CN102344475A

CN102344475A - 一种灯盏花乙素衍生物及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN102344475A
Application number: CN2010102443487A
Authority: CN
Inventors: 张伟; 杨兆祥; 普俊学; 张国丽; 刘一丹
Original assignee: Kunming Pharmaceutical Corp
Current assignee: Kunming Pharmaceutical Corp
Priority date: 2010-07-30
Filing date: 2010-07-30
Publication date: 2012-02-08

Abstract

本发明涉及药物化学领域，公开了一种灯盏花乙素衍生物，还公开了其制备方法和应用。本发明所述灯盏花乙素衍生物由灯盏花乙素的羧基与葡甲胺的甲氨基以离子键成盐，其制备方法是葡甲胺加入到灯盏花乙素悬浊液中搅拌，形成澄清溶液，冷冻干燥获得所述灯盏花乙素衍生物，或减压浓缩上述澄清溶液至原体积的1/3-1/2，过滤得沉淀物，将沉淀物过滤，干燥即获得所述灯盏花乙素衍生物。该方法无需控制pH值，工艺简便。本发明所述灯盏花乙素衍生物具有高度水溶性，改变了灯盏花乙素不溶于水特性。同时家兔肌肉刺激实验和药物稳定性研究表明，本发明所述灯盏花乙素衍生物比其他灯盏花乙素盐更安全、更稳定，可用于制备治疗心脑血管疾病的药物。

Description

一种灯盏花乙素衍生物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及药物化学领域，更具体的说是涉及一种灯盏花乙素衍生物，还涉及本发明所述灯盏花乙素衍生物的制备方法和应用。

背景技术

灯盏花素从菊科植物短葶飞蓬的干燥全草-灯盏花中提取分离得到，是以含灯盏花乙素为主(＞90％)，同时还含有少量灯盏花甲素的混合物，灯盏花素具有活血化瘀、散寒解表、舒筋活络和祛风除湿的功效，临床上常用于治疗心脑血管疾病。目前临床中使用的灯盏花素制剂，其有效成分一般为利用乙醇和乙酸乙酯进行提取的主要含灯盏花乙素的制剂。灯盏花乙素在心脑血管疾病治疗方面已有许多文献报道。

灯盏花乙素，又称野黄岑苷，化学学名为4′，5，6-三羟基黄酮-7-葡萄糖醛酸苷。灯盏花乙素可通过多种作用机制实现其对急性脑缺血的明显保护作用：可抑制血小板聚集，抑制体内凝血功能和促进纤溶活性，从而抑制血栓形成；通过抑制蛋白激酶C激活所致的脑血管痉挛收缩，增加局部脑血流量，改善脑微循环，减少炎性细胞黏附浸润，保护缺血后脑组织；还能加快脑血流速度，增加脑血流量，改善微循环，最终改善血液流通。

同时，灯盏花乙素对心肌也有保护作用。在灯盏花素抗家兔心肌缺血再灌注损伤的药理研究中，将实验家兔随机分为3组，各组家兔均结扎左室支40分钟，松开结扎线再灌流30分钟。Ⅰ组在结扎前10分钟由耳静脉输入灯盏花素，Ⅱ组输入维拉帕米，Ⅲ组静注同容积生理盐水。在结扎前及结扎、再灌后每10分钟，测左室内压峰值(LVSP)。结果显示，再灌注后30分钟内，灯盏花素组LVSP下降程度比生理盐水组及维拉帕米组小，差异有极显著意义(P＜0.01)。此外，其他心肌保护机制还包括：抑制肌酸磷酸激酶(CPK)释放，抑制Ca²⁺内流，舒张冠脉血管，降低血液黏度，增加冠脉血流量等。

临床应用表明灯盏花乙素对高血压、脑溢血、脑血栓形成、脑栓塞多发性神经炎、慢性蛛网膜炎及其后遗症具有较好疗效，并对风湿、冠心病也有一定疗效，但是由于灯盏花乙素特殊的分子结构，导致其口服生物半衰期短，绝对生物利用度低，以及水溶性和脂溶性均较差，种种缺点限制了它在医药领域中的应用。

