CN102391988A - 草甘膦耐受性甜菜 - Google Patents

草甘膦耐受性甜菜 Download PDF

Info

Publication number
CN102391988A
CN102391988A CN2011100745010A CN201110074501A CN102391988A CN 102391988 A CN102391988 A CN 102391988A CN 2011100745010 A CN2011100745010 A CN 2011100745010A CN 201110074501 A CN201110074501 A CN 201110074501A CN 102391988 A CN102391988 A CN 102391988A
Authority
CN
China
Prior art keywords
primer
nucleotide sequence
beet plant
dna
seed
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN2011100745010A
Other languages
English (en)
Inventor
J·克劳斯
E·绍尔布雷
R·内尔斯
A·罗克
R·延森
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
KWS SAAT SE and Co KGaA
Original Assignee
KWS SAAT SE and Co KGaA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from US10/376,763 external-priority patent/US7335816B2/en
Application filed by KWS SAAT SE and Co KGaA filed Critical KWS SAAT SE and Co KGaA
Publication of CN102391988A publication Critical patent/CN102391988A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
    • C12N15/8274—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for herbicide resistance
    • C12N15/8275—Glyphosate
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
    • C12Q1/6895—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for plants, fungi or algae
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/16—Primer sets for multiplex assays

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Pretreatment Of Seeds And Plants (AREA)
  • Cultivation Of Plants (AREA)

Abstract

本发明涉及草甘膦耐受性甜菜。本发明涉及草甘膦耐受性甜菜植株，植株材料和种子。本发明的目标是制备转基因甜菜植株的事件，所述甜菜植株具有对草甘膦的高度耐受性并且保持在生长，产量，品质和病原抗性等方面的其他重要农学性质。

