CN101914092A - 双环氮杂烷类衍生物、其制备方法及其在医药上的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及双环氮杂烷类衍生物、其制备方法及其在医药上的用途，特别是一种通式(I)所示的新的双环氮杂烷类衍生物、其制备方法及含有该衍生物的药物组合物以及其作为治疗剂特别是作为二肽基肽酶抑制剂(DPPIV)的用途，其中通式(I)的各取代基同说明书中的定义相同。

Description

双环氮杂烷类衍生物、其制备方法及其在医药上的用途
本申请是申请号为200810004727.1，申请日为2008年1月23日，发明名称为“双环氮杂烷类衍生物、其制备方法及其在医药上的用途”的中国发明专利申请的分案申请。
技术领域
本发明涉及一种双环氮杂烷类衍生物、其制备方法及含有该衍生物的药物组合物以及其作为治疗剂特别是作为二肽基肽酶抑制剂(DPPIV)的用途。
背景技术
糖尿病是一种多病因的代谢疾病，特点是慢性高血糖，伴随因胰岛素分泌及/或作用缺陷引起的糖、脂肪和蛋白质代谢紊乱。糖尿病是一种非常古老的疾病，是由于人体内胰岛素绝对或相对缺乏而引起的血中葡萄糖浓度升高，进而糖大量从尿中排出，并出现多饮、多尿、多食、消瘦、头晕、乏力等症状。
二肽基肽酶-IV(DPPIV)是一种丝氨酸蛋白酶，它可以在次末端含有一个脯氨酸残基的肽链里裂解N-末端二肽酶，尽管DPPIV对哺乳动物的生理作用还没有得到完全的证实，但其在神经酶代谢，T-细胞激活，癌细胞转移入内皮及HIV病毒进入淋巴样细胞过程中都起到重要的作用(WO98/19998)。
最近，有研究表明DPPIV可以阻止胰升糖素样肽(GLP)-1的分泌，尤其，它可以裂解GLP-1中N-末端的组-丙二肽酶，使其从活性形式的GLP-1(7-36)NH2降解为无活性的GLP-1(9-36)NH2(Endocrinology，1999，140：5356～5363)。由于生理情况下，循环血中完整GLP-1的半衰期很短，DPPIV降解GLP-1后的无活性代谢物能与GLP-1受体结合拮抗活性GLP-1从而缩短了对GLP-1的生理反应。而DPPIV抑制剂能完全保护内源性甚至外源性的GLP-1不被DPPIV灭活，极大的提高GLP-1的生理活性(5～10倍)，由于GLP-1对胰腺胰岛素的分泌是一个重要的刺激器并能直接影响葡萄糖的分配，DPPIV抑制剂对非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM)的治疗起到很好的作用(US6110949)。
发明内容
本发明涉及一种由通式(I)表示的化合物或其药学上可接受的盐：
其中：
R选自烷基、环烷基、卤代烷基、芳基、杂芳基、胺酰烷基、酰胺烷基、杂环胺酰烷基或氨烷基，其中所述杂环为五元杂环或六元杂环，且该杂环进一步被一个或多个烷基、芳基、杂芳基、卤代烷基、卤代烷氧基、羟基、氨基、烷氨基、酰胺基、胺酰基、氰基、炔基、烷氧基、芳氧基、氨烷基、羟烷基、杂环烷基、羧酸、羧酸酯或卤素取代；
R1选自氢原子、烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、-C(O)NR3R4、-C(O)R3、-C(O)OR3，其中烷基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基可以进一步被一个或多个烷基、芳基、羟基、氨基、烷氧基、芳氧基或杂环烷基所取代；
R2选自氢原子或烷基，其中烷基进一步被一个或多个选自环烷基或芳基的取代基所取代；
R3和R4分别选自氢原子、烷基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环烷基，其中烷基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环烷基可以进一步被一个或多个烷基、环烷基、芳基、杂芳基、烷氧基、环烷氧基、芳氧基、杂芳氧基、卤素、羟基、氨基、氰基、羟烷基、杂环烷基、杂环烷氧基、三氟甲基、羧酸或羧酸酯所取代；
同时R3和R4可以与N原子一起形成一个3～8元的杂环基，其中5～8元杂环内可以进一步含有一个或多个N、O或S原子，并且3～8元杂环上可以进一步被一个或多个烷基、芳基、杂芳基、卤代烷基、卤代烷氧基、羟基、氨基、氰基、烷氧基、芳氧基、羟烷基、杂环烷基、羧酸、羧酸酯、卤素或-NR3R4所取代；
n是0～4。
进一步，本发明包括下述通式(IA)表示的化合物或其药学上可接受的盐：
Figure BSA00000195667900022
其中：
R选自烷基、环烷基、卤代烷基、芳基、杂芳基、胺酰烷基、酰胺烷基、杂环胺酰烷基或氨烷基，其中所述杂环为五元杂环或六元杂环，且该杂环进一步被一个或多个烷基、芳基、杂芳基、卤代烷基、卤代烷氧基、羟基、氨基、烷氨基、酰胺基、胺酰基、氰基、炔基、烷氧基、芳氧基、氨烷基、羟烷基、杂环烷基、羧酸、羧酸酯或卤素取代；
R1选自氢原子、烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、-C(O)NR3R4、-C(O)R3、-C(O)OR3，其中烷基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基可以进一步被一个或多个烷基、芳基、羟基、氨基、烷氧基、芳氧基或杂环烷基所取代；
R2选自氢原子或烷基，其中烷基进一步被一个或多个选自环烷基或芳基的取代基所取代；
R3和R4分别选自氢原子、烷基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环烷基，其中烷基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环烷基可以进一步被一个或多个烷基、环烷基、芳基、杂芳基、烷氧基、环烷氧基、芳氧基、杂芳氧基、卤素、羟基、氨基、氰基、羟烷基、杂环烷基、杂环烷氧基、三氟甲基、羧酸或羧酸酯所取代；
同时R3和R4可以与N原子一起形成一个3～8元的杂环基，其中5～8元杂环内可以进一步含有一个或多个N、O或S原子，并且3～8元杂环上可以进一步被一个或多个烷基、芳基、杂芳基、卤代烷基、卤代烷氧基、羟基、氨基、氰基、烷氧基、芳氧基、羟烷基、杂环烷基、羧酸、羧酸酯、卤素或-NR3R4所取代。
优选地，在通式(I)所示的化合物或其盐中，R为
Figure BSA00000195667900031
其中：
R5选自氢原子、烷基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环烷基，其中烷基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环烷基可以进一步被一个或多个烷基、环烷基、芳基、杂芳基、烷氧基、环烷氧基、芳氧基、杂芳氧基、卤素、羟基、氨基、烷氨基、氰基、羟烷基、杂环烷基、杂环烷氧基、羧酸或羧酸酯所取代；
R6和R7各自分别选自烷基、芳基、杂芳基、卤代烷基、卤代烷氧基、羟基、氨基、氰基、炔基、烷氧基、芳氧基、羟烷基、杂环烷基、羧酸、羧酸酯或卤素；
W为碳、硫或氧原子，当W为碳时，可以进一步被R6或R7所取代。
进一步，本发明包括下述(IB)表示的化合物或其药学上可接受的盐：
Figure BSA00000195667900041
其中：R是
Figure BSA00000195667900042
R1选自氢原子、烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、-C(O)NR3R4、-C(O)R3、-C(O)OR3，其中烷基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基进一步被一个或多个选自烷基、芳基、羟基、氨基、烷氧基、芳氧基或杂环烷基的取代基所取代；
R2选自氢原子或烷基，其中烷基进一步被一个或多个选自环烷基或芳基的取代基所取代；
R3和R4分别选自氢原子、烷基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环烷基，其中烷基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环烷基进一步被一个或多个选自烷基、环烷基、芳基、杂芳基、烷氧基、环烷氧基、芳氧基、杂芳氧基、卤素、羟基、氨基、氰基、羟烷基、杂环烷基、杂环烷氧基、三氟甲基、羧酸或羧酸酯的取代基所取代；
同时R3和R4与N原子一起形成一个3～8元的杂环基，其中5～8元杂环内进一步含有一个或多个N、O或S原子，并且3～8元杂环进一步被一个或多个选自烷基、芳基、杂芳基、卤代烷基、卤代烷氧基、羟基、氨基、氰基、烷氧基、芳氧基、羟烷基、杂环烷基、羧酸、羧酸酯、卤素或-NR3R4的取代基所取代；
R5选自氢原子、烷基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环烷基，其中烷基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环烷基进一步被一个或多个选自烷基、环烷基、芳基、杂芳基、烷氧基、环烷氧基、芳氧基、杂芳氧基、卤素、羟基、氨基、烷氨基、氰基、羟烷基、杂环烷基、杂环烷氧基、羧酸或羧酸酯的取代基所取代；
R6和R7各自分别选自烷基、芳基、杂芳基、卤代烷基、卤代烷氧基、羟基、氨基、氰基、炔基、烷氧基、芳氧基、羟烷基、杂环烷基、羧酸、羧酸酯或卤素；
W为碳、硫或氧原子，当W为碳时，可以进一步被R6或R7所取代。
进一步，本发明包括下述通式(IC)表示的化合物或其药学上可接受的盐：
Figure BSA00000195667900043
其中：R是
R1选自氢原子、烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、-C(O)NR3R4、-C(O)R3、-C(O)OR3，其中烷基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基进一步被一个或多个选自烷基、芳基、羟基、氨基、烷氧基、芳氧基或杂环烷基的取代基所取代；
R2选自氢原子或烷基，其中烷基进一步被一个或多个选自环烷基或芳基的取代基所取代；
R3和R4分别选自氢原子、烷基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环烷基，其中烷基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环烷基进一步被一个或多个选自烷基、环烷基、芳基、杂芳基、烷氧基、环烷氧基、芳氧基、杂芳氧基、卤素、羟基、氨基、氰基、羟烷基、杂环烷基、杂环烷氧基、三氟甲基、羧酸或羧酸酯的取代基所取代；
同时R3和R4与N原子一起形成3～8元的杂环基，其中5～8元杂环内进一步含有一个或多个N、O或S原子，并且3～8元杂环进一步被一个或多个选自烷基、芳基、杂芳基、卤代烷基、卤代烷氧基、羟基、氨基、氰基、烷氧基、芳氧基、羟烷基、杂环烷基、羧酸、羧酸酯、卤素或-NR3R4的取代基所取代；
R5选自氢原子、烷基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环烷基，其中烷基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环烷基进一步被一个或多个选自烷基、环烷基、芳基、杂芳基、烷氧基、环烷氧基、芳氧基、杂芳氧基、卤素、羟基、氨基、烷氨基、氰基、羟烷基、杂环烷基、杂环烷氧基、羧酸或羧酸酯的取代基所取代；
R6和R7各自分别选自烷基、芳基、杂芳基、卤代烷基、卤代烷氧基、羟基、氨基、氰基、炔基、烷氧基、芳氧基、羟烷基、杂环烷基、羧酸、羧酸酯或卤素；
W为碳、硫或氧原子，当W为碳时，可以进一步被R6或R7所取代。
本发明中所述的药学上可接受的盐为本发明化合物与选自下列的酸形成的盐：盐酸、对甲苯磺酸、酒石酸、马来酸、乳酸、甲磺酸、硫酸、磷酸、柠檬酸、乙酸或三氟乙酸。优选为对甲苯磺酸、盐酸、酒石酸或三氟乙酸。
具体地，本发明包括如下所述结构的化合物及其盐：
Figure BSA00000195667900052
Figure BSA00000195667900061
Figure BSA00000195667900081
进一步，本发明涉及一种如下列通式(ID)所示的化合物，其作为本发明通式(I)化合物合成的中间体：
其中：
R1选自氢原子、烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、-C(O)NR3R4、-C(O)R3、-C(O)OR3，其中烷基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基进一步被一个或多个选自烷基、芳基、羟基、氨基、烷氧基、芳氧基或杂环烷基的取代基所取代；
R3和R4分别选自氢原子、烷基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环烷基，其中烷基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环烷基进一步被一个或多个选自烷基、环烷基、芳基、杂芳基、烷氧基、环烷氧基、芳氧基、杂芳氧基、卤素、羟基、氨基、氰基、羟烷基、杂环烷基、杂环烷氧基、三氟甲基、羧酸或羧酸酯的取代基所取代；
同时R3和R4与N原子一起形成3～8元的杂环基，其中5～8元杂环内进一步含有一个或多个N、O或S原子，并且3～8元杂环进一步被一个或多个选自烷基、芳基、杂芳基、卤代烷基、卤代烷氧基、羟基、氨基、氰基、烷氧基、芳氧基、羟烷基、杂环烷基、羧酸、羧酸酯、卤素或-NR3R4的取代基所取代。
本发明涉及通式(ID)所示化合物的制备方法，包括：
Figure BSA00000195667900092
冰浴下，将原料叔丁基-5-氧代-六氢-并环戊二烯吡咯-2-羧酸酯在适宜的溶剂中(如二氯甲烷)与三氟乙酸下反应得到六氢并环戊二烯吡咯-5-酮三氟乙酸盐；
Figure BSA00000195667900093
六氢并环戊二烯吡咯-5-酮三氟乙酸盐在碱存在下与酰氯或酯类反应得到通式(ID)的化合物；
本发明涉及通式(IB)所示化合物的制备方法，包括：
Figure BSA00000195667900101
将所述的中间体(ID)室温条件下在适宜的溶剂(如甲醇、乙醇)中与的不同胺、取代的硼氢化钠，在碱性条件下(如三乙胺)反应得到通式(IB)化合物。
本发明涉及通式(IB)所示化合物的制备方法，包括：
Figure BSA00000195667900102
将叔丁醇钾和甲基三苯基磷碘的甲苯溶液加热后，在室温下将中间体(ID)化合物加入到上述溶液中反应，得到氮杂双环烯基化合物；
Figure BSA00000195667900103
氮杂双环烯基化合物在合适的溶剂中(如二氯甲烷)，在高氯酸银作用下室温下与三甲基硅氰反应得到氮杂双环氰基化合物；
将氮杂双环氰基化合物在合适的溶剂中(如乙醇)与适宜的酸(如盐酸)在室温下反应得到氮杂双环氨基化合物；
将氮杂双环氨基化合物在碱性溶剂(如N，N-二甲基甲酰胺)溶剂中与卤化物反应得到通式(IB)化合物。
本发明涉及通式(IB)所示化合物的制备方法，包括：
Figure BSA00000195667900111
将中间体(ID)化合物和对甲苯磺酰甲基异腈在适宜的溶剂中(如乙二醇二甲醚)发生异氰化反应得到氮杂双环氰基化合物；
Figure BSA00000195667900112
氮杂双环氰基化合物在在适宜的溶剂中(如四氢呋喃)，在六甲基二硅基胺基锂作用下与卤化物反应，得到R2取代的氮杂双环氰基化合物；
Figure BSA00000195667900113
R2取代的氮杂双环氰基化合物在酸的作用下水解得到R2取代的氮杂双环羧基化合物；
或者R2取代的氮杂双环氰基化合物在适宜的溶剂中(如二氯甲烷)，在冰浴下与还原剂(DIBAL-H)反应，先将氰基还原成醛基，得到的醛在四氢呋喃/水混合溶剂中，在冰浴下与磷酸二氢钠、亚氯酸钠和2-甲基-2-丁烯反应，得到R2取代的氮杂双环羧基化合物；
Figure BSA00000195667900114
将R2取代的氮杂双环羧基化合物在碱性条件下(如三乙胺)及氯甲酸乙酯作用下发生叠氮化反应得到氮杂双环叠氮基化合物；
Figure BSA00000195667900121
氮杂双环叠氮基化合物在适宜的溶剂中(如甲苯)加热，再在酸性溶液中搅拌，并调节pH为碱性，得到R2取代的氮杂双环氨基化合物；
Figure BSA00000195667900122
将R2取代的氮杂双环氨基化合物在碱性溶剂中(如N，N-二甲基甲酰胺)，与卤化物反应得到通式(IB)化合物。
本发明涉及通式(IC)所示化合物的制备方法，包括：
Figure BSA00000195667900123
将中间体(ID)在适宜的溶剂中(如四氢呋喃)，冰浴下与还原剂(如三叔丁基氧铝锂氢)反应得到氮杂双环羟基化合物；
Figure BSA00000195667900124
氮杂双环羟基化合物在适宜的溶剂中(如二氯甲烷)，冰浴下与碱性试剂(如三乙胺)、甲磺酰氯反应得到氮杂双环甲磺酸基化合物；
Figure BSA00000195667900131
氮杂双环甲磺酸基化合物在碱性试剂中(如N，N-二甲基甲酰胺溶剂)与邻苯二甲酰亚胺钾盐加热反应得到邻苯二甲酰亚胺取代的氮杂双环化合物；
Figure BSA00000195667900132
邻苯二甲酰亚胺取代的氮杂双环化合物在适宜的溶剂中(如乙醇)，与肼加热得到氮杂双环氨基化合物；
Figure BSA00000195667900133
氮杂双环氨基化合物在适宜的溶剂中(如二氯甲烷)，与卤化物加热，反应得到通式(IC)化合物。
优选地，R为：
R5选自氢原子、烷基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环烷基，其中烷基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环烷基进一步被一个或多个选自烷基、环烷基、芳基、杂芳基、烷氧基、环烷氧基、芳氧基、杂芳氧基、卤素、羟基、氨基、烷氨基、氰基、羟烷基、杂环烷基、杂环烷氧基、羧酸或羧酸酯的取代基所取代；
R6和R7各自分别选自烷基、芳基、杂芳基、卤代烷基、卤代烷氧基、羟基、氨基、氰基、炔基、烷氧基、芳氧基、羟烷基、杂环烷基、羧酸、羧酸酯或卤素；
W为碳、硫或氧原子，当W为碳时，可以进一步被R6或R7所取代。
进一步，本发明还包括将得到的通式(IB)或(IC)化合物经纯化后在酸的甲醇、二氯甲烷或乙酸乙酯溶液中反应，得到其酸加成产物盐。
进一步，本发明涉及一种药物组合物，其含有治疗有效剂量的本发明化合物或其药学上可接受的盐，和药学上可接受的载体。
进一步，本发明还涉及本发明化合物化合物或其药学上可接受的盐在制备二肽基肽酶(DPPIV)抑制剂药物中的用途。
在本发明通式(I)所表述的化合物或其盐中，通式(I)以游离态或者以酸加成盐的形式存在，并提供医药上允许的(非毒性的，生理允许的)盐；所述的医药上允许的盐包括盐酸盐、对甲苯磺酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、乳酸盐、甲磺酸盐、硫酸盐、磷酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐或三氟乙酸盐。优选为对甲苯磺酸盐、盐酸盐、酒石酸盐及三氟乙酸盐。
发明的详细说明
除非有相反陈述，下列用在说明书和权利要求书中的术语具有下述含义。
“烷基”指饱和的脂族烃基团，包括1至20个碳原子的直链和支链基团。优选含有1至10个碳原子的中等大小烷基，例如甲基、乙基、丙基、2-丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、戊基登。更优选的是含有1至4个碳原子的低级烷基，例如甲基、乙基、丙基、2-丙基、正丁基、异丁基或叔丁基等。烷基可以取代的或未取代的，当被取代时，优选的基团为卤素、羟基、低级烷氧基、芳基、芳氧基、杂芳基、杂环烷基、C(O)R3和C(O)NR3R4。
