CN102256606A - 有效跳跃人杜兴肌营养不良基因外显子43、46、50-53中至少一个的方法和手段 - Google Patents

有效跳跃人杜兴肌营养不良基因外显子43、46、50-53中至少一个的方法和手段 Download PDF

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Abstract

本发明涉及方法，其中使用分子诱导和/或促进患者中，优选患者分离的细胞中DMD前mRNA的外显子43、外显子46、外显子50-53中至少一个的跳跃，所述方法包括向所述细胞和/或所述患者提供分子。本发明还涉及所述分子本身。

Description

有效跳跃人杜兴肌营养不良基因外显子43、46、50-53中至少一个的方法和手段
发明领域
本发明涉及遗传学领域，更具体而言涉及人类遗传学领域。本发明尤其涉及人杜兴肌营养不良前mRNA剪接的调节。
发明背景
肌病是导致肌肉功能性损伤的病症。肌营养不良(MD)是指特征为骨骼肌的逐渐衰弱和退化的遗传学疾病。杜兴肌营养不良(Duchennemuscular dystrophy，DMD)和贝克肌营养不良(Becker muscular dystrophy，BMD)是最常见的儿童形式的肌营养不良。它们是隐性遗传疾病，因为负责DMD和BMD的基因位于X染色体上，突变主要影响男性，发病率为每3500名男孩中约1例。
DMD和BMD是由编码抗肌萎缩蛋白的DMD基因的遗传学缺陷导致，所述抗肌萎缩蛋白是细胞骨架和细胞外基质之间相互作用所必需的肌肉蛋白，用于在收缩期间维持肌纤维的稳定性。DMD是严重且致死的神经肌肉病症，导致在12岁之前依靠轮椅维持，并且由于呼吸或心脏衰竭，DMD患者通常在30岁之前死去。相比之下，BMD患者通常直至晚年仍能走动，并具有近乎正常的预期寿命。DMD基因中的DMD突变特征为移码插入或缺失或无义点突变，导致功能性抗肌萎缩蛋白的缺乏。通常，BMD突变保持阅读框完整，允许合成具有部分功能性抗肌萎缩蛋白。
最近十年，已经出现为了恢复抗肌萎缩蛋白转录本的破坏的阅读框而进行的剪接的特定修饰，作为杜兴肌营养不良(DMD)的有希望的疗法(van Ommen，van Deutekom，Aartsma-Rus，Curr Opin Mol Ther.2008；10(2)：140-9，Yokota，Duddy，Partidge，Acta Myol.2007；26(3)：179-84，van Deutekom et al.，N Engl J Med.2007；357(26)：2677-86)。
使用干扰剪接信号的反义寡核苷酸(AON)，可以在DMD前mRNA中诱导特定的外显子跳跃，从而恢复开放阅读框并将严重的DMD转变成较轻微的BMD表型(van Deutekom et al.Hum Mol Genet.2001；10：1547-54；Aartsma-Rus et al.，Hum Mol Genet 2003；12(8)：907-14.)。在由于外显子23中无义突变导致抗肌萎缩蛋白缺乏的mdx小鼠模型中首次获得体内概念验证(proof-of-concept)。肌内注射和静脉内注射靶向突变的外显子23的AON恢复抗肌萎缩蛋白的表达持续至少三个月(Lu et al.Nat Med.2003；8：1009-14；Lu et al.，Proc Natl Acad Sci U S A.2005；102(1)：198-203)。这是通过纤维膜处抗肌萎缩蛋白关联蛋白的恢复以及处理的肌肉的功能性改善来实现的。还在hDMD小鼠模型中实现人外显子的体内跳跃，所述hDMD小鼠模型包含整合在小鼠染色体5中的人DMD基因的完整拷贝(Bremmer-Bout et al.Molecular Therapy.2004；10：232-40；′t Hoen et al.J Biol Chem.2008；283：5899-907)。
最近，成功完成了首次用于人体的研究，其中将诱导外显子51跳跃的AON注入4名DMD患者胫骨前肌的小区域内。在治疗的所有四名患者的大多数肌纤维中观察到新抗肌萎缩蛋白表达，并且该AON是安全且耐受良好的(van Deutekom et al.N Engl J Med.2007；357：2677-86)。
发明的详细描述
方法
第一方面，本发明提供了诱导和/或促进患者中，优选在患者分离的细胞中，DMD前mRNA的外显子43、46、50-53中至少一个的跳跃的方法，所述方法包括向所述细胞和/或所述患者提供与所述外显子中的至少8个核苷酸的连续区段结合的分子。应当理解，所述方法包括体外、体内或离体方法。
因此，提供了诱导和/或促进患者中，优选在所述患者分离的细胞中，DMD前mRNA的外显子43、46、50-53中至少一个的跳跃的方法，所述方法包括向所述细胞和/或所述患者提供与所述外显子中的至少8个核苷酸的连续区段结合的分子。
如本文所定义，DMD前mRNA优选表示DMD或BMD患者DMD基因的前mRNA。
优选地，患者意图表示患有本文随后所定义的具有DMD或BMD的患者，或由于他或她的遗传学背景而易于发展为DMD或BMD的患者。就DMD患者而言，所用的寡核苷酸优选纠正所述患者DMD基因所呈现的一个突变，并且因此优选会产生看起来与BMD蛋白类似的DMD蛋白：所述蛋白优选是如本文随后所定义的功能性抗肌萎缩蛋白。就BMD患者而言，所用的寡核苷酸优选纠正所述患者BMD基因所呈现的一个突变，并且因此优选会产生抗肌萎缩蛋白，其比原来存在于所述BMD患者中的抗肌萎缩蛋白功能性更强。
外显子跳跃是指诱导细胞中的成熟mRNA不包含正常存在其中的特定外显子。通过向表达所述mRNA的前mRNA的细胞提供能干扰关键序列的分子能干扰外显子包含信号的分子来进行外显子跳跃，所述关键序列例如所述外显子剪接所必需的剪接受体序列的剪接供体，所述外显子包含信号是识别一段核苷酸作为待包括在mRNA中的外显子所必需的。术语前mRNA是指通过转录从细胞核中的DNA模板合成的未加工的或部分加工的前体mRNA。
在本发明的语境中，本文所指的诱导和/或促进外显子跳跃表示治疗的患者的一个或多个(肌肉)细胞中至少1％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更多的DMD mRNA不包含所述外显子。如实施例中所述，这优选通过PCR来评价。
优选地，本发明方法通过诱导和/或促进患者的一个或多个(肌肉)细胞中的DMD前mRNA的外显子43、46、50-53中至少一个的跳跃，向所述患者提供功能性抗肌萎缩蛋白和/或减少所述患者中异常抗肌萎缩蛋白的产生和/或增加所述患者中功能性抗肌萎缩蛋白的产生。向患者提供功能性抗肌萎缩蛋白和/或减少所述患者中异常抗肌萎缩蛋白的产生通常应用于DMD患者中。增加所述患者中功能性抗肌萎缩蛋白的产生通常应用于BMD患者。
因此，优选的方法是这样的方法：其中向患者或所述患者的一个或多个细胞提供功能性抗肌萎缩蛋白和/或其中减少所述患者中异常抗肌萎缩蛋白的产生和/或其中增加所述患者中功能性抗肌萎缩蛋白的产生，其中所述异常或功能性抗肌萎缩蛋白的水平是通过与开始方法时所述患者中的所述抗肌萎缩蛋白的水平比较来评价。
减少异常抗肌萎缩蛋白的产生可以在mRNA水平上评价，并且优选表示通过RT PCR仍然可检测到异常抗肌萎缩蛋白mRNA最初数量的99％、90％、80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、10％、5％或更少。异常抗肌萎缩蛋白mRNA或蛋白在本文也被称为非功能性抗肌萎缩蛋白mRNA或蛋白。非功能性抗肌萎缩蛋白优选的是不能与肌动蛋白和/或DGC蛋白复合物成员结合的抗肌萎缩蛋白。非功能性抗肌萎缩蛋白或抗肌萎缩蛋白mRNA通常没有或不编码具有蛋白的完整C-末端的抗肌萎缩蛋白。
增加所述患者或所述患者细胞中功能性抗肌萎缩蛋白的产生可以在mRNA水平上评价(通过RT-PCR分析)，并且优选表示通过RT PCR可以检测到可检测数量的功能性抗肌萎缩蛋白mRNA。在另一个实施方案中，可检测到的抗肌萎缩蛋白mRNA的1％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更多是功能性抗肌萎缩蛋白mRNA。增加所述患者或所述患者细胞中功能性抗肌萎缩蛋白的产生可以在蛋白水平上评价(通过免疫荧光和western印迹分析)，并且优选表示通过免疫荧光或western印迹分析可以检测到可检测数量的功能性抗肌萎缩蛋白。在另一个实施方案中，可检测到的抗肌萎缩蛋白的1％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更多是功能性抗肌萎缩蛋白。
如本文所定义，功能性抗肌萎缩蛋白优选是与具有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的蛋白相应的野生型抗肌萎缩蛋白。功能性抗肌萎缩蛋白优选是这样的抗肌萎缩蛋白，其具有在它的N末端部分中的肌动蛋白结合结构域(N末端的前240个氨基酸)、半胱氨酸富集结构域(氨基酸3361至3685)和C末端结构域(C末端的最后325个氨基酸)，如本领域技术人员所已知的，这些结构域的每一个都存在于野生型抗肌萎缩蛋白中。本文所指的氨基酸与SEQ ID NO：1表示的野生型抗肌萎缩蛋白的氨基酸相符合。换而言之，功能性抗肌萎缩蛋白是至少在一定程度上表现出野生型抗肌萎缩蛋白活性的抗肌萎缩蛋白。“至少在一定程度上”优选表示野生型功能性抗肌萎缩蛋白的相应活性的至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或100％。在本文中，功能性抗肌萎缩蛋白的活性是优选与肌动蛋白和与抗肌萎缩蛋白关联的糖蛋白复合物(DGC)结合(Aartsma-Rus A et al，(2006)，莱顿杜兴肌营养不良突变数据库条目：确定阅读框规则的突变类型反常情况的综述，Muscle Nerve，34：135-144)。通过使用总蛋白提取物的免疫共沉淀或来自肌肉活检的横断面的免疫荧光分析可以显现抗肌萎缩蛋白与肌动蛋白和与DGC复合物的结合，这对本领技术人员是已知的。
患杜兴肌营养不良的个体或患者通常在编码抗肌萎缩蛋白的基因中具有突变，其阻止完整蛋白的合成，即提前的终止阻止C-末端的合成。在贝克肌营养不良中，DMD基因与野生型基因比较也包含突变，但是所述突变通常不会诱导提前的终止且通常合成C-末端。因此合成的功能性抗肌萎缩蛋白具有至少与野生型蛋白一样的活性，尽管没有必要是相同的活性量。BMD个体的基因组通常编码这样的抗肌萎缩蛋白，其包含N末端部分(N末端的前240个氨基酸)、半胱氨酸富集结构域(氨基酸3361至3685)和C末端结构域(C末端的最后325个氨基酸)，但是它的中央杆状结构域可以短于野生型抗肌萎缩蛋白之一(Aartsma-Rus A et al，(2006)，莱顿杜兴肌营养不良突变数据库条目：确定阅读框规则的突变类型和反常情况的综述，Muscle Nerve，34：135-144)。用于DMD治疗的外显子跳跃通常通过跳跃杆状结构域中的外显子以纠正阅读框和允许包含C-末端的抗肌萎缩蛋白的残余部分的合成，克服前mRNA中的提前终止，尽管由于较小的杆状结构域，所述蛋白略小。在优选的实施方案中，患有DMD并通过本文所定义的方法治疗的个体会提供至少在一定程度上表现出野生型抗肌萎缩蛋白活性的抗肌萎缩蛋白。更优选地，如果所述个体是杜兴患者或疑似杜兴患者，功能性抗肌萎缩蛋白是患有BMD个体的抗肌萎缩蛋白：通常所述抗肌萎缩蛋白能与肌动蛋白和DGC两者相互作用，但是它的中央杆状结构域可以短于野生型抗肌萎缩蛋白的中央杆状结构域(Aartsma-Rus A et al，(2006)，莱顿杜兴肌营养不良突变数据库条目：确定阅读框规则的突变类型和反常情况的综述，Muscle Nerve，34：135-144)。野生型抗肌萎缩蛋白的中央杆状结构域包含24个血影蛋白样重复(Aartsma-Rus A et al，(2006)，莱顿杜兴肌营养不良突变数据库条目：确定阅读框规则的突变类型和反常情况的综述，Muscle Nerve，34：135-144)。例如，本文所提供的抗肌萎缩蛋白的中央杆状结构域可以包含5-23个、10-22个或12-18个血影蛋白样重复，只要它能与肌动蛋白和与DGC结合。
本发明方法可以缓解患者生肌细胞或肌细胞的一个或多个特征或缓解具有下述缺失的DMD患者的一种或多种症状：所述缺失包括但不限于DMD基因中的外显子44、44-46、44-47、44-48、44-49、44-51、44-53(可通过外显子43跳跃纠正)、19-45、21-45、43-45、45、47-54、47-56(可通过外显子46跳跃纠正)、51、51-53、51-55、51-57(可通过外显子50跳跃纠正)、13-50、19-50、29-50、43-50、45-50、47-50、48-50、49-50、50、52(可通过外显子51跳跃纠正)、外显子8-51、51、53、53-55、53-57、53-59、53-60(可通过外显子52跳跃纠正)和外显子10-52、42-52、43-52、45-52、47-52、48-52、49-52、50-52、52(可通过外显子53跳跃纠正)，这共占所有具有缺失的DMD患者的68％(Aartsma-Rus et al.，Hum.Mut.2009)。
可选择地，本发明方法可以改善患者肌细胞的一个或多个特征或缓解DMD患者的一种或多种症状，所述DMD患者在DMD基因中具有小突变或具有外显子43、46、50-53的单一外显子重复，这共占所有具有缺失的DMD患者的36％(Aartsma-Rus et al，Hum.Mut.2009)。
此外，对于一些患者，除外显子43、外显子46和/或外显子50-53之外还需要一个其他外显子的同时跳跃以恢复开放阅读框，包括具有特定缺失、小(点)突变或双重或多重外显子重复的患者，例如(但不限于)外显子44-50的缺失需要外显子43和51的共跳跃、外显子46-50的缺失需要外显子45和51的共跳跃、外显子44-52缺失需要外显子43和53的共跳跃、外显子46-52的缺失需要外显子45和53的共跳跃、外显子51-54的缺失需要外显子50和55的共跳跃、外显子53-54的缺失需要外显子52和55的共跳跃、外显子53-56的缺失需要外显子52和57的共跳跃、外显子43或外显子44中的无义突变需要外显子43和44的共跳跃、外显子45或外显子46中的无义突变需要外显子45和46的共跳跃、外显子50或外显子51中的无义突变需要外显子50和51的共跳跃、外显子51或外显子52中的无义突变需要外显子51和52的共跳跃、外显子52或外显子53中的无义突变需要外显子52和53的共跳跃、或双重或多重外显子重复涉及外显子43、46、50、51、52和/或53。
在优选的方法中，诱导外显子43的跳跃、或诱导外显子46的跳跃、或诱导外显子50的跳跃、或诱导外显子51的跳跃、或诱导外显子52的跳跃、或诱导外显子53的跳跃。本发明方法还包括诱导这些外显子中的两个的跳跃。例如，优选外显子50和51、或52和53、或43与51、或43和53、或51和52的跳跃。根据患者中识别的突变的类型和身份(涉及的特定外显子)，本领域技术人员应当知道需要在所述患者中跳跃哪种外显子组合。
在优选的方法中，缓解DMD或BMD患者的一种或多种症状和/或改善来自DMD或BMD患者的一个或多个肌细胞的一个或多个特征。可以在细胞、组织水平或患者自身评价这类症状或特征。
可以通过对来自患者的生肌细胞或肌细胞进行下述任何测定来评价一个或多个特征缓解：减少的肌细胞钙摄取、减少的胶原蛋白合成、改变的形态学、改变的脂质合成、减少的氧化胁迫和/或改善的肌纤维功能、完整性和/或存活。通常使用肌肉活检的横断面的免疫荧光和/或组织化学分析来评价这些参数。
可以使用下述测定中的至少一个来评价肌纤维功能、完整性和/或存活的改善：血液中肌酸激酶可检测地减少、疑似营养不良的肌肉的活检横断面中肌纤维坏死可检测地减少和/或疑似营养不良的肌肉的活检横断面中肌纤维直径的同质性可检测地增加。这些测定中的每一种都是本领域技术人员已知的。
可以如Hodgetts et al(Hodgetts S.，et al，(2006)，NeuromuscularDisorders，16：591-602.2006)所述检测血液中的肌酸激酶。肌酸激酶可检测地减少可以表示与治疗前的同一DMD或BMD患者中的肌酸激酶浓度相比减少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更多。
肌纤维坏死可检测地减少优选在肌肉活检中评价，更优选如Hodgettset al(Hodgetts S.，et al，(2006)，Neuromuscular Disorders，16：591-602.2006)所述使用活检横断面来评价。坏死可检测地减少可以是其中使用活检的横断面鉴定为坏死区域减少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更多。通过与治疗前的同一DMD或BMD患者中评价的坏死比较来测量所述减少。
