CN103288615A - 单环间苯三酚类化合物及其药物组合物和其应用 - Google Patents

Abstract

提供单环间苯三酚类化合物Rxd-20和Rxd-44或其药用盐，以其为有效成分和至少一种药学上可接受的载体组成的药物组合物，其制备方法，以及其在制备抗肿瘤药物中的应用。Rxd-20和Rxd-44为具有五元环侧链的间苯三酚类化合物，具有显著的体外细胞毒活性，化学结构新颖，活性强，作为抗肿瘤药物有较多优势。

Description

单环间苯三酚类化合物及其药物组合物和其应用

技术领域：

本发明属于药物技术领域，具体地说，涉及具有抗肿瘤活性的活性单环间苯三酚类化合物，其制备方法，以该化合物为活性成分的药物组合物，以及其在制备治疗肿瘤疾病的药物中的应用。

背景技术：

金丝桃属（Hypericum）是藤黄科（Guttiferae）的一个大属，全世界约400种，除南北两极地或荒漠地及大部分热带低地外世界广布。我国约有55种8亚种，几产于全国各地，但主要集中在西南。本属植物是一类重要的药用和观赏植物类群。金丝桃属植物的许多种类具有药用价值,其中民间药用植物约有18种。主要用于抗菌消炎，收敛止血，解毒消肿，利湿止痛。国外民间或临床医学上也较常使用本属植物治疗神经系统疾病，治外伤，抗菌等方面。正是由于该属植物中有许多种均具有长期的民间药用基础，各国先后对该属植物展开了大量的研究工作，尤其是在药学研究方面。先后从不同的金丝桃属植物中发现了如金丝桃素类、槲皮苷、金丝桃苷、芦丁、黄烷酮醇类、黄酮类、酮类、香豆素类和间苯三酚衍生物(贯叶金丝桃素）等活性成分。其中间苯三酚类化合物结构类型十分丰富且多变，且多有全新骨架类型的化合物报道。其中单环间苯三酚类化学成分结构类型十分多样，且生物活性较好，一直是国际上相关领域的研究热点。然而迄今为止，现有技术中未见有单环间苯三酚类化合物Rxd-20和Rxd-44及其活性的报道。

发明内容：

本发明目的在于提供从芒种花（Hypericum henryi levl.）中分离得到的一类具有五元环侧链的单环间苯三酚类化合物，其制备方法，在药物中特别是在抗肿瘤药物中的应用。

为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案：

下述结构式所示的单环间苯三酚类化合物Rxd-20和Rxd-44或其药用盐，

如所述的药用盐，是指药学上可接受的盐，与有机酸如酒石酸或柠檬酸或甲酸或乙二酸，或是与无机酸如盐酸或硫酸或磷酸形成的盐。

一种用于预防或治疗肿瘤疾病的药物组合物，其包含述的化合物Rxd-20和Rxd-44或其药用盐和至少一种药学上可接受的载体。

所示的化合物Rxd-20和Rxd-44的制备方法，包括用100％丙酮或乙醇或甲醇溶剂，冷浸或热回流浸提芒种花地上部分粗粉得到总浸膏，总浸膏经各种正反相柱层析及制备和半制备HPLC分离后得所述化合物。

所述的化合物Rxd-20和Rxd-44或其药用盐在制备预防或治疗肿瘤药物中的应用。

所述的化合物Rxd-20和Rxd-44或其药用盐在制备预防或治疗白血病、肺癌、结肠癌药物中的应用。

本发明的化合物Rxd-20和Rxd-44可直接作为药物使用，其余辅料为药物学上可接受的，对人和动物无毒和惰性的药用载体或赋形剂。

所述的药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、超填料以及药物制品辅剂。将所述的有效提取物或有效部位以单位体重服用量的形式使用。本发明的药物可经口服和口腔喷雾两种形式给药。

口服可用其固体或液体制剂，如粉剂、片剂、糖衣片剂、胶囊、酊剂、糖浆、滴丸剂等。

口腔喷雾可用其固体或液体制剂。

本发明药物可用于治疗肿瘤疾病。

具体实施方式：

下面用本发明的实施例来进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此来限定本发明。

实施例1：

化合物Rxd-20和Rxd-44的制备：

干燥芒种花地上部分18kg，粉碎后用100%甲醇(每次50升)在室温下冷浸三次，每次2天，提取液浓缩后用硅胶拌样上硅胶柱，分别以氯仿及乙酸乙酯冲柱。氯仿部分125g，以丙酮溶解，聚酰胺拌样上MCI柱，以甲醇/水为流动相梯度洗脱，用TLC进行检测，合并相同馏份，得到七个部分。其中第二部分经Rp-18反相柱(90%MeOH:H₂O)划分为三个组分，组分2以Petroleum ether-EtOAc过硅胶柱之后再经Sephadex LH-20柱得到化合物Rxd-20(8mg)。第三部分硅胶拌样过硅胶柱分成三部分，组分3经Sephadex LH-20柱后，再经过MPLC分离得到Rxd-44（100mg）。

化合物结构解析：

表-1.Rxd-20的NMR波谱数据(Me₂CO)

表-2.Rxd-44的NMR波谱数据(Me₂CO)

实施例2：

化合物Rxd-20、Rxd-44体外抗肿瘤活性评价：

药物与试剂:细胞试验用的RPMI1640培养基、DMEM培养基、胎牛血清(FBS)、胰酶为GibcoBRL产品(Invitrogen Coporation,USA)；细胞计数试剂盒CCK-8为日本同仁株式会社产品。其它化学试剂购自Sigma/Aldrich公司。