为改善灯盏花乙素溶解性，药物学家们采用了不同手段，以期改善灯盏花乙素体内生物利用度。其中，中国专利申请号93106319.1公开了一种“灯盏花素粉针剂及制备方法”和中国专利申请号200710066193.0公开了一种“高纯度灯盏花乙素盐及缓释片剂”，两者分别公开了灯盏花素和灯盏花乙素分别与精氨酸、赖氨酸、钠离子、钾离子、钙离子成盐的组合物及其制备方法，大大增加了灯盏花素和灯盏花乙素的水溶性。但是，由于灯盏花乙素本身对pH和热不稳定，不能与氧化性物质配伍，精氨酸、赖氨酸等碱性氨基酸具有盐析特性，在制成灯盏花乙素碱性氨基酸盐的注射剂后，在与酸性高盐的输液配伍易产生絮状沉淀物，加上碱性氨基酸盐在盐酸溶液中能发生右旋化，大大限制了灯盏花乙素碱性氨基酸盐的应用范围。另一方面，制备成灯盏花乙素钠盐或钾盐的注射液后，临床应用存在局部刺激性和过敏性等不良反应频率增高的现象。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种灯盏花乙素衍生物，该化合物更安全、更稳定，具有高度水溶性。

本发明另一个目的在于提供一种本发明所述灯盏花乙素衍生物的制备方法。

本发明进一步的目的在于将本发明所述灯盏花乙素衍生物用于制备治疗心脑血管疾病的药物。

本发明提供了一种灯盏花乙素衍生物，是由灯盏花乙素上的羧基与葡甲胺上的甲氨基通过离子键成盐，获得的一种新型离子化合物，其结构式如式(I)所示：

葡甲胺，分子式为C₇H₁₇NO₅，分子量为195.21，因其易溶于水，具有适宜的碱性和一定的还原性，更重要的是安全、无毒，与含有酚羟基的化合物组合利于保护酚羟基不被氧化，成盐后对皮肤、粘膜、组织无刺激性，故非常适宜作为药物的助溶剂，能改善药物主成分的水溶解性(罗明生，药物辅料大全，四川科学技术出版社：698-699)。本发明所述灯盏花乙素衍生物因结合葡甲胺，使得该衍生物更安全、更稳定，水溶性效果好。

本发明所述灯盏花乙素衍生物的制备方法无需控制pH值，工艺简便，第一种制备方法具体包括以下步骤：

步骤1：将葡甲胺加入到灯盏花乙素悬浊液中搅拌，使形成澄清溶液；

步骤2：冷冻干燥后直接获得所述灯盏花乙素衍生物。

本发明所述灯盏花乙素衍生物的另一种制备方法具体包括以下步骤：

步骤2：浓缩步骤(1)中澄清溶液至原体积的1/3-1/2，过滤得沉淀物，将沉淀物用有机溶剂洗涤过滤，干燥即获得所述灯盏花乙素衍生物。其中，该方法步骤2中所述有机溶剂为甲醇、乙醇或者丙酮。

其中，所述灯盏花乙素悬浊液由灯盏花乙素溶于水、有机溶剂或两者的混合液制备而成。

其中，所述混合溶液中，有机溶剂为甲醇、乙醇或者丙酮。

其中，所述混合液中，有机溶剂百分含量大于50％小于100％。

其中，灯盏花乙素与葡甲胺的摩尔比为1∶1。

由于本发明所述灯盏花乙素衍生物为离子型化合物，在体内会形成灯盏花乙素羧酸根离子的离解形式，并进一步代谢后产生药效，起到治疗心脑血管疾病的作用。因此，无论是游离形式的灯盏花乙素还是离解形式的灯盏花乙素羧酸根离子给药，均具有治疗心脑血管疾病的作用。离解形式的灯盏花乙素羧酸根离子关键在于如何选择一种碱基离子，使得获得的灯盏花乙素盐更稳定、更安全，本发明所述灯盏花乙素衍生物经实验证明其结构稳定，更加安全，所以能够用于制备治疗心脑血管疾病的药物。

经由上述的技术方案可知，本发明所述灯盏花乙素衍生物安全、稳定，水溶性效果好，可用于制备治疗心脑血管疾病的药物，并且其制备方法无需控制pH值，工艺简便，质量稳定可控。

附图说明

图1示本发明所述灯盏花乙素衍生物的的红外吸收光谱；

图2示本发明所述灯盏花乙素衍生物的氢核磁共振图谱；

图3示本发明所述灯盏花乙素衍生物的碳核磁共振图谱。

具体实施方式

本发明公开了一种灯盏花乙素衍生物，还公开了该化合物的制备方法和应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