肌纤维直径的同质性可检测地增加优选在肌肉活检横断面中评价，更优选如在Hodgetts et al(Hodgetts S.，et al，(2006)，NeuromuscularDisorders，16：591-602.2006)中所述评价。通过与治疗前的同一DMD或BMD患者中肌纤维直径的同质性比较测量所述增加。
可以通过对患者自身进行任何下述测定来评价一种或多种症状的缓解：将丧失行走的时间延长、肌力的改善、举重物能力的改善、从地上站起来所需时间的改善、9米行走时间改善、攀爬四层楼梯所需时间的改善、腿功能等级的改善、肺功能的改善、心脏功能的改善、生活质量改善。这些测定中的每一种都是本领域技术人员已知的。举例而言，Manzurat al(Manzur AY et al，(2008)，Glucocorticoid corticosteroids for Duchennemuscular dystrophy(杜兴肌营养不良的糖皮质激素皮质甾类)(综述)，Wileypublishers，The Cochrane collaboration.)的公开对这些测定中的每一种都给出大量的说明。对于这些测定中的每一种，一旦发现测定中测量的参数可检测地改善或延长，则将优选表示使用本发明方法已经缓解了个体的杜兴肌营养不良或贝克肌营养不良的一种或多种症状。可检测地改善或延长优选统计学上显著的改善或延长，如Hodgetts et al(Hodgetts S.，et al，(2006)，Neuromuscular Disorders，16：591-602.2006)所述。可选择地，可以通过测量如本文后所定义的肌纤维功能、完整性和/或存活的改善来评价杜兴肌营养不良或贝克肌营养不良一种或多种症状的缓解。
本发明方法的治疗可以持续至少一周、至少一个月、至少七个月、至少一年、至少2、3、4、5、6年或更长。
如本文所定义的用于本发明的每个分子或寡核苷酸或其等同物都可以适用于向受DMD或BMD影响的或有风险发展成DMD或BMD的个体体内的细胞、组织和/或器官直接给药，并且都可以体内、离体或体外直接给药。本发明分子或寡核苷酸或组合物的给药频率可以依赖于数个参数，例如患者年龄、患者突变、分子数(剂量)、所述分子的剂型。所述频率可以在两周至少一次、或三周至少一次或四周至少一次或五周至少一次或更长的时间周期之间改变。
可以将分子或寡核苷酸或其等同物递送至细胞。当将所述分子、寡核苷酸或其等同物给药至个体时，优选将它溶解在与递送方法相容的溶液中。对于静脉内给药、皮下给药、肌内给药、膜内给药和/或心室内给药，所述溶液优选是生理盐水。特别优选的本发明方法是使用赋形剂，所述赋形剂将进一步增强本文所定义的所述分子、寡核苷酸或其功能等同物递送至细胞或细胞中，优选肌细胞。优选的赋形剂在题目为“药物组合物”的部分中界定。
在本发明优选的方法中，使用能诱导和/或促进患者DMD前mRNA的另一个外显子跳跃的其他分子。优选地，第二外显子选自：患者DMD前mRNA的外显子6、7、11、17、19、21、43、44、45、50、51、52、53、55、57、59、62、63、65、66、69或75。可以使用的分子在表1-7中的任何一个中有描述。这样，阻止了从该前mRNA产生包含DMD前mRNA两个或多个外显子的mRNA。该实施方案也被称为双重或多重外显子跳跃(Aartsma-Rus A，Janson AA，Kaman WE，et al.Antisense-inducedmultiexon skipping for Duchenne muscular dystrophy makes more sense(杜兴肌营养不良的反义诱导的多重外显子跳跃更有意义).Am J Hum Genet2004；74(1)：83-92，Aartsma-Rus A，Kaman WE，Weij R，den Dunnen JT，vanOmmen GJ，van Deutekom JC.Exploring the frontiers of therapeutic exonskipping for Duchenne muscular dystrophy by double targeting within one ormultiple exons(通过双重靶向一个或多个外显子来开发对杜兴肌营养不良治疗的外显子跳跃的前沿).Mol Ther 2006；14(3)：401-7)。在大多数情况下，双重外显子跳跃导致DMD前mRNA仅排除两个靶向外显子。然而，在其他情况下，发现所述前mRNA中的靶向外显子和所述外显子之间的全部区域在产生的mRNA中都不存在了，即使这些区域中存在其他外显子(其间的外显子)。该多重跳跃显然是来自DMD基因的寡核苷酸组合的结果，其中将外显子45的一个寡核苷酸和外显子51的一个寡核苷酸添加到转录DMD基因的细胞中。这种安排导致产生的mRNA不包含外显子45-51。显然地，在所提及寡核苷酸存在的情况下，前mRNA的结构是这样的：刺激剪接体系使外显子44和52彼此连接。
通过在两条互补的寡核苷酸之间提供连接，也有可能特定地促进其间的外显子跳跃。因此，在一个实施方案中，通过连接部分使与至少两个抗肌萎缩蛋白外显子互补的核苷酸区段分离。因此在该实施方案中，所述至少两段核苷酸连接形成单个分子。
如果多于一个化合物或分子用在本发明方法中，则可以以任何顺序将所述化合物给予个体。在一个实施方案中，所述化合物可以被同时给药(意思是在10小时之内，优选在1小时之内给予所述化合物)。尽管如此，这是没有必要的。在另一个实施方案中，相继给予所述化合物。
分子
第二方面，提供了如前部分题目为“方法”所述的方法中使用的分子。如本文所定义的分子优选寡核苷酸或反义寡核苷酸(AON)。
本发明人发现，使用优选与外显子43、46、50-53中任何一个的至少8个核苷酸的连续区段结合的分子，所述外显子被高频率地特异跳跃。尽管该效应与所述分子相对于结合少于8个核苷酸的连续区段的分子的较高结合亲和力有关，但是可能有其他细胞内参数参与促成杂交双链的热动力、动力或结构特征。在优选的实施方案中，使用与所述外显子中的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50个核苷酸的连续区段结合的分子
在优选的实施方案中，包含与DMD前mRNA的外显子43、46、50-53中的任何一个的一部分互补的序列的本发明分子或寡核苷酸是这样的：所述互补部分至少是本发明寡核苷酸长度的50％，更优选至少是60％，更优选至少是70％，更优选至少是80％，更优选至少是90％或更优选至少是95％甚至更优选至少是98％和最优选高达100％。“所述外显子的一部分”优选表示至少8个核苷酸的区段。在最优选的实施方案中，本发明的寡核苷酸由与本文所定义的所述外显子DMD前mRNA的一部分互补的序列组成。例如，寡核苷酸可以包含与本文所定义的所述外显子DMD前mRNA的一部分互补的序列和其他侧翼序列。在更优选的实施方案中，所述寡核苷酸的互补部分的长度至少为8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50个核苷酸。优选地，其他侧翼序列用来修饰蛋白与所述分子或寡核苷酸的结合，或用来修饰寡核苷酸的热动力特征、更优选地用来修饰靶RNA结合亲和力。
用于本发明方法中的优选分子与选自下述核苷酸序列之一的至少8个核苷酸的连续区段结合或互补：
5’-AGAUAGUCUACAACAAAGCUCAGGUCGGAUUGACAUUAUUCAUAGCAAGAAGACAGCAGCAUUGCAAAGUGCAACGCCUGUGG-3’(SEQ ID NO：2)用于外显子43的跳跃；
5′-UUAUGGUUGGAGGAAGCAGAUAACAUUGCUAGUAUCCCACUUG AACCUGGAAAAGAGCAGCAACUAAAAGAAAAGC-3’(SEQID NO：3)用于外显子46的跳跃；
5’-GGCGGTAAACCGUUUACUUCAAGAGCUGAGGGCAAAGCAGCCUG ACCUAGC UCCUGGACUGACCACUAUUGG-3’(SEQ ID NO：4)用于外显子50的跳跃；
5′-CUCCUACUCAGACUGUUACUCUGGUGACACAACCUGUGGUUACUAAGGAAACUGCCAUCUCCAAACUAGAAAUGCCAUCUUCCUUGAUG UUGGAGGUAC-3’(SEQ ID NO：5)用于外显子51的跳跃；
5’-AUGCAGGAUUUGGAACAGAGGCGUCCCCAGUUGGAAGAACUCAUUACCGCUGCCCAAAAUUUGAAAAACAAGACCAGCAAUCAAGAGGCU-3’(SEQ ID NO：6)用于外显子52的跳跃；以及
5’-AAAUGUUAAAGGAUUCAACACAAUGGCUGGAAGCUAAGGAAGAA GCUGAGCAGGUCUUAGGACAGGCCAGAG-3’(SEQ ID NO：7)用于外显子53的跳跃.
在理论上可以制备的与所述外显子之一中通过SEQ ID NO 2-7所定义的连续核苷酸区段结合的多种分子之中，本发明提供了可以在本方法中使用的用于有效跳跃外显子43、外显子46和/或外显子50-53中至少一个的不同的分子。尽管跳跃效应可以针对所述区段中相对高密度的推定的SR蛋白结合位点，但是可能有其他参数参与促成所述分子或其他分子的摄取，细胞内参数例如杂交双链的热动力、动力或结构特征。
发现与包括在SEQ ID NO 2-7中任一个的连续区段或组成SEQ IDNO 2-7中任一个的连续区段结合的分子分别导致被提供该分子的细胞和/或患者中外显子43、外显子46和/或外显子50-53的高效跳跃。因此，在优选的实施方案中，提供了这样的方法：其中分子与SEQ ID NO 2-7中至少8、10、12、15、18、20、25、30、35、40、45、50个核苷酸的连续区段结合。
在用于诱导和/或促进跳跃外显子43、外显子46和/或外显子50-53中任一个的优选实施方案中，本发明提供的分子包含反义核苷酸序列或由其组成，所述反义核苷酸序列选自表1-6中任一个所述的反义核苷酸序列。本发明分子优选包含SEQ ID NO 16、SEQ ID NO 65、SEQ ID NO 70、SEQ ID NO 91、SEQ ID NO 110、SEQ ID NO 117、SEQ ID NO 127、SEQID NO 165、SEQ ID NO 166、SEQ ID NO 167、SEQ ID NO 246、SEQ IDNO 299、SEQ ID NO：357的反义核苷酸序列或由SEQ ID NO 16、SEQ IDNO 65、SEQ ID NO 70、SEQ ID NO 91、SEQ ID NO 110、SEQ ID NO 117、SEQ ID NO 127、SEQ ID NO 165、SEQ ID NO 166、SEQ ID NO 167、SEQID NO 246、SEQ ID NO 299、SEQ ID NO：357的反义核苷酸序列组成。
本发明的优选分子包含8-50个核苷酸或碱基的核苷酸类或核苷酸或反义寡核苷酸序列，更优选10-50个核苷酸，更优选20-40个核苷酸，更优选20-30个核苷酸，例如20个核苷酸、21个核苷酸、22个核苷酸、23个核苷酸、24个核苷酸、25个核苷酸、26个核苷酸、27个核苷酸、28个核苷酸、29个核苷酸、30个核苷酸、31个核苷酸、32个核苷酸、33个核苷酸、34个核苷酸、35个核苷酸、36个核苷酸、37个核苷酸、38个核苷酸、39个核苷酸、40个核苷酸、41个核苷酸、42个核苷酸、43个核苷酸、44个核苷酸、45个核苷酸、46个核苷酸、47个核苷酸、48个核苷酸、49个核苷酸或50个核苷酸。本发明的最优选分子包含25个核苷酸的核苷酸类序列。
此外，所示的序列没有一个源自剪接点的保守部分。因此，所述分子不可能介导来自DMD前mRNA的其他外显子或来自其他基因的外显子的差异剪接。
在一个实施方案中，本发明的分子是与确定序列结合的化合物分子，或者是已经被修饰得能与DMD前RNA分子上的对应核苷酸序列结合的诸如RNA结合蛋白或非天然的锌指蛋白的蛋白。用于筛查与特定核苷酸序列结合的化合物分子的方法例如在PCT/NL01/00697和美国专利第6,875,736号中公开，通过引用将二者并入本文。用于设计与特定核苷酸序列结合的RNA结合锌指蛋白的方法在Friesen and Darby，NatureStructural Biology 5：543-546(1998)中公开，通过引用将其并入本文。
本发明的优选分子与SEQ ID NO 2：5’-AGAUAGUCUACAACAAAGCUCAGGUCGGAUUGACAUUAUUCAUAGCAAGAAGACAGCAGCAUUGCAAAGUGCAACGCCUGUGG-3’序列的至少一部分结合，所述序列存在于DMD基因的外显子43中。更优选地，本发明提供的分子包含SEQ ID NO 8-SEQ ID NO 69的反义核苷酸序列或由SEQ ID NO 8-SEQ ID NO 69的反义核苷酸序列组成。
在更优选的实施方案中，本发明提供的分子包含SEQ ID NO 16和/或SEQ ID NO 65的反义核苷酸序列或由SEQ ID NO 16和/或SEQ ID NO65的反义核苷酸序列组成。
在最优选的实施方案中，本发明提供的分子包含SEQ ID NO 65的反义核苷酸序列或由SEQ ID NO 65的反义核苷酸序列组成。发现该分子在调节肌细胞和/或患者的DMD前mRNA外显子43的剪接中是非常有效的。
本发明的另一个优选分子与SEQ ID NO 3：5′-UUAUGGUUGGAGGAAGCAGAUAACAUUGCUAGUAUCCCACUUG AACCUGGAAAAGAGCAGCAACUAAAAGAAAAGC-3’序列的至少一部分结合，所述序列存在于DMD基因的外显子46中。更优选地，本发明提供的分子包含SEQ ID NO 70-SEQ ID NO 122的反义核苷酸序列或由SEQ ID NO 70-SEQ ID NO 122的反义核苷酸序列组成。在更优选的实施方案中，本发明提供的分子包含SEQ ID NO 70、SEQ ID NO 91、SEQID NO 110和/或SEO ID NO117的反义核苷酸序列或由SEQ ID NO 70、SEQ ID NO 91、SEQ ID NO 110和/或SEQ ID NO117的反义核苷酸序列组成。
在最优选的实施方案中，本发明提供的分子包含SEQ ID NO 117的反义核苷酸序列或由SEQ ID NO 117的反义核苷酸序列组成。发现该分子在调节肌细胞和/或患者的DMD前mRNA外显子46的剪接中是非常有效的。
本发明的另一个优选分子与SEQ ID NO 4：5’-GGCGGTAAACCGUUUACUUCAAGAGCUGAGGGCAAAGCAGCCUGACCUAGCUCCUGGACUGACCACUAUUGG-3’序列的至少一部分结合，所述序列存在于DMD基因的外显子50中。更优选地，本发明提供的分子包含SEQ ID NO 123-SEQ ID NO 167和/或SEQ ID NO 529-SEQID NO 535的反义核苷酸序列或由SEQ ID NO 123-SEQ ID NO 167和/或SEQ ID NO 529-SEQ ID NO 535的反义核苷酸序列组成
在更优选的实施方案中，本发明提供的分子包含SEQ ID NO 127、或SEQ ID NO 165、或SEQ ID NO 166和/或SEQ ID NO 167的反义核苷酸序列或由SEQ ID NO 127、或SEQ ID NO 165、或SEQ ID NO 166和/或SEQ ID NO 167的反义核苷酸序列组成。
在最优选的实施方案中，本发明提供的分子包含SEQ ID NO 127的反义核苷酸序列或由SEQ ID NO 127的反义核苷酸序列组成。发现该分子在调节肌细胞和/或患者的DMD前mRNA外显子50的剪接中是非常有效的。
本发明的另一个优选分子与SEQ ID NO 5：5′-CUCCUACUCAGACUGUUACUCUGGUGACACAACCUGUGGUUACUAAGGAAACUGCCAUCUCCAAACUAGAAAUGCCAUCUUCCUUGAUG UUGGAGGUAC-3’序列的至少一部分结合，所述序列存在于DMD基因的外显子51中。更优选地，本发明提供的分子包含SEQ ID NO 168-SEQID NO 241的反义核苷酸序列或由SEQ ID NO 168-SEQ ID NO 241的反义核苷酸序列组成。