Description

草甘膦耐受性甜菜
本发明是申请号为200480004680.9、国际申请日为2004年2月17日、进入中国国家阶段的申请日为2005年8月19日的发明专利申请的分案申请。 
技术领域
本发明涉及草甘膦耐受性甜菜植株，植物材料和种子。 
背景技术
甜菜(Beta vulgaris)在许多国家中被作为商业农作物而栽种，其总产量超过240百万公吨。 
N-(膦酰基甲基)甘氨酸(通常被称为草甘膦(Glyphosat))是一种广谱除草剂，由于其高效，具有生物可降解性和对动物与人类的低毒性故被广泛使用。草甘膦抑制莽草酸途径，该途径导致包括氨基酸类和维生素类的芳香化合物的合成。具体而言，草甘膦通过抑制酶5-烯醇丙酮酰-3-磷酸基莽草酸合酶(EPSP合酶或EPSPS)，抑制磷酸烯醇丙酮酸和3-磷酸基莽草酸反应转变为5-烯醇丙酮酰-3-磷酸基莽草酸。当用草甘膦处理常规植物的时候，植物不能产生生长和生存所需的芳香族氨基酸(例如苯丙氨酸和酪氨酸)。EPSPS存在于所有植物，细菌，和真菌中。它不存在于不能自身合成芳香族氨基酸的动物中。因为芳香族氨基酸的生物合成途径不存在于哺乳动物、禽类或水生生命形式中，故即使草甘膦对这些有机体存在任何毒性，其毒性也是很少量的。EPSPS酶天然地存在于植物和微生物来源的食物中。 
草甘膦是除草剂(诸如美国Monsanto公司生产的 
Figure BSA00000460219100011
)中的有效成分。典型地，其以水溶性盐诸如铵盐、烷基胺盐、碱金属盐或三甲基锍(trimethylsulfonium)盐进行配制。最通常的制剂之一是草甘膦的异丙胺盐，其是 
Figure BSA00000460219100012
除草剂中使用的形式。 
已经证明通过在植物的基因组中插入产生草甘膦耐受性EPSP合酶(例如来自农杆菌属样品(Agrobacterium sp.)菌株CP4AcO的CP4-EPSPS)的能力可以生产草甘膦耐受性植物。 
通过农杆菌介导的转化，将编码草甘膦耐受性EPSPS(例如CP4-EPSPS)的基因导入植物的基因组中可以生产草甘膦耐受性甜菜植株。WO 99/23232中已经公开了所述甜菜植株，其表达CP4-EPSPS。然而，由采用CP4-EPSPS基因以该方式转化的细胞所生长的甜菜植 株，在其性状上存在很大差异，这是由于如下事实，即基因被插入在植物基因组中的随机位置上。特定转基因插入至染色体上特定位置通常被称为“事件(event)”。术语“事件”也用来区分遗传工程化农作物品种。合乎需要的事件是非常稀少的。由于转基因被插入到具有生长重要性的植物基因中，导致基因断裂和不表达，或转基因插入到不能使转基因表达或使其表达非常低的染色体部分中，因此绝大多数的事件是会被废弃的。因为这个原因，为了识别特征在于导入基因充分表达的事件，就需要筛选大量的事件。这个过程非常费时而且成本高昂，而且其绝非可以保证能够发现具有满意性质的植株。 
发明内容
因此，本发明的目的是提供甜菜植株，其表现出对抗草甘膦的高水平耐受性，但不具有在其他重要农学性质诸如生长、产量、品质、病原抗性等方面上的缺点。 
根据本发明的草甘膦耐受性甜菜植株的特征在于： 
a)甜菜植株获自保藏于NCIMB，Aberdeen(苏格兰，英国)，保藏号为NCIMB 41158或NCIMB 41159的种子，和/或 
b)采用含有SEQ ID NO：1核苷酸序列的第一引物和含有SEQ IDNO：2核苷酸序列的第二引物，使用聚合酶链式反应，可从所述甜菜植株、其部分或其种子的基因组DNA中扩增630-700bp，优选664bp的DNA片段，和/或 
c)采用含有SEQ ID NO：3核苷酸序列的第一引物和含有SEQ IDNO：4核苷酸序列的第二引物，使用聚合酶链式反应，可从所述甜菜植株、其部分或其种子的基因组DNA中扩增3500-3900bp，优选3706bp的DNA片段，和/或 
d)采用含有SEQ ID NO：7核苷酸序列的第一引物和含有SEQ IDNO：8核苷酸序列的第二引物，使用聚合酶链式反应，可从所述甜菜植株、其部分或其种子的基因组DNA中扩增270-300bp，优选288bp的DNA片段，和/或 
e)采用含有SEQ ID NO：9核苷酸序列的第一引物和含有SEQ IDNO：10核苷酸序列的第二引物，使用聚合酶链式反应，可从所述甜菜植株、其部分或其种子的基因组DNA中扩增710-790bp，优选751bp 的DNA片段，和/或 
f)采用含有SEQ ID NO：14核苷酸序列的第一引物和含有SEQ IDNO：16核苷酸序列的第二引物，使用聚合酶链式反应，可从所述甜菜植株的基因组DNA中扩增990-1100bp，优选1042bp的DNA片段。 
聚合酶链式反应(PCR)是用于扩增核酸分子的众所周知的标准方法(参见，例如US 4,683,202)。 
根据本发明的甜菜植株(以下称为“事件H7-1”)表现出对草甘膦除草剂高度耐受。此外，事件H7-1的生长性状和其他重要农学性质未受转化过程影响。事件H7-1表达高水平的农杆菌-CP4-EPSPS-基因，该基因被稳定地掺入植物基因组中，且其为植物提供草甘膦耐受性。植物通过采用二元载体PV-BVGT08的农杆菌介导的转化技术进行制备。该载体在左和右边界区(“Border”区)之间包含下列序列：编码区，其由来自拟南芥EPSPS的叶绿体转运肽编码序列(称为ctp2)组成，该编码序列与CP4-EPSPS编码序列结合，且处于玄参花叶病毒启动子(pFMV)和来自豌豆的E9-3’转录终止序列的调控下。 
在本发明优选实施方案中，3706bp、664bp、288bp、751bp和1042bp DNA片段分别显示出与SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：13、SEQ IDNO：11、SEQ ID NO：12或SEQ ID NO：17的核苷酸序列至少95％，优选至少99％，更优选至少99.9％的同一性。例如，95％同一性意指特定序列95％的核苷酸与对比序列相同。为此目的，序列可采用BLAST程序(例如可获自http://www.ncbi.nlm.nih.gov/blast/bl2seq/bl2.html)进行排列和对比。最优选地，3706bp DNA片段含有SEQ ID NO：6的核苷酸序列，664bp DNA片段含有SEQ ID NO：13的核苷酸序列，288bp DNA片段含有SEQ ID NO：11的核苷酸序列，751bp DNA片段含有SEQ ID NO：12的核苷酸序列，和/或1042bp DNA片段含有SEQ IDNO：17的核苷酸序列。 
本发明还涉及保藏于NCIMB，Aberdeen(苏格兰，英国)，保藏号为NCIMB 41158或NCIMB 41159的种子。所述种子可被用于获得草甘膦耐受性的甜菜植株。种子可被锯开且成长的植物将具有草甘膦耐受性。 
本发明还涉及草甘膦耐受性的甜菜植株的细胞、组织或部分。 
本发明另一方面是草甘膦耐受性甜菜植株的鉴定方法，其特征在 于，该方法包含以下步骤： 
a)采用含有SEQ ID NO：1核苷酸序列的第一引物和含有SEQ IDNO：2核苷酸序列的第二引物，使用聚合酶链式反应，从所述甜菜植株、其部分或其种子的基因组DNA中扩增630-700bp，优选664bp的DNA片段，和/或 
b)采用含有SEQ ID NO：3核苷酸序列的第一引物和含有SEQ IDNO：4核苷酸序列的第二引物，使用聚合酶链式反应，从所述甜菜植株、其部分或其种子的基因组DNA中扩增3500-3900bp，优选3706bp的DNA片段，和/或 
c)采用含有SEQ ID NO：7核苷酸序列的第一引物和含有SEQ IDNO：8核苷酸序列的第二引物，使用聚合酶链式反应，从所述甜菜植株、其部分或其种子的基因组DNA中扩增270-300bp，优选288bp的DNA片段，和/或 
d)采用含有SEQ ID NO：9核苷酸序列的第一引物和含有SEQ IDNO：10核苷酸序列的第二引物，使用聚合酶链式反应，从所述甜菜植株、其部分或其种子的基因组DNA中扩增710-790bp，优选751bp的DNA片段，和/或 
e)采用含有SEQ ID NO：14核苷酸序列的第一引物和含有SEQ IDNO：16核苷酸序列的第二引物，使用聚合酶链式反应，从所述甜菜植株的基因组DNA中扩增990-1100bp，优选1042bp的DNA片段。 
该方法提供了采用标准分子生物学方法对转基因草甘膦耐受性甜菜植株的检测。 
本发明还涉及用于鉴定转基因草甘膦耐受性甜菜植株或其细胞、组织或部分的试剂盒。试剂盒包括至少一个引物对，该引物对含有用于聚合酶链式反应的第一引物和第二引物，其可以特异地识别事件H7-1，其细胞、组织或部分。 
优选地，第一引物含有SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：7或SEQ IDNO：9或SEQ ID NO：14的核苷酸序列，第二引物优选含有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：8或SEQ ID NO：10或SEQ ID NO：16的核苷酸序列。 
根据本发明进一步的实施方案，第一引物和第二引物各识别形成SEQ ID NO：5核苷酸序列的部分的核苷酸序列。 
本发明的Sugar beet 3S0057 5043 MK1，已经于2003年2月17日保藏于国立工业和海洋微生物保藏有限公司(英国)，德国艾恩贝克，并且保藏编号为NCIMB 41158。本发明的Sugar beet 3S00575046 MK1，已经于2003年2月17日保藏于国立工业和海洋微生物保藏有限公司(英国)，德国艾恩贝克，并且保藏编号为NCIMB 41159。 
附图说明
下列附图用于说明本发明。其显示了： 
图1二元载体和PV-BVGT08的图谱 
图2通过PCR分析鉴定H7-1。分析来自18个植物的DNA样品。阴性对照＝来自非转化甜菜的DNA；阳性对照＝来自H7-1原始转化体的DNA。 
图3通过多重PCR和在转基因事件H7-1和非转基因植株之间的区别来鉴定事件H7-1。分析来自54个植物的DNA探针。 
图4pFMV-ctp2-CP4-EPSPS-E9-3’-插入片段，其具有限制性内切酶HindIII、XbaI、ClaI、PstI和BamHI的剪切位点。 
图5事件H7-1的插入片段/拷贝数分析。采用PstI、HindIII、XbaI、ClaI和BamHI(泳道3-7)酶切10μg H7-1基因组DNA，用于Southern印迹分析。用BamHI酶切作为阴性对照的未转化基因组DNA(泳道8)。用BamHI酶切作为阳性对照的质粒PV-BVGT08。泳道2和9表示分子量标准。印迹采用32P-标记的CP4-EPSPS编码区作为探针。该探针是涵盖碱基对447-1055的CP4-EPSPS基因的内部序列。 
图6事件H7-1的Southern印迹分析，用来评估ctp2-CP4-EPSPS编码区的完整性。用XbaI和HindIII/BamHI酶切10μg与PV-BVGT08混合的H7-1基因组DNA，非转基因对照DNA和非转基因对照DNA。印迹采用32P-标记的CP4-EPSPS-PCR片段作为探针。 
图7事件H7-1的Southern印迹分析，用来评估启动子区完整性。用HindIII，XbaI和SacI/XhoI酶切10μg与PV-BVGT08混和的H7-1基因组DNA，非转基因对照DNA和非转基因对照DNA。印迹采用32P-标记的启动子片段(HindIII)(＝PV-BVGT08序列，Bp 7972-8583)或完整的启动子-ctp2-CP4-EPSPS-E9-3’-盒(PmeI/XhoI)(＝PV-BVGT08序列，Bp 7935-2389)作为探针。 
图8事件H7-1的Southern印迹分析，用来评估多腺苷酸化(Poly-A-)区域完整性。用EcoRI/PstI，XbaI，HindIII和PstI酶切10μg与PV-BVGT08混和的H7-1基因组DNA，非转基因对照DNA和非转基因对照DNA。印迹采用32P-标记的Poly-A-片段(BamHI/XhoI)(＝PV-BVGT08序列，Bp 1702-2389)作为探针。 
图9作为评估事件H7-1中“主链”载体DNA缺失的探针使用的片段。 
图10事件H7-1的Southern印迹分析，用来评估事件H7-1中“主 链”DNA的缺失。用XbaI酶切10μg与PV-BVGT08混和的H7-1基因组DNA，非转基因对照DNA和非转基因对照DNA。印迹采用包含PV-BVGT08(探针1-4)的整个“主链”的32P-标记片段作为探针。 
图11PCR片段与左边界区(left border，LB)上PV-BVGT08序列之间的对比。 
图12PCR片段与右边界区(right border，RB)上PV-BVGT08序列之间的对比。 
图13插入片段右接头外的基因组DNA的分析。将大约50ng的H7-1基因组DNA、非转基因对照DNA或水用于PCR反应，PCR采用P1(其中两个引物位于插入片段外)和P3(其中一个引物位于插入片段内，而另一引物位于插入片段外)的引物组合。 
图14插入片段左接头外的基因组DNA的分析。将大约50ng的H7-1基因组DNA、非转基因对照DNA和水用于PCR反应，PCR采用P2(其中两个引物位于插入片段外)和P4(其中一个引物位于插入片段内，而另一引物位于插入片段外)的引物组合。 
图15H7-1种子批的子代图谱。 
图16事件H7-1的Southern印迹分析，用来评估插入的DNA是否被稳定地整合至基因组内。用BamHI，XbaI和HindIII酶切10μgH7-1基因组DNA(最初的转化体H7-1-1995和三个子代，H7-1-1996至1998)和来自不同来源的非转基因对照DNA。印迹用PV-BVGT08(＝Bp 447-1555)的32P-标记CP4-EPSPS探针进行检测。 
具体实施方式
参照以下实施例(仅以例举说明的方式)进一步解释本发明。 
以下是所使用的缩写的列表： 
                            大约 
～ 
℃                          摄氏度 
bidest                      双蒸无菌水 
bp                          碱基对 
CTAB                        溴化十六烷基三甲基铵 
DNA                         脱氧核糖核酸 
E.coli           大肠杆菌 
EDTA             乙二胺四乙酸 
Fig.             图 
h                小时 
HCl              盐酸 
kb               千碱基对 
kg               公斤 
M，mM，          摩尔，毫摩尔 
min              分钟 
Na2HPO4/NaH2PO4  磷酸钠 
NaCl             氯化钠 
NaOH             氢氧化钠 
nt               核苷酸 
PCR              聚合酶链式反应 
Pmol             皮摩尔 
RNase            核糖核酸核酸酶 
rpm              每分钟转数 
RR               Roundup 
Figure BSA00000460219100071
RT               室温 
SDS              十二烷基硫酸钠 
sec              秒 
SEVAG            氯仿∶异戊醇(24∶1) 
SSC              标准枸椽酸盐盐水 
TE               三-EDTA缓冲液 
TRIS             三(羟甲基)氨基甲烷 
实施例1：事件H7-1的鉴定
甜菜(Beta vulgaris)基因型3S0057已在遗传上进行修饰以便表达CP4-5-烯醇-丙酮酰-莽草酸-3-磷酸盐合酶或CP4-EPSPS，其提供了对除草剂草甘膦的耐受性，且也可被用作可选择的标记。该转基因品系通过采用二元载体PV-BVGT08的根癌农杆菌介导的转化技术来制 备。用于甜菜转化的载体的T-DNA在左和右边界区之间包含以下序列：编码区，其由来自拟南芥EPSPS的叶绿体转运肽编码序列(称为ctp2)组成，该编码序列与CP4-EPSPS编码序列结合，且处于35S玄参花叶病毒启动子(pFMV)和来自豌豆的rbcS-E9-基因的3’转录终止序列的调控下。 
采用以下方法： 
I.DNA提取： 
方法1： 
收集新鲜叶子或其它组织(20-100mg在1.5ml反应管中)，加入400μl提取缓冲液(如下)。用小研杵研碎组织。将混合物涡旋5秒，然后在室温下孵育30分钟至60分钟。随后以13,000rpm实施离心步骤1分钟。将包含DNA的上清液注入新1.5ml反应管内，与120μl异丙醇混合。混合物在室温下孵育2分钟。加入乙醇后形成DNA沉淀。13,000rpm离心5分钟后，缓慢倾出乙醇。使样品风干。将片状沉淀物再溶于400μl H2O或TE缓冲液(如下)中。 
提取缓冲液(100ml)： 
TE缓冲液： 
10mM   Tris-HCl(pH 8.0) 
1mM    EDTA。 
方法2： 
在1.5ml Eppendorf管内收集新鲜植物材料(20-100mg)，加入500μl CTAB缓冲液(65℃)(如下)。混合物在65℃孵育1-1.5小时，随后离心5秒。加入5μl RNase A(10mg/ml)。混合物在37℃孵育30分钟，随后离心5秒。加入200μl SEVAG。混合并在13,000rpm离心10分钟后，将上清液转移到新的1.5ml反应管中。1体积异丙醇(约400μl)与上清液小心混合。之后13,000rpm离心10分钟。加入600μl 70％醇。通过反转管数次来洗涤片状沉淀物。混合物再一次在13,000rpm 离心2分钟。小心地倾出乙醇。将管在干净的纸上倒置并引流。样品风干15分钟。片状沉淀物再溶于50μlH2O中(如下)。 
CTAB缓冲液： 
Figure BSA00000460219100091
SEVAG： 
氯仿∶异戊醇(24∶1) 
RNase-缓冲液： 
10mM Tris，15mM NaCl，pH7.5 
RNase A： 
10mg RNase/ml RNase-缓冲液 
(5ml bidest+50mg RNase A，等份于1.5ml反应管中，100℃煮沸反应管30分钟，在-20℃贮存) 
通常使用方法1。用这种方法可每天提取大量DNA样品而且DNA的品质是可接受的。当叶子材料较老或如果存在DNA品质问题的时候使用方法2。方法2较为复杂，需要更多时间，且所得DNA产量较低，但其具有较高的品质。 
通常，不进行DNA定量，通常在PCR反应中使用0.5-1μl提取的DNA溶液。 
II.PCR反应： 
对于PCR反应，制备缓冲液+dNTP的10x缓冲液混合物。步骤如下： 
Figure BSA00000460219100101
PCR反应(25μl)： 
III.通过PCR鉴定H7-1 
通过采用事件特异引物的PCR实行H7-1的鉴定： 
上游引物(SEQ ID NO：1)： 
H7-207U30：5′TTA ATT TTT GCA GGC GAT GGTGGC TGT TAT 3′ 
下游引物(SEQ ID NO：2)： 
H7-841L30：5′CAT ACG CAT TAG TGA GTG GGC TGT CAG GAC 3′ 
上游引物位于插入片段之外，是甜菜基因组DNA的一部分。下游引物位于插入的CP4-EPSPS基因内。 
PCR条件： 
Figure BSA00000460219100111
重复步骤2a-c 34次。 
预期的PCR产物是664bp的DNA片段(SEQ ID NO：13，见图2)。 
IV.通过多重PCR鉴定H7-1 
对于非转基因植株和转基因植株(无论是纯合的或是杂合的)的辨别，使用三种不同的引物实施多重PCR。使用下列引物： 
H72(SEQ ID NO：14)：5′GCTCTGACACAACCGGTAAATGCATTGGCC 3′ 
H7S2(SEQ ID NO：15)：5′GACCCATAGTTTGATTTTAAGCACGACATG 3′ 
H7R2(SEQ ID NO：16)：5′GCAGATTCTGCTAACTTGCGCCATCGGAG 3′ 
PCR条件： 
步骤2a-c重复34次。 
非转基因植株仅显现一段约350bp的PCR片段。纯合的转基因植株显现一段约1.042kb的片段。杂合的植物显现两个片段(见图3)。 
实施例2：事件H7-1的特征化
实施分子分析来对H7-1中存在的整合的DNA进行特征化。具体 而言，测定插入片段数目(甜菜基因组内整合位点的数目)，拷贝数(一个基因座内DNA片段的数目)，插入的编码区的完整性及其调控元件，pFMV启动子和E9-3’转录终止序列，用于转化的载体“主链”序列的缺失和插入片段的稳定遗传性。此外，鉴定侧接于DNA插入片段的序列。 
通过使用Southern印迹，PCR和反向PCR技术对甜菜转化事件H7-1的插入的DNA进行特征描述。其中包括阳性对照和阴性对照(PV-BVGT08，非转基因植株DNA)，并且用与试样(H7-1)同样的方法处理。 
从1997年种植的事件H7-1植物批号74903H中分离DNA。还从1995年原始转化体H7-1/3S0057(＝6401VH)和1996年，1997年和1998年生产的三个其它子代(H7-1/64801H，H7-1/74922H和H7-1/83002S)中分离DNA。 
非转基因甜菜品系3S0057作为对照。此外，甜菜品系5R7150，8K1180和6S0085用作阴性对照。该品系是用于培育传统的甜菜的普通非转基因品系。 
参照物与用于转化的质粒PV-BVGT08相对应。将质粒DNA和来自对照甜菜品系的DNA混合在一起，用限制性内切酶酶切，并与试样平行在琼脂糖凝胶上进行电泳分离。质粒可作为预期片段的分子量标记并可作为阳性杂交对照。以代表低于1拷贝的分析元件的浓度，将质粒DNA与基因组植物DNA混合，以便证实Southern印迹法的敏感性(～10μg基因组DNA和～28pg PV-BVGT08-DNA)。使用分子量标准参照物RAOULTM(ONCOR/Appligene，货号#160673)估测分子大小。 
