CN101732417B - 博落回总生物碱离子对混合物的制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及博落回总生物碱的离子对混合物的制备方法和应用，本发明的博落回总生物碱和黄芩提取物形成的离子对混合物具有抗菌生物活性，而且活性明显优于博落回总生物碱。本发明涉及含有博落回总生物碱的离子对混合物在抗菌方面的人用药品或兽药的应用。

Description

博落回总生物碱离子对混合物的制备方法和用途

技术领域

本发明涉及一种来自中草药博落回提取物制成的离子对混合物的药物和制备方法，以及该药物在抗菌方面具体是人用药、兽用药以及日化产品中的制药用途，特别是涉及含有博落回总生物碱离子对混合物用于人用药或兽用药以及日化用品的用途。

背景技术

博落回Macleaya cordata(Willd)R.Br.、小果博落回Macleaya microcarpa(Maxim.)Fedde系罂粟科博落回属多年生草本植物，在我国分布广泛。在我国使用博落回治疗疥癣、杀虫灭蛆具有悠久的历史。博落回中主要含有血根碱、白屈菜红碱、原阿片碱、别隐品碱等异喹啉类生物碱，现代药理药效学研究表明，博落回中生物碱具有以下药理药效作用：

1、抗菌作用

博落回植物中主要含有血根碱、白屈菜红碱等生物碱。大量药理研究资料表明：血根碱、白屈莱红碱及博落回总生物碱对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、八迭杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌、白假丝酵母、羊毛状小抱霉菌以及流感病毒A有不同程度的抑制和杀伤作用。血根碱对葡萄球菌的最小抑菌浓度为1.95μg/mL，血根碱和白屈菜红碱抗菌、抗病毒的机制可能是抑制DNA合成及逆转录酶，影响细胞膜的通透性。另外，研究表明血根碱和博落回红碱具有较强的抗炎及抑制口腔细菌的效果，因此被用于口腔炎症的治疗。

2、杀虫作用

袁涛忠等(1999)观察了博落回总碱对绒尾蛆蝇三龄幼虫的杀灭效果，结果发现对应于0.16mmol/100mL的博落回总碱浓度可以在24h内100％杀死全部幼虫，其杀虫效力相当于0.025mmol/L的澳氰菊醋。博落回对茶黄毒蛾Pseudoconspersa，对尖音库蚊Culexpipiers，对果蝇Drpsophila hydei有毒杀作用，对家蝇也有触杀作用。药理研究表明博落回有强大的杀阴道滴虫作用，在玻片上将滴虫与博落回浸膏相接触，滴虫立刻被全部杀死。此外，血根碱、白屈菜红碱及博落回碱还有杀线虫和防植物霉菌作用，其中的生物碱对植物蚜虫也有杀灭作用。

中国专利CN100366621C公开了博落回总生物碱盐及其制备方法和应用，博落回总生物碱盐为博落回总生物碱水杨酸盐、博落回总生物碱苯甲酸盐、博落回总生物碱马来酸盐、博落回总生物碱酒石酸盐或博落回总生物碱硼酸盐，所制备的博落回总生物碱盐应用于抗菌药品的制备。

中国专利CN1957990A公开了将博落回总生物碱盐加药剂学相应的辅料制成粉剂、散剂、片剂、胶囊剂或注射剂，以应用于杀灭钉螺、螺卵、日本血吸虫尾蚴从而起到预防血吸虫病，或应用于人畜体内驱血吸虫达到人畜血吸虫病的治疗。其中所述的博落回总生物碱盐是通过博落回总生物碱与无机酸或有机酸反应而得到，所述的无机酸或有机酸选自盐酸、硫酸、硼酸、水杨酸、酒石酸、枸椽酸。