本发明的另一个优选分子与SEQ ID NO 6：5’-AUGCAGGAUUUGGAACAGAGGCGUCCCCAGUUGGAAGAACUCAUUACCGCUGCCCAAAAUUUGAAAAACAAGACCAGCAAUCAAGAGGCU-3’序列的至少一部分结合，所述序列存在于DMD基因的外显子52中。更优选地，本发明提供的分子包含SEQ ID NO 242-SEQ ID NO 310的反义核苷酸序列或由SEQ ID NO 242-SEQ ID NO 310的反义核苷酸序列组成。在更优选的实施方案中，本发明提供的分子包含SEQ ID NO 246和/或SEQ ID NO 299的反义核苷酸序列或由SEQ ID NO 246和/或SEQID NO 299的反义核苷酸序列组成。在最优选的实施方案中，本发明提供的分子包含SEQ ID NO 299的反义核苷酸序列或由SEQ ID NO 299的反义核苷酸序列组成。发现该分子在调节肌细胞和/或患者的DMD前mRNA外显子52的剪接中是非常有效的。
本发明的另一个优选分子与SEQ ID NO 7：5’-AAAUGUUAAAGGAUUCAACACAAUGGCUGGAAGCUAAGGAAGAAGCUGAGCAGGUCUUAGGACAGGCCAGAG-3’序列的至少一部分结合，所述序列存在于DMD基因的外显子53中。更优选地，本发明提供的分子包含SEQ ID NO 311-SEQ ID NO 358的反义核苷酸序列或由SEQ ID NO 311-SEQ ID NO 358的反义核苷酸序列组成。
在最优选的实施方案中，本发明提供的分子包含SEQ ID NO 357的反义核苷酸序列或由SEQ ID NO 357的反义核苷酸序列组成。发现该分子在调节肌细胞和/或患者的DMD前mRNA外显子53的剪接中是非常有效的。
本发明分子的核苷酸序列可以包含RNA残基、一个或多个DNA残基和/或一个或多个核苷酸类似物或等同物，这将在下文进一步详述。
优选地，本发明分子包含一个或多个被修饰的残基，以增加核酸酶抗性和/或增加反义核苷酸与靶序列的亲和力。因此，在优选的实施方案中，所述反义核苷酸序列包含至少一个核苷酸类似物或等同物，其中将核苷酸类似物或等同物定义为具有修饰碱基和/或具有修饰主链和/或具有非天然核苷间连接或这些修饰的组合的残基。
在优选的实施方案中，所述核苷酸类似物或等同物包含修饰的主链。这类主链的实例通过下述修饰提供：吗啉代主链、氨基甲酸酯主链、硅氧烷主链、硫化、亚砜和砜主链、甲酰乙酰基(formacetyl)和硫代甲酰乙酰基主链、亚甲基甲酰乙酰基(methyleneformacetyl)主链、乙酰核糖主链、含有烯烃的主链、氨基磺酸、磺酸和磺胺主链、亚甲基亚胺和亚甲基肼主链，以及氨基主链。磷酰二胺吗啉代寡聚物是之前已被证实为反义试剂的修饰的主链寡核苷酸。吗啉代寡核苷酸具有不带电的主链，其中DNA的脱氧核糖由六元环取代，且磷酸二酯连接由磷酰二胺连接取代。吗啉代寡核苷酸对酶降解是抗性的，并且似乎是通过阻止翻译或干扰前mRNA剪接而非通过激活RNase H而发挥反义试剂的功能。通过物理破坏细胞膜的方法已成功地将吗啉代寡核苷酸递送至组织培养细胞中，并且一项比较数种这些方法的研究发现划痕标记是最有效的递送方法；然而，由于吗啉代主链不带电，阳离子脂质不是吗啉代寡核苷酸摄入细胞中的有效介导物。一项最近的报道表明吗啉代寡核苷酸形成三螺旋，并且由于非离子型主链，这些研究表明在不存在镁的条件下，吗啉代寡核苷酸能形成三螺旋。
优选地，主链残基之间的连接不包含磷原子，例如通过短链烷基或环烷基核苷间连接形成的连接、混合的杂原子和烷基或环烷基的核苷间连接或一个或多个短链杂原子或杂环的核苷间连接。
优选的核苷酸类似物或等同物包括具有修饰的聚酰胺主链的肽核酸(PNA)(Nielsen，et al.(1991)Science 254，1497-1500)。基于PNA的分子就碱基对识别而言是真正的DNA分子模拟物。PNA的主链由通过肽键连接的N-(2-氨乙基)-甘氨酸单元组成，其中核苷碱基通过亚甲羰键与主链连接。可选的主链包含一碳延伸的吡咯烷PNA单体(Govindaraju andKumar(2005)Chem.Commun，495-497)。由于PNA分子的主链包含不带电的磷酸基，因此PNA-RNA杂合体通常分别比RNA-RNA或RNA-DNA杂合体更稳定(Egholm et al(1993)Nature 365，566-568)。
更优选的主链包括吗啉代核苷酸类似物或等同物，其中核糖或脱氧核糖由六元吗啉环取代。最优选的核苷酸类似物或等同物包括磷酸二胺吗啉代寡核苷酸(PMO)，其中核糖或脱氧核糖由六元吗啉环取代，并且邻近的吗啉环之间的阴离子磷酸二酯连接由非离子的磷二酰胺连接取代。
在另一个实施方案中，本发明的核苷酸类似物或等同物包含磷酸二酯连接的一个非桥氧的取代。该修饰轻微地使碱基对不稳定，但是显著增加了对核酸酶降解的抗性。优选的核苷酸类似物或等同物包含硫代磷酸，手性硫代磷酸，二硫代磷酸酯，磷酸三酯，氨烷基磷酸三酯，H-磷酸酯，包括3′-烃基亚磷酸酯、5′-烃基亚磷酸酯和手性磷酸酯的甲基和其他烷基磷酸酯，亚膦酸酯，包括3′-氨基氨基磷酸酯和氨烷基氨基磷酸酯的氨基磷酸酯，硫羰氨基磷酸酯，硫羰烷基磷酸酯，硫羰烷基磷酸三酯，硒磷酸酯或硼烷磷酸酯(boranophosphate)。
本发明的另一个优选的核苷酸类似物或等同物包含一个或多个糖部分，其在2′、3′和/或5′位置处单取代或双取代，例如-OH；-F；取代的或非取代的、线性的或分支的低级(C1-C10)烷基、烯基、炔基、烷芳基、烯丙基、芳基或芳烷基，以上基团可以由一个或多个杂原子打断；O-、S-或N-烷基；O-、S-或N-烯基；O-、S-或N-炔基；O-、S-或N-烯丙基；O-烷基-O-烷基、-甲氧基、-氨基丙氧基；-氨基氧；甲乙氧基；-二甲氨基乙氧基；以及-二甲氨基乙烯乙氧基。所述糖部分可以是吡喃糖或吡喃糖衍生物、或脱氧吡喃糖或脱氧吡喃糖衍生物、优选是核糖或核糖衍生物、或脱氧核糖或脱氧核糖衍生物。这类优选的衍生化的糖部分包括锁核酸(LNA)，其中2′-碳原子与糖环的3′或4′碳原子连接，因而形成双环糖部分。优选的LNA包括2′-O，4′-C-乙烯-桥核酸(Morita et al.2001.Nucleic AcidRes Supplement No.1：241-242)。这些取代使得核苷酸类似物或等同物耐受RNase H和核酸酶，并增加了对靶RNA的亲和力。
本领域技术人员应当理解，没有必要均匀地修饰反义寡核苷酸中的所有位置。此外，可以将多于一个前述类似物或等同物并入单反义寡核苷酸中，或甚至并入反义寡核苷酸的单一位置中。在某些实施方案中，本发明的反义寡核苷酸具有至少两种不同类型的类似物或等同物。
本发明优选的反义寡核苷酸包含2’-O烷基磷硫酰反义寡核苷酸，例如2′-O-甲基修饰的核糖(RNA)、2′-O-乙基修饰的核糖、2′-O-丙基修饰的核糖和/或这些修饰的取代衍生物，例如卤代衍生物。本发明最优选的反义寡核苷酸包含2’-O-甲基磷硫酰核糖。
可将本发明分子的功能性等同物定义为本文所定义的寡核苷酸，其中至少在一定程度上保留了所述功能性等同物的活性。优选地，所述功能性等同物的活性是诱导外显子43、46、50、51、52或53跳跃，并提供功能性抗肌萎缩蛋白。因此优选地，通过检测外显子43、46、50、51、52或53跳跃并通过确定功能性抗肌萎缩蛋白的数量来评价所述功能性等同物的所述活性。本文优选将功能性抗肌萎缩蛋白定义为能与肌动蛋白和DGC蛋白复合物成员结合的抗肌萎缩蛋白。对寡核苷酸所述活性的评价优选通过RT-PCR或免疫荧光或Western印迹分析来进行。优选至少在一定程度上保留所述活性，此时，它表现出功能性等同物来源的所述寡核苷酸相应活性的至少50％、或至少60％、或至少70％或至少80％或至少90％或至少95％或更高。遍及在本申请，当使用词语寡核苷酸时，它可以由本文所定义的其功能性等同物代替。
本领域技术人员应当理解，可以将不同的反义寡核苷酸组合，用于有效地跳跃人DMD前mRNA的外显子43、外显子46、外显子50、外显子51、外显子52和/或外显子53中任何一个。本发明包括使用一个、两个、三个、四个、五个或更多个寡核苷酸用于跳跃所述外显子之一(即外显子43、46、50、51、52或53)。还包括使用至少两个寡核苷酸用于跳跃至少两个所述外显子。优选跳跃两个所述外显子。更优选地，这两个外显子是：
-43和51，或
-43和53，或
-50和51，或
-51和52，或
-52和53。
本领域技术人员会知道，根据DMD或BMD患者中存在突变的类型、数量和位置，跳跃外显子的哪种组合是优选的。
可以将反义寡核苷酸与增强所述反义寡核苷酸摄入细胞中，优选肌细胞中的部分连接。这些部分的实例是胆固醇、碳水化合物、维生素、生物素、脂质、磷脂、细胞穿透肽(包括但不限于触角足突变蛋白(antennapedia)、TAT、transportan以及诸如寡精氨酸、聚精氨酸、寡赖氨酸或聚赖氨酸的带正电荷氨基酸)、诸如由抗体提供的抗原结合结构域、抗体的Fab片段、或诸如骆驼状单结构域抗原结合结构域的单链抗原结合结构域。
优选的反义寡核苷酸包含肽连接的PMO。
当系统性递送时，包含本发明一个或多个核苷酸类似物或等同物的优选反义寡核苷酸调节一个或多个包括心肌细胞在内的肌细胞中的剪接。在本方面中，包含特定核苷酸类似物或等同物的反义寡核苷酸的系统性递送可能导致靶向肌细胞的子集，而包含不同核苷酸类似物或等同物的反义寡核苷酸可能导致靶向肌细胞的不同子集。因此，在一个实施方案中，优选使用包含不同核苷酸类似物或等同物的反义寡核苷酸组合来诱导人DMD前mRNA的外显子43、46、50、51、52或53跳跃。
通过基于腺病毒或腺相关病毒的载体所提供的质粒来源的反义寡核苷酸表达或病毒表达可以将能干扰必需序列的分子提供给细胞，这导致高效跳跃人DMD前mRNA的外显子43、外显子46、外显子50、外显子51、外显子52或外显子53。在优选的实施方案中，提供了基于病毒的表达载体，其包含驱动本文所示分子表达的表达盒。表达优选由诸如U1、U6或U7RNA启动子的聚合酶III启动子驱动。通过提供水性溶液中的质粒可以将所述质粒提供给肌细胞或生肌细胞，用于反义寡核苷酸表达。可选择地，可以通过使用已知转染药剂的转染来提供质粒，例如LipofectAMINETM 2000(Invitrogen)或聚乙烯亚胺(PEI；ExGen500(MBIFermentas))或它们的衍生物。
一个优选的反义寡核苷酸表达系统是基于腺病毒相联病毒(AAV)的载体。已经开发出可以用于小反义核苷酸序列高效表达的基于单链和双链AAV的载体，用于高效跳跃DMD前mRNA的外显子43、46、50、51、52或53。
优选的基于AAV的载体包含由聚合酶III-启动子(Pol III)驱动的表达盒。优选的Pol III启动子例如是U1、U6或U7RNA启动子。
因此，本发明还提供了基于病毒的载体，其包含用于表达本发明的一个或多个反义序列的Pol III-启动子驱动的表达盒，用于诱导人DMD前mRNA的外显子43、外显子46、外显子50、外显子51、外显子52或外显子53跳跃。
药物组合物
如果需要，通过添加药物可接受的载体可以将本发明的分子或表达反义寡核苷酸的载体并入药学上有活性的混合物或组合物中。
因此，另一方面，本发明提供了组合物，优选药物组合物，所述药物组合物包含含有本发明的反义寡核苷酸的分子和/或表达本发明反义序列的基于病毒的载体分子和药物可接受的载体。
优选的药物组合物包含本文所定义的分子和/或本文所定义的载体，以及药物可接受的载体或赋形剂，所述药物可接受的载体或赋形剂与能诱导DMD前mRNA的外显子6、7、11、17、19、21、43、44、45、50、51、52、53、55、57、59、62、63、65、66、69或75跳跃的本文所定义的分子和/或载体任意组合。能诱导任何这些外显子跳跃的优选分子显示在表1-7的任一个中。
优选的赋形剂包括能形成递送本文所定义的这类分子的复合物、介质和/或脂质体的赋形剂，优选将寡核苷酸复合在或捕获在囊泡或脂质体中通过细胞膜。这些赋形剂中许多是本领域内已知的。合适的赋形剂包括聚乙醇胺和衍生物、或包括聚丙烯亚胺或聚乙醇胺共聚物(PEC)和衍生物在内的相似的阳离子聚合物、ExGen 500、合成的两性物(SAINT-18)、lipofectinTM、DOTAP和/或能自我组装成颗粒的病毒衣壳蛋白，所述颗粒可以将这类分子，优选本文所定义的寡核苷酸递送至细胞，优选肌细胞。这种赋形剂已经表现出有效地将(寡核苷酸，例如反义)核酸递送至包括肌细胞在内的大量培养细胞中。它们的高转染潜能与对总细胞存活的去除的低至中度的毒性结合。可以利用结构修饰的便利来对它们其他的(体内)核酸转移特征或毒性进行进一步的修饰和分析。
Lipofectin代表脂质体转染试剂的实例。它由两种脂质组分组成，阳离子脂质N-[1-(2，3二油酰氧基)丙基]-N，N，N-三甲基铵基氯化物(DOTMA)(化学纯(cp.)，DOTAP，其是甲基硫酸盐)和中性脂质二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)。中性组分介导细胞内释放。另一组递送系统是聚合纳米颗粒。
聚阳离子，例如公知的作为DNA转染试剂的二乙氨乙基(DEAE)-葡聚糖，可以与氰基丙烯酸丁酯(PBCA)和氰基丙烯酸己酯(PHCA)结合，以配制成能将本文所定义的分子或化合物，优选寡核苷酸穿过细胞膜递送入细胞中的阳离子纳米颗粒。
除了这些常用的纳米颗粒材料之外，阳离子肽鱼精蛋白为将本文所定义化合物，优选的寡核苷酸配制成胶体提供了可选的方式。该胶状纳米颗粒系统可通过简单的自我组装过程形成所谓的微粒(proticles)，以包装和介导本文所定义的化合物，优选寡核苷酸的细胞内释放。本领域技术人员可选择和修改任何上述的或其他可商购的可选择的赋形剂和递送系统，来包装和递送本文所定义的化合物，优选寡核苷酸，用于在本发明中递送治疗人杜兴肌营养不良或贝克肌营养不良的所述化合物。
此外，可以将本文所定义的化合物，优选寡核苷酸与特别设计的促进摄入细胞、细胞质和/或它的核的靶向配基共价或非共价连接。这类配基可以包括(i)识别细胞、组织或器官特异性元件促进细胞摄取的化合物(包括但不限于肽(-样)结构)和/或(ii)能促进本文所定义的化合物的细胞摄取和/或细胞内释放的化合物，优选从诸如内涵体或溶酶体的囊泡释放寡核苷酸。
因此，在优选的实施方案中，将本文所定义的化合物，优选寡核苷酸配制在药物中，所述药物提供有至少一种用于递送的赋形剂和/或靶向配基和/或将所述化合物递送至细胞和/或增强它的细胞内递送的递送装置。因此，本发明还包括药学上可接受的组合物，其包含本文所定义的化合物，优选寡核苷酸且还包含至少一种用于递送的赋形剂和/或靶向配基和/或将所述化合物递送至细胞和/或增强它的细胞内递送的递送装置。应当理解，不可以将分子或化合物或寡核苷酸配制在一种单一的组合物或制剂中。根据它们的特性，本领域技术人员会了解对于每种化合物哪种类型的剂型是最合适的。
在优选的实施方案中，使用的本文所定义的分子或寡核苷酸的浓度范围为0.1nM-1□M。更优选地，所用的浓度范围为0.3-400nM，更优选1-200nM。可以以范围为0.1-20mg/kg的剂量使用本文所定义的分子或寡核苷酸，优选0.5-10mg/kg。如果使用数种分子或寡核苷酸，这些浓度可以指寡核苷酸的总浓度或每种寡核苷酸的浓度。如上文给出的寡核苷酸浓度的范围是体外或离体使用的优选浓度。本领域技术人员应当理解，根据所用的寡核苷酸、待处理的靶细胞、基因靶标和它的表达水平、所用的培养基以及转染与孵育条件、所用的寡核苷酸浓度可以进一步改变，并且需要进一步的优化。
更优选地，用于在发明中预防、治疗DMD或BMD的化合物，优选寡核苷酸是通过合成产生的，并且以配制在药学可接受的组合物或制剂中的形式直接给予细胞、组织、器官和/或患者。药物组合物至个体的递送优选通过一种或多种肠胃外注射实施，例如静脉内给药和/或皮下给药和/或肌内给药和/或膜内给药和/或心室内给药，优选在人体的一个或多个位点注射。
当系统性递送时，任选地包含本发明的一种或多种核苷酸类似物或等同物的本文所定义的优选寡核苷酸调节一个或多个包括心肌细胞在内的肌细胞中的剪接。本方面中，包含特定核苷酸类似物或等同物的寡核苷酸的系统性递送可能导致靶向肌细胞的子集，在本方面中，包含特定核苷酸类似物或等同物的反义寡核苷酸的系统性递送可能导致靶向肌细胞的子集，而包含不同核苷酸类似物或等同物的反义寡核苷酸可能导致靶向肌细胞的不同子集。
在本方面中，包含特定核苷酸类似物或等同物的反义寡核苷酸的系统性递送可能导致靶向肌细胞的子集，而包含不同核苷酸类似物或等同物的反义寡核苷酸可能导致靶向肌细胞的不同子集。因此，在本实施方案中，优选使用包含不同核苷酸类似物或等同物的寡核苷酸组合来调节至少一类肌细胞中的DMD mRNA的剪接。
在优选的实施方案中，提供了用作药物的分子或基于病毒的载体，优选用于调节DMD前mRNA的剪接，更优选用于促进或诱导本文所示的外显子43、46、50-53中任一个的跳跃。
用途
另一方面，本发明提供了本发明的反义寡核苷酸或分子和/或表达本发明一段或多段反义序列的基于病毒的载体和/或药物组合物在调节DMD前mRNA剪接中的用途。优选在体外人生肌细胞或肌细胞中调节所述剪接。更优选的是在体内人肌细胞中调节剪接。因此，本发明还涉及本文所定义的分子和/或本文所定义的载体和/或本文所定义的药物组合物在调节DMD前mRNA剪接中的作用或在制备用于治疗DMD或BMD患者的药物中的用途。
