KR20120107991A - Ｃ형 간염 바이러스 억제제 - Google Patents

Ｃ형 간염 바이러스 억제제 Download PDF

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마코넨 벨레마
제프리 리 로마인
반 엔. 응우옌
간 왕
오마르 디. 로페즈
데니스 알. 생 로랑
퀴 첸
존 에이. 벤더
종 양
피야세나 헤와와삼
닝닝 수
니콜라스 에이. 민웰
존 에이. 이스터
바오-닝 수
미카엘 제이. 스미스
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브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니
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Abstract

본 개시내용은 C형 간염 바이러스 (HCV) 감염의 치료를 위한 화합물, 조성물 및 방법에 관한 것이다. 또한, 이러한 화합물을 함유하는 제약 조성물, 및 HCV 감염의 치료에서의 이들 화합물의 사용 방법이 개시되어 있다.
<화학식 I>

Description

Ｃ형 간염 바이러스 억제제 {HEPATITIS C VIRUS INHIBITORS}
관련 출원에 대한 상호 참조
본원은 2009년 12월 16일자로 출원된 미국 가출원 일련 번호 61/286,942를 우선권 주장한다.
본 개시내용은 일반적으로 항바이러스 화합물에 관한 것이고, 보다 구체적으로는 C형 간염 바이러스 (HCV)에 의해 코딩되는 NS5A 단백질의 기능을 억제할 수 있는 화합물, 이러한 화합물을 포함하는 조성물, 및 NS5A 단백질의 기능을 억제하는 방법에 관한 것이다.
HCV는 전세계적으로 1억 7천만 명 - 인간 면역결핍 바이러스 제1형에 감염된 숫자의 대략 5배가 감염된 것으로 추산되는 주요 인간 병원체이다. 이들 HCV에 감염된 개체 중 높은 비율에서 간경변 및 간세포성 암종을 비롯한 심각한 진행성 간 질환이 발생한다.
PEG화 인터페론 및 리바비린의 조합물을 사용하는, HCV에 대한 치료의 현재 표준은 지속적인 바이러스 반응을 달성함에 있어 최적화되지 않은 성공률을 가지며, 다수의 부작용을 유발한다. 따라서, 상기 충족되지 않은 의학적 필요를 다루기 위해 효과적인 요법을 개발하는 것에 대한 명백한 장기간의 필요성이 있다.
HCV는 양성-가닥 RNA 바이러스이다. 추정되는 아미노산 서열의 비교 및 5' 비번역 영역에서의 광범위한 유사성을 근거로, HCV는 플라비비리다에(Flaviviridae) 과 내의 별도의 속으로서 분류되어 있다. 플라비비리다에 과의 모든 구성원은, 중단되지 않는 단일 오픈 리딩 프레임의 번역을 통해 모든 공지된 바이러스-특이적 단백질을 코딩하는 양성 가닥 RNA 게놈을 함유하는 외피보유 비리온을 갖는다.
교정 능력이 결여된 코딩된 RNA 의존성 RNA 폴리머라제의 높은 오류율로 인해, 상당한 이질성이 HCV 게놈 전체에 걸쳐 뉴클레오티드 및 코딩된 아미노산 서열 내에서 발견된다. 6종 이상의 유전자형이 특징규명되었고, 50종을 초과하는 아형이 전세계적인 분포와 함께 기재되어 있다. HCV의 유전적 이질성의 임상적 의미는 단일요법 치료 동안 돌연변이가 발생하는 경향을 설명하였고, 따라서 사용하기 위한 추가적인 치료 옵션이 요망된다. 발병기전 및 요법에 대한 유전자형의 가능한 조절제 효과는 이해하기 어려운 채로 남아있다.
단일 가닥 HCV RNA 게놈은 길이가 뉴클레오티드 대략 9500개이고, 약 3000개 아미노산의 단일 거대 폴리단백질을 코딩하는 단일 오픈 리딩 프레임 (ORF)을 갖는다. 감염된 세포에서, 상기 폴리단백질은 세포 및 바이러스 프로테아제에 의해 다중 부위에서 절단되어 구조적 및 비-구조적 (NS) 단백질을 생성한다. HCV의 경우에, 성숙한 비-구조적 단백질 (NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A 및 NS5B)의 생성은 2종의 바이러스 프로테아제에 의해 이루어진다. 첫 번째 것은 메탈로프로테아제인 것으로 여겨지며, 이는 NS2-NS3 접합부를 절단하고; 두 번째 것은 NS3의 N-말단 영역 내에 함유된 세린 프로테아제 (본원에서 또한 NS3 프로테아제로도 지칭됨)이며, 이는 NS3-NS4A 절단 부위에서는 시스로, 나머지 NS4A-NS4B, NS4B-NS5A, NS5A-NS5B 부위에 대해서는 트랜스로 NS3의 하류의 모든 후속 절단을 매개한다. NS4A 단백질은, NS3 프로테아제에 대한 보조인자로서 작용하고 NS3 및 다른 바이러스 레플리카제 성분의 막 국재화를 보조함으로써 다중 기능을 수행하는 것으로 보인다. NS3-NS4A 복합체의 형성은, 절단 사건의 단백질분해 효율 상승을 일으키는 적당한 프로테아제 활성을 위해 필요하다. NS3 단백질은 또한 뉴클레오시드 트리포스파타제 및 RNA 헬리카제 활성을 나타낸다. NS5B (본원에서 또한 HCV 폴리머라제로도 지칭됨)는 레플리카제 복합체에서 NS5A를 비롯한 다른 HCV 단백질과 함께 HCV의 복제에 관여하는 RNA-의존성 RNA 폴리머라제이다.
HCV 바이러스 복제를 선택적으로 억제하는, HCV-감염 환자의 치료에 유용한 화합물이 요망된다. 특히, NS5A 단백질의 기능을 억제하는 데 효과적인 화합물이 요망된다. HCV NS5A 단백질은, 예를 들어 하기 참고문헌: [Tan, S.L. et al., Virology, 284:1-12 (2001)]; [Park, K.-J. et al., J. Biol. Chem., 30711-30718 (2003)]; [Tellinghuisen, T.L. et al., Nature, 435:374 (2005)]; [Love, R.A. et al., J. Virol., 83:4395 (2009)]; [Appel, N. et al., J. Biol. Chem., 281:9833 (2006)]; [Huang, L., J. Biol. Chem., 280:36417 (2005)]; WO 2006/093867 (Rice, C. et al.)에 기재되어 있다.
한 측면에서, 본 개시내용은 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
<화학식 I>
Figure pct00001
상기 식에서,
n은 0, 1 또는 2이고;
X는 수소, 알케닐, 시아노, 시클로알킬, (시클로알킬)알킬, 할로 및 헤테로시클릴로부터 선택되고;
R1은 수소 및 할로로부터 선택되고;
R2는 수소, 알케닐, 시아노, 시클로알킬, (시클로알킬)알킬, 할로 및 헤테로시클릴로부터 선택되거나; 또는
R1 및 R2는 이들이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께, 1개의 할로 기로 임의로 치환된 6-원 방향족 고리를 형성하고;
단, X 및 R2 중 적어도 1개는 알케닐, 시아노, 시클로알킬, (시클로알킬)알킬, 할로 및 헤테로시클릴로부터 선택되고;
각각의 R3은 알킬이고, 여기서 알킬은 인접한 탄소 원자와 함께 융합된 3- 또는 4-원 고리, 또는 상기 알킬이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께 스피로시클릭 3- 또는 4-원 고리를 임의로 형성할 수 있고; 여기서 융합된 고리 및 스피로시클릭 고리는 1 또는 2개의 알킬 기로 임의로 치환되고;
각각의 R4는 독립적으로 수소 및 -C(O)R5로부터 선택되고;
각각의 R5는 독립적으로 알콕시, 알킬, 아릴알콕시, 아릴알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 헤테로시클릴알킬, (NRcRd)알케닐 및 (NRcRd)알킬로부터 선택된다.
제1 측면의 제1 실시양태에서, 본 개시내용은 각각의 R5가 독립적으로 알콕시, 헤테로시클릴 및 (NRcRd)알킬로부터 선택되는 것인 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
제1 측면의 제2 실시양태에서, 본 개시내용은 X가 할로인 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다. 제1 측면의 제3 실시양태에서, R2는 할로이다.
제1 측면의 제4 실시양태에서, 본 개시내용은 R1 및 R2가 이들이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께, 1개의 할로 기로 임의로 치환된 6-원 방향족 고리를 형성하는 것인 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
제1 측면의 제5 실시양태에서, 본 개시내용은 X가 수소인 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
제2 측면에서, 본 개시내용은 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 조성물을 제공한다. 제2 측면의 제1 실시양태에서, 조성물은 항-HCV 활성을 갖는 하나 이상의 추가의 화합물을 추가로 포함한다. 제2 측면의 제2 실시양태에서, 추가의 화합물 중 적어도 하나는 인터페론 또는 리바비린이다. 제2 측면의 제3 실시양태에서, 인터페론은 인터페론 알파 2B, PEG화 인터페론 알파, 컨센서스 인터페론, 인터페론 알파 2A 및 림프모구성 인터페론 타우로부터 선택된다.
제2 측면의 제4 실시양태에서, 본 개시내용은 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 제약상 허용되는 담체, 및 항-HCV 활성을 갖는 하나 이상의 추가의 화합물을 포함하며, 여기서 추가의 화합물 중 적어도 하나가 인터류킨 2, 인터류킨 6, 인터류킨 12, 제1형 헬퍼 T 세포 반응의 발생을 증진시키는 화합물, 간섭 RNA, 안티-센스 RNA, 이미퀴모드, 리바비린, 이노신 5'-모노포스페이트 데히드로게나제 억제제, 아만타딘 및 리만타딘으로부터 선택되는 것인 조성물을 제공한다.
제2 측면의 제5 실시양태에서, 본 개시내용은 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 제약상 허용되는 담체, 및 항-HCV 활성을 갖는 하나 이상의 추가의 화합물을 포함하며, 여기서 추가의 화합물 중 적어도 하나가 HCV 감염의 치료를 위해 HCV 메탈로프로테아제, HCV 세린 프로테아제, HCV 폴리머라제, HCV 헬리카제, HCV NS4B 단백질, HCV 진입, HCV 조립, HCV 방출, HCV NS5A 단백질 및 IMPDH로부터 선택된 표적의 기능을 억제하는 데 효과적인 것인 조성물을 제공한다.
제3 측면에서, 본 개시내용은 환자에게 치료 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 환자에서의 HCV 감염의 치료 방법을 제공한다. 제3 측면의 제1 실시양태에서, 상기 방법은 항-HCV 활성을 갖는 하나 이상의 추가의 화합물을 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 투여 전에, 후에 또는 그와 동시에 투여하는 것을 추가로 포함한다. 제3 측면의 제2 실시양태에서, 추가의 화합물 중 적어도 하나는 인터페론 또는 리바비린이다. 제3 측면의 제3 실시양태에서, 인터페론은 인터페론 알파 2B, PEG화 인터페론 알파, 컨센서스 인터페론, 인터페론 알파 2A 및 림프모구성 인터페론 타우로부터 선택된다.
제3 측면의 제4 실시양태에서, 본 개시내용은 환자에게 치료 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하고, 항-HCV 활성을 갖는 하나 이상의 추가의 화합물을 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 투여 전에, 후에 또는 그와 동시에 투여하는 것을 포함하며, 여기서 추가의 화합물 중 적어도 하나가 인터류킨 2, 인터류킨 6, 인터류킨 12, 제1형 헬퍼 T 세포 반응의 발생을 증진시키는 화합물, 간섭 RNA, 안티-센스 RNA, 이미퀴모드, 리바비린, 이노신 5'-모노포스페이트 데히드로게나제 억제제, 아만타딘 및 리만타딘으로부터 선택되는 것인, 환자에서의 HCV 감염의 치료 방법을 제공한다.
제3 측면의 제5 실시양태에서, 본 개시내용은 환자에게 치료 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하고, 항-HCV 활성을 갖는 하나 이상의 추가의 화합물을 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 투여 전에, 후에 또는 그와 동시에 투여하는 것을 포함하며, 여기서 추가의 화합물 중 적어도 하나가 HCV 감염의 치료를 위해 HCV 메탈로프로테아제, HCV 세린 프로테아제, HCV 폴리머라제, HCV 헬리카제, HCV NS4B 단백질, HCV 진입, HCV 조립, HCV 방출, HCV NS5A 단백질 및 IMPDH로부터 선택된 표적의 기능을 억제하는 데 효과적인 것인, 환자에서의 HCV 감염의 치료 방법을 제공한다.
본 개시내용의 다른 측면은 본원에 개시된 실시양태의 적합한 조합을 포함할 수 있다.
또 다른 측면 및 실시양태는 본원에 제공된 설명에서 찾아볼 수 있다.
본원에서 본 개시내용의 설명은 화학 결합의 법칙 및 원칙과 일치하도록 해석하여야 한다. 일부 경우에, 임의의 주어진 위치에 치환기를 수용시키기 위해 수소 원자를 제거하는 것이 필요할 수 있다.
본 개시내용에 포함된 화합물은 제약 작용제로서 사용하기에 적합하게 안정한 것들임을 이해하여야 한다.
분자 내 특정 위치에서의 임의의 치환기 또는 가변기의 정의는 그 분자 내 다른 위치에서의 그의 정의와 독립적인 것으로 의도된다. 예를 들어, R1 및 R2가 둘 다 R4 기를 함유하는 경우에, 2개의 R4 기는 동일하거나 상이할 수 있다.
본 명세서에 인용되는 모든 특허, 특허 출원 및 참고 문헌은 그 전체 내용이 본원에 참조로 포함된다. 불일치되는 경우에, 정의를 비롯하여 본 개시내용이 우선할 것이다.
본 명세서에 사용된 하기 용어는 나타낸 의미를 갖는다:
본원에 사용된 단수 형태는 문맥상 달리 명확하게 지시되지 않는 한, 복수형 언급을 포함한다.
달리 언급되지 않는 한, 본 개시내용의 모든 아릴, 시클로알킬 및 헤테로시클릴 기는 이들 각각의 정의에 각각 기재된 바와 같이 치환될 수 있다. 예를 들어, 아릴알킬 기의 아릴 부분은 용어 "아릴"의 정의에 기재된 바와 같이 치환될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "알케닐"은 1개 이상의 탄소-탄소 이중 결합을 함유하는, 2 내지 6개의 탄소 원자의 직쇄 또는 분지쇄 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "알케닐옥시"는 산소 원자를 통해 모 분자 모이어티에 부착되어 있는 알케닐 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "알케닐옥시카르보닐"은 카르보닐 기를 통해 모 분자 모이어티에 부착되어 있는 알케닐옥시 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "알콕시"는 산소 원자를 통해 모 분자 모이어티에 부착되어 있는 알킬 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "알콕시알킬"은 1, 2 또는 3개의 알콕시 기로 치환된 알킬 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "알콕시알킬카르보닐"은 카르보닐 기를 통해 모 분자 모이어티에 부착되어 있는 알콕시알킬 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "알콕시카르보닐"은 카르보닐 기를 통해 모 분자 모이어티에 부착되어 있는 알콕시 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "알킬"은 1 내지 6개의 탄소 원자를 함유하는 직쇄 또는 분지쇄 포화 탄화수소로부터 유도된 기를 지칭한다. 본 개시내용의 화합물에서, R3이 알킬인 경우에, 알킬은 인접한 탄소 원자와 함께 융합된 3- 또는 4-원 고리를 임의로 형성하여 하기 제시된 구조:
Figure pct00002
(식 중, m은 1 및 2로부터 선택되고, z는 0, 1 또는 2이고, Rs는 알킬임)
를 제공할 수 있거나; 또는
여기서 알킬은 이것이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께 스피로시클릭 3- 또는 4-원 고리를 임의로 형성하여 하기 제시된 구조:
Figure pct00003
(식 중, m은 1 및 2로부터 선택되고, z는 0, 1 또는 2이고, Rs는 알킬임)
를 제공할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "알킬카르보닐"은 카르보닐 기를 통해 모 분자 모이어티에 부착되어 있는 알킬 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "알킬카르보닐옥시"는 산소 원자를 통해 모 분자 모이어티에 부착되어 있는 알킬카르보닐 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "알킬술파닐"은 황 원자를 통해 모 분자 모이어티에 부착되어 있는 알킬 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "알킬술포닐"은 술포닐 기를 통해 모 분자 모이어티에 부착되어 있는 알킬 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "아릴"은 페닐 기, 또는 고리 중 하나 또는 둘 모두가 페닐 기인 비시클릭 융합 고리계를 지칭한다. 비시클릭 융합 고리계는 4- 내지 6-원 방향족 또는 비-방향족 카르보시클릭 고리에 융합된 페닐 기로 이루어진다. 본 개시내용의 아릴 기는 기 내의 임의의 치환가능한 탄소 원자를 통해 모 분자 모이어티에 부착될 수 있다. 아릴 기의 대표적인 예는 인다닐, 인데닐, 나프틸, 페닐 및 테트라히드로나프틸을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 본 개시내용의 아릴 기는 알케닐, 알콕시, 알콕시알킬, 알콕시카르보닐, 알킬, 알킬카르보닐, 제2 아릴 기, 아릴알콕시, 아릴알킬, 아릴카르보닐, 시아노, 할로, 할로알콕시, 할로알킬, 헤테로시클릴, 헤테로시클릴알킬, 헤테로시클릴카르보닐, 히드록시, 히드록시알킬, 니트로, -NRxRy, (NRxRy)알킬, 옥소 및 -P(O)OR2 (여기서, 각각의 R은 독립적으로 수소 및 알킬로부터 선택됨)로부터 독립적으로 선택된 1, 2, 3, 4 또는 5개의 치환기로 임의로 치환되며; 여기서 아릴알킬 및 헤테로시클릴알킬의 알킬 부분은 비치환되고, 제2 아릴 기, 아릴알킬의 아릴 부분, 아릴카르보닐의 아릴 부분, 헤테로시클릴, 및 헤테로시클릴알킬 및 헤테로시클릴카르보닐의 헤테로시클릴 부분은 알콕시, 알킬, 시아노, 할로, 할로알콕시, 할로알킬 및 니트로로부터 독립적으로 선택된 1, 2 또는 3개의 치환기로 임의로 추가 치환된다.
본원에 사용된 용어 "아릴알콕시"는 알콕시 기를 통해 모 분자 모이어티에 부착되어 있는 아릴 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "아릴알콕시카르보닐"은 카르보닐 기를 통해 모 분자 모이어티에 부착되어 있는 아릴알콕시 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "아릴알킬"은 1, 2 또는 3개의 아릴 기로 치환된 알킬 기를 지칭한다. 아릴알킬의 알킬 부분은 알콕시, 알킬카르보닐옥시, 할로, 할로알콕시, 할로알킬, 헤테로시클릴, 히드록시 및 -NRcRd로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 추가 기로 임의로 추가 치환되며, 여기서 헤테로시클릴은 알콕시, 알킬, 비치환된 아릴, 비치환된 아릴알콕시, 비치환된 아릴알콕시카르보닐, 할로, 할로알콕시, 할로알킬, 히드록시, -NRxRy 및 옥소로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 치환기로 임의로 추가 치환된다.
본원에 사용된 용어 "아릴알킬카르보닐"은 카르보닐 기를 통해 모 분자 모이어티에 부착되어 있는 아릴알킬 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "아릴카르보닐"은 카르보닐 기를 통해 모 분자 모이어티에 부착되어 있는 아릴 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "아릴옥시"는 산소 원자를 통해 모 분자 모이어티에 부착되어 있는 아릴 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "아릴옥시카르보닐"은 카르보닐 기를 통해 모 분자 모이어티에 부착되어 있는 아릴옥시 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "아릴술포닐"은 술포닐 기를 통해 모 분자 모이어티에 부착되어 있는 아릴 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "카르보닐"은 -C(O)-를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "카르복시"는 -CO2H를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "시아노"는 -CN을 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "시클로알킬"은 3 내지 7개의 탄소 원자 및 0개의 헤테로원자를 갖는 포화 모노시클릭 탄화수소 고리계를 지칭한다. 시클로알킬 기의 대표적인 예는 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸 및 시클로헥실을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 본 개시내용의 시클로알킬 기는 알콕시, 알킬, 아릴, 시아노, 할로, 할로알콕시, 할로알킬, 헤테로시클릴, 히드록시, 히드록시알킬, 니트로 및 -NRxRy로부터 독립적으로 선택된 1, 2, 3, 4 또는 5개의 치환기로 임의로 치환되며, 여기서 아릴 및 헤테로시클릴은 알콕시, 알킬, 시아노, 할로, 할로알콕시, 할로알킬, 히드록시 및 니트로로부터 독립적으로 선택된 1, 2 또는 3개의 치환기로 임의로 추가 치환된다.
본원에 사용된 용어 "(시클로알킬)알킬"은 1, 2 또는 3개의 시클로알킬 기로 치환된 알킬 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "시클로알킬옥시"는 산소 원자를 통해 모 분자 모이어티에 부착되어 있는 시클로알킬 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "시클로알킬옥시카르보닐"은 카르보닐 기를 통해 모 분자 모이어티에 부착되어 있는 시클로알킬옥시 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "시클로알킬술포닐"은 술포닐 기를 통해 모 분자 모이어티에 부착되어 있는 시클로알킬 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "포르밀"은 -CHO를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "할로"는 Cl, Br, F 또는 I를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "할로알콕시"는 산소 원자를 통해 모 분자 모이어티에 부착되어 있는 할로알킬 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "할로알콕시카르보닐"은 카르보닐 기를 통해 모 분자 모이어티에 부착되어 있는 할로알콕시 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "할로알킬"은 1, 2, 3 또는 4개의 할로겐 원자로 치환된 알킬 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "헤테로시클릴"은 질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택된 1, 2, 3 또는 4개의 헤테로원자를 함유하는 4-, 5-, 6- 또는 7-원 고리를 지칭한다. 4-원 고리는 0개의 이중 결합을 갖고, 5-원 고리는 0 내지 2개의 이중 결합을 갖고, 6- 및 7-원 고리는 0 내지 3개의 이중 결합을 갖는다. 용어 "헤테로시클릴"은 또한, 헤테로시클릴 고리가 또 다른 모노시클릭 헤테로시클릴 기, 또는 4- 내지 6-원 방향족 또는 비-방향족 카르보시클릭 고리에 융합되어 있는 것인 비시클릭 기; 뿐만 아니라, 가교된 비시클릭 기, 예컨대 7-아자비시클로[2.2.1]헵트-7-일, 2-아자비시클로[2.2.2]옥트-2-일, 2,5-디아자비시클로[2.2.1]헵탄-2-일 및 2-아자비시클로[2.2.2]옥트-3-일을 포함한다. 본 개시내용의 헤테로시클릴 기는 기 내의 임의의 탄소 원자 또는 질소 원자를 통해 모 분자 모이어티에 부착될 수 있다. 헤테로시클릴 기의 예는 벤조티에닐, 푸릴, 이미다졸릴, 인돌리닐, 인돌릴, 이소퀴놀리닐, 이소티아졸릴, 이속사졸릴, 모르폴리닐, 옥사졸릴, 옥세타닐, 피페라지닐, 피페리디닐, 피라졸릴, 피리디닐, 피롤리디닐, 피롤로피리디닐, 피롤릴, 퀴놀리닐, 테트라히드로푸라닐, 테트라히드로피라닐, 티아졸릴, 티에닐 및 티오모르폴리닐을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 본 개시내용의 헤테로시클릴 기는 알케닐, 알콕시, 알콕시알킬, 알콕시카르보닐, 알킬, 알킬카르보닐, 아릴, 아릴알콕시카르보닐, 아릴알킬, 아릴카르보닐, 시아노, 할로, 할로알콕시, 할로알킬, 제2 헤테로시클릴 기, 헤테로시클릴알킬, 헤테로시클릴카르보닐, 히드록시, 히드록시알킬, 니트로, -NRxRy, (NRxRy)알킬 및 옥소로부터 독립적으로 선택된 1, 2, 3, 4 또는 5개의 치환기로 임의로 치환되며, 여기서 아릴알킬 및 헤테로시클릴알킬의 알킬 부분은 비치환되고, 아릴, 아릴알킬의 아릴 부분, 아릴카르보닐의 아릴 부분, 제2 헤테로시클릴 기, 및 헤테로시클릴알킬 및 헤테로시클릴카르보닐의 헤테로시클릴 부분은 알콕시, 알킬, 시아노, 할로, 할로알콕시, 할로알킬 및 니트로로부터 독립적으로 선택된 1, 2 또는 3개의 치환기로 임의로 추가 치환된다.
본원에 사용된 용어 "헤테로시클릴알콕시"는 알콕시 기를 통해 모 분자 모이어티에 부착되어 있는 헤테로시클릴 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "헤테로시클릴알콕시카르보닐"은 카르보닐 기를 통해 모 분자 모이어티에 부착되어 있는 헤테로시클릴알콕시 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "헤테로시클릴알킬"은 1, 2 또는 3개의 헤테로시클릴 기로 치환된 알킬 기를 지칭한다. 헤테로시클릴알킬의 알킬 부분은 알콕시, 알킬카르보닐옥시, 아릴, 할로, 할로알콕시, 할로알킬, 히드록시 및 -NRcRd로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 추가 기로 임의로 추가 치환되며, 여기서 아릴은 알콕시, 알킬, 비치환된 아릴, 비치환된 아릴알콕시, 비치환된 아릴알콕시카르보닐, 할로, 할로알콕시, 할로알킬, 히드록시 및 -NRxRy로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 치환기로 임의로 추가 치환된다.
본원에 사용된 용어 "헤테로시클릴알킬카르보닐"은 카르보닐 기를 통해 모 분자 모이어티에 부착되어 있는 헤테로시클릴알킬 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "헤테로시클릴카르보닐"은 카르보닐 기를 통해 모 분자 모이어티에 부착되어 있는 헤테로시클릴 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "헤테로시클릴옥시"는 산소 원자를 통해 모 분자 모이어티에 부착되어 있는 헤테로시클릴 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "헤테로시클릴옥시카르보닐"은 카르보닐 기를 통해 모 분자 모이어티에 부착되어 있는 헤테로시클릴옥시 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "히드록시"는 -OH를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "히드록시알킬"은 1, 2 또는 3개의 히드록시 기로 치환된 알킬 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "히드록시알킬카르보닐"은 카르보닐 기를 통해 모 분자 모이어티에 부착되어 있는 히드록시알킬 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "니트로"는 -NO2를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "-NRcRd"는 질소 원자를 통해 모 분자 모이어티에 부착되어 있는 2개의 기 Rc 및 Rd를 지칭한다. Rc 및 Rd는 독립적으로 수소, 알케닐옥시카르보닐, 알콕시알킬카르보닐, 알콕시카르보닐, 알킬, 알킬카르보닐, 알킬술포닐, 아릴, 아릴알콕시카르보닐, 아릴알킬, 아릴알킬카르보닐, 아릴카르보닐, 아릴옥시카르보닐, 아릴술포닐, 시클로알킬, 시클로알킬옥시, 시클로알킬옥시카르보닐, 시클로알킬술포닐, 포르밀, 할로알콕시카르보닐, 헤테로시클릴, 헤테로시클릴알콕시카르보닐, 헤테로시클릴알킬, 헤테로시클릴알킬카르보닐, 헤테로시클릴카르보닐, 헤테로시클릴옥시카르보닐, 히드록시알킬카르보닐, (NReRf)알킬, (NReRf)알킬카르보닐, (NReRf)카르보닐, (NReRf)술포닐, -C(NCN)OR' 및 -C(NCN)NRxRy로부터 선택되며, 여기서 R'는 알킬 및 비치환된 페닐로부터 선택되고, 아릴알킬, 아릴알킬카르보닐, 헤테로시클릴알킬 및 헤테로시클릴알킬카르보닐의 알킬 부분은 1개의 -NReRf 기로 임의로 추가 치환되고; 아릴, 아릴알콕시카르보닐, 아릴알킬, 아릴알킬카르보닐, 아릴카르보닐, 아릴옥시카르보닐 및 아릴술포닐의 아릴 부분, 헤테로시클릴, 및 헤테로시클릴알콕시카르보닐, 헤테로시클릴알킬, 헤테로시클릴알킬카르보닐, 헤테로시클릴카르보닐 및 헤테로시클릴옥시카르보닐의 헤테로시클릴 부분은 알콕시, 알킬, 시아노, 할로, 할로알콕시, 할로알킬 및 니트로로부터 독립적으로 선택된 1, 2 또는 3개의 치환기로 임의로 추가 치환된다.
본원에 사용된 용어 "(NRcRd)알케닐"은
Figure pct00004
(식 중, Rc 및 Rd는 본원에 정의된 바와 같고, 각각의 Rq는 독립적으로 수소 또는 C1 -3 알킬임)를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "(NRcRd)알킬"은 1, 2 또는 3개의 -NRcRd 기로 치환된 알킬 기를 지칭한다. (NRcRd)알킬의 알킬 부분은 알콕시, 알콕시알킬카르보닐, 알콕시카르보닐, 알킬술파닐, 아릴알콕시카르보닐, 카르복시, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 헤테로시클릴카르보닐, 히드록시 및 (NReRf)카르보닐로부터 선택된 1 또는 2개의 추가 기로 임의로 추가 치환되며; 여기서 헤테로시클릴은 알콕시, 알킬, 시아노, 할로, 할로알콕시, 할로알킬 및 니트로로부터 독립적으로 선택된 1, 2, 3, 4 또는 5개의 치환기로 임의로 추가 치환된다.
본원에 사용된 용어 "-NReRf"는 질소 원자를 통해 모 분자 모이어티에 부착되어 있는 2개의 기 Re 및 Rf를 지칭한다. Re 및 Rf는 독립적으로 수소, 알킬, 비치환된 아릴, 비치환된 아릴알킬, 비치환된 시클로알킬, 비치환된 (시클로알킬)알킬, 비치환된 헤테로시클릴, 비치환된 헤테로시클릴알킬, (NRxRy)알킬 및 (NRxRy)카르보닐로부터 선택된다.
본원에 사용된 용어 "(NReRf)알킬"은 1, 2 또는 3개의 -NReRf 기로 치환된 알킬 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "(NReRf)알킬카르보닐"은 카르보닐 기를 통해 모 분자 모이어티에 부착되어 있는 (NReRf)알킬 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "(NReRf)카르보닐"은 카르보닐 기를 통해 모 분자 모이어티에 부착되어 있는 -NReRf 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "(NReRf)술포닐"은 술포닐 기를 통해 모 분자 모이어티에 부착되어 있는 -NReRf 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "-NRxRy"는 질소 원자를 통해 모 분자 모이어티에 부착되어 있는 2개의 기 Rx 및 Ry를 지칭한다. Rx 및 Ry는 독립적으로 수소, 알콕시카르보닐, 알킬, 알킬카르보닐, 비치환된 아릴, 비치환된 아릴알콕시카르보닐, 비치환된 아릴알킬, 비치환된 시클로알킬, 비치환된 헤테로시클릴 및 (NRx'Ry')카르보닐로부터 선택되며, 여기서 Rx' 및 Ry'는 독립적으로 수소 및 알킬로부터 선택된다.
본원에 사용된 용어 "(NRxRy)알킬"은 1, 2 또는 3개의 -NRxRy 기로 치환된 알킬 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "(NRxRy)카르보닐"은 카르보닐 기를 통해 모 분자 모이어티에 부착되어 있는 -NRxRy 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "-NRxRy"는 질소 원자를 통해 모 분자 모이어티에 부착되어 있는 2개의 기 Rx 및 Ry를 지칭한다. Rx 및 Ry는 독립적으로 수소 및 알킬로부터 선택된다.
본원에 사용된 용어 "(NRx'Ry')카르보닐"은 카르보닐 기를 통해 모 분자 모이어티에 부착되어 있는 -NRx'Ry' 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "옥소"는 =O를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "술포닐"은 -SO2-를 지칭한다.
비대칭 중심이 본 개시내용의 화합물에 존재한다. 이들 중심은 키랄 탄소 원자 주위의 치환기의 배위에 따라 기호 "R" 또는 "S"로 표시된다. 본 개시내용은 NS5A를 억제하는 능력을 갖는, 모든 입체화학적 이성질체 형태 또는 그의 혼합물을 포함하는 것으로 이해하여야 한다. 화합물의 개별 입체이성질체는 키랄 중심을 함유하는 상업적으로 입수가능한 출발 물질로부터 합성하여 제조할 수 있거나, 또는 거울상이성질체 생성물의 혼합물의 제조에 이은 분리, 예컨대 부분입체이성질체의 혼합물로의 전환에 이은 분리 또는 재결정화, 크로마토그래피 기술에 의하거나, 또는 키랄 크로마토그래피 칼럼 상에서 거울상이성질체를 직접 분리함으로써 제조할 수 있다. 특정 입체화학의 출발 화합물은 상업적으로 입수가능하거나, 또는 당업계에 공지된 기술에 의해 제조 및 분할할 수 있다.
본 개시내용의 특정 화합물은 또한, 분리가능할 수 있는 상이한 안정한 입체구조 형태로 존재할 수 있다. 예를 들어 입체 장애 또는 고리 변형 때문인, 비대칭 단일 결합 주변의 제한된 회전으로 인한 비틀림 비대칭은 상이한 이형태체의 분리를 가능케 할 수 있다. 본 개시내용은 이들 화합물의 각각의 형태 이성질체 및 그의 혼합물을 포함한다.
본 개시내용의 화합물은 또한 호변이성질체로서 존재하며; 따라서 본 개시내용은 모든 호변이성질체 형태도 또한 포함한다.
용어 "본 개시내용의 화합물" 및 등가의 표현은 화학식 I의 화합물, 및 그의 제약상 허용되는 거울상이성질체, 부분입체이성질체 및 염을 포함하도록 의도된다. 유사하게, 중간체에 대한 언급은 문맥상 허용되는 경우에 그의 염을 포함하도록 의도된다.
본 개시내용은 본 발명의 화합물에서 발생하는 원자의 모든 동위원소를 포함하도록 의도된다. 동위원소는 동일한 원자 번호를 갖되 상이한 질량수를 갖는 원자를 포함한다. 일반적인 예로서 비제한적으로, 수소의 동위원소는 중수소 및 삼중수소를 포함한다. 탄소의 동위원소는 13C 및 14C를 포함한다. 동위원소-표지된 본 발명의 화합물은 일반적으로 당업자에게 공지된 통상의 기술 또는 본원에 기재된 것과 유사한 방법에 의해, 달리 사용되는 표지되지 않은 시약 대신에 적절한 동위원소-표지된 시약을 사용하여 제조할 수 있다. 이러한 화합물은 다양한 잠재적 용도, 예를 들어 생물학적 활성의 측정에서의 표준물 및 시약으로서의 용도를 가질 수 있다. 안정한 동위원소의 경우에, 이러한 화합물은 생물학적, 약리학적 또는 약동학적 특성을 유리하게 변경하는 잠재력을 가질 수 있다.
본 개시내용의 화합물은 제약상 허용되는 염으로서 존재할 수 있다. 본원에 사용된 용어 "제약상 허용되는 염"은 합리적인 의학적 판단의 범위 내에서, 합당한 유익/유해 비율에 적합하도록, 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응, 또는 다른 문제점 또는 합병증 없이 환자의 조직과 접촉시켜 사용하기에 적합하고, 그의 의도되는 용도에 대해 효과적인, 수용성 또는 유용성이거나, 또는 수분산성 또는 유분산성인 본 개시내용의 화합물의 염 또는 쯔비터이온 형태를 나타낸다. 상기 염은 화합물의 최종 단리 및 정제 동안 제조할 수 있거나, 또는 적합한 질소 원자를 적합한 산과 반응시켜 별도로 제조할 수 있다. 대표적인 산 부가염은 아세테이트, 아디페이트, 알기네이트, 시트레이트, 아스파르테이트, 벤조에이트, 벤젠술포네이트, 비술페이트, 부티레이트, 캄포레이트, 캄포르술포네이트; 디글루코네이트, 글리세로포스페이트, 헤미술페이트, 헵타노에이트, 헥사노에이트, 포르메이트, 푸마레이트, 히드로클로라이드, 히드로브로마이드, 히드로아이오다이드, 2-히드록시에탄술포네이트, 락테이트, 말레에이트, 메시틸렌술포네이트, 메탄술포네이트, 나프틸렌술포네이트, 니코티네이트, 2-나프탈렌술포네이트, 옥살레이트, 팔모에이트, 펙티네이트, 퍼술페이트, 3-페닐프로프리오네이트, 피크레이트, 피발레이트, 프로피오네이트, 숙시네이트, 타르트레이트, 트리클로로아세테이트, 트리플루오로아세테이트, 포스페이트, 글루타메이트, 비카르보네이트, 파라-톨루엔술포네이트 및 운데카노에이트를 포함한다. 제약상 허용되는 부가염을 형성하는 데 사용될 수 있는 산의 예는 무기 산, 예컨대 염산, 브롬화수소산, 황산 및 인산, 및 유기 산, 예컨대 옥살산, 말레산, 숙신산 및 시트르산을 포함한다.
염기성 부가염은 화합물의 최종 단리 및 정제 동안 카르복시 기를 적합한 염기, 예컨대 금속 양이온의 수산화물, 탄산염 또는 중탄산염, 또는 암모니아, 또는 1급, 2급 또는 3급 유기 아민과 반응시켜 제조할 수 있다. 제약상 허용되는 염의 양이온은 리튬, 나트륨, 칼륨, 칼슘, 마그네슘 및 알루미늄, 뿐만 아니라 비독성 아민 양이온, 예컨대 암모늄, 테트라메틸암모늄, 테트라에틸암모늄, 메틸아민, 디메틸아민, 트리메틸아민, 트리에틸아민, 디에틸아민, 에틸아민, 트리부틸아민, 피리딘, N,N-디메틸아닐린, N-메틸피페리딘, N-메틸모르폴린, 디시클로헥실아민, 프로카인, 디벤질아민, N,N-디벤질페네틸아민 및 N,N'-디벤질에틸렌디아민을 포함한다. 염기 부가염의 형성에 유용한 다른 대표적인 유기 아민은 에틸렌디아민, 에탄올아민, 디에탄올아민, 피페리딘 및 피페라진을 포함한다.
요법에서 사용하기 위해, 치료 유효량의 화학식 I의 화합물, 뿐만 아니라 그의 제약상 허용되는 염을 정제되지 않은 화학물질로서 투여하는 것이 가능한 경우에, 활성 성분을 제약 조성물로서 제공하는 것이 가능하다. 따라서, 본 개시내용은 치료 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 하나 이상의 제약상 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물을 추가로 제공한다. 본원에 사용된 용어 "치료 유효량"은 의미있는 환자 이익, 예를 들어 바이러스 부하의 지속적인 감소를 나타내기에 충분한 각 활성 성분의 총량을 지칭한다. 단독으로 투여되는 개별적인 활성 성분에 적용되는 경우에, 상기 용어는 그 성분 단독의 양을 지칭한다. 조합물에 적용되는 경우에, 상기 용어는 조합으로, 순차적으로 또는 동시에 투여되든지에 상관없이, 치료 효과를 일으키는 활성 성분들의 총량을 지칭한다. 화학식 I의 화합물 및 그의 제약상 허용되는 염은 상기 기재된 바와 같다. 담체(들), 희석제(들) 또는 부형제(들)은 제제의 다른 성분과 상용성이고 그의 수용자에게 유해하지 않다는 관점에서 허용가능해야 한다. 본 개시내용의 또 다른 측면에 따라, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 하나 이상의 제약상 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제와 혼합하는 것을 포함하는, 제약 제제의 제조 방법이 또한 제공된다. 본원에 사용된 용어 "제약상 허용되는"은 합리적인 의학적 판단의 범위 내에서, 합당한 유익/유해 비율에 적합하도록, 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응, 또는 다른 문제점 또는 합병증 없이 환자의 조직과 접촉시켜 사용하기에 적합하고, 그의 의도되는 용도에 대해 효과적인 화합물, 물질, 조성물 및/또는 투여 형태를 지칭한다.
제약 제제는 단위 용량당 소정량의 활성 성분을 함유하는 단위 투여 형태로 제공될 수 있다. 일일 체중 1 kg당 약 0.01 내지 약 250 mg ("mg/kg"), 바람직하게는 일일 약 0.05 내지 약 100 mg/kg (체중)의 본 개시내용의 화합물의 투여량 수준이, HCV 매개 질환의 예방 및 치료를 위한 단일요법에서 전형적이다. 전형적으로, 본 개시내용의 제약 조성물은 일일 약 1회 내지 약 5회, 또는 대안적으로 연속 주입으로서 투여될 것이다. 이러한 투여는 장기 또는 단기 요법으로서 이용될 수 있다. 단일 투여 형태를 제조하기 위해 담체 물질과 조합될 수 있는 활성 성분의 양은 치료될 상태, 상태의 중증도, 투여 시간, 투여 경로, 사용되는 화합물의 분비 속도, 치료의 지속기간, 및 환자의 연령, 성별, 체중 및 상태에 따라 달라질 것이다. 바람직한 단위 투여 제제는 본원에서 상기 언급된 바와 같은 일일 용량 또는 하위-용량, 또는 그의 적절한 분율의 활성 성분을 함유하는 것이다. 일반적으로, 치료는 화합물의 최적 용량보다 실질적으로 적은 투여량으로 개시된다. 이어서, 투여량은 해당 상황 하에서의 최적 효과가 달성될 때까지 작은 증분으로 증가된다. 일반적으로, 화합물을 일반적으로 어떠한 해롭거나 유해한 부작용도 유발하지 않으면서 항-바이러스적으로 효과적인 결과를 도출할 농도 수준으로 투여하는 것이 가장 바람직하다.
본 개시내용의 조성물이 본 개시내용의 화합물 및 하나 이상의 추가 치료제 또는 예방제의 조합물을 포함하는 경우에, 화합물 및 추가 작용제는 둘 다 통상적으로, 단독치료 요법으로 보통 투여되는 투여량의 약 10 내지 150％, 보다 바람직하게는 약 10 내지 80％의 투여량 수준으로 존재한다.
제약 제제는 임의의 적절한 경로, 예를 들어 경구 (협측 또는 설하 포함), 직장, 비내, 국소 (협측, 설하 또는 경피 포함), 질 또는 비경구 (피하, 피내, 근육내, 관절내, 활막내, 흉골내, 수막강내, 병변내, 정맥내 또는 진피내 주사 또는 주입 포함) 경로에 의한 투여에 적합화시킬 수 있다. 이러한 제제는 제약 분야에 공지된 임의의 방법에 의해, 예를 들어 활성 성분을 담체(들) 또는 부형제(들)와 회합시켜 제조할 수 있다. 경구 투여 또는 주사에 의한 투여가 바람직하다.
경구 투여에 적합화된 제약 제제는 개별 단위, 예컨대 캡슐 또는 정제; 분말 또는 과립; 수성 또는 비-수성 액체 중의 용액 또는 현탁액; 식용 폼(foam) 또는 휩(whip); 또는 수중유 액체 에멀젼 또는 유중수 에멀젼으로서 존재할 수 있다.
예를 들어, 정제 또는 캡슐 형태로의 경구 투여를 위해, 활성 약물 성분은 제약상 허용되는 비독성의 경구용 불활성 담체, 예컨대 에탄올, 글리세롤, 물 등과 조합될 수 있다. 분말은, 화합물을 적합하게 미세한 크기로 분쇄하고, 유사하게 분쇄된 제약 담체, 예컨대 식용 탄수화물 (예를 들어, 전분 또는 만니톨로서)과 혼합하여 제조한다. 향미제, 보존제, 분산화제 및 착색제가 또한 존재할 수 있다.
캡슐은 상기 기재된 바와 같이 분말 혼합물을 제조하고, 형성된 젤라틴 외피에 충전시켜 제조한다. 충전 작업 전에, 활택제 및 윤활제, 예컨대 콜로이드 실리카, 활석, 스테아르산마그네슘, 스테아르산칼슘 또는 고체 폴리에틸렌 글리콜을 분말 혼합물에 첨가할 수 있다. 붕해제 또는 가용화제, 예컨대 한천-한천, 탄산칼슘 또는 탄산나트륨을 또한 첨가하여 캡슐을 복용했을 때 의약의 이용률을 개선시킬 수 있다.
추가로, 바람직하거나 필요한 경우에, 적합한 결합제, 윤활제, 붕해제 및 착색제가 또한 혼합물 내로 혼입될 수 있다. 적합한 결합제는 전분, 젤라틴, 천연 당, 예컨대 글루코스 또는 베타-락토스, 옥수수 감미제, 천연 및 합성 검, 예컨대 아카시아, 트라가칸트 또는 알긴산나트륨, 카르복시메틸셀룰로스, 폴리에틸렌 글리콜 등을 포함한다. 이들 투여 형태에 사용되는 윤활제는 올레산나트륨, 염화나트륨 등을 포함한다. 붕해제는 전분, 메틸 셀룰로스, 한천, 벤토나이트, 크산탄 검 등을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 정제는, 예를 들어 분말 혼합물을 제조하고, 과립화하거나 슬러그화하고, 윤활제 및 붕해제를 첨가하고, 정제로 압착함으로써 제제화된다. 분말 혼합물은 적합하게 분쇄된 화합물을 상기 기재된 바와 같은 희석제 또는 베이스, 및 임의로 결합제, 예컨대 카르복시메틸셀룰로스, 알기네이트, 젤라틴 또는 폴리비닐 피롤리돈, 용해 지연제, 예컨대 파라핀, 재흡수 촉진제, 예컨대 4급 염 및/또는 흡수제, 예컨대 벤토나이트, 카올린 또는 인산이칼슘과 혼합하여 제조한다. 분말 혼합물은 결합제, 예컨대 시럽, 전분 페이스트, 아카디아 점액, 또는 셀룰로스 또는 중합체 물질의 용액으로 습윤화시키고, 스크린을 통해 통과시켜 과립화할 수 있다. 과립화에 대한 대안으로, 분말 혼합물을 타정기에 통과시킬 수 있으며, 그 결과물은 과립으로 부수어지는 불완전하게 형성된 슬러그이다. 정제 형성 틀에 점착되는 것을 방지하기 위해, 스테아르산, 스테아레이트 염, 활석 또는 미네랄 오일을 첨가함으로써 과립을 윤활시킬 수 있다. 이어서, 윤활된 혼합물을 정제로 압착한다. 본 개시내용의 화합물은 또한, 불활성의 자유 유동 담체와 조합하여, 과립화 또는 슬러그화 단계를 거치지 않고 정제로 직접 압착시킬 수 있다. 쉘락의 밀봉 코팅, 당 또는 중합체 물질의 코팅, 및 왁스의 연마 코팅으로 이루어지는 투명 또는 불투명 보호 코팅이 제공될 수 있다. 상이한 단위 투여형과 구별하기 위해서 이들 코팅에 염료를 첨가할 수 있다.
용액, 시럽 및 엘릭시르와 같은 경구용 유동액은 주어진 양에 소정량의 화합물이 함유되어 있는 투여 단위 형태로 제조할 수 있다. 시럽은 적합하게 가미된 수용액에 화합물을 용해시켜 제조할 수 있는 반면, 엘릭시르는 비독성 비히클의 사용을 통해 제조한다. 가용화제 및 유화제, 예컨대 에톡실화 이소스테아릴 알콜 및 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에테르, 보존제, 향미 첨가제, 예컨대 페퍼민트 오일 또는 천연 감미제, 또는 사카린 또는 기타 인공 감미제 등이 또한 첨가될 수 있다.
적절한 경우에, 경구 투여용 투여 단위 제제는 마이크로캡슐화될 수 있다. 제제는 또한, 예를 들어 미립자 물질을 중합체, 왁스 등으로 코팅하거나 이에 포매시킴으로써 방출이 연장 또는 지속되도록 제조할 수 있다.
화학식 I의 화합물 및 그의 제약상 허용되는 염은 또한 리포좀 전달 시스템, 예컨대 소형 단층 소포, 대형 단층 소포 및 다층 소포의 형태로 투여될 수 있다. 리포좀은 다양한 인지질, 예컨대 콜레스테롤, 스테아릴아민 또는 포스파티딜콜린으로부터 형성될 수 있다.
화학식 I의 화합물 및 그의 제약상 허용되는 염은 또한, 화합물 분자가 커플링된 개별 담체로서의 모노클로날 항체를 사용함으로써 전달될 수 있다. 화합물은 또한, 표적화될 수 있는 약물 담체로서의 가용성 중합체와 커플링될 수 있다. 이러한 중합체는 폴리비닐피롤리돈, 피란 공중합체, 폴리히드록시프로필메타크릴아미드페놀, 폴리히드록시에틸아스파르트아미드페놀, 또는 팔리토일 잔기로 치환된 폴리에틸렌옥시드폴리리신을 포함할 수 있다. 더욱이, 화합물은 약물의 제어 방출을 달성하는 데 유용한 생분해성 중합체 부류, 예를 들어 폴리락트산, 폴렙실론 카프로락톤, 폴리히드록시 부티르산, 폴리오르토에스테르, 폴리아세탈, 폴리디히드로피란, 폴리시아노아크릴레이트, 및 히드로겔의 가교되거나 또는 양친매성의 블록 공중합체에 커플링될 수 있다.
경피 투여에 적합화된 제약 제제는 연장된 기간 동안 수용자의 상피와 밀접하게 접촉된 채 유지되도록 의도된 별개의 패치로서 제공될 수 있다. 예를 들어, 활성 성분은 문헌 [Pharmaceutical Research, 3(6):318 (1986)]에 개괄적으로 기재된 바와 같이 이온영동법에 의해 패치로부터 전달될 수 있다.
국소 투여에 적합화된 제약 제제는 연고, 크림, 현탁액, 로션, 분말, 용액, 페이스트, 겔, 스프레이, 에어로졸 또는 오일로서 제제화될 수 있다.
눈 또는 다른 외부 조직, 예를 들어 입 및 피부의 치료를 위해, 제제는 바람직하게는 국소 연고 또는 크림으로 도포된다. 연고로 제제화되는 경우에, 활성 성분은 파라핀계 또는 수혼화성 연고 베이스와 함께 사용될 수 있다. 대안적으로, 활성 성분은 수중유 크림 베이스 또는 유중수 베이스를 사용하여 크림으로 제제화될 수 있다.
눈에 국소 투여하기에 적합화된 제약 제제는, 활성 성분이 적합한 담체, 특히 수성 용매 중에 용해 또는 현탁되어 있는 점안제를 포함한다.
입에 국소 투여하기에 적합화된 제약 조성물은 로젠지, 파스틸 및 구강 세정제를 포함한다.
직장 투여에 적합화된 제약 제제는 좌제 또는 관장제로서 제공될 수 있다.
담체가 고체인 비내 투여에 적합화된 제약 제제는 코로 들이쉬는 방식으로, 즉, 코에 밀착시켜 유지한 분말 용기로부터 비도를 통해 빠르게 흡입함으로써 투여되는, 예를 들어 20 내지 500 마이크로미터의 입자 크기를 갖는 조 분말을 포함한다. 비내 스프레이 또는 점비제로서 투여하기 위한, 담체가 액체인 적합한 제제는 활성 성분의 수용액 또는 오일 용액을 포함한다.
흡입에 의한 투여에 적합화된 제약 제제는 다양한 유형의 계량식 용량 가압 에어로졸, 분무기 또는 취입기에 의해 생성될 수 있는 미세한 입자 분진 또는 미스트를 포함한다.
질내 투여에 적합화된 제약 제제는 페사리, 탐폰, 크림, 겔, 페이스트, 폼 또는 스프레이 제제로서 제공될 수 있다.
비경구 투여에 적합화된 제약 제제는 항산화제, 완충제, 정균제, 및 제제가 의도된 수용자의 혈액과 등장성이 되도록 하는 용질을 함유할 수 있는 수성 및 비-수성 멸균 주사 용액; 및 현탁화제 및 증점제를 포함할 수 있는 수성 및 비-수성 멸균 현탁액을 포함한다. 상기 제제는 단위-용량 또는 다중-용량 용기, 예를 들어 밀봉된 앰플 및 바이알로 제공될 수 있고, 사용 직전에 단지 멸균된 액체 담체, 예를 들어 주사용수의 첨가만을 필요로 하는 냉동-건조 (동결건조) 상태로 보관될 수 있다. 임시처방 주사 용액 및 현탁액은 멸균 분말, 과립 및 정제로부터 제조할 수 있다.
상기 구체적으로 언급된 성분 이외에도, 제제는 해당 제제의 유형과 관련된 분야에서 통상적인 다른 작용제를 포함할 수 있는 것으로 이해하여야 한다 (예를 들어, 경구 투여에 적합한 것은 향미제를 포함할 수 있음).
용어 "환자"는 인간 및 다른 포유동물을 둘 다 포함한다.
용어 "치료하는"은 (i) 질환, 장애 및/또는 상태에 걸리기 쉬울 수 있지만 아직 걸린 것으로 진단되지는 않은 환자에서 질환, 장애 또는 상태가 발생하는 것을 예방하는 것; (ii) 질환, 장애 또는 상태를 억제하는 것, 즉, 그의 진행을 저지하는 것; 및 (iii) 질환, 장애 또는 상태를 경감하는 것, 즉, 질환, 장애 및/또는 상태의 감퇴를 유발하는 것을 지칭한다.
본 개시내용의 화합물은 또한 시클로스포린, 예를 들어 시클로스포린 A와 함께 투여될 수 있다. 시클로스포린 A는 임상 시험에서 HCV에 대해 활성인 것으로 나타났다 (문헌 [Hepatology, 38:1282 (2003)]; [Biochem. Biophys. Res. Commun., 313:42 (2004)]; [J. Gastroenterol., 38:567 (2003)]).
하기 표 1은 본 개시내용의 화합물과 함께 투여될 수 있는 일부 예시적인 화합물의 예를 나열한다. 본 개시내용의 화합물은 조합 요법에서 다른 항-HCV 활성 화합물과 함께 공동으로 또는 개별적으로, 또는 화합물들을 조성물로 조합하여 투여할 수 있다.
<표 1>
Figure pct00005
Figure pct00006
Figure pct00007
Figure pct00008
Figure pct00009
Figure pct00010
Figure pct00011
Figure pct00012
Figure pct00013
본 개시내용의 화합물은 또한 실험실 시약으로서 사용될 수 있다. 화합물은 바이러스 복제 검정법의 고안, 동물 검정 시스템의 정당성 확인, 및 HCV 질환 메카니즘의 지식을 더욱 증진시키기 위한 구조 생물학 연구를 위한 조사 도구를 제공하는 데 도움이 될 수 있다. 추가로, 본 개시내용의 화합물은, 예를 들어 경쟁적 억제에 의해 다른 항바이러스 화합물의 결합 부위를 확립하거나 결정하는 데 유용하다.
본 개시내용의 화합물은 또한 물질의 바이러스 오염을 치료 또는 예방하기 위해 사용될 수 있으며, 따라서 이러한 물질, 예를 들어 혈액, 조직, 수술 기구 및 의류, 실험실 기구 및 의류, 및 채혈 또는 수혈 장치 및 재료와 접촉하는 실험실 또는 병원 직원 또는 환자의 바이러스 감염의 위험을 낮출 수 있다.
본 개시내용은 합성 과정에 의해, 또는 인체 또는 동물체 내 (생체내)에서 발생하는 과정 또는 시험관내에서 발생하는 과정을 비롯한 대사 과정에 의해 제조되는 경우에 화학식 I을 갖는 화합물을 포함하도록 의도된다.
특히 하기 예시적인 실시예를 비롯하여 본 출원에 사용된 약어들은 당업자에게 널리 공지되어 있다. 사용된 약어들 중 일부는 하기와 같다: ca. = 약; min 또는 mins = 분; h 또는 hr 또는 hrs = 시간; rt 또는 RT = 실온 또는 체류 시간 (문맥상 지시될 것임); Rt = 체류 시간; TFA = 트리플루오로아세트산; DMSO = 디메틸술폭시드; Me = 메틸; THF = 테트라히드로푸란; t-Bu 또는 t-Bu = tert-부틸; EDCI = 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드; DMAP = 4-디메틸아미노피리딘; DBU = 1,8-디아자비시클로운데스-7-엔; Ph = 페닐; DEA = 디에틸아민; Et = 에틸; DMF = N,N-디메틸포름아미드; OAc = 아세테이트; HMDS = 헥사메틸디실란; pTsOH = 파라-톨루엔술폰산; iPr2EtN, DIEA 또는 DIPEA = 디이소프로필에틸아민; EtOAc 또는 EtOAc 또는 EA = 에틸 아세테이트; Et3SiH = 트리에틸실란; MeOH = 메탄올; TMSCHN2 = 트리메틸실릴디아조메탄; H-D-Ser-OBzl.HCl = D-세린 벤질 에스테르 히드로클로라이드; EtOH = 에탄올; Me2S = 디메틸술피드; TEA 또는 Et3N = 트리에틸아민; LiHMDS = 리튬 헥사메틸디실라지드; DIBAL = 디이소부틸알루미늄 히드라이드; TBDMS-Cl = tert-부틸디메틸실릴 클로라이드; i-PrOH = 이소프로판올; Boc, boc 또는 BOC = tert-부톡시카르보닐; Cbz-Cl = 벤질 클로로포르메이트; Bn = 벤질; DEAD = 디에틸아조디카르복실레이트; mCPBA = 메타-클로로퍼옥시벤조산; DCM = 디클로로메탄; TMSCN = 트리메틸실릴 시아나이드; ACN 또는 MECN = 아세토니트릴; dpppe = 1,5-비스(디페닐포스피노)펜탄; TMEDA = 테트라메틸에틸렌디아민; DMA = N,N-디메틸아세트아미드; MeOD = CD3OD; Hex = 헥산; NaOEt = 나트륨 에톡시드; MTBE = 메틸 tert 부틸 에테르; NCS = N-클로로숙신이미드; Et2O = 디에틸에테르; DME = 1,2-디메톡시에탄; 및 EEDQ = N-에톡시카르보닐-2-에톡시-1,2-디히드로퀴놀린.
본 개시내용은 이제 특정 실시양태와 관련하여 기재될 것이며, 이는 본 개시내용의 범주를 제한하도록 의도되지는 않는다. 반면, 본 개시내용은 특허청구범위의 범주 내에 포함될 수 있는 모든 대안, 변형 및 등가물을 포괄한다. 따라서, 특정 실시양태를 포함하는 하기 실시예는 본 개시내용의 한 실시를 예시할 것이며, 실시예는 특정 실시양태의 예시 목적을 위한 것이고, 그의 절차 및 구상 측면의 가장 유용하고 쉽게 이해되는 설명으로 여겨지는 것을 제공하기 위해 제시되는 것으로 이해된다.
출발 물질은 상업적 공급원으로부터 입수할 수 있거나, 또는 당업자에게 공지된 잘 확립된 문헌 방법에 의해 제조할 수 있다.
일반적 CAP의 합성
화합물 분석 조건
워터스(Waters) 마이크로매스(MICROMASS)® ZQ MS 시스템과 연결된 시마즈(Shimadzu) LC 시스템 상에서 순도 평가 및 저분해능 질량 분석을 수행하였다. 체류 시간이 기계 사이에 약간 달라질 수 있음에 주목하여야 한다. 달리 언급되지 않는 한, 추가적인 LC 조건이 본 섹션에 적용가능하다.
조건-MS-W1
칼럼 = 엑스테라(XTERRA)® 3.0 X 50 mm S7
시작 ％B = 0
최종 ％B = 100
구배 시간 = 2분
중지 시간 = 3분
유량 = 5 mL/분
파장 = 220 nm
용매 A = 10％ 메탄올/90％ H2O 중 0.1％ TFA
용매 B = 90％ 메탄올/10％ H2O 중 0.1％ TFA
조건-MS-W2
칼럼 = 엑스테라® 3.0 X 50 mm S7
시작 ％B = 0
최종 ％B = 100
구배 시간 = 3분
중지 시간 = 4분
유량 = 4 mL/분
파장 = 220 nm
용매 A = 10％ 메탄올/90％ H2O 중 0.1％ TFA
용매 B = 90％ 메탄올/10％ H2O 중 0.1％ TFA
조건-MS-W5
칼럼 = 엑스테라® 3.0 X 50 mm S7
시작 ％B = 0
최종 ％B = 30
구배 시간 = 2분
중지 시간 = 3분
유량 = 5 mL/분
파장 = 220 nm
용매 A = 10％ 메탄올/90％ H2O 중 0.1％ TFA
용매 B = 90％ 메탄올/10％ H2O 중 0.1％ TFA
조건-D1
칼럼 = 엑스테라® C18 3.0 X 50 mm S7
시작 ％B = 0
최종 ％B = 100
구배 시간 = 3분
중지 시간 = 4분
유량 = 4 mL/분
파장 = 220 nm
용매 A = 10％ 메탄올/90％ H2O 중 0.1％ TFA
용매 B = 90％ 메탄올/10％ H2O 중 0.1％ TFA
조건-D2
칼럼 = 페노메넥스(PHENOMENEX)® 루나(Luna) 4.6 X 50 mm S10
시작 ％B = 0
최종 ％B = 100
구배 시간 = 3분
중지 시간 = 4분
유량 = 4 mL/분
파장 = 220 nm
용매 A = 10％ 메탄올/90％ H2O 중 0.1％ TFA
용매 B = 90％ 메탄올/10％ H2O 중 0.1％ TFA
조건-M3
칼럼 = 엑스테라® C18 3.0 X 50 mm S7
시작 ％B = 0
최종 ％B = 40
구배 시간 = 2분
중지 시간 = 3분
유량 = 5 mL/분
파장 = 220 nm
용매 A = 10％ 메탄올/90％ H2O 중 0.1％ TFA
용매 B = 90％ 메탄올/10％ H2O 중 0.1％ TFA
조건 I
칼럼 = 페노메넥스® 루나 3.0 X 50 mm S10
시작 ％B = 0
최종 ％B = 100
구배 시간 = 2분
중지 시간 = 3분
유량 = 4 mL/분
파장 = 220 nm
용매 A = 10％ 메탄올/90％ H2O 중 0.1％ TFA
용매 B = 90％ 메탄올/10％ H2O 중 0.1％ TFA
조건 II
칼럼 = 페노메넥스® 루나 4.6 X 50 mm S10
시작 ％B = 0
최종 ％B = 100
구배 시간 = 2분
중지 시간 = 3분
유량 = 5 mL/분
파장 = 220 nm
용매 A = 10％ 메탄올/90％ H2O 중 0.1％ TFA
용매 B = 90％ 메탄올/10％ H2O 중 0.1％ TFA
조건 III
칼럼 = 엑스테라® C18 3.0 X 50 mm S7
시작 ％B = 0
최종 ％B = 100
구배 시간 = 3분
중지 시간 = 4분
유량 = 4 mL/분
파장 = 220 nm
용매 A = 10％ 메탄올/90％ H2O 중 0.1％ TFA
용매 B = 90％ 메탄올/10％ H2O 중 0.1％ TFA
Cap-1
Figure pct00014
(R)-2-(디메틸아미노)-2-페닐아세트산
메탄올 (10 mL) 중 10％ Pd/C (2.0 g)의 현탁액을 (R)-2-페닐글리신 (10 g, 66.2 mmol), 포름알데히드 (물 중 37 중량％ 33 mL), 1N HCl (30 mL) 및 메탄올 (30 mL)의 혼합물에 첨가하고, H2 (60 psi)에 3시간 동안 노출시켰다. 반응 혼합물을 규조토 (셀라이트(CELITE)®)를 통해 여과하고, 여과물을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 이소프로판올로부터 재결정화시켜 Cap-1의 HCl 염을 백색 침상체 (4.0 g)로서 수득하였다. 광학 회전: -117.1° [H2O 중 c=9.95 mg/mL; λ=589 nm].
Figure pct00015
Cap-2
Figure pct00016
(R)-2-(디에틸아미노)-2-페닐아세트산
NaBH3CN (6.22 g, 94 mmol)을 (R)-2-페닐글리신 (6.02 g, 39.8 mmol) 및 메탄올 (100 mL)의 냉각된 (빙수) 혼합물에 몇 분에 걸쳐 조금씩 첨가하고, 5분 동안 교반하였다. 아세트알데히드 (10 mL)를 10분에 걸쳐 적가하고, 동일한 냉각 온도에서 45분 동안 및 주위 온도에서 약 6.5시간 동안 교반을 계속하였다. 반응 혼합물을 빙수조로 다시 냉각시키고, 물 (3 mL)로 처리한 다음, 혼합물의 pH가 약 1.5 - 2.0이 될 때까지 약 45분에 걸쳐 진한 HCl을 적가하여 켄칭하였다. 냉각조를 제거하고, 혼합물의 pH가 약 1.5-2.0을 유지하도록 진한 HCl을 첨가하면서 교반을 계속하였다. 반응 혼합물을 밤새 교반하고, 여과하여 백색 현탁액을 제거하고, 여과물을 진공 하에 농축시켰다. 조 물질을 에탄올로부터 재결정화시켜 Cap-2의 HCl 염을 빛나는 백색 고체로서 두 수확물 (수확물-1: 4.16 g; 수확물-2: 2.19 g)로 수득하였다.
Figure pct00017
Cap-3
Figure pct00018
아세트알데히드 (5.0 mL, 89.1 mmol), 및 메탄올/H2O (4 mL/1 mL) 중 10％ Pd/C (720 mg)의 현탁액을 (R)-2-페닐글리신 (3.096 g, 20.48 mmol), 1N HCl (30 mL) 및 메탄올 (40 mL)의 냉각된 (약 15℃) 혼합물에 순차적으로 첨가하였다. 냉각조를 제거하고, 반응 혼합물을 H2 벌룬 하에 17시간 동안 교반하였다. 추가의 아세트알데히드 (10 mL, 178.2 mmol)를 첨가하고, H2 분위기 하에 24시간 동안 교반을 계속하였다 [주: H2의 공급은 반응 전반에 걸쳐 필요에 따라 보충하였다]. 반응 혼합물을 규조토 (셀라이트®)를 통해 여과하고, 여과물을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 이소프로판올로부터 재결정화시켜 (R)-2-(에틸아미노)-2-페닐아세트산의 HCl 염을 빛나는 백색 고체 (2.846 g)로서 수득하였다.
Figure pct00019
메탄올/H2O (3 mL/1 mL) 중 10％ Pd/C (536 mg)의 현탁액을 (R)-2-(에틸아미노)-2-페닐아세트산/HCl (1.492 g, 6.918 mmol), 포름알데히드 (물 중 37 중량％ 20 mL), 1N HCl (20 mL) 및 메탄올 (23 mL)의 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 H2 벌룬 하에 약 72시간 동안 교반하였고, 여기서 H2 공급은 필요에 따라 보충하였다. 반응 혼합물을 규조토 (셀라이트®)를 통해 여과하고, 여과물을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 이소프로판올 (50 mL)로부터 재결정화시켜 Cap-3의 HCl 염을 백색 고체 (985 mg)로서 수득하였다.
Figure pct00020
Cap-4
Figure pct00021
(R)-2-(메톡시카르보닐아미노)-2-페닐아세트산
ClCO2Me (3.2 mL, 41.4 mmol)를 (R)-tert-부틸 2-아미노-2-페닐아세테이트/HCl (9.877 g, 40.52 mmol) 및 디이소프로필에틸아민 (14.2 mL, 81.52 mmol)의 냉각된 (빙수) THF (410 mL) 반-용액에 6분에 걸쳐 적가하고, 유사한 온도에서 5.5시간 동안 교반하였다. 휘발성 성분을 진공 하에 제거하고, 잔류물을 물 (100 mL) 및 에틸 아세테이트 (200 mL) 사이에 분배시켰다. 유기 층을 1N HCl (25 mL) 및 포화 NaHCO3 용액 (30 mL)으로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 생성된 무색 오일을 헥산으로부터 연화처리하고, 여과하고, 헥산 (100 mL)으로 세척하여 (R)-tert-부틸 2-(메톡시카르보닐아미노)-2-페닐아세테이트를 백색 고체 (7.7 g)로서 수득하였다.
Figure pct00022
TFA (16 mL)를 상기 생성물의 냉각된 (빙수) CH2Cl2 (160 mL) 용액에 7분에 걸쳐 적가하고, 냉각조를 제거하고, 반응 혼합물을 20시간 동안 교반하였다. 탈보호가 여전히 완료되지 않았기 때문에, 추가의 TFA (1.0 mL)를 첨가하고, 추가로 2시간 동안 교반을 계속하였다. 휘발성 성분을 진공 하에 제거하고, 생성된 오일 잔류물을 디에틸 에테르 (15 mL) 및 헥산 (12 mL)으로 처리하여 침전물을 수득하였다. 침전물을 여과하고, 디에틸 에테르/헥산 (약 1:3 비율; 30 mL)으로 세척하고, 진공 하에 건조시켜 Cap-4를 솜털모양의 백색 고체 (5.57 g)로서 수득하였다. 광학 회전: -176.9° [H2O 중 c=3.7 mg/mL; λ=589 nm].
Figure pct00023
Cap-5
Figure pct00024
에탄올 (40 mL) 중 (R)-2-페닐글리신 (1.0 g, 6.62 mmol), 1,4-디브로모부탄 (1.57 g, 7.27 mmol) 및 Na2CO3 (2.10 g, 19.8 mmol)의 혼합물을 100℃에서 21시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 주위 온도로 냉각시키고, 여과하고, 여과물을 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 에탄올 중에 용해시키고, 1N HCl을 사용하여 pH 3 내지 4로 산성화시키고, 휘발성 성분을 진공 하에 제거하였다. 생성된 조 물질을 역상 HPLC (물/메탄올/TFA)로 정제하여 Cap-5의 TFA 염을 반-점성 백색 발포체 (1.0 g)로서 수득하였다.
Figure pct00025
Cap-6
Figure pct00026
Cap-6의 TFA 염을 Cap-5의 제조 방법을 이용하여 (R)-2-페닐글리신 및 1-브로모-2-(2-브로모에톡시)에탄으로부터 합성하였다.
Figure pct00027
Cap-7
Figure pct00028
p-톨루엔술포닐 클로라이드 (8.65 g, 45.4 mmol)의 CH2Cl2 (200 mL) 용액을 -5℃ 내지 0℃로 온도를 유지하면서 (S)-벤질 2-히드록시-2-페닐아세테이트 (10.0 g, 41.3 mmol), 트리에틸아민 (5.75 mL, 41.3 mmol) 및 4-디메틸아미노피리딘 (0.504 g, 4.13 mmol)의 냉각된 (-5℃) CH2Cl2 (200 mL) 용액에 적가하였다. 반응물을 0℃에서 9시간 동안 교반한 다음, 동결기 (-25℃)에 14시간 동안 보관하였다. 이것을 주위 온도로 해동되도록 하고, 물 (200 mL), 1N HCl (100 mL) 및 염수 (100 mL)로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 진공 하에 농축시켜, 정치시 응고되는 점성 오일 (16.5 g)로서 벤질 2-페닐-2-(토실옥시)아세테이트를 수득하였다. 생성물의 키랄 보전성은 확인하지 않았고, 생성물을 추가의 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.
Figure pct00029
