1H),1.67-1.65(m,1H),1.59(td,J＝12.9,5.8Hz,1H),1.30(t,J＝7.2Hz,3H),1.28-1.21(m,1H),1.19(d,J＝7.0Hz,3H),0.90-0.79(m,1H),0.58-0.43(m,2H),0.27(dq,J＝9.3,4.8Hz,1H),0.14(dq,J＝9.4,4.8Hz,1H)。LC-MS保留时间3.56min；m/z＝322[M+Na]+。柱：Phenomenex LUNA C18,50×2,3μ。溶剂A＝90％水/10％甲醇/0.1％TFA；溶剂B＝10％水/90％甲醇/0.1％TFA。起始％B＝0，结束％B＝100。梯度时间＝4min。流速＝0.8ml/min。波长＝220。
Cap 15.3步骤d
将1.5N HCl水溶液(0.99mL,1.5mmol)加到Cap 15.3步骤c(160mg,0.594mmol)在EtOH(2mL)中的溶液中并将反应混合物在52℃搅拌16h。将反应混合物浓缩，然后与乙醇一起共沸蒸馏，得到呈白色固体形式的粗品。将该粗品溶解在DCM(3mL)中，用冰/H2O浴冷却，然后用氯甲酸甲酯(0.069mL,0.89mmol)和DIPEA(0.31mL,1.8mmol)处理。将反应混合物在室温搅拌16h，用EtOAc(20mL)稀释，加入盐水(10mL)并将水层再用EtOAc(10mL)萃取。将合并的有机层浓缩至干并通过快速硅胶色谱(12g硅胶,加载溶剂:DCM,0-40％Et2O/己烷)来纯化，得到Cap 15.3步骤d(129mg)，其为澄清无色粘性油状物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.25(d,J＝9.0Hz,1H),4.35-4.17(m,4H),3.70(s,3H),2.77(ddd,J＝11.0,8.5,2.1Hz,1H),2.28-2.16(m,1H),1.69-1.56(m,3H),1.42(d,J＝13.1Hz,1H),1.31(t,J＝7.2Hz,3H),1.21(d,J＝6.8Hz,3H),0.89-0.79(m,1H),0.58-0.43(m,2H),0.31-0.24(m,1H),0.14(dq,J＝9.5,4.7Hz,1H)。LC-MS保留时间3.60min；m/z＝322[M+Na]+。柱：Phenomenex LUNA C18,50×2,3μ。溶剂A＝90％水/10％甲醇/0.1％TFA；溶剂B＝10％水/90％甲醇/0.1％TFA。起始％B＝0，结束％B＝100。梯度时间＝4min。流速＝0.8ml/min。波长＝220。
Cap 15.4步骤d
使用Cap 15.4步骤c作为原料如上所述进行反应，得到Cap 15.4步骤d(141mg)，其为澄清无色粘性油状物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.25(d,J＝8.8Hz,1H),4.39-4.14(m,3H),3.95-3.83(m,1H),3.70(s,3H),3.06-2.98(m,1H),2.46-2.34(m,1H),1.67-1.48(m,3H),1.33-1.23(m,1H),1.30(t,J＝7.2Hz,3H),1.17(d,J＝6.0Hz,3H),1.14-1.02(m,1H),0.62-0.48(m,2H),0.46-0.37(m,1H),0.10(td,J＝8.5,4.4Hz,1H)。LC-MS保留时间3.58min；m/z＝322[M+Na]+。柱：Phenomenex LUNA C18,50×2,3μ。溶剂A＝90％水/10％甲醇/0.1％TFA；溶剂B＝10％水/90％甲醇/0.1％TFA。起始％B＝0，结束％B＝100。梯度时间＝4min。流速＝0.8ml/min。波长＝220。
Cap 15.1
将1M LiOH水溶液(1.27mL,1.27mmol)加到Cap 15.1步骤d(0.19g,0.64mmol)在THF(3mL)中的溶液中并将反应混合物在室温搅拌16h。将反应混合物用1M HCl水溶液(1.3mL)中和并用EtOAc(2×10mL)萃取。将合并的有机层干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩，得到Cap 15.1(0.19g)，其为白色固体且无需进一步纯化即使用。LC-MS保留时间3.38min；m/z＝294[M+Na]+。柱：Phenomenex LUNA C18,50×2,3μ。溶剂A＝90％水/10％甲醇/0.1％TFA；溶剂B＝10％水/90％甲醇/0.1％TFA。起始％B＝0，结束％B＝100。梯度时间＝4min。流速＝0.8ml/min。波长＝220nm。
Cap 15.2、15.3和15.4
如针对Cap 15.1所述那样进行反应和产物分析。
原料(量) 产物(量) 保留时间 m/z(M+Na)+
Cap 15.2步骤d(210mg) Cap 15.2(210mg) 3.20min 294
Cap 15.3步骤d(115mg) Cap 15.3(116mg) 3.32min 294
Cap 15.4步骤d(120mg) Cap 15.4(122mg) 3.34min 294
Cap 16
Cap 16步骤a
在氮气下在0℃向2-氧杂螺[3.3]庚-6-酮(0.54g,4.82mmol)(其制备参见WO2011130146)在CH2Cl2(30mL)中的溶液中先后加入2-(二甲氧基磷酰基)-2-((甲氧基羰基)氨基)乙酸甲酯(2.458g,9.63mmol)和1,1,3,3-四甲基胍(1.244mL,10.60mmol)。将反应混合物从冷却浴中取出并在～25℃搅拌16h。真空除去所有溶剂。将残余物加载到Thomson硅胶柱(90g)上，用45％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到两个级份即384mg(粘性无色油状物，其在静置后固化成灰白色固体)和627mg(粘性浅黄色油状物，其在静置后固化成灰白色固体)。两个级份的1H NMR与产物一致且因此将它们合并，得到一批Cap 16步骤a，其为浅黄色固体(1.014g)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.40(宽单峰,1H),4.62(d,J＝6.5Hz,2H),4.58(d,J＝6.3Hz,2H),3.65(s,3H),3.56(s,3H),3.24(s,2H),2.97(s,2H)。
Cap 16步骤b
将Cap 16步骤a(1g,4.15mmol)和(-)-1,2-二((2S,5S)-2,5-二甲基磷杂环戊烷-1-基)乙烷(环辛二烯)四氟硼酸铑(I)(0.100g,0.180mmol)在MeOH(50mL)中的溶液在500mL帕尔反应容器中用氮气充分冲洗，暴露于真空并再用氮气冲洗若干次，然后用氢气充填至60psi。将反应混合物在～25℃剧烈振摇72h。将反应混合物从帕尔氢化仪器中取出。真空除去所有溶剂。将残余物加载到Thomson硅胶柱(90g)上，用50％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到Cap16步骤b，其为浅黄色粘性油状物(846mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.58(d,J＝7.8Hz,1H),4.57(d,J＝1.0Hz,1H),4.55(d,J＝1.0Hz,1H),4.44(d,J＝1.0Hz,1H),4.42(d,J＝1.0Hz,1H),3.93(t,J＝8.4Hz,1H),3.62(s,3H),3.56(s,3H),2.43-2.29(m,1H),2.29-2.16(m,2H),2.08-1.94(m,2H)。
Cap 16
向Cap 16步骤b(0.300g,1.233mmol)在MeOH(4mL)中的溶液中加入氢氧化锂(0.032g,1.36mmol)在水(2mL)中的溶液。将反应混合物在～25℃搅拌17.5h。真空除去所有挥发物组分。将残余物用水(4mL)稀释并用6N HCl酸化至pH～2。将产物用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩，得到Cap16，其为澄清无色粘性油状物且在静置后固化成白色固体(215.8mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.49(宽单峰,1H),7.40(d,J＝8.3Hz,1H),4.62-4.49(m,2H),4.49-4.37(m,2H),3.84(t,J＝8.3Hz,1H),3.55(s,3H),2.46-2.29(m,1H),2.29-2.14(m,2H),2.11-1.94(m,2H)。
Cap 17.1和Cap 17.2
Cap 17步骤a
历时20min将2M异丙基氯化镁(97mL,195mmol)在THF中的溶液滴加到Cap 16步骤a(16.0g,64.9mmol)和N,O-二甲基羟胺HCl(9.82g,101mmol)在无水THF(150mL)中的冷的经氮气吹扫的溶液中同时保持反应温度低于-20℃(制冷器浴)。将反应混合物在相同温度搅拌2h，然后将其用饱和NH4Cl溶液(100mL)淬灭并用乙醚(100mL)稀释。将水层用乙醚(100mL)洗涤且将合并的乙醚萃取物用盐水洗涤并干燥(MgSO4)。浓缩有机物，得到无色油状物(21.43g)，将其加载(己烷)到Thomson 300g硅胶柱上并用总计3L 5-100％EtOAc/己烷梯度洗脱。分离到Cap 17步骤a，其为无色油状物(17.65g)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ4.41-4.35(m,1H),3.71(s,3H),3.19(s,3H),2.80-2.76(m,1H),2.37(dd,J＝14.7,5.7Hz,1H),1.24(d,J＝6.1Hz,3H),0.89(s,9H),0.09(s,3H),0.06(s,3H)。
Cap 17步骤b
在氮气下在-78℃将叔丁基锂(32.4mL,55.1mmol)滴加到1-溴环戊-1-烯(4.05g,27.5mmol)在THF(200mL)中的溶液中。搅拌30min后，在-78℃将所得乙烯基锂经由套管转移到Cap 17步骤a(6.0g,23mmol)在THF(50mL)中的溶液中。将反应混合物搅拌2h，温热至0℃并保持1h且用饱和NH4Cl溶液(40mL)淬灭。加入盐水(40mL)并将水相用Et2O(2×)萃取。将合并的有机层干燥(MgSO4)且真空蒸发并将所得粗产物(8g；含有残留溶剂)直接使用。出于表征目的，将一小部分(～500mg)加载(DCM)到40g Thomson硅胶柱上并用总计1L 5-35％EtOAc/己烷进行梯度洗脱。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.79-6.78(m,1H),4.36-4.32(m,1H),2.97(dd,J＝14.5,7.3Hz,1H),2.60-2.53(m,5H),1.94(m,2H),1.2(d,J＝6.1Hz,3H),0.86(s,9H),0.06(s,3H),0.001(s,3H)。
Cap 17步骤c
将Amberlyst 15(2.4g无水形式,Fluka 06423)加到Cap 17步骤b(3g,11.17mmol)在乙腈(60mL)中的经氮气吹扫的溶液中并将反应混合物在50℃加热1h。过滤除去树脂并通过旋转蒸发来除去溶剂。将粗产物加载(DCM)到240g Thomson硅胶柱上并用总计2L 5-50％EtOAc/己烷进行梯度洗脱，得到Cap 17步骤c(1.9g)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ4.24(t,J＝4.3Hz,1H),3.82-3.76(m,1H),2.46(dt,J＝9.5,4.1Hz,1H),2.37(dd,J＝15.6,4.6Hz,1H),2.30(ddd,J＝13.7,2.9,1.0Hz,1H),2.00-1.86(m,5H),1.72-1.67(m,1H),1.31(d,(dd,J＝6.1Hz,3H)。
Cap 17步骤d
在氮气下将2-异氰基乙酸乙酯(1.51g,13.20mmol)用乙醚(30mL)稀释并用氧化亚铜(I)(257mg,1.80mmol)处理。将浆液搅拌5min且加入Cap 17步骤c的产物(1.85g,12.0mmol)在乙醚(15mL)中的溶液并将反应混合物在室温搅拌2h。将反应混合物冷却至0℃并加入12mL 1M叔丁醇盐在THF中的溶液(注：反应混合物在加入10mL后固化)，然后将反应混合物静置18h。加入乙酸(0.76mL,13.20mmol)在20mL DCM中的溶液(使用刮刀将固体物料弄碎)并将溶液搅拌30min，然后过滤。将滤液用DCM稀释并用水洗涤。将水层用DCM萃取且将合并的有机层用盐水洗涤并干燥(MgSO4)。将粗产物加载(DCM)到110g Thomson硅胶柱上并用总计1.5L 15-100％EtOAc/DCM进行梯度洗脱，得到Cap 17步骤d(3.0g)(注：1H NMR显示出～20％残留的EtOAc)，其为顺式/反式异构体的混合物且按原样使用。注：对样品(～40mg)进行手性制备型HPLC[chiralpak AS 21×250mm 10μm；(12％w等梯度/0.5mL溶解在总计3mL EtOH中的注射量)，运行20min，A＝0.1％二乙胺/庚烷，B＝EtOH]。收集在8min和13min洗脱的峰。在8min洗脱的峰:UPLC(条件10):0.946min；[M+H]+C14H22NO4分析计算值268.15；实测值268.10。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.23(s,0.7H)/7.95(d,J＝11.4Hz,0.3H),6.67-6.61(m,1H),4.28-4.23(m,2H),3.98-3.94(m,1H),3.60-3.43(m,2H),2.63/2.32(d,J＝15.1Hz,1H),2.10-2.04(m,1H),2.01-1.93(m,2H),1.91-1.78(m,2H),1.82-1.69(m,2H),1.35-1.24(m,6H)。在13min洗脱的峰:UPLC(条件10):0.966min；[M+H]+C14H22NO4分析计算值268.15；实测值268.10。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.26(s,0.55H)/7.99(d,J＝11.3Hz,0.45H),6.67-6.62(m,1H),4.28-4.22(m,2H),4.00-3.93(m,1H),3.57-3.40(m,2H),2.79-2.58(m,1H),2.16-1.91(m,2H),1.90-1.67(m,5H),1.35-1.26(m,6H)。
Cap 17步骤e
将(-)-1,2-二((2S,5S)-2,5-二甲基磷杂环戊烷-1-基)乙烷(环辛二烯)四氟硼酸铑(I)(0.312g,0.561mmol)加到异构体混合物Cap 17步骤e(3.0g,具有～20％残余的EtOAc)在MeOH(37mL)中的经氮气吹扫的溶液中并将溶液用氢气吹扫3次并在60PSI振摇3天。通过旋转蒸发来除去溶剂并将粗产物加载(DCM)到110g Thomson硅胶柱上并用总计2L5-100％EtOAc/DCM进行梯度洗脱，得到经还原的产物(2.4g)。
Cap 17步骤f
将2.5mL HCl(1.5N)加到在Cap 17步骤e中得到的立体异构体的混合物(1.75g,6.50mmol)在乙醇(20mL)中的溶液中并将反应混合物在50℃加热6h(用配备有与油鼓泡器连接的针头的隔膜盖上)。将挥发物成分用旋转蒸发器除去并将残余物暴露于自制真空18h，得到胺中间体(～1.6g)。将产物吸收在DCM(30mL)中，在氮气下在-25℃加入许尼希碱(Hunig’s Base)(3.46mL,19.89mmol)，然后滴加氯甲酸甲酯(0.820mL,10.61mmol)。将反应混合物在相同温度搅拌3h，然后将其用水(10mL)淬灭并用DCM(50mL)稀释。将有机层分离，干燥(MgSO4)并真空蒸发。将所得粗产物加载(DCM)到110g Thomson硅胶柱上并用总计2L15-100％EtOAc/DCM进行梯度洗脱，得到氨基甲酸甲酯(1.56g)。将产物先后用反相HPLC(Axia-Luna柱,30×100mm C18；MeOH/水/TFA)和制备型SFC(Chiralpak AD-H柱,30×250mm,5μm；流动相：10％EtOH/CO2；流速：50.0mL/min且保持15min；在220nm进行UV监测)进行纯化，得到两种主产物。非对映异构体-1(359mg):LCMS:条件10,Rt＝1.02min；[M+H]+C15H26NO5分析计算值300.37；实测值300.1。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ5.16(d,J＝8.9Hz,1H),4.57(t,J＝8.2Hz,1H),4.26-4.19(m,2H),3.96-3.94(m,1H),3.75-3.71(m,1H),3.70(s,3H),2.04(宽单峰,1H),1.85-1.62(系列m,6H),1.52-1.44(m,2H),1.41-1.35(m,1H),1.29(t,J＝7.2Hz,3H),1.15(d,J＝6.3Hz,3H)。非对映异构体-2(89mg):LC/MS:条件10,Rt＝1.04min；[M+H]+C15H26NO5分析计算值300.37；实测值30.15。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ5.08(d,J＝8.7Hz,1H),4.26-4.19(m,3H),3.84(s,1H),3.76-3.75(m,1H),3.70(s,3H),3.41-3.47(m,1H),2.27(宽单峰,1H),1.90-1.85(m,2H),1.76-1.72(m,3H),1.66-1.55(m,3H),1.31(t,J＝7.2Hz,3H),1.19(d,J＝6.3Hz,3H)。