在本文及其权利要求书中，动词“包含”与它的同源词用的是它的非限制性意义，表示包括紧接着该词的项目但并不排除未具体提到的项目。此外，动词“由…组成”可以用“基本上由…组成”取代，表示本文所定义的分子或基于病毒的载体或组合物可以包括具体指出的组分之外的其他组分，所述其他组分不会改变本发明的特有特征。此外，由不定冠词“一个(a)”或“一个(an)”提及的元件不排除存在多于一个所述元件的可能性，除非文中明确指出有且只有一个所述元件。因此，不定冠词“一个(a)”或“一个(an)”通常表示“至少一个”。
可以将本文所示的每个实施方案组合起来，除非另有所指。通过引用将本说明书所引用的所有专利和参考文献整体并入本文。
下面提供的实施例仅为说明性目的，并非意图以任何方式限制本发明的范围。
实施例
实施例1-4
材料和方法
(部分地)基于通过m-fold程序所预测的靶外显子RNA的重叠开放的二级结构，(部分地)基于通过ESE-finder软件所预测的重叠潜在的SR-蛋白结合位点来设计AON。AON由Prosensa Therapeutics B.V.(Leiden，Netherlands)合成，且包含2’-O-甲基RNA和全长磷硫酰(PS)主链。
组织培养、转染和RT-PCR分析
如前述处理来自健康个体(“人对照”)(实施例1、3和4；外显子43、50、52跳跃)或携带外显子45缺失的DMD患者(实施例2；外显子46跳跃)的肌管培养物(Aartsma-Rus et al.，Neuromuscul.Disord.2002；12：S71-77以及Hum Mol Genet 2003；12(8)：907-14)。为了筛查AON，用50nM和150nM(实施例2)、200nM和500nM(实施例4)或只有500nM(实施例1和3)的每种AON转染肌管培养物。使用转染试剂UNIFectylin(Prosensa Therapeutics BV，Netherlands)，每□g AON加2□l UNIFectylin。通过用靶向外显子(43、46、50、51、52或53)侧翼外显子中引物的巢式RT-PCR分析来确定外显子跳跃效率。从琼脂糖凝胶分离PCR片段用于序列确认。为了定量，使用Agilent 2100生物分析仪(Agilent Technologies，USA)上的DNA 1000LabChips Kit分析PCR产物。
结果
DMD外显子43跳跃。
设计靶向外显子43序列的一系列AON，并转染进健康的对照肌管培养物中。随后对分离的RNA的RT-PCR和序列分析表明靶向本文定义为SEQ ID NO 2的外显子43中连续核苷酸区段的几乎所有的AON都确实能诱导外显子43跳跃。如图1所示，PS237(SEQ ID NO：65)在500nM时可重复地诱导外显子43跳跃的最高水平(高达66％)。为了比较，还显示了PS238和PS240，诱导外显子43跳跃的水平分别高达13％和36％(图1)。通过对新的更小的转录本片段的序列分析来确认外显子43的精确跳跃。在未处理的细胞(NT)中没有观察到外显子43跳跃。
DMD外显子46跳跃。
设计靶向外显子46序列的一系列AON，并转染进来自DMD基因中携带外显子45缺失的DMD患者的肌管培养物中。对于携带这类突变的患者，反义诱导的外显子46跳跃将诱导确实可以缓解所述疾病的一种或多种症状的新的BMD-样抗肌萎缩蛋白的合成。随后对分离的RNA的RT-PCR和序列分析表明靶向本文定义为SEQ ID NO 3的外显子46中连续核苷酸区段的几乎所有的AON都确实能诱导外显子46跳跃，甚至在50nM的相对低的AON浓度时。如图2所示，PS182(SEQ ID NO：117)可重复地诱导外显子46跳跃的最高水平(在50nM时高达50％且在150nM时高达74％)。为了比较，还显示了PS177、PS179和PS181，在150nM时诱导外显子46跳跃的水平分别高达55％、58％和42％(图2)。通过对新的更小的转录本片段的序列分析来确认外显子46的精确跳跃。在未处理的细胞(NT)中没有观察到外显子46跳跃。DMD外显子50跳跃。
设计靶向外显子50序列的一系列AON，并转染进健康的对照肌管培养物中。随后对分离的RNA的RT-PCR和序列分析表明靶向本文定义为SEQ ID NO 4的外显子50中连续核苷酸区段的几乎所有的AON都确实能诱导外显子50跳跃。如图3所示，PS248(SEQ ID NO：127)可重复地诱导外显子50跳跃的最高水平(在500nM时高达35％)。为了比较，还显示了PS245、PS246和PS247，在500nM时诱导外显子50跳跃水平高达14-16％(图3)。通过对新的更小的转录本片段的序列分析来确认外显子50的精确跳跃。在未处理的细胞(NT)中没有观察到外显子50跳跃。DMD外显子51跳跃。
设计靶向外显子51序列的一系列AON，并转染进健康的对照肌管培养物中。随后对分离的RNA的RT-PCR和序列分析表明靶向本文定义为SEQ ID NO 5的外显子51中连续核苷酸区段的几乎所有的AON都确实能诱导外显子51跳跃。SEQ ID NO 180的AON可重复地诱导外显子51跳跃的最高水平(未示出)。
DMD外显子52跳跃。
设计靶向外显子52序列的一系列AON，并转染进健康的对照肌管培养物中。随后对分离的RNA的RT-PCR和序列分析表明靶向本文定义为SEQ ID NO 6的外显子52中连续核苷酸区段的几乎所有的AON都确实能诱导外显子52跳跃。如图4所示，PS236(SEQ ID NO：299)可重复地诱导外显子52跳跃的最高水平(在200nM时高达88％且在500nM时高达91％)。为了比较，还显示了PS232和AON52-1(之前由Aartsma-Ruset al.公开，寡核苷酸2005)，当以500nM施用时，诱导外显子52跳跃水平分别高达59％和10％(图4)。通过对新的更小的转录本片段的序列分析来确认外显子52的精确跳跃。在未处理的细胞(NT)中没有观察到外显子52跳跃。
DMD外显子53跳跃。
设计靶向外显子53序列的一系列AON，并转染进健康的对照肌管培养物中。随后对分离的RNA的RT-PCR和序列分析表明靶向本文定义为SEQ ID NO 7的外显子53中连续核苷酸区段的几乎所有的AON都确实能诱导外显子53跳跃。SEQ ID NO 328的AON可重复地诱导外显子53跳跃的最高水平(未示出)。
序列表：
DMD基因氨基酸序列
SEQ ID NO 1：
MLWWEEVEDCYEREDVQKKTFTKWVNAQFSKFGKQHIENLFSDLQDGRRLLDLLEGLTGQKLPKEKGSTRVHALNNVNKALRVLQNNNVDLVNIGSTDIVDGNHKLTLGLIWNIILHWQVKNVMKNIMAGLQQTNSEKILLSWVRQSTRNYPQVNVINFTTSWSDGLALNALIHSHRPDLFDWNSVVCQQSATQRLEHAFNIARYQLGIEKLLDPEDVDTTYPDKKSILMYITSLFQVLPQQVSIEAIQEVEMLPRPPKVTKEEHFQLHHQMHYSQQITVSLAQGYERTSSPKPRFKSYAYTQAAYVTTSDPTRSPFPSQHLEAPEDKSFGSSLMESEVNLDRYQTALEEVLSWLLSAEDTLQAQGEISNDVEVVKDQFHTHEGYMMDLTAHQGRVGNILQLGSKLIGTGKLSEDEETEVQEQMNLLNSRWECLRVASMEKQSNLHRVLMDLQNQKLKELNDWLTKTEERTRKMEEEPLGPDLEDLKRQVQQHKVLQEDLEQEQVRVNSLTHMVVVVDESSGDHATAALEEQLKVLGDRWANICRWTEDRWVLLQDILLKWQRLTEEQCLFSAWLSEKEDAVNKIHTTGFKDQNEMLSSLQKLAVLKADLEKKKQSMGKLYSLKQDLLSTLKNKSVTQKTEAWLDNFARCWDNLVQKLEKSTAQISQAVTTTQPSLTQTTVMETVTTVTTREQILVKHAQEELPPPPPQKKRQITVDSEIRKRLDVDITELHSWITRSEAVLQSPEFAIFRKEGNFSDLKEKVNAIEREKAEKFRKLQDASRSAQALVEQMVNEGVNADSIKQASEQLNSRWIEFCQLLSERLNWLEYQNNIIAFYNQLQQLEQMTTTAENWLKIQPTTPSEPTAIKSQLKICKDEVNRLSGLQPQIERLKIQSIALKEKGQGPMFLDADFVAFTNHFKQVFSDVQAREKELQTIFDTLPPMRYQETMSAIRTWVQQSETKLSIPQLSVTDYEIMEQRLGELQALQSSLQEQQSGLYYLSTTVKEMSKKAPSEISRKYQSEFEEIEGRWKKLSSQLVEHCQKLEEQMNKLRKIQNHIQTLKKWMAEVDVFLKEEWPALGDSEILKKQLKQCRLLVSDIQTIQPSLNSVNEGGQKIKNEAEPEFASRLETELKELNTQWDHMCQQVYARKEALKGGLEKTVSLQKDLSEMHEWMTQAEEEYLERDFEYKTPDELQKAVEEMKRAKEEAQQKEAKVKLLTESVNSVIAQAPPVAQEALKKELETLTTNYQWLCTRLNGKCKTLEEVWACWHELLSYLEKANKWLNEVEFKLKTTENIPGGAEEISEVLDSLENLMRHSEDNPNQIRILAQTLTDGGVMDELINEELETFNSRWRELHEEAVRRQKLLEQSIQSAQETEKSLHLIQESLTFIDKQLAAYIADKVDAAQMPQEAQKIQSDLTSHEISLEEMKKHNQGKEAAQRVLSQIDVAQKKLQDVSMKFRLFQKPANFEQRLQESKMILDEVKMHLPALETKSVEQEVVQSQLNHCVNLYKSLSEVKSEVEMVIKTGRQIVQKKQTENPKELDERVTALKLHYNELGAKVTERKQQLEKCLKLSRKMRKEMNVLTEWLAATDMELTKRSAVEGMP SNLDSEVAWGKATQKEIEKQKVHLKSITEVGEALKTVLGKKETLVEDKLSLLNSNWIAVTSRAEEWLNLLLEYQKHMETFDQNVDHITKWIIQADTLLDESEKKKPQQKEDVLKRLKAELNDIRPKVDSTRDQAANLMANRGDHCRKLVEPQISELNHRFAAISHRIKTGKASIPLKELEQFNSDIQKLLEPLEAEIQQGVNLKEEDFNKDMNEDNEGTVKELLQRGDNLQQRITDERKREEIKIKQQLLQTKHNALKDLRSQRRKKALEISHQWYQYKRQADDLLKCLDDIEKKLASLPEPRDERKIKEIDRELQKKKEELNAVRRQAEGLSEDGAAMAVEPTQIQLSKRWREIESKFAQFRRLNFAQIHTVREETMMVMTEDMPLEISYVPSTYLTEITHVSQALLEVEQLLNAPDLCAKDFEDLFKQEESLKNIKDSLQQSSGRIDIIHSKKTAALQSATPVERVKLQEALSQLDFQWEKVNKMYKDRQGRFDRSVEKWRRFHYDIKIFNQWLTEAEQFLRKTQIPENWEHAKYKWYLKELQDGIGQRQTVVRTLNATGEEIIQQSSKTDASILQEKLGSLNLRWQEVCKQLSDRKKRLEEQKNILSEFQRDLNEFVLWLEEADNIASIPLEPGKEQQLKEKLEQVKLLVEELPLRQGILKQLNETGGPVLVSAPISPEEQDKLENKLKQTNLQWIKVSRALPEKQGEIEAQIKDLGQLEKKLEDLEEQLNHLLLWLSPIRNQLEIYNQPNQEGPFDVQETEIAVQAKQPDVEEILSKGQHLYKEKPATQPVKRKLEDLSSEWKAVNRLLQELRAKQPDLAPGLTTIGASPTQTVTLVTQPVVTKETAISKLEMPSSLMLEVPALADFNRAWTELTDWLSLLDQVIKSQRVMVGDLEDINEMIIKQKATMQDLEQRRPQLEELITAAQNLKNKTSNQEARTIITDRIERIQNQWDEVQEHLQNRRQQLNEMLKDSTQWLEAKEEAEQVLGQARAKLESWKEGPYTVDAIQKKITETKQLAKDLRQWQTNVDVANDLALKLLRDYSADDTRKVHMITENINASWRSIHKRVSEREAALEETHRLLQQFPLDLEKFLAWLTEAETTANVLQDATRKERLLEDSKGVKELMKQWQDLQGEIEAHTDVYHNLDENSQKILRSLEGSDDAVLLQRRLDNMNFKWSELRKKSLNIRSHLEASSDQWKRLHLSLQELLVWLQLKDDELSRQAPIGGDFPAVQKQNDVHRAFKRELKTKEPVIMSTLETVRIFLTEQPLEGLEKLYQEPRELPPEERAQNVTRLLRKQAEEVNTEWEKLNLHSADWQRKIDETLERLQELQEATDELDLKLRQAEVIKGSWQPVGDLLIDSLQDHLEKVKALRGEIAPLKENVSHVNDLARQLTTLGIQLSPYNLSTLEDLNTRWKLLQVAVEDRVRQLHEAHRDFGPASQHFLSTSVQGPWERAISPNKVPYYINHETQTTCWDHPKMTELYQSLADLNNVRFSAYRTAMKLRRLQKALCLDLLSLSAACDALDQHNLKQNDQPMDILQIINCLTTIYDRLEQEHNNLVNVPLCVDMCLNWLLNVYDTGRTGRIRVLSFKTGIISLCKAHLEDKYRYLFKQVAS STGFCDQRRLGLLLHDSIQIPRQLGEVASFGGSNIEPSVRSCFQFANNKPEIEAALFLDWMRLEPQSMVWLPVLHRVAAAETAKHQAKCNICKECPIIGFRYRSLKHFNYDICQSCFFSGRVAKGHKMHYPMVEYCTPTTSGEDVRDFAKVLKNKFRTKRYFAKHPRMGYLPVQTVLEGDNMETPVTLINFWPVDSAPASSPQLSHDDTHSRIEHYASRLAEMENSNGSYLNDSISPNESIDDEHLLIQHYCQSLNQDSPLSQPRSPAQILISLESEERGELERILADLEEENRNLQAEYDRLKQQHEHKGLSPLPSPPEMMPTSPQSPRDAELIAEAKLLRQHKGRLEARMQILEDHNKQLESQLHRLRQLLEQPQAEAKVNGTTVSSPSTSLQRSDSSQPMLLRVVGSQTSDSMGEEDLLSPPQDTSTGLEEVMEQLNNSFPSSRGRNTPGKPMREDTM
SEQ ID NO 2(外显子43)：
AGAUAGUCUACAACAAAGCUCAGGUCGGAUUGACAUUAUUCAUAGCAAGAAGACAGCAGCAUUGCAAAGUGCAACGCCUGUGG
SEQ ID NO 3(外显子46)：
UUAUGGUUGGAGGAAGCAGAUAACAUUGCUAGUAUCCCACUUGAACCUGGAAAAGAGCAGCAACUAAAAGAAAAGC
SEQ ID NO 4(外显子50)：
’GGCGGTAAACCGUUUACUUCAAGAGCUGAGGGCAAAGCAGCCUGACCUAGCUCCUGGACUGACCACUAUUGG
SEQ ID NO 5(外显子51)：
CUCCUACUCAGACUGUUACUCUGGUGACACAACCUGUGGUUACUAAGGAAACUGCCAUCUCCAAACUAGAAAUGCCAUCUUCCUUGAUGUUGGAGGUAC
SEQ ID NO 6(外显子52)：
AUGCAGGAUUUGGAACAGAGGCGUCCCCAGUUGGAAGAACUCAUUACCGCUGCCCAAAAUUUGAAAAACAAGACCAGCAAUCAAGAGGCU
SEQ ID NO 7(外显子53)：
AAAUGUUAAAGGAUUCAACACAAUGGCUGGAAGCUAAGGAAGAAGCUGAGCAGGUCUUAGGACAGGCCAGAG
表1：用于跳跃DMD基因外显子43的寡核苷酸
Figure BPA00001390394100291
表2：用于跳跃DMD基因外显子46的寡核苷酸
Figure BPA00001390394100292
Figure BPA00001390394100301
表3：用于跳跃DMD基因外显子50的寡核苷酸