中国专利CN101297870A也公开了博落回总生物碱或其盐对血吸虫所造成的肝纤维化具有良好的预防和治疗作用，可用来制备预防和治疗血吸虫致肝纤维化的药物。

然而，博落回总生物碱在应用过程中，对皮肤和鼻粘膜有较大大刺激作用，不利于其应用在日化产品上，抗菌作用也还有待进一步提升等诸多问题。

黄芩或黄芩提取物作为抗菌药物仍存着使用量大，抗菌效果不是很明显的缺陷。此外，在长期的药物研究中，由于黄芩苷极难溶于多种无机和有机溶剂，水溶性和脂溶性差，并且在碱液中不稳定，因此限制了黄芩苷的生物利用度。另外，长期单一使用黄芩苷，也会导致耐药菌株的产生，因此使得其抗菌谱不够广泛。

综合所述，目前需要提供一种能够提高博落回总生物碱的生物利用度、扩大博落回总生物碱的抗菌谱、增强博落回总生物碱药效、同时降低对皮肤和鼻粘膜的刺激作用的方法及其产品。

发明内容

本发明人基于通过多年对博落回和黄芩等天然物质研究积累，突破对于博落回总生物碱开发的传统思路，即不再局限于选择适于博落回总生物碱的合适载体或配伍剂，也不再于对博落回总生物碱进行酸/碱基团的盐化处理，而是创造性的选择一种能够增强博落回总生物碱的抑菌协同效应、又能显著提高生物利用度的与其生物碱能结合成离子对混合物来自另一种中药种的其他化学成分、同时能够降低对皮肤和鼻粘膜的刺激作用的离子对化合物的混合物，从而最终获得一种来自中药的新的离子对化合物的混合物。简单的说，发明人通过多年在博落回生物碱领域的积累和研究，发现将博落回提取物中的生物碱与黄芩提取物中含有葡萄糖醛酸基的黄酮化合物为原料可制备生成含有离子对化合物的混合物，所述的混合物可增强博落回总生物碱的抗菌效果并提高临床疗效，增大博落回总生物碱的脂溶性和提高生物利用度，并且所生成的离子对混合物大大降低了对鼻粘膜和皮肤的刺激，拓展本发明成分的应用领域。

因此，本发明第一个目的是提供一种来自中草药博落回和黄芩的提取物制备的博落回总生物碱离子对混合物，包括具有如下式I所示的结构黄芩苷离子对化合物，和具有如下式II所示的结构白屈菜红碱离子对化合物：

式I；

式II；

其中式I所示的黄芩苷离子对化合物由黄芩苷中的葡萄糖醛酸基和血根碱的依靠分子间静电作用结合而生成的水不溶性化合物；

其中式II所示的白屈菜红碱离子对化合物由黄芩苷中的葡萄糖醛酸基和白屈菜红碱的依靠分子间静电作用结合而生成的水不溶性化合物；

在一个实施方案中，所述博落回总生物碱以血根碱黄芩苷离子对化合物和白屈菜红碱黄芩苷离子对化合物的混合物质量百分比合计为30～90％，基于性价比考虑，其中优选50～70％，最优选60～63％。

本发明第二个目的是提供上述博落回总生物碱离子对混合物的制备方法，包括：

1)将博落回总生物碱的无机酸盐在60～100℃下制成0.2％～2％质量百分比浓度的水溶液，其中无机酸选自指盐酸、硫酸、磷酸或硝酸；

2)将黄芩苷在60～100℃下用无机碱调pH至6.5～7.5制成1％～10％量百分比浓度的水溶液，其中无机碱选自氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠或碳酸氢钠；

3)将上述溶液在60～100℃下缓慢混匀，冷却，沉淀过滤、干燥即得桔红色的博落回总生物碱离子对混合物。

在另一个实施方案中，其中可使用商用的博落回总生物碱(如购自湖南美可达生物资源有限公司，批号090220，其中血根碱和白屈菜红碱含量为62％，黄芩提取物(如购自山东诸城市浩天药业有限公司，批号YZ20090209，其中纯度为76％；如购自山东诸城市浩天药业有限公司，批号YZ20091225，其中纯度为90％)。

在另一个实施方案中，使用通过传统方法从博落回和黄芩提取的博落回总生物碱或黄芩苷，其中，在具体实施方案中，从博落回提取总生物碱并制成无机酸盐的方法包括：

(1-1)取博落回果实，拣去杂质，加入用硫酸调节pH值2-3的100℃的热酸水在3-6小时内20倍量进行循环提取。提取后固液分离，滤液用石灰乳或氢氧化钠或氢氧化钾调节pH值至11，静置24小时，沉淀过滤，干燥，得到博落回总生物碱粗品；或者