Cap 17.1
向Cap 17步骤f(非对映异构体-1；56mg,0.187mmol)在THF(5.6mL)/水(1.5mL)中的溶液中加入氢氧化锂一水合物(24mg,0.561mmol)。将反应混合物搅拌18h，然后浓缩，用水(10mL)稀释并用Et2O洗涤。将水层用1mL 1N HCl酸化，用EtOAc萃取并将有机层用盐水洗涤并干燥(MgSO4)，得到Cap 17.1(49mg)，将其用于下一步而无需进一步纯化。
Cap 17.2
向Cap 17步骤f(非对映异构体-2；75mg,0.25mmol)在THF(7mL)/水(3mL)中的溶液中加入氢氧化锂一水合物(31mg,0.75mmol)。将反应混合物搅拌18h，然后浓缩，用水(10mL)稀释并用Et2O洗涤。将水层用1mL 1N HCl酸化，用EtOAc萃取且将有机层用盐水洗涤且干燥(MgSO4)并真空蒸发，得到Cap 17.2(55mg)，将其用于下一步而无需纯化。
Cap 18
非对映异构体混合物
Cap 18步骤a
在氮气下在-78℃向二异丙基胺(18.36ml,129mmol)在THF(20ml)中的溶液中滴加2.5M正丁基锂在己烷中的溶液(51.5ml,129mmol)。将反应混合物在-78℃搅拌15min，然后使其达到0℃并保持30min。在氮气下在-78℃向3-亚甲基环丁烷甲腈(10g,107mmol)在THF(300ml)中的溶液中滴加上述LDA溶液。将反应混合物搅拌45min，然后滴加碘甲烷(8.02ml,129mmol)。将反应混合物在-78℃保持30min，然后从冷却浴中取出并在～25℃搅拌19h。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液(水溶液,100mL)淬灭，然后用乙醚(3×100mL)萃取。将合并的有机层用水和盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩，得到深色油状物。将产物用于下一步而无需进一步纯化。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.97-4.90(m,2H),3.32-3.27(m,1H),3.27-3.22(m,1H),2.75-2.69(m,1H),2.67(dt,J＝4.1,2.2Hz,1H),1.55(s,3H)。
Cap 18步骤b
将水(108ml,5992mmol)、1,4-二噁烷(339ml,3959mmol)、Cap 18步骤a(11.47g,107mmol)和四氧化锇(4wt.％在水中的溶液)(2.72g,0.428mmol)的混合物在～25℃搅拌5min。历时30min逐份加入高碘酸钠(48.1g,225mmol)。将反应混合物在～25℃搅拌19.5h。将反应混合物用CH2Cl2(150mL)和水(150mL)稀释。过滤混合物并将固体用CH2Cl2(100mL)洗涤。分离滤液并将水层用CH2Cl2(2×100mL)萃取。将合并的有机层用水(50mL)和盐水(50mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物加载到Thomson硅胶柱(用25％乙酸乙酯/己烷洗脱)上，得到Cap 18步骤b，其为浅黄色油状物(9.13g)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ3.79-3.74(m,1H),3.74-3.67(m,1H),3.21-3.16(m,1H),3.16-3.10(m,1H),1.74(s,3H)。
Cap 18步骤c
在0℃冷却浴中在氮气下向Cap 18步骤b(2g,18.33mmol)在CH2Cl2(100mL)中的溶液中先后加入2-(二甲氧基磷酰基)-2-((甲氧基羰基)氨基)乙酸甲酯(7.01g,27.5mmol)和1,1,3,3-四甲基胍(3.23mL,27.5mmol)。将反应混合物从冷却浴中取出并在～25℃在氮气下搅拌23h。将反应混合物用饱和NH4Cl(水溶液,25mL)处理。分离各层并将水层用CH2Cl2(2×50mL)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物加载到Thomson硅胶柱(用25％乙酸乙酯/己烷洗脱)上，得到Cap 18步骤c，其为无色粘性油状物(2.77g)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.61(宽单峰,1H),3.67(s,3H),3.58(s,3H),3.50(dt,J＝17.8,1.6Hz,1H),3.27(dd,J＝17.7,3.4Hz,1H),3.15(dt,J＝17.9,1.7Hz,1H),2.88(dt,J＝17.8,1.7Hz,1H),1.52(s,3H)。
Cap 18
向Cap 18步骤c(0.4083g,1.714mmol)在MeOH(6ml)中的溶液中加入氢氧化锂(0.049g,2.057mmol)在水(3.00ml)中的溶液。将反应混合物在～25℃搅拌6.5h。真空除去所有挥发物组分。将残余物用水(15mL)稀释并用乙酸乙酯(25mL)洗涤。分离各层并将水相用6N HCl酸化至pH～1-2。将产物用乙酸乙酯(3×25mL)萃取。将合并的有机层用盐水(25mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩，得到Cap 18，其为白色泡沫状物(345mg)。产物无需进一步纯化即使用。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.66(宽单峰,1H),8.43(宽单峰,1H),3.57(s,3H),3.49(dd,J＝17.8,3.0Hz,1H),3.24(dd,J＝17.6,3.3Hz,1H),3.19-3.07(m,1H),2.92-2.78(m,1H),1.51(s,3H)。
实施例QC-1.1、QC-1.2和QC-1.3
向4,4’-二(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂二环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)联苯四盐酸盐(50mg,0.084mmol)和Cap-2(外消旋混合物)(41.9mg,0.168mmol)在2mL DMF中的溶液中加入DIEA(0.088ml,0.505mmol)。向所得混合物中加入HATU(64.0mg,0.168mmol)并将混合物在～25℃搅拌2h。然后除去溶剂，得到当用LC(条件3)分析时比例为～1:2:1的3种非对映异构体的粗混合物。然后将混合物通过反相HPLC(柱:Water Sunfire 30×150mm；乙腈/水/NH4OAc)来纯化，得到三种非对映异构体的游离碱(实施例QC-1.1、QC-1.2和QC-1.3)，其为白色固体。实施例QC-1.1(9.1mg)：LC(条件1)：Rt＝1.15min；>95％；
LC/MS：[M+H]+C48H51F4N8O6分析计算值911.39；实测值456.5(M/2+1)；
HRMS:[M+H]+C48H51F4N8O6分析计算值911.3862；实测值911.3869；1H NMR(500MHz,CD3OD)δppm 7.61-7.88(8H,m),7.36(2H,宽单峰),5.09-5.21(2H,m),4.66-4.77(2H,m),3.69(6H,s),2.36-2.62(6H,m),1.86-2.14(16H,m),1.03-1.17(2H,m),0.70-0.84(2H,m)。实施例QC-1.2(24.5mg)：LC(条件1)：Rt＝1.19min；>97％纯。
LC/MS:[M+H]+C48H51F4N8O6分析计算值911.39；实测值456.5(M/2+1)；
HRMS:[M+H]+C48H51F4N8O6分析计算值911.3862；实测值911.3865；1H NMR(500MHz,CD3OD)δppm 7.59-7.89(8H,m),7.36(2H,d,J＝4.88Hz),5.08-5.24(2H,m),4.60-4.76(2H,m),3.69(6H,s),2.36-2.71(6H,m),1.82-2.20(16H,m),1.16-1.25(1H,m),1.03-1.14(1H,m),0.66-0.83(2H,m)。实施例QC-1.3(14.7mg)：LC(条件1)：Rt＝1.22min；>99％纯。
LC/MS:[M+H]+C48H51F4N8O6分析计算值911.39；实测值456.5(M/2+1)；
HRMS:[M+H]+C48H51F4N8O6分析计算值911.3862；实测值911.3864。1H NMR(500MHz,CD3OD)δppm 7.61-7.88(8H,m),7.36(2H,宽单峰),5.09-5.21(2H,m),4.66-4.77(2H,m),3.69(6H,s),2.36-2.62(6H,m),1.86-2.14(16H,m),1.03-1.17(2H,m),0.70-0.84(2H,m)。
实施例QC-2.1-QC-4.3
使用适当的Cap按照针对实施例QC-1所述的程序来制备实施例QC-2.1至QC-3.3。还类似地制备了实施例QC-4.1至QC-4.3，不同的是反相HPLC纯化使用MeOH/水/TFA溶剂系统(柱:WATERS Atlantis OBD 30×100mm 5μ)。尽管当使用Cap-1时仅有一种化合物是所期望的，但是得到3种不同的非对映异构体，这表明在合成Cap-1的过程中可能发生外消旋化。
实施例QC-5.1、QC-5.2和QC-5.3
(涉及非特定立体异构中心的三种非对映异构体)
实施例QC-5步骤a
外消旋混合物
2-((1R,3s,5S)-二环[3.1.0]己-3-基)-2-(叔丁氧基羰基氨基)乙酸(实施例QC-5步骤a)由市售(顺式)-二环[3.1.0]己-3-醇如下制备：首先使用标准光延(Mitsubobu’s)方案将(顺式)-二环[3.1.0]己-3-醇转化成它的(反式)-二环[3.1.0]己-3-醇异构体，然后按照在Cap-2步骤d至Cap-2步骤f中描述的反应顺序加工成2-氨基-2-((1R,3s,5S)-二环[3.1.0]己-3-基)乙酸乙酯。然后将胺保护成其BOC衍生物，然后在标准方案下对乙酯进行水解，得到酸实施例QC-5步骤a。
实施例QC-5步骤b
非对映异构体混合物
向4,4’-二(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂二环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)联苯四盐酸盐(50mg,0.084mmol)和酸实施例QC-5步骤a(43.0mg,0.168mmol)在2mL DMF中的溶液中加入DIEA(0.088ml,0.505mmol)和HATU(64.0mg,0.168mmol)。将混合物在～25℃搅拌2h。然后真空除去溶剂并将粗产物通过反相HPLC(柱:WATERS Atlantis OBD 30×100mm 5μ,MeOH/水/THF)来纯化，得到实施例QC-5步骤b的TFA盐，其为白色固体(97mg)。LC(条件1)：Rt＝1.47min；LC/MS：[M+H]+C54H67N8O6分析计算值923.52；实测值462.8(M/2+1)；1H NMR(500MHz,CD3OD)δppm 7.82-7.91(10H,m),5.08-5.18(2H,m),4.57(1H,d,J＝7.63Hz),4.48(1H,d,J＝8.24Hz),4.06-4.12(1H,m),3.79-3.86(1H,m),3.02(3H,s),2.88(3H,s),2.66-2.75(2H,m),2.43-2.54(2H,m),2.01-2.16(4H,m),1.88-1.97(2H,m),1.68-1.82(4H,m),1.57-1.68(2H,m),1.47(9H,s),1.41(9H,s),1.25-1.36(6H,m),1.16-1.24(1H,m),1.04-1.11(1H,m),0.81-0.93(2H,m),0.29-0.39(2H,m),0.19-0.27(2H,m)。
实施例QC-5步骤c
非对映异构体混合物
向实施例QC-5步骤b(97mg,0.084mmol)在1mL CH2Cl2中的混合物中加入HCl(2mL,4.00mmol)(2N在乙醚中)。将所得混合物在室温搅拌2h。然后除去溶剂，得到实施例QC-5步骤c的盐酸盐，其为黄色固体(73mg)。LC(条件1)：Rt＝0.84min；LC/MS：[M+H]+C44H51N8O2分析计算值723.41；实测值723.6。
实施例QC-5.1、QC-5.2和QC-5.3
向实施例QC-5步骤b的盐酸盐(73mg,0.084mmol)在2mL CH2Cl2中的混合物中加入DIEA(0.117mL,0.672mmol)和氯甲酸甲酯(0.026mL,0.336mmol)。将所得混合物在室温搅拌1h。加入氨(2mL,4.00mmol)(2N在甲醇中)并将所得混合物搅拌2h。然后真空除去溶剂并将粗品通过反相HPLC(柱:Water Sunfire 30×150mm,乙腈/水/NH4OAc)来纯化，得到三种非对映异构体的游离碱(实施例QC-5.1、QC-5.2和QC-5.3)，其为白色至浅黄色固体。实施例QC-5.1(8.5mg)：LC(条件3)：Rt＝2.05min,>95％纯；LC/MS：[M+H]+C48H55N8O6分析计算值839.42；实测值839.7.HRMS:[M+H]+C48H55N8O6分析计算值839.4239；实测值839.4243。1H NMR(500MHz,CD3OD)δppm 7.64-7.87(8H,m),7.37(2H,宽单峰),5.10-5.22(2H,m),4.57-4.72(2H,m),3.68(6H,s),2.38-2.58(4H,m),1.90-2.31(6H,m),1.55-1.87(6H,m),1.20-1.38(6H,m),1.04-1.19(2H,m),0.72-0.85(2H,m),0.28-0.37(2H,m),0.22-0.28(2H,m)。实施例QC-5.2(18mg)：LC(条件3)：Rt＝2.14min；>99％纯；LC/MS：[M+H]+C48H55N8O6分析计算值839.42；实测值839.7；
HRMS:[M+H]+C48H55N8O6分析计算值839.4239；实测值839.4243；1H NMR(500MHz,CD3OD)δppm 7.63-7.86(8H,m),7.37(2H,d),5.11-5.22(2H,m),4.51-4.70(2H,m),3.68(6H,d),2.38-2.59(4H,m),1.90-2.15(6H,m),1.57-1.84(6H,m),1.18-1.38(6H,m),1.03-1.16(2H,m),0.72-0.83(2H,m),0.28-0.39(2H,m),0.22-0.28(2H,m)。实施例QC-5.3(9.1mg)：LC(条件3)：Rt＝2.23min；>95％纯.LC/MS:[M+H]+C48H55N8O6分析计算值839.42；实测值839.7；HRMS:[M+H]+C48H55N8O6分析计算值839.4239；实测值839.4242。1H NMR(500MHz,CD3OD)δppm 7.63-7.93(8H,m),7.36(2H,s),5.17-5.29(2H,m),4.55(2H,d,J＝8.5Hz),3.69(6H,s),2.39-2.64(4H,m),1.92-2.20(6H,m),1.58-1.86(6H,m),1.27-1.45(6H,m),1.17-1.27(2H,m),0.70-0.84(2H,m),0.31-0.45(2H,m),0.20-0.30(2H,m)。