细胞系与细胞培养:人非小细胞肺癌细胞株NCI-H460和人前列腺癌细胞株PC3的培养液为采用添加了10%FBS的RPMI1640培养基,人乳腺癌细胞株MCF-7的培养液为添加了10%FBS的高糖DMEM培养基，人结直肠腺癌细胞株HCT-15培养液为添加了10%FBS、2mM L-谷氨酰胺、1.5g/L碳酸氢钠、4.5g/L葡萄糖、10mMHEPES和1.0mM丙酮酸钠的RPMI1640培养基培养。细胞培养条件：37℃、饱和湿度、5%二氧化碳培养箱。

药物作用：收集对数生长期的肿瘤细胞，用培养液配成每毫升含5×10⁴个细胞的单细胞悬液，按100μL/孔接种于96孔板后置于37℃培养箱中培育24小时使细胞贴壁。再将各孔的培养液更换成含不同浓度待测药物的新鲜培养液，每3孔为一个检测浓度。实验另设培养液空白对照组及未加药处理的细胞对照组。药物与细胞作用72h后，取出培养板，按10μL/孔加入CCK-8后继续置于细胞培养箱1-2h。取出，与酶标仪上测定450nm处每孔的光密度值OD。该光密度值和活细胞数目正相关。根据OD值可得出不同浓度药物作用下的细胞相对于对照孔细胞的活力（%），及细胞活力为50%时的药物浓度即药物对细胞增殖的半数抑制浓度IC₅₀。IC₅₀值越小则药物抑制肿瘤细胞增殖的能力越强。

结果：Rxd44对人非小细胞肺癌细胞株NCI-H460、人结直肠腺癌细胞株HCT-15、人乳腺癌细胞株MCF7和人前列腺癌细胞株PC3都显示了很强的增殖抑制活性，IC₅₀2～9μM；Rxd20对上述四种肿瘤细胞也表现了一定的增殖抑制作用，但明显较Rxd44弱，IC₅₀25～50μM。具体数据见表3。

表3.Rxd20、Rxd44对肿瘤细胞增殖的抑制作用（IC₅₀，μM）

注：表中所示为三次独立试验结果的平均值±标准差

结论：Rxd44具有明显的抗肿瘤作用，Rxd20具有一定的抗肿瘤作用。

实施例3：

按实施例1制得Rxd-20、Rxd-44，按其与赋形剂重量比1:1的比例加入赋形剂，制粒压片。

实施例4：

按实施例1制得Rxd-20、Rxd-44，按其与赋形剂重量比1:2的比例加入赋形剂，制粒压片。

实施例5：

按实施例1制得Rxd-20、Rxd-44，按常规胶囊制剂方法制成胶囊。

实施例6：

按实施例1制得Rxd-20或Rxd-44，再按下述方法制成片剂：

片剂：Rxd-20或Rxd-44       100mg

淀粉                       适量

玉米浆                     适量

硬脂酸镁                   适量

实施例7：

胶囊剂：Rxd-20或Rxd-44    100mg

淀粉                      适量

硬脂酸镁                  适量

制备方法：将Rxd-20、Rxd-44，与助剂混合，过筛，在合适的容器中均匀混合，把得到的混合物装入硬明胶胶囊。

实施例8：

鼻喷雾剂：Rxd-20或Rxd-44    80mg

制备方法：搅拌下于适当体积的重蒸馏水中每次加入一种成分，直至完全深解，然后再加入另一种成分。加水至2ml后，将该溶液在无菌过滤器上过滤，装入瓶中并按照适当的剂量分隔。

实施例9：

滴丸：Rxd-20或Rxd-44   1g

聚乙二醇6000           9g

制法：Rxd-20或Rxd-44与聚乙二醇6000熔融液的制备：按上述处方量称取Rxd-20或Rxd-44，加入适量无水乙醇，微热溶解后，加入处方量的聚乙二醇熔融液中（60℃水浴保温），搅拌混合均匀，直至乙醇挥尽为止，静置于60℃水浴中保温30分钟，待气泡除尽，然后将除尽气泡的上述混匀熔融液转入贮液筒内，在保温80-85℃的条件下，控制滴速，一滴滴地滴入冷凝液中，等冷凝完全，倾去冷凝液，收集滴丸，沥净和用滤纸除去丸上的冷凝液，放置硅胶干燥器中或自然干燥即可。

Claims (6)

1.下述结构式所示的单环间苯三酚类化合物Rxd-20和Rxd-44或其药用盐，

2.如权利要求1所述的药用盐，是指药学上可接受的盐，与有机酸如酒石酸或柠檬酸或甲酸或乙二酸，或是与无机酸如盐酸或硫酸或磷酸形成的盐。

3.一种用于预防或治疗肿瘤疾病的药物组合物，其包含权利要求1所述的化合物或其药用盐和至少一种药学上可接受的载体。

4.权利要求1所示的化合物的制备方法，包括用100％丙酮或乙醇或甲醇溶剂，冷浸或热回流浸提芒种花地上部分粗粉得到总浸膏，总浸膏经各种正反相柱层析及制备和半制备HPLC分离后得所述化合物。

5.权利要求1所述的化合物或其药用盐在制备预防或治疗肿瘤药物中的应用。

6.权利要求1所述的化合物或其药用盐在制备预防或治疗白血病、肺癌、结肠癌药物中的应用。