CN102026666A - 促胰岛素肽缀合物制剂 - Google Patents

促胰岛素肽缀合物制剂 Download PDF

Info

Publication number
CN102026666A
CN102026666A CN2008801265943A CN200880126594A CN102026666A CN 102026666 A CN102026666 A CN 102026666A CN 2008801265943 A CN2008801265943 A CN 2008801265943A CN 200880126594 A CN200880126594 A CN 200880126594A CN 102026666 A CN102026666 A CN 102026666A
Authority
CN
China
Prior art keywords
pharmaceutical preparation
exenatide
conjugate
preparation
individuality
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN2008801265943A
Other languages
English (en)
Other versions
CN102026666B (zh
Inventor
托马斯·R·乌利希
马里夫·卡里尔
拜恩·赛昂·常
奥马尔·库雷希
玛吉·王
吉恩-菲利普·埃斯特拉迪耶
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Changshan Kaijiejian Biological Drug R & D Hebei Co ltd
Kangjiu LLC
ConjuChem Biotechnologies Inc
Abraxis Bioscience LLC
Original Assignee
ConjuChem Biotechnologies Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by ConjuChem Biotechnologies Inc filed Critical ConjuChem Biotechnologies Inc
Publication of CN102026666A publication Critical patent/CN102026666A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN102026666B publication Critical patent/CN102026666B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/643—Albumins, e.g. HSA, BSA, ovalbumin or a Keyhole Limpet Hemocyanin [KHL]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics

Abstract

本发明提供了包含促胰岛素肽缀合物特别是白蛋白与艾塞那肽-4或其衍生物的缀合物的药物制剂，及其施用方法。本发明还提供了通过施用本文所述的药物制剂来治疗糖尿病和促胰岛素肽相关疾病或病症的方法。