DNA分离：
用研钵和研杵将来自事件H7-1的批号74903H的植物组织(1-3g湿重)在液氮中磨为细粉。粉末转移到50ml Oakridge管，然后加入7.5ml预热(60℃)的CTAB缓冲液(2％CTAB，100mM Tris-HCl，20mM EDTA pH 8.0，1.4M NaCl和0.2％巯基乙醇)。采用间歇搅拌将样品在65℃孵育大约30分钟。在样品中加入等体积(8ml)的RT氯仿∶异戊醇(24∶1v/v)混合物。将混悬液反转混和，然后离心(10min，9000rpm)使两相分离。水相转移到新50ml Oakridge管，然后加入5 ml异丙醇使DNA沉淀。离心(2min，9000rpm)得到片状沉淀的DNA并弃去上清液。沉淀的DNA用76％乙醇和10mM乙酸铵的洗涤溶液孵育大约20分钟。在离心分离和倾析上清液后，真空干燥DNA并将其再溶于TE中，pH 8.04℃过夜。 
作为可选方法，通过获自Qiagen(Düsseldorf，德国，货号#68163)的DNeasy Plant Maxi Kit分离DNA。根据厂商说明实施DNA分离。 
作为其它的可选方法，通过获自Qiagen(Düsseldorf，德国，货号#69103)的DNeasy Plant Mini Kits分离DNA。根据厂商说明实施DNA分离。 
DNA定量和限制性内切酶酶切：
采用LKB Biochrom UV/可视分光光度计(Amersham Pharmacia，Freiburg，德国)实施DNA定量，或可选地，在琼脂糖凝胶电泳后通过用RFLPscan程序(MWG-Biotech，Ebersberg，德国)扫描DNA，完成DNA定量。采用获自Gibco/Life Technologies(Karlsruhe，德国)(货号#10496-016)的High DNA Mass Ladder作为校准标准。限制性内切酶购自Boehringer Mannheim(Mannheim，德国)、Stratagene(Amsterdam，Niederlande)或New England Biolabs(Frankfurt，德国)并且根据厂商手册进行使用。 
DNA探针制备：
从E.coli培养物中分离PV-BVGT08DNA。通过采用相应限制性内切酶酶切，然后用琼脂糖凝胶电泳或聚合酶链式反应(PCR)分离，制备与CP4-EPSPS编码区，35S启动子，E9-3’-poly-A-区，35S-ctp2-CP4-EPSPS-E9-3’-盒和“主链”区同源的探针模板。产物用BIO 101(La Jolla，CA)的Gene Clean II试剂盒纯化。采用Amersham-Pharmacia Biotech Europe(Freiburg，德国)的MegaprimeTM DNA标记系统实施用32P-dCTP或32P-dATP对探针(25pg)的标记。 
Southern印迹分析：
限制性内切酶处理的DNA的样品用琼脂糖凝胶电泳在～35伏特分离～15小时。凝胶成像后，在0.25M HCl-溶液中浸泡凝胶15分钟使DNA脱嘌呤，凝胶在0.5M NaOH，1.5M NaCl的变性溶液中持续轻柔搅拌孵育30分钟使DNA变性，最后通过在若干体积的2M NaCl和1M Tris-HCl，pH 5.5的溶液中浸泡2小时使DNA中和。采用获自 Stratagene的Pressure Blotter，根据厂商手册，将获自琼脂糖凝胶的DNA转移至Hybond-NTM尼龙膜(Amersham Pharmacia Biotech Europe，Freiburg，德国)。在将滤器置于2xSSPE(20xSSPE：3.6MNaCl，20mM EDTA，0.2M NaH2PO4/Na2HPO4pH7.4)中浸泡15分钟后，通过紫外线(Transilluminator Pharmacia，Freiburg，德国)照射1分钟以及在真空干燥箱中80℃烘烤1小时从而将DNA固定于膜上。在50％甲酰胺，5xSSC，0.1％月桂酰肌氨酸，0.02％SDS和2％封闭剂(Boehringer Mannheim，德国，货号#1096176)的水溶液中将印迹预杂交4小时。与放射标记的探针的杂交在新鲜的预杂交溶液中于42℃经过16-18小时而完成。在杂交后，膜在2xSSC中于42℃洗涤5分钟，在2xSSC，1％SDS中于65℃洗涤20分钟，然后在0.2xSSC，0.1％SDS中于68℃洗涤15分钟，洗两次。通过采用Biomax-MSTM胶片连同Kodak Biomax MSTM增感屏对印迹曝光从而获得印迹的放射自显影图像。 
侧翼5’和3’基因组序列的鉴定： 
采用反向PCR技术鉴定转基因-和植株基因组DNA之间的接头。按照上面描述纯化基因组DNA。大约1μg的DNA在分离的反应中被限制性核酸酶TaqI、AluI、NdeIII或RsaI酶切。使用T4-连接酶将酶切的DNA片段再过夜连接，然后进行PCR反应。使用获自NBI(National Biosciences，Inc.，Plymouth，Michigan)的引物分析软件 
Figure BSA00000460219100141
获得多种反引物组合。 
该反向PCR扩增产生的片段用凝胶电泳分离，从凝胶上切取，然后采用Gene Clean IITM试剂盒纯化。使用来自Invitrogen(Groningen，Niederlande)的TOPOTMTA 
Figure BSA00000460219100142
试剂盒将纯化的片段克隆至载体 
Figure BSA00000460219100143
2.1。将插入片段提交给MWG-Biotech(Ebersberg，德国)进行测序。用Mac Tetra DNA分析软件(SoftGene GmbH，Bochold，德国)实施对所得序列数据的分析。 
PCR分析： 
采用DNAeasy Plant Mini试剂盒(Qiagen，Düsseldorf，德国)，根据厂商说明，制备基因组DNA。将大约50ng的基因组DNA用于PCR。反应设置为95℃30秒，55℃30秒，和72℃2分钟进行35个循环。在PTC200循环仪(Biozym，Oldendorf，德国)中完成PCR。 通过琼脂糖凝胶电泳分析PCR产物。 
1.插入片段数量：
对H7-1评估插入片段数量，转基因DNA进入甜菜基因组的整合位点数量。为了测定插入片段数量，用限制性内切酶HindIII，XbaI和BamHI酶切基因组DNA。作为阴性对照的来自未转化的对照植物的DNA(表示相同遗传背景)用Hind III酶切。采用转化载体DNA(PV-BVGT08)作为阳性对照。 
XbaI和BamHI在PV-BVGT08中仅剪切一次且不在使用的标记CP4-EPSPS探针内剪切(见图4)。HindIII在PV-BVGT08中剪切三次，但所有三个位置均位于探针的外面且在同侧上，5’(相对于探针)。因此，各酶会释放出单个DNA片段，该片段可与CP4-EPSPS探针杂交，并可包含插入的DNA和邻近的基因组植物DNA的部分。检测到的片段数量表明在事件中存在的插入片段的数量。结果如图5所示。 
分别使用酶HindIII、XbaI或BamHI酶切后，仅发现单个杂交片段。来自HindIII消化(泳道4)的5.2kb片段，来自XbaI消化(泳道5)的4kb片段和来自BamHI消化(泳道7)的大约11kb片段显示出转化体H7-1表现单个整合事件(图4)。泳道1中的强信号表示线性化PV-BVGT08质粒。其它的微弱信号涉及少量未经酶切的PV-BVGT08或涉及非特异性背景杂交信号。 
2.拷贝数
理论上，一个整合位点可由大于一个拷贝的插入的DNA组成。但是由于前述限制性分析的片段大小，故上述情况是不可能的。如果H7-1中存在大于一个拷贝的插入的DNA，则其它的片段则会被检测到。这也可通过用限制性内切酶PstI酶切进行证实。PstI在左和右边界序列中剪切两次。限制性酶切部位之一位于CP4-EPSPS编码区内，因此在酶切后，可以预期两个与CP4-EPSPS探针杂交的片段。预期片段之一与约1.2kb的内部片段相对应。第二个片段应是边界片段。而且，如果存在大于一个拷贝，其它的片段应该是可检测的。但是结果显示PstI按预期的那样剪切DNA。检测到1.2kb的内部片段和仅一个约4.9kb的其它片段(图5：泳道3，图4)。 
用ClaI剪切DNA作为附加的内部对照(图5：泳道6，图4)。与预期中一样，2.4kb的单个片段杂交，这是因为ClaI在所用的CP4- EPSPS片段的左手侧和右手侧外部剪切两次。这一结果也是整合的DNA片段完整性的证明并且与以下给出的结果一致。 
质粒PV-BVGT08(PV-BVGT08＝8590bp)与CP4-EPSPS片段的杂交产生8.6kb信号(图5，泳道1)，如所预期的那样。第二条较小的非常微弱的带是由于PV-BVGT08的不完全限制性。 
概括而言，试验显示出转化的甜菜品系H7-1含有在植物基因组中的PV-BVGT08的T-DNA单拷贝整合。 
3.编码区的完整性
通过用酶HindIII酶切P-FMV，HindIII加BamHI酶切ctp2-CP4-EPSPS和EcoRI加PstI酶切E9-3’-非翻译区来测定具有各个元件的CP4-EPSPS基因盒的完整性(就各元件而言，为P-FMV启动子，ctp2-CP4-EPSPS编码区和E9-3’-非翻译区))。采用SacI加XhoI酶切P-FMV-ctp2-CP4-EPSPS区域和E9-3’-区域来实施附加试验。采用相同的酶酶切与非转基因甜菜DNA混合的质粒DNA和单独的非转基因甜菜DNA，分别作为阳性对照和阴性对照。 
这些酶在预期的DNA插入片段内，在左和右T-DNA边界之间，剪切(见质粒图谱，图1中)，所以，如果相应元件是完整的，则H7-1DNA和PV-BVGT08DNA中的杂交片段大小应相同。 
用XbaI酶切DNA作为另外的对照。XbaI在启动子和ctp2-CP4-EPSPS编码区之间剪切一次。因此，可以预期含有PV-BVGT08 DNA的8.6kb片段，而在H7-1的情况下为与PV-BVGT08片段相比在大小上不同的边界片段。结果如图6，7和8所示。 
图6：用HindIII和BamHI的酶切释放出CP4-EPSPS基因，用PCR产生的CP4-EPSPS片段探测印迹。阴性对照(泳道6)未显示任何杂交带。来自事件H7-1的基因组DNA和与非转基因DNA混和的质粒PV-BVGT08两者都产生大约1.7kb片段，这与预期大小相符。用XbaI的酶切产生预期的线性化PV-BVGT08的8.6kb片段。对于事件H7-1，酶切产生大约4.0kb的边界片段(同样参见图4和5)。同样，阴性对照未显示任何信号。 
图7：用HindIII的酶切释放出玄参花叶病毒启动子，用PCR产生的启动子片段探测印迹。阴性对照(泳道5)未显示任何杂交信号。来自事件H7-1的基因组DNA和与非转基因DNA混和的质粒PV- BVGT08两者都产生大小约0.6kb的杂交片段。该片段符合启动子的预期大小(泳道4和6)。 
用XbaI的酶切产生预期的线性化PV-BVGT08的8.6kb片段和来自事件H7-1的大约1.3kb大小的左边界片段(泳道1和3)。该1.3kb片段也是对事件H7-1仅包含转基因的单拷贝的附加证明。同样，阴性对照(泳道2)未显示任何信号。 
用SacI/XhoI的酶切释放出启动子联同CP4-EPSPS编码区和poly-A-区。与完整的启动子-ctp2-CP4-EPSPS-多腺苷酸化信号盒(PmeI/XhoI片段)杂交产生预期的2.3kb启动子-ctp2-CP4-EPSPS和0.7kb多腺苷酸化信号片段，此两者均含有与非转基因DNA混和的PV-BVGT08 DNA和H7-1的基因组DNA(泳道9和11)。 
图8：用PstI和EcoRI的酶切释放出E9-3’多腺苷酸化信号，用多腺苷酸化信号片段探测印迹。阴性对照(泳道3)未显示任何杂交带。与非转基因DNA混合的质粒PV-BVGT08和来自事件H7-1的基因组DNA两者都产生大约0.6kb大小的片段，这与预期大小相符。用XbaI的酶切产生预期的线性化PV-BVGT08的8.6kb片段和含有事件H7-1的大约4.0kb大小的边界片段。 
用PstI的酶切释放出E9-3’多腺苷酸化信号联同0.5kb的CP4-EPSPS编码区的3’部分。产生的1.2kb片段可按预期的用基因组H7-1DNA和PV-BVGT08 DNA进行检测。 
用HindIII的酶切得到线性化PV-BVGT08减去启动子片段的8.0kb片段(泳道13)和含有H7-1的5.2kb边界片段(泳道11)。来自HindIII酶切的单个5.2kb片段和来自XbaI酶切的单个4.0kb片段也是对事件H7-1仅包含一个拷贝插入的DNA的附加证明。同样，阴性对照未显示任何信号。 
概括而言，印迹结果证明了，转化的DNA的所有元件是完整的，且事件H7-1包含单个完整的CTP2-CP4-EPSPS编码区和其调控元件，pFMV启动子和E9-3’转录终止序列。 
4.用于检测“主链”片段的分析
Ti-质粒“主链”区的定义是与左和右边界序列接界的T-DNA的外部区域，其由用于细菌复制和细菌选择的起始基因和选择基因组成，而且其在农杆菌介导的转化时，通常不被转移至植物基因组。为了确 定在事件H7-1中不存在“主链”载体DNA，用限制性内切酶XbaI酶切来自H7-1的基因组DNA，来自未转化对照的基因组DNA，和与PV-BVGT08 DNA混和的来自H7-1的基因组DNA，然后用三个重叠的由PCR产生的探针进行检测，所述探针包括完整主链序列。第四个探针具有在一个片段中的完整“主链”。 
所用探针表示“主链”序列(见图9)： 
1：bp 2730-5370 
2：bp 5278-6419 
3：bp 6302-7851 
4：bp 2730-7851 
图10显示Southern印迹分析的结果。泳道6，10，14和18：用完整“主链”的“主链”片段探测酶切的H7-1的基因组DNA，其未显示任何杂交带。仅泳道4，8，12，16和20：与PV-BVGT08 DNA混和的H7-1的基因组DNA显示8.6kb的带，如预期的那样。条带表示线性化PV-BVGT08 DNA。 
泳道2和4：H7-1基因组DNA和与PV-BVGT08混和且与CP4-EPSPS片段杂交的H7-1基因组DNA显示出杂交信号。泳道2中4kb的带表示右边界片段，泳道4的两条带也表示4.0kb长的右边界片段和8.6kb大小的线性化PV-BVGT08质粒。两条带具有相同的强度。这清楚地显示出加入的PV-BVGT08 DNA的浓度与H7-1DNA中CP4-EPSPS元件的浓度相当。使用的质粒DNA的浓度等于0.5拷贝。如果H7-1基因组中存在整合的“主链”序列，则可检测到明显的信号。 
这些结果证明了H7-1不包含任何用于转化的质粒的可检测“主链”序列。该结果也得到5’和3’基因组侧翼区分析数据的支持(如下)。 
5.侧翼5’和3’基因组序列的鉴定 
农杆菌介导的转化通常导致左和右边界之间的所有序列整合至植物基因组中。整合质粒DNA的5’和3’末端应分别位于左或右边界序列内或与之邻近。因此可用反向PCR技术识别该区域。对克隆的PCR产物测序，然后将序列数据与PV-BVGT08序列比较。 
图11显示来自克隆的反向PCR片段的序列(D1U.RPT)(＝基因组H7-1，上游序列)的排列，该序列通过用于左边界区域分析的引物 获得，与PV-BVGT08序列(下游序列)的比对。两序列的比较显示同源性恰在边界序列内终止。 
图12显示来自克隆的反向PCR片段的序列(B3UNI.RPT)(＝基因组H7-1，上游序列)的排列，该序列通过用于右边界区域分析的引物获得，与PV-BVGT08序列(下游序列)的比对。两序列的比较显示同源性在边界序列前18个核苷酸已经停止。 
总的来说，这清楚地显示出，Ti-质粒PV-BVGT08的左和右边界之间的序列被正确地整合。序列在边界之内或紧接边界之前停止。这些数据支持“主链”分析的结果，即没有边界区之外的“主链”序列被整合至H7-1基因组内。 
为确定甜菜事件H7-1中插入片段的右和左侧上侧翼序列是否为完整的植物基因组序列，采用引物组合P1，P2，P3和P4实施反向PCR分析。 
引物组合P1和P2的引物位于插入片段外。如果位于事件H7-1中的插入片段基因座的DNA与未转化对照的DNA相同，则PCR将产生两个PCR片段，该片段表示来自两个引物组合的合成。引物组合P3和P4的引物按如下方式设计，即使得各引物之一位于CP4-EPSPS插入片段内而另一引物位于插入片段外(在植物基因组DNA内)。由此PCR应仅产生来自事件H7-1的DNA的片段。 
来自反向PCR技术的序列数据联合来自PV-BVGT08载体的数据，可产生包含H7-1插入片段(PV-BVGT08序列)，右和左接头区和其它甜菜基因组DNA(SEQ ID NO：5)的序列。 
对于鉴别转基因至植物基因组DNA接头(事件特异性的鉴别)和对于插入片段左和右侧的基因组DNA区域，使用以下引物组合： 
P1组合(用于分析右边界区外基因组DNA的引物，SEQ IDNO：18，SEQ ID NO：19)： 
上游引物：5′CGG TAA ATG CAT TGG CCT TTG TT 
下游引物：5′CAC CCA GAT CCC AAT AAA ACC GTA AT 
预期PCR产物241bp 
P2组合(用于分析左边界区外基因组DNA的引物，SEQ ID NO：20，SEQ ID NO：21)： 
上游引物：5′AAA TGG TTG TAG ATA AAT AAG GAA ATC A 
下游引物：5′ACA TGT TTG AGC ACT CTT CTT GT 
预期PCR产物377bp 
P3组合(用于分析转基因至植物基因组DNA接头的引物，SEQ IDNO：7，SEQ ID NO：8)： 
上游引物：5′ATG CAT TGG CCT TTG TTT TTG AT 
下游引物：5′TGT CGT TTC CCG CCT TCA G 
预期PCR产物288bp(SEQ ID NO：11) 
P4组合(用于分析转基因至植物基因组DNA接头的引物，SEQ IDNO：9，SEQ ID NO：10)： 
上游引物：5′CGC TGC GGA CAT CTA CAT TTT TGA AT 
下游引物：5′AGT TAA CTT TCC ACT TAT CGG GGC ACT G 
预期PCR产物751bp(SEQ ID NO：12) 
采用事件H7-1DNA和来自非转基因对照植物的DNA的PCR试验(采用引物组合P3，其具有位于H7-1插入片段内部的一个引物)可产生仅含事件H7-1DNA的片段。相反，采用引物组合P1(与插入片段外部序列同源)的PCR试验可产生同时含有事件H7-1和非转基因对照DNA的片段。这些结果见图13。 
该结果表明紧接插入片段右接头的序列存在于转基因事件H7-1DNA中和来自非转基因植株的DNA中。可以得出如下结论，即事件H7-1插入片段外的该DNA是非转基因基因组DNA。 
采用事件H7-1DNA和来自非转基因对照植物的DNA，以及使用引物组合P4(其含有一个位于CP4-EPSPS插入片段内的引物)所实施的PCR试验产生仅含事件H7-1DNA的片段。相反，使用引物组合P2(与插入片段外部序列同源)的PCR试验产生同时含有有事件H7-1的DNA和非转基因对照DNA的片段。(图14)。 
该结果表明紧接插入片段左接头的序列存在于转基因事件H7-1的DNA中和来自非转基因植株的DNA中。可以得出如下结论，即事件H7-1外的DNA是非转基因基因组DNA。 
概括而言，可以描述如下，即甜菜事件H7-1插入片段外部的序列与非转基因植株中存在的序列相同。可以得出如下结论，这些序列是用于转化的亲本品系和其它常规甜菜品系中存在的植物基因组序列。 
6.子代稳定性
为了证明整合DNA的稳定性，将原始转化事件H7-1和通过与非转基甜菜品系自花传粉得到的该品系的三个子代(64801H，74922H和83002S；见图15)进行比较。最初转化品系和子代产于1995年，1996年，1997年和1998年。 
四个不同的非转基因甜菜品系(3S0057，5R7150，8K1180，6S0085)作为对照进行分析。分别用XbaI，HindIII和BamHI酶切所有DNA，然后与标记的CP4-EPSPS片段杂交。为了证明T-DNA被稳定地整合至植物基因组中，采用相同限制性内切酶酶切的H7-1子代的所有泳道应表现为准确相同大小的条带。 
来自H7-1子代的DNA泳道3-6显示出预期片段：用BamHI酶切的DNA为大约11kb的条带，用XbaI酶切产生4.0kb的片段而HindIII限制性酶切产生5.2kb的条带。来自相同限制性酶切但来自不同年份的所有条带在其大小上相同。所有非转基因品系未显示任何信号(图16)。 
这些结果证明了引入的序列被稳定地整合至基因组DNA中并被稳定地遗传。 
序列记录-自由文本 
SEQ ID：5
<223>：用侧翼3′-和5′-序列插入的DNA 
SEQ ID：6
<223>：PCR-产物 
SEQ ID：11
<223>：PCR-产物 
SEQ ID：12
<223>：PCR-产物 
SEQ ID：13
<223>：PCR-产物 
SEQID：17
<223>：PCR-产物 
Figure ISA00000460219300011
Figure ISA00000460219300012
Figure ISA00000460219300021
Figure ISA00000460219300031
Figure ISA00000460219300041
Figure ISA00000460219300061
Figure ISA00000460219300071
Figure ISA00000460219300081
Figure ISA00000460219300091
Figure ISA00000460219300101
Figure ISA00000460219300111
Figure ISA00000460219300121
Figure ISA00000460219300131
Figure ISA00000460219300141