(1-2)取花前期新鲜博落回全草药材，拣去杂质，榨汁过滤，滤液吸入浓缩器中进行减压浓缩，经管式离心机离心，再进行减压浓缩到，将浓缩液放入真空干燥箱中干燥，即得博落回总生物碱；或者

(1-3)取博落回的叶，拣去杂质，加入用硫酸调节pH值2-3的100℃的热酸水在3-6小时内20倍量循环提取。提取后固液分离，滤液用石灰乳或氢氧化钠或氢氧化钾调节pH值至11，静置24小时，沉淀过滤，干燥，得到博落回总生物碱粗品；

(2)将所得博落回总生物碱粗品溶于乙醇中，搅拌加入盐酸或硫酸或磷酸或硝酸，成盐后析出晶体，纯化干燥，得到博落回总生物碱的无机酸盐。

上述博落回植物来源包括博落回Macleaya cordata(Willd.)R.Br.、小果博落回Macleaya microcarpa(Maxim.)Fedde。

其中，在具体的实施方案中，黄芩提取物的制备方法是：

(1)将黄芩根(最优选为鲜根)，沸水提取，合并提取液，浓缩至适量，用盐酸调pH值到1.0～2.0，75～85℃保温，静置，滤过即为黄芩提取物。

(2)精制可将黄芩提取物用氢氧化钠溶液55～65℃调PH值到6.5～7.5，再用盐酸调PH值1-2，滤过，洗涤，干燥即得。

本发明第三个目的提供一种上述方法所制备的博落回总生物碱离子对混合物在制备抗菌消炎药物中的用途，其中在一个实施方案中，所述的药物是人用药或兽用药。

本发明第四个目的提供含有上述博落回总生物碱离子对混合物的除菌或消炎性日化产品，其中在一个实施方案中，所述的日化产品是化妆品、洗涤用品(包括洗涤剂或洗涤液或洗衣粉、消毒液或消毒剂、洗手液或除垢剂等)、口腔用品或身体清洁用品(包括药皂或香皂)、香味剂、除臭剂、驱虫灭害产品。而且本发明博落回总生物碱离子对混合物不但在抗菌方面有很好的效果，还可同时有效地避免博落回总生物碱对皮肤和鼻粘膜的刺激作用。

本发明第五个目的是提供含有上述博落回总生物碱离子对混合物的饲料或饲料添加剂，其中在一个实施方案中，所述的饲料或饲料添加剂是家禽、牲畜或水产饲料或饲料添加剂。

定义：

除非特别指明，本发明所述的“离子对化合物”，又名“离子对药物”，是指大分子有机酸和有机碱通过分子间静电吸引结合而生成的水不溶性化合物，具有亲水性小，亲脂性大的特点，其光谱也与形成离子对化合物之前不同。离子对化合物的形成改变了单体分子溶解性、稳定性等理化性质，并可发挥各自活性，有可能产生协同作用，从而影响药物疗效；同时又易于穿透亲脂性的细胞膜，改善吸收。

本发明所述的博落回植物，其来源包括博落回Macleaya cordata(Willd.)R.Br.、小果博落回Macleaya microcarpa(Maxim.)Fedde。

本发明中博落回总生物碱是从中草药博落回提取的总生物碱，主要含有血根碱和白屈菜红碱。也可使用商用的博落回总生物碱(如购自湖南美可达生物资源有限公司，批号090220，其中血根碱和白屈菜红碱含量总和为62％)。

血根碱为苯并菲啶类生物碱，主要分布在罂粟科、芸香科、小檗科等植物中。血根碱主要从罂粟科等植物(如博落回、血水草、白屈菜等)中提取分离得到或通过合成制备。其药理作用主要为抗菌、抗炎、杀虫、杀蛆、改善肝脏功能、增强免疫力、抗肿瘤等方面，最近研究发现血根碱还具有杀灭钉螺、防治血吸虫病等生物活性。且血根碱原碱本身稳定性较差，一般以盐的形式才稳定存在。

