CN102988529A - 樱桃核中总酚酸的制备方法及新用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种植物樱桃的核中总酚酸的制备方法，是将樱桃核原料粉碎，用一定浓度的乙醇-水提取，减压浓缩得到粗体物后用水混悬，水相直接上大孔树脂以醇水系统洗脱得到总酚酸类提取物，也是樱桃核中具有药理活性的有效部位。本发明提供的樱桃核中的总酚酸具有明显的抗菌活性，且樱桃为药食同源类植物，无毒、副作用，可以开发成一种新的抗菌药物。樱桃核中的总酚酸可以制成各种制剂。本发明方法设计合理，具有工艺过程简单、成本低、能耗低和生产过程污染低的特点。

Description

樱桃核中总酚酸的制备方法及新用途

技术领域

本发明涉及植物医药技术领域，尤其涉及植物樱桃核中总酚酸的制备方法及在制备抗菌药物中的新应用。

背景技术

凡对细菌和其他微生物具有抑制和杀灭作用的物质统称为抗菌药。它包括化学合成药如磺胺类药、呋喃类药、喹诺酮类药，也包括具有抗菌作用的抗生素，还包括具有抗菌作用的中草药等。由于化学合成药引起的病原菌抗药性增加，植物源杀菌剂具有不污染环境，对人体安全，不易产生抗药性等特点，使得天然产物又成为作为发现新药物的重要来源和从植物中获得具有抗菌活性的天然化合物的研究又重新获得普遍的关注。我国植物资源丰富，在植物中寻找抗菌、抗氧化和其他活性成分一直是植物化学和天然产物化学研究的主流。

樱桃核为樱桃（Prunus pseudocerasus Lindl.）的种子。原植物为蔷薇科（Rosaceae）梅属（Prunus.L）植物，落叶乔木或灌木。除食用和观赏价值之外，《本草纲目》、《名医别录》等古籍中还记载了樱桃各个部位的药用价值。《本草纲目》中记载：“（樱桃）调中益脾气，令人好颜色，止泄精。”樱桃主要用于病后体虚气弱，脾胃功能失调，气短心悸，倦怠少食者。与酒合用可祛风湿、通经络，治疗风湿性腰腿痛、四肢麻木不仁等。因其富含铁，还用于缺铁性贫血。《名医别录》中记载：“（樱桃）味甘。主调中，益脾气。”樱桃果实可以祛除风湿，治疗瘫痪、冻疮；果汁可以治疗烧伤、烫伤，闷疹；叶片可治胃寒食积，腹泻，疮毒；种子有透疹解毒，发汗解表等功效；枝梗可以治疗寒疼，气疼；根有调气活血的作用。樱桃叶中含有的黄酮类化合物具有保护心肌，降低心肌耗氧量，调节心肌功能，增加冠脉流量，降低阻力的功效，对促进微动脉血流恢复，缓解心绞痛，降低舒张压及对胸闷、心悸及早博均有一定疗效。樱桃还含有数种抗癌成分，如抗氧化剂功效的花青素等，由于这些物质的存在而有助于预防皮肤癌、肺癌、乳癌和肝癌。

发明内容

目前针对樱桃核的化学成分研究较少，还没有文献报道。与樱桃叶中含有大量黄酮类成分不同，樱桃核中的黄酮含量较少。通过抗菌活性追踪，樱桃核提取物30%大孔树脂部分有较强的抗菌活性。利用液质联用技术对该部分的化学成分进行推测，基本上为简单酚酸类化合物和木脂素类化合物，因此确定该部分（总酚酸）为樱桃核的抗菌有效部位。

樱桃属于药食同源类植物，无毒、副作用。从其中开发出来的抗菌药物具有低毒高效的特点，有十分宽广的市场前景。

本发明的目的之一是提供一种植物樱桃核的总酚酸的制备方法，该方法是将取樱桃核原料粉碎成粗粉，用甲醇或乙醇提取，减压浓缩得到粗体物后用水混悬，再上大孔树脂以水醇系统洗脱得到总酚酸。该方法采用大孔树脂层析一步即可获得有效部位，具体通过以下步骤实现：