“环烷基”指3至8元全碳单环、全碳5元/6元或6元/6元稠合环或多环稠合环(“稠合”环系意味着系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对碳原子)基团，其中一个或多个环可以含有一个或多个双键，单没有一个环具有完全共轭的π电子系统。环烷基的实例有环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯、环己烷、环己二烯、金刚烷、环庚烷、环庚三烯等。环烷基可以是取代或未取代的。当被取代时，取代基优选为一个或多个取代基，独立地选自由低级烷基、三卤烷基、卤素、羟基、低级烷氧基、芳基(可选自被一个或多个基团取代，取代基是彼此独立地是卤素、羟基、低级烷基或低级烷氧基)、芳氧基(可选自被一个或多个基团取代，取代基彼此独立地是卤素、羟基、低级烷基或低级烷氧基)、6元杂芳基(环中具有1至3个氮原子，环中的碳可选地被一个或多个基团取代，取代基彼此独立地是卤素、羟基、低级烷基或低级烷氧基)、5元杂芳基(具有1至3个选自氮、氧和硫的杂原子，该基团的碳和氮原子可选地被一个或多个基团取代，取代基彼此独立地是卤素、羟基、低级烷基或低级烷氧基)、或5或6元杂环烷基(具有1至3个选自氮、氧和硫地杂原子，该基团地碳和氮原子(如果有的话)，可选地被一个或多个基团取代，取代基彼此独立地是卤素、羟基、低级烷基或低级烷氧基)、巯基、(低级烷基)硫基、芳硫基(可选地被一个或多个基团取代，取代基彼此独立地是卤素、羟基、低级烷基或低级烷氧基)、氰基。酰基、硫代酰基、O-氨基甲酰基、N-氨基甲酰基、O-硫代氨基甲酰基、N-硫代氨基甲酰基、C-酰氨基、N-酰氨基、硝基、N-磺酰氨基、S-磺酰氨基、C(O)R3、C(O)NR3R4和-C(O)OR3。
“烯基”指由至少两个碳原子和至少一个碳-碳双键组成的如上述定义的烷基。代表性实例包括但不限于乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-，2-或3-丁烯基等。
“炔基”指至少两个碳原子和至少一个碳-碳三键组成的如上所定义的烷基。代表性实例包括但不限于乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-，2-或3-丁炔基等。
“芳基”指具有至少一个芳环结构的基团，即具有共轭的π电子体系的芳环，包括碳环芳基、杂芳即和联芳基。所述的芳基可以由一个或多个选自以下的取代机任选取代：卤素、三卤甲基、羟基、SR、硝基、氰基、烷氧基和烷基。
“杂芳基”指具有1至3个杂原子作为环原子，其余的环原子为碳的芳基，杂原子包括氧、硫和氮。所述环可以是5元或6元环。杂环芳基基团的实例包括呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡咯、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基等。
“杂环烷基”指单环或稠环基团，在环中，具有5至9个环原子，其中一个或两个环原子选自氮、氧或S(O)n(其中n是整数0至2)的杂原子，其余环原子为碳。这些环还可以具有一个或多个双键、不过，这些环不具有完全共轭的π电子系统。未取代的杂环烷基包括但不限于吡咯烷基、哌啶子基、哌嗪子基、吗啉基、硫代吗啉基、高哌嗪其等、杂环烷基可以是取代的或未取代的。当被取代时，取代基优选为一个或多个，更优选一个、两个或三个，进而更优选一个或两个，独立地选自由低级烷基、三卤烷基、卤素、羟基、低级烷氧基、氰基和酰基组成的组。优选地，杂芳基可选自被一个或两个取代基取代，取代基独立地选自卤素、低级烷基、三卤烷基、羟基、巯基、氰基、N-酰氨基或羧基。
“羟基”指-OH基团。
“烷氧基”指-O-(烷基)和-O-(未取代地环烷基)。代表性实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基等。
“卤代烷氧基”指-O-(卤代烷基)。代表性实例包括但不限于三氟甲氧基、三溴甲氧基等。
“芳氧基”指-O-芳基和-O-杂芳基，芳基和杂芳基定义同上。代表性实例包括但不限于苯氧基、吡啶氧基、呋喃氧基、噻吩氧基、嘧啶氧基、吡嗪氧基等及其衍生物。
“巯基”指-SH基团。
“烷硫基”指-O-(烷基)和-O-(未取代的环烷基)。代表性实例包括但不限于甲硫基、乙硫基、丙硫基、丁硫基、环丙硫基、环丁硫基、环戊硫基、环己硫基等。
“芳硫基”指-S-芳基和-S-杂芳基，芳基和杂芳基定义同上。代表性实例包括但不限于苯硫基、吡啶硫基、呋喃硫基、噻吩硫基、嘧啶硫基等及其衍生物、
“酰基”指-C(O)-R”基团，其中R”选自由氢、低级烷基、三卤甲基、未取代的环烷基、芳基(可选地被一个或多个，优选一个、两个或三个取代基，取代基选自由低级烷基、三卤甲基、低级烷氧基和卤素组成的组)、杂芳基(通过环碳键合的)(可选地被一个或多个，优选一个、两个或三个取代基，取代基选自由低级烷基、三卤甲基、低级烷氧基和卤素组成的组)和杂脂环基(通过环碳键合的)(可选地被一个或多个，优选一个、两个或三个取代基取代，取代基选自由低级烷基、三卤甲基、低级烷氧基和卤素组成的组)。代表性酰基包括但不限于乙酰基、三氟乙酰基、苯甲酰基等。
“硫代酰基”指-C(S)-R”基团，其中R”的定义同上。
“乙酰基”指-C(O)CH3基团。
“卤素”指氟、氯、溴或碘，优选氟或氯。
“三氟甲基”指-CF3。
“氰基”指-CN。
“氨基”指-NH2。
“羧酸”指-COOH。
“羧酸酯”指-COOR，其中R为烷基或环烷基。
“羟烷基”指-(CH2)rNH2，其中r是1～4。
“可选”或“可选地”意味着随后所描述地事件或环境可以但不必发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生地场合。例如，“可选被烷基取代地杂环基团”意味着烷基可以但不必存在，该说明包括杂环基团被烷基取代的情形和杂环基团不被烷基取代的情形。
“药物组合物”表示一种或多种本文所述化合物或其生理学上/药学上可接受的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，其他组分例如生理学/药学上可接受的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进化合物对生物体的给药。
本发明化合物的合成方法
为了完成本发明的目的，本发明采用如下技术方案：
合成方案I
Figure BSA00000195667900171
冰浴下，叔丁基-5-氧代-六氢-并环戊二烯吡咯-2-羧酸酯在适宜的溶剂中(如二氯甲烷)中与三氟乙酸下反应得到六氢并环戊二烯吡咯-5-酮三氟乙酸盐；六氢并环戊二烯吡咯-5-酮三氟乙酸盐在碱存在下与酰氯或酯类反应得到通式(ID)的化合物；将所述的中间体(ID)室温条件下在适宜的溶剂(如甲醇、乙醇)中与的不同胺、取代的硼氢化钠，在碱性条件下(如三乙胺)反应得到通式(IB)化合物。
合成方案II
Figure BSA00000195667900172
将叔丁醇钾和甲基三苯基磷碘的甲苯溶液加热后，在室温下将中间体(ID)化合物加入到上述溶液中反应，得到氮杂双环烯基化合物；氮杂双环烯基化合物在适宜的溶剂中(如二氯甲烷)，在高氯酸银作用下室温下与三甲基硅氰反应得到氮杂双环氰基化合物；将氮杂双环氰基化合物在合适的溶剂中(如乙醇)与适宜的酸(如盐酸)在室温下反应得到氮杂双环氨基化合物；将氮杂双环氨基化合物在碱性溶剂(如N，N-二甲基甲酰胺)溶剂中与卤化物反应得到通式(IB)化合物。
合成方案III
Figure BSA00000195667900173
将中间体(ID)化合物和对甲苯磺酰甲基异腈在适宜的溶剂中(如乙二醇二甲醚)发生异氰化反应得到氮杂双环氰基化合物；氮杂双环氰基化合物在在适宜的溶剂中(如四氢呋喃)，在六甲基二硅基胺基锂作用下与卤化物反应，得到R2取代的氮杂双环氰基化合物；R2取代的氮杂双环氰基化合物在酸的作用下水解得到R2取代的氮杂双环羧基化合物，或者R2取代的氮杂双环氰基化合物在适宜的溶剂中(如二氯甲烷)，在冰浴下与还原剂(DIBAL-H)反应，先将氰基还原成醛基，得到的醛在四氢呋喃/水混合溶剂中，在冰浴下与磷酸二氢钠、亚氯酸钠和2-甲基-2-丁烯反应，得到R2取代的氮杂双环羧基化合物；将R2取代的氮杂双环羧基化合物在碱性条件下(如三乙胺)及氯甲酸乙酯作用下发生叠氮化反应得到氮杂双环叠氮基化合物；氮杂双环叠氮基化合物在适宜的溶剂中(如甲苯)加热，再在酸性溶液中搅拌，并调节pH为碱性，得到R2取代的氮杂双环氨基化合物；将R2取代的氮杂双环氨基化合物在碱性溶剂中(如N，N-甲基甲酰胺)，与卤化物反应得到通式(IB)化合物。
合成方案IV
Figure BSA00000195667900181
将中间体(ID)在适宜的溶剂中(如四氢呋喃)，冰浴下与还原剂(如三叔丁基氧铝锂氢)反应得到氮杂双环羟基化合物；氮杂双环羟基化合物在适宜的溶剂中(如二氯甲烷)，冰浴下与碱性试剂(如三乙胺)、甲磺酰氯反应得到氮杂双环甲磺酸基化合物；氮杂双环甲磺酸基化合物在碱性试剂中(如N，N-二甲基甲酰胺溶剂)与邻苯二甲酰亚胺钾盐加热反应得到邻苯二甲酰亚胺取代的氮杂双环化合物；邻苯二甲酰亚胺取代的氮杂双环化合物在适宜的溶剂中(如乙醇)，与肼加热得到氮杂双环氨基化合物；氮杂双环氨基化合物在适宜的溶剂中(如二氯甲烷)，与卤化物加热，反应得到通式(IC)化合物。
进一步，通式(IB)或(IC)化合物经纯化后在酸的甲醇、二氯甲烷或乙酸乙酯溶液中反应，得到其酸加成产物盐。
本发明涉及一种药物组合物，其含有治疗有效剂量的化合物或其盐和药学载体，或者本发明通式化合物或其盐在制备二肽基肽酶抑制剂药物中的用途。换言之，本发明还提供含有药物有效剂量的上述化合物的组合物，以及所述的化合物在制备二肽基肽酶抑制剂中的用途。
具体实施方式
以下结合实施例用于进一步描述本发明，但这些实施例并非限制着本发明的范围。
实施例
化合物的结构是通过核磁共振(1H NMR)或质谱(MS)来确定的。1H NMR位移(δ)以百万分之一(ppm)的单位给出。NMR的测定是用BrukerAVANCE-400核磁仪，测定溶剂为氘代氯仿(CDCl3)、氘代二甲基亚砜(DMSO-D6)、氘代甲醇(CD3OD)，内标为四甲基硅烷(TMS)，化学位移是以10-6(ppm)作为单位给出。
MS的测定用FINNIGAN LCQAd(ESI)质谱仪。
激酶平均抑制率及IC50值的测定用NovoStar酶标仪(德国BMG公司)
薄层硅胶使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板
柱层析一般使用烟台黄海硅胶200～300目硅胶为载体。
DMSO-D6：氘代二甲基亚砜；
CDCl3：氘代氯仿；
CD3OD：氘代甲醇；
实施例1
顺-5-(2-(S)-(2-氰基吡咯-1-基)-2-氧代乙氨基)-N，N-二甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-酰胺盐酸盐
Figure BSA00000195667900191
Figure BSA00000195667900201
第一步
[2-(2-氨基甲酰-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基]-氨基甲酸叔丁酯1b的制备
将N-叔丁氧基羰基-甘氨酸1a(5g，28.56mmol)和L-脯氨酰胺(3.25g，28.50mmol)溶于75mLN，N-二甲基甲酰胺中，冷却到0℃，搅拌下加入1-羟基苯并三唑(11.8g，87.3mmol)，N-乙基-N’-(二甲氨基丙基)-碳二亚胺(11.3g，59mmol)，三乙胺(12.1mL，87.3mmol)，自然升至室温，搅拌过夜，次日薄层色谱跟踪反应至原料完全消失后，低于50℃蒸去N，N-二甲基甲酰胺，用乙酸乙酯萃取反应液(200mL×3)，合并有机相，用50mL饱和氯化钠溶液洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物用乙酸乙酯重结晶，得到标题产物[2-(2-氨基甲酰-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基]-氨基甲酸叔丁酯1b(7.42g，白色粉末)，产率95.8％。MS m/z(ESI)：272.1(M+1)。
第二步
[2-(2-氰基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基]-氨基甲酸叔丁酯1c的制备
氮气氛下，在一个干燥的三口瓶中依次加入286mL吡啶，[2-(2-氨基甲酰-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基]-氨基甲酸叔丁酯1b(13.5g，49.8mmol)，咪唑(7.11g，104.6mmol)，反应体系冷却到-35℃，搅拌下滴加三氯氧磷(19mL，204.2mmol)，并在该温度下继续反应1小时，随后自然升至室温，反应0.5小时后，低温蒸干吡啶，乙酸乙酯稀释，加水，用乙酸乙酯萃取反应液(200mL×3)，合并有机相，用50mL饱和氯化钠溶液洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法纯化所得残余物，得标题产物[2-(2-氰基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基]-氨基甲酸叔丁酯1c(10.7g，白色粉末)，产率84.9％。
MS m/z(ESI)：254.3(M+1)。
第三步
1-(2-氨基乙酰基)-2-氰基-吡咯烷盐酸盐1d的制备
将[2-(2-氰基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基]-氨基甲酸叔丁酯1c(13.7g，54.2mmol)搅拌下溶解于140mL乙醚和40mL水中，冰浴下滴加37％的盐酸溶液(90mL)，冰浴下反应1小时，蒸干溶剂，乙醚分散离心，得到标题产物1-(2-氨基乙酰基)-2-氰基-吡咯烷盐酸盐1d(10g，白色粉末)，产率98％。
MS m/z(ESI)：154.4(M+1)。
第四步
六氢并环戊二烯吡咯-5-酮三氟乙酸盐1f的制备
将叔丁基-5-氧代-六氢-并环戊二烯吡咯-2-羧酸酯1e(0.32g，1.42mmol)搅拌下溶解于10mL二氯甲烷中，冰浴下加入三氟乙酸(3.27mL，42.7mmol)，0℃下反应30分钟，减压蒸干溶剂得到标题产物六氢并环戊二烯吡咯-5-酮三氟乙酸盐1f的粗产品，直接用于下一步。
MS m/z(ESI)：126.4(M+1)。
第五步
N，N-二甲基-5-氧代-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸酯1g的制备
将上一步六氢并环戊二烯吡咯-5-酮三氟乙酸盐1f的粗产品搅拌下溶解于15mL乙腈中，冰浴冷却下加入碳酸钾(0.24g，1.71mmol)，再滴加N，N-二甲基氨甲酰氯(0.14mL，1.56mmol)，室温下反应2小时，蒸掉溶剂，加入50mL水，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并有机相，用50mL饱和氯化钠溶液洗涤，乙酸乙酯相用无水硫酸镁干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法纯化所得残余物，得到标题产物N，N-二甲基-5-氧代-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸酯1g(0.19g，浅黄色油状物)，产率68.3％。
MS m/z(ESI)：197.4(M+1)。
1H NMR(DMSO-D6，400MHz)δ3.56(m，2H)，2.85(m，2H)，2.7(s，6H)，2.81(m，2H)，2.5(m，2H)，2.01(m，2H)。
第六步
顺-5-(2-(2-氰基吡咯-1-基)-2-氧代乙氨基)-N，N-二甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-酰胺1h的制备
将1-(2-氨基乙酰基)-2-氰基-吡咯烷盐酸盐1d(0.36g，1.91mmol)搅拌下溶解于20mL甲醇，加入N，N-二甲基-5-氧代-六氢-并环戊二烯吡咯-2-酰胺1g(0.25g，1.28mmol)及三乙酰氧基硼氢化钠(1.22g，5.74mmol)，室温反应3小时，反应液浓缩，加用20mL饱和碳酸钠溶液，然后用二氯甲烷(20mL×10)萃取反应液，合并有机相，用10mL饱和氯化钠溶液洗涤，二氯甲烷层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法纯化得到残余物，得到标题产物顺-5-(2-(2-氰基吡咯-1-基)-2-氧代乙氨基)-N，N-二甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-酰胺1h(0.3g，白色粉末)，产率53％。
MS m/z(ESI)：334.5(M+1)。
第七步
顺-5-(2-(2-氰基吡咯-1-基)-2-氧代乙氨基)-N，N-二甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-酰胺盐酸盐1的制备
将顺-5-(2-(2-氰基吡咯-1-基)-2-氧代乙氨基)-N，N-二甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-酰胺1h(200mg，0.687mmol)分散于10mL二氯甲烷中，冰浴下加入2mL 0.5N的盐酸乙醚溶液，蒸干溶剂，加入10mL乙醚，沉淀物离心，得标题产物顺-5-(2-(2-氰基吡咯-1-基)-2-氧代乙氨基)-N，N-二甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-酰胺盐酸盐1(180mg，白色粉末)，产率80％。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ4.82(dd，1H，J1＝4Hz，J2＝5.2Hz)，4.02(dd，2H，J1＝J2＝16.4Hz)，3.62-3.25(m，7H)，2.76(s，6H)，2.51-1.49(m，10H)。
实施例2
顺-甲基-5-(2-(S)-(2-氰基吡咯-1-基)-2-氧代乙氨基)-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸酯盐酸盐
Figure BSA00000195667900221
第一步
甲基5-氧代-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸酯2a的制备
将六氢并环戊二烯吡咯-5-酮三氟乙酸盐1f(0.559g，2.34mmol)搅拌下溶解于20mL乙腈中，冰水浴下依次加入碳酸钾(0.646g，4.68mmol)和氯甲酸甲酯(0.22mL，2.8mmol），自然升温，室温反应过夜，减压蒸干溶剂，加入50mL水，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并有机相，依次用50mL饱和氯化钠溶液和50mL水洗涤，乙酸乙酯相用无水硫酸镁干燥过夜，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法纯化所得残余物，得到标题产物甲基5-氧代-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸酯2a(0.25g，无色油状物)，产率58.4％。
MS m/z(ESI)：184(M+1)。
第二步
顺-甲基-5-(2-(2-氰基吡咯-1-基)-2-氧代乙氨基)-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸酯2b的制备