根据红外光谱、质谱以及核磁共振实验结果，本发明所述灯盏花乙素衍生物由灯盏花乙素上的羧基与葡甲胺上的甲氨基通过离子键成盐，形成一种新型离子化合物，但其本身结构并未发生较大改变，将其命名为灯盏花乙素葡甲胺，其结构式如式(I)所示：

葡甲胺易溶于水，安全、无毒，适于作为药物的助溶剂，故本发明所述灯盏花乙素衍生物具有水溶性效果好的特点。

在对肌肉刺激性比较实验中，本发明所述灯盏花乙素衍生物刺激性最小，而其他与灯盏花乙素成盐的组合物对肌肉的刺激性均比本发明对肌肉的刺激性大。

稳定性实验中，本发明所述灯盏花乙素衍生物在高温60℃加热10天后，仍然维持黄绿色结晶性粉末状态，而灯盏花乙素和其他与灯盏花乙素成盐的组合物颜色均变为淡黄色；在与0.01mol/L的盐酸、pH6.5磷酸缓冲溶液、0.9％氯化钠注射液和10％葡萄糖注射液的配伍实验中，本发明所述灯盏花乙素衍生物除在0.01mol/L的盐酸中产生沉淀外，与其余溶液均未产生沉淀，而其他与灯盏花乙素成盐的组合物在所有溶液中均观察到沉淀。

以上实验结果表明本发明所述灯盏花乙素衍生物和现有的其他与灯盏花乙素成盐的组合物相比，更加安全、稳定。

本发明还公开了灯盏花乙素衍生物的制备方法，第一种制备方法具体包括以下步骤：

步骤2：冷冻干燥后直接获得所述灯盏花乙素衍生物。

其中，所述混合溶液中，有机溶剂为甲醇、乙醇或者丙酮。

其中，灯盏花乙素与葡甲胺的摩尔比为1∶1。

下面结合实施例，进一步阐述本发明。

实施例1：本发明所述制备方法制备所述灯盏花乙素衍生物

取灯盏花乙素46.2g(0.1摩尔)，加100ml的水搅拌；另取葡甲胺19.5g(0.1摩尔)，加50ml的水使溶解；将葡甲胺水溶液缓缓滴加到灯盏花乙素混悬液中，搅拌约1小时，直至溶液澄清。冷冻干燥，即得产物60g，产品得率为91.3％(产品得率＝产品质量/灯盏花乙素与葡甲胺质量之和×100％)。

实施例2：本发明所述灯盏花乙素衍生物结构确定

1、红外光谱分析

将实施例1中产物进行红外光谱分析，灯盏花乙素对照品，批号：8420-200102，中国药品生物制品检定所提供，结果参见图1。

灯盏花乙素红外光谱IRv max(KBr)cm^-1：3513，3370(羧基OH)，1720(羧酸羰基C＝O)，1660(黄酮羰基C＝O)，1608(C＝C)，1574(苯环)。

实施例1所述产物红外光谱IR v max(KBr)cm^-1：3500-3000(宽钝峰)，1664(黄酮羰基C＝O)，1608(C＝C)，1574(苯环)。

实施例1所述产物红外光谱显示，羧基OH消失，出现3500-3000cm^-1的宽钝峰，1720cm^-1的羧酸羰基C＝O消失，表明产物的分子结构中，羧基发生了改变。

2、灯盏花乙素和实施例1中产物核磁共振图谱(¹H-NMR，DMSO，¹³C-NMR，DMSO)比较

将灯盏花乙素和实施例1中产物分别进行氢谱和碳谱核磁共振分析，灯盏花乙素对照品，批号：8420-200102，中国药品生物制品检定所提供，结果参见图2、图3和表1、表2。