Claims (45)

1.草甘膦耐受性甜菜植株细胞，其特征在于
a)甜菜植株获自保藏于NCIMB，Aberdeen，苏格兰，英国，保藏号为NCIMB 41158或NCIMB 41159的种子，和/或
b)采用含有SEQ ID NO：1核苷酸序列的第一引物和含有SEQID NO：2核苷酸序列的第二引物，使用聚合酶链式反应，可从所述甜菜植株、其部分或其种子的基因组DNA中扩增630-700bp的DNA片段，和/或
c)采用含有SEQ ID NO：3核苷酸序列的第一引物和含有SEQID NO：4核苷酸序列的第二引物，使用聚合酶链式反应，可从所述甜菜植株、其部分或其种子的基因组DNA中扩增3500-3900bp的DNA片段，和/或
d)采用含有SEQ ID NO：7核苷酸序列的第一引物和含有SEQID NO：8核苷酸序列的第二引物，使用聚合酶链式反应，可从所述甜菜植株、其部分或其种子的基因组DNA中扩增270-300bp的DNA片段，和/或
e)采用含有SEQ ID NO：9核苷酸序列的第一引物和含有SEQID NO：10核苷酸序列的第二引物，使用聚合酶链式反应，可从所述甜菜植株、其部分或其种子的基因组DNA中扩增710-790bp的DNA片段，和/或
f)采用含有SEQ ID NO：14核苷酸序列的第一引物和含有SEQ ID NO：16核苷酸序列的第二引物，使用聚合酶链式反应，可从所述甜菜植株的基因组DNA中扩增990-1100bp的DNA片段。
2.根据权利要求1的草甘膦耐受性甜菜植株细胞，其特征在于，在b)中，可从所述甜菜植株、其部分或其种子的基因组DNA中扩增664bp的DNA片段。
3.根据权利要求1的草甘膦耐受性甜菜植株细胞，其特征在于，在c)中，可从所述甜菜植株、其部分或其种子的基因组DNA中扩增3706bp的DNA片段。
4.根据权利要求1的草甘膦耐受性甜菜植株细胞，其特征在于，在d)中，可从所述甜菜植株、其部分或其种子的基因组DNA中扩增288bp的DNA片段。
5.根据权利要求1的草甘膦耐受性甜菜植株细胞，其特征在于，在e)中，可从所述甜菜植株、其部分或其种子的基因组DNA中扩增751bp的DNA片段。
6.根据权利要求1的草甘膦耐受性甜菜植株细胞，其特征在于，在f)中，可从所述甜菜植株的基因组DNA中扩增1042bp的DNA片段。
7.根据权利要求1至6中任一项的草甘膦耐受性甜菜植株细胞，其特征在于，所述3706bp DNA片段含有SEQ ID NO：6核苷酸序列或表现出与SEQ ID NO：6核苷酸序列至少95％的同一性。
8.根据权利要求7的草甘膦耐受性甜菜植株细胞，其特征在于，所述3706bp DNA片段表现出与SEQ ID NO：6核苷酸序列至少99％的同一性。
9.根据权利要求8的草甘膦耐受性甜菜植株细胞，其特征在于，所述3706bp DNA片段表现出与SEQ ID NO：6核苷酸序列至少99.9％的同一性。
10.根据权利要求1至6中任一项的草甘膦耐受性甜菜植株细胞，其特征在于，所述664bp DNA片段含有SEQ ID NO：13核苷酸序列或表现出与SEQ ID NO：13核苷酸序列至少95％的同一性。
11.根据权利要求10的草甘膦耐受性甜菜植株细胞，其特征在于，所述664bp DNA片段表现出与SEQ ID NO：13核苷酸序列至少99％的同一性。
12.根据权利要求11的草甘膦耐受性甜菜植株细胞，其特征在于，所述664bp DNA片段表现出与SEQ ID NO：13核苷酸序列至少99.9％的同一性。
13.根据权利要求1至6中任一项的草甘膦耐受性甜菜植株细胞，其特征在于，所述288bp DNA片段含有SEQ ID NO：11核苷酸序列或表现出与SEQ ID NO：11核苷酸序列至少95％的同一性。
14.根据权利要求13的草甘膦耐受性甜菜植株细胞，其特征在于，所述288bp DNA片段表现出与SEQ ID NO：11核苷酸序列至少99％的同一性。
15.根据权利要求14的草甘膦耐受性甜菜植株细胞，其特征在于，所述288bp DNA片段表现出与SEQ ID NO：11核苷酸序列至少99.9％的同一性。
16.根据权利要求1至6中任一项的草甘膦耐受性甜菜植株细胞，其特征在于，所述751bp DNA片段含有SEQ ID NO：12核苷酸序列或表现出与SEQ ID NO：12核苷酸序列至少95％的同一性。
17.根据权利要求16的草甘膦耐受性甜菜植株细胞，其特征在于，所述751bp DNA片段表现出与SEQ ID NO：12核苷酸序列至少99％的同一性。
18.根据权利要求17的草甘膦耐受性甜菜植株细胞，其特征在于，所述751bp DNA片段表现出与SEQ ID NO：12核苷酸序列至少99.9％的同一性。
19.根据权利要求1至6中任一项的草甘膦耐受性甜菜植株细胞，其特征在于，所述1042bp DNA片段含有SEQ ID NO：17核苷酸序列或表现出与SEQ ID NO：17核苷酸序列至少95％的同一性。
20.根据权利要求19的草甘膦耐受性甜菜植株细胞，其特征在于，所述1042bp DNA片段表现出与SEQ ID NO：17核苷酸序列至少99％的同一性。
21.根据权利要求20的草甘膦耐受性甜菜植株细胞，其特征在于，所述1042bp DNA片段表现出与SEQ ID NO：17核苷酸序列至少99.9％的同一性。
22.来自根据权利要求1-19之任一项的植株细胞的组织。
23.草甘膦耐受性甜菜植株的鉴定方法，其特征在于，该方法包含以下步骤：
a)采用含有SEQ ID NO：1核苷酸序列的第一引物和含有SEQID NO：2核苷酸序列的第二引物，使用聚合酶链式反应，从所述甜菜植株、其部分或其种子的基因组DNA中扩增630-700bp的DNA片段，和/或
b)采用含有SEQ ID NO：3核苷酸序列的第一引物和含有SEQID NO：4核苷酸序列的第二引物，使用聚合酶链式反应，从所述甜菜植株、其部分或其种子的基因组DNA中扩增3500-3900bp的DNA片段，和/或
c)采用含有SEQ ID NO：7核苷酸序列的第一引物和含有SEQID NO：8核苷酸序列的第二引物，使用聚合酶链式反应，从所述甜菜植株、其部分或其种子的基因组DNA中扩增270-300bp的DNA片段，和/或
d)采用含有SEQ ID NO：9核苷酸序列的第一引物和含有SEQID NO：10核苷酸序列的第二引物，使用聚合酶链式反应，从所述甜菜植株、其部分或其种子的基因组DNA中扩增710-790bp的DNA片段，和/或
e)采用含有SEQ ID NO：14核苷酸序列的第一引物和含有SEQ ID NO：16核苷酸序列的第二引物，使用聚合酶链式反应，从所述甜菜植株的基因组DNA中扩增990-1100bp的DNA片段。
24.根据权利要求23的草甘膦耐受性甜菜植株的鉴定方法，其特征在于，在a)中，从所述甜菜植株、其部分或其种子的基因组DNA中扩增664bp的DNA片段。
25.根据权利要求23的草甘膦耐受性甜菜植株的鉴定方法，其特征在于，在b)中，从所述甜菜植株、其部分或其种子的基因组DNA中扩增3706bp的DNA片段。
26.根据权利要求23的草甘膦耐受性甜菜植株的鉴定方法，其特征在于，在c)中，从所述甜菜植株、其部分或其种子的基因组DNA中扩增288bp的DNA片段。
27.根据权利要求23的草甘膦耐受性甜菜植株的鉴定方法，其特征在于，在d)中，从所述甜菜植株、其部分或其种子的基因组DNA中扩增751bp的DNA片段。
28.根据权利要求23的草甘膦耐受性甜菜植株的鉴定方法，其特征在于，在e)中，从所述甜菜植株的基因组DNA中扩增1042bp的DNA片段。
29.用于鉴定转基因草甘膦耐受性甜菜植株、其细胞、组织或部分的试剂盒，其包含至少一个引物对，所述引物对含有用于聚合酶链式反应的第一引物和第二引物，其中第一引物识别掺入至所述植株基因组的外源DNA内的序列，第二引物识别所述DNA的3’或5’侧翼区内的序列，由此所述植株是根据权利要求1-19之任一项的植株。
30.用于鉴定转基因草甘膦耐受性甜菜植株、其细胞、组织或部分的试剂盒，其包含至少一个引物对，所述引物对含有用于聚合酶链式反应的第一引物和第二引物，其中第一引物识别掺入至所述植株基因组的外源DNA内的序列，第二引物识别所述DNA的3’或5’侧翼区内的序列，其特征在于
a)第一引物含有SEQ ID NO：1核苷酸序列和第二引物含有SEQ ID NO：2核苷酸序列，和/或
b)第一引物含有SEQ ID NO：7核苷酸序列和第二引物含有SEQ ID NO：8核苷酸序列，和/或
c)第一引物含有SEQ ID NO：9核苷酸序列和第二引物含有SEQ ID NO：10核苷酸序列，和/或
d)第一引物含有SEQ ID NO：14核苷酸序列和第二引物含有SEQ ID NO：16核苷酸序列。
31.根据权利要求29或30的试剂盒，其特征在于，第一引物和第二引物识别形成SEQ ID NO：5核苷酸序列的部分的核苷酸序列。
32.一种制备权利要求1至6中任一项的草甘膦耐受性甜菜植株细胞的方法，其特征在于：该方法包括将农杆菌-CP4-EPSPS-基因稳定地掺入植物基因组中，并且所述细胞通过采用二元载体PV-BVGT08的农杆菌介导的转化技术进行制备，其中所述载体在左和右边界区之间包含下列序列：编码区，其由来自拟南芥EPSPS的叶绿体转运肽编码序列(称为ctp2)组成，该编码序列与CP4-EPSPS编码序列结合，且处于玄参花叶病毒启动子(pFMV)和来自豌豆的E9-3’转录终止序列的调控下。
33.一种制备权利要求22的植株细胞的组织的方法，其特征在于：该方法包括将农杆菌-CP4-EPSPS-基因稳定地掺入植物基因组中，并且所述组织通过采用二元载体PV-BVGT08的农杆菌介导的转化技术进行制备，其中所述载体在左和右边界区之间包含下列序列：编码区，其由来自拟南芥EPSPS的叶绿体转运肽编码序列(称为ctp2)组成，该编码序列与CP4-EPSPS编码序列结合，且处于玄参花叶病毒启动子(pFMV)和来自豌豆的E9-3’转录终止序列的调控下。
34.一种制备草甘膦耐受性甜菜植株的方法，
其中所述植物的特征在于：
a)甜菜植株获自保藏于NCIMB，Aberdeen，苏格兰，英国，保藏号为NCIMB 41158或NCIMB 41159的种子，和/或
b)采用含有SEQ ID NO：1核苷酸序列的第一引物和含有SEQ IDNO：2核苷酸序列的第二引物，使用聚合酶链式反应，可从所述甜菜植株、其部分或其种子的基因组DNA中扩增630-700bp的DNA片段，和/或
c)采用含有SEQ ID NO：3核苷酸序列的第一引物和含有SEQ IDNO：4核苷酸序列的第二引物，使用聚合酶链式反应，可从所述甜菜植株、其部分或其种子的基因组DNA中扩增3500-3900bp的DNA片段，和/或
d)采用含有SEQ ID NO：7核苷酸序列的第一引物和含有SEQ IDNO：8核苷酸序列的第二引物，使用聚合酶链式反应，可从所述甜菜植株、其部分或其种子的基因组DNA中扩增270-300bp的DNA片段，和/或
e)采用含有SEQ ID NO：9核苷酸序列的第一引物和含有SEQ IDNO：10核苷酸序列的第二引物，使用聚合酶链式反应，可从所述甜菜植株、其部分或其种子的基因组DNA中扩增710-790bp的DNA片段，和/或
f)采用含有SEQ ID NO：14核苷酸序列的第一引物和含有SEQID NO：16核苷酸序列的第二引物，使用聚合酶链式反应，可从所述甜菜植株、其部分或其种子的基因组DNA中扩增990-1100bp的DNA片段，
其特征在于，该方法包括将农杆菌-CP4-EPSPS-基因稳定地掺入植物基因组中，并且所述植株通过采用二元载体PV-BVGT08的农杆菌介导的转化技术进行制备，其中所述载体在左和右边界区之间包含下列序列：编码区，其由来自拟南芥EPSPS的叶绿体转运肽编码序列(称为ctp2)组成，该编码序列与CP4-EPSPS编码序列结合，且处于玄参花叶病毒启动子(pFMV)和来自豌豆的E9-3’转录终止序列的调控下。
35.根据权利要求34的方法，其特征在于，在b)中，可从所述甜菜植株、其部分或其种子的基因组DNA中扩增664bp的DNA片段。
36.根据权利要求34的方法，其特征在于，在c)中，可从所述甜菜植株、其部分或其种子的基因组DNA中扩增3706bp的DNA片段。
37.根据权利要求34的方法，其特征在于，在d)中，可从所述甜菜植株、其部分或其种子的基因组DNA中扩增288bp的DNA片段。
38.根据权利要求34的方法，其特征在于，在e)中，可从所述甜菜植株、其部分或其种子的基因组DNA中扩增751bp的DNA片段。
39.根据权利要求34的方法，其特征在于，在f)中，可从所述甜菜植株、其部分或其种子的基因组DNA中扩增1042bp的DNA片段。
40.一种制备草甘膦耐受性甜菜植株的种子的方法，
其中所述植物的特征在于：
a)甜菜植株获自保藏于NCIMB，Aberdeen，苏格兰，英国，保藏号为NCIMB 41158或NCIMB 41159的种子，和/或
b)采用含有SEQ ID NO：1核苷酸序列的第一引物和含有SEQ IDNO：2核苷酸序列的第二引物，使用聚合酶链式反应，可从所述甜菜植株、其部分或其种子的基因组DNA中扩增630-700bp的DNA片段，和/或
c)采用含有SEQ ID NO：3核苷酸序列的第一引物和含有SEQ IDNO：4核苷酸序列的第二引物，使用聚合酶链式反应，可从所述甜菜植株、其部分或其种子的基因组DNA中扩增3500-3900bp的DNA片段，和/或
d)采用含有SEQ ID NO：7核苷酸序列的第一引物和含有SEQ IDNO：8核苷酸序列的第二引物，使用聚合酶链式反应，可从所述甜菜植株、其部分或其种子的基因组DNA中扩增270-300bp的DNA片段，和/或
e)采用含有SEQ ID NO：9核苷酸序列的第一引物和含有SEQ IDNO：10核苷酸序列的第二引物，使用聚合酶链式反应，可从所述甜菜植株、其部分或其种子的基因组DNA中扩增710-790bp的DNA片段，和/或
f)采用含有SEQ ID NO：14核苷酸序列的第一引物和含有SEQID NO：16核苷酸序列的第二引物，使用聚合酶链式反应，可从所述甜菜植株、其部分或其种子的基因组DNA中扩增990-1100bp的DNA片段，
其特征在于，该方法包括将农杆菌-CP4-EPSPS-基因稳定地掺入植物基因组中，并且所述种子通过采用二元载体PV-BVGT08的农杆菌介导的转化技术进行制备，其中所述载体在左和右边界区之间包含下列序列：编码区，其由来自拟南芥EPSPS的叶绿体转运肽编码序列(称为ctp2)组成，该编码序列与CP4-EPSPS编码序列结合，且处于玄参花叶病毒启动子(pFMV)和来自豌豆的E9-3’转录终止序列的调控下。
41.根据权利要求40的方法，其特征在于，在b)中，可从所述甜菜植株、其部分或其种子的基因组DNA中扩增664bp的DNA片段。
42.根据权利要求40的方法，其特征在于，在c)中，可从所述甜菜植株、其部分或其种子的基因组DNA中扩增3706bp的DNA片段。
43.根据权利要求40的方法，其特征在于，在d)中，可从所述甜菜植株、其部分或其种子的基因组DNA中扩增288bp的DNA片段。
44.根据权利要求40的方法，其特征在于，在e)中，可从所述甜菜植株、其部分或其种子的基因组DNA中扩增751bp的DNA片段。
45.根据权利要求40的方法，其特征在于，在f)中，可从所述甜菜植株、其部分或其种子的基因组DNA中扩增1042bp的DNA片段。
CN2011100745010A 2003-02-20 2004-02-17 草甘膦耐受性甜菜 Pending CN102391988A (zh)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP03003866.5 2003-02-20
EP03003866 2003-02-20
US10/376763 2003-02-28
US10/376,763 US7335816B2 (en) 2003-02-28 2003-02-28 Glyphosate tolerant sugar beet