将1-(2-氨基乙酰基)-2-氰基-吡咯烷盐酸盐1d(0.43g，2.29mmol)搅拌下溶解于20mL甲醇中，加入甲基5-氧代-六氢-并环戊二烯吡咯-2-羧酸酯2a(0.28g，1.53mmol)及三乙酰氧基硼氢化钠(1.46g，6.88mmol)，室温反应3小时，反应液浓缩，加用20mL饱和碳酸钠溶液，然后用二氯甲烷(20mL×3)萃取反应液，合并有机相，用10mL饱和氯化钠溶液洗涤，二氯甲烷层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法纯化得到的产品顺-甲基-5-(2-(2-氰基吡咯-1-基)-2-氧代乙氨基)-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸酯2b(0.22g，白色粉末)，产率41％。
MS m/z(ESI)：357(M+1)。
第三步
顺-甲基-5-(2-(2-氰基吡咯-1-基)-2-氧代乙氨基)-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸酯盐酸盐2的制备
将顺-甲基-5-(2-(2-氰基吡咯-1-基)-2-氧代乙氨基)-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸酯2b分散于10mL乙醚中，冰浴下加入2mL 0.5N的盐酸乙醚溶液，沉淀物离心，得标题产物顺-甲基-5-(2-((S)-2-氰基吡咯-1-基)-2-氧代乙氨基)-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸酯盐酸盐2(200mg，白色粉末)。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ4.71(m，1H)，3.93(m，2H)，3.59-3.28(m，10H)，2.64(m，2H)，2.34(m，2H)，2.17(m，2H)，2.08(m，2H)。
实施例3
顺-1-(2-(2-(2-羟基乙酰基)-八氢并环戊二烯吡咯-5-基氨基)乙酰基)-2-氰基-吡咯烷盐酸盐
Figure BSA00000195667900241
第一步
2-(2-羟基乙酰基)-六氢并环戊二烯吡咯-2-酮3a的制备
将六氢并环戊二烯吡咯-5-酮三氟乙酸盐1f(764.8mg，3.2mmol)和2-羟基乙酸(267.5mg，3.52mmol)搅拌下溶解于10mL乙腈中，冰水浴下加入羟基乙酸(1.3g，9.6mmol)和1-乙基-3-二甲氨丙基-碳二亚胺盐酸盐(1.23g，6.4mmol)和三乙胺(1.3mL，9.6mmol)，撤掉冰水浴，在25℃下反应过夜，蒸干溶剂，加入20mL乙酸乙酯，抽滤，用20mL水洗涤滤液，乙酸乙酯层用无水硫酸镁干燥，抽滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法纯化得到残余物，得到标题产物2-(2-羟基乙酰基)-六氢并环戊二烯吡咯-2-酮3a(0.375g，无色油状物)，产率64％。
MS m/z(ESI)：184(M+1)。
第二步
顺-1-(2-(2-(2-羟基乙酰基)-八氢并环戊二烯吡咯-5-基氨基)乙酰基)-2-氰基-吡咯烷3b的制备
将2-(2-羟基乙酰基)-六氢并环戊二烯吡咯-2-酮3a(0.375g，2.05mmol)和1-(2-氨基乙酰基)-2-氰基-吡咯烷盐酸盐1d(0.78g，4.1mmol)搅拌下溶解于10mL四氢呋喃和5mL甲醇中，室温下反应0.5小时后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.87g，4.1mmol)，室温反应过夜，减压浓缩反应液，加50mL甲醇和碳酸钾(2g，7mmol)搅拌0.5小时，减压抽滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法纯化得到产品顺-1-(2-(2-(2-羟基乙酰基)-八氢并环戊二烯吡咯-5-基氨基)乙酰基)-2-氰基-吡咯烷3，直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI)：357(M+1)。
第三步
顺-1-(2-(2-(2-羟基乙酰基)-八氢并环戊二烯吡咯-5-基氨基)乙酰基)-2-氰基-吡咯烷盐酸盐3的制备
将顺-1-(2-(2-(2-羟基乙酰基)-八氢并环戊二烯吡咯-5-基氨基)乙酰基)-2-氰基-吡咯烷3b分散于10mL乙醚中，冰浴下加入2mL 0.5N的盐酸乙醚溶液，沉淀物离心，得到标题产物顺-1-(2-(2-(2-羟基乙酰基)-八氢并环戊二烯吡咯-5-基氨基)乙酰基)-2-氰基-吡咯烷盐酸盐3(100mg，白色粉末)。
实施例4
顺-1-(2-(2-(哌啶-1-羰基)-八氢并环戊二烯吡咯-5-基氨基)乙酰基)-2-氰基-吡咯烷盐酸盐
Figure BSA00000195667900251
第一步
2-(哌啶-1-羰基)-六氢并环戊二烯吡咯-5-酮4a的1制备
将六氢并环戊二烯吡咯-5-酮三氟乙酸盐1f(478mg，2mmol)搅拌下溶解于20mL二氯甲烷中，加入碘代[3-(1-哌啶甲酰基)咪唑-1-甲基盐](0.96g，3mmol)和三乙胺(0.84mL，6mmol)，室温下反应过夜，加入20mL水淬灭反应，用二氯甲烷(50mL×3)萃取，合并有机相，依次用50mL 10％柠檬酸溶液和50mL饱和氯化钠溶液洗涤，二氯甲烷相用无水硫酸镁干燥，抽滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法纯化得到残余物，得到标题产物2-(哌啶-1-羰基)-六氢并环戊二烯吡咯-5-酮4a(0.41g，无色油状物)，产率87％。
MS m/z(ESI)：237(M+1)。
第二步
顺-1-(2-(2-(哌啶-1-羰基)-八氢并环戊二烯吡咯-5-基氨基)乙酰基)-2-氰基-吡咯烷4b的制备
将2-(哌啶-1-羰基)-六氢并环戊二烯吡咯-5-酮4a(0.41g，1.74mmol)和1-(2-氨基乙酰基)-2-氰基-吡咯烷盐酸盐1d(0.5g，2.6mmol)溶解于50mL四氢呋喃中，加入5g硫酸钠和0.05mL乙酸，室温下反应0.5小时后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.1g，5.2mmol)，室温反应3小时后，减压浓缩反应液，加入50mL饱和碳酸钠溶液，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并有机相，依次用50mL饱和氯化钠溶液和50mL水洗涤，乙酸乙酯层用无水硫酸镁干燥，抽滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法纯化得到标题产物顺-1-(2-(2-(哌啶-1-羰基)-八氢并环戊二烯吡咯-5-基氨基)乙酰基)-2-氰基-吡咯烷4b，直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI)：410(M+1)。
第三步
顺-1-(2-(2-(哌啶-1-羰基)-八氢并环戊二烯吡咯-5-基氨基)乙酰基)-2-氰基-吡咯烷盐酸盐4的制备
将顺-1-(2-(2-(哌啶-1-羰基)-八氢并环戊二烯吡咯-5-基氨基)乙酰基)-2-氰基-吡咯烷4b分散于10mL乙醚中，冰浴下加入2mL0.5N的盐酸乙醚溶液，沉淀物离心，得到标题产物顺-1-(2-(2-(哌啶-1-羰基)-八氢并环戊二烯吡咯-5-基氨基)乙酰基)-2-氰基-吡咯烷盐酸盐4(0.16g，白色粉末)。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ4.83(dd，1H，J1＝3.0Hz，J2＝5.8Hz)，4.09(dd，2H，J1＝J2＝13.1Hz)，3.70-3.30(m，10H)，2.72(m，2H)，2.47(m，2H)，2.31-2.00(m，5H)，1.66-1.52(m，8H)。
实施例5
顺-1-(2-(2-乙酰基-八氢并环戊二烯吡咯-5-基氨基)乙酰基)-2-氰基-吡咯烷酸盐
Figure BSA00000195667900261
第一步
2-乙酰基-六氢并环戊二烯吡咯-5-酮5a的制备
将六氢并环戊二烯吡咯-5-酮三氟乙酸盐1f(717mg，3mmol)搅拌下溶解于乙腈(20mL)中，冰水浴下加入二碳酸二叔丁酯(0.42mL，4.5mmol)和三乙胺(0.98mL，9mmol)，冰水浴下反应过夜，蒸干溶剂，加入50mL水，用乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并有机相，用50mL饱和氯化钠溶液洗涤，用无水硫酸镁干燥，抽滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱谱法纯化得到残余物，得到标题产物2-乙酰基-六氢并环戊二烯吡咯-5-酮5a(0.36g，无色油状物)，产率72％。
MS m/z(ESI)：168.4(M+1)。
第二步
顺-1-(2-(2-乙酰基-八氢并环戊二烯吡咯-5-基氨基)乙酰基)-2-氰基-吡咯烷5b的制备
将2-乙酰基-六氢并环戊二烯吡咯-5-酮5a(0.36g，2.15mmol)和1-(2-氨基乙酰基)-2-氰基-吡咯烷盐酸盐1d(0.614g，3.23mmol)溶解于50mL四氢呋喃中，加入5g硫酸钠和0.05mL乙酸，室温下反应0.5小时后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.37g，6.46mmol)，室温反应3小时后，减压浓缩反应液，加入50mL饱和碳酸钠溶液，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并有机相，依次用50mL饱和氯化钠溶液和50mL水洗涤，乙酸乙酯层用无水硫酸镁干燥，抽滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法纯化得到标题产物顺-1-(2-(2-乙酰基-八氢并环戊二烯吡咯-5-基氨基)乙酰基)-2-氰基-吡咯烷5b，直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI)：305.5(M+1)。
第三步
顺-1-(2-(2-乙酰基-八氢并环戊二烯吡咯-5-基氨基)乙酰基)-2-氰基-吡咯烷盐酸盐5的制备
将上一步所得顺-1-(2-(2-乙酰基-八氢并环戊二烯吡咯-5-基氨基)乙酰基)-2-氰基-吡咯烷5b分散于20mL乙醚中，冰浴下加入4mL 0.5N的盐酸乙醚溶液，沉淀物离心，得到标题产物顺-1-(2-(2-乙酰基-八氢并环戊二烯吡咯-5-基氨基)乙酰基)-2-氰基-吡咯烷酸盐5(0.23g，白色粉末)。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ4.71(m，1H)，3.92(m，2H)，3.69-3.37(m，7H)，2.69(m，2H)，2.33(m，2H)，2.13(m，2H)，2.04-2.00(m，5H)，1.48(m，2H)。
实施例6
顺-5-[2-(2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙氨基]六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸异丙胺盐酸盐
第一步
N-异丙基-5-氧代-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸酯6a的制备
将六氢并环戊二烯吡咯-5-酮三氟乙酸盐1f(717mg，3mmol)搅拌下溶解于20mL二氯甲烷，冰水浴下加入异氰酸酯(9mL，9mmol)和三乙胺(1.7mL，12mmol)。室温反应过夜，加50mL水，用二氯甲烷(50mL×3)萃取，合并有机相，依次用50mL 10％柠檬酸溶液和50mL饱和氯化钠溶液洗涤，二氯甲烷相用无水硫酸镁干燥，抽滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法纯化得到残余物，得到标题产物N-异丙基-5-氧代-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸酯6a(0.3g，无色油状物)，产率47.6％
MS m/z(ESI)：211(M+1)。
第二步
顺-5-[2-(2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙氨基]六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸异丙胺6b的制备
将N-异丙基-5-氧代-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸酯6a(0.3g，1.43mmol)和(S)-1-(2-氨基乙酰基)-2-氰基-吡咯烷盐酸盐1d(0.407g，2.14mmol)溶解于50mL四氢呋喃中，加入5g硫酸钠和0.05mL乙酸，室温下反应0.5小时后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.9g，4.3mmol)，室温反应3小时后，减压浓缩反应液，加入50mL饱和碳酸钠溶液，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并有机相，依次用50mL饱和氯化钠溶液和50mL水洗涤，乙酸乙酯层用无水硫酸镁干燥，抽滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法纯化得到标题产物顺-5-[2-(2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙氨基]六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸异丙胺6b，直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI)：384(M+1)。
第三步
顺-5-[2-(2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙氨基]六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸异丙胺盐酸盐6的制备
将上一步所得的顺-5-[2-(2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙氨基]六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸异丙胺6b分散于10mL乙醚中，冰浴下加入2mL 0.5N的盐酸乙醚溶液，沉淀物离心，得到标题产物顺-5-[2-(2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙氨基]六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸异丙胺盐酸盐6(80mg，白色粉末)。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ4.70(m，1H)，3.92(m，2H)，3.76-3.32(m，8H)，2.63-1.41(m，10H)，1.01(d，6H，J＝6Hz)。
实施例7
顺-1-(2-(2-(吗啡啉-4-羰基)-八氢并环戊二烯吡咯-5-基氨基)乙酰基)-2-氰基-吡咯烷盐酸盐
Figure BSA00000195667900291
第一步
2-(吗啡啉-4-羰基)-六氢并环戊二烯吡咯-5-酮7a的制备
将六氢并环戊二烯吡咯-5-酮三氟乙酸盐1f(574mg，2.4mmol)搅拌下溶解于20mL乙腈中，冰水浴下加入碳酸钾(0.397g，2.88mmol)，滴加吗啡啉-4-酰氯(0.323mL，2.64mmol)，冰水浴下反应过夜，蒸干溶剂，加入50mL水，用乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并有机相，用50mL饱和氯化钠溶液洗涤，用无水硫酸镁干燥，抽滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱谱法纯化得到残余物，得到标题产物2-(吗啡啉-4-羰基)-六氢并环戊二烯吡咯-5-酮7a(0.572g，无色油状物)，产率77.3％。
MS m/z(ESI)：239(M+1)。
第二步
顺-1-(2-(2-(吗啡啉-4-羰基)-八氢并环戊二烯吡咯-5-基氨基)乙酰基)-2-氰基-吡咯烷7b的制备
将2-(吗啡啉-4-羰基)-六氢并环戊二烯吡咯-5-酮7a(0.64g，2.69mmol)和1-(2-氨基乙酰基)-2-氰基-吡咯烷盐酸盐1d(0.764g，4.03mmol)溶解于50mL四氢呋喃中，加入5g硫酸钠和0.05mL乙酸，室温下反应0.5小时后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.71g，8.07mmol)，室温反应3小时后，减压浓缩反应液，加入50mL饱和碳酸钠溶液，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并有机相，依次用50mL饱和氯化钠溶液和50mL水洗涤，乙酸乙酯层用无水硫酸镁干燥，抽滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法纯化得到标题产物顺-1-(2-(2-(吗啡啉-4-羰基)-八氢并环戊二烯吡咯-5-基氨基)乙酰基)-2-氰基-吡咯烷7b，直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI)：376.7(M+1)。
第三步
顺-1-(2-(2-(吗啡啉-4-羰基)-八氢并环戊二烯吡咯-5-基氨基)乙酰基)-2-氰基-吡咯烷盐酸盐7的制备
将上一步所得的顺-1-(2-(2-(吗啡啉-4-羰基)-八氢并环戊二烯吡咯-5-基氨基)乙酰基)-2-氰基-吡咯烷7b分散于10mL乙醚中，冰浴下加入2mL 0.5N的盐酸乙醚溶液，沉淀物离心，得到标题产物顺-1-(2-(2-(吗啡啉-4-羰基)-八氢并环戊二烯吡咯-5-基氨基)乙酰基)-2-氰基-吡咯烷盐酸盐7(30mg，白色粉末)，产率3％。
实施例8
顺-1-(2-(2-(吡咯烷-1-羰基)-八氢并环戊二烯吡咯-5-基氨基)乙酰基)2-氰基-吡咯烷盐酸盐
Figure BSA00000195667900301
第一步
2-(吡咯烷-1-羰基)-六氢并环戊二烯吡咯-5-酮8a的制备
将六氢并环戊二烯吡咯-5-酮三氟乙酸盐1f(478mg，2mmol)搅拌下溶解于20mL二氯甲烷中，加入吡咯烷-1-酰氯(0.276mL，2.5mmol)和三乙胺(0.84mL，6mmol)，室温下反应过夜，加入10％柠檬酸溶液调节PH值为4，用二氯甲烷(50mL×3)萃取，合并有机相，用50mL饱和氯化钠溶液洗涤，二氯甲烷相用无水硫酸镁干燥，抽滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法纯化得到残余物，得到标题产物2-(吡咯烷-1-羰基)-六氢并环戊二烯吡咯-5-酮8a(0.26g，无色油状物)，产率58.5％。MS m/z(ESI)：223(M+1)。
第二步
顺-1-(2-(2-(吡咯烷-1-羰基)-八氢并环戊二烯吡咯-5-基氨基)乙酰基)2-氰基-吡咯烷8b的制备
将2-(吡咯烷-1-羰基)-六氢并环戊二烯吡咯-5-酮8a(0.26g，1.17mmol)和1-(2-氨基乙酰基)-2-氰基-吡咯烷盐酸盐1d(0.33g，1.75mmol)溶解于50mL四氢呋喃中，加入5g硫酸钠和0.05mL乙酸，室温下反应0.5小时后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.75g，3.5mmol)，室温反应3小时后，减压浓缩反应液，加入50mL饱和碳酸钠溶液，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并有机相，依次用50mL饱和氯化钠溶液和50mL水洗涤，乙酸乙酯层用无水硫酸镁干燥，抽滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法纯化得到标题产物顺-1-(2-(2-(吡咯烷-1-羰基)-八氢并环戊二烯吡咯-5-基氨基)乙酰基)2-氰基-吡咯烷8b，直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI)：396(M+1)。