表1 灯盏花乙素氢谱和碳谱(DMSO-d₆)数据

C	¹³C	¹H	HMBC相关性
				C-2	164.138s		7.91，6.80，
C-3	102.554d	6.8041，s
				C-4	182.377s		6.80，6.98，
C-5	146.879s		12.73，8.59，6.97，6.80，
				C-6	130.484s		12.73，8.59，6.97，
C-7	151.002s		8.59，6.97，5.21，
				C-8	93.604d	6.9792，s
C-9	149.026s		6.97，
				C-10	105.886s		12.73，6.97，6.80，
C-1’	121.323s		6.93，6.80，
				C-2’，6’	128.460dd		7.91，
C-3’，5’	116.012dd		10.35，7.91，6.93，
				C-4’	161.219s		7.91，6.93，
G-1	99.980d	5.2154(d，7.5Hz)	5.49，5.27，5.21，404，
				G-2	75.521d	4.0447(d，9.6Hz)	5.49，5.21，4.04，3.44
G-3	75.248d	3.4481-3.3486，m，	5.49，5.21，4.04，3.44
				G-4	72.827d	3.4481-3.3486，m，	5.49，3.44
G-5	71.334d	3.4481-3.3486，m，	4.04，3.34
				G-6	170.077s		4.04，3.44，
5-OH		12.7312s
				6-OH		8.5917s
4’-OH		10.3588s
				G-3-OH		5.4910(d，3.6Hz)，
G-OH		5.2772br s

表2实施例1所述产物的氢谱和碳谱(DMSO-d₆)数据

C	¹³C	¹H	HMBC相关性
				C-2	164.095s		7.84，6.88，6.73，
C-3	102.221d	6.73363，s
				C-4	182.349s		6.73，6.94，
C-5	146.652s		6.73，
				C-6	130.539s		6.94，
C-7	151.443s		6.94，5.01，
				C-8	94.067d	6.94513，s
C-9	148.978s		6.94，
				C-10	105.778s		6.94，6.73，
C-1’	120.905s		6.88，6.73
				C-2’，6’	128.333dd	7.84647(d，8.5Hz)	7.84，
C-3’，5’	115.989dd	6.88338(d，8.5Hz)	7.84，6.88，
				C-4’	161.530s		7.84，6.88，
G-1	100.628d	5.01387(d，7.1Hz)	5.01，3.7，3.4，3.35，
				G-2	75.768d，	3.35m	5.01，3.7，3.35，3.25，
G-3	74.270d	3.7d	3.25，
				G-4	72.940d	3.35m	3.25，
G-5	71.308d	3.45m	3.7，3.6，3.4，3.3，-
				G-6	172.800s		3.7d，3.25m，
NH₂-Me	33.210q	2.49009，s
				NH₂-CH₂	51.109t，	2.99367-2.8896，dd，
M-1	72.061d	3.25d or t	3.7，3.25，
				M-2	70.366d	3.4，m or 3.65m	3.7，3.6，3.45，3.4，-
M-3	70.313d	3.4，m or 3.65m	3.7，3.6，3.45，3.4，-
				M-4	68.590d	3.8，br
M-5	63.366t	3.6，m 3.4，m

依照本发明所述制备方法制备的产物经高分辨质谱分析表明，样品中碳、氢、氧、氮原子的含量与理论值一致，经红外吸收光谱、核磁共振谱(氢核磁共振谱、碳核磁共振谱)综合解析，确证该样品为本发明所述灯盏花乙素衍生物，命名为灯盏花乙素葡甲胺，分子式为C₂₁H₁₈O₁₂·C₇H₁₇NO₅，分子量为657.58。结构式为：

实施例3：本发明所述灯盏花乙素衍生物含量测定

采用Agilent1100高效液相色谱仪对实施例1中产物进行色谱分析，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-四氢呋喃-0.1％磷酸水溶液(比例为23∶10∶67)为流动相；检测波长为335nm。理论板数按灯盏花乙素峰计算应不低于8000。

乙腈、磷酸为色谱级；HPLC用水是重蒸蒸馏水；盐酸、三乙胺为分析级；灯盏花乙素对照品，批号：8420-200102，中国药品生物制品检定所提供；葡甲胺，批号：C007-090501；西安力邦制药有限公司提供。

取实施例1中产物适量，精密称定，加水溶解并稀释制成每1ml含约0.2mg的溶液，摇匀，作为供试品溶液；另取灯盏花乙素对照品适量，加甲醇溶解并稀释制成每1ml含约0.1mg的溶液，摇匀，作为对照品溶液；精密量取5μl注入液相色谱仪，记录色谱图按外标法以峰面积计算，即得所述灯盏花乙素衍生物含量为97.5％。