벤질 2-페닐-2-(토실옥시)아세테이트 (6.0 g, 15.1 mmol), 1-메틸피페라진 (3.36 mL, 30.3 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (13.2 mL, 75.8 mmol)의 THF (75 mL) 용액을 65℃에서 7시간 동안 가열하였다. 반응물을 주위 온도로 냉각되도록 하고, 휘발성 성분을 진공 하에 제거하였다. 잔류물을 에틸아세테이트 및 물 사이에 분배시키고, 유기 층을 물 및 염수로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 에틸 아세테이트)로 정제하여, 벤질 2-(4-메틸피페라진-1-일)-2-페닐아세테이트를 오렌지빛-갈색 점성 오일 (4.56 g)로서 수득하였다. 키랄 HPLC 분석 (키랄셀(CHIRALCEL)® OD-H)은 샘플이 38.2 대 58.7 비율의 입체이성질체들의 혼합물임을 나타내었다. 입체이성질체들의 분리는 하기와 같이 수행하였다: 생성물을 에탄올/헵탄 (1:1) 120 mL 중에 용해시키고, 키랄 HPLC 칼럼 (키랄셀 OJ, 5 cm ID x 50 cm L, 20 μm) 상에 주입하고 (5 mL/주입) (75 mL/분에서 85:15 헵탄/에탄올로 용리함), 220 nm에서 모니터링하였다. 입체이성질체-1 (1.474 g) 및 입체이성질체-2 (2.2149 g)를 점성 오일로서 회수하였다.
Figure pct00030
벤질 2-(4-메틸피페라진-1-일)-2-페닐아세테이트 (1.0 g, 3.1 mmol)의 어느 한쪽 입체이성질체의 메탄올 (10 mL) 용액을 메탄올 (5.0 mL) 중 10％ Pd/C (120 mg)의 현탁액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 조심스럽게 모니터링하면서 50분 미만 동안 수소 벌룬에 노출시켰다. 반응의 완료 직후, 촉매를 규조토 (셀라이트®)를 통해 여과하고, 여과물을 진공 하에 농축시켜, 페닐아세트산으로 오염된 Cap-7을 황갈색 발포체 (867.6 mg; 질량이 이론적 수율을 초과함)로서 수득하였다. 생성물을 추가의 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.
Figure pct00031
SN2 치환 단계를 위한 적절한 아민 (즉, Cap-8을 위해 4-히드록시피페리딘, 및 Cap-9를 위해 (S)-3-플루오로피롤리딘)을 사용하고, 하기 기재된 바와 같은 각각의 입체이성질체 중간체의 분리를 위한 변형된 조건을 사용하여, Cap-8 및 Cap-9의 합성을 Cap-7의 합성에 따라 수행하였다.
Cap-8
Figure pct00032
중간체 벤질 2-(4-히드록시피페리딘-1-일)-2-페닐 아세테이트의 입체이성질체 분리를 하기 조건을 이용하여 수행하였다: 화합물 (500 mg)을 에탄올/헵탄 (5 mL/45 mL) 중에 용해시켰다. 생성된 용액을 키랄 HPLC 칼럼 (키랄셀 OJ, 2 cm ID x 25 cm L, 10 μm) 상에 주입하고 (5 mL/주입) (10 mL/분에서 80:20 헵탄/에탄올로 용리함), 220 nm에서 모니터링하여 입체이성질체-1 186.3 mg 및 입체이성질체-2 209.1 mg을 밝은 황색 점성 오일로서 수득하였다. 이들 벤질 에스테르를 Cap-7의 제조에 따라 가수소분해하여 Cap-8을 수득하였다.
Figure pct00033
Cap-9
Figure pct00034
중간체 벤질 2-((S)-3-플루오로피롤리딘-1-일)-2-페닐아세테이트의 부분입체이성질체 분리를 하기 조건을 이용하여 수행하였다: 에스테르 (220 mg)를 키랄 HPLC 칼럼 (키랄셀 OJ-H, 0.46 cm ID x 25 cm L, 5 μm) 상에서 분리하였다 (10 bar 압력, 70 mL/분 유량 및 35℃의 온도에서, 0.1％ TFA를 함유하는 95％ CO2 / 5％ 메탄올로 용리함). 각각의 입체이성질체에 대한 HPLC 용리액을 농축시키고, 잔류물을 CH2Cl2 (20 mL) 중에 용해시키고, 수성 매질 (물 10 mL + 포화 NaHCO3 용액 1 mL)로 세척하였다. 유기 상을 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 진공 하에 농축시켜 분획-1 92.5 mg 및 분획-2 59.6 mg을 수득하였다. 이들 벤질 에스테르를 Cap-7의 제조에 따라 가수소분해하여 Cap-9a 및 Cap-9b를 제조하였다.
Cap-9a (부분입체이성질체-1; 샘플은 H2O/메탄올/TFA 용매를 사용한 역상 HPLC 상에서의 정제의 결과로서 TFA 염임):
Figure pct00035
Cap-9b (부분입체이성질체-2):
Figure pct00036
Cap-10
Figure pct00037
메탄올 (15 mL) 중 D-프롤린 (2.0 g, 17 mmol) 및 포름알데히드 (H2O 중 37 중량％ 2.0 mL)의 용액에 메탄올 (5 mL) 중 10％ Pd/C (500 mg)의 현탁액을 첨가하였다. 혼합물을 수소 벌룬 하에 23시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 규조토 (셀라이트®)를 통해 여과하고, 진공 하에 농축시켜 Cap-10을 회백색 고체 (2.15 g)로서 수득하였다.
Figure pct00038
Cap-11
Figure pct00039
메탄올 (20 mL) 중 (2S,4R)-4-플루오로피롤리딘-2-카르복실산 (0.50 g, 3.8 mmol), 포름알데히드 (H2O 중 37 중량％ 0.5 mL), 12N HCl (0.25 mL) 및 10％ Pd/C (50 mg)의 혼합물을 수소 벌룬 하에 19시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 규조토 (셀라이트®)를 통해 여과하고, 여과물을 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 이소프로판올로부터 재결정화시켜 Cap-11의 HCl 염을 백색 고체 (337.7 mg)로서 수득하였다.
Figure pct00040
Cap-12 (Cap-52와 동일)
Figure pct00041
(S)-2-(메톡시카르보닐아미노)프로판산
L-알라닌 (2.0 g, 22.5 mmol)을 10％ 수성 탄산나트륨 용액 (50 mL) 중에 용해시키고, 이것에 메틸 클로로포르메이트 (4.0 mL)의 THF (50 mL) 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 주위 조건 하에 4.5시간 동안 교반하고, 진공 하에 농축시켰다. 생성된 백색 고체를 물 중에 용해시키고, 1N HCl을 사용하여 pH 약 2-3으로 산성화시켰다. 생성된 용액을 에틸 아세테이트 (3 x 100 mL)로 추출하고, 합한 유기 상을 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 진공 하에 농축시켜, 무색 오일 (2.58 g)을 수득하였다. 상기 물질 500 mg을 역상 HPLC (H2O/메탄올/TFA)에 의해 정제하여 Cap-12 150 mg을 무색 오일로서 수득하였다.
Figure pct00042
Cap-13
Figure pct00043
메탄올 (30 mL) 중 L-알라닌 (2.5 g, 28 mmol), 포름알데히드 (8.4 g, 37 중량％), 1N HCl (30 mL) 및 10％ Pd/C (500 mg)의 혼합물을 수소 분위기 (50 psi) 하에 5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 규조토 (셀라이트®)를 통해 여과하고, 여과물을 진공 하에 농축시켜, 진공 하에 정치시 응고되는 오일로서 Cap-13의 HCl 염을 수득하였다 (4.4 g; 질량이 이론적 수율을 초과함). 생성물을 추가의 정제 없이 사용하였다.
Figure pct00044
Cap-14
Figure pct00045
(R)-2-페닐-2-(피페리딘-1-일)아세트산
단계 1: (R)-(-)-D-페닐글리신 tert-부틸 에스테르 (3.00 g, 12.3 mmol), NaBH3CN (0.773 g, 12.3 mmol), KOH (0.690 g, 12.3 mmol) 및 아세트산 (0.352 mL, 6.15 mmol)의 혼합물을 메탄올 중에서 0℃에서 교반하였다. 상기 혼합물에 글루타르산 디알데히드 (2.23 mL, 12.3 mmol)를 5분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 그대로 교반하면서 주위 온도로 가온되도록 하고, 동일한 온도에서 16시간 동안 교반을 계속하였다. 용매를 후속적으로 제거하고, 잔류물을 10％ 수성 NaOH 및 에틸 아세테이트로 분배시켰다. 유기 상을 분리하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 농축 건조시켜, 투명한 오일을 수득하였다. 상기 물질을 역상 정제용 HPLC (프라임스피어(Primesphere) C-18, 30 x 100 mm; CH3CN-H2O-0.1％ TFA)로 정제하여 중간체 에스테르 (2.70 g, 56％)를 투명한 오일로서 수득하였다.
Figure pct00046
단계 2: 디클로로메탄 (10 mL) 중 중간체 에스테르 (1.12 g, 2.88 mmol)의 교반된 용액에 TFA (3 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 주위 온도에서 4시간 동안 교반한 다음, 이것을 농축 건조시켜 밝은 황색 오일을 수득하였다. 오일을 역상 정제용 HPLC (프라임스피어 C-18, 30 x 100 mm; CH3CN-H2O-0.1％ TFA)를 사용하여 정제하였다. 적절한 분획을 합하고, 진공 하에 농축 건조시켰다. 이어서, 잔류물을 최소량의 메탄올 중에 용해시키고, MCX LP 추출 카트리지 (2 x 6 g)에 적용시켰다. 카트리지를 메탄올 (40 mL)로 헹군 다음, 목적 화합물을 메탄올 (50 mL) 중 2M 암모니아를 사용하여 용리하였다. 생성물-함유 분획을 합하고, 농축시키고, 잔류물을 물에 녹였다. 상기 용액을 동결건조시켜, 표제 화합물 (0.492 g, 78％)을 밝은 황색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00047
Cap-15
Figure pct00048
단계 1: (S)-1-페닐에틸 2-브로모-2-페닐아세테이트. 무수 디클로로메탄 (100 mL) 중 α-브로모페닐아세트산 (10.75 g, 0.050 mol), (S)-(-)-1-페닐에탄올 (7.94 g, 0.065 mol) 및 DMAP (0.61 g, 5.0 mmol)의 혼합물에 고체 EDCI (12.46 g, 0.065 mol)를 모두 한번에 첨가하였다. 생성된 용액을 실온에서 Ar 하에 18시간 동안 교반한 다음, 이것을 에틸 아세테이트로 희석하고, 세척하고 (H2O x 2, 염수), 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 농축시켜 연황색 오일을 수득하였다. 상기 오일을 플래쉬 크로마토그래피 (SiO2/헥산-에틸 아세테이트, 4:1)하여, 표제 화합물 (11.64 g, 73％)을 백색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00049
단계 2: (S)-1-페닐에틸 (R)-2-(4-히드록시-4-메틸피페리딘-1-일)-2-페닐아세테이트. THF (8 mL) 중 (S)-1-페닐에틸 2-브로모-2-페닐아세테이트 (0.464 g, 1.45 mmol)의 용액에 트리에틸아민 (0.61 mL, 4.35 mmol)에 이어서 테트라부틸암모늄 아이오다이드 (0.215 g, 0.58 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 5분 동안 교반한 다음, THF (2 mL) 중 4-메틸-4-히드록시피페리딘 (0.251 g, 2.18 mmol)의 용액을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, 이것을 55-60℃ (오일조 온도)에서 4시간 동안 가열하였다. 이어서, 냉각된 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (30 mL)로 희석하고, 세척하고 (H2O x2, 염수), 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (0-60％ 에틸 아세테이트-헥산)에 의해 정제하여, 먼저 표제 화합물의 (S,R)-이성질체 (0.306 g, 60％)를 백색 고체로서 수득한 다음, 상응하는 (S,S)-이성질체 (0.120 g, 23％)를 또한 백색 고체로서 수득하였다.
(S,R)-이성질체:
Figure pct00050
(S,S)-이성질체:
Figure pct00051
단계 3: (R)-2-(4-히드록시-4-메틸피페리딘-1-일)-2-페닐아세트산. 디클로로메탄 (3 mL) 중 (S)-1-페닐에틸 (R)-2-(4-히드록시-4-메틸피페리딘-1-일)-2-페닐아세테이트 (0.185 g, 0.52 mmol)의 용액에 트리플루오로아세트산 (1 mL)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 휘발물을 후속적으로 진공 하에 제거하고, 잔류물을 역상 정제용 HPLC (프라임스피어 C-18, 20 x 100 mm; CH3CN-H2O-0.1％ TFA)에 의해 정제하여, 표제 화합물 (TFA 염)을 연청색빛 고체 (0.128 g, 98％)로서 수득하였다.
Figure pct00052
Cap-16
Figure pct00053
단계 1: (S)-1-페닐에틸 2-(2-플루오로페닐)아세테이트. CH2Cl2 (100 mL) 중 2-플루오로페닐아세트산 (5.45 g, 35.4 mmol), (S)-1-페닐에탄올 (5.62 g, 46.0 mmol), EDCI (8.82 g, 46.0 mmol) 및 DMAP (0.561 g, 4.60 mmol)의 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 이어서, 용매를 농축시키고, 잔류물을 H2O-에틸 아세테이트로 분배시켰다. 상을 분리하고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (2x)로 역추출하였다. 합한 유기 상을 세척하고 (H2O, 염수), 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (바이오타지(BIOTAGE)®/0-20％ 에틸 아세테이트-헥산)에 의해 정제하여 표제 화합물을 무색 오일 (8.38 g, 92％)로서 수득하였다.
Figure pct00054
단계 2: (R)-((S)-1-페닐에틸) 2-(2-플루오로페닐)-2-(피페리딘-1-일)아세테이트. 0℃에서 THF (1200 mL) 중 (S)-1-페닐에틸 2-(2-플루오로페닐)아세테이트 (5.00 g, 19.4 mmol)의 용액에 DBU (6.19 g, 40.7 mmol)를 첨가하고, 용액을 30분 동안 교반하면서 실온으로 가온되도록 하였다. 이어서, 용액을 -78℃로 냉각시키고, THF (100 mL) 중 CBr4 (13.5 g, 40.7 mmol)의 용액을 첨가하고, 혼합물을 -10℃로 가온되도록 하고, 상기 온도에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 NH4Cl로 켄칭하고, 층을 분리하였다. 수성 층을 에틸 아세테이트 (2x)로 역추출하고, 합한 유기 상을 세척하고 (H2O, 염수), 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물에 피페리딘 (5.73 mL, 58.1 mmol)을 첨가하고, 용액을 실온에서 24시간 동안 교반하였다. 이어서, 휘발물을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (바이오타지®/0-30％ 디에틸 에테르-헥산)로 정제하여, 미반응 출발 물질 (2.53 g, 51％)과 함께 부분입체이성질체들의 순수한 혼합물 (1H NMR에 의하면 2:1 비율)을 황색 오일 (2.07 g, 31％)로서 수득하였다. 부분입체이성질체 혼합물을 추가로 크로마토그래피 (바이오타지®/0-10％ 디에틸 에테르-톨루엔)하여 표제 화합물을 무색 오일 (0.737 g, 11％)로서 수득하였다.
Figure pct00055
단계 3: (R)-2-(2-플루오로페닐)-2-(피페리딘-1-일)아세트산. 에탄올 (30 mL) 중 (R)-((S)-1-페닐에틸) 2-(2-플루오로페닐)-2-(피페리딘-1-일)아세테이트 (0.737 g, 2.16 mmol) 및 20％ Pd(OH)2/C (0.070 g)의 혼합물을 실온 및 대기압 (H2 벌룬)에서 2시간 동안 수소화시켰다. 이어서, 용액을 Ar으로 퍼징하고, 규조토 (셀라이트®)를 통해 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 이로써 표제 화합물을 무색 고체 (0.503 g, 98％)로서 수득하였다.
Figure pct00056
Cap-17
Figure pct00057
단계 1: (S)-1-페닐에틸 (R)-2-(4-히드록시-4-페닐피페리딘-1-일)-2-페닐아세테이트. THF (25 mL) 중 (S)-1-페닐에틸 2-브로모-2-페닐아세테이트 (1.50 g, 4.70 mmol)의 용액에 트리에틸아민 (1.31 mL, 9.42 mmol)에 이어서 테트라부틸암모늄 아이오다이드 (0.347 g, 0.94 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 5분 동안 교반한 다음, THF (5 mL) 중 4-페닐-4-히드록시피페리딘 (1.00 g, 5.64 mmol)의 용액을 첨가하였다. 혼합물을 16시간 동안 교반한 다음, 이것을 에틸 아세테이트 (100 mL)로 희석하고, 세척하고 (H2O x2, 염수), 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 칼럼 (0-60％ 에틸 아세테이트-헥산) 상에서 정제하여, 부분입체이성질체들의 대략 2:1 혼합물을 수득하였다 (1H NMR로 판단). 이들 이성질체의 분리를 초임계 유체 크로마토그래피 (키랄셀® OJ-H, 30 x 250 mm; 35℃에서 CO2 중 20％ 에탄올)를 이용하여 수행함으로써, 먼저 표제 화합물의 (R)-이성질체 (0.534 g, 27％)를 황색 오일로서 수득한 다음, 상응하는 (S)-이성질체 (0.271 g, 14％)를 또한 황색 오일로서 수득하였다.
(S,R)-이성질체:
Figure pct00058
(S,S)-이성질체:
Figure pct00059
하기 에스테르를 유사한 방식으로 제조하였다:
Figure pct00060
체류 시간 측정을 위한 키랄 SFC 조건:
조건 I
칼럼: 키랄팩(CHIRALPAK)® AD-H 칼럼, 4.62x50 mm, 5 μm
용매: 90％ CO2-10％ 메탄올 (0.1％ DEA 함유)
온도: 35℃
압력: 150 bar
유량: 2.0 mL/분
220 nm에서의 UV 모니터링
주입: 메탄올 3 mL당 1.0 mg
조건 II
칼럼: 키랄셀® OD-H 칼럼, 4.62x50 mm, 5 μm
용매: 90％ CO2-10％ 메탄올 (0.1％ DEA 함유)
온도: 35℃
압력: 150 bar
유량: 2.0 mL/분
220 nm에서의 UV 모니터링
주입: 메탄올 1 mL당 1.0 mg
Cap-17, 단계 2: (R)-2-(4-히드록시-4-페닐피페리딘-1-일)-2-페닐아세트산. 디클로로메탄 (5 mL) 중 (S)-1-페닐에틸 (R)-2-(4-히드록시-4-페닐피페리딘-1-일)-2-페닐아세테이트 (0.350 g, 0.84 mmol)의 용액에 트리플루오로아세트산 (1 mL)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 휘발물을 후속적으로 진공 하에 제거하고, 잔류물을 역상 정제용 HPLC (프라임스피어 C-18, 20 x 100 mm; CH3CN-H2O-0.1％ TFA)에 의해 정제하여 표제 화합물 (TFA 염)을 백색 고체 (0.230 g, 88％)로서 수득하였다.
Figure pct00061
하기 카르복실산을 유사한 방식으로 광학적으로 순수한 형태로 제조하였다:
Figure pct00062
체류 시간 측정을 위한 LC-MS 조건:
조건 I
칼럼: 페노메넥스® 루나 4.6 X 50 mm S10
시작 ％B = 0
최종 ％B = 100
구배 시간 = 4분
유량 = 4 mL/분
파장 = 220
용매 A = 10％ 메탄올 - 90％ H2O - 0.1％ TFA
용매 B = 90％ 메탄올 - 10％ H2O - 0.1％ TFA
조건 II
칼럼: 워터스 선파이어(SunFire) 4.6 X 50 mm S5
시작 ％B = 0
최종 ％B = 100
구배 시간 = 2분
유량 = 4 mL/분
파장 = 220
용매 A = 10％ 메탄올 - 90％ H2O - 0.1％ TFA
용매 B = 90％ 메탄올 - 10％ H2O - 0.1％ TFA
조건 III
칼럼: 페노메넥스® 10μ 3.0 X 50 mm
시작 ％B = 0
최종 ％B = 100
구배 시간 = 2분
유량 = 4 mL/분
파장 = 220
용매 A = 10％ 메탄올 - 90％ H2O - 0.1％ TFA
용매 B = 90％ 메탄올 - 10％ H2O - 0.1％ TFA
Cap-18
Figure pct00063
단계 1: (R,S)-에틸 2-(4-피리딜)-2-브로모아세테이트. 0℃에서 아르곤 하에 건조 THF (150 mL) 중 에틸 4-피리딜아세테이트 (1.00 g, 6.05 mmol)의 용액에 DBU (0.99 mL, 6.66 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 30분에 걸쳐 실온으로 가온되도록 한 다음, 이것을 -78℃로 냉각시켰다. 상기 혼합물에 CBr4 (2.21 g, 6.66 mmol)를 첨가하고, -78℃에서 2시간 동안 교반을 계속하였다. 이어서, 반응 혼합물을 포화 수성 NH4Cl로 켄칭하고, 상을 분리하였다. 유기 상을 세척하고 (염수), 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 생성된 황색 오일을 즉시 플래쉬 크로마토그래피 (SiO2/헥산-에틸 아세테이트, 1:1)로 정제하여 표제 화합물 (1.40 g, 95％)을 다소 불안정한 황색 오일로서 수득하였다.
Figure pct00064
단계 2: (R,S)-에틸 2-(4-피리딜)-2-(N,N-디메틸아미노)아세테이트. DMF (10 mL) 중 (R,S)-에틸 2-(4-피리딜)-2-브로모아세테이트 (1.40 g, 8.48 mmol)의 용액에 실온에서 디메틸아민 (THF 중 2M, 8.5 mL, 17.0 mmol)을 첨가하였다. 반응의 완료 후 (박층 크로마토그래피에 의해 판단), 휘발물을 진공 하에 제거하고, 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (바이오타지®, 40+M SiO2 칼럼; 50％-100％ 에틸 아세테이트-헥산)로 정제하여 표제 화합물 (0.539 g, 31％)을 밝은 황색 오일로서 수득하였다.
Figure pct00065
단계 3: (R,S)-2-(4-피리딜)-2-(N,N-디메틸아미노)아세트산. THF-메탄올-H2O의 혼합물 (1:1:1, 6 mL) 중 (R,S)-에틸 2-(4-피리딜)-2-(N,N-디메틸아미노)아세테이트 (0.200 g, 0.960 mmol)의 용액에 분말화된 LiOH (0.120 g, 4.99 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 용액을 3시간 동안 교반한 다음, 이것을 1N HCl을 사용하여 pH 6으로 산성화시켰다. 수성 상을 에틸 아세테이트로 세척한 다음, 이것을 동결건조시켜 표제 화합물의 디히드로클로라이드를 황색 고체 (LiCl 함유)로서 수득하였다. 생성물을 후속 단계에 그대로 사용하였다.
Figure pct00066
하기 실시예를 상기 기재된 방법을 이용하여 유사한 방식으로 제조하였다:
Figure pct00067
Figure pct00068
Cap-37
Figure pct00069
단계 1: (R,S)-에틸 2-(퀴놀린-3-일)-2-(N,N-디메틸아미노)-아세테이트. 에틸 N,N-디메틸아미노아세테이트 (0.462 g, 3.54 mmol), K3PO4 (1.90 g, 8.95 mmol), Pd(t-Bu3P)2 (0.090 g, 0.176 mmol), 3-브로모퀴놀린 및 톨루엔 (10 mL)의 혼합물을 Ar 버블 스트림으로 15분 동안 탈기하였다. 이어서, 반응 혼합물을 100℃에서 12시간 동안 가열한 후, 이것을 실온으로 냉각시키고, H2O에 부었다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (2x)로 추출하고, 합한 유기 상을 세척하고 (H2O, 염수), 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 먼저 역상 정제용 HPLC (프라임스피어 C-18, 30 x 100 mm; CH3CN-H2O-5 mM NH4OAc)에 의해 정제한 다음, 플래쉬 크로마토그래피 (SiO2/헥산-에틸 아세테이트, 1:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (0.128 g, 17％)을 오렌지색 오일로서 수득하였다.
Figure pct00070
단계 2: (R,S) 2-(퀴놀린-3-일)-2-(N,N-디메틸아미노)아세트산. (R,S)-에틸 2-(퀴놀린-3-일)-2-(N,N-디메틸아미노)아세테이트 (0.122 g, 0.472 mmol) 및 6M HCl (3 mL)의 혼합물을 100℃에서 12시간 동안 가열하였다. 용매를 진공 하에 제거하여 표제 화합물의 디히드로클로라이드 (0.169 g, >100％)를 밝은 황색 발포체로서 수득하였다. 정제되지 않은 물질을 추가의 정제 없이 후속 단계에 사용하였다.
Figure pct00071
Cap-38
Figure pct00072
단계 1: (R)-((S)-1-페닐에틸) 2-(디메틸아미노)-2-(2-플루오로페닐)아세테이트 및 (S)-((S)-1-페닐에틸) 2-(디메틸아미노)-2-(2-플루오로페닐)아세테이트. CH2Cl2 (40 mL) 중 (RS)-2-(디메틸아미노)-2-(2-플루오로페닐)아세트산 (2.60 g, 13.19 mmol), DMAP (0.209 g, 1.71 mmol) 및 (S)-1-페닐에탄올 (2.09 g, 17.15 mmol)의 혼합물에 EDCI (3.29 g, 17.15 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반되도록 하였다. 이어서, 용매를 진공 하에 제거하고, 잔류물을 에틸 아세테이트-H2O로 분배시켰다. 층을 분리하고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (2x)로 역추출하고, 합한 유기 상을 세척하고 (H2O, 염수), 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (바이오타지®/0-50％ 디에틸 에테르-헥산)에 의해 정제하였다. 이어서, 생성된 순수한 부분입체이성질체 혼합물을 역상 정제용 HPLC (프라임스피어 C-18, 30 x 100 mm; CH3CN-H2O-0.1％ TFA)에 의해 분리하여, 먼저 (S)-1-페네틸 (R)-2-(디메틸아미노)-2-(2-플루오로페닐)아세테이트 (0.501 g, 13％) 및 이어서 (S)-1-페네틸 (S)-2-(디메틸아미노)-2-(2-플루오로페닐)-아세테이트 (0.727 g, 18％)를 둘 다 그의 TFA 염으로서 수득하였다.
(S,R)-이성질체:
Figure pct00073
(S,S)-이성질체:
Figure pct00074
단계 2: (R)-2-(디메틸아미노)-2-(2-플루오로페닐)아세트산. 에탄올 (30 mL) 중 (R)-((S)-1-페닐에틸) 2-(디메틸아미노)-2-(2-플루오로페닐)아세테이트 TFA 염 (1.25 g, 3.01 mmol) 및 20％ Pd(OH)2/C (0.125 g)의 혼합물을 실온 및 대기압 (H2 벌룬)에서 4시간 동안 수소화시켰다. 이어서, 용액을 Ar으로 퍼징하고, 규조토 (셀라이트®)를 통해 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 이로써 표제 화합물을 무색 고체 (0.503 g, 98％)로서 수득하였다.
Figure pct00075
S-이성질체를 유사한 방식으로 (S)-((S)-1-페닐에틸) 2-(디메틸아미노)-2-(2-플루오로페닐)아세테이트 TFA 염으로부터 수득할 수 있었다.
Cap-39
Figure pct00076
(R)-(2-클로로페닐)글리신 (0.300 g, 1.62 mmol), 포름알데히드 (35％ 수용액, 0.80 mL, 3.23 mmol) 및 20％ Pd(OH)2/C (0.050 g)의 혼합물을 실온 및 대기압 (H2 벌룬)에서 4시간 동안 수소화시켰다. 이어서, 용액을 Ar으로 퍼징하고, 규조토 (셀라이트®)를 통해 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 역상 정제용 HPLC (프라임스피어 C-18, 30 x 100 mm; CH3CN-H2O-0.1％ TFA)로 정제하여 표제 화합물 (R)-2-(디메틸아미노)-2-(2-클로로페닐)아세트산의 TFA 염을 무색 오일 (0.290 g, 55％)로서 수득하였다.
Figure pct00077
Cap-40
Figure pct00078
H2O (5.5 mL) 중 (R)-(2-클로로페닐)글리신 (1.00 g, 5.38 mmol) 및 NaOH (0.862 g, 21.6 mmol)의 빙냉 용액에 메틸 클로로포르메이트 (1.00 mL, 13.5 mmol)를 적가하였다. 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반되도록 한 다음, 이것을 진한 HCl (2.5 ml)을 첨가하여 산성화시켰다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (2x)로 추출하고, 합한 유기 상을 세척하고 (H2O, 염수), 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 (R)-2-(메톡시카르보닐아미노)-2-(2-클로로페닐)아세트산을 황색-오렌지색 발포체 (1.31 g, 96％)로서 수득하였다.
Figure pct00079
Cap-41
Figure pct00080
THF (20 mL) 중 2-(2-(클로로메틸)페닐)아세트산 (2.00 g, 10.8 mmol)의 현탁액에 모르폴린 (1.89 g, 21.7 mmol)을 첨가하고, 용액을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고, H2O (2x)로 추출하였다. 수성 상을 동결건조시키고, 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (바이오타지®/0-10％ 메탄올-CH2Cl2)에 의해 정제하여 표제 화합물 2-(2-(모르폴리노메틸)페닐)아세트산을 무색 고체 (2.22 g, 87％)로서 수득하였다.
Figure pct00081
하기 실시예를 Cap-41에 대해 기재된 방법을 이용하여 유사하게 제조하였다:
Figure pct00082
Cap-45a
Figure pct00083
HMDS (1.85 mL, 8.77 mmol)를 CH2Cl2 (10 mL) 중 (R)-2-아미노-2-페닐아세트산 p-톨루엔술포네이트 (2.83 g, 8.77 mmol)의 현탁액에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 메틸 이소시아네이트 (0.5 g, 8.77 mmol)를 30분 동안 교반을 계속하면서 한번에 첨가하였다. 반응물을 H2O (5 mL)를 첨가하여 켄칭하고, 생성된 침전물을 여과하고, H2O 및 n-헥산으로 세척하고, 진공 하에 건조시켰다. (R)-2-(3-메틸우레이도)-2-페닐아세트산 (1.5 g; 82％)을 백색 고체로서 회수하였고, 이것을 추가의 정제 없이 사용하였다.
Figure pct00084
HPLC 페노메넥스® C-18 3.0 × 46 mm, 2분에 걸쳐 0 → 100％ B, 1분의 유지 시간, A=90％ 물, 10％ 메탄올, 0.1％ TFA, B=10％ 물, 90％ 메탄올, 0.1％ TFA, RT=1.38분, 90％ 균질 지수.
Cap-46
목적 생성물을 Cap-45a에 대해 기재된 방법에 따라 제조하였다.
Figure pct00086
HPLC 엑스테라® C-18 3.0 × 506 mm, 2분에 걸쳐 0 → 100％ B, 1분의 유지 시간, A=90％ 물, 10％ 메탄올, 0.2％ H3PO4, B=10％ 물, 90％ 메탄올, 0.2％ H3PO4, RT=0.87분, 90％ 균질 지수.
Cap-47
Figure pct00087
단계 1: (R)-tert-부틸 2-(3,3-디메틸우레이도)-2-페닐아세테이트. DMF (40 mL) 중 (R)-tert-부틸-2-아미노-2-페닐아세테이트 (1.0 g, 4.10 mmol) 및 휘니그 염기 (1.79 mL, 10.25 mmol)의 교반된 용액에 디메틸카르바모일 클로라이드 (0.38 mL, 4.18 mmol)를 10분에 걸쳐 적가하였다. 실온에서 3시간 동안 교반한 후, 반응물을 감압 하에 농축시키고, 생성된 잔류물을 에틸 아세테이트 중에 용해시켰다. 유기 층을 H2O, 1N 수성 HCl 및 염수로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. (R)-tert-부틸 2-(3,3-디메틸우레이도)-2-페닐아세테이트를 백색 고체 (0.86 g; 75％)로서 수득하였고, 추가의 정제 없이 사용하였다.
Figure pct00088
HPLC 페노메넥스® 루나 C-18 4.6 × 50 mm, 4분에 걸쳐 0 → 100％ B, 1분의 유지 시간, A=90％ 물, 10％ 메탄올, 0.1％ TFA, B=10％ 물, 90％ 메탄올, 0.1％ TFA, RT=2.26분, 97％ 균질 지수.
단계 2: (R)-2-(3,3-디메틸우레이도)-2-페닐아세트산. CH2Cl2 (250 mL) 중 ((R)-tert-부틸 2-(3,3-디메틸우레이도)-2-페닐아세테이트 (0.86 g, 3.10 mmol)의 교반된 용액에 TFA (15 mL)를 적가하고, 생성된 용액을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 이어서, 목적 화합물을 EtOAC:헥산 (5:20)의 혼합물로 용액으로부터 침전시키고, 여과하고, 감압 하에 건조시켰다. (R)-2-(3,3-디메틸우레이도)-2-페닐아세트산을 백색 고체 (0.59 g, 86％)로서 단리하였고, 추가의 정제 없이 사용하였다.
Figure pct00089
HPLC 엑스테라® C-18 3.0 × 50 mm, 2분에 걸쳐 0 → 100％ B, 1분의 유지 시간, A=90％ 물, 10％ 메탄올, 0.2％ H3PO4, B=10％ 물, 90％ 메탄올, 0.2％ H3PO4, RT=0.75분, 93％ 균질 지수.
Cap-48
Figure pct00090
단계 1: (R)-tert-부틸 2-(3-시클로펜틸우레이도)-2-페닐아세테이트. DMF (15 mL) 중 (R)-2-아미노-2-페닐아세트산 히드로클로라이드 (1.0 g, 4.10 mmol) 및 휘니그 염기 (1.0 mL, 6.15 mmol)의 교반된 용액에 시클로펜틸 이소시아네이트 (0.46 mL, 4.10 mmol)를 10분에 걸쳐 적가하였다. 실온에서 3시간 동안 교반한 후, 반응물을 감압 하에 농축시키고, 생성된 잔류물을 에틸 아세테이트에 녹였다. 유기 층을 H2O 및 염수로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. (R)-tert-부틸 2-(3-시클로펜틸우레이도)-2-페닐아세테이트를 불투명한 오일 (1.32 g; 100％)로서 수득하였고, 추가의 정제 없이 사용하였다.
Figure pct00091
HPLC 엑스테라® C-18 3.0 × 50 mm, 4분에 걸쳐 0 → 100％ B, 1분의 유지 시간, A=90％ 물, 10％ 메탄올, 0.1％ TFA, B=10％ 물, 90％ 메탄올, 0.1％ TFA, RT=2.82분, 96％ 균질 지수.
단계 2: (R)-2-(3-시클로펜틸우레이도)-2-페닐아세트산. CH2Cl2 (25 mL) 중 (R)-tert-부틸 2-(3-시클로펜틸우레이도)-2-페닐아세테이트 (1.31 g, 4.10 mmol)의 교반된 용액에 TFA (4 mL) 및 트리에틸실란 (1.64 mL; 10.3 mmol)을 적가하고, 생성된 용액을 실온에서 6시간 동안 교반하였다. 휘발성 성분을 감압 하에 제거하고, 조 생성물을 에틸 아세테이트/펜탄 중에서 재결정화시켜 (R)-2-(3-시클로펜틸우레이도)-2-페닐아세트산을 백색 고체 (0.69 g, 64％)로서 수득하였다.
Figure pct00092
HPLC 엑스테라® C-18 3.0 × 50 mm, 2분에 걸쳐 0 → 100％ B, 1분의 유지 시간, A=90％ 물, 10％ 메탄올, 0.2％ H3PO4, B=10％ 물, 90％ 메탄올, 0.2％ H3PO4, RT=1.24분, 100％ 균질 지수.
Cap-49
Figure pct00093
포름산 (91 mL) 중 2-(벤질아미노)아세트산 (2.0 g, 12.1 mmol)의 교반된 용액에 포름알데히드 (6.94 mL, 93.2 mmol)를 첨가하였다. 70℃에서 5시간 후, 반응 혼합물을 감압 하에 20 mL로 농축시켰고, 백색 고체가 침전되었다. 여과 후, 모액을 수집하고, 감압 하에 추가로 농축시켜, 조 생성물을 수득하였다. 역상 정제용 HPLC (엑스테라® 30 X 100 mm, 220 nm에서 검출, 유량 35 mL/분, 8분에 걸쳐 0 → 35％ B; A= 90％ 물, 10％ 메탄올, 0.1％ TFA, B=10％ 물, 90％ 메탄올, 0.1％ TFA)에 의해 정제하여, 그의 TFA 염으로서의 표제 화합물 2-(벤질(메틸)-아미노)아세트산 (723 mg, 33％)을 무색 왁스로서 수득하였다.
Figure pct00094
Cap-50
Figure pct00095
물 (30 mL) 중 3-메틸-2-(메틸아미노)부탄산 (0.50 g, 3.81 mmol)의 교반된 용액에 K2CO3 (2.63 g, 19.1 mmol) 및 벤질 클로라이드 (1.32 g, 11.4 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 주위 온도에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (30 mL x 2)로 추출하고, 수성 층을 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였고, 이를 역상 정제용 HPLC (엑스테라® 30 x 100 mm, 220 nm에서 검출, 유량 40 mL/분, 6분에 걸쳐 20 → 80％ B; A= 90％ 물, 10％ 메탄올, 0.1％ TFA, B=10％ 물, 90％ 메탄올, 0.1％ TFA)에 의해 정제하여 2-(벤질(메틸)아미노)-3-메틸부탄산, TFA 염 (126 mg, 19％)을 무색 왁스로서 수득하였다.
Figure pct00096
Cap-51
Figure pct00097
(S)-2-(메톡시카르보닐아미노)-3-메틸부탄산
Na2CO3 (1.83 g, 17.2 mmol)을 L-발린 (3.9 g, 33.29 mmol)의 NaOH (1M/H2O 33 mL, 33 mmol) 용액에 첨가하고, 생성된 용액을 빙수조로 냉각시켰다. 메틸 클로로포르메이트 (2.8 mL, 36.1 mmol)를 15분에 걸쳐 적가하고, 냉각조를 제거하고, 반응 혼합물을 주위 온도에서 3.25시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에테르 (50 mL, 3x)로 세척하고, 수성 상을 빙수조로 냉각시키고, 진한 HCl을 사용하여 1-2의 pH 영역으로 산성화시키고, CH2Cl2 (50 mL, 3x)로 추출하였다. 유기 상을 건조시키고 (MgSO4), 진공 하에 증발시켜, Cap-51을 백색 고체 (6 g)로서 수득하였다.
Figure pct00098
Cap-51 (대안적 경로)
Figure pct00099
(S)-2-(메톡시카르보닐아미노)-3-메틸부탄산
DIEA (137.5 mL, 0.766 mol)를 THF (900 mL) 중 (S)-tert-부틸 2-아미노-3-메틸부타노에이트 히드로클로라이드 (75.0 g, 0.357 mol)의 현탁액에 첨가하고, 혼합물을 0℃로 냉각시켰다 (빙수조). 메틸 클로로포르메이트 (29.0 mL, 0.375 mol)를 45분에 걸쳐 적가하고, 냉각조를 제거하고, 불균질 혼합물을 3시간 동안 주위 온도에서 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하고, 잔류물을 EtOAc 및 물 (각각 1 L) 사이에 분배시켰다. 유기 층을 H2O (1 L) 및 염수 (1 L)로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 물질을 실리카 겔 플러그 (1 kg)를 통해 통과시켜 (헥산 (4 L) 및 15:85 EtOAc/헥산 (4 L)으로 용리함), (S)-tert-부틸 2-(메톡시카르보닐아미노)-3-메틸부타노에이트를 투명한 오일 (82.0 g, 99％ 수율)로서 수득하였다.
Figure pct00100
트리플루오로아세트산 (343 mL, 4.62 mol) 및 Et3SiH (142 mL, 0.887 mol)를 CH2Cl2 (675 mL) 중 (S)-tert-부틸 2-(메톡시카르보닐아미노)-3-메틸부타노에이트 (82.0 g, 0.355 mol)의 용액에 순차적으로 첨가하고, 혼합물을 4시간 동안 주위 온도에서 교반하였다. 휘발성 성분을 감압 하에 제거하고, 생성된 오일을 석유 에테르 (600 mL)로 연화처리하여 백색 고체를 수득하였고, 이를 여과하고, 헥산 (500 mL) 및 석유 에테르 (500 mL)로 세척하였다. EtOAc/석유 에테르로부터 재결정화시켜 Cap-51을 백색 박편상 결정 (54.8 g, 88％ 수율)으로서 수득하였다. MP = 108.5-109.5℃.
Figure pct00101
광학 회전: [α]D = -4.16 (12.02 mg/mL; MeOH). 광학적 순도: >99.5％ ee. 주의: 광학적 순도 평가는, 표준 TMSCHN2 (벤젠/MeOH) 에스테르화 프로토콜 하에 제조된 Cap-51의 메틸 에스테르 유도체 상에서 수행하였다. HPLC 분석 조건: 칼럼, 키랄팩® AD-H (4.6 x 250 mm, 5 μm); 용매, 95％ 헵탄 / 5％ IPA (등용매); 유량, 1 mL/분; 온도, 35℃; 205 nm에서의 UV 모니터링.
[주: Cap-51은 또한 플람(Flamm)으로부터 구입할 수도 있다.]
Cap-52 (Cap-12와 동일)
Figure pct00102
(S)-2-(메톡시카르보닐아미노)프로판산
Cap-51의 합성에 대해 기재된 절차에 따라 L-알라닌으로부터 Cap-52를 합성하였다. 특성화 목적을 위해, 조 물질의 일부를 역상 HPLC (H2O/메탄올/TFA)로 정제하여 Cap-52를 무색 점성 오일로서 수득하였다.
Figure pct00103
Cap-53 내지 Cap-64
Cap-51의 합성에 대해 기재된 절차에 따라, 만일 존재한다면 언급된 변형법으로, 적절한 출발 물질로부터 Cap-53 내지 Cap-64를 제조하였다.
Figure pct00104
Figure pct00105
Figure pct00106
Figure pct00107
Cap-65
Figure pct00108
메틸 클로로포르메이트 (0.65 mL, 8.39 mmol)를 Na2CO3 (0.449 g, 4.23 mmol), NaOH (1M/H2O 8.2 mL, 8.2 mmol) 및 (S)-2-아미노-3-히드록시-3-메틸부탄산 (1.04 g, 7.81 mmol)의 냉각된 (빙수) 혼합물에 5분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 45분 동안 교반한 다음, 냉각조를 제거하고, 추가로 3.75시간 동안 교반을 계속하였다. 반응 혼합물을 CH2Cl2로 세척하고, 수성 상을 빙수조로 냉각시키고, 진한 HCl을 사용하여 1-2의 pH 영역으로 산성화시켰다. 휘발성 성분을 진공 하에 제거하고, 잔류물을 MeOH/CH2Cl2의 2:1 혼합물 (15 mL)에 녹이고, 여과하고, 여과물을 회전증발시켜, Cap-65를 백색 반-점성 발포체 (1.236 g)로서 수득하였다.
Figure pct00109
Cap-65의 합성에 대해 기재된 절차를 이용하여, 상업적으로 입수가능한 적절한 출발 물질로부터 Cap-66 및 Cap-67을 제조하였다.
Cap-66
Figure pct00110
Figure pct00111
[주: NH의 우세한 신호만을 기록하였다].
Cap-67
Figure pct00112
Figure pct00113
[주: NH의 우세한 신호만을 기록하였다].
Cap-68
Figure pct00114
메틸 클로로포르메이트 (0.38 ml, 4.9 mmol)를 1N NaOH (수성) (9.0 ml, 9.0 mmol), 1M NaHCO3 (수성) (9.0 ml, 9.0 mol), L-아스파르트산 β-벤질 에스테르 (1.0 g, 4.5 mmol) 및 디옥산 (9 ml)의 혼합물에 적가하였다. 반응 혼합물을 주위 조건에서 3시간 동안 교반한 다음, 에틸 아세테이트 (50 ml, 3x)로 세척하였다. 수성 층을 12N HCl을 사용하여 pH 약 1-2로 산성화시키고, 에틸 아세테이트 (3 x 50 ml)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 진공 하에 농축시켜 Cap-68을 밝은 황색 오일로서 수득하였다 (1.37 g; 질량이 이론적 수율을 초과하였고, 생성물은 추가의 정제 없이 사용함).
Figure pct00115
Cap-69a 및 Cap-69b
Figure pct00116
NaCNBH3 (2.416 g, 36.5 mmol)을 알라닌 (1.338 g, 15.0 mmol)의 냉각된 (약 15℃) 물 (17 mL)/MeOH (10 mL) 용액에 여러 배치로 나누어 첨가하였다. 몇 분 후에, 아세트알데히드 (4.0 mL, 71.3 mmol)를 4분에 걸쳐 적가하고, 냉각조를 제거하고, 반응 혼합물을 주위 조건에서 6시간 동안 교반하였다. 추가의 아세트알데히드 (4.0 mL)를 첨가하고, 반응물을 2시간 동안 교반하였다. 진한 HCl을 pH가 약 1.5에 도달할 때까지 반응 혼합물에 천천히 첨가하고, 생성된 혼합물을 40℃에서 1시간 동안 가열하였다. 대부분의 휘발성 성분을 진공 하에 제거하고, 잔류물을 도웩스(DOWEX)® 50WX8-100 이온 교환 수지 (칼럼을 물로 세척하고, 화합물을 묽은 NH4OH (NH4OH 18 ml 및 물 282 ml를 혼합하여 제조함)로 용리함)로 정제하여 Cap-69 (2.0 g)를 회백색 연질 흡습성 고체로서 수득하였다.
Figure pct00117
Cap-70 내지 Cap-74x
Cap-69의 합성에 대해 기재된 절차에 따라, 적절한 출발 물질을 사용하여 Cap-70 내지 Cap-74x를 제조하였다.
Cap-75
Figure pct00119
Cap-75, 단계 a
Figure pct00120
NaBH3CN (1.6 g, 25.5 mmol)을 H-D-Ser-OBzl HCl (2.0 g, 8.6 mmol)의 냉각된 (빙수조) 물 (25 ml)/메탄올 (15 ml) 용액에 첨가하였다. 아세트알데히드 (1.5 ml, 12.5 mmol)를 5분에 걸쳐 적가하고, 냉각조를 제거하고, 반응 혼합물을 주위 조건에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 12N HCl로 조심스럽게 켄칭하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 물 중에 용해시키고, 역상 HPLC (MeOH/H2O/TFA)로 정제하여 (R)-벤질 2-(디에틸아미노)-3-히드록시프로파노에이트의 TFA 염을 무색 점성 오일 (1.9 g)로서 수득하였다.
Figure pct00121
Cap-75
NaH (0.0727 g, 1.82 mmol, 60％)를 상기 제조된 TFA 염 (R)-벤질 2-(디에틸아미노)-3-히드록시프로파노에이트 (0.3019 g, 0.8264 mmol)의 냉각된 (빙수) THF (3.0 mL) 용액에 첨가하고, 혼합물을 15분 동안 교반하였다. 메틸 아이오다이드 (56 μL, 0.90 mmol)를 첨가하고, 조가 주위 조건으로 해동되도록 하면서 18시간 동안 교반을 계속하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, MeOH 예비-컨디셔닝된 MCX (6 g) 카트리지 상에 로딩하고, 메탄올로 세척하고, 이어서 화합물을 2N NH3/메탄올로 용리하였다. 휘발성 성분을 진공 하에 제거하여, (R)-2-(디에틸아미노)-3-히드록시프로판산으로 오염된 Cap-75를 황색 반-고체 (100 mg)로서 수득하였다. 생성물을 추가의 정제 없이 그대로 사용하였다.
Cap-76
Figure pct00122
NaCNBH3 (1.60 g, 24.2 mmol)을 (S)-4-아미노-2-(tert-부톡시카르보닐아미노)부탄산 (2.17 g, 9.94 mmol)의 냉각된 (약 15℃) 물/MeOH (각각 12 mL) 용액에 여러 배치로 나누어 첨가하였다. 몇 분 후에, 아세트알데히드 (2.7 mL, 48.1 mmol)를 2분에 걸쳐 적가하고, 냉각조를 제거하고, 반응 혼합물을 주위 조건에서 3.5시간 동안 교반하였다. 추가의 아세트알데히드 (2.7 mL, 48.1 mmol)를 첨가하고, 반응물을 20.5시간 동안 교반하였다. 대부분의 MeOH 성분을 진공 하에 제거하고, 나머지 혼합물을 그의 pH가 약 1.0에 도달할 때까지 진한 HCl로 처리한 다음, 40℃에서 2시간 동안 가열하였다. 휘발성 성분을 진공 하에 제거하고, 잔류물을 4M HCl/디옥산 (20 mL)으로 처리하고, 주위 조건에서 7.5시간 동안 교반하였다. 휘발성 성분을 진공 하에 제거하고, 잔류물을 도웩스® 50WX8-100 이온 교환 수지 (칼럼을 물로 세척하고, 화합물을 묽은 NH4OH (NH4OH 18 ml 및 물 282 ml로부터 제조함)로 용리함)로 정제하여, 중간체 (S)-2-아미노-4-(디에틸아미노)부탄산을 회백색 고체 (1.73 g)로서 수득하였다.
메틸 클로로포르메이트 (0.36 mL, 4.65 mmol)를 Na2CO3 (0.243 g, 2.29 mmol), NaOH (1M/H2O 4.6 mL, 4.6 mmol) 및 상기 생성물 (802.4 mg)의 냉각된 (빙수) 혼합물에 11분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 55분 동안 교반한 다음, 냉각조를 제거하고, 추가의 5.25시간 동안 교반을 계속하였다. 반응 혼합물을 동일한 부피의 물로 희석하고, CH2Cl2 (30 mL, 2x)로 세척하고, 수성 상을 빙수조로 냉각시키고, 진한 HCl을 사용하여 2의 pH 영역으로 산성화시켰다. 이어서, 휘발성 성분을 진공 하에 제거하고, 조 물질을 MCX 수지 (6.0 g; 칼럼을 물로 세척하고, 샘플을 2.0M NH3/MeOH로 용리함)로 유리 염기화시켜, 불순한 Cap-76을 회백색 고체 (704 mg)로서 수득하였다.
Figure pct00123
Cap-77a 및 Cap-77b
Figure pct00124
Cap-77의 합성은 Cap-7에 대해 기재된 절차에 따라, SN2 치환 단계를 위해 7-아자비시클로[2.2.1]헵탄을 사용하고, 하기 조건을 이용하여 중간체 벤질 2-(7-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-일)-2-페닐아세테이트의 입체이성질체 분리를 달성함으로써 수행하였다: 중간체 (303.7 mg)를 에탄올 중에 용해시키고, 생성된 용액을 키랄 HPLC 칼럼 (키랄셀 AD-H 칼럼, 30 x 250 mm, 5 um) (70 mL/분 및 35℃의 온도에서 90％ CO2-10％ EtOH로 용리함) 상에 주입하여 입체이성질체-1 124.5 mg 및 입체이성질체-2 133.8 mg을 수득하였다. 이들 벤질 에스테르를 Cap-7의 제조에 따라 가수소분해하여 Cap-77을 수득하였다.
Figure pct00125
Cap-78
Figure pct00126
NaCNBH3 (0.5828 g, 9.27 mmol)을 MeOH (10 mL) 중 (R)-2-(에틸아미노)-2-페닐아세트산의 HCl 염 (Cap-3의 합성에서의 중간체; 0.9923 mg, 4.60 mmol) 및 (1-에톡시시클로프로폭시)트리메틸실란 (1.640 g, 9.40 mmol)의 혼합물에 첨가하고, 반-불균질 혼합물을 오일조로 50℃에서 20시간 동안 가열하였다. 추가의 (1-에톡시시클로프로폭시)트리메틸실란 (150 mg, 0.86 mmol) 및 NaCNBH3 (52 mg, 0.827 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 추가로 3.5시간 동안 가열하였다. 이어서, 이것을 주위 온도로 냉각되도록 하고, 진한 HCl을 사용하여 약 2의 pH 영역으로 산성화시키고, 혼합물을 여과하고, 여과물을 회전증발시켰다. 생성된 조 물질을 i-PrOH (6 mL)에 녹이고, 가열하여 용해시키고, 용해되지 않은 부분을 여과하고, 여과물을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질의 약 1/3을 역상 HPLC (H2O/MeOH/TFA)로 정제하여 Cap-78의 TFA 염을 무색 점성 오일 (353 mg)로서 수득하였다.
Figure pct00127
Cap-79
Figure pct00128
반응 혼합물이 청색 색조를 얻을 때까지, 오존을 Cap-55 (369 mg, 2.13 mmol)의 냉각된 (-78℃) CH2Cl2 (5.0 mL) 용액을 통해 약 50분 동안 버블링하였다. Me2S (10 피펫 방울)를 첨가하고, 반응 혼합물을 35분 동안 교반하였다. -78℃ 조를 -10℃ 조로 대체하고, 추가로 30분 동안 교반을 계속한 다음, 휘발성 성분을 진공 하에 제거하여 무색 점성 오일을 수득하였다.
NaBH3CN (149 mg, 2.25 mmol)을 상기 조 물질 및 모르폴린 (500 μL, 5.72 mmol)의 MeOH (5.0 mL) 용액에 첨가하고, 혼합물을 주위 조건에서 4시간 동안 교반하였다. 이것을 빙수 온도로 냉각시키고, 진한 HCl로 처리하여 그의 pH가 약 2.0이 되도록 한 다음, 2.5시간 동안 교반하였다. 휘발성 성분을 진공 하에 제거하고, 잔류물을 MCX 수지 (MeOH 세척; 2.0N NH3/MeOH 용리) 및 역상 HPLC (H2O/MeOH/TFA)의 조합으로 정제하여, 확인되지 않은 양의 모르폴린을 함유하는 Cap-79를 수득하였다.
모르폴린 오염물을 소모시키기 위해, 상기 물질을 CH2Cl2 (1.5 mL) 중에 용해시키고, Et3N (0.27 mL, 1.94 mmol)에 이어서 아세트산 무수물 (0.10 mL, 1.06 mmol)로 처리하고, 주위 조건에서 18시간 동안 교반하였다. THF (1.0 mL) 및 H2O (0.5 mL)를 첨가하고, 1.5시간 동안 교반을 계속하였다. 휘발성 성분을 진공 하에 제거하고, 생성된 잔류물을 MCX 수지 (MeOH 세척; 2.0N NH3/MeOH 용리)를 통해 통과시켜, 불순한 Cap-79를 갈색 점성 오일로서 수득하였고, 이를 추가의 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.
Cap-80a 및 Cap-80b
Figure pct00129
SOCl2 (6.60 mL, 90.5 mmol)를 (S)-3-아미노-4-(벤질옥시)-4-옥소부탄산 (10.04 g, 44.98 mmol) 및 MeOH (300 mL)의 냉각된 (빙수) 혼합물에 15분에 걸쳐 적가하고, 냉각조를 제거하고, 반응 혼합물을 주위 조건에서 29시간 동안 교반하였다. 대부분의 휘발성 성분을 진공 하에 제거하고, 잔류물을 EtOAc (150 mL) 및 포화 NaHCO3 용액 사이에 조심스럽게 분배시켰다. 수성 상을 EtOAc (150 mL, 2x)로 추출하고, 합한 유기 상을 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 진공 하에 농축시켜, (S)-1-벤질 4-메틸 2-아미노숙시네이트를 무색 오일 (9.706 g)로서 수득하였다.
Figure pct00130
Pb(NO3)2 (6.06 g, 18.3 mmol)를 (S)-1-벤질 4-메틸 2-아미노숙시네이트 (4.50 g, 19.0 mmol), 9-브로모-9-페닐-9H-플루오렌 (6.44 g, 20.0 mmol) 및 Et3N (3.0 mL, 21.5 mmol)의 CH2Cl2 (80 mL) 용액에 1분에 걸쳐 첨가하고, 불균질 혼합물을 주위 조건에서 48시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 여과물을 MgSO4로 처리하고, 다시 여과하고, 최종 여과물을 농축시켰다. 생성된 조 물질을 바이오타지® 정제 (350 g 실리카 겔, CH2Cl2 용리)에 적용시켜 (S)-1-벤질 4-메틸 2-(9-페닐-9H-플루오렌-9-일아미노)숙시네이트를 고점성 무색 오일 (7.93 g)로서 수득하였다.
Figure pct00131
LiHMDS (1.0 M/THF 9.2 mL, 9.2 mmol)를 (S)-1-벤질 4-메틸 2-(9-페닐-9H-플루오렌-9-일아미노)숙시네이트 (3.907 g, 8.18 mmol)의 냉각된 (-78℃) THF (50 mL) 용액에 10분에 걸쳐 적가하고, 약 1시간 동안 교반하였다. MeI (0.57 mL, 9.2 mmol)를 8분에 걸쳐 혼합물에 적가하고, 냉각조를 실온으로 해동되도록 하면서 16.5시간 동안 교반을 계속하였다. 포화 NH4Cl 용액 (5 mL)으로 켄칭한 후, 대부분의 유기 성분을 진공 하에 제거하고, 잔류물을 CH2Cl2 (100 mL) 및 물 (40 mL) 사이에 분배시켰다. 유기 층을 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 진공 하에 농축시키고, 생성된 조 물질을 바이오타지® (350 g 실리카 겔; 25％ EtOAc/헥산)로 정제하여, 약 1.0:0.65 비율 (1H NMR)의 1-벤질 4-메틸 3-메틸-2-(9-페닐-9H-플루오렌-9-일아미노)숙시네이트의 2S/3S 및 2S/3R 부분입체이성질체 혼합물 3.65 g을 수득하였다. 우세한 이성질체의 입체화학은 이 시점에서 측정하지 않았으며, 혼합물을 분리 없이 다음 단계에 적용시켰다.
Figure pct00132
디이소부틸알루미늄 히드라이드 (헥산 중 1.0M 20.57 ml, 20.57 mmol)를 상기 제조된 (2S)-1-벤질 4-메틸 3-메틸-2-(9-페닐-9H-플루오렌-9-일아미노)숙시네이트 (3.37 g, 6.86 mmol)의 냉각된 (-78℃) THF (120 mL) 용액에 10분에 걸쳐 적가하고, -78℃에서 20시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 냉각조로부터 제거하고, 교반하면서 약 1M H3PO4/H2O (250 mL)에 신속히 붓고, 혼합물을 에테르 (100 mL, 2x)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 물질의 실리카 겔 메쉬를 제조하고, 크로마토그래피 (25％ EtOAc/헥산; 중력 용리)에 적용시켜, 벤질 알콜로 오염된 (2S,3S)-벤질 4-히드록시-3-메틸-2-(9-페닐-9H-플루오렌-9-일아미노)부타노에이트 1.1 g을 무색 점성 오일로서 수득하고, 불순물로서 (2S,3R) 입체이성질체를 함유하는 (2S,3R)-벤질 4-히드록시-3-메틸-2-(9-페닐-9H-플루오렌-9-일아미노)부타노에이트를 수득하였다. 후자의 샘플을 동일한 칼럼 크로마토그래피 정제 조건에 재적용시켜 정제된 물질 750 mg을 백색 발포체로서 수득하였다. [주: 상기 조건 하에 (2S,3S) 이성질체가 (2S,3R) 이성질체 전에 용리되었다].
(2S,3S) 이성질체:
Figure pct00133
(2S,3R) 이성질체:
Figure pct00134
DIBAL-환원 생성물의 상대 입체화학 할당은 하기 프로토콜을 이용하여 각각의 이성질체로부터 제조된 락톤 유도체 상에서 수행되는 NOE 연구를 기초로 하여 이루어졌다: LiHMDS (1.0 M/THF 50 μL, 0.05 mmol)를 (2S,3S)-벤질 4-히드록시-3-메틸-2-(9-페닐-9H-플루오렌-9-일아미노)부타노에이트 (62.7 mg, 0.135 mmol)의 냉각된 (빙수) THF (2.0 mL) 용액에 첨가하고, 반응 혼합물을 유사한 온도에서 약 2시간 동안 교반하였다. 휘발성 성분을 진공 하에 제거하고, 잔류물을 CH2Cl2 (30 mL), 물 (20 mL) 및 포화 수성 NH4Cl 용액 (1 mL) 사이에 분배시켰다. 유기 층을 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 진공 하에 농축시키고, 생성된 조 물질을 바이오타지® 정제 (40 g 실리카 겔; 10-15％ EtOAc/헥산)에 적용시켜 (3S,4S)-4-메틸-3-(9-페닐-9H-플루오렌-9-일아미노)디히드로푸란-2(3H)-온을 무색 고체 필름 (28.1 mg)으로서 수득하였다. (2S,3R)-벤질 4-히드록시-3-메틸-2-(9-페닐-9H-플루오렌-9-일아미노)부타노에이트를 (3S,4R)-4-메틸-3-(9-페닐-9H-플루오렌-9-일아미노)디히드로푸란-2(3H)-온과 유사하게 수득하였다.
(3S,4S)-락톤 이성질체:
Figure pct00135
(3S,4R)-락톤 이성질체:
Figure pct00136
TBDMS-Cl (48 mg, 0.312 mmol)에 이어서 이미다졸 (28.8 mg, 0.423 mmol)을 (2S,3S)-벤질 4-히드록시-3-메틸-2-(9-페닐-9H-플루오렌-9-일아미노)부타노에이트 (119.5 mg, 0.258 mmol)의 CH2Cl2 (3 ml) 용액에 첨가하고, 혼합물을 주위 조건에서 14.25시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 CH2Cl2 (30 mL)로 희석하고, 물 (15 mL)로 세척하고, 유기 층을 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 바이오타지® (40 g 실리카 겔; 5％ EtOAc/헥산)로 정제하여, TBDMS계 불순물로 오염된 (2S,3S)-벤질 4-(tert-부틸디메틸실릴옥시)-3-메틸-2-(9-페닐-9H-플루오렌-9-일아미노)부타노에이트를 무색 점성 오일 (124.4 mg)로서 수득하였다. (2S,3R)-벤질 4-히드록시-3-메틸-2-(9-페닐-9H-플루오렌-9-일아미노)부타노에이트를 (2S,3R)-벤질 4-(tert-부틸디메틸실릴옥시)-3-메틸-2-(9-페닐-9H-플루오렌-9-일아미노)부타노에이트와 유사하게 수득하였다.
(2S,3S)-실릴 에테르 이성질체:
Figure pct00137
(2S,3R)-실릴 에테르 이성질체:
Figure pct00138
수소 벌룬을 EtOAc (16 mL) 중 (2S,3S)-벤질 4-(tert-부틸디메틸실릴옥시)-3-메틸-2-(9-페닐-9H-플루오렌-9-일아미노)부타노에이트 (836 mg, 1.447 mmol) 및 10％ Pd/C (213 mg)의 혼합물에 부착하고, 혼합물을 실온에서 약 21시간 동안 교반하고, 이때 필요에 따라 벌룬을 H2로 재충전하였다. 반응 혼합물을 CH2Cl2로 희석하고, 규조토 패드 (셀라이트®-545)를 통해 여과하고, 패드를 EtOAc (200 mL), EtOAc/MeOH (1:1 혼합물, 200 mL) 및 MeOH (750 mL)로 세척하였다. 합한 유기 상을 농축시키고, 생성된 조 물질로부터 실리카 겔 메쉬를 제조하고, 플래쉬 크로마토그래피 (EtOAc/i-PrOH/H2O의 8:2:1 혼합물)에 적용시켜 (2S,3S)-2-아미노-4-(tert-부틸디메틸실릴옥시)-3-메틸부탄산을 솜털모양의 백색 고체 (325 mg)로서 수득하였다. (2S,3R)-벤질 4-(tert-부틸디메틸실릴옥시)-3-메틸-2-(9-페닐-9H-플루오렌-9-일아미노)부타노에이트를 (2S,3R)-2-아미노-4-(tert-부틸디메틸실릴옥시)-3-메틸부탄산과 유사하게 수득하였다.
(2S,3S)-아미노산 이성질체:
Figure pct00139
(2S,3R)-아미노산 이성질체:
Figure pct00140
물 (1 mL) 및 NaOH (1.0M/H2O 0.18 mL, 0.18 mmol)를 (2S,3S)-2-아미노-4-(tert-부틸디메틸실릴옥시)-3-메틸부탄산 (41.9 mg, 0.169 mmol) 및 Na2CO3 (11.9 mg, 0.112 mmol)의 혼합물에 첨가하고, 약 1분 동안 초음파처리하여 반응물을 용해시켰다. 이어서, 혼합물을 빙수조로 냉각시키고, 메틸 클로로포르메이트 (0.02 mL, 0.259 mmol)를 30초에 걸쳐 첨가하고, 유사한 온도에서 40분 동안 및 이어서 주위 온도에서 2.7시간 동안 격렬한 교반을 계속하였다. 반응 혼합물을 물 (5 mL)로 희석하고, 빙수조로 냉각시키고, 1.0N HCl 수용액 (약 0.23 mL)으로 적하 처리하였다. 혼합물을 물 (10 mL)로 추가로 희석하고, CH2Cl2 (15 mL, 2x)로 추출하였다. 합한 유기 상을 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 진공 하에 농축시켜, Cap-80a를 회백색 고체로서 수득하였다. (2S,3R)-2-아미노-4-(tert-부틸디메틸실릴옥시)-3-메틸부탄산을 Cap-80b와 유사하게 수득하였다.
Cap-80a:
Figure pct00141
Cap-80b:
Figure pct00142
조 생성물을 추가의 정제 없이 사용하였다.
Cap-81
Figure pct00143
문헌 [Falb et al., Synthetic Communications, 23:2839 (1993)]에 의해 기재된 프로토콜에 따라 제조하였다.
Cap-82 내지 Cap-85
Cap-51 또는 Cap-13에 대해 기재된 걸차에 따라 적절한 출발 물질로부터 Cap-82 내지 Cap-85를 합성하였다. 샘플은 이들의 입체이성질체 (즉, 각각 Cap-4, Cap-13, Cap-51 및 Cap-52)의 스펙트럼 프로파일과 유사한 스펙트럼 프로파일을 나타내었다.
Figure pct00144
Cap-86
Figure pct00145
(2S,3R)-3-메톡시-2-(메톡시카르보닐아미노)부탄산
H2O (15 mL) 중 O-메틸-L-트레오닌 (3.0 g, 22.55 mmol), NaOH (0.902 g, 22.55 mmol)의 혼합물에 ClCO2Me (1.74 mL, 22.55 mmol)를 0℃에서 적가하였다. 혼합물을 12시간 동안 교반되도록 하고, 1N HCl을 사용하여 pH 1로 산성화시켰다. 수성 상을 EtOAc (2x250 mL), 및 CH2Cl2 중 10％ MeOH (250 mL)로 추출하고, 합한 유기 상을 진공 하에 농축시켜 무색 오일 (4.18 g, 97％)을 수득하였고, 이것은 후속 단계에서 사용하기에 충분한 순도였다.
Figure pct00146
Cap-87
Figure pct00147
H2O (15 mL) 중 L-호모세린 (2.0 g, 9.79 mmol), Na2CO3 (2.08 g, 19.59 mmol)의 혼합물에 ClCO2Me (0.76 mL, 9.79 mmol)를 0℃에서 적가하였다. 혼합물을 48시간 동안 교반되도록 하고, 1N HCl을 사용하여 pH 1로 산성화시켰다. 수성 상을 EtOAc (2X250 mL)로 추출하고, 합한 유기 상을 진공 하에 농축시켜 무색 고체 (0.719 g, 28％)를 수득하였고, 이것은 후속 단계에서 사용하기에 충분한 순도였다.
Figure pct00148
Cap-88
Figure pct00149
DMSO (10 mL) 중 L-발린 (1.0 g, 8.54 mmol), 3-브로모피리딘 (1.8 mL, 18.7 mmol), K2CO3 (2.45 g, 17.7 mmol) 및 CuI (169 mg, 0.887 mmol)의 혼합물을 100℃에서 12시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, H2O (약 150 mL)에 붓고, EtOAc (x2)로 세척하였다. 유기 층을 소량의 H2O로 추출하고, 합한 수성 상을 6N HCl을 사용하여 pH 약 2로 산성화시켰다. 부피를 약 1/3로 감소시키고, 양이온 교환 수지 (스트라타(Strata)) 20 g을 첨가하였다. 슬러리를 20분 동안 정치하고, 양이온 교환 수지 (스트라타) 패드 (약 25 g) 상에 로딩하였다. 패드를 H2O (200 mL), MeOH (200 mL)로 세척한 다음, NH3 (MeOH 중 3M, 2X200 mL)으로 세척하였다. 적절한 분획을 진공 하에 농축시키고, 잔류물 (약 1.1 g)을 H2O 중에 용해시키고, 동결시키고, 동결건조시켰다. 표제 화합물을 발포체 (1.02 g, 62％)로서 수득하였다.
Figure pct00150
Cap-89
Figure pct00151
DMSO (10 mL) 중 L-발린 (1.0 g, 8.54 mmol), 5-브로모피리미딘 (4.03 g, 17.0 mmol), K2CO3 (2.40 g, 17.4 mmol) 및 CuI (179 mg, 0.94 mmol)의 혼합물을 100℃에서 12시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, H2O (약 150 mL)에 붓고, EtOAc (x2)로 세척하였다. 유기 층을 소량의 H2O로 추출하고, 합한 수성 상을 6N HCl을 사용하여 pH 약 2로 산성화시켰다. 부피를 약 1/3로 감소시키고, 양이온 교환 수지 (스트라타) 20 g을 첨가하였다. 슬러리를 20분 동안 정치하고, 양이온 교환 수지 (스트라타) 패드 (약 25 g) 상에 로딩하였다. 패드를 H2O (200 mL), MeOH (200 mL)로 세척한 다음, NH3 (MeOH 중 3M, 2x200 mL)으로 세척하였다. 적절한 분획을 진공 하에 농축시키고, 잔류물 (약 1.1 g)을 H2O 중에 용해시키고, 동결시키고, 동결건조시켰다. 표제 화합물을 발포체 (1.02 g, 62％)로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD)은 혼합물이 발린을 함유함을 보여주었고, 순도는 추정할 수 없었다. 물질을 후속 반응에 그대로 사용하였다.