第三步
顺-1-(2-(2-(吡咯烷-1-羰基)-八氢并环戊二烯吡咯-5-基氨基)乙酰基)2-氰基-吡咯烷盐酸盐8的制备
将上一步所得的顺-1-(2-(2-(吡咯烷-1-羰基)-八氢并环戊二烯吡咯-5-基氨基)乙酰基)2-氰基-吡咯烷8b分散于10mL乙醚中，冰浴下加入2mL 0.5N的盐酸乙醚溶液，沉淀物离心，得到标题产物顺-1-(2-(2-(吡咯烷-1-羰基)-八氢并环戊二烯吡咯-5-基氨基)乙酰基)2-氰基-吡咯烷盐酸盐8(90mg，白色粉末)。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ4.72(m，1H)，4.09(m，2H)，3.43-3.30(m，11H)，2.62(m，2H)，2.35(m，2H)，2.18(m，2H)，2.08(m，2H)，1.77(m，4H)。
实施例9
顺-5-(2-(2-氰基吡咯-1-基)-2-氧代乙氨基)-N，N-二甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-酰胺三氟乙酸盐
Figure BSA00000195667900311
将实施例1所得的顺-5-(2-(2-氰基吡咯-1-基)-2-氧代乙氨基)-N，N-二甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-酰胺1h(157mg，0.54mmol)分散于10mL二氯甲烷中，冰浴下加入2mL三氟乙酸搅拌0.5小时，沉淀物离心，得到标题产物顺-5-(2-(2-氰基吡咯-1-基)-2-氧代乙氨基)-N，N-二甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-酰胺三氟乙酸盐9(201mg，白色粉末)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ4.74(t，1H，J＝5.2Hz)，3.98(d，1H，J＝15.6Hz)，3.79(d，1H，J＝15.6Hz)，3.57-3.25(m，7H)，2.75(s，6H)，2.55(m，2H)，2.33(m，2H)，2.20-2.08(m，4H)，1.74(m，2H)。
实施例10
反-5-(2-(2-氰基吡咯-1-基)-2-氧代乙氨基)-N，N-二甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-酰胺三氟乙酸盐
Figure BSA00000195667900321
第一步
顺-5-羟基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸酯N，N-二甲基酰胺10a的制备
在氮气保护下，在一个干燥的三口烧瓶中，将N，N二甲基-5-氧代-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸酯1g(1.58g，8.06mmol)搅拌下溶解于30mL四氢呋喃中，冷却到-25℃，并在该温度下，滴加30mL三叔丁基氧铝锂氢(2.45g，9.6mmol)的四氢呋喃溶液，在-25℃反应2.5小时后，加水淬灭反应，加入20mL饱和氯化铵溶液，自然升至室温，分液，水相用二氯甲烷(50mL×3)萃取，合并有机相，用50mL饱和氯化钠溶液洗涤，硫酸镁干燥有机相，抽滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法纯化所得残余物，得到标题产物顺-5-羟基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸酯N，N-二甲基酰胺10a(1.27g，无色油状物)，产率80％。
MS(m/z)(ESI)：199(M+1)。
第二步
顺-2-二甲基氨甲酰基-八氢并环戊二烯吡咯-5-甲磺酸酯10b的制备
在氮气的保护下，在干燥的单口烧瓶中将顺-5-羟基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸酯N，N-二甲基酰胺10a(1.69g，8.5mmol)搅拌下溶解于30mL二氯甲烷中，冰盐浴冷却至-5℃～0℃之间，依次加入三乙胺(1.66g，14.45mmol)和甲基磺酰氯(2.2g，21.74mmol)，搅拌0.5小时后自然升至室温，在室温下反应2小时，减压浓缩反应液，加入20mL水，用乙酸乙酯(50mL×6)萃取，合并有机相，用50mL饱和氯化钠溶液洗涤，硫酸镁干燥有机相，抽滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法纯化所得的残余物，得到标题产物顺-2-二甲基氨甲酰基-八氢并环戊二烯吡咯-5-甲磺酸酯10b(1.94g，白色固体)，产率83％。
MS(m/z)(ESI)：277(M+1)
第三步
反-5-(1，3-二氧代-1，3-二氢-异吲哚-2-基)-六氢并环戊二烯吡咯-羧酸二甲基酰胺10c的制备
在氮气的保护下，在干燥的单口瓶中将顺-2-二甲基氨甲酰基-八氢并环戊二烯吡咯-5-甲磺酸酯10b(1g，3.6mmol)搅拌下溶解于20mLN，N-二甲基甲酰胺中，加入邻苯二甲酰亚胺钾盐(993mg，5.4mmol)，升温到70℃，反应3小时，减压浓缩N，N-二甲基甲酰胺，加入20mL水，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并有机相，用50mL饱和氯化钠溶液洗涤，硫酸镁干燥，抽滤，滤液减压浓缩，得到标题产物反-5-(1，3-二氧代-1，3-二氢-异吲哚-2-基)-六氢并环戊二烯吡咯-羧酸二甲基酰胺10c(1.06g，白色固体)，产率90％，产品直接用于下一步反应。
MS(m/z)(ESI)：328(M+1)。
第四步
反-5-氨基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸N，N-二甲酰胺10d的制备
在单口瓶中将反-5-(1，3-二氧代-1，3-二氢-异吲哚-2-基)-六氢并环戊二烯吡咯-羧酸二甲基酰胺10c(1g，3.06mmol)搅拌下溶解于20mL 95％乙醇中，加入肼(490mg，15.3mmol)，加热回流反应8小时，冷却到室温，抽滤，滤液减压浓缩，得到白色的固体，加入25mL甲醇，抽滤，滤液减压浓缩，用碱性氧化铝柱色谱法纯化所得残余物，得到标题产物反-5-氨基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸N，N-二甲酰胺10d(290mg，无色油状物)，产率48％。
MS(m/z)(ESI)：198(M+1)。
第五步
反-5-(2-(2-氰基吡咯-1-基)-2-氧代乙氨基)-N，N-二甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-酰胺10e的制备
在干燥的单口烧瓶中加入反-1-(2-氯-乙基)-吡咯-2-氰基(334mg，1.94mmol)，加入20mL反-5-氨基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸N，N-二甲酰胺10d(290mg，1.46mmol)的二氯甲烷溶液，加热回流48小时，减压浓缩反应液，用硅胶柱色谱法纯化所得到的残余物，得到反-5-(2-(2-氰基吡咯-1-基)-2-氧代乙氨基)-N，N-二甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-酰胺10e，直接用于下一步反应。
第六步
反-5-(2-(2-氰基吡咯-1-基)-2-氧代乙氨基)-N，N-二甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-酰胺三氟乙酸盐10的制备
将上一步得到的反-5-(2-(2-氰基吡咯-1-基)-2-氧代乙氨基)-N，N-二甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-酰胺10e搅拌下溶解于10mL二氯甲烷中，加入2mL三氟乙酸搅拌0.5小时，得到反-5-(2-(2-氰基吡咯-1-基)-2-氧代乙氨基)-N，N-二甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-酰胺三氟乙酸盐10(201mg，白色固体)。
MS(m/z)(ESI)：334(M+1)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ4.65(m，1H)，3.93(d，1H，J＝15.2Hz)，3.74(d，1H，J＝15.2Hz)，3.69-3.19(m，7H)，2.77(s，6H)，2.18-1.96(m，10H)。
实施例11
5-[2-(2-氰基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙胺基]-5-甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺对甲苯磺酸盐
Figure BSA00000195667900341
第一步
5-亚甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺的制备
氮气保护下，将叔丁醇钾(7.17g，0.064mol)和甲基三苯基磷碘(25.8g，0.064mol)搅拌下溶解于150mL甲苯中，加热回流3小时，冷却至室温，加入30mL的N，N-二甲基-5-氧代-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸酯1g(5.0g，0.0255mol)甲苯溶液，30分钟后，薄层色谱跟踪反应，原料消失，加入30mL水和30mL饱和氯化钠溶液，用乙酸乙酯(200mL×4)萃取，合并有机相，干燥过夜。抽滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法纯化，得到标题产物5-亚甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺11a(4.0g，浅黄色油状透明液体)，收率：80％。
MS m/z(ESI)：195.2(M+1)。
第二步
5-异氰基-5-甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺的制备
在氮气保护下，将5-亚甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺11a(1.6g，8.23mmol)搅拌下溶解于30mL二氯甲烷中，再依次加入三甲基硅氰(4.08g，41.2mmol)和高氯酸银(5.12g，24.7mmol)，室温下搅拌过夜后，用饱和碳酸氢钠溶液处理部分反应液，薄层色谱跟踪反应，仍有大部分的原料剩余，冰浴下，加入20mL饱和碳酸氢钠溶液，反应放热，10分钟后，过滤，除去固体，分液后，用乙酸乙酯(50mL×4)萃取，合并有机相，用无水硫酸镁干燥，抽滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法纯化得到标题产物5-异氰基-5-甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺11b(0.33g，淡黄色油状物)，收率：18.1％。
GC-MS：221.1(M+)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ3.31(m，4H)，2.97(m，2H)，2.84(s，6H)，2.32(m，2H)，1.52(s，3H)，1.46(m，2H)。
第三步
5-氨基-5-甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺的制备
在冰浴下，将0.38mL的6N的盐酸加入5-异氰基-5-甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺11b(0.388g，1.75mmol)的15mL乙醇溶液中，撤掉冰浴，在室温下反应1.5小时，薄层色谱跟踪反应，原料消失，加入20mL饱和碳酸氢钠溶液淬灭反应，用二氯甲烷(50mL×3)萃取，合并有机相，蒸干溶剂，用硅胶柱色谱法纯化得到标题产物5-氨基-5-甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺11c(0.28g，黄色油状物)，收率：75.7％。
MS m/z(ESI)：212.2(M+1)。
第四步
5-[2-(2-氰基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙胺基]-5-甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺的制备
将5-氨基-5-甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺11c(200mg，0.92mmol)搅拌下溶解于8mL的N，N-二甲基甲酰胺中，加入1-(2-氯-乙酰基)-吡咯烷-2-氰基(175mg，1.02mmol)，室温下反应过夜后，在40～50℃水浴中，减压除去N，N-二甲基甲酰胺，用硅胶柱色谱法纯化，得到标题产物5-[2-(2-氰基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙胺基]-5-甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺11d(135mg，无色油状液体)，收率：42.3％。回收5-氨基-5-甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺11c(130mg)。
MS m/z(ESI)：348.2(M+1)。
第五步
5-[2-(2-氰基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙胺基]-5-甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺对甲苯磺酸盐的制备
在冰浴下，将5-[2-(2-氰基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙胺基]-5-甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺11d(20mg，0.057mmol)和一水合对甲苯磺酸(12mg，0.063mmol)搅拌下溶解于2mL的二氯甲烷中，搅拌10分钟后，撤掉冰浴，蒸干反应液中溶剂，得到油状物，加入5mL乙酸乙酯，剧烈搅拌，有白色固体析出，抽滤，得到的白色固体为标题产物5-[2-(2-氰基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙胺基]-5-甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺对甲苯磺酸盐11(26mg，白色固体)，收率：86.8％。
MS m/z(ESI)：348.2(M+1)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ7.68(d，2H)，7.17(d，2H)，3.72(m，1H)，3.68(m，1H)，3.58(m，1H)，3.30(m，4H)，2.98(s，2H)，2.81(s，6H)，2.55(m，2H)，2.22(m，4H)，2.05(m，2H)，1.62(m，2H)，1.56(s，3H)。
实施例12
5-[2-(2-氰基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙胺基]-5-甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺对甲苯磺酸盐
Figure BSA00000195667900361
第一步
5-氰基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺的制备
在冰浴下，将N，N-二甲基-5-氧代-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸酯1g(12.9g，0.066mol)和对甲苯磺酰甲基异腈(14.2g，0.0727mol)搅拌下溶解于240mL乙二醇二甲醚中，滴加叔丁醇钾(14.8g，0.132mol)的叔丁醇溶液，滴毕，撤掉冰浴，室温下反应过夜，薄层色谱跟踪，反应完全，加入100mL水，50mL饱和氯化钠溶液，用乙酸乙酯(200mL×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱层析法纯化，得到标题产物5-氰基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺12a(7.0g，浅黄色油状液)，收率：51％。
MS m/z(ESI)：208.1(M+1)。
1H NMR(DMSO-D6，400MHz)δ3.5-3.0(m，4H)，2.75(s，6H)，2.6(m，1H)，2.1-1.5(m，6H)。
第二步
5-氰基-5-甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺
在氮气保护下，将5-氰基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺12a(4.2g，20.2mmol)和碘甲烷(11.5g，80.8mmol)搅拌下溶解于100mL干燥的四氢呋喃，在室温下，滴加六甲基二硅基胺基锂(80.8mL，80.8mmol)，室温下反应2小时，MS检测反应结束，加入100mL水，用乙酸乙酯(200mL×3)萃取，无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩，得到油状物，薄层色谱显示为两个较近的点，用硅胶柱色谱法纯化，下面的点为5-氰基-5-甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺12b(2.41l g，浅黄色油状物)。
MS m/z(ESI)：222.2(M+1)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ3.44(m，2H)，3.3(m，2H)，2.85(s，6H)，2.77(m，2H)，2.06(m，2H)，2.00(m，2H)，1.36(s，3H)。
第三步
2-二甲基氨甲酰基-5-甲基-八氢-并环戊二烯吡咯-5-羧酸的制备
将5-氰基-5-甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺12b(6.99g，31.6mmol)搅拌下溶解于90mL的36％盐酸中，油浴50℃下搅拌48小时，薄层色谱跟踪反应，原料消失，反应结束，加入150mL水，冰浴下用碳酸钾固体中和反应液，调节pH为6左右，用乙酸乙酯(150mL×3)萃取，再用二氯甲烷(150mL×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩，得到标题产物2-二甲基氨甲酰基-5-甲基-八氢-并环戊二烯吡咯-5-羧酸12c(7.0g，黄色液体)，收率：92％，直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI)：241.2(M+1)。
第四步
5-氨基-5-甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺的制备
在冰浴下，将2-二甲基氨甲酰基-5-甲基-八氢-并环戊二烯吡咯-5-羧酸12c(1.0g，4.2mmol)搅拌下溶解于25mL丙酮中，在-5℃下，滴加三乙胺(463.5mg，4.58mmol)和氯甲酸乙酯(497mg，4.58mmol)的10mL丙酮溶液，在-5℃下，反应15分钟，加入叠氮化钠(546mg，8.4mmol)的10mL水溶液，在-5℃继续反应30分钟，加入25mL水淬灭反应，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，无水硫酸钠干燥，抽滤，减压浓滤液，得到一粗产品-5-(叠氮基羰基)-N，N，5-三甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-氨甲酰12d(700mg，黄色油状物)。
第五至第六步
将此黄色油状物5-(叠氮基羰基)-N，N，5-三甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-氨甲酰12d(700mg)加入到20mL甲苯中回流2小时，蒸干甲苯，得到产品(3aS，5r，6aR)-5-异氰酰-N，N，5-三甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2(1H)-氨甲酰12e，冰浴下滴加8mL的8N盐酸，搅拌30分钟，薄层色谱跟踪反应原料消失，在冰浴下，用3N氢氧化钠调节PH＞12，用乙酸乙酯(15mL×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸镁干燥，抽滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法纯化得到标题产物5-氨基-5-甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺12f(500mg，浅黄色油状液体)。
MS m/z(ESI)：212.2(M+1)。
1H NMR(DMSO-D6，400MHz)δ3.5-3.0(m，4H)，2.72(s，6H)，1.7-1.3(m，6H)，1.04(s，3H)。
第七步
5-[2-(2-氰基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙胺基]-5-甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺的制备
将5-氨基-5-甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺12f(332mg，1.57mmol)搅拌下溶解于的10mL的N，N-二甲基甲酰胺/CH2Cl2(1∶1)混合溶剂中，加入1-(2-氯-乙酰基)-吡咯烷-2-氰基(217mg，1.26mmol)，室温下反应过夜，抽干溶剂，用硅胶柱色谱法纯化，得到标题产物5-[2-(2-氰基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙胺基]-5-甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺12g(240mg，无色油状物)，收率：55％。
MS m/z(ESI)：348.2(M+1)。
第八步
5-[2-(2-氰基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙胺基]-5-甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺对甲苯磺酸盐的制备
将5-[2-(2-氰基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙胺基]-5-甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺12g(150mg，0.43mmol)和一水合对甲苯磺酸(82mg，0.43mmol)搅拌下溶解于4mL的二氯甲烷中，搅拌10分钟后，蒸干反应液中溶剂，得到标题产物5-[2-(2-氰基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙胺基]-5-甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺对甲苯磺酸盐12(220mg，淡黄色固体)，收率：95.3％。
MS m/z(ESI)：348.2(M+1)。
1H NMR(DMSO-D6，400MHz)δ4.82(m，1H)，3.97(s，2H)，3.79(m，2H)，3.49(m，2H)，3.21(m，4H)，2.75(s，6H)，2.62(m，2H)，2.19(m，2H)，1.92-1.61(m，3H)，2.06(m，3H)，1.2(s，3H)。
实施例13
5-(2-(-2-氰基-4-氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基氨基)-N，N，5-三甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-氨甲酰酒石酸盐
Figure BSA00000195667900391
第一步
(2S，4R)-1-(叔丁氧羰基)-4-羟基吡咯烷-2-羧酸的制备
将羟脯氨酸13a(60g，0.458mol)加入到750mL四氢呋喃/水(2∶1)混合溶剂中，加入252mL 10％的氢氧化钠溶液，加入750mL二碳酸二叔丁酯(136g，0.624mol)的四氢呋喃/水(2∶1)溶液，室温下反应过夜，加入500mL乙酸乙酯，分液，有机层丢弃，水相用浓盐酸调节PH为2，用1.5L乙酸乙酯萃取，饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩，得到标题产物(2S，4R)-1-(叔丁氧羰基)-4-羟基吡咯烷-2-羧酸13b(86.4g，无色油状物)，收率：80％。
第二步
(2S，4R)-叔丁基2-氨甲酰-4-羟基吡咯烷-1-羧酸酯的制备
氩气氛下，将(2S，4R)-1-(叔丁氧羰基)-4-羟基吡咯烷-2-羧酸13b(86.4g，0.374mol)搅拌下溶解于1.2L四氢呋喃中，加入三乙胺(41g，0.411mol)，冷却至-15℃，加入氯甲酸乙酯(43.84g，0.411mol)，搅拌10分钟后，加入236.8mL氨水，在2小时内慢慢升温至5℃，再加入32g氯化铵，搅拌30分钟后停止，分液，有机相用无水硫酸干燥，水相用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机相，蒸干溶剂，真空抽干溶剂，得到标题产物(2S，4R)-叔丁基2-氨甲酰-4-羟基吡咯烷-1-羧酸酯13c(74g，白色固体)，收率：86％。
第三步
(2S，4R)-叔丁基2-氰基-4-羟基吡咯烷-1-羧酸酯的制备
氩气氛下，将(2S，4R)-叔丁基2-氨甲酰-4-羟基吡咯烷-1-羧酸酯13c(74g，0.3217mol)搅拌下溶解于740mL吡啶中，冷却至-20℃，滴加三氟乙酸酐(169g，.0.804mol)，滴毕升至室温反应，薄层色谱跟踪反应至原料消失，加入水淬灭反应，加入0.8L乙酸乙酯，搅拌，分液，有机相用500mL饱和氯化钠溶液洗涤，再用400mL浓盐酸中和吡啶至微酸性，再用300mL 2M氢氧化钠溶液洗涤，用500mL饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸镁干燥，抽滤，滤液减压浓缩，得到标题产物(2S，4R)-叔丁基2-氰基-4-羟基吡咯烷-1-羧酸酯13d(49.7g，黄褐色油状物)，收率：73％。
第四步
(2S，4S)-叔丁基2-氰基-4-氟吡咯烷-1-羧酸酯的制备
氩气氛下，将(2S，4R)-叔丁基2-氰基-4-羟基吡咯烷-1-羧酸酯13d(49.7g，0.2344mol)搅拌下溶解于1130mL二氯乙烷中，冷却至-30℃，加入三氟化二乙氨基硫(56.7g，0.3516mol)，反应45分钟后升至-5℃，自然升至室温，反应过夜，薄层色谱跟踪反应，原料消失，缓慢加入饱和碳酸氢钠溶液，剧烈冒泡，冷却，使温度控制在20℃以下，直到反应液PH大于7，加入冰水，加入500mL二氯甲烷，分液，依次用500mL饱和硫酸氢钠溶液和500mL饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸镁干燥，抽滤，滤液减压浓缩，浓缩过程中温度低于38℃，得到标题产物(2S，4S)-叔丁基2-氰基-4-氟吡咯烷-1-羧酸酯13e(50g，棕黄色固体)，产率：100％。
第五步
(2S，4S)-4-氟-2-氰基吡咯烷的制备
氩气氛下，将(2S，4S)-叔丁基2-氰基-4-氟吡咯烷-1-羧酸酯13e(1g，4.6mmol)搅拌下溶解于2mL乙酸乙酯中，冷却至15℃，加入2.5mL 3M氯化氢的1，4-二氧六环溶液，室温下搅拌2小时，在25℃以下反应5小时，薄层色谱有原料，把浑浊的反应液过滤，母液再在室温下搅拌2小时，又有白色固体析出，过滤，母液继续搅拌2小时，过滤，合并过滤出来的白色固体，得到标题产物(2S，4S)-4-氟-2-氰基吡咯烷13f(15.6g，白色固体)，收率：76.6％。
第六步
(2S，4S)-1-(2-氯乙酰基)-4-氟-2-氰基吡咯烷的制备
氩气氛下，将氯代乙酰氯(11.13g，98.5mmol)搅拌下溶解于120mL二氯甲烷中，冷却至0℃，将(2S，4S)-4-氟-2-氰基吡咯烷13f(11.4g，75.7mmol)搅拌下溶解于400mL二氯甲烷中，加入三乙胺(16.1g，158.97mmol)，在30分钟内将此溶液滴加到氯代乙酰氯的二氯甲烷溶液中，在0℃反应2小时，加入200mL水，150mL二氯甲烷，萃取分液，有机相用少量饱和硫酸氢钠溶液洗涤至中性，再依次用300mL水和300mL饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法纯化所得残余物，得到标题产物(2S，4S)-1-(2-氯乙酰基)-4-氟-2-氰基吡咯烷13g(8g，白色晶体)，收率：60％。
参考文献：WO2003002553。
第七步
5-(2-(2-氰基-4-氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基氨基)-N，N，5-三甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-氨甲酰的制备
氮气氛下，将5-氨基-5-甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺12(130mg，0.616mmol)，(2S，4S)-1-(2-氯乙酰基)-4-氟-2-氰基吡咯烷13g(117.4mg，0.616mmol)和碳酸钾(85mg，0.616mmol)搅拌下溶解于2mL二氯甲烷与2mL N，N-二甲基甲酰胺的混合溶剂中，室温下反应过夜，薄层色谱跟踪反应，原料基本消失，减压浓缩除掉反应液中的二氯甲烷和N，N-二甲基甲酰胺，用硅胶柱色谱法纯化所得残余物，得到标题产物5-(2-(2-氰基-4-氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基氨基)-N，N，5-三甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2(1H)-氨甲酰13h(0.13g，无色油状液体)，收率：58％。
第八步
5-(2-(2-氰基-4-氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基氨基)-N，N，5-三甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2(1H)-氨甲酰酒石酸盐的制备
室温下，将5-(2-(2-氰基-4-氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基氨基)-N，N，5-三甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2(1H)-氨甲酰13(0.16g，0.44mmol)搅拌下溶解于5mL二氯甲烷中，滴加5mL酒石酸(65.6mg，0.44mmol)的丙酮溶液，室温下反应30分钟，有白色固体析出，过滤，用丙酮洗涤固体，得到标题产物5-(2-(2-氰基-4-氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基氨基)-N，N，5-三甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-氨甲酰酒石酸盐13(0.18g，白色固体)，收率：82％。
1H NMR(DMSO-D6，400MHz)δ5.76(m，1H)，5.46(m，1H)，5.0(m，1H)，4.08-4.05(m，4H)，3.97(m，2H)，3.69(m，2H)，2.73(s，6H)，2.61(m，2H)，1.87(m，3H)，1.57(m，3H)，1.18(s，3H)，1.9(m，2H)。
实施例14
5-苄基-5-[2-(2-氰基-4-氟-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基氨基]-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺酒石酸盐
Figure BSA00000195667900421
第一步
5-苄基-5-氰基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺的制备
氮气氛下，将5-氰基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺12a(4.0g，19.3mmol)搅拌下溶解于60mL四氢呋喃中，加入苄氯(5.4g，42.5mmol)，室温搅拌下滴加六甲基二硅基胺基锂(42.5mL，42.5mmol)，室温下搅拌4小时，薄层色谱跟踪反应至原料消失，加入50mL水淬灭反应，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法纯化所得残余物，得到标题产物5-苄基-5-氰基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺14a(2.6g，淡黄色固体)，收率：46％。
第二步
5-苄基-5-甲酰基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺的制备
将5-苄基-5-氰基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺14a(2.0g，6.7mmol)搅拌下溶剂于100mL二氯甲烷中，在0℃下滴加二异丁基氢化铝(20.2mL，20.2mmol)，薄层色谱跟踪反应至原料消失，加水淬灭反应，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法纯化所得残余物，得到标题产物5-苄基-5-甲酰基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺14b(729mg，无色油状液体)，收率：36％。
第三步
5-苄基-2-二甲基氨基甲酰-八氢并环戊二烯吡咯-5-羧酸的制备
氮气氛下，将5-苄基-5-甲酰基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺14b(0.729g，2.43mmol)搅拌下溶解于28mL四氢呋喃和14mL水的混合溶剂中，在0℃下，加入二水合磷酸二氢钠(1.14g，7.29mmol)，亚氯酸钠(0.66g，7.29mmol)和2-甲基-2-丁烯(0.513g，7.32mmol)，在0℃下反应2小时，薄层色谱跟踪反应至原料消失，加入乙酸乙酯萃取反应液，合并有机相，用无水硫酸镁干燥，抽滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法纯化所得残余物，得到标题产物5-苄基-2-二甲基氨基甲酰-八氢并环戊二烯吡咯-5-羧酸14c(0.76g，无色油状液体)，收率：98％。
MS m/z(ESI)：317.3(M+1)。
1H NMR(DMSO-D6，400MHz)δ7.5-7.0(m，5H)，3.24(m，2H)，3.1(m，2H)，2.76(s，2H)，2.7(s，6H)，2.68(m，2H)，1.99-1.55(m，4H)。
第四步
5-苄基-2-二甲基氨基甲酰-八氢并环戊二烯吡咯-5-羰基叠氮化物的制备
冰浴下，将5-苄基-2-二甲基氨基甲酰-八氢并环戊二烯吡咯-5-羧酸14c(0.86g，2.72mmol)搅拌下溶解于30mL丙酮中，在-5℃下，依次滴加三乙胺(0.303g，2.99mmol)，15mL氯甲酸乙酯(0.325g，2.99mmol)的丙酮溶液，搅拌15分钟，滴加15mL叠氮化钠(0.353g，5.44mmol)的水溶液，搅拌30分钟，薄层色谱跟踪反应至原料消失，浓缩掉丙酮，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩，得到标题产物5-苄基-2-二甲基氨基甲酰-八氢并环戊二烯吡咯-5-羰基叠氮化物14d(0.9g，浅黄色油状液体)，收率：97％。
第五步
5-苄基-5-异氰酰基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺的制备
将5-苄基-2-二甲基氨基甲酰-八氢并环戊二烯吡咯-5-羰基叠氮化物14d(1.0g，2.72mmol)搅拌下溶解于20mL甲苯中，加热回流1.5小时，浓缩掉甲苯，所得残余物为标题产物5-苄基-5-异氰酰基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺14e，直接用于下一步反应。
第六步
5-氨基-5-苄基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺的制备
室温下，将上一步得到的5-苄基-5-异氰酰基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺14e中滴加12mL的8N的盐酸，搅拌30分钟，用4N的氢氧化钠溶液调节PH为9，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法纯化所得残余物，得到标题产物5-氨基-5-苄基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺14f(0.55g，无色油状液体)，收率：70％。
第七步
5-苄基-5-[2-(2-氰基-4-氟-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基氨基]-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺的制备
将5-氨基-5-苄基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺14f(0.1g，0.35mmol)搅拌下溶解于4mL二氯甲烷/N，N-二甲基甲酰胺(V/V＝1/1)混合溶剂中，加入(2S，4S)-1-(2-氯乙酰基)-4-氟-2-氰基吡咯烷13g(66.5mg，0.35mmol)和碳酸钾(49mg，0.35mmol)，在40℃下反应12小时，薄层色谱跟踪反应至原料消失，浓缩掉反应液，用硅胶柱色谱法纯化所得残余物，得到标题产物5-苄基-5-[2-(2-氰基-4-氟-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基氨基]-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺14g(87mg，白色固体)，收率：56％。