血根碱分子式：C₂₀H₁₄O₄N⁺；分子量：332.32，结构式如下：

白屈菜红碱为苯并菲啶类生物碱，又名白屈菜赤碱、白屈菜季铵碱。主要分布在罂粟科、芸香科、小檗科等植物中。白屈菜红碱主要从罂粟科植物如博落回、血水草、白屈菜等以及芸香科植物如双面针、飞龙掌血中提取分离得到或通过合成制备。其药理作用主要为抗菌、抗炎、杀虫、杀蛆、改善肝脏功能、抗肝纤维化、增强免疫力、抗肿瘤等，因其在药理方面的独特作用已受到高度重视。最新发现白屈菜红碱能降低四氯化碳诱导的肝纤维化大鼠模型肝脏组织TGF-β1和α-SMA，从而保护肝脏。白屈菜红碱也能够抑制高糖诱导的乳鼠心肌细胞形态和功能的改变，并能抑制PKC-α、PKC-β2、NF-κB和C-fos的表达和活性，对高糖环境中的心肌细胞具有保护作用。

白屈菜红碱分子式：C₂₁H₁₈O₄N⁺；分子量：348.37，结构式如下：

其他博落回总生物碱还包括博落回碱、白屈菜如宾碱、白屈菜黄碱、原阿片碱、α-别隐品碱等。

本发明所述的植物黄芩为唇形科植物黄芩Scutellaria baicalensis Geongi的干燥根，具有清热燥湿、泻火解毒之功效，而黄芩苷(baicalin，C₂₁H₁₈O₁₁)是从唇形科植物黄芩(Scutellaria baicalensis Georigi)的干燥根中提取的一种黄酮类化合物，其分子式为C₂₁H₁₈O₁₁、分子量为446.36，熔点223-225℃，[α]18D+123℃(c＝0.2，吡啶-水)；易溶于N，N-二甲基甲酰胺，吡啶中，可溶于碳酸氢钠、碳酸钠、氢氧化钠等碱性溶液中，但在碱液中不稳定，渐变暗棕色，微溶于热冰醋酸，难溶于甲酸、乙酸、丙酮，几乎不溶于水，乙醚、苯、氯仿等。

目前证实黄芩苷具有抗菌、抗炎、抗过敏、抗病毒、抗肿瘤、清除氧自由基、抗心律失常、扩张心脑血管、保护脑神经细胞、保肝利胆、降压、利尿、镇静、解热、抑制醛糖还原酶等作用，已收载入国家药品监督管理局国家药品标准化学药品地方标准上升国家标准第10册239号(国家药典委员会编)，其中规定含黄芩苷不得少于90％(注射用)；黄芩苷不得少于83％(口服用)。2005年版《中国药典》收载黄芩提取物，规定含黄芩苷不得少于85％。因此，已有将黄芩苷作为抗菌药的应用研究，已发挥其抑菌抗炎、清热解毒、镇静、降压、神经保护等药理作用。

黄芩苷分子式：C₂₁H₁₈O₁₁；分子量：446.36，结构式如下：

黄芩中其他成分还有：野黄芩苷、去甲汉黄芩素-7-O-葡萄糖苷酸、千层纸素-7-O-葡萄糖苷酸、汉黄芩素-7-O-葡萄糖苷酸等。

本发明中黄芩苷是从中草药黄芩提取的黄芩苷。也可使用商用的黄芩提取物(如购自山东诸城市浩天药业有限公司，批号YZ20090209，其中纯度为76％；如购自山东诸城市浩天药业有限公司，批号YZ20091225，其中纯度为90％)。

因此，本发明所述的博落回总生物碱离子对混合物，是指和黄芩提取物中含有葡萄糖醛酸的黄酮化合物与博落回总生物碱中的血根碱、白屈菜红碱等生物碱形成的一系列离子对化合物，其中主要含有黄芩苷与血根碱和白屈菜红碱组成的离子对化合物混合物。