Description

促胰岛素肽缀合物制剂
本申请要求于2007年12月11日递交的美国临时申请号61/007,346、于2008年2月15日递交的美国临时申请号61/029,295、和于2008年12月3日递交的美国临时申请号61/200,879的优先权，每一个临时申请被整体通过引用并入本文。
1.发明领域
本发明提供了包含促胰岛素肽缀合物的药物制剂及其施用方法。所述制剂可用于治疗糖尿病或其它促胰岛素肽相关疾病。
2.发明背景
2000年估计全世界所有年龄人群的糖尿病流行程度是2.8％或者1.71亿，而2030年预计为4.4％或3.66亿。参见Wild等，2004，Diabetes Care 27(5)：1047-1053。仅在美国，2005年糖尿病的流行程度估计为2080万或美国人口的7％。参见Centers for Disease Control and Prevention，2005，National DiabetesFact Sheet：General Information and National Estimates on Diabetes in theUnited States，2005。所有糖尿病个体中大约95％具有II型疾病。糖尿病目前在美国是第五位导致死亡的主要原因，并与源于心血管疾病、肾衰、失明和下肢截肢的过高发病率相关。
与之类似，肥胖对世界人口的影响逐渐增加。据世界卫生组织估计1995年全世界有2亿肥胖成人，另有1800万五岁以下儿童归为超重。到2000年，肥胖成人数已增至超过3亿。参见Formiguera等，2004，Best Practice &Research Clinical Gastroenterology，18：6，1125-1146。
促胰岛素肽已作为一种可能用来控制II型非胰岛素依赖性糖尿病以及相关代谢紊乱如肥胖症的治疗剂进行研究。最近已经表明，促胰岛素肽与白蛋白缀合在体内能够提供更长的持续作用时间，同时保持促胰岛素肽的低毒性和治疗优势。参见例如Giannoukakis，Curr Opin Investig Drugs.4(10)：1245-9(2003)。此类药物产品制剂能够用于提供稳定和持续的效果。因而，本领域需要包含促胰岛素肽缀合物的药物制剂。
3.发明概述
本发明提供了能够提供促胰岛素肽缀合物的稳定性和维持其生物活性的药物制剂。本发明提供的药物制剂包括液体和冻干制剂、单位剂型和多次剂型、及其组合。所述药物制剂能够适合于通过胃肠外途径如皮下、静脉内、肌肉内、经皮、动脉内、腹膜内施用，或通过口服途径、表面途径或吸入途径施用。
一方面，本发明提供了包含促胰岛素肽缀合物、缓冲液、张力调节剂、稳定剂、表面活性剂和任选的防腐剂的药物制剂，其中所述制剂的pH约为3.0至8.0。在一些实施方案中，所述制剂的pH约为4.0至8.0。在一些实施方案中，所述制剂的pH为约4.0至6.0。在一些实施方案中，所述制剂的pH为约6.0至8.0。在一些实施方案中，所述制剂的pH为约6.0至9.0。在一些实施方案中，所述制剂的pH为约5.0至7.0。在一些实施方案中，所述制剂的pH为约4.5至6.0。在一些实施方案中，所述制剂的pH为约5.0至6.0。在一些实施方案中，所述制剂的pH为约5.1至6.0、约5.2至6.0、约5.3至6.0、约5.4至6.0、约5.5至6.0、约5.6至6.0、约5.7至6.0、或约5.8至6.0。在一些实施方案中，所述制剂的pH为约3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9或9.0。在具体实施方案中，所述制剂的pH为约5.0。在另一具体实施方案中，所述制剂的pH为约7.0。
所述促胰岛素肽可以是本领域技术人员已知的任何促胰岛素肽。例如，其可以是任何能够刺激激素胰岛素合成或表达或引起该刺激的肽。在一些实施方案中，所述促胰岛素肽选自：胰高血糖素样肽1、艾塞那肽-3(exendin-3)和艾塞那肽-4(exendin-4)，以及它们的前体、衍生物或片段。在优选的实施方案中，所述促胰岛素肽是艾塞那肽-4或其衍生物。本发明描述了示例性的衍生物。
所述促胰岛素肽缀合物可以是与白蛋白缀合。在一些实施方案中，所述促胰岛素肽与人血清白蛋白缀合。在一些实施方案中，所述促胰岛素肽与重组人血清白蛋白缀合。
另一方面，本发明提供了药物制剂，其包含浓度为约1mg/ml至约100mg/ml的白蛋白与艾塞那肽-4或其衍生物的缀合物；缓冲液；张力调节剂；稳定剂；表面活性剂和任选的防腐剂，其中所述制剂的pH为约4至约8。在优选的实施方案中，白蛋白与艾塞那肽-4的缀合物是艾塞那肽-4(1-39)-Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2白蛋白缀合物。术语“艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2白蛋白缀合物”是指通过使下式化合物：
Figure BPA00001197230100041
(SEQ ID NO：35)与白蛋白共价键合制备的缀合物，其产生下式的缀合物：
Figure BPA00001197230100042
(SEQ ID NO：34)，
其中X是白蛋白半胱氨酸34的硫原子。本领域技术人员将会理解能够通过使白蛋白半胱氨酸34侧链巯基共价连接[2-[2-[2-马来酰亚胺基丙酰胺基(乙氧基)乙氧基]乙酸接头，该接头再共价连接艾塞那肽-4(1-39)Lys40-NH2羧基末端赖氨酸即赖氨酸40的ε氨基，来形成艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2白蛋白缀合物。
在一些实施方案中，所述药物制剂包含5-30mM磷酸钠缓冲液中的约1mg/ml至约15mg/ml艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2白蛋白缀合物，所述缓冲液的pH为6.5-7.5，还含有100-200mM氯化钠、1-10mM辛酸钠和1-30mg/L聚山梨醇酯80。在具体实施方案中，所述制剂包含5-30mM磷酸钠缓冲液中的10mg/ml艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2白蛋白缀合物，所述缓冲液的pH为6.5-7.5，还含有100-200mM氯化钠、1-10mM辛酸钠和1-30mg/L聚山梨醇酯80。在具体实施方案中，所述制剂包含10mM磷酸钠缓冲液中的10mg/ml艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2白蛋白缀合物，所述缓冲液还含有100-200mM氯化钠、1-10mM辛酸钠和1-30mg/L聚山梨醇酯80，其中所述制剂的pH为约5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9或8.0。在具体实施方案中，所述制剂包含10mM磷酸钠缓冲液中的10mg/ml艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2白蛋白缀合物，所述缓冲液的pH为7.0，还含有100-200mM氯化钠、1-10mM辛酸钠和1-30mg/L聚山梨醇酯80。在具体实施方案中，所述制剂包含10mM磷酸钠缓冲液中的10mg/ml艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2白蛋白缀合物，所述缓冲液的pH为7.0，还含有135mM氯化钠、1.6mM辛酸钠和15mg/L聚山梨醇酯80。在具体实施方案中，所述制剂由以下成分组成：10mM磷酸钠缓冲液中的约1mg/ml至约15mg/ml艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2白蛋白缀合物，所述缓冲液的pH为7.0，还含有135mM氯化钠、1.6mM辛酸钠和15mg/L聚山梨醇酯80。在具体实施方案中，所述制剂由以下成分组成：10mM磷酸钠缓冲液中的10mg/ml艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2白蛋白缀合物，所述缓冲液的pH为7.0，还含有135mM氯化钠、1.6mM辛酸钠和15mg/L聚山梨醇酯80。
在一些实施方案中，所述药物制剂包含5-30mM醋酸钠缓冲液中的约1mg/ml至约15mg/ml艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2白蛋白缀合物，所述缓冲液的pH为4.5-5.5，还含有1-15mM辛酸钠、0.05至0.2％(w/v)普朗尼克F68(pluronic F68)、以及100-200mM氯化钠或2-8％(w/v)山梨糖醇。在具体实施方案中，所述制剂包含5-30mM醋酸钠缓冲液中的10mg/ml艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2白蛋白缀合物，所述缓冲液的pH为4.5-5.5，还含有1-15mM辛酸钠、0.05至0.2％(w/v)普朗尼克F68、以及100-200mM氯化钠或2-8％(w/v)山梨糖醇。在具体实施方案中，所述制剂包含10mM醋酸钠缓冲液中的10mg/ml艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2白蛋白缀合物，所述缓冲液还含有1-15mM辛酸钠、0.05至0.2％(w/v)普朗尼克F68、以及100-200mM氯化钠或2-8％(w/v)山梨糖醇，其中所述制剂的pH为约4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4或5.5。在具体实施方案中，所述制剂包含10mM醋酸钠缓冲液中的10mg/ml艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2白蛋白缀合物，所述缓冲液的pH为pH 5.0，还含有1-15mM辛酸钠、0.05至0.2％(w/v)普朗尼克F68、以及100-200mM氯化钠或2-8％(w/v)山梨糖醇。在具体实施方案中，所述制剂包含10mM醋酸钠缓冲液中的10mg/ml艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2白蛋白缀合物，所述缓冲液的pH为5.0，还含有150mM氯化钠、5mM辛酸钠和0.1％(w/v)普朗尼克F68(即，泊洛沙姆188(poloxamer 188))。在具体实施方案中，所述制剂由以下成分组成：10mM醋酸钠缓冲液中的约1mg/ml至约15mg/ml艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2白蛋白缀合物，所述缓冲液的pH为5.0，还含有150mM氯化钠、5mM辛酸钠和0.1％(w/v)普朗尼克F68(即，泊洛沙姆188)。在具体实施方案中，所述制剂由以下成分组成：10mM醋酸钠缓冲液中的10mg/ml艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2白蛋白缀合物，所述缓冲液的pH为5.0，还含有150mM氯化钠、5mM辛酸钠和0.1％(w/v)普朗尼克F68(即，泊洛沙姆188)。
另一方面，本发明提供了治疗糖尿病、肥胖症或可用促胰岛素肽治疗的其它疾病或病症的方法，该其它疾病或病症例如前期糖尿病(例如，糖耐量受损(IGT)或空腹血糖受损(IFG))；糖尿病，例如I型糖尿病；II型糖尿病；成人隐匿性自身免疫糖尿病(“LADA”)，也称为成人迟发性自身免疫糖尿病；迟发性I型糖尿病；1.5型糖尿病；类固醇诱发的糖尿病；人免疫缺陷病毒(HIV)治疗诱发的糖尿病；先天性或HIV相关脂肪营养不良个体的糖尿病发展(“脂肪再分布综合症”)；肥胖症(即，BMI为30kg/m2或更大)；超重(即，BMI为25kg/m2至30kg/m2)；代谢综合症(X综合症)；神经系统紊乱；外科手术、胰岛素耐受；无知觉低血糖症；限制性肺疾病；胃肠紊乱，例如肠易激综合症(IBS)、功能性消化不良；与胃肠紊乱相关的疼痛，例如与IBS和功能性消化不良相关的疼痛；炎症性肠病(IBD)，例如克罗恩病、溃疡性结肠炎；与IBD相关的疼痛；高血糖症，例如与外科手术(例如，大的外科手术，例如冠状动脉搭桥术)相关的高血糖症，例如与糖尿病(例如II型糖尿病)个体外科手术相关的高血糖症；代谢综合症；冠状动脉心力衰竭(CHF)；与β细胞功能障碍相关的紊乱；与β细胞缺失相关的紊乱；与β细胞数量不足相关的紊乱；或其它可用促胰岛素肽或促胰岛素肽缀合物治疗的病症，所述方法包括向个体施用所述促胰岛素肽缀合物，例如本发明所述的药物制剂之中的促胰岛素肽缀合物。
另一方面，本发明提供了通过向个体施用有效量的促胰岛素肽缀合物，例如本发明所述的药物制剂中的促胰岛素肽缀合物，并联合一种或多种第二治疗剂来治疗糖尿病、肥胖症或其它可用促胰岛素肽治疗的紊乱的方法。在一些实施方案中，所述第二治疗剂是抗糖尿病制剂。在一些实施方案中，所述抗糖尿病制剂是口服抗糖尿病制剂(OAD)，例如双胍，例如二甲双胍。
本发明还涵盖包含本发明的药物制剂和剂型的试剂盒。
4.附图简述
图1显示了在25℃孵育6个月的制剂的SEC-HPLC时程纯度图。
图2显示了在40℃孵育3个月的制剂的SEC-HPLC时程纯度图。
图3显示了在25℃孵育6个月的制剂的RP-HPLC肽降解物图。
图4显示了在40℃孵育3个月的制剂的RP-HPLC肽降解物图。
图5显示了含醋酸钠缓冲液的制剂与含磷酸钠缓冲液的制剂在25℃的SEC-HPLC纯度比较。
图6显示了含醋酸钠缓冲液的制剂与含磷酸钠缓冲液的制剂在25℃的RP-HPLC肽降解物比较。
图7显示了含醋酸钠缓冲液的制剂与含磷酸钠缓冲液的制剂在25℃孵育6个月后的SDS-PAGE比较。
图8显示了不同pH的制剂在25℃的SEC-HPLC纯度比较。
图9显示了不同pH的制剂在25℃的RP-HPLC肽降解物比较。
图10显示了含不同张力调节剂、pH 5.0的制剂在25℃的SEC-HPLC纯度比较。
图11显示了含不同张力调节剂、pH 5.0的制剂在25℃的RP-HPLC肽降解物比较。
图12显示了含不同稳定剂、pH 6.0的制剂在25℃的SEC-HPLC纯度比较。
图13显示了含不同稳定剂、pH 6.0的制剂在25℃的RP-HPLC肽降解物比较。
图14显示了含不同浓度艾塞那肽-4(1-39)-Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2白蛋白缀合物、pH 6的山梨糖醇制剂在25℃的SEC-HPLC纯度比较。
图15显示了含不同浓度艾塞那肽-4(1-39)-Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2白蛋白缀合物、pH 6的山梨糖醇制剂在25℃的RP-HPLC纯度比较。
图16显示了含10mg/ml艾塞那肽-4(1-39)-Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2白蛋白缀合物、pH 5.0醋酸钠缓冲液、150mM氯化钠和5mM辛酸钠的制剂的SEC-HPLC纯度图。
图17显示了含10mg/ml艾塞那肽-4(1-39)-Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2白蛋白缀合物、pH 5.0磷酸钠缓冲液、150mM氯化钠和5mM辛酸钠的制剂的SEC-HPLC纯度图。
图18显示了含10mg/ml艾塞那肽-4(1-39)-Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2白蛋白缀合物、pH 5.0醋酸钠缓冲液、150mM氯化钠和5mM辛酸钠的制剂的RP-HPLC肽降解物图。
图19显示了含10mg/ml艾塞那肽-4(1-39)-Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2白蛋白缀合物、pH 5.0磷酸钠缓冲液、150mM氯化钠和5mM辛酸钠的制剂的RP-HPLC肽降解物图。
5.优选实施方案的详细说明
5.1定义
如本文所用，除非另有说明，以下术语应具有如下含义：
如本文所用，除非另有说明，“约”是指该术语所修饰数值上下不超过10％的数值。例如，术语“约20mg/ml”表示18mg/ml至22mg/ml的范围。在“约”用于pH范围的情况下，例如“约pH 5.0，该pH值在该术语所修饰pH上下不超过0.5。因而，“约pH 5.0表示pH 4.5至5.5的范围。与之类似，“约pH7.0表示pH 6.5至pH 7.5的范围。
如本文所用，“个体”指动物，如哺乳动物，包括但不限于：灵长类动物(例如人)、牛、绵羊、山羊、马、狗、猫、兔、大鼠、小鼠等。在优选的实施方案中，所述个体是人。在某些实施方案中，所述个体是非人动物，例如非人动物如牛、绵羊、山羊或马。所述个体可为雄性或雌性。
如本文所用，“促胰岛素”表示具有促胰岛素活性，即刺激激素胰岛素合成或表达或引起该刺激的能力。促胰岛素肽包括但不限于：GLP-1、艾塞那肽-3、艾塞那肽-4，以及肽例如GLP-1、艾塞那肽-3和艾塞那肽-4等肽和其它促胰岛素活性肽的前体、衍生物或片段。
“胰高血糖素样肽-1(“GLP-1)和“GLP-1衍生物”为肠道激素，它们一般在高血糖症期间刺激胰岛素分泌、抑制胰高血糖素分泌、刺激(促)胰岛素生物合成、以及减慢胃排空和酸分泌速度。在一些实施方案中，胰高血糖素样肽是GLP-1(7-37)。在一些实施方案中，胰高血糖素样肽是GLP-1(7-36)。一些GLP和GLP衍生物，如本文SEQ ID NO：3-15所述的那些，促进细胞对葡萄糖的吸收但并不刺激胰岛素的表达，如美国专利号5,574,008中所公开的那样，其在此被全文通过参考引入本文。
“艾塞那肽-3是天然存在的GLP-1激动剂，分离自墨西哥毒蜥即珠毒蜥(Heloderma horridum)的唾液分泌物，并与哺乳动物GLP-1氨基酸序列有53％的重叠，如美国专利号5,424,286中所公开的那样，其在此被全文通过参考引入本文。艾塞那肽-3的氨基酸序列为HSDGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGG PSSGAPPPS(SEQ ID NO：16)。
“艾塞那肽-4是天然存在的GLP-1激动剂，分离自希拉毒蜥即钝尾毒蜥(Heloderma suspectum)的唾液腺毒液，并与哺乳动物GLP-1氨基酸序列享有53％的重叠，如美国专利号5,424,286中所公开的那样，其在此被全文通过参考引入本文。艾塞那肽-4的氨基酸序列为HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS(SEQ ID NO：17)。艾塞那肽-4以葡萄糖依赖性的方式降低胰高血糖素、增加胰岛素分泌，并模拟GLP-1的某些作用，包括结合并激活人GLP-1受体。艾塞那肽-4通过恢复第一阶段胰岛素反应、调控胰高血糖素分泌、延迟胃排空和降低食物摄入，来降低空腹和餐后的葡萄糖浓度，从而改善血糖控制。
“反应基团”是能够形成共价键的化学基团。此类反应剂能够与感兴趣的促胰岛素肽偶联或键合而形成经修饰的促胰岛素肽。反应基团一般是羧基、磷酰基或酰基，作为酯或混合酸酐，或亚胺基化合物，由此能够与白蛋白靶位点上的官能团例如氨基、羟基或巯基等形成共价键。一般来说，酯包括酚类化合物或者是硫酯、烷基酯、磷酸酯等。反应基团包括琥珀酰亚胺基和马来酰亚胺基。
“官能团”是白蛋白上能与修饰的促胰岛素肽的反应基团反应形成共价键的基团。官能团包括与酯反应体键合的羟基；与马来酰亚胺和马来酰亚胺基、亚胺基化合物及硫酯基团键合的巯基；以及与反应体的羧基、磷酰基或酰基键合的氨基。
“连接基团”是能够用来使反应基团与促胰岛素肽连接的化学部分。连接基团可包括一个或多个烷基如甲基、乙基、丙基、丁基等基团，烷氧基，烯基，炔基，或被烷基取代的氨基，环烷基，多环基团，芳基，聚芳基，取代的芳基，杂环基，以及取代的杂环基。连接基团还可以包括聚乙氧基氨基酸，例如AEA((2-氨基)乙氧基乙酸)或优选的连接基团AEEA([2-(2-氨基)乙氧基)]乙氧基乙酸)。
如本文所用，“白蛋白”是指血浆中最丰富的蛋白质，视来源物种而定，其单体形式的分子量约65-67千道尔顿。术语“白蛋白”与“血清白蛋白”可互换使用，但不意味着限制与本发明促胰岛素肽形成缀合物的白蛋白的来源。因而，如本文所用的术语“白蛋白”可以指从天然来源如血液或浆液中纯化的白蛋白，或者可以指化学合成的白蛋白，或通过重组技术生产的白蛋白。本文所述促胰岛素肽缀合物的示例形式的白蛋白在下文5.5.5.1节提供。
“促胰岛素肽缀合物”包含的促胰岛素肽已经借助促胰岛素肽和白蛋白官能团之间形成的共价键而与白蛋白缀合。在一些实施方案中，所述促胰岛素肽已经被修饰而含有与白蛋白共价键合的反应基团。在一些实施方案中，反应基团借助连接基团与促胰岛素肽偶联。
“稳定”制剂包括这样的制剂，其中的肽或肽缀合物经储存后基本上保留其物理稳定性和/或化学稳定性和/或生物活性。本领域有多种分析技术可以测量蛋白质的稳定性，并且例如在Lee，V.，1991，Peptide and Protein DrugDelivery，247-301(Marcel Dekker，Inc.，New York，N.Y.)和Jones，A.1993，Adv.Drug Deliery Rev.10：29-90中综述。可在选定的温度、选定的时段测量稳定性。优选制剂在室温(约25℃)或40℃保持稳定至少1、2、3、4、5或6个月，和/或在约2-8℃保持稳定至少1、2、3、4、5或6个月。此外，在某些实施方案中，所述制剂优选在冷冻后(例如，-70℃)稳定。在某些实施方案中，稳定性标准如下：(1)视觉分析制剂保持清亮；(2)制剂的浓度、pH和渗透压摩尔浓度不超过约±10％的变化；(3)通过SEC-HPLC测量，不超过约10％、更优选不超过约5％、或最优选不超过约1％的聚集形式；和(4)通过SDS-PAGE或RP-HPLC测量，不超过10％、更优选不超过约5％、或最优选不超过1％的肽或肽缀合物降解。
如本文所用，“稳定剂”是实现如本文所定义的“稳定”的制剂。
如果经色度和/或透明度视觉检查，或通过紫外光散射、或通过大小排阻层析测量，显示出基本上无聚集、沉淀和/或变性迹象，则肽或肽缀合物在药物制剂中“保留其物理稳定性”。例如，如果少于约10％、更优选少于约5％、或最优选少于约1％的肽或肽缀合物在制剂中作为聚集物存在，则所述肽或肽缀合物在药物制剂中保留其物理稳定性。
如果在给定时间的化学稳定性使得肽如下文所定义的那样被视为保留其生物活性，则所述肽或肽缀合物在药物制剂中“保留其化学稳定性”。化学稳定性可通过检测和定量化学改变形式的肽来进行评估。化学改变可以包括大小修饰(例如，裁剪)，这能够利用例如大小排阻层析、SDS-PAGE和/或基质辅助激光解吸电离/飞行时间质谱(MALDI/TOF MS)来评价。其它类型的化学改变包括电荷改变(例如，由于脱酰胺作用而发生)，这能够通过例如离子交换层析来评价。
如果药物制剂中的肽对于其目的用途而言有生物活性，则肽或肽缀合物在药物制剂中“保留其生物活性”。例如，如果药物制剂中肽的生物活性为药物制剂制备之时所呈现的生物活性的至少约70％、至少约80％、或更优选地至少约90％(在测定误差范围内)，则生物活性得以保留。具体肽的生物活性将是本领域技术人员公知的该肽的生物活性。例如，GLP-1的生物活性包括但不限于：在高血糖症期间刺激胰岛素分泌、抑制胰高血糖素分泌、刺激(促)胰岛素生物合成、减慢胃排空和酸分泌速度、以及减小血糖水平。
如本文所用，“缓冲液”是缓冲溶液，其对抗pH变化，并通过其酸碱共轭组分的作用而使溶液的pH值维持在可接受的范围。本发明的缓冲液pH范围为约4至约8；优选约5至约7；且最优选pH范围约5至约6。在一些实施方案中，缓冲液的pH为约3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9或8.0。控制pH在此范围的缓冲液的实例包括醋酸盐(例如醋酸钠)、磷酸盐(例如磷酸钠)、琥珀酸盐(例如琥珀酸钠)、葡萄糖酸盐、组氨酸盐、柠檬酸盐及其它有机酸缓冲液。
如本文所用，“张力调节剂”是指以合适的量使制剂等渗的化合物，包括：例如氯化钠、氯化钙、氯化镁、乳糖、山梨糖醇、蔗糖、甘露醇、海藻糖、棉子糖、聚乙二醇、羟乙基淀粉、甘氨酸等。“等渗”表示目的制剂与人体血液具有基本上相同的渗透压摩尔浓度。等渗制剂一般具有约250至350mOsm、优选约250至约330mOsm的渗透压摩尔浓度。渗透压摩尔浓度可以利用例如蒸汽压或冰点渗透压计来测量。
如本文所用，“表面活性剂”是指在溶液中溶解时减小液体和固体之间的界面张力的化合物，其可以添加到制剂中以减少重构蛋白质的聚集，和/或减少重构制剂中颗粒的形成。可用于本文所述制剂和方法的表面活性剂的实例包括聚山梨醇酯(例如聚山梨醇酯20或80)；泊洛沙姆(例如泊洛沙姆188(普朗尼克F68))；Triton；十二烷基硫酸钠(SDS)；月桂基硫酸钠；辛基糖酐钠；月桂基-、肉豆蔻基-、亚油基(linoleyl)-、或硬脂基-磺基甜菜碱；月桂基-、肉豆蔻基-、亚油基-、或硬脂基-肌氨酸；亚油基-、肉豆蔻基-、或鲸蜡基-甜菜碱；月桂酰胺丙基-、椰油酰胺丙基-、亚油酰胺丙基-、肉豆蔻酰胺丙基-、棕榈酰胺丙基(palmidopropyl)-、或异硬脂酰胺丙基-甜菜碱(例如月桂酰胺丙基)；肉豆蔻酰胺丙基-、棕榈酰胺丙基-、或异硬脂酰胺丙基-二甲基胺；甲基椰油酰基牛磺酸钠或甲基油酰基牛磺酸二钠；以及MONAQUATTM系列(MonaIndustries，Inc.，Paterson，N.J.)、聚乙二醇、聚丙烯醇、以及乙烯和丙二醇的共聚物等。
如本文所用，“防腐剂”是指能够添加到制剂中基本上减小其细菌活性的化合物，从而利于生产例如多次制剂。潜在防腐剂的实例包括间甲酚、苄醇、甲醇、乙醇、异丙醇、羟苯丁酯、羟苯乙酯、羟苯甲酯、苯酚、甘油、木糖醇、间苯二酚、邻苯二酚、2，6-二甲基环己醇、2-甲基-2，4-戊二醇、葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮、2-氯苯酚、苄索氯铵、硫柳汞(水杨乙汞)、苯甲酸(羟苯丙酯)MW 180.2、苯甲酸MW 122.12、苯扎氯铵、氯丁醇、苯甲酸钠、丙酸钠和西吡氯铵。
如本文所用，“膨松剂”是指能够大量添加到冻干混合物中并形成冻干饼物理结构的化合物(例如，利于生产基本上均一的、保持通孔结构的冻干饼)。示例性的膨松剂包括甘露醇、甘氨酸、聚乙二醇和山梨醇。除了提供药学上可接受的的饼，膨松剂一般还赋予冻干组合物有益的性质，例如调节塌陷温度、提供冻融保护、在长期储存过程中进一步增强蛋白质稳定性，等等。这些制剂还可作为张力调节剂。
如本文所用，“还原糖”含有半缩醛基，能够还原金属离子或与蛋白质中的赖氨酸或其它氨基基团共价反应，而“非还原糖”不具有还原糖的这些性质。还原糖的实例有果糖、甘露糖、麦芽糖、乳糖、阿拉伯糖、木糖、核糖、鼠李糖、半乳糖和葡萄糖。非还原糖包括蔗糖、海藻糖、山梨糖、松三糖和棉子糖。优选如本文所述的冻干药物制剂在没有还原糖的情况下、或仅在非还原糖的存在下冻干。
如本文所用，“药学上可接受的载体”是指药学上可接受的的材料、组合物或溶媒体，适合于对哺乳动物、优选人类施用。所述载体包括液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或封装材料，参与将目的制剂从一个器官或身体部位运载或输送至另一器官或身体部位。在与制剂中的其它成分相容和对个体不过度有害(例如，致命)的意义上，每种载体必须是“可接受的”。在优选的实施方案中，所述药学上可接受的的载体由政府管理机构例如美国食品药物管理局(FDA)或欧洲药品管理局(EMEA)批准对人施用。
“预防”任何疾病或紊乱是指减小染上该疾病或紊乱的风险(即，使有可能接触或易感疾病、但尚未经历或表现出该疾病症状的个体不呈现疾病的至少一种临床症状)。优选地，预防是指对尚未罹患疾病或紊乱、或者尚未呈现疾病或紊乱症状的个体应用所述化合物或组合物，例如尚无糖尿病或尚未呈现糖尿病症状的个体。
在一个实施方案中，“治疗”任何疾病或紊乱是指改善个体既有的疾病或紊乱(即，阻止或减轻疾病或至少一种其临床症状的发展)。在另一实施方案中，“治疗”是指改善至少一种物理参数，其可以是个体难以察觉的参数。而在另一实施方案中，“治疗”是指在物理上(例如，使可察觉的症状稳定)或在生理上(例如，使物理参数稳定)或两者兼而有之地调节疾病。
如本文所用，就治疗而言，“有效量”表示当对个体施用以治疗疾病时，足以治疗疾病的所述促胰岛素肽缀合物的量。其中，有效量可取决于所用的促胰岛素肽、疾病及其严重度、以及待治疗个体的年龄、体重等而变化不等。
5.2药物制剂
本发明提供了促胰岛素肽缀合物的药物制剂。所述制剂可适合于经胃肠外途径施用，例如皮下、静脉内、肌肉内、经皮、动脉内或腹膜内途径，或经其它途径施用，如口服、局部或吸入途径。
所述缀合物中的所述促胰岛素肽可以是本领域技术人员已知的任何促胰岛素肽。其可以是任何能够刺激激素胰岛素合成或表达或引起该刺激的肽。在一些实施方案中，所述促胰岛素肽选自：胰高血糖素样肽1、艾塞那肽-3和艾塞那肽-4、以及它们的前体、衍生物或片段。在某些实施方案中，所述促胰岛素肽是艾塞那肽-4或衍生物。下文详细描述了示例性的衍生物。
在一些实施方案中，所述促胰岛素肽与白蛋白缀合。在一些实施方案中，所述促胰岛素肽与血清白蛋白缀合。在一些实施方案中，所述促胰岛素肽与人血清白蛋白缀合。在一些实施方案中，所述促胰岛素肽与重组人血清白蛋白缀合。所述促胰岛素肽和促胰岛素肽缀合物在下文5.5节详细描述。
预期游离白蛋白可以存在于制剂中，浓度为约80、70、60、50、40、30、25、20、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1、0.5、0.1、0.05或0.01mg/ml。在某些实施方案中，存在的游离白蛋白少于约80、70、60、50、40、30、20、25、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1、0.5、0.1、0.05或0.01mg/ml。优选地，存在的游离白蛋白少于或等于约15mg/ml，更优选存在的游离白蛋白少于或等于10mg/ml，最优选少于5mg/ml。在一些实施方案中，本文所述制剂中存在的游离白蛋白少于或等于10mg/ml。在一些实施方案中，本文所述制剂中存在的游离白蛋白少于或等于1mg/ml。在一些实施方案中，本文所述制剂中存在的游离白蛋白少于或等于0.5mg/ml。在一些实施方案中，本文所述制剂中存在的游离白蛋白少于或等于0.1mg/ml。在一些实施方案中，本文所述制剂中存在的游离白蛋白少于或等于0.05mg/ml。
本发明制剂中促胰岛素肽缀合物的实际剂量水平可以变化，以获得活性成分对特定个体、组合物和施用方式有效而实现所期望的治疗反应，且对个体无毒的量。所选的剂量水平将取决于多种药代动力学因素，包括所采用的本发明特定组合物的活性，施用途径，施用时间，所采用特定化合物的排泄率，治疗持续时间，与所采用的特定组合物组合使用的其它药物、化合物和/或材料，所治疗个体的年龄、性别、体重、病症、综合健康和过去病史，以及医学领域公知的类似因素。
在某些实施方案中，根据本发明的制剂适合于对需要的个体皮下施用促胰岛素肽缀合物。在一些实施方案中，对个体施用约1000μg至3000μg量的促胰岛素肽缀合物剂量(例如，1025μg、1050μg、1075μg、1100μg、1125μg、1150μg、1175μg、1200μg、1225μg、1250μg、1275μg、1300μg、1325μg、1350μg、1375μg、1400μg、1425μg、1450μg、1475μg、1500μg、1525μg、1550μg、1575μg、1600μg、1625μg、1650μg、1675μg、1700μg、1725μg、1750μg、1775μg、1800μg、1825μg、1850μg、1875μg、1900μg、1925μg、1950μg、1975μg、2000μg、2025μg、2050μg、2075μg、2100μg、2125μg、2150μg、2175μg、2200μg、2225μg、2250μg、2275μg、2300μg、2325μg、2350μg、2375μg、2400μg、2425μg、2450μg、2475μg、2500μg、2525μg、2550μg、2575μg、2600μg、2625μg、2650μg、2675μg、2700μg、2725μg、2750μg、2775μg、2800μg、2825μg、2850μg、2875μg、2900μg、2925μg、2950μg或2975μg)，优选约1000μg至2750μg(例如，1025μg、1050μg、1075μg、1100μg、1125μg、1150μg、1175μg、1200μg、1225μg、1250μg、1275μg、1300μg、1325μg、1350μg、1375μg、1400μg、1425μg、1450μg、1475μg、1500μg、1525μg、1550μg、1575μg、1600μg、1625μg、1650μg、1675μg、1700μg、1725μg、1750μg、1775μg、1800μg、1825μg、1850μg、1875μg、1900μg、1925μg、1950μg、1975μg、2000μg、2025μg、2050μg、2075μg、2100μg、2125μg、2150μg、2175μg、2200μg、2225μg、2250μg、2275μg、2300μg、2325μg、2350μg、2375μg、2400μg、2425μg、2450μg、2475μg、2500μg、2525μg、2550μg、2575μg、2600μg、2625μg、2650μg、2675μg、2700μg或2725μg)，更优选约1000-2500μg(例如，1025μg、1050μg、1075μg、1100μg、1125μg、1150μg、1175μg、1200μg、1225μg、1250μg、1275μg、1300μg、1325μg、1350μg、1375μg、1400μg、1425μg、1450μg、1475μg、1500μg、1525μg、1550μg、1575μg、1600μg、1625μg、1650μg、1675μg、1700μg、1725μg、1750μg、1775μg、1800μg、1825μg、1850μg、1875μg、1900μg、1925μg、1950μg、1975μg、2000μg、2025μg、2050μg、2075μg、2100μg、2125μg、2150μg、2175μg、2200μg、2225μg、2250μg、2275μg、2300μg、2325μg、2350μg、2375μg、2400μg、2425μg、2450μg或2475μg)，最优选约1000μg至2000μg(例如，1025μg、1050μg、1075μg、1100μg、1125μg、1150μg、1175μg、1200μg、1225μg、1250μg、1275μg、1300μg、1325μg、1350μg、1375μg、1400μg、1425μg、1450μg、1475μg、1500μg、1525μg、1550μg、1575μg、1600μg、1625μg、1650μg、1675μg、1700μg、1725μg、1750μg、1775μg、1800μg、1825μg、1850μg、1875μg、1900μg、1925μg、1950μg或1975μg)促胰岛素肽缀合物。
在一些实施方案中，可以有效治疗本文所述特定个体的疾病或病症的促胰岛素肽缀合物例如促胰岛素肽缀合物制剂的剂量按照每周施用方案对个体施用。从而，在某些实施方案中，个体可以施用周总剂量的促胰岛素肽缀合物，为期数周，以实现期望的治疗反应。在某些实施方案中，周总剂量在周内以单次施用的形式施用，即每周一次，且周总剂量包括1000μg或1500μg量的促胰岛素肽缀合物。在某些实施方案中，周总剂量每周一次施用，且剂量包括2000μg量的促胰岛素肽缀合物。
在某些实施方案中，周总剂量在周内分两次施用，即一周两次，且每次施用包括1000μg量的促胰岛素肽缀合物，总计周总剂量2000μg。在某些实施方案中，周总剂量每周两次施用，且每次施用包括1500μg量的促胰岛素肽缀合物，总计周总剂量3000μg。在某些实施方案中，周总剂量每周两次施用，且每次施用包括1600μg量的促胰岛素肽缀合物，总计周总剂量3200μg。在某些实施方案中，周总剂量每周两次施用，且每次施用包括1700μg量的促胰岛素肽缀合物，总计周总剂量3400μg。在某些实施方案中，周总剂量每周两次施用，且第一次施用包括1500μg量的促胰岛素肽缀合物，而第二次施用包括2000μg量的促胰岛素肽，总计周总剂量3500μg。在某些实施方案中，周总剂量每周两次施用，且每次施用包括1750μg量的促胰岛素肽缀合物，总计周总剂量3500μg。在某些实施方案中，周总剂量每周两次施用，且每次施用包括1800μg量的促胰岛素肽缀合物，总计周总剂量3600μg。在某些实施方案中，周总剂量每周两次施用，且每次施用包括1900μg量的促胰岛素肽缀合物，总计周总剂量3800μg。在某些实施方案中，周总剂量每周两次施用，且每次施用包括2000μg量的促胰岛素肽缀合物，总计周总剂量4000μg。
在其它实施方案中，所述促胰岛素肽缀合物，例如促胰岛素肽缀合物制剂，可以每8、9、10、11、12或13天施用一次。在其它实施方案中，所述促胰岛素肽缀合物，例如促胰岛素肽缀合物制剂，可以每3、4、5、6、7或8天周期施用两次。在其它实施方案中，所述促胰岛素肽缀合物，例如促胰岛素肽缀合物制剂，可以每9、10、11、12、13或14天周期施用两次。
在一些实施方案中，所述制剂中促胰岛素肽缀合物(无游离白蛋白)的浓度为约0.1mg/ml至约100mg/ml、约0.1mg/ml至约75mg/ml、约0.1mg/ml至约50mg/ml、约0.1mg/ml至约40mg/ml、约0.1mg/ml至约30mg/ml、约1mg/ml至约l00mg/ml、约5mg/ml至约50mg/ml、或约10mg/ml to 20mg/ml。在一些实施方案中，所述制剂中促胰岛素肽缀合物的浓度高于约10mg/ml、约20mg/ml、约50mg/ml、约100mg/ml、约200mg/ml、或约500mg/ml。在一些实施方案中，所述制剂中促胰岛素肽缀合物的浓度低于约100mg/ml、约50mg/ml、约40mg/ml、约30mg/ml、约20mg/ml、约10mg/ml、约5mg/ml、约1mg/ml、或约0.1mg/ml。在优选实施方案中，所述制剂中促胰岛素肽缀合物的浓度为约1mg/ml至约50mg/ml、约1mg/ml至约40mg/ml、约1mg/ml至约20mg/ml、或约1至约15mg/ml。在特别优选的实施方案中，所述制剂中促胰岛素肽缀合物的浓度为约1mg/ml。在其它特别优选的实施方案中，所述制剂中促胰岛素肽缀合物的浓度为约2.5mg/ml。在其它特别优选的实施方案中，所述制剂中促胰岛素肽缀合物的浓度为约5mg/ml。在其它特别优选的实施方案中，所述制剂中促胰岛素肽缀合物的浓度为约10mg/ml。
在某些实施方案中，本文的制剂可作为单药治疗施用。换言之，可提供本文的制剂作为活性剂的单独施用，来治疗本发明提供的一种或多种病症。
本文的制剂还可以组合或包含一种或多种可用于所治疗的具体适应症的第二治疗剂而施用，优选具有补充活性、不会不利地影响制剂中促胰岛素肽缀合物的那些第二治疗剂。在某些实施方案中，此类第二治疗剂可以以目的用途有效的量与促胰岛素肽缀合物一起存在。在具体实施方案中，所述第二治疗剂是抗糖尿病药，例如口服抗糖尿病药，例如，双胍，如二甲双胍。
所述药物制剂可以包含维持生理适宜pH的缓冲液。另外，缓冲液可以增强所述制剂的等渗和化学稳定性。在一些实施方案中，所述制剂的pH为约3.0至8.0。在一些实施方案中，所述制剂的pH为约4.0至8.0。在一些实施方案中，所述制剂的pH为约4.0至6.0。在一些实施方案中，所述制剂的pH为约6.0至8.0。在一些实施方案中，所述制剂的pH为约6.0至9.0。在一些实施方案中，所述制剂的pH为约5.0至7.0。在一些实施方案中，所述制剂的pH为约4.5至6.0。在一些实施方案中，所述制剂的pH为约5.0至6.0。在一些实施方案中，所述制剂的pH为约5.1至6.0、约5.2至6.0、约5.3至6.0、约5.4至6.0、约5.5至6.0、约5.6至6.0、约5.7至6.0、或约5.8至6.0。在一些实施方案中，所述制剂的pH为约3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9或9.0。在具体实施方案中，所述制剂的pH为约5.0。在另一具体实施方案中，所述制剂的pH为约7.0。pH可根据需要通过本领域已知的技术来调节。例如，可根据需要添加盐酸或氢氧化钠以调节pH至期望的水平。
本发明制剂中的有用的缓冲液包括但不限于：醋酸盐、磷酸盐、琥珀酸盐、组氨酸盐、三(三(羟甲基)氨基甲烷)、二乙醇胺、柠檬酸盐、其它有机酸及其混合物。所述制剂可进一步包含任何认为适宜的反离子，例如钠或钙离子。在优选的实施方案中，缓冲液是醋酸盐缓冲液(例如醋酸钠缓冲液)。在另一优选的实施方案中，缓冲液是磷酸盐缓冲液(例如磷酸钠缓冲液)。
缓冲液以足以维持适宜pH的量存在。在一些实施方案中，所述制剂中存在的缓冲液约0.1mM至约100mM、约0.1mM至约50mM、约0.1mM至约30mM、约0.1mM至约25mM、约0.1mM至约20mM、或约5mM至约15mM。在某些实施方案中，缓冲液为约5mM、6mM、7mM、8mM、9mM、10mM、11mM、12mM、13mM、14mM、或15mM。在一些实施方案中，所述缓冲液是约10mM的醋酸钠缓冲液或磷酸钠缓冲液。
所述制剂可包含张力调节剂，其帮助维持制剂的等渗性。在一些实施方案中，所述制剂是等渗的，即该制剂具有与血浆相同或大致相同的渗透压。等渗制剂一般渗透压为约250至350mOsm，优选约250至约330mOsm。在一些实施方案中，所述制剂是高渗的。在一些实施方案中，所述制剂是低渗的。
所述张力调节剂可以是对技术人员显而易见的任何张力调节剂，例如盐、糖、糖醇、多元醇或氨基酸。示例性的张力调节剂包括但不限于：盐，例如氯化钠、氯化钙或氯化镁；糖或多元醇，例如乳糖、山梨糖醇、蔗糖、甘露醇、海藻糖、棉子糖、聚乙二醇、羟乙基淀粉、甘氨酸及其混合物。在一些优选的实施方案中，所述张力调节剂是氯化钠。在其它优选的实施方案中，所述张力调节剂是山梨糖醇。在某些实施方案中，混合的张力调节剂产生如上所述等渗的总渗透压。
当制剂为冻干制剂时，优选盐或非还原糖作为张力调节剂。“非还原糖”不含能够还原金属离子或与蛋白质中的赖氨酸及其它氨基基团共价反应的半缩醛基。非还原糖包括蔗糖、海藻糖、山梨糖、松三糖和棉子糖。非还原糖能够防止或降低蛋白质在冻干和随后储存时的化学和/或物理不稳定性。
所述张力调节剂在所述制剂中以维持该制剂所期望的等渗性的量存在。在一些实施方案中，张力调节剂以约0.1％至约50％(w/v)、约0.5％至约20％(w/v)、约1％至约10％(w/v)、或约4％至约6％(w/v)存在。在一些实施方案中，张力调节剂以约5％(w/v)存在。在一些实施方案中，张力调节剂以至少1mM的浓度存在。在一些实施方案中，张力调节剂以约1mM至约200mM、约10mM至约150mM、或约50mM至约100mM存在。在一些优选的实施方案中，所述制剂包含约135mM氯化钠。在其它优选的实施方案中，所述制剂包含约150mM氯化钠。在其它优选的实施方案中，所述制剂包含约5％山梨糖醇(w/v)。
所述制剂还可包含稳定剂，以便在储存温度波动期间稳定所述缀合物，并使产物的降解、肽降解物和聚集最小化。本发明制剂中有用的稳定剂包括但不限于：辛酸钠、Na-N-乙酰色氨酸、H-谷氨酸、精氨酸、氮及其混合物。在优选实施方案中，稳定剂是辛酸钠。
在某些实施方案中，在所述制剂中存在的稳定剂为约0.1mM至30mM、约0.5mM至20mM、约1mM至约15mM、或约5mM至约10mM。在某些实施方案中，在所述制剂中存在的稳定剂为约1mM、2mM、3mM、4mM、5mM、6mM、7mM、8mM、9mM、10mM、11mM、12mM、13mM、14mM、15mM、16mM、17mM、18mM、19mM或20mM。在优选实施方案中，所述稳定剂是约5mM的辛酸钠。
所述制剂还可包含表面活性剂。表面活性剂是在溶液中溶解时减小液体和固体之间界面张力的化合物，并可以添加到制剂中以减小重构蛋白质的聚集，和/或减小重构制剂中颗粒的形成。示例性的表面活性剂包括聚山梨醇酯(例如聚山梨醇酯20或80)；泊洛沙姆(例如泊洛沙姆188(普朗尼克F68))；Triton；十二烷基硫酸钠(SDS)；月桂基硫酸钠；辛基糖酐钠；月桂基-、肉豆蔻基-、亚油基-、或硬脂基-磺基甜菜碱；月桂基-、肉豆蔻基-、亚油基-、或硬脂基-肌氨酸；亚油基-、肉豆蔻基-、或鲸蜡基-甜菜碱；月桂酰胺丙基-、椰油酰胺丙基-、亚油酰胺丙基-、肉豆蔻酰胺丙基-、棕榈酰胺丙基-、或异硬脂酰胺丙基-甜菜碱(例如月桂酰胺丙基)；肉豆蔻酰胺丙基-、棕榈酰胺丙基-、或异硬脂酰胺丙基-二甲基胺；甲基椰油酰基牛磺酸钠或甲基油酰基牛磺酸二钠；以及MONAQUATTM系列(Mona Industries，Inc.，Paterson，N.J.)、聚乙二醇、聚丙烯醇、以及乙烯和丙二醇的共聚物等。
表面活性剂是这样的量，其减小所配制肽或肽缀合物的聚集，和/或最小化制剂中颗粒的形成，和/或减小吸附作用。例如，制剂中存在的表面活性剂的量可以为约0.001-1％(w/v)，优选约0.01-0.5％(w/v)。在一些实施方案中，所述制剂包含的表面活性剂为泊洛沙姆。在一些实施方案中，所述制剂包含普朗尼克F68。在具体实施方案中，所述制剂包含约0.01％(w/v)至约1％(w/v)普朗尼克F68，更优选约0.1％(w/v)普朗尼克F68。
在某些实施方案中，所述制剂包含上述试剂(即促胰岛素肽缀合物、缓冲液、张力调节剂和表面活性剂)，而不含一种或多种防腐剂，例如苄醇、苯酚、间甲酚、氯丁醇和苄索氯铵。在其它实施方案中，制剂之中可包括防腐剂，尤其是制剂为多次制剂的情况下。示例性的防腐剂包括但不限于：间甲酚、苄醇、甲醇、乙醇、异丙醇、羟苯丁酯、羟苯乙酯、羟苯甲酯、苯酚、甘油、木糖醇、间苯二酚、邻苯二酚、2，6-二甲基环己醇、2-甲基-2，4-戊二醇、葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮、2-氯苯酚、苄索氯铵、硫柳汞(水杨乙汞)、苯甲酸(羟苯丙酯)MW 180.2、苯甲酸MW 122.12、苯扎氯铵、氯丁醇、苯甲酸钠、丙酸钠和西吡氯铵。任何这些防腐剂可作为单独的防腐剂或彼此组合而用在本文公开的制剂之中。
在优选实施方案中，使用与所述制剂的缓冲液或其它组分相容(即溶液清亮)的防腐剂。当缓冲液是醋酸钠或磷酸钠时，相容的防腐剂包括甲醇、乙醇、异丙醇、甘油、间苯二酚、2-甲基-2，4-戊二醇、硫柳汞(水杨乙汞)、苯扎氯铵、苯甲酸钠、西吡氯铵。
所述制剂中使用的防腐剂的浓度可根据本领域技术人员的判断来确定。在一些实施方案中，制剂之中存在约0.005-10％(w/v)、约0.1-1.0％(w/v)、或约0.3-0.7％(w/v)的防腐剂。在一些实施方案中，制剂之中存在约0.005、0.1、0.3、0.5、0.7、或1.0％(w/v)的防腐剂。
膨松剂可包含在冻干制剂之中，以利于生产基本上均一的、保持通孔结构的冻干饼。示例性的膨松剂包括甘露醇、甘氨酸、聚乙二醇和山梨醇。膨松剂还可作为张力调节剂。
一种或多种其它药学上可接受的的载体、赋形剂或稳定剂，例如Remington′s Pharmaceutical Sciences第19版Genarro，A.编辑(1995)中所述的那些，可以包含在制剂之中，只要它们不会显著不利地影响该制剂所期望的特性。本发明制剂的其它构成要素可包括水，例如注射用水、植物油、增稠剂例如甲基纤维素抗吸附剂、润湿剂、抗氧化剂包括抗坏血酸和甲硫氨酸、螯合剂如EDTA、金属配合物(例如Zn-蛋白质配合物)、生物可降解聚合物例如聚酯、和/或成盐反粒子例如钠离子等。可接受的载体、赋形剂或稳定剂存在的量是其在所采用的剂量和浓度下对个体无毒的量。
根据本发明的最佳制剂可根据诸如制剂储存的时间长短、制剂储存和使用的条件、施用制剂的具体个体群等因素而不同。
在某些实施方案中，本文所述的制剂可包含在小瓶、瓶、管、注射器或其它容器中用于单次或多次施用。此类容器可例如由玻璃或聚合材料如聚丙烯、聚乙烯、聚氯乙烯或聚烯烃制成。在一些实施方案中，所述容器可包括封盖或其它封闭系统，例如橡胶塞，其可被针头穿透以抽取单次剂量，而随针头取出后重新密封。所有此类本领域已知的用于注射可注射液体、冻干制剂、重构的冻干制剂或重构的粉剂的容器均可被用于本文公开的制剂和方法。在具体实施方案中，所述容器是笔式递药器械，包括单次剂量或多次剂量。这样的笔式递药器械可以是永久性的，例如装有含单次剂量或多次剂量的一次性内管的永久性笔，或者整个器械可以是一次性的，例如含有单次剂量或多次剂量的一次性笔。在某些实施方案中，在笔式递药器械包含多次剂量的情况下，剂量可以是预设的，即固定的。在其它实施方案中，剂量可以是可变剂量，即由使用者拨入。在一些实施方案中，笔式递药器械包括锁紧套口、锁紧锥口或其它针头连接接头，以帮助连接一次性针头。在其它实施方案中，笔式递药器械包括永久的，即永久性针头。在另一具体实施方案中，所述容器是注射器。在一些实施方案中，所述注射器包括锁紧套口、锁紧锥口或其它针头连接接头，以帮助连接一次性针头。在其它实施方案中，所述注射器包括永久的，即永久性针头。在一些实施方案中，所述注射器预装填有单次剂量或多次剂量。