Figure BPA00001390394100312
Figure BPA00001390394100331
表4：用于跳跃DMD基因外显子51的寡核苷酸
Figure BPA00001390394100332
Figure BPA00001390394100341
Figure BPA00001390394100351
表5：用于跳跃DMD基因外显子52的寡核苷酸
Figure BPA00001390394100352
Figure BPA00001390394100361
表6：用于跳跃DMD基因外显子53的寡核苷酸
Figure BPA00001390394100372
Figure BPA00001390394100381
表7：用于跳跃示出的DMD基因其他外显子的寡核苷酸
Figure BPA00001390394100382
Figure BPA00001390394100391
Figure BPA00001390394100401
Figure BPA00001390394100411
Figure BPA00001390394100441
附图说明
图1.在人对照肌管中，在500nM检验靶向外显子43的一系列AON(PS237、PS238和PS240；分别为SEQ ID NO 65、66、16)。PS237(SEQID NO 65)可重复地诱导外显子43跳跃的最高水平(M：DNA大小标志物；NT：未处理的细胞)。
图2.在来自外显子45缺失的DMD患者的肌管中，在两种不同浓度(50和150nM)检验靶向外显子46的一系列AON(PS177、PS179、PS181和PS182；分别为SEQ ID NO 91、70、110和117)。PS182(SEQ ID NO 117)可重复地诱导外显子46跳跃的最高水平(M：DNA大小标志物)。
图3.在人对照肌管中，在500nM检验靶向外显子50的一系列AON(PS245、PS246、PS247和PS248；分别为SEQ ID NO 167、165、166和127)。PS248(SEQ ID NO 127)可重复地诱导外显子50跳跃的最高水平(M：DNA大小标志物；NT：未处理的细胞)。
图4.在人对照肌管中，在两种不同浓度(200和500nM)检验靶向外显子52的两个新的AON(PS232和PS236；分别为SEQ ID NO 246和299)，并直接与以前描述的AON(52-1)进行比较。PS236(SEQ ID NO 299)可重复地诱导外显子52跳跃的最高水平(M：DNA大小标志物；NT：未处理的细胞)。

Claims (11)

1.分子，所述分子与选自以下核苷酸序列之一中的至少8个核苷酸的连续区段结合：
用于外显子50的跳跃的
5’-GGCGGTAAACCGUUUACUUCAAGAGCUGAGGGCAAAGCAGCCUGACCUAGCUCCUGGACUGACCACUAUUGG-3’(SEQID NO：4)；
用于外显子43的跳跃的
5’AGAUAGUCUACAACAAAGCUCAGGUCGGAUUGACAUUAUUCAUAGCAAGAAGACAGCAGCAUUGCAAAGUGCAACGCCUGUGG-3’(SEQ ID NO：2)；
用于外显子46的跳跃的
5′UUAUGGUUGGAGGAAGCAGAUAACAUUGCUAGUAUCCCACUUGAACCUGGAAAAGAGCAGCAACUAAAAGAAAAGC-3’(SEQ ID NO：3)；
用于外显子51的跳跃的
5′CUCCUACUCAGACUGUUACUCUGGUGACACAACCUGUGGUUACUAAGGAAACUGCCAUCUCCAAACUAGAAAUGCCAUCUUCCUUGAUG UUGGAGGUAC-3’(SEQ ID NO：5)；
用于外显子52的跳跃的
5’AUGCAGGAUUUGGAACAGAGGCGUCCCCAGUUGGAAGAACUCAUUACCGCUGCCCAAAAUUUGAAAAACAAGACCAGCAAUCAAGAGGCU-3’(SEQ ID NO：6)；以及
用于外显子53的跳跃的
5’AAAUGUUAAAGGAUUCAACACAAUGGCUGGAAGCUAAGGAAAA GCUGAGCAGGUCUUAGGACAGGCCAGAG-3’(SEQ ID NO：7)。
2.如权利要求1所述的分子，其中所述分子包含选自表1-6中所示的SEQ ID NO：8-358和/或SEQ ID NO 529-535的反义核苷酸序列或由选自表1-6中所示的SEQ ID NO：8-358和/或SEQ ID NO 529-535的反义核苷酸序列组成。
3.如权利要求2所述的分子，其中所述分子包含选自SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：110、SEQ IDNO：117、SEQ ID NO：127、SEQ ID NO：165、SEQ ID NO：166、SEQ IDNO：167、SEQ ID NO：246、SEQ ID NO：299和SEQ ID NO：357的反义核苷酸序列或由选自SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：70、SEQID NO：91、SEQ ID NO：110、SEQ ID NO：117、SEQ ID NO：127、SEQ IDNO：165、SEQ ID NO：166、SEQ ID NO：167、SEQ ID NO：246、SEQ IDNO：299和SEQ ID NO：357的反义核苷酸序列组成。
4.如权利要求1-2任一项所述的分子，其包含2’-O-烷基磷硫酰反义寡核苷酸。
5.如权利要求4所述的分子，其包含2’-O甲基磷硫酰核糖。
6.基于病毒的载体，其包含驱动权利要求1-5中任一项所定义的分子表达的表达盒。
7.用作药物的权利要求1-5中的任一项所述的分子或权利要求6所述的基于病毒的载体，其优选用于调节DMD或BMD患者的DMD前mRNA的剪接或用于治疗DMD或BMD患者。
8.药物组合物，包含权利要求1-5中任一项所定义的分子和/或权利要求6所述的载体，药物可接受的载体，并且任选地与能诱导或促进患者DMD前mRNA的外显子6、7、11、17、19、21、43、44、45、50-53、55、57、59、62、63、65、66、69或75中至少一个的跳跃的分子组合。
9.用于诱导和/或促进患者中，优选患者分离的细胞中DMD前mRNA的外显子43、外显子46、外显子50-53中至少一个的跳跃的方法，所述方法包括向所述细胞和/或所述患者提供权利要求1-5中任一项所述的分子或权利要求6所述的载体。
10.如权利要求9所述的方法，其中使用能诱导或促进患者DMD前mRNA的外显子6、7、11、17、19、21、43、44、45、50-53、55、57、59、62、63、65、66、69或75中至少一个的跳跃的其他分子。
11.权利要求1-5中任一项所述的分子、权利要求6所述的载体或权利要求8所述的药物组合物在调节DMD前mRNA的剪接中的用途或制备用于治疗DMD或BMD患者的药物中的用途。
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Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105307723A (zh) * 2013-03-15 2016-02-03 萨勒普塔医疗公司 改进的用于治疗肌营养不良的组合物
CN106714845A (zh) * 2014-08-11 2017-05-24 得克萨斯州大学系统董事会 通过crispr/cas9介导的基因编辑预防肌营养不良
CN107667174A (zh) * 2015-05-21 2018-02-06 ProQR治疗上市公司Ⅱ 治疗营养不良型大疱性表皮松解症的反义寡核苷酸
CN110257379A (zh) * 2012-07-03 2019-09-20 马林生物科技有限公司 用于治疗肌肉萎缩症患者的寡核苷酸

Families Citing this family (102)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1191097A1 (en) * 2000-09-21 2002-03-27 Leids Universitair Medisch Centrum Induction of exon skipping in eukaryotic cells
WO2004083432A1 (en) 2003-03-21 2004-09-30 Academisch Ziekenhuis Leiden Modulation of exon recognition in pre-mrna by interfering with the secondary rna structure
SI3345895T1 (sl) 2003-04-11 2020-03-31 Ptc Therapeutics, Inc. Spojina 1,2,4-oksadiazol benzojske kisline in njena uporaba za supresijo nesmiselne in zdravljenje bolezni
USRE48960E1 (en) 2004-06-28 2022-03-08 The University Of Western Australia Antisense oligonucleotides for inducing exon skipping and methods of use thereof
EP2206781B1 (en) 2004-06-28 2015-12-02 The University Of Western Australia Antisense oligonucleotides for inducing exon skipping and methods of use thereof
WO2006086667A2 (en) 2005-02-09 2006-08-17 Avi Bio Pharma, Inc. Antisense composition and method for treating muscle atrophy
NZ574807A (en) 2006-08-11 2011-01-28 Prosensa Technologies Bv Methods and means for treating dna repeat instability associated genetic disorders
CN101896186A (zh) 2007-10-26 2010-11-24 莱顿教学医院 对抗肌肉病症的方式和方法
EP2119783A1 (en) 2008-05-14 2009-11-18 Prosensa Technologies B.V. Method for efficient exon (44) skipping in Duchenne Muscular Dystrophy and associated means
US8084601B2 (en) 2008-09-11 2011-12-27 Royal Holloway And Bedford New College Royal Holloway, University Of London Oligomers
SI3133160T1 (sl) 2008-10-24 2019-05-31 Sarepta Therapeutics, Inc. Sestavki, ki preskakujejo ekson za DMD
DK2607484T3 (en) * 2008-10-27 2016-03-07 Biomarin Technologies B V Methods and means for efficient skipping of exon 45 in Duchenne muscular dystrophy pre-MRNA
ES2593836T3 (es) 2009-04-24 2016-12-13 Biomarin Technologies B.V. Oligonucleótido que comprende una inosina para tratar la DMD
US20120270930A1 (en) 2009-10-29 2012-10-25 Academisch Ziekenhuis Leiden H.O.D.N. Lumc Methods and compositions for dysferlin exon-skipping
ES2693459T3 (es) 2009-11-12 2018-12-11 The University Of Western Australia Moléculas antisentido y métodos para el tratamiento de patologías
AU2011286539B2 (en) * 2010-08-05 2017-03-02 Academisch Ziekenhuis Leiden H.O.D.N. Lumc Antisense oligonucleotide directed removal of proteolytic cleavage sites from proteins
TWI541024B (zh) 2010-09-01 2016-07-11 日本新藥股份有限公司 反義核酸
WO2012109296A1 (en) 2011-02-08 2012-08-16 The Charlotte-Mecklenburg Hospital Authority D/B/A Carolinas Medical Center Antisense oligonucleotides
CA2831827A1 (en) 2011-04-05 2012-10-11 Academisch Ziekenhuis Leiden H.O.D.N. Lumc Compounds and methods for altering activin receptor-like kinase signalling
JP5850519B2 (ja) * 2011-05-09 2016-02-03 ネッパジーン株式会社 モルフォリノ搭載バブルリポソームを有効成分としてなる筋ジストロフィー治療薬
WO2013016595A1 (en) * 2011-07-28 2013-01-31 The Regents Of The University Of California Exonic splicing enhancers and exonic splicing silencers
US20130085139A1 (en) 2011-10-04 2013-04-04 Royal Holloway And Bedford New College Oligomers
EP2799548B1 (en) 2011-12-28 2019-08-21 Nippon Shinyaku Co., Ltd. Antisense nucleic acid
EP4043039A1 (en) * 2012-01-27 2022-08-17 BioMarin Technologies B.V. Rna modulating oligonucleotides with improved characteristics for the treatment of duchenne and becker muscular dystrophy
DE102012103041A1 (de) 2012-04-10 2013-10-10 Eberhard-Karls-Universität Tübingen Universitätsklinikum Behandlung der dilativen Kardiomyopathie mittels Antisense-Oligonucleotiden
WO2013163628A2 (en) 2012-04-27 2013-10-31 Duke University Genetic correction of mutated genes
EP3633035A1 (en) 2013-03-14 2020-04-08 Sarepta Therapeutics, Inc. Exon skipping compositions for treating muscular dystrophy
MX366274B (es) * 2013-03-14 2019-07-04 Sarepta Therapeutics Inc Composiciones para el salto del exón para el tratamiento de distrofia muscular.