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN 200480004680 Division CN1751126A (zh) 2003-02-20 2004-02-17 草甘膦耐受性甜菜

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN102391988A true CN102391988A (zh) 2012-03-28

Family

ID=32910124

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2011100745010A Pending CN102391988A (zh) 2003-02-20 2004-02-17 草甘膦耐受性甜菜

Country Status (12)

Country Link
EP (1) EP1597373B1 (zh)
JP (1) JP5586122B2 (zh)
CN (1) CN102391988A (zh)
CA (1) CA2502981C (zh)
DK (1) DK1597373T3 (zh)
EA (1) EA011923B1 (zh)
ES (1) ES2391090T3 (zh)
PL (1) PL214713B1 (zh)
PT (1) PT1597373E (zh)
RS (1) RS53441B (zh)
SI (1) SI1597373T1 (zh)
WO (1) WO2004074492A1 (zh)

Families Citing this family (288)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PT1885176T (pt) 2005-05-27 2016-11-28 Monsanto Technology Llc Evento mon89788 de soja e métodos para a sua deteção
US9206137B2 (en) 2010-11-15 2015-12-08 Bayer Intellectual Property Gmbh N-Aryl pyrazole(thio)carboxamides
US9055743B2 (en) 2010-11-29 2015-06-16 Bayer Intellectual Property Gmbh Alpha, beta-unsaturated imines
KR20130123416A (ko) 2010-12-01 2013-11-12 바이엘 인텔렉쳐 프로퍼티 게엠베하 작물에서 선충류를 구제하고 수확량을 증가시키기 위한 플루오피람의 용도
EP2460407A1 (de) 2010-12-01 2012-06-06 Bayer CropScience AG Wirkstoffkombinationen umfassend Pyridylethylbenzamide und weitere Wirkstoffe
WO2012120105A1 (en) 2011-03-10 2012-09-13 Bayer Cropscience Ag Use of lipochito-oligosaccharide compounds for safeguarding seed safety of treated seeds
PT2688413T (pt) 2011-03-23 2018-03-27 Bayer Ip Gmbh Combinações de compostos ativos
EP2694494A1 (en) 2011-04-08 2014-02-12 Bayer Intellectual Property GmbH Fungicide hydroximoyl-tetrazole derivatives
US20140038823A1 (en) 2011-04-22 2014-02-06 Peter Dahmen Active compound combinations comprising a (thio)carboxamide derivative and a fungidical compound
WO2012171914A1 (en) 2011-06-14 2012-12-20 Bayer Intellectual Property Gmbh Use of an enaminocarbonyl compound in combination with a biological control agent
CN103717076B (zh) 2011-08-10 2016-04-13 拜耳知识产权股份有限公司 含有特定特特拉姆酸衍生物的活性化合物组合物
MX348003B (es) 2011-08-22 2017-03-08 Bayer Cropscience Nv Metodos y medios para modificar un genoma vegetal.
EP2561759A1 (en) 2011-08-26 2013-02-27 Bayer Cropscience AG Fluoroalkyl-substituted 2-amidobenzimidazoles and their effect on plant growth
CN103874681B (zh) 2011-09-12 2017-01-18 拜耳知识产权有限责任公司 杀真菌性4‑取代的‑3‑{苯基[(杂环基甲氧基)亚氨基]甲基}‑1,2,4‑噁二唑‑5(4h)‑酮衍生物
MX362112B (es) 2011-09-16 2019-01-07 Bayer Ip Gmbh Uso de fenilpirazolin-3-carboxilatos para mejorar el rendimiento de las plantas.
JP6138797B2 (ja) 2011-09-16 2017-05-31 バイエル・インテレクチュアル・プロパティ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツングＢａｙｅｒ Ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ ＧｍｂＨ 植物収量を向上させるためのアシルスルホンアミド類の使用
BR112014006208B1 (pt) 2011-09-16 2018-10-23 Bayer Intellectual Property Gmbh método de indução de respostas reguladoras do crescimento nas plantas aumentando o rendimento de plantas úteis ou plantas de cultura e composição de aumento do rendimento da planta compreendendo isoxadifen-etilo ou isoxadifeno e combinação de fungicidas
JP6255344B2 (ja) 2011-10-04 2017-12-27 バイエル・インテレクチュアル・プロパティ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツングＢａｙｅｒ Ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ ＧｍｂＨ サッカロピンデヒドロゲナーゼ遺伝子を阻害することによって真菌類及び卵菌類を防除するためのＲＮＡｉ
US9617286B2 (en) 2011-11-21 2017-04-11 Bayer Intellectual Property Gmbh Fungicide N-[(trisubstitutedsilyl)methyl]-carboxamide derivatives
JP2015504442A (ja) 2011-11-30 2015-02-12 バイエル・インテレクチユアル・プロパテイー・ゲー・エム・ベー・ハー 殺菌性ｎ−ビシクロアルキルおよびｎ−トリシクロアルキル（チオ）カルボキサミド誘導体
US9414595B2 (en) 2011-12-19 2016-08-16 Bayer Cropscience Ag Use of anthranilic acid diamide derivatives for pest control in transgenic crops
TWI558701B (zh) 2011-12-29 2016-11-21 拜耳知識產權公司 殺真菌之３－［（１，３－噻唑－４－基甲氧基亞胺）（苯基）甲基］－２－經取代之－１，２，４－二唑－５（２ｈ）－酮衍生物
TWI557120B (zh) 2011-12-29 2016-11-11 拜耳知識產權公司 殺真菌之３－［（吡啶－２－基甲氧基亞胺）（苯基）甲基］－２－經取代之－１，２，４－二唑－５（２ｈ）－酮衍生物
PT2806740T (pt) 2012-01-25 2018-04-16 Bayer Ip Gmbh Composição de compostos ativos que contém bacillus de fluopiram e agente de controlo biológico
EP2806739A1 (en) 2012-01-25 2014-12-03 Bayer Intellectual Property GmbH Active compound combinations containing fluopyram and biological control agent
PE20190346A1 (es) 2012-02-27 2019-03-07 Bayer Ip Gmbh Combinaciones de compuestos activos
WO2013139949A1 (en) 2012-03-23 2013-09-26 Bayer Intellectual Property Gmbh Compositions comprising a strigolactame compound for enhanced plant growth and yield
CN104245687B (zh) 2012-04-12 2016-12-14 拜尔农科股份公司 作为杀真菌剂的n-酰基-2-(环)烷基吡咯烷和哌啶
WO2013156559A1 (en) 2012-04-20 2013-10-24 Bayer Cropscience Ag N-cycloalkyl-n-[(heterocyclylphenyl)methylene]-(thio)carboxamide derivatives
EP2838363A1 (en) 2012-04-20 2015-02-25 Bayer Cropscience AG N-cycloalkyl-n-[(trisubstitutedsilylphenyl)methylene]-(thio)carboxamide derivatives
EP2662362A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG Pyrazole indanyl carboxamides
EP2662370A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG 5-Halogenopyrazole benzofuranyl carboxamides
EP2662363A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG 5-Halogenopyrazole biphenylcarboxamides
EP2662361A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG Pyrazol indanyl carboxamides
MX2014013489A (es) 2012-05-09 2015-02-12 Bayer Cropscience Ag 5-halogenopirazolindanil carboxamidas.
EP2662360A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG 5-Halogenopyrazole indanyl carboxamides
CN104768934B (zh) 2012-05-09 2017-11-28 拜耳农作物科学股份公司 吡唑茚满基甲酰胺
EP2662364A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG Pyrazole tetrahydronaphthyl carboxamides
AR091104A1 (es) 2012-05-22 2015-01-14 Bayer Cropscience Ag Combinaciones de compuestos activos que comprenden un derivado lipo-quitooligosacarido y un compuesto nematicida, insecticida o fungicida
CN107926985B (zh) 2012-05-30 2021-02-02 拜尔农作物科学股份公司 包含生物防治剂和杀真菌剂的组合物
WO2013178653A1 (en) 2012-05-30 2013-12-05 Bayer Cropscience Ag Composition comprising a biological control agent and a fungicide selected from inhibitors of amino acid or protein biosynthesis, inhibitors of atp production and inhibitors of the cell wall synthesis
US9364006B2 (en) 2012-05-30 2016-06-14 Bayer Cropscience Ag Composition comprising a biological control agent and a fungicide
EP2854549B1 (en) 2012-05-30 2018-08-01 Bayer Cropscience AG Composition comprising a biological control agent and fluopicolide
AR091197A1 (es) 2012-05-30 2015-01-21 Bayer Cropscience Ag Composicion que comprende un agente de control biologico y un fungicida
JP6285423B2 (ja) 2012-05-30 2018-02-28 バイエル・クロップサイエンス・アクチェンゲゼルシャフト 生物農薬および殺虫剤を含む組成物
US9386773B2 (en) 2012-05-30 2016-07-12 Bayer Cropscience Ag Compositions comprising a biological control agent and a fungicide from the group consisting of inhibitors of the respiratory chain at complex I or II
US9585399B2 (en) 2012-05-30 2017-03-07 Bayer Cropscience Ag Compositions comprising a biological control agent and an insecticide
WO2014019983A1 (en) 2012-07-31 2014-02-06 Bayer Cropscience Ag Compositions comprising a pesticidal terpene mixture and an insecticide
AR092564A1 (es) 2012-09-14 2015-04-22 Bayer Cropscience Lp Variantes de la enzima 4-hidroxifenil piruvato deoxigenasa (hppd) y metodos de uso para conferir tolerancia a herbicidas en plantas
EP2719280A1 (en) 2012-10-11 2014-04-16 Bayer CropScience AG Use of N-phenylethylpyrazole carboxamide derivatives or salts thereof for resistance management of phytopathogenic fungi
JP6153619B2 (ja) 2012-10-19 2017-06-28 バイエル・クロップサイエンス・アクチェンゲゼルシャフト カルボキサミド誘導体を含む活性化合物の組み合わせ
AU2013333846B2 (en) 2012-10-19 2017-04-20 Bayer Cropscience Ag Method for enhancing tolerance to abiotic stress in plants using carboxamide or thiocarboxamide derivatives
US20150259294A1 (en) 2012-10-19 2015-09-17 Bayer Cropscience Ag Method of plant growth promotion using carboxamide derivatives
EP2908641B1 (en) 2012-10-19 2018-01-10 Bayer Cropscience AG Method for treating plants against fungi resistant to fungicides using carboxamide or thiocarboxamide derivatives
EP2735231A1 (en) 2012-11-23 2014-05-28 Bayer CropScience AG Active compound combinations
EA030236B1 (ru) 2012-11-30 2018-07-31 Байер Кропсайенс Акциенгезельшафт Тройные фунгицидные и пестицидные смеси
BR112015012055B1 (pt) 2012-11-30 2021-01-12 Bayer Cropscience Ag composição fungicida ternária, seu processo de preparação, método para controlar um ou mais microrganismos nocivos, semente resistente a microrganismos nocivos e seu método de tratamento
WO2014083088A2 (en) 2012-11-30 2014-06-05 Bayer Cropscience Ag Binary fungicidal mixtures
EP2925137A1 (en) 2012-11-30 2015-10-07 Bayer CropScience AG Binary fungicidal or pesticidal mixture
US9510596B2 (en) 2012-11-30 2016-12-06 Bayer Cropscience Ag Binary pesticidal and fungicidal mixtures
ES2667555T3 (es) 2012-12-03 2018-05-11 Bayer Cropscience Ag Composición que comprende un agente de control biológico y un insecticida
WO2014086753A2 (en) 2012-12-03 2014-06-12 Bayer Cropscience Ag Composition comprising biological control agents
EP2925143A2 (en) 2012-12-03 2015-10-07 Bayer CropScience AG Composition comprising a biological control agent and an insecticide
BR112015012702A2 (pt) 2012-12-03 2017-07-11 Bayer Cropscience Ag composição que compreende um agente de controle biológico e um fungicida
ES2770775T3 (es) 2012-12-03 2020-07-03 Bayer Cropscience Ag Procedimiento para el control de plagas aplicando una combinación de Paecilomyces lilacinus y Fluopyram
US9867377B2 (en) 2012-12-03 2018-01-16 Bayer Cropscience Ag Composition comprising a biological control agent and an insecticide
CA2893080A1 (en) 2012-12-03 2014-06-12 Bayer Cropscience Ag Composition comprising a biological control agent and a fungicide
MX2015006946A (es) 2012-12-03 2015-09-08 Bayer Cropscience Ag Composicion que comprende agentes de control biologico.
AR093909A1 (es) 2012-12-12 2015-06-24 Bayer Cropscience Ag Uso de ingredientes activos para controlar nematodos en cultivos resistentes a nematodos
AR093996A1 (es) 2012-12-18 2015-07-01 Bayer Cropscience Ag Combinaciones bactericidas y fungicidas binarias
BR112015014307A2 (pt) 2012-12-19 2017-07-11 Bayer Cropscience Ag difluorometil-nicotínico- tetrahidronaftil carboxamidas
AU2014214628A1 (en) 2013-02-11 2015-08-13 Bayer Cropscience Lp Compositions comprising gougerotin and an insecticide
KR20150119023A (ko) 2013-02-11 2015-10-23 바이엘 크롭사이언스 엘피 고제로틴 및 살진균제를 포함하는 조성물
MX2015010259A (es) 2013-02-11 2015-10-29 Bayer Cropscience Lp Composiciones que comprenden un agente de control biologico basado en la cepa nrrl b-50550 de streptomyces microflavus y otro agente de control biologico.
AU2014225732B2 (en) 2013-03-07 2020-03-19 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Toxin genes and methods for their use
CN105555135B (zh) 2013-04-19 2018-06-15 拜耳作物科学股份公司 涉及邻苯二甲酰胺衍生物应用的用于改善对转基因植物生产潜能的利用的方法
JP2016519687A (ja) 2013-04-19 2016-07-07 バイエル・クロップサイエンス・アクチェンゲゼルシャフト バイナリー殺虫または農薬混合物
TW201507722A (zh) 2013-04-30 2015-03-01 Bayer Cropscience Ag 做為殺線蟲劑及殺體內寄生蟲劑的ｎ－（２－鹵素－２－苯乙基）－羧醯胺類
WO2014177514A1 (en) 2013-04-30 2014-11-06 Bayer Cropscience Ag Nematicidal n-substituted phenethylcarboxamides
US9770022B2 (en) 2013-06-26 2017-09-26 Bayer Cropscience Ag N-cycloalkyl-N-[(bicyclylphenyl)methylene]-(thio)carboxamide derivatives
UA120701C2 (uk) 2013-12-05 2020-01-27 Байєр Кропсайєнс Акцієнгезелльшафт N-циклоалкіл-n-{[2-(1-заміщений циклоалкіл)феніл]метилен}-(тіо)карбоксамідні похідні
TW201607929A (zh) 2013-12-05 2016-03-01 拜耳作物科學公司 Ｎ－環烷基－ｎ－｛［２－（１－經取代環烷基）苯基］亞甲基｝－（硫代）甲醯胺衍生物
EP2885970A1 (en) 2013-12-21 2015-06-24 Bayer CropScience AG Fungicide compositions comprising compound I, at least one succinate dehydrogenase (SDH) inhibitor and at least one triazole fungicide
BR112016020889B1 (pt) 2014-03-11 2022-10-04 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Molécula de ácido nucleico recombinante, célula hospedeira bacteriana, proteína hppd recombinante, uso do ácido nucleico recombinante e produto de base
WO2015160620A1 (en) 2014-04-16 2015-10-22 Bayer Cropscience Lp Compositions comprising ningnanmycin and an insecticide
WO2015160618A1 (en) 2014-04-16 2015-10-22 Bayer Cropscience Lp Compositions comprising ningnanmycin and a biological control agent