本发明提供的制剂可以配制为多种浓度、不同药瓶大小而用于多种施用剂量。例如，剂量可配制在0.25、0.5、1或2ml药瓶中、或任何其它大小的药瓶中、或本领域技术人员已知的其它容器中。
用于体内施用的制剂必需消毒。这可在制备制剂之前或之后通过无菌过滤膜过滤而容易地实现。可选地，整个制剂的消毒可通过对除蛋白质之外的成分高压灭菌而实现，例如约120℃高压灭菌约30分钟。
在某些实施方案中，本发明提供了药物制剂，其包含浓度约1mg/ml至约100mg/ml的白蛋白与艾塞那肽-4或其衍生物的缀合物；缓冲液；张力调节剂；稳定剂；表面活性剂和任选的防腐剂，其中所述制剂的pH为约4至约8。
在某些实施方案中，药物制剂包含或可选地由以下成分组成：白蛋白和促胰岛素肽的缀合物，所述促胰岛素肽含有的序列相对于天然艾塞那肽-4序列具有不超过3个氨基酸的取代、缺失或插入，所述缀合物的浓度为约1mg/ml至约100mg/ml；缓冲液；张力调节剂，其中张力调节剂的浓度为至少1mM；稳定剂；和表面活性剂，其中所述制剂的pH为约4.0至约8.0。
在某些实施方案中，艾塞那肽-4白蛋白缀合物含有与艾塞那肽-4(1-39)Lys40-NH2羧基末端赖氨酸ε氨基上的[2-[2-[2-马来酰亚胺基丙酰胺基(乙氧基)乙氧基]乙酸接头共价连接的重组人血清白蛋白半胱氨酸34巯基。这样的缀合物可通过使所述接头与白蛋白的半胱氨酸34巯基共价键合而形成。在一些实施方案中，艾塞那肽-4白蛋白缀合物浓度为约10mg/ml至20mg/ml。在一些实施方案中，缓冲液是醋酸钠或磷酸钠缓冲液或其混合物，pH约5.0至6.0。在一些实施方案中，张力调节剂是氯化钠或山梨糖醇。在一些实施方案中，稳定剂是辛酸钠。在一些实施方案中，表面活性剂是普朗尼克F68。
在某些实施方案中，所述药物制剂包含或可选地由以下组成：5-30mM磷酸钠缓冲液中的约1mg/ml至约15mg/ml促胰岛素肽缀合物，pH 6.5-7.5，所述缓冲液含100-200mM氯化钠、1-10mM辛酸钠和1-30mg/L聚山梨醇酯80。在具体实施方案中，所述制剂包含或可选地由以下组成：5-30mM磷酸钠缓冲液中的10mg/ml促胰岛素肽缀合物，pH 6.5-7.5，所述缓冲液含100-200mM氯化钠、1-10mM辛酸钠和1-30mg/L聚山梨醇酯80。在具体实施方案中，所述制剂包含或可选地由以下组成：10mM磷酸钠缓冲液中的10mg/ml促胰岛素肽缀合物，所述缓冲液含100-200mM氯化钠、1-10mM辛酸钠和1-30mg/L聚山梨醇酯80，其中所述制剂的pH为约5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9或8.0。在具体实施方案中，所述制剂包含或可选地由以下组成：10mM磷酸钠缓冲液中的10mg/ml促胰岛素肽缀合物，pH 7.0，所述缓冲液含100-200mM氯化钠、1-10mM辛酸钠和1-30mg/L聚山梨醇酯80。在具体实施方案中，所述制剂包含或可选地由以下组成：10mM磷酸钠缓冲液中的10mg/ml促胰岛素肽缀合物，pH 7.0，所述缓冲液含135mM氯化钠、1.6mM辛酸钠和15mg/L聚山梨醇酯80。
在优选的实施方案中，所述药物制剂包含或可选地由以下组成：5-30mM磷酸钠缓冲液中的约1mg/ml至约15mg/ml艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2白蛋白缀合物，pH 6.5-7.5，所述缓冲液含100-200mM氯化钠、1-10mM辛酸钠和1-30mg/L聚山梨醇酯80。在具体实施方案中，所述制剂包含或可选地由以下组成：5-30mM磷酸钠缓冲液中的10mg/ml艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2白蛋白缀合物，pH6.5-7.5，所述缓冲液含100-200mM氯化钠、1-10mM辛酸钠和1-30mg/L聚山梨醇酯80。在具体实施方案中，所述制剂包含或可选地由以下组成：10mM磷酸钠缓冲液中的10mg/ml艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2白蛋白缀合物，所述缓冲液含100-200mM氯化钠、1-10mM辛酸钠和1-30mg/L聚山梨醇酯80，其中所述制剂的pH为约5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9或8.0。在具体实施方案中，所述制剂包含或可选地由以下组成：10mM磷酸钠缓冲液中的10mg/ml艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2白蛋白缀合物，pH 7.0，所述缓冲液含100-200mM氯化钠、1-10mM辛酸钠和1-30mg/L聚山梨醇酯80。在具体实施方案中，所述制剂包含或可选地由以下组成：10mM磷酸钠缓冲液中的10mg/ml艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2白蛋白缀合物，pH 7.0，所述缓冲液含135mM氯化钠、1.6mM辛酸钠和15mg/L聚山梨醇酯80。
在具体实施方案中，所述制剂由以下组成：10mM磷酸钠缓冲液中的约1mg/ml至约15mg/ml促胰岛素肽缀合物，pH 7.0，所述缓冲液含135mM氯化钠、1.6mM辛酸钠和15mg/L聚山梨醇酯80。在具体实施方案中，所述制剂由以下组成：10mM磷酸钠缓冲液中的约1mg/ml至约15mg/ml白蛋白与艾塞那肽-4或其衍生物的缀合物，pH 7.0，所述缓冲液含135mM氯化钠、1.6mM辛酸钠和15mg/L聚山梨醇酯80。在具体实施方案中，所述制剂由以下组成：10mM磷酸钠缓冲液中的约1mg/ml至约15mg/ml艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2白蛋白缀合物，pH 7.0，所述缓冲液含135mM氯化钠、1.6mM辛酸钠和15mg/L聚山梨醇酯80。在具体实施方案中，所述制剂由以下组成：10mM磷酸钠缓冲液中的10mg/ml艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2白蛋白缀合物，pH 7.0，所述缓冲液含135mM氯化钠、1.6mM辛酸钠和15mg/L聚山梨醇酯80。
在某些实施方案中，所述药物制剂包含或可选地由以下组成：5-30mM醋酸钠缓冲液中的约1mg/ml至约15mg/ml促胰岛素肽缀合物，pH 4.5-5.5，所述缓冲液含1-15mM辛酸钠、0.05至0.2％(w/v)普朗尼克F68、以及100-200mM氯化钠或2-8％(w/v)山梨糖醇。在具体实施方案中，所述制剂包含或可选地由以下组成：5-30mM醋酸钠缓冲液中的10mg/ml促胰岛素肽缀合物，pH 4.5-5.5，所述缓冲液含1-15mM辛酸钠、0.05至0.2％(w/v)普朗尼克F68、以及100-200mM氯化钠或2-8％(w/v)山梨糖醇。在具体实施方案中，所述制剂包含或可选地由以下组成：10mM醋酸钠缓冲液中的10mg/ml促胰岛素肽缀合物，所述缓冲液含1-15mM辛酸钠、0.05至0.2％(w/v)普朗尼克F68、以及100-200mM氯化钠或2-8％(w/v)山梨糖醇，其中所述制剂的pH为约4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4或5.5。在具体实施方案中，所述制剂包含或可选地由以下组成：10mM醋酸钠缓冲液中的10mg/ml促胰岛素肽缀合物，pH 5.0，所述缓冲液含1-15mM辛酸钠、0.05至0.2％(w/v)普朗尼克F68、以及100-200mM氯化钠或2-8％(w/v)山梨糖醇。在具体实施方案中，所述制剂包含或可选地由以下组成：10mM醋酸钠缓冲液中的10mg/ml促胰岛素肽缀合物，pH 5.0，所述缓冲液含150mM氯化钠、5mM辛酸钠和0.1％(w/v)普朗尼克F68(即，泊洛沙姆188)。
在优选的实施方案中，所述药物制剂包含或可选地由以下组成：5-30mM醋酸钠缓冲液中的约1mg/ml至约15mg/ml艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2白蛋白缀合物，pH 4.5-5.5，所述缓冲液含1-15mM辛酸钠、0.05至0.2％(w/v)普朗尼克F68、以及100-200mM氯化钠或2-8％(w/v)山梨糖醇。在具体实施方案中，所述制剂包含或可选地由以下组成：5-30mM醋酸钠缓冲液中的10mg/ml艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2白蛋白缀合物，pH 4.5-5.5，所述缓冲液含1-15mM辛酸钠、0.05至0.2％(w/v)普朗尼克F68、以及100-200mM氯化钠或2-8％(w/v)山梨糖醇。在具体实施方案中，所述制剂包含或可选地由以下组成：10mM醋酸钠缓冲液中的10mg/ml艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2白蛋白缀合物，所述缓冲液含1-15mM辛酸钠、0.05至0.2％(w/v)普朗尼克F68、以及100-200mM氯化钠或2-8％(w/v)山梨糖醇，其中所述制剂的pH为约4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4或5.5。在具体实施方案中，所述制剂包含或可选地由以下组成：10mM醋酸钠缓冲液中的10mg/ml艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2白蛋白缀合物，pH 5.0，所述缓冲液含1-15mM辛酸钠、0.05至0.2％(w/v)普朗尼克F68、以及100-200mM氯化钠或2-8％(w/v)山梨糖醇。在具体实施方案中，所述制剂包含或可选地由以下组成：10mM醋酸钠缓冲液中的10mg/ml艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2白蛋白缀合物，pH 5.0，所述缓冲液含150mM氯化钠、5mM辛酸钠和0.1％(w/v)普朗尼克F68(即，泊洛沙姆188)。
在具体实施方案中，所述制剂由以下组成：10mM醋酸钠缓冲液中的约1mg/ml至约15mg/ml促胰岛素肽缀合物，pH 5.0，所述缓冲液含150mM氯化钠、5mM辛酸钠和0.1％(w/v)普朗尼克F68(即，泊洛沙姆188)。在具体实施方案中，所述制剂由以下组成：10mM醋酸钠缓冲液中的约1mg/ml至约15mg/ml白蛋白与艾塞那肽-4或其衍生物的缀合物，pH 5.0，所述缓冲液含150mM氯化钠、5mM辛酸钠和0.1％(w/v)普朗尼克F68(即，泊洛沙姆188)。在具体实施方案中，所述制剂由以下组成：10mM醋酸钠缓冲液中的约1mg/ml至约15mg/ml艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2白蛋白缀合物，pH 5.0，所述缓冲液含150mM氯化钠、5mM辛酸钠和0.1％(w/v)普朗尼克F68(即，泊洛沙姆188)。在具体实施方案中，所述制剂由以下组成：10mM醋酸钠缓冲液中的10mg/ml艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2白蛋白缀合物，pH 5.0，所述缓冲液含150mM氯化钠、5mM辛酸钠和0.1％(w/v)普朗尼克F68(即，泊洛沙姆188)。
本发明提供的药物制剂可以是本领域技术人员认为有用的任何形式。例如，其可以为液体或冻干制剂的形式、单位剂型或多次剂型或其组合。因而，所述制剂包括液体单位剂型、液体多次剂型、冻干单位剂型以及冻干多次剂型。
在一些实施方案中，所述制剂是液体制剂。在其它实施方案中，所述制剂是冻干制剂。冻干是为保存蛋白质而通常采用的技术，作用是从目的肽制品中除去水分。赋形剂可以包含在冻干前的制剂中，以增强冷冻干燥过程期间的稳定性，和/或提高冻干产品储存时的稳定性。参见Pikal，M.1990，Biopharm.3(9)：26-30和Arakawa等1991，Pharm.Res.8(3)：285-291。
冻干制剂可按照本领域技术人员的判断进行重构。在优选实施方案中，提供了冻干制剂，当对之用例如注射用水重构时，得到本发明所述的液体制剂之一。本发明还提供了重构促胰岛素肽缀合物冻干制剂的方法，包括提供冻干制剂，并重构冻干制剂以形成本发明所述的促胰岛素肽缀合物制剂。
在期望的阶段，一般是向个体施用肽时，可以用稀释剂重构冻干制剂，从而使重构的制剂中的蛋白质浓度至少为1、2、3、4、5、10、20、30、40、50mg/ml。在一些实施方案中，重构的制剂中的蛋白质浓度为约1mg/ml至约100mg/ml、约1mg/ml至约50mg/ml、或约1mg/ml至约15mg/ml。在具体实施方案中，可以用稀释剂重构冻干制剂，从而使重构的制剂中的蛋白质浓度为约45-55mg/ml。在优选实施方案中，可以用稀释剂重构冻干制剂，从而使重构的制剂中的蛋白质浓度为约50mg/ml。稀释剂可以是技术人员认为适宜的任何稀释剂，例如注射用水等等。
本发明提供的药物制剂既包括单位剂型，又包括多次剂型。在一些实施方案中，所述制剂是单位剂型。“单位剂型”是指个体单次施用量的药物制剂的包装形式。在一些实施方案中，所述制剂是单位剂型。在某些实施方案中，单位剂型含有约0.01-100mg、0.1-50mg、1-10mg、或1-5mg促胰岛素肽缀合物。在具体实施方案中，单位剂型含有约1、2、3、4、5、7.5、10、20、30、40、50、75、100mg促胰岛素肽缀合。这样的单位剂型可按照本领域技术人员已知的技术制备。
在一些实施方案中，所述制剂为多次剂型。多次剂型可以有利于个体方便地使用，能够完全使用药瓶内含物而减小浪费，且对于生产商而言能够显著节约成本。多次药物制剂可盛装在多剂量容器内，例如小瓶、安瓿瓶等，其允许多次抽取部分量的制剂。如上文详细说明的那样，多次制剂中可存在与制剂中的缓冲液相容的一种或多种防腐剂。
优选本发明的制剂是稳定的。在一些实施方案中，所述制剂在约4℃的温度下稳定至少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36个月或36个月以上。在其它实施方案中，所述制剂在约25℃的温度下稳定至少约1、2或3周，或至少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36个月或36个月以上。在其它实施方案中，所述制剂在约40℃的温度下稳定至少约1、2或3周，或至少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36个月或36个月以上。
5.2.1药物制剂的制备
本发明提供的制剂可通过对本领域技术人员显而易见的任何技术来制备。在某些实施方案中，所述制剂可通过在适于制备制剂的条件下使所述促胰岛素肽缀合物与制剂的其它组分接触来制备。例如，所述促胰岛素肽缀合物可与其它组分一起混合，与其它组分一起透析，与其它组分一起渗滤，或通过对本领域技术人员显而易见的任何技术与其它组分接触。所述促胰岛素肽缀合物可通过对本领域技术人员显而易见的任何技术来制备。本文描述了示例性的技术。所述促胰岛素肽缀合物可按照本领域技术人员认为适宜的任何方法来纯化。本文描述了示例性的方法。
本发明制剂的促胰岛素肽缀合物可在配制成期望的制剂组合物之前，按照本领域已知的任何纯化方法进行纯化。在一些实施方案中，所述缀合物通过疏水相互作用层析(HIC)纯化。HIC可以是技术人员已知的任何HIC技术。在某些实施方案中，所述缀合物可通过两次HIC纯化进行纯化，例如相继进行的两次HIC纯化。
在一个实施方案中，第一次纯化步骤包括使所述促胰岛素肽缀合物与苯基琼脂糖凝胶(即与苯基共价偶联的、基于球状琼脂糖的凝胶过滤基质)接触。在某些实施方案中，这个步骤从游离或缀合的白蛋白物质中分离出未缀合的促胰岛素肽。在某些实施方案中，苯基琼脂糖凝胶用含有5mM辛酸钠和5mM硫酸铵、pH 6.0的磷酸盐缓冲液平衡。在这些条件下，未缀合的化合物能够结合苯基琼脂糖凝胶，而缀合物能够流出苯基琼脂糖凝胶。然后可以收集缀合物作为留出级分，用于进一步的纯化。
在某些实施方案中，缀合物的纯化还包括第二HIC步骤，其中苯基琼脂糖凝胶流出物与丁基琼脂糖凝胶(即与丁基共价偶联的、基于球状琼脂糖的凝胶过滤基质)接触，以从未缀合的白蛋白、二聚形式的未缀合白蛋白以及残留的未缀合化合物中进一步纯化出缀合物。在某些实施方案中，丁基琼脂糖凝胶用含有5mM辛酸钠和750mM硫酸铵、pH 6.0或接近pH 6.0的缓冲液平衡。然后该丁基琼脂糖凝胶与上述第一纯化步骤的苯基琼脂糖凝胶流出物接触。在某些实施方案中，可利用线性或逐步降低的盐梯度或其组合来实现缀合物的洗脱，其中未缀合的白蛋白可用约750mM硫酸铵洗脱，二聚形式的未缀合白蛋白可用约550mM硫酸铵洗脱，化合物-白蛋白缀合物(期望的物质)可用约100mM硫酸铵洗脱，而未缀合的化合物及其它物质可用水或其等同物来洗脱。这些物质可包括例如，二聚、三聚或多聚的白蛋白缀合物，或化合物对白蛋白的化学计量大于1∶1的白蛋白缀合产物。
在某些实施方案中，缀合物的纯化还包括继HIC之后的洗涤和通过超滤浓缩缀合物。在一些实施方案中，可利用无菌水、生理盐水或缓冲液来去除纯化的缀合物中的硫酸铵和缓冲液组分。
在其它实施方案中，所述促胰岛素肽缀合物可根据2006年12月22日递交的题为“Process for the Production of Preformed Conjugates of Albumin andTherapeutic Agent(白蛋白与治疗剂的预形成缀合物的生产方法)”的美国专利申请号11/645,297(公开号2007/0269863)中描述的纯化方法来纯化，其全文通过引用并入本文。
在某些实施方案中，继纯化所述促胰岛素肽缀合物之后，所述缀合物可以通过对技术人员显而易见的任何技术重新配制成期望的制剂组合物，例如本发明的制剂。参见Remington′s Pharmaceutical Sciences第16版，Osol，A.编辑(1980)。例如，可通过在容器中混合组分，并加水和缓冲液至期望的体积和浓度而制备液体制剂。其它示例性的技术包括透析、超滤、渗滤、大小排阻层析等。一般而言，缀合物可以在产生本发明提供的制剂的条件下与制剂组分进行接触。
在某些实施方案中，重新配制纯化的促胰岛素肽缀合物包括将含有从上述第二HIC纯化步骤即在丁基琼脂糖凝胶层析之后洗脱的促胰岛素肽缀合物的级分汇集到适宜的容器之中。汇集的物质接着可利用本领域已知的任何浓缩方法进行浓缩。在某些实施方案中，汇集的物质可以利用超滤膜和泵系统进行浓缩，直至蛋白质浓度达到约10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、或大于100mg/ml。在具体实施方案中，汇集的物质浓缩至蛋白质浓度约70mg/ml。浓缩产物可接着以至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、或大于10体积的水进行渗滤，其中含促胰岛素肽缀合物的溶液的体积保持不变。在具体实施方案中，浓缩产物以至少10体积的水进行渗滤。在一些实施方案中，含有促胰岛素肽缀合物的渗滤溶液可随之接触期望的制剂组合物(即混合)，以获得包含促胰岛素肽缀合物的制剂组合物。在具体实施方案中，可制备5×浓度的期望制剂组合物，4份含促胰岛素肽缀合物的溶液可与1份5×制剂溶液混合以获得本文所述的促胰岛素肽缀合物制剂。在某些实施方案中，可测量所得溶液的蛋白质浓度，且蛋白质浓度可根据需要用制剂缓冲液调整以达到在1×制剂缓冲液中促胰岛素肽缀合物的期望浓度。在一些实施方案中，1×制剂缓冲液中促胰岛素肽缀合物的终浓度为约1、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、或大于100mg/ml。在具体实施方案中，1×制剂缓冲液中促胰岛素肽缀合物的终浓度为约10mg/ml。在另一具体实施方案中，1×制剂缓冲液中促胰岛素肽缀合物的终浓度位约50mg/ml。在准备储存之前产物可根据本领域任何已知的方法进一步过滤。
在可选实施方案中，重新配制纯化的促胰岛素肽缀合物可包括如下步骤。以下介绍作为举例而非限制。如上文所述，在汇集从二次HIC纯化步骤即丁基琼脂糖凝胶层析后获得的级分、并浓缩促胰岛素肽缀合物至约70mg/ml之后，该浓缩产物可随之以至少10体积的、含本发明期望制剂组合物的渗滤缓冲液进行渗滤，其中制剂组合物不含表面活性剂泊洛沙姆188(普朗尼克F68)。浓缩产物可以至少10体积的渗滤缓冲液进行渗滤，其中含本发明促胰岛素肽缀合物的溶液的体积保持不变。在适用情况下，“5×泊洛沙姆188溶液”包含5×浓度的表面活性剂泊洛沙姆188，例如0.5％(w/v)泊洛沙姆188，可随之如上所述在渗滤缓冲液中制备，4份含促胰岛素肽缀合物的溶液可与1份5×泊洛沙姆188溶液混合。可测量所得溶液的蛋白质浓度，且蛋白质浓度可根据需要用制剂缓冲液调整以达到在1×制剂缓冲液中促胰岛素肽缀合物的浓度约50mg/ml。在准备储存之前产物可根据本领域任何已知的方法进一步过滤。
在其它实施方案中，可通过使所述肽或肽缀合物与其它组分接触，并冻干所得混合物来制备冻干制剂。有许多冷冻干燥仪可用于此目的，例如Hull50(Hull，USA)或GT20(Leybold-Heraeus，Germany)冷冻干燥仪。冷冻干燥可通过冷冻制剂、随后在适于初次干燥的温度使冷冻内容物中的冰升华而实现。在此条件下，产物温度低于制剂的共熔点或塌陷温度。一般初次干燥搁板温度范围为约-30至-5℃(只要在初次干燥期间保持冷冻)，在适宜的压力下(一般为约50至250mTorr)进行。干燥所需的时间主要由制剂、承装样品的容器(例如，玻璃药瓶)大小和类型以及液体体积控制，其范围可以是数小时到数天(例如，40-60小时)。二次干燥阶段可在0-40℃进行，这主要取决于容器的类型和大小以及所采用蛋白质的类型。然而，在某些实施方案中，二次干燥步骤也许并不必要。例如，在整个冻干除水阶段的储存温度可以是约-30至-5℃。二次干燥所需的时间和压力将取决于例如温度和其它参数而产生适宜的冻干饼。二次干燥时间受制于期望的产物残留含水量，一般需要至少约5小时(例如，10-15小时)。压力可以与初次干燥步骤期间所采用的压力相同。冷冻干燥条件可以根据制剂和药瓶大小而不同。
5.2.1.1所制备制剂的评价
一方面，本发明提供了评价促胰岛素肽缀合物(例如根据本发明提供的方法制备和/或配制的艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2白蛋白缀合物)样品以确定其中一种多种物质的水平的方法。在某些实施方案中，所述方法包括：确定含促胰岛素肽缀合物(例如艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2白蛋白缀合物)的样品中一种或多种物质的水平的数值；并将该数值与参照数值比较，由此评价所述样品。所述参照数值可以是任何预设的数值或数值范围，例如由政府机构(如FDA)、或其它团体(例如经批准制备促胰岛素肽缀合物的生产厂家)、或法定当局(如USP)所设置的数值。
所述物质可以是本领域技术人员可以在所述样品中进行评价的任何物质。其实例包括但不限于：促胰岛素肽缀合物、未缀合的白蛋白和未缀合的促胰岛素肽、或这些物质的任何衍生物。在某些实施方案中，未缀合的促胰岛素肽的衍生物可以是氧化的肽(例如甲硫氨酸残基氧化)、脱氨的肽(例如天冬酰胺或谷氨酰胺残基脱氨)。在某些实施方案中，所述物质是多个促胰岛素肽与高分子(例如白蛋白)的缀合物，例如2∶1肽对高分子，或3∶1肽对高分子，或4∶1肽对高分子。
在优选的实施方案中，所述物质是艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2白蛋白缀合物。
在优选的实施方案中，所评价的物质是未缀合的白蛋白。在优选实施方案中，所述样品中未缀合的白蛋白的水平数值＜10.0mg/ml。
在优选的实施方案中，所评价的物质是未缀合的艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2。在优选的实施方案中，未缀合的艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2的水平数值＜25.0μg/ml。
在具体实施方案中，所评价的物质是以2∶1的比例与白蛋白缀合的艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2。
在具体实施方案中，所评价的物质是以3∶1的比值与白蛋白缀合的艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2。
任何本领域已知的方法皆可用来确定含有促胰岛素肽缀合物的样品中物质的数值。在一些实施方案中，所述样品中未缀合的物质的水平通过凝胶电泳、液相色谱质谱(LCMS)、疏水相互作用层析、高效液相色谱(HPLC)、反相色谱(例如反相HPLC)、圆二色性、溶解温度、渗透压摩尔浓度或紫外吸收(例如280nm的吸光值)来确定。
在某些实施方案中，疏水相互作用层析可用于检测或定量缀合物、未缀合的白蛋白、未缀合的肽、和/或多个促胰岛素肽与高分子的缀合物。
在某些实施方案中，凝胶电泳可用于检测或定量缀合物、未缀合的白蛋白、未缀合的肽、和/或多个促胰岛素肽与高分子的缀合物。在某些实施方案中，凝胶电泳可与免疫检测组合，例如Western印迹或酶联免疫吸附试验，以利于检测。
在某些实施方案中，LCMS可用于检测缀合物、未缀合的白蛋白、未缀合的肽、和/或多个促胰岛素肽与高分子的缀合物。
在某些实施方案中，反相HPLC可用于检测或定量未缀合的肽、和/或未缀合的肽的衍生物。
5.3治疗方法
本发明还提供了治疗个体的可用促胰岛素肽治疗的紊乱或病症的方法。在某些实施方案中，可用促胰岛素肽治疗的紊乱或病症是肥胖症。在某些实施方案中，可用促胰岛素肽治疗的紊乱或病症是糖尿病。虽然不希望束缚于任何理论，但认为本发明提供的药物制剂会通过葡萄糖依赖性、胰岛素依赖性以及胰岛素非依赖性机制使高血糖症正常化。所述药物制剂可用作治疗II型糖尿病的主要制剂，和治疗I型糖尿病的辅助制剂。在某些实施方案中，可用促胰岛素肽治疗的紊乱或病症是II型糖尿病。在一些实施方案中，所述方法包括向个体施用治疗有效量的促胰岛素肽缀合物，例如本文所述的促胰岛素肽缀合物制剂的步骤。在一些实施方案中，促胰岛素肽缀合物是白蛋白与艾塞那肽-4或其衍生物的缀合物。在优选实施方案中，所述个体是人。
所述药物制剂尤其适合于治疗糖尿病(既包括I型和II型)个体，因为所述肽的作用依赖于血液的葡萄糖浓度，因而相比于现有的治疗方法，低血糖副作用的风险大大减小。
因而，在某些方面，本发明提供了治疗个体II型糖尿病的方法，包括向患有II型糖尿病的个体施用本发明所述的制剂。在一些实施方案中，所述制剂包含：白蛋白和促胰岛素肽的缀合物，所述促胰岛素肽含有的序列相对于天然艾塞那肽-4序列具有不超过3个氨基酸取代、缺失或插入，所述缀合物的浓度为约1mg/ml至约100mg/ml；缓冲液；张力调节剂；稳定剂；和表面活性剂，其中所述制剂的pH为约4至约8。在某些实施方案中，所述方法包括向具有II型糖尿病的个体施用包含促胰岛素肽缀合的艾塞那肽-4衍生物的制剂，所述衍生物含有与[2-[2-[2-马来酰亚胺基丙酰胺基(乙氧基)乙氧基]乙酸接头共价连接的重组人血清白蛋白半胱氨酸34巯基，所述接头与艾塞那肽-4(1-39)Lys40-NH2羧基末端赖氨酸的ε氨基共价连接。
本发明的药物制剂还可用于治疗肥胖症个体。本发明的药物制剂还可用于治疗具有可用促胰岛素肽治疗的紊乱或病症的个体。
5.3.1个体
在本发明的某些实施方案中，所述个体是动物，例如哺乳动物，例如非人灵长类动物。在某些实施方案中，所述个体是人。所述个体可以是雄性或雌性个体。在某些实施方案中，所述个体是非人动物，例如牛、绵羊、山羊、马、猫或狗。
在某些实施方案中，所述个体具有患上可用促胰岛素肽治疗的紊乱或病症的风险，包括但不限于：肥胖症和II型糖尿病。在一些实施方案中，所述个体具有患肥胖症的风险。在一些实施方案中，个体具有患II型糖尿病的风险。
在一些实施方案中，所述个体不健康。在一些实施方案中，所述个体具有或患有可用促胰岛素肽治疗的病症，包括但不限于肥胖症或II型糖尿病。
在一些实施方案中，所述个体肥胖。在一些实施方案中，所述个体是人，且体重指数(BMI)为30kg/m2或更大。在一些实施方案中，所述个体是人，且BMI为30kg/m2至35kg/m2。在一些实施方案中，所述个体是人，且BMI为35kg/m2或更大。在一些实施方案中，所述个体是人，且BMI为40kg/m2或更大。在一些实施方案中，所述个体体重超过其年龄、身高和/或种族正常体重的120％。
在一些实施方案中，所述个体患有II型糖尿病。在一些实施方案中，个体葡萄糖水平异常。在具体实施方案中，所述个体的葡萄糖水平高。在一些实施方案中，所述个体是人，且平均全血血糖水平为8mmol/L(138mg/dl)或更高，和/或平均血浆血糖水平为9.0mmol/L(154mg/dl)或更高。在一些实施方案中，所述个体是人，且平均全血血糖水平为8mmol/L(138mg/dl)至16mmol/L(281mg/dl)，和/或平均血浆血糖水平为9.0mmol/L(154mg/dl)至17mmol/L(314mg/dl)。在一些实施方案中，所述个体是人，且平均全血血糖水平高于16mmol/L(281mg/dl)，和/或平均血浆血糖水平高于17mmol/L(314mg/dl)。
在一些实施方案中，所述个体是人，且糖基化血红蛋白(HbAlc)的水平为6.5％或更高。在一些实施方案中，所述个体是人，且HbAlc的水平为6.5％至11％。在一些实施方案中，所述个体是人，且HbAlc水平为11％或更高。
在某些实施方案中，所述个体患有促胰岛素肽例如促胰岛素肽缀合物可治疗的疾病、紊乱或病症。例如，所述个体患有代谢综合症。根据美国国家胆固醇教育计划成人教育组第三项报告(ATPIII)，患有代谢综合症的个体有三种或多种如下标准：(1)男性腰围大于102cm，女性腰围大于88；(2)血清甘油三酸酯高于1.7mmol/l；(3)血压高于130/85mmHg；(4)HDL胆固醇男性低于1.0mmol/l，而女性低于1.3mmol/l；和(5)血清葡萄糖高于6.1mmol/l(高于5.6mmol/l可适用)。根据世界卫生组织(WHO)，患有代谢综合症的个体具有糖尿病、或空腹血糖受损(IFG)、或糖耐量受损(IGT)、或胰岛素耐受(通过钳夹试验评估)，此外还有至少两个如下标准：(1)腰臀比男性大于0.90，或女性大于0.85；(2))血清甘油三酸酯高于1.7mmol/l，或HDL胆固醇男性低于0.9mmol/l女性低于1.0mmol/l；(3)血压高于140/90mmHg；(4)尿蛋白排泄率大于20mg/分钟，或尿白蛋白肌酐比大于30mg/g。因而，如果个体满足ATPIII或WHO所定义的代谢综合症标准，则该个体具有代谢综合症。
在一些实施方案中，所述个体患有前期糖尿病(例如，糖耐量受损(IGT)或空腹血糖受损(IFG))。在一些实施方案中，所述个体患有糖尿病，例如I型糖尿病、II型糖尿病。在一些实施方案中，所述个体患有成人隐匿性自身免疫糖尿病(“LADA”)，也称为成人迟发性自身免疫糖尿病。在一些实施方案中，所述个体患有迟发性I型糖尿病。在一些实施方案中，所述个体患有1.5型糖尿病。在一些实施方案中，所述个体患有有类固醇诱发的糖尿病。在一些实施方案中，所述个体患有人免疫缺陷病毒(HIV)治疗诱发的糖尿病。在一些实施方案中，所述个体患有与先天性或HIV相关脂肪营养不良(“脂肪再分布综合症”)有关的糖尿病。在一些实施方案中，所述个体患有神经系统紊乱。在一些实施方案中，所述个体胰岛素耐受。在一些实施方案中，所述个体患有无知觉低血糖症。在一些实施方案中，所述个体患有限制性肺疾病。在一些实施方案中，所述个体患有胃肠紊乱，例如肠易激综合症(IBS)、功能性消化不良；或与胃肠紊乱相关的疼痛，例如与IBS和功能性消化不良相关的疼痛。在一些实施方案中，所述个体患有炎症性肠病(IBD)，例如克罗恩病和溃疡性结肠炎，或与IBD相关的疼痛。在一些实施方案中，所述个体患有高血糖症，例如与外科手术(例如，大的外科手术，例如冠状动脉搭桥术)相关的高血糖症，例如与针对糖尿病(例如II型糖尿病、代谢综合症)个体的外科手术相关的高血糖症。在一些实施方案中，所述个体患有冠状动脉心力衰竭(CHF)。在一些实施方案中，所述个体患有与β细胞功能障碍相关的紊乱、与β细胞缺失相关的紊乱、或与β细胞数量不足相关的紊乱。
在一些实施方案中，所述个体肥胖。在一些实施方案中，所述个体肥胖但既无糖尿病也无前期糖尿病；肥胖且患有糖尿病或前期糖尿病；肥胖但未患代谢综合症；肥胖且患有代谢综合症；超重但既无糖尿病也无前期糖尿病；超重且有糖尿病或前期糖尿病；超重但未患代谢综合症；超重且患有代谢综合症；患有代谢综合症但无糖尿病或前期糖尿病(取决于代谢综合症的定义)；患有代谢综合症但既不肥胖也不超重。
在一些实施方案中，所述个体具有一个或多个如下特征：(1)糖尿病或前期糖尿病；(2)超重或肥胖；和(3)代谢综合症。
在一些实施方案中，所述个体没用过抗糖尿病药。在一些实施方案中，所述个体没用过其它抗糖尿病药或没用过口服抗糖尿病药(OAD)。在其它实施方案中，所述个体之前已经用一种或多种其它抗糖尿病药例如OAD治疗过。在其它实施方案中，所述个体之前已经用二甲双胍、磺酰脲、噻唑烷二酮或其组合治疗过。在一些实施方案中，所述个体正用OAD治疗，即处于OAD积极治疗方案之中。在一个实施方案中，所述个体在施用促胰岛素肽缀合物前的1周、2天或1天内已施用OAD例如二甲双胍。在具体实施方案中，所述个体已经每日施用稳定剂量≥1000mg的二甲双胍至少3个月。示例性的OAD在下文提供。
在具体实施方案中，所述个体目前正用二甲双胍治疗，即处于二甲双胍积极治疗方案之中。在一个实施方案中，所述个体在施用促胰岛素肽缀合物前的1周、2天或1天内已施用二甲双胍。在具体实施方案中，所述个体已经每日施用稳定剂量≥1000mg的二甲双胍至少3个月。
在某些实施方案中，本发明的制剂可作为单一治疗施用。换言之，可提供本发明的制剂作为单独施用的活性药剂，来治疗本发明提供的一种或多种病症。
5.3.2与抗糖尿病药组合治疗
在本发明提供的方法和制剂中，促胰岛素肽缀合物可与一种或多种第二治疗剂一起使用或组合使用，以用于治疗或预防糖尿病、肥胖症、或可用促胰岛素肽例如促胰岛素肽缀合物治疗的紊乱。在一些实施方案中，这些药剂的组合能够比任何单一治疗单独使用产生更好的对此类疾病或紊乱的治疗效果。
本发明提供的制剂能够通过本领域技术人员认为适宜的任何方式与第二治疗剂组合。例如，所述制剂可以如本文所述施用，而第二治疗剂可按照任何方式、按照适宜该药剂的任何时序和剂量施用。施用方法、剂量、和剂量时序落在本领域技术人员的技术范围内，并且可基于对第二活性药剂的了解确定。在某些实施方案中，剂量和剂量时序可由本领域技术人员针对组合治疗来调整。所述制剂和第二药剂无需一起施用。然而，在某些实施方案中，在适宜的情况下，所述制剂和第二药剂可适当地一起施用。在某些实施方案中，在适宜的情况下，所述制剂除了促胰岛素肽之外，还可以包含第二药剂。
在本发明提供的方法中，一种或多种治疗成分或药剂可与促胰岛素肽缀合物一起使用。所述第二治疗剂包括抗糖尿病药，包括口服抗糖尿病药(OAD)或抗肥胖药物。
5.3.2.1OAD
可在本发明提供的组合治疗中使用的示例性OAD包括但不限于：磺酰脲类，例如甲苯磺丁脲(甲糖宁)、醋酸己脲(乙酰磺环己脲)、妥拉磺脲(甲磺氮草脲)、氯磺丙脲(特泌胰)、格列吡嗪(瑞易宁)、格列本脲(达安疗、优降糖、达安宁)、氯磺环己脲、格列美脲(亚莫利)或格列齐特(达美康)；双胍类，例如二甲双胍、苯乙双胍或丁双胍；格列奈，例如唐力(那格列奈)、普瑞丁(瑞格列奈)、快如妥(米格列奈)；美格替耐，例如瑞格列奈(普瑞丁)或那格列奈(唐力)；噻唑烷二酮类，例如罗格列酮(文迪雅)、吡格列酮(安可妥)或曲格列酮(瑞泽林)；或α-葡萄糖苷酶抑制剂，例如米格列醇(Glyset)或阿卡波糖(拜糖平/卡博平)。
5.3.2.2DPP IV抑制剂
在一些实施方案中，可在本发明提供的组合治疗中使用的第二治疗剂为二肽基肽酶IV抑制剂(DPP IV抑制剂)。DPP-IV抑制剂可以是任何呈现DPP-IV酶活抑制作用的化合物。例如，DPP-IV抑制剂的实例描述在：(i)D.J.Drucker，2003，Exp.Opin.Invest.Drugs，12：87-100；(ii)K.Augustyns等，2003，Exp.Opin.Ther.Patents，13：499-510；(iii)C.F.Deacon等，2004，Exp.Opin.Investig.Drugs，13：1091-1102；(iv)A.E.Weber，2004，J.Med.Chem.，47：4135-4141；(v)J.J.Hoist，2004，Exp.Opin.Emerg.Drugs，9：155-166；(vi)Augustyns等，2005，Expert Opinion On Therapeutic Patents，15(10)：1387-1407；(vii)Sebokova等，2007，Current Topics in Medicinal Chemistry 7：547-555，每一篇的内容都整体通过引用并入本文。
在DPP IV抑制剂可以口服或口服施用的情况下，DPP IV抑制剂是如本文所述的OAD。换言之，OAD可包括本文所述的一些或全部DPP IV抑制剂。
DPP-IV抑制剂的具体实例包括但不限于：二肽衍生物或二肽模拟物，例如丙氨酸吡咯烷、异亮氨酸噻唑烷、以及假底物N-缬氨酰脯氨酰、O-苯甲酰羟胺，例如，如美国专利号7,253,172、7,241,756、7,238,724、7,238,720、7,236,683、7,235,538、7,230,074、7,230,002、7,229,969、7,223,573、7,217,711、7,208,498、7,205,409、7,205,323、7,196,201、7,192,952、7,189,728、7,186,846、7,186,731、7,183,290、7,183,280、7,179,809、7,169,926、7,169,806、7,166,579、7,157,490、7,144,886、7,132,443、7,125,873、7,125,863、7,122,555、7,115,650、7,109,192、7,101,871、7,098,239、7,084,120、7,078,397、7,078,281、7,074,794、7,060,722、7,053,055、7,034,039、7,026,316、6,911,467、6,890,898、6,890,905、6,869,947、6,867,205、6,861,440、6,844,316、6,849,622、6,825,169、6,812,350、6,803,357、6,800,650、6,727,261、6,716,843、6,710,040、6,706,742、6,699,871、6,645,995、6,617,340、6,699,871、6,573,287、6,432,969、6,395,767、6,380,398、6,319,893、6,303,661、6,242,422、6,201,132、6,172,081、6,166,063、6,124,305、6,110,949、6,107,317、6,100,234、6,040,145、6,011,155、5,939,560、5,462,928中所述，其每一篇内容都整体通过引用并入本文。
更多DPP-IV抑制剂的实例可见美国专利申请公开号20070172525、20070185061、2007016750、20070149451、20070142383、20070142436、20070123579、20070112059、20070105890、20070098781、20070093492、20070082932、20070082908、20070072810、20070072804、20070072803、20070060547、20070049619、20070049596、20070021477、20060293297、20060281796、20060281727、20060276487、20060276410、20060270722、20060270701、20060270679,20060264457、20060264433、20060264401、20060264400、20060258646、20060258621、20060247226、20060229286、20060217428、20060211682、20060205711、20060205675、20060173056、20060154866、20060142585、20060135767、20060135561、20060135512、20060116393、20060111336、20060111428、20060079541、20060074058、20060074087、20060069116、20060058323、20060052382、20060046978、20060040963、20060039974、20060014953、20060014764、20060004074、20050059724、20050059716、20050043292、20050038020、20050032804、20050272765、20050272652、20050261271、20050260732、20050260712、20050245538、20050234235、20050233978、20050234108、20050222242、20050222222、20050222140、20050215784、20050215603、20050209249、20050209159、20050203095、20050203031、20050203027、20050192324、20050187227、20050176771、20050171093、20050164989、20050143377、20050143405、20050137224、20050131019、20050130985、20050130981、20050113310、20050107390、20050107309、20050096348、20050090539、20050075330、20050070719、20050070706、20050070535、20050070531、20050070530、20050065148、20050065145、20050065144、20050043299、20050043292、20050032804、20050026921、20050004205、20050004117、20050032804、20040259903、20040259902、20040259883、20040259870、20040259843、20040254226、20050254167、20040242898、20040242636、20040242568、20040242566、20040236102、20040235752、20040229926、20040229848、20040229820、20040209891、20040186153、20040180925、20040176428、20040176406、20040171555、20040171848、20040167341、20040167133、20040152745、20040147434、20040138215、20040138214、20040121964、20040116328、20040110817、20040106656、20040106802、20040106655、20040097510、20040087587、20040082570、20040082497、20040077645、20040072892、20040063935、20040034014、20030232788、20030225102、20030216450、20030216382、20030199528、20030195188、20030166578、20030162820、20030149071、20030134802、20030130281、20030130199、20030125304、20030119750、20030119738、20030105077、20030100563、20030092630、20030087950、20030078247、20030060494、20020198242、20020198205、20020183367、20020165164、20020161001、20020110560、20020103384、20030096857、20020071838、20020065239、20020061839、20020049164、2002001941 1、20020006899、20010020006，其中每一篇的内容都整体通过引用并入本文。