1. 取樱桃核原料粉碎成粗粉，用5~10倍体积量的甲醇或乙醇提取2~3次，甲醇或乙醇的体积浓度为50%~100%，提取采用加热回流或超声提取；

2. 将提取液合并后减压浓缩，除去甲醇或乙醇，减压浓缩干燥既得浸膏；

3. 浸膏加水混悬后，上大孔树脂，水洗脱2~6个柱体积后再用体积浓度30%~50%甲醇或乙醇洗脱，收集甲醇或乙醇洗脱液，减压回收甲醇或乙醇，喷雾干燥得到干燥粉末，总得率为2%~6%。

采用的大孔树脂为DM301、NKA-9、AB-8、D101、DM130、DM-18、D312型弱极性或中极性大孔树脂。所得的提取物利用FeCl₃颜色反应呈阳性，且HCl-Mg反应呈阴性，排除了黄酮类化合物的影响，确定所得提取物为总酚酸。利用可见分光光度法，以没食子酸 （自制，纯度97%）为对照品，0.6%FeCl₃-0.9%K₃[Fe(CN)₆] (1:0.9)混合溶液为显色剂，检测波长720nm，检测结果显示所得提取物其总酚酸含量为60%~90%。

本发明的目的之二是提供樱桃核中总酚酸在制备抗菌药物中的新用途。所述的植物樱桃核中总酚酸加入药剂学允许的赋型制剂制备成药物制剂，制剂形式为外用制剂或口服制剂。所述外用制剂包括涂膜剂、软膏、硬膏、霜剂或凝胶，所述口服制剂包括片剂、胶囊剂、丸剂或颗粒剂。

本发明的有益之处是：（1）本发明采用的原料为食品生产中的工业废料，成本低廉，也是对传统中药进行的二次开发。（2）在抗菌活性追踪的指导下对原药材中的有效部位进行了充分的提纯，浓缩，得到其总酚酸（其有效部位），利用分光光度法测定总酚酸含量，其含量达到60%~90%，优于其粗提物直接入药，且便于制成各种制剂。（3）用本方法获得的有效部位，具有显著的抑菌作用，可抑制金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、乙型链球菌的生长。（4）获得的总酚酸可以制成外用制剂或口服制剂，给药简单，药物利用度高。（5）本发明方法设计合理，具有工艺简单、成本低、能耗低和生产过程污染低的特点。

具体实施方式

本发明结合具体实施例作进一步的说明。

实施例1   樱桃核总酚酸的制备

取樱桃核200g左右粉碎，加1600ml 70%乙醇-水，回流提取2小时，过滤后滤渣再加1000ml 70%乙醇-水回流提取1小时，合并两次滤液，减压回收乙醇，得到浸膏。将此浸膏用200ml水混悬后上D101大孔树脂，水洗脱3个体积后再用40%乙醇-水洗脱至流出液近无色，收集此部分洗脱液，减压回收乙醇，喷雾干燥得到干燥粉末，得到6.6g总酚酸，总得率约为3.3%。所得的提取物利用FeCl₃颜色反应呈阳性，且HCl-Mg反应呈阴性，排除了黄酮类化合物的影响，确定所得提取物为总酚酸。利用可见分光光度法，以没食子酸 （自制，纯度97%）为对照品，0.6%FeCl₃-0.9%K₃[Fe(CN)₆] (1:0.9)混合溶液为显色剂，检测波长720nm，检测结果显示所得提取物其总酚酸含量为82%。

实施例2   樱桃核总酚酸的制备

取樱桃核200g左右粉碎，加1600ml 90%乙醇-水，回流提取2小时，过滤后滤渣再加1000ml 90%乙醇-水回流提取1小时，合并两次滤液，减压回收乙醇，得到浸膏。将此浸膏用200ml水混悬后上D312大孔树脂，水洗脱3个体积后再用50%乙醇-水洗脱至流出液近无色，收集此部分洗脱液，减压回收乙醇，喷雾干燥得到干燥粉末，得到8g总酚酸，总得率约为4%。所得的提取物利用FeCl₃颜色反应呈阳性，且HCl-Mg反应呈阴性，排除了黄酮类化合物的影响，确定所得提取物为总酚酸。利用可见分光光度法，以没食子酸 （自制，纯度97%）为对照品，0.6%FeCl₃-0.9%K₃[Fe(CN)₆] (1:0.9)混合溶液为显色剂，检测波长720nm，检测结果显示所得提取物其总酚酸含量为80%。