MS m/z(ESI)：442.2(M+1)。
第八步
5-苄基-5-[2-(2-氰基-4-氟-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基氨基]-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺酒石酸盐的制备
将5-苄基-5-[2-(2-氰基-4-氟-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基氨基]-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺14g(87mg，0.197mmol)搅拌下溶解于3mL二氯甲烷中，滴加3mL酒石酸的丙酮溶液，室温下反应30分钟，浓缩掉溶剂，加入乙酸乙酯及丙酮重结晶，得到标题产物5-苄基-5-[2-(2-氰基-4-氟-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基氨基]-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺酒石酸盐14(80mg，白色固体)，收率：68％。
1H NMR(DMSO-D6，400MHz)δ7.32-7.2(m，5H)，5.55(d，1H)，5.41(d，1H)，4.97(m，1H)，4.31(s，2H)，4.08(m，1H)，4.0-3.5(m，6H)，2.81(s，2H)，2.78(s，6H)，2.5(m，2H)，2.0(m，3H)，1.6-1.3(m，6H)。
实施例15
5-环己基甲基-5-[2-(2-氰基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基氨基]-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺酒石酸盐
第一步
5-氰基-5-环己基甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺的制备将5-氰基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺12a(3.66g，17.6mmol)搅拌下溶解于150mL四氢呋喃中，滴入溴甲基环己烷(6.2g，35.2mmol)，滴加六甲基二硅基胺基锂(35.2mL，35.2mmol)，室温下反应2小时，薄层色谱跟踪反应至原料消失，加入150mL饱和氯化铵溶液，用乙酸乙酯(60mL×3)萃取，合并有机相，无水硫酸镁干燥，抽滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法纯化所得残余物，得到标题产物5-氰基-5-环己基甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺15a(2.2g，黄色固体)，收率：41.5％。
MS m/z(ESI)：304.5(M+1)。
第二步
5-环己基甲基-5-甲酰基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺的制备
在0℃下，将5-氰基-5-环己基甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺15a(1.2g，3.95mmol)搅拌下溶解于30mL二氯甲烷中，冰浴下滴加二异丁基氢化铝(11.8mL，11.8mmol)，反应1小时后，薄层色谱跟踪反应至原料消失，加入100mL饱和酒石酸钾钠溶液，搅拌至溶液透明，用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，合并有机相，无水硫酸镁干燥，抽滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法纯化所得残余物，得到标题产物5-环己基甲基-5-甲酰基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺15b(0.4g，微黄色油状物)，收率：33％。
MS m/z(ESI)：307.4(M+1)。
第三步
5-环己基甲基-2-二甲基氨基甲酰-八氢并环戊二烯吡咯-5-羧酸的制备
将5-环己基甲基-5-甲酰基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺15b(0.713g，2.33mmol)搅拌下溶解于60mL四氢呋喃和30mL水的混合溶剂中，在0℃下，加入二水合磷酸二氢钠(1.09g，6.99mmol)，亚氯酸钠(0.79g，6.99mmol)和2-甲基-2-丁烯(0.62mL，7.0mmol)，在0℃下反应2小时，薄层色谱跟踪反应至原料消失，蒸干四氢呋喃，加入乙酸乙酯萃取水相，合并有机相，用无水硫酸镁干燥，抽滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法纯化所得残余物，得到标题产物5-环己基甲基-2-二甲基氨基甲酰-八氢并环戊二烯吡咯-5-羧酸15c(0.75g，黄色固体)，收率：100％。
MS m/z(ESI)：323.3(M+1)。
第四步
5-环己基甲基-2-二甲基氨基甲酰-八氢并环戊二烯吡咯-5-羰基叠氮化物的制备
冰浴下，将5-环己基甲基-2-二甲基氨基甲酰-八氢并环戊二烯吡咯-5-羧酸15c(0.75g，2.33mmol)搅拌下溶解于20mL丙酮中，在0至-5℃下滴加三乙胺(0.36mL，2.56mmol)，加入2mL氯甲酸乙酯(0.25mL，2.56mmol)的丙酮溶液，搅拌15分钟，加入2mL叠氮化钠(0.303g，4.66mmol)的水溶液，维持温度在0至-5℃，继续反应30分钟，薄层色谱跟踪反应至原料消失，蒸干反应液中的丙酮，加入10mL水，用乙酸乙酯(10mL×5)萃取，合并有机相，无水硫酸镁干燥，抽滤，滤液减压浓缩，所得残余物为标题产物5-环己基甲基-2-二甲基氨基甲酰-八氢并环戊二烯吡咯-5-羰基叠氮化物15d(0.79g，黄色油状物)，直接用于下一步反应。
第五步
5-环己基甲基-5-异氰酰基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺的制备
将5-环己基甲基-2-二甲基氨基甲酰-八氢并环戊二烯吡咯-5-羰基叠氮化物15d(0.79g，2.27mmol)搅拌下溶解于20mL甲苯中，加热回流1小时，薄层色谱跟踪反应至原料消失，蒸干反应液，得到的残余物为标题产物5-环己基甲基-5-异氰酰基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺15e(0.65g，灰色固体)，直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI)：320.4(M+1)。
第六步
5-氨基-5-环己基甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺的制备
冰浴下，将10mL的8N盐酸滴入5-环己基甲基-5-异氰酰基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺15e(0.65g，2.03mmol)中，撤掉冰浴，在50℃下反应20分钟，薄层色谱跟踪反应至原料消失，加入浓氨水至反应液PH大于8，用乙酸乙酯(30mL*5)萃取水相，合并有机相，用无水硫酸镁干燥，抽滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法纯化所得残余物，得到标题产物5-氨基-5-环己基甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺15f(0.5g，灰色油状物)，收率：84％。
MS m/z(ESI)：294.3(M+1)。
第七步
5-环己基甲基-5-[2-(2-氰基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基氨基]-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺的制备
将5-氨基-5-环己基甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺15f(0.115g，0.39mmol)搅拌下溶解于10mL二氯甲烷/N，N-二甲基甲酰胺(V/V＝1/1)中，加入1-(2-氯-乙酰基)-吡咯烷-2-氰基(54mg，0.31mmol)，在50℃下反应2小时，薄层色谱跟踪反应至原料消失，减压浓缩除掉反应液中的二氯甲烷和N，N-二甲基甲酰胺，用硅胶柱色谱法纯化所得残余物，得到标题产物5-环己基甲基-5-[2-(2-氰基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基氨基]-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺15g(113mg，无色油状液体)，收率：67％。
MS m/z(ESI)：430.5(M+1)。
第八步
5-环己基甲基-5-[2-(2-氰基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基氨基]-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺酒石酸盐的制备
将5-环己基甲基-5-[2-(2-氰基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基氨基]-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺15g(113mg，0.263mmol)搅拌下溶解于10mL乙酸乙酯中，滴加2mL酒石酸的丙酮溶液，搅拌30分钟后，过滤，得到标题产物5-环己基甲基-5-[2-(2-氰基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基氨基]-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺酒石酸盐15(40mg，白色固体)。
1H NMR(DMSO-D6，400MHz)δ5.2(m，1H)，4.77(s，2H)，4.18(m，3H)，4.02(m，1H)，3.63(m，2H)，3.32(m，2H)，2.73(s，6H)，2.58(m，2H)，2.16-1.87(m，9H)，1.59-1.19(m，8H)。
实施例16
5-环戊基-5-[2-(2-氰基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基氨基]-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺酒石酸盐
Figure BSA00000195667900471
第一步
5-氰基-5-环戊基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺的制备
氮气氛下，将5-氰基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺12a搅拌下溶解于30mLN，N-二甲基甲酰胺中，加入碘代环戊烷(5.4g，27.5mmol)，滴加六甲基二硅基胺基锂(27.5mL，27.5mmol)，室温下搅拌2小时，薄层色谱跟踪反应至原料消失，加入10mL水，浓缩掉N，N-二甲基甲酰胺，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法纯化所得残余物，得到标题产物5-氰基-5-环戊基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺16a(2.6g，浅黄色固体)，收率：42％。
MS m/z(ESI)：276.2(M+1)。
1H NMR(DMSO-D6，400MHz)δ3.35-3.0(m，4H)，2.24(s，6H)，1.34-2.5(m，15H)。
第二步
5-环戊基-5-甲酰基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺的制备
在0℃下，将5-氰基-5-环戊基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺16a(0.817g，2.97mmol)搅拌下溶解于40mL二氯甲烷中，冰浴下滴加二异丁基氢化铝(8.9mL，8.9mmol)，反应45分钟后，薄层色谱跟踪反应至原料消失，蒸干二氯甲烷，加入100mL饱和酒石酸钾钠溶液，搅拌至溶液透明，用乙酸乙酯(100mL×4)萃取，合并有机相，无水硫酸镁干燥，抽滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法纯化所得残余物，得到标题产物5-环戊基-5-甲酰基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺16b(0.266g，淡黄色油状物)，收率：32％。
MS m/z(ESI)：279.3(M+1)。
第三步
5-环戊基-2-二甲基氨基甲酰-八氢并环戊二烯吡咯-5-羧酸的制备
将5-环戊基-5-甲酰基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺16b(0.266g，0.955mmol)搅拌下溶解于20mL四氢呋喃和10mL水的混合溶剂中，在0℃下，加入二水合磷酸二氢钠(0.448g，2.87mmol)，亚氯酸钠(0.26g，2.87mmol)和2-甲基-2-丁烯(0.24mL，2.88mmol)，在0℃下反应2小时，薄层色谱跟踪反应至原料消失，蒸干四氢呋喃，加入乙酸乙酯萃取水相，合并有机相，用无水硫酸镁干燥，抽滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法纯化所得残余物，得到标题产物5-环戊基-2-二甲基氨基甲酰-八氢并环戊二烯吡咯-5-羧酸16c(0.28g，黄色固体)，收率：99.6％。
MS m/z(ESI)：295.5(M+1)。
第四步
5-环戊基-2-二甲基氨基甲酰-八氢并环戊二烯吡咯-5-羰基叠氮化物的制备
冰浴下，将5-环戊基-2-二甲基氨基甲酰-八氢并环戊二烯吡咯-5-羧酸16c(0.28g，6.95mmol)搅拌下溶解于20mL丙酮中，在0至-5℃下滴加三乙胺(0.15mL，1.05mmol)，2mL氯甲酸乙酯(0.1mL，1.05mmol)的丙酮溶液，搅拌15分钟后，加入叠氮化钠(0.124g，1.9mmol)的水溶液，在反应30分钟，薄层色谱跟踪反应至原料消失，蒸干丙酮，加入10mL水，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸镁干燥，抽滤，滤液减压浓缩，得到标题产物5-环戊基-2-二甲基氨基甲酰-八氢并环戊二烯吡咯-5-羰基叠氮化物16d(0.287g，黄色油状物)，收率：95％，直接用于下一步反应。
第五步
5-环戊基-5-异氰酰基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺的制备
将5-环戊基-2-二甲基氨基甲酰-八氢并环戊二烯吡咯-5-羰基叠氮化物16d(0.287g，0.9mmol)搅拌下溶解于10mL甲苯中，加热回流1小时，薄层色谱跟踪反应至原料消失，蒸干溶剂，得到标题产物5-环戊基-5-异氰酰基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺16e，直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI)：292.3(M+1)。
第六步
5-氨基-5-环戊基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺的制备
冰浴下，向上一步得到的5-环戊基-5-异氰酰基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺16e中滴加10mL 8N的盐酸，撤掉冰浴，在50℃下反应15分钟，薄层色谱跟踪反应至原料消失，加入浓氨水调节反应液PH大于8，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用无水硫酸镁干燥，抽滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法纯化所得残余物，得到标题产物5-氨基-5-环戊基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺16f(0.18g，黄色油状液体)，收率：81.8％。
MS m/z(ESI)：266.2(M+1)。
第七步
5-环戊基-5-[2-(2-氰基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基氨基]-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺的制备
氮气氛下，将5-氨基-5-环戊基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺16f(0.108g，0.407mmol)和1-(2-氯-乙酰基)-吡咯烷-2-氰基(70mg，0.407mmol)搅拌下溶解于3mL的N，N-二甲基甲酰胺，加入碳酸钾(57mg，0.407mmol)，油浴80℃下反应过夜，薄层色谱跟踪反应至原料消失，浓缩反应液，用硅胶柱色谱法纯化所得残余物，得到标题产物5-环戊基-5-[2-(2-氰基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基氨基]-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺16g(100mg，无色油状液体)，收率：61.3％。
MS m/z(ESI)：402.3(M+1)。
第八步
5-环戊基-5-[2-(2-氰基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基氨基]-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺酒石酸盐的制备
将5-环戊基-5-[2-(2-氰基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基氨基]-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺16g(102mg，0.254mmol)搅拌下溶解于2mL乙酸乙酯中，加入3mL酒石酸的丙酮溶液，搅拌30分钟，有白色固体析出，加入少量正己烷，继续搅拌，过滤，得到标题产物5-环戊基-5-[2-(2-氰基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基氨基]-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺酒石酸盐16(88mg，白色固体)，收率：65％。
实施例17
5-苄基-5-[2-(2-氰基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基氨基]-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺酒石酸盐
Figure BSA00000195667900501
第一步