而更多DPP-IV抑制剂的实例可见申请公开号WO 07/054577、WO07/053865、WO 05/116029、WO 05/087235、WO 05/082348、WO 05/082849、WO 05/079795、WO 05/075426、WO 05/072530、WO 05/063750、WO05/058849、WO 05/049022、WO 05/047297、WO 05/044195、WO 05/042488、WO 05/042003、WO 05/040095、WO 05/037828、WO 05/037779、WO05/034940、WO 05/033099、WO 05/032590、WO 05/030751、WO 05/030127、WO 05/026148、WO 05/025554、WO 05/023762、WO 05/020920、WO 05/19168、WO 05/12312、WO 05/12308、WO 05/12249、WO 05/11581、WO 05/09956、WO 05/03135、WO 05/00848、WO 05/00846、WO 04/112701、WO 04/111051、WO 04/111041、WO 04/110436、WO 04/110375、WO 04/108730、WO04/104216、WO 04/104215、WO 04/103993、WO 04/103276、WO 04/99134、WO 04/96806、WO 04/92128、WO 04/87650、WO 04/87053、WO 04/85661、WO 04/85378、WO 04/76434、WO 04/76433、WO 04/71454、WO 04/69162、WO 4/67509、WO 04/64778、WO 04/58266、WO 04/52362、WO 04/52850、WO 04/50022、WO 4/50658、WO 04/48379、WO 04/46106、WO 04/43940、WO 04/41820、WO 04/41795、WO 4/37169、WO 04/37181、WO 04/33455、WO 04/32836、WO 04/20407、WO 04/18469、WO 04/18468、WO 04/18467、WO 04/14860、WO 04/09544、WO 04/07468、WO 04/07446、WO 04/04661、WO 04/00327、WO 03/106456、WO 03/104229、WO 03/101958、WO 03/101448、WO 03/99279、WO 03/95425、WO 03/84940、WO 03/82817、WO 03/80633、WO 03/74500、WO 03/72556、WO 03/72528、WO 03/68757、WO 03/68748、WO 03/57666、WO 03/57144、WO 03/55881、WO 03/45228、WO 03/40174、WO 03/38123、WO 03/37327、WO 03/35067、WO 03/35057、WO 03/24965、WO 03/24942、WO 03/22871、WO 03/15775、WO 03/04498、WO 03/04496、WO 03/02530、WO 03/02596、WO 03/02595、WO 03/02593、WO 03/02553、WO 03/02531、WO 03/00181、WO 03/00180、WO 03/00250、WO 02/83109、WO 02/83128、WO 02/76450、WO 02/68420、WO 02/62764、WO 02/55088、WO 02/51836、WO 02/38541、WO 02/34900、WO 02/30891、WO 02/30890、WO 02/14271、WO 02/02560、WO 01/97808、WO 01/96295、WO 01/81337、WO 01/81304、WO 01/68603、WO 01/55105、WO 01/52825、WO 01/34594、WO 00/71135、WO 00/69868、WO 00/56297、WO 00/56296、WO 00/34241、WO 00/23421、WO 00/10549、WO 99/67278、WO 99/62914、WO 99/61431、WO 99/56753、WO 99/25719、WO 99/16864、WO 98/50066、WO 98/50046、WO 98/19998、WO 98/18763、WO 97/40832、WO 95/29691、WO 95/15309、WO 93/10127、WO 93/08259、WO 91/16339、EP 1517907、EP 1513808、EP1492777、EP 1490335、EP 1489088、EP 1480961、EP 1476435、EP 1476429、EP 1469873、EP 1465891、EP 1463727、EP 1461337、EP 1450794、EP 1446116、EP 1442049、EP 1441719、EP 1426366、EP 1412357、EP1406873、EP 1406872、EP 1406622、EP 1404675、EP 1399420、EP 1399471、EP 1399470、EP 1399469、EP 1399433、EP 1399154、EP 1385508、EP 1377288、EP 1355886、EP 1354882、EP 1338592、EP 1333025、EP 1304327、EP 1301 187、EP 1296974、EP 1280797、EP 1282600、EP 1261586、EP 1258476、EP 12541 13、EP 1248604、EP 1245568、EP 1215207、EP 1228061、EP 1137635、EP 1123272、EP 1104293、EP 1082314、EP 1050540、EP 1043328、EP 0995440、EP 0980249、EP 0975359、EP 0731789、EP 0641347、EP 0610317、EP 0528858、CA2466870、CA2433090、CA2339537、CA 2289125、CA 2289124、CA 2123128、DD 296075、DE 19834591、DE19828113、DE 19823831、DE 19616486、DE 10333935、DE 10327439、DE10256264、DE 10251927、DE 10238477、DE 10238470、DE 10238243、DE10143840、FR 2824825、FR 2822826、JP2005507261；JP 2005505531、JP2005502624、JP 2005500321、JP 2005500308、JP2005023038、JP 2004536115、JP 2004535445、JP 2004535433、JP 2004534836、JP 2004534815、JP2004532220、JP 2004530729、JP 2004525929、JP 2004525179、JP 2004522786、JP 2004521149、JP 2004503531、JP 2004315496、JP 2004244412、JP2004043429、JP 2004035574、JP 2004026820、JP 2004026678、JP 2004002368、JP 2004002367、JP 2003535898、JP 2003535034、JP 2003531204、JP2003531191、JP 2003531118、JP 2003524591、JP 2003520849、JP 2003327532、JP 2003300977、JP 2003238566、JP 2002531547、JP 2002527504、JP2002517401、JP 2002516318、JP 2002363157、JP 2002356472、JP 2002356471、JP 2002265439、JP 2001510442、JP 200051 1559、JP 2000327689、JP2000191616、JP 1998182613、JP 1998081666、JP 1997509921、JP 1995501078、JP 1993508624，其中每一篇的内容都整体通过参考引入本文。
在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是分子量小于1000、700或500道尔顿的小分子，例如除核酸、蛋白质或肽之外的有机分子。
在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是β-氨基酸衍生物，例如3(R)-氨基-1-[3-(三氟甲基)-5，6，7，8-四氢[1，2，4]三唑并[4，3-a-]吡嗪-7-基]-4-(2，4，5-三氟苯基)丁-1-酮(MK-0431；捷诺维)或其药物盐、水合物或多晶型，这些被详细描述在美国专利号6,699,871、EP 1412357、WO 03/04498和US 2003100563中，每一篇的内容都被整体通过引用并入本文。在一些实施方案中，DPP-IV抑制剂是西格列汀。西格列汀被描述为口服活性的选择性DPP-IV抑制剂，最近在美国和欧洲被批准用于单独地或联合二甲双胍或磺酰脲或PPARγ激动剂治疗糖尿病。参见美国专利号6,699,871，Kim等，2005，J.Med.Chem.48：141-151，每一篇的内容都整体通过引用并入本文。
在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是氰基吡咯烷，例如(1-[[3-羟基-1-金刚烷基)氨基[乙酰基]-2-氰基-(S)-吡咯烷(LAF237或维达列汀)、1-[2-[5-氰基吡啶-2-基)氨基]乙氨基]乙酰基-2-氰基-(S)-吡咯烷(NVP-DPP728)、或(1S，3S，5S)-2-[2(S)-氨基-2-(3-羟基金刚烷-1-基)乙酰基]-2-氮杂双环[-3.1.0]己烷-3-腈(沙克列汀或BMS-47718)，这详细公开在例如美国专利号6,617,340、6,432,969、6,395,767、6,166,063、6,124,305、6,110,949、6,011,155、6,107,317、WO 98/19998和JP 2000511559、WO 00/34241、EP 1137635及JP 2002531547中，每一篇的内容都整体通过引用并入本文。
在一些实施方案中，DPP-IV抑制剂是维达列汀。在一些实施方案中，DPP-IV抑制剂是NVP-DPP728。维达列汀和NVP-DPP728被描述为口服活性的选择性DPP-IV抑制剂。参见Villhauer等，2002，J Med Chem45：2362-2365，Villhauer等，2003，J Med Chem 46：2774-2789，每一篇的内容都整体通过引用并入本文。维达列汀(LAF 237)目前正在美国进行III期临床试验。其在欧洲已批准联合二甲双胍或磺酰脲或噻唑烷二酮使用。
在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是沙克列汀。沙克列汀目前在美国和欧洲处于III期临床试验，用于治疗II型糖尿病。参见Augeri等，2005，J.Med.Chem.48(5)：5025-5037，其内容整体通过引用并入本文。
在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是3-(L-异亮氨酰)噻唑烷(异亮氨酸噻唑烷或PSN-9301)。异亮氨酸噻唑烷可见于JP 2001510442、WO 97/40832、美国专利号6,303,661以及DE 19616486，每一篇的内容都整体通过引用并入本文。异亮氨酸噻唑烷被描述为口服活性的选择性DPP-IV抑制剂。参见Pederson等，1998，Diabetes 47：1253-1258；Epstein等，2007，Curr.Opion.Inyestig.Drugs，8(4)：331-337，每一篇的内容都整体通过引用并入本文。
在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是SYR-322(阿格列汀)或SYR-472，例如描述在美国专利号7,169,926和7,034,039中，每一篇的内容都整体通过引用并入本文。
在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是缬氨酸吡咯烷，例如公开在Deacon等，Diabetes(1998)47：764769中，其整体通过引用并入本文。
在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是[1-[2(S)-氨基-3-甲基丁酰基]吡咯烷-2(R)-基]硼酸(PT-100)。
在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是β-苯乙胺，例如公开在Nordhoff等，2006，Bioorganic Medical Chemistry Letters 16：1744-1748中，其整体通过引用并入本文。
在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是PT-630(DB-160)，例如公开在申请公开号WO 06/034435中，其整体通过引用并入本文。
在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是ABT-341，例如公开在Pei等，J.Med.Chem.2006年11月2日；49(22)：6439-42中，其整体通过引用并入本文。
在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是ABT-279，例如公开在Madar等，J.Med.Chem.2006年10月19日；49(21)：6416-20中，其整体通过引用并入本文。
在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是BI-1356/利拉利汀(Ondero)，例如公开在申请公开号WO 04/18468中，其整体通过引用并入本文。
在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是SYR-619。
在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是GSK-823093。
在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是PSN 9301。
在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是TA-6666。
在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是CR-14023。
在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是CR-14025。
在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是CR-14240。
在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是CR-13651。
在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是NNC-72-2138。
在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是NN-7201。
在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是PHX-1149。
在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是PHX-1004。
在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是SNT-189379。
在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是GRC-8087。
在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是SK-0403。
在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是GSK-825964。
在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是TS-021。
在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是GRC-8200。
在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是GRC-8116。
在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是FE107542。
在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是MP-513。
在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是BI356。
在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是ALS 2-0426。
在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是ABT279。
在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是TS-201。
在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是KRP-104。
在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是R1579。
在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是LY2463665。
在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是ARI-2243。
在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是SSR-162369。
5.3.2.3其它第二治疗剂
在一些实施方案中，所述第二治疗剂是胰岛素受体激动剂。在一些实施方案中，所述胰岛素受体激动剂是人胰岛素或胰岛素类似物；基础胰岛素，例如来得时(甘精胰岛素)、诺和平(地特胰岛素)、NN5401、NN-344、Albulin-G；或速效胰岛素，例如诺和锐(门冬胰岛素)、优泌乐(赖脯胰岛素)、艾倍得(格鲁胰岛素)。
在一些实施方案中，所述第二治疗剂是胰淀素受体激动剂，例如西米林(Symlin)(普兰林肽)。
在一些实施方案中，所述第二治疗剂是葡萄糖依赖性促胰岛素肽/抑胃肽(GIP)类似物；胰高血糖素受体(GCGR)拮抗剂，例如BAY-27-9955、Cpd G或ISIS-325，568；糖皮质激素受体(GCCR)拮抗剂，例如ISIS-377，131；铬、钒盐或衍生物；11β-羟基类固醇脱氢酶(11β-HSD1和11β-HSD2)脱氢酶和还原酶抑制剂，例如BVT-3498；蛋白酪氨酸磷酸酶1b(PTP 1b)抑制剂；葡萄糖转运蛋白(GLUT)及同工酶(GLUT1、GLUT4)抑制剂；钠-葡萄糖协同转运蛋白及同工型(SGLT1、SGLT2)抑制剂，例如达格列嗪、舍格列净和AVE-2268；去乙酰化酶(SIRT)及同工型激动剂(SIRT1)，例如白藜芦醇、SRT-501；PPAR γ/δ激动剂；PPAR α/γ激动剂，例如tesaglitasar、muraglitazar、naveglitazar；果糖-1，6-二磷酸酶(FBPase)抑制剂，例如CS-917、MB-7803；葡萄糖依赖性促胰岛素受体(GDIR，G蛋白偶联受体119，即GPR-119)激动剂，例如ADP-668；G蛋白偶联受体GPR-40、GPR-120、GPR-109A(HM-74A)激动剂促成的葡萄糖依赖性胰岛素分泌；成纤维细胞生长因子(FGF)及同工型(FGF-21)类似物；早老蛋白相关扁菱形蛋白样蛋白质(PSARL)拮抗剂，例如CXS-203；肝胰岛素致敏物质(HISS)、骨形态发生蛋白-9(BMP-9)；骨钙素；内脂素(烟酰胺磷酸核糖转移酶，Nampt)；选择性PPARγ调节剂(SPPARM)，例如metaglidasen、MBX-2044；葡糖激酶(GK)激活剂，例如RO-28-1675；糖原磷酸酶(GP)抑制剂，例如PSN-357；β细胞生长因子，例如胰岛新生基因相关蛋白(INGAP)；CD-3拮抗剂例如teplizumab，GAD65拮抗剂例如Diamyd、DiaPep277，白介素-1抑制剂(IL-I)例如XOMA-052，jun N-末端激酶(JNK)抑制剂，耐受原例如NBI-6024、TRX4。
在一些实施方案中，所述第二治疗剂是抗肥胖药。在一些实施方案中，所述抗肥胖药是大麻素1受体(CBlR)反向激动剂和拮抗剂，例如Acomplia/Zimulti(利莫那班)、诺美婷(西布曲明)、或赛尼可(奥利司他)。
在一些实施方案中，第二治疗剂是胃肠激素类似物。在一些实施方案中，所述胃肠激素类似物是胰高血糖素样肽-2(GLP-2)类似物，例如Gattex(teduglutide)；肽YY类似物，例如PYY(1-36)、PYY(3-36)；胰多肽(PP)类似物；或胃泌素类似物。
5.3.3选择个体进行治疗
一方面，本发明提供了选择个体以用本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂进行治疗的方法，包括鉴别已经用抗糖尿病药治疗过的个体。使用任何本领域已知的抗糖尿病药的之前治疗皆可作为基础来识别个体以用促胰岛素肽缀合物(例如本文描述的促胰岛素肽缀合物)治疗。示例性的抗糖尿病药在上文提供。在一些实施方案中，所述抗糖尿病药是口服抗糖尿病药(OAD)。在一些实施方案中，如果所述个体在之前未用抗糖尿病药例如OAD治疗过，则鉴别该个体以进行治疗。在其它实施方案中，如果所述个体在之前已经用抗糖尿病药例如OAD治疗过，则鉴别该个体以进行治疗。可以根据本领域技术人员的判断来确定所述个体是否之前已用抗糖尿病药例如OAD治疗过。在某些实施方案中，本发明提供了选择个体以用本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂进行治疗的方法，包括鉴别因其它抗糖尿病药从而经历过低血糖的个体。
在某些实施方案中，本发明提供了选择个体以用本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂进行治疗的方法，包括鉴别经历过之前治疗和经历过增重或不期望的体重增加的个体。
在某些实施方案中，本发明提供了选择个体以用本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂进行治疗的方法，包括鉴别之前已经用第二活性药剂(例如OAD，例如磺酰脲、二甲双胍或噻唑烷二酮)治疗过的个体，所述方法可以进一步包括确定施用所述抗糖尿病药是否产生了期望的治疗结果，例如，通过本领域技术人员确定，可接受地控制了个体葡萄糖水平。可接受的血糖控制可显示为但不限于：全血血糖下降、血浆血糖下降、组织间液葡萄糖(IG)下降，和/或HbAlc水平下降。在一些实施方案中，本发明提供了选择个体以用本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂进行治疗的方法，包括鉴别之前已经施用过抗糖尿病药例如OAD，例如导致可接受地控制了个体葡萄糖水平的个体。在具体实施方案中，本发明提供了选择个体以用本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂进行治疗的方法，包括鉴别之前已经施用过抗糖尿病药例如OAD，但没有导致可接受地控制个体葡萄糖水平的个体。前述方法可以进一步包括向鉴别的个体施用所述促胰岛素肽缀合物或制剂。
在一些实施方案中，本发明提供了选择个体以用本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂进行治疗的方法，包括鉴别在首次施用所述促胰岛素肽缀合物之前已经施用过抗糖尿病药例如OAD的个体。在具体实施方案中，OAD是二甲双胍。在一些实施方案中，本发明提供了选择个体以用本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂进行治疗的方法，包括鉴别在不超过30、25、20、15、10或5天之前(自鉴别时间起衡量)已经施用过其它抗糖尿病药例如OAD的个体，所述方法进一步包括在施用所述其它抗糖尿病药的30、25、20、15、10或5天之内施用所述促胰岛素肽缀合物或制剂。在具体实施方案中，本发明提供了选择个体以用本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂进行治疗的方法，包括鉴别未施用过有效量的其它抗糖尿病药例如OAD的个体，然后在首次施用所述促胰岛素肽缀合物之时(例如，在同一小时或同一天内)施用其它抗糖尿病药。在其它实施方案中，本发明提供了选择个体以用本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂进行治疗的方法，包括鉴别未施用过有效量的其它抗糖尿病药例如OAD的个体，然后向个体首次施用所述促胰岛素肽缀合物或制剂。
另一方面，本发明提供了治疗具有前期糖尿病，例如糖耐量受损(IGT)或空腹血糖受损(IFG)的个体的方法，包括向所述个体施用治疗前期糖尿病有效量的促胰岛素肽缀合物，例如本文所述的促胰岛素肽缀合物制剂。在一些实施方案中，所述促胰岛素肽缀合物是与白蛋白缀合的艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2。在一些实施方案中，本发明提供了选择个体以用本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂进行治疗的方法，包括鉴别具有IFG和/或IGT的个体。在一些实施方案中，所述方法包括鉴别经本领域技术人员诊断具有IFG的个体。在一些实施方案中，本发明提供了选择个体以用本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂进行治疗的方法，包括鉴别空腹血浆葡萄糖水平＞100mg/dl(5.6mmol/l)但＜126mg/dl(7.0mmol/l)的个体。在其它实施方案中，本发明提供了选择个体以用本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂进行治疗的方法，包括鉴别经本领域技术人员诊断具有IGT的个体。在一些实施方案中，所述方法包括鉴别2小时口服糖耐量试验水平＞140mg/dl(7.8mmol/l)但＜200mg/dl(11.1mmol/l)的个体。前述方法可以进一步包括向鉴别的个体施用所述促胰岛素肽缀合物或制剂。
另一方面，本发明提供了治疗肥胖但既无糖尿病也无前期糖尿病的个体的方法，包括向所述个体施用治疗肥胖症有效量的促胰岛素肽缀合物，例如本文所述的促胰岛素肽缀合物制剂。在一些实施方案中，所述促胰岛素肽缀合物是与白蛋白缀合的艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2。在一些实施方案中，本发明提供了选择个体以用本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂进行治疗的方法，包括鉴别肥胖但既无糖尿病也无前期糖尿病的个体用胰岛素肽缀合物治疗，其中所述方法包括鉴别之前已经用抗肥胖药治疗过的个体。用本领域已知的任何抗肥胖药的治疗皆可作为基础来选择个体以用促胰岛素肽缀合物(例如本文描述的促胰岛素肽缀合物)进行治疗。在一些实施方案中，所述抗肥胖药是奥利司他。在一些实施方案中，所述抗肥胖药是西布曲明。在其它实施方案中，所述抗肥胖药是利拉鲁肽(NN2211)。利拉鲁肽(NN2211)是GLP-1类似物，其结构为Arg(34)Lys(26)-(N-ε-(γ-Glu(N-α-十六酰氯))-GLP-1(7-36)-NH2。在一些实施方案中，如果个体未用利拉鲁肽治疗过，则选择该个体进行治疗。在其它实施方案中，本发明提供了选择个体以用本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂进行治疗的方法，包括鉴别已经用利拉鲁肽治疗过的个体。上述方法可以进一步包括向所鉴别的个体施用所述促胰岛素肽缀合物或制剂。
在某些实施方案中，在个体之前已经用利拉鲁肽治疗过的情况下，本发明提供了选择个体以用本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂进行治疗的方法，包括鉴别之前已经用利拉鲁肽治疗过并产生了期望的治疗结果，例如，本领域技术人员确定，减重达个体基础体重的5％以上的个体。在一些实施方案中，本发明提供了选择个体以用本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂进行治疗的方法，包括鉴别之前已经用利拉鲁肽治疗过并导致减重达个体基础体重的5％以上的个体。在具体实施方案中，本发明提供了选择个体以用本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂进行治疗的方法，包括鉴别之前已经用利拉鲁肽治疗过但未导致减重达个体基础体重的5％以上的个体。前述方法可以进一步包括向所鉴别的个体施用所述促胰岛素肽缀合物或制剂。
5.3.4神经系统紊乱的治疗
本发明提供的促胰岛素肽缀合物和制剂可作为镇静剂使用。在本发明的一个方面，提供了使患有引起中枢或外周神经系统活跃性增加的异常的哺乳动物个体镇静的方法。所述方法包括向所述个体施用包含足以对该个体产生镇静或抗焦虑作用的量的本发明所述促胰岛素肽缀合物的药物制剂。所述药物制剂可以脑室内、口服、皮下、肌肉内或静脉内施用。此类方法可用于治疗或改善神经系统病症，例如焦虑、运动紊乱、敌对、精神错乱、惊厥、恐怖袭击、癔病和睡眠失调。
在相关的方面，本发明涵盖增加哺乳动物个体的活跃性的方法，包括向所述个体施用包含足以对该个体产生活跃作用的量的本发明所述促胰岛素肽缀合物的药物制剂。优选地，所述个体患有引起中枢或外周神经系统活跃性下降的病症。所述药物制剂可用于治疗促胰岛素肽相关疾病或病症。在某些实施方案中，所述药物制剂可用于治疗或改善抑郁症、分裂情感性障碍、睡眠呼吸中止、注意力缺陷综合症伴有注意力差、记忆丧失、健忘和猝睡症，这仅仅是列举若干唤醒中枢神经系统可能对其有利的病症。
本发明提供的促胰岛素肽缀合物和制剂还可用于诱发唤醒以治疗或缓解抑郁症、分裂情感性障碍、睡眠呼吸中止、注意力缺陷综合症伴有注意力差、记忆丧失、健忘和猝睡症。治疗的疗效可以借助个体采访，通过心理/神经测试评估其病症，或与这些病症相关的症状的缓解来进行监测。例如，猝睡症的治疗可通过监测猝睡的发作发生来评估。作为另一个实例，修饰的ITP对于个体注意力集中能力或记忆能力的作用，可利用本领域技术人员公知的任何多种诊断试验来测试。
5.3.5术后治疗
本发明提供的促胰岛素肽缀合物和制剂可用于术后治疗。个体在进行手术前约1-16小时、进行手术期间、以及手术之后不超过约5天的时期需要包含本发明所述缀合的促胰岛素肽的药物制剂。
所述药物制剂在手术开始之前约16小时至约1小时施用。手术之后至施用本发明所用化合物以便减小代谢效应和胰岛素耐受的时间长度取决于许多因素。这些因素一般是本领域普通医师已知的，并且最重要的是在手术之前的准备阶段所述个体是否空腹或被提供了葡萄糖输液或饮料，或一些其它形式的物质。其它重要的因素包括该个体的性别、体重和年龄、无力调节血糖的严重程度、无力调节血糖的潜在原因、手术所致创伤的预期严重程度、施用途径和生物利用度、体内的滞留、剂型、以及所施用化合物的效力。开始施用本发明所用的修饰的促胰岛素肽的优选时间段是手术开始前约1小时至约10小时。开始施用的最优选的时间阶段是手术开始前2小时至8小时。
一种特定类型的手术，即择期腹部手术之后的胰岛素耐受在术后第一天最为突出，持续至少5天，并且可能需要长达3周才恢复正常。因而，术后个体可能在手术创伤之后的一段时间内需要施用本发明的药物制剂，这将取决于本领域普通医师所理解和确定的因素。这些因素中包括在手术之后所述个体是否空腹或被提供了葡萄糖输液或饮料，或一些其它形式的物质，还有(但并非限制)，所述个体的性别、体重和年龄、任何无力调节血糖的严重程度、任何无力调节血糖的潜在原因、手术所致创伤的实际严重程度、施用途径和生物利用度、体内的滞留、剂型、以及所施用化合物的效力。施用本发明所用化合物的优选持续时间不超过术后5天。
5.3.6胰岛素耐受治疗
本发明提供的促胰岛素肽缀合物和制剂可用来治疗胰岛素耐受，这独立于其在术后治疗中的用途。胰岛素耐受可以因胰岛素与细胞表面受体的结合下降所致，或因细胞内代谢的改变所致。第一类特征在于胰岛素敏感性下降，一般可通过增加胰岛素浓度而纠正。第二类特征在于胰岛素反应性下降，不能通过大量胰岛素克服。创伤后的胰岛素耐受可通过与胰岛素耐受程度成比例剂量的胰岛素而纠正，因而显然是因胰岛素敏感性下降所致。
5.3.7治疗糖尿病或肥胖症而减少恶心
本发明提供的促胰岛素肽缀合物和制剂可用于治疗促胰岛素肽相关疾病或病症，同时减少恶心的副作用，例如2006年11月9日递交的、题为“Methodof Treatment of Diabetes and/ro Obesity with Reduced Nausea Effect(治疗糖尿病和/或肥胖症并减少恶心副作用的方法)”的美国专利申请号11/595,576(公开号2007/0207958)中所述，其整体通过引用并入本文。
5.3.8其它病症
本发明提供的促胰岛素肽缀合物和制剂可用于改变有此需要的个体的纤连蛋白浓度。本发明提供了降低有此需要的个体的纤连蛋白浓度的方法，所述方法包括向该个体施用有效量的本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂，从而降低该个体的纤连蛋白浓度。本发明提供了降低纤连蛋白水平升高的个体的纤连蛋白浓度的方法，所述方法包括向该个体施用有效量的本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂，从而降低该个体的纤连蛋白浓度。本发明提供了改善有此需要的个体的心血管风险特征的方法，包括向该个体施用有效量的本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂，并测量该个体纤连蛋白浓度的下降，从而改善该个体的心血管风险特征。本发明提供了改善纤连蛋白水平升高的个体的心血管风险特征的方法，包括向该个体施用有效量的本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂，并测量该个体纤连蛋白浓度的下降，由此改善该个体的心血管风险特征。本发明提供了治疗有此需要的个体的方法，包括向该个体施用有效量的本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂，而降低该个体的纤连蛋白浓度。本发明提供了治疗纤连蛋白水平升高的个体的方法，包括向该个体施用有效量的本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂，从而降低个体的纤连蛋白浓度。
本发明提供的促胰岛素肽缀合物和制剂可用于改变有此需要的个体的脂蛋白颗粒大小或亚类组成。本发明提供了使有此需要的个体的大LDL、大HDL、总HDL或任意组合的所述脂蛋白的浓度增加的方法，包括向所述个体施用有效量的本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂，由此增加所述个体的大LDL、大HDL、总HDL或任意组合的所述脂蛋白的浓度。本发明提供了使大LDL、大HDL、总HDL或任意组合的所述脂蛋白的浓度下降的个体的大LDL、大HDL、总HDL或任意组合的所述脂蛋白的浓度增加的方法，包括向所述个体施用有效量的本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂，从而增加该个体大LDL、大HDL、总HDL或任意组合的所述脂蛋白的浓度。本发明提供了使有此需要的个体的小LDL、极小LDL、总LDL或任意组合的所述脂蛋白的浓度降低的方法，包括向该个体施用有效量的本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂，从而降低小LDL的浓度。本发明提供了使小LDL、极小LDL、总LDL或任意组合的所述脂蛋白的水平升高的个体的小LDL、极小LDL、总LDL或任意组合的所述脂蛋白的浓度降低的方法，包括向该个体施用有效量的本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂，从而降低小LDL的浓度。本发明提供了改善有此需要的个体的心血管风险特征的方法，包括向该个体施用有效量的本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂，并测量大LDL、大HDL、总HDL或任意组合的所述脂蛋白的浓度的增加，从而改善该个体的心血管风险特征。本发明提供了改善大LDL、大HDL、总HDL或其任意组合的水平下降的个体的心血管风险特征的方法，包括向该个体施用有效量的本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂，并测量大LDL、大HDL、总HDL或任意组合的所述脂蛋白的浓度的增加，从而改善该个体的心血管风险特征。本发明提供了治疗小LDL、极小LDL或总LDL或任意组合的所述脂蛋白的水平升高的个体的方法，包括向该个体施用有效量的本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂，由此降低所述个体小LDL、极小LDL、总LDL或任意组合的所述脂蛋白的浓度。本发明提供了使有此需要的个体LDL或HDL平均颗粒大小增加的方法，包括向所述个体施用有效量的本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂，从而增加所述个体LDL或HDL的颗粒大小。本发明提供了使小LDL水平升高、HDL大水平下降、总HDL水平下降或其任意组合的个体的LDL或HDL平均颗粒大小增加的方法，包括向所述个体施用有效量的本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂，从而增加所述个体LDL或HDL的颗粒大小。
5.3.9施用剂量和频率
所述促胰岛素肽缀合物，例如促胰岛素肽缀合物制剂，可以按照本领域技术人员认为适宜的任何技术施用。例如，所述促胰岛素肽缀合物，例如促胰岛素肽缀合物制剂，可通过任何如下方式施用：(a)肠道，例如口服(经口)、直肠(例如，栓剂或灌肠剂的形式)、饲管(例如，胃管、十二指肠管、胃造口管)；(b)胃肠外，例如皮下、静脉内、肌肉内、皮内(进入皮肤本身)、经皮(透过皮肤例如完整皮肤扩散)、动脉内、腹膜内、心脏内(进入心脏)施用、骨内(进入骨髓)施用、鞘内(进入椎管)、经粘膜(透过粘膜扩散，例如吹药(鼻吸)、经鼻(例如鼻内)、舌下(舌头下面)、口颊(经面颊)、阴道、吸入(例如，肺部施用)；(c)表面；(d)硬膜外腔(注射或输注到硬膜外腔中)；和(e)玻璃体。每次施用的所述促胰岛素肽缀合物，例如促胰岛素肽缀合物制剂，可以快速浓注或输注。在优选实施方案中，皮下施用促胰岛素肽缀合物，例如促胰岛素肽缀合物制剂。在具体实施方案中，用针头，例如25号针头、26号针头、27号针头、28号针头、29号针头、30号针头、31号针头、32号针或33号针头或更高规格的针头，皮下施用促胰岛素肽缀合物，例如促胰岛素肽缀合物制剂。
所述促胰岛素肽缀合物，例如促胰岛素肽缀合物制剂的施用剂量和频率可以由本领域技术人员来确定。有效治疗紊乱或病症的促胰岛素肽缀合物的量会随着紊乱或病症的性质和严重程度、以及施用活性成分的途径而不同。频率和剂量也会根据每个个体特异的因素而不同，取决于紊乱或病症的严重程度，施用途径，以及个体的年龄、体重、反应和过去的病史。有效剂量可根据由体外或动物模型测试系统获得的剂量反应曲线而外推得到。
所述促胰岛素肽缀合物的示例性剂量包括每千克个体或样品体重毫克或微克量的促胰岛素肽缀合物(例如，约1mg/kg至约50mg/kg，例如约10mg/kg至约30mg/kg)。
在一些实施方案中，按照周施用方案在几周的时间内施用对特定个体可以有效实现所期望的治疗反应的剂量的所述促胰岛素肽缀合物，例如促胰岛素肽缀合物制剂。在一些实施方案中，可以每周一次施用促所述胰岛素肽缀合物，例如促胰岛素肽缀合物制剂(例如，作为单次剂量)。在一些实施方案中，可以每周两次施用所述促胰岛素肽缀合物，例如促胰岛素肽缀合物制剂(例如，作为两次相同或不同的剂量)。在其它实施方案中，可以每2、3、4、5或6天施用一次所述促胰岛素肽缀合物，例如促胰岛素肽缀合物制剂。在其它实施方案中，可以每8、9、10、11、12或13天施用一次所述促胰岛素肽缀合物，例如促胰岛素肽缀合物制剂。在其它实施方案中，可以每3、4、5、6、7或8天的时间施用两次所述促胰岛素肽缀合物，例如促胰岛素肽缀合物制剂。在其它实施方案中，可以每9、10、11、12、13或14天的时间施用两次所述促胰岛素肽缀合物，例如促胰岛素肽缀合物制剂。
在一些实施方案中，所述剂量每周施用一次或两次，且该剂量所含的促胰岛素肽缀合物的量为约1000μg至3000μg(例如，1025μg、1050μg、1075μg、1100μg、1125μg、1150μg、1175μg、1200μg、1225μg、1250μg、1275μg、1300μg、1325μg、1350μg、1375μg、H00μg、1425μg、1450μg、1475μg、1500μg、1525μg、1550μg、1575μg、1600μg、1625μg、1650μg、1675μg、1700μg、1725μg、1750μg、1775μg、1800μg、1825μg、1850μg、1875μg、1900μg、1925μg、1950μg、1975μg、2000μg、2025μg、2050μg、2075μg、2100μg、2125μg、2150μg、2175μg、2200μg、2225μg、2250μg、2275μg、2300μg、2325μg、2350μg、2375μg、2400μg、2425μg、2450μg、2475μg、2500μg、2525μg、2550μg、2575μg、2600μg、2625μg、2650μg、2675μg、2700μg、2725μg、2750μg、2775μg、2800μg、2825μg、2850μg、2875μg、2900μg、2925μg、2950μg或2975μg)，优选约1000μg至2750μg(例如，1025μg、1050μg、1075μg、1100μg、1125μg、1150μg、1175μg、1200μg、1225μg、1250μg、1275μg、1300μg、1325μg、1350μg、1375μg、1400μg、1425μg、1450μg、1475μg、1500μg、1525μg、1550μg、1575μg、1600μg、1625μg、1650μg、1675μg、1700μg、1725μg、1750μg、1775μg、1800μg、1825μg、1850μg、1875μg、1900μg、1925μg、1950μg、1975μg、2000μg、2025μg、2050μg、2075μg、2100μg、2125μg、2150μg、2175μg、2200μg、2225μg、2250μg、2275μg、2300μg、2325μg、2350μg、2375μg、2400μg、2425μg、2450μg、2475μg、2500μg、2525μg、2550μg、2575μg、2600μg、2625μg、2650μg、2675μg、2700μg或2725μg)，更优选约1000至2500μg(例如，1025μg、1050μg、1075μg、1100μg、1125μg、1150μg、1175μg、1200μg、1225μg、1250μg、1275μg、1300μg、1325μg、1350μg、1375μg、1400μg、1425μg、1450μg、1475μg、1500μg、1525μg、1550μg、1575μg、1600μg、1625μg、1650μg、1675μg、1700μg、1725μg、1750μg、1775μg、1800μg、1825μg、1850μg、1875μg、1900μg、1925μg、1950μg、1975μg、2000μg、2025μg、2050μg、2075μg、2100μg、2125μg、2150μg、2175μg、2200μg、2225μg、2250μg、2275μg、2300μg、2325μg、2350μg、2375μg、2400μg、2425μg、2450μg或2475μg)，最优选约1000μg至2000μg(例如，1025μg、1050μg、1075μg、1100μg、1125μg、1150μg、1175μg、1200μg、1225μg、1250μg、1275μg、1300μg、1325μg、1350μg、1375μg、1100μg、1425μg、1450μg、1475μg、1500μg、1525μg、1550μg、1575μg、1600μg、1625μg、1650μg、1675μg、1700μg、1725μg、1750μg、1775μg、1800μg、1825μg、1850μg、1875μg、1900μg、1925μg、1950μg或1975μg)的所述促胰岛素肽缀合物。在一些实施方案中，该剂量所含促胰岛素肽的量是1000μg至2000μg。在一些实施方案中，该剂量所含促胰岛素肽的量是1500μg至2000μg。
在某些实施方案中，周总剂量在所述周内施用一次，即每周一次，且周总剂量含1000μg或1500μg量的所述促胰岛素肽缀合物。在某些实施方案中，周总剂量每周施用一次，且该剂量含2000μg量的所述促胰岛素肽缀合物。在某些实施方案中，周总剂量在所述周内施用两次，即每周两次，且每次施用含1000μg量的所述促胰岛素肽缀合物，相当于周总剂量为2000μg。在某些实施方案中，周总剂量每周施用两次，且每次施用含1500μg量的所述促胰岛素肽缀合物，相当于周总剂量为3000μg。在某些实施方案中，周总剂量每周施用两次，且每次施用含1600μg量的所述促胰岛素肽缀合物，相当于周总剂量为3200μg。在某些实施方案中，周总剂量每周施用两次，且每次施用含1700μg量的所述促胰岛素肽缀合物，相当于周总剂量为3400μg。在某些实施方案中周总剂量每周施用两次，其中第一次施用含1500μg量的所述促胰岛素肽缀合物，而第二次施用含2000μg量的所述促胰岛素肽缀合物，相当于周总剂量为3500μg。在某些实施方案中，周总剂量每周施用两次，且每次施用含1750μg量的所述促胰岛素肽缀合物，相当于周总剂量为3500μg。在某些实施方案中，周总剂量每周施用两次，且每次施用含1800μg量的所述促胰岛素肽缀合物，相当于周总剂量为3600μg。在某些实施方案中，周总剂量每周施用两次，且每次施用含1900μg量的所述促胰岛素肽缀合物，相当于周总剂量为3800μg。在某些实施方案中，周总剂量每周施用两次，且每次施用含2000μg量的所述促胰岛素肽缀合物，相当于周总剂量4000μg。
在某些实施方案中，本发明所述的这些剂量或其它示例性剂量可以提供在递药装置中，以方便对个体施用所述剂量。可以使用本领域已知的任何递药装置。在具体实施方案中，递药装置是构造用于皮下递药的注射器，例如0.3、0.5、1、2、3或大于3ml、具有25、26、27、28、29、30、31、32、33或大于33号针头的注射器。
不同的治疗有效量的所述促胰岛素肽缀合物可以应用于不同的紊乱和病症，本领域普通技术人员将会容易地知晓这一点。
在某些实施方案中，可以重复施用本发明提供的促胰岛素肽缀合物，例如所述促胰岛素肽缀合物制剂，且施用可以相隔至少12小时、1天、36小时、2天、60小时、3天、84小时、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、4周、6周、2月、75天、3月或6月。在某些实施方案中，相隔3或4天、1周或2周重复施用所述促胰岛素肽缀合物，例如促胰岛素肽缀合物制剂。
在某些实施方案中，可以实施所述方法，且所述制剂可以作为一次剂量单次给予或长期给予。长期表示本发明的制剂对给定个体不止一次地施用。例如，长期施用可以基于每周、每两周、每月或更高频率或更低频率对个体施用多次剂量的制剂，这对本领域技术人员是显而易见的。如果根据本领域技术人员判断是合适的，长期施用可持续数周、数月或数年。此外，如果根据本领域技术人员判断，某些剂量显示出不可接受的耐受特征，例如次数频繁或严重的恶性和呕吐，则技术人员可减小剂量以减轻这样的特征。例如，本文所述的剂量可以从1500μg的剂量减至1000μg的剂量，或者2000μg的剂量可以减至1500μg的剂量。
在重复施用期间施用的所述促胰岛素肽缀合物的剂量可以保持不变，或者可以有所不同，例如相对于之前施用的所述促胰岛素肽缀合物剂量增加或减少。在某些实施方案中，在重复施用期间施用的所述促胰岛素肽缀合物的剂量保持不变。因而，在一些实施方案中，向个体施用1500μg周剂量的所述促胰岛素肽缀合物，且基于每周按1500μg/周重复施用。在其它实施方案中，向个体施用3000μg周剂量的所述促胰岛素肽缀合物，分两次1500μg的剂量递药，且基于每周按3000μg所述促胰岛素肽缀合物/周的周总剂量重复每周施用两次。在一些实施方案中，向个体施用2000μg剂量的所述促胰岛素肽缀合物，且基于每周按2000μg/周重复施用。在其它实施方案中，向个体施用4000μg周剂量的所述促胰岛素肽缀合物，分两次2000μg的剂量递药，且且基于每周按4000μg促胰岛素肽缀合物/周的周总剂量重复每周施用两次。在一些实施方案中，向个体施用3000μg剂量的所述促胰岛素肽缀合物，且基于每周按3000μg/周重复施用。
在其它实施方案中，在重复施用期间增加向个体施用的所述促胰岛素肽缀合物、例如所述促胰岛素肽缀合物制剂的剂量。例如，在具体实施方案中，第一时间阶段向个体施用1500μg初始周总剂量的所述促胰岛素肽缀合物，接着第二时间阶段向个体施用2000μg周总剂量的所述促胰岛素肽缀合物。在一些实施方案中，第一时间阶段是1、2、3、4、5、6、7、8或更多周。在具体实施方案中，第一时间阶段是4周，即剂量的增加始于第5周施用开始之际。在一些实施方案中，第二时间阶段是1、2、3、4、5、6、7、8或更多周。在具体实施方案中，长期施用周剂量(即，第二时间阶段是如本文所述的长期施用)。在另一实施方案中，向个体施用1500μg初始周总剂量的所述促胰岛素肽缀合物，为期4周，紧接着长期施用(始于第5周)2000μg周总剂量的所述促胰岛素肽缀合物。
在具体实施方案中，以所述次序按如下步骤施用所述促胰岛素肽缀合物，例如所述促胰岛素肽缀合物制剂剂量：(a)第一持续时间阶段向所述个体每周施用一次1.5mg所述促胰岛素肽缀合物；和(b)第二持续时间阶段向所述个体每周施用一次2.0mg所述促胰岛素肽缀合物。在一些实施方案中，第一持续时间阶段4周。在一些实施方案中，第二持续时间阶段8周。