Figure pct00152
Cap-90
Figure pct00153
Cap-1의 제조에 대해 기재된 방법에 따라 Cap-90을 제조하였다. 조 물질을 후속 단계에 그대로 사용하였다.
Figure pct00154
Cap-91 내지 Cap-116
달리 언급되지 않는 한, Cap-51의 제조에 이용된 방법에 따라 하기 Cap을 제조하였다:
Figure pct00155
Figure pct00156
Figure pct00157
Figure pct00158
Figure pct00159
Cap-117 내지 Cap-123
Cap-117 내지 Cap-123의 제조를 위해, Boc 아미노산을 상업적 공급원으로부터 입수하고, CH2Cl2 중 25％ TFA로 처리하여 탈보호시켰다. 반응이 완료된 후 (LC-MS에 의해 판단), 용매를 진공 하에 제거하고, Cap-51에 대해 기재된 절차에 따라, 상응하는 아미노산의 TFA 염을 메틸 클로로포르메이트로 카르바모일화시켰다.
Figure pct00160
Cap-124
Figure pct00161
Cap-51에 대한 절차에 따라 L-트레오닌 tert-부틸 에스테르의 히드로클로라이드 염을 카르바모일화시켰다. 조 반응 혼합물을 1N HCl을 사용하여 pH 약 1로 산성화시키고, 혼합물을 EtOAc (2X50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 진공 하에 농축시켜, 정치시 응고되는 무색 오일을 수득하였다. 수성 층을 진공 하에 농축시키고, 생성된 생성물 및 무기 염의 혼합물을 EtOAc-CH2Cl2-MeOH (1:1:0.1)로 연화처리한 다음, 유기 상을 진공 하에 농축시켜 무색 오일을 수득하였고, 이것은 LC-MS에 의해 목적 생성물인 것으로 나타났다. 두 수확물 모두를 합하여 고체 0.52 g을 수득하였다.
Figure pct00162
Cap-125
Figure pct00163
메탄올 (15 mL) 중 Pd(OH)2 (20％, 100 mg), 수성 포름알데히드 (37 중량％, 4 ml), 아세트산 (0.5 mL)의 현탁액에 (S)-4-아미노-2-(tert-부톡시카르보닐아미노)부탄산 (1 g, 4.48 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 수소로 수회 퍼징하고, 수소 벌룬 하에 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 규조토 패드 (셀라이트®)를 통해 여과하고, 휘발성 성분을 진공 하에 제거하였다. 생성된 조 물질을 그대로 다음 단계에 사용하였다.
Figure pct00164
Cap-126
Figure pct00165
본 절차는 Cap-51을 제조하기 위해 사용된 절차의 변형이다. 0℃에서 THF (10 mL) 및 H2O (10 mL) 중 3-메틸-L-히스티딘 (0.80 g, 4.70 mmol)의 현탁액에 NaHCO3 (0.88 g, 10.5 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 ClCO2Me (0.40 mL, 5.20 mmol)로 처리하고, 혼합물을 0℃에서 교반되도록 하였다. 약 2시간 동안 교반한 후, LC-MS는 출발 물질이 남아있지 않음을 보여주었다. 반응물을 6N HCl을 사용하여 pH 2로 산성화시켰다.
용매를 진공 하에 제거하고, 잔류물을 CH2Cl2 중 20％ MeOH 20 mL 중에 현탁시켰다. 혼합물을 여과하고, 농축시켜, 밝은 황색 발포체 (1.21 g)를 수득하였다. LC-MS 및 1H NMR은 물질이 메틸 에스테르 및 목적 생성물의 9:1 혼합물임을 보여주었다. 상기 물질을 THF (10 mL) 및 H2O (10 mL)에 녹이고, 0℃로 냉각시키고, LiOH (249.1 mg, 10.4 mmol)를 첨가하였다. 약 1시간 동안 교반한 후, LC-MS는 에스테르가 남아있지 않음을 보여주었다. 이에 따라, 혼합물을 6N HCl로 산성화시키고, 용매를 진공 하에 제거하였다. LC-MS 및 1H NMR에서 에스테르의 부재를 확인하였다. 표제 화합물을 무기 염으로 오염된 HCl 염 (1.91 g, >100％)으로서 수득하였다. 화합물을 추가의 정제 없이 후속 단계에 그대로 사용하였다.
Figure pct00166
Cap-127
Figure pct00167
(S)-2-아미노-3-(1-메틸-1H-이미다졸-4-일)프로판산 (1.11 g, 6.56 mmol), NaHCO3 (1.21 g, 14.4 mmol) 및 ClCO2Me (0.56 mL, 7.28 mmol)로부터 출발하여 상기 Cap-126에 대한 방법에 따라 Cap-127을 제조하였다. 표제 화합물을 무기 염으로 오염된 HCl 염 (1.79 g, >100％)으로서 수득하였다. LC-MS 및 1H NMR은 약 5％의 메틸 에스테르의 존재를 보여주었다. 조 혼합물을 추가의 정제 없이 그대로 사용하였다.
Figure pct00168
Cap-128의 제조
Figure pct00169
단계 1. (S)-벤질 2-(tert-부톡시카르보닐아미노)펜트-4-이노에이트 (cj-27b)의 제조.
Figure pct00170
0℃에서 CH2Cl2 (100 mL) 중 cj-27a (1.01 g, 4.74 mmol), DMAP (58 mg, 0.475 mmol) 및 iPr2NEt (1.7 mL, 9.8 mmol)의 용액에 Cbz-Cl (0.68 mL, 4.83 mmol)을 첨가하였다. 용액을 0℃에서 4시간 동안 교반되도록 하고, 세척하고 (1N KHSO4, 염수), 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (TLC 6:1 hex:EtOAc)에 의해 정제하여 표제 화합물 (1.30 g, 91％)을 무색 오일로서 수득하였다.
Figure pct00171
단계 2. (S)-벤질 3-(1-벤질-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-2-(tert-부톡시카르보닐아미노)프로파노에이트 (cj-28)의 제조.
Figure pct00172
실온에서 DMF-H2O (5 mL, 4:1) 중 (S)-벤질 2-(tert-부톡시카르보닐아미노)펜트-4-이노에이트 (0.50 g, 1.65 mmol), 나트륨 아스코르베이트 (0.036 g, 0.18 mmol), CuSO4-5H2O (0.022 g, 0.09 mmol) 및 NaN3 (0.13 g, 2.1 mmol)의 혼합물에 BnBr (0.24 mL, 2.02 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 65℃로 가온하였다. 5시간 후, LC-MS는 낮은 전환을 나타내었다. 추가 분량의 NaN3 (100 mg)을 첨가하고, 12시간 동안 가열을 계속하였다. 반응물을 EtOAc 및 H2O에 붓고, 진탕시켰다. 층을 분리하고, 수성 층을 EtOAc로 3회 추출하고, 합한 유기 상을 세척하고 (H2O x3, 염수), 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 (바이오타지®, 40+M CH2Cl2 중 0-5％ MeOH; TLC, CH2Cl2 중 3％ MeOH)에 의해 정제하여, 정치시 응고되는 밝은 황색 오일 (748.3 mg, 104％)을 수득하였다. NMR은 목적 생성물과 일치하였으나, DMF의 존재를 시사하였다. 물질을 추가의 정제 없이 그대로 사용하였다.
Figure pct00173
단계 3. (S)-벤질 3-(1-벤질-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-2-(메톡시카르보닐아미노)프로파노에이트 (cj-29)의 제조.
Figure pct00174
CH2Cl2 중 (S)-벤질 3-(1-벤질-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-2-(tert-부톡시카르보닐아미노)프로파노에이트 (0.52 g, 1.15 mmol)의 용액에 TFA (4 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반되도록 하였다. 혼합물을 진공 하에 농축시켜, 정치시 응고되는 무색 오일을 수득하였다. 상기 물질을 THF-H2O 중에 용해시키고, 0℃로 냉각시켰다. 고체 NaHCO3 (0.25 g, 3.00 mmol)에 이어서 ClCO2Me (0.25 mL, 3.25 mmol)를 첨가하였다. 1.5시간 동안 교반한 후, 혼합물을 6N HCl을 사용하여 pH 약 2로 산성화시킨 다음, H2O-EtOAc에 부었다. 층을 분리하고, 수성 상을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 세척하고 (H2O, 염수), 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 진공 하에 농축시켜, 펌프 상에서 정치시 응고되는 무색 오일 (505.8 mg, 111％, NMR은 미확인 불순물의 존재를 시사함)을 수득하였다. 물질을 추가의 정제 없이 그대로 사용하였다.
Figure pct00175
단계 4. (S)-2-(메톡시카르보닐아미노)-3-(1H-1,2,3-트리아졸-4-일)프로판산 (Cap-128)의 제조.
Figure pct00176
(S)-벤질 3-(1-벤질-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-2-(메톡시카르보닐아미노)프로파노에이트 (502 mg, 1.11 mmol)를 12시간 동안 대기압에서 MeOH (5 mL) 중 Pd-C (82 mg)의 존재 하에 수소화시켰다. 혼합물을 규조토 (셀라이트®)를 통해 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. (S)-2-(메톡시카르보닐아미노)-3-(1H-1,2,3-트리아졸-4-일)프로판산을 무색 검 (266 mg, 111％)으로서 수득하였고, 이것은 약 10％의 메틸 에스테르로 오염되어 있었다. 물질을 추가의 정제 없이 그대로 사용하였다.
Figure pct00177
Cap-129의 제조
Figure pct00178
단계 1. (S)-2-(벤질옥시카르보닐아미노)-3-(1H-피라졸-1-일)프로판산 (cj-31)의 제조.
Figure pct00179
CH3CN (12 mL) 중 (S)-벤질 2-옥소옥세탄-3-일카르바메이트 (0.67 g, 3.03 mmol) 및 피라졸 (0.22 g, 3.29 mmol)의 현탁액을 50℃에서 24시간 동안 가열하였다. 혼합물을 밤새 실온으로 냉각시키고, 고체를 여과하여 (S)-2-(벤질옥시카르보닐아미노)-3-(1H-피라졸-1-일)프로판산 (330.1 mg)을 수득하였다. 여과물을 진공 하에 농축시킨 다음, 소량의 CH3CN (약 4 mL)으로 연화처리하여 제2 수확물 (43.5 mg)을 수득하였다. 총 수율 370.4 mg (44％). m.p. 165.5 - 168℃. 문헌 m.p. 168.5 - 169.5 [Vederas et al., J. Am. Chem. Soc., 107:7105 (1985)].
Figure pct00180
단계 2. (S)-2-(메톡시카르보닐아미노)-3-(1H-피라졸-1-일)프로판산 (Cap-129)의 제조.
Figure pct00181
(S)-2-(벤질옥시카르보닐아미노)-3-(1H-피라졸-1-일)프로판산 (0.20 g, 0.70 mmol)을 2시간 동안 대기압에서 MeOH (5 mL) 중 Pd-C (45 mg)의 존재 하에 수소화시켰다. 생성물은 MeOH에 불용성인 것으로 나타났고, 이에 따라 반응 혼합물을 H2O 5 mL 및 몇 방울의 6N HCl로 희석하였다. 균질 용액을 규조토 (셀라이트®)를 통해 여과하고, MeOH를 진공 하에 제거하였다. 나머지 용액을 동결시키고, 동결건조시켜 황색 발포체 (188.9 mg)를 수득하였다. 상기 물질을 THF-H2O (1:1, 10 mL) 중에 현탁시킨 다음, 0℃로 냉각시켰다. 차가운 혼합물에 NaHCO3 (146.0 mg, 1.74 mmol)을 조심스럽게 첨가하였다 (CO2의 방출). 기체 방출이 중지된 후 (약 15분), ClCO2Me (0.06 mL, 0.78 mmol)를 적가하였다. 혼합물을 2시간 동안 교반되도록 하고, 6N HCl을 사용하여 pH 약 2로 산성화시키고, EtOAc에 부었다. 층을 분리하고, 수성 상을 EtOAC (x5)로 추출하였다. 합한 유기 층을 세척하고 (염수), 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 농축시켜 표제 화합물을 무색 고체 (117.8 mg, 79％)로서 수득하였다.
Figure pct00182
Cap-130
Figure pct00183
Cap-130을, 문헌 [Calmes, M. et al., Tetrahedron, 43(10):2285 (1987)]에 주어진 절차와 유사하게, 상업적으로 입수가능한 (R)-페닐글리신의 아실화에 의해 제조하였다.
Cap-131
Figure pct00184
단계 a: 디메틸카르바모일 클로라이드 (0.92 mL, 10 mmol)를 THF (50 mL) 중 (S)-벤질 2-아미노-3-메틸부타노에이트 히드로클로라이드 (2.44 g; 10 mmol) 및 휘니그 염기 (3.67 mL, 21 mmol)의 용액에 천천히 첨가하였다. 생성된 백색 현탁액을 실온에서 밤새 (16시간) 교반하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트 및 물 사이에 분배시켰다. 유기 층을 염수로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 황색 오일을 플래쉬 크로마토그래피 (에틸 아세테이트:헥산 (1:1)으로 용리함)에 의해 정제하였다. 수집된 분획을 진공 하에 농축시켜, 투명한 오일 2.35 g (85％)을 수득하였다.
Figure pct00185
단계 b: 상기 제조된 중간체 (2.35 g; 8.45 mmol)의 MeOH (50 mL) 용액에 Pd/C (10％; 200 mg)를 첨가하고, 생성된 흑색 현탁액을 N2 (3x)로 플러싱하고, 1 atm의 H2 하에 위치시켰다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고, 마이크로섬유 필터를 통해 여과하여 촉매를 제거하였다. 이어서, 생성된 투명한 용액을 감압 하에 농축시켜 1.43 g (89％)의 Cap-131을 백색 발포체로서 수득하였고, 이를 추가의 정제 없이 사용하였다.
Figure pct00186
Cap-132
Figure pct00187
Cap-132를 Cap-131에 대해 기재된 방법에 따라 (S)-벤질 2-아미노프로파노에이트 히드로클로라이드로부터 제조하였다.
Figure pct00188
Cap-133
Figure pct00189
Cap-133을 Cap-47에 대해 기재된 방법에 따라 (S)-tert-부틸 2-아미노-3-메틸부타노에이트 히드로클로라이드 및 2-플루오로에틸 클로로포르메이트로부터 제조하였다.
Figure pct00190
Cap-134
Figure pct00191
Cap-134를 Cap-51에 대해 기재된 방법에 따라 (S)-디에틸 알라닌 및 메틸 클로로포르메이트로부터 제조하였다.
Figure pct00192
Cap-135
Figure pct00193
메탄올 (5 mL) 중 D-2-아미노-(4-플루오로페닐)아세트산 (338 mg, 2.00 mmol), 디에틸에테르 중 1N HCl (2.0 mL, 2.0 mmol) 및 포르말린 (37％, 1 mL)의 용액을 10％ 탄소상 팔라듐 (60 mg) 상에서 16시간 동안 25℃에서 벌룬 수소화에 적용시켰다. 이어서, 혼합물을 셀라이트®를 통해 여과하여, Cap-135의 HCl 염을 백색 발포체 (316 mg, 80％)로서 수득하였다.
Figure pct00194
Cap-136
Figure pct00195
질소 하에, 무수 디에틸 에테르 (50 mL) 중 1-벤질-1H-이미다졸 (1.58 g, 10.0 mmol)의 냉각된 (-50℃) 현탁액에 n-부틸 리튬 (헥산 중 2.5M, 4.0 mL, 10.0 mmol)을 적가하였다. 20분 동안 -50℃에서 교반한 후, 건조 이산화탄소 (드라이어라이트(Drierite)를 통과한 것)를 반응 혼합물에 10분 동안 버블링한 후, 이것을 25℃로 가온되도록 하였다. 반응 혼합물에 이산화탄소를 첨가했을 때 형성된 무거운 침전물을 여과하여 흡습성 백색 고체를 수득하였고, 이를 물 (7 mL) 중에 용해시키고, pH = 3으로 산성화시키고, 냉각시키고, 스크래칭(scratching)으로 결정화를 유도하였다. 상기 침전물을 여과하여 백색 고체를 수득하였고, 이를 메탄올 중에 현탁시키고, 1N HCl/디에틸 에테르 (4 mL)로 처리하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 물 (5 mL)로부터 동결건조시켜, Cap-136의 HCl 염을 백색 고체 (817 mg, 40％)로서 수득하였다.
Figure pct00196
Cap-137
Figure pct00197
Cap-137, 단계 a
Figure pct00198
무수 디옥산 (10 mL) 중 1-클로로-3-시아노이소퀴놀린 (188 mg, 1.00 mmol; WO 2003/099274에서의 절차에 따라 제조함) (188 mg, 1.00 mmol), 불화세슘 (303.8 mg, 2.00 mmol), 비스(트리-tert-부틸포스핀)팔라듐 디클로라이드 (10 mg, 0.02 mmol) 및 2-(트리부틸스탄닐)푸란 (378 μL, 1.20 mmol)의 현탁액을 질소 하에 80℃에서 16시간 동안 가열한 후, 이것을 25℃로 냉각시키고, 1시간 동안 격렬히 교반하면서 포화 수성 불화칼륨 용액으로 처리하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 및 물 사이에 분배시키고, 유기 상을 분리하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 (0％ → 30％ 에틸 아세테이트/헥산으로 용리) 상에서 정제하여 Cap-137, 단계 a를 백색 고체로서 수득하였고, 이를 그대로 사용하였다 (230 mg, 105％).
Figure pct00199
Cap-137
Figure pct00200
사염화탄소 (1 mL), 아세토니트릴 (1 mL) 및 물 (1.5 mL) 중 Cap-137, 단계 a (110 mg, 0.50 mmol) 및 과아이오딘화나트륨 (438 mg, 2.05 mmol)의 현탁액에 루테늄 트리클로라이드 히드레이트 (2 mg, 0.011 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반한 다음, 디클로로메탄 및 물 사이에 분배시켰다. 수성 층을 분리하고, 디클로로메탄으로 2회 더 추출하고, 합한 디클로로메탄 추출물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 헥산으로 연화처리하여 Cap-137 (55 mg, 55％)을 회색빛 색상의 고체로서 수득하였다.
Figure pct00201
Cap-138 내지 Cap-158
합성 전략. 방법 A.
Figure pct00202
Cap-138
Figure pct00203
Cap-138, 단계 a
Figure pct00204
건조 테트라히드로푸란 (20 mL) 중 5-히드록시이소퀴놀린 (WO 2003/099274에서의 절차에 따라 제조함) (2.0 g, 13.8 mmol) 및 트리페닐포스핀 (4.3 g, 16.5 mmol)의 교반 현탁액에 건조 메탄올 (0.8 mL) 및 디에틸 아조디카르복실레이트 (3.0 mL, 16.5 mmol)를 조금씩 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 20시간 동안 교반한 후, 이것을 에틸 아세테이트로 희석하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에 예비 흡수시키고, 정제 (40％ 에틸 아세테이트/헥산으로 용리)하여 Cap-138, 단계 a를 밝은 황색 고체 (1.00 g, 45％)로서 수득하였다.
Figure pct00205
Cap-138, 단계 b
Figure pct00206
무수 디클로로메탄 (50 mL) 중 Cap-138, 단계 a (2.34 g, 14.7 mmol)의 교반된 용액에 실온에서 메타-클로로퍼벤조산 (77％, 3.42 g, 19.8 mmol)을 한번에 첨가하였다. 20시간 동안 교반한 후, 분말화된 탄산칼륨 (2.0 g)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 이것을 여과하고, 농축시켜 Cap-138, 단계 b를 연황색 고체로서 수득하였고, 이것은 사용하기에 충분히 순수하였다 (2.15 g, 83.3％).
Figure pct00207
Cap-138, 단계 c
Figure pct00208
건조 아세토니트릴 (20 mL) 중 Cap-138, 단계 b (0.70 g, 4.00 mmol) 및 트리에틸아민 (1.1 mL, 8.00 mmol)의 교반된 용액에 실온에서 질소 하에 트리메틸실릴시아나이드 (1.60 mL, 12.00 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 75℃에서 20시간 동안 가열한 후, 이것을 실온으로 냉각시키고, 에틸 아세테이트로 희석하고, 포화 중탄산나트륨 용액 및 염수로 세척한 후, Na2SO4 상에서 건조시키고, 용매를 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (5％ 에틸 아세테이트/헥산 → 25％ 에틸 아세테이트/헥산으로 용리)하여, 백색 결정질 고체로서의 Cap-138, 단계 c (498.7 mg)를 여과물로부터 회수된 추가의 Cap-138, 단계 c 223 mg과 함께 수득하였다.
Figure pct00209
Cap-138
Figure pct00210
Cap-138, 단계 c (0.45 g, 2.44 mmol)를 5N 수산화나트륨 용액 (10 mL)으로 처리하고, 생성된 현탁액을 85℃에서 4시간 동안 가열하고, 25℃로 냉각시키고, 디클로로메탄으로 희석하고, 1N 염산으로 산성화시켰다. 유기 상을 분리하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, ¼ 부피로 농축시키고, 여과하여 Cap-138을 황색 고체 (0.44 g, 88.9％)로서 수득하였다.
Figure pct00211
합성 전략. 방법 B (문헌 [Tetrahedron Letters, 42:6707 (2001)]으로부터 유래됨).
Figure pct00212
Cap-139
Figure pct00213
Cap-139, 단계 a
Figure pct00214
무수 톨루엔 (6 mL) 중 1-클로로-6-메톡시이소퀴놀린 (1.2 g, 6.2 mmol; WO 2003/099274에서의 절차에 따라 제조함), 시안화칼륨 (0.40 g, 6.2 mmol), 1,5-비스(디페닐포스피노)펜탄 (0.27 g, 0.62 mmol) 및 아세트산팔라듐 (II) (70 mg, 0.31 mmol)의 아르곤-탈기된 현탁액을 함유하는 두꺼운 벽의 스크류-탑 바이알에 N,N,N',N'-테트라메틸에틸렌디아민 (0.29 mL, 2.48 mmol)을 첨가하였다. 바이알을 밀봉하고, 150℃에서 22시간 동안 가열한 다음, 25℃로 냉각되도록 하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 (5％ 에틸 아세테이트/헥산 → 25％ 에틸 아세테이트/헥산으로 용리함) 상에서 정제하여 Cap-139, 단계 a를 백색 고체 (669.7 mg)로서 수득하였다.
Figure pct00215
Cap-139
Figure pct00216
Cap-138에 대해 기재된 절차에 따라 5N NaOH를 사용하여, Cap-139, 단계 a의 염기성 가수분해로부터 Cap-139를 제조하였다.
Figure pct00217
Cap-140
Figure pct00218
Cap-140, 단계 a
Figure pct00219
건조 디메틸아세트아미드 (2 mL) 중 1,3-디클로로-5-에톡시이소퀴놀린 (482 mg, 2.00 mmol; WO 2005/051410에서의 절차에 따라 제조함), 아세트산팔라듐 (II) (9 mg, 0.04 mmol), 탄산나트륨 (223 mg, 2.10 mmol) 및 1,5-비스(디페닐포스피노)펜탄 (35 mg, 0.08 mmol)의 격렬히 교반된 혼합물에 25℃에서 질소 하에 N,N,N',N'-테트라메틸에틸렌디아민 (60 mL, 0.40 mmol)을 첨가하였다. 10분 후, 혼합물을 150℃로 가열한 다음, 아세톤 시아노히드린의 원액 (DMA 4.34 mL 중 아세톤 시아노히드린 457 μL로부터 제조함)을 1 mL 분량으로 18시간에 걸쳐 시린지 펌프를 사용하여 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 에틸 아세테이트 및 물 사이에 분배시키고, 유기 층을 분리하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 (10％ 에틸 아세테이트/헥산 → 40％ 에틸 아세테이트/헥산으로 용리함) 상에서 정제하여 Cap-140, 단계 a를 황색 고체 (160 mg, 34％)로서 수득하였다.
Figure pct00220
Cap-140
Figure pct00221
하기 기재된 Cap-141의 제조 절차에 기재된 바와 같이 12N HCl을 사용하는 Cap-140, 단계 a의 산 가수분해에 의해 Cap-140을 제조하였다.
Figure pct00222
Cap-141
Figure pct00223
Cap-141, 단계 a
Figure pct00224
Cap-140, 단계 a (상기 참조)의 제조 절차에 기재된 바와 같이 1-브로모-3-플루오로이소퀴놀린 (문헌 [J. Med. Chem., 13:613 (1970)]에 개괄된 절차를 이용하여 3-아미노-1-브로모이소퀴놀린으로부터 제조함)으로부터 Cap-141, 단계 a를 제조하였다.
Figure pct00225
Cap-141
Figure pct00226
Cap-141, 단계 a (83 mg, 0.48 mmol)를 12N HCl (3 mL)로 처리하고, 생성된 슬러리를 80℃에서 16시간 동안 가열한 후, 이것을 실온으로 냉각시키고, 물 (3 mL)로 희석하였다. 혼합물을 10분 동안 교반한 다음, 여과하여 Cap-141을 회백색 고체 (44.1 mg, 47.8％)로서 수득하였다. 여과물을 디클로로메탄으로 희석하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 추가의 Cap-141을 수득하였고, 이것은 직접 사용하기에 충분히 순수하였다 (29.30 mg, 31.8％).
Figure pct00227
Cap-142
Figure pct00228
Cap-142, 단계 a
Figure pct00229
Cap-138, 단계 b 및 c의 제조를 위한 2-단계 절차에 기재된 바와 같이 4-브로모이소퀴놀린 N-옥시드로부터 Cap-142, 단계 a를 제조하였다.
Figure pct00230
Cap-142, 단계 b
Figure pct00231
무수 톨루엔 (1 mL) 중 Cap-142, 단계 a (116 mg, 0.50 mmol), 삼염기성 인산칼륨 (170 mg, 0.80 mmol), 아세트산팔라듐 (II) (3.4 mg, 0.015 mmol) 및 2-(디시클로헥실포스피노)비페닐 (11 mg, 0.03 mmol)의 아르곤-탈기된 현탁액에 모르폴린 (61 μL, 0.70 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 100℃에서 16시간 동안 가열하고, 25℃로 냉각시키고, 규조토 (셀라이트®)를 통해 여과하였다. 잔류물을 실리카 겔 (10％ → 70％ 에틸 아세테이트/헥산으로 용리함) 상에서 정제하여 Cap-142, 단계 b (38 mg, 32％)를 황색 고체로서 수득하였고, 이를 직접 사용하였다.
Figure pct00232
Cap-142
Figure pct00233
Cap-138에 대한 절차에 기재된 바와 같이 5N 수산화나트륨을 사용하여 Cap-142, 단계 b로부터 Cap-142를 제조하였다.
Figure pct00234
Cap-143
Figure pct00235
Cap-143, 단계 a
Figure pct00236
무수 디메틸포름아미드 (10 mL) 중 3-아미노-1-브로모이소퀴놀린 (444 mg, 2.00 mmol)의 교반된 용액에 수소화나트륨 (60％, 세척되지 않음, 96 mg, 2.4 mmol)을 한번에 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 5분 동안 교반한 후, 2-브로모에틸 에테르 (90％, 250 μL, 2.00 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 5시간 동안 및 75℃에서 72시간 동안 추가로 교반한 후, 이것을 25℃로 냉각시키고, 포화 염화암모늄 용액으로 켄칭하고, 에틸 아세테이트로 희석하였다. 유기 층을 분리하고, 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 (0％ → 70％ 에틸 아세테이트/헥산으로 용리함) 상에서 정제하여 Cap-143, 단계 a를 황색 고체 (180 mg, 31％)로서 수득하였다.
Figure pct00237
Cap-143
Figure pct00238
무수 테트라히드로푸란 (5 mL) 중 Cap-143, 단계 a (154 mg, 0.527 mmol)의 차가운 (-60℃) 용액에 헥산 중 n-부틸리튬의 용액 (2.5M, 0.25 mL, 0.633 mmol)을 첨가하였다. 10분 후, 건조 이산화탄소를 반응 혼합물에 10분 동안 버블링한 후, 이것을 1N HCl로 켄칭하고, 25℃로 가온되도록 하였다. 이어서, 혼합물을 디클로로메탄 (3 x 30 mL)으로 추출하고, 합한 유기 추출물을 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 역상 HPLC (MeOH/물/TFA)에 의해 정제하여 Cap-143 (16 mg, 12％)을 수득하였다.
Figure pct00239
Cap-144
Figure pct00240
Cap-144, 단계 a
Figure pct00241
1,3-디클로로이소퀴놀린 (2.75 g, 13.89 mmol)을 발연 질산 (10 mL) 및 진한 황산 (10 mL)의 차가운 (0℃) 용액에 조금씩 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반한 후, 이것을 16시간 동안 교반하면서 25℃로 점차 가온하였다. 이어서, 부순 얼음 및 물을 함유하는 비커에 혼합물을 붓고, 생성된 현탁액을 1시간 동안 0℃에서 교반한 후, 이것을 여과하여 Cap-144, 단계 a (2.73 g, 81％)를 황색 고체로서 수득하였고, 이를 직접 사용하였다.
Figure pct00242
Cap-144, 단계 b
Figure pct00243
Cap-144, 단계 a (0.30 g, 1.23 mmol)를 메탄올 (60 mL)에 녹이고, 산화백금 (30 mg)으로 처리하고, 현탁액을 7 psi H2에서 1.5시간 동안 파르(Parr) 수소화에 적용시켰다. 이어서, 포르말린 (5 mL) 및 추가의 산화백금 (30 mg)을 첨가하고, 현탁액을 45 psi H2에서 13시간 동안 파르 수소화에 재적용시켰다. 이어서, 이것을 규조토 (셀라이트®)를 통해 흡인-여과하고, 1/4 부피로 농축시켰다. 생성된 침전물을 흡인-여과하여 표제 화합물을 황색 고체로서 수득하였고, 이를 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (헥산 중 5％ 에틸 아세테이트 → 헥산 중 25％ 에틸 아세테이트로 용리함)하여 Cap-144, 단계 b (231 mg, 78％)를 연황색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00244
Cap-144, 단계 c
Figure pct00245
Cap-139, 단계 a의 제조에 대해 기재된 절차에 따라 Cap-144, 단계 b로부터 Cap-144, 단계 c를 제조하였다.
Figure pct00246
Cap-144
Figure pct00247
Cap-141에 대해 기재된 절차에 따라 Cap-144를 제조하였다.
Figure pct00248
Cap-145 내지 Cap-162
하기 개괄된 바와 같이, 달리 언급되지 않는 한 Cap-138 (방법 A) 또는 Cap-139 (방법 B)의 제조에 대해 기재된 절차에 따라 적절한 1-클로로이소퀴놀린으로부터 Cap-145 내지 Cap-162를 제조하였다.
Figure pct00249
Figure pct00250
Figure pct00251
Figure pct00252
Figure pct00253
Figure pct00254
Figure pct00255
Cap-163
Figure pct00256
디에틸에테르 (25 ml) 중 2-케토부티르산 (1.0 g, 9.8 mmol)의 용액에 페닐마그네슘 브로마이드 (22 ml, THF 중 1M)를 적가하였다. 반응물을 약 25℃에서 질소 하에 17.5시간 동안 교반하였다. 반응물을 1N HCl로 산성화시키고, 생성물을 에틸 아세테이트 (3 x 100 ml)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물에 이어서 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시켰다. 진공 하에 농축시킨 후, 백색 고체를 수득하였다. 고체를 헥산/에틸 아세테이트로부터 재결정화시켜 Cap-163을 백색 침상체 (883.5 mg)로서 수득하였다.
Figure pct00257
Cap-164
Figure pct00258
MeOH (40 mL) 중 2-아미노-2-페닐부티르산 (1.5 g, 8.4 mmol), 포름알데히드 (14 mL, 물 중 37％), 1N HCl (10 mL) 및 10％ Pd/C (0.5 mg)의 혼합물을 파르 병 내에서 42시간 동안 50 psi의 H2에 노출시켰다. 반응물을 셀라이트® 상에서 여과하고, 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 MeOH (36 mL)에 녹이고, 생성물을 역상 HPLC (MeOH/H2O/TFA)로 정제하여 Cap-164의 TFA 염을 백색 고체 (1.7 g)로서 수득하였다.
Figure pct00259
Cap-165
Figure pct00260
1,2-디클로로에탄 (7 ml) 중 2-아미노-2-인단카르복실산 (258.6 mg, 1.46 mmol) 및 포름산 (0.6 ml, 15.9 mmol)의 혼합물에 포름알데히드 (0.6 ml, 물 중 37％)를 첨가하였다. 혼합물을 약 25℃에서 15분 동안 교반한 다음, 70℃에서 8시간 동안 가열하였다. 휘발성 성분을 진공 하에 제거하고, 잔류물을 DMF (14 mL) 중에 용해시키고, 역상 HPLC (MeOH/H2O/TFA)에 의해 정제하여 Cap-165의 TFA 염을 점성 오일 (120.2 mg)로서 수득하였다.
Figure pct00261
Cap-166a 및 Cap-166b
Figure pct00262
반-정제용 키랄셀 OJ 칼럼, 20 x 250 mm, 10 μm (85:15 헵탄/에탄올 혼합물로 10 mL/분의 용리 속도에서 25분 동안 용리함)를 사용하여 벤질 에스테르 중간체를 분리한 것을 제외하고는, Cap-7a 및 Cap-7b의 합성에 대해 기재된 방법에 따라 (1S,4S)-(+)-2-메틸-2,5-디아자비시클로[2.2.1]헵탄 (2HBr)으로부터 Cap-166a 및 Cap-166b를 제조하였다.
Cap-166b:
Figure pct00263
Cap-167
Figure pct00264
20％ TFA/CH2Cl2 중 라세미 Boc-1,3-디히드로-2H-이소인돌 카르복실산 (1.0 g, 3.8 mmol)의 용액을 약 25℃에서 4시간 동안 교반하였다. 모든 휘발성 성분을 진공 하에 제거하였다. MeOH 중 생성된 조 물질, 포름알데히드 (15 mL, 물 중 37％), 1N HCl (10 mL) 및 10％ Pd/C (10 mg)의 혼합물을 파르 병 내에서 23시간 동안 H2 (40 PSI)에 노출시켰다. 반응 혼합물을 셀라이트® 상에서 여과하고, 진공 하에 농축시켜 Cap-167을 황색 발포체 (873.5 mg)로서 수득하였다.
Figure pct00265
Cap-168
Figure pct00266
Cap-167의 제조에 대해 기재된 절차에 따라 라세미 Boc-아미노인단-1-카르복실산으로부터 라세미 Cap-168을 제조하였다. 조 물질을 그대로 사용하였다.
Cap-169
Figure pct00267
MeOH (60 mL) 중 2-아미노-2-페닐프로판산 히드로클로라이드 (5.0 g, 2.5 mmol), 포름알데히드 (15 ml, 물 중 37％), 1N HCl (15 ml) 및 10％ Pd/C (1.32 g)의 혼합물을 파르 병에 넣고, 수소 (55 PSI) 하에서 4일 동안 진탕시켰다. 반응 혼합물을 셀라이트® 상에서 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 MeOH에 녹이고, 역상 정제용-HPLC (MeOH/물/TFA)에 의해 정제하여, Cap-169의 TFA 염을 점성 반-고체 (2.1 g)로서 수득하였다.
Figure pct00268
Cap-170
Figure pct00269
(S)-2-(메톡시카르보닐아미노)-2-(테트라히드로-2H-피란-4-일)아세트산
물 (15 ml) 중 (S)-2-아미노-2-(테트라히드로-2H-피란-4-일)아세트산 (505 mg; 3.18 mmol; 아스타테크(Astatech)로부터 입수)에 탄산나트륨 (673 mg; 6.35 mmol)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 0℃로 냉각시킨 다음, 메틸 클로로포르메이트 (0.26 ml; 3.33 mmol)를 5분에 걸쳐 적가하였다. 조를 주위 온도로 해동되도록 하면서 반응물을 18시간 동안 교반되도록 하였다. 이어서, 반응 혼합물을 1N HCl 및 에틸 아세테이트 사이에 분배시켰다. 유기 층을 제거하고, 수성 층을 2회의 추가 분량의 에틸 아세테이트로 추가로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜, Cap-170을 무색 잔류물로서 수득하였다.
Figure pct00270
Cap-171
Figure pct00271
에틸 아세테이트 (7 ml) 및 CH2Cl2 (4.00 ml) 중 메틸 2-(벤질옥시카르보닐아미노)-2-(옥세탄-3-일리덴)아세테이트 (200 mg, 0.721 mmol; 문헌 [Il Farmaco, 56:609-613 (2001)])의 용액을 10분 동안 질소 버블링에 의해 탈기하였다. 이어서, 디메틸 디카르보네이트 (0.116 ml, 1.082 mmol) 및 Pd/C (20 mg, 0.019 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물에 수소 벌룬을 장착하고, 주위 온도에서 밤새 교반되도록 하였고, 이때 TLC (95:5 CH2Cl2 / MeOH: Ce(NH4)2SO4 1 g, 몰리브데넘산암모늄 6 g, 황산 6 ml 및 물 100 ml로 만들어진 착색제로 가시화됨)는 완전한 전환을 나타내었다. 반응물을 셀라이트®를 통해 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 바이오타지® (25개의 샘플렛 상에 디클로로메탄과 함께 로딩; 25S 칼럼 상에서 디클로로메탄 (3CV)에 이어서 250 ml에 걸쳐 0 → 5％ MeOH / 디클로로메탄으로 용리한 다음, 5％ MeOH / 디클로로메탄 (250 ml)에서 유지시킴; 9 ml 분획)를 통해 정제하였다. 목적 물질을 함유하는 분획을 수집하고, 무색 오일로서의 메틸 2-(메톡시카르보닐아미노)-2-(옥세탄-3-일)아세테이트 120 mg (81％)으로 농축시켰다.
Figure pct00272
THF (2 mL) 및 물 (0.5 mL) 중 메틸 2-(메톡시카르보닐아미노)-2-(옥세탄-3-일)아세테이트 (50 mg, 0.246 mmol)에 수산화리튬 1수화물 (10.33 mg, 0.246 mmol)을 첨가하였다. 생성된 용액을 밤새 주위 온도에서 교반되도록 하였다. TLC (1:1 EA/Hex; 하네시안(Hanessian) 착색제 [Ce(NH4)2SO4 1 g, 몰리브데넘산암모늄 6 g, 황산 6 ml 및 물 100 ml])는 약 10％의 출발 물질이 남아있음을 나타내었다. 추가의 LiOH 3 mg을 첨가하고, 밤새 교반되도록 하였고, 이때 TLC는 출발 물질이 전혀 남아있지 않음을 보여주었다. 진공 하에 농축시키고, 고진공 하에 밤새 위치시켜, 리튬 2-(메톡시카르보닐아미노)-2-(옥세탄-3-일)아세테이트 55 mg을 무색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00273
Cap-172
Figure pct00274
Cap-172, 단계 a
Figure pct00275
하기 디아조화 단계는 문헌 [Barton, A. et al., J. C. S. Perkin Trans I, 159-164 (1982)]으로부터 적합화시켰다: 물 (0.6 mL) 중 NaNO2 (166 mg, 2.4 mmol)의 용액을 물 (7.5 mL) 중 메틸 2-아미노-5-에틸-1,3-티아졸-4-카르복실레이트 (186 mg, 1.0 mmol), CuSO4-5H2O (330 mg, 1.32 mmol), NaCl (260 mg, 4.45 mmol) 및 H2SO4 (5.5 mL)의 차가운 (0℃) 교반된 용액에 천천히 첨가하였다. 혼합물을 45분 동안 0℃에서 교반하고, 1시간 동안 추가로 교반하면서 실온으로 가온되도록 한 후, CuCl (118 mg)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 16시간 동안 추가로 교반한 후, 이것을 염수로 희석하고, 에테르로 2회 추출하였다. 유기 층을 합하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 메틸 2-클로로-5-에틸티아졸-4-카르복실레이트 (즉, Cap-172, 단계 a) (175 mg, 85％)를 오렌지색 오일 (80％ 순도)로서 수득하였고, 이를 다음 반응에 직접 사용하였다.
Figure pct00276
Cap-172
THF/H2O/MeOH (20 mL/ 3 mL/ 12 mL) 중 메틸 2-클로로-5-에틸티아졸-4-카르복실레이트 (175 mg)의 용액에 LiOH (305 mg, 12.76 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반한 후, 이것을 농축시키고, 에테르 중 1N HCl (25 mL)을 사용하여 중화시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트로 2회 추출하고, 유기 층을 합하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 증발시켜 Cap-172 (60 mg, 74％)를 적색 고체로서 수득하였고, 이를 추가의 정제 없이 사용하였다.
Figure pct00277
Cap-173
Figure pct00278
Cap-173, 단계 a
Figure pct00279
하기 디아조화 단계는 문헌 [Barton, A. et al., J.C.S. Perkin Trans I, 159-164 (1982)]으로부터 적합화시켰다: 물 (1.0 mL) 중 NaNO2 (150 mg, 2.17 mmol)의 용액을 50％ H3PO2 (3.2 mL) 중 메틸 2-아미노-5-에틸-1,3-티아졸-4-카르복실레이트 (186 mg, 1.0 mmol)의 차가운 (0℃) 교반된 용액에 적가하였다. 혼합물을 1시간 동안 0℃에서 교반하고, 이것을 2시간 동안 추가로 교반하면서 실온으로 가온되도록 하였다. 0℃로 재냉각시킨 후, 혼합물을 물 (10 mL) 중 NaOH (85 mg)의 용액으로 천천히 처리하였다. 이어서, 혼합물을 포화 NaHCO3 용액으로 희석하고, 에테르로 2회 추출하였다. 유기 층을 합하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 메틸 5-에틸티아졸-4-카르복실레이트 (즉, Cap-173, 단계 a) (134 mg, 78％)를 오렌지색 오일 (85％ 순도)로서 수득하였고, 이를 다음 반응에 직접 사용하였다.
Figure pct00280
Cap-173
THF/H2O/MeOH (18 mL/ 2.7 mL/ 11 mL) 중 메틸 5-에틸티아졸-4-카르복실레이트 (134 mg)의 용액에 LiOH (281 mg, 11.74 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반한 후, 이것을 농축시키고, 에테르 중 1N HCl (25 mL)을 사용하여 중화시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트로 2회 추출하고, 유기 층을 합하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 증발시켜 Cap-173 (90 mg, 73％)을 오렌지색 고체로서 수득하였고, 이를 추가의 정제 없이 사용하였다.
Figure pct00281
Cap-174
Figure pct00282
Cap-174, 단계 a
Figure pct00283
트리플산 무수물 (5.0 g, 18.0 mmol)을 CH2Cl2 (80 mL) 중 메틸 3-히드록시피콜리네이트 (2.5 g, 16.3 mmol) 및 TEA (2.5 mL, 18.0 mmol)의 차가운 (0℃) 용액에 적가하였다. 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반한 후, 이것을 추가로 1시간 동안 교반하면서 실온으로 가온되도록 하였다. 이어서, 혼합물을 포화 NaHCO3 용액 (40 mL)으로 켄칭하고, 유기 층을 분리하고, 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 메틸 3-(트리플루오로메틸술포닐옥시)피콜리네이트 (즉, Cap-174, 단계 a) (3.38 g, 73％)를 암갈색 오일 (>95％ 순도)로서 수득하였고, 이를 추가의 정제 없이 직접 사용하였다.
Figure pct00284
Cap-174
DMF (20 mL) 중 메틸 3-(트리플루오로메틸술포닐옥시)피콜리네이트 (570 mg, 2.0 mmol)의 용액에 LiCl (254 mg, 6.0 mmol), 트리부틸(비닐)스탄난 (761 mg, 2.4 mmol) 및 비스(트리페닐포스핀)팔라듐 디클로라이드 (42 mg, 0.06 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 100℃에서 밤새 가열한 후, KF의 포화 용액 (20 mL)을 실온에서 반응 혼합물에 첨가하였다. 상기 혼합물을 4시간 동안 교반한 후, 이것을 셀라이트®를 통해 여과하고, 셀라이트® 패드를 에틸 아세테이트로 세척하였다. 이어서, 여과물의 수성 상을 분리하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 디옥산 중 4N HCl (5 mL)로 처리하고, 생성된 혼합물을 메탄올로 추출하고, 여과하고, 증발시켜 Cap-174 (260 mg)를 녹색 고체로서 수득하였고, 다소 무기 염으로 오염되었으나 이를 추가의 정제 없이 사용하였다.
Figure pct00285
Cap-175
Figure pct00286
Cap-175, 단계 a
Figure pct00287
DMF (20 mL) 중 메틸 3-(트리플루오로메틸술포닐옥시)피콜리네이트 (즉, Cap-174, 단계 a; Cap-174의 제조에서의 중간체) (570 mg, 2.0 mmol)의 용액에 LiCl (254 mg, 6.0 mmol), 트리부틸(비닐)스탄난 (761 mg, 2.4 mmol) 및 비스(트리페닐포스핀)팔라듐 디클로라이드 (42 mg, 0.06 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 100℃에서 4시간 동안 가열한 후, 용매를 진공 하에 제거하였다. 잔류물을 아세토니트릴 (50 mL) 및 헥산 (50 mL)에 녹이고, 생성된 혼합물을 헥산으로 2회 세척하였다. 이어서, 아세토니트릴 층을 분리하고, 셀라이트®를 통해 여과하고, 증발시켰다. 잔류물을 호리존(Horizon) 기기 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (헥산 중 25％ 에틸 아세테이트 → 헥산 중 65％ 에틸 아세테이트로 구배 용리)에 의해 정제하여, 메틸 3-비닐피콜리네이트 (즉, Cap-175, 단계 a) (130 mg, 40％)를 황색 오일로서 수득하였다.
Figure pct00288
Cap-175, 단계 b
Figure pct00289
탄소상 팔라듐 (10％, 25 mg)을 에탄올 (10 mL) 중 메틸 3-비닐피콜리네이트 (120 mg, 0.74 mmol)의 용액에 첨가하였다. 현탁액을 수소 분위기 하에 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 이것을 셀라이트®를 통해 여과하고, 셀라이트® 패드를 메탄올로 세척하였다. 여과물을 농축 건조시켜 메틸 3-에틸피콜리네이트 (즉, Cap-175, 단계 b)를 수득하였고, 이를 다음 반응에 직접 사용하였다.
Figure pct00290
Cap-175
THF/H2O/MeOH (5 mL/ 0.75 mL/ 3 mL) 중 메틸 3-에틸피콜리네이트의 용액에 LiOH (35 mg, 1.47 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2일 동안 교반한 후, 추가의 LiOH (80 mg)를 첨가하였다. 실온에서 추가의 24시간 후, 혼합물을 여과하고, 용매를 진공 하에 제거하였다. 이어서, 잔류물을 디옥산 중 4N HCl (5 mL)로 처리하고, 생성된 현탁액을 농축 건조시켜 Cap-175를 황색 고체로서 수득하였고, 이를 추가의 정제 없이 사용하였다.
Figure pct00291
Cap-176
Figure pct00292
(S)-2-(4,4-디플루오로시클로헥실)-2-(메톡시카르보닐아미노)아세트산
Cap-176, 단계 a
Figure pct00293
EtOAc (150 mL) 중 1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-온 (15 g, 96 mmol)의 용액을 1,1,3,3-테트라메틸구아니딘 (10.45 mL, 83 mmol) 및 EtOAc (150 mL) 중 메틸 2-(벤질옥시카르보닐아미노)-2-(디메톡시포스포릴)아세테이트 (21.21 g, 64.0 mmol)의 용액에 첨가하였다. 생성된 용액을 72시간 동안 주위 온도에서 교반한 다음, 이것을 EtOAc (25 mL)로 희석하였다. 유기 층을 1N HCl (75 mL), H2O (100 mL) 및 염수 (100 mL)로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 바이오타지® (5％ → 25％ EtOAc/헥산; 300 g 칼럼)를 통해 정제하였다. 이어서, 생성물을 함유하는 합한 분획을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 헥산/EtOAc로부터 재결정화시켜 메틸 2-(벤질옥시카르보닐아미노)-2-(1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일리덴)아세테이트에 상응하는 백색 결정 (6.2 g)을 수득하였다.
Figure pct00294
Cap-176, 단계 b
Figure pct00295
에스테르 Cap-176, 단계 b를 문헌 [Burk, M.J. et al. (J. Am. Chem. Soc., 117:9375-9376 (1995))] 및 그 안의 참고문헌의 방법에 따라 알켄 Cap-176, 단계 a로부터 제조하였다: 500 mL 고압 병을 N2 블랭킷 하에 탈기된 MeOH (200 mL) 중 알켄 Cap-176, 단계 a (3.5 g, 9.68 mmol)로 충전하였다. 이어서, 용액을 (-)-1,2-비스((2S,5S)-2,5-디메틸포스폴라노)에탄(시클로옥타디엔)로듐 (I) 테트라플루오로보레이트 (0.108 g, 0.194 mmol)로 충전하고, 생성된 혼합물을 N2 (3x)로 플러싱하고, H2 (3x)로 충전하였다. 용액을 70 psi의 H2 하에 주위 온도에서 72시간 동안 격렬히 진탕시켰다. 용매를 감압 하에 제거하고, 나머지 잔류물을 EtOAc에 녹였다. 이어서, 갈색빛 용액을 실리카 겔 플러그를 통해 여과하고, EtOAc로 용리하였다. 용매를 진공 하에 농축시켜 에스테르 Cap-176, 단계 b에 상응하는 투명한 오일 (3.4 g)을 수득하였다.
Figure pct00296
Cap-176, 단계 c
Figure pct00297
에스테르 Cap-176, 단계 b (4.78 g, 13.15 mmol)를 THF (15 mL) 중에 용해시킨 다음, 물 (10 mL), 빙초산 (26.4 mL, 460 mmol) 및 디클로로아세트산 (5.44 mL, 65.8 mmol)을 순차적으로 첨가하였다. 생성된 혼합물을 주위 온도에서 72시간 동안 교반하고, 기체의 방출이 더이상 가시적이지 않을 때까지 격렬한 교반 하에 고체 Na2CO3을 천천히 첨가하여 반응을 켄칭하였다. 조 생성물을 10％ 에틸 아세테이트-디클로로메탄으로 추출하고, 유기 층을 합하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 농축시켰다. 생성된 잔류물을 바이오타지® (0％ → 30％ EtOAc/Hex; 25 g 칼럼)를 통해 정제하여 케톤 Cap-176, 단계 c (3.86 g)를 투명한 오일로서 수득하였다.
Figure pct00298
Cap-176, 단계 d
Figure pct00299
데옥소-플루오르(DEOXO-FLUOR)® (3.13 mL, 16.97 mmol)를 CH2Cl2 (50 mL) 중 케톤 Cap-176, 단계 c (2.71 g, 8.49 mmol)의 용액에 첨가한 다음, 촉매량의 EtOH (0.149 mL, 2.55 mmol)를 첨가하였다. 생성된 황색빛 용액을 실온에서 밤새 교반하였다. 포화 수성 NaHCO3 (25 mL)을 첨가하여 반응을 켄칭하고, 혼합물을 EtOAc (3X75 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 건조시켜 황색빛 오일을 수득하였다. 잔류물을 바이오타지® 크로마토그래피 (2％ → 15％ EtOAc/Hex; 90 g 칼럼)를 통해 정제하여 디플루오로 아미노산 디플루오라이드 Cap-176, 단계 d에 상응하는 백색 고체 (1.5 g)를 회수하였다.
Figure pct00300
Cap-176, 단계 e
Figure pct00301
디플루오라이드 Cap-176, 단계 d (4 g, 11.72 mmol)를 MeOH (120 mL) 중에 용해시키고, Pd/C (1.247 g, 1.172 mmol)로 충전하였다. 현탁액을 N2 (3x)로 플러싱하고, 반응 혼합물을 1 atm의 H2 (벌룬) 하에 위치시켰다. 혼합물을 48시간 동안 주위 온도에서 교반하였다. 이어서, 현탁액을 셀라이트® 플러그를 통해 여과하고, 진공 하에 농축시켜 아미노산 Cap-176, 단계 e에 상응하는 오일 (2.04 g)을 수득하였고, 이를 추가의 정제 없이 사용하였다.
Figure pct00302
Cap-176, 단계 f
Figure pct00303
메틸 클로로포르메이트 (1.495 mL, 19.30 mmol)를 CH2Cl2 (100 mL) 중 아미노산 Cap-176, 단계 e (2 g, 9.65 mmol) 및 DIEA (6.74 mL, 38.6 mmol)의 용액에 첨가하였다. 생성된 용액을 3시간 동안 실온에서 교반하고, 휘발물을 감압 하에 제거하였다. 잔류물을 바이오타지® (0％ → 20％ EtOAc/Hex; 90 g 칼럼)를 통해 정제하였다. 카르바메이트 Cap-176, 단계 f에 상응하는, 진공 하에 정치시 응고되는 투명한 오일 (2.22 g)을 회수하였다.
Figure pct00304
Cap-176
Figure pct00305
(S)-2-(4,4-디플루오로시클로헥실)-2-(메톡시카르보닐아미노)아세트산
물 (25 mL) 중 LiOH (0.379 g, 15.83 mmol)의 용액을 THF (75 mL) 중 카르바메이트 Cap-176, 단계 f (2.1 g, 7.92 mmol)의 용액에 첨가하고, 생성된 혼합물을 4시간 동안 주위 온도에서 교반하였다. THF를 진공 하에 제거하고, 나머지 수성 상을 1N HCl 용액 (2 mL)으로 산성화시킨 다음, EtOAc (2 X 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 농축시켜 Cap-176에 상응하는 백색 발포체 (1.92 g)를 수득하였다.
Figure pct00306
Cap-177a-d
Figure pct00307
Cap-177a-d, 단계 a
Figure pct00308
1,1,3,3-테트라메틸구아니딘 (0.985 mL, 7.85 mmol)을 EtOAc (40 mL) 중 메틸 2-(벤질옥시카르보닐아미노)-2-(디메톡시포스포릴)아세테이트 (2.0 g, 6.0 mmol)의 교반된 용액에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 N2 하에 10분 동안 교반하였다. 이어서, 디히드로-2H-피란-3(4H)-온 [23462-75-1] (0.604 g, 6.04 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 동결기에서 10분 동안 냉각시키고, 수성 시트르산 (물 20 mL 중 1.5 g)을 사용하여 중화시켰다. 2개의 상을 분배시키고, 유기 층을 0.25N 수성 HCl 및 염수로 세척한 다음, 건조시키고 (MgSO4), 무색 오일로 농축시켰다. 조 물질을 플래쉬 실리카 크로마토그래피 (로딩 용매: DCM, EtOAc/헥산으로 용리함, 20％ → 30％ EtOAc 구배)에 의해 정제하여 2종의 이성질체 생성물을 수득하였다: 첫 번째로 용리된 생성물은 (Z)-메틸 2-(벤질옥시카르보닐아미노)-2-(2H-피란-3(4H,5H,6H)-일리덴)아세테이트 (490 mg) (백색 고체)였고, 두 번째는 (E)-메틸 2-(벤질옥시카르보닐아미노)-2-(2H-피란-3(4H,5H,6H)-일리덴)아세테이트 (433 mg) (백색 고체)였다. LC-MS 체류 시간 1.398분 (Z-이성질체에 대해) 및 1.378분 (E-이성질체에 대해); m/z 304.08 (Z-이성질체에 대해) 및 304.16 (E-이성질체에 대해) (MH-). LC 데이터는 시마즈 LC-10AS 액체 크로마토그래프 (페노메넥스® 루나 10u C18 3.0x50 mm 칼럼 장착, SPD-10AV UV-Vis 검출기 사용, 검출기 파장 220 nm) 상에서 기록하였다. 다음의 용리 조건을 이용하였다: 유량 4 mL/분, 구배 100％ 용매 A / 0％ 용매 B → 0％ 용매 A / 100％ 용매 B, 구배 시간 3분, 유지 시간 1분, 및 분석 시간 4분 (여기서, 용매 A는 5％ MeOH / 95％ H2O / 10 mM 아세트산암모늄이고, 용매 B는 5％ H2O / 95％ MeOH / 10 mM 아세트산암모늄임). MS 데이터는 LC용 마이크로매스(MICROMASS)® 플랫폼을 이용하여 전기분무 모드로 측정하였다.
Figure pct00309
(주의: 절대 위치화학은 1H NMR 이동 및 커플링 상수에 의해 결정하였다).
Cap-177a-d, 단계 b
Figure pct00310
(-)-1,2-비스((2S,5S)-2,5-디메틸포스폴라노)에탄(시클로옥타디엔)-로듐(I)테트라플루오로보레이트 (28.2 mg, 0.051 mmol)를 MeOH (10 mL) 중 (Z)-메틸 2-(벤질옥시카르보닐아미노)-2-(2H-피란-3(4H,5H,6H)-일리덴)아세테이트 (310 mg, 1.015 mmol)의 교반된 용액에 첨가하고, 혼합물을 N2에 이어서 H2로 진공 플러싱한 다음, 반응물을 H2 (60 psi) 하에 실온에서 2일 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 플래쉬 실리카 크로마토그래피 (로딩 용매: DCM, 헥산 중 20％ EtOAc로 용리함)에 의해 정제하여 (S)-메틸 2-(벤질옥시카르보닐아미노)-2-((S)-테트라히드로-2H-피란-3-일)아세테이트 (204 mg)를 투명한 무색 오일로서 수득하였다.
Figure pct00311
LC 데이터는 시마즈 LC-10AS 액체 크로마토그래프 (페노메넥스® 루나 10u C18 3.0x50 mm 칼럼 장착, SPD-10AV UV-Vis 검출기 사용, 검출기 파장 220 nm) 상에서 기록하였다. 다음의 용리 조건을 이용하였다: 유량 4 mL/분, 구배 100％ 용매 A / 0％ 용매 B → 0％ 용매 A / 100％ 용매 B, 구배 시간 3분, 유지 시간 1분, 및 분석 시간 4분 (여기서, 용매 A는 5％ MeOH / 95％ H2O / 10 mM 아세트산암모늄이고, 용매 B는 5％ H2O / 95％ MeOH / 10 mM 아세트산암모늄임). MS 데이터는 LC용 마이크로매스® 플랫폼을 이용하여 전기분무 모드로 측정하였다.
Figure pct00312
다른 입체이성질체 ((E)-메틸 2-(벤질옥시카르보닐아미노)-2-(2H-피란-3(4H,5H,6H)-일리덴)아세테이트) (360 mg, 1.18 mmol)를 유사한 방식으로 환원시켜 (S)-메틸 2-(벤질옥시카르보닐아미노)-2-((R)-테트라히드로-2H-피란-3-일)아세테이트 (214 mg)를 투명한 무색 오일로서 수득하였다.
Figure pct00313
LC 데이터는 시마즈 LC-10AS 액체 크로마토그래프 (페노메넥스® 루나 10u C18 3.0x50 mm 칼럼 장착, SPD-10AV UV-Vis 검출기 사용, 검출기 파장 220 nm) 상에서 기록하였다. 다음의 용리 조건을 이용하였다: 유량 4 mL/분, 구배 100％ 용매 A / 0％ 용매 B → 0％ 용매 A / 100％ 용매 B, 구배 시간 3분, 유지 시간 1분, 및 분석 시간 4분 (여기서, 용매 A는 5％ MeOH / 95％ H2O / 10 mM 아세트산암모늄이고, 용매 B는 5％ H2O / 95％ MeOH / 10 mM 아세트산암모늄임). MS 데이터는 LC용 마이크로매스® 플랫폼을 이용하여 전기분무 모드로 측정하였다.
Figure pct00314
Cap-177a, 단계 b (Cap-177c, 단계 b) 및 Cap-177b, 단계 b (Cap-177d, 단계 b)의 개별 거울상이성질체를, 개별 입체이성질체 출발 물질의 올레핀 환원을 위한 수소화 촉매로서 (-)-1,2-비스((2R,5R)-2,5-디메틸포스폴라노)에탄 (시클로옥타디엔)-로듐(I)테트라플루오로보레이트를 사용하여 동일한 방식으로, 그리고 유사한 수율로 제조하였다.
Cap-177a 및 Cap-177b, 단계 c
Figure pct00315
10％ Pd/C (69.3 mg, 0.065 mmol)를 MeOH (10 mL) 중 (S)-메틸 2-(벤질옥시카르보닐아미노)-2-((S)-테트라히드로-2H-피란-3-일)아세테이트 (200 mg, 0.651 mmol) 및 디메틸 디카르보네이트 [4525-33-1] (0.104 mL, 0.976 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 N2에 이어서 H2로 진공 플러싱한 다음, 반응물을 H2 (55 psi) 하에 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트®/실리카 패드를 통해 여과하고, 여과물을 무색 오일로 농축시켰다. 조 오일을 플래쉬 실리카 크로마토그래피 (로딩 용매: DCM, 헥산 중 30％ EtOAc로 용리함)에 의해 정제하여 생성물 (S)-메틸 2-(메톡시카르보닐아미노)-2-((S)-테트라히드로-2H-피란-3-일)아세테이트 (132 mg)를 무색 오일로서 수득하였다.
Figure pct00316
LC 데이터는 시마즈 LC-10AS 액체 크로마토그래프 (페노메넥스® 루나 10u C18 3.0x50 mm 칼럼 장착, SPD-10AV UV-Vis 검출기 사용, 검출기 파장 220 nm) 상에서 기록하였다. 다음의 용리 조건을 이용하였다: 유량 4 mL/분, 구배 100％ 용매 A / 0％ 용매 B → 0％ 용매 A / 100％ 용매 B, 구배 시간 3분, 유지 시간 1분, 및 분석 시간 4분 (여기서, 용매 A는 5％ MeOH / 95％ H2O / 10 mM 아세트산암모늄이고, 용매 B는 5％ H2O / 95％ MeOH / 10 mM 아세트산암모늄임). MS 데이터는 LC용 마이크로매스® 플랫폼을 이용하여 전기분무 모드로 측정하였다.
Figure pct00317
또 다른 부분입체이성질체 ((S)-메틸 2-(벤질옥시카르보닐아미노)-2-((R)-테트라히드로-2H-피란-3-일)아세테이트)를 유사한 방식으로 변환시켜 (S)-메틸 2-(메톡시카르보닐아미노)-2-((R)-테트라히드로-2H-피란-3-일)아세테이트를 투명한 무색 오일로서 수득하였다.
Figure pct00318
LC 데이터는 시마즈 LC-10AS 액체 크로마토그래프 (페노메넥스® 루나 10u C18 3.0x50 mm 칼럼 장착, SPD-10AV UV-Vis 검출기 사용, 검출기 파장 220 nm) 상에서 기록하였다. 다음의 용리 조건을 이용하였다: 유량 4 mL/분, 구배 100％ 용매 A / 0％ 용매 B → 0％ 용매 A / 100％ 용매 B, 구배 시간 3분, 유지 시간 1분, 및 분석 시간 4분 (여기서, 용매 A는 5％ MeOH / 95％ H2O / 10 mM 아세트산암모늄이고, 용매 B는 5％ H2O / 95％ MeOH / 10 mM 아세트산암모늄임). MS 데이터는 LC용 마이크로매스® 플랫폼을 이용하여 전기분무 모드로 측정하였다.
Figure pct00319
Cap-177a, 단계 c (Cap-177c, 단계 c) 및 Cap-177b, 단계 c (Cap-177d, 단계 c)의 개별 거울상이성질체를, Cap-177a-d, 단계 b로부터의 적절한 출발 물질을 사용하여 동일한 방식으로, 그리고 유사한 수율로 제조하였다.
Cap-177a 및 Cap-177b, 단계 d
Figure pct00320
THF (4 mL) 중 (S)-메틸 2-(메톡시카르보닐아미노)-2-((S)-테트라히드로-2H-피란-3-일)아세테이트 (126 mg, 0.545 mmol)의 용액에, 실온에서 교반하면서 물 중 1M LiOH (1.090 mL, 1.090 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 3시간 동안 교반하고, 1M HCl (1.1 mL)을 사용하여 중화시키고, EtOAc (3x 10 mL)로 추출하였다. 유기물을 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 (S)-2-(메톡시카르보닐아미노)-2-((S)-테트라히드로-2H-피란-3-일)아세트산 (Cap-177a) (125 mg)을 투명한 무색 오일로서 수득하였다.
Figure pct00321
LC 데이터는 시마즈 LC-10AS 액체 크로마토그래프 (페노메넥스® 루나 10u C18 3.0x50 mm 칼럼 장착, SPD-10AV UV-Vis 검출기 사용, 검출기 파장 220 nm) 상에서 기록하였다. 다음의 용리 조건을 이용하였다: 유량 4 mL/분, 구배 100％ 용매 A / 0％ 용매 B → 0％ 용매 A / 100％ 용매 B, 구배 시간 3분, 유지 시간 1분, 및 분석 시간 4분 (여기서, 용매 A는 5％ MeOH / 95％ H2O / 10 mM 아세트산암모늄이고, 용매 B는 5％ H2O / 95％ MeOH / 10 mM 아세트산암모늄임). MS 데이터는 LC용 마이크로매스® 플랫폼을 이용하여 전기분무 모드로 측정하였다.
Figure pct00322
또 다른 부분입체이성질체 ((S)-메틸 2-(메톡시카르보닐아미노)-2-((R)-테트라히드로-2H-피란-3-일)아세테이트)를 유사한 방식으로 변환시켜 (S)-2-(메톡시카르보닐아미노)-2-((R)-테트라히드로-2H-피란-3-일)아세트산 (Cap-177b)을 투명한 무색 오일로서 수득하였다.
Figure pct00323
LC 데이터는 시마즈 LC-10AS 액체 크로마토그래프 (페노메넥스® 루나 10u C18 3.0x50 mm 칼럼 장착, SPD-10AV UV-Vis 검출기 사용, 검출기 파장 220 nm) 상에서 기록하였다. 다음의 용리 조건을 이용하였다: 유량 4 mL/분, 구배 100％ 용매 A / 0％ 용매 B → 0％ 용매 A / 100％ 용매 B, 구배 시간 3분, 유지 시간 1분, 및 분석 시간 4분 (여기서, 용매 A는 5％ MeOH / 95％ H2O / 10 mM 아세트산암모늄이고, 용매 B는 5％ H2O / 95％ MeOH / 10 mM 아세트산암모늄임). MS 데이터는 LC용 마이크로매스® 플랫폼을 이용하여 전기분무 모드로 측정하였다.
Figure pct00324
Cap-177a (Cap-177c) 및 Cap-177b (Cap-177d)의 개별 거울상이성질체를, Cap-177a-d, 단계 c로부터의 적절한 출발 물질을 사용하여 동일한 방식으로, 그리고 유사한 수율로 제조하였다.
Cap-178
Figure pct00325
Cap-178, 단계 a
Figure pct00326
수소화 탱크에서 MeOH 20 mL 중 (2S,3S,4S)-2-메틸-3,4-디히드로-2H-피란-3,4-디일 디아세테이트 (5 g, 23.34 mmol)의 용액에 Pd/C (150 mg, 0.141 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 파르 진탕기 상에서 1시간 동안 40 psi에서 수소화시켰다. 이어서, 혼합물을 여과하고, 여과물을 농축시켜 Cap-178, 단계 a (5.0 g)를 정치시 응고되는 투명한 오일로서 수득하였다.