“除菌或消炎性的日化产品”，指含有本发明离子对药物的化妆品、洗涤用品、口腔用品或身体清洁用品、香味剂、除臭剂、驱虫灭害产品或其他日化产品。常见的日化产品包括：美容化妆品、清洁化妆品、护肤品、发用化妆品、药皂或香皂或洗手液、洗涤剂或洗涤液或洗衣粉、消毒液或消毒剂、洗手液或除垢剂、牙膏、漱口水、鞋油、地板蜡等。

“含有上述博落回总生物碱离子对混合物的饲料添加剂”指用于预防动物疾病的非营养性饲料添加剂或药物饲料添加剂，这类添加剂对动物没有营养作用，但是可以通过防治疫病、促进动物消化吸收等作用来达到促进动物生长、提高饲料报酬，降低饲料成本，获取更大经济效益之目的。常见的“含有上述博落回总生物碱离子对混合物的饲料添加剂或药物饲料添加剂”包括：抑菌促生长剂(抗生素、抗菌剂等)、激素类添加剂、酶类添加剂、微生物添加剂、驱虫药物添加剂、中药添加剂、镇静类添加剂等。

有益效果

1.本发明所制备的博落回总生物碱离子对混合物具有亲水性小，亲脂性大的特点，改变了单体分子溶解性理化性质，又易于穿透亲脂性的细胞膜，改善吸收；

2.博落回总生物碱离子对混合物由于有博落回生物碱与黄芩提取物中含有葡萄糖醛酸基的黄酮化合物生成的离子对化合物，其产品相对于博落回总生物碱更稳定；

3.所制备的博落回总生物碱离子对混合物既可发挥各自活性，也有产生协同作用，从而提高了生物利用度，进一步提升药物疗效；

4.通过将博落回总生物碱离子对混合物的抗菌活性测定、生物利用度研究和毒理学研究发现，该离子对化合物可成倍地增强博落回总生物碱离子对混合物抗菌效果、提高了生物利用度，并为扩大博落回总生物碱离子对混合物的抗菌谱提供了可能，减少耐药菌株的产生；

5.本发明产品还可以有效避免博落回总生物碱刺激性味道的产生，使产品的应用范围可有效扩展至日化产品领域。

具体实施方式

如前所述，根据前面所公开的内容，本领域的专业人员可最大限度地应用本发明。应当指出，本发明旨在提供一种新的抗菌消炎药物。在以下具体实施方式部分提供了足以证实所述药物的疗效之后，本领域技术人员根据制药用途、日化产品用途以及饲料用途的常规技术，完全可以预料出本发明的黄芩苷离子对化合物能够用于上述领域且能实现预期功能，因此下面的实施例可以帮助本领域的技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。

实施例1：博落回总生物碱离子对混合物的制备方法

将黄芩提取物(黄芩苷含量76％)20.0g、NaOH 1.8g溶于200mL中配制成黄芩提取物的水溶液(A)；

将博落回总生物碱盐酸盐(总生物碱质量百分比62％)18.5g溶于1000mL水中，加热至90℃，直至博落回总生物碱盐酸盐全都溶解，制成博落回总生物碱盐酸盐水溶液(B)；

在90℃条件下将黄芩苷钠盐水溶液(A)缓慢加入到博落回总生物碱盐酸盐水溶液(B)中，不断搅拌，反应2小时，冷却至室温，过滤，用纯净水充分洗涤沉淀，沉淀60℃真空干燥，即得博落回总生物碱离子对混合物36.5g。

实施例2：博落回总生物碱离子对混合物的制备方法

将黄芩提取物(黄芩苷含量90％)20.0g、NaOH 2.0g溶于200mL中配制成黄芩提取物的水溶液(A)；

将博落回总生物碱硫酸氢盐20.0g溶于1000mL水中，加热至90℃以上，直至博落回总生物碱硫酸氢盐全都溶解，制成博落回总生物碱硫酸氢盐水溶液(B)；

在90℃以上条件下将黄芩苷钠盐水溶液(A)缓慢加入到博落回总生物碱硫酸氢盐水溶液(B)中，不断搅拌，反应2小时，冷却至室温，过滤，用纯净水充分洗涤沉淀，沉淀60℃真空干燥，即得博落回总生物碱离子对混合物36.2g。