实施例4：本发明所述灯盏花乙素衍生物与灯盏花乙素钠盐、灯盏花乙素钾盐的肌肉刺激性比较实验

观察本发明所述灯盏花乙素衍生物与灯盏花乙素钠盐、灯盏花乙素钾盐无菌溶液经家兔股四头肌注射后对肌肉有无刺激性，为本发明所述灯盏花乙素衍生物的安全性提供实验依据。

1、受试药物

受试药物为本发明所述灯盏花乙素衍生物、灯盏花乙素钠盐与灯盏花乙素钾盐，每支含本发明所述灯盏花乙素衍生物、灯盏花乙素钠盐与灯盏花乙素钾盐相当于含灯盏花乙素20mg，无辅料；批号分别为20100501、20100502、20100503，由昆明制药集团股份有限公司药物研究院提供。

2、空白对照

注射用水为无色或几乎无色澄明液体，批号09112601，由昆明制药集团股份有限公司药物研究院提供。

3、实验动物

普通级日本大耳白兔，6只，雌雄各半，体重2.10-2.70kg，昆明制药集团股份有限公司动物室提供，动物生产许可证号：SCXK(滇)2009-0001。

4、实验方法

将动物分为3组，每组2只，雌雄各半。受试药物加水配制成无菌溶液，浓度为2mg/ml。将家兔固定后，于家兔左侧股四头肌给予对照品(专用溶剂对照)，右侧股四头肌给予等量受试药物1次。注射后24h和48h肉眼观察注射部位红斑、水肿、充血等刺激反应程度及范围，并详细记录观察现象。注射后48h处死动物，解剖观察注射部位肌肉有无变化。

根据肉眼观察和组织病理学检查结果，判断受试药物对实验动物注射部位肌肉及周围组织是否产生刺激性、刺激反应程度以及刺激反应的恢复情况。若各股四头肌反应级的最高与最低之差大于2时，应另取2只动物重新试验。实验现象按表3进行反应级评分，家兔肌肉刺激性实验结果参见表4。

表3肌肉刺激反应分级标准

刺激反应反应级

无明显变化 0

轻度充血，范围在0.5×1.0cm以下 1

中度充血，范围在0.5×1.0cm以上 2

重度充血，伴有肌肉变性 3

出现坏死，有褐色变性 4

出现广泛性坏死 5

表4 家兔肌肉刺激性实验

样品动物刺激反应级别

灯盏花乙素葡甲胺 0

灯盏花乙素钠盐 2

灯盏花乙素钾盐 3

注射用水 0

由表4可知，本发明所述灯盏花乙素衍生物无菌溶液对肌肉刺激性最小，灯盏花乙素钠盐次之，灯盏花乙素钾盐皮肤刺激性最强。表明本发明所述灯盏花乙素衍生物的药用安全性比灯盏花乙素钠盐和灯盏花乙素钾盐高。

实施例5：本发明所述灯盏花乙素衍生物与灯盏花乙素、灯盏花乙素精氨酸、灯盏花乙素赖氨酸的稳定性研究

1、灯盏花乙素及其灯盏花乙素盐的稳定性比较

将本发明所述灯盏花乙素衍生物与灯盏花乙素、灯盏花乙素精氨酸、灯盏花乙素赖氨酸原料分别进行强光照(4000±500LX)、高温60℃和高湿75％考察10天，于第5、10天取样，与0天进行比较，结果参见表5。

表5灯盏花乙素及其灯盏花乙素盐的稳定性比较

表5结果显示，灯盏花乙素、灯盏花乙素精氨酸、灯盏花乙素赖氨酸在高温60℃加热10天，与0天比较性状，发现颜色变黄色，推测可能部分灯盏花乙素氧化和氨基酸在高温中变化；而本发明所述灯盏花乙素衍生物仍然是黄绿色结晶性粉末，表明其结构稳定。

2、灯盏花乙素盐的配伍稳定性比较

将本发明所述灯盏花乙素衍生物、灯盏花乙素精氨酸、灯盏花乙素赖氨酸分别用0.01mol/L的盐酸、pH6.5磷酸缓冲溶液、0.9％氯化钠注射液和10％葡萄糖注射液溶解制成5mg/ml的溶液，密封后，在室温下静置。观察是否产生沉淀，结果参见表6。