实施例3   樱桃核总酚酸的制备

取樱桃核1000g左右粉碎，加8000ml 60%乙醇-水，回流提取2小时，过滤后滤渣再加3000ml 60%乙醇-水回流提取1小时，合并两次滤液，减压回收乙醇，得到浸膏。将此浸膏用1000ml水混悬后上AB-8大孔树脂，水洗脱3个体积后再用30%乙醇-水洗脱至流出液近无色，收集此部分洗脱液，减压回收乙醇，喷雾干燥得到干燥粉末，得到30g总酚酸，总得率约为3%。所得的提取物利用FeCl₃颜色反应呈阳性，且HCl-Mg反应呈阴性，排除了黄酮类化合物的影响，确定所得提取物为总酚酸。利用可见分光光度法，以没食子酸 （自制，纯度97%）为对照品，0.6%FeCl₃-0.9%K₃[Fe(CN)₆] (1:0.9)混合溶液为显色剂，检测波长720nm，检测结果显示所得提取物其总酚酸含量为85%。

实施例4   樱桃核总酚酸的制备

取樱桃核1000g左右粉碎，加8000ml 80%乙醇-水，回流提取2小时，过滤后滤渣再加3000ml 80%乙醇-水回流提取1小时，合并两次滤液，减压回收乙醇，得到浸膏。将此浸膏用1000ml水混悬后上DM301大孔树脂，水洗脱3个体积后再用50%乙醇-水洗脱至流出液近无色，收集此部分洗脱液，减压回收乙醇，喷雾干燥得到干燥粉末，得到45g总酚酸，总得率约为4.5%。所得的提取物利用FeCl₃颜色反应呈阳性，且HCl-Mg反应呈阴性，排除了黄酮类化合物的影响，确定所得提取物为总酚酸。利用可见分光光度法，以没食子酸 （自制，纯度97%）为对照品，0.6%FeCl₃-0.9%K₃[Fe(CN)₆] (1:0.9)混合溶液为显色剂，检测波长720nm，检测结果显示所得提取物其总酚酸含量为81%。

实施例5   涂膜剂的制备

取聚乙烯醇（PVA）120g，加入到350ml蒸馏水中浸泡溶胀后水浴加热，过滤。取上述1-4任一实施例方法获得的樱桃核总酚酸50g，与10g甘油、30g苯甲酸一起加入至500ml乙醇中在搅拌下至药物基本溶解，搅拌均匀后缓缓加入聚乙烯醇液中，随加随搅拌，搅匀后滤过既得。

实施例6   软膏剂的制备

取硬脂酸100g在水浴上熔化，加入羊毛脂20g、白凡士林120g并水浴加热至80℃，另将甘油120g及蒸馏水500ml加热至90℃，再加入十二烷基硫酸钠10g和羟苯乙酯1g溶解为水相，然后慢慢将水相倒入油相中，边加边搅拌至冷凝，既得乳剂型基质，取上述1-4任一实施例方法获得的樱桃核总酚酸50g加入上述基质中，搅拌均匀即得。

实施例7   硬膏剂的制备

取生胶洗净，切成适宜大小的条块，在炼胶机中塑炼成网状胶片，浸入适量的溶剂汽油中，浸泡至完全溶胀成凝胶状，移入打膏桶内搅拌3-4小时，依次加入凡士林、羊毛脂、松香、氧化锌等制成基质，再加入上述1-4任一实施例方法获得的樱桃核总酚酸适量，继续搅拌3小时，待已成均匀膏浆时，以七号筛滤过，经涂布、切割、加衬、包装既得。

实施例8   凝胶剂的制备

取卡波姆940适量撒入100ml纯水中，搅拌下滴加三乙醇胺，制成凝胶基质，另取上述1-4任一实施例方法获得的樱桃核总酚酸20g与羟基苯乙酯1g溶解于200ml乙醇中，搅拌下加入凝胶基质中，搅拌既得。

实施例9   片剂制备

取上述1~4任一实施例方法获得的樱桃核总酚酸50g，粉碎后过80目筛，与淀粉100g混匀，加10%淀粉浆10g制成软材加入硬脂酸镁1g，干淀粉10g混匀后制成1000片，既得。每片含樱桃核总酚酸50mg。