实验例3：博落回总生物碱离子对混合物的体外抗菌活性测定

将实施例2得到的博落回总生物碱离子对混合物进行抗菌活性试验，其试验是对几种常见病菌按照下述方法测定抑菌活性。

菌种系湖南省微生物研究所分离鉴定所得，菌种分别是：大肠杆菌，金黄色葡萄球菌，鸡葡萄球菌，鸡白痢沙门氏菌，猪霍乱沙门氏菌，大肠埃希氏菌；试验样品的配置浓度均为2000μg/mL；抗菌过程中设相应溶解基质对照；采用琼脂平板扩散法和试管稀释法测定。

(1)MIC测定方法

取无菌试管13支，排成一排，除第1管加入1.8mLMH用肉汤稀释1000倍的菌液，其余每管加入MH肉汤1mL，在第1管加入抗菌药物原液0.2mL混匀，然后吸取1mL至第2管，混匀后再吸取1mL至第3管，如此连续倍比稀释至第12管，并从第12管中吸取1mL弃去，第13管为不含药物的生长对照。37℃培养24h，以无细菌生长的最低浓度为最小抑菌浓度(MIC)。

(2)MBC测定方法

将高于MIC浓度(含MIC浓度)的试管中的液体无菌方式涂抹与相应的平板上，37℃培养24小时，不长菌的平板对应的那管试管浓度作为MBC浓度。

表1  体外抗菌实验结果                       n＝6

经体外抗菌活性测定实验，离子对混合物对大肠杆菌，金黄葡色葡球菌，鸡葡葡球菌，鸡白痢沙门氏菌，猪霍乱沙门氏菌，大肠埃希氏菌均有抑菌作用，尤其是对大肠杆菌，金黄葡萄球菌，猪霍乱沙门氏菌具有较强的抑菌作用，其MIC均低于10μg/mL，且离子对混合物的MIC值均低于博落回总生物碱和黄芩提取物，说明博落回总生物碱离子对混合物具有博落回总生物碱的抗菌活性，同时也具有黄芩提取物的抗菌活性，由于协同作用，增强了博落回总生物碱和黄芩提取物形成的离子对混合物的抗菌效果。

实验例4：博落回总生物碱离子对混合物的生物利用度试验

采用HPLC-UV法研究离子对混合物(血根碱黄芩苷离子对化合物和白屈菜红碱黄芩苷离子对化合物混合物含量之和为62％)、博落回总生物碱(血根碱和白屈菜红碱之和为62％)、黄芩提取物(黄芩苷含量90％)以灌胃方式给药后的血药浓度，比较药代动力学参数，以揭示药物在动物体内动态变化的规律及其生物利用度。

仪器与试剂：Agilent 1100高效液相色谱仪，Quat Pump泵，VWD紫外-可见检测器，Agilent全自动进样器，Agilent色谱工作站。移液器，GILSON；FZQ-2型涡旋混合器(江苏泰县医疗器械厂)；TGL-16G高速离心机(上海安亨科学仪器厂)。甲醇、乙腈、冰醋酸均为色谱纯，盐酸、乙酸乙酯为分析纯，水为亚沸蒸馏水。

实验动物：成年Beagle犬，体重(9kg±0.6kg)，雌雄各半。

色谱条件色谱柱：反相C₁₈柱：LichrospherCR(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：乙腈-1％的冰醋酸水溶液(10∶90)；流速：1.0mL·min^-1；柱温：30℃；波长：284nm；进样量：20μL。

血浆样品处理：取血浆样品0.5mL，加入1％冰醋酸50mL，涡旋混匀，再加入(3mol·L^-1)盐酸溶液300mL，边加边涡旋，加入乙酸乙酯萃取4次，每次2mL，分离乙酸乙酯层，合并，于37℃水浴下N₂吹干，残渣用甲醇200mL溶解，离心，取上清液备用。进样20μL，记录峰面积，采用外标标准曲线法以峰面积比值定量。