表6灯盏花乙素盐的配伍稳定性比较

表6结果显示，灯盏花乙素精氨酸、灯盏花乙素赖氨酸与0.01mol/L的盐酸、pH6.5磷酸缓冲溶液和0.9％氯化钠注射液配伍，会产生沉淀；而本发明所述灯盏花乙素衍生物除在0.01mol/L的盐酸中会产生沉淀外，在pH6.5磷酸缓冲溶液、0.9％氯化钠注射液和10％葡萄糖注射液均不会产生沉淀。表明本发明所述灯盏花乙素衍生物较灯盏花乙素精氨酸、灯盏花乙素赖氨酸在与不同溶液配伍时更稳定。

实施例6：本发明所述制备方法制备所述灯盏花乙素衍生物

1、制备方法

取灯盏花乙素46.2g(0.1摩尔)，加100ml的50％甲醇溶液，搅拌并加热至60℃；另取葡甲胺19.5g(0.1摩尔)，加30ml的水使溶解；将葡甲胺水溶液缓缓滴加到灯盏花乙素甲醇水的混悬液中，60℃保温搅拌约1小时，直至溶液澄清。减压浓缩溶液为原体积的1/3，经过滤、静置，得沉淀物，再用甲醇洗涤，干燥，即得产物58g，产品得率为88.3％(产品得率＝产品质量/灯盏花乙素与葡甲胺质量之和×100％)。

2、结构确定

采用实施例2中方法对产物进行分析，确定产物为本发明所述灯盏花乙素衍生物。

3、含量测定

采用实施例3中含量测定方法，测得所述灯盏花乙素衍生物含量为99.1％。

实施例7：本发明所述制备方法制备所述灯盏花乙素衍生物

1、制备方法

取灯盏花乙素46.2g(0.1摩尔)，加100ml的乙醇溶液，搅拌并加热至70℃；另取葡甲胺19.5g(0.1摩尔)，加60ml的水使溶解；将葡甲胺水溶液缓缓滴加到灯盏花乙素甲醇水的混悬液中，70℃保温搅拌约1小时，直至溶液澄清。减压浓缩溶液为原体积的1/2，经过滤、静置，得沉淀物，再次过滤，用乙醇洗涤，干燥，即得产物40g，产品得率为60.8％(产品得率＝产品质量/灯盏花乙素与葡甲胺质量之和×100％)。

2、结构确定

3、含量测定

采用实施例3中含量测定方法，测得所述灯盏花乙素衍生物含量为99.7％。

实施例8：本发明所述制备方法制备所述灯盏花乙素衍生物

1、制备方法

取灯盏花乙素46.2g(0.1摩尔)，加100ml的丙酮溶液，搅拌并加热至70℃；另取葡甲胺19.5g(0.1摩尔)，加80ml的水使溶解；将葡甲胺水溶液缓缓滴加到灯盏花乙素甲醇水的混悬液中，50℃保温搅拌约1小时，直至溶液澄清。减压浓缩溶液为原体积的1/3，经过滤、静置，得沉淀物，再次过滤，用丙酮洗涤，干燥，即得产物45g，产品得率为68.5％(产品得率＝产品质量/灯盏花乙素与葡甲胺质量之和×100％)。

2、结构确定

3、含量测定

采用实施例3中含量测定方法，测得所述灯盏花乙素衍生物含量为98.9％。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.一种灯盏花乙素衍生物，其特征在于，结构式如式(I)所示：

2.权利要求1所述灯盏花乙素衍生物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤2：冷冻干燥后直接获得本发明所述灯盏花乙素衍生物。

3.权利要求1所述灯盏花乙素衍生物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤2：浓缩步骤(1)中澄清溶液至原体积的1/3-1/2，过滤得沉淀物，将沉淀物用有机溶剂洗涤过滤，干燥即获得本发明所述灯盏花乙素衍生物。

4.根据权利要求2或3所述的制备方法，其特征在于，所述灯盏花乙素悬浊液由灯盏花乙素溶于水、有机溶剂或两者的混合液制备而成。

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤2中所述有机溶剂为甲醇、乙醇或者丙酮。

6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述混合液中，有机溶剂百分含量大于50％小于100％。

7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述混合液中，有机溶剂为甲醇、乙醇或者丙酮。

8.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，灯盏花乙素与葡甲胺的摩尔比为1∶1。

9.权利要求1所述灯盏花乙素衍生物在制备治疗心脑血管疾病的药物中的应用。