Figure pct00327
Cap-178, 단계 b
Figure pct00328
MeOH 50 mL 중 Cap-178, 단계 a (5.0 g, 23 mmol)의 용액에 수 방울의 나트륨 메톡시드를 첨가하였다. 30분 동안 실온에서 교반한 후, 나트륨 메톡시드 (0.1 mL, 23.12 mmol)를 첨가하고, 용액을 밤새 실온에서 교반하였다. 이어서, 용매를 진공 하에 제거하였다. 잔류물을 벤젠으로 희석하고, 농축시켜 상응하는 디올을 황색 고체로서 수득하였다. 고체를 피리딘 50 mL 중에 용해시키고, 상기 용액에 -35℃에서 벤조일 클로라이드 (2.95 mL, 25.4 mmol)를 적가하였다. 생성된 혼합물을 -35℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 밤새 실온에서 교반하였다. 혼합물을 Et2O로 희석하고, 물로 세척하였다. 수성 층을 EtOAc (2X)로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 농축시켰다. 조 생성물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 5％-15％ EtOAc/Hex)에 의해 정제하여 Cap-178, 단계 b (4.5 g)를 장기간 정치시 천천히 결정화되는 투명한 오일로서 수득하였다.
Figure pct00329
Cap-178, 단계 c
Figure pct00330
CS2 6 mL 중 NaH (1.143 g, 28.6 mmol) (미네랄 오일 중 60％)의 혼합물에 CS2 40 mL 중 Cap-178, 단계 b (4.5 g, 19 mmol)를 15분에 걸쳐 적가하였다. 생성된 혼합물을 30분 동안 실온에서 교반하였다. 혼합물은 일부 고체와 함께 밝은 오렌지색으로 변했다. 이어서, MeI (14.29 mL, 229 mmol)를 20분에 걸쳐 적가하였다. 이어서, 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 반응물을 포화 NH4Cl 용액으로 조심스럽게 켄칭하였다. 혼합물을 EtOAc (3X)로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 농축시켰다. 조 생성물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 6％ EtOAc/Hex)에 의해 정제하여 Cap-178, 단계 c (3.13 g)를 투명한 오일로서 수득하였다.
Figure pct00331
Cap-178, 단계 d
Figure pct00332
80℃에서 벤젠 40 mL 중 Cap-178, 단계 c (3.13 g, 9.59 mmol) 및 AIBN (120 mg, 0.731 mmol)의 혼합물에 트리-n-부틸주석 히드라이드 (10.24 mL, 38.4 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 환류 온도에서 20분 동안 교반한 다음, 실온으로 냉각시켰다. 혼합물을 디에틸 에테르로 희석하고, KF (10 g) 수용액 100 mL를 첨가하고, 혼합물을 30분 동안 격렬히 교반하였다. 이어서, 2개의 층을 분리하고, 수성 상을 EtOAc (2X)로 추출하였다. 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 농축시켰다. 조 생성물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 헥산 중 3％ Et3N으로 불활성화시키고, 헥산 중 3％ Et3N으로 플러싱하여 트리부틸주석 유도체를 제거한 다음, 15％ EtOAc/Hex로 용리함)에 의해 정제하여 Cap-178, 단계 d (1.9 g)를 투명한 오일로서 수득하였다.
Figure pct00333
Cap-178, 단계 e
Figure pct00334
MeOH 10 mL 중 Cap-178, 단계 d (1.9 g, 8.63 mmol)의 혼합물에 나트륨 메톡시드 (2 mL, 4.00 mmol) (메탄올 중 2M)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 5시간 동안 실온에서 교반하였다. 용매를 진공 하에 제거하였다. 혼합물을 포화 NH4Cl 용액을 사용하여 중화시키고, EtOAc (3X)로 추출하였다. 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 농축시켜 Cap-178, 단계 e (0.8 g)를 투명한 오일로서 수득하였다. 생성물을 추가의 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.
Figure pct00335
Cap-178, 단계 f
Figure pct00336
토실-Cl (2.63 g, 13.77 mmol)을 CH2Cl2 100 mL 중 Cap-178, 단계 e (0.8 g, 6.89 mmol) 및 피리딘 (2.23 mL, 27.5 mmol)의 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 3일 동안 실온에서 교반하였다. 이어서, 물 10 mL를 반응 혼합물에 첨가하고, 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 2개의 층을 분리하고, 유기 상을 물 및 1N HCl 수용액으로 세척하였다. 유기 상을 MgSO4로 건조시키고, 농축시켜 Cap-178, 단계 f (1.75 g)를 밝은 황색 고체로서 수득하였다. 생성물을 추가의 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.
Figure pct00337
Cap-178, 단계 g
Figure pct00338
마이크로웨이브 튜브에 에틸 2-(디페닐메틸렌아미노)아세테이트 (1.6 g, 5.92 mmol) 및 Cap-178, 단계 f (1.6 g, 5.92 mmol)를 넣었다. 톨루엔 10 mL를 첨가하였다. 튜브를 밀봉하고, LiHMDS (7.1 mL, 7.10 mmol) (톨루엔 중 1N)를 N2 하에 적가하였다. 생성된 암갈색 용액을 6시간 동안 100℃에서 마이크로웨이브 조사 하에 가열하였다. 이어서, 혼합물에 물 및 혼합물을 첨가하고, EtOAc (3X)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 농축시켜 Cap-3, 단계 g (3.1 g)의 부분입체이성질체 혼합물을 오렌지색 오일로서 수득하였다. 조 혼합물을 분리 없이 다음 단계에 적용시켰다.
Figure pct00339
Cap-178, 단계 h
Figure pct00340
THF 20 mL 중 에틸 Cap-178, 단계 g의 부분입체이성질체 혼합물의 용액에 HCl (30 ml, 60.0 mmol) (2N 수성)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 EtOAc로 추출하고, 수성 층을 농축시켜 Cap-178, 단계 h의 HCl 염 (1.9 g)을 오렌지색 오일로서 수득하였다. 염을 추가의 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.
Figure pct00341
Cap-178, 단계 i
Figure pct00342
CH2Cl2 20 mL 중 Cap-178, 단계 h (HCl 염) 1.9 g, DiPEA (4.19 mL, 24.0 mmol) 및 메틸 클로로포르메이트 (1.24 mL, 16.0 mmol)의 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 CH2Cl2로 희석하고, 물로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4로 건조시키고, 농축시켰다. 조 생성물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 0-20％ EtOAc/Hex)에 의해 정제하여 Cap-178, 단계 i (1.1 g)를 황색 오일로서 수득하였다.
Figure pct00343
Cap-178, 단계 j
Figure pct00344
THF 5 mL 및 물 2 mL 중 Cap-178, 단계 i (1.1 g, 4.2 mmol)의 혼합물에 LiOH (6.36 mL, 12.7 mmol) (2N 수성)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 이어서, 혼합물을 수성 1N HCl을 사용하여 중화시키고, EtOAc (3X)로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 농축시켜 Cap-178, 단계 j (0.8 g)를 투명한 오일로서 수득하였다.
Figure pct00345
Cap-178, 단계 k
Figure pct00346
CH2Cl2 10 mL 중 Cap-178, 단계 j (240 mg, 1.04 mmol), (S)-1-페닐에탄올 (0.141 mL, 1.142 mmol) 및 EDC (219 mg, 1.14 mmol)의 용액에 DMAP (13.95 mg, 0.114 mmol)를 첨가하였다. 생성된 용액을 밤새 실온에서 교반하고, 용매를 진공 하에 제거하였다. 잔류물을 EtOAc에 녹이고, 물로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 농축시켰다. 조 생성물을 크로마토그래피 (실리카 겔, 0-15％ EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 Cap-178, 단계 k를 2종의 부분입체이성질체의 혼합물로서 수득하였다. 혼합물을 키랄 HPLC (키랄팩® AS 칼럼, 21 x 250 mm, 10 um) (90％ 0.1％ 디에틸아민/헵탄-10％ EtOH로 용리함, 15 mL/분)에 의해 분리하여 Cap-178, 단계 k 입체이성질체 1 (첫 번째로 용리됨) 및 Cap-178, 단계 k 입체이성질체 2 (두 번째로 용리됨)를 백색 고체로서 수득하였다. 이성질체의 입체화학은 할당되지 않았다.
Cap-178, 단계 k 입체이성질체 1 (130 mg):
Figure pct00347
Cap-178, 입체이성질체 1
EtOH 10 mL 중 Cap-178, 단계 k 입체이성질체 1 ((S)-2-(메톡시카르보닐아미노)-2-((2S,4R)-2-메틸테트라히드로-2H-피란-4-일)아세트산) (150 mg, 0.447 mmol)의 용액에 Pd/C (20 mg, 0.188 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 파르 진탕기 상에서 밤새 40 psi에서 수소화시켰다. 이어서, 혼합물을 여과하고, 여과물을 농축시켜 Cap-178, 입체이성질체 1 (100 mg)을 점착성 백색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00348
Cap-179 (거울상이성질체-1 및 거울상이성질체-2)
Figure pct00349
Cap-179, 단계 a
Figure pct00350
2,6-디메틸-4H-피란-4-온 (10 g, 81 mmol)을 에탄올 (125 mL) 중에 용해시키고, Pd/C (1 g, 0.94 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 파르 진탕기에서 12시간 동안 실온에서 H2 (0.325 g, 161 mmol) (70 psi) 하에 수소화시켰다. 촉매를 셀라이트®의 패드를 통해 여과하고, 에탄올로 세척하였다. 여과물을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 바이오타지® (2％ → 25％ EtOAc/Hex; 160 g 칼럼)를 통해 정제하였다. 투명한 오일의 2개의 분획을 단리하였다. 제1 용리 분획은 (2R,6S)-2,6-디메틸디히드로-2H-피란-4(3H)-온 (1.8 g)에 상응하였고, 반면에 제2 분획은 Cap-179, 단계 a (1.8 g)에 상응하였다.
(2R,6S)-2,6-디메틸디히드로-2H-피란-4(3H)-온 데이터:
Figure pct00351
Cap-179, 단계 a 데이터:
Figure pct00352
Cap-179, 단계 b
Figure pct00353
DEAD (2.311 mL, 14.59 mmol)를 벤젠 (25 mL) 중 Cap-179, 단계 a (0.38 g, 2.92 mmol), 4-니트로벤조산 (2.195 g, 13.14 mmol) 및 Ph3P (3.83 g, 14.59 mmol)의 용액에 적가하였다. 열 발생이 검출되었고, 생성된 호박색 용액을 6시간 동안 주위 온도에서 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하고, 잔류물을 바이오타지® (0 → 15％ EtOAc/Hex; 80 g 칼럼)를 통해 정제하였다. Cap-179, 단계 b (0.77 g)에 상응하는 백색 고체를 단리하였다.
Figure pct00354
Cap-179, 단계 c
Figure pct00355
물 (8 mL) 중 LiOH (0.330 g, 13.8 mmol)의 용액을 THF (30 mL) 중 Cap-179, 단계 b (0.77 g, 2.76 mmol)의 용액에 첨가하고, 생성된 혼합물을 16시간 동안 주위 온도에서 교반하였다. THF를 감압 하에 제거하고, 수성 층을 추가의 물 (20 mL)로 희석하고, EtOAc (3 X 15 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 백색 고체와 함께 유성 잔류물을 회수하였다. 혼합물을 헥산으로 연화처리하고, 고체를 여과하여 Cap-179, 단계 c (0.34 g)에 상응하는 투명한 오일을 수득하였다.
Figure pct00356
Cap-179, 단계 d
Figure pct00357
p-토실 클로라이드 (3.98 g, 20.89 mmol)를 CH2Cl2 (150 mL) 중 Cap-179, 단계 c (1.36 g, 10.5 mmol) 및 피리딘 (3.38 mL, 41.8 mmol)의 용액에 실온에서 첨가하고, 24시간 동안 교반한 다음, 황색 오일로 농축시켰다. 나머지 잔류물을 피리딘 (20 mL) 및 물 (30 mL)에 첨가하고, 생성된 혼합물을 1 1/2시간 동안 주위 온도에서 교반하였다. 혼합물을 Et2O (75 mL)로 추출하고, 분리된 유기 층을 1N 수성 HCl (4 X 50 mL)로 완전히 세척하였다. 이어서, 유기 층을 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 농축시켰다. Cap-179, 단계 d (2.2 g)에 상응하는 백색 고체를 단리하였다.
Figure pct00358
Cap-179, 단계 e
Figure pct00359
밀봉된 마이크로웨이브 바이알에서 LiHMDS (4.30 mL, 4.30 mmol)를 톨루엔 (25 mL) 중 Cap-179, 단계 d (1.02 g, 3.59 mmol) 및 벤질 2-(디페닐메틸렌아미노)아세테이트 (1.181 g, 3.59 mmol)의 용액에 실온에서 첨가한 다음, 생성된 혼합물을 100℃에서 마이크로웨이브 조사 하에 5시간 동안 교반하였다. 반응물을 물 (10 mL)로 켄칭하고, EtOAc로 추출하고, 물로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 바이오타지® (0％ → 6％ EtOAc/Hex; 80 g 칼럼)를 통해 정제하여 Cap-179, 단계 e (1.2 g)에 상응하는 황색 오일을 단리하였다.
Figure pct00360
Cap-179, 단계 f (거울상이성질체-1 및 거울상이성질체-2)
Figure pct00361
Cap-179, 단계 e (2.08 g, 4.71 mmol)를 THF (100 mL) 중에 용해시키고, 2N HCl (9.42 mL, 18.84 mmol)로 처리하였다. 생성된 투명한 용액을 4시간 동안 주위 온도에서 교반한 다음, THF를 감압 하에 제거하였다. 나머지 수성 층을 헥산 (3 X 20 ml)으로 추출하고, H2O (20 mL)로 희석한 후, 수성 상을 1N NaOH를 사용하여 pH = 10으로 염기성화시키고, EtOAc (3 x 10 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 CH2Cl2 (100 mL)에 녹이고, DIEA (2.468 mL, 14.13 mmol) 및 메틸 클로로포르메이트 (0.401 mL, 5.18 mmol)로 충전하였다. 생성된 용액을 2시간 동안 주위 온도에서 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (10 mL)로 켄칭하고, 유기 층을 감압 하에 제거하였다. 이어서, 수성 층을 EtOAc (3 x 10 mL)로 추출하고, 합한 유기 층을 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 바이오타지® (10％ EtOAc/Hex; 25 g 칼럼)를 통해 정제하였다. Cap-179, 단계 f (1.05 g)에 상응하는 투명한 무색 오일을 회수하였다.
Figure pct00362
키랄팩® AD-H 칼럼 (30 x 250 mm, 5 μm) 상에서 수식자로서 12％ 메탄올을 사용하여 라세미 혼합물을 분리하는 키랄 SFC 방법을 개발하였다 (온도 = 35℃, 압력 = 150 bar, 파장 = 210 nm, 8분 동안 유량 = 70 ml/분, 용매 A = CO2, 용매 B = MeOH). 2종의 분리된 이성질체, Cap-179 단계 f (거울상이성질체-1) (제1 용리) 및 Cap-179 단계 f (거울상이성질체-2) (제2 용리)는 상응하는 혼합물과 동일한 분석 데이터를 나타내었다 (상기 참조).
Cap-179 (거울상이성질체-1 및 거울상이성질체-2)
파르 병에서 Cap-179 단계 f (거울상이성질체-1) (0.35 g, 1.044 mmol)를 MeOH (50 mL) 중에 용해시키고, Pd/C (0.111 g, 1.044 mmol)로 충전하였다. 이어서, 현탁액을 파르 진탕기에 넣고, 혼합물을 N2 (3X)로 플러싱하고, 40 psi의 H2 (2.104 mg, 1.044 mmol) 하에 위치시키고, 실온에서 2시간 동안 진탕시켰다. 촉매를 셀라이트®의 패드를 통해 여과하고, 용매를 감압 하에 제거하여 Cap-179 거울상이성질체-1 (0.25 g)에 상응하는 호박색 고체를 수득하였다.
Figure pct00363
Cap-179 거울상이성질체-2를 유사하게 제조하였다:
Figure pct00364
[주: 거울상이성질체의 1H NMR 프로파일에서의 사소한 변화는 샘플 농도의 차이의 결과일 수 있다.]
Cap-180 (라세미 혼합물)
Figure pct00365
Cap-180, 단계 a
Figure pct00366
p-토실-Cl (4.39 g, 23.0 mmol)을 CH2Cl2 (50 mL) 중 Cap-179, 단계 a (1.50 g, 11.5 mmol) 및 피리딘 (3.73 mL, 46.1 mmol)의 용액에 실온에서 첨가하고, 2일 동안 교반하였다. 반응물을 CH2Cl2로 희석하고, 물에 이어서 1N HCl로 세척하였다. 유기 층을 건조시키고 (MgSO4), 황색 오일로 농축시키고, 이를 바이오타지® (5％ → 20％ EtOAc/Hex; 40 g 칼럼)를 통해 정제하였다. Cap-180, 단계 a (2.89 g)에 상응하는, 진공 하에 응고되는 투명한 오일을 단리하였다.
Figure pct00367
Cap-180, 단계 b
Figure pct00368
LiHMDS 1N (7.09 mL, 7.09 mmol)을 톨루엔 (30 mL) 중 Cap-180, 단계 a (1.68 g, 5.91 mmol) 및 에틸 2-(디페닐메틸렌아미노)아세테이트 (1.579 g, 5.91 mmol)의 용액에 실온에서 첨가한 다음, 생성된 혼합물을 85℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 물 (50 mL)로 켄칭하고, EtOAc로 추출하고, 물로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 바이오타지® (0％ → 15％ EtOAc/Hex; 40 g 칼럼)를 통해 정제하였다. Cap-180, 단계 b (라세미 혼합물; 0.64 g)에 상응하는 투명한 황색빛 오일을 단리하였다.
Figure pct00369
Cap-180, 단계 c
Figure pct00370
Cap-180, 단계 b (0.36 g, 0.949 mmol)를 THF (10 mL) 중에 용해시키고, 2N HCl (1.897 mL, 3.79 mmol)로 처리하였다. 생성된 투명한 용액을 20시간 동안 주위 온도에서 교반하고, THF를 감압 하에 제거하였다. 나머지 수성 층을 헥산 (3 X 20 mL)으로 추출하고, H2O (20 mL)로 희석한 후, 수성 상을 1N NaOH를 사용하여 pH = 10으로 염기성화시키고, EtOAc (3 x 10 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 CH2Cl2 (10.00 mL)에 녹이고, DIEA (0.497 mL, 2.85 mmol) 및 메틸 클로로포르메이트 (0.081 mL, 1.044 mmol)로 충전하였다. 생성된 용액을 2시간 동안 주위 온도에서 교반하고, 반응 혼합물을 물 (10 mL)로 켄칭하고, 유기 층을 감압 하에 제거하였다. 수성 층을 EtOAc (3 x 10 mL)로 추출하고, 합한 유기 층을 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 농축시켰다. Cap-180, 단계 c (0.21 g)에 상응하는 호박색 오일을 회수하였고, 이를 추가의 정제 없이 사용하였다.
Figure pct00371
Cap-180 (라세미 혼합물)
Cap-180, 단계 c (0.32 g, 1.2 mmol)를 THF (10 mL) 중에 용해시키고, 0℃에서 물 (3.33 mL) 중 LiOH (0.056 g, 2.342 mmol)로 충전하였다. 생성된 용액을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. THF를 감압 하에 제거하고, 나머지 잔류물을 물 (15 mL)로 희석하고, Et2O (2 x 10 mL)로 세척하였다. 이어서, 수성 층을 1N HCl을 사용하여 pH 약 2로 산성화시키고, EtOAc (3 x 15 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 진공 하에 농축시켜 Cap-180 (라세미 혼합물) (0.2 g)을 백색 발포체로서 수득하였다.
Figure pct00372
Cap-185 (거울상이성질체-1 및 거울상이성질체-2)
Figure pct00373
Cap-185, 단계 a
Figure pct00374
THF 1 mL 중 푸란 (1.075 mL, 14.69 mmol) 및 아연 (1.585 g, 24.24 mmol)의 혼합물에 THF 4 mL 중 1,1,3,3-테트라브로모프로판-2-온 (8.23 g, 22.03 mmol) 및 트리에틸 보레이트 (5.25 mL, 30.8 mmol)를 암실에서 1시간 동안 적가하였다. 생성된 혼합물을 암실에서 17시간 동안 실온에서 교반하였다. 생성된 암갈색 혼합물을 -15℃로 냉각시키고, 물 6 mL를 첨가하였다. 혼합물을 0℃로 가온하고, 30분 동안 상기 온도에서 교반하였다. 이어서, 혼합물을 여과하고, 에테르로 세척하였다. 여과물을 물로 희석하고, 에테르 (3x)로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 농축시켜 암갈색 오일을 수득하였다. 암갈색 오일을 MeOH 6 mL 중에 용해시키고, 용액을 MeOH 20 mL 중 아연 (4.99 g, 76 mmol), 염화구리 (I) (0.756 g, 7.64 mmol) 및 염화암모늄 (5.4 g, 101 mmol)의 혼합물에 적가하였다. 반응 온도를 첨가 동안 15℃ 미만으로 유지하였다. 이어서, 혼합물을 20시간 동안 실온에서 교반하고, 여과하고, 여과물을 물로 희석하고, CH2Cl2 (3X)로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 농축시켰다. 조 생성물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 0-14％ EtOAc/Hex)에 의해 정제하여 Cap-185, 단계 a를 곧 황색으로 변하는 백색 고체 (1.0 g)로서 수득하였다.
Figure pct00375
Cap-185, 단계 b
Figure pct00376
-78℃에서 THF 2 mL 중 Cap-185, 단계 a (240 mg, 1.933 mmol)의 용액에 L-셀렉트리드 (3.87 mL, 3.87 mmol) (THF 중 1M)를 100분에 걸쳐 적가하였다. 생성된 혼합물을 -78℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 밤새 실온에서 교반하였다. 이어서, 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 20％ NaOH 수용액 4 mL를 첨가하고, 이어서 H2O2 (30％ 수용액) 2 mL를 적가하였다. 생성된 혼합물을 1시간 동안 교반한 다음, 6N HCl (약 5 mL)을 사용하여 중화시켰다. 수성 층을 NaCl로 포화시키고, CH2Cl2 (3X)로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 농축시켰다. 조 생성물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 0-40％ EtOAc/Hex)에 의해 정제하여 Cap-185, 단계 b (180 mg)를 투명한 오일로서 수득하였다.
Figure pct00377
Cap-185, 단계 c
Figure pct00378
p-토실-Cl (544 mg, 2.85 mmol)을 5 mL의 CH2Cl2 (5 mL) 중 Cap-185, 단계 b (180 mg, 1.427 mmol) 및 피리딘 (0.462 mL, 5.71 mmol)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 2일 동안 실온에서 교반하였다. 반응물을 CH2Cl2로 희석하고, 1N 수성 HCl로 세척하였다. 수성 층을 CH2Cl2 (2X)로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 농축시켰다. 조 생성물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 0-15％ EtOAc/Hex)에 의해 정제하여 Cap-185, 단계 c (210 mg)를 백색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00379
Cap-185, 단계 d
Figure pct00380
마이크로웨이브 튜브를 톨루엔 5 mL 중 벤질 2-(디페닐메틸렌아미노)아세테이트 (1.5 g, 4.57 mmol) 및 Cap-185, 단계 c (1.28 g, 4.57 mmol)로 충전하였다. 튜브를 밀봉하고, LiHMDS (5.5 mL, 5.5 mmol) (톨루엔 중 1N)를 N2 하에 적가하였다. 생성된 암갈색 용액을 마이크로웨이브에서 5시간 동안 100℃에서 가열하였다. 이어서, 혼합물에 물 및 EtOAc를 첨가하였다. 층을 분리하고, 수상을 EtOAc (2X)로 추출하였다. 합한 유기 층을 농축시켜 Cap-185, 단계 d를 라세미 혼합물로서 수득하였다. 조 혼합물을 정제 또는 분리 없이 다음 단계에 적용시켰다.
Figure pct00381
Cap-185, 단계 e
Figure pct00382
THF 30 mL 중 Cap-185, 단계 d의 라세미 혼합물의 용액에 HCl (20 mL) (2N 수성)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. TLC에 의해 판단시 반응이 이루어진 후, 2개의 층을 분리하였다. 수성 층을 EtOAc로 세척하고, 포화 NaHCO3 수용액을 사용하여 중화시킨 다음, EtOAc (3X)로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 농축시켜 Cap-185, 단계 e를 수득하였다.
Figure pct00383
Cap-185, 단계 f
Figure pct00384
CH2Cl2 5 mL 중 조 Cap-185, 단계 e, DiPEA (1.24 mL, 7.1 mmol) 및 메틸 클로로포르메이트 (0.55 mL, 7.1 mmol)의 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 CH2Cl2로 희석하고, 물로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4로 건조시키고, 농축시켰다. 조 생성물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 0-40％ EtOAc/Hex)에 의해 정제하여 라세미 혼합물 700 mg을 수득하였다. 이어서, 혼합물을 키랄 HPLC (키랄팩® AD-H 칼럼, 30 x 250 mm, 5 um)에 의해 70 mL/분에서 88％ CO2-12％ EtOH로 용리하여 분리함으로써 Cap-1, 단계 f의 거울상이성질체-1 240 mg 및 거울상이성질체-2 310 mg을 백색 고체로서 수득하였다.
거울상이성질체-1:
Figure pct00385
거울상이성질체-2:
Figure pct00386
Cap-185 (거울상이성질체-1 및 거울상이성질체-2)
MeOH 10 mL 중 용액 Cap-185, 단계 f (거울상이성질체-2) (300 mg, 0.905 mmol)를 함유하는 수소화 병에 Pd/C (15 mg, 0.141 mmol)를 질소 커버 하에 첨가하였다. 혼합물을 파르 진탕기 상에서 3시간 동안 40 psi에서 수소화시켰다. 이어서, 혼합물을 여과하고, 여과물을 농축시켜 Cap-185 (거울상이성질체-2) (200 mg)를 백색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00387
[주: Cap-185 (거울상이성질체-1)를 유사한 방식으로 수득할 수 있었다.]
Cap-186
Figure pct00388
MeOH 4 mL 중 에스테르 Cap-185, 단계 f (거울상이성질체-2) (150 mg, 0.453 mmol)의 용액에 NaOH (물 중 1N 4 mL, 4.00 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 3시간 동안 실온에서 교반하였다. 이어서, 메탄올을 진공 하에 제거하고, 잔류물을 1N HCl 용액을 사용하여 중화시키고, EtOAc (3X)로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 농축시켜, 일부 벤질 알콜로 오염된 Cap-186 (점착성 백색 고체; 115 mg)을 수득하였다.
Figure pct00389
Cap-187
Figure pct00390
Cap-187, 단계 a
Figure pct00391
벤젠 30 mL 중 Cap-178, 단계 e (2.2 g, 18.94 mmol), PPh3 (24.84 g, 95 mmol) 및 4-니트로벤조산 (14.24 g, 85 mmol)의 용액에 DEAD (42.9 mL, 95 mmol)를 적가하였다. 생성된 밝은 오렌지색 용액을 밤새 실온에서 교반하였다. 이어서, 용매를 진공 하에 제거하고, 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 0-15％ EtOAc/Hex)에 의해 정제하여 Cap-187, 단계 a (2.3 g)를 백색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00392
Cap-187, 단계 b
Figure pct00393
MeOH 10 mL 중 Cap-187, 단계 a (2.3 g, 8.67 mmol)의 용액에 나트륨 메톡시드 (2.372 mL, 8.67 mmol) (메탄올 중 25％)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 3시간 동안 실온에서 교반하였다. 물을 첨가하고, 혼합물을 EtOAc (5X)로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 농축시켰다. 조 생성물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 0-15％ EtOAc/Hex, 이어서 15-50％ EtOAc/Hex)에 의해 정제하여 Cap-187, 단계 b (0.85 g)를 투명한 오일로서 수득하였다.
Figure pct00394
Cap-187
Cap-187의 개별 거울상이성질체는 Cap-178에 대해 기재된 절차에 따라 Cap-187, 단계 b로부터 합성하였다.
Figure pct00395
Cap-188 (4종의 입체이성질체)
Figure pct00396
Cap-188, 단계 a
Figure pct00397
MeOH 50 mL 중 2,2-디메틸디히드로-2H-피란-4(3H)-온 (2 g, 15.60 mmol)의 용액에 수소화붕소나트륨 (0.649 g, 17.16 mmol)을 천천히 첨가하였다. 생성된 혼합물을 3시간 동안 실온에서 교반하였다. 이어서, 혼합물에 1N HCl 수용액을 혼합물이 산성 pH 범위로 넘어갈 때까지 첨가한 다음, EtOAc (3X)로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 농축시켜 Cap-188, 단계 a (1.9 g)를 투명한 오일로서 수득하였다. 생성물을 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.
Figure pct00398
Cap-188.1 및 Cap-188.2, 단계 b
Figure pct00399
p-토실-Cl (5.56 g, 29.2 mmol)을 CH2Cl2 100 mL 중 Cap-188, 단계 a (1.9 g, 14.59 mmol) 및 피리딘 (4.72 mL, 58.4 mmol)의 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 3일 동안 실온에서 교반하였다. 반응물에 물 10 mL를 첨가하고, 혼합물을 추가로 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 2개의 층을 분리하고, 유기 상을 물 및 1N HCl 수용액으로 세척하였다. 유기 상을 MgSO4로 건조시키고, 농축시켜 2종의 거울상이성질체의 혼합물을 밝은 황색 고체로서 수득하였다. 이어서, 혼합물을 키랄 HPLC (키랄팩® AD 칼럼, 21 x 250 mm, 10 um)에 의해 15 mL/분에서 92％ 0.1％ 디에틸아민/헵탄-8％ EtOH로 용리하여 분리함으로써 Cap-188.1, 단계 b (1.0 g) 및 Cap-188.2, 단계 b (1.0 g)를 수득하였다. 2종의 거울상이성질체의 절대 입체화학은 할당되지 않았다.
Cap-188.1, 단계 b:
Figure pct00400
Cap-188.2, 단계 b:
Figure pct00401
Cap-188
Cap-188의 4종의 입체이성질체는 Cap-178의 제조에 대해 기재된 절차에 따라 Cap-188.1, 단계 b 및 Cap-188.2, 단계 b로부터 합성할 수 있었다.
Cap-188 (입체이성질체-1):
Figure pct00402
Cap-188 (입체이성질체-2):
Figure pct00403
Cap-189
Figure pct00404
Cap-189, 단계 a
Figure pct00405
에테르 100 mL 중 페닐마그네슘 브로마이드 (113 mL, 340 mmol)의 용액 (에테르 중 3M)에 에테르 50 mL 중 엑소-2,3-에폭시노르보르난 (25 g, 227 mmol)을 첨가하였다. 초기 발열 후, 혼합물을 밤새 가열 환류시켰다. 이어서, 반응물을 실온으로 냉각시키고, 물 (약 10 mL)로 조심스럽게 켄칭하였다. 혼합물을 에테르로 희석하고, 3N HCl 수용액 (약 160 mL)으로 세척하였다. 수성 층을 에테르 (2X)로 추출하고, 합한 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 농축시켰다. 조 생성물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 0-18％ EtOAc/Hex)에 의해 정제하여 Cap-189, 단계 a (11 g)를 수득하였다.
Figure pct00406
Cap-189, 단계 b
Figure pct00407
-78℃에서 CH2Cl2 200 mL 중 옥살릴 클로라이드 (59.9 mL, 120 mmol)의 용액에 CH2Cl2 100 mL 중 DMSO (17.01 mL, 240 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 10분 동안 교반하고, CH2Cl2 150 mL 중 Cap-189, 단계 a (11 g, 100 mmol)를 첨가하고, 이어서 CH2Cl2 30 mL 중 Et3N (72.4 mL, 519 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 -78℃에서 교반한 다음, 실온으로 가온하였다. 물 (150 mL)을 첨가하고, 혼합물을 30분 동안 실온에서 교반하였다. 이어서, 2개의 층을 분리하고, 수성 층을 CH2Cl2 (2X)로 추출하였다. 유기 층을 합하고, MgSO4로 건조시키고, 농축시켰다. 조 생성물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 0-5％ EtOAc/Hex)에 의해 정제하여 Cap-189, 단계 b (5.3 g)를 밝은 황색 오일로서 수득하였다.
Figure pct00408
Cap-189, 단계 c
Figure pct00409
벤젠 100 mL 중 Cap-189, 단계 b (5.3 g, 49.0 mmol), p-톨루엔술폰산 1수화물 (1.492 g, 7.84 mmol) 및 에틸렌 글리콜 (4.10 mL, 73.5 mmol)의 혼합물을 4시간 동안 환류시킨 다음, 밤새 실온에서 교반하였다. 반응물을 Et2O와 수성 포화 NaHCO3 용액 사이에 분배시키고, 2개의 층을 분리하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 농축시켰다. 조 생성물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 0-6％ EtOAc/Hex)에 의해 정제하여 Cap-189, 단계 c (5.2 g)를 투명한 오일로서 수득하였다.
Figure pct00410
Cap-189, 단계 d
Figure pct00411
MeOH 60 mL 및 CH2Cl2 50 mL 중 Cap-189, 단계 c (5.2 g, 34.2 mmol)의 용액을 -78℃로 냉각시키고, 밝은 청색이 분명해질 때까지 오존 기체로 처리하였다. 이어서, 반응물을 N2로 버블링하여 과잉 오존 기체를 제거하고 (청색이 사라짐), 수소화붕소나트륨 (1.939 g, 51.3 mmol)을 반응물에 첨가하였다. 이어서, 반응물을 0℃로 가온하였다. 아세톤을 혼합물에 첨가하여 과잉 수소화붕소나트륨을 켄칭하였다. 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 100％ EtOAc)에 의해 정제하여 Cap-189, 단계 d (5.0 g)를 투명한 오일로서 수득하였다.
Figure pct00412
Cap-189, 단계 e
Figure pct00413
CH2Cl2 20 mL 중 Cap-189, 단계 d (1 g, 5.31 mmol)의 용액에 산화은 (3.8 g), p-Ts-Cl (1.215 g, 6.38 mmol) 및 KI (0.176 g, 1.063 mmol)를 첨가하였다. 생성된 용액을 3일 동안 실온에서 교반하였다. 이어서, 혼합물을 여과하고, 여과물을 농축시켰다. 조 생성물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 60％ EtOAc/Hex)에 의해 정제하여 Cap-189, 단계 e (0.79 g)를 투명한 오일로서 수득하였다.
Figure pct00414
Cap-189, 단계 f
Figure pct00415
MeOH 40 mL 중 Cap-189, 단계 e (2.2 g, 6.43 mmol)의 용액에 탄산칼륨 (1.776 g, 12.85 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 이어서, 혼합물을 물 및 EtOAc로 희석하였다. 2개의 층을 분리하였다. 수성 층을 EtOAc (2X)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 농축시켰다. 조 생성물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 0-15％ EtOAc/Hex)에 의해 정제하여 Cap-189, 단계 f (0.89 g, 5.23 mmol, 81％)를 투명한 오일로서 수득하였다.
Figure pct00416
Cap-189, 단계 g
Figure pct00417
THF 15 mL 중 Cap-189, 단계 f (890 mg, 5.23 mmol)의 용액에 HCl (15 mL, 45.0 mmol) (3M 수성)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 이어서, 혼합물을 에테르로 희석하고, 2개의 층을 분리하였다. 수성 상을 에테르 (2X)로 추출하고, 합한 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 농축시켜 Cap-189, 단계 g (0.95 g, 일부 잔류 용매를 함유함)를 수득하였다. 생성물을 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.
Figure pct00418
Cap-189, 단계 h (거울상이성질체-1 및 거울상이성질체-2)
Figure pct00419
-20℃에서 THF 6 mL 중 (+/-)-벤질옥시카르보닐-α-포스포노글리신 트리메틸 에스테르 (1733 mg, 5.23 mmol)의 용액에 1,1,3,3-테트라메틸구아니딘 (0.723 mL, 5.75 mmol)을 첨가하였다. 생성된 밝은 황색 혼합물을 -20℃에서 1시간 동안 교반하고, THF 3 mL 중 Cap-189, 단계 g (660 mg, 5.23 mmol)를 첨가한 다음, 혼합물을 3일 동안 실온에서 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 EtOAc로 희석하고, 0.1N HCl 수용액으로 세척하였다. 수성 층을 EtOAc (2X)로 추출하고, 합한 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 농축시켰다. 조 생성물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 0-4％ EtOAc/CH2Cl2)에 의해 정제하여 라세미 혼합물 960 mg을 수득하였다. 혼합물을 키랄 HPLC (키랄팩® AD 칼럼, 21 x 250 mm, 10 um)에 의해 15 mL/분에서 90％ 0.1％ 디에틸아민/헵탄-10％ EtOH로 용리하여 분리함으로써 Cap-189, 단계 h (거울상이성질체-1; 300 mg) 및 Cap-189, 단계 h (거울상이성질체-2; 310 mg)를 백색 고체로서 수득하였다.
Cap-189, 단계 h (거울상이성질체-1):
Figure pct00420
Cap-189, 단계 h (거울상이성질체-2):
Figure pct00421
Cap-189, 단계 i
Figure pct00422
500 mL 수소화 병에서 MeOH 10 mL 중 Cap-189, 단계 h (거울상이성질체-2; 290 mg, 0.875 mmol)의 용액을 통해 N2를 30분 동안 버블링하였다. 용액에 (S,S)-Me-BPE-Rh (9.74 mg, 0.018 mmol)를 첨가한 다음, 혼합물을 6일 동안 60 psi에서 수소화시켰다. 혼합물을 농축시켰고, 키랄 분석용 HPLC (키랄팩® OJ 칼럼)는 소량의 나머지 출발 물질 및 1종의 주요 생성물을 나타내었다. 이어서, 잔류물을 키랄 HPLC (키랄팩® OJ 칼럼, 21 x 250 mm, 10 um)에 의해 15 mL/분에서 70％ 0.1％ 디에틸아민/ 헵탄-30％ EtOH로 용리하여 분리함으로써 Cap-189, 단계 i (150 mg)를 투명한 오일로서 수득하였다.
Figure pct00423
Cap-189, 단계 j
Figure pct00424
수소화 병에서 MeOH 10 mL 중 Cap-189, 단계 i (150 mg, 0.450 mmol)의 용액에 디메틸 디카르보네이트 (0.072 mL, 0.675 mmol) 및 10％ Pd/C (23.94 mg, 0.022 mmol)를 질소 커버의 커버 하에 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 파르-진탕기 상에서 밤새 45 psi에서 수소화시켰다. 혼합물을 여과하고, 여과물을 농축시켜 Cap-189, 단계 j (110 mg)를 투명한 오일로서 수득하였다.
Figure pct00425
Cap-189
THF 2 mL 및 물 1 mL 중 Cap-189, 단계 j (110 mg, 0.428 mmol)의 혼합물에 LiOH (0.641 mL, 1.283 mmol) (2N 수성)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 혼합물을 1N HCl 수용액을 사용하여 중화시키고, EtOAc (3X)로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 농축시켜 Cap-189 (100 mg)를 백색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00426
Cap-190 (부분입체이성질체 혼합물)
Figure pct00427
Cap-190, 단계 a
Figure pct00428
0℃에서 DMF 30 mL 중 시클로펜트-3-에놀 (2.93 g, 34.8 mmol) 및 이미다졸 (5.22 g, 77 mmol)의 혼합물에 t-부틸디메틸클로로실란 (6.30 g, 41.8 mmol)을 첨가하였다. 생성된 무색 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 이어서, 헥산 및 물을 혼합물에 첨가하고, 2개의 층을 분리하였다. 수성 층을 EtOAc (2X)로 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 농축시켰다. 조 생성물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 2％ EtOAc/Hex)에 의해 정제하여 Cap-190, 단계 a (6.3 g)를 투명한 오일로서 수득하였다.
Figure pct00429
Cap-190, 단계 b
Figure pct00430
0℃에서 CH2Cl2 40 mL 중 Cap-190, 단계 a (2.3 g, 11.59 mmol)의 용액에 m-CPBA (5.60 g, 16.23 mmol)를 5 부분으로 나누어 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 이어서, 헥산 및 물을 혼합물에 첨가하고, 2개의 층을 분리하였다. 유기 층을 수성 10％ NaHSO3 및 염수 50 mL로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 농축시켰다. 조 생성물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 3％-6％ EtOAc/Hex)에 의해 정제하여 Cap-190, 단계 b (1.42 g) 및 그의 트랜스 부분입체이성질체 (0.53 g)를 투명한 오일로서 수득하였다.
Cap-190, 단계 b (시스):
Figure pct00431
Cap-190, 단계 b (트랜스):
Figure pct00432
Cap-190, 단계 c
Figure pct00433
0℃에서 벤젠 15 mL 중 (S)-1,2'-메틸렌디피롤리딘 (0.831 g, 5.39 mmol)의 용액에 n-부틸리튬 (4.90 mL, 4.90 mmol) (헥산 중 1M)을 적가하였다. 용액은 밝은 황색으로 변했다. 혼합물을 30분 동안 0℃에서 교반하였다. 이어서, 벤젠 10 mL 중 Cap-190, 단계 b (시스-이성질체; 0.7 g, 3.27 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 3시간 동안 0℃에서 교반하였다. EtOAc 및 포화 NH4Cl 수용액을 혼합물에 첨가하고, 2개의 층을 분리하였다. 유기 층을 물 및 염수로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 농축시켰다. 조 생성물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 15％ EtOAc/Hex)에 의해 정제하여 Cap-190, 단계 c (400 mg)를 밝은 황색 오일로서 수득하였다.
Figure pct00434
Cap-190, 단계 d
Figure pct00435
0℃에서 THF 5 mL 중 Cap-190, 단계 c (400 mg, 1.866 mmol), MeI (1.866 mL, 3.73 mmol) (t-부틸 메틸 에테르 중 2M)의 용액에 NaH (112 mg, 2.80 mmol) (미네랄 오일 중 60％)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온으로 가온되도록 하고, 밤새 실온에서 교반하였다. 이어서, 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc (3X)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 농축시켰다. 조 생성물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 5％ EtOAc/Hex)에 의해 정제하여 Cap-190, 단계 d (370 mg)를 밝은 황색 오일로서 수득하였다.
Figure pct00436
Cap-190, 단계 e
Figure pct00437
수소화 병에서 EtOAc 10 mL 중 Cap-190, 단계 d (400 mg, 1.751 mmol)의 용액에 산화백금(IV) (50 mg, 0.220 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 파르 진탕기 상에서 2시간 동안 50 psi에서 수소화시켰다. 이어서, 혼합물을 셀라이트®를 통해 여과하고, 여과물을 농축시켜 Cap-190, 단계 e (400 mg)를 투명한 오일로서 수득하였다.
Figure pct00438
Cap-190, 단계 f
Figure pct00439
THF 5 mL 중 Cap-190, 단계 e (400 mg, 1.736 mmol)의 용액에 TBAF (3.65 mL, 3.65 mmol) (THF 중 1N)를 첨가하였다. 혼합물의 색상은 수 분 후에 갈색으로 변하였고, 이를 밤새 실온에서 교반하였다. 휘발성 성분을 진공 하에 제거하고, 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 0-25％ EtOAc/Hex)에 의해 정제하여 Cap-190, 단계 f (105 mg)를 밝은 황색 오일로서 수득하였다.
Cap-190
이어서, Cap-190을 Cap-182에 대해 기재된 절차에 따라 Cap-190, 단계 f로부터 합성하였다.
Figure pct00441
Cap-191 (거울상이성질체-1)
Figure pct00442
Cap-191, 단계 a
Figure pct00443
질소 하에 -78℃에서 THF (3 ml) 중 디이소프로필아민 (3 ml, 21.05 mmol)의 용액에 n-부틸 리튬 (헥산 중 2.5M; 8.5 ml, 21.25 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 10분 동안 -78℃에서 교반한 다음, 25분 동안 0℃가 되게 하였다. 반응물을 다시 -78℃로 냉각시키고, THF (3 ml) 중 메틸 테트라히드로-2H-피란-4-카르복실레이트 (3 g, 20.81 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 15분 동안 -78℃에서 교반한 다음, 30분 동안 0℃가 되게 하였다. 반응물을 -78℃로 냉각시키고, 메틸 아이오다이드 (1.301 ml, 20.81 mmol)를 첨가하였다. 첨가한 후, 냉각조를 제거하고, 반응물을 약 25℃로 천천히 가온되도록 하고, 22시간 동안 교반하였다. 에틸 아세테이트 및 수성 HCl (0.1N)을 첨가하고, 유기 층을 분리하고, 염수로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 톰슨 실리카 겔 카트리지 상에 로딩하고 10％ 에틸 아세테이트/헥산으로 용리하여 밝은 황색 오일 (2.83 g)을 수득하였다.
Figure pct00444
Cap-191, 단계 b
Figure pct00445
질소 하에 -78℃에서 톨루엔 (190 ml) 중 Cap-191, 단계 a (3 g, 18.96 mmol)의 용액에 디이소부틸알루미늄 히드라이드 (톨루엔 중 1.5M; 26.5 ml, 39.8 mmol)를 적가하였다. 반응물을 1.5시간 동안 -78℃에서 계속 교반하고, 조를 제거하고, 18시간 동안 교반하였다. 반응물을 MeOH (20 mL)로 켄칭하였다. HCl (1M, 150 mL)을 첨가하고, 혼합물을 EtOAc (4 x 40 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔; 40％ 에틸 아세테이트/헥산)로 정제하여 무색 오일 (1.36 g)을 수득하였다.
Figure pct00446
Cap-191, 단계 c
Figure pct00447
질소 하에 -78℃에서 CH2Cl2 (85 ml) 중 DMSO (5.9 ml, 83 mmol)의 용액에 옥살릴 클로라이드 (3.8 ml, 43.4 mmol)를 첨가하고, 40분 동안 교반하였다. 이어서, CH2Cl2 (42.5 ml) 중 Cap-191, 단계 b (4.25 g, 32.6 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응물을 2시간 동안 질소 하에 -78℃에서 계속 교반하였다. 반응물을 차가운 20％ K2HPO4 (수성) (10 mL) 및 물로 켄칭하였다. 혼합물을 15분 동안 약 25℃에서 교반하고, 디에틸 에테르 (50 mL)로 희석하고, 층을 분리하였다. 수성 층을 디에틸 에테르 (2 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 CH2Cl2 (4 mL)에 녹이고, 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, CH2Cl2로 용리함)로 정제하여 무색 오일 (2.1 g)을 수득하였다.
Figure pct00448
Cap-191, 단계 d
Figure pct00449
약 25℃에서 질소 하에 CHCl3 (20 ml) 중 Cap-191c (2.5 g, 19.51 mmol)의 용액에 (R)-2-아미노-2-페닐에탄올 (2.94 g, 21.46 mmol)을 첨가하고, 5시간 동안 교반하였다. 반응물을 0℃로 냉각시키고, 트리메틸실릴 시아나이드 (3.8 ml, 30.4 mmol)를 적가하였다. 냉각조를 제거하고, 반응물을 15.5시간 동안 질소 하에 약 25℃에서 교반되도록 하였다. 반응물을 3N HCl (20 mL) 및 물 (20 mL)로 처리하고, 생성물을 CHCl3 (3 x 50 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 건조시키고 (NaSO4), 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔; 40％ 에틸 아세테이트/헥산)로 정제하여 2종의 부분입체이성질체를 수득하였다.
정치시 백색 고체로 응고되는 무색 오일로서의 Cap-191, 단계 d1 (부분입체이성질체 1) (3 g).
Figure pct00450
밝은 황색 오일로서의 Cap-191, 단계 d2 (부분입체이성질체 2) (0.5 g).
Figure pct00451
Cap-191, 단계 e
Figure pct00452
질소 하에 0℃에서 CH2Cl2 (11 ml) 및 MeOH (5.50 ml) 중 Cap-191, 단계 d2 (부분입체이성질체 2) (0.4472 g, 1.630 mmol)의 용액에 테트라아세트산납 (1.445 g, 3.26 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 1.5시간 동안 교반하고, 냉각조를 제거하고, 20시간 동안 계속 교반하였다. 반응물을 포스페이트 완충제 (pH = 7; 6 mL)로 처리하고, 45분 동안 교반하였다. 반응물을 셀라이트® 상에서 여과하고, CH2Cl2로 세척하고, 층을 분리하였다. 수성 층을 CH2Cl2 (3 X 25 mL)로 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔; 15％ 에틸 아세테이트/헥산)로 정제하여 이민 중간체를 무색 오일 (181.2 mg)로서 수득하였다.
Figure pct00453
이민 중간체를 6N HCl (10 mL)에 녹이고, 10일 동안 90℃에서 가열하였다. 반응물을 열로부터 제거하고, 실온으로 냉각되도록 하고, 에틸 아세테이트 (3 x 25 mL)로 추출하였다. 수성 층을 진공 하에 농축시켜 회백색 고체를 수득하였다. 고체를 MeOH에 녹이고, 예비-컨디셔닝된 MCX (6 g) 카트리지 상에 로딩하고, MeOH로 세척하고, 이어서 2N NH3/MeOH 용액으로 용리하고, 진공 하에 농축시켜 회백색 고체 (79.8 mg)를 수득하였다.
Figure pct00454
Cap-191 (거울상이성질체-1)
0℃에서 수산화나트륨 (1M 수성; 0.4 ml, 0.40 mmol) 중 Cap-191, 단계 e (0.0669 g, 0.386 mmol) 및 탄산나트륨 (0.020 g, 0.193 mmol)의 용액에 메틸 클로로포르메이트 (0.035 ml, 0.453 mmol)를 적가하였다. 반응물을 냉각조로부터 제거하고, 3시간 동안 약 25℃에서 교반되도록 하였다. 반응물을 디에틸 에테르 (3 x 20 mL)로 세척하였다. 수성 층을 12N HCl (pH 약 1-2)을 사용하여 산성화시키고, 에틸 아세테이트 (2 x 20 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 진공 하에 농축시켜 Cap-191을 무색 필름 (66.8 mg)으로서 수득하였다.
Figure pct00455
Cap-192 (거울상이성질체-2)
Figure pct00456
Cap-192 (거울상이성질체-2)를 그의 거울상이성질체 Cap-191의 제조에 대해 기재된 절차에 따라 Cap-191, 단계 d1로부터 제조하였다.
Cap-193
Figure pct00457
Cap-193, 단계 a
Figure pct00458
DCM 중 메틸 2-(벤질옥시카르보닐아미노)-2-(디메톡시포스포릴)아세테이트 (1.45 g, 4.2 mmol)의 용액에 DBU (0.70 ml, 4.7 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 10분 동안 교반하고, 이어서 DCM 중 1,3-디메톡시프로판-2-온 (0.5 g, 4.2 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 18시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 80 g 실리카 겔 카트리지에 충전시키고, 이를 헥산 중 0-70％ EtOAc의 18분 구배로 용리하여 Cap-193, 단계 a (0.8 g)를 농후한 오일로서 수득하였다.
Figure pct00459
Cap-193, 단계 b
Figure pct00460
MeOH 중 에스테르 Cap-193, 단계 a (0.5 g) 및 (+)-1,2-비스((2S,5S)-2,5-디에틸포스폴라노)벤젠(시클로옥타디엔)로듐 (I) 테트라플루오로보레이트 (0.1 g)의 반응 혼합물을 18시간 동안 55 psi의 H2 하에 교반하였다. 반응 혼합물을 농축 건조시켰다. 잔류물을 25 g 실리카 겔 카트리지에 충전시키고, 헥산 중 0-80％ EtOAc의 18분 구배로 용리하여 Cap-193, 단계 b (0.49 g)를 투명한 오일로서 수득하였다.
Figure pct00461
Cap-193, 단계 c
Figure pct00462
EtOAc 중 Cap-193, 단계 b (0.16 g), 디메틸 디카르보네이트 (0.13 g) 및 10％ Pd/C (0.026 g)의 반응 혼합물을 2시간 동안 실온에서 H2 하에 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 농축시켜 메틸 카르바메이트 Cap-193, 단계 c를 수득하였다.
Figure pct00463
Cap-193
THF (1 mL) 및 MeOH (0.25 mL) 중 에스테르 Cap-193, 단계 c의 용액에 1N NaOH (1 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, EtOAc 및 1N HCl로 희석하였다. 수성 상을 EtOAc로 추출하고, 합한 유기 상을 포화 NaCl로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 Cap-193 (0.082 g)을 수득하였다.
Figure pct00464
Cap-194
Figure pct00465
피페리딘 (1.0 mL, 10 mmol)을 DMF (3 mL) 중 (S)-2-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐아미노)- 4-메톡시부탄산 (0.355 g, 1 mmol)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 3시간 동안 실온에서 교반하였다. 휘발성 물질을 제거하고, 잔류물을 포화 NaHCO3 (수성) (5 mL) 및 EtOAc (5 mL) 사이에 분배시켰다. 수성 층을 추가로 EtOAc 및 Et2O로 세척하였다. 수용액에 Na2CO3 (212 mg, 2.0 mmol)에 이어서 메틸 클로로포르메이트 (0.16 mL, 2.0 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 16시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 pH <7까지 1N HCl (수성)로 산성화시킨 다음, EtOAc (2 x 10 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 실리카 크로마토그래피 (EtOAc/헥산, 구배 20％ → 70％)에 의해 정제하여 (S)-4-메톡시-2-(메톡시카르보닐아미노)부탄산 (Cap-194) (91.5 mg)을 점성 무색 오일로서 수득하였다.
Figure pct00466
(칼럼: 페노메넥스® 루나 3.0 x 50 mm S10. 용매 A = 90％ 물 : 10％ 메탄올 : 0.1％ TFA. 용매 B = 10％ 물 : 90％ 메탄올 : 0.1％ TFA. 유량 = 4 mL/분. 시작 ％B = 0. 최종 ％B = 100. 구배 시간 = 3분. 파장 = 220).
Figure pct00467
실시예 섹션
워터스 마이크로매스® ZQ MS 시스템과 연결된 시마즈 LC 시스템 (조건 1) 또는 워터스 PDA UV-Vis 검출을 이용한 워터스 액퀴티(Acquity) HPLC 및 워터스 ZQ MS (조건 2) 상에서 저분해능 질량 분석을 수행하였다. 체류 시간 (Rt)은 하기 조건을 이용하여 얻었고, 체류 시간이 기기 사이에 약간 달라질 수 있음에 주목하여야 한다:
조건 1a
칼럼 = 페노메넥스® 루나 4.6X 30 mm S10
시작 ％B = 0
최종 ％B = 100
구배 시간 = 3분
정지 시간 = 4분
유량 = 4 mL/분
파장 = 220 nm
용매 A = 10％ 메탄올/90％ H2O 중 0.1％ TFA
용매 B = 90％ 메탄올/10％ H2O 중 0.1％ TFA
조건 1b
칼럼 = 워터스 액퀴티 BEH C18; 1.7 μm; 150 X 2.1 mm ID; (35℃에서)
10％B 유지 = 0-1분
10-50％B = 0-25분
50-98％B = 25-33분
98％B 유지 = 32-35분
98-10％B = 35.0-35.5분
10％B 유지 = 35.5-40분
유량 = 0.35 ml/분
파장 = 254 nm
용매 A = 물 중 0.05％ TFA
용매 B = CH3CN 중 0.05％ TFA
조건 1c
칼럼 = 워터스 액퀴티 BEH C18; 1.7 μm; 150 X 2.1 mm ID; (35℃에서)
10％B 유지 = 0-1분
10-60％B = 1-4분
60-98％B = 4-21분
98％B 유지 = 21-21.5분
98-10％B = 21.5-22분
10％B 유지 = 22-25분
유량 = 0.35 ml/분
파장 = 315 nm
용매 A = 물 중 0.05％ TFA
용매 B = CH3CN 중 0.05％ TFA
조건 2a
칼럼 = 워터스 선파이어 C18, 4.6X150 mm, 3.5 μm
시작 ％B = 10
최종 ％B = 50
구배 시간 = 20분
정지 시간 = 25 내지 40분에서 변화함
유량 = 1 mL/분
파장 = 220 & 254 nm
용매 A = 5％ CH3CN/95％ H2O 중 0.1％ TFA
용매 B = 0.1％ 95％ CH3CN/5％ H2O의 중 0.1％ TFA
조건 2b
칼럼 = 워터스 엑스브릿지(Xbridge) 페닐, 4.6X150 mm, 3 μm
시작 ％B = 10
최종 ％B = 50
구배 시간 = 20분
정지 시간 = 25 내지 40분에서 변화함
유량 = 1 mL/분
파장 = 220 & 254 nm
용매 A = 5％ CH3CN/95％ H2O 중 0.1％ TFA
용매 B = 95％ CH3CN/5％ H2O중 0.1％ TFA
조건 3
칼럼 = 페노메넥스® 루나 C18 (2), 3 u, 150x4.6 mm
시작 ％B = 0
최종 ％B = 100
구배 시간: = 10분
유량 = 1 mL/분
파장 = 220 및 256 nm
용매 A = H2O/CH3CN (95:5) + 0.05％ TFA
용매 B = H2O/CH3CN (5:95) + 0.05％ TFA
조건 OL1
칼럼 = 페노메넥스® 루나 3.0 X 50 mm S10
시작 ％B = 0
최종 ％B = 100
구배 시간 = 4분
정지 시간 = 5분
유량 = 4 mL/분
파장 = 220 nm
용매 A = 10％ 메탄올/90％ H2O 중 0.1％ TFA
용매 B = 90％ 메탄올/10％ H2O 중 0.1％ TFA
조건 OL2
칼럼 = 페노메넥스® 루나 50X 2 mm 3 u
시작 ％B = 0
최종 ％B = 100
구배 시간 = 4분
정지 시간 = 5분
유량 = 0.8 mL/분
오븐 온도 = 40℃
파장 = 220 nm
용매 A = 10％ 아세토니트릴/90％ H2O 중 0.1％ TFA
용매 B = 90％ 아세토니트릴/10％ H2O 중 0.1％ TFA
조건 OL3
칼럼 = 워터스 액퀴티 BEH C18; 1.7 μm; 150 X 2.1 mm ID; (35℃에서)
10％B 유지 = 0-1분
10-60％B = 1-4분
60-98％B = 4-21분
98％B 유지 = 21-21.5분
98-10％B = 21.5-22분
10％B 유지 = 22-25분
유량 = 0.35 ml/분
파장 = 315 nm
용매 A = 물 중 0.05％ TFA
용매 B = CH3CN 중 0.05％ TFA
조건 OL4a
칼럼 = 워터스 선파이어 C18, 4.6X150 mm, 3.5 μm
시작 ％B = 10
최종 ％B = 100
구배 시간 = 15분
정지 시간 = 18분
유량 = 1 mL/분
파장 = 220 & 254 nm
용매 A = 5％ CH3CN/95％ H2O 중 0.1％ TFA
용매 B = 95％ CH3CN/5％ H2O 중 0.1％ TFA
조건 OL4b
칼럼 = 워터스 엑스브릿지 페닐, 4.6X150 mm, 3 μm
시작 ％B = 10
최종 ％B = 50
구배 시간 = 15분
정지 시간 = 18분
유량 = 1 mL/분
파장 = 220 & 254 nm
용매 A = 5％ CH3CN/95％ H2O 중 0.1％ TFA
용매 B = 95％ CH3CN/5％ H2O 중 0.1％ TFA
조건 OL4c
칼럼 = 워터스 액퀴티 BEH C18; 1.7 μm; 50 X 2.1 mm ID; (35℃에서)
2％B 유지 = 0-1분
2-98％B = 1-1.5분
98％B = 1.5-2.2분
유량 = 0.8 ml/분
파장 = 2 nm
용매 A = 물 중 0.05％ TFA
용매 B = CH3CN 중 0.05％ TFA
조건 OL5a
칼럼 = 페노메넥스® 루나 3.0 X 50 mm S10
시작 ％B = 0
최종 ％B = 100
구배 시간 = 3분
정지 시간 = 4분
유량 = 4 mL/분
파장 = 220 nm
용매 A = 10％ 메탄올/90％ H2O 중 0.1％ TFA
용매 B = 90％ 메탄올/10％ H2O 중 0.1％ TFA
조건 OL5b
칼럼 = 페노메넥스® 루나 3.0 X 50 mm S10
시작 ％B = 0
최종 ％B = 100
구배 시간 = 3분
정지 시간 = 4분
유량 = 4 mL/분
파장 = 220 nm
용매 A = 5％ 메탄올/95％ H2O 중 10 mM NH4OAc
용매 B = 95％ 메탄올/5％ H2O 중 10 mM NH4OAc
조건-D4
칼럼 = 페노메넥스® 루나, 3.0 X 50 mm S10
시작 ％B = 0
최종 ％B = 100
구배 시간 = 3분
정지 시간 = 4분
유량 = 4 mL/분
파장 = 220 nm
용매 A = 10％ 메탄올/90％ H2O 중 0.1％ TFA
용매 B = 90％ 메탄올/10％ H2O 중 0.1％ TFA
조건 J4
칼럼 = 페노메넥스® 루나 4.6X 50 mm S10
시작 ％B = 0
최종 ％B = 100
구배 시간 = 4분
정지 시간 = 5분