样品采集与处理：给药前采集空白血样，给药组于0，0.25，0.5，1.0，1.5，2.0，4.0，5.0，7.0，9.0，12.0，24.0h在下肢静脉取血5mL，将采集到的血样置含肝素离心管中，离心(2000r·min^-1)10min，取上层血浆-20℃储存。

药代动力学参数的计算：DAS软件拟合计算，确定房室模型，主要药动学参数见表。

表2  Beagle犬灌胃药物后的主要药代动力学参数

结果表明，博落回总生物碱的离子对混合物(血根碱离子对化合物+白屈菜红碱离子对化合物)与黄芩苷比较，Tmax缩短，Cmax提高，AUC反应药物的生物利用度，博落回总生物碱的离子对混合物的AUC值也大大增加，生物利用度大大提高。

实验例5：博落回总生物碱离子对混合物的动物急性毒性实验

观察博落回总生物碱离子对混合物、黄芩提取物、博落回总生物碱进行一次灌胃给药对动物所产生的急性毒性反应及死亡情况，以测定其给药毒性。

实验动物：清洁级昆明小鼠70只，雌雄各半，体重(20±2)g，由湖南斯莱克景达实验动物公司提供，实验动物生产许可证号为SCXK(湘)2009-0004，实验动物合格证号为003465。鼠用全价颗粒饲料由湖南中医药大学实验动物中心提供。

实验仪器：AY-120电子分析天平。

实验方法：根据预试结果进行急性毒性正式试验，取昆明小鼠70只，体重20.16±1.52g，雌雄各半，试验前禁食不禁水，14小时后按性别体重分层随机分为7组，分别为博落回总生物碱离子对混合物组、黄芩提取物组、博落回总生物碱5个剂量组，灌胃给药，给药量为40mL/kg，给药后每日观察动物行为活动、粪便、饮食及毛色和14日内动物存活情况，试验结束时称量动物体重，解剖观察动物脏器情况。

实验结果：给药观察期间，博落回生物碱组有四个浓度组动物出现死亡，未死亡动物进食进水正常，未见异常行为，未观察到病理分泌物，大便成形，小便无变化，除有一个浓度组外，其余各组生长状况较正常组稍差。观察14天后，处死动物，大致解剖后未发现明显器官病变。

给药观察期间，博落回总生物碱离子对混合物组、黄芩提取物组各动物未出现死亡，正常生长，进食进水正常，毛色光亮，呼吸正常，未见异常行为，未观察到病理分泌物，大便成形，小便无变化。观察14天后，处死动物，大致解剖后未发现明显器官病变。

表3 急性毒性实验LD₅₀结果

结果显示，博落回总生物碱离子对混合物组无明显毒性，最大给药量为4000mg/kg；黄芩提取物组无明显毒性，最大给药量为4000mg/kg；博落回总生物碱组LD₅₀为669mg/kg，95％可信限为574-781mg/kg。

综上所述，本发明的离子对化合物是指大分子有机酸和有机碱通过分子间静电吸引结合而生成的水不溶性化合物，具有亲水性小，亲脂性大的特点，其光谱也与形成离子对化合物之前不同。离子对化合物的形成改变了单体分子溶解性、稳定性等理化性质，并可发挥各自活性，可能产生协同作用，又易于穿透亲脂性的细胞膜，改善吸收。另外，本发明的离子对混合物，由于有博落回生物碱与黄芩提取物的葡萄糖醛酸基生成的离子对化合物，其产品相对于博落回总生物碱更稳定，并具有较强的抗菌活性，更突出的是本发明的离子对混合物相对于黄芩提取物的抗菌活性成倍提升。且本发明通过博落回生物碱与黄芩提取物的葡萄糖醛酸基生成的离子对化合物内部的协同作用，极大增强了博落回总生物碱的生物利用度，使临床的应用效果进一步得到提升。另外，本发明产品还可以有效避免博落回总生物碱刺激性味道的产生，使产品的应用范围可有效扩展至日化产品领域。

Claims (10)

1.一种博落回总生物碱离子对混合物，是通过中草药的博落回总生物碱提取物和黄芩提取物制备得到，包括具有如下式I所示的结构黄芩苷离子对化合物，和具有如下式II所示的结构白屈菜红碱离子对化合物：