WO2015160619A1 (en) 2014-04-16 2015-10-22 Bayer Cropscience Lp Compositions comprising ningnanmycin and a fungicide
CN107531676A (zh) 2015-04-13 2018-01-02 拜耳作物科学股份公司 N‑环烷基‑n‑(双杂环基亚乙基)‑(硫代)羧酰胺衍生物
EP3097782A1 (en) 2015-05-29 2016-11-30 Bayer CropScience Aktiengesellschaft Methods for controlling phytopathogenic nematodes by combination of fluopyram and biological control agents
KR20180043838A (ko) 2015-09-11 2018-04-30 바이엘 크롭사이언스 악티엔게젤샤프트 Ｈｐｐｄ 변이체 및 사용 방법
DE102016106656A1 (de) 2016-04-12 2017-10-12 Kws Saat Se Kernkodierte männliche Sterilität durch Mutation in Cytochrom P450 Oxidase
DE102016015741A1 (de) 2016-04-12 2017-11-30 Kws Saat Se Kernkodierte männliche Sterilität durch Mutation in Cytochrom P450 Oxidase
WO2017198455A2 (en) * 2016-05-17 2017-11-23 Bayer Cropscience Nv Method for increasing yield in beta spp. plants
WO2018019676A1 (en) 2016-07-29 2018-02-01 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Active compound combinations and methods to protect the propagation material of plants
CA3043493A1 (en) 2016-11-23 2018-05-31 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Axmi669 and axmi991 toxin genes and methods for their use
BR112019011293A2 (pt) 2016-12-19 2019-10-08 Basf Se compostos de fórmula i, intermediários, composição agroquímica, uso e método para combater fungos nocivos fitopatogênicos
US11286498B2 (en) 2017-01-18 2022-03-29 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Use of BP005 for the control of plant pathogens
BR112019014727A2 (pt) 2017-01-18 2020-04-07 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC molécula de ácido nucleico, vector, célula, planta, semente, polipeptídeo, composição, métodos para o controle de uma população de pragas, para matar uma praga, para produzir um polipeptídeo, para proteger uma planta e para aumentar o rendimento em uma planta, uso do ácido nucleico e produto de base
BR112019015338B1 (pt) 2017-02-21 2023-03-14 Basf Se Compostos de fórmula i, composição agroquímica, semente revestida, uso dos compostos e método para combater fungos nocivos fitopatogênicos
BR112019018056A2 (pt) 2017-03-07 2020-08-11 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC molécula de ácido nucleico recombinante, cassete de expressão, célula hospedeira, plantas, sementes transgênicas, polipeptídeo recombinante, métodos para conferir tolerância e para controlar ervas daninhas, produto de utilidade e uso da sequência de nucleotídeos
US20200045974A1 (en) 2017-04-07 2020-02-13 Basf Se Substituted Oxadiazoles for Combating Phytopathogenic Fungi
WO2018188962A1 (en) 2017-04-11 2018-10-18 Basf Se Substituted oxadiazoles for combating phytopathogenic fungi
CA3061009A1 (en) 2017-04-21 2018-10-25 Bayer Cropscience Lp Method of improving crop safety
CN110621669A (zh) 2017-05-04 2019-12-27 巴斯夫欧洲公司 防除植物病原性真菌的取代5-卤代烷基-5-羟基异噁唑类
WO2018202491A1 (en) 2017-05-04 2018-11-08 Basf Se Substituted trifluoromethyloxadiazoles for combating phytopathogenic fungi
WO2018219797A1 (en) 2017-06-02 2018-12-06 Basf Se Substituted oxadiazoles for combating phytopathogenic fungi
EP3642187A1 (en) 2017-06-19 2020-04-29 Basf Se 2-[[5-(trifluoromethyl)-1,2,4-oxadiazol-3-yl]aryloxy](thio)acetamides for combating phytopathogenic fungi
WO2019025250A1 (en) 2017-08-04 2019-02-07 Basf Se SUBSTITUTED TRIFLUOROMETHYLOXADIAZOLES FOR COMBATING PHYTOPATHOGENIC FUNGI
WO2019038042A1 (en) 2017-08-21 2019-02-28 Basf Se SUBSTITUTED TRIFLUOROMETHYLOXADIAZOLES FOR THE CONTROL OF PHYTOPATHOGENIC FUNGI
BR112020004441B1 (pt) 2017-09-18 2024-01-16 Basf Se Compostos da fórmula i, composição agroquímica, semente revestida, uso de compostos e método não-terapêutico de combate de fungos
WO2019068811A1 (en) 2017-10-06 2019-04-11 Bayer Aktiengesellschaft COMPOSITIONS COMPRISING FLUOPYRAM AND TIOXAZAFENE
WO2019083808A1 (en) 2017-10-24 2019-05-02 Basf Se IMPROVING HERBICIDE TOLERANCE AGAINST HPPD INHIBITORS BY REGULATION OF PUTATIVE REDUCED 4-HYDROXYPHENYLPYRUVATE REDUCES IN SOYBEANS
BR112020008092A2 (pt) 2017-10-24 2020-09-15 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC método para conferir tolerância a um herbicida e planta de soja transgênica
US11147275B2 (en) 2017-11-23 2021-10-19 Basf Se Substituted trifluoromethyloxadiazoles for combating phytopathogenic fungi
WO2019108982A1 (en) 2017-11-30 2019-06-06 Boragen, Inc. Benzoxaborole compounds and formulations thereof
WO2019121143A1 (en) 2017-12-20 2019-06-27 Basf Se Substituted cyclopropyl derivatives
WO2019137995A1 (en) 2018-01-11 2019-07-18 Basf Se Novel pyridazine compounds for controlling invertebrate pests
US20200383333A1 (en) 2018-01-29 2020-12-10 BASF Agro B.V. New agrochemical formulations
WO2019154665A1 (en) 2018-02-07 2019-08-15 Basf Se New pyridine carboxamides
EP3749660A1 (en) 2018-02-07 2020-12-16 Basf Se New pyridine carboxamides
US11917995B2 (en) 2018-03-01 2024-03-05 BASF Agro B.V. Fungicidal compositions of mefentrifluconazole
WO2019219464A1 (en) 2018-05-15 2019-11-21 Basf Se Substituted trifluoromethyloxadiazoles for combating phytopathogenic fungi
WO2019224092A1 (en) 2018-05-22 2019-11-28 Basf Se Pesticidally active c15-derivatives of ginkgolides
CN112513033A (zh) 2018-06-04 2021-03-16 拜耳公司 除草活性的双环苯甲酰基吡唑
EP3836938A4 (en) 2018-08-18 2022-05-11 Boragen, Inc. SOLID FORMS OF SUBSTITUTED BENZOXAZOLE AND COMPOSITIONS THEREOF
EP3613736A1 (en) 2018-08-22 2020-02-26 Basf Se Substituted glutarimide derivatives
EP3628160A1 (en) 2018-09-25 2020-04-01 KWS SAAT SE & Co. KGaA Use of glyphosate herbicide for controlling unwanted vegetation in beta vulgaris growing areas
EP3628738A1 (en) 2018-09-25 2020-04-01 KWS SAAT SE & Co. KGaA Method for controlling weed beets and other weeds
EP3628158A1 (en) 2018-09-28 2020-04-01 Basf Se Pesticidal mixture comprising a mesoionic compound and a biopesticide
US20210347777A1 (en) 2018-10-23 2021-11-11 Basf Se Tricyclic pesticidal compounds
EP3643705A1 (en) 2018-10-24 2020-04-29 Basf Se Pesticidal compounds
EP3670501A1 (en) 2018-12-17 2020-06-24 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole compounds as fungicides
MA54689B1 (fr) 2019-01-11 2023-07-31 Basf Se Formes cristallines de 1-(1,2-diméthylpropyl)-n-éthyl-5-méthyl-n-pyridazine-4-yl-pyrazole-4-carboxamide
EP3696177A1 (en) 2019-02-12 2020-08-19 Basf Se Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests
US20220240508A1 (en) 2019-05-10 2022-08-04 Bayer Cropscience Lp Active compound combinations
CN113923987B (zh) 2019-05-29 2024-10-01 巴斯夫欧洲公司 用于防除动物害虫的介离子咪唑鎓化合物和衍生物
EP3769623A1 (en) 2019-07-22 2021-01-27 Basf Se Mesoionic imidazolium compounds and derivatives for combating animal pests
WO2020244970A1 (en) 2019-06-06 2020-12-10 Basf Se New carbocyclic pyridine carboxamides
CN113993847A (zh) 2019-06-06 2022-01-28 巴斯夫欧洲公司 杀真菌的n-(吡啶-3-基)羧酰胺类
WO2020244969A1 (en) 2019-06-06 2020-12-10 Basf Se Pyridine derivatives and their use as fungicides
EP3766879A1 (en) 2019-07-19 2021-01-20 Basf Se Pesticidal pyrazole derivatives
AU2020318591A1 (en) 2019-07-22 2022-02-17 Bayer Aktiengesellschaft 5-amino substituted pyrazoles and triazoles as pest control agents
EP4003974A1 (en) 2019-07-23 2022-06-01 Bayer Aktiengesellschaft Novel heteroaryl-triazole compounds as pesticides
TW202118391A (zh) 2019-07-23 2021-05-16 德商拜耳廠股份有限公司 作為殺蟲劑之新穎雜芳基三唑化合物（二）
CA3149206A1 (en) 2019-08-01 2021-02-04 Bayer Cropscience Lp Method of improving cold stress tolerance and crop safety
EP3701796A1 (en) 2019-08-08 2020-09-02 Bayer AG Active compound combinations
WO2021058659A1 (en) 2019-09-26 2021-04-01 Bayer Aktiengesellschaft Rnai-mediated pest control
WO2021063736A1 (en) 2019-10-02 2021-04-08 Basf Se Bicyclic pyridine derivatives
WO2021063735A1 (en) 2019-10-02 2021-04-08 Basf Se New bicyclic pyridine derivatives
CA3156302A1 (en) 2019-10-02 2021-04-08 Bayer Aktiengesellschaft COMBINATIONS OF ACTIVE COMPOUNDS INCLUDING FATTY ACIDS
MX2022004367A (es) 2019-10-09 2022-05-06 Bayer Ag Nuevos compuestos de heteroarilo-triazol como pesticidas.
CN114728928A (zh) 2019-10-09 2022-07-08 拜耳公司 作为农药的新的杂芳基三唑化合物
US20220380318A1 (en) 2019-11-07 2022-12-01 Bayer Aktiengesellschaft Substituted sulfonyl amides for controlling animal pests
WO2021097162A1 (en) 2019-11-13 2021-05-20 Bayer Cropscience Lp Beneficial combinations with paenibacillus
WO2021099271A1 (en) 2019-11-18 2021-05-27 Bayer Aktiengesellschaft Active compound combinations comprising fatty acids
TW202134226A (zh) 2019-11-18 2021-09-16 德商拜耳廠股份有限公司 作為殺蟲劑之新穎雜芳基-三唑化合物
TW202136248A (zh) 2019-11-25 2021-10-01 德商拜耳廠股份有限公司 作為殺蟲劑之新穎雜芳基-三唑化合物
MX2022009333A (es) 2020-01-31 2022-10-07 Pairwise Plants Services Inc Supresion de la respuesta de evasion de la sombra en las plantas.
JP2023513624A (ja) 2020-02-18 2023-03-31 バイエル・アクチエンゲゼルシヤフト 殺有害生物剤としてのヘテロアリール－トリアゾール化合物
EP3708565A1 (en) 2020-03-04 2020-09-16 Bayer AG Pyrimidinyloxyphenylamidines and the use thereof as fungicides
WO2021209490A1 (en) 2020-04-16 2021-10-21 Bayer Aktiengesellschaft Cyclaminephenylaminoquinolines as fungicides
EP4135512A1 (en) 2020-04-16 2023-02-22 Pairwise Plants Services, Inc. Methods for controlling meristem size for crop improvement
AU2021260029A1 (en) 2020-04-21 2022-11-24 Bayer Aktiengesellschaft 2-(het)aryl-substituted condensed heterocyclic derivatives as pest control agents
EP3903584A1 (en) 2020-04-28 2021-11-03 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors iv
BR112022021631A2 (pt) 2020-04-28 2022-12-06 Basf Se Compostos, composição, métodos para combater ou controlar pragas invertebradas, para proteger plantas em crescimento e para tratar ou proteger um animal, semente e uso de um composto
EP3903582A1 (en) 2020-04-28 2021-11-03 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors ii
EP3903583A1 (en) 2020-04-28 2021-11-03 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors iii
EP3903581A1 (en) 2020-04-28 2021-11-03 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors i
TW202208347A (zh) 2020-05-06 2022-03-01 德商拜耳廠股份有限公司 作為殺蟲劑之新穎雜芳基三唑化合物
US20230348392A1 (en) 2020-05-06 2023-11-02 Bayer Aktiengesellschaft Pyridine (thio)amides as fungicidal compounds
US20230180756A1 (en) 2020-05-12 2023-06-15 Bayer Aktiengesellschaft Triazine and pyrimidine (thio)amides as fungicidal compounds
EP3909950A1 (en) 2020-05-13 2021-11-17 Basf Se Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests
EP4153566A1 (en) 2020-05-19 2023-03-29 Bayer CropScience Aktiengesellschaft Azabicyclic(thio)amides as fungicidal compounds
CN116096230A (zh) 2020-06-02 2023-05-09 成对植物服务股份有限公司 控制分生组织大小以改良作物的方法
US20230278994A1 (en) 2020-06-04 2023-09-07 Bayer Aktiengesellschaft Heterocyclyl pyrimidines and triazines as novel fungicides
CN116057056A (zh) 2020-06-10 2023-05-02 拜耳公司 作为杀真菌剂的氮杂双环取代的杂环化合物
WO2021249800A1 (en) 2020-06-10 2021-12-16 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole compounds as fungicides
EP3945089A1 (en) 2020-07-31 2022-02-02 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors v
CA3186972A1 (en) 2020-06-17 2021-12-23 Pairwise Plants Services, Inc. Methods for controlling meristem size for crop improvement
BR112022025344A2 (pt) 2020-06-18 2023-01-03 Bayer Ag Composição para uso na agricultura
JP2023532224A (ja) 2020-06-18 2023-07-27 バイエル、アクチエンゲゼルシャフト 新規殺菌剤としてのオキサジアジニルピリダジン
UY39276A (es) 2020-06-19 2022-01-31 Bayer Ag Uso de compuestos de 1,3,4–oxadiazol–2–ilpirimidina para controlar microorganismos fitopatógenos, métodos de uso y composiciones.
BR112022025692A2 (pt) 2020-06-19 2023-02-28 Bayer Ag 1,3,4-oxadiazóis e seus derivados como fungicidas
BR112022025710A2 (pt) 2020-06-19 2023-03-07 Bayer Ag 1,3,4-oxadiazol pirimidinas e 1,3,4-oxadiazol piridinas como fungicidas
UY39275A (es) 2020-06-19 2022-01-31 Bayer Ag 1,3,4-oxadiazol pirimidinas como fungicidas, procesos e intermediarios para su preparación, métodos de uso y usos de los mismos
EP3929189A1 (en) 2020-06-25 2021-12-29 Bayer Animal Health GmbH Novel heteroaryl-substituted pyrazine derivatives as pesticides
BR112022026904A2 (pt) 2020-07-02 2023-01-24 Bayer Ag Derivados de heterocicleno como agentes de controle de pragas
EP3960727A1 (en) 2020-08-28 2022-03-02 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors vi
EP3939961A1 (en) 2020-07-16 2022-01-19 Basf Se Strobilurin type compounds and their use for combating phytopathogenic fungi