유량 = 4 mL/분
파장 = 220 nm
용매 A = 10％ 메탄올/90％ H2O 중 0.1％ TFA
용매 B = 90％ 메탄올/10％ H2O 중 0.1％ TFA
조건 PY1
칼럼 = 페노메넥스®, 2.0 X 50 mm, 3 μm
시작 ％B = 0
최종 ％B = 100
구배 시간 = 4분
정지 시간 = 5분
유량 = 0.8 mL/분
파장 = 220 nm
용매 A = 10％ 메탄올/90％ 물 중 0.1％ TFA
용매 B = 90％ 메탄올/10％ 물 중 0.1％ TFA
오븐 온도 = 40℃
실시예 1 및 2
Figure pct00468
실시예 1, 단계 a
Figure pct00469
아미드 1a (CH3SO3H)를, 그의 거울상이성질체의 합성에 대해 특허 WO 2004/052850에 기재된 절차에 따라 제조하였다.
실시예 1, 단계 b
Figure pct00470
질소 유입구, 오버헤드 교반기, 열전대 및 가열 맨틀이 장착된 1 L 둥근 바닥 플라스크를 아미드 1a (.CH3SO3H) 50 g (225 mmol) 및 이소프로판올 250 mL로 충전시켰다. 이어서, 생성된 슬러리를 EtOH 중 23 중량％ NaOEt (2.68M, 675 mmol, 3.0 당량) 252 mL로 충전시키고, 약 1시간 동안 50℃에서 교반하였다. 혼합물을 물 12.2 mL (675 mmol, 3 당량)로 충전시키고, 60℃로 가열하였다. 생성된 슬러리를 약 18시간 동안 60℃에서 교반되도록 하였다. 슬러리를 실온으로 냉각시키고, 물 250 mL 및 디-t-부틸디카르보네이트 98.2 g (450 mmol, 2.0 당량)으로 충전시켰다. 에탄올 및 이소프로판올을 진공 증류를 통해 제거하고, 수성 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. 혼합물을 내부 온도 < 5℃를 유지하면서 6M 수성 HCl 76 mL (456 mmol)로 중화시켰다. 생성물을 MTBE 500 mL로 추출하고, 풍부한 유기 층을 물 100 mL로 세척하였다. 투명한 용액을 진공 증류를 통해 150 mL로 농축시키고, 생성된 슬러리를 내부 온도 > 45℃를 유지하면서 헵탄 600 mL로 충전시켰다. 슬러리를 약 30분에 걸쳐 실온으로 냉각시키고, 약 2시간 동안 실온에서 교반되도록 하였다. 생성물을 여과하고, 4:1 헵탄:MTBE 250 mL로 세척하고, 70℃에서 진공 하에 건조시켜 산 1b 40.5 g (178 mmol, 79％ 수율, 205 nm에서 99.8 AP)을 수득하였다:
Figure pct00471
산 1b의 대안적 합성
Figure pct00472
500-mL 반응기에서 에스테르 1b.1 (상업적으로 입수가능, 17.5 g, 1.00 당량)을 THF (87.5 mL)에 용해시켰다. 생성된 용액을 -75℃로 냉각시키고, 톨루엔 중 1.5M DIBAL-H (61.3 mL, 1.5 당량)를 온도를 -70℃ 미만으로 유지하면서 충전시켰다. 생성된 용액을 1시간 동안 -70℃에서 교반하였다. 트리플루오로아세트산 (2.3 mL, 0.5 당량)을 내부 온도를 -70℃ 미만으로 유지하면서 10분에 걸쳐 충전시켰다. 이어서, 트리에틸아민 (51.3 mL, 6 당량)을 내부 온도를 -70℃ 미만으로 유지하면서 15분에 걸쳐 충전시켰다. 트리플루오로아세트산 무수물 (11.2 mL, 1.3 당량)을 내부 온도를 -70℃ 미만으로 유지하면서 10분에 걸쳐 충전시켰다. 이어서, 반응물을 90분에 걸쳐 실온으로 가온되도록 하고, 온도를 15℃ 미만으로 유지하면서 20 중량％ 수성 시트르산 1수화물 (96.6 g, 1.5 당량)의 용액에의 역첨가를 통해 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반한 다음, 더 아래쪽의 수성 층을 폐기하였다. 생성물이 풍부한 유기 층을 포화 수성 중탄산나트륨 70 mL로 2회 세척하였다. 고체 중탄산나트륨 (1.7 g, 0.1 g/g 실시예 146)을 충전시키고, 용액을 진공 하에 순수한 톨루엔으로 용매 교환시켜 1b.2를 2 L/kg 톨루엔 중 용액으로서 수득하였다.
톨루엔 33 mL 중 1b.2 (실시예 151로부터 이론적으로 16.5 g)를 250 mL 반응기 내로 연마 여과하였다. 이어서, 트리플루오로톨루엔 (50 mL) 및 클로로아이오도메탄 (43.2 g, 4.0 당량)을 충전시키고, 생성된 용액을 -20℃로 냉각시켰다. 톨루엔 중 1.1M 디에틸아연 (111 mL, 2.0 당량)을 내부 온도 < -8℃를 유지하면서 충전시켰다. 생성된 용액을 14시간 동안 -15 내지 -20℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃로 가온한 다음, 20 중량％ 수성 시트르산 (135.7 g, 2.3 당량)의 용액에의 역첨가를 통해 켄칭하였다. 반응기를 톨루엔 (82 mL)으로 헹구고, 헹굼액을 켄칭 용액에 첨가하였다. 생성된 2상 혼합물을 20분 동안 교반한 다음, 더 아래쪽의 수성 층을 분할 및 폐기하였다. 풍부한 유기물을 2회 13 중량％ 수성 NaCl 60 mL, 이어서 포화 NaHCO3 60 mL로 세척하였다. 생성된 용액을 진공 하에 순수한 IPA로 용매 교환시켜 생성물 1b.3을 10 L/kg IPA 중 용액으로서 수득하였다.
250 mL 반응기를 IPA 중 1b.3 (147 mL, 에스테르 1b.1로부터 이론적으로 14.7 g)의 용액으로 충전시켰다. 용액을 35℃로 가온하고, 고체 수산화나트륨 (6.2 g, 3.0 당량)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 밤새 35℃에서 교반하였다. 물 (44 mL)을 첨가하고, 유기 용매를 진공 하에 제거하였다. MTBE (145 ml)를 첨가하고, pH를 6N 수성 HCl을 사용하여 3.0으로 조정하였다. 수성 층을 분할 및 폐기하였다. 생성물이 풍부한 유기물을 물 60 mL로 세척한 다음, MTBE의 일정 부피 첨가를 통해 진공 하에 공비증류로 건조시켰다. 용액을 55 mL로 농축시키고, 30분 동안 50℃에서 교반하였다. 용액을 1시간에 걸쳐 실온으로 냉각시켰고, 이 시간 동안 슬러리가 형성되었다. 헵탄 (90 mL)을 90분에 걸쳐 충전시키고, 생성된 슬러리를 1시간 동안 숙성시켰다. 고체를 중간 유리 프릿 상에서 수집하고, 3:1 헵탄:MTBE 22.5 mL에 이어서 헵탄 22.5 mL로 세척하였다. 황갈색 고체를 50℃ 진공 오븐에서 건조시켜 산 1b 5.48 g (46％)을 94.9 LCAP 순도로 수득하였다. 조 산 1b를 50℃에서 MTBE 55 mL에 용해시켰다. 생성된 용액을 20 mL로 농축시키고, 1시간에 걸쳐 실온으로 냉각시켰다. 이어서, 헵탄 (33 mL)을 90분에 걸쳐 첨가하였다. 생성된 고체를 중간 유리 프릿 상에서 수집하고, 헵탄 (15 mL)으로 세척하고, 50℃ 진공 오븐에서 건조시켜 산 1b 4.45 g을 황갈색 분말 (98.8％ AP, 98.8％ 키랄 순도, 에스테르 1b.1로부터 37％)로서 수득하였다.
실시예 1, 단계 c
Figure pct00473
질소 유입구, 오버헤드 교반기 및 열전대를 구비한 250 mL 둥근 바닥 플라스크를 산 1b 20.0 g (88.0 mmol, 2.11 당량), 1,1'-(비페닐-4,4'-디일)비스(2-브로모에타논) 16.5 g (41.7 mmol, 1 당량), 아세토니트릴 110 mL 및 테트라히드로푸란 55 mL로 충전시켰다. 이어서, 디이소프로필에틸아민 (15.1 mL, 86.6 mmol, 2.08 당량)을 내부 온도 < 25℃를 유지하면서 충전시켰다. 혼합물을 약 5시간 동안 20-25℃에서 교반되도록 하고, 에틸 아세테이트 83 mL 및 13 중량％ 수성 NaCl 90 mL로 충전시켰다. 생성된 2상 혼합물을 분리하고, 풍부한 유기 층을 추가의 13 중량％ 수성 NaCl 90 mL로 세척하였다. 풍부한 유기 층을 테트라히드로푸란 20 mL로 희석하고, NaHCO3 및 NaCl의 수성 혼합물 (1M 수성 NaHCO3 45 mL 및 26％ 수성 NaCl 45 mL)로 세척하였다. 풍부한 유기 층을 약 160 mL의 표적 부피로의 진공 증류를 통해 톨루엔으로 용매 교환시켰다. 생성된 케토에스테르 1c의 톨루엔 용액을 다음 단계에 그대로 사용하였다.
[주: 1,1'-(비페닐-4,4'-디일)비스(2-브로모에타논)의 제조에 대해서는, 제법 특허 출원 WO 2009/020825를 참조한다].
실시예 1, 단계 d
Figure pct00474
상기 케토에스테르 1c의 톨루엔 용액을 NH4OAc 64.2 g (832.9 mmol, 20.0 당량)으로 충전시키고, 약 18시간 동안 90-100℃에서 교반되도록 하였다. 60℃로 냉각시키고, 2:1 AcOH:물 255 mL를 충전하였다. 생성된 2상 혼합물을 분리하고, 톨루엔 층을 1:1 AcOH:물 58 mL로 세척하였다. 풍부한 수성 층을 합하고, 나머지 톨루엔을 진공 증류를 통해 제거하였다. 수용액을 메탄올 60 mL로 희석하고, 50-60℃로 가열하였다. 10N NaOH 106 mL (1060 mmol, 25.4 당량)를 내부 온도 < 60℃를 유지하면서 충전시켰다. 이어서, 생성된 슬러리를 실온으로 냉각되도록 하였다. 슬러리를 여과하고, 물 100 mL에 이어서 메탄올 400 mL로 세척하여 조 이미다졸 1d 26.1 g을 수득하였다. 이어서, 습윤 조 이미다졸 1d를 질소 유입구, 오버헤드 교반기 및 열전대를 구비한 500 mL 둥근 바닥 플라스크 내로 충전시켰다. N-메틸-2-피롤리디논 165 mL를 충전시키고, 50℃로 가열하였다. 생성된 투명한 용액을 메탄올 30 mL로 충전시키고, 약 18시간 동안 50℃에서 교반되도록 하였다. 생성된 슬러리를 내부 온도 > 45℃를 유지하면서 추가의 메탄올 130 mL로 충전시켰다. 슬러리를 약 30분 동안 50℃에서 교반되도록 하고, 실온으로 냉각시켰다. 슬러리를 여과하고, 고체를 1:1 메탄올:N-메틸-2-피롤리디논 90 mL에 이어서 메탄올 200 mL로 세척하였다. 고체를 -70℃에서 진공 하에 건조시켜 이미다졸 1d 22.7 g (31.5 mmol, 76％ 수율, 254 nm에서 95 AP)을 수득하였다:
Figure pct00475
실시예 1, 단계 e
Figure pct00476
질소 유입구 및 오버헤드 교반기를 구비한 250 mL 둥근 바닥 플라스크를 이미다졸 1d 7.0 g (10.8 mmol), 메탄올 105 mL, 및 이소프로판올 중 5.6M HCl 3.7 mL (20.8 mmol, 1.93 당량)로 충전시켰다. 생성된 용액을 목탄으로 처리하고, 여과하였다. 목탄을 메탄올 140 mL로 세척하고, 여과물과 합하였다. 풍부한 유기 스트림을 약 70 mL로 농축시키고, 질소 유입구, 오버헤드 교반기 및 열전대를 구비한 둥근 바닥 플라스크 내로 충전시켰다. 이어서, 용액을 6M HCl 14.75 mL (88.5 mmol, 8.2 당량)로 충전시키고, 50℃에서 교반되도록 하였다. 50℃에서 약 12시간 후, 혼합물을 이소프로판올 50 mL로 충전시키고, 생성된 슬러리를 1시간 동안 50℃에서 교반되도록 하였다. 슬러리를 실온으로 냉각시키고, 약 15시간 동안 숙성시켰다. 생성물을 여과하고, 4:1 이소프로판올:메탄올 35 mL에 이어서 이소프로판올 70 mL로 세척하였다. 고체를 진공 하에 55℃에서 건조시켜 피롤리딘 1e/4HCl 5.3 g (8.9 mmol, 83％, 254 nm에서 99.8 AP)을 수득하였다:
Figure pct00477
실시예 1, 단계 f
Figure pct00478
질소 유입구, 오버헤드 교반기 및 열전대를 구비한 250 mL 재킷 장착 반응기를 (S)-2-(메톡시카르보닐아미노)-3-메틸부탄산 4.24 g (24.2 mmol, 2.4 당량), 1-히드록시벤조트리아졸 1수화물 3.86 g (25.21 mmol, 2.5 당량), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드 4.55 g (23.73 mmol, 2.35 당량) 및 아세토니트릴 60 mL로 충전시켰다. 혼합물을 약 1시간 동안 교반하고, 피롤리딘 1e/4HCl 6 g (10.1 mmol)으로 충전시켰다. 생성된 슬러리를 10℃로 냉각시키고, 디이소프로필에틸아민 7.92 mL (45.41 mmol, 4.5 당량)로 충전시켰다. 혼합물을 실온으로 가온되도록 하고, 약 19시간 동안 교반하였다. 생성된 유기 용액을 13 중량％ 수성 NaCl 36 mL로 세척하였다. 풍부한 유기물을 아세토니트릴 12 mL로 충전시키고, 13 중량％ 수성 NaCl 및 1M NaOH를 함유하는 수용액 36 mL로 세척하였다. 이어서, 풍부한 유기물을 메탄올 12 mL로 충전시키고, 50℃로 가열하였다. 물 (60 mL)을 2시간의 기간에 걸쳐 첨가하고, 생성된 슬러리를 실온으로 냉각시키고, 약 2시간 동안 숙성시켰다. 고체를 여과하고, 1:1 아세토니트릴:물 36 mL로 세척하고, 진공 하에 건조시켰다. 질소 유입구, 오버헤드 교반기 및 열전대를 구비한 250 mL 재킷 장착 반응기를 상기 고체로 충전시키고, SDA3A 등급 에탄올 240 mL로 용해시켰다. 용액을 진공 증류를 통해 약 50 mL로 농축시키고, 이소프로판올 중 5.47M HCl 4.24 mL (23.19 mmol, 2.30 당량) 및 추가의 SDA3A 에탄올 30 mL로 충전시켰다. 혼합물을 약 50 mL로 농축시키고, SDA3A 에탄올 40 mL로 희석하고, 목탄으로 처리하였다. 목탄을 여과하고, SDA3A 에탄올 90 mL로 세척하였다. 풍부한 여과물 및 세척액을 합하고, 40 mL로 농축시켰다. 에틸 아세테이트 16 mL를 충전시키고, 40℃로 가열하였다. 아미드 1f/2HCl 시드 결정 60 mg을 충전시키고, 1시간 동안 40℃에서 교반하였다. 추가의 에틸 아세테이트 68 mL를 40℃의 내부 온도를 유지하면서 1.5시간에 걸쳐 충전시켰다. 생성된 슬러리를 약 18시간 동안 40℃에서 교반하고, 실온으로 냉각시켰다. 슬러리를 여과하고, 3:1 에틸 아세테이트:SDA3A 에탄올 24 mL 및 에틸 아세테이트 30 mL로 세척하였다. 고체를 50℃에서 진공 하에 건조시켜 아미드 1f/2HCl 6.83 g (8.17 mmol, 81％, 300 nm에서 99.5 AP)을 수득하였다:
Figure pct00479
아미드 1f/2HCl을 위한 시드의 제조: 아미드 1f를 상기 약술된 기본 절차에 따라 피롤리딘 1e.4HCl 504 mg (0.8 mmol)을 사용하여 제조하였다. 반응 완료 후, 풍부한 아세토니트릴 용액을 13％ 수성 NaCl 3 mL, 13％ NaCl 및 1M NaOH를 함유하는 수용액 2x 3 mL 및 13％ 수성 NaCl 3 mL로 세척하였다. 풍부한 유기물을 잔류물로 농축시키고, 아세토니트릴 10 mL로 희석하였다. 흐린 혼합물을 여과하고, 투명한 여과물을 잔류물로 농축시켰다. 잔류물을 SDA3A 에탄올 10 mL로 희석하고, 에탄올 중 0.88M HCl 2.1 mL (1.9 mmol, 2.4 당량)로 충전시켰다. 혼합물을 잔류물로 농축시키고, 이소프로판올 1.8 mL로 희석하였다. 생성된 용액을 50℃로 가열하고, 약 18시간 동안 교반되도록 하였다. 생성된 슬러리를 실온으로 냉각시키고, 여과하고, 2:1 아세톤:에탄올로 세척하여 아미드 1f/2HCl 476 mg (0.57 mmol, 78％)을 수득하였다.
[주: (S)-2-(메톡시카르보닐아미노)-3-메틸부탄산은 플라마(Flamma)로부터 구입하였다.]
실시예 1 및 2
아미드 1f/2HCl의 샘플 (106.9 mg)을 탈염기화시키고 (2 g MCX 칼럼; MeOH 세척; 2N NH3/MeOH 용리), 진공 하에 건조시켰다. NCS (0.0195 g, 0.146 mmol)를 생성된 물질의 DMF (2.5 mL) 용액에 첨가하고, 16.5시간 동안 50℃에서 오일조로 가열하였다. 대부분의 휘발성 성분을 진공 하에 제거하고, 잔류물을 MeOH에 용해시키고, 역상 HPLC 정제 (MeOH/물/TFA; 칼럼: 페노메넥스® 루나, 30X100 mm S10 악시아(Axia))에 적용시켜 실시예 1의 TFA 염 (백색 발포체; 56.1 mg) 및 실시예 2의 TFA 염 (백색 발포체; 22.3 mg)을 회수하였다.
실시예 1:
Figure pct00480
실시예 2:
Figure pct00481
실시예 3
Figure pct00482
실시예 3, 단계 a
Figure pct00483
아미드 3a/2HCl의 합성에 대해서는, 제법 특허 출원 WO 2009/020825를 참조한다.
실시예 3
아세트산 (2 mL) 중 아미드 3a (32 mg, 0.043 mmol)의 용액에 아세트산 중 1M 브로민 2 당량을 첨가하고, 반응물을 30분 동안 교반하였다. 추가의 브로민 1 당량을 첨가하고 (고체가 형성됨), 반응물을 5％ NaHCO3으로 중화시키고, EtOAc (2x10 mL)로 추출하였다. 합한 추출물을 포화 Na2S2O3 용액 및 염수로 세척하고, 농축시켰다. 잔류물을 고진공 하에 건조시켜 실시예 3 (41 mg)을 수득하였다.
Figure pct00484
실시예 4 및 5
Figure pct00485
디이소프로필에틸 아민 (100 ul, 74.2 mg, 0.574 mmol)을 아세토니트릴 (2 mL) 중 아미드 3a (197 mg, 0.243 mmol) 및 N-클로로숙신아미드 (39 mg, 0.292 mmol)의 혼합물에 첨가하고, 밤새 교반하였다. 이어서, 추가 분량의 N-클로로숙신아미드 (66 mg, 0.494 mmol)를 반응 혼합물에 첨가하고, HPLC 분석에 의해 출발 물질의 소모가 확인될 때까지 교반하였다. 이어서, 조 반응 혼합물을 역상 HPLC (용매 A = H2O/CH3CN (95:5) + 0.05％ TFA; 용매 B = H2O/CH3CN (5:95) + 0.05％ TFA; 칼럼: 루나 C18, 5u, 100 × 21.5 mm; 유량: 20 mL/분)에 의해 정제하여 실시예 4의 TFA 염 (황색빛 무정형 분말, 60 mg) 및 실시예 3의 TFA 염 (황색빛 무정형 분말, 115 mg)을 수득하였다.
실시예 5:
Figure pct00486
실시예 4:
Figure pct00487
실시예 6 및 7
Figure pct00488
실시예 6, 단계 a
Figure pct00489
DMF 중 피롤리딘 1e/4HCl (0.104 g, 0.174 mmol), HATU (0.133 g, 0.349 mmol) 및 Cap-193 (0.082 g, 0.349 mmol)의 혼합물에 DIEA (0.183 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 3시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 정제용 HPLC (페노메넥스® 악시아 5 u 칼럼, 35분 구배 0-90％B. A = H2O/CH3CN/10 mM NH4OAc, 95:5. B = CH3CN/H2O/10 mM NH4OAc 95:5)에 의해 정제하여 실시예 6, 단계 a (0.064 g)를 수득하였다.
Figure pct00490
실시예 6 및 7
DMF 중 실시예 6, 단계 a (0.057 g)의 용액에 NCS (10.34 mg, 0.077 mmol)를첨가하였다. 반응 혼합물을 3시간 동안 60℃에서 가열하였다. 반응 혼합물을 정제용 HPLC (페노메넥스® 악시아 5 u 30 x 100 mm 칼럼, 20분 구배 0-100％B. A = H2O/CH3OH/TFA 90:10:0.1. B = CH3OH/H2O/TFA 90:10:0.1)에 의해 정제하여 실시예 6 (0.022 g) 및 실시예 7 (0.017 g)을 수득하였다.
실시예 6:
Figure pct00491
실시예 7:
Figure pct00492
실시예 V1
Figure pct00493
실시예 V1, 단계 a
Figure pct00494
DMF (12 mL) 중 카르바메이트 1d (0.80 g, 1.23 mmol) 및 NCS (0.214 g, 1.603 mmol)의 용액을 17시간 동안 50℃에서 가열하였다. 이것을 주위 온도로 냉각되도록 한 후, 휘발성 성분을 진공 하에 제거하였다. 잔류물을 MeOH (36 mL)에 용해시키고, 2종의 생성물을 정제용 HPLC (칼럼: 엑스테라®, 30 X 100 mm, S5; 출발 ％B = 50, 최종 ％B = 100; 구배 시간 = 10분; 정지 시간 = 12분; 유량 = 30 ml/분; 파장 = 220; 용매 A = 10％ MeOH - 90％ H2O - 0.1％ TFA; 용매 B = 90％ MeOH - 10％ H2O - 0.1％ TFA)에 의해 분리하였다. 2개의 분획 각각을 과량의 2N NH3/MeOH 용액으로 중화시키고, 진공 하에 농축시켜 대부분의 메탄올을 제거하고, 잔류물을 20％ MeOH/CHCl3과 물 사이에 분배시켰다. 유기 층을 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 진공 하에 농축시켜 클로라이드 V1a-1 (밝은 황색 발포체; 288.4 mg) 및 디클로라이드 V1a-2 (밝은 황색 고체; 400.4 mg)를 수득하였다.
클로라이드 V1a-1:
Figure pct00495
디클로라이드 V1a-2:
Figure pct00496
실시예 V1, 단계 b
Figure pct00497
MeOH (1 mL) 중 클로라이드 V1a-1 (0.2741 g, 0.401 mmol)의 현탁액에 디옥산 중 4M HCl (4 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 7시간 동안 실온에서 교반한 다음, 휘발성 성분을 진공 하에 제거하여 V1b의 HCl 염을 황갈색 고체 (231.7 mg)로서 수득하였다. 생성물을 추가의 정제 없이 사용하였다.
Figure pct00498
[주: 생성물의 정확한 HCl 함량은 결정되지 않았다].
실시예 V1
DMF (1.5 mL) 중 클로라이드 V1b/4HCl (0.045 g, 0.072 mmol), (S)-2-(메톡시카르보닐아미노)부탄산 (0.025 g, 0.157 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.075 mL, 0.429 mmol)의 용액에 HATU (0.057 g, 0.150 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 약 25℃에서 교반하였다. 이것을 MeOH (2.5 mL)로 희석하고, 생성물을 정제용 HPLC (칼럼: 엑스테라®, 30 X 100 mm, S5; 출발 ％B = 30, 최종 ％B = 90; 구배 시간 = 10분; 정지 시간 = 12분; 유량 = 30 ml/분; 파장 = 220; 용매 A = 10％ MeOH - 90％ H2O - 0.1％ TFA; 용매 B = 90％ MeOH - 10％ H2O - 0.1％ TFA)에 의해 정제하여 실시예 V1의 TFA 염을 밝은 황색 고체 (39.4 mg)로서 수득하였다.
Figure pct00499
실시예 V2
실시예 V2 (TFA 염)를 실시예 V1의 합성에 대해 기재된 절차에 따라 피롤리딘 V1b/4HCl 및 (S)-2-(메톡시카르보닐아미노)-2-(테트라히드로-2H-피란-4-일)아세트산으로부터 제조하였다.
Figure pct00500
Figure pct00501
실시예 V3
Figure pct00502
실시예 V3, 단계 a
Figure pct00503
중간체 V3a를 피롤리딘 V1b의 제조에 대해 기재된 절차에 따라 카르바메이트 V1a-2로부터 HCl 염으로서 제조하였다.
Figure pct00504
[주: 생성물의 정확한 HCl 염 함량은 결정되지 않았다].
실시예 V3
실시예 V3 (TFA 염)을 실시예 V1의 합성에 대해 기재된 절차에 따라 피롤리딘 V3a의 HCl 염으로부터 제조하였다.
Figure pct00505
실시예 V4 내지 V6
실시예 V4 내지 V6 (TFA 염)을 실시예 V1의 합성에 대해 기재된 절차에 따라 피롤리딘 V3a의 HCl 염 및 적절한 산으로부터 제조하였다.
Figure pct00506
Figure pct00507
Figure pct00508
실시예 V7 및 V8
Figure pct00509
실시예 V7, 단계 a
Figure pct00510
DMF (3 mL) 중 피롤리딘 1e/4HCl (0.350 g, 0.589 mmol), (S)-2-(메톡시카르보닐아미노)-3-메틸부탄산 (0.103 g, 0.589 mmol), (S)-2-(메톡시카르보닐아미노)-2-(테트라히드로-2H-피란-4-일)아세트산 (0.128 g, 0.589 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.720 mL, 4.12 mmol)의 용액에 HATU (0.493 g, 1.295 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 4시간 동안 약 25℃에서 교반한 다음, MeOH로 희석하고, 정제용 HPLC (칼럼: 엑스테라®, 30 X 100 mm, S5; 출발 ％B = 30, 최종 ％B = 75; 구배 시간 = 15분; 정지 시간 = 15분; 유량 = 30 ml/분; 파장 = 220; 용매 A = 10％ MeOH - 90％ H2O - 0.1％ TFA; 용매 B = 90％ MeOH - 10％ H2O - 0.1％ TFA)에 의해 정제하여, 3종의 가능한 생성물로부터 생성물 V7a를 단리하였다. 생성물 V7a를 MeOH에 용해시키고, 탈염기화시키고 (6g MCX 카트리지; MeOH 세척; 2N NH3/MeOH 용리), 진공 하에 농축시켜 황갈색 고체 (103.2 mg)를 수득하였다.
Figure pct00511
실시예 V7 및 V8
DMF (1.5 mL) 중 생성물 V7a (0.103 g, 0.128 mmol) 및 NCS (0.022 g, 0.167 mmol)의 용액을 24시간 동안 50℃에서 가열하였다. 이것을 주위 온도로 냉각되도록 한 후, 반응 혼합물을 MeOH로 희석하고, 정제용 HPLC (칼럼: 엑스테라®, 30 X 100 mm, S5; 출발 ％B = 40, 최종 ％B = 100; 구배 시간 = 15분; 정지 시간 = 17분; 유량 = 30 ml/분; 파장 = 220; 용매 A = 10％ MeOH - 90％ H2O - 0.1％ TFA; 용매 B = 90％ MeOH - 10％ H2O - 0.1％ TFA)에 의해 정제하여 위치이성질체 V7 및 V8의 혼합물을 단리하였다. 혼합물을 MeOH에 용해시키고, 상이한 정제용 HPLC 정제 조건 (칼럼: 워터스 선파이어, 30 X 100 mm, S5; 출발 ％B = 10, 최종 ％B = 50; 구배 시간 = 20분; 정지 시간 = 20분; 유량 = 30 ml/분; 파장 = 220; 용매 A = 10％ 아세토니트릴 - 90％ H2O - 0.1％ TFA; 용매 B = 90％ 아세토니트릴 - 10％ H2O - 0.1％ TFA)에 적용시켜 2종의 위치이성질체를 TFA 염으로서 분리하였다.
실시예 V7 (회백색 고체, 17.3 mg):
Figure pct00512
실시예 V8 (회백색 고체, 16.8 mg):
Figure pct00513
실시예 V9
Figure pct00514
실시예 V9, 단계 a
Figure pct00515
Boc2O (0.734 g, 3.36 mmol)에 이어서 DMAP (0.021 g, 0.168 mmol)를, DMF (60 ml) 중 피롤리딘 1e/4HCl (2.00 g, 3.36 mmol) 및 Et3N (2.3 ml, 16.82 mmol)의 혼합물에 첨가하고, 4.5시간 동안 주위 조건에서 교반하였다. 휘발성 성분을 진공 하에 제거하고, 잔류물을 1.0N NaOH (20 mL)와 20％ MeOH/CHCl3 (50 mL) 사이에 분배시켰다. 수성 상을 20％ MeOH/CHCl3 (50 mL, 2x)으로 세척하였다. 합한 유기 상을 건조시키고 (MgSO4), 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질로부터 실리카 겔 메쉬를 제조하고, 바이오타지® 정제 (160 g 실리카 겔) (칼럼을 먼저 모든 더 높은 Rf 스팟 (즉, 비스-Boc 유도체 1d; 0.28 g)이 나타날 때까지 EtOAc로 용리한 다음, 칼럼을 2.5 L에 걸쳐 5-10％ MeOH/CH2Cl2로 용리하여 잔류 비스-Boc x (이어서 모노-Boc V9a (0.81 g; Et3N 약 1.1 mol 당량 함유))를 용리함)에 적용시켰다.
Figure pct00516
실시예 V9, 단계 b
Figure pct00517
DMF (8 mL) 중 카르바메이트 V9a (1 g, 1.823 mmol), (S)-2-(메톡시카르보닐아미노)-2-(테트라히드로-2H-피란-4-일)아세트산 (0.400 g, 1.841 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.65 mL, 3.72 mmol)의 용액에 HATU (0.770 g, 2.026 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 3시간 동안 약 25℃에서 교반하였다. 휘발성 성분을 진공 하에 제거하고, 잔류물을 20％ MeOH/CHCl3 (250 mL)에 녹이고, 물 (3 x 40 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 CHCl3 (4 mL)에 녹이고, 톰슨 실리카 겔 카트리지 상에 로딩하고, 10％ MeOH/EtOAc로 용리하여 생성물 V9b를 황갈색 발포체 (1.15 g)로서 수득하였다.
Figure pct00518
실시예 V9, 단계 c
Figure pct00519
DMF (13 mL) 중 V9b (0.9387 g, 1.255 mmol) 및 NCS (0.335 g, 2.51 mmol)의 용액을 24.5시간 동안 50℃에서 가열하였다. 휘발성 성분을 진공 하에 제거하고, 잔류물을 CH2Cl2 (200 mL)에 녹이고, 물 (3 x 50 mL)에 이어서 염수 (50 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 CH2Cl2 (6 mL)에 녹이고, 실리카 겔 정제 (100％ 에틸 아세테이트)에 적용시켜 화합물 V9c를 황색 고체 (720.7 mg)로서 수득하였다.
Figure pct00520
실시예 V9, 단계 d
Figure pct00521
피롤리딘 V9d를 V1b의 합성에 대해 기재된 절차에 따라 카르바메이트 V9c로부터 HCl 염으로서 제조하였다.
Figure pct00522
실시예 V9
실시예 V9 (TFA 염)를 실시예 V1의 합성에 대해 기재된 절차에 따라 중간체 V9d의 HCl 염 및 (S)-2-(메톡시카르보닐아미노)부탄산으로부터 제조하였다.
Figure pct00523
실시예 V10 내지 V16
실시예 V10 내지 V16 (TFA 염)을 실시예 V1의 제조에 대해 기재된 절차에 따라 피롤리딘 V9d의 HCl 염 및 적절한 산으로부터 제조하였다. 실시예 V13 내지 V16은 하기 조건을 이용하는 추가의 역상 HPLC 정제를 요구하였다: 칼럼: 워터스 선파이어, 30 X 100 mm, S5; 출발 ％B = 10, 최종 ％B = 50; 구배 시간 = 20분; 정지 시간 = 20분; 유량 = 30 ml/분; 파장 = 220; 용매 A = 10％ 아세토니트릴 - 90％ H2O - 0.1％ TFA; 용매 B = 90％ 아세토니트릴 - 10％ H2O - 0.1％ TFA.
Figure pct00524
Figure pct00525
실시예 GW1-1 내지 GW1-3
Figure pct00526
실시예 GW1, 단계 a
Figure pct00527
카르바메이트 GW1a의 제조에 대해서는, 미국 특허 출원 2009/0068140을 참조한다.
실시예 GW1, 단계 b
Figure pct00528
DMF (9 mL) 중 카르바메이트 GQ1a (0.830 g, 1.271 mmol)의 용액에 NCS (0.221 g, 1.653 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 16시간 동안 50℃에서 가열하였다. 추가의 NCS (0.1 g, 0.75 mmol)를 첨가하고, 추가로 4시간 동안 가열을 계속하였다. 이것을 주위 온도로 냉각되도록 하고, DCM과 물 (각각 20 mL) 사이에 분배시켰다. 수성 층을 DCM (20 mL)으로 추출하고, 합한 유기 상을 건조시키고 (Na2SO4), 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 MeOH에 용해시키고, 역상 HPLC 정제 (MeOH/물/TFA; 칼럼: 페노메넥스® 루나, 30X100 mm S10 악시아)에 적용시켜 GW1b의 TFA 염을 밝은 황색 발포체 (0.25 g)로서 회수하였다.
Figure pct00529
실시예 GW1, 단계 c
Figure pct00530
디옥산 중 4N HCl (10 mL)을 카르바메이트 GW1b (0.29 g, 0.306 mmol)에 첨가하고, 반응 혼합물을 4시간 동안 실온에서 교반하였다. 용매를 제거하고, 밤새 진공 하에 건조시켜 생성물 GW1c의 HCl 염을 갈색 고체 (0.21 g)로서 수득하였다.
Figure pct00531
실시예 GW1-1 내지 GW1-3
DMF (10 mL) 중 GW1c의 HCl 염 (150 mg, 0.225 mmol), (S)-2-(메톡시카르보닐아미노)-2-(테트라히드로-2H-피란-4-일)아세트산 (57.6 mg, 0.265 mmol) 및 (S)-2-(메톡시카르보닐아미노)-3-메틸부탄산 (48.0 mg, 0.274 mmol)의 용액에 DIEA (0.236 mL, 1.349 mmol) 및 HATU (176 mg, 0.463 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 대부분의 휘발성 성분을 진공 하에 제거하고, 잔류물을 MeOH에 용해시키고, 역상 HPLC 정제 (MeOH/물/TFA; 칼럼: 페노메넥스® 루나, 30X100 mm S10 악시아)에 적용시켜 3종의 생성물을 TFA 염으로서 단리하였다. 실시예 GW1-1 (밝은 황색 발포체, 25 mg)은 미확인 불순물로 오염되어 있었다.
Figure pct00532
실시예 GW1-2 (밝은 황색 발포체, 39 mg);
Figure pct00533
실시예 GW1-3 (밝은 황색 발포체, 22 mg),
Figure pct00534
실시예 GW2
Figure pct00535
실시예 GW2, 단계 a
Figure pct00536
DMF (9 mL) 중 카르바메이트 GW1a (0.830 g, 1.271 mmol)의 용액에 NCS (0.221 g, 1.653 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 16시간 동안 50℃에서 가열하였다. 추가의 NCS (0.1 g, 0.75 mmol)를 첨가하고, 추가로 4시간 동안 50℃에서 교반을 계속하였다. 혼합물을 DCM과 물 (각각 20 mL) 사이에 분배시켰다. 수성 상을 DCM (20 mL)으로 추출하고, 합한 상을 Na2SO4로 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 생성물을 MeOH에 용해시키고, 역상 HPLC 정제 (MeOH/물/TFA; 칼럼: 페노메넥스® 루나, 30X100 mm S10 악시아)에 적용시켜 카르바메이트 GW2a를 밝은 황색 발포체 (0.03 g)로서 회수하였다.
Figure pct00537
실시예 GW2, 단계 b
Figure pct00538
디옥산 중 4N HCl (10 mL)을 카르바메이트 GW2a (0.19 g, 0.208 mmol)에 첨가하고, 이것을 4시간 동안 실온에서 교반하였다. 용매를 제거하고, 이것을 밤새 진공 하에 건조시켜 피롤리딘 GW2b의 HCl 염을 갈색 고체 (0.16 g)로서 수득하였다.
Figure pct00539
실시예 GW2
DMF (3 mL) 중 피롤리딘 GW2b의 HCl 염 (80 mg, 0.126 mmol) 및 (S)-2-(메톡시카르보닐아미노)-3-메틸부탄산 (48.7 mg, 0.278 mmol)의 용액에 DIEA (0.132 mL, 0.758 mmol) 및 HATU (99 mg, 0.260 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 대부분의 휘발성 성분을 진공 하에 제거하고, 잔류물을 MeOH에 용해시키고, 역상 HPLC 정제 (MeOH/물/TFA; 칼럼: 페노메넥스® 루나, 30X100 mm S10 악시아)에 적용시켜 GW2의 TFA 염 (밝은 황색 발포체; 50 mg)을 회수하였다.
Figure pct00540
실시예 GW2-1
실시예 GW2-1 (TFA 염)을 실시예 GW2의 제조에 대해 기재된 절차에 따라 피롤리딘 GW2b 및 (S)-2-(메톡시카르보닐아미노)-2-(테트라히드로-2H-피란-4-일)아세트산으로부터 제조하였다.
Figure pct00541
Figure pct00542
실시예 GW3
Figure pct00543
실시예 GW3, 단계 a
Figure pct00544
상기 3종의 에스테르를 문헌 [Tetrahedron Letters, 3203-3205 (2003)]에 기재된 절차에 따라 (S)-1-tert-부틸 2-메틸 5-옥소피롤리딘-1,2-디카르복실레이트로부터 제조하였다.
실시예 GW3, 단계 b
Figure pct00545
보란-메틸 술피드 착체 (5.44 mL, 10.88 mmol)를 THF (25 mL) 중 에스테르 GW3a-2 (1.4 g, 5.44 mmol)의 용액에 첨가하고, 반응 혼합물을 7시간 동안 40℃에서 가열하였다. 휘발성 성분을 진공 하에 제거하고, 잔류물을 EtOAc와 물 (각각 50 mL) 사이에 분배시켰다. 수성 층을 EtOAc (30 mL)로 추출하고, 합한 유기 상을 Na2SO4로 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 생성된 무색 오일을 플래쉬 크로마토그래피 (0-50％ EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 에스테르 GW3b를 무색 오일 (0.77 g)로서 수득하였다.
Figure pct00546
실시예 GW3, 단계 c
Figure pct00547
에탄올 (10 mL) 중 에스테르 GW3b (1.69 g, 6.95 mmol)의 용액에 물 (5.00 mL) 중 LiOH (0.250 g, 10.42 mmol)의 용액을 첨가하고, 반응 혼합물을 5시간 동안 실온에서 교반하였다. 유기 용매를 진공 하에 증발시키고, 잔류물을 물 (10 mL)로 희석하고, 에테르 (10 mL)로 세척하였다. 이것을 빙수조에서 냉각시키고, 1N HCl을 사용하여 약 2의 pH 범위로 산성화시켰다. 이어서, 이것을 EtOAc (20 mL, 3x)로 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4로 건조시키고, 진공 하에 농축시켜 산 GW3c를 무색 오일로서 수득하였고, 이는 고진공에 장기간 노출시 백색 고체가 되었다 (1.38 g).
Figure pct00548
실시예 GW3, 단계 d
Figure pct00549
CH3CN (30 mL) 중 GW3c (1.83 g, 7.98 mmol) 및 1,1'-(비페닐-4,4'-디일)비스(2-브로모에타논) (1.581 g, 3.99 mmol)의 현탁액에 DIEA (1.436 mL, 8.22 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 4시간 동안 실온에서 교반하였다. 용매를 진공 하에 증발시키고, 잔류물을 EtOAc와 물 (각각 50 mL) 사이에 분배시켰다. 유기 층을 포화 NaHCO3 (20 mL)으로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 진공 하에 농축시켜 디에스테르 GW3d를 밝은 황색 고체 (2.67 g)로서 수득하였고, 이를 다음 단계에 그대로 사용하였다.
실시예 GW3, 단계 e
Figure pct00550
크실렌 (30 mL) 중 디케토에스테르 GW3d (2.67 g, 3.85 mmol)의 용액에 아세트산암모늄 (2.97 g, 38.5 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 밀봉된 튜브에서 6시간 동안 140℃에서 가열하였다. 휘발성 성분을 진공 하에 제거하고, 잔류물을 DCM (50 mL)과 물 (50 mL) 사이에 분배시켰다. 유기 층을 포화 NaHCO3 (20 mL)으로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피 (50-100％ EtOAc/헥산, 100％ EtOAc-10％ MeOH/EtOAc)로 정제하여 이미다졸 GW3e를 오렌지색 고체 (1.3 g)로서 수득하였다.
Figure pct00551
실시예 GW3, 단계 f
Figure pct00552
디옥산 중 4N HCl (12.10 mL, 48.4 mmol)을 카르바메이트 GW3e (1.3 g, 1.99 mmol)에 첨가하고, 혼합물을 5시간 동안 실온에서 교반하였다. 휘발성 성분을 진공 하에 제거하고, 생성물을 밤새 진공 하에 건조시켜 피롤리딘 GW3f의 HCl 염을 황색 고체 (1.14 g)로서 수득하였다.
Figure pct00553
실시예 GW3, 단계 g
Figure pct00554
DMF (15 mL) 중 피롤리딘 GW3f의 HCl 염 (1.14 g, 1.905 mmol), (S)-2-(메톡시카르보닐아미노)-2-(테트라히드로-2H-피란-4-일)아세트산 (0.488 g, 2.248 mmol) 및 (S)-2-(메톡시카르보닐아미노)-3-메틸부탄산 (0.407 g, 2.324 mmol)의 현탁액에 DIEA (1.996 mL, 11.43 mmol)를 첨가하였다. 전체 용해를 초음파처리의 도움으로 수행한 다음, HATU (1.478 g, 3.89 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 대부분의 휘발성 성분을 진공 하에 제거하고, 잔류물을 MeOH에 용해시키고, 역상 HPLC 정제 (MeOH/물/TFA; 칼럼: 페노메넥스® 루나, 30X100 mm S10 악시아)에 적용시켜 3종의 생성물의 TFA 염: GW3g-1 (0.28 g), GW3g-2 (0.64 g) 및 GW3g-3 (0.36 g)을 밝은 황색 발포체로서 수득하였다.
생성물 GW3g-3:
Figure pct00555
[주: 마지막 3회의 통합은 1.1-0.85 ppm 영역에서의 신호 (피크를 취하지 않음)를 갖는 부 회전이성질체를 포함한다].
Figure pct00556
생성물 GW3g-1,
Figure pct00557
생성물 GW3g-2,
Figure pct00558
실시예 GW3
DMF (2 mL) 중 GW3g-3/2TFA (160 mg, 0.174 mmol)의 용액에 NCS (30.6 mg, 0.229 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 5.5시간 동안 50℃로 가열하였다. 잔류물을 MeOH에 용해시키고, 역상 HPLC 정제 (MeOH/물/TFA; 칼럼: 페노메넥스® 루나, 30X100 mm S10 악시아)에 적용시켜 GW3의 TFA 염을 밝은 황색 발포체 (40 mg)로서 회수하였다. [주: 유사한 경우에 대해, 염소화는 유리 염기 형태로 존재하는 출발 물질 상에서 수행하였다.]
Figure pct00559
실시예 GW4
Figure pct00560
실시예 GW4 (TFA 염)를 실시예 GW3의 제조에 대해 기재된 절차에 따라 GW3g-1로부터 제조하였다.
Figure pct00561
실시예 GW5 내지 GW7
Figure pct00562
DMF (2 mL) 중 GW3g-2 (565 mg, 0.588 mmol)의 용액에 NCS (0.021 g, 0.161 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 17시간 동안 50℃에서 가열하였다. 대부분의 휘발성 성분을 진공 하에 제거하고, 잔류물을 MeOH에 용해시키고, 역상 HPLC 정제 (MeOH/물/TFA; 칼럼: 페노메넥스® 루나, 30X100 mm S10 악시아)에 적용시켜 2개의 분획 (하나는 GW5이고, 두 번째 것은 GW6 및 GW7의 혼합물임)을 수득하였다. 분획을 진공 하에 건조시키고, 밝은 황색 고체로서 회수하였다. 두 분획 모두를 메탄올에 개별적으로 용해시키고, 역상 HPLC 정제 (ACN/TFA/물, 워터스-선파이어 30X100 mm S5)에 적용시켜 실시예 GW5, GW6 및 GW7의 TFA 염을 회수하였다.
실시예 GW5:
Figure pct00563
실시예 GW6:
Figure pct00564
실시예 GW7:
실시예 GW8
Figure pct00566
실시예 GW8, 단계 a
Figure pct00567
DMF (9 mL) 중 GW3e (0.360 g, 0.551 mmol)의 용액에 NCS (0.096 g, 0.717 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 15시간 동안 50℃에서 가열하였다. 잔류물을 MeOH로 희석하고, 역상 HPLC 정제 (MeOH/물/TFA; 칼럼: 페노메넥스® 루나, 30X100 mm S10 악시아)에 적용시켜 카르바메이트 GW8a의 TFA 염을 밝은 황색 발포체 (20 mg)로서 회수하였다. GW3e의 TFA 염 (60 mg) 및 모노-클로로 유사체 (70 mg)도 또한 단리하였다.
카르바메이트 GW8a:
Figure pct00568
실시예 GW8, 단계 b
Figure pct00569
디옥산 중 4N HCl (3 mL)을 GW8a의 TFA 염 (55 mg, 0.063 mmol)에 첨가하고, 혼합물을 5시간 동안 실온에서 교반하였다. 용매를 진공 하에 제거하고, 잔류물을 밤새 진공 하에 건조시켜 피롤리딘 GW8b의 HCl 염을 갈색 고체 (50 mg)로서 수득하였다.
Figure pct00570
실시예 GW8
DMF (3 mL) 중 GW8b의 HCl 염 (50 mg, 0.075 mmol)의 현탁액에 (S)-2-(메톡시카르보닐아미노)-3-메틸부탄산 (28.9 mg, 0.165 mmol), DIEA (0.079 mL, 0.450 mmol) 및 HATU (58.7 mg, 0.154 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 대부분의 휘발성 성분을 진공 하에 제거하고, 잔류물을 MeOH에 용해시키고, 역상 HPLC 정제 (MeOH/물/TFA; 칼럼: 페노메넥스® 루나, 30X100 mm S10 악시아)에 적용시켜 GW8의 TFA 염 (밝은 황색 발포체; 40 mg)을 회수하였다.
Figure pct00571
실시예 GW9 및 GW10
Figure pct00572
실시예 GW9, 단계 a
Figure pct00573
THF (25 mL) 중 GW3a-2 (1.31 g, 5.09 mmol)의 용액에 메틸마그네슘 브로마이드 (2.037 mL, 6.11 mmol)를 -40℃ (드라이아이스/아세톤 조)에서 적가하였다. 이것을 2시간 동안 동일한 온도에서 교반한 다음, 조를 제거하고, 추가로 1시간 동안 교반을 계속하였다. 아세트산 (1 mL), 물 (10 mL) 및 에테르 (50 mL)를 첨가하고, 혼합물을 진탕시키고, 유기 층을 분리하였다. 유기 층을 물로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피 (5-95％ EtOAc/헥산)로 정제하여 에스테르 GW9a를 무색 오일 (0.6 g)로서 수득하였다.
Figure pct00574
실시예 GW9, 단계 b
Figure pct00575
DCM (15 mL) 중 케톤 GW9a (0.6 g, 2.195 mmol)의 용액에 TFA (0.846 mL, 10.98 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 7시간 동안 실온에서 교반하였다. 휘발성 성분을 진공 하에 제거하고, 밤새 진공 하에 건조시켜 밝은 황색 오일 (0.63 g)을 수득하였다.
메탄올 (20 mL) 중 상기 조 생성물 (0.5 g, 1.8 mmol)의 용액을 Pd/C (0.025 g, 0.234 mmol)를 함유하는 500 mL 파르 진탕기 병에 첨가하였다. 배기 및 질소 재충전을 수행한 후 (3x), 혼합물을 24시간 동안 60 psi 하에 진탕시켰다. 반응 혼합물을 여과지를 통해 여과하고, 휘발성 성분을 진공 하에 제거하여 밝은 황색 오일 (0.41 g)을 수득하였다.
CH2Cl2 (7 mL) 중 상기 조 생성물 (0.48 g, 1.77 mmol)의 용액에 DMAP (10.81 mg, 0.088 mmol), 트리에틸아민 (0.740 mL, 5.31 mmol)을 첨가하였다. 디-tert-부틸 디카르보네이트 (0.386 g, 1.77 mmol)를 15분에 걸쳐 조금씩 첨가하고, 혼합물을 18시간 동안 실온에서 교반하였다. 휘발성 성분을 진공 하에 제거한 후, 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피 (0-22％ EtOAc/헥산)로 정제하여 2종의 주 생성물을 수득하였다. 제1 용리액은 GW9b-1 (0.54 g)이었다.
Figure pct00576
제2 용리액은 미확인 불순물 (0.48 g)로 오염된 GW9b-2였다. 깨끗한 GW9b-2 분획을 하기 스펙트럼 데이터를 획득하는 데 사용하였다:
Figure pct00577
실시예 GW9, 단계 c
Figure pct00578
에탄올 (40 mL) 중 GW9b-1 (3.73 g, 14.50 mmol)의 용액에 물 (20.00 mL) 중 LiOH (0.417 g, 17.39 mmol)의 용액을 첨가하고, 혼합물을 6시간 동안 실온에서 교반하였다. 추가의 LiOH (0.1 g, 4.3 mmol)를 첨가하고, 추가로 2시간 동안 교반을 계속하였다. 대부분의 유기 성분을 증발시키고, 잔류부를 에테르 (20 mL)로 세척하였다. 수성 층을 빙수조로 냉각시키고, 1N HCl을 사용하여 2-3의 pH로 산성화시키고, EtOAc (50 mL, 4x)로 추출하고, Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 무색 오일을 수득하였고, 이는 고진공에 노출시 백색 고체가 되었다 (3.43 g). 고체를, 이것을 환류 상태로 만드는 열선총의 도움으로 최소량의 EtOAc에 용해시켰다. 실온으로 냉각시킨 후, 헥산 5방울을 첨가하고, 밤새 주위 온도에 정치되도록 하여 산 GW9c를 백색 침상체로서 수득하고, 이를 여과하고, 헥산으로 세척하고, 진공 하에 건조시켰다 (2.02 g).
Figure pct00579
실시예 GW9, 단계 d
Figure pct00580
화합물 GW9d (TFA 염; 밝은 황색 발포체)를, 최종 단계에 (S)-2-(메톡시카르보닐아미노)-3-메틸부탄산을 사용하는 것을 제외하고는 산 GW3c로부터의 전구체 GW3g의 제조에 대해 기재된 절차에 따라 산 GW9c로부터 제조하였다.
Figure pct00581
실시예 GW9 및 GW10
DMF (6 mL) 중 GW9d (TFA 염; 310 mg, 0.328 mmol)의 용액에 NCS (62.5 mg, 0.468 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 9시간 동안 50℃에서 가열하였다. 대부분의 휘발성 성분을 진공 하에 제거하고, 잔류물을 MeOH에 용해시키고, 역상 HPLC 정제 (MeOH/물/TFA; 칼럼: 페노메넥스® 루나, 30X100 mm S10 악시아)에 적용시켜 모노- 및 디-클로로 생성물을 분리하였다. 모노-염소화 생성물을 상이한 역상 HPLC 조건 (ACN/TFA/물, 워터스-선파이어 30X100 mm S5)을 이용하여 추가로 정제하였다. 실시예 GW9 (밝은 황색 발포체; 36 mg) 및 실시예 GW10 (밝은 황색 발포체; 60 mg)을 TFA 염으로서 회수하였다.
실시예 GW9:
Figure pct00582
실시예 GW10:
Figure pct00583
실시예 GW11 및 GW12
Figure pct00584
실시예 GW11 및 GW12를, (S)-2-(메톡시카르보닐아미노)-3-메틸부탄산 대신에 (S)-2-(메톡시카르보닐아미노)부탄산을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 GW9 및 GW10의 제조에 대해 기재된 절차에 따라 제조하였다.
실시예 GW11 (TFA 염):
Figure pct00585
실시예 GW12 (TFA 염):
Figure pct00586
실시예 OL1 및 OL2
Figure pct00587
실시예 OL1, 단계 a
Figure pct00588
피롤리딘 1e/4HCl (455 mg, 0.766 mmol), (S)-2-(4,4-디플루오로시클로헥실)-2-(메톡시카르보닐아미노)아세트산 (385 mg, 1.532 mmol), HATU (612 mg, 1.609 mmol) 및 DIEA (0.803 mL, 4.60 mmol)를 DMF (30 mL) 중에서 합하고, 생성된 황색 용액을 3시간 동안 주위 온도에서 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하고, 잔류물을 메탄올에 재용해시키고, 정제용 HPLC (용매 A: 10％ 아세토니트릴 / 90％ 물 / 10 mM NH4OAc; 용매 B: 90％ 아세토니트릴 / 10％ 물 / 10 mM NH4OAc; 칼럼: 선파이어 정제용 MS C18 30 x 150 mm S10; 파장: 220 nm; 유량: 40 ml/분; 구배: 30분에 걸쳐 10％ B → 75％ B 및 30분의 유지 시간)에 의해 정제하였다. 생성물 OL1a (0.37 g, 0.396 mmol)에 해당하는 회백색 고체를 회수하였다.
Figure pct00589
실시예 OL1 및 OL2
NCS (6.83 mg, 0.051 mmol)를 DMF (2 mL) 중 아미드 OL1a (39 mg, 0.043 mmol)의 용액에 첨가하고, 생성된 혼합물을 5시간 동안 50℃로 가열하였다. 이어서, 반응 혼합물을 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 용매 A: 10％ MeOH / 90％ 물 / 0.1％ TFA; 용매 B: 90％ MeOH / 10％ 물 / 0.1％ TFA; 칼럼: 선파이어 정제용 MS C18 30 x 100 mm 5u; 파장: 220 nm; 유량: 40 ml/분; 구배: 30분에 걸쳐 0％ B → 75％ B 및 2분의 유지 시간. 분획을 농축시킨 후, 실시예 OL1 (15 mg) 및 실시예 OL2 (16 mg)의 TFA 염을 단리하였다.
실시예 OL1:
Figure pct00590
실시예 OL2:
Figure pct00591
실시예 OL3 내지 OL5
Figure pct00592
실시예 OL3, 단계 a
Figure pct00593
피롤리딘 V9a (207 mg, 0.377 mmol), (S)-2-(메톡시카르보닐아미노)-2-(테트라히드로-2H-피란-4-일)아세트산 (82 mg, 0.377 mmol), HATU (158 mg, 0.415 mmol) 및 DIEA (0.132 mL, 0.755 mmol)를 DMF (5 mL) 중에서 합하고, 생성된 황색 용액을 3시간 동안 주위 온도에서 교반하였다. 혼합물을 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 용매 A: 10％ MeOH / 90％ 물 / 0.1％ TFA; 용매 B: 90％ MeOH / 10％ 물 / 0.1％ TFA; 칼럼: 선파이어 정제용 MS C18 30 x 100 mm 5u; 파장: 220 nm; 유량: 40 ml/분; 구배: 30분에 걸쳐 20％ B → 80％ B 및 2분의 유지 시간. 카르바메이트 OL3a의 TFA 염 (0.19 g)에 해당하는 백색 고체를 회수하였다 [주: 카르바메이트 OL3a 및 V9b는 이들의 형태적 상태 외에는 동일하다].
Figure pct00594
실시예 OL3, 단계 b
Figure pct00595
카르바메이트 OL3a (0.19 g, 0.195 mmol)를 CH2Cl2 (15 mL)에 용해시키고, 디옥산 중 4N HCl (3 mL, 12.00 mmol)로 충전시켰다. 생성된 현탁액을 2시간 동안 주위 온도에서 교반하고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. 피롤리딘 OL3b의 HCl 염 (3X) (0.12 g)에 해당하는 황색빛 고체를 회수하였고, 추가의 정제 없이 사용하였다.
Figure pct00596
실시예 OL3, 단계 c
Figure pct00597
(S)-2-(4,4-디플루오로시클로헥실)-2-(메톡시카르보닐아미노)아세트산 (87 mg, 0.345 mmol), 피롤리딘 OL3b의 HCl 염 (3X) (261 mg, 0.345 mmol), HATU (144 mg, 0.379 mmol) 및 DIEA (0.301 mL, 1.724 mmol)를 DMF (10 mL) 중에서 합하고, 생성된 갈색빛 용액을 2시간 동안 주위 온도에서 교반하였다. 샘플을 직접적으로 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 용매 A: 10％ MeOH / 90％ 물 / 0.1％ TFA; 용매 B: 90％ MeOH / 10％ 물 / 0.1％ TFA; 칼럼: 선파이어 정제용 MS C18 30 x 100 mm 5u; 파장: 220 nm; 유량: 40 ml/분; 구배: 30분에 걸쳐 30％ B → 70％ B 및 2분의 유지 시간. 아미드 OL3c의 TFA 염 (2x) (132 mg, 0.117 mmol, 33.8％ 수율)에 해당하는 백색 고체를 회수하였다.
Figure pct00598
실시예 OL3 내지 OL5
NCS (22.66 mg, 0.170 mmol)를 DMF (3 mL) 중 실시예 OL3c의 TFA 염 (115 mg, 0.131 mmol)의 용액에 첨가하고, 생성된 혼합물을 5시간 동안 50℃로 가열하였다. 혼합물을 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 용매 A: 05％ MeCN / 95％ 물 / 10 mM NH4Ac; 용매 B: 95％ MeCN / 5％ 물 / 10 mM NH4Ac; 칼럼: 선파이어 정제용 MS C18 30 X 100 mm S10; 파장: 220 nm; 유량: 35 ml/분; 구배: 30분에 걸쳐 10％ B → 100％ B 및 2분의 유지 시간. 2개의 분획을 단리하였고, 여기서 제1 용리액은 모노-염소화 유사체의 혼합물 (실시예 OL4 및 OL5)에 해당하였고, 두 번째 것은 비스-염소화 유사체 (실시예 OL3)에 해당하였다. 상응하는 분획을 농축시킨 후, 혼합물을 메탄올에 재용해시키고, 모노염소화된 위치이성질체를 정제용 HPLC에 의해 분리하였다. 용매 A: 10％ 아세토니트릴 / 90％ 물 / 0.1％ TFA; 용매 B: 90％ 아세토니트릴 / 10％ 물 / 0.1％ TFA; 칼럼: 페노메넥스® 루나 21 x 100 mm S10; 파장: 220 nm; 유량: 25 ml/분; 구배: 60분에 걸쳐 10％ B → 50％ B 및 2분의 유지 시간. 실시예 OL4 및 실시예 OL5에 해당하는 2개의 분획을 TFA 염으로서 단리하였고, 이들의 상대 위치화학은 결정되지 않았다.
실시예 OL3 (36 mg)을 백색 고체로서 회수하였다.
Figure pct00599
실시예 OL4 (10 mg)를 백색 고체로서 회수하였다.
Figure pct00600
실시예 OL5 (12 mg, 7.96％ 수율)를 백색 고체로서 회수하였다.
Figure pct00601
실시예 OL6
Figure pct00602
실시예 OL6 (TFA 염)을 실시예 V1의 합성에 대해 기재된 절차에 따라 피롤리딘 V1b/4HCl 및 Cap-179 (거울상이성질체-1)로부터 출발하여 제조할 수 있었다.
Figure pct00603
실시예 OL7
Figure pct00604
실시예 OL7, 단계 a
Figure pct00605
AcOH (30 mL) 중 (2S,2'S)-tert-부틸 2,2'-(5,5'-(비페닐-4,4'-디일)비스(1H-이미다졸-5,2-디일))디피롤리딘-1-카르복실레이트 (500 mg, 0.800 mmol)의 용액에 AcOH (0.8 mL) 중 브로민 (0.041 mL, 0.800 mmol)을 10분에 걸쳐 적가하였다. 생성된 반응 혼합물을 밤새 실온에서 교반하고, 포화 NaHCO3으로 중화시킨 다음, CH2Cl2로 추출하였다. 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔; 1:1 EtOAc/Hex, 이어서 2:1 EtOAc/Hex)에 의해 정제하여 브로마이드 OL7a.1 (200 mg) 및 디브로마이드 OL7a.2 (140 mg)를 백색 고체로서 수득하였다 (주: 디브로마이드가 칼럼으로부터 첫 번째로 용리되었다).
실시예 OL7, 단계 b.1
Figure pct00606
물 (0.03 mL) 중 시클로프로필보론산 (13.49 mg, 0.157 mmol)의 혼합물, 제3 인산칼륨 (90 mg, 0.423 mmol)의 혼합물을 15분 동안 실온에서 교반하였다. 이어서, 브로마이드 OL7a.1 (85 mg, 0.121 mmol), Pd(II)아세테이트 (2.71 mg, 0.012 mmol), 트리시클로헥실포스핀 (6.8 mg, 0.024 mmol) 및 톨루엔 (1 mL)을 첨가하고, 반응 혼합물을 밤새 110℃에서 교반하였다. 휘발성 성분을 진공 하에 제거하고, 잔류물을 정제용 HPLC에 의해 하기 조건을 이용하여 정제하였다. 칼럼: 워터스 선파이어 OBD 19 X 100 mm S5; 용매 A = 10％ ACN-90％ H2O-0.1％ TFA; 용매 B = 90％ ACN-10％ H2O-0.1％ TFA; 시작 ％B = 10; 최종 ％B = 75; 유량 = 20 ml/분; 구배 시간 = 20분. 커플링된 생성물 OL7b.1의 TFA 염을 밝은 황색 고체 (79 mg)로서 회수하였다.
실시예 OL7, 단계 b.2
Figure pct00607
톨루엔 (1.5 mL) 및 물 (0.05 mL) 중 디브로마이드 OL7a.2 (140 mg, 0.179 mmol), 시클로프로필보론산 (40.0 mg, 0.465 mmol), Pd(II)아세테이트 (8.03 mg, 0.036 mmol), 제3 인산칼륨 (266 mg, 1.252 mmol), 트리시클로헥실포스핀 (20.07 mg, 0.072 mmol)의 혼합물을 1.5시간 동안 110℃에서 마이크로웨이브로 가열하였다. LCMS는 어떠한 반응도 없었음을 보여주었다. 혼합물을 여과하고, 여과물을 진공 하에 농축시키고, 생성된 조 생성물을 정제용 HPLC에 의해 정제하였다: 칼럼 = 워터스 선파이어 OBD 19 X 100 mm S5; 용매 A = 10％ ACN-90％ H2O-0.1％ TFA; 용매 B = 90％ ACN-10％ H2O-0.1％ TFA; 시작 ％B = 10. 최종 ％B = 70; 유량 = 20 ml/분; 구배 시간 = 20분. 커플링된 생성물 OL7b.2의 TFA 염을 밝은 황색 고체로서 수득하였다.
실시예 OL7, 단계 c
Figure pct00608
CH2Cl2 (2 mL) 중 상기 제조한 카르바메이트 OL7b (79 mg)의 용액에 HCl (2 mL, 8.00 mmol) (디옥산 중 4N)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 30분 동안 실온에서 교반하였다. 휘발성 성분을 진공 하에 제거하여 OL7c의 HCl 염 (69 mg)을 수득하였고, 이를 추가의 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.
실시예 OL7
DMF (1 mL) 중 (S)-2-(메톡시카르보닐아미노)-3-메틸부탄산 (20.09 mg, 0.115 mmol), 피롤리딘 OL7/4 HCl (35 mg, 0.057 mmol)의 혼합물에 DiPEA (0.06 mL, 0.34 mmol) 및 HATU (43.6 mg, 0.115 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반한 다음, 암모니아 (2 mL, 메탄올 중 2M)를 첨가하고, 추가로 1시간 동안 교반을 계속하였다. 휘발성 성분을 진공 하에 제거하고, 잔류물을 정제용 HPLC에 의해 정제하였다: 칼럼 = 워터스 선파이어 C18 19 X 100 mm 5u; 용매 A = 10％ MeOH-90％ H2O-0.1％ TFA; 용매 B = 90％ MeOH-10％ H2O-0.1％ TFA; 시작 ％B = 10; 최종 ％B = 75; 유량 = 25 ml/분; 구배 시간 = 18분. 실시예 OL7의 TFA 염을 회백색 고체 (24 mg)로서 수득하였다.
Figure pct00609
실시예 OL8 내지 OL14
실시예 OL8 내지 OL14를 적절한 전구체, 및 실시예 OL7의 제조에 대해 기재된 절차를 이용하여 TFA 염으로서 제조하였다.
Figure pct00610
Figure pct00611
실시예 OL15
Figure pct00612
실시예 OL15, 단계 a
Figure pct00613
THF (3 mL) 중 브로마이드 OL7a.1 (200 mg, 0.284 mmol), CsF (0.021 mL, 0.568 mmol), Pd(Ph3P)4 (19.71 mg, 0.017 mmol) 및 2-알릴-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란 (0.107 mL, 0.568 mmol)의 혼합물을 마이크로웨이브에서 1시간 동안 140℃에서 가열하였다. 용매를 진공 하에 제거하고, 잔류물을 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 칼럼, 페노메넥스® 루나 10u (30 X 100 mm); 용매 A = 5％ CH3CN-95％ H2O-10mM NH4OAc; 용매 B = 95％ CH3CN-5％ H2O-10mM NH4OAc; 시작 ％B = 30; 최종 ％B = 100; 유량 = 25 ml/분; 구배 시간 = 48분. 생성물 OL15a를 백색 고체 (90 mg)로서 수득하였다.
실시예 OL15
실시예 OL7의 합성에 대해 기재된 절차에 따라 카르바메이트 OL15a를 실시예 OL15의 TFA 염으로 전환시켰다.
Figure pct00614
실시예 OL16
Figure pct00615
실시예 OL16 (TFA 염)을 실시예 OL15의 합성에 대해 기재된 절차에 따라 적절한 전구체로부터 제조하였다.
Figure pct00616
실시예 OL17 및 OL18
Figure pct00617
0℃에서 톨루엔 (0.5 mL) 중 OL15a (70 mg, 0.105 mmol), 디아이오도메탄 (0.102 mL, 1.263 mmol)의 용액에 디에틸아연 (1.263 mL, 1.263 mmol) (헵탄 중 1M)을 신속하게 첨가하였다. 생성된 혼합물을 1.5시간 동안 0℃에서 교반한 다음, 4시간 동안 실온에서 교반하였다. 혼합물에 포화 수성 NaHCO3 용액을 첨가하고, 혼합물을 CH2Cl2로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO4 하에 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용 HPLC에 의해 정제하였다: 칼럼, 페노메넥스® 루나 10u (30 X 100 mm); 용매 A = 5％ CH3CN-95％ H2O-10mM NH4OAc; 용매 B = 95％ CH3CN-5％ H2O-10mM NH4OAc; 시작 ％B = 30; 최종 ％B = 100; 유량 = 25 ml/분. 구배 시간 = 25분. 생성된 물질 (백색 고체, 40 mg)을 CH2Cl2 (1 mL)에 용해시키고, HCl (1 mL, 4.00 mmol) (디옥산 중 4N)로 처리하였다. 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 휘발성 성분을 진공 하에 제거하여 생성물 (35 mg)을 수득하였고, 이를 실시예 OL7의 합성에 대해 기재된 절차에 따라 (S)-2-(메톡시카르보닐아미노)-3-메틸부탄산과 커플링시켰다. 수득한 조 잔류물을 정제용 HPLC에 의해 정제하였다: 칼럼 = 워터스 선파이어 C18 19 X 100 mm 5u; 용매 A = 10％ MeOH-90％ H2O-0.1％ TFA; 용매 B = 90％ MeOH-10％ H2O-0.1％ TFA; 출발 ％B = 20; 최종 ％B = 85; 유량 = 25 ml/분; 구배 시간 = 27분. 2개의 분획을 단리하였고, 여기서 용리된 첫 번째 것은 실시예 OL18의 TFA 염 (Rt = 1.74분 (조건 OL5a). (M+H)+ 793.54)에 해당하였고, 용리된 두 번째 것은 실시예 OL17의 TFA 염 (Rt = 1.77분 (조건 OL5a). (M+H)+ 793.53)에 해당하였다.
실시예 OL19
Figure pct00618
실시예 OL19, 단계 a
Figure pct00619
물 (0.2 mL) 중 1-메틸-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸 (59.1 mg, 0.284 mmol), 제3 인산칼륨 (121 mg, 0.568 mmol)의 혼합물을 15분 동안 실온에서 교반하였다. 이어서, 브로마이드 OL7a.1 (100 mg, 0.142 mmol), Pd(Ph3P)4 (9.85 mg, 0.008 mmol) 및 DMF (2 mL)를 첨가하고, 반응 혼합물을 마이크로웨이브 방사선 하에 40분 동안 130℃에서 교반하였다. 휘발성 성분을 진공 하에 제거하고, 잔류물을 정제용 HPLC에 의해 하기 조건을 이용하여 정제하였다. 칼럼: 페노메넥스® 루나 10u (30 X 100 mm); 용매 A = 10％ ACN-90％ H2O-10 mM NH4OAc; 용매 B = 90％ ACN-10％ H2O-10mM NH4OAc; 시작 ％B = 10; 최종 ％B = 80; 유량 = 25 ml/분; 구배 시간 = 15분. 커플링된 생성물 OL19a를 밝은 황색 고체 (120 mg)로서 회수하였다.