式I；

式II；

其中式I所示的黄芩苷离子对化合物是由黄芩苷中的葡萄糖醛酸基和血根碱的

依靠分子间静电作用结合而生成的水不溶性化合物；

其中式II所示的白屈菜红碱离子对化合物是由黄芩苷中的葡萄糖醛酸基和白屈菜红碱的

依靠分子间静电作用结合而生成的水不溶性化合物。

2.根据权利要求1所述的博落回总生物碱离子对混合物，其特征在于，混合物中黄芩苷离子对化合物和白屈菜红碱离子对化合物质量含量合计为30～90％。

3.根据权利要求1所述的博落回总生物碱离子对混合物，其特征在于，混合物中黄芩苷离子对化合物和白屈菜红碱离子对化合物质量含量合计为50～70％。

4.权利要求1或2或3的博落回总生物碱离子对混合物的制备方法，包括：

1)将博落回总生物碱提取物的无机酸盐在60～100℃下制成0.2％～2％质量百分比浓度的水溶液，其中无机酸选自盐酸、硫酸、磷酸或硝酸；

2)将黄芩提取物在60～100℃下用无机碱调pH至6.5～7.5制成1％～10％质量百分比浓度的水溶液，其中无机碱选自氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠或碳酸氢钠；

3)将上述溶液在60～100℃下缓慢混匀，冷却，沉淀过滤、干燥即得博落回总生物碱离子对混合物。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其中博落回总生物碱提取物中的总生物碱质量百分比30～90％；黄芩提取物中黄芩苷质量百分比75～90％。

6.根据权利要求5所述的制备方法，所述的博落回总生物碱提取物的无机酸盐是通过以下步骤制备得到：

步骤一：

A、取博落回果实，拣去杂质，加入用硫酸调节pH值2-3的50～100℃的热酸水在3-6小时内20倍量进行循环提取；提取后固液分离，滤液用石灰乳或氢氧化钠或氢氧化钾调节pH值至11，静置24小时，沉淀过滤，干燥，得到博落回总生物碱粗品；

B、或者，取花前期新鲜博落回全草药材，拣去杂质，榨汁过滤，滤液吸入浓缩器中进行减压浓缩，经管式离心机离心，再进行减压浓缩，将浓缩液放入真空干燥箱中干燥，即得博落回总生物碱；

C或者，取博落回的叶，拣去杂质，加入用硫酸调节pH值2-3的50～100℃的热酸水在3-6小时内20倍量循环提取；提取后固液分离，滤液用石灰乳或氢氧化钠或氢氧化钾调节pH值至11，静置24小时，沉淀过滤，干燥，得到博落回总生物碱粗品；

步骤二：将步骤一所得博落回总生物碱粗品溶于乙醇中，搅拌加入盐酸或硫酸或磷酸或硝酸，成盐后析出晶体，纯化干燥，得到博落回总生物碱的无机酸盐；

上述博落回的植物来源是博落回Macleaya cordata(Willd.)R.Br.或小果博落回Macleaya microcarpa(Maxim.)Fedde。

7.根据权利要求5所述的制备方法，其中，所述的黄芩提取物的制备包括以下步骤：

(1)将黄芩根，沸水提取，合并提取液，浓缩，用盐酸调pH值到1.0～2.0，75～85℃保温，静置，滤过；

(2)精制：将(1)步所得提取物用氢氧化钠溶液55～65℃调PH值到6.5～7.5，再用盐酸调pH值1.0～2.0，滤过，洗涤，干燥即得。

8.权利要求1-3任一项所述的博落回总生物碱离子对混合物在制备抗菌消炎药物中的用途，其中所述的药物是人用药或兽用药。

9.权利要求1-3任一项所述的博落回总生物碱离子对混合物的除菌或消炎性日化产品，其中所述的日化产品是化妆品、洗涤用品、口腔用品或身体清洁用品、香味剂、除臭剂、驱虫灭害产品。

10.权利要求1-3任一项所述的博落回总生物碱离子对混合物的饲料或饲料添加剂，其中所述的饲料或饲料添加剂是家禽、牲畜或水产饲料或饲料添加剂。