WO2022017836A1 (en) 2020-07-20 2022-01-27 BASF Agro B.V. Fungicidal compositions comprising (r)-2-[4-(4-chlorophenoxy)-2-(trifluoromethyl)phenyl]-1- (1,2,4-triazol-1-yl)propan-2-ol
EP3970494A1 (en) 2020-09-21 2022-03-23 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors viii
WO2022033991A1 (de) 2020-08-13 2022-02-17 Bayer Aktiengesellschaft 5-amino substituierte triazole als schädlingsbekämpfungsmittel
KR20230058455A (ko) 2020-08-31 2023-05-03 바스프 에스이 식물 수확량 개선
WO2022053453A1 (de) 2020-09-09 2022-03-17 Bayer Aktiengesellschaft Azolcarboxamide als schädlingsbekämpfungsmittel
WO2022058327A1 (en) 2020-09-15 2022-03-24 Bayer Aktiengesellschaft Substituted ureas and derivatives as new antifungal agents
EP3974414A1 (de) 2020-09-25 2022-03-30 Bayer AG 5-amino substituierte pyrazole und triazole als schädlingsbekämpfungsmittel
CN116209355A (zh) 2020-10-27 2023-06-02 巴斯夫农业公司 包含氯氟醚菌唑的组合物
WO2022090071A1 (en) 2020-11-02 2022-05-05 Basf Se Use of mefenpyr-diethyl for controlling phytopathogenic fungi
WO2022090069A1 (en) 2020-11-02 2022-05-05 Basf Se Compositions comprising mefenpyr-diethyl
WO2022106304A1 (en) 2020-11-23 2022-05-27 BASF Agro B.V. Compositions comprising mefentrifluconazole
JP2024501464A (ja) 2020-12-14 2024-01-12 ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア スルホキシミン系殺虫剤
EP3915971A1 (en) 2020-12-16 2021-12-01 Bayer Aktiengesellschaft Phenyl-s(o)n-phenylamidines and the use thereof as fungicides
WO2022129196A1 (en) 2020-12-18 2022-06-23 Bayer Aktiengesellschaft Heterobicycle substituted 1,2,4-oxadiazoles as fungicides
WO2022129190A1 (en) 2020-12-18 2022-06-23 Bayer Aktiengesellschaft (hetero)aryl substituted 1,2,4-oxadiazoles as fungicides
WO2022129188A1 (en) 2020-12-18 2022-06-23 Bayer Aktiengesellschaft 1,2,4-oxadiazol-3-yl pyrimidines as fungicides
CN116669554A (zh) 2020-12-18 2023-08-29 拜耳公司 使用Dhodh抑制剂来防治作物中的抗性植物病原性真菌
EP4036083A1 (de) 2021-02-02 2022-08-03 Bayer Aktiengesellschaft 5-oxy substituierte hetereozyklen, als schädlingsbekämpfungsmittel
EP4043444A1 (en) 2021-02-11 2022-08-17 Basf Se Substituted isoxazoline derivatives
BR112023015909A2 (pt) 2021-02-11 2023-11-21 Monsanto Technology Llc Métodos e composições para modificar níveis de citocinina oxidase em plantas
US20220380792A1 (en) 2021-02-25 2022-12-01 Pairwise Plants Services, Inc Methods and compositions for modifying root architecture in plants
BR112023019788A2 (pt) 2021-03-30 2023-11-07 Bayer Ag 3-(hetero)aril-5-clorodifluorometil-1,2,4-oxadiazol como fungicida
WO2022207494A1 (en) 2021-03-30 2022-10-06 Bayer Aktiengesellschaft 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide
BR112023022818A2 (pt) 2021-05-03 2024-01-16 Basf Se Líquido de pulverização, mistura de aditivo, kit de pelo menos duas partes, método para controlar fungos fitopatogênicos ou bactérias fitopatogênicas, e, usos de uma mistura de aditivo, de um líquido de pulverização e de um kit de pelo menos duas partes
EP4334315A1 (en) 2021-05-06 2024-03-13 Bayer Aktiengesellschaft Alkylamide substituted, annulated imidazoles and use thereof as insecticides
TW202311258A (zh) 2021-05-12 2023-03-16 德商拜耳廠股份有限公司 作為除蟲劑之經2-(雜)芳基取代之稠合雜環衍生物
EP4091451A1 (en) 2021-05-17 2022-11-23 BASF Agro B.V. Compositions comprising mefentrifluconazole
KR20240008856A (ko) 2021-05-18 2024-01-19 바스프 에스이 살진균제로서의 신규한 치환된 피리딘
BR112023023989A2 (pt) 2021-05-18 2024-01-30 Basf Se Compostos, composição, método para combater fungos fitopatogênicos e semente
CN117355518A (zh) 2021-05-18 2024-01-05 巴斯夫欧洲公司 用作杀真菌剂的新型取代吡啶类
BR112023026264A2 (pt) 2021-06-14 2024-03-05 Basf Se Métodos para melhorar o rendimento produzido por uma planta, para produzir uma planta híbrida e para melhorar o rendimento sinérgico, método de cultivo para melhorar o rendimento produzido por uma planta e uso de uma combinação
CN117897050A (zh) 2021-06-17 2024-04-16 成对植物服务股份有限公司 大豆中生长调节因子家族转录因子的修饰
UY39827A (es) 2021-06-24 2023-01-31 Pairwise Plants Services Inc Modificación de genes de ubiquitina ligasa e3 hect para mejorar los rasgos de rendimiento
CA3224982A1 (en) 2021-07-01 2023-01-05 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for enhancing root system development
EP4119547A1 (en) 2021-07-12 2023-01-18 Basf Se Triazole compounds for the control of invertebrate pests
CN117794908A (zh) 2021-08-02 2024-03-29 巴斯夫欧洲公司 (3-喹啉基)-喹唑啉
AU2022321882A1 (en) 2021-08-02 2024-02-15 Basf Se (3-pirydyl)-quinazoline
US20230078990A1 (en) 2021-08-12 2023-03-16 Pairwise Plants Services, Inc. Modification of brassinosteroid receptor genes to improve yield traits
AU2022326207A1 (en) 2021-08-13 2024-02-15 Bayer Aktiengesellschaft Active compound combinations and fungicide compositions comprising those
WO2023023496A1 (en) 2021-08-17 2023-02-23 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for modifying cytokinin receptor histidine kinase genes in plants
EP4140986A1 (en) 2021-08-23 2023-03-01 Basf Se Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests
WO2023025682A1 (en) 2021-08-25 2023-03-02 Bayer Aktiengesellschaft Novel pyrazinyl-triazole compounds as pesticides
EP4140995A1 (en) 2021-08-27 2023-03-01 Basf Se Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests
WO2023034731A1 (en) 2021-08-30 2023-03-09 Pairwise Plants Services, Inc. Modification of ubiquitin binding peptidase genes in plants for yield trait improvement
WO2023031885A1 (en) 2021-09-02 2023-03-09 SESVanderHave NV Methods and compositions for ppo herbicide tolerance
AR126938A1 (es) 2021-09-02 2023-11-29 Pairwise Plants Services Inc Métodos y composiciones para mejorar la arquitectura de las plantas y los rasgos de rendimiento
EP4144739A1 (de) 2021-09-02 2023-03-08 Bayer Aktiengesellschaft Anellierte pyrazole als schädlingsbekämpfungsmittel
EP4151631A1 (en) 2021-09-20 2023-03-22 Basf Se Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests
US20230087522A1 (en) 2021-09-21 2023-03-23 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for reducing pod shatter in canola
EP4413127A1 (en) 2021-10-04 2024-08-14 Pairwise Plants Services, Inc. Methods for improving floret fertility and seed yield
CN118302434A (zh) 2021-10-07 2024-07-05 成对植物服务股份有限公司 用于改善小花育性和种子产量的方法
WO2023072670A1 (en) 2021-10-28 2023-05-04 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors x
WO2023072671A1 (en) 2021-10-28 2023-05-04 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors ix
CN118541353A (zh) 2021-11-03 2024-08-23 拜耳公司 作为杀真菌化合物的双(杂)芳基硫醚(硫代)酰胺
CN118317956A (zh) 2021-11-30 2024-07-09 拜耳公司 作为杀真菌化合物的双(杂)芳基硫醚噁二嗪
EP4194453A1 (en) 2021-12-08 2023-06-14 Basf Se Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests
AR127904A1 (es) 2021-12-09 2024-03-06 Pairwise Plants Services Inc Métodos para mejorar la fertilidad de floretes y el rendimiento de semillas
EP4198033A1 (en) 2021-12-14 2023-06-21 Basf Se Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests
EP4198023A1 (en) 2021-12-16 2023-06-21 Basf Se Pesticidally active thiosemicarbazone compounds
AR128372A1 (es) 2022-01-31 2024-04-24 Pairwise Plants Services Inc Supresión de la respuesta de evitación de la sombra en las plantas
WO2023148028A1 (en) 2022-02-01 2023-08-10 Globachem Nv Methods and compositions for controlling pests
WO2023156402A1 (en) 2022-02-17 2023-08-24 Basf Se Pesticidally active thiosemicarbazone compounds
CN118715324A (zh) 2022-02-18 2024-09-27 巴斯夫欧洲公司 香豆素合成及其用途
EP4238971A1 (en) 2022-03-02 2023-09-06 Basf Se Substituted isoxazoline derivatives
US20240327858A1 (en) 2022-03-02 2024-10-03 Pairwise Plants Services, Inc. Modification of brassinosteroid receptor genes to improve yield traits
WO2023192838A1 (en) 2022-03-31 2023-10-05 Pairwise Plants Services, Inc. Early flowering rosaceae plants with improved characteristics
US20230357789A1 (en) 2022-04-07 2023-11-09 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for improving resistance to fusarium head blight
WO2023205714A1 (en) 2022-04-21 2023-10-26 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for improving yield traits
US20230348922A1 (en) 2022-05-02 2023-11-02 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for enhancing yield and disease resistance
WO2023213626A1 (en) 2022-05-03 2023-11-09 Bayer Aktiengesellschaft Use of (5s)-3-[3-(3-chloro-2-fluorophenoxy)-6-methylpyridazin-4-yl]-5-(2-chloro-4-methylbenzyl)-5,6-dihydro-4h-1,2,4-oxadiazine for controlling unwanted microorganisms
WO2023213670A1 (en) 2022-05-03 2023-11-09 Bayer Aktiengesellschaft Crystalline forms of (5s)-3-[3-(3-chloro-2-fluorophenoxy)-6-methylpyridazin-4-yl]-5-(2-chloro-4-methylbenzyl)-5,6-dihydro-4h-1,2,4-oxadiazine
US20230416767A1 (en) 2022-05-05 2023-12-28 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for modifying root architecture and/or improving plant yield traits
AR129709A1 (es) 2022-06-27 2024-09-18 Pairwise Plants Services Inc Métodos y composiciones para modificar el escape a la sombra en plantas
AR129748A1 (es) 2022-06-29 2024-09-25 Pairwise Plants Services Inc Métodos y composiciones para controlar el tamaño del meristemo para el mejoramiento de cultivos
WO2024006791A1 (en) 2022-06-29 2024-01-04 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for controlling meristem size for crop improvement
WO2024028243A1 (en) 2022-08-02 2024-02-08 Basf Se Pyrazolo pesticidal compounds
US20240043857A1 (en) 2022-08-04 2024-02-08 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for improving yield traits
US20240060081A1 (en) 2022-08-11 2024-02-22 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for controlling meristem size for crop improvement
WO2024047605A1 (en) 2022-09-01 2024-03-07 SESVanderHave NV Methods and compositions for ppo herbicide tolerance
WO2024054880A1 (en) 2022-09-08 2024-03-14 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for improving yield characteristics in plants
EP4342885A1 (en) 2022-09-20 2024-03-27 Basf Se N-(3-(aminomethyl)-phenyl)-5-(4-phenyl)-5-(trifluoromethyl)-4,5-dihydroisoxazol-3-amine derivatives and similar compounds as pesticides
WO2024068519A1 (en) 2022-09-28 2024-04-04 Bayer Aktiengesellschaft 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide
WO2024068518A1 (en) 2022-09-28 2024-04-04 Bayer Aktiengesellschaft 3-heteroaryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide
WO2024068520A1 (en) 2022-09-28 2024-04-04 Bayer Aktiengesellschaft 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide
EP4295688A1 (en) 2022-09-28 2023-12-27 Bayer Aktiengesellschaft Active compound combination
WO2024068517A1 (en) 2022-09-28 2024-04-04 Bayer Aktiengesellschaft 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide
EP4361126A1 (en) 2022-10-24 2024-05-01 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors xv
WO2024104818A1 (en) 2022-11-16 2024-05-23 Basf Se Substituted benzodiazepines as fungicides
WO2024104815A1 (en) 2022-11-16 2024-05-23 Basf Se Substituted benzodiazepines as fungicides
WO2024104822A1 (en) 2022-11-16 2024-05-23 Basf Se Substituted tetrahydrobenzodiazepine as fungicides
WO2024104823A1 (en) 2022-11-16 2024-05-23 Basf Se New substituted tetrahydrobenzoxazepine
EP4385326A1 (en) 2022-12-15 2024-06-19 Kimitec Biogorup Biopesticide composition and method for controlling and treating broad spectrum of pests and diseases in plants
WO2024137438A2 (en) 2022-12-19 2024-06-27 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Insect toxin genes and methods for their use
EP4389210A1 (en) 2022-12-21 2024-06-26 Basf Se Heteroaryl compounds for the control of invertebrate pests
WO2024165343A1 (en) 2023-02-08 2024-08-15 Basf Se New substituted quinoline compounds for combatitng phytopathogenic fungi
WO2024173622A1 (en) 2023-02-16 2024-08-22 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for modifying shade avoidance in plants
WO2024182658A1 (en) 2023-03-02 2024-09-06 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for modifying shade avoidance in plants
WO2024186950A1 (en) 2023-03-09 2024-09-12 Pairwise Plants Services, Inc. Modification of brassinosteroid signaling pathway genes for improving yield traits in plants
WO2024194038A1 (en) 2023-03-17 2024-09-26 Basf Se Substituted pyridyl/pyrazidyl dihydrobenzothiazepine compounds for combatting phytopathogenic fungi

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PL197872B1 (pl) * 1997-10-31 2008-05-30 Syngenta Participations Ag Roślina buraka cukrowego wyrażająca aktywność enzymu cp4/epsps oraz jej rośliny potomne, transgeniczne nasiona rośliny buraka cukrowego wyrażające aktywność enzymu cp4/epsps oraz sposób wytwarzania transgenicznych roślin

Also Published As

Publication number Publication date
ES2391090T3 (es) 2012-11-21
PL377934A1 (pl) 2006-02-20
DK1597373T3 (da) 2012-10-15
EP1597373B1 (de) 2012-07-18
JP2006518205A (ja) 2006-08-10
JP5586122B2 (ja) 2014-09-10
PL214713B1 (pl) 2013-09-30
EA011923B1 (ru) 2009-06-30
SI1597373T1 (sl) 2012-11-30
EA200501096A1 (ru) 2006-02-24
EP1597373A1 (de) 2005-11-23
CA2502981A1 (en) 2004-09-02
CA2502981C (en) 2012-09-11
PT1597373E (pt) 2012-09-27
RS20050373A (en) 2007-06-04
WO2004074492A1 (de) 2004-09-02
RS53441B (en) 2014-12-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102391988A (zh) 草甘膦耐受性甜菜
US7335816B2 (en) Glyphosate tolerant sugar beet
CN100523190C (zh) 除草剂抗性的棉花植物及生产和鉴定其的方法
KR101813722B1 (ko) 벼의 17314 트랜스제닉 사건 및 이의 이용 방법
CA2742005C (en) Transgenic brassica event mon 88302 and methods of use thereof
EP2247736B1 (en) Corn plant event mon87460 and compositions and methods for detection thereof
EP1708560B1 (en) Corn plant mon88017 and compositions and methods for detection thereof
USH2258H1 (en) Development of novel germplasm using segregates from transgenic crosses
CN106086010B (zh) 用于检测除草剂耐受性大豆植物dbn9008的核酸序列及其检测方法
CN104878094B (zh) 用于检测除草剂耐受性玉米植物dbn9888的核酸序列及其检测方法
CN106086011B (zh) 用于检测除草剂耐受性大豆植物dbn9004的核酸序列及其检测方法
CN104830845B (zh) 用于检测除草剂耐受性玉米植物dbn9878的核酸序列及其检测方法
WO2006130436A2 (en) Soybean event mon89788 and methods for detection thereof
CN105112520A (zh) 原种事件a5547-127以及在生物样品中鉴定此类事件的方法和试剂盒
CN101413028A (zh) 棉花事件mon15985以及检测它的组合物和方法
CN104830846B (zh) 用于检测除草剂耐受性玉米植物dbn9898的核酸序列及其检测方法
CA2810180A1 (en) Brassica gat event dp-073496-4 and compositions and methods for the identification and/or detection thereof
CN104878096B (zh) 用于检测除草剂耐受性玉米植物dbn9868的核酸序列及其检测方法
CN113166775A (zh) 控制杂草甜菜和其它杂草的方法
CN104878095B (zh) 用于检测除草剂耐受性玉米植物dbn9858的核酸序列及其检测方法
CN106119245B (zh) 用于检测除草剂耐受性大豆植物dbn9001的核酸序列及其检测方法
CN104878090B (zh) 用于检测除草剂耐受性玉米植物dbn9877的核酸序列及其检测方法
CN113163768A (zh) 草甘膦除草剂在甜菜生长区域中控制不需要的植被的用途
CN102876690A (zh) 来源于肺炎克雷伯氏杆菌342的epsp合酶基因及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C12 Rejection of a patent application after its publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20120328