实施例QC-6至QC-7
向实施例QC-2.1(50mg,0.044mmol)在1mL DMF中的混合物中加入NCS(7.03mg,0.053mmol)。将所得混合物在50℃搅拌过夜。然后除去溶剂并将粗产物通过反相HPLC(柱:WATERS Sunfire C18OBD 30×100mm 5μ,MeOH/水/TFA)来纯化，得到实施例QC-6和实施例QC-7的TFA盐，其分别为白色和浅黄色固体。实施例QC-6(20mg)：LC(条件2)：Rt＝1.72min,>99％纯；LC/MS：[M+H]+C48H50ClF4N8O6分析计算值945.35；实测值473.16(M/2+1)；HRMS:[M+H]+C48H50ClF4N8O6分析计算值945.3472；实测值945.3440；1H NMR(500MHz,CD4OD)δppm 7.77-7.92(9H,m),5.06-5.13(1H,m),4.97-5.04(1H,m),4.61-4.70(2H,m),3.78-3.85(1H,m),3.71-3.75(1H,m),3.69(6H,d),2.63-2.74(1H,m),2.39-2.55(5H,m),1.83-2.14(14H,m),1.00-1.12(2H,m),0.81-0.89(1H,m),0.72-0.79(1H,m)。实施例QC-7(19mg)：LC(条件2)：Rt＝2.03min,>96％纯；LC/MS：[M+H]+C48H49Cl2F4N8O6分析计算值979.31；实测值490.17(M/2+1)；HRMS:[M+H]+C48H49Cl2F4N8O6分析计算值979.3083；实测值979.3043；1H NMR(500MHz,CD3OD)δppm7.74-7.88(8H,m),4.97-5.05(2H,m),4.63-4.71(2H,m),3.71-3.78(2H,m),3.69(6H,s),2.39-2.55(6H,m),1.87-2.11(14H,m),1.01-1.11(2H,m),0.73-0.81(2H,m)。
实施例QC-8.1
向4,4’-二(2-((2S,5S)-5-甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-4-基)-1,1’-联苯四盐酸盐(25mg,0.042mmol)和Cap 5.1(20.32mg,0.084mmol)在2mL DMF中的溶液中加入DIEA(0.044mL,0.251mmol)。向所得混合物中加入HATU(31.8mg,0.084mmol)并将混合物在室温搅拌2h。真空除去溶剂。将粗产物通过反相HPLC(柱:WATERS Sunfire C18OBD 30×100mm 5μ,甲醇/水/TFA)来纯化，得到实施例QC-8.1的TFA盐，其为白色固体(32mg,64.3％)。LC(条件1)：Rt＝1.04min；LC/MS：[M+H]+C50H63N8O8分析计算值903.48；实测值903.7；HRMS:[M+H]+C50H63N8O8分析计算值903.4763；实测值903.4753；1H NMR(500MHz,CD3OD)δ8.03-7.78(m,10H),5.16(dd,J＝10.5,7.2Hz,2H),4.84-4.73(m,2H),4.33-4.18(m,2H),3.92-3.78(m,2H),3.74-3.63(m,6H),3.61-3.43(m,2H),2.69-2.47(m,2H),2.43-2.07(m,6H),2.06-1.95(m,2H),1.95-1.74(m,4H),1.56(d,J＝6.4Hz,6H),1.42(m,2H),0.83-0.70(m,2H),0.67-0.49(m,4H),0.45-0.33(m,2H),0.21-0.10(m,2H)。
实施例QC-8.2
实施例QC-8.2的TFA盐如下制备：用Cap 5.2代替Cap 5.1且使用与针对实施例QC-8.1所述相同的程序。LC(条件1)：Rt＝1.01min；LC/MS：[M+H]+C50H63N8O8分析计算值903.48；实测值903.7；
HRMS:[M+H]+C50H63N8O8分析计算值903.4763；实测值903.4761；1H NMR(500MHz,CD3OD)δ8.05-7.78(m,10H),5.16(dd,J＝10.4,7.0Hz,2H),4.83-4.75(m,2H),4.36-4.18(m,2H),3.92-3.75(m,2H),3.74-3.61(m,6H),3.57-3.37(m,2H),2.72-2.47(m,2H),2.44-2.24(m,4H),2.24-2.07(m,2H),1.99(m,2H),1.95-1.77(m,2H),1.58(d,J＝6.4Hz,6H),1.52-1.40(m,2H),1.39-1.19(m,4H),0.76(m,2H),0.67-0.44(m,4H),0.38(m,2H)。
实施例QC-9至QC-16和实施例OL1至OL10如下制备：使用与针对实施例QC-1.1所述相同的程序，将相应的母核(参见表格中的参考文献)与Cap5.1或Cap 5.2组合且将产物用反相HPLC条件纯化并以TFA盐的形式得到。实施例OL10由适当的母核和Cap 6如下制备：使用标准EDC/CH2Cl2偶联条件，将产物用反相HPLC条件纯化并以游离碱的形式得到。实施例OL11至OL12由适当的母核和Cap 7如下制备：使用标准HATU/DIEA/DMF偶联条件，将产物用反相HPLC条件纯化并以TFA盐的形式得到。
*实施例QC14的倒数第二个前体如下制备：由1,1’-(1,4-亚苯基)二(2-氨基乙酮)二盐酸盐(制备程序参见TL,1986,第5759页)和Boc-L-脯氨酸开始，按照在WO2008/021927中描述的三步方案(酰胺偶联、将酮酰胺环化成咪唑和Boc脱保护)。
实施例QC-17.1
实施例QC-17.1步骤a
在室温向4-溴-2-甲基苯甲酸(10g,46.5mmol)在DMF(150mL)中的溶液中先后加入N,O-二甲基羟胺盐酸盐(5.44g,55.8mmol)和HOBT(8.55g,55.8mmol)。然后先后加入EDC(10.7g,55.8mmol)和DIEA(24.4mL,140mmol)并将反应混合物在室温搅拌12h。然后将反应混合物用EtOAc(150mL)稀释，用水(3×250mL)和盐水(150mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到粗QC-17.1步骤a(9.5g)，将其按原样用于下一步。1H NMR(CDCl3,δ＝7.26ppm,400MHz):δ7.37(d,J＝1.6Hz,1H),7.34(dd,J＝8.0,1.6Hz,1H),7.14(d,J＝8.0Hz,1H),3.47(s,3H),3.30(s,3H),2.31(s,3H)。
LC/MS:[M+H]+C10H13 81BrNO2分析计算值260.01；实测值260.0。
实施例QC-17.1步骤b
将QC-17.1步骤a(9.5g,36.8mmol)溶解在乙醚(150mL)中并冷却至0℃。然后历时10min滴加甲基碘化镁(3.0M在乙醚中,24.54mL,73.6mmol)。将反应混合物在40℃搅拌6h，然后使其达到室温并搅拌12h。将反应混合物冷却至0℃，先后用冰和1.5N HCl(50mL)淬灭。将有机层分离并将水层用甲基叔丁基醚(2×100mL)萃取，用Na2SO4干燥并减压浓缩。将粗品通过快速色谱(硅胶,60-120,EtOAc:石油醚,2:98)来纯化，得到QC-17.1步骤b(6.25g)，其为淡黄色液体。1H NMR(CDCl3,δ＝7.26ppm,400MHz):δ7.55(d,J＝8.0Hz,1H),7.41(s,1H),7.40(d,J＝8.0Hz,1H),2.55(s,3H),2.50(s,3H)。
实施例QC-17.1步骤c
将4-乙酰基苯基硼酸(5.39g,32.9mmol)加到含有QC-17.1步骤b(7.0g,32.9mmol)在MeOH(75.0mL)中的溶液的密封管中并将反应混合物用氮气吹扫10min。然后先后加入K2CO3(9.08g,65.7mmol)和Pd(Ph3P)4(1.139g,0.986mmol)并将反应混合物再用氮气吹扫10min。将反应混合物加热至75℃并保持12h。然后减压浓缩反应混合物且将残余物用EtOAc(100mL)稀释并用水(2×100mL)和盐水(50mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过Combiflash(Silicycle,SiO2,10-15％EtOAc/石油醚)来纯化，得到QC-17.1步骤c(6.5g)，其为白色固体。1H NMR(CDCl3,δ＝7.26ppm,400MHz):δ8.06-8.04(m,2H),7.81(d,J＝8.0Hz,1H),7.72-7.70(m,2H),7.54-7.49(m,2H),2.65(s,3H),2.63(s,6H)。
实施例QC-17.1步骤d
在10℃将溴(1.12mL,21.8mmol)(在10mL二噁烷中稀释)缓慢(历时10min)加到QC-17.1步骤c(2.75g,10.90mmol)在二噁烷(50mL)中的溶液中并将混合物在室温搅拌2h。将反应混合物用10％NaHCO3(25mL)淬灭并用DCM(50mL)萃取。将有机相用Na2SO4干燥并减压浓缩，得到粗QC-17.1步骤d(5.0g)，将其按原样用于下一步而无需纯化。
LC/MS:[M+H]+C17H15 79/81Br2O2分析计算值410.94；实测值411.0。
实施例QC-17.1步骤e
在0℃向粗QC-17.1步骤d(5.1g,12mmol)在乙腈(75mL)中的溶液中先后加入QC-17.1步骤a(5.70g,24.9mmol)和DIEA(8.69mL,49.7mmol)。10min后，将温度升至室温并搅拌2h。然后将反应混合物用EtOAc(100mL)稀释且用10％NaHCO3(50mL)和盐水(50mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过Combiflash(Silicycle,SiO2,25-30％EtOAc/石油醚)来纯化，得到QC-17.1步骤e(5.8g)，其为淡黄色油状物。1H NMR(CDCl3,δ＝7.26ppm,400MHz):δ8.00(app bd,2H),7.71(app d,3H),7.53-7.51(m,2H),5.61-5.34(m,2H),5.29-5.04(m,2H),4.51-4.36(m,2H),4.09-3.91(m,2H),2.59(s,3H),2.35-2.21(m,4H),2.15-2.04(m,2H),1.80-1.63(m,2H),1.47/1.44(s,18H),1.35-1.27(m,6H)。LC/MS:[M-H]-C39H49N2O10分析计算值705.35；实测值705.30。
实施例QC-17.1步骤f
向QC-17.1步骤e(5.6g,7.92mmol)在二甲苯(75mL)中的溶液中加入NH4OAc(12.21g,158mmol)并将反应混合物用氮气吹扫10min。在130℃加热18h后，将反应混合物冷却至室温并减压除去挥发物组分。然后将反应混合物用EtOAc(100mL)稀释且用10％NaHCO3(50mL)和盐水(50mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过Combiflash(RediSep,C-18柱,30-40％乙腈:10mM碳酸氢铵)来纯化，得到QC-17.1步骤f(2.3g)，其为淡黄色固体。1H NMR(DMSO-d6,δ＝2.50ppm,400MHz):δ12.27/12.0/11.77/11.71(s,2H),7.92-7.63(m,5H),7.58-7.47(m,3H),7.24(宽单峰,1H),4.90-4.75(m,2H),3.92-3.84(m,2H),2.54(s,3H),2.20-2.01(m,6H),1.73-1.65(m,2H),1.48-1.12(m,24H)。LC/MS:[M-H]-C39H49N6O4分析计算值665.39；实测值665.4。
实施例QC-17.1步骤g
向QC-17.1步骤f(1.55g,2.32mmol)在MeOH(10mL)中的溶液中加入HCl/MeOH(4N,58.1mL)并在室温搅拌2h。真空除去挥发物组分并将残余物与无水DCM(3×25mL)一起共蒸发。将所得固体暴露于高真空，得到QC-17.1步骤e的盐酸盐(1.3g)，其为淡黄色固体。1HNMR(MeOD,δ＝3.34ppm,400MHz):δ8.06(宽单峰,1H),7.98(d,J＝8.4Hz,2H),7.90(d,J＝8.4Hz,2H),7.86(宽单峰,1H),7.78(宽单峰,1H),7.74(d,J＝8.4Hz,1H),7.71(d,J＝8.4Hz,1H),5.27-5.20(m,2H),4.04-4.00(m,2H),2.80-2.67(m,4H),2.59(s,3H),2.55-2.46(m,2H),2.15-2.06(m,2H),1.60(d,J＝6.4,6H)。LC/MS:[[M+H]+C29H35N6分析计算值467.28；实测值467.2。
实施例QC-17.1
将HATU(37.2mg,0.098mmol)加到Cap 5.2(26.2mg,0.108mmol)和实施例QC-17.1步骤g(30mg,0.049mmol)在DMF(2mL)和DIEA(0.051ml,0.294mmol)中的搅拌溶液中。将反应混合物在室温搅拌2h并真空浓缩。将残余物用MeOH稀释，过滤并通过制备型HPLC(WatersSunfire C18OBD 30×100mm 5μ；MeOH/水/TFA缓冲液)来纯化，得到实施例QC-17.1的TFA盐(34mg)，其为灰白色固体。LC/MS(条件1)：Rt＝1.743min；LC/MS：[M+H]+C51H65N8O8分析计算值917.12；实测值917.9；HPLC(条件6)：Rt＝26.27；97％同质性。1H NMR(500MHz,CD3OD)δ8.05-7.92(m,1H),7.90-7.83(m,4H),7.75(s,1H),7.72-7.65(m,1H),7.63(s,1H),7.56(d,J＝8.2Hz,1H),5.25-5.10(m,2H),4.84-4.78(m,2H),4.27-4.15(m,2H),3.79(d,J＝7.9Hz,2H),3.65(s,4H),3.49-3.38(m,2H),2.59-2.51(m,2H),2.47(s,3H),2.42-2.33(m,2H),2.33-2.23(m,2H),2.16(d,J＝17.7Hz,2H),2.04-1.95(m,2H),1.82(t,J＝12.2Hz,2H),1.67-1.52(m,6H),1.51-1.38(m,2H),1.36-1.21(m,5H),0.83-0.72(m,2H),0.63-0.45(m,4H),0.43-0.30(m,2H)。
实施例QC-17.2
实施例QC-17.2的TFA盐如下制备：用Cap 5.1代替Cap 5.2并使用与针对实施例QC-17.1所述相同的程序。LC/MS(条件1)：Rt＝1.710min；LC/MS：[M+H]+C51H65N8O8分析计算值917.12；实测值917.6；HPLC(条件6)：Rt＝26.05；98％同质性。1H NMR(500MHz,CD3OD)δ8.01-7.95(m,1H),7.90(s,1H),7.88-7.80(m,5H),7.75(s,1H),7.72-7.66(m,2H),7.63(s,1H),7.54(d,J＝7.9Hz,1H),5.16(dd,J＝10.1,7.3Hz,2H),4.82-4.74(m,2H),4.22(d,J＝8.9Hz,2H),3.89-3.81(m,2H),3.67(s,6H),3.53-3.45(m,2H),2.58-2.50(m,3H),2.47(s,3H),2.42-2.33(m,3H),2.27(宽单峰,2H),2.15(dd,J＝19.5,10.1Hz,2H),1.98(dd,J＝11.7,5.3Hz,2H),1.89(t,J＝12.4Hz,2H),1.79(d,J＝12.2Hz,2H),1.55(t,J＝6.7Hz,6H),1.46-1.38(m,2H),1.35-1.27(m,3H),0.76(dt,J＝11.1,5.3Hz,2H),0.69-0.50(m,5H),0.38(d,J＝5.5Hz,2H),0.25-0.12(m,2H)。
实施例QC-18.1
实施例QC-18.1步骤a