US9849066B2 (en) 2013-04-24 2017-12-26 Corning Incorporated Delamination resistant pharmaceutical glass containers containing active pharmaceutical ingredients
EP3004370B1 (en) 2013-06-05 2024-08-21 Duke University Rna-guided gene editing and gene regulation
CA2942147C (en) 2014-03-06 2022-12-13 Ptc Therapeutics, Inc. Pharmaceutical compositions and salts of a 1,2,4-oxadiazole benzoic acid
TR201901939T4 (tr) 2014-03-12 2019-03-21 Nat Center Neurology & Psychiatry Antisens nükleik asit.
GB201410693D0 (en) 2014-06-16 2014-07-30 Univ Southampton Splicing modulation
MX2016016526A (es) 2014-06-17 2017-04-04 Nippon Shinyaku Co Ltd Acidos nucleicos antisentido.
CA2963288A1 (en) 2014-10-03 2016-04-07 Cold Spring Harbor Laboratory Targeted augmentation of nuclear gene output
JP6929791B2 (ja) 2015-02-09 2021-09-01 デューク ユニバーシティ エピゲノム編集のための組成物および方法
MA41795A (fr) 2015-03-18 2018-01-23 Sarepta Therapeutics Inc Exclusion d'un exon induite par des composés antisens dans la myostatine
US10471089B2 (en) * 2015-06-10 2019-11-12 Association Institut De Myologie Combined therapy for duchenne muscular dystrophy
EP3325018A4 (en) 2015-07-22 2019-04-24 Duke University HIGH EFFICIENCY SCREENING OF REGULATORY ELEMENT FUNCTION USING EPIGENOUS EDITING TECHNOLOGIES
EP3341727B1 (en) 2015-08-25 2022-08-10 Duke University Compositions and methods of improving specificity in genomic engineering using rna-guided endonucleases
WO2017047707A1 (ja) 2015-09-15 2017-03-23 日本新薬株式会社 アンチセンス核酸
AU2016334232B2 (en) * 2015-10-09 2022-05-26 Wave Life Sciences Ltd. Oligonucleotide compositions and methods thereof
US10196639B2 (en) 2015-10-09 2019-02-05 University Of Southampton Modulation of gene expression and screening for deregulated protein expression
CN108699555A (zh) 2015-10-09 2018-10-23 萨勒普塔医疗公司 用于治疗杜兴肌营养不良和相关病症的组合物和方法
WO2017066497A2 (en) 2015-10-13 2017-04-20 Duke University Genome engineering with type i crispr systems in eukaryotic cells
AR106530A1 (es) 2015-10-30 2018-01-24 Ptc Therapeutics Inc Métodos para tratar epilepsia
EP3390636B1 (en) 2015-12-14 2021-05-19 Cold Spring Harbor Laboratory Antisense oligomers for treatment of dravet syndrome
US11096956B2 (en) 2015-12-14 2021-08-24 Stoke Therapeutics, Inc. Antisense oligomers and uses thereof
GB2545898B (en) 2015-12-21 2019-10-09 Sutura Therapeutics Ltd Improved drug delivery by conjugating oligonucleotides to stitched/stapled peptides
GB2574525B (en) * 2015-12-21 2020-09-02 Sutura Therapeutics Ltd Improved drug delivery by conjugating oligonucleotides to stitched/stapled peptides
MA45328A (fr) 2016-04-01 2019-02-06 Avidity Biosciences Llc Compositions acide nucléique-polypeptide et utilisations de celles-ci
LT3442600T (lt) * 2016-04-15 2024-05-27 Research Institute At Nationwide Children's Hospital Su adeno virusu susijusio viruso vektoriaus iš β-sarkoglikano ir mikro- rnr-29 pristatymas ir raumenų distrofijos gydymas
MA45290A (fr) * 2016-05-04 2019-03-13 Wave Life Sciences Ltd Procédés et compositions d'agents biologiquement actifs
WO2018005805A1 (en) * 2016-06-30 2018-01-04 Sarepta Therapeutics, Inc. Exon skipping oligomers for muscular dystrophy
DK3554553T3 (da) 2016-12-19 2022-09-19 Sarepta Therapeutics Inc Exon-overspringnings-oligomerkonjugat til muskeldystrofi
MX2019006989A (es) 2016-12-19 2019-08-16 Sarepta Therapeutics Inc Conjugados de oligomeros de omision de exon para distrofia muscular.
PL3554552T3 (pl) 2016-12-19 2022-11-21 Sarepta Therapeutics, Inc. Koniugaty oligomerów do pomijania egzonów dla dystrofii mięśniowej
SG11201906200WA (en) 2017-01-06 2019-08-27 Avidity Biosciences Llc Nucleic acid-polypeptide compositions and methods of inducing exon skipping
JP2020513811A (ja) * 2017-03-17 2020-05-21 リサーチ インスティチュート アット ネイションワイド チルドレンズ ホスピタル 筋ジストロフィーを治療するための筋肉特異的マイクロジストロフィンのアデノ随伴ウイルスベクター送達
EP3612546B1 (en) * 2017-04-20 2022-07-13 Synthena AG Modified oligomeric compounds comprising tricyclo-dna nucleosides and uses thereof
GB201711809D0 (en) * 2017-07-21 2017-09-06 Governors Of The Univ Of Alberta Antisense oligonucleotide
CN111499615B (zh) 2017-08-04 2024-02-02 斯基霍克疗法公司 用于调节剪接的方法和组合物
WO2019040923A1 (en) 2017-08-25 2019-02-28 Stoke Therapeutics, Inc. ANTISENSE OLIGOMERS FOR THE TREATMENT OF DISEASE CONDITIONS AND OTHER DISEASES
EA201991450A1 (ru) 2017-09-22 2019-12-30 Сарепта Терапьютикс, Инк. Конъюгаты олигомеров для пропуска экзона при мышечной дистрофии
CN111770757A (zh) * 2017-09-22 2020-10-13 艾维迪提生物科学公司 诱导外显子跳读的核酸-多肽组合物和方法
JP2020536060A (ja) 2017-09-28 2020-12-10 サレプタ セラピューティクス， インコーポレイテッド 筋ジストロフィーを処置するための併用療法
WO2019067979A1 (en) 2017-09-28 2019-04-04 Sarepta Therapeutics, Inc. POLYTHERAPIES FOR TREATING MUSCLE DYSTROPHY
JP2020536058A (ja) 2017-09-28 2020-12-10 サレプタ セラピューティクス， インコーポレイテッド 筋ジストロフィーを処置するための併用療法
AU2018378812A1 (en) 2017-12-06 2020-07-09 Avidity Biosciences, Inc. Compositions and methods of treating muscle atrophy and myotonic dystrophy
CN112004533A (zh) * 2018-02-20 2020-11-27 艾知怀斯治疗学公司 治疗运动障碍的方法和组合物
AU2019252680A1 (en) * 2018-04-12 2020-10-22 Wave Life Sciences Ltd. Oligonucleotide compositions and methods of use thereof
MX2020011695A (es) 2018-05-04 2021-02-26 Stoke Therapeutics Inc Métodos y composiciones para el tratamiento de la enfermedad por almacenamiento de éster de colesterilo.
US10765760B2 (en) 2018-05-29 2020-09-08 Sarepta Therapeutics, Inc. Exon skipping oligomer conjugates for muscular dystrophy
US20220251551A1 (en) * 2018-06-13 2022-08-11 Sarepta Therapeutics, Inc. Exon skipping oligomers for muscular dystrophy
TW202020153A (zh) * 2018-07-27 2020-06-01 美商薩羅塔治療公司 用於肌肉萎縮症之外顯子跳躍寡聚物
EP3830259A4 (en) 2018-08-02 2022-05-04 Dyne Therapeutics, Inc. MUSCLE TARGETING COMPLEXES AND THEIR USES FOR THE TREATMENT OF FACIOSCAPULOHUMERAL MUSCULAR DYSTROPHY
EP3829595A4 (en) 2018-08-02 2022-08-24 Dyne Therapeutics, Inc. MUSCLE TARGETING COMPLEXES AND THEIR USES FOR THE TREATMENT OF DYSTROPHINOPATHIES
US11168141B2 (en) 2018-08-02 2021-11-09 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating dystrophinopathies
CN109486813B (zh) * 2018-10-10 2022-01-18 广州医科大学附属第二医院 一种用于修复TPP1基因Pre-mRNA异常剪接的U1-snRNA及其应用
CN113383078A (zh) * 2018-12-06 2021-09-10 波涛生命科学有限公司 寡核苷酸组合物及其方法
EP3920915A4 (en) 2019-02-05 2022-10-05 Skyhawk Therapeutics, Inc. METHODS AND COMPOSITIONS FOR MODULATING SPLICE
EP3920928A4 (en) 2019-02-06 2022-09-28 Skyhawk Therapeutics, Inc. METHODS AND COMPOSITIONS FOR MODULATION OF SPLICING
JP2022526643A (ja) * 2019-04-10 2022-05-25 ピーティーシー セラピューティクス，インコーポレーテッド 小児患者においてナンセンス変異が介在するデュシェンヌ型筋ジストロフィーを治療するための方法
CN110288555B (zh) * 2019-07-02 2022-08-02 桂林电子科技大学 一种基于改进的胶囊网络的低照度增强方法
CN114466682A (zh) * 2019-08-02 2022-05-10 全国儿童医院研究所 用于治疗基于肌营养不良蛋白的肌病的靶向外显子44的核酸和包含所述核酸的重组腺相关病毒
EP4031242A4 (en) * 2019-09-19 2023-12-20 Arnay Sciences, Llc COMPOUNDS AND METHODS USEFUL FOR MODULATING GENE SPLICING
US20230140736A1 (en) 2020-02-28 2023-05-04 Nippon Shinyaku Co., Ltd. Antisense nucleic acid inducing skipping of exon 51
CA3172111A1 (en) 2020-03-19 2021-09-23 Barbora MALECOVA Compositions and methods of treating facioscapulohumeral muscular dystrophy
EP4150092A1 (en) 2020-05-11 2023-03-22 Stoke Therapeutics, Inc. Opa1 antisense oligomers for treatment of conditions and diseases
JP2024519601A (ja) 2021-03-31 2024-05-20 エントラーダ セラピューティクス，インコーポレイティド 環状細胞透過性ペプチド
WO2022241408A1 (en) 2021-05-10 2022-11-17 Entrada Therapeutics, Inc. Compositions and methods for modulating tissue distribution of intracellular therapeutics
EP4088722A1 (en) * 2021-05-12 2022-11-16 Justus-Liebig-Universität Gießen Pharmaceutical compositions, uses thereof and methods for treatment of genetic diseases caused by intronic splice-acceptor site mutations
WO2022271818A1 (en) 2021-06-23 2022-12-29 Entrada Therapeutics, Inc. Antisense compounds and methods for targeting cug repeats
US11638761B2 (en) 2021-07-09 2023-05-02 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating Facioscapulohumeral muscular dystrophy
EP4367247A2 (en) * 2021-07-09 2024-05-15 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating dystrophinopathies
US11771776B2 (en) 2021-07-09 2023-10-03 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating dystrophinopathies
AU2022345098A1 (en) 2021-09-16 2024-04-04 Avidity Biosciences, Inc. Compositions and methods of treating facioscapulohumeral muscular dystrophy
EP4215614A1 (en) 2022-01-24 2023-07-26 Dynacure Combination therapy for dystrophin-related diseases
WO2023168427A1 (en) 2022-03-03 2023-09-07 Yale University Compositions and methods for delivering therapeutic polynucleotides for exon skipping
US12071621B2 (en) 2022-04-05 2024-08-27 Avidity Biosciences, Inc. Anti-transferrin receptor antibody-PMO conjugates for inducing DMD exon 44 skipping
WO2023250511A2 (en) 2022-06-24 2023-12-28 Tune Therapeutics, Inc. Compositions, systems, and methods for reducing low-density lipoprotein through targeted gene repression
WO2024069229A2 (en) 2022-08-03 2024-04-04 Sutura Therapeutics Ltd Biologically active compounds

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006000057A1 (en) * 2004-06-28 2006-01-05 SMITHKLINE BEECHAM CORPORATION, doing business as GLAXOSMITHKLINE Antisense oligonucleotides for inducing exon skipping and methods of use thereof
EP1857548A1 (en) * 2006-05-19 2007-11-21 Academisch Ziekenhuis Leiden Means and method for inducing exon-skipping
CN101896186A (zh) * 2007-10-26 2010-11-24 莱顿教学医院 对抗肌肉病症的方式和方法

Family Cites Families (217)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2752581C2 (de) 1977-11-25 1979-12-13 Wolfgang 4044 Kaarst Keil Vorrichtung zur Vollentsalzung von Wasser
US5034506A (en) 1985-03-15 1991-07-23 Anti-Gene Development Group Uncharged morpholino-based polymers having achiral intersubunit linkages
US5541308A (en) 1986-11-24 1996-07-30 Gen-Probe Incorporated Nucleic acid probes for detection and/or quantitation of non-viral organisms
DE3834636A1 (de) 1988-10-11 1990-04-19 Max Planck Gesellschaft Verfahren zur analyse von laengenpolymorphismen in dna-bereichen
US5766847A (en) 1988-10-11 1998-06-16 Max-Planck-Gesellschaft Zur Forderung Der Wissenschaften E.V. Process for analyzing length polymorphisms in DNA regions
US6867195B1 (en) 1989-03-21 2005-03-15 Vical Incorporated Lipid-mediated polynucleotide administration to reduce likelihood of subject's becoming infected
US5681941A (en) 1990-01-11 1997-10-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. Substituted purines and oligonucleotide cross-linking
US5608046A (en) 1990-07-27 1997-03-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Conjugated 4'-desmethyl nucleoside analog compounds
FR2675803B1 (fr) 1991-04-25 1996-09-06 Genset Sa Oligonucleotides fermes, antisens et sens et leurs applications.