5-苄基-5-[2-(2-氰基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基氨基]-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺的制备
氮气氛下，将5-氨基-5-苄基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺14f(0.1g，0.35mmol)、1-(2-氯-乙酰基)-吡咯烷-2-氰基(120.4mg，0.7mmol)和碳酸钾(49mg，0.35mmol)搅拌下溶解于3mL的N，N-二甲基甲酰胺，油浴80℃下反应过夜，薄层色谱跟踪反应至原料消失，浓缩反应液，用硅胶柱色谱法纯化所得残余物，得到标题产物5-苄基-5-[2-(2-氰基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基氨基]-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺17a(56mg，无色油状液体)，收率：40％。
MS m/z(ESI)：424.3(M+1)。
第二步
5-苄基-5-[2-(2-氰基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基氨基]-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺酒石酸盐的制备
将5-苄基-5-[2-(2-氰基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基氨基]-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺17a(56mg，0.132mmol)搅拌下溶解于1mL乙酸乙酯中，加入1mL酒石酸的丙酮溶液，搅拌30分钟，有白色固体析出，加入少量正己烷，继续搅拌，过滤，得到标题产物5-苄基-5-[2-(2-氰基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基氨基]-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺酒石酸盐17(50mg，白色固体)，收率：67％。
1H NMR(DMSO-D6，400MHz)δ7.32-7.19(m，5H)，4.78(m，1H)，4.23(s，2H)，3.8-3.0(m，8H)，2.75(s，2H)，2.73(s，6H)，2.18(m，2H)，2.16(m，2H)，1.87(m，3H)，1.35(m，3H)。
实施例18
5-[2-(2-氰基-4-氟-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基氨基]-5-甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺对甲苯磺酸盐
Figure BSA00000195667900511
第一步
5-[2-(2-氰基-4-氟-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙胺基]-5-甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺的制备
氮气氛下，将5-氨基-5-甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺11c(1.3g，7.58mmol)、(2S，4S)-1-(2-氯乙酰基)-4-氟-2-氰基吡咯烷13g(1.74g，9.1mmol)、碳酸钾(1.26g，9.1mmol)及30mL的N，N-二甲基甲酰胺和18mL二氯甲烷加入反应瓶中，油浴30℃下反应过夜后，薄层色谱跟踪反应，原料消失，减压除去N，N-二甲基甲酰胺，用硅胶柱色谱法纯化，得到标题产物5-[2-(2-氰基-4-氟-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基氨基]-5-甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺18a(1.39g，白色固体)，收率：50％。
MS m/z(ESI)：348.2(M+1)。
第二步
5-[2-(2-氰基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙胺基]-5-甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺对甲苯磺酸盐的制备
室温下，将5-[2-(2-氰基-4-氟-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基氨基]-5-甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺18a(0.9g，2.47mmol)搅拌下溶解于5mL的二氯甲烷中，再将一水合对甲苯磺酸(469mg，2.47mmol)搅拌下溶解于3mL丙酮中，将对甲苯磺酸的丙酮溶液滴加入上述溶液中，滴加过程中有白色沉淀逐渐产生，搅拌30分钟后，加1mL正己烷搅拌，过滤，得到的标题产物5-[2-(2-氰基-4-氟-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基氨基]-5-甲基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺对甲苯磺酸盐18(1.3g，白色固体)，收率：93％。
MS m/z(ESI)：366.1(M+1)。
1H NMR(DMSO-D6，400MHz)δ7.74(d，2H)，7.29(d，2H)，5.57-5.44(m，1H)，5.07(m，1H)，4.19-4.07(m，4H)，3.49(m，2H)，3.35(m，2H)，3.0(m，2H)，2.9(s，6H)，2.6(m，2H)，2.39(m，5H)，1.57(m，2H)，1.34(s，3H)。
实施例19
5-乙基-5-[2-(2-氰基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基氨基]-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺酒石酸盐
第一步
5-氰基-5-乙基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺
在氮气保护下，将5-氰基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺12a(3.0g，14.5mmol)搅拌下溶解于60mL干燥的四氢呋喃，加入碘乙烷(4.52g，29mmol)在室温下，滴加六甲基二硅基胺基锂(29mL，29mmol)，室温下反应2小时，薄层色谱跟踪反应，原料消失，加入20mL水，用乙酸乙酯(200mL×3)萃取，无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩，得到油状物，薄层色谱显示为两个较近的点，用硅胶柱色谱法纯化，得到5-氰基-5-乙基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺19a(1.64g，浅黄色油状物)。
MS m/z(ESI)：236.3(M+1)。
1H NMR(DMSO-D6，400MHz)δ3.5-3.0(m，4H)，2.7(s，6H)，1.9-1.2(m，8H)，1.19(m，3H)。
第二步
2-二甲基氨甲酰基-5-乙基-八氢-并环戊二烯吡咯-5-羧酸的制备
将5-氰基-5-乙基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺19a(1.54g，6.55mmol)搅拌下溶解于60mL二氯甲烷中，在0℃下滴加二异丁基氢化铝(19.6mL，19.6mmol)，滴毕，在0℃下搅拌30分钟，薄层色谱跟踪反应，原料消失，反应结束，加入1.5mL水，用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩，得到标题产物5-乙基-5-甲酰基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺19b(0.4g，淡黄色液体)，收率：26％。
MS m/z(ESI)：239.1(M+1)。
第三步
5-乙基-2-二甲基氨基甲酰-八氢并环戊二烯吡咯-5-羧酸的制备
将5-乙基-5-甲酰基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺19b(0.4g，1.68mmol)搅拌下溶解于18mL四氢呋喃和9mL水的混合溶剂中，加入二水合磷酸二氢钠(787mg，5.04mmol)，亚氯酸钠(0.454g，5.04mmol)和2-甲基-2-丁烯(354mg，5.06mmol)，氮气氛下，在0℃下反应2小时，薄层色谱跟踪反应至原料消失，加入乙酸乙酯萃取水相，合并有机相，用无水硫酸镁干燥，抽滤，滤液减压浓缩，得到标题产物5-乙基-2-二甲基氨基甲酰-八氢并环戊二烯吡咯-5-羧酸19c(0.426g，淡黄色油状液体)，收率：100％，直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI)：255.2(M+1)。
第四步
5-乙基-2-二甲基氨基甲酰-八氢并环戊二烯吡咯-5-羰基叠氮化物的制备
冰浴下，将5-乙基-2-二甲基氨基甲酰-八氢并环戊二烯吡咯-5-羧酸19c(0.56g，2.2mmol)搅拌下溶解于60mL丙酮中，在-5℃下滴加三乙胺(0.245mg，2.43mmol)，加入2mL氯甲酸乙酯(263mg，2.43mmol)的丙酮溶液，搅拌15分钟，加入2mL叠氮化钠(0.286g，4.4mmol)的水溶液，维持温度在0至-5℃，继续反应30分钟，薄层色谱跟踪反应至原料消失，加入10mL水，用乙酸乙酯(10mL×5)萃取，合并有机相，无水硫酸镁干燥，抽滤，滤液减压浓缩，所得残余物为标题产物5-乙基-2-二甲基氨基甲酰-八氢并环戊二烯吡咯-5-羰基叠氮化物19d(0.5g，淡黄色油状物)，直接用于下一步反应。
第五步
5-乙基-5-异氰酰基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺的制备
将5-乙基-2-二甲基氨基甲酰-八氢并环戊二烯吡咯-5-羰基叠氮化物19d(0.5g，1.86mmol)搅拌下溶解于30mL甲苯中，加热回流2小时，薄层色谱跟踪反应至原料消失，蒸干反应液，得到的残余物为标题产物5-乙基-5-异氰酰基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺19e，直接用于下一步反应。
第六步
5-氨基-5-乙基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺的制备
室温下，将12mL的8N盐酸滴入上一步得到的5-环己基甲基-5-异氰酰基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺19e中，搅拌30分钟，用8N氢氧化钠溶液调节pH为9-10，用二氯甲烷(30mL×5)萃取水相，合并有机相，用无水硫酸镁干燥，抽滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法纯化所得残余物，得到标题产物5-氨基-5-乙基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺19f(0.3g，无色油状物)，收率：71％。
MS m/z(ESI)：226.2(M+1)。
第七步
5-乙基-5-[2-(2-氰基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基氨基]-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺的制备
氮气氛下，将5-氨基-5-乙基-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺19f(0.202g，0.897mmol)、1-(2-氯-乙酰基)-吡咯烷-2-氰基(185mg，1.07mmol)、碳酸钾(148mg，1.07mmol)及9mL二氯甲烷/N，N-二甲基甲酰胺(V/V＝1/1)混合溶剂加入反应瓶中，在60℃下反应2小时，薄层色谱跟踪反应至原料消失，减压浓缩除掉反应液中的二氯甲烷和N，N-二甲基甲酰胺，用硅胶柱色谱法纯化所得残余物，得到标题产物5-乙基-5-[2-(2-氰基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基氨基]-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺19g(120mg，淡黄色油状液体)，收率：40％。
MS m/z(ESI)：362.2(M+1)。
第八步
5-乙基-5-[2-(2-氰基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基氨基]-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺酒石酸盐的制备
将5-乙基-5-[2-(2-氰基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基氨基]-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺19g(120mg，0.33mmol)搅拌下溶解于1mL乙酸乙酯中，滴加2mL酒石酸(50mg，0.33mmol)的丙酮溶液，搅拌30分钟后，过滤，得到标题产物5-乙基-5-[2-(2-氰基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基氨基]-六氢并环戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺酒石酸盐19(160mg，白色固体)，收率：94％。
MS m/z(EST)：362.2(M+1)。
1H NMR(DMSO-D6，400MHz)δ4.79(m，1H)，4.11(s，2H)，3.65(m，2H)，3.49(m，2H)，3.22(m，4H)，2.75(s，6H)，2.55(m，2H)，2.19(m，2H)，2.09(m，2H)，1.99(m，2H)，1.51(m，4H)，0.86(t，3H)。
测试例
生物学评价
DPP IV/DPP8/DPP9抑制活性的测定
下面的方法是用来测定本发明化合物抑制DPPIV/DPP8/DPP9酶活性的。检测了本发明中化合物抑制纯DPPIV/DPP8/DPP9酶活性的抑制能力。每个化合物的抑制率或半抑制浓度IC50(把酶活性抑制至50％时所测化合物的浓度)是以固定量的酶混合底物及不同浓度的待测化合物来测定的。
DPP IV抑制活性的测定
材料和方法：
材料：
a.白色96孔板(BMG)
b.Tris缓冲液：制备100mL 2mM的Tris缓冲液，将0.0242g Tris溶解于约90mLdH2O中，用HCl和NaOH调节pH到8.00，最后加dH2O至100mL。
c.DPPIV酶(CalBiochem Catalog no.317630)，溶解于Tris缓冲液中至2mM。
d.DPPIV-GloTM底物(Promega Catalog no.G8350)，溶解于dH2O中至1mM。
e.DPPIV-Glo.缓冲液(Promega Catalog no.G8350)
f.荧光素检测试剂(Promega Catalog no.G8350)
g.DMSO
h.dH2O
操作：
按以下操作顺序进行：
1.解冻DPPIV-Glo.使用前缓冲并平衡到室温。
2.使用前缓冲冻存的荧光素检测试剂。
3.悬浮DPPIV-Glo.在底物中加入超纯水轻微混合均匀后，制成1mM的底物。
4.将荧光素检测试剂放入茶色瓶中，加入DPPIV-Glo.。荧光素检测试剂应在1分钟内溶解。
5.用DMSO溶解所测化合物至最终操作浓度的50倍。
6.每个试管中加入50倍浓度的所测化合物2μL，在反面对照合空白对照中加入2μLDMSO。
7.在每个试管中加入46μL Tris缓冲液，在空白对照中加入48μL Tris缓冲液。
8.在反面对照和测试样的每个试管中加入2μLDPPIV酶。
9.振动混合并离心试管。将试管中物质全部转移到96-well平板上。
10.混合底物和DPPIV-Glo.比例为1∶49。振动混合至充分混合。使用前在室温下静置30-60分钟。
11.在每个96-well平板孔中加入50μL DPPIV-Glo.和底物的混合液，用封膜封住平板。
12.用平板振荡器在300-500rpm/30s下慢慢混合96孔中物质。在室温下培养30分钟到3小时。
13.记录发光。
抑制率定义：[1-(S-B)/(N-B)]*100％
S：样品
B：空白对照
N：反面对照
DPP 8抑制活性的测定
材料和方法：
材料：
i.白色96孔板(BMG)
j.Tris缓冲液：制备100mL 2mM的Tris缓冲液，将0.0242g Tris溶解于约90mLdH2O中，用HCl和NaOH调节pH到8.00，最后加dH2O至100mL。
k.DPP8酶(Bioscience Catalog no.80080)，溶解于25mM Tris-HCl，pH8.0，100mMNaCl，0.05％Tween-20，50％glycerol，3mM DTT缓冲液中。反应使用终浓度为0.1ng/100μL assay。
l.DPP8-GloTM底物(Promega Catalog no.G8350)，溶解于dH2O中至1mM。
m.DPP8-Glo.缓冲液(Promega Catalog no.G8350)
n.荧光素检测试剂(Promega Catalog no.G8350)
o.DMSO
p.dH2O
操作：
按以下操作顺序进行：
14.解冻DPP8-Glo.使用前缓冲并平衡到室温。
15.使用前缓冲冻存的荧光素检测试剂。
16.悬浮DPP8-Glo.在底物中加入超纯水轻微混合均匀后，制成1mM的底物。
17.将荧光素检测试剂放入茶色瓶中，加入DPP8-Glo.。荧光素检测试剂应在1分钟内溶解。
18.用DMSO溶解所测化合物至最终操作浓度的50倍。
19.每个试管中加入50倍浓度的所测化合物2μL，在反面对照合空白对照中加入2μLDMSO。
20.在每个试管中加入46μL Tris缓冲液，在空白对照中加入48μL Tris缓冲液。
21.在反面对照和测试样的每个试管中加入2μLDPP8酶。
22.振动混合并离心试管。将试管中物质全部转移到96-well平板上。
23.混合底物和DPP8-Glo.比例为1∶49。振动混合至充分混合。使用前在室温下静置30-60分钟。
24.在每个96-well平板孔中加入50μL DPP8-Glo.和底物的混合液，用封膜封住平板。
25.用平板振荡器在300-500rpm/30s下慢慢混合96孔中物质。在室温下培养30分钟到3小时。
26.记录发光。
抑制率定义：[1-(S-B)/(N-B)]*100％
S：样品
B：空白对照
N：反面对照
DPP 9抑制活性的测定
材料和方法：
材料：
q.白色96孔板(BMG)
r.Tris缓冲液：制备100mL 2mM的Tris缓冲液，将0.0242g Tris溶解于约90mLdH2O中，用HCl和NaOH调节pH到8.00，最后加dH2O至100mL。
s.DPP9酶(Bioscience Catalog no.80090)，溶解于25mM Tris-HCl，pH8.0，100mMNaCl，0.05％Tween-20，50％glycerol，3mM DTT缓冲液中。反应使用终浓度为0.01ng/100μL assay。
t.
u.DPP9-GloTM底物(Promega Catalog no.G8350)，溶解于dH2O中至1mM。
v.DPP9-Glo.缓冲液(Promega Catalog no.G8350)
w.荧光素检测试剂(Promega Catalog no.G8350)
x.DMSO
y.dH2O
操作：
按以下操作顺序进行：
27.解冻DPP9-Glo.使用前缓冲并平衡到室温。
28.使用前缓冲冻存的荧光素检测试剂。
29.悬浮DPP9-Glo.在底物中加入超纯水轻微混合均匀后，制成1mM的底物。
30.将荧光素检测试剂放入茶色瓶中，加入DPP9-Glo.。荧光素检测试剂应在1分钟内溶解。
31.用DMSO溶解所测化合物至最终操作浓度的50倍。
32.每个试管中加入50倍浓度的所测化合物2μL，在反面对照合空白对照中加入2μLDMSO。
33.在每个试管中加入46μL Tris缓冲液，在空白对照中加入48μL Tris缓冲液。
34.在反面对照和测试样的每个试管中加入2μLDPP9酶。
35.振动混合并离心试管。将试管中物质全部转移到96-well平板上。
36.混合底物和DPP9-Glo.比例为1∶49。振动混合至充分混合。使用前在室温下静置30-60分钟。
37.在每个96-well平板孔中加入50μL DPP9-Glo.和底物的混合液，用封膜封住平板。
38.用平板振荡器在300-500rpm/30s下慢慢混合96孔中物质。在室温下培养30分钟到3小时。
39.记录发光。
抑制率定义：[1-(S-B)/(N-B)]*100％
S：样品
B：空白对照
N：反面对照
表1实施例IC50数据
Figure BSA00000195667900581
Figure BSA00000195667900591
DPPIV抑制剂降血糖作用的初步评价
试验目的：
观察DPPIV抑制剂类受试化合物实施例1和实施例2对正常ICR小鼠口服糖耐量的影响，初步评价其在体内的降血糖作用。
受试动物：
种属、品系：ICR小鼠
来源：中国科学院上海实验动物中心，合格证号：SYXK(沪)2004-2005
体重：25～30g
性别：雄性
动物数：40只
饲养条件：SPF级动物房饲养，温度：22-24℃，湿度：45-80％，光照：
150-300Lx，12小时昼夜交替。
受试药物：
名称：实施例1化合物
批号：01
颜色、形态：白色粉末
纯度：96.97％
提供单位：上海恒瑞医药有限公司研发中心
配制方法：准确称取药物，加入双蒸水，分别配制成0.5、0.15及0.05mg/mL的混悬液。(注：该化合物虽供试品接收单上显示易溶于水，但实验中发现其水溶性较差，低浓度时基本能溶解，但浓度为0.5mg/mL时仍有肉眼可见的颗粒存在。我们也曾试用1％CMC配制该化合物，但效果比双蒸水配制差。)
给药剂量：口服给药：1、3、10mg/kg，容积20mL/kg。
名称：实施例2化合物
批号：01
颜色、形态：白色粉末
纯度：99.62％
提供单位：上海恒瑞医药有限公司研发中心
配制方法：准确称取药物，加入双蒸水溶解，充分混匀，配成1.5mg/mL的溶液，然后稀释成0.5、0.15及0.05mg/mL的透明溶液。给药剂量：口服给药：1、3、10mg/kg，容积20mL/kg。
试验方法：
一、药物对正常ICR小鼠血糖的影响
取正常雄性ICR小鼠，按体重随机分组，每组6只，分别为空白对照、阳性对照组，以及不同剂量的给药组。具体分组如下：
试验1：
空白对照：口服双蒸水
给药组1：口服实施例1化合物1mg/kg
         口服实施例1化合物3mg/kg
         口服实施例1化合物10mg/kg
给药组2：口服实施例2化合物1mg/kg
         口服实施例2化合物3mg/kg
         口服实施例2化合物10mg/kg
试验2：
空白对照：口服双蒸水
给药组1：口服实施例1化合物1mg/kg
         口服实施例1化合物3mg/kg
         口服实施例1化合物10mg/kg
给药组2：口服实施例2化合物1mg/kg
         口服实施例2化合物3mg/kg
         口服实施例2化合物10mg/kg
各组动物禁食6小时后，分别单次给予受试药物或双蒸水，于给药后30分钟时口服葡萄糖2.5g/kg，于给糖前及给糖后30、60和120分钟时取血，测定血清葡萄糖水平。
二、血清葡萄糖测定方法：
采用葡萄糖试剂盒测定血清中的葡萄糖含量，取250μl酶工作液，加入5μl血清，同时设立空白管(加入5μl双蒸水)及标准管(加入5μl葡萄糖标液)，混匀，37℃水浴20分钟，以空白管调零，OD505nm处比色测定。
血清葡萄糖含量BG(mmol/l)＝OD 样品管/OD标准管×5.55数据处理和统计分析：
1、采用均值±SD及Student-t test对数据进行统计学分析
2、计算给糖后30分钟时血糖下降百分率以及曲线下面积AUC
试验结果：
试验1：
雄性ICR小鼠于禁食6小时后口服双蒸水、不同剂量的受试物实施例1、实施例2，各组于给药30分钟后，做口服糖耐量试验。结果显示，空白对照组小鼠口服葡萄糖2.5g/kg后血清葡萄糖浓度明显升高，30分钟时达到峰值。实施例1化合物低、中、高3个剂量组小鼠的血糖在30分钟时均明显低于空白对照组，其血糖下降百分率分别达19.16％、22.85和31.85％。实施例2化合物各剂量组小鼠给糖后30分钟时血糖明显低于空白对照组(P＜0.01)，与空白对照组相比，分别下降了25.54％、25.92和26.93％。
试验2：
雄性ICR小鼠于禁食6小时后口服双蒸水、不同剂量的受试物实施例1、实施例2，各组于给药30分钟后，做口服糖耐量试验。结果显示，空白对照组小鼠口服葡萄糖2.5g/kg后血清葡萄糖浓度明显升高，30分钟时达到峰值；SHR1039各剂量组小鼠给糖后30分钟时血糖明显低于空白对照组(P＜0.01)，与空白对照组相比，分别下降了26.10％、30.24和32.05％。SHR1040低、中、高3个剂量组小鼠的血糖在30分钟时均明显低于空白对照组，其血糖下降百分率分别达24.51％、26.96％和27.75％。
结论：
本报告中的两次试验结果均显示，受试化合物实施例1、实施例2在正常ICR小鼠口服糖耐量试验中均具有明显的降血糖作用。其中，受试化合物实施例1显示出较好的量效关系。
DPPIV抑制类化合物对KKAy小鼠口服糖耐量的影响
试验目的：
观察受试化合物实施例1和实施例2对II型糖尿病KKAy小鼠口服糖耐量的影响，初步评价其在体内的降血糖作用。
受试动物：
种属、品系：KKAy小鼠
来源：中国科学院上海实验动物中心，合格证号：SYXK(沪)2004-2005
体重：40～55g
性别：雌性：52只；雄性：33只
饲养条件：SPF级动物房饲养，温度：22-24℃，湿度：45-80％，光照：
150-300Lx，12小时昼夜交替。
受试药物：
名称：实施例1化合物和实施例2化合物
配制方法：准确称取药物，加入双蒸水溶解，充分混匀，配成3mg/mL的混
悬液，然后稀释成1、0.3和0.1mg/mL的透明溶液。
给药剂量：口服给药：1、3、10、30mg/kg，容积10mL/kg。
试验方法：
受试物对KKAy小鼠血糖的影响
取正常KKAy小鼠，禁食6小时后按体重和空腹血糖分组，每组5只，分别为空白对照以及不同剂量的给药组。具体实验如下：
试验1：雄性0704
空白对照：口服双蒸水
SHR1039组：口服实施例1化合物10mg/kg
           口服实施例1化合物30mg/kg
试验2：雌性0816
空白对照：口服双蒸水
SHR1039组：口服实施例1化合物3mg/kg
           口服实施例1化合物10mg/kg
试验3：雄性0712
空白对照：口服双蒸水
SHR1040组：口服实施例2化合物3mg/kg
           口服实施例2化合物10mg/kg
试验4：雌性0907
空白对照：口服双蒸水
SHR1040组：口服实施例2化合物3mg/kg
           口服实施例2化合物10mg/kg
各组动物禁食6小时后，分别单次给予受试化合物或双蒸水，于给药后30分钟时口服葡萄糖2.5g/kg(雌性KKAy小鼠)或1.5g/kg(雄性KKAy小鼠)，于给糖后0、30、60和120分钟时用血糖仪测定血清葡萄糖含量。
数据处理和统计分析：
3、采用均值±SD及Student-t test或Anova对数据进行统计学分析
4、计算给糖后30分钟时血糖下降百分率以及曲线下面积AUC
试验结果：
四、化合物实施例1：试验1、2
雄性KKAy小鼠于禁食6小时后口服双蒸水及不同剂量受试物实施例1，各组于给药30分钟后，做口服糖耐量试验。结果显示，空白对照组小鼠口服葡萄糖1.5g/kg后血清葡萄糖浓度明显升高，30分钟时达到峰值；实施例1在10和30mg/kg组小鼠给糖后30分钟时血糖比空白对照组有所降低，与空白对照组相比，分别下降了16.22％和17.15％。
雌性KKAy小鼠于禁食6小时后口服双蒸水及不同剂量受试物实施例1，各组于给药30分钟后，做口服糖耐量试验。结果显示，空白对照组小鼠口服葡萄糖2.5g/kg后血清葡萄糖浓度明显升高，30分钟时达到峰值；实施例1在3和10mg/kg组小鼠给糖后30分钟时血糖与空白对照组相比明显降低，其下降率为40.63％和24.68％。
五、化合物实施例2：试验3、4
雄性KKAy小鼠于禁食6小时后口服双蒸水及不同剂量受试物实施例2，各组于给药30分钟后，做口服糖耐量试验。结果显示，空白对照组小鼠口服葡萄糖1.5g/kg后血清葡萄糖浓度明显升高，30分钟时达到峰值；实施例2在10和30mg/kg组小鼠给糖后30分钟时血糖比空白对照组有所降低，与空白对照组相比，分别下降了13.79％和12.23％。
雌性KKAy小鼠于禁食6小时后口服双蒸水及不同剂量受试物实施例2，各组于给药30分钟后，做口服糖耐量试验。结果显示，空白对照组小鼠口服葡萄糖2.5g/kg后血清葡萄糖浓度明显升高，30分钟时达到峰值；实施例2化合物10mg/kg组小鼠给糖后30分钟时血糖较空白对照组有所降低(P＝0.075，anova)，降幅达21.55％，但由于个体差异较大，无显著性差异。
结论：
受试化合物实施例1和实施例2在II型糖尿病KKAy小鼠口服糖耐量试验中均具有一定的降血糖作用。

Claims (4)

1.下式所示化合物：
Figure FSA00000195667800011
2.一种药物组合物，其含有治疗有效剂量的根据权利要求1所述的化合物和药学上可接受的载体。
3.根据权利要求1所述的化合物在制备二肽基肽酶抑制剂药物中的用途。
4.根据权利要求2所述的药物组合物在制备二肽基肽酶抑制剂药物中的用途。
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