在冰/水浴中在0℃向1-(4-溴-2-氟苯基)乙酮(5.0g,23mmol)在二噁烷(150mL)和乙醚(150mL)中的溶液中滴加溴(1.18mL,23.0mmol)。将反应混合物搅拌1h，温热至室温并搅拌16h。将混合物在EtOAc(50mL)和饱和NaHCO3(50mL)之间分配且将有机层用水洗涤并用Na2SO4干燥。真空蒸发挥发物组分并将固体真空干燥过夜，得到实施例18.1步骤a(6.94g)，其为白色固体。1H NMR(DMSO-d6,δ＝2.5ppm,400MHz):7.87-7.79(m,2H),7.62-7.60(m,1H),4.84(s,2H)。
实施例QC-18.1步骤b
向实施例18.1步骤a(2.58g,8.72mmol)和(2S,5S)-1-(叔丁氧基羰基)-5-甲基吡咯烷-2-甲酸(2.00g,8.72mmol)在乙腈(50mL)中的溶液中加入DIEA(2.285mL,13.08mmol)并将混合物在室温搅拌64h。真空除去溶剂并将残余物在EtOAc(40mL)和水(30mL)之间分配。将有机层用饱和NaHCO3和盐水洗涤，用Na2SO4干燥并真空蒸发，得到实施例18.1步骤b(3.8g)，其为黄色固体。1H NMR(CDCl3,400MHz):7.87(m,1H),7.44(m,2H),5.42-5.09(m,2H),4.53-4.40(m,1H),4.10-3.95(m,1H),2.31(m,2H),2.09(m,1H),1.75(m,1H),1.49-1.46(两个单峰,9H),1.33(m,3H)。LC/MS:[M+Na]+C19H24BrNNaO5分析计算值466.06；实测值466.03。
实施例QC-18.1步骤c
向含有实施例18.1步骤b(3.8g,8.6mmol)在二甲苯(40mL)中的溶液的压力管中加入乙酸铵(6.59g,86mmol)且将反应容器盖上并在140℃加热6h。真空蒸发挥发物组分并将残余物在DCM(80mL)和水(50mL)之间分配。将有机层分离且用饱和NaHCO3洗涤并用Na2SO4干燥。真空除去溶剂，得到红色油状物，将其通过快速色谱(0-40％EtOAc/己烷)来纯化，得到实施例18.1步骤c(2.3g)，其为棕色固体。1H NMR(DMSO-d6,δ＝2.5ppm,400MHz):7.98(app.t,J＝8.4Hz,1H),7.65(dd,J＝11,1.9Hz,1H),7.45(dd,J＝8.3,2,1H),7.36(m,1H),4.85(m,1H),3.90(m,1H),2.15-2.07(m,3H),1.73(m,1H),1.40-1.17(m,12H)。LC/MS:[M+Na]+C19H23 79BrFN3NaO2分析计算值446.09；实测值446.00。
实施例QC-18.1步骤d
向2-溴-1-(4-溴苯基)乙酮(2.425g,8.72mmol)和(2S,5S)-1-(叔丁氧基羰基)-5-甲基吡咯烷-2-甲酸(2g,8.72mmol)在乙腈(50mL)中的溶液中加入DIEA(1.524mL,8.72mmol)并将混合物在室温搅拌16h。真空除去溶剂并将残余物在EtOAc(40mL)和水(30mL)之间分配。将有机相用饱和NaHCO3和盐水洗涤并用Na2SO4干燥。真空除去挥发物组分，得到实施例18.1步骤d(1.74g)，其为浅黄色固体且无需进一步纯化即使用。1H NMR(DMSO-d6,δ＝2.5ppm,400MHz):7.95-7.90(m,2H),7.81(m,1H),7.79(m,1H),5.63-5.44(m,2H),4.36(m,1H),3.99(m,1H),2.27(m,1H),2.09(m,2H),1.63(m,1H),1.41-1.37(两个单峰,9H),1.19(m,3H)。LC/MS:[M+Na]+C19H24BrNNaO5分析计算值448.07；实测值448.06。
实施例QC-18.1步骤e
向含有实施例18.1步骤d(3.4g,8.0mmol)在二甲苯(40mL)中的溶液的压力管中加入乙酸铵(6.15g,80mmol)并将混合物在140℃加热6h。真空除去挥发物组分，将残余物小心地在DCM(60mL)和饱和NaHCO3(30mL)之间分配且将有机层分离并用Na2SO4干燥。真空除去溶剂，得到红色固体，将其通过快速色谱(5-50％EtOAc/己烷)来纯化，得到实施例18.1步骤e(2.65g)，其为浅棕色固体。1H NMR(DMSO-d6,δ＝2.5ppm,400MHz):7.73-7.71(m,2H),7.59-7.50(m,3H),4.80(m,1H),3.89(m,1H),2.10(m,3H),1.71(m,1H),1.40-1.17(m,12H)。LC/MS:[M+Na]+C19H24BrN3NaO2分析计算值428.09；实测值428.07。
实施例QC-18.1步骤f
向实施例18.1步骤e(2.64g,6.50mmol)和4,4,4’,4’,5,5,5’,5’-八甲基-2,2’-二(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷)(3.30g,13.0mmol)在二噁烷(40mL)中的溶液中加入乙酸钾(1.594g,16.24mmol)。将混合物通过鼓泡氮气10min来脱气，加入Pd(Ph3P)4(0.375g,0.325mmol)并继续再脱气15min。然后将反应容器密封并在80℃加热16h。真空蒸发挥发物组分并将残余物在DCM(100mL)和半饱和NaHCO3(50mL)之间分配。将有机层分离，用Na2SO4干燥并真空蒸发，得到粗红色油状物，将其通过快速色谱(10-90％EtOAc/己烷)来纯化。得到呈黄色泡沫状物形式的实施例18.1步骤f(2.7g)。1H NMR(DMSO-d6,δ＝2.5ppm,400MHz):7.77(d,J＝8.3Hz,2H),7.64-7.53(m,3H),4.80(m,1H),3.88(m,1H),2.09(m,3H),1.73(m,1H),1.43-1.08(m,24H).LC/MS:[M+H]+C25H37BrBN3O4分析计算值454.29；实测值454.23。
实施例QC-18.1步骤g
向含有实施例18.1步骤f(2.70g,5.96mmol)和实施例4步骤c(2.30g,5.42mmol)在DME(70mL)中的溶液的压力管中加入水(17.50mL)和碳酸氢钠(2.27g,27.1mmol)。将混合物通过鼓泡氮气15min来脱气且加入Pd(Ph3P)4(0.313g,0.271mmol)并继续再脱气15min。将反应容器密封并在80℃加热15h。真空蒸发溶剂并将残余物在DCM(100mL)和水(50mL)之间分配。将有机层分离，用Na2SO4干燥且真空除去挥发物组分并将所得粗红色固体通过快速色谱(30-100％EtOAc/己烷)来纯化。得到呈黄色固体形式的实施例18.1步骤g(1.95g)。1H NMR(DMSO-d6,δ＝2.5ppm,400MHz):8.10(m,1H),7.87-7.71(m,4H),7.61-7.55(m,3H),7.37(m,1H),4.85(m,2H),3.91(m,2H),2.11(m,6H),1.76(m,2H),1.42-1.08(m,24H)。LC/MS:[M+H]+C35H48FN6O4分析计算值671.37；实测值671.35。
实施例QC-18.1步骤h
向实施例18.1步骤g(1.95g,2.91mmol)在二噁烷(10mL)中的混悬液中加入4N HCl在二噁烷中的溶液(9.72mL,320mmol)并将混合物在室温搅拌6h。加入甲醇(1mL)并继续搅拌1h。真空除去挥发物组分并将残余物真空干燥过夜。得到实施例18.1步骤h的盐酸盐(1.7g)，其为黄色固体。1H NMR(DMSO-d6),δ＝2.5ppm,400MHz):10.34/10.29/9.43/9.08(四个宽单峰,～4H),8.16(t,J＝8.3Hz,1H),8.10(宽单峰,1H),8.00(d,J＝8.3Hz,2H),7.92(d,J＝8.3Hz,2H),7.78-7.72(m,3H),4.99-4.89(m,2H),3.80(m,2H),2.53-2.42(m,4H),2.25(m,2H),1.87(m,2H),1.44(d,J＝6.5,3H),1.43(d,J＝6.5,3H)。LC/MS:[M+H]+C28H32FN6分析计算值471.27；实测值471.17。
实施例QC-18.1
将HATU(37.0mg,0.097mmol)加到Cap 5.2(26.0mg,0.107mmol)和实施例QC-18.1步骤f(30mg,0.049mmol)在DMF(2mL)和DIEA(0.051ml,0.294mmol)中的搅拌溶液中。将反应混合物在室温搅拌2h并真空浓缩。将残余物用MeOH稀释，过滤并通过制备型HPLC(WatersSunfire C18OBD 30×100mm 5μ；MeOH/水/TFA缓冲液)来纯化，得到实施例QC-17.1的TFA盐(34mg)，其为灰白色固体。LC/MS(条件1)：Rt＝1.77min；LC/MS：[M+H]+C50H62FN8O8分析计算值921.47；实测值921.11；HPLC(条件6)：Rt＝26.39；99％同质性。1H NMR(500MHz,CD3OD)δ8.13-7.98(m,1H),7.95-7.84(m,5H),7.82(s,1H),7.75-7.67(m,2H),5.24-5.12(m,2H),4.82-4.76(m,2H),4.28-4.17(m,2H),3.87-3.75(m,2H),3.72-3.61(m,6H),3.42(t,J＝11.6Hz,2H),2.52(d,J＝3.4Hz,2H),2.44-2.23(m,4H),2.18-2.08(m,2H),2.03-1.94(m,2H),1.82(t,J＝12.2Hz,2H),1.58(d,J＝6.7Hz,6H),1.47(td,J＝12.1,8.2Hz,2H),1.33-1.18(m,5H),0.84-0.74(m,2H),0.57(宽单峰,2H),0.50(宽单峰,2H),0.37(d,J＝4.0Hz,2H)。
实施例QC-18.2
实施例QC-18.2的TFA盐如下制备：用Cap 5.1代替Cap 5.2且使用与针对实施例QC-18.1所述相同的程序。LC/MS(条件1)：Rt＝1.75min；LC/MS：[M+H]+C50H62FN8O8分析计算值921.47；实测值921.25；HPLC(条件6)：Rt＝26.02min；98％同质性。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.96(d,J＝9.3Hz,1H),7.92-7.80(m,6H),7.79-7.64(m,4H),5.26-5.12(m,2H),4.22(d,J＝6.5Hz,3H),3.84(d,J＝7.8Hz,3H),3.73-3.64(m,7H),3.48(t,J＝11.8Hz,3H),2.56-2.48(m,2H),2.45-2.23(m,5H),2.18-2.09(m,2H),2.04-1.94(m,3H),1.94-1.74(m,5H),1.55(d,J＝6.3Hz,6H),1.47-1.35(m,3H),1.29(宽单峰,4H),1.03-0.84(m,3H),0.81-0.70(m,3H),0.63(t,J＝13.6Hz,3H),0.54(d,J＝4.8Hz,2H),0.38(d,J＝5.3Hz,2H),0.24-0.08(m,2H)。
实施例QC-19
实施例QC-19步骤a
按照在Tetrahedon Letters,2003,3203-3205中描述的程序由(S)-5-氧代吡咯烷-1,2-二甲酸1-叔丁基酯·2-甲基酯制备呈非对映异构体混合物形式的上述酯。
实施例QC-19步骤b
历时10min向冷却的(-50℃)实施例QC-19步骤a(4.75g,18.5mmol)在甲苯(45mL)中的溶液中滴加Superhydride(19.20mL 1M/THF,19.20mmol)。加入许尼希碱(13.6mL,78mmol)并搅拌10min；加入呈固体形式的DMAP(0.122g,0.997mmol)，搅拌15min；并历时15min滴加三氟乙酸酐(2.98mL,21.1mmol)，移开冷却浴并继续搅拌4小时同时将其温热至室温。将反应混合物用水(50mL)和饱和NaCl(30mL)洗涤并将有机相真空浓缩。将所得粗品用快速色谱(8-60％EtOAc/己烷)纯化，得到实施例QC-19步骤b，其为黄色油状物(2.85g)。1H NMR(CDCl3,400MHz):6.36(s,0.5H),6.25(s,0.5H),4.70-4.57(m,1H),3.78(s,3H),2.96(m,1H),2.54(m,1H),1.70(s,3H),1.50(s,4.5H),1.44(s,4.5H)。
实施例QC-19步骤c
历时20min将二乙基锌(1.1M在甲苯中,59.1mL,65.0mmol)滴加到冷却的(-23℃)实施例QC-19步骤b(5.23g,21.7mmol)在甲苯(60mL)中的溶液中并搅拌10min。历时10min滴加氯碘甲烷(9.44mL,130mmol)并将反应混合物在-21℃搅拌16h。将饱和NaHCO3(60mL)加到反应混合物中，移开冷却浴并将混合物搅拌10min。然后将其过滤并将滤饼用甲苯(50mL)洗涤。对滤液进行分配并将有机层用Na2SO4干燥并真空浓缩。将所得粗品用快速色谱(2-10％EtOAc/己烷)纯化，得到实施例QC-19步骤c.1(第一洗脱物；无色油状物；2.88g)和实施例QC-19步骤c.2(第二洗脱物；无色油状物；1.01g)。相对立体化学归属基于NOE研究来进行。实施例QC-19步骤c.1:1H NMR(CDCl3,400MHz):4.65-4.52(m,1H),3.72(s,3H),3.28-3.17(m,1H),2.44-2.32(m,1H),2.16-2.10(m,1H),1.51-1.42(两个单峰,9H),1.24(s,3H),1.07(m,1H),0.69-0.60(m,1H)。实施例QC-19步骤c.2:1H NMR(CDCl3,400MHz):4.0(m,1H),3.76(s,3H),3.32-3.16(m,1H),2.43(m,1H),2.01(m,1H),1.44(s,9H),1.35(s,3H),0.76-0.66(m,2H)。
实施例QC-19步骤d
向实施例QC-19步骤c.1(2.88g,11.3mmol)在乙醇(20mL)中的溶液中加入LiOH(0.324g,13.5mmol)在水(10.00mL)中的溶液并将反应混合物在室温搅拌6h。真空除去大部分挥发物组分并将残余物在水(20mL)和乙醚(20mL)之间分配。将水层在冰/水浴中冷却，用1N HCl酸化至pH为2并用EtOAc(30mL,4×)萃取。将合并的有机相用Na2SO4干燥并真空蒸发，得到实施例QC-19步骤d.1，其为粘性固体(2.55g)。1H NMR(CDCl3,400MHz):4.64(m,1H),3.25(appt s,1H),2.70-2.40(m,1H),2.14(m,1H),1.54-1.44(m,9H),1.27(s,3H),1.10-0.80(m,1H),0.67(m,1H)。实施例QC-19步骤d.2由实施例QC-19步骤c.2类似地制备。1H NMR(CDCl3,400MHz):4.13(明显宽单峰,1H),3.06(明显宽单峰,1H),2.55/2.41(重叠明显宽单峰,2H),1.51(s,9H),1.27(s,3H),0.76(app t,J＝5.6Hz,1H),0.60(明显宽单峰,1H)。
实施例QC-19步骤e
向实施例QC-19步骤d.2(1.09g,4.52mmol)和1,1’-(联苯-4,4’-二基)二(2-溴乙酮)(0.869g,2.19mmol)在乙腈(40mL)中的混悬液中加入DIEA(0.789mL,4.52mmol)并将混合物在室温搅拌4h。真空除去挥发物组分并将残余物在EtOAc(70mL)和水(50mL)之间分配。将有机层用饱和NaHCO3(50mL)洗涤，用Na2SO4干燥，真空蒸发并真空干燥，得到实施例QC-19步骤e(1.54g)，其为白色泡沫状物。1H NMR(DMSO-d6,δ＝2.5ppm,400MHz):8.13(d,J＝8.3Hz,4H),7.99(d,J＝8.5Hz,4H),5.70-5.54(m,4H),4.17(m,2H),3.13-3.11(m,2H),2.58-2.46(m,2H),2.19(m,2H),1.42-1.37(两个单峰,18H),1.24(s,6H),0.76-0.70(m,4H)。LC/MS:[M+Na]+C40H48N2NaO10分析计算值739.32；实测值739.52。
实施例QC-19步骤f
向含有实施例QC-19步骤e(1.54g,2.15mmol)在二甲苯(40mL)中的溶液的压力管中加入乙酸铵(1.656g,21.48mmol)且将容器盖上并在140℃加热5h。真空除去挥发物组分并将残余物小心地在DCM(50mL)和水(50mL)之间分配同时加入足够的饱和NaHCO3溶液以在分配结束时使水相为中性或碱性。将有机层用Na2SO4干燥，真空蒸发并将所得粗品通过快速色谱(10-100％EtOAc/己烷)来纯化，得到实施例QC-19步骤f(0.65g)，其为棕色固体。1HNMR(DMSO-d6,δ＝2.5ppm,400MHz):7.84-7.65(m,8H),7.55-7.54(m,1.7H),7.32-7.30(m,0.3H),4.60(m,2H),3.20(m,2H),2.48-2.43(m,2H),2.12(m,2H),1.45-1.07(m,24H),0.77(m,2H),0.69(m,2H)。LC/MS:[M+H]+C40H49N6O4分析计算值677.38；实测值677.45。