실시예 OL19, 단계 b
Figure pct00620
CH2Cl2 (1 mL) 중 상기 제조한 카르바메이트 OL19a (120 mg)의 용액에 HCl (1 mL, 4.00 mmol) (디옥산 중 4N)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 휘발성 성분을 진공 하에 제거하여 OL19b의 HCl 염 (87 mg)을 수득하였고, 이를 추가의 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.
실시예 OL19
DMF (1 mL) 중 (S)-2-(메톡시카르보닐아미노)-3-메틸부탄산 (15.30 mg, 0.087 mmol), 피롤리딘 OL19b/4 HCl (30 mg, 0.044 mmol)의 혼합물에 DiPEA (0.053 mL, 0.306 mmol) 및 HATU (33.2 mg, 0.087 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하고, 휘발성 성분을 진공 하에 제거하고, 잔류물을 정제용 HPLC에 의해 정제하였다: 칼럼 = 워터스 아틀란티스(Atlantis) OBD 30 X 100 mm 5u; 용매 A = 10％ MeOH-90％ H2O-0.1％ TFA; 용매 B = 90％ MeOH-10％ H2O-0.1％ TFA; 시작 ％B = 20; 최종 ％B = 75; 유량 = 25 ml/분; 구배 시간 = 25분. 실시예 OL19의 TFA 염을 백색 고체 (33 mg)로서 수득하였다.
Figure pct00621
실시예 OL20 내지 OL25
실시예 OL20 내지 OL25를 적절한 전구체, 및 실시예 OL19의 제조에 대해 기재된 절차를 이용하여 TFA 염으로서 제조하였다.
Figure pct00622
Figure pct00623
실시예 DSTL-1
Figure pct00624
실시예 DSTL-1, 단계 a
Figure pct00625
디페닐포스포릴 아지드 (17.09 mL, 79 mmol)를 톨루엔 (225 mL) 중 6-브로모-2-나프토산 (16.5 g, 65.7 mmol), 트리에틸아민 (18.32 mL, 131 mmol) 및 tert-부틸알콜 (7.54 mL, 79 mmol)의 용액에 첨가하고, 100℃에서 4시간 동안 교반하였다. 휘발성 물질을 회전 증발에 의해 제거하고, 잔류물을 EtOAc (500 mL)에 녹이고, 물 및 염수로 세척하였다. 농축시 침전물이 형성되었고, 이를 여과에 의해 단리하고, 1:1 Et2O/Hex로 세척하여 실시예 DSTL-1, 단계 a (10.5 g)를 수득하였다. 모액을 농축시켜, 덜 순수한 생성물의 제2 수확물을 단리하였다 (9.8 g); 합한 수율 (93％).
Figure pct00626
실시예 DSTL-1, 단계 b
Figure pct00627
실시예 DSTL-1, 단계 a (5 g, 15.52 mmol)를 아세트산 (50 mL)에 희석하고, 발연 질산 (2.3 mL)을 20분에 걸쳐 적가하였다. 반응물을 2시간 동안 교반하고, 여과에 의해 단리한 생성물을 DCM과 포화 NaHCO3 용액 사이에 분배시켰다. 유기 층을 농축시키고, 실시예 DSTL-1, 단계 b 5.7 g (정량적)을 수득하였다.
Figure pct00628
실시예 DSTL-1, 단계 c
Figure pct00629
주석(II)클로라이드 탈수화물 (3 g, 16.34 mmol)을 MeOH (100 mL) 중 실시예 DSTL-1, 단계 b (2 g, 5.47 mmol)의 용액에 첨가하고, 용액을 70℃에서 18시간 동안 교반하였다. 용매를 회전 증발에 의해 제거하고, 실시예 DSTL-1, 단계 c (이론적으로 1.25 g으로 추정함)를 고진공 하에 건조시켰다.
Figure pct00630
실시예 DSTL-1, 단계 d
Figure pct00631
HATU (2.085 g, 5.48 mmol)를 DMF (70 mL) 중 실시예 DSTL-1, 단계 c (1.25 g, 5.48 mmol), 실시예 1, 단계 b (1.246 g, 5.48 mmol) 및 휘니그 염기 (7.09 g, 54.8 mmol)의 용액에 첨가하고, 반응 혼합물을 6시간 동안 교반한 후, EtOAc (500 mL)와 포화 NaHCO3 (150 mL) 사이에 분배시켰다. 침전된 주석 염을 셀라이트®를 통한 여과에 의해 제거하고, 유기 상을 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 AcOH (100 mL)에 녹이고, 18시간 동안 60℃에서 가열하였다. 용매를 고진공 하에 회전 증발에 의해 제거하고, 잔류물을 CH2Cl2에 녹이고, 포화 NaHCO3 용액으로 세척하였다. 농축시킨 후, 조 생성물을 톰슨 실리카 겔 카트리지 (110 g)에 충전시키고 (DCM), 구배 용리 (1L에 걸쳐 15 - 100％ B)에 적용시켜 실시예 DSTL-1, 단계 d (420 mg, 44％)를 수득하였다.
Figure pct00632
실시예 DSTL-1, 단계 d.1
Figure pct00633
실시예 DSTL-1, 단계 d.1을 특허 출원 WO 2008/021927에 그의 데스메타노 유사체의 합성에 대해 기재된 절차에 따라 실시예 1, 단계 b로부터 제조하였다.
실시예 DSTL-1, 단계 e
Figure pct00634
DMF (15 mL) 중 실시예 DSTL-1, 단계 d.1 (560 mg, 1.39 mmol)의 용액에 NCS (203 mg, 1.52 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 16시간 동안 50℃에서 가열하였다. 용액을 질소로 퍼징하여 DMF를 증발시키고, 조 잔류물을 톰슨 SiO2 칼럼 (80 g)에 충전시키고 (DCM), 구배 용리를 수행하였다 (바이오타지®). 구획 1: 1.5 L에 걸쳐 10 - 100％ B. 구획 2: 100％ B 유지 300 mL. (A/B 헥산/EtOAc). 실시예 DSTL-1, 단계 e (589.1 mg, 92％ 수율)를 단리하였다.
Figure pct00635
실시예 DSTL-1, 단계 f
Figure pct00636
스크류-마개 압력 용기에서 테트라키스(트리페닐포스핀) 팔라듐 (76 mg, 0.066 mmol)을 디옥산 (12 mL) 중 실시예 DSTL-1, 단계 e (580 mg, 1.32 mmol), 비스(피나콜레이토)디보론 (671 mg, 2.64 mmol) 및 아세트산칼륨 (324 mg, 3.30 mmol)의 교반된 현탁액에 한번에 첨가하였다. 반응 혼합물을 배기시키고 아르곤으로 플러싱하고 (3x), 예열된 오일조 (80℃)에 넣고, 16시간 동안 교반하였다. 냉각시, 반응 혼합물을 EtOAc로 희석하고, 포화 NaHCO3 용액, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 조 잔류물을 수행된 톰슨 SiO2 칼럼 (80 g)에 충전시키고 (DCM), 구배 용리를 수행하였다 (바이오타지®). 구획 1: 1.5 L에 걸쳐 5 - 100％ B. 구획 2: 100％ B 유지 300 mL. (A/B CH2Cl2/EtOAc). 실시예 DSTL-1, 단계 f (714.7 mg, 95％)를 황색 발포체로서 단리하였다.
Figure pct00637
실시예 DSTL-1, 단계 g
Figure pct00638
스크류-마개 압력 용기에서 아르곤 하에 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐 (27.0 mg, 0.023 mmol)을 DME (4 mL) 및 물 (1 mL)의 탈기된 용액 중 실시예 DSTL-1, 단계 d (200 mg, 0.467 mmol), 실시예 DSTL-1, 단계 f (250 mg, 0.514 mmol) 및 NaHCO3 (196 mg, 2.335 mmol)의 교반된 현탁액에 한번에 첨가하였다. 용액을 배기시키고 아르곤으로 충전시키고 (3x), 예열된 오일조 (80℃)에 넣고, 14시간 동안 교반하였다. 혼합물을 EtOAc (10 mL), THF (2 mL) 및 MeOH (1 mL)로 희석하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 농축시켜 용매를 제거한 후, 잔류물을 톰슨 SiO2 칼럼 (80 g)에 충전시키고, 구배에 의해 용리하였다 (바이오타지®). 구획 1: 1.5 L에 걸쳐 20 - 100％ B, 구획 2: 300 mL 동안 100％ B 유지; A/B 헥산/EtOAc. DSTL-1, 단계 g (195.0 mg, 52.6％)를 황갈색 고체로서 단리하였다.
Figure pct00639
실시예 DSTL-1, 단계 h
Figure pct00640
차가운 (0℃) 디옥산 중 4N HCl (4 mL)을 MeOH (1 mL) 중 실시예 DSTL-1, 단계 g (65 mg, 0.092 mmol)의 교반된 용액에 첨가하였다. 혼합물을 3시간 동안 실온에서 교반하고, 농축시키고, 고진공 하에 두어 DSTL-1, 단계 h를 오렌지색-황갈색 고체로서 및 테트라 HCl 염으로서 수득하였다.
Figure pct00641
실시예 DSTL-1
실시예 DSTL-1을 실시예 GW2의 제조에 대해 기재된 절차에 따라 실시예 DSTL-1, 단계 h로부터 제조하였다. 정제용 HPLC (워터스 선파이어 칼럼 (30 x 100 mm, S5)을 사용하여 25분에 걸쳐 0 - 50％ B의 구배 (40 ml/분에서), 여기서 용매 B = 90％ CH3CN - 10％ H2O - 0.1％ TFA 및 A = 5％ CH3CN - 95％ H2O - 0.1％ TFA)에 의해 정제를 달성하였다. 실시예 DSTL-1 (70.4 mg, 67.7％)을 백색 고체로서 단리하였다.
Figure pct00642
실시예 DSTL-2
Figure pct00643
실시예 DSTL-2를, Cap-51 대신에 (S)-2-(메톡시카르보닐아미노)-2-(테트라히드로-2H-피란-4-일)아세트산을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 GW2의 제조에 대해 기재된 절차에 따라 실시예 DSTL-1, 단계 h로부터 제조하였다. 정제용 HPLC (워터스 선파이어 칼럼 (30 x 100 mm, S5)을 사용하여 25분에 걸쳐 0 - 50％ B의 구배 (40 ml/분에서), 여기서 용매 B = 90％ CH3CN - 10％ H2O - 0.1％ TFA 및 A = 5％ CH3CN - 95％ H2O - 0.1％ TFA)에 의해 정제를 달성하였다. 실시예 DSTL-2 (18.0 mg)를 백색 고체로서 단리하였다.
Figure pct00644
실시예 DSTL-3 및 DSTL-4
Figure pct00645
실시예 DSTL-3, 단계 a 및 DSTL-4, 단계 a
Figure pct00646
AcOH (1 mL) 중 브로민 (0.079 mL, 1.54 mmol)의 용액을 AcOH (40 mL) 중 실시예 1, 단계 d (1.0 g, 1.541 mmol)의 교반된 용액에 조금씩 첨가하고, 혼합물을 3시간 동안 실온에서 교반하였다. 용매를 진공 하에 제거하고, 잔류물을 DCM에 녹이고, 포화 NaHCO3 용액으로 세척하였다. 수성 층을 DCM으로 2회 더 추출하고, 합한 유기 추출물을 염수로 세척하고, 건조시켰다 (Na2SO4). 잔류물을 톰슨 실리카 겔 카트리지 (160 g)에 충전시키고 (DCM), 2 L에 걸쳐 30 - 100％ B로 용리하였다. 구획 2: 800 mL 동안 100％ B 유지. A/B 헥산/EtOAc. 3종의 성분을 단리하였다;
출발 물질 (303.6 mg);
실시예 DSTL-3, 단계 a (X = H; 382.1 mg); 황색 고체.
Figure pct00647
실시예 DSTL-4, 단계 a (X = Br; 287.2 mg); 밝은 황색 고체.
Figure pct00648
실시예 DSTL-3, 단계 b 및 DSTL-4, 단계 b
Figure pct00649
실시예 DSTL-3, 단계 b 및 DSTL-4, 단계 b의 생성물을 개별적으로 사용하였다. 보호기의 제거를 실시예 DSTL-1, 단계 h로부터의 절차에 기재된 바와 같이 수행하였다.
X = H; 실시예 DSTL-3, 단계 b: 황색 고체, 33.1 mg (97％ 순도);
Figure pct00650
X = Br; 실시예 DSTL-4, 단계 b: 황색 고체, 33 mg (96％ 순도);
Figure pct00651
실시예 DSTL-3
실시예 DSTL-3을 실시예 GW2의 제조에 대해 기재된 절차에 따라 실시예 DSTL-3, 단계 b로부터 제조하였다. 정제용 HPLC (워터스 선파이어 칼럼 (30 x 100 mm, S5)을 사용하여 30분에 걸쳐 0 - 50％B의 구배 (40 ml/분에서), B = 90％ CH3CN - 10％ H2O - 0.1％ TFA 및 A = 5％ CH3CN - 95％ H2O - 0.1％ TFA)에 의해 정제를 달성하였다. 실시예 DSTL-3 (29.0 mg)을 백색 고체로서 단리하였다.
Figure pct00652
실시예 DSTL-4
실시예 DSTL-4를 실시예 GW2의 제조에 대해 기재된 절차에 따라 실시예 DSTL-4, 단계 b로부터 제조하였다. 정제용 HPLC (워터스 선파이어 칼럼 (30 x 100 mm, S5)을 사용하여 30분에 걸쳐 0 - 50％B의 구배 (40 ml/분에서), B = 90％ CH3CN - 10％ H2O - 0.1％ TFA 및 A = 5％ CH3CN - 95％ H2O - 0.1％ TFA)에 의해 정제를 달성하였다. 실시예 DSTL-4 (30.2 mg)를 백색 고체로서 단리하였다.
Figure pct00653
실시예 DSTL-5
Figure pct00654
실시예 DSTL-5, 단계 a
Figure pct00655
실온에서 아큐플루오르 (알루미나 상 45-50％) (345 mg, 1.2 mmol)를 건조 DMF (5 mL) 중 실시예 1, 단계 d (1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-tert-부틸 3,3'-(5,5'-(비페닐-4,4'-디일)비스(1H-이미다졸-5,2-디일))비스(2-아자비시클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트) (500 mg, 0.77 mmol)의 교반된 현탁액에 한번에 첨가하였다. 혼합물을 60℃에서 예열된 오일조에 넣고, 4시간 동안 교반한 후, 용매를 고진공 하에 회전 증발에 의해 제거하였다. 조 생성물을 톰슨 90 g 실리카 겔 카트리지에 충전시키고, 2 L에 걸쳐 10 - 100％ B로 용리하고, 1L 동안 100％ B에서 유지하였다 (용매 B = EtOAc; 용매 A = 헥산). 2L에 걸쳐 0 - 100％ B로 용리하는 제2 구배를 적용시켰다 (용매 B = 메탄올; 용매 A = EtOAc). 3개의 분획을 수집하였다: 황색 고체로서의 실시예 DSTL-5, 단계 a (X=F) (1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-tert-부틸 3,3'-(5,5'-(비페닐-4,4'-디일)비스(4-플루오로-1H-이미다졸-5,2-디일))비스(2-아자비시클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트) (45.0 mg, 7％); 황색 고체로서의 실시예 DSTL-5, 단계 a (X=H) ((1R,3S,5R)-3차 부틸 3-(5-(4'-(2-((1R,3S,5R)-2-(tert-부톡시카르보닐)-2-아자비시클로[3.1.0]헥산-3-일)-1H-이미다졸-5-일)비페닐-4-일)-4-플루오로-1H-이미다졸-2-일)-2-아자비시클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트 (193 mg, 32％), 및 회수된 출발 물질 (153 mg, 24％).
실시예 DSTL-5, 단계 a X = F: 제1 용리 화합물의 샘플 (약 10 mg)을 정제용 HPLC (페노메넥스® 루나 칼럼 (30 x 100 mm, 10u)을 사용하여 30분에 걸쳐 0 - 100％ B의 구배 (40 ml/분에서), 여기서 용매 B = 90％ CH3CN - 10％ H2O - 0.1％ TFA 및 A = 5％ CH3CN - 95％ H2O - 0.1％ TFA)에 의해 추가로 정제하였다. 밝은 황색 고체로서 단리하였다 (4.6 mg).
Figure pct00656
실시예 DSTL-5, 단계 a X = H: 제2 용리 화합물의 샘플 (약 15 mg)을 정제용 HPLC (페노메넥스® 루나 칼럼 (30 x 100 mm, 10u)을 사용하여 30분에 걸쳐 0 - 100％ B의 구배 (40 ml/분에서), 여기서 용매 B = 90％ CH3CN - 10％ H2O - 0.1％ TFA 및 A = 5％ CH3CN - 95％ H2O - 0.1％ TFA)에 의해 추가로 정제하였다. 회백색 고체로서 단리하였다 (11.2 mg).
Figure pct00657
실시예 DSTL-5, 단계 b
Figure pct00658
실시예 DSTL-5, 단계 a, (X = F) 및 (X = H)의 생성물을 개별적으로 사용하였다. 보호기의 제거를 실시예 DSTL-1, 단계 h로부터의 절차에 기재된 바와 같이 수행하였다.
실시예 DSTL-5, 단계 b (X = F): 황색 고체, 23.4 mg;
Figure pct00659
실시예 DSTL-5, 단계 b (X = H): 18 mg (95％ 순도);
Figure pct00660
실시예 DSTL-5
실시예 DSTL-5를 실시예 GW2의 제조에 대해 기재된 절차에 따라 실시예 DSTL-5, 단계 b (X = H)로부터 제조하였다. 정제용 HPLC (워터스 선파이어 칼럼 (30 x 100 mm, S5)을 사용하여 30분에 걸쳐 0 - 50％B의 구배 (40 ml/분에서), B = 90％ CH3CN - 10％ H2O - 0.1％ TFA 및 A = 5％ CH3CN - 95％ H2O - 0.1％ TFA)에 의해 정제를 달성하였다. 실시예 DSTL-5 (37.3 mg, 39％)를 연황색 고체로서 단리하였다.
Figure pct00661
실시예 DSTL-6
Figure pct00662
실시예 DSTL-6을, Cap-51 대신에 (S)-2-(메톡시카르보닐아미노)-2-(테트라히드로-2H-피란-4-일)아세트산을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 GW2의 제조에 대해 기재된 절차에 따라 실시예 DSTL-5, 단계 b (X = H)로부터 제조하였다. 정제용 HPLC (워터스 선파이어 칼럼 (30 x 100 mm, S5)을 사용하여 25분에 걸쳐 0 - 50％B의 구배 (40 ml/분에서), B = 90％ CH3CN - 10％ H2O - 0.1％ TFA 및 A = 5％ CH3CN - 95％ H2O - 0.1％ TFA)에 의해 정제를 달성하였다. 실시예 DSTL-6 (37.1 mg, 36％)을 백색 고체로서 단리하였다.
Figure pct00663
실시예 DSTL-7
Figure pct00664
실시예 DSTL-7을, Cap-51 대신에 (S)-2-(메톡시카르보닐아미노)-2-(테트라히드로-2H-피란-4-일)아세트산을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 GW2의 제조에 대해 기재된 절차에 따라 실시예 DSTL-5, 단계 b (X = F)로부터 제조하였다. 정제용 HPLC (워터스 선파이어 칼럼 (30 x 100 mm, S5)을 사용하여 25분에 걸쳐 0 - 50％B의 구배 (40 ml/분에서), 여기서 용매 B = 90％ CH3CN - 10％ H2O - 0.1％ TFA 및 A = 5％ CH3CN - 95％ H2O - 0.1％ TFA)에 의해 정제를 달성하였다. 실시예 DSTL-7 (14 mg, 25％)을 백색 고체로서 단리하였다.
Figure pct00665
실시예 DSTL-8
Figure pct00666
실시예 DSTL-8, 단계 a
Figure pct00667
아큐플루오르 (알루미나 상 45-50％) (274 mg, 0.92 mmol)를 건조 DMF (4 mL) 중 실시예 GW1, 단계 a (2S,2'S,5S,5'S)-tert-부틸 5,5'-(5,5'-(비페닐-4,4'-디일)비스(1H-이미다졸-5,2-디일))비스(2-메틸피롤리딘-1-카르복실레이트) (400 mg, 0.6 mmol)의 교반된 현탁액에 실온에서 한번에 첨가하였다. 혼합물을 60℃에서 예열된 오일조에 넣고, 4시간 동안 교반한 후, 추가의 아큐플루오르 135 mg을 첨가하고, 16시간 동안 60℃에서 교반을 계속하였다. 용매를 고진공 하에 회전 증발에 의해 제거하고, 조 생성물을 톰슨 90 g 실리카 겔 카트리지에 충전시키고, 2 L에 걸쳐 10 - 100％ B로 용리하고, 1 L 동안 100％ B에서 유지하였다 (용매 B = EtOAc; 용매 A = 헥산). 2 L에 걸쳐 0 - 100％ B로 용리하는 제2 구배를 적용시켰다 (용매 B = 메탄올; 용매 A = EtOAc). 3개의 분획을 수집하였다:
황색-오렌지색 고체로서의 실시예 DSTL-8, 단계 (X = F) (2S,2'S,5S,5'S)-tert-부틸 5,5'-(5,5'-(비페닐-4,4'-디일)비스(4-플루오로-1H-이미다졸-5,2-디일))비스(2-메틸피롤리딘-1-카르복실레이트) (33 mg, 5.1％):
Figure pct00668
황색-오렌지색 고체로서의 실시예 DSTL-8, 단계 a (X = H) (2S,5S)-tert-부틸 2-(5-(4'-(2-((2S,5S)-1-(tert-부톡시카르보닐)-5-메틸피롤리딘-2-일)-1H-이미다졸-5-일)비페닐-4-일)-4-플루오로-1H-이미다졸-2-일)-5-메틸피롤리딘-1-카르복실레이트 (108.6 mg, 17％).
Figure pct00669
적색빛-오렌지색 고체로서의 회수된 출발 물질 (321.2 mg, 80％).
실시예 DSTL-8, 단계 b
Figure pct00670
실시예 DSTL-8, 단계 a, (X = F) 및 (X = H)의 생성물을 개별적으로 사용하였다. 보호기의 제거를 실시예 DSTL-1, 단계 h로부터의 절차에 기재된 바와 같이 수행하였다.
실시예 DSTL-8, 단계 b (X = F): 황색 고체, 22.7 mg;
Figure pct00671
실시예 DSTL-8, 단계 b (X = H): 35 mg (95％ 순도);
Figure pct00672
실시예 DSTL-8
실시예 DSTL-5를 실시예 GW2의 제조에 대해 기재된 절차에 따라 실시예 DSTL-8, 단계 b (X = H)로부터 제조하였다. 정제용 HPLC (워터스 선파이어 칼럼 (30 x 100 mm, S5)을 사용하여 40 ml/분에서 30분에 걸쳐 0 - 50％B의 구배, B = 90％ CH3CN - 10％ H2O - 0.1％ TFA 및 A = 5％ CH3CN - 95％ H2O - 0.1％ TFA)에 의해 정제를 달성하였다. 실시예 DSTL-8 (31.9 mg, 41％)을 밝은 복숭아색 고체로서 단리하였다.
Figure pct00673
실시예 DSTL-9
Figure pct00674
실시예 DSTL-9를, Cap-51 대신에 (S)-2-(메톡시카르보닐아미노)-2-(테트라히드로-2H-피란-4-일)아세트산을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 GW2의 제조에 대해 기재된 절차에 따라 실시예 DSTL-8, 단계 b (X = H)로부터 제조하였다. 정제용 HPLC (워터스 선파이어 칼럼 (30 x 100 mm, S5)을 사용하여 25분에 걸쳐 0 - 50％B의 구배 (40 ml/분에서), 여기서 용매 B = 90％ CH3CN - 10％ H2O - 0.1％ TFA 및 A = 5％ CH3CN - 95％ H2O - 0.1％ TFA)에 의해 정제를 달성하였다. 실시예 DSTL-9 (27.2 mg, 32％)를 연황색 고체로서 단리하였다.
Figure pct00675
실시예 DSTL-10
Figure pct00676
실시예 DSTL-10을, Cap-51 대신에 (S)-2-(메톡시카르보닐아미노)-2-(테트라히드로-2H-피란-4-일)아세트산을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 GW2의 제조에 대해 기재된 절차에 따라 실시예 DSTL-8, 단계 b (X = F)로부터 제조하였다. 정제용 HPLC (워터스 선파이어 칼럼 (30 x 100 mm, S5)을 사용하여 25분에 걸쳐 0 - 50％B의 구배 (40 ml/분에서), 여기서 용매 B = 90％ CH3CN - 10％ H2O - 0.1％ TFA 및 A = 5％ CH3CN - 95％ H2O - 0.1％ TFA)에 의해 정제를 달성하였다. 실시예 DSTL-10 (13.8 mg, 25％)을 연황색 고체로서 단리하였다.
Figure pct00677
실시예 DSTL-11
Figure pct00678
실시예 DSTL-11, 단계 a
Figure pct00679
DSTL-11, 단계 a의 제조를 특허 출원 20080213 US 10889A USCIP의 화합물 J5와 유사한 방식으로 수행하였다.
Figure pct00680
실시예 DSTL-11, 단계 b
Figure pct00681
5N 수산화나트륨 (1.469 mL, 7.4 mmol)을 에탄올 (40 mL) 중 DSTL-11, 단계 a (1R,3S,5R)-tert-부틸 3-(4-(4-브로모페닐)-5-(에톡시카르보닐)-1H-이미다졸-2-일)-2-아자비시클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트 (1.75 g, 3.7 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 16시간 동안 50℃에서 교반하고, 추가의 5N NaOH (1.5 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 6시간 동안 60℃에서 교반하고, 추가의 5N NaOH (0.75 mL)를 첨가하고, 16시간 동안 60℃에서 교반을 계속하였다. 에탄올을 회전 증발에 의해 제거하고, 잔류물을 에틸 아세테이트에 녹이고, pH = 5로 중화시켰다 (pH = 7에 가까워질 때까지 1N HCl 대략 20 mL, 이어서 pH =5 포스페이트 완충제 사용). 유기 층을 분리하고, 염수로 세척하고, 건조시키고, 농축시켰다. 실시예 DSTL-11, 단계 b (1.6 g, 92％)를 백색 고체로서 단리하였다.
Figure pct00682
실시예 DSTL-11, 단계 c
Figure pct00683
CDI (0.58 g, 3.57 mmol)를 건조 THF (30 mL) 중 DSTL-11, 단계 b 4-(4-브로모페닐)-2-((1R,3S,5R)-2-(tert-부톡시카르보닐)-2-아자비시클로[3.1.0]헥산-3-일)-1H-이미다졸-5-카르복실산 (1.6 g, 3.57 mmol)의 교반된 용액에 한번에 첨가하였다. 혼합물을 4시간 동안 50℃에서 교반한 후, 실온으로 냉각시키고, (진한) NH4OH (4.96 mL, 35.7 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 16시간 동안 교반한 후, EtOAc로 희석하고, 포화 NaHCO3 용액, 염수로 세척하고, 건조시켰다. 조 생성물을 톰슨 160 g 실리카 겔 카트리지에 충전시키고, 3 L에 걸쳐 40 - 100％ B로 용리하고, 이어서 1 L 동안 100％ B에서 유지하였다. (용매 B = EtOAc; 용매 A = 헥산). 실시예 DSTL-11, 단계 c (1.76 g 99％)를 단리하였다.
Figure pct00684
실시예 DSTL-11, 단계 d
Figure pct00685
2,4,6-트리클로로-1,3,5-트리아진 (시아누르산 클로라이드) (168 mg, 0.91 mmol)을 건조 DMF (4 mL) 중 실시예 DSTL-11, 단계 c (1R,3S,5R)-tert-부틸 3-(4-(4-브로모페닐)-5-카르바모일-1H-이미다졸-2-일)-2-아자비시클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트 (903 mg, 1.82 mmol)의 교반된 용액에 한번에 첨가하였다. 혼합물을 2시간 동안 교반한 다음, 16시간 동안 50℃로 가온하였다. 추가의 시아누르산 클로라이드 (20 mg)를 첨가하고, 혼합물을 추가로 24시간 동안 50℃에서 교반하고, EtOAc 및 물로 희석하고, 유기 층을 포화 NaHCO3 용액, 염수로 세척하고, 건조시켰다 (Na2SO4). 조 생성물을 톰슨 90 g 실리카 겔 카트리지에 충전시키고, 1.5 L에 걸쳐 25-100％ B로 용리하고, 이어서 500 mL 동안 100％ B에서 유지하였다. (용매 B = EtOAc; 용매 A = 헥산). 실시예 DSTL-11, 단계 d (346 g, 60％)를 황색빛-황갈색 발포체로서 단리하였다.
Figure pct00686
실시예 DSTL-11, 단계 e
Figure pct00687
벽이 두꺼운 스크류-마개 튜브에서 테트라키스(트리페닐)팔라듐 (45.8 mg, 0.04 mmol)을 DME (6 mL) 및 물 (1.5 mL) 중 실시예 DSTL-11, 단계 d (1R,3S,5R)-tert-부틸 3-(5-(4-브로모페닐)-4-시아노-1H-이미다졸-2-일)-2-아자비시클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트 (340 mg, 0.79 mmol), (1R,3S,5R)-tert-부틸 3-(4-(4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)페닐)-1H-이미다졸-2-일)-2-아자비시클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트 (393 mg, 0.871 mmol) 및 NaHCO3 (333 mg, 3.96 mmol)의 아르곤 퍼징된 현탁액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤으로 폭기하고, 밀봉하고, 예열된 오일조 (80℃)에 침지시키고, 14시간 동안 교반하였다. 혼합물을 EtOAc로 희석하고, 포화 NaHCO3 용액, 염수로 세척하고, (Na2SO4) 상에서 건조시켰다. 조 생성물을 톰슨 90 g 실리카 겔 카트리지에 충전시키고, 1.5 L에 걸쳐 35 - 100％ B로 용리하고, 이어서 0.5 L 동안 100％ B에서 유지하였다. (용매 B = EtOAc; 용매 A = 헥산). 실시예 DSTL-11, 단계 e (200 mg, 36％)를 밝은 황색 발포체로서 단리하였다.
소량의 샘플 (약 20 mg)을 정제용 HPLC (페노메넥스® 제미니(Gemini) 칼럼 (30 x 100 mm, 10u)을 사용하여 40 ml/분에서 25분에 걸쳐 0％B → 100％B의 구배, 여기서 용매 B = 95％ CH3CN - 5％ H2O - 10 mM NH4OAc 및 A = 5％ CH3CN - 95％ H2O - 10 mM NH4OAc)에 의한 추가 정제에 적용시켰다 (12.9 mg).
Figure pct00688
실시예 DSTL-11, 단계 f
Figure pct00689
실시예 DSTL-11, 단계 f의 생성물을 실시예 DSTL-1, 단계 h로부터의 절차에 기재된 바와 같이 보호기를 제거하여 수득하였다.
Figure pct00690
실시예 DSTL-11
실시예 DSTL-11을 실시예 GW2의 제조에 대해 기재된 절차에 따라 실시예 DSTL-11, 단계 f로부터 제조하였다. 정제용 HPLC (워터스 선파이어 칼럼 (30 x 100 mm, S5)을 사용하여 40 ml/분에서 30분에 걸쳐 0 - 50％B의 구배, B = 90％ CH3CN - 10％ H2O - 0.1％ TFA 및 A = 5％ CH3CN - 95％ H2O - 0.1％ TFA)에 의해 정제를 달성하였다. 실시예 DSTL-11 (21.5 mg, 31％)을 회백색 고체로서 단리하였다.
Figure pct00691
실시예 DSTL-12
Figure pct00692
실시예 DSTL-12를, Cap-51 대신에 (S)-2-(메톡시카르보닐아미노)-2-(테트라히드로-2H-피란-4-일)아세트산을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 GW2의 제조에 대해 기재된 절차에 따라 실시예 DSTL-11, 단계 f로부터 제조하였다. 정제용 HPLC (워터스 선파이어 칼럼 (30 x 100 mm, S5)을 사용하여 25분에 걸쳐 0 - 50％B의 구배 (40 ml/분에서), 여기서 용매 B = 90％ CH3CN - 10％ H2O - 0.1％ TFA 및 A = 5％ CH3CN - 95％ H2O - 0.1％ TFA)에 의해 정제를 달성하였다. 실시예 DSTL-12 (26.7 mg, 35％)를 회백색 고체로서 단리하였다.
Figure pct00693
실시예 JLR-1
Figure pct00694
실시예 JLR-1, 단계 a
Figure pct00695
실시예 JLR-1, 단계 a의 합성에 대해서는, 제법 특허 출원 WO 2009/020825를 참조한다.
실시예 JLR-1, 단계 b
Figure pct00696
AcOH 중 1M 브로민의 용액 (0.4 mL)을 아세트산 (15 mL) 중 실시예 JLR-1, 단계 a (250 mg, 0.40 mmol)의 용액에 첨가하고, 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM (100 mL) 위에 붓고, pH = 중성이 될 때까지 포화 NaHCO3 용액 및 고체 NaHCO3으로 처리하였다. 유기 상을 농축시키고, 진공 하에 건조시켰다. 반응은 출발 물질 : 모노 브로마이드 : 디브로마이드의 1:1:1 혼합물을 제공하였고, 이를 톰슨 SiO2 칼럼 (25 g)에 적용시켜 (DCM) 분리하였다. 500 mL에 걸쳐 구배 15 - 100％ B에 의해 용리하여 (바이오타지®) 실시예 JLR-1, 단계 b (180 mg)를 수득하였다.
Figure pct00697
실시예 JLR-1, 단계 c
Figure pct00698
디옥산 중 4N HCl의 용액 (4 mL)을 MeOH (4 mL) 중 실시예 JLR-1, 단계 b (38 mg, 0.054 mmol)에 첨가하고, 4시간 동안 교반하였다. 용매를 진공 하에 제거하고, 테트라 HCl 염을 고진공 하에 건조시켰다.
Figure pct00699
실시예 JLR-1
실시예 JLR-1을 실시예 GW2의 제조에 대해 기재된 절차에 따라 실시예 JLR-1, 단계 c로부터 제조하였다. 정제용 HPLC (페노메넥스® 루나 칼럼 (30 x 100 mm S10), 15-100％ B의 25분 구배 실행 (40 ml/분에서), 여기서 용매 B = 90％ MeOH - 10％ H2O - 0.1％ TFA 및 A = 5％ MeOH - 95％ H2O - 0.1％ TFA)에 의해 정제하였다.
Figure pct00700
실시예 JLR-2
Figure pct00701
실시예 JLR-2, 단계 a
Figure pct00702
아이오딘 (162 mg, 0.640 mmol)을 디옥산 (15 mL) 및 물 (15 mL) 중 실시예 JLR-1, 단계 a (400 mg, 0.640 mmol) 및 NaHCO3 (161 mg, 1.921 mmol)의 용액에 첨가하고, 반응물을 6시간 동안 교반하고, 10％ Na2S2O3 용액 (40 mL)으로 켄칭하고, EtOAc/THF (2:1)로 희석하였다. 유기 상을 농축시키고, 조 생성물을 톰슨 실리카 겔 칼럼 (40 g)에 적용시키고 (DCM), 1 L에 걸쳐 35-100％ B로 용리하여 (A/B DCM/EtOAc) 출발 물질, 디아이오다이드 (255 mg) 및 실시예 JLR-2, 단계 a (46 mg, 9％)의 혼합물을 수득하였다.
Figure pct00703
실시예 JLR-2, 단계 b
Figure pct00704
디옥산 중 4N HCl의 용액 (5 mL)을 MeOH (5 mL) 중 JLR-2, 단계 a (46 mg, 0.061 mmol)에 첨가하고, 4시간 동안 교반하였다. 용매를 진공 하에 제거하고, 테트라 HCl 염을 고진공 하에 건조시켰다.
Figure pct00705
실시예 JLR-2
실시예 JLR-2를 실시예 GW2의 제조에 대해 기재된 절차에 따라 실시예 JLR-2, 단계 b로부터 제조하였다. 반-정제용 HPLC (다이나맥스(Dynamax) 6A 반-정제용 C8 칼럼; 30분에 걸쳐 5％ - 95％ B (20 ml/분에서), 여기서 용매 B = 90％ CH3CN - 10％ H2O - 1％ NH4OAc 및 A = 5％ CH3CN - 95％ H2O - 1％ NH4OAc)에 의해 정제하였다.
Figure pct00706
실시예 JLR-3
Figure pct00707
실시예 JLR-3, 단계 a
Figure pct00708
NCS (175 mg, 1.310 mmol)를 DMF (10 mL) 중 실시예 DSTL-1, 단계 d (510 mg, 1.191 mmol)의 용액에 첨가하고, 50℃에서 18시간 동안 교반하였다. 용매를 고진공 하에 회전 증발에 의해 제거하고, 잔류물을 톰슨 실리카 겔 카트리지 (80 g)에 충전시켰다 (DCM). 750 mL에 걸쳐 25 - 100％ B의 구배 용리 (A/B Hex/EtOAc)를 수행하여 실시예 JLR-3, 단계 a (250 mg, 46％)를 수득하였다.
Figure pct00709
실시예 JLR-3, 단계 a.1
Figure pct00710
실시예 JLR-3, 단계 a.1을, 그의 데스메타노 유사체의 제조에 대해 특허 출원 WO 2008/021927에 기재된 절차에 따라 실시예 DSTL-1, 단계 d.1로부터 제조하였다.
실시예 JLR-3, 단계 b
Figure pct00711
실시예 JLR-3, 단계 b를 실시예 DSTL-1, 단계 g의 제조에 대해 기재된 절차에 따라 실시예 JLR-3, 단계 a 및 실시예 JLR-3, 단계 a.1로부터 제조하여, 실시예 JLR-3, 단계 b를 수득하였다.
Figure pct00712
실시예 JLR-3, 단계 c
Figure pct00713
실시예 JLR-3, 단계 c를 DSTL-3, 단계 a의 제조에 대해 기재된 절차에 따라 실시예 JLR-3, 단계 b로부터 제조하여, 실시예 JLR-3, 단계 c를 수득하였다.
Figure pct00714
실시예 JLR-3, 단계 d
Figure pct00715
실시예 JLR-3, 단계 d를 실시예 JLR-1, 단계 b로부터의 절차에 기재된 절차에 따라 실시예 JLR-3, 단계 c로부터 제조하였다.
Figure pct00716
실시예 JLR-3
실시예 JLR-3을 실시예 GW2의 제조에 대해 기재된 절차에 따라 실시예 JLR-3, 단계 d로부터 제조하였다. 정제용 HPLC (페노메넥스® 루나 칼럼 (30 x 100 mm S10), 15-100％ B의 18분 구배 실행 (40 ml/분에서), 여기서 용매 B = 90％ MeOH - 10％ H2O - 0.1％ TFA 및 A = 5％ MeOH - 95％ H2O - 0.1％ TFA)에 의해 정제하였다.
Figure pct00717
실시예 JLR-4
Figure pct00718
실시예 JLR-4, 단계 a
Figure pct00719
휘니그 염기 (1.2 g, 9 mmol)를 아세토니트릴 (75 mL) 중 2-브로모-1-(4-브로모페닐)에타논 (2.5 g, 8.99 mmol) 및 (2S,5S)-1-(tert-부톡시카르보닐)-5-메틸피롤리딘-2-카르복실산 (1.9 g, 8.29 mmol)의 용액에 첨가하고, 24℃에서 6시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 EtOAc에 녹이고, 물로 세척하였다. 농축시켜 백색 고체를 수득하고, 이를 크실렌 (90 mL)에 녹였다. 아세트산암모늄 (4.23 g, 70.4 mmol)을 첨가하고, 용액을 스크류-마개 압력 용기에서 3.5시간 동안 135℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc (400 mL)로 희석하고, 포화 NaHCO3 용액으로 세척하고, 농축시켰다. 조 생성물을 80g 톰슨 실리카 겔 카트리지에 충전시키고 (DCM), 1 L에 걸쳐 15％ → 100％ B의 구배 용리 (A/B Hex/EtOAc)를 수행하여 실시예 JLR-4, 단계 a (수율은 결정되지 않음)를 수득하였다.
Figure pct00720
[주: 출발 카르복실산의 합성에 대해서는, 미국 특허 출원 2009/0068140을 참조한다].
실시예 JLR-4, 단계 b
Figure pct00721
NCS (161 mg, 1.21 mmol)를 DMF (10 mL) 중 실시예 JLR-4, 단계 a (700 mg, 1.7 mmol)의 용액에 첨가하고, 50℃에서 18시간 동안 교반하였다. 추가의 NCS (50 mg)를 첨가하고, 6시간 동안 반응을 계속한 후, 용매를 질소 퍼징에 의해 제거하였다. 조 생성물을 40g 톰슨 실리카 겔 카트리지에 충전시키고 (DCM), 750 mL에 걸쳐 15％ → 100％ B의 구배 용리(A/B Hex/EtOAc)를 수행하여 실시예 JLR-4, 단계 b (580 mg, 70％)를 수득하였다.
Figure pct00722
실시예 JLR-4, 단계 c
Figure pct00723
EEDQ (1.67 g, 6.75 mmol)를 DCM (100 mL) 중 실시예 DSTL-1, 단계 c (1.6 g, 6.75 mmol) 및 (2S,5S)-1-(tert-부톡시카르보닐)-5-메틸피롤리딘-2-카르복실산 (1.55 g, 6.75 mmol)의 용액에 첨가하고, 6시간 동안 교반하였다. (주: 디아닐린은 완전히 가용성이지 않았다). 반응 혼합물을 DCM (1 부피)으로 희석하고, 반 포화 NaHCO3 용액으로 세척하였다. 농축시켜 고체 (2.5 g)를 수득하였다.
Figure pct00724
조 고체 (2.5 g, 5.58 mmol)를 AcOH (200 mL)에 녹이고, 60℃에서 18시간 동안 교반하였다. 고진공 하에 농축시켜 용매를 제거하였다. 잔류물을 DCM에 녹이고, 포화 NaHCO3 용액으로 세척하고, 농축시켰다. 잔류물을 80 g 톰슨 실리카 겔 카트리지에 충전시키고 (DCM), 750 mL에 걸쳐 15％ → 100％ B의 구배 용리 (A/B Hex/EtOAc)를 수행하여 실시예 JLR-4, 단계 c (2.6 g)를 수득하였다.
Figure pct00725
실시예 JLR-4, 단계 d
Figure pct00726
실시예 JLR-4, 단계 d를 실시예 DSTL-1, 단계 f의 제조에 대해 기재된 절차에 따라 실시예 JLR-4, 단계 c로부터 제조하였다.
Figure pct00727
실시예 JLR-4, 단계 e
Figure pct00728
실시예 JLR-4, 단계 e를 DSTL-1, 단계 g의 제조에 대해 기재된 절차에 따라 실시예 JLR-4, 단계 d 및 실시예 JLR-4, 단계 b로부터 제조하여, 실시예 JLR-4, 단계 e를 수득하였다.
Figure pct00729
실시예 JLR-4, 단계 f
Figure pct00730
실시예 JLR-4, 단계 f를 실시예 JLR-1, 단계 b의 제조에 대해 기재된 절차에 따라 실시예 JLR-4, 단계 e로부터 제조하여, 실시예 JLR-4, 단계 f를 수득하였다.
Figure pct00731
실시예 JLR-4
실시예 JLR-4를 실시예 GW2의 제조에 대해 기재된 절차에 따라 실시예 JLR-4, 단계 f로부터 제조하였다. 정제용 HPLC (루나 악시아 칼럼 (30 x 100 mm C18), 15-100％ B의 25분 구배 실행 (40 ml/분에서), 여기서 용매 B = 90％ MeOH - 10％ H2O - 0.1％ TFA 및 A = 5％ MeOH - 95％ H2O - 0.1％ TFA)에 의해 정제하였다.
Figure pct00732
실시예 JLR-5
Figure pct00733
실시예 JLR-5를, (S)-2-(메톡시카르보닐아미노)-2-(테트라히드로-2H-피란-4-일)아세트산을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 GW2의 제조에 대해 기재된 절차에 따라 실시예 JLR-4, 단계 f로부터 제조하였다. 정제용 HPLC (루나 악시아 칼럼 (30 x 100 mm C18), 15-100％ B의 25분 구배 실행 (40 ml/분에서), 여기서 용매 B = 90％ MeOH - 10％ H2O - 0.1％ TFA 및 A = 5％ MeOH - 95％ H2O - 0.1％ TFA)에 의해 정제하였다.
Figure pct00734
실시예 ZY1
Figure pct00735
실시예 ZY1, 단계 a
Figure pct00736
HATU (151 mg, 0.40 mmol)를 DMF (1.5 mL) 및 DIPEA (0.25 mL, 1.4 mmol) 중 4,4'-비스(2-((1R,3S,5R)-2-아자비시클로[3.1.0]헥산-3-일)-1H-이미다졸-4-일)비페닐 (실시예 1e)의 HCl 염 (107 mg, 0.18 mmol) 및 (S)-2-(메톡시카르보닐아미노)-2-((S)-테트라히드로-2H-피란-3-일)아세트산 (Cap-177a) (86 mg, 0.40 mmol)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 MeOH로 희석하고, 정제용 HPLC (0.1％ TFA 완충제를 함유하는 H2O-MeOH)에 의해 정제하여 디메틸 (S,1S,1'S)-2,2'-((1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(4,4'-(비페닐-4,4'-디일)비스(1H-이미다졸-4,2-디일))비스(2-아자비시클로[3.1.0]헥산-3,2-디일))비스(2-옥소-1-((S)-테트라히드로-2H-피란-3-일)에탄-2,1-디일)디카르바메이트의 TFA 염 (148.5 mg)을 밝은 황색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00737
(칼럼: 페노메넥스® 루나 3.0 x 50 mm S10. 용매 A = 90％ 물 : 10％ 메탄올 : 0.1％ TFA 용매. 용매 B = 10％ 물 : 90％ 메탄올 : 0.1％ TFA. 유량 = 4 mL/분. 시작 ％B = 0. 최종 ％B = 100. 구배 시간 = 3분. 파장 = 220).
Figure pct00738
실시예 ZY1
NCS (8.2 mg, 0.061 mmol)를 DMF (1 mL) 중 디메틸 (S,1S,1'S)-2,2'-((1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(4,4'-(비페닐-4,4'-디일)비스(1H-이미다졸-4,2-디일))비스(2-아자비시클로[3.1.0]헥산-3,2-디일))비스(2-옥소-1-((S)-테트라히드로-2H-피란-3-일)에탄-2,1-디일)디카르바메이트 (실시예 ZY1, 단계 a)의 TFA 염 (33 mg, 0.031 mmol)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 16시간 동안 50℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 MeOH로 희석하고, 여과하고, 정제용 HPLC (0.1％ TFA 완충제를 함유하는 H2O-MeOH)에 의해 정제하여 디메틸 (S,1S,1'S)-2,2'-((1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(4,4'-(비페닐-4,4'-디일)비스(5-클로로-1H-이미다졸-4,2-디일))비스(2-아자비시클로[3.1.0]헥산-3,2-디일))비스(2-옥소-1-((S)-테트라히드로-2H-피란-3-일)에탄-2,1-디일)디카르바메이트 (실시예 ZY1)의 TFA 염 (25 mg)을 백색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00739
(칼럼: 페노메넥스® 루나 3.0 x 50 mm S10. 용매 A = 95％ 물 / 5％ 메탄올 / 10 mM 아세트산암모늄. 용매 B = 5％ 물 / 95％ 메탄올 / 10 mM 아세트산암모늄. 유량 = 4 mL/분. 시작 ％B = 0. 최종 ％B = 100. 구배 시간 = 2분. 파장 = 220).
Figure pct00740
실시예 ZY2
Figure pct00741
실시예 ZY2, 단계 a
Figure pct00742
HATU (140 mg, 0.37 mmol)를 DMF (1.5 mL) 및 DIPEA (0.23 mL, 1.3 mmol) 중 4,4'-비스(2-((1R,3S,5R)-2-아자비시클로[3.1.0]헥산-3-일)-1H-이미다졸-4-일)비페닐 (실시예 1e)의 HCl 염 (100 mg, 0.17 mmol) 및 (S)-2-(메톡시카르보닐아미노)-2-((R)-테트라히드로-2H-피란-3-일)아세트산 (Cap-117b) (80 mg, 0.37 mmol)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 3시간 동안 실온에서 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 MeOH로 희석하고, 정제용 HPLC (0.1％ TFA 완충제를 함유하는 H2O-MeOH)에 의해 정제하여 디메틸 (R,1S,1'S)-2,2'-((1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(4,4'-(비페닐-4,4'-디일)비스(1H-이미다졸-4,2-디일))비스(2-아자비시클로[3.1.0]헥산-3,2-디일))비스(2-옥소-1-((R)-테트라히드로-2H-피란-3-일)에탄-2,1-디일)디카르바메이트 (실시예 ZY2, 단계 a)의 TFA 염 (76.2 mg)을 백색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00743
(칼럼: 페노메넥스® 루나 3.0 x 50 mm S10. 용매 A = 90％ 물 : 10％ 메탄올 : 0.1％ TFA. 용매 B = 10％ 물 : 90％ 메탄올 : 0.1％ TFA. 유량 = 4 mL/분. 시작 ％B = 0. 최종 ％B = 100. 구배 시간 = 3분. 파장 = 220).
Figure pct00744
실시예 ZY2
NCS (5.2 mg, 0.039 mmol)를 DMF (1 mL) 중 디메틸 (R,1S,1'S)-2,2'-((1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(4,4'-(비페닐-4,4'-디일)비스(1H-이미다졸-4,2-디일))비스(2-아자비시클로[3.1.0]헥산-3,2-디일))비스(2-옥소-1-((R)-테트라히드로-2H-피란-3-일)에탄-2,1-디일)디카르바메이트 (실시예 ZY2, 단계 a)의 TFA 염 (21 mg, 0.020 mmol)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 16시간 동안 50℃에서 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 MeOH로 희석하고, 여과하고, 정제용 HPLC (0.1％ TFA 완충제를 함유하는 H2O-MeOH)에 의해 정제하여 디메틸 (R,1S,1'S)-2,2'-((1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(4,4'-(비페닐-4,4'-디일)비스(5-클로로-1H-이미다졸-4,2-디일))비스(2-아자비시클로[3.1.0]헥산-3,2-디일))비스(2-옥소-1-((R)-테트라히드로-2H-피란-3-일)에탄-2,1-디일)디카르바메이트 (실시예 ZY2)의 TFA 염 (10.8 mg)을 백색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00745
(칼럼: 페노메넥스® 루나 3.0 x 50 mm S10. 용매 A = 95％ 물 / 5％ 메탄올 / 10 mM 아세트산암모늄. 용매 B = 5％ 물 / 95％ 메탄올 / 10 mM 아세트산암모늄. 유량 = 4 mL/분. 시작 ％B = 0. 최종 ％B = 100. 구배 시간 = 2분. 파장 = 220).
Figure pct00746
실시예 ZY3
Figure pct00747
실시예 ZY3, 단계 a
Figure pct00748
HATU (82 mg, 0.22 mmol)를 DMF (1 mL) 및 DIPEA (0.14 mL, 0.79 mmol) 중 4,4'-비스(2-((1R,3S,5R)-2-아자비시클로[3.1.0]헥산-3-일)-1H-이미다졸-4-일)비페닐 (실시예 1e)의 HCl 염 (58.3 mg, 0.098 mmol) 및 (R)-2-(메톡시카르보닐아미노)-2-((R)-테트라히드로-2H-피란-3-일)아세트산 (Cap 117c) (49 mg, 0.23 mmol)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 3시간 동안 실온에서 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 MeOH로 희석하고, 여과하고, 정제용 HPLC (0.1％ TFA 완충제를 함유하는 H2O-MeOH)에 의해 정제하여 디메틸 (R,1R,1'R)-2,2'-((1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(4,4'-(비페닐-4,4'-디일)비스(1H-이미다졸-4,2-디일))비스(2-아자비시클로[3.1.0]헥산-3,2-디일))비스(2-옥소-1-((R)-테트라히드로-2H-피란-3-일)에탄-2,1-디일)디카르바메이트 (실시예 ZY3, 단계 a)의 TFA 염 (79.8 mg)을 백색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00749
(칼럼: 페노메넥스® 루나 3.0 x 50 mm S10. 용매 A = 90％ 물 : 10％ 메탄올 : 0.1％ TFA. 용매 B = 10％ 물 : 90％ 메탄올 : 0.1％ TFA. 유량 = 4 mL/분. 시작 ％B = 0. 최종 ％B = 100. 구배 시간 = 3분. 파장 = 220).
실시예 ZY3
NCS (6.7 mg, 0.050 mmol)를 DMF (1 mL) 중 디메틸 (R,1R,1'R)-2,2'-((1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(4,4'-(비페닐-4,4'-디일)비스(1H-이미다졸-4,2-디일))비스(2-아자비시클로[3.1.0]헥산-3,2-디일))비스(2-옥소-1-((R)-테트라히드로-2H-피란-3-일)에탄-2,1-디일)디카르바메이트 (실시예 ZY3, 단계 a)의 TFA 염 (27 mg, 0.025 mmol)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 16시간 동안 50℃에서 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 MeOH로 희석하고, 여과하고, 정제용 HPLC (0.1％ TFA 완충제를 함유하는 H2O-MeOH)에 의해 정제하여 디메틸 (R,1R,1'R)-2,2'-((1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(4,4'-(비페닐-4,4'-디일)비스(5-클로로-1H-이미다졸-4,2-디일))비스(2-아자비시클로[3.1.0]헥산-3,2-디일))비스(2-옥소-1-((R)-테트라히드로-2H-피란-3-일)에탄-2,1-디일)디카르바메이트 (실시예 ZY3)의 TFA 염 (15.8 mg)을 백색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00750
(칼럼: 페노메넥스® 루나 3.0 x 50 mm S10. 용매 A = 95％ 물 / 5％ 메탄올 / 10 mM 아세트산암모늄. 용매 B = 5％ 물 / 95％ 메탄올 / 10 mM 아세트산암모늄. 유량 = 4 mL/분. 시작 ％B = 0. 최종 ％B = 100. 구배 시간 = 2분. 파장 = 220).
실시예 ZY4
Figure pct00751
실시예 ZY4, 단계 a
Figure pct00752
HATU (75 mg, 0.20 mmol)를 DMF (1 mL) 및 DIPEA (0.13 mL, 0.72 mmol) 중 4,4'-비스(2-((1R,3S,5R)-2-아자비시클로[3.1.0]헥산-3-일)-1H-이미다졸-4-일)비페닐 (실시예 1e)의 HCl 염 (53.5 mg, 0.090 mmol) 및 (R)-2-(메톡시카르보닐아미노)-2-((S)-테트라히드로-2H-피란-3-일)아세트산 (Cap-117d) (45 mg, 0.21 mmol)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 3시간 동안 실온에서 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 MeOH로 희석하고, 여과하고, 정제용 HPLC (0.1％ TFA 완충제를 함유하는 H2O-MeOH)에 의해 정제하여 디메틸 (S,1R,1'R)-2,2'-((1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(4,4'-(비페닐-4,4'-디일)비스(1H-이미다졸-4,2-디일))비스(2-아자비시클로[3.1.0]헥산-3,2-디일))비스(2-옥소-1-((S)-테트라히드로-2H-피란-3-일)에탄-2,1-디일)디카르바메이트 (실시예 ZY4, 단계 a)의 TFA 염 (78.5 mg)을 백색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00753
(칼럼: 페노메넥스® 루나 3.0 x 50 mm S10. 용매 A = 90％ 물 : 10％ 메탄올 : 0.1％ TFA. 용매 B = 10％ 물 : 90％ 메탄올 : 0.1％ TFA. 유량 = 4 mL/분. 시작 ％B = 0. 최종 ％B = 100. 구배 시간 = 3분. 파장 = 220).
실시예 ZY4
NCS (9.2 mg, 0.069 mmol)를 DMF (1 mL) 중 디메틸 (S,1R,1'R)-2,2'-((1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(4,4'-(비페닐-4,4'-디일)비스(1H-이미다졸-4,2-디일))비스(2-아자비시클로[3.1.0]헥산-3,2-디일))비스(2-옥소-1-((S)-테트라히드로-2H-피란-3-일)에탄-2,1-디일)디카르바메이트 (실시예 ZY4, 단계 a)의 TFA 염 (37 mg, 0.034 mmol)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 16시간 동안 50℃에서 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 MeOH로 희석하고, 여과하고, 정제용 HPLC (0.1％ TFA 완충제를 함유하는 H2O-MeOH)에 의해 정제하여 디메틸 (S,1R,1'R)-2,2'-((1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(4,4'-(비페닐-4,4'-디일)비스(5-클로로-1H-이미다졸-4,2-디일))비스(2-아자비시클로[3.1.0]헥산-3,2-디일))비스(2-옥소-1-((S)-테트라히드로-2H-피란-3-일)에탄-2,1-디일)디카르바메이트 (실시예 ZY4)의 TFA 염 (25 mg)을 백색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00754
(칼럼: 페노메넥스® 루나 3.0 x 50 mm S10. 용매 A = 95％ 물 / 5％ 메탄올 / 10 mM 아세트산암모늄. 용매 B = 5％ 물 / 95％ 메탄올 / 10 mM 아세트산암모늄. 유량 = 4 mL/분. 시작 ％B = 0. 최종 ％B = 100. 구배 시간 = 2분. 파장 = 220).
실시예 ZY5
Figure pct00755
NCS (5.3 mg, 0.039 mmol)를 DMF (1 mL) 중 디메틸 (S,1S,1'S)-2,2'-((1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(4,4'-(비페닐-4,4'-디일)비스(1H-이미다졸-4,2-디일))비스(2-아자비시클로[3.1.0]헥산-3,2-디일))비스(2-옥소-1-((S)-테트라히드로-2H-피란-3-일)에탄-2,1-디일)디카르바메이트 (실시예 ZY1, 단계 a)의 TFA 염 (42.4 mg, 0.039 mmol)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 16시간 동안 50℃에서 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 MeOH로 희석하고, 여과하고, 정제용 HPLC (0.1％ TFA 완충제를 함유하는 H2O-MeOH)에 의해 정제하여 실시예 ZY5를 TFA 염 (11.7 mg, 백색 고체)으로서 수득하였다.
Figure pct00756
(칼럼: 페노메넥스® 루나 3.0 x 50 mm S10. 용매 A = 90％ 물 : 10％ 메탄올 : 0.1％ TFA. 용매 B = 10％ 물 : 90％ 메탄올 : 0.1％ TFA. 유량 = 4 mL/분. 시작 ％B = 0. 최종 ％B = 100. 구배 시간 = 3분. 파장 = 220).
Figure pct00757
실시예 ZY6
Figure pct00758
NCS (1.1 mg, 8.4 μmol)를 DMF (1 mL) 중 디메틸 (R,1S,1'S)-2,2'-((1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(4,4'-(비페닐-4,4'-디일)비스(1H-이미다졸-4,2-디일))비스(2-아자비시클로[3.1.0]헥산-3,2-디일))비스(2-옥소-1-((R)-테트라히드로-2H-피란-3-일)에탄-2,1-디일)디카르바메이트 (실시예 ZY2, 단계 a)의 TFA 염 (8.1 mg, 8.4 μmol)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 16시간 동안 50℃에서 교반하였다. 이어서, 반응물을 MeOH로 희석하고, 여과하고, 정제용 HPLC (0.1％ TFA 완충제를 함유하는 H2O-MeOH)에 의해 정제하여 실시예 ZY6의 TFA 염 (2.2 mg)을 백색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00759
(칼럼: 페노메넥스® 루나 3.0 x 50 mm S10. 용매 A = 90％ 물 : 10％ 메탄올 : 0.1％ TFA. 용매 B = 10％ 물 : 90％ 메탄올 : 0.1％ TFA. 유량 = 4 mL/분. 시작 ％B = 0. 최종 ％B = 100. 구배 시간 = 3분. 파장 = 220).
Figure pct00760
실시예 ZY7
Figure pct00761
실시예 ZY7, 단계 a
Figure pct00762
HATU (95 mg, 0.25 mmol)를 DMF (1 mL) 및 DIPEA (0.16 mL, 0.91 mmol) 중 4,4'-비스(2-((1R,3S,5R)-2-아자비시클로[3.1.0]헥산-3-일)-1H-이미다졸-4-일)비페닐 (실시예 1e)의 HCl 염 (67.6 mg, 0.114 mmol) 및 (S)-4-메톡시-2-(메톡시카르보닐아미노)부탄산 (실시예 ZY7, 단계 a) (50 mg, 0.26 mmol)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 3시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 MeOH로 희석하고, 여과하고, 정제용 HPLC (0.1％ TFA 완충제를 함유하는 H2O-MeOH)에 의해 정제하여 디메틸 (2S,2'S)-1,1'-((1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(4,4'-(비페닐-4,4'-디일)비스(1H-이미다졸-4,2-디일))비스(2-아자비시클로[3.1.0]헥산-3,2-디일))비스(4-메톡시-1-옥소부탄-2,1-디일)디카르바메이트 (실시예 ZY7, 단계 a)의 TFA 염 (96.4 mg)을 백색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00763
(칼럼: 페노메넥스® 루나 3.0 x 50 mm S10. 용매 A = 90％ 물 : 10％ 메탄올 : 0.1％ TFA. 용매 B = 10％ 물 : 90％ 메탄올 : 0.1％ TFA. 유량 = 4 mL/분. 시작 ％B = 0. 최종 ％B = 100. 구배 시간 = 3분. 파장 = 220).
Figure pct00764
실시예 ZY7
NCS (9.7 mg, 0.073 mmol)를 DMF (1 mL) 중 디메틸 (2S,2'S)-1,1'-((1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(4,4'-(비페닐-4,4'-디일)비스(1H-이미다졸-4,2-디일))비스(2-아자비시클로[3.1.0]헥산-3,2-디일))비스(4-메톡시-1-옥소부탄-2,1-디일)디카르바메이트 (실시예 ZY7, 단계 a)의 TFA 염 (29 mg, 0.036 mmol)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 16시간 동안 50℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 MeOH로 희석하고, 여과하고, 정제용 HPLC (0.1％ TFA 완충제를 함유하는 H2O-MeOH)에 의해 정제하여 디메틸 (2S,2'S)-1,1'-((1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(4,4'-(비페닐-4,4'-디일)비스(5-클로로-1H-이미다졸-4,2-디일))비스(2-아자비시클로[3.1.0]헥산-3,2-디일))비스(4-메톡시-1-옥소부탄-2,1-디일)디카르바메이트 (실시예 ZY7)의 TFA 염 (7.9 mg)을 백색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00765
(칼럼: 페노메넥스® 루나 3.0 x 50 mm S10. 용매 A = 90％ 물 : 10％ 메탄올 : 0.1％ TFA. 용매 B = 10％ 물 : 90％ 메탄올 : 0.1％ TFA. 유량 = 4 mL/분. 시작 ％B = 0. 최종 ％B = 100. 구배 시간 = 3분. 파장 = 220).
Figure pct00766
실시예 ZY8
Figure pct00767
NCS (5.6 mg, 0.042 mmol)를 DMF (1 mL) 중 디메틸 (2S,2'S)-1,1'-((1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(4,4'-(비페닐-4,4'-디일)비스(1H-이미다졸-4,2-디일))비스(2-아자비시클로[3.1.0]헥산-3,2-디일))비스(4-메톡시-1-옥소부탄-2,1-디일)디카르바메이트 (실시예 ZY7, 단계 b)의 TFA 염 (33.3 mg, 0.042 mmol)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 16시간 동안 50℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 MeOH로 희석하고, 여과하고, 정제용 HPLC (0.1％ TFA 완충제를 함유하는 H2O-MeOH)에 의해 정제하여 실시예 ZY8의 TFA 염 (9.4 mg)을 백색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00768
(칼럼: 페노메넥스® 루나 3.0 x 50 mm S10. 용매 A = 90％ 물 : 10％ 메탄올 : 0.1％ TFA. 용매 B = 10％ 물 : 90％ 메탄올 : 0.1％ TFA. 유량 = 4 mL/분. 시작 ％B = 0. 최종 ％B = 100. 구배 시간 = 3분. 파장 = 220).
Figure pct00769
생물학적 활성
본 개시내용에서는 HCV 레플리콘 검정을 이용하였고, 이것은 공동 소유의 PCT/US2006/022197 및 문헌 [O'Boyle et. al., Antimicrob. Agents Chemother., 49(4):1346-1353 (Apr. 2005)]에 기재된 바와 같이 제조하여 수행하고 검증하였다. 루시페라제 리포터를 혼입시키는 검정 방법을 또한 기재된 바와 같이 (Apath.com) 이용하였다.
HCV-neo 레플리콘 세포, 및 NS5A 영역에 내성 치환을 함유하는 레플리콘 세포를 현재 기재된 화합물 패밀리를 시험하는 데 사용하였다. 화합물은 돌연변이를 함유하는 세포 상에서 야생형 세포에 대한 상응하는 억제 효능에 비해 다양한 정도의 감소된 억제 활성을 갖는 것으로 측정되었다. 따라서, 본 개시내용의 화합물은 HCV NS5A 단백질의 기능을 억제하는 데 효과적일 수 있고, 출원 PCT/US2006/022197 및 공동 소유의 WO 04/014852에 이전에 기재된 바와 같이 조합시에 효과적인 것으로 이해된다. 본 개시내용의 화합물이 다중 유전자형의 HCV를 억제할 수 있음을 이해하여야 한다. 하기 표 2는 HCV 1b 유전자형에 대한 본 개시내용의 대표적인 화합물의 EC50 (유효 50％ 억제 농도) 값을 보여준다. 한 실시양태에서, 본 개시내용의 화합물은 1a, 1b, 2a, 2b, 3a, 4a 및 5a 유전자형에 대해 억제성이다. HCV 1b에 대한 EC50 값은 하기와 같다. HCV 1b에 대한 EC50 값은 하기와 같다: A = 0.2 pM - <1 pM; B = 1 pM - <10 pM; 및 C = 10 pM - <100 pM; 및 D = 100 pM - 0.15 μM.
본 개시내용의 화합물은 NS5A 억제 이외의 메카니즘 또는 NS5A 억제와 다른 메카니즘에 의해 HCV를 억제할 수 있다. 한 실시양태에서 본 개시내용의 화합물은 HCV 레플리콘을 억제하고, 또 다른 실시양태에서 본 개시내용의 화합물은 NS5A를 억제한다.
<표 2>
Figure pct00770
Figure pct00771
Figure pct00772
Figure pct00773
본 개시내용이 상기 예시적인 실시예로 제한되지 않고, 이것이 그의 본질적 속성에서 벗어나지 않으면서 다른 특정 형태로 구현될 수 있음이 당업자에게 분명할 것이다. 따라서, 예시로서 모든 측면에서 고려되지만 제한되지는 않는 실시예, 상기 실시예 이외의 첨부된 특허청구범위에서의 언급, 및 특허청구범위와 동등한 의미 및 범위 내에 있는 모든 변형법이 그 안에 포함되는 것으로 의도되는 것이 바람직하다.