在另一实施方案中，在向个体施用的所述促胰岛素肽缀合物，例如所述促胰岛素肽缀合物制剂的剂量在重复施用期间增加的情况下，在第一时间阶段以两次1500μg的剂量递送，向个体施用3000μg初始周总剂量的所述促胰岛素肽缀合物，接着在第二时间阶段以两次2000μg的剂量递送施用4000μg周总剂量的所述促胰岛素肽缀合物。在一些实施方案中，第一时间阶段是1、2、3、4、5、6、7、8或更多周。在具体实施方案中，第一时间阶段是4周，即剂量增加始于第5周施用开始之际。在一些实施方案中，第二时间阶段是1、2、3、4、5、6、7、8或更多周。在具体实施方案中，长期施用周剂量(即，第二时间阶段是如本文所述的长期施用)。在另一实施方案中，以两次1500μg的剂量递送，向个体施用3000μg初始周总剂量的所述促胰岛素肽缀合物，为期4周，紧接着以两次2000μg的剂量递送长期施用(始于第5周)4000μg周总剂量的所述促胰岛素肽缀合物。
在具体实施方案中，以所述次序按如下步骤向个体施用所述促胰岛素肽缀合物，例如所述促胰岛素肽缀合物制剂的剂量：(a)第一持续时间阶段向所述个体每周施用二次1.5mg所述促胰岛素肽缀合物；和(b)第二持续时间阶段向所述个体每周施用二次2.0mg所述促胰岛素肽缀合物。在一些实施方案中，第一持续时间阶段4周。在一些实施方案中，第二持续时间阶段8周。
在另一实施方案中，在向个体施用的所述促胰岛素肽缀合物，例如所述促胰岛素肽缀合物制剂的剂量在重复施用期间增加的情况下，在第一时间阶段向个体施用1500μg初始周总剂量的所述促胰岛素肽缀合物，接着在第二时间阶段施用2000μg周总剂量的所述促胰岛素肽缀合物，接着在第三时间阶段施用3000μg周总剂量的所述促胰岛素肽缀合物。在一些实施方案中，第一时间阶段是1、2、3、4、5、6、7、8或更多周，第二时间阶段是1、2、3、4、5、6、7、8或更多周。在具体实施方案中，第一时间阶段4周，第二时间阶段4周，即剂量的增加始于第5周和第9周施用开始之际。在具体实施方案中，第一时间阶段2周，第二时间阶段2周，即剂量的增加始于第3周和第5周施用开始之际。在一些实施方案中，第三时间阶段是1、2、3、4、5、6、7、8或更多周。在具体实施方案中，长期施用周剂量(即，第三时间阶段是如本文所述的长期施用)。在另一实施方案中，向个体施用1500μg初始周总剂量的所述促胰岛素肽缀合物，为期4周，紧接着施用(始于第5周)2000μg周总剂量的所述促胰岛素肽缀合物，为期4周，紧接着长期施用(始于第9周)3000μg周总剂量的所述促胰岛素肽缀合物。在另一实施方案中，向个体施用1500μg初始周总剂量的所述促胰岛素肽缀合物，为期2周，紧接着施用(始于第3周)2000μg周总剂量的所述促胰岛素肽缀合物，为期2周，紧接着长期施用(始于第5周)3000μg周总剂量的所述促胰岛素肽缀合物。
在具体实施方案中，以所述次序按如下步骤向个体施用所述促胰岛素肽缀合物，例如所述促胰岛素肽缀合物制剂的剂量：(a)第一持续时间阶段向所述个体每周施用一次1.5mg所述促胰岛素肽缀合物；(b)第二持续时间阶段向所述个体每周施用一次2.0mg所述促胰岛素肽缀合物；和(c)第三持续时间阶段向所述个体每周施用一次3.0mg所述促胰岛素肽缀合物。在一些实施方案中，第一持续时间阶段4周。在一些实施方案中，第二持续时间阶段8周。
在其它实施方案中，所述促胰岛素肽缀合物，例如所述促胰岛素肽缀合物制剂的剂量在重复施用期间降低。例如，在具体实施方案中，在第一时间阶段向所述个体每周施用二次1500μg，计3000μg周总剂量的所述促胰岛素肽缀合物，接着在第二时间阶段施用2000μg周总剂量的所述促胰岛素肽缀合物。在另一具体实施方案中，在第一时间阶段向所述个体每周施用二次1500μg，计3000μg周总剂量的所述促胰岛素肽缀合物，接着在第二时间阶段向所述个体每周施用二次1000μg，计2000μg周总剂量的所述促胰岛素肽缀合物。在一些实施方案中，第一时间阶段是1、2、3、4、5、6、7、8或更多周。在具体实施方案中，第一时间阶段4周。在一些实施方案中，第二时间阶段是1、2、3、4、5、6、7、8或更多周。在具体实施方案中，长期施用周剂量(即，第二时间阶段是如本文所述的长期施用)。
本文所述的有效量的所述促胰岛素肽缀合物将提供治疗益处而不会产生大的毒性。
所述促胰岛素肽缀合物的毒性可通过细胞培养或试验动物的标准药学方法来确定，例如，通过测定LD50(50％群体的致死剂量)或LD100(100％群体的致死剂量)来确定。毒性效应和治疗效应的剂量之比为治疗指数。优选治疗指数高的化合物。从这些细胞培养测定和动物研究获得的数据可用于配制人用无毒的剂量范围。本文所述化合物的剂量优选在循环浓度范围之内，包括很少或没有毒性的有效剂量。剂量可以取决于所采用的剂型和所利用的施用途径而在此范围内变化。确切的剂型、施用途径和剂量可由每个医师考虑个体的病症来选择(参见Fingl等，1996 The Pharmacological Basis ofTherapeutics，第9版，第2章第29页，Elliot M.Ross)。
5.3.9.1组合治疗的施用途径和剂量
所述促胰岛素肽缀合物，例如本文所述的促胰岛素肽缀合物制剂，以及一种或多种第二治疗剂可以基本上在相同的时间即同时施用，例如在同一小时或同一天内等施用；或在不同的时间交错施用，即相继地在施用另一抗糖尿病药之前或之后施用，例如在不同天、不同周等施用。因此本方法应理解为包括所有这样的同时或非同时治疗。在一些实施方案中，所述促胰岛素肽缀合物制剂在施用其它第二治疗剂的0.1、0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18或超过18小时之内施用。在一些实施方案中，所述促胰岛素肽缀合物制剂在施用其它第二治疗剂的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或超过14天之内施用。在一些实施方案中，所述促胰岛素肽缀合物制剂在施用第二治疗剂的1、2、3、4、5或超过5周之内施用。
在一些实施方案中，在本发明提供的组合治疗中，按照本发明提供的施用方案，例如间隔5、6、7、8或9天，或间隔12、13、14、15或16天，通过皮下注射向个体施用促胰岛素肽缀合物制剂。取决于待治疗的疾病和个体的病症，具体的一种或多种第二治疗剂可以通过口服、胃肠外(例如，肌肉内、腹膜内、静脉内、动脉内、脑室内(ICV)、枕大池注射或输注、皮下注射、或植入)、吸入喷雾、经鼻、阴道、直肠、舌下、或表面施用途径而施用，并且可以单独或一起配制成含适宜各施用途径的无毒药学上可接受的稀释剂、赋形剂或载体的适宜剂量单位制剂。当具体的第二治疗剂和所述促胰岛素肽缀合物分开施用时，它们可以通过不同的途径施用。
所述制剂可以在本领域技术人员认为适宜的任何注射部位施用。在某些实施方案中，所述制剂在腹部、大腿或手臂处施用。
所述制剂可以在本领域技术人员认为适宜的任何时间施用。在某些实施方案中，所述制剂在早上、餐前、或晚上睡前、或其组合方式来施用。
不过，应当理解，任何特定个体的具体剂量水平和施用频率可变化，这取决于多种因素，包括年龄、体重、整体健康、性别、饮食、施用方式和时间、排泄率、药物组合、具体并且的严重程度以及进行治疗的宿主。
在个体响应本发明提供的组合治疗中的一种或多种药剂而经历不良事件的情况下，例如，恶性、呕吐、注射相关的皮肤反应、低血糖即血糖水平60mg/dL(3.3mmol/L)伴有低血糖临床迹象，或任何其它体质症状或迹象，例如极端和快速的减重，可以根据本领域技术人员的判断来减小或调整一种或多种所述药剂的具体剂量水平和施用频率。
在本发明提供的组合治疗的具体实施方案中，个体接受所述促胰岛素肽缀合物和一种OAD，例如双胍，例如二甲双胍。在另一具体实施方案中，个体接受所述促胰岛素肽缀合物和两种OAD，例如双胍(例如二甲双胍)、磺酰脲或噻唑烷二酮，以及第二OAD。
5.4试剂盒
在另一实施方案中，本发明提供了可用于例如实施本文所述的治疗方法的试剂盒，其包含本发明的促胰岛素肽缀合物，例如所述促胰岛素肽缀合物制剂。例如，本发明提供了用于在有此需要的个体中治疗II型糖尿病的试剂盒。试剂盒包含在配发给本领域技术人员的包装之中的所述促胰岛素肽缀合物，例如所述促胰岛素肽缀合物制剂。所述试剂盒可以包括标签，或标记有关使用本发明所述促胰岛素肽缀合物的说明，例如施用所述促胰岛素肽缀合物，例如所述促胰岛素肽缀合物制剂以治疗个体的说明书，所述个体患有(或经历着)例如前期糖尿病(例如，糖耐量受损(IGT)或空腹血糖受损(IFG))；糖尿病，例如I型糖尿病或II型糖尿病；成人隐匿性自身免疫糖尿病(“LADA”)，也称为成人迟发性自身免疫糖尿病；迟发性I型糖尿病和1.5型糖尿病；类固醇诱发的糖尿病；人免疫缺陷病毒(HIV)治疗诱发的糖尿病；先天性或HIV相关脂肪营养不良个体的糖尿病发展(“脂肪再分布综合症”)；肥胖症(即，BMI为30kg/m2或更大)；超重(即，BMI为25kg/m2至30kg/m2)；代谢综合症(X综合症)；神经系统紊乱；外科手术；胰岛素耐受；无知觉低血糖症；限制性肺疾病；胃肠紊乱，例如肠易激综合症(IBS)、功能性消化不良；与胃肠紊乱相关的疼痛，例如与IBS和功能性消化不良相关的疼痛；炎症性肠病(IBD)，例如克罗恩病和溃疡性结肠炎；与IBD相关的疼痛；高血糖症，例如与外科手术(例如，大的外科手术，例如冠状动脉搭桥术)相关的高血糖症，例如与针对糖尿病(例如II型糖尿病、代谢综合症)个体的外科手术相关的高血糖症；冠状动脉心力衰竭(CHF)；与β细胞功能障碍相关的紊乱；与β细胞缺失相关的紊乱；与β细胞数量不足相关的紊乱；以及其它可用所述促胰岛素肽或促胰岛素肽缀合物治疗的病症。
试剂盒可以包括标签，或标记有关使用本发明所述促胰岛素肽缀合物的说明，例如施用所述促胰岛素肽缀合物，例如所述促胰岛素肽缀合物制剂以促进减重、刺激胰岛素合成和释放、增强脂肪、肌肉或肝组织对胰岛素摄入的敏感性、刺激葡萄糖吸收、减缓(例如，降低速率)消化过程如胃排空、阻断或抑制胰高血糖素分泌、促进β细胞功能、增殖和/或活性、恢复糖尿病个体的一期胰岛素释放、减少食物摄入、减小食欲、预防或防护肝病，例如与肥胖症、糖尿病或高血糖症(例如，非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH))相关的肝病的说明书。
标签上的说明可进一步包括如本发明所述促胰岛素肽缀合物储存条件的说明。
在某些实施方案中，所述试剂盒可以包括一个或多个容器，例如瓶、小瓶、安瓿、预填充式容器，例如预填充式注射器或预填充式注射笔，微芯片(例如，用于控制释放其内含物的微芯片)或试管，其含有单位剂量或多次剂量的所述促胰岛素肽缀合物，例如所述促胰岛素肽缀合物制剂。所述剂型可以作为液体或冻干制剂盛装。包含冻干剂型的试剂盒可进一步包括一个或多个的其它容器，其含有用于重构冻干制剂的稀释剂，从而使重构制剂中的蛋白质，即所述促胰岛素肽缀合物的浓度至少为1、2、3、4、5、10、20、30、40、50mg/ml，例如约1mg/ml至约100mg/ml，更优选约1mg/ml至约50mg/ml，最优选约1mg/ml至约15mg/ml。
所述试剂盒可进一步包括一种或多种可用于实施本发明所述的治疗方法其它组件，包括但不限于：缓冲液、过滤器、针头、注射器以及带有使用说明的包装插页。在具体实施方案中，所述试剂盒包括针头，例如25号针头、26号针头、27号针头、28号针头、29号针头、30号针头、31号针头、32号针或33号针头或更高规格的针头，用于例如向个体皮下施用所述促胰岛素肽缀合物制剂。在某些实施方案中，所述试剂盒可包括用于安全处理施用所述促胰岛素肽缀合物制剂的工具的组件，例如盛装用过的注射器和针头的利器容器。
在优选的实施方案中，所述试剂盒包括一个或多个预装了第一剂量所述促胰岛素肽缀合物，例如所述促胰岛素肽缀合物制剂的注射器，和一个或多个预装了第二更高剂量所述促胰岛素肽缀合物，例如所述促胰岛素肽缀合物制剂的注射器，用于例如在本发明所述施用方案的过程中向个体施用递增的剂量。在具体实施方案中，所述试剂盒包括1、2、3、4、5、6、7、8或超过8个预装第一剂量所述促胰岛素肽缀合物，例如所述促胰岛素肽缀合物制剂的注射器。在另一具体实施方案中，所述试剂盒包括1、2、3、4、5、6、7、8或超过8个预装第二更高剂量所述促胰岛素肽缀合物，例如所述促胰岛素肽缀合物制剂的注射器。
在一些实施方案中，预装了第一剂量的注射器包含约1000μg量的所述促胰岛素肽缀合物。在一些实施方案中，预装了第一剂量的注射器包含约1500μg量的所述促胰岛素肽缀合物。在一些实施方案中，预装了第二更高剂量的注射器包含约2000μg量的所述促胰岛素肽缀合物。
在其它实施方案中，试所述剂盒包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或超过10个空注射器，和1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或超过10个小瓶，其中每个小瓶含有1剂、2剂、3剂、4剂、5剂、6剂、7剂、8剂、9剂、10剂或超过10剂促胰岛素肽缀合物制剂。在其它实施方案中，所述试剂盒包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或超过10个预装有1剂、2剂、3剂、4剂、5剂、6剂、7剂、8剂、9剂、10剂或超过10剂所述促胰岛素肽缀合物制剂的注射器。在一些实施方案中，注射器包括锁紧套口、锁紧锥口或其它针头连接接头，以方便一次性针头的连接。在其它实施方案中，注射器包括永久的，即永久性针头。
在具体实施方案中，所述试剂盒包括笔式递药器械，和1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或超过10个可替换性内管，其中可替换性内管包含即预装有1剂、2剂、3剂、4剂、5剂、6剂、7剂、8剂、9剂、10剂或超过10剂所述促胰岛素肽缀合物制剂。在某些实施方案中，在笔式递药器械包含多次剂量的情况下，该剂量可以是预设的，即固定的。在其它实施方案中，所述剂量可以是灵活剂量，即由使用者装入。在具体实施方案中，所述试剂盒包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或超过10个预装有1剂、2剂、3剂、4剂、5剂、6剂、7剂、8剂、9剂、10剂或超过10剂所述促胰岛素肽缀合物制剂的笔式递药器械。在一些实施方案中，笔式递药器械包括锁紧套口、锁紧锥口或其它针头连接接头，以方便一次性针头的连接。在具体实施方案中，所述试剂盒包括一次性笔式递药器械。在其它实施方案中，笔式递药器械包括永久的，即永久性针头。在一些实施方案中，所述促胰岛素肽缀合物制剂包含10mM醋酸钠缓冲液中的10mg/ml艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2白蛋白缀合物，pH为5.0，所述缓冲液含5mM辛酸钠、0.1％(w/v)普朗尼克F68和150mM氯化钠。在其它实施方案中，所述促胰岛素肽缀合物制剂包含10mM磷酸钠缓冲液中的10mg/ml艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2白蛋白缀合物，pH为7.0，所述缓冲液含1.6mM辛酸钠、15mg/L聚山梨醇酯80和135mM氯化钠。
5.5促胰岛素肽缀合物
本发明涉及包含所述促胰岛素肽缀合物的药物制剂。可用的促胰岛素肽包括但不限于：GLP-1、艾塞那肽-3和艾塞那肽-4、以及它们的前体、衍生物和片段。此类促胰岛素肽包括美国专利号6,514,500；6,821,949；6,887,849；6,849,714；6,329,336；6,924,264；WO 03/103572和6,593,295中公开的那些，每一篇的内容都整体通过引用并入本文。
在优选的实施方案中，所述促胰岛素肽是C末端氨基化物(CO-NH2)。
在一些实施方案中，所述促胰岛素肽是GLP-1。在一些实施方案中，所述促胰岛素肽是GLP-1衍生物。在一些实施方案中，所述促胰岛素肽是艾塞那肽-3。在一些实施方案中，所述促胰岛素肽是艾塞那肽-3衍生物。在一些实施方案中，所述促胰岛素肽是艾塞那肽-4。在一些实施方案中，所述促胰岛素肽是艾塞那肽-4衍生物。在一些实施方案中，所述促胰岛素肽是艾塞那肽-4(1-39)-NH2。在一些实施方案中，所述促胰岛素肽是艾塞那肽-4(1-39)Lys40-NH2。
在优选的实施方案中，所述促胰岛素肽缀合物是艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2白蛋白缀合物。
5.5.1GLP-1及其衍生物
激素胰高血糖素可以根据任何本领域技术人员已知的方法来合成。在一些实施方案中，其作为高分子量前体分子合成，随之蛋白水解成3种肽：胰高血糖素、GLP-1、和胰高血糖素样肽2(GLP-2)。GLP-1的未加工形式具有37个氨基酸，如SEQ ID NO：1(HDEFERHAEG TFTSDVSSYL EGQAAKEFIAWLVKGRG)所示。未加工形式的GLP-1基本上不能介导胰岛素生物合成诱导。不过，未加工形式的GLP-1肽天然转化成SEQ ID NO：2所示的31个氨基酸长的肽(7-37肽)，其具有GLP-1(“GLP-1(7-37)”)的氨基酸7-37(HAEGTFTSDVSSYL EGQAAKEFIA WLVKGRG)。GLP-1(7-37)还可以进行其它加工，通过蛋白水解除去C-末端甘氨酸，从产生GLP-1(7-36)，其还主要以C-末端残基精氨酸氨基化为精氨酰胺的形式GLP-1(7-36)氨基化物存在。这种加工发生在肠内，胰腺中发生程度要小得多，产生GLP-1(7-37)具有促胰岛素活性的多肽。
如果一种化合物能够刺激胰岛素激素的合成或表达或引起该刺激，则认为该化合物具有“促胰岛素活性”。GLP-1(7-37)和GLP-1(7-36)的激素活性似乎对胰腺β细胞特异，其似乎在此处诱导胰岛素的生物合成。胰高血糖素样肽激素可用于研究成人发作型糖尿病的致病机理，这是一种以高血糖为特征、其中胰岛素分泌动力学异常的病症。而且，胰高血糖素样肽可用于这种疾病的治疗和处理，以及高血糖症的治疗和处理。
可以从人GLP-1确定的氨基酸序列中选择肽部分(片段)。可互换使用的术语“肽片段”和“肽部分”旨在包括可来自天然存在氨基酸序列的合成及天然存在的氨基酸序列。
GLP-1的氨基酸序列已经由若干研究人员报道过。参见Lopez，L.C.等，1983，Proc.Natl.Acad.Sci，USA 80：5485-5489；Bell，G.I.等，1983，Nature302：716-718；Heinrich，G.等，1984，Endocrinol.115：2176-2181。前原高血糖素(preproglucagon)mRNA的结构及其对应的氨基酸序列是公知的。已经表征了前体基因产物，即前高血糖素(proglucagon)向胰高血糖素和两种促胰岛素肽的蛋白水解加工。如本文所用，GLP-1(1-37)的概念是指具有1(N-末端)至37(C-末端)所有氨基酸的GLP-1多肽。与此类似，GLP-1(7-37)是指具有7(N-末端)至37(C-末端)所有氨基酸的GLP-1多肽。与此类似，GLP-1(7-36)是指具有1(N-末端)至36(C-末端)所有氨基酸的GLP-1多肽。
在一个实施方案中，GLP-1(7-36)及其肽片段通过如下文所述的常规方法合成，例如通过众所周知的固相肽合成法，如Merrifield，J.M.，1962，Chem.Soc.85：2149，以及Stewart和Young，Solid Phase Peptide Synthesis，Freeman，San Francisco，1969，27-66页所述，每一篇的内容都整体通过引用并入本文。不过，也有可能利用例如蛋白水解酶通过使天然存在的氨基酸序列片段化而获得前胰高血糖素多肽或GLP-1的片段。此外，有可能通过应用重组DNA技术而获得前胰高血糖素多肽或GLP-1的期望片段，如Maniatis，T.等，Molecular Biology：A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor，N.Y.，1982中所公开的那样，其整体通过引用并入本文。
可用于本文所述方法的肽包括衍生自GLP-1的那些肽，例如GLP-1(1-37)和GLP-1(7-36)。如果肽能够通过使天然存在的序列片段化、或能够基于对天然存在氨基酸序列或编码此序列的基因材料(DNA或RNA)的序列了解而合成，则认为该肽“可衍生自天然存在的氨基酸序列”。
同样有用的是被认为是GLP-1衍生物”的那些分子，例如GLP-1(1-37)，尤其是GLP-1(7-36)。此类“衍生物”具有如下特征：(1)其与GLP-1或GLP-1类似大小的片段享有基本的同源性；(2)其能够作为促胰岛素激素发挥作用；和(3)应用本发明提供的至少一种测定法，所述衍生物的促胰岛素活性至少为GLP-1促胰岛素活性的1％、5％、10％、25％、50％、75％、100％或大于100％。
如果GLP-1衍生物的氨基酸序列与GLP-1(1-37)享有至少80％、更优选至少90％、最优选至少95％的同一性，则认为该衍生物与GLP-1享有“基本的同源性”。在此上下文中，同一性百分比表示在对序列进行比对，并且如果必要引入空位以获得最大序列同源性百分比之后，候选序列中与肽中的对应氨基酸残基完全相同(即，比对中给定位置上的氨基酸残基是相同的残基)或相似(即，比对中给定位置上的氨基酸取代是保守取代，如上文所讨论的那样)的氨基酸残基百分比。在某些实施方案中，GLP-1衍生物以其与天然存在GLP-1序列的序列同一性百分比或序列相似性百分比进行表征。序列同源性，包括序列同一性和相似性百分比，利用本领域公知的序列比对技术来确定，优选利用经设计用于此目的的计算机算法，使用所述计算机算法或含所述算法的软件包的默认参数。
可用的衍生物还包括GLP-1片段，其除了含有基本上同源于天然存在GLP-1肽的序列之外，还可以在其氨基和/或其羧基末端、或在所述序列内部含有一个或多个其它氨基酸。因而，可用的衍生物包括可以含有天然存在GLP-1序列中可能不存在的一个或多个氨基酸的GLP-1多肽片段，条件是此类多肽的促胰岛素活性至少为GLP-1促胰岛素活性的1％、5％、10％、25％、50％、75％、100％或大于100％。其它氨基酸可以是D-氨基酸或L-氨基酸或其组合。
可用的GLP-1片段还包括那些虽然含有基本上与天然存在GLP-1肽的序列同源，但是在其氨基和/或其羧基末端缺少天然GLP-1肽中的一个或多个其它氨基酸。因而，可用的GLP-1多肽片段可以缺少天然存在GLP-1序列中正常存在的一个或多个氨基酸，条件是此类多肽的促胰岛素活性至少为GLP-1促胰岛素活性的1％、5％、10％、25％、50％、75％、100％或大于100％。在某些实施方案中，所述多肽片段缺少天然存在GLP-1序列中正常存在的一个氨基酸。在一些实施方案中，所述多肽片段缺少天然存在GLP-1序列中正常存在的两个氨基酸。在一些实施方案中，多所述肽片段缺少天然存在GLP-1序列中正常存在的三个氨基酸。在一些实施方案中，所述多肽片段缺少天然存在GLP-1序列中正常存在的四个氨基酸。
同样有用的是上述片段的明显或细微变体，其具有序列中的氨基酸取代(因而具有不同于天然序列的氨基酸序列)，条件是此类变体的促胰岛素活性与上述GLP-1衍生物基本上完全相同。明显或细微取代的实例包括用一个碱性残基取代另一个(即Arg取代Lys)，用一个疏水残基取代另一个(即Leu取代Ile)，或用一个芳族残基取代另一个(即Phe取代Tyr)，等等。
除了那些具有促胰岛素活性的GLP-1衍生物，刺激细胞吸收葡萄糖但不刺激胰岛素表达或分泌的GLP-1衍生物也可用于本发明所述的方法。此类GLP-1衍生物在美国专利号5,574,008中公开，其整体通过引用并入本文。
能够在本文所述方法中使用的刺激细胞吸收葡萄糖但不刺激胰岛素表达或分泌的GLP-1衍生物包括：
H2N-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Xaa-Gly-Arg-R2(SEQ ID NO：3)；
H2N-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Xaa-Gly-Arg-R2(SEQ ID NO：4)；
H2N-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Xaa-Gly-Arg-R2(SEQ ID NO：5)；
H2N-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Xaa-Gly-Arg-R2(SEQ ID NO：6)；
H2N-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Xaa-Gly-Arg-R2(SEQ ID NO：7)；
H2N-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Xaa-Gly-Arg-R2(SEQ ID NO：8)；
H2N-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Xaa-Gly-Arg-R2(SEQ ID NO：9)；
H2N-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Xaa-Gly-Arg-R2(SEQ ID NO：1O)；
H2N-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Xaa-Gly-Arg-R2(SEQ ID NO：11)；
H2N-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Xaa-Gly-Arg-R2(SEQ ID NO：12)；
H2N-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Xaa-Gly-Arg-R2(SEQ IDNO：13)；
H2N-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Xaa-Gly-Arg-R2(SEQ IDNO：14)；and
H2N-His-D-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Xaa-Gly-Arg-R2(SEQID NO：15).
这些肽是C-末端GLP-1片段，它们不具有促胰岛素活性，但仍然可用于治疗糖尿病和高血压病症，如美国专利号5,574,008中所述，其整体通过引用并入本文。
能够用于本发明所述制剂和方法的其它GLP-1衍生物包括GLP-1/艾塞那肽-4杂合肽，其含有与艾塞那肽-4的9个C-末端氨基酸融合的GLP-1(7-36)，其序列为HAEG TFTSDVSSYL EGQAAKEFIA WLVKGRPSSGAPPPS(SEQ ID NO：28)。
同样可用于本发明所述制剂和方法的是含有以下融合蛋白分子的GLP-1衍生物：[Gly8]GLP-1(7-36)-[Gly8]GLP-1(7-36)-人血清白蛋白(albiglutide)，如美国专利号7,141,547中所述，其整体通过引用并入本文。
能够用于本发明所述制剂和方法的其它GLP-1衍生物包括如下GLP-1融合蛋白分子：GLP-1(7-36)-人血清白蛋白；人血清白蛋白-GLP-1(7-36)；[Gly8]GLP-1(7-36)-人血清白蛋白；人血清白蛋白-[Gly8]GLP-1(7-36)；GLP-1(7-36)-GLP-1(7-36)-人血清白蛋白；GLP-1(9-36)-人血清白蛋白；和[Gly8]GLP-1(7-36)-GLP-1(7-36)-人血清白蛋白，如美国专利号7,141,547中所述，其整体通过引用并入本文。
能够用于本发明所述制剂和方法的其它GLP-1衍生物包括GLP-1/艾塞那肽-4/人血清白蛋白杂合多肽，其含有[Gly8][Glu22]GLP-1(7-36)，与艾塞那肽-4(1-39)的8个C-末端氨基酸融合，与接头序列融合，与人血清白蛋白融合，具有序列：
HGEGTFTSDV SSYLEEQAAK EFIAWLVKGR GSSGAPPPSG
GGGGSGGGGS GGGGSDAHKS EVAHRFKDLG EENFKALVLI AFAQYLQQCP
FEDHVKLVNE VTEFAKTCVA DESAENCDKS LHTLFGDKLC TVATLRETYG
EMADCCAKQE PERNECFLQH KDDNPNLPRL VRPEVDVMCT AFHDNEETFL
KKYLYEIARR HPYFYAPELL FFAKRYKAAF TECCQAADKA ACLLPKLDEL
RDEGKASSAK QRLKCASLQK FGERAFKAWA VARLSQRFPK AEFAEVSKLV
TDLTKVHTEC CHGDLLECAD DRADLAKYIC ENQDSISSKL KECCEKPLLE
KSHCIAEVEN DEMPADLPSL AADFVESKDV CKNYAEAKDV FLGMFLYEYA
RRHPDYSVVL LLRLAKTYET TLEKCCAAAD PHECYAKVFD EFKPLVEEPQ
NLIKQNCELF EQLGEYKFQN ALLVRYTKKV PQVSTPTLVE VSRNLGKVGS
KCCKHPEAKR MPCAEDYLSV VLNQLCVLHE KTPVSDRVTK CCTESLVNRR
PCFSALEVDE TYVPKEFNAE TFTFHADICT LSEKERQIKK QTALVELVKH
KPKATKEQLK AVMDDFAAFV EKCCKADDKE TCFAEEGKKL VAASQAALGL
(SEQ ID NO：29)，如美国专利号7,271,149中所述，其整体通过引用并入本文
5.5.2艾塞那肽-3和艾塞那肽-4以及衍生物
艾塞那肽-3和艾塞那肽-4是39个氨基酸的肽(残基2和3不同)，其与GLP-1大约53％同源，能用作促胰岛素药。
艾塞那肽-3的氨基酸序列是：
HSDGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGG PSSGAPPPS(SEQ ID NO：16)，
艾塞那肽-4的氨基酸序列是：
HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS(SEQ ID NO：17)。
同样可用于本发明所述制剂的是艾塞那肽-4的促胰岛素片段，其含有氨基酸序列：艾塞那肽-4(1-31)desGlu17Tyr32(SEQ ID NO：18)HGEGTFTSDLSKQMEEAVRLFIEWLKNGGPY和艾塞那肽-4(1-30)Tyr31(SEQ ID NO：19)HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGY。
同样有用的是天然艾塞那肽-4的的抑制性片段，含有氨基酸序列：艾塞那肽-4(9-39)(SEQ ID NO：20)DLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS。
其它示例性促胰岛素肽如EQ ID NO：21-27所示。
  HDEFERHAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRK   SEQ ID NO：21
  HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRK   SEQ ID NO：22
  HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK   SEQ ID NO：23
  HSDGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK   SEQ ID NO：24
  HGEGTFTSDLSKEMEEEVRLFIEWLKNGGPY   SEQ ID NO：25
  HGEGTFTSDLSKEMEEEVRLFIEWLKNGGY   SEQ ID NO：26
  DLSKQMEEEAVRLFIEWLKGGPSSGPPPS   SEQ ID NO：27
可用于本发明所述制剂的肽包括可衍生自天然存在的艾塞那肽-3和艾塞那肽-4的肽。如果肽能够通过使天然存在的序列片段化，或能够基于对天然存在氨基酸序列或编码此序列的基因材料(DNA或RNA)的序列了解而合成，则认为该肽“可衍生自天然存在的氨基酸序列”。
可用于本发明所述制剂的分子还包括认为是艾塞那肽-3和艾塞那肽-4衍生物”的那些分子。在本发明的一个实施方案中，所述“衍生物”具有如下特征：(1)其与艾塞那肽-3或艾塞那肽-4或者艾塞那肽-3或艾塞那肽-4类似大小的片段享有基本的同源性；(2)其能够作为促胰岛素激素发挥作用；和(3)应用本发明提供的至少一种测定法，所述衍生物的促胰岛素活性至少为艾塞那肽-3或艾塞那肽-4促胰岛素活性的1％、5％、10％、25％、50％、75％、100％或大于100％。
如果艾塞那肽-3或艾塞那肽-4衍生物的氨基酸序列与艾塞那肽-3和艾塞那肽-4享有至少80％、更优选至少90％、最优选至少95％的同一性，则认为该衍生物与艾塞那肽-3和艾塞那肽-4享有“基本的同源性”。在此上下文中，同一性百分比表示在对序列进行比对，并且如果必要引入空位以获得最大序列同源性百分比之后，候选序列中与肽中的对应氨基酸残基完全相同(即，比对中给定位置上的氨基酸残基是相同的残基)或相似(即，比对中给定位置上的氨基酸取代是保守取代，如上文所讨论的那样)的氨基酸残基百分比。在某些实施方案中，艾塞那肽-3或艾塞那肽-4衍生物以其与天然存在艾塞那肽-3或艾塞那肽-4序列的序列同一性百分比或序列相似性百分比进行表征。序列同源性，包括序列同一性和相似性百分比，利用本领域公知的序列比对技术来确定，优选利用被设计用于此目的的计算机算法，使用所述计算机算法或含所述算法的软件包的默认参数。
可用的衍生物还包括艾塞那肽-3或艾塞那肽-4片段，其除了含有基本上与天然存在的艾塞那肽-3或艾塞那肽-4同源的序列之外，还可以在其氨基和/或其羧基末端，或在所述序列内部含有一个或多个其它氨基酸。因而，可用的衍生物包括可以含有天然存在艾塞那肽-3或艾塞那肽-4序列中可能不存在的一个或多个氨基酸的艾塞那肽-3或艾塞那肽-4多肽片段，条件是此类多肽的促胰岛素活性至少为艾塞那肽-3或艾塞那肽-4促胰岛素活性的1％、5％、10％、25％、50％、75％、100％或大于100％。
与此类似，可用的艾塞那肽-3或艾塞那肽-4片段包括虽然含有基本上与天然存在的艾塞那肽-3或艾塞那肽-4同源的序列，但是在其氨基和/或其羧基末端缺少艾塞那肽-3或艾塞那肽-4中天然见到的一个或多个其它氨基酸。因而，可用的艾塞那肽-3或艾塞那肽-4多肽片段可以缺少天然存在艾塞那肽-3或艾塞那肽-4序列中正常存在的一个或多个氨基酸，条件是此类多肽的促胰岛素活性至少为艾塞那肽-3或艾塞那肽-4促胰岛素活性的1％、5％、10％、25％、50％、75％、100％或大于100％。
可用的衍生物还包括艾塞那肽-3或艾塞那肽-4的片段，若非其添加、缺失或取代了不超过5、4、3、2或1个氨基酸，会在序列上与天然存在的艾塞那肽-3或艾塞那肽-4完全相同。在某些实施方案中，所述衍生物相对于天然艾塞那肽-3或艾塞那肽-4序列含有不超过5个、不超过4个、不超过3个、不超过2个或不超过1个的氨基酸添加、缺失或取代。因而，可用的衍生物包括艾塞那肽-3或艾塞那肽-4的多肽片段，若非其相对于天然艾塞那肽-3或艾塞那肽-4序列添加、缺失或取代了不超过5、4、3、2或1个氨基酸，会与之完全相同，条件是此类多肽的促胰岛素活性至少为艾塞那肽-3或艾塞那肽-4促胰岛素活性的1％、5％、10％、25％、50％、75％、100％或大于100％。
可用的衍生物还包括上述片段的保守变体，其具有序列中的氨基酸取代(因而具有不同于天然序列的氨基酸序列)，条件是此类变体仍然具有促胰岛素活性。保守取代的实例包括用一个碱性残基取代另一个(即Arg取代Lys)，用一个疏水残基取代另一个(即Leu取代Ile)，或用一个芳族残基取代另一个(即Phe取代Tyr)，等等。如下6组中的每个氨基酸都是另一个的保守取代：
丙氨酸(A)、丝氨酸(S)和苏氨酸(T)
天冬氨酸(D)和谷氨酸(E)
天冬酰胺(N)和谷氨酰胺(Q)
精氨酸(R)和赖氨酸(K)
异亮氨酸(I)、亮氨酸(L)、甲硫氨酸(M)和缬氨酸(V)
苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)和色氨酸(W)
同样可用于本发明所述制剂和方法的是包含如下融合蛋白分子的艾塞那肽-4衍生物：艾塞那肽-4(1-39)-人血清白蛋白以及人血清白蛋白-艾塞那肽-4(1-39)，如美国专利号7,141,547或7,271,149中所述，每一篇的内容都整体通过引用并入本文。
5.5.3促胰岛素肽与白蛋白的缀合物
可用的本发明所述药物制剂的促胰岛素肽缀合物包括与白蛋白缀合的促胰岛素肽及其衍生物。可利用若干方法使促胰岛素肽与白蛋白连接。在某些实施方案中，促胰岛素肽根据任何本领域技术人员已知的技术与白蛋白连接。在一些实施方案中，修饰促胰岛素肽，以纳入能够与白蛋白上可利用的反应官能团反应的反应基团。
选择能与白蛋白形成稳定共价键的反应基团，例如，通过与血清蛋白质或肽上的一个或多个氨基、羟基或巯基反应来选择。优选地，所述反应基团仅与白蛋白上的一个氨基、羟基或巯基反应。优选地，所述反应基团与白蛋白上的特定氨基、羟基或巯基反应。可用的本发明所述方法的缀合物包括修饰的肽或其修饰的衍生物，其借助于反应基团与白蛋白上的氨基、羟基或巯基之间的反应而共价连接于白蛋白。因而，可用的缀合物包括修饰的肽或其修饰的衍生物，其中所述反应基团已经与白蛋白形成了共价键。
为与蛋白质上的官能团形成共价键，可以使用多种活性羧基，特别是酯作为化学反应基团。虽然在这些连接试剂中可以采用多个不同的羟基，但最便利的是N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)、N-羟基-硫代琥珀酰亚胺(硫代NHS)、马来酰亚胺苯甲酸琥珀酰亚(MBS)、γ-马来酰亚胺基-丁酸琥珀酰亚胺酯(GMBS)和3-马来酰亚胺基丙酸(3-MPA)。
伯胺是NHS酯的主要靶标。蛋白质N-末端上存在的可及ε-氨基与NHS酯反应。然而，可能不期望或不能用蛋白质上的ε-氨基偶联NHS。虽然有五种氨基酸侧链中具有氮原子，但仅赖氨酸的ε-氨基与NHS酯显著反应。当NHS酯缀合反应与伯胺反应释放的N-羟基琥珀酰亚胺反应时可以形成酰胺键。这些含琥珀酰亚胺的反应基团在这里被称作琥珀酰亚胺基。
在具体实施方案中，白蛋白上的官能团是位于氨基酸残基34(Cys34)上的单个游离巯基，而化学反应基团是含马来酰亚胺基基团如(GMBA或MPA)。GMBA代表γ-马来酰亚胺基-丁酰胺。此类含马来酰亚胺的基团在本文称作马来酰亚胺基。
在一些实施方案中，白蛋白与促胰岛素肽上的琥珀酰亚胺基或马来酰亚胺基共价连接。在一些实施方案中，白蛋白的氨基、羟基或巯基与促胰岛素肽上的琥珀酰亚胺基或马来酰亚胺基共价连接。在一些实施方案中，白蛋白半胱氨酸34巯基与位于促胰岛素肽赖氨酸上的[2-[2-[2-马来酰亚胺基丙酰胺基(乙氧基)乙氧基]乙酸接头共价连接。
在具体的实施方案中，所述反应基团是任选地通过连接基团与肽上单个限定氨基酸相连的单个MPA反应基团，且MPA基本是在白蛋白的单个氨基酸残基，优选半胱氨酸34处与白蛋白共价连接。在优选的实施方案中，白蛋白是重组人白蛋白。在某些实施方案中，反应基团，优选MPA，通过一个或多个连接接团，优选AEEA、AEA或氨基辛酸，更尤其是8-氨基辛酸而与肽相连。在反应基团(优选MPA)通过一个以上的连接基团与肽相连的实施方案的某些实例中，每个连接基团可以优选独立地选自下组：AEA((2-氨基)乙氧基乙酸)、AEEA([2-(2-氨基)乙氧基)]乙氧基乙酸)、以及氨基辛酸、更尤其是8-氨基辛酸。在一个实施方案中，反应基团，优选MPA，借助串联排列的1、2、3、4、5或6个AEEA连接基团与肽相连。在另一实施方案中，反应基团，优选MPA，借助串联排列的1、2、3、4、5或6个8-氨基辛酸连接基团与肽相连。
在某些实施方案中，反应基团可以与促胰岛素肽上适于此类反应基团连接的任何残基连接。所述残基可以是肽的末端或内部残基。在某些实施方案中，反应基团可以与肽的羧基末端或氨基末端连接。在有利的实施方案中，反应基团与肽的单个位点连接。这可以利用本领域技术人员已知的保护基团来实现。在某些实施方案中，促胰岛素肽衍生物可以含有掺入用来连接反应基团的残基。可用于连接的残基包括但不限于：赖氨酸、天冬酰胺和谷氨酰胺残基。残基可以掺入在肽的内部或末端。在某些实施方案中，反应基团与内部赖氨酸残基连接。在某些实施方案中，反应基团与末端赖氨酸残基连接。在某些实施方案中，反应基团与氨基末端赖氨酸残基连接。在某些实施方案中，反应基团与羧基末端赖氨酸残基，例如，位于GLP-1、GLP-1(7-37)或艾塞那肽-4羧基末端的赖氨酸残基连接。
用反应基团修饰促胰岛素肽以与白蛋白缀合的方式变化多样，这取决于包括促胰岛素肽在内的多个要素的性质。选择简单、确保高产、并得到高度纯化产物的合成方法。通常，在促胰岛素肽合成的最后阶段生成化学反应基团，例如，羧基酯化以形成活性酯。产生修饰的促胰岛素肽的具体方法在美国专利号6,329,336、6,849,714或6,887,849中描述，每一篇的内容都整体通过引用并入本文。
促胰岛素肽缀合物还可以是非特异性地与白蛋白缀合。一般采用与氨基键合，特别是形成非特异性缀合的酰胺键。为形成这样的价键，可以使用多种活性羧基，尤其是酯作为化学反应基团与促胰岛素肽偶联。虽然在这些连接试剂中可以采用多个不同的羟基，但最便利的是N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和N-羟基-硫代琥珀酰亚胺(硫代NHS)。其它可以利用的连接试剂在美国专利号5,612,034中描述，其整体通过引用并入本文。
在一些实施方案中，促胰岛素肽缀合物可以包含白蛋白融合蛋白，即与促胰岛素肽融合的白蛋白分子、或其片段或变体。白蛋白融合蛋白可以通过核酸翻译而生成，所述核酸包含编码全部或部分治疗性蛋白的多核苷酸，该多核苷酸与编码全部或部分白蛋白的多核苷酸连接。在一些实施方案中，白蛋白融合蛋白包含白蛋白或其片段或变体，其与胰高血糖素样肽1融合，如美国专利号7,141,547或7,271,149中所述，其在此整体通过参考引入本文。在一些实施方案中，白蛋白融合蛋白包含白蛋白或其片段或变体，其与艾塞那肽-3或其片段或变体融合。在一些实施方案中，白蛋白融合蛋白包含白蛋白或其片段或变体，其与艾塞那肽-4或其片段或变体融合。在一些实施方案中，白蛋白融合蛋白是[Gly8]GLP-1(7-36)-[Gly8]GLP-1(7-36)-人血清白蛋白(albiglutide)，如美国专利号7,141,547或7,271,149中所述。
5.5.4促胰岛素肽合成
促胰岛素肽可通过本领域普通技术人员已知的固相肽化学标准方法来合成。例如，促胰岛素肽片段可以通过固相化学技术，按照Steward和Young(Steward，J.M.and Young，J.D.，1984，Solid Phase Peptide Synthesis，第二版(Pierce Chemical Company，Rockford，111.)所述的方法利用生物系统合成仪来合成。与此类似，可以合成多个片段，然后连接在一起以形成更大的片段。这些合成肽片段还可以具有特定位置上的氨基酸取代。关于固相肽合成法，许多技术的综述可见J.M.Stewart和J.D.Young，1963，Solid Phase PeptideSynthesis.(W.H.Freeman Co.，San Francisco)，以及J.Meienhofer，1973，Hormonal Proteins and Peptides，第2卷，第46页，Academic Press，New York)。关于经典溶液合成法，参见G.Schroder和K.Lupke，The Peptides，第1卷(Academic Press，New York)。在一些实施方案中，促胰岛素肽的合成如美国专利号6,329,336、6,849,714或6,887,849中所述，每一篇的内容都整体通过引用并入本文。
5.5.5缀合
优选地，缀合物中的肽和白蛋白以1∶1的摩尔比或接近1：1的摩尔比存在。在优选的实施方案中，缀合物中的肽和白蛋白以1∶1的摩尔比或接近1∶1的摩尔比存在，且肽任选地通过连接基团，基本上仅在肽的一个位点上与反应基团相连，而反应基团基本是仅在白蛋白的一个位点上与白蛋白相连。
优选地，肽缀合物中的白蛋白是人血清白蛋白。优选地，反应基团与白蛋白的单个连接位点优选是白蛋白半胱氨酸34的巯基(例如，借助于马来酰亚胺键)。在具体实施方案中，反应基团是单个MPA反应基团，其任选地通过连接基团在单个限定的氨基酸处与肽相连，且MPA基本上在白蛋白的单个氨基酸残基，优选半胱氨酸34处与白蛋白共价相连。
在优选的实施方案中，缀合物通过使修饰的含马来酰亚胺基的肽与含巯基的血清蛋白(优选白蛋白)在pH 3.0-8.0的条件下接触而形成，由此优选形成稳定的硫酯键，其在生理条件下不能切断。在优选实施方案中，血清蛋白是重组人白蛋白。
在一个实施方案中，缀合物中修饰的肽其在C-末端酰胺化。在另一实施方案中，修饰的肽C-末端未酰胺化。缀合物也可以包含此类酰胺化的肽。
在优选的实施方案中，单个反应基团共价连接于修饰的肽的限定位点。在缀合物优选的实施方案中，单个反应基团共价连接于修饰的肽的限定位点，且反应基团共价连接于白蛋白的单个限定位点，优选白蛋白氨基酸残基Cys34的巯基。优选地，本发明修饰的肽或缀合物的反应基团包含马来酰亚胺基，并以大约1∶1的摩尔比形成肽：白蛋白缀合物。在某些实施方案中，1∶1摩尔比的肽：血清蛋白与较高比值相比更为优选，因为1∶1的摩尔比提供比较高比值更佳的生物活性和更低的免疫原性(参见例如Stehle等1997 Anti-CancerDrugs 8：677-685，其整体通过引用并入本文)。
在优选的实施方案中，白蛋白是重组人白蛋白。生产预形成的肽：白蛋白缀合物的具体方法在2006年4月11日递交的题为“Process for the Productionof Preformed Conjugate of Recombinant Albumin(生产预形成的重组白蛋白缀合物的方法)”的美国临时申请号60/791,241以及2006年12月22日递交的题为“Process for the Production of Preformed Conjugate of Albumin and aTherapeutic Agent(生产预形成的白蛋白与治疗剂的缀合物的方法)”的美国专利申请号11/645,297(公开号2007/0269863)中描述，每一篇的内容都整体通过引用并入本文。纯化肽：白蛋白缀合物的具体方法在美国专利申请公开号2005/0267293中描述，其整体通过引用并入本文。
在某些实施方案中，缀合物如下：
(SEQ ID NO：31)，
其中X是所述蛋白质氨基酸的S、O或NH。在某些实施方案中，所述蛋白质是白蛋白。在某些实施方案中，所述蛋白质是白蛋白，而X是所述白蛋白Cys 34的S(硫原子)。缀合物的白蛋白可以是如上文所述的任何白蛋白。
在某些实施方案中，缀合物如下：
Figure BPA00001197230100981
(SEQ ID NO：32)，
其中X是所述蛋白质氨基酸的S、O或NH。在某些实施方案中，所述蛋白质是白蛋白。在某些实施方案中，所述蛋白质是白蛋白且X是所述白蛋白Cys 34的S(硫原子)。缀合物的白蛋白可以是如下文所述的任何白蛋白。
5.5.5.1白蛋白
任何本领域技术人员已知的白蛋白均可用来形成本文所述制剂的促胰岛素肽缀合物。在一些实施方案中，白蛋白可以是从宿主物种中分离和纯化以用于形成缀合物的血清白蛋白。血清白蛋白可以是任何本领域技术人员已知的哺乳动物血清白蛋白，包括但不限于：小鼠、大鼠、兔、豚鼠、狗、猫、绵羊、牛、绵羊、马或人血清白蛋白。在一些实施方案中，白蛋白是人血清白蛋白。在一些实施方案中，白蛋白是牛血清白蛋白。
人血清白蛋白(HSA)形成显著比例的血清渗透压，并且还作为内源和外源配体的载体发挥作用。成熟形式的HAS是585个氨基酸的非糖基化单体蛋白质，对应分子量约66kD。其球形结构由17个二硫桥维持，形成了连续9个一系列双环。参见Brown，J.R.，Albumin Structure，Function and Uses，Rosenoer，V.M.等(编辑)，Pergamon Press，Oxford(1977)，其整体通过引用并入本文。天然的成熟人血清白蛋白序列为：
DAHKSE VAHRFKDLGE ENFKALVLIA FAQYLQQCPF EDHVKLVNEV
TEFAKTCVAD ESAENCDKSL HTLFGDKLCT VATLRETYGE MADCCAKQEP
ERNECFLQHK DDNPNLPRLV RPEVDVMCTA FHDNEETFLK KYLYEIARRH