实施例QC-19步骤g
向实施例QC-19步骤f(0.65g,0.960mmol)在二噁烷(5mL)中的溶液中加入4N HCl在二噁烷中的溶液(5.84mL,192mmol)并将混合物在室温搅拌6h。真空除去挥发物组分并真空干燥过夜，得到实施例QC-19步骤g的盐酸盐(0.6g)，其为棕色固体。1H NMR(DMSO-d6,δ＝2.5ppm,400MHz):10.5-10(宽单峰,～3.2H),7.99(宽单峰,2H),7.95(d,J＝8.5,4H),7.85(d,J＝8.5Hz,4H),4.76(m,2H),3.18(m,2H),2.61-2.46(m,4H；与溶剂信号重叠),1.35(s,6H),1.30(m,2H),0.82(app br t,J＝7.1,2H)。LC/MS:[M+H]+C30H33N6分析计算值477.28；实测值477.22。
实施例QC-19
将HATU(37.0mg,0.097mmol)加到Cap 5.2(23.5mg,0.096mmol)和实施例QC-19步骤g(30mg,0.048mmol)在DMF(2mL)和IDEA(0.051ml,0.294mmol)中的搅拌溶液中。将反应混合物在室温搅拌2h并真空浓缩。将残余物用MeOH稀释，过滤并通过制备型HPLC(WatersSunfire C18OBD 30×100mm 5μ；MeOH/水/TFA缓冲液)来纯化，得到实施例QC-191的TFA盐(31mg)，其为灰白色固体。LC/MS(条件1)：Rt＝1.72min；LC/MS：[M+H]+C52H63N8O8分析计算值927.48；实测值927.05；HPLC(条件6)：Rt＝26.32；100％同质性。1H NMR(500MHz,CD3OD)δ7.96-7.74(m,10H),5.02(t,J＝8.5Hz,2H),4.56(d,J＝7.9Hz,2H),3.82(d,J＝10.7Hz,2H),3.66(s,5H),3.60(d,J＝3.4Hz,2H),3.54-3.44(m,2H),2.77(dd,J＝13.3,9.3Hz,2H),2.32-2.15(m,4H),1.88(t,J＝12.5Hz,2H),1.53(宽单峰,4H),1.41(s,6H),1.11(d,J＝11.9Hz,2H),1.00(d,J＝5.5Hz,2H),0.95(d,J＝5.5Hz,2H),0.76(dt,J＝10.8,5.5Hz,2H),0.64-0.58(m,2H),0.52-0.45(m,2H),0.42-0.32(m,2H)。
实施例1.1和1.2
按照针对实施例QC-8.1所述的程序由Cap 8.2制备实施例1.1的TFA盐。LC(条件1)：Rt＝1.15min；LC/MS：[M+H]+C50H63N8O8分析计算值903.48；实测值903.50；HRMS:[M+H]+C50H63N8O8分析计算值903.4763；实测值903.4755；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.89(宽单峰,8H),7.73(d,J＝7.9Hz,2H),5.02(t,J＝8.5Hz,2H),4.71-4.61(m,2H),4.11(t,J＝8.7Hz,2H),3.78-3.67(m,3H),3.55(s,6H),3.24(t,J＝10.5Hz,2H),2.36(宽单峰,2H),2.30-2.06(m,4H),1.98(d,J＝9.8Hz,2H),1.89-1.72(m,3H),1.49(d,J＝6.4Hz,6H),1.23(d,J＝5.8Hz,1H),1.09(d,J＝13.4Hz,2H),0.68(dt,J＝10.6,5.2Hz,2H),0.56-0.40(m,4H),0.36-0.27(m,2H)。
按照针对实施例QC-8.1所述的程序由Cap 8.1制备实施例1.2的TFA盐。LC(条件1)：Rt＝1.19min；LC/MS：[M+H]+C50H63N8O8分析计算值903.48；实测值903.50；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.02-7.87(m,8H),7.71(d,J＝8.5Hz,2H),5.09-4.97(m,2H),4.62(t,J＝6.7Hz,2H),4.30(t,J＝9.0Hz,2H),3.56(s,6H),3.38(d,J＝8.9Hz,2H),3.17(dd,J＝10.8,8.1Hz,2H),2.36(宽单峰,2H),2.29-2.08(m,4H),1.99(d,J＝3.4Hz,2H),1.86-1.75(m,3H),1.54(d,J＝9.2Hz,2H),1.47(d,J＝6.7Hz,6H),1.42(宽单峰,2H),1.26(d,J＝6.1Hz,1H),0.68-0.59(m,2H),0.57-0.48(m,2H),0.45-0.31(m,4H)。
实施例2.1-2.4
将HATU(24.38mg,0.064mmol)加到4,4’-二(2-((2S,5S)-5-甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)-1,1’-联苯四盐酸盐(18.3mg,0.031mmol)和Cap 9.1(16.5mg,0.064mmol)在DMF(0.8mL)和DIEA(0.037mL,0.21mmol)中的搅拌溶液中。将反应混合物用氮气吹扫，密封，然后在室温搅拌2h。将反应混合物在氮气气流下部分浓缩，然后通过制备型HPLC(具有TFA缓冲剂的ACN/水)来纯化，得到实施例2.1的TFA盐，其为灰白色固体(23.1mg)。LC-MS保留时间2.205min；1/2m/z 466.55(MH+)。在配备有Phenomenex-Luna 3μC18 2.0×50mm柱且使用检测波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器的Shimadzu LC-10AS液相色谱仪上记录LC数据。使用以下洗脱条件：流速为0.8mL/min，梯度为100％溶剂A/0％溶剂B至0％溶剂A/100％溶剂B，梯度时间为4min，保持时间为1min，分析时间为5min，其中溶剂A为10％乙腈/90％H2O/0.1％三氟乙酸且溶剂B为10％H2O/90％乙腈/0.1％三氟乙酸。使用针对LC的Micromass Platform(电喷雾模式)来确定MS数据。
除非另有说明，以与针对实施例2.1所述程序类似的方式制备并表征实施例2.2-2.4的TFA盐。
实施例# 起始酸 保留时间 1/2m/z(MH+)
实施例2.2 Cap 9.2 2.183 466.55
实施例2.3 Cap 9.3 1.145* 466.55
实施例2.4 Cap 9.4 1.183* 466.55
*梯度时间为2min，保持时间为1min，分析时间为3min。
实施例3.1-3.4
将HATU(22.8mg,0.060mmol)加到4,4’-二(2-((2S,5S)-5-甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)-1,1’-联苯四盐酸盐(17.1mg,0.029mmol)和Cap 10.1(16.3mg,0.060mmol)在DMF(0.8mL)和DIEA(0.035mL,0.200mmol)中的澄清搅拌溶液中。将反应混合物用氮气吹扫，密封，然后在室温搅拌2h。将反应混合物在氮气气流下部分浓缩，然后通过制备型HPLC(具有TFA缓冲剂的ACN/水)来纯化，得到实施例3.1的TFA盐(23.4mg)，其为白色固体。LC-MS保留时间2.425min；1/2m/z 480.55(MH+)。在配备有Phenomenex-Luna 3μC18 2.0×50mm柱且使用检测波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器的Shimadzu LC-10AS液相色谱仪上记录LC数据。使用以下洗脱条件：流速为0.8mL/min，梯度为100％溶剂A/0％溶剂B至0％溶剂A/100％溶剂B，梯度时间为4min，保持时间为1min，分析时间为5min，其中溶剂A为10％乙腈/90％H2O/0.1％三氟乙酸且溶剂B为10％H2O/90％乙腈/0.1％三氟乙酸。使用针对LC的Micromass Platform(电喷雾模式)来确定MS数据。1H NMR(400MHz,MeOH-d4)δ7.96-7.83(m,10H),5.32(t,J＝8.4Hz,2H),4.56(t,J＝6.4Hz,2H),4.34(d,J＝8.3Hz,2H),3.81-3.53(m,10H),2.70-2.59(m,2H),2.42-2.21(m,4H),2.12-1.91(m,6H),1.81-1.42(m,28H)。
除非另有说明，以与针对实施例10.1所述程序类似的方式制备并表征实施例3.2-3.4的TFA盐。
实施例# 起始酸 保留时间 1/2m/z(MH+)
实施例3.2 Cap 10步骤d.2 1.332* 480.5
实施例3.3 Cap 10步骤d.3 2.126 480.6
实施例3.4 Cap 10步骤d.4 2.273 480.6
*梯度时间为2min，保持时间为1min，分析时间为3min。
实施例4.1和4.2(两种对称的非对映异构体)
向4,4’-二(2-((2S,5S)-5-甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)-1,1’-联苯四盐酸盐(0.134g,0.224mmol)、Cap-12(0.1034g,0.519mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.313mL,1.791mmol)在DMF(1.5mL)中的溶液中加入HATU(0.179g,0.470mmol)。将反应混合物在～25℃搅拌3.5h。将反应混合物用MeOH(3.5mL)稀释并将产物通过制备型HPLC(注射体积:2000μL；梯度时间:15min；起始％B:30,结束％B:100；流速:30mL/min；停止时间:15min；溶剂A:10％MeOH-90％H2O-0.1％TFA,溶剂B:90％MeOH-10％H2O-0.1％TFA；柱:XTERRA 30×100mmS5；UV收集:220nm)来纯化，得到非对映异构体的混合物。将非对映异构体的混合物进一步通过制备型HPLC(注射体积:2000μL；梯度时间:30min；起始％B:10,结束％B:50；流速:30mL/min；停止时间:30min；溶剂A:10％乙腈-90％H2O-0.1％TFA,溶剂B:90％乙腈-10％H2O-0.1％TFA；柱:Waters-SunFire 30×100mm S5；UV收集:220nm)来分离，从而分离到两种对称的非对映异构体。实施例4.1(第一洗脱物)(35.5mg)，其为灰白色泡沫状物。LC(条件1)：Rt＝13.696min。LC/MS:[M+H]+C46H55N8O6分析计算值815.42；实测值815.49。实施例4.2(最后洗脱物)(38.3mg)，其为灰白色泡沫状物。LC(条件1)：Rt＝14.492min。LC/MS:[M+H]+C46H55N8O6分析计算值815.42；实测值815.49。
实施例5.1和5.2(两种对称的非对映异构体)
按照针对实施例4.1和4.2所述的程序由4,4’-二(2-((2S,5S)-5-甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)-1,1’-联苯四盐酸盐和Cap-11制备实施例5.1和5.2。实施例5.1(第一洗脱物)(56.4mg)，其为浅黄色泡沫状物：LC(条件1)：Rt＝15.124min。LC/MS:[M+H]+C48H59N8O6分析计算值843.46；实测值843.40。实施例5.2(最后洗脱物)(50.7mg)，其为白色泡沫状物。LC(条件1)：Rt＝16.559min。LC/MS:[M+H]+C48H59N8O6分析计算值843.46；实测值843.40。
实施例6
将HATU(173mg,0.455mmol)加到4,4’-二(2-((2S,5S)-5-甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)-1,1’-联苯四盐酸盐(109mg,0.182mmol)和Cap 13.1(117mg,0.455mmol)在DMF(2.0mL)和DIEA(0.222mL,1.27mmol)中的澄清搅拌溶液中。将反应混合物用氮气吹扫，密封，然后在室温搅拌过夜。将反应混合物在氮气气流下部分浓缩，然后通过制备型HPLC(具有TFA缓冲剂的ACN/水)来纯化，得到实施例6的TFA盐(135mg)，其为灰白色固体。LC-MS保留时间2.196min；m/z 931.7(MH+)。在配备有Phenomenex-Luna 3μC18 2.0×50mm柱且使用检测波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器的Shimadzu LC-10AS液相色谱仪上记录LC数据。使用以下洗脱条件：流速为0.8mL/min，梯度为100％溶剂A/0％溶剂B至0％溶剂A/100％溶剂B，梯度时间为4min，保持时间为1min，分析时间为5min，其中溶剂A为10％乙腈/90％H2O/0.1％三氟乙酸且溶剂B为10％H2O/90％乙腈/0.1％三氟乙酸。使用针对LC的MicromassPlatform(电喷雾模式)来确定MS数据。1H NMR(400MHz,MeOH-d4)δ7.96(s,2H),7.88(s,8H),5.20(dd,J＝10.7,7.2Hz,2H),4.79(t,J＝6.8Hz,2H),4.31-4.24(m,2H),3.85-3.76(m,2H),3.74-3.69(m,2H),3.67(s,6H),2.91-2.83(m,2H),2.55(dt,J＝12.8,6.7Hz,2H),2.47-2.23(m,6H),2.00(dd,J＝12.3,5.8Hz,2H),1.79(d,J＝12.3Hz,2H),1.69-1.27(m,12H),1.15(dd,J＝8.3,4.3Hz,2H),0.47(td,J＝8.5,3.9Hz,2H),0.34-0.21(m,4H),-0.01--0.09(m,2H)。
实施例7
以与针对实施例6所述程序类似的方式由Cap 13.2制备实施例7的TFA盐并进行表征。LC-MS保留时间2.208min；m/z 931.7(MH+)。
实施例8
实施例8步骤a
在0℃在冰/水浴中向(R)-5-(羟基甲基)吡咯烷-2-酮(5g,43.4mmol)和三苯基膦(17.09g,65.1mmol)在乙腈(300mL)中的混悬液中滴加四溴化碳(21.60g,65.1mmol)在乙腈(80mL)中的溶液。混悬液在1h内逐渐变为澄清溶液且将浴移开并在室温搅拌23h。真空除去溶剂并对所得粗品进行快速色谱(30-100％EtOAc/己烷,10-20％MeOH/EtOAc)，得到实施例8步骤a，其为棕色油状物(6.3g)。LC(条件II)：Rt＝1.29min；LC/MS：[M+H]+C5H9BrNO分析计算值179.99；实测值178.11。1H NMR(CDCl3,δ＝7.26ppm,400MHz)δ6.09(宽单峰,1H),4.07-3.92(m,1H),3.46(dd,J＝10.3,4.8Hz,1H),3.36(dd,J＝10.3,7.5Hz,1H),2.55-2.30(m,3H),1.99-1.81(m,1H)。
实施例8步骤b
通过注射器向实施例8步骤a(6.33g,35.6mmol)和氟化银(I)(14.21g,112mmol)的混合固体中缓慢加入乙腈(500mL)同时将反应烧瓶用铝箔覆盖。将反应混合物在室温搅拌40h。将其经由硅藻土过滤并真空除去溶剂。对所得粗品进行快速色谱(50-100％EtOAc/Hex,EtOAc,10-20％MeOH/EtOAc)，得到实施例8步骤b，其为无色油状物(1.96g)。LC(条件II)：Rt＝0.78min；LC/MS：[M+H]+C5H9FNO分析计算值118.07；实测值118.0。1H NMR(CDCl3,δ＝7.26ppm,400MHz)δ6.07(宽单峰,1H),4.51(dd,J＝9.5,3.5Hz,0.5H),4.43-4.31(m,1H),4.23(dd,J＝9.5,7.3Hz,0.5H),4.06-3.91(m,1H),2.48-2.34(m,2H),2.32-2.18(m,1H),1.84(m,1H)。
实施例8步骤c
在冰/水浴在0℃历时10min向实施例8步骤b(2.61g,22.28mmol)和DMAP(0.109g,0.891mmol)在DCM(110mL)中的溶液中分三份加入一缩二碳酸二叔丁酯(5.11g,23.40mmol)。将浴移开并将其在室温搅拌20h。加入50％饱和NaHCO3(30mL)并搅拌10min。将有机层分离并用Na2SO4干燥。真空蒸发溶剂，得到粗产物，其为黄色油状物。对所得粗品进行快速色谱(0-80％EtOAc/己烷)，得到实施例8步骤c，其为无色油状物(3.87g)。LC(条件II)：Rt＝2.64min；LC/MS：[M+Na]+C10H16FNNaO3分析计算值240.10；实测值240.14。1H NMR(CDCl3,δ＝7.26ppm,500MHz)δ4.68(ddd,J＝48.2,9.8,3.5Hz,1H),4.50(ddd,J＝45.7,9.8,2.5Hz,1H),4.31(ddm,J＝27.7,8.8Hz,1H),2.69(dtd,J＝17.7,9.8,1.9Hz,1H),2.44(ddq,J＝17.7,9.8,1.1Hz,1H),2.20(m,1H),2.06(m,1H),1.51(s,9H)。
实施例8步骤d
在干冰/丙酮浴中在-78℃向实施例8步骤c(2.67g,12.29mmol)在THF(50mL)中的溶液中滴加Superhydride(14.75mL,14.75mmol)。将反应混合物在-78℃搅拌40min。加入饱和NaHCO3水溶液(15mL)且移开干冰/丙酮浴并将温度升至室温。滴加20滴50％H2O2并将其搅拌20min。将有机层分离并将水层用乙醚(2×40mL)萃取，将合并的有机层用Na2SO4干燥，真空蒸发溶剂，得到粗中间体(2.34g)，其为澄清油状物。将粗中间体溶解在甲醇(30mL)中并加入对甲苯磺酸一水合物(0.223g,1.174mmol)，将其在室温搅拌16h。加入饱和NaHCO3水溶液(5mL)，用乙醚(3×35mL)萃取，用Na2SO4干燥，真空蒸发，得到澄清油状物，其为粗产物。对所得粗品进行快速色谱(0-40％EtOAc/己烷)，得到实施例8步骤d，其为无色油状物(1.97g)。LC(条件II)：Rt＝3.43min；LC/MS：[M+Na]+C11H20FNNaO3分析计算值256.13；实测值256.19。1H NMR(CDCl3,δ＝7.26ppm,400MHz)δ5.27-5.16(m,1H),4.59-4.26(m,2H),4.03(宽单峰,1H),3.29(宽单峰,3H),2.17-1.96(m,2H),1.96-1.85(m,1H),1.85-1.70(m,1H),1.55-1.39(m,9H)。
实施例8步骤e
向用-78℃干冰/丙酮浴冷却的实施例8步骤d(1.97g,8.44mmol)在DCM(50mL)中的溶液中先后加入氰基三甲基甲硅烷(1.698mL,12.67mmol)和三氟化硼乙醚络合物(1.605mL,12.67mmol)。将其搅拌1h。加入饱和NaHCO3(20mL)且将浴移开并将其在室温搅拌2h。将有机层分离并用DCM(40mL×2)萃取，用Na2SO4干燥，真空蒸发。对所得粗品进行快速色谱(0-40％,40-55％EtOAc/己烷)，得到第一洗脱物实施例8步骤e.1(反式；1.12g)和第二洗脱物实施例8步骤e.2(顺式；0.63g)，其为白色固体。LC(条件II)：Rt＝3.04min；LC/MS：[M+Na]+C11H17FN2NaO2分析计算值251.12；实测值251.16。1H NMR(CDCl3,δ＝7.26ppm,400MHz):d4.67-4.44(m,3H),4.12-4.06(m,1H),2.32(宽单峰,2H),2.18(br s,2H),1.52(s,9H)。
实施例8步骤f
向8e-顺式产物(0.51g,2.234mmol)在二噁烷(3mL)中的溶液中加入HCl(12M,3mL,99mmol)。将其加热至80℃并保持8h。真空除去溶剂并真空干燥16h，得到粗中间体(0.55g)，其为黄色固体。将该粗中间体(0.55g)溶解在THF(4mL)中，加入NaOH(2M,3.44mL,6.89mmol)和一缩二碳酸二叔丁酯(0.719g,3.30mmol)并将其在室温搅拌17h。真空蒸发溶剂并加入水(5mL)和乙醚(5mL)。将水层分离且在冰/水浴中用10％HCl酸化至pH 3，用EtOAc(15mL,3×)萃取并用Na2SO4干燥，真空蒸发溶剂，得到实施例8步骤f，其为黄色固体(0.50g)。1H NMR(CDCl3,δ＝7.26ppm,400MHz):δ4.69-4.14(m,4H),2.29-2.07(m,4H),1.50-1.48(两个单峰,9H)。
实施例8
按照针对合成实施例QC17.1所述的程序，使用所示及其它适当前体，将实施例8步骤f加工成实施例8。LC/MS：[M+H]+C50H61F2N8O8分析计算值939.46；实测值939.77。在以下LC条件下的Rt＝15.99：起始％B＝10；结束％B＝98；梯度时间＝35min；停止时间＝35min；流速＝0.35mL/min；波长＝306nm；溶剂A＝具有0.05％TFA的水；溶剂B＝具有0.05％TFA的乙腈；柱＝Waters Acquity BEH C18；1.7μm；150×2.1mm ID(在35℃)。
实施例9.1
将HATU(44.8mg,0.118mmol)加到4,4’-二(2-((2S,5S)-5-甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)-1,1’-联苯盐酸盐(32mg,0.054mmol)和Cap 15.1(32mg,0.12mmol)在DMF(0.5mL)和DIEA(0.075mL,0.43mmol)中的溶液中并将混合物在室温搅拌2h。将粗反应混合物经由使用以下条件的制备型LC/MS来纯化而得到实施例9.1(24.1mg)：柱：WatersXBridge C18,19×200mm,5μm颗粒；保护柱：Waters XBridge C18,19×10mm,5μm颗粒；流动相A：具有20mM乙酸铵的水；流动相B：具有20mM乙酸铵的95:5乙腈:水；梯度：40-80％B历时20min，在100％B保持5min；流速：20mL/min。将含有期望产物的级份合并且通过离心蒸发来干燥。LC/MS保留时间2.99min；m/z＝960[M+H]+。柱：Waters BEH C18,2.0×50mm,1.7μm颗粒；流动相A：具有10mM乙酸铵的5:95乙腈:水；流动相B：具有10mM乙酸铵的95:5乙腈:水；温度：40℃；梯度：在0％B保持0.5min，0-100％B历时4min，然后在100％B保持0.5min；流速：1mL/min。
实施例9.2
使用Cap 15.2(38mg,0.14mmol)作为原料如上所述进行反应，得到实施例9.2(20.8mg)。LC/MS保留时间2.99min；m/z＝960[M+H]+。柱：Waters BEH C18,2.0×50mm,1.7μm颗粒；流动相A：具有10mM乙酸铵的5:95乙腈:水；流动相B：具有10mM乙酸铵的95:5乙腈:水；温度：40℃；梯度：在0％B保持0.5min，0-100％B历时4min，然后在100％B保持0.5min；流速：1mL/min。
实施例9.3
使用Cap 15.3(34mg,0.13mmol)作为原料如上所述进行反应，得到实施例9.3(39.7mg)。LC/MS保留时间3.01min；m/z＝960[M+H]+。柱：Waters BEHC18,2.0×50mm,1.7μm颗粒；流动相A：具有10mM乙酸铵的5:95乙腈:水；流动相B：具有10mM乙酸铵的95:5乙腈:水；温度：40℃；梯度：在0％B保持0.5min，0-100％B历时4min，然后在100％B保持0.5min；流速：1mL/min。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.89-7.40(m,12H),5.38-4.92(m,2H),4.69-4.60(m,2H),4.25-3.91(m,6H),3.55(s,6H),2.84-2.65(m,2H),2.30-2.20(m,2H),2.19-1.96(m,4H),1.95-1.87(m,2H),1.84-1.52(m,4H),1.60-1.24(m,8H),1.22-1.03(m,4H),0.99-0.81(m,6H),0.79-0.65(m,2H),0.45-0.28(m,4H),0.20--0.04(m,4H)。
实施例9.4
使用Cap 15.4(34mg,0.13mmol)作为原料如上所述进行反应，得到实施例9.4(25.5mg)。LC/MS保留时间3.03min；m/z＝960[M+H]+。柱：Waters BEHC18,2.0×50mm,1.7μm颗粒；流动相A：具有10mM乙酸铵的5:95乙腈:水；流动相B：具有10mM乙酸铵的95:5乙腈:水；温度：40℃；梯度：在0％B保持0.5min，0-100％B历时4min，然后在100％B保持0.5min；流速：1mL/min。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.10-7.64(m,12H),5.10-4.98(m,2H),4.69-4.54(m,2H),4.08-3.95(m,2H),3.79-3.69(m,2H),3.56(s,6H),2.97-2.72(m,4H),2.43-2.05(m,8H),1.90-1.79(m,2H),1.75-1.64(m,2H),1.49(d,J＝5.8Hz,6H),1.33-1.14(m,6H),1.09-0.81(m,8H),0.54-0.36(m,4H),0.24-0.66(m,2H),0.66-0.02(m,2H)。
实施例10
实施例10步骤a.1-a.2
两种酯按照在以下两篇文献中描述的程序来制备：Madar,D.J.etal.J.Med.Chem.,2006,49,6416；Biellmann,J.et al.,J.Org.Chem.,1992,57,2060。
实施例10步骤b
向实施例10步骤a.1(3.05g,19.9mmol)和DMAP(0.122g,0.996mmol)在DCM(150mL)中的混悬液中加入一缩二碳酸二叔丁酯(5.21g,23.89mmol)并将反应混合物在室温搅拌17h。真空蒸发溶剂并对所得粗品进行快速色谱(0-60％EtOAc/Hex)，得到实施例10步骤b，其为无色油状物(3.26g)。LC/MS：[M+Na]+C13H19NNaO4分析计算值276.12；实测值276.02。1HNMR(CDCl3,δ＝7.26ppm,400MHz)δ4.66-4.53(两个宽单峰,1H),4.34-4.22(m,1H),3.04(s,3H),2.35-2.12(m,5H),1.51-1.45(两个宽单峰,9H)
实施例10步骤c
向实施例10步骤b(2.05g,8.09mmol)在乙醇(20mL)中的溶液中加入氢氧化锂(0.233g,9.71mmol)在水(10mL)中的溶液，将其在室温搅拌5h。蒸发溶剂且加入乙醚(10mL)和水(10mL)并向水层中加入1N HCl以调节其pH至2。将水相用EtOAc(3×20mL)萃取，用Na2SO4干燥，真空蒸发，得到实施例10步骤c(1.65g)，其为浅黄色油状物。LC/MS：[M+Na]+C12H17NNaO4分析计算值262.11；实测值262.02。1H NMR(CDCl3,δ＝7.26ppm,400MHz)δ4.67-4.36(m,2H),2.54-2.13(m,5H),1.53(宽单峰,9H)。
实施例10
按照针对合成实施例QC17.1所述的程序并使用所示及其它适当前体将实施例10步骤c加工成实施例10。LC(条件8)：Rt＝2.98min；LC/MS：[M+H]+C52H63N8O8分析计算值927.48；实测值927.47。
实施例10.1
按照针对实施例10所述的程序由实施例10步骤a.2制备实施例10.1。LC(条件8)：Rt＝2.95min；LC/MS：[M+H]+C52H63N8O8分析计算值927.48；实测值927.47。
实施例11
实施例11步骤a
向顺式-1-苄基吡咯烷-2,5-二甲酸二乙酯盐酸盐(按照在J.Med.Chem.,2006,49,3068中描述的程序来制备)(17.35g,50.8mmol)在乙醇(300mL)中的溶液中加入碳酸钾(14.03g,102mmol)和氢氧化钯/碳(20％)，将其用氮气吹扫，然后安装氢气气囊并在室温搅拌6h。加入一缩二碳酸二叔丁酯(27.7g,127mmol)并在室温在氢气气囊下搅拌72h。将反应混合物用硅藻土过滤并用甲醇洗涤。蒸发溶剂并将其在EtOAc(80mL)和水(50mL)之间分配，将水层用EtOAc(20mL,2×)萃取并将合并的有机层用Na2SO4干燥。真空蒸发溶剂并对所得粗品进行快速色谱(0-30％EtOAc/Hex)，得到实施例11步骤a，其为无色油状物(13.3g)。LC(条件8)：Rt＝3.44min；LC/MS：[M+Na]+C15H25NNaO6分析计算值338.16；实测值338.11。1H NMR(CDCl3,δ＝7.26ppm,400MHz)δ4.41(m,1H),4.30(m,1H),4.23(m,4H),2.24-2.12(m,4H),1.45(s,9H),1.30(m,6H)。
实施例11步骤b
在0℃在冰/水浴中历时20min向实施例11步骤a(16.8g,53.3mmol)在乙醇(150mL)中的溶液中滴加氢氧化钾(2.99g,53.3mmol)在乙醇(100mL)中的溶液。移开冰/水浴并将混合物在室温搅拌23h。蒸发溶剂，加入水(40mL)，然后加入1N HCl以调节pH至8-9。将水层用己烷(35mL,2×)洗涤，通过加入1N HCl将其pH调节至4-5并用EtOAc(70mL×3)萃取。将合并的有机层用Na2SO4干燥并真空除去挥发物组分，得到实施例11步骤b(8.45g)，其为无色油状物。LC(条件8)：Rt＝3.10min；LC/MS：[M+Na]+C13H21NNaO6分析计算值310.13；实测值310.10。1H NMR(CDCl3,δ＝7.26ppm,400MHz)δ4.63-4.50,4.44-4.20(一系列多重峰,4H),2.49-2.27(m,2H),2.11-2.05(m,2H),1.48(两个单峰,9H),1.38-1.30(m,3H)。
实施例11步骤c
在0℃在冰/水浴中历时15min向实施例11步骤b(1.6g,5.57mmol)在THF(35mL)中的溶液中滴加硼烷-二甲硫醚络合物(2.78mL,5.57mmol)。搅拌10min后，将浴移开并将混合物在室温搅拌5h。加入甲醇(10mL)并将其在室温再搅拌1h。蒸发溶剂并将残余物在EtOAc(80mL)和水(50mL)之间分配。将有机层分离，用Na2SO4干燥，真空蒸发挥发物组分。对所得粗品进行快速色谱(0-35％EtOAc/Hex)，得到实施例11步骤c，其为无色油状物(0.91g)。将两种对映异构体通过手性SFC(柱IC-2×15cm；15％i-PrOH/0.1％二乙胺/CO2)来分离：峰1(402mg)和峰2(414mg)。LC(条件8)：Rt＝3.01min；LC/MS：[M+Na]+C13H23NNaO5分析计算值296.15；实测值296.10。
实施例11步骤d
向实施例11步骤c(峰1,402mg,1.471mmol)在乙醇(4mL)中的溶液中加入氢氧化锂(42.3mg,1.765mmol)在水(2mL)中的溶液并将混合物在室温搅拌5h。将混合物浓缩，用水(10mL)稀释并用EtOAc(10mL)洗涤。将水层用冰/水浴冷却，加入1N HCl以将其pH调节至～2并将其用EtOAc(3×30mL)萃取。将合并的有机层用Na2SO4干燥并真空蒸发挥发物组分，得到实施例11步骤d(0.29g)，其为黄色固体。LC/MS：[M+Na]+C11H19NNaO5分析计算值268.12；实测值268.126。1H NMR(CDCl3,δ＝7.26ppm,400MHz)δ4.45-4.40,4.17-4.03,3.68-3.58(一系列多重峰,4H),2.27-1.95(m,4H),1.47(宽单峰,9H)。
实施例11
按照针对合成实施例QC17.1所述的程序并使用所示中间体及其它适当前体将实施例11步骤d加工成实施例11。在以下LC条件下的Rt＝15.99：起始％B＝10；结束％B＝98；梯度时间＝35min；停止时间＝35min；流速＝0.35mL/min；波长＝306nm；溶剂A＝具有0.05％TFA的水；溶剂B＝具有0.05％TFA的乙腈；柱＝Waters Acquity BEH C18；1.7μm；150×2.1mm ID(在35℃)。LC/MS：[M+H]+C50H61F2N8O8分析计算值939.46；实测值939.77。
实施例11.1
按照针对实施例11所述的程序由实施例11步骤c(峰2)制备实施例11.1。在以下LC条件下的Rt＝12.51：起始％B＝10；结束％B＝98；梯度时间＝35min；停止时间＝35min；流速＝0.35mL/min；波长＝306nm；溶剂A＝具有0.05％TFA的水；溶剂B＝具有0.05％TFA的乙腈；柱＝Waters Acquity BEH C18；1.7μm；150×2.1mm ID(在35℃)。LC/MS：[M+H]+C50H67N8O10分析计算值940.11；实测值939.88。
实施例12.1和12.2
(两种涉及非特定立体异构中心的对称非对映异构体)
向4,4’-二(2-((2S,5S)-5-甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)-1,1’-联苯(四盐酸盐；0.100g,0.167mmol)、Cap 18(0.094g,0.418mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.233mL,1.337mmol)在DMF(2mL)中的溶液中加入HATU(0.140g,0.368mmol)。将反应混合物在室温搅拌4h。将反应混合物用MeOH(6mL)稀释并将产物通过反相制备型HPLC(XTERRA 30×100mmS5；MeOH/水/TFA)来纯化，得到浅黄色固体，其为三种非对映异构体的混合物(110mg)。将样品进一步通过制备型手性SFC[柱：ChiralCel OJ-H,30×250mm,5μm；流动相：20％EtOH(0.2％DEA)/80％CO2；压力：120巴；温度：35℃；流速：70mL/min；UV：320nm]来纯化，得到三种非对映异构体。为了除去少量杂质，将两种对称的非对映异构体进一步通过制备型HPLC(Waters-Sunfire 30×100mm S5；乙腈/水/TFA)来单独纯化。实施例12.1(黄色固体；11.0mg)：LC(条件8)：Rt＝3.05min；LC/MS：[M+H]+C48H53N10O6分析计算值865.41；实测值865.60。实施例12.2(黄色固体；7.6mg)：LC(条件8)：Rt＝3.01min；LC/MS：[M+H]+C48H53N10O6分析计算值865.41；实测值865.73。
实施例13
向4,4’-二(2-((2S,5S)-5-甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)-1,1’-联苯(四盐酸盐；0.05g,0.084mmol)、Cap 16(0.042g,0.184mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.117mL,0.668mmol)在DMF(2mL)中的溶液中加入HATU(0.067g,0.175mmol)。将反应混合物在～25℃搅拌4h。将反应混合物用甲醇(6mL)稀释并将产物先后通过制备型HPLC(Xbridge C18,30×100mm 5μm；乙腈/水/乙酸铵)和另一个反相HPLC(Waters XBridge C18,19×200mm,5μm；乙腈/水/乙酸铵)来纯化，得到实施例13，其为白色固体(11.4mg)。LC(条件8)：Rt＝2.78min；LC/MS：[M+H]+C48H59N8O8分析计算值875.45；实测值875.72。
实施例JLR-1.0
实施例JLR-1.0步骤a
在-78℃历时10min将1M二(三甲基甲硅烷基)氨基锂(61.7mL,61.7mmol)在THF中的溶液加到(S)-5-氧代吡咯烷-1,2-二甲酸1-叔丁基酯·2-甲基酯(15g,61.7mmol)在THF(225mL)中的经氮气吹扫的溶液中。将反应混合物搅拌1h，然后在相同温度加入3-溴丙-1-烯(5.22mL,61.7mmol)并将反应混合物搅拌1.5h，然后移开冷却浴并在室温搅拌18h。将反应混合物用稀乙酸(12mL在50mL水中)淬灭并浓缩除去THF。将残余物吸收在EtOAc中并用水和盐水洗涤且干燥(Na2SO4)。将粗产物溶解在最小体积的10％EtOAc/Hex中并加载到300gThomson硅胶柱上。用总计3L 10-80％EtOAc/己烷进行梯度洗脱。注：将纯级份留出且将混合级份合并且再次进行色谱纯化。洗脱的第一条带为(S)-4,4-二烯丙基-5-氧代吡咯烷-1,2-二甲酸1-叔丁基酯·2-甲基酯(4.63g)，然后为单烷基化反式产物(3.56g)，然后为单烷基化顺式产物(2.0g)。反式产物：1H NMR(500MHz,MeOD)δ5.79(ddt,J＝17.1,10.0,7.1Hz,1H),5.20-5.05(m,2H),4.66(dd,J＝9.8,1.9Hz,1H),3.81(s,3H),2.76(dtd,J＝11.3,8.8,4.4Hz,1H),2.57(dddt,J＝14.3,6.7,4.4,1.3Hz,1H),2.29-2.17(m,2H),2.16-2.06(m,1H),1.49(s,9H)。二烷基化产物：1H NMR(CDCl3；500MHz):δ5.81-5.70(m,2H),5.19-5.07(一系列多重峰,4H),4.56(dd,J＝9.9,5.6Hz,1H),3.79(s,3H),2.40-2.34(m,3H),2.30-2.25(m,2H),1.94(dd,J＝13.7,5.6Hz,1H),1.49(s,9H)。
实施例JLR-1.0步骤b
将GrubbsI催化剂(0.117g,0.417mmol)加到(S)-4,4-二烯丙基-5-氧代吡咯烷-1,2-二甲酸1-叔丁基酯·2-甲基酯(2.7g,8.35mmol)在二氯甲烷(130mL)中的经氮气吹扫的溶液中并在24℃搅拌18h。将反应混合物部分浓缩(～1/5体积)并加载到160g Thomson硅胶柱上。用总计2L 5-75％EtOAc/己烷进行梯度洗脱，得到(S)-1-氧代-2-氮杂螺[4.4]壬-7-烯-2,3-二甲酸2-叔丁基酯·3-甲基酯(1.98g)。1H NMR(CDCl3,500MHz):δ5.67-5.65(m,1H),5.61-5.59(m,1H),4.68(dd,J＝9.3,4.0Hz,1H),3.81(s,3H),2.88(dt,J＝16.8,2.3Hz1H),2.77(dt,J＝16.6,2.3Hz 1H),2.44-2.29(一系列多重峰,3H),2.12(dd,J＝13.2,4.0Hz 1H),1.50(s,9H)。
实施例JLR-1.0步骤c
在-78℃将1M Superhydride(7.7mL,7.72mmol)在THF中的溶液滴加到(S)-1-氧代-2-氮杂螺[4.4]壬-7-烯-2,3-二甲酸2-叔丁基酯·3-甲基酯(1.9g,6.43mmol)在THF(40mL)中的经氮气吹扫的溶液中并搅拌1h。历时1h将反应混合物温热至0℃，再次冷却至-78℃且在-78℃再加入6mL Superhydride并搅拌1h，然后置于冰箱中在-5℃保持18h。将反应混合物在冷却下用饱和NaHCO3溶液(16mL)淬灭并保持在0℃且加入30％过氧化氢溶液(1.8mL)。将反应混合物在相同温度搅拌20min，然后通过旋转蒸发来除去溶剂。将残余物用DCM(3×60mL)萃取且将合并的有机层用水洗涤并干燥(Na2SO4)。将溶剂减少至35mL体积，加入三乙基甲硅烷(1.1mL,6.76mmol)并将反应混合物冷却至-78℃。在氮气下加入三氟化硼乙醚合物(0.98mL,7.72mmol)并在30min后再加入三乙基甲硅烷(1.1mL,6.76mmol)和三氟化硼乙醚合物(0.98mL,7.72mmol)。将反应混合物搅拌2h，用饱和NaHCO3溶液(10mL)淬灭，用DCM(3×60mL)萃取并将有机层干燥(Na2SO4)。将粗产物加载(DCM)到160g Thomson硅胶柱上并用总计2L 5-50％EtOAc/己烷进行梯度洗脱，得到(S)-2-氮杂螺[4.4]壬-7-烯-2,3-二甲酸2-叔丁基酯·3-甲基酯(1.44g)。1H NMR(MeOD,500MHz):δ5.70-5.67(m,2H),4.30(t,J＝7.9Hz,1H),3.76(s,3H),3.47-3.44(m,1H),3.38-3.31(m,1H),2.48-2.29(一系列多重峰,5H),1.98-1.93(m,1H),1.47/1.42(s,9H)。
实施例JLR-1.0步骤d
将钯/碳(10％；182mg)加到(S)-2-氮杂螺[4.4]壬-7-烯-2,3-二甲酸2-叔丁基酯·3-甲基酯(480mg,1.71mmol)在EtOAc(50mL)中的经氮气吹扫的溶液中且将反应混合物用氢气(气囊)吹扫并搅拌18h。通过用硅藻土过滤来除去催化剂并通过旋转蒸发来浓缩除去溶剂。将残余物吸收在苯中并通过旋转蒸发来浓缩(2×)以确保除去EtOAc。由此得到(S)-2-氮杂螺[4.4]壬烷-2,3-二甲酸2-叔丁基酯·3-甲基酯(472mg)，其无需进一步纯化即使用。为了进行表征，将样品(25mg)加载到12g Thomson硅胶柱上并用总计1.5L 15-100％EtAOc/己烷进行梯度洗脱。1H NMR(MeOD,500MHz):δ4.29-4.25(m,1H),3.75(s,3H),3.37-3.35(m,1H),3.29-3.24(m,1H),2.24-2.20(m,1H),1.91-1.84(m,1H),1.72-1.66(m,5H),1.57-1.54(m,3H),1.47/1.42(s,9H)。
实施例JLR-1.0步骤e
向(S)-2-氮杂螺[4.4]壬烷-2,3-二甲酸2-叔丁基酯·3-甲基酯(445mg,1.57mmol)在MeOH(3.5mL)/水(1mL)中的溶液中加入氢氧化锂一水合物(99mg,2.356mmol)。将反应混合物搅拌18h，然后浓缩，用水(20mL)稀释并用Et2O洗涤。将水层用2.5mL 1N HCl酸化，用EtOAc萃取并将有机层用盐水洗涤并干燥(MgSO4)，得到产物(338mg)，其无需进一步纯化即使用。1H NMR(MeOD,500MHz):δ4.26-4.19(m,1H),3.37-3.35(m,1H),3.29-3.25(m,1H),2.25-2.21(m,1H),1.93-1.89(m,1H),1.72-1.67(m,5H),1.59-1.55(m,3H),1.48/1.44(s,9H)。LC/MS：[M-H]-C39H49N2O10分析计算值705.35；实测值705.30。
实施例JLR-1.0步骤f
将许尼希碱(0.21mL,1.23mmol)加到(S)-2-(叔丁氧基羰基)-2-氮杂螺[4.4]壬烷-3-甲酸(330mg,1.23mmol)和1,1’-([1,1’-联苯]-4,4’-二基)二(2-溴乙酮)(243mg,0.613mmol)在乙腈(6mL)中的溶液中并在24℃搅拌18h。通过旋转蒸发来除去溶剂并将残余物吸收在EtOAc中，用饱和NaHCO3溶液和盐水洗涤且干燥(Na2SO4)。将粗产物加载(DCM)到25g Thomson硅胶柱上并用总计1L 15-100％EtOAc/己烷进行梯度洗脱，得到二酯中间体(387mg)，将其吸收在二甲苯(7mL)中并置于螺帽玻璃压力容器中。加入NH4OAc(579mg,0.5mmol)并将密封的容器在140℃加热3h。将反应混合物冷却至室温，用EtOAc(40mL)稀释，用饱和NaHCO3和盐水洗涤，干燥(Na2SO4)。将粗产物加载(DCM)到25g Thomson硅胶柱上并用总计1L 15-100％EtOAc/DCM进行梯度洗脱，得到二咪唑产物(170mg)。1H NMR(MeOD,500MHz):δ7.78(d,J＝8.1Hz,4H),7.69(d,J＝8.1Hz,4H),7.39(s,2H),4.12(q,J＝7.2Hz,2H),3.51(宽单峰,4H),2.28-2.24(m,2H),2.13-2.08(m,2H),1.77-1.48(一系列多重峰,16H),1.24(s,18H).HPLC：条件10,Rt＝1.0min；[M+H]+C44H57N6O4分析计算值733.47；实测值733.40。
实施例JLR-1.0步骤g
向JLR-1.0步骤f(150mg,0.20mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中加入4N HCl在二噁烷(10mL)中的溶液并将反应混合物在室温搅拌5h。真空除去挥发物组分并将残余物暴露于自制真空18h。LC/MS(条件2)：Rt＝1.78min；[M+H]+C34H41N6分析计算值533.34；实测值533.36。
实施例JLR-1.0
将HATU(74.9mg,0.197mmol)加到JLR-1.0步骤g(四盐酸盐；50mg,0.094mmol)、(S)-2-((2R,6R)-2,6-二甲基四氢-2H-吡喃-4-基)-2-((甲氧基羰基)氨基)乙酸(48.3mg,0.197mmol)和许尼希碱(0.154mL,0.939mmol)在DMF(5mL)中的溶液中并搅拌5h。对反应混合物进行制备型HPLC(Phenonmenex-Luna柱；30×100mm S10；MeOH/水/TFA)，得到实施例JLR-1.0的TFA盐(46mg)，其为黄色固体。UPLC(条件10)：Rt＝0.9min；[M+H]+C56H75N8O8分析计算值987.57；实测值987.65。1H NMR(500MHz,MeOD)δ7.97(s,2H),7.88(s,8H),5.21(dd,J＝10.8,7.3Hz 2H),4.22-4.18(m,4H),4.13(d,J＝8.8Hz,2H),3.67(s,6H),3.37-3.29(m,4H),2.46-2.42(m,2H),2.29(t,J＝11.4Hz,2H),2.20-2.16(m,2H),1.85-1.72(m,14H),1.61-1.41(m,6H),1.22(d,J＝6.9Hz,6H),1.22-1.9(m,2H),1.02(d,J＝6.1Hz,6H),0.96(q,J＝11.4Hz,2H)。
实施例JLR-2.0
实施例JLR-2.0步骤a
在特别包裹的玻璃容器中将1-甲基-3-硝基-1-亚硝基胍(4.9g,33.5mmol)缓慢加到10N氢氧化钠(14mL,100mmol)在乙醚(30mL)和水(20mL)中的溶液中并在0℃搅拌15min。将所得溶液倾泻到特别包裹的分液漏斗中并在0℃将乙醚层滴加到实施例JLR-1.0步骤a的单烷基化反式产物(790mg,2.79mmol)和Pd(OAc)2(43.8mg,0.195mmol)在THF(25mL)中的溶液中。将反应混合物搅拌45min，然后温热至室温并继续搅拌2h。用硅藻土过滤除去催化剂并将滤液浓缩。将粗产物加载(DCM)到110g Thomson硅胶柱上并用总计2L 5-60％EtOAc/己烷进行梯度洗脱，得到环丙基加合物(486mg)。
实施例JLR-2.0步骤b
在-78℃将1M Superhydride(3mL,2.89mmol)在THF中的溶液滴加到(2S,4R)-4-(环丙基甲基)-5-氧代吡咯烷-1,2-二甲酸1-叔丁基酯·2-甲基酯(383mg,1.3mmol)在THF(15mL)中的经氮气吹扫的溶液中并搅拌45min。将反应混合物在冷却下用饱和NaHCO3溶液(18mL)淬灭，温热至0℃且加入30％过氧化氢溶液(0.8mL)且将反应混合物在相同温度搅拌20min，然后通过旋转蒸发来除去溶剂。将残余物用DCM(3×20mL)萃取且将合并的有机层用水洗涤并干燥(Na2SO4)。将溶剂减少至15mL体积，加入三乙基甲硅烷(315mg,2.71mmol)并将反应混合物冷却至-78℃。在氮气下加入三氟化硼乙醚合物(402mg,2.83mmol)且在30min后如上再加入三乙基甲硅烷和三氟化硼乙醚合物。将反应混合物搅拌2h，用饱和NaHCO3溶液(8mL)淬灭，用DCM(3×20mL)萃取且将有机层干燥(Na2SO4)。将粗产物加载(DCM)到90gThomson硅胶柱上并用总计2L 5-60％EtOAc/己烷进行梯度洗脱，得到(2S,4R)-4-(环丙基甲基)吡咯烷-1,2-二甲酸1-叔丁基酯·2-甲基酯(242mg)。1H NMR(MeOD,500MHz):δ4.33-4.29(m,1H),3.75(s,3H),3.72-3.68(m,1H),3.07-3.02(m,1H),2.42-2.38(m,1H),2.16-2.11(m,1H),2.01-1.92(m,3H),1.48/1.42(s,9H),1.32-1.28(m,2H),0.71-0.67(m,1H),0.48-0.45(m,2H)。
实施例JLR-2.0步骤c
向(2S,4R)-4-(环丙基甲基)吡咯烷-1,2-二甲酸1-叔丁基酯·2-甲基酯(242mg,0.85mmol)在MeOH(2mL)/水(0.5mL)中的溶液中加入氢氧化锂一水合物(53mg,1.28mmol)。将反应混合物搅拌18h，然后浓缩，用水(10mL)稀释并用Et2O洗涤。将水层用2mL 1N HCl酸化，用EtOAc萃取且将有机层用盐水洗涤并干燥(MgSO4)，得到酸(212mg)，其无需进一步纯化即使用。
实施例JLR-2.0步骤d
将许尼希碱(0.14mL,0.79mmol)加到(2S,4R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-(环丙基甲基)吡咯烷-2-甲酸(212mg,0.79mmol)和1,1’-([1,1’-联苯]-4,4’-二基)二(2-溴乙酮)(156mg,0.395mmol)在乙腈(4mL)中的溶液中并在24℃搅拌18h。通过旋转蒸发来除去溶剂并将残余物吸收在EtOAc中，用饱和NaHCO3溶液和盐水洗涤且干燥(Na2SO4)。将粗产物加载(DCM)到25g Thomson硅胶柱上并用总计1L 15-100％EtOAc/己烷进行梯度洗脱，得到二酮酯中间体(225mg)，将其吸收在二甲苯(7mL)中并置于螺帽玻璃压力容器中。加入NH4OAc(224mg,2.91mmol)且将容器密封且将反应混合物在140℃加热。搅拌3h后，将反应混合物冷却至室温，用EtOAc稀释，用饱和NaHCO3和盐水洗涤，干燥(Na2SO4)。将粗产物加载(DCM)到25g Thomson硅胶柱上并用总计1L 5-100％EtOAc/己烷进行梯度洗脱，得到二咪唑产物(144mg)。1H NMR(MeOD,500MHz):δ7.78(宽单峰,4H),7.69(d,J＝7.9Hz,4H),7.35(m,2H),7.39(s,2H),5.07-5.01(m,2H),3.94-3.87(m,2H),3.17-3.13(m,2H),2.54(宽单峰,2H),2.27-2.07(m,4H),1.5/1.3(s,18H),1.38-1.36(m,4H),0.74-0.73(m,2H),0.49-0.47(m,4H),0.09(宽单峰,4H)。UPLC：条件10,Rt＝1.0min；[M+H]+C44H57N6O4分析计算值733.47；实测值733.45。
实施例JLR-2.0步骤e
向JLR-2.0步骤d(138mg,0.188mmol)在MeOH(3mL)中的溶液中加入4N HCl在二噁烷中的溶液(7mL)并将反应混合物在室温搅拌6h。真空除去挥发物组分并将残余物暴露于自制真空18h。LC/MS(条件10)：Rt＝0.8min；[M+H]+C34H41N6分析计算值533.34；实测值533.30。
实施例JLR-2.0
将HATU(86mg,0.225mmol)加到JLR-2.0步骤e(四盐酸盐；60mg,0.113mmol)、(S)-2-((2R,6R)-2,6-二甲基四氢-2H-吡喃-4-基)-2-((甲氧基羰基)氨基)乙酸(55.2mg,0.225mmol)和许尼希碱(0.2mL,1.1mmol)在DMF(3mL)中的溶液中并搅拌3h。对反应混合物进行反相制备型HPLC(Phenonmenex-Luna柱；30×100mm S10；MeOH/水/TFA)，得到实施例JLR-2.0的TFA盐(52mg)，其为白色固体。UPLC(条件10)：Rt＝0.92min；[M+H]+C56H75N8O8分析计算值987.57；实测值987.60。1H NMR(500MHz,MeOD)δ7.94(s,2H),7.91-7.88(m,8H),5.37(dd,,J＝8.6,5.2Hz 2H),4.26-4.21(m,4H),4.13-4.09(m,2H),3.76-3.72(m,4H),3.69(s,6H),3.37-3.29(m,4H),2.46-2.42(m,2H),2.79-2.74(m,2H),2.40-2.26(m,2H),1.61-1.58(m,2H),1.51-1.35(一系列多重峰,4H),1.24(d,J＝6.8Hz,6H),1.08(d,J＝6.3Hz,6H),1.04(q,J＝11.6Hz,2H),0.83-0.78(m,2H),0.55-0.50(m,4H),0.16-0.13(m,4H)。
实施例JLR-3.0
将HATU(72mg,0.188mmol)加到Cap 17.1(49mg,0.184mmol)、4,4’-二(2-((2S,5S)-5-甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)-1,1’-联苯(四盐酸盐；55mg,0.092mmol)和许尼希碱(0.16mL,0.92mmol)在DMF(5.5mL)中的溶液中并搅拌4h。对反应混合物进行反相制备型HPLC(Phenonmenex-Luna柱；30×100mm S10；MeOH/水/TFA)，得到实施例JLR-3.0的TFA盐(36mg)，其为白色固体。UPLC(条件10)：Rt＝0.90min；[M+H]+C54H71N8O8分析计算值959.64；实测值959.50。1H NMR(500MHz,MeOD)δ7.90(s,2H),7.89-7.78(m,8H),5.20(dd,,J＝10.7,7.2Hz,2H),4.73-4.67(m,4H),4.04-4.00(m,2H),3.70(s,6H),3.64-3.60(m,4H),2.58-2.52(m,2H),2.46-2.23(m,6H),2.02-1.99(m,2H),1.81-1.67(m,6H),1.57(d,J＝6.6Hz,6H),1.53-1.38(m,8H),1.25-1.21(m,2H),1.09(d,J＝6.1Hz,6H)。
实施例JLR-3.1
实施例JLR-3.1
将HATU(78mg,0.21mmol)加到Cap 17.2(54mg,0.20mmol)、4,4’-二(2-((2S,5S)-5-甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)-1,1’-联苯(四盐酸盐；60mg,0.092mmol)和许尼希碱(0.17mL,1.0mmol)在DMF(6mL)中的溶液中并搅拌4h。对反应混合物进行反相制备型HPLC(Phenonmenex-Luna柱；30×100mm S10,MeOH/水/TFA)，得到实施例JLR-3.1的TFA盐(48mg)，其为白色固体。UPLC(条件10)：Rt＝0.88min；[M+H]+C54H71N8O8分析计算值959.64；实测值959.50。1H NMR(500MHz,MeOD)δ7.94(s,2H),7.88(s,8H),5.18(dd,,J＝10.9,7.2Hz,2H),4.98-4.92(m,2H),4.28-4.21(m,2H),3.83-3.82(m,2H),3.68(s,6H),3.27-3.23(m,2H),2.58-2.52(m,2H),2.46-2.37(m,2H),2.23-2.27(m,4H),2.03-1.97(m,4H),1.87-1.76(m,6H),1.72-1.61(m,8H),1.58(d,J＝6.7Hz,6H),1.30-1.11(m,4H),1.09(d,J＝6.1Hz,6H)。
生物学活性
在本申请中使用HCV复制子测定且如在共同拥有的PCT/US2006/022197和O’Boyle等人,Antimicrob Agents Chemother.49(4):1346-1353(2005年4月)中所述那样进行制备、实施和验证。还如所述那样(Apath.com)使用引入萤光素酶报告子的测定方法。
HCV-neo复制子细胞和在NS5A区中含有抗性取代的复制子细胞用于测试当前所述的化合物家族。与针对野生型细胞的相应抑制效力相比，化合物对含有突变的细胞的抑制活性被确定具有不同程度的减小。因此，本申请化合物可有效地抑制HCV NS5A蛋白的功能且应当理解的是，本申请化合物在组合中如先前在PCT/US2006/022197和共同拥有的WO04/014852中所述那样是有效的。应当理解的是，本申请化合物可抑制HCV的多种基因型。表2显示了本申请代表性化合物针对HCV 1b基因型的EC50值(50％有效抑制浓度)。
本申请化合物可通过除NS5A抑制外或不同于NS5A抑制的机制来抑制HCV。在一个实施方案中，本申请化合物抑制HCV复制子，而在另一个实施方案中，本申请化合物抑制NS5A。本申请化合物可抑制HCV的多种基因型。针对HCV 1b的EC50范围如下：A(900.01pM-0.7μm)；B(100.01pM-900pM)；C(5.01pM-100pM)；D(0.5pM-5pM)。
表2
本领域技术人员应当理解的是，本申请不限于上述示例性实施例且在不背离本申请基本属性的情况下本申请可按其它具体形式来实施。因此，应当理解的是，实施例在各个方面都应当被视为是示例性而非限制性的，应当参考所附权利要求书而非上述实施例且落入权利要求书的等价意义和范围内的所有变化形式都应当被视为包括在本申请范围内。

Claims (16)

1.一种化合物或其药用盐，所述化合物选自：
((R,S,R,1S,1’S)-((2S,2’S,5S,5’S)-5,5’-(5,5’-([1,1’-联苯]-4,4’-二基)二(1H-咪唑-5,2-二基))二(2-甲基吡咯烷-5,1-二基))二(1-((2R,4R,6S)-2-环丙基-6-甲基四氢-2H-吡喃-4-基)-2-氧代乙烷-2,1-二基))二氨基甲酸二甲酯；
((S,R,R,1S,1’S)-((2S,2’S,5S,5’S)-5,5’-(5,5’-([1,1’-联苯]-4,4’-二基)二(1H-咪唑-5,2-二基))二(2-甲基吡咯烷-5,1-二基))二(1-((2S,4R,6R)-2-环丙基-6-甲基四氢-2H-吡喃-4-基)-2-氧代乙烷-2,1-二基))二氨基甲酸二甲酯；
((S,R,S,1S,1’S)-((2S,2’S,5S,5’S)-5,5’-(5,5’-([1,1’-联苯]-4,4’-二基)二(1H-咪唑-5,2-二基))二(2-甲基吡咯烷-5,1-二基))二(1-((2R,4S,6S)-2-环丙基-6-甲基四氢-2H-吡喃-4-基)-2-氧代乙烷-2,1-二基))二氨基甲酸二甲酯；和
(4,4’-联苯二基二(1H-咪唑-4,2-二基((2S,5S)-5-甲基-2,1-吡咯烷二基)(1-(3-氰基-3-甲基亚环丁基)-2-氧代-2,1-乙烷二基)))二氨基甲酸二甲酯。
2.一种化合物或其药用盐，所述化合物选自：
(4,4’-联苯二基二(1H-咪唑-4,2-二基(3S)-2-氮杂螺[4.4]壬烷-3,2-二基((1S)-1-((2R,6R)-2,6-二甲基四氢-2H-吡喃-4-基)-2-氧代-2,1-乙烷二基)))二氨基甲酸二甲酯；和
(4,4’-联苯二基二(1H-咪唑-4,2-二基((2S,4R)-4-(环丙基甲基)-2,1-吡咯烷二基)((1S)-1-((2R,6R)-2,6-二甲基四氢-2H-吡喃-4-基)-2-氧代-2,1-乙烷二基)))二氨基甲酸二甲酯。
3.一种化合物或其药用盐，所述化合物选自：
(4,4’-联苯二基二(1H-咪唑-5,2-二基((2S,5S)-5-甲基-2,1-吡咯烷二基)((1S)-1-(2-氧杂螺[3.3]庚-6-基)-2-氧代-2,1-乙烷二基)))二氨基甲酸二甲酯；
(4,4’-联苯二基二(1H-咪唑-4,2-二基((2S,5S)-5-甲基-2,1-吡咯烷二基)((1S)-1-((2R,4R,4aS,7aS)-2-甲基八氢环戊并[b]吡喃-4-基)-2-氧代-2,1-乙烷二基)))二氨基甲酸二甲酯；和
(4,4’-联苯二基二(1H-咪唑-4,2-二基((2S,5S)-5-甲基-2,1-吡咯烷二基)((1S)-1-((2R,4S,4aS,7aS)-2-甲基八氢环戊并[b]吡喃-4-基)-2-氧代-2,1-乙烷二基)))二氨基甲酸二甲酯。
4.一种化合物或其药用盐，所述化合物为：
((R,S,S,1S,1’S)-((2S,2’S,5S,5’S)-5,5’-(5,5’-([1,1’-联苯]-4,4’-二基)二(1H-咪唑-5,2-二基))二(2-甲基吡咯烷-5,1-二基))二(1-((2S,4S,6R)-2-环丙基-6-甲基四氢-2H-吡喃-4-基)-2-氧代乙烷-2,1-二基))二氨基甲酸二甲酯。
5.一种组合物，其包含权利要求1的化合物或其药用盐和药用载体。
6.权利要求5的组合物，其还包含至少一种具有抗HCV活性的其它化合物。
7.一种组合物，其包含权利要求2的化合物或其药用盐和药用载体。
8.权利要求7的组合物，其还包含至少一种具有抗HCV活性的其它化合物。
9.一种组合物，其包含权利要求3的化合物或其药用盐和药用载体。
10.权利要求9的组合物，其还包含至少一种具有抗HCV活性的其它化合物。
11.一种组合物，其包含权利要求4的化合物或其药用盐和药用载体。
12.权利要求11的组合物，其还包含至少一种具有抗HCV活性的其它化合物。
13.权利要求1的化合物或其药用盐在制备用于治疗HCV感染的药物中的用途。
14.权利要求2的化合物或其药用盐在制备用于治疗HCV感染的药物中的用途。
15.权利要求3的化合物或其药用盐在制备用于治疗HCV感染的药物中的用途。
16.权利要求4的化合物或其药用盐在制备用于治疗HCV感染的药物中的用途。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9717712B2 (en) 2013-07-02 2017-08-01 Bristol-Myers Squibb Company Combinations comprising tricyclohexadecahexaene derivatives for use in the treatment of hepatitis C virus
JP2016527232A (ja) 2013-07-17 2016-09-08 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ Ｈｃｖの治療に使用するためのビフェニル誘導体を含む組み合わせ
US10617675B2 (en) 2015-08-06 2020-04-14 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
WO2018213140A1 (en) * 2017-05-15 2018-11-22 Zeno Royalties & Milestones, LLC Analgesic compounds
UY39484A (es) 2020-11-02 2022-06-30 Novartis Ag Inhibidores de interleucina-17

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011075439A1 (en) * 2009-12-16 2011-06-23 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis c virus inhibitors
WO2012109080A1 (en) * 2011-02-07 2012-08-16 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis c virus inhibitors

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2003261434A1 (en) 2002-08-12 2004-02-25 Bristol-Myers Squibb Company Iminothiazolidinones as inhibitors of hcv replication
US7894996B2 (en) 2005-02-28 2011-02-22 The Rockefeller University Structure of the hepatitis C NS5A protein
US8329159B2 (en) * 2006-08-11 2012-12-11 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US20110237636A1 (en) * 2009-03-30 2011-09-29 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C Virus Inhibitors
AU2011240808B2 (en) 2010-04-14 2015-01-22 Array Biopharma Inc. 5, 7-substituted-imidazo [1, 2-c] pyrimidines as inhibitors of JAK kinases
US9546160B2 (en) * 2011-05-12 2017-01-17 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011075439A1 (en) * 2009-12-16 2011-06-23 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis c virus inhibitors
WO2012109080A1 (en) * 2011-02-07 2012-08-16 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis c virus inhibitors

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