Claims (20)

  1. 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
    <화학식 I>
    Figure pct00774

    상기 식에서,
    n은 0, 1 또는 2이고;
    X는 수소, 알케닐, 시아노, 시클로알킬, (시클로알킬)알킬, 할로 및 헤테로시클릴로부터 선택되고;
    R1은 수소 및 할로로부터 선택되고;
    R2는 수소, 알케닐, 시아노, 시클로알킬, (시클로알킬)알킬, 할로 및 헤테로시클릴로부터 선택되거나; 또는
    R1 및 R2는 이들이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께, 1개의 할로 기로 임의로 치환된 6-원 방향족 고리를 형성하고;
    단, X 및 R2 중 적어도 1개는 알케닐, 시아노, 시클로알킬, (시클로알킬)알킬, 할로 및 헤테로시클릴로부터 선택되고;
    각각의 R3은 알킬이고, 여기서 알킬은 인접한 탄소 원자와 함께 융합된 3- 또는 4-원 고리, 또는 이것이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께 스피로시클릭 3- 또는 4-원 고리를 임의로 형성할 수 있고; 여기서 융합된 고리 및 스피로시클릭 고리는 1 또는 2개의 알킬 기로 임의로 치환되고;
    각각의 R4는 독립적으로 수소 및 -C(O)R5로부터 선택되고;
    각각의 R5는 독립적으로 알콕시, 알킬, 아릴알콕시, 아릴알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 헤테로시클릴알킬, (NRcRd)알케닐 및 (NRcRd)알킬로부터 선택된다.
  2. 제1항에 있어서, 각각의 R5가 독립적으로 알콕시, 헤테로시클릴 및 (NRcRd)알킬로부터 선택되는 것인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  3. 제1항에 있어서, X가 할로인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  4. 제3항에 있어서, R2가 할로인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  5. 제1항에 있어서, R1 및 R2가 이들이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께, 1개의 할로 기로 임의로 치환된 6-원 방향족 고리를 형성하는 것인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  6. 제1항에 있어서, X가 수소인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  7. Figure pct00775