PYFYAPELLF FAKRYKAAFT ECCQAADKAA CLLPKLDELR DEGKASSAKQ
RLKCASLQKF GERAFKAWAV ARLSQRFPKA EFAEVSKLVT DLTKVHTECC
HGDLLECADD RADLAKYICE NQDSISSKLK ECCEKPLLEK SHCIAEVEND
EMPADLPSLA ADFVESKDVC KNYAEAKDVF LGMFLYEYAR RHPDYSVVLL
LRLAKTYETT LEKCCAAADP HECYAKVFDE FKPLVEEPQN LIKQNCELFE
QLGEYKFQNA LLVRYTKKVP QVSTPTLVEV SRNLGKVGSK CCKHPEAKRM
PCAEDYLSVV LNQLCVLHEK TPVSDRVTKC CTESLVNRRP CFSALEVDET
YVPKEFNAET FTFHADICTL SEKERQIKKQ TALVELVKHK PKATKEQLKA
VMDDFAAFVE KCCKADDKET CFAEEGKKLV AASQAALGL(SEQ ID NO.30)
因而，与天然形式白蛋白形成的缀合物落在本文所述方法的范围之内。除非另有说明，本文述及的白蛋白旨在表示成熟形式的白蛋白。
在一些实施方案中，白蛋白是重组血清白蛋白。重组白蛋白可以是任何本领域技术人员已知的哺乳动物白蛋白，包括但不限于：小鼠、大鼠、兔、豚鼠、狗、猫、绵羊、牛、绵羊、马或人白蛋白。在优选的实施方案中，重组白蛋白是重组人白蛋白，特别是重组人白蛋白(rHA)。在多个实施方案中，rHA可以在哺乳动物或非哺乳动物生物体中生产。在一个实施方案中，rHA在非哺乳动物生物体中生产。可用于生产rHA的非哺乳动物生物体的实例包括但不限于酵母、细菌、植物、真菌和昆虫。在一个实施方案中，rHA在完整植物或完整真菌中生产。在另一实施方案中，rHA在培养的植物细胞、培养的真菌细胞、或培养的昆虫细胞中生产。在另一实施方案中，rHA在非人哺乳动物或非人哺乳动物细胞中生产。可用于生产rHA的非人哺乳动物的实例但扩但不限于属于如下的那些：牛科(Bovidae)、犬科(Canidae)、猪科(Suidae)、啮齿目(Rodentia)、兔形目(Lagomorpha)以及灵长目(Primates)(不包括人)。在具体实施方案中，用于生产rHA的非人哺乳动物选自下组：牛、狗、猪、绵羊、山羊、大鼠、小鼠、兔、黑猩猩和大猩猩。在另一实施方案中，用于生产rHA的非人哺乳动物细胞有非限制性的牛、犬、猪、绵羊、山羊、啮齿动物、兔或非人灵长类动物细胞。与从人血液或浆液中纯化的白蛋白相比，在非人生物体中生产的rHA的主要优点在于，在rHA的生产过程中不存在人源产品。此类受控生产方法的应用产生了更纯的产品、更低的结构异质性。
在一些实施方案中，所述促胰岛素肽缀合物可以包含白蛋白前体。人白蛋白在肝细胞中合成，然后分泌到血流中。这种合成首先产生前体前原HAS，其含有18个氨基酸的指导新生多肽进入分泌途径的信号序列。因而，与白蛋白前体形成的缀合物落在本文所述缀合物的范围之内。
在某些实施方案中，所述促胰岛素肽缀合物可以包含白蛋白的分子变体。所述白蛋白变体可以包括由于人群中白蛋白的多态性而产生的天然变体。通过多种条件下的电泳分析已经鉴定了人血清白蛋白超过30种以上的显著不同的基因变体。参见例如Weitkamp等，Ann.Hum.Genet.，36(4)：381-92(1973)；Weitkamp，Isr.J.Med.ScL，9(9)：1238-48(1973)；Fine等，Biomedicine，25(8)：291-4(1976)；Fine等，Rev.Fr.Transfus.Immunohematol，25(2)：149-63.(1982)；Rochu等，Rev.Fr.Transfus.Immunohematol.31(5)：725-33(1988)；Arai等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A 86(2)：434-8(1989)，每一篇的内容都整体通过引用并入本文。因而，与白蛋白分子变体形成的缀合物落在本发明所述缀合物的范围之内。
在具体实施方案中，白蛋白变体相对于成熟天然人血清白蛋白的序列具有不超过5、4、3、2或1个氨基酸取代、缺失或插入。
在一些实施方案中，所述促胰岛素肽缀合物可以包含与白蛋白基本同源的白蛋白衍生物。例如，所述缀合物可以利用白蛋白同源物形成，该白蛋白同源物具有的氨基酸序列与天然人血清白蛋白即SEQ ID NO.30享有至少75％、至少80％、至少85％、更优选至少90％、最优选至少95％的同一性。在此上下文中，同一性百分比表示在对序列进行比对，并且如果必要引入空位以获得最大序列同源性百分比时，候选序列中与肽中的对应氨基酸残基完全相同(即，比对中给定位置上的氨基酸残基是相同的残基)或相似(即，比对中给定位置上的氨基酸取代是保守取代，如上文所讨论的那样)的氨基酸残基百分比。在某些实施方案中，白蛋白衍生物以其与天然存在白蛋白序列的序列同一性百分比或序列相似性百分比进行表征。序列同源性，包括序列同一性和相似性百分比，利用本领域公知的序列比对技术来确定，优选利用被设计用于此目的的计算机算法，例如BLAST，使用所述计算机算法或含所述算法的软件包的默认参数。
在某些实施方案中，白蛋白同源物包含游离半胱氨酸。在某些实施方案中，蛋白同源物包含单个游离半胱氨酸。在一些实施方案中，蛋白同源物包含游离半胱氨酸34。
在一些实施方案中，所述促胰岛素肽缀合物可以包含人血清白蛋白至少100、200、300、400、500或超过500个氨基酸的N-末端片段。在另一实施方案中，所述促胰岛素肽缀合物可以包含含有Asp-Ala-His-LysN-末端序列修饰的人血清白蛋白变体。在另一实施方案中，所述促胰岛素肽缀合物可以包含在3个N-末端氨基酸残基Asp-Ala-His中的至少一个缺失。在另一实施方案中，所述促胰岛素肽缀合物可以包含白蛋白的N-末端延伸，例如Glu-3、Ala-2、Glu-1、Phe0-HSA(SEQ ID NO.30的1-585)或其N-末端片段。在本发明的另一实施方案中，人血清白蛋白(HSA)变体选自下组：HSA(SEQ ID NO.30的2-585)、HSA(SEQ ID NO.30的3-585)、HSA(SEQ ID NO.30的4-585)、Asp-Ala-HSA(SEQ ID NO.30的4-585)、Xaa3-HSA(SEQ ID NO.30的1-585)，以及它们的N-末端片段，其中Xaa3是取代了天然HAS第3位的His残基的氨基酸残基。
在一些实施方案中，所述促胰岛素肽缀合物可以包含白蛋白的结构衍生物。所述白蛋白的结构衍生物可以包括具有白蛋白型活性的蛋白质或肽，例如，白蛋白的功能片段。在一些实施方案中，所述衍生物是白蛋白的抗原决定簇，即能够被抗白蛋白抗体识别的多肽的一部分。在一些实施方案中，重组白蛋白可以是任何蛋白，优选其血浆半衰期为人体中人血清白蛋白血浆半衰期的75％-100％，且能够通过修饰编码人血清白蛋白的基因而获得。例如但不限于，重组白蛋白可以仅在白蛋白的痕量金属结合区含有插入或缺失，从而减小或消除与痕量金属如镍和/或铜的结合，如美国专利号6,787,636中所述，其整体通过引用并入本文。具体地，重组白蛋白可以在N-末端区域或结合区VI进行修饰，例如通过N-末端至少一个氨基酸的截短，从而呈现出减小或消除痕量金属如镍和/或铜的结合。该结合区其它适宜的修饰包括突变，例如足以破坏痕量金属结合的延长或插入，在这一位点痕量金属结合的水平最高。减少白蛋白的痕量金属结合对于降低用白蛋白组合物治疗的个体对痕量金属的过敏反应可能性是有利的。
白蛋白的结构衍生物可以利用任何本领域技术人员已知的方法来生成，包括但不限于：寡核苷酸介导的(定点)诱变、丙氨酸扫描以及聚合酶链式反应(PCR)诱变。可对克隆的白蛋白编码DNA进行定点诱变(参见Carter，Biochem.J.237：1-7(1986)；Zoller和Smith，Methods Enzymol.154：329-50(1987))、盒诱变、限制性选择诱变(Wells等，Gene 34：315-323(1985))或其它已知技术，以产生编码白蛋白结构衍生物的白蛋白变体DNA或序列(Ausubel等，Current Protocols In Molecular Biology，John Wiley and Sons，New York(current edition)；Sambrook等，Molecular Cloning，A Laboratory Manual，第三版，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，New York(2001)，每一篇的内容都整体通过引用并入本文。
在某些实施方案中，白蛋白衍生物包括任何高分子，优选其血浆半衰期为人体中人血清白蛋白血浆半衰期的75％-100％，且能够通过体外修饰白蛋白而获得。在一些实施方案中，白蛋白用脂肪酸修饰。在一些实施方案中，白蛋白用金属离子修饰。在一些实施方案中，白蛋白用对白蛋白具有高亲和力的小分子修饰。在一些实施方案中，白蛋白用糖修饰，包括但不限于：葡萄糖、乳糖、甘露糖和半乳糖。
在一些实施方案中，所述促胰岛素肽缀合物可以包含白蛋白融合蛋白，即与治疗性蛋白或其片段或变体融合的白蛋白分子、或其片段或变体。白蛋白融合蛋白可以通过核酸翻译而生成，所述核酸包含编码全部或部分治疗性蛋白的多核苷酸，该多核苷酸与编码全部或部分白蛋白的多核苷酸连接。任何本领域技术人员已知的白蛋白融合蛋白都可以用来根据本发明的方法形成缀合物。示例性的白蛋白融合蛋白在美国专利号6,548,653、6,686,179、6,905,688、6,994,857、7,045,318、7,056,701、7,141,547和7,271,149中描述，每一篇的内容都整体通过参考引入本文。在一些实施方案中，白蛋白融合蛋白包含白蛋白或其片段或变体，其与胰高血糖素样肽1融合，如美国专利号7,141,547或7,271,149中所述。在一些实施方案中，白蛋白融合蛋白包含白蛋白或其片段或变体，其与艾塞那肽-3或其片段或变体融合。在一些实施方案中，白蛋白融合蛋白包含白蛋白或其片段或变体，其与艾塞那肽-4或其片段或变体融合。在一些实施方案中，白蛋白融合蛋白包含白蛋白或其片段或变体，其与多个艾塞那肽-4或其片段或变体融合。
用来形成本发明所述缀合物的白蛋白可以利用本领域技术人员已知的方法和材料获得。例如，白蛋白可以由商业来源获得，例如NovozymesBiopharma UK Ltd.(Nottingham，UK；来自酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的重组人白蛋白)；Cortex-Biochem(San Leandro，Calif.；血清白蛋白)；TalecrisBiotherapeutics(Research Triangle Park，North Carolina；血清白蛋白)；ZLBBehring(King of Prussia，PA)或New Century Pharmaceuticals(Huntsville，Ala.；来自毕赤氏酵母的重组人白蛋白)。
在一些实施方案中，白蛋白是(Novozymes BiopharmaUK Ltd.(Nottingham，UK))。是在体外利用重组酵母技术生产的重组人白蛋白(rHA)，其中遗传修饰的酵母(酿酒酵母)分泌可溶性rHA，随后收获、纯化和配制用于制备生物制品的赋形剂，或用于医疗装置的衣料。rHA与HAS相比的主要优点是其在酵母中表达，在生产过程中没有动物或人源产品。此类受控生产方法的应用产生了更纯的产品、更低的结构异质性。以前的研究已经表明可溶性rHA和HAS在其生化特征、放射标记效率以及体外和体内的生物学行为方面没有显著差异。参见Dodsworth等，1996，Biotechnol.Appl.Biochem.24：171-176。
在一些实施方案中，白蛋白是
Figure BPA00001197230101043
(GB-1057，Mitsubishi Tanabe Pharma Corp.，Osaka，Japan)。MEDWAY是重组人白蛋白(rHA)，在体外利用重组酵母技术生产，其中基因修饰的酵母(毕赤氏酵母(Pichia pastoris))分泌可溶性rHA，其可以随之收获、纯化和配制用于适应症治疗。
在一些实施方案中，所述缀合物中使用的白蛋白变体是ALBAGENTM(New Century Pharma，Huntsville，AL)。ALBAGEN是HSA(2-585)，并且因单点N-末端缺失，导致金属结合特性改变而具有低变应原性。
在一些实施方案中，所述白蛋白是ALBUCULTTM(Novozymes BiopharmaUK Ltd.(Nottingham，UK))。AlbucultTM是酵母来源的重组人白蛋白溶液，专门被设计用于细胞培养。其制备无需使用动物或人类来源的材料，因此没有污染人类或动物来源的病毒或阮病毒的风险。
6.实施例
本发明通过以下实施例举例说明，其并非旨在以任何方式限制。
6.1实施例1：制备艾塞那肽-4白蛋白缀合物
与人血清白蛋白(HSA)Cys34缀合的艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2(下文在如下实施例中称作“艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2HSA缀合物”)如以下文献中详细描述的那样制备：美国专利号6,329,336；美国专利公开号2005/0267293；2006年12月22日递交的题为“Process for the Production of Preformed Conjugates ofRecombinant Albumin(预形成重组白蛋白缀合物的生产方法)”的美国专利申请号11/645,297，每一篇的内容都以其整体通过引用并入本文。
艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2的制备
艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2根据美国专利号6,329,336中所述的方法制备，其整体通过引用并入本文。简言之，利用人工固相合成法和Symphony肽合成仪，使用Fmoc保护的Rink酰胺MBHA树脂合成100μmole的艾塞那肽-4的固相肽。人工进行Lys(Aloc)基的选择性脱保护，并通过用溶于5mL CHCl3 NMM∶HOAc(18∶1∶0.5)中的3当量Pd(PPh3)4溶液处理树脂2小时完成。树脂随之用CHCl3(6×5mL)、20％HOAc的DCM溶液(6×5mL)、DCM(6×5mL)、和DMF(6×5mL)洗涤。然后重新自动化合成，向3-马来酰亚胺基丙酸(MPA)中添加氨基乙氧基乙氧基乙酸(AEEA)基团。树脂切割和产物分离利用85％TFA/5％TIS/5％茴香硫醚和5％苯酚进行，接着通过干冰冷冻Et2O进行沉淀。产物通过制备型反相高效液相色谱、利用Varian(Rainin)制备型二元反相高效液相色谱系统进行纯化。
艾塞那肽-4(1-39)Lys 40 (ε-AEEA-MPA)-NH 2 HSA缀合物的制备
艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2随之与人重组血清白蛋白缀合，如2006年12月22日递交的题为“Process for the Production of PreformedConjugates of Albumin and Therapeutic Agent(白蛋白与治疗剂的预形成缀合物的生产方法)”的美国专利申请号11/645,297(公开号2007/0269863)中所述，其内容整体通过引用并入本文。纯化酿酒酵母中表达的重组白蛋白，用硫代乙醇酸处理，并在缀合之前通过苯基琼脂糖凝胶HIC纯化。缀合反应包括35μl 10mM艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2与175μl巯基白蛋白富集的白蛋白以0.7∶1的终摩尔比混合。反应在37℃进行30分钟，然后在4℃储存进行液相色谱/质谱分析，并通过丁基琼脂糖凝胶HIC纯化。
将缀合反应混合物上样到用高盐含量的水性缓冲液平衡过的疏水支持物上，从而纯化艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2HSA缀合物；对支持物应用递减的盐浓度梯度；并收集洗脱的白蛋白缀合物，如2006年12月22日递交的题为“Process for the Production of Preformed Conjugates of Albuminand Therapeutic Agent(白蛋白与治疗剂的预形成缀合物的生产方法)”的美国专利申请号11/645,297(公开号2007/0269863)中所述，其内容整体通过引用并入本文。
6.2实施例2：包含艾塞那肽-4(1-39)Lys 40 (ε-AEEA-MPA)-NH 2  HSA缀 合物的制剂的稳定性研究
本实施例对制剂进行了描述，经评价和鉴定证实该制剂为保持艾塞那肽-4-白蛋白缀合物的蛋白质结构和稳定性提供了适宜的条件和赋形剂。
6.2.1制剂基质
用表1所示的赋形剂制备了27种制剂。艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2HSA缀合物制剂包括(1)pH范围5.0-7.0(5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0)；(2)10mM醋酸钠缓冲液(pH 5.0)或10mM磷酸钠缓冲液(pH 6.0-7.0)；(3)150mM氯化钠、5％(w/v)山梨糖醇、9％(w/v)蔗糖或5％(w/v)甘油作为张力调节剂；(4)5mM辛酸钠、5mM辛酸钠+5mM Na-N-乙酰色氨酸、5mM辛酸钠+5mM H-Glut、或5mM辛酸钠+20mM精氨酸作为稳定剂；(5)0.1％普朗尼克(w/v)F68作为表面活性剂；和(6)艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2白蛋白缀合物，浓度为10mg/mL、20mg/mL或40mg/mL。
制备所有赋形剂(醋酸钠、磷酸钠、氯化钠、山梨糖醇、蔗糖、甘油、辛酸钠、Na-N-乙酰色氨酸、H-glut、精氨酸、普朗尼克F68)的母液，无菌过滤并储存于4℃。添加每种赋形剂至终浓度，无菌过滤，并调整溶液的pH。包装制剂以便在0.5ml无菌玻璃药瓶中使用。
表1.制剂基质
Figure BPA00001197230101081
*氮封样品
6.2.2制剂研究方法
如表2所总结的那样，实施了若干方法来表征制剂中艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2HSA缀合物的物理和化学稳定性。基于对清亮度、颜色和沉淀物存在的视觉检查进行了外观分析，以确定制剂的质量。利用pH计和渗压计来确定制剂的pH和渗透压摩尔浓度被维持在可接受的范围内。进行OD280肽浓度分析和相互作用疏水层析(HIC-HPLC)，以确定制剂肽浓度被维持在可接受的范围内。利用SDS-PAGE来评价制剂中肽的纯度。进行大小排阻层析(SEC-HPLC)检验总体聚集、纯度和稳定性。反相高效液相色谱(RP-HPLC)基于相对疏水性来分离分子，并用来检测制剂中的肽降解物。
表2.艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2HSA缀合物制剂稳定性评估检验方法
Figure BPA00001197230101091
研究了在4℃、25℃和40℃储存长达6个月的每种制剂中艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2HSA缀合物的稳定性，并总结于表3。
表3.CJC-1134-PC候选品的应力和时间点条件
Figure BPA00001197230101092
6.2.3制剂的pH、浓度和渗透压摩尔浓度
制剂的pH、缀合物浓度和渗透压摩尔浓度在零时间点，3个月时于5℃、25℃和40℃，以及6个月时于5℃和25℃评价，如表4-9所示。发现包含谷氨酸、甘油和精氨酸的制剂是高渗的，随后在1个月后由于不稳定性而从基质中去除。含蔗糖的制剂在1个月后由于非离子张力调节剂的冗余而从基质中去除。如通过OD280所观察到的那样，一些含40mg/ml浓度艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2HSA缀合物的制剂比其目标缀合物浓度要低超过2mg。
表4.零时间点的pH、缀合物浓度和渗透压摩尔浓度读数
  制剂ID   蛋白质浓度(mg/mL)   pH   渗透压摩尔浓度
  A5NO   9.3   5.23   293
  A5SO   9.5   5.31   289
  A5SuO   9.6   5.30   286
  A5GO   9.5   5.33   545
  A5NOG   9.4   4.82   301
  A5NOR   8.8   5.15   326
  P6NO   9.2   5.94   299
  P6SO   9.4   6.07   293
  P6SuO   9.3   6.11   291
  P6GO   9.5   6.14   562
  P6NOG   9.3   4.90   301
  P6NOR   9.2   6.08   338
  P6SOG   9.3   5.01   297
  P6SOR   9.5   5.97   349
  P6SA   无数据＊   5.07   296
  20P6SO   17.7   6.12   289
  20P6SuO   18.4   6.11   282
  40P6SO   34.7   6.13   302
  40P6SuO   32.5   6.18   264
  P7NO   10.0   6.55   299
  P7SO   9.5   6.78   297
  P7SuO   9.7   6.78   289
  P7GO   9.8   6.83   562
  P7NOG   9.6   5.55   305
  P7NOR   9.3   6.98   329
*乙酰色氨酸制剂分光光度计不可读
表5.样品在3个月后5℃的pH、缀合物浓度和渗透压摩尔浓度
Figure BPA00001197230101121
*乙酰色氨酸制剂分光光度计不可读
**氮封样品
表6.选择的样品在3个月后25℃的pH、缀合物浓度和渗透压摩尔浓度读数
Figure BPA00001197230101122
*乙酰色氨酸制剂分光光度计不可读
**氮封样品
表7.选择的样品在3个月后40℃的pH、缀合物浓度和渗透压摩尔浓度读数
*乙酰色氨酸制剂分光光度计不可读
表8.选择的样品在6个月后5℃的pH、缀合物浓度和渗透压摩尔浓度读数
*乙酰色氨酸制剂分光光度计不可读
**氮封样品
表9.选择的样品在6个月后25℃的pH、缀合物浓度和渗透压摩尔浓度读数
Figure BPA00001197230101151
*乙酰色氨酸制剂分光光度计不可读
**氮封样品
6.2.4温度效应
在稳定性加速的条件下(温度25℃或40℃)研究了不同制剂中艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2HSA缀合物的稳定性特征，为期6个月。主要降解产物包括肽降解物和聚集物。
如图1所示，pH 6.0，含辛酸钠或者Na-N-乙酰色氨酸与辛酸钠混合物的山梨糖醇制剂在6个月后25℃比其它制剂表现得稍微好些(0.05-0.2％)。同样，如图2所示，pH 6.0，含辛酸钠或者Na-N-乙酰色氨酸与辛酸钠混合物的山梨糖醇制剂在3个月后40℃与其它样品相比维持更高的纯度(0.4-4.0％)。
图3和4显示了通过RP-HPLC测定的，分别在6个月25℃和3个月40℃孵育后制剂中肽降解物的时间曲线。发现高浓度和高pH制剂，例如pH 6.0含20mg/ml或40mg/ml艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2HSA缀合物的制剂，以及pH 7.0的制剂，在25-40℃时比其它样品含有更高水平的肽降解物(＞20％)。一般而言，低pH制剂，例如pH 5.0的制剂，具有更低水平的艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2HSA缀合物的肽降解物。
6.2.5缓冲液效应
检验了醋酸钠缓冲液和磷酸钠缓冲液中的10mM艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2HSA缀合物的稳定性。
如图5中的SEC-HPLC纯度比较所示，醋酸盐和磷酸盐缓冲液中艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2HSA缀合物的稳定性似乎并无显著不同，不过6个月后含磷酸盐缓冲液的制剂表现得稍微好些。
如图6中的RP-HPLC肽降解物比较所示，在6个月末的时候，与醋酸钠缓冲液中的制剂相比，在磷酸钠缓冲制剂中观察到显著增加的(＞10％)肽降解物。
图7显示了pH 5.0的醋酸钠制剂与的pH 6.0磷酸钠缓冲液制剂6个月后25C的SDS-PAGE比较。较低的pH制剂，例如pH 5.0含醋酸钠缓冲液的制剂，在主带下方显示出低分子量杂质，暗示有较低分子量的降解产物。
6.2.6pH效应
检验了一系列pH的制剂中艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2HSA缀合物的稳定性，包括pH 5.0、pH 6.0和pH 7.0。图8显示了在25℃孵育6个月的不同pH制剂的SEC-HPLC纯度比较。pH 5.0和pH 6.0的含盐制剂表现相当，两种制剂均保留约96.0％的纯度。在大多数时间点，pH 7.0的制剂比pH 5.0和pH 6.0的制剂表现出稍微更低的纯度。
图9显示了在25℃孵育6个月的不同pH制剂的RP-HPLC肽降解物比较。pH 5.0的制剂具有最低量的肽降解物：约20μg/mL；pH 6.0制剂的肽降解物几乎为约40μg/mL；而H 7.0制剂的肽降解物高于约60μg/mL。
6.2.7张力调节剂的效应
检验了含多种张力调节剂的制剂中艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2 HSA缀合物的稳定性，包括150mM氯化钠、5％(w/v)山梨糖醇、9％(w/v)蔗糖和5％(w/v)甘油。
如图10所示，显示了在25℃孵育0-6个月的含不同张力调节剂的pH 5.0制剂的SEC-HPLC纯度比较，氯化钠和山梨糖醇制剂6个月后表现相当(在约0.2％纯度范围内)。
如图11所示，显示了在25℃孵育0-6个月的含不同张力调节剂的pH 5.0制剂的RP-HPLC肽降解物比较，氯化钠和山梨糖醇制剂6个月后表现相当，其中山梨糖醇制剂比氯化钠制剂含有稍微少些(约10％)的肽降解物。
6.2.8稳定剂效应
在此研究中，检验了包括5mM辛酸钠在内的多种稳定剂：5mM Na-N-乙酰色氨酸、5mM H-谷氨酸、20mM精氨酸和氮。
图12显示了在25℃孵育0-6个月的含不同稳定剂的pH 6.0制剂的SEC-HPLC纯度比较。25℃6个月后，含5mM辛酸钠的制剂，以及含5mM辛酸钠和20mM精氨酸的制剂维持约96.2％的纯度；含5mM辛酸钠和氮的制剂维持约95.9％的纯度。
如图13所示，显示了在25℃孵育1-6个月的含不同稳定剂的pH 6.0制剂的RP-HPLC肽降解物，含20mM精氨酸的制剂比含5mM辛酸钠或者含5mM辛酸钠和氮覆层的制剂显示出稍微更少的肽降解物(约10％)。
6.2.9缀合物浓度效应
检验了多种艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2白蛋白缀合物浓度，包括10mg/ml、20mg/ml和40mg/ml。
图14显示了含10mg/ml、20mg/ml和40mg/ml  艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2 HSA缀合物的pH 6.0山梨糖醇制剂在25℃储存6个月时的SEC-HPLC纯度比较。观察到纯度是缀合物浓度依赖性的。在25C储存6个月后，在含10mg/ml缀合物的制剂中观察到最高的纯度，维持在比含20mg/ml缀合物的制剂纯度高约0.9％的水平，且比含40mg/ml缀合物的制剂纯度高约1.6％。
图15显示了含10mg/ml、20mg/ml和40mg/ml CJC-1134-PC的pH 6.0山梨糖醇制剂在25℃孵育6个月后的RP-HPLC纯度比较。同样，发现肽降解物的量是缀合物浓度依赖性的，因为含10mg/ml缀合物的制剂具有最低量的肽降解物：约40μg/mL。在25℃孵育6个月后，相对于在10mg/ml制剂中观察到的降解，20mg/ml制剂中的降解约高1.72倍，而40mg/ml制剂中的降解约高3倍。
6.2.10结论
肽降解物似乎受缓冲液组成和pH的组合影响。对于艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2HSA缀合物制剂，优选较低的pH。发现氯化钠和山梨糖醇均是与艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2HSA缀合物兼容的张力调节剂。
SEC-HPLC分析显示了pH 5.0和pH 6.0制剂在较高孵育温度时相当的纯度数据，而RP-HPLC显示最低量的肽降解物出现在pH 5.0制剂中。由于认为肽降解物是艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2HSA缀合物制剂中更为突出的稳定性问题，因而10mM醋酸钠缓冲液中可用的pH是pH 5.0。
对于张力调节剂而言，在4℃、25℃和40℃孵育6个月的过程中，含醋酸钠缓冲液以及150mM氯化钠或5％(w/v)山梨糖醇的pH 5.0制剂表现相当。SEC-HPLC数据显示4℃6个月的过程中纯度下降低于0.5％，而25℃时两种制剂均下降约2.5％。40℃3个月后两种制剂通过SEC-HPLC均观察到约5.0％的纯度下降。这些数据分别示于图16(150mM氯化钠制剂)和图17(5％(w/v)山梨糖醇制剂)。此外，RP-HPLC分析显示，这两种制剂在4℃和25℃6个月后分别使肽降解物最小化至约8-20μg/mL。这些数据分别示于图18(150mM氯化钠制剂)和图19(5％(w/v)山梨糖醇制剂)。
因而，氯化钠和山梨糖醇张力调节剂均与艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2HSA缀合物制剂兼容。至于稳定剂，5mM辛酸钠、和20mM精氨酸制剂，在25℃6个月后保持纯度和低水平的肽降解物。
相应地，可用的制剂包括10mM醋酸钠缓冲液中的10mg/ml艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2HSA缀合物，pH 5.0，所述缓冲液含5mM辛酸钠、0.1％(w/v)普朗尼克F68、以及150mM氯化钠或5％(w/v)山梨糖醇。
6.3实施例3：防腐剂
研究了多种防腐剂与所述制剂(10mM磷酸钠缓冲液pH 7.0，或10mM醋酸钠缓冲液pH 5.0，和10mg/ml艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2HSA缀合物)的兼容性。所述防腐剂包括0.005％、0.1％或1.0％(w/v)间甲酚、苄醇、甲醇、乙醇、异丙醇、羟苯丁酯、羟苯乙酯、羟苯甲酯、苯酚、甘油、木糖醇、间苯二酚、邻苯二酚、2，6-二甲基环己醇、2-甲基-2，4-戊二醇、葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮、2-氯苯酚、苄索氯铵、硫柳汞(水杨乙汞)、苯甲酸(羟苯丙酯)MW 180.2、苯甲酸MW 122.12、苯扎氯铵、氯丁醇、苯甲酸钠、丙酸钠和西吡氯铵。
含0.005％、0.1％、1.0％(w/v)浓度的甲醇、乙醇、异丙醇、甘油、间苯二酚、2-甲基-2，4-戊二醇、硫柳汞(水杨乙汞)、苯扎氯铵、和苯甲酸钠的制剂产生清亮溶液。浓度0.005％、0.1％或1.0％(w/v)的西吡氯铵当用于含pH 7.0磷酸钠缓冲液的制剂时产生清亮溶液，而当用于含pH 5.0醋酸钠缓冲液的制剂时产生浑浊溶液。
虽然羟苯丁酯、羟苯乙酯或羟苯甲酯在0.005％和0.1％(w/v)浓度时产生清亮溶液，但是每一种这些防腐剂在0.3％、0.5％、0.7％和1.0％(w/v)浓度时使得溶液不可溶。
与此类似，含间甲酚、苄醇、苯酚、苯扎氯铵或氯丁醇的制剂在0.1％(w/v)浓度时清亮，但是当含1％(w/v)这些防腐剂时不透明、浑浊或不可溶。
含苯甲酸(羟苯丙酯)MW 180.2或苯甲酸MW 122.12的制剂在0.005％(w/v)浓度时产生清亮溶液，但是在分别为0.1％和1.0％(w/v)的浓度时不可溶。
这种浑浊或不溶问题被鉴别为制剂中缓冲液(醋酸钠或磷酸钠)或其它组分与所选择的防腐剂之间存在潜在不兼容性。
基于其与一线制剂的兼容性及其使用的安全性和频率，甲醇、乙醇、异丙醇、甘油、间苯二酚、2-甲基-2，4-戊二醇、硫柳汞(水杨乙汞)、苯扎氯铵、苯甲酸钠和西吡氯铵是艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2白蛋白缀合物制剂中可用的防腐剂。
6.4实施例4：10mM醋酸钠缓冲液(pH 5.0、5mM辛酸钠、0.1％(w/v) 普朗尼克F68和150mM NaCl)中的艾塞那肽 -4(1-39)Lys 40 (ε-AEEA-MPA)-NH 2 HSA缀合物的稳定性
本实施例显示了在10mM醋酸钠缓冲液(pH 5.0、5mM辛酸钠、0.1％(w/v)普朗尼克F68和150mM NaCl)中配制的艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2HSA缀合物在5℃、25℃(长达12个月)和40℃(长达3个月)孵育时的稳定性。
制备所有赋形剂(醋酸钠、氯化钠、辛酸钠、普朗尼克F68)的母液，无菌过滤并储存于4℃。添加每种赋形剂至终浓度，无菌过滤，并调整溶液的pH。包装制剂以便在具有13mm灰色丁基瓶塞的3.0ml I型无菌玻璃药瓶中使用。
艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2HSA缀合物的稳定性通过测量以下来确定：(1)视觉外观；(2)pH，通过pH计来测量；(3)蛋白质浓度，通过HIC-HPLC和A280来测量；(4)纯度，通过SDS-PAGE来测定；(5)肽降解物的量，通过RP-HPLC来测量；和(6)聚集物含量(含三聚体以上的物质)，通过SEC-HPLC来测量。
稳定性研究结果示于表10-12。配制在10mM醋酸钠缓冲液(pH 5.0、5mM辛酸钠、0.1％(w/v)普朗尼克F68和150mM NaCl)中的艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2HSA缀合物的稳定性在5℃和25℃孵育时维持至少12个月，而在40℃孵育时维持至少3个月。在每个时间点，所述制剂展示出清亮、草色至琥珀色的外观，不含颗粒；pH维持在4.5-6.0；蛋白质浓度维持在8.0-12mg/mL；在SDS-PAGE之后出现单个条带，分子量与缀合物标准一致，无大的结构域降解；且较高分子量聚集物含量＜1％。
表10：储存在5±3℃的艾塞那肽-4HSA缀合物(醋酸钠缓冲液，pH 5.0制剂)的稳定性
Figure BPA00001197230101221
*通过SDS-PAGE测定
表11：储存在25±2℃的艾塞那肽-4HSA缀合物(醋酸钠缓冲液，pH 5.0制剂)的稳定性
Figure BPA00001197230101231
*通过SDS-PAGE测定
表12：储存在40±2℃的艾塞那肽-4HSA缀合物(醋酸钠缓冲液，pH 5.0制剂)的稳定性
Figure BPA00001197230101232
*通过SDS-PAGE测定
6.5实施例5：10mM磷酸钠缓冲液(pH 7.0、1.6mM辛酸钠、15mg/L 聚山梨醇酯80和135mM氯化钠)中的艾塞那肽 -4(1-39)Lys 40 (ε-AEEA-MPA)-NH 2 HSA缀合物的稳定性
本实施例显示了在10mM磷酸钠缓冲液(pH 7.0、1.6mM辛酸钠、15mg/L聚山梨醇酯80和135mM氯化钠)中配制的艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2HSA缀合物，在5℃、25℃(长达18个月)和40℃(长达6个月)孵育时的稳定性。
制备所有赋形剂(磷酸钠、氯化钠、辛酸钠、聚山梨醇酯80)的母液，无菌过滤并储存于4℃。添加每种赋形剂至终浓度，无菌过滤，并调整溶液的pH。包装制剂以便在具有13mm灰色丁基瓶塞的3.0mlI型无菌玻璃药瓶中使用。
艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2HSA缀合物的稳定性通过测量以下来确定：(1)视觉外观；(2)pH，通过pH计来测量；(3)渗透压摩尔浓度(mOsm)，通过渗压计来测量；(4)纯度，通过SDS-PAGE来测定；(5)肽降解物的量，通过RP-HPLC来测量；和(6)聚集物含量(含三聚体以上的物质)，通过SEC-HPLC来测量。
稳定性研究结果示于表13-15。在每个时间点，所述制剂展示出清亮、草色至琥珀色的外观，不含颗粒；pH维持在7.0；渗透压摩尔浓度维持在250-330mOsm；在SDS-PAGE之后出现单个条带，分子量与缀合物标准一致，无大的结构域降解；且较高分子量聚集物含量为0％。
表13：储存在5±-3℃的艾塞那肽-4HSA缀合物(磷酸钠缓冲液，pH 7.0制剂)的稳定性
Figure BPA00001197230101251
*通过SDS-PAGE测定
表14：储存在25±2℃的艾塞那肽-4HSA缀合物(磷酸钠缓冲液，pH 7.0制剂)的稳定性
Figure BPA00001197230101252
*通过SDS-PAGE测定
表15：储存在40±2℃的艾塞那肽-4HSA缀合物(磷酸钠缓冲液，pH 7.0制剂)的稳定性
Figure BPA00001197230101253
*通过SDS-PAGE测定
**许多低于定量水平(15μg/ml)的峰值未包括在总数内
6.6实施例6：艾塞那肽-4缀合物制剂对于血糖水平的影响
本实施例描述了随机、安慰剂对照、双盲单剂递增施用的I/II期临床研究结果，以评价对II型糖尿病个体皮下施用的一系列剂量艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2HSA缀合物制剂的安全性、耐受性、药代动力学和药效动力学效应。
研究了四种皮下施用的单剂(包括1.5mg和2.0mg)艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2HSA和安慰剂的效应。所述缀合物在本发明所述制剂中的施用浓度为10mg/ml。
在施用艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2HSA缀合物后2-7天测定每名个体的空腹血浆葡萄糖水平。还利用血糖仪在每天6个时间点测量血糖水平：(1)空腹/早餐前5分钟；(2)早餐后2小时；(3)中餐前5分钟；(4)中餐后2小时；(5)晚餐前5分钟；和(6)晚餐后2小时。对于每名个体，在施用后第1-7天计算这6次测量结果的平均值。
与安慰剂治疗个体的空腹血浆葡萄糖水和日均葡萄糖水平相比，所述缀合物治疗个体的空腹血浆葡萄糖水和日均葡萄糖水平降低。
6.7实施例7：用艾塞那肽-4(1-39)Lys 40 (ε-AEEA-MPA)-NH 2 HSA缀合物 制剂治疗II型糖尿病
含有10mM醋酸钠缓冲液(pH 5.0、含5mM辛酸钠、0.1％(w/v)普朗尼克F68和150mM氯化钠)中的10mg/ml艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2HSA缀合物的药物制剂被用来治疗有需要的人类个体的II型糖尿病。II型糖尿病患者接受：(1)每周一剂含1.5mg艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2HSA缀合物的制剂，总计12周治疗；或(2)每周一剂含1.5mg艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2HSA缀合物的制剂，为期4周；接着每周一剂含2.0mg艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2HSA缀合物的制剂，为期8周。
患者在用缀合物治疗之前日服稳定剂量的≥1000mg二甲双胍至少3个月。个体在第一次施用所述缀合物之前进行长达14天的常规筛查评价。在筛查前至少3个月已经诊断患有II型糖尿病的患者根据如下标准来评估：知情同意；完整病历；回顾纳入/排除标准；附随药物治疗调查；完全体检；体重；重要体征(血压、体温、脉搏、呼吸频率)；十二导联心电图、尿液药物筛查以及呼气式酒精测试；临床实验室分析(临床化学、血液学和血凝)；验尿；血清妊娠试验(仅经期前女性)；空腹血浆葡萄糖；HbA1c水平；果糖胺、脂质类型分析；总IgE水平；以及免疫原性抽样分析。
艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2 HSA缀合物在早晨空腹状态下通过对患者腹部皮下注射施用。由本领域技术人员在整个施用期间监测患者，包括抽血进行临床实验室分析(临床化学、血液学、血凝)、果糖胺、脂质类型分析、以及HbA1c；十二导联心电图；以及体检，以确定艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2HSA缀合物制剂的安全性和功效。
6.8实施例8：用艾塞那肽-4(1-39)Lys 40 (ε-AEEA-MPA)-NH 2 HSA缀合物 制剂制剂II型糖尿病
含有10mM醋酸钠缓冲液(pH 5.0、含5mM辛酸钠、0.1％(w/v)普朗尼克F68和150mM氯化钠)中的10mg/ml艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2HSA缀合物的药物制剂被用来治疗有需要的人类个体的II型糖尿病。II型糖尿病患者接受：(1)每周两剂含1.5mg艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2HSA缀合物的制剂，合3.0mg的周总剂量，总计12周治疗；或(2)每周两剂含1.5mg艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2HSA缀合物的制剂，合3.0mg的周总剂量，为期4周治疗；接着每周一剂含2.0mg艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2HSA缀合物的制剂，进行另外8周的治疗。
患者在用缀合物治疗之前日服稳定剂量的≥1000mg的二甲双胍至少3个月。个体在第一次施用缀合物之前进行长达14天的常规筛查评价。在筛查前至少3个月已经诊断患有II型糖尿病的患者根据如下标准来评估：知情同意；完整病历；回顾纳入/排除标准；附随药物治疗调查；完全体检；体重；重要体征(血压、体温、脉搏、呼吸频率)；十二导联心电图、尿液药物筛查以及呼气式酒精测试；临床实验室分析(临床化学、血液学和血凝)；验尿；血清妊娠试验(仅经期前女性)；空腹血浆葡萄糖；HbA1c水平；果糖胺、脂质类型分析；总IgE水平；以及免疫原性抽样分析。
艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2HSA缀合物在早晨空腹状态下通过对患者腹部皮下注射施用。由本领域技术人员在整个施用期间监测患者，包括抽血进行临床实验室分析(临床化学、血液学、血凝)、果糖胺、脂质类型分析、以及HbA1c；十二导联心电图；以及体检，以确定艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2HSA缀合物制剂的安全性和功效。
6.9实施例9：用实施例7和8中所述艾塞那肽 -4(1-39)Lys 40 (ε-AEEA-MPA)-NH 2 HSA缀合物制剂治疗的个体
进行了包括实施例7中所述施用方案的第一临床试验。试验持续3个月，并收录了144名二甲双胍治疗未能充分控制的II型糖尿病患者。患者随机分到3个平行治疗小组之一：一组每周1.5mg；一组每周1.5mg，四周后调至2mg/周；以及安慰剂组。进行了包括实施例8所述施用方案的第二临床试验。试验持续3个月，并收录了80名二甲双胍治疗未能充分控制的II型糖尿病患者。患者随机分到3个平行治疗组之一：一组每周两次1.5mg，四周后调至每周2mg；一组3mg(每周两次1.5mg)；以及安慰剂组。两种试验具有相同的录入标准和研究评估，从而能够进行整合分析。
制剂的所述缀合物利用
Figure BPA00001197230101291
生产，是Novozymes Biopharma生产的重组白蛋白。药物制剂用31号针头进行小量(≤0.2ml)注射。
在糖尿病治疗中，抗糖尿病药功效的主要证明在于HbA1c的减少。HbA1c％(血红蛋白Alc，即糖基化血红蛋白的百分比)代表个体在用抗糖尿病药治疗前的数月期间的平均血糖水平，并且是最常用的长期高血糖度量方法。
与基线和安慰组相比，在所有主动治疗组的整个治疗期间均观察到HbA1c显著下降(1.5mg、2mg组合策略，以及每个方案3mg整合分析)。在3mg剂量组观察到最强的降低，其中患者在12周治疗期结束时实现HbA1c下降1.4％。1.5mg和2mg组HbA1c均下降0.8％，而安慰组是0.4％。
3mg组实现减重1.2kg(相对于基线显著)，其中超过80％的患者有一定程度的减重，相比之下，该试验安慰组仅0.4kg减重(相对于基线不显著)。在第一试验的1.5mg和2.0mg剂量组，分别观察到2.0kg和1.3kg的减重(相对于基线而非安慰剂ITT(意向治疗)显著)。
药物良好耐受。两种试验所有治疗策略的药物相关的恶心率为23％，相比之下安慰组是10％；两种试验所有治疗策略的总体呕吐率为11％，相比之下安慰组是6％；而两种试验所有治疗策略的总体腹泻为10％，相比之下安慰组是8％。这些不良事件的发生随着时间消失。例如，在3mg最高剂量组中，28天后没有恶心或呕吐。
注射部位不良事件罕见，实际上在治疗组中比安慰组中更少发生。
这些数据证明，如实施例7和实施例8所述施用艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2HSA缀合物，引起强的HbA1下降，伴有减重和卓越的GI耐受性。此外，液体制剂和低注射量(借由极细规格的针头)很少引起注射部位反应。因而，施用如本发明所述的艾塞那肽-4(1-39)Lys40(ε-AEEA-MPA)-NH2HSA缀合物，从患者优先的角度而言为糖尿病治疗提供了明显的优势。
对所有目的而言，本说明书中引用的所有出版物、专利和专利申请以其整体被通过参考引入本文，就如同每一篇单独的出版物或专利申请被专门分别地表示通过参考引入本文一样。虽然出于澄清理解的目的，上述发明通过举例说明和实施例的方式进行了一些详细的说明，但是对于本领域普通技术人员显而易见的是，根据本发明的教导，可对之进行某些改变和调整而不会偏离所附权利要求书的精神或范围。
Figure ISB00000249233900011
Figure ISB00000249233900021
Figure ISB00000249233900031
Figure ISB00000249233900041
Figure ISB00000249233900051
Figure ISB00000249233900061
Figure ISB00000249233900071
Figure ISB00000249233900101
Figure ISB00000249233900111
Figure ISB00000249233900121
Figure ISB00000249233900141
Figure ISB00000249233900151
Figure ISB00000249233900161
Figure ISB00000249233900181
Figure ISB00000249233900191
Figure ISB00000249233900201
Figure ISB00000249233900211
Figure ISB00000249233900221