JPH07501204A (ja) 1991-06-28 1995-02-09 マサチューセッツ インスティテュート オブ テクノロジー 局所的オリゴヌクレオチド療法
EP0558697A1 (en) 1991-06-28 1993-09-08 Massachusetts Institute Of Technology Localized oligonucleotide therapy
US6200747B1 (en) 1992-01-28 2001-03-13 North Shore University Hospital Research Corp. Method and kits for detection of fragile X specific, GC-rich DNA sequences
US5869252A (en) 1992-03-31 1999-02-09 Abbott Laboratories Method of multiplex ligase chain reaction
US6172208B1 (en) 1992-07-06 2001-01-09 Genzyme Corporation Oligonucleotides modified with conjugate groups
US5418139A (en) 1993-02-10 1995-05-23 University Of Iowa Research Foundation Method for screening for cardiomyopathy
CA2116280A1 (en) 1993-03-05 1994-09-06 Marcy E. Macdonald Huntingtin dna, protein and uses thereof
PT698092E (pt) 1993-05-11 2007-10-29 Univ North Carolina Oligonucleótidos complementares de uma cadeia codificadora que combatem splicing aberrante e métodos para a sua utilização
US5695933A (en) 1993-05-28 1997-12-09 Massachusetts Institute Of Technology Direct detection of expanded nucleotide repeats in the human genome
US5741645A (en) 1993-06-29 1998-04-21 Regents Of The University Of Minnesota Gene sequence for spinocerebellar ataxia type 1 and method for diagnosis
US5624803A (en) 1993-10-14 1997-04-29 The Regents Of The University Of California In vivo oligonucleotide generator, and methods of testing the binding affinity of triplex forming oligonucleotides derived therefrom
US5627263A (en) 1993-11-24 1997-05-06 La Jolla Cancer Research Foundation Integrin-binding peptides
DE4342605A1 (de) 1993-12-14 1995-06-22 Buna Gmbh Funktionalisierte Olefinhomo- und -copolymere
US5962332A (en) 1994-03-17 1999-10-05 University Of Massachusetts Detection of trinucleotide repeats by in situ hybridization
AU2360195A (en) 1994-05-05 1995-11-29 Beckman Instruments, Inc. Oligonucleotide repeat arrays
US5968909A (en) 1995-08-04 1999-10-19 Hybridon, Inc. Method of modulating gene expression with reduced immunostimulatory response
US5854223A (en) 1995-10-06 1998-12-29 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York S-DC28 as an antirestenosis agent after balloon injury
US20070173465A9 (en) 1995-10-11 2007-07-26 Monahan Sean D Expression of zeta negative and zeta positive nucleic acids using a dystrophin gene
US7034009B2 (en) 1995-10-26 2006-04-25 Sirna Therapeutics, Inc. Enzymatic nucleic acid-mediated treatment of ocular diseases or conditions related to levels of vascular endothelial growth factor receptor (VEGF-R)
US6300060B1 (en) 1995-11-09 2001-10-09 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Method for predicting the risk of prostate cancer morbidity and mortality
DK0882061T3 (da) 1996-02-14 2004-09-27 Isis Pharmaceuticals Inc Sukkermodificerede gapped oligonukleotider
AU6469896A (en) 1996-07-18 1998-02-10 Srl Inc. Method for the diagnosis of spinocerebellar ataxia type 2 and primers therefor
CA2241173A1 (en) 1996-10-30 1998-05-07 Srl, Inc. Cdna fragment of causative gene of spinocerebellar ataxia type 2
US5853995A (en) 1997-01-07 1998-12-29 Research Development Foundation Large scale genotyping of diseases and a diagnostic test for spinocerebellar ataxia type 6
AU6591798A (en) 1997-03-31 1998-10-22 Yale University Nucleic acid catalysts
US20020137890A1 (en) 1997-03-31 2002-09-26 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
AU7265298A (en) 1997-04-29 1998-11-24 Trustees Of Boston University Methods and compositions for targeted dna differential display
US6329501B1 (en) 1997-05-29 2001-12-11 Auburn University Methods and compositions for targeting compounds to muscle
US6280938B1 (en) 1997-08-19 2001-08-28 Regents Of The University Of Minnesota SCA7 gene and method of use
US6514755B1 (en) 1998-08-18 2003-02-04 Regents Of The University Of Minnesota SCA7 gene and methods of use
US6794499B2 (en) 1997-09-12 2004-09-21 Exiqon A/S Oligonucleotide analogues
CA2304813A1 (en) 1997-09-22 1999-04-08 Fritz Eckstein Nucleic acid catalysts with endonuclease activity
US6130207A (en) 1997-11-05 2000-10-10 South Alabama Medical Science Foundation Cell-specific molecule and method for importing DNA into a nucleus
JP3012923B2 (ja) 1998-01-26 2000-02-28 新潟大学長 Ｃａｇリピート病の治療薬
KR100280219B1 (ko) 1998-02-26 2001-04-02 이수빈 삼핵산 반복 서열을 이용한 신경정신 질환의 진단 방법 및 진단 시약
US6322978B1 (en) 1998-04-20 2001-11-27 Joslin Diabetes Center, Inc. Repeat polymorphism in the frataxin gene and uses therefore
EP1073732A2 (en) 1998-04-29 2001-02-07 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Nucleoside triphosphates and their incorporation into ribozymes
CA2334960C (en) 1998-06-10 2012-01-03 Biognostik Gesellschaft Fur Biomolekulare Diagnostik Mbh Combination of tgf-.beta. inhibition and immune stimulation to treat hyperproliferative diseases
US6924355B2 (en) 1998-09-01 2005-08-02 Genentech, Inc. PRO1343 polypeptides
JP2002525382A (ja) 1998-09-25 2002-08-13 ザ チルドレンズ メディカル センター コーポレイション プロテインキナーゼの活性を選択的に調節するショートペプチド
US6172216B1 (en) 1998-10-07 2001-01-09 Isis Pharmaceuticals Inc. Antisense modulation of BCL-X expression
US6210892B1 (en) 1998-10-07 2001-04-03 Isis Pharmaceuticals, Inc. Alteration of cellular behavior by antisense modulation of mRNA processing
DE69932346T2 (de) * 1998-10-26 2007-07-05 Avi Biopharma, Inc., Portland Auf Morpholin basierendes p53-Antisense- Oligonucleotid und dessen Verwendungen
US6399575B1 (en) 1998-11-10 2002-06-04 Auburn University Methods and compositions for targeting compounds to the central nervous system
US6133031A (en) 1999-08-19 2000-10-17 Isis Pharmaceuticals Inc. Antisense inhibition of focal adhesion kinase expression
US20040226056A1 (en) 1998-12-22 2004-11-11 Myriad Genetics, Incorporated Compositions and methods for treating neurological disorders and diseases
US20020049173A1 (en) 1999-03-26 2002-04-25 Bennett C. Frank Alteration of cellular behavior by antisense modulation of mRNA processing
US6379698B1 (en) 1999-04-06 2002-04-30 Isis Pharmaceuticals, Inc. Fusogenic lipids and vesicles
CA2365984A1 (en) 1999-04-08 2000-10-19 Oasis Biosciences, Inc. Antisense oligonucleotides comprising universal and/or degenerate bases
JP2000325085A (ja) 1999-05-21 2000-11-28 Masafumi Matsuo デュシェンヌ型筋ジストロフィー治療剤
US20030236214A1 (en) 1999-06-09 2003-12-25 Wolff Jon A. Charge reversal of polyion complexes and treatment of peripheral occlusive disease
US6656730B1 (en) 1999-06-15 2003-12-02 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides conjugated to protein-binding drugs
WO2000078813A2 (en) 1999-06-18 2000-12-28 Emory University Huntington disease cellular model: stably transfected pc12 cells expressing mutant huntingtin
WO2001016312A2 (en) 1999-08-31 2001-03-08 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Nucleic acid based modulators of gene expression
CA2386540A1 (en) 1999-10-04 2001-04-12 University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey Novel carbamates and ureas
US6165786A (en) 1999-11-03 2000-12-26 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of nucleolin expression
EP1257639A2 (en) 2000-02-08 2002-11-20 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Nucleozymes with endonuclease activity
WO2005019453A2 (en) 2001-05-18 2005-03-03 Sirna Therapeutics, Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF GENE EXPRESSION USING CHEMICALLY MODIFIED SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
EP1133993A1 (en) 2000-03-10 2001-09-19 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Substances for the treatment of spinal muscular atrophy
US20020187931A1 (en) 2000-04-13 2002-12-12 Michael Hayden Modulating cell survival by modulating huntingtin function
US6653467B1 (en) * 2000-04-26 2003-11-25 Jcr Pharmaceutical Co., Ltd. Medicament for treatment of Duchenne muscular dystrophy
EP1287125B1 (en) 2000-04-28 2009-07-29 Asklepios Biopharmaceutical, Inc. Dna sequences encoding dystrophin minigenes and methods of use thereof
AU5736601A (en) 2000-05-01 2001-11-12 Hybridon Inc Modulation of oligonucleotide cpg-mediated immune stimulation by positional modification of nucleosides
US20020013287A1 (en) 2000-05-09 2002-01-31 Reliable Biopharmaceuticals, Inc. St Louis Missouri Polymeric compounds useful as prodrugs
US7405193B2 (en) 2000-05-31 2008-07-29 Serono Genetics Institute S.A. Use of Acrp30 globular head to promote increases in muscle mass and muscle differentiation
CN1326990A (zh) 2000-06-07 2001-12-19 上海博德基因开发有限公司 一种新的多肽——人类dna cgg重复结合蛋白16.17和编码这种多肽的多核苷酸
US20030124523A1 (en) 2000-06-22 2003-07-03 Asselbergs Fredericus Alphonsus Maria Organic compounds
US6794192B2 (en) 2000-06-29 2004-09-21 Pfizer Inc. Target
RU2165149C1 (ru) 2000-07-03 2001-04-20 Шапошников Валерий Геннадьевич Система формования и упаковки изделий из сахарной ваты
US6727355B2 (en) 2000-08-25 2004-04-27 Jcr Pharmaceuticals Co., Ltd. Pharmaceutical composition for treatment of Duchenne muscular dystrophy
JP4836366B2 (ja) 2000-08-25 2011-12-14 雅文 松尾 デュシェンヌ型筋ジストロフィー治療剤
EP1191097A1 (en) 2000-09-21 2002-03-27 Leids Universitair Medisch Centrum Induction of exon skipping in eukaryotic cells
AU3922802A (en) 2000-10-02 2002-05-27 Keck Graduate Inst Methods for identifying nucleotides at defined positions in target nucleic acidsusing fluorescence polarization
WO2002029056A2 (en) 2000-10-06 2002-04-11 Regents Of The University Of Michigan Mini-dystrophin nucleic acid and peptide sequences
US6623927B1 (en) 2000-11-08 2003-09-23 Council Of Scientific And Industrial Research Method of detection of allelic variants of SCA2 gene
US6743893B2 (en) 2000-11-30 2004-06-01 The Uab Research Foundation Receptor-mediated uptake of peptides that bind the human transferrin receptor
US7001994B2 (en) 2001-01-18 2006-02-21 Genzyme Corporation Methods for introducing mannose 6-phosphate and other oligosaccharides onto glycoproteins
TW200526779A (en) 2001-02-08 2005-08-16 Wyeth Corp Modified and stabilized GDF propeptides and uses thereof
KR100408053B1 (ko) 2001-02-13 2003-12-01 엘지전자 주식회사 에스알엠의 토크리플 저감방법
US20070021360A1 (en) * 2001-04-24 2007-01-25 Nyce Jonathan W Compositions, formulations and kit with anti-sense oligonucleotide and anti-inflammatory steroid and/or obiquinone for treatment of respiratory and lung disesase
WO2002092763A2 (en) 2001-05-11 2002-11-21 Regents Of The University Of Minnesota Intron associated with myotonic dystrophy type 2 and methods of use
US20050277133A1 (en) 2001-05-18 2005-12-15 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated treatment of polyglutamine (polyQ) repeat expansion diseases using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050282188A1 (en) 2001-05-18 2005-12-22 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050014172A1 (en) 2002-02-20 2005-01-20 Ivan Richards RNA interference mediated inhibition of muscarinic cholinergic receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
IL143379A (en) 2001-05-24 2013-11-28 Yissum Res Dev Co Oligonucleotide against human ache isoform r and its uses
JP4510442B2 (ja) 2001-06-26 2010-07-21 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニー ＴＮＦ−α発現のＮ−ヘテロ環インヒビター
NZ530360A (en) 2001-07-06 2006-01-27 Topigen Pharma Inc Methods for increasing in vivo efficacy of oligonucleotides and inhibiting inflammation in mammals by substituting an adenosine base for 2'6'-diaminopurine (DAP) and analogs thereof
AU2002326589B2 (en) 2001-08-07 2008-06-05 University Of Delaware Compositions and methods for the prevention and treatment of Huntington's disease
DE60230046D1 (de) 2001-08-10 2009-01-08 Novartis Ag Peptide, die atherosklerotische schädigungen binden
US20060074034A1 (en) 2001-09-17 2006-04-06 Collins Douglas A Cobalamin mediated delivery of nucleic acids, analogs and derivatives thereof
KR20030035047A (ko) 2001-10-29 2003-05-09 (주)바이오코돈 Bmp-4 유전자 발현을 이용한 편평태선 질환의 치료 및진단방법
US20030166004A1 (en) 2001-11-01 2003-09-04 Jeno Gyuris Endothelial-cell binding peptides for diagnosis and therapy
US20030134790A1 (en) 2002-01-11 2003-07-17 University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey Bone Morphogenetic Protein-2 And Bone Morphogenetic Protein-4 In The Treatment And Diagnosis Of Cancer
WO2003062258A1 (en) 2002-01-22 2003-07-31 The Cleveland Clinic Foundation Rnase l activator-antisense complexes
WO2003069330A1 (en) 2002-02-11 2003-08-21 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York System and method for identifying proteins involved in force-initiated signal transduction
US20050096284A1 (en) 2002-02-20 2005-05-05 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated treatment of polyglutamine (polyQ) repeat expansion diseases using short interfering nucleic acid (siNA)
DE60331049D1 (de) 2002-03-01 2010-03-11 Univ Tulane Konjugate von zytotoxischen mitteln und biologisch aktiven peptiden
US20040101852A1 (en) 2002-11-21 2004-05-27 Isis Pharmaceuticals Inc. Modulation of CGG triplet repeat binding protein 1 expression
ITRM20020253A1 (it) 2002-05-08 2003-11-10 Univ Roma Molecole chimeriche di snrna con sequenze antisenso per le giunzioni di splicing del gene della distrofina e applicazioni terapeutiche.
US20040102395A1 (en) 2002-11-22 2004-05-27 Isis Pharmaceuticals Inc. Modulation of IAP-like expression
EP1380644A1 (en) 2002-07-08 2004-01-14 Kylix B.V. The use of specified TCF target genes to identify drugs for the treatment of cancer, in particular colorectal cancer, in which TCF/beta-catenin/WNT signalling plays a central role
WO2004011060A2 (en) 2002-07-26 2004-02-05 Mirus Corporation Delivery of molecules and complexes to mammalian cells in vivo
US20050255086A1 (en) 2002-08-05 2005-11-17 Davidson Beverly L Nucleic acid silencing of Huntington's Disease gene
CA2493297A1 (en) 2002-08-12 2004-02-19 Universite De Sherbrooke Methods to reprogram splice site selection in pre-messenger rnas
GB0219143D0 (en) 2002-08-16 2002-09-25 Univ Leicester Modified tailed oligonucleotides
US20040219565A1 (en) 2002-10-21 2004-11-04 Sakari Kauppinen Oligonucleotides useful for detecting and analyzing nucleic acids of interest
EP1554305B1 (en) 2002-10-23 2007-03-28 Centre for Research and Technology Hellas/Institute of Agrobiotechnology Prion protein-binding peptide sequences
US7892793B2 (en) 2002-11-04 2011-02-22 University Of Massachusetts Allele-specific RNA interference
US7655785B1 (en) 2002-11-14 2010-02-02 Rosetta Genomics Ltd. Bioinformatically detectable group of novel regulatory oligonucleotides and uses thereof
US7250496B2 (en) * 2002-11-14 2007-07-31 Rosetta Genomics Ltd. Bioinformatically detectable group of novel regulatory genes and uses thereof
DK2284266T3 (da) 2002-11-14 2014-01-13 Thermo Fisher Scient Biosciences Inc sIRNA-MOLEKYLE MOD TP53
ES2566632T3 (es) 2002-11-25 2016-04-14 Masafumi Matsuo Fármacos de ácido nucleico ENA que modifican el corte y empalme en precursores de ARNm
GB0228079D0 (en) 2002-12-02 2003-01-08 Laxdale Ltd Huntington's Disease
EP3450559A1 (en) 2003-03-07 2019-03-06 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Therapeutic compositions
WO2004083432A1 (en) 2003-03-21 2004-09-30 Academisch Ziekenhuis Leiden Modulation of exon recognition in pre-mrna by interfering with the secondary rna structure
US7514551B2 (en) 2003-04-03 2009-04-07 Enzo Life Sciences, Inc. Multisignal labeling reagents, and processes and uses therefor
WO2004101787A1 (ja) 2003-05-14 2004-11-25 Japan Science And Technology Agency ハンチンチン遺伝子の発現抑制
CN1829532A (zh) 2003-06-02 2006-09-06 惠氏公司 肌肉抑制素（gdf8）抑制剂和皮质类固醇联合用于治疗神经肌肉紊乱的用途
ES2302898T3 (es) 2003-07-11 2008-08-01 Lbr Medbiotech B.V. Transferencia de genes a celulas musculares mediada por el receptor de manosa-6-fosfato.