    Figure pct00776

    Figure pct00777

    Figure pct00778

    Figure pct00779

    Figure pct00780

    Figure pct00781

    Figure pct00782

    Figure pct00783

    Figure pct00784

    Figure pct00785

    Figure pct00786

    Figure pct00787

    Figure pct00788

    Figure pct00789

    Figure pct00790

    Figure pct00791

    Figure pct00792

    Figure pct00793

    Figure pct00794

    로부터 선택되는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  8. Figure pct00795

    Figure pct00796

    로부터 선택되는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  9. 제1항의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 조성물.
  10. 제9항에 있어서, 항-HCV 활성을 갖는 하나 이상의 추가의 화합물을 추가로 포함하는 조성물.
  11. 제10항에 있어서, 추가의 화합물 중 적어도 하나가 인터페론 또는 리바비린인 조성물.
  12. 제11항에 있어서, 인터페론이 인터페론 알파 2B, PEG화 인터페론 알파, 컨센서스 인터페론, 인터페론 알파 2A 및 림프모구성 인터페론 타우로부터 선택되는 것인 조성물.
  13. 제10항에 있어서, 추가의 화합물 중 적어도 하나가 인터류킨 2, 인터류킨 6, 인터류킨 12, 제1형 헬퍼 T 세포 반응의 발생을 증진시키는 화합물, 간섭 RNA, 안티-센스 RNA, 이미퀴모드, 리바비린, 이노신 5'-모노포스페이트 데히드로게나제 억제제, 아만타딘 및 리만타딘으로부터 선택되는 것인 조성물.
  14. 제10항에 있어서, 추가의 화합물 중 적어도 하나가 HCV 감염의 치료를 위해 HCV 메탈로프로테아제, HCV 세린 프로테아제, HCV 폴리머라제, HCV 헬리카제, HCV NS4B 단백질, HCV 진입, HCV 조립, HCV 방출, HCV NS5A 단백질 및 IMPDH로부터 선택된 표적의 기능을 억제하는 데 효과적인 것인 조성물.
  15. 환자에게 치료 유효량의 제1항의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 환자에서의 HCV 감염의 치료 방법.
  16. 제15항에 있어서, 항-HCV 활성을 갖는 하나 이상의 추가의 화합물을 제1항의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 투여 전에, 후에 또는 그와 동시에 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  17. 제16항에 있어서, 추가의 화합물 중 적어도 하나가 인터페론 또는 리바비린인 방법.
  18. 제17항에 있어서, 인터페론이 인터페론 알파 2B, PEG화 인터페론 알파, 컨센서스 인터페론, 인터페론 알파 2A 및 림프모구성 인터페론 타우로부터 선택되는 것인 방법.
  19. 제16항에 있어서, 추가의 화합물 중 적어도 하나가 인터류킨 2, 인터류킨 6, 인터류킨 12, 제1형 헬퍼 T 세포 반응의 발생을 증진시키는 화합물, 간섭 RNA, 안티-센스 RNA, 이미퀴모드, 리바비린, 이노신 5'-모노포스페이트 데히드로게나제 억제제, 아만타딘 및 리만타딘으로부터 선택되는 것인 방법.
  20. 제16항에 있어서, 추가의 화합물 중 적어도 하나가 HCV 감염의 치료를 위해 HCV 메탈로프로테아제, HCV 세린 프로테아제, HCV 폴리머라제, HCV 헬리카제, HCV NS4B 단백질, HCV 진입, HCV 조립, HCV 방출, HCV NS5A 단백질 및 IMPDH로부터 선택된 표적의 기능을 억제하는 데 효과적인 것인 방법.
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