Claims (85)

1.一种药物制剂，其包含：白蛋白与促胰岛素肽的缀合物，所述促胰岛素肽含有相对于天然艾塞那肽-4序列具有不超过3个氨基酸取代、缺失或插入的序列，所述缀合物浓度约为1mg/ml至约100mg/ml；缓冲液；张力调节剂，其中该张力调节剂浓度至少为1mM；稳定剂；和表面活性剂，其中所述制剂的pH为约4至约8。
2.如权利要求1所述的药物制剂，其中所述缀合物含有与[2-[2-[2-马来酰亚胺丙酰胺基(乙氧基)乙氧基]乙酸接头共价连接的白蛋白半胱氨酸34巯基，所述接头与所述肽的赖氨酸的ε氨基共价连接。
3.如权利要求1所述的药物制剂，其中所述缀合物如下：
Figure FPA00001197230000011
(SEQ ID NO：33)
其中X是白蛋白氨基酸的S、O或NH。
4.如权利要求2所述的药物制剂，其中所述赖氨酸已经被添加至天然艾塞那肽-4序列中。
5.如权利要求2所述的药物制剂，其中所述赖氨酸已经被添加至天然艾塞那肽-4序列的羧基末端。
6.如权利要求1-5中任一项所述的药物制剂，其中所述白蛋白是人血清白蛋白。
7.如权利要求1-5中任一项所述的药物制剂，其中所述白蛋白是重组血清白蛋白。
8.如权利要求1-5中任一项所述的药物制剂，其中所述白蛋白是重组人血清白蛋白。
9.如权利要求1所述的药物制剂，其中所述缀合物含有与[2-[2-[2-马来酰亚胺基丙酰胺基(乙氧基)乙氧基]乙酸接头共价连接的重组人血清白蛋白半胱氨酸34巯基，所述接头与艾塞那肽-4(1-39)Lys40-NH2羧基末端赖氨酸的ε氨基共价连接。
10.如权利要求1-8中任一项所述的药物制剂，其中所述缀合物是纯化的。
11.如权利要求1-10中任一项所述的药物制剂，其中所述缀合物的浓度为约1mg/ml至约50mg/ml。
12.如权利要求1-10中任一项所述的药物制剂，其中所述缀合物的浓度为约1mg/ml至约15mg/ml。
13.如权利要求1-10中任一项所述的药物制剂，其中所述缀合物的浓度为约1mg/ml至约10mg/ml。
14.如权利要求1-10中任一项所述的药物制剂，其中所述缀合物的浓度为约10mg/ml。
15.如权利要求1-10中任一项所述的药物制剂，其中所述缀合物的浓度为约20mg/ml。
16.如权利要求1-15中任一项所述的药物制剂，其中pH在约5至约7之间。
17.如权利要求1-15中任一项所述的药物制剂，其中pH约5.0。
18.如权利要求1-15中任一项所述的药物制剂，其中pH约7.0。
19.如权利要求1-18中任一项所述的药物制剂，其中所述缓冲液是醋酸缓冲液。
20.如权利要求19所述的药物制剂，其中所述醋酸缓冲液是醋酸钠缓冲液，且其中pH约4.0至约6.0。
21.如权利要求1-18中任一项所述的药物制剂，其中所述缓冲液是磷酸缓冲液。
22.如权利要求21所述的药物制剂，其中所述磷酸缓冲液是磷酸钠缓冲液，且其中pH约6.0至约8.0。
23.如权利要求1-22中任一项所述的药物制剂，其中所述缓冲液浓度1mM至约20mM。
24.如权利要求1-22中任一项所述的药物制剂，其中所述缓冲液的浓度为5mM至约15mM。
25.如权利要求1-22中任一项所述的药物制剂，其中所述缓冲液的浓度为约10mM。
26.如权利要求1-25中任一项所述的药物制剂，其中所述张力调节剂是氯化钠。
27.如权利要求26所述的药物制剂，其中氯化钠的浓度为约135mM至约155mM。
28.如权利要求26所述的药物制剂，其中氯化钠的浓度为约135mM。
29.如权利要求26所述的药物制剂，其中氯化钠的浓度为约150mM。
30.如权利要求1-25中任一项所述的药物制剂，其中所述张力调节剂是山梨糖醇。
31.如权利要求30所述的药物制剂，其中山梨糖醇约5％(w/v)。
32.如权利要求1-31中任一项所述的药物制剂，其中所述稳定剂是辛酸钠。
33.如权利要求32所述的药物制剂，其中辛酸钠的浓度为约5mM。
34.如权利要求1-33中任一项所述的药物制剂，其中所述表面活性剂是普朗尼克F68。
35.如权利要求34所述的药物制剂，其中普朗尼克F68约0.1％(w/v)。
36.如权利要求1-35中任一项所述的药物制剂，其中所述药物制剂还包含防腐剂。
37.如权利要求36所述的药物制剂，其中所述防腐剂选自甲醇、乙醇、异丙醇、甘油、间苯二酚、2-甲基-2，4-戊二醇、硫柳汞(水杨乙汞)、苯扎氯铵和苯甲酸钠。
38.如权利要求1-37中任一项所述的药物制剂，其中所述药物制剂为单位剂型。
39.如权利要求1-37中任一项所述的药物制剂，其中所述药物制剂为多次剂型。
40.如权利要求1-39中任一项所述的药物制剂，其中所述药物制剂为液体剂型。
41.如权利要求1-39中任一项所述的药物制剂，其中所述药物制剂为冻干剂型。
42.如权利要求1-41中任一项所述的药物制剂，其中所述药物制剂适合于胃肠外施用。
43.如权利要求42所述的药物制剂，其所述中药物制剂适合于皮下、静脉内、肌肉内、经皮、动脉内、腹膜内、肺部或口服施用。
44.如权利要求42所述的药物制剂，其中所述药物制剂适合于皮下施用。
45.如权利要求1所述的药物制剂，其中所述缀合物的浓度为10mg/ml，所述缓冲液是浓度为10mM的醋酸钠，所述张力调节剂是浓度为150mM的氯化钠，所述稳定剂是浓度为5mM的辛酸钠，所述表面活性剂是浓度为0.1％(w/v)的普朗尼克F68，且其中所述制剂的pH为约5.0。
46.如权利要求1所述的药物制剂，其中所述缀合物的浓度为10mg/ml，所述缓冲液是浓度为10mM的磷酸钠，所述张力调节剂是浓度为135mM的氯化钠，所述稳定剂是浓度为8mM的辛酸钠，所述表面活性剂是浓度为15mg/L的聚山梨醇酯80，且其中所述制剂的pH为约7.0。
47.一种治疗个体II型糖尿病的方法，该方法包括向具有II型糖尿病的个体施用药物制剂，所述药物制剂包含：白蛋白与促胰岛素肽的缀合物，所述促胰岛素肽含有相对于天然艾塞那肽-4序列具有不超过3个氨基酸取代、缺失或插入的序列，所述缀合物的浓度为约1mg/ml至约100mg/ml；缓冲液；张力调节剂；稳定剂；和表面活性剂，其中所述制剂的pH为约4至约8。
48.一种治疗个体II型糖尿病的方法，该方法包括向具有II型糖尿病的个体施用如权利要求1-45、81或82中任一项所述的药物制剂。
49.一种治疗个体II型糖尿病的方法，该方法包括向具有II型糖尿病的个体施用如权利要求46或权利要求83所述的药物制剂。
50.如权利要求47-49中任一项所述的方法，其包括向所述个体每周施用约1.0-4.0mg所述缀合物。
51.如权利要求47-49中任一项所述的方法，其包括向所述个体每周施用约1.5-2.0mg所述缀合物。
52.如权利要求47-49中任一项所述的方法，其包括向所述个体每周施用约3.0-4.0mg所述缀合物。
53.如权利要求47-49中任一项所述的方法，其包括向所述个体每周施用一次1.5mg所述缀合物。
54.如权利要求47-49中任一项所述的方法，其包括向所述个体每周施用一次2.0mg所述缀合物。
55.如权利要求47-49中任一项所述的方法，其包括向所述个体每周施用一次3.0mg所述缀合物。
56.如权利要求47-49中任一项所述的方法，其包括向所述个体每周施用两次1.5mg所述缀合物。
57.如权利要求47-49中任一项所述的方法，该方法按下述顺序包括以下步骤：
(a)第一持续时间阶段向所述个体每周施用一次1.5mg所述缀合物；和
(b)第二持续时间阶段向所述个体每周施用一次2.0mg所述缀合物。
58.如权利要求57所述的方法，其中所述第一持续时间阶段为4周，其中所述第二持续时间阶段为8周。
59.如权利要求47-49中任一项所述的方法，该方法按下述顺序包括以下步骤：
(a)第一持续时间阶段向所述个体每周施用二次1.5mg所述缀合物；和
(b)第二持续时间阶段向所述个体每周施用二次2.0mg所述缀合物。
60.如权利要求59所述的方法，其中所述第一持续时间阶段为4周。
61.如权利要求47-49中任一项所述的方法，该方法按下述顺序包括以下步骤：
(a)第一持续时间阶段向所述个体每周施用一次1.5mg缀合物；
(b)第二持续时间阶段向所述个体每周施用一次2.0mg缀合物；和
(c)第三持续时间阶段向所述个体每周施用一次3.0mg缀合物。
62.如权利要求61所述的方法，其中所述第一持续时间阶段为4周，其中所述第二持续时间阶段为4周。
63.如权利要求61所述的方法，其中所述第一持续时间阶段为2周，其中所述第二持续时间阶段为2周。
64.一种治疗个体II型糖尿病的方法，该方法包括向具有II型糖尿病的个体施用包含促胰岛素肽缀合的艾塞那肽-4衍生物的药物制剂，所述衍生物含有与[2-[2-[2-马来酰亚胺基丙酰胺基(乙氧基)乙氧基]乙酸接头共价连接的重组人血清白蛋白半胱氨酸34巯基，所述接头与艾塞那肽-4(1-39)Lys40-NH2羧基末端赖氨酸的ε氨基共价连接，其中向所述个体每周施用一次1.5mg所述缀合的艾塞那肽-4衍生物。
65.一种治疗个体II型糖尿病的方法，该方法包括向具有II型糖尿病的个体施用包含促胰岛素肽缀合的艾塞那肽-4衍生物的药物制剂，所述衍生物含有与[2-[2-[2-马来酰亚胺基丙酰胺基(乙氧基)乙氧基]乙酸接头共价连接的重组人血清白蛋白半胱氨酸34巯基，所述接头与艾塞那肽-4(1-39)Lys40-NH2羧基末端赖氨酸的ε氨基共价连接，其中向所述个体每周施用二次1.5mg所述缀合的艾塞那肽-4衍生物。
66.一种治疗个体II型糖尿病的方法，该方法包括向具有II型糖尿病的个体施用包含促胰岛素肽缀合的艾塞那肽-4衍生物的药物制剂，所述衍生物含有与[2-[2-[2-马来酰亚胺基丙酰胺基(乙氧基)乙氧基]乙酸接头共价连接的重组人血清白蛋白半胱氨酸34巯基，所述接头与艾塞那肽-4(1-39)Lys40-NH2羧基末端赖氨酸的ε氨基共价连接，其中向所述个体每周施用一次2.0mg所述缀合的艾塞那肽-4衍生物。
67.一种治疗个体II型糖尿病的方法，该方法包括向具有II型糖尿病的个体施用包含促胰岛素肽缀合的艾塞那肽-4衍生物的药物制剂，所述衍生物含有与[2-[2-[2-马来酰亚胺基丙酰胺基(乙氧基)乙氧基]乙酸接头共价连接的重组人血清白蛋白半胱氨酸34巯基，所述接头与艾塞那肽-4(1-39)Lys40-NH2羧基末端赖氨酸的ε氨基共价连接，其中向所述个体每周施用二次2.0mg所述缀合的艾塞那肽-4衍生物。
68.一种治疗个体II型糖尿病的方法，该方法包括向具有II型糖尿病的个体施用包含促胰岛素肽缀合的艾塞那肽-4衍生物的药物制剂，所述衍生物含有与[2-[2-[2-马来酰亚胺基丙酰胺基(乙氧基)乙氧基]乙酸接头共价连接的重组人血清白蛋白半胱氨酸34巯基，所述接头与艾塞那肽-4(1-39)Lys40-NH2羧基末端赖氨酸的ε氨基共价连接，其中向所述个体每周施用一次3.0mg所述缀合的艾塞那肽-4衍生物。
69.一种治疗个体II型糖尿病的方法，该方法包括向具有II型糖尿病的个体施用包含促胰岛素肽缀合的艾塞那肽-4衍生物的药物制剂，所述衍生物含有与[2-[2-[2-马来酰亚胺基丙酰胺基(乙氧基)乙氧基]乙酸接头共价连接的重组人血清白蛋白半胱氨酸34巯基，所述接头与艾塞那肽-4(1-39)Lys40-NH2羧基末端赖氨酸的ε氨基共价连接，其中向所述个体每周施用一次1.5mg所述缀合的艾塞那肽-4衍生物，为期4周，接着每周施用一次2.0mg所述缀合的艾塞那肽-4衍生物。
70.治疗个体II型糖尿病的方法，包括向具有II型糖尿病的个体施用包含促胰岛素肽缀合的艾塞那肽-4衍生物的药物制剂，所述衍生物含有与[2-[2-[2-马来酰亚胺基丙酰胺基(乙氧基)乙氧基]乙酸接头共价连接的重组人血清白蛋白半胱氨酸34巯基，所述接头与艾塞那肽-4(1-39)Lys40-NH2羧基末端赖氨酸的ε氨基共价连接，其中向所述个体每周施用二次1.5mg所述缀合的艾塞那肽-4衍生物，为期4周，接着每周施用一次2.0mg所述缀合的艾塞那肽-4衍生物。
71.一种治疗个体II型糖尿病的方法，该方法包括向具有II型糖尿病的个体施用包含促胰岛素肽缀合的艾塞那肽-4衍生物的药物制剂，所述衍生物含有与[2-[2-[2-马来酰亚胺基丙酰胺基(乙氧基)乙氧基]乙酸接头共价连接的重组人血清白蛋白半胱氨酸34巯基，所述接头与艾塞那肽-4(1-39)Lys40-NH2羧基末端赖氨酸的ε氨基共价连接，其中向所述个体每周施用二次1.5mg缀合的艾塞那肽-4衍生物，为期4周，接着每周两次2.0mg所述缀合的艾塞那肽-4衍生物。
72.一种治疗个体II型糖尿病的方法，该方法包括向具有II型糖尿病的个体施用包含促胰岛素肽缀合的艾塞那肽-4衍生物的药物制剂，所述衍生物含有与[2-[2-[2-马来酰亚胺基丙酰胺基(乙氧基)乙氧基]乙酸接头共价连接的重组人血清白蛋白半胱氨酸34巯基，所述接头与艾塞那肽-4(1-39)Lys40-NH2羧基末端赖氨酸的ε氨基共价连接，其中向所述个体每周施用一次1.5mg所述缀合的艾塞那肽-4衍生物，为期4周，接着每周施用一次2.0mg所述缀合的艾塞那肽-4衍生物，为期4周，接着每周施用一次3.0mg所述缀合的艾塞那肽-4衍生物。
73.一种治疗个体II型糖尿病的方法，该方法包括向具有II型糖尿病的个体施用包含促胰岛素肽缀合的艾塞那肽-4衍生物的药物制剂，所述衍生物含有与[2-[2-[2-马来酰亚胺基丙酰胺基(乙氧基)乙氧基]乙酸接头共价连接的重组人血清白蛋白半胱氨酸34巯基，所述接头与艾塞那肽-4(1-39)Lys40-NH2羧基末端赖氨酸的ε氨基共价连接，其中向所述个体每周施用一次1.5mg所述缀合的艾塞那肽-4衍生物，为期2周，接着每周施用一次2.0mg所述缀合的艾塞那肽-4衍生物，为期2周，接着每周施用一次3.0mg所述缀合的艾塞那肽-4衍生物。
74.一种治疗个体II型糖尿病的试剂盒，该试剂盒包括一个或多个含有如权利要求1-46或81-83中任一项所述的药物制剂的容器。
75.如权利要求74所述的试剂盒，其中所述一个或多个容器各自含有所述药物制剂的单位剂型。
76.如权利要求74所述的试剂盒，其中所述药物制剂是冻干的。
77.如权利要求74所述的试剂盒，其中所述冻干的药物制剂通过在非还原糖的存在下冻干而制备。
78.如权利要求74所述的试剂盒，其中所述非还原糖是蔗糖或海藻糖。
79.如权利要求76所述的试剂盒，其还包括一个或多个含有用于重构所述冻干药物制剂的无菌稀释剂的容器。
80.如权利要求47-73中任一项所述的方法，其中所述个体每天使用≥1000mg稳定剂量的二甲双胍至少3个月。
81.一种由以下成分组成的药物制剂：白蛋白与促胰岛素肽的缀合物，所述促胰岛素肽含有相对于天然艾塞那肽-4序列具有不超过3个氨基酸取代、缺失或插入的序列，所述缀合物的浓度为约1mg/ml至约100mg/ml；缓冲液；张力调节剂；稳定剂；和表面活性剂，其中所述制剂的pH为约4.0至约8.0。
82.一种由以下成分组成的药物制剂：
(a)具有下式的缀合物：
Figure FPA00001197230000131
(SEQ ID NO：33)
其中X是白蛋白半胱氨酸34的S，所述缀合物的浓度为10mg/ml；
(b)缓冲液，其中所述缓冲液是浓度为10mM的醋酸钠；
(c)张力调节剂，其中所述张力调节剂是浓度为150mM的氯化钠；
(d)稳定剂，其中所述稳定剂是浓度为5mM的辛酸钠；和
(e)表面活性剂，其中所述表面活性剂是浓度为0.1％(w/v)的普朗尼克F68，
其中所述制剂的pH为约5.0。
83.一种由以下成分组成的药物制剂：
(a)具有下式的缀合物：
(SEQ ID NO：33)
其中X是白蛋白半胱氨酸34的S，所述缀合物的浓度为10mg/ml；
(b)缓冲液，其中所述缓冲液是浓度为10mM的磷酸钠；
(c)张力调节剂，其中所述张力调节剂是浓度为135mM的氯化钠；
(d)稳定剂，其中所述稳定剂是浓度为8mM的辛酸钠；和
(e)表面活性剂，其中所述表面活性剂是浓度为15mg/L的聚山梨醇酯80，其中所述制剂的pH为约7.0。
84.如权利要求47-49、64-73或81-83中任一项所述的方法，其中所述白蛋白是人血清白蛋白。
85.如权利要求47-49、64-73或81-83中任一项所述的方法，其中所述个体是人。
CN2008801265943A 2007-12-11 2008-12-11 促胰岛素肽缀合物制剂 Active CN102026666B (zh)