US20050048495A1 (en) 2003-08-29 2005-03-03 Baker Brenda F. Isoform-specific targeting of splice variants
US20050054752A1 (en) 2003-09-08 2005-03-10 O'brien John P. Peptide-based diblock and triblock dispersants and diblock polymers
WO2005033134A2 (en) 2003-09-30 2005-04-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Secreted protein therapeutics and uses thereof
WO2005035550A2 (en) 2003-10-14 2005-04-21 Kernel Biopharma Inc. Dual phase-pna conjugates for the delivery of pna through the blood brain barrier
US20050191636A1 (en) 2004-03-01 2005-09-01 Biocept, Inc. Detection of STRP, such as fragile X syndrome
US20080207538A1 (en) 2004-03-11 2008-08-28 Lawrence David S Enhanced Production of Functional Proteins From Defective Genes
EP1735443A2 (en) 2004-04-14 2006-12-27 Sirna Therapeutics, Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED TREATMENT OF POLYGLUTAMINE (POLYQ) REPEAT EXPANSION DISEASES USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
KR20070085113A (ko) 2004-05-11 2007-08-27 가부시키가이샤 알파젠 Rna간섭을 생기게 하는 폴리뉴클레오티드, 및 이를 이용한유전자발현억제 방법
US20050288246A1 (en) 2004-05-24 2005-12-29 Iversen Patrick L Peptide conjugated, inosine-substituted antisense oligomer compound and method
WO2005115439A2 (en) 2004-05-27 2005-12-08 Acceleron Pharma Inc. Cerberus/coco derivatives and uses thereof
US7361468B2 (en) * 2004-07-02 2008-04-22 Affymetrix, Inc. Methods for genotyping polymorphisms in humans
EP1618881A1 (en) * 2004-07-20 2006-01-25 Santhera Pharmaceuticals (Schweiz) GmbH Use of non-glucocorticoid steroids for the treatment of muscular dystrophy
WO2006017522A2 (en) 2004-08-03 2006-02-16 University Of Utah Research Foundation Use of antisense oligonucleotides to effect translation modulation
US20060099612A1 (en) 2004-09-02 2006-05-11 Suntory Limited Method for analyzing genes of industrial yeasts
CA2582137A1 (en) 2004-10-05 2007-02-15 Wyeth Probe arrays for detecting multiple strains of different species
ITRM20040568A1 (it) 2004-11-18 2005-02-18 Uni Degli Studi Di Roma Tor Vergata Uso della tecnica "phage display" per l'identificazione di peptidi con capacita' di legame a cellule staminali/progenitore, peptidi cosi' ottenuti e loro usi.
US7838657B2 (en) 2004-12-03 2010-11-23 University Of Massachusetts Spinal muscular atrophy (SMA) treatment via targeting of SMN2 splice site inhibitory sequences
KR100663277B1 (ko) 2004-12-20 2007-01-02 삼성전자주식회사 휴대단말기의 시스템 관련 이벤트 처리 장치 및 방법
US20060148740A1 (en) 2005-01-05 2006-07-06 Prosensa B.V. Mannose-6-phosphate receptor mediated gene transfer into muscle cells
US20120122801A1 (en) 2005-01-05 2012-05-17 Prosensa B.V. Mannose-6-phosphate receptor mediated gene transfer into muscle cells
CA2596588C (en) 2005-01-31 2017-06-27 University Of Iowa Research Foundation Nucleic acid silencing of huntington's disease gene
PL1877099T3 (pl) 2005-04-06 2013-02-28 Genzyme Corp Terapeutyczne koniugaty zawierające enzym lizosomalny, kwas polisialowy i grupę kierującą
WO2006112705A2 (en) 2005-04-22 2006-10-26 Academisch Ziekenhuis Leiden Modulation of exon recognition in pre-mrna by interfering with the binding of sr proteins and by interfering with secondary rna structure.
WO2006121960A2 (en) 2005-05-06 2006-11-16 Medtronic, Inc. Methods and sequences to suppress primate huntington gene expression
US7902352B2 (en) 2005-05-06 2011-03-08 Medtronic, Inc. Isolated nucleic acid duplex for reducing huntington gene expression
WO2006121277A1 (en) 2005-05-09 2006-11-16 Korea Research Institute Of Standards And Science Fret probes for fluorescent detection of the epsps gene
HUE027486T2 (en) 2005-06-23 2016-09-28 Isis Pharmaceuticals Inc Preparations and methods for modifying SMN2-Splicing
WO2007002904A2 (en) 2005-06-28 2007-01-04 Medtronic, Inc. Methods and sequences to preferentially suppress expression of mutated huntingtin
EP2179737B1 (en) * 2005-07-01 2013-08-14 Index Pharmaceuticals AB Modulating responsiveness to steroids
EP2325315B1 (en) 2005-10-28 2014-05-07 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of huntingtin gene
US7906617B2 (en) 2005-12-15 2011-03-15 E. I. Du Pont De Nemours And Company Polyethylene binding peptides and methods of use
PL3210633T3 (pl) 2006-01-26 2019-12-31 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Kompozycje i ich zastosowania ukierunkowane na huntingtynę
WO2007123391A1 (en) 2006-04-20 2007-11-01 Academisch Ziekenhuis Leiden Therapeutic intervention in a genetic disease in an individual by modifying expression of an aberrantly expressed gene.
US7855053B2 (en) 2006-07-19 2010-12-21 The Regents Of The University Of California Methods for detecting the presence of expanded CGG repeats in the FMR1 gene 5′ untranslated region
CN101501193B (zh) 2006-08-11 2013-07-03 普罗森那技术公司 用于治疗与dna重复不稳定性相关的遗传病的方法和手段
NZ574807A (en) 2006-08-11 2011-01-28 Prosensa Technologies Bv Methods and means for treating dna repeat instability associated genetic disorders
JP2010512304A (ja) 2006-09-27 2010-04-22 メルク・シャープ・エンド・ドーム・コーポレイション メラノコルチン−４受容体モジュレータとしてのアシル化ピペリジン誘導体
SG166778A1 (en) 2006-10-11 2010-12-29 Max Planck Gesellschaft Influenza targets
WO2008103755A1 (en) 2007-02-20 2008-08-28 Mayo Foundation For Medical Education And Research Treating cancer with viral nucleic acid
PL381824A1 (pl) 2007-02-22 2008-09-01 Instytut Chemii Bioorganicznej Pan W Poznaniu Sekwencja siRNA, wektor, cel molekularny dla reagentów siRNA i wektorów wprowadzanych do komórek i tkanek, sposób oceny specyficzności wyciszania zmutowanego transkryptu, sposób badania oddziaływań enzymów szlaku interferencji RNA z transkryptami oraz zastosowanie sekwencji siRNA i wektora
EP2170363B1 (en) 2007-06-29 2018-08-08 Sarepta Therapeutics, Inc. Tissue specific peptide conjugates and methods
CN103212085A (zh) 2007-07-12 2013-07-24 普罗森那技术公司 用于使化合物靶向多种选定器官或组织的分子
EP2167135A2 (en) 2007-07-12 2010-03-31 Prosensa Technologies B.V. Molecules for targeting compounds to various selected organs, tissues or tumor cells
US9212205B2 (en) 2007-07-26 2015-12-15 University Of Rochester Nucleic acid binding compounds and methods of use
WO2009023855A2 (en) 2007-08-15 2009-02-19 Isis Pharmaceuticals, Inc. Tetrahydropyran nucleic acid analogs
WO2009099326A1 (en) 2008-02-08 2009-08-13 Prosensa Holding Bv Methods and means for treating dna repeat instability associated genetic disorders
WO2009101399A1 (en) 2008-02-12 2009-08-20 Isis Innovation Limited Treatment of muscular dystrophy using peptide nucleic acid ( pna)
EP2105145A1 (en) 2008-03-27 2009-09-30 ETH Zürich Method for muscle-specific delivery lipid-conjugated oligonucleotides
AU2009244013B2 (en) 2008-05-09 2015-06-25 The University Of British Columbia Methods and compositions for the treatment of Huntington's disease
EP2119783A1 (en) 2008-05-14 2009-11-18 Prosensa Technologies B.V. Method for efficient exon (44) skipping in Duchenne Muscular Dystrophy and associated means
WO2009144481A2 (en) 2008-05-30 2009-12-03 Isis Innovation Limited Conjugates for delivery of biologically active compounds
US20110152352A1 (en) 2008-06-10 2011-06-23 Tufts University Smad proteins control drosha-mediated mirna maturation
GB2457965B8 (en) 2008-07-01 2011-02-16 Renovo Ltd Methods and systems for determining efficacy of medicaments.
WO2010006237A2 (en) 2008-07-11 2010-01-14 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Phosphorothioate oligonucleotides non-nucleosidic phosphorothiotes as delivery agents for irna agents
WO2010014592A1 (en) 2008-07-29 2010-02-04 The Board Of Regents Of The University Of Texas Sytem Selective inhibition of polyglutamine protein expression
US8084601B2 (en) * 2008-09-11 2011-12-27 Royal Holloway And Bedford New College Royal Holloway, University Of London Oligomers
US8609615B2 (en) 2008-10-15 2013-12-17 Valerion Therapeutics, Llc Methods and compositions for treatment of myotonic dystrophy
SI3133160T1 (sl) * 2008-10-24 2019-05-31 Sarepta Therapeutics, Inc. Sestavki, ki preskakujejo ekson za DMD
DK2607484T3 (en) 2008-10-27 2016-03-07 Biomarin Technologies B V Methods and means for efficient skipping of exon 45 in Duchenne muscular dystrophy pre-MRNA
US20100248239A1 (en) 2009-03-24 2010-09-30 Mayo Foundation For Medical Education And Research Methods and materials for detecting fragile x mutations
EP2411532B1 (en) 2009-03-24 2017-04-05 Asuragen, Inc. Pcr methods for characterizing the 5' untranslated region of the fmr1 and fmr2 genes
US20120149756A1 (en) 2009-04-10 2012-06-14 Associatin Institut de Myologie Tricyclo-dna antisense oligonucleotides, compositions, and methods for the treatment of disease
ES2593836T3 (es) 2009-04-24 2016-12-13 Biomarin Technologies B.V. Oligonucleótido que comprende una inosina para tratar la DMD
BRPI1010885A2 (pt) 2009-06-08 2015-09-22 Miragen Therapeutics motivos de modificação química para inibidores mirna e miméticos.
CA2931725C (en) 2009-09-11 2021-10-19 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of huntingtin expression
ES2693459T3 (es) 2009-11-12 2018-12-11 The University Of Western Australia Moléculas antisentido y métodos para el tratamiento de patologías
US20110166081A1 (en) 2009-12-03 2011-07-07 University Of Iowa Research Foundation Alpha-dystroglycan as a Protein Therapeutic
WO2011078797A2 (en) 2009-12-22 2011-06-30 Singapore Health Services Pte. Ltd Antisense oligonucleotides and uses threreof
AU2010335039B2 (en) 2009-12-24 2015-03-26 Academisch Ziekenhuis Leiden H.O.D.N. Lumc Molecule for treating an inflammatory disorder
WO2011097614A1 (en) 2010-02-08 2011-08-11 Isis Pharmaceuticals, Inc. Mehods and compositions useful in diseases or conditions related to repeat expansion
WO2011097641A1 (en) 2010-02-08 2011-08-11 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions useful in treatment of diseases or conditions related to repeat expansion
WO2012012443A2 (en) 2010-07-19 2012-01-26 Bennett C Frank Modulation of dystrophia myotonica-protein kinase (dmpk) expression
SI2605794T1 (sl) 2010-08-20 2017-01-31 Replicor Inc. Oligonukleotidni kelatni kompleksi
TWI541024B (zh) 2010-09-01 2016-07-11 日本新藥股份有限公司 反義核酸
WO2012109296A1 (en) 2011-02-08 2012-08-16 The Charlotte-Mecklenburg Hospital Authority D/B/A Carolinas Medical Center Antisense oligonucleotides
EP3067421B1 (en) 2011-02-08 2018-10-10 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds comprising bicyclic nucleotides and uses thereof
WO2012144906A1 (en) 2011-04-22 2012-10-26 Prosensa Technologies B.V. New compounds for treating, delaying and/or preventing a human genetic disorder such as myotonic dystrophy type 1 (dm1)
KR102339196B1 (ko) 2011-05-05 2021-12-15 사렙타 쎄러퓨틱스, 인코퍼레이티드 펩타이드 올리고뉴클레오타이드 접합체
CA2842742A1 (en) 2011-06-23 2012-12-27 Cold Spring Harbor Laboratory Phenocopy model of disease
JP6317675B2 (ja) 2011-11-30 2018-04-25 サレプタ セラピューティクス， インコーポレイテッド 延長リピート病を処置するためのオリゴヌクレオチド
US9203291B2 (en) 2011-12-03 2015-12-01 Thomas Krupenkin Method and apparatus for mechanical energy harvesting using combined magnetic and microfluidic energy generation
EP2790736B1 (en) 2011-12-12 2018-01-31 Oncoimmunin, Inc. In vivo delivery of oligonucleotides
EP2799548B1 (en) 2011-12-28 2019-08-21 Nippon Shinyaku Co., Ltd. Antisense nucleic acid
EP4043039A1 (en) 2012-01-27 2022-08-17 BioMarin Technologies B.V. Rna modulating oligonucleotides with improved characteristics for the treatment of duchenne and becker muscular dystrophy
WO2013120003A1 (en) 2012-02-08 2013-08-15 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of rna by repeat targeting
EP4400169A2 (en) 2012-04-23 2024-07-17 Vico Therapeutics B.V. Rna modulating oligonucleotides with improved characteristics for the treatment of neuromuscular disorders
AR091065A1 (es) 2012-05-18 2014-12-30 Replicor Inc Una formulacion farmaceutica que comprende un quelato de oligonucleotidos antiviral para el tratamiento de una infeccion antiviral
CA2877644A1 (en) 2012-07-03 2014-01-09 Prosensa Technologies B.V. Oligonucleotide for the treatment of muscular dystrophy patients
MX366274B (es) * 2013-03-14 2019-07-04 Sarepta Therapeutics Inc Composiciones para el salto del exón para el tratamiento de distrofia muscular.

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006000057A1 (en) * 2004-06-28 2006-01-05 SMITHKLINE BEECHAM CORPORATION, doing business as GLAXOSMITHKLINE Antisense oligonucleotides for inducing exon skipping and methods of use thereof
EP1857548A1 (en) * 2006-05-19 2007-11-21 Academisch Ziekenhuis Leiden Means and method for inducing exon-skipping
CN101896186A (zh) * 2007-10-26 2010-11-24 莱顿教学医院 对抗肌肉病症的方式和方法

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110257379A (zh) * 2012-07-03 2019-09-20 马林生物科技有限公司 用于治疗肌肉萎缩症患者的寡核苷酸
CN110257379B (zh) * 2012-07-03 2023-08-11 马林生物科技有限公司 用于治疗肌肉萎缩症患者的寡核苷酸
CN105307723A (zh) * 2013-03-15 2016-02-03 萨勒普塔医疗公司 改进的用于治疗肌营养不良的组合物
CN106714845A (zh) * 2014-08-11 2017-05-24 得克萨斯州大学系统董事会 通过crispr/cas9介导的基因编辑预防肌营养不良
CN107667174A (zh) * 2015-05-21 2018-02-06 ProQR治疗上市公司Ⅱ 治疗营养不良型大疱性表皮松解症的反义寡核苷酸
CN107667174B (zh) * 2015-05-21 2021-10-26 翼治疗有限公司 治疗营养不良型大疱性表皮松解症的反义寡核苷酸

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WO2009054725A3 (en) 2009-10-15

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