实施例10   胶囊剂制备

取上述1~4任一实施例方法获得的樱桃核总酚酸50g，粉碎后过80目筛，与淀粉100g混匀，加10%淀粉浆10g制成软材，用14目筛制粒后，置60℃~70℃干燥后于12目筛整粒，套入1号空心胶囊中。共装1000粒，每粒胶囊含樱桃核总酚酸50mg。

实施例11   丸剂制备

取上述1~4任一实施例方法获得的樱桃核总酚酸50g，粉碎后过80目筛，适量蜂蜜作黏合剂制成丸。

实施例12   颗粒剂制备

取上述1~4任一实施例方法获得的樱桃核总酚酸50g，粉碎后过80目筛，加10%淀粉浆制成软材，用14目筛制粒后，置60℃~70℃干燥后于12目筛整粒，分装，密封，包装既得。

实施例13  

采用实施例1制备得到的樱桃核总酚酸体外抗菌活性筛选试验

采用肉汤稀释法中的常量稀释法药敏试验方法：

1. 10支管中先各加1ml的肉汤培养基；

2. 在1号管加1ml的药物，与肉汤混匀后移取1ml至2号管，在2中混匀后再移1ml到3号管，一次类推到9号管，从9号管移去1ml到废液缸，10号不加药；

3. 除9号外其余都再加0.1ml的3×10⁶CFU/ml的细菌，混匀后，37℃恒温培养18-24小时。之后用接种环取培养后的各试管的试液，涂于培养皿上，观察是否长菌。

其中，金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌和大肠杆菌的实验室管1-8号的药物含量分别为62.5mg/ml、33.2mg/ml、18.2mg/ml、7.3mg/ml、5.2 mg/ml、2.62 mg/ml、1.42 mg/ml、0.63 mg/ml，9号为不加菌阴性对照，10号加菌阳性对照。绿脓杆菌和乙型链球菌的实验试管1-8号的药物含量分别为2.03 mg/ml、0.92 mg/ml、0.53 mg/ml、0.31 mg/ml、0.12 mg/ml、53.75μg/ml、35.23μg/ml、15.82μg/ml。9号为不加菌阴性对照，10号加菌阳性对照。其中链球菌的营养肉汤经121℃15min灭菌后放到室温时，向其中加入5%的小牛血清配成；平板培养基经灭菌放到50℃后加入5%的小牛血清，混匀后制成培养皿。实验结果见表1。

表1 具有抗菌活性的樱桃核提取物体外抗菌活性对比表 

Claims (8)

1.一种植物樱桃核中总酚酸的制备方法，其特征是将取樱桃核原料粉碎成粗粉，用甲醇或乙醇提取，减压浓缩得到粗体物后用水混悬，再上大孔树脂以水醇系统洗脱得到总酚酸。

2.一种植物樱桃核中总酚酸的制备方法，其特征是：通过以下步骤实现：

取樱桃核原料粉碎成粗粉，用5~10倍体积量的甲醇或乙醇提取2~3次，甲醇或乙醇的体积浓度为50%~100%，提取采用加热回流或超声提取；

将提取液合并后减压浓缩，除去甲醇或乙醇，减压浓缩干燥既得浸膏；

浸膏加水混悬后，上大孔树脂，水洗脱2~6个体积后再用体积浓度30%~50%乙醇洗脱至流出液无色，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇，喷雾干燥得到干燥粉末。

3.根据权利要求1或2所述的一种植物樱桃核中总酚酸的制备方法，其特征是：步骤（3）所述的大孔树脂为DM301、NKA-9型、AB-8、D101、DM130、DM-18、D312型弱极性或中极性大孔树脂。

4.根据权利要求1或2制备得到的植物樱桃核中的总酚酸在制备抗菌药物中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其中所述的菌包括金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、乙型链球菌。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征是：所述的植物樱桃核中总酚酸加入药剂学允许的赋型制剂制备成药物制剂，制剂形式为外用制剂或口服制剂。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征是：所述外用制剂包括涂膜剂、软膏、硬膏、霜剂或凝胶。

8.根据权利要求6所述的应用，其特征是：所述口服制剂包括片剂、胶囊剂、丸剂或颗粒剂。