Applications Claiming Priority (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US734607P 2007-12-11 2007-12-11
US61/007,346 2007-12-11
US2929508P 2008-02-15 2008-02-15
US61/029,295 2008-02-15
US20087908P 2008-12-03 2008-12-03
US61/200,879 2008-12-03
PCT/US2008/013599 WO2009075859A2 (en) 2007-12-11 2008-12-11 Formulation of insulinotropic peptide conjugates

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN102026666A true CN102026666A (zh) 2011-04-20
CN102026666B CN102026666B (zh) 2013-10-16

Family

ID=40636823

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2008801265943A Active CN102026666B (zh) 2007-12-11 2008-12-11 促胰岛素肽缀合物制剂

Country Status (6)

Country Link
US (1) US20090186819A1 (zh)
EP (1) EP2231191A2 (zh)
JP (1) JP2011506442A (zh)
CN (1) CN102026666B (zh)
CA (1) CA2708762A1 (zh)
WO (1) WO2009075859A2 (zh)

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102766204A (zh) * 2011-05-05 2012-11-07 天津药物研究院 胰高血糖素样肽-1突变体多肽及其制备方法和其应用
CN102854325A (zh) * 2011-07-01 2013-01-02 复旦大学 胰岛素与血清蛋白可逆性结合的亲和力指标测定方法及应用
CN103655468A (zh) * 2013-12-02 2014-03-26 无锡和邦生物科技有限公司 一种促胰岛素分泌肽融合蛋白Exendin-4-HSA溶液稳定制剂
CN109562185A (zh) * 2016-06-02 2019-04-02 赛诺菲 药剂与能够结合葡萄糖感应蛋白的部分的新颖缀合物
CN112237571A (zh) * 2020-10-26 2021-01-19 无锡和邦生物科技有限公司 一种提高艾塞那肽人血清白蛋白融合蛋白稳定性的冻干粉

Families Citing this family (48)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6514500B1 (en) * 1999-10-15 2003-02-04 Conjuchem, Inc. Long lasting synthetic glucagon like peptide {GLP-!}
US20090175821A1 (en) * 1999-05-17 2009-07-09 Bridon Dominique P Modified therapeutic peptides with extended half-lives in vivo
CA2638240C (en) * 2008-08-29 2010-02-02 Alexander Macgregor Method of treating dysglycemia and glucose excursions
CN104013569A (zh) * 2008-10-15 2014-09-03 精达制药公司 高浓缩药物颗粒、制剂、混悬剂及其应用
WO2010043566A2 (de) 2008-10-17 2010-04-22 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Kombination von einem insulin und einem glp-1-agonisten
WO2011038301A2 (en) * 2009-09-25 2011-03-31 Xoma Technology Ltd. Screening methods
ES2855146T3 (es) * 2009-11-13 2021-09-23 Sanofi Aventis Deutschland Composición farmacéutica que comprende un agonista de GLP-1, una insulina y metionina
US9707176B2 (en) 2009-11-13 2017-07-18 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Pharmaceutical composition comprising a GLP-1 agonist and methionine
WO2011104557A1 (en) * 2010-02-24 2011-09-01 Arecor Limited Protein formulations
WO2011109787A1 (en) * 2010-03-05 2011-09-09 Conjuchem, Llc Methods of administering insulinotropic peptides
WO2011109784A1 (en) * 2010-03-05 2011-09-09 Conjuchem, Llc Formulation of insulinotropic peptide conjugates
BR112013001398A2 (pt) * 2010-08-11 2016-05-24 Kyowa Medex Co Ltd método, reagente e kit para medir hemoglobina glicada
PT2611458T (pt) 2010-08-30 2016-12-16 Sanofi Aventis Deutschland Utilização de ave0010 para o fabrico de um medicamento para o tratamento da diabetes mellitus tipo 2
US9289516B2 (en) 2011-03-09 2016-03-22 The General Hospital Corporation Imaging beta cell mass
US9821032B2 (en) 2011-05-13 2017-11-21 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Pharmaceutical combination for improving glycemic control as add-on therapy to basal insulin
PT2750699E (pt) 2011-08-29 2015-11-03 Sanofi Aventis Deutschland Acelerómetro pendular
TWI559929B (en) 2011-09-01 2016-12-01 Sanofi Aventis Deutschland Pharmaceutical composition for use in the treatment of a neurodegenerative disease
CN102532303A (zh) * 2011-12-22 2012-07-04 江苏弘和药物研发有限公司 聚乙二醇缀合的艾塞那肽的合成及应用
UA116217C2 (uk) 2012-10-09 2018-02-26 Санофі Пептидна сполука як подвійний агоніст рецепторів glp1-1 та глюкагону
ES2688367T3 (es) 2012-12-21 2018-11-02 Sanofi Derivados de exendina-4 como agonistas duales de GLP1/GIP o trigonales de GLP1/GIP/glucagón
TWI780236B (zh) 2013-02-04 2022-10-11 法商賽諾菲公司 胰島素類似物及/或胰島素衍生物之穩定化醫藥調配物
CN103408669B (zh) * 2013-08-01 2016-01-20 江苏泰康生物医药有限公司 Glp-1类似物融合蛋白，及其制备方法和用途
EP3080154B1 (en) 2013-12-13 2018-02-07 Sanofi Dual glp-1/gip receptor agonists
WO2015086733A1 (en) 2013-12-13 2015-06-18 Sanofi Dual glp-1/glucagon receptor agonists
EP3080152A1 (en) 2013-12-13 2016-10-19 Sanofi Non-acylated exendin-4 peptide analogues
TW201609795A (zh) 2013-12-13 2016-03-16 賽諾菲公司 作為雙重ｇｌｐ－１／ｇｉｐ受體促效劑的艾塞那肽－４（ｅｘｅｎｄｉｎ－４）胜肽類似物
CN112957455A (zh) 2014-01-09 2021-06-15 赛诺菲 胰岛素类似物和/或胰岛素衍生物的稳定化药物制剂
WO2015104311A1 (en) 2014-01-09 2015-07-16 Sanofi Stabilized glycerol free pharmaceutical formulations of insulin analogues and/or insulin derivatives
SG11201604706TA (en) 2014-01-09 2016-07-28 Sanofi Sa Stabilized pharmaceutical formulations of insulin aspart
TW201625668A (zh) 2014-04-07 2016-07-16 賽諾菲公司 作為胜肽性雙重ｇｌｐ－１／昇糖素受體激動劑之艾塞那肽－４衍生物
TW201625670A (zh) 2014-04-07 2016-07-16 賽諾菲公司 衍生自ｅｘｅｎｄｉｎ－４之雙重ｇｌｐ－１／升糖素受體促效劑
TW201625669A (zh) 2014-04-07 2016-07-16 賽諾菲公司 衍生自艾塞那肽－４（Ｅｘｅｎｄｉｎ－４）之肽類雙重ＧＬＰ－１／升糖素受體促效劑
MX2016013588A (es) * 2014-04-17 2017-01-26 Merck Sharp & Dohme Complejo de tanato de sitagliptina.
US9932381B2 (en) 2014-06-18 2018-04-03 Sanofi Exendin-4 derivatives as selective glucagon receptor agonists
WO2016038521A1 (en) * 2014-09-08 2016-03-17 Sun Pharmaceutical Industries Limited Pharmaceutical compositions of liraglutide
CR20170234A (es) * 2014-11-06 2018-01-15 Xellia Pharmaceuticals Aps Composiciones de antibiótico
CN107206058A (zh) 2014-12-12 2017-09-26 赛诺菲-安万特德国有限公司 甘精胰岛素/利西拉来固定比率配制剂
TWI748945B (zh) 2015-03-13 2021-12-11 德商賽諾菲阿凡提斯德意志有限公司 第２型糖尿病病患治療
TW201705975A (zh) 2015-03-18 2017-02-16 賽諾菲阿凡提斯德意志有限公司 第２型糖尿病病患之治療
AR105319A1 (es) 2015-06-05 2017-09-27 Sanofi Sa Profármacos que comprenden un conjugado agonista dual de glp-1 / glucagón conector ácido hialurónico
TW201706291A (zh) 2015-07-10 2017-02-16 賽諾菲公司 作為選擇性肽雙重ｇｌｐ－１／升糖素受體促效劑之新毒蜥外泌肽（ｅｘｅｎｄｉｎ－４）衍生物
TWI762706B (zh) 2017-08-24 2022-05-01 丹麥商諾佛 儂迪克股份有限公司 Glp-1組成物及其用途
CN108042794B (zh) * 2018-01-05 2022-01-25 北京博康健基因科技有限公司 重组促胰岛素分泌素的稳定制剂及其制备方法
TWI829687B (zh) 2018-05-07 2024-01-21 丹麥商諾佛 儂迪克股份有限公司 包含glp-1促效劑與n-(8-(2-羥基苯甲醯基)胺基)辛酸之鹽的固體組成物
WO2021144476A1 (en) 2020-02-18 2021-07-22 Novo Nordisk A/S Pharmaceutical formulations
WO2021235915A1 (ko) * 2020-05-22 2021-11-25 한미약품 주식회사 액상 제제
KR20230129425A (ko) * 2020-12-07 2023-09-08 스핏파이어 파마, 엘엘씨 Glp-1r 및 gcgr의 균형 잡힌 작용제를 사용하여 혈당및/또는 체중을 낮추기 위한 치료 요법 및 방법
JP2024503242A (ja) * 2020-12-24 2024-01-25 ハンミ ファーマシューティカル カンパニー リミテッド 短腸症候群の予防又は治療のためのインスリン分泌ペプチドとｇｌｐ－２の併用療法

Family Cites Families (60)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4462941A (en) * 1982-06-10 1984-07-31 The Regents Of The University Of California Dynorphin amide analogs
US5614492A (en) * 1986-05-05 1997-03-25 The General Hospital Corporation Insulinotropic hormone GLP-1 (7-36) and uses thereof
US5118666A (en) * 1986-05-05 1992-06-02 The General Hospital Corporation Insulinotropic hormone
US5120712A (en) * 1986-05-05 1992-06-09 The General Hospital Corporation Insulinotropic hormone
US5545618A (en) * 1990-01-24 1996-08-13 Buckley; Douglas I. GLP-1 analogs useful for diabetes treatment
US5612034A (en) * 1990-10-03 1997-03-18 Redcell, Inc. Super-globuling for in vivo extended lifetimes
US5843440A (en) * 1990-10-03 1998-12-01 Redcell Canada, Inc. Cellular and serum protein anchors for modulating pharmacokinetics
JPH06509551A (ja) * 1991-04-05 1994-10-27 ジェネンテク，インコーポレイテッド Ｇｐ　ＩＩ↓ｂＩＩＩ↓ａに対する高い特異性を有する血小板凝集阻害剤
US5614487A (en) * 1993-05-28 1997-03-25 Genentech, Inc. Sustained release pharmaceutical composition
US5705483A (en) * 1993-12-09 1998-01-06 Eli Lilly And Company Glucagon-like insulinotropic peptides, compositions and methods
DK145493D0 (da) * 1993-12-23 1993-12-23 Dako As Antistof
US5574008A (en) * 1994-08-30 1996-11-12 Eli Lilly And Company Biologically active fragments of glucagon-like insulinotropic peptide
YU18596A (sh) * 1995-03-31 1998-07-10 Eli Lilly And Company Analogne formulacije monomernog insulina
US5654276A (en) * 1995-06-07 1997-08-05 Affymax Technologies N.V. Peptides and compounds that bind to the IL-5 receptor
WO1997046584A1 (de) * 1996-06-05 1997-12-11 Boehringer Mannheim Gmbh Exendin-analoga, verfahren zu deren herstellung und diese enthaltende arzneimittel
CA2262647C (en) * 1996-08-08 2007-12-04 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Methods for regulating gastrointestinal motility
AU4351897A (en) * 1996-09-16 1998-04-02 Conjuchem, Inc. Affinity labeling libraries with tagged leaving groups
UA65549C2 (uk) * 1996-11-05 2004-04-15 Елі Ліллі Енд Компані Спосіб регулювання ожиріння шляхом периферійного введення аналогів та похідних glp-1 (варіанти) та фармацевтична композиція
FR2757973B1 (fr) * 1996-12-27 1999-04-09 Sgs Thomson Microelectronics Processeur de traitement matriciel
ES2247676T3 (es) * 1997-01-07 2006-03-01 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Uso de las exendinas y de los agonistas de las mismas para la reduccion de la ingesta alimenticia.
US6723530B1 (en) * 1997-02-05 2004-04-20 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Polynucleotides encoding proexendin, and methods and uses thereof
US7157555B1 (en) * 1997-08-08 2007-01-02 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Exendin agonist compounds
CA2305597C (en) * 1997-11-07 2008-07-29 Conjuchem Inc. Affinity markers for human serum albumin
US6437092B1 (en) * 1998-11-06 2002-08-20 Conjuchem, Inc. Conjugates of opioids and endogenous carriers
US7223725B1 (en) * 1997-11-14 2007-05-29 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Exendin agonist compounds
EP1056775B1 (en) * 1998-02-27 2010-04-28 Novo Nordisk A/S Glp-1 derivatives of glp-1 and exendin with protracted profile of action
US6107489A (en) * 1998-03-17 2000-08-22 Conjuchem, Inc. Extended lifetimes in vivo renin inhibitors
US6998387B1 (en) * 1998-03-19 2006-02-14 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Human appetite control by glucagon-like peptide receptor binding compounds
US20030170250A1 (en) * 1998-03-23 2003-09-11 Ezrin Alan M. Local delivery of long lasting therapeutic agents
DE122007000001I1 (de) * 1999-01-14 2007-06-28 Amylin Pharmaceuticals Inc Neue exendin agonist Formulierungen und deren Verabreichung
ES2343072T3 (es) * 1999-01-14 2010-07-22 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Exendina para la supresion del glucagon.
US6451974B1 (en) * 1999-03-17 2002-09-17 Novo Nordisk A/S Method of acylating peptides and novel acylating agents
US6924264B1 (en) * 1999-04-30 2005-08-02 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Modified exendins and exendin agonists
US7144854B1 (en) * 1999-09-10 2006-12-05 Conjuchem, Inc. Long lasting anti-angiogenic peptides
US6887470B1 (en) * 1999-09-10 2005-05-03 Conjuchem, Inc. Protection of endogenous therapeutic peptides from peptidase activity through conjugation to blood components
US6514500B1 (en) * 1999-10-15 2003-02-04 Conjuchem, Inc. Long lasting synthetic glucagon like peptide {GLP-!}
US20040266673A1 (en) * 2002-07-31 2004-12-30 Peter Bakis Long lasting natriuretic peptide derivatives
US6329336B1 (en) * 1999-05-17 2001-12-11 Conjuchem, Inc. Long lasting insulinotropic peptides
US6849714B1 (en) * 1999-05-17 2005-02-01 Conjuchem, Inc. Protection of endogenous therapeutic peptides from peptidase activity through conjugation to blood components
EP2110381A1 (en) * 1999-05-17 2009-10-21 ConjuChem Biotechnologies Inc. Long lasting fusion peptide inhibitors of viral infection
US6506724B1 (en) * 1999-06-01 2003-01-14 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Use of exendins and agonists thereof for the treatment of gestational diabetes mellitus
AU5325200A (en) * 1999-06-21 2001-01-09 Eli Lilly And Company Synergistic use of thiazolidinediones with glucagon-like peptide-1 and agonists thereof to treat metabolic instability associated with non-insulin dependent diabetes
US6528486B1 (en) * 1999-07-12 2003-03-04 Zealand Pharma A/S Peptide agonists of GLP-1 activity
US6706892B1 (en) * 1999-09-07 2004-03-16 Conjuchem, Inc. Pulmonary delivery for bioconjugation
US7090841B1 (en) * 2000-05-01 2006-08-15 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Use of CD63 inhibitors
CN1462191B (zh) * 2000-05-19 2013-07-24 埃米林药品公司 Glp-1用于制备治疗急性冠脉综合征的药物的用途
CA2395165C (en) * 2000-10-20 2012-05-22 Mario Ehlers Treatment of hibernating myocardium and diabetic cardiomyopathy with a glp-1 peptide
US7268113B2 (en) * 2001-02-02 2007-09-11 Conjuchem Biotechnologies Inc. Long lasting growth hormone releasing factor derivatives
EA006160B1 (ru) * 2001-02-16 2005-10-27 Конджачем, Инк. Долгоживущий глюкагоноподобный пептид 2(glp-2, гпп-2) для лечения желудочно-кишечных заболеваний и расстройств
DE10114178A1 (de) * 2001-03-23 2002-10-10 Aventis Pharma Gmbh Zinkfreie und zinkarme Insulinzubereitungen mit verbesserter Stabilität
PT1479691E (pt) * 2001-05-31 2007-02-28 John Erickson Inibidores de péptido de fusão de longa duração para a infecção por hiv
CA2471363C (en) * 2001-12-21 2014-02-11 Human Genome Sciences, Inc. Albumin fusion proteins
US7105489B2 (en) * 2002-01-22 2006-09-12 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for treating polycystic ovary syndrome
US6861236B2 (en) * 2002-05-24 2005-03-01 Applied Nanosystems B.V. Export and modification of (poly)peptides in the lantibiotic way
EP1575490A4 (en) * 2002-06-04 2007-08-08 Lilly Co Eli MODIFIED ANALOGUES OF GLUCAGON-LIKE PEPTIDE-1 (GLP-1)
WO2005046716A1 (en) * 2003-11-13 2005-05-26 Novo Nordisk A/S Soluble pharmaceutical compositions for parenteral administration comprising a glp-1 peptide and a insulin peptide of short time action for treatment of diabetes and bulimia
MXPA06006746A (es) * 2003-12-18 2006-08-18 Novo Nordisk As Analogos de glp-1 novedosos ligados a agentes similares a albumina.
PL1745078T3 (pl) * 2004-04-23 2009-12-31 Conjuchem Biotechnologies Inc Sposób oczyszczania koniugatów albumin
CN112618700A (zh) * 2004-11-12 2021-04-09 诺和诺德公司 促胰岛素肽的稳定制剂
US8039432B2 (en) * 2005-11-09 2011-10-18 Conjuchem, Llc Method of treatment of diabetes and/or obesity with reduced nausea side effect

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102766204A (zh) * 2011-05-05 2012-11-07 天津药物研究院 胰高血糖素样肽-1突变体多肽及其制备方法和其应用
CN102766204B (zh) * 2011-05-05 2014-10-15 天津药物研究院 胰高血糖素样肽-1突变体多肽及其制备方法和其应用
CN102854325A (zh) * 2011-07-01 2013-01-02 复旦大学 胰岛素与血清蛋白可逆性结合的亲和力指标测定方法及应用
CN102854325B (zh) * 2011-07-01 2015-01-07 复旦大学 胰岛素与血清蛋白可逆性结合的亲和力指标测定方法及应用
CN103655468A (zh) * 2013-12-02 2014-03-26 无锡和邦生物科技有限公司 一种促胰岛素分泌肽融合蛋白Exendin-4-HSA溶液稳定制剂
CN103655468B (zh) * 2013-12-02 2015-04-22 无锡和邦生物科技有限公司 一种促胰岛素分泌肽融合蛋白Exendin-4-HSA溶液稳定制剂
CN109562185A (zh) * 2016-06-02 2019-04-02 赛诺菲 药剂与能够结合葡萄糖感应蛋白的部分的新颖缀合物
CN112237571A (zh) * 2020-10-26 2021-01-19 无锡和邦生物科技有限公司 一种提高艾塞那肽人血清白蛋白融合蛋白稳定性的冻干粉
CN112237571B (zh) * 2020-10-26 2022-06-07 无锡和邦生物科技有限公司 一种提高艾塞那肽人血清白蛋白融合蛋白稳定性的冻干粉

Also Published As

Publication number Publication date
US20090186819A1 (en) 2009-07-23
CA2708762A1 (en) 2009-06-18
WO2009075859A2 (en) 2009-06-18
CN102026666B (zh) 2013-10-16
EP2231191A2 (en) 2010-09-29
JP2011506442A (ja) 2011-03-03
WO2009075859A3 (en) 2010-01-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102026666B (zh) 促胰岛素肽缀合物制剂
JP6685343B2 (ja) 持続型インスリン分泌性ペプチド結合体の液状製剤
WO2011109784A1 (en) Formulation of insulinotropic peptide conjugates
US10406230B2 (en) Exendin-4 analogue pegylated with polyethylene glycol or derivative thereof, preparation method thereof, and pharmaceutical composition for preventing or treating diabetes, containing same as active ingredient
WO2011109787A1 (en) Methods of administering insulinotropic peptides
TWI652071B (zh) 包含調酸素及免疫球蛋白片段之蛋白質接合物的液態製劑
CN104519871B (zh) 长效胰岛素缀合物的液体制剂
JP4689833B2 (ja) グルカゴン様ペプチド−１の貯蔵安定性製剤
US8202837B2 (en) Methods for administering hypoglycemic agents
US8501693B2 (en) Use of exendins and exendin agonists and GLP-1 receptor agonists for altering the concentration of fibrinogen
CN103596595A (zh) 用于治疗糖尿病的包括长效胰岛素缀合物和长效促胰岛素肽缀合物的组合物
JP2011506442A5 (zh)
ZA200406626B (en) Method for administering glp-1 molecules
JP2010031018A5 (zh)
EP1711532A2 (en) Combined use of a glp-1 agonist and gastrin compounds
WO2008056726A1 (fr) Dérivé de glp-1 et son utilisation
US20090209469A1 (en) Use of Exendins and GLP-1 Receptor Agonists for Altering Lipoprotein Particle Size and Subclass Composition
CN105025919A (zh) 用于血糖控制的治疗剂、组合物和方法
WO2023083301A1 (zh) Glp-1受体和gip受体双重激动剂的药物组合物及其用途
EP1600162A1 (en) Shelf-stable formulation of glucagon-like peptide-1
CN104870469A (zh) 药物组合物
WO2023143458A1 (zh) 酰化胰岛素
MXPA01005648A (en) Shelf-stable formulation of glucagon-like peptide-1

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
ASS Succession or assignment of patent right

Owner name: KANGJIU CO., LTD.

Free format text: FORMER OWNER: CALIFORNIA CAPITAL EQUITY, LLC

Effective date: 20130621

Owner name: CHANGSHAN KAIJIEJIAN BIOLOGICAL MEDICINE RESEARCH

Free format text: FORMER OWNER: KANGJIU CO., LTD.

Effective date: 20130621

Owner name: CALIFORNIA CAPITAL EQUITY, LLC

Free format text: FORMER OWNER: CONJUCHEM INC.

Effective date: 20130621

C41 Transfer of patent application or patent right or utility model
COR Change of bibliographic data

Free format text: CORRECT: ADDRESS; TO: 050000 SHIJIAZHUANG, HEBEI PROVINCE

TA01 Transfer of patent application right

Effective date of registration: 20130621

Address after: 050000, Zhengding Road, Zhengding Town, Zhengding County, Hebei, Shijiazhuang province 9

Applicant after: Changshan kaijiejian biological drug R & D (Hebei) Co.,Ltd.

Address before: California, USA

Applicant before: Kangjiu LLC

Effective date of registration: 20130621

Address after: California, USA

Applicant after: Kangjiu LLC

Address before: California, USA

Applicant before: ABRAXIS BIOSCIENCE, LLC

Effective date of registration: 20130621

Address after: California, USA

Applicant after: ABRAXIS BIOSCIENCE, LLC

Address before: Quebec, Montreal, Canada

Applicant before: Conjuchem Biotechnologies Inc.

Effective date of registration: 20130621

Address after: Quebec, Montreal, Canada

Applicant after: CONJUCHEM BIOTECHNOLOGIES Inc.

Address before: Quebec

Applicant before: Conjuchem Biotechnologies Inc.

C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant