CN101723843A - 一种制备高纯度左旋卡尼汀的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种高纯度左旋卡尼汀的制备方法。属于手性药物生产过程中不同环节质量控制的关键技术。通过气相色谱和手性柱检测手性原料S-环氧氯丙烷中左旋异构体杂质的含量，控制反应原料中的左旋异构体杂质在一定的限度；使用旋光仪器检测和控制手性中间体L-3-氯-2-羟丙基三甲铵比旋度在一定的限度；通过HPLC法联合使用(+)α-甲基-6-甲氧基-2-萘乙酰氯衍生化试剂检测中间体L-3-氰基-2-羟丙基三甲铵中的右旋异构体含量，控制反应中间体的光学异构体的含量在一定限度，最终成品左旋卡尼汀经过HPLC法联合使用(+)α-甲基-6-甲氧基-2-萘乙酰氯衍生化试剂检测。通过以上检测和控制方法可以得到高纯度的左旋卡尼汀，其左旋异构体含量可以达到97％以上，右旋异构体的含量可以达到2％以下。

Description

一种制备高纯度左旋卡尼汀的方法

技术领域

本发明涉及一种制备高纯度左旋卡尼汀的方法，更具体地讲，本发明涉及通过检测和控制左旋卡尼汀合成工艺中手性原料和手性中间体的含量，从而得到高纯度左旋卡尼汀产物的方法。

技术背景

左旋卡尼汀又称左旋肉碱，普遍存在于哺乳动物组织中，也存在于一些植物和微生物中，主要药理作用是将长链脂肪酸转运入线粒体中进行氧化产生能量，广泛应用于药品和保健食品中。1905年Gulewitsch和Krimberg从肉提取物中发现了左旋卡尼汀。

天然的卡尼汀都是左旋卡尼汀，只有左旋卡尼汀才具有生理活性。目前药用的左旋卡尼汀通常都是通过化学合成获得的，人工合成的左旋卡尼汀并不像天然提取的左旋卡尼汀，由于原料和合成工艺等原因，很难保证得到绝对的左旋卡尼汀，一般会含有其旋光对应异构体右卡尼汀。而右卡尼汀对肉碱乙酰转移酶(CAT)和肉碱脂肪酰转移酶(PTC)有竞争性抑制作用，大约有10％的患者服用混旋体的卡尼汀后发生重症肌无力样的症状(《马丁戴尔大药典》第33版Page1356)，因此考虑到用药安全，需要严格控制人工合成左旋卡尼汀中的右旋异构体含量。

1988年日本专利(JP63185947)描述了以手性环氧氯丙烷为原料，经季铵盐化、腈化、水解、除盐得。这种方法使用光学纯的化合物为原料制备左旋卡尼汀，不需拆分。该专利没有报道手性原料中光学异构体含量多少以及如何精确测定，也没有报道最终左旋卡尼汀成品中的左旋异构体含量和右旋异构体含量。

光学活性季胺盐的制备(JP3287567A)中只介绍了以手性环氧氯丙烷为原料制备L-3-氯-2-羟丙基三甲铵，只提及L-3-氯-2-羟丙基三甲铵是光学活性卡尼汀合成中间体，该专利报道了制备的L-3-氯-2-羟丙基三甲铵的旋光度，也没有报道原料和中间体的光学异构体的含量以及如何精确测定。

L-(-)-肉碱的合成报道(合成化学，vol，12，2004)，具体描述了以手性环氧氯丙烷为原料通过胺化反应制备L-3-氯-2-羟丙基三甲铵，再经过氰化制备L-(-)-氯化-3-氰基-2-羟丙基三甲铵，最后水解合成左旋卡尼汀，其中对环氧氯丙烷、中间体和成品进行了比旋度检测。也没有报道原料、中间体和成品中的光学异构体的含量以及如何精确测定，按其方法制备高纯度左旋卡尼汀的成本很高。

另一关于L-(-)-肉碱合成报道(中国医药杂志，2006，37(12))，以手性salen-CoIII(2)，即[(R，R)，N，N’-双-(3，5-二叔丁基水杨醛)-1，2-环乙二胺(2-)]乙酸钴为催化剂，水解拆分外消旋环氧氯丙烷，得到S-环氧氯丙烷，再经季胺化、氰化、水解及离子交换得左旋卡尼汀。其中也只对S-环氧氯丙烷、中间体和成品进行了比旋度检测，但也没有报道原料、中间体和成品中的光学异构体的含量以及如何精确测定，更没有报道如何对其进行控制，以降低成本和提高左旋卡尼汀的纯度。

关于左旋卡尼汀中右卡尼汀的检测方法，文献报道如下：

文献(J.Pharm.Biomed.Anal.30(2002)209-218)报道了HPLC联合使用衍生化试剂(+)-FLEC((+)-1-(9-芴基)-氯甲酸乙酯)测定左旋卡尼汀中右旋体的方法，该方法中只是测定成品中左旋卡尼汀中右旋体的方法，没有报道合成左旋卡尼汀工艺过程中如何检测原料和中间体中对映异构体含量，更没有报道如何对其进行控制，以降低成本和提高左旋卡尼汀的纯度。

由于手性S-环氧氯丙烷也是通过化学合成或生物转化而得，如果光测定旋光度，不精确测定其光学异构体的含量，原料中就可能有光学对映异构体杂质参与左旋卡尼汀各步的合成反应，由于使用该手性原料合成左旋卡尼汀工艺不进行拆分，所以最终成品中就可能含有光学对映异构体杂质。此外，由于从原料开始合成左旋卡尼汀的步骤多，在合成过程中易发生消旋反应，因此必须在精确测定和控制原料中异构体的含量基础上，精确测定每一步反应产物的光学纯度，才能保证是否发生消旋反应影响成品的光学纯度。

由于左旋卡尼汀中右旋体对人体有危害，因此，需要研究一个有效方法，通过在每一步的合成过程中灵敏检测原料和中间体的光学异构体纯度，控制每一步光学异构体杂质的含量，保证最终得到高光学纯度的左旋卡尼汀成品，这对于保证人类健康，提高人工合成左旋卡尼汀纯度，具有重要作用；同时，为了保护环境，在繁多的人工合成左旋卡尼汀的生产步骤过程中，保证每一步反应的成品率，不让不合格的中间体进入下个化学反应过程，减少污染环境的环节，降低三废处理费用，这对于节能减排也具有重要的作用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种制备高纯度左旋卡尼汀的方法，其特在在于，在以S-环氧氯丙烷为原料人工合成左旋卡尼汀的工艺过程中，通过检测和控制手性原料和手性中间体的含量，从而得纯度按重量计高于97％的左旋卡尼汀产物，其中右旋卡尼汀含量低于2％，该方法包括下述步骤：

(1).通过气相色谱和手性柱检测起始原料S-环氧氯丙烷的光学异构体含量，控制S-环氧氯丙烷中的左旋异构体含量在0-12％W/W；

(2).通过旋光仪检测合成工艺中化学中间体L-3-氯-2-羟丙基三甲铵的比旋度，控制其比旋度的值在-26.0°～-29.4°；

(3).使用手性衍生化试剂检测中间体混合物中L-3-氰基-2-羟丙基三甲铵的光学纯度和其中右旋异构体的含量，控制该右旋异构体的含量在0～3.6％W/W；

其中所述手性衍生化试剂为光学活性纯的D型或L型下式(II)化合物：

式中带*的碳原子是手性碳原子；R代表具有1-6个碳原子的直链或支链烷基，或具有6-10个碳原子的芳烷基，或具有2-6个碳原子的直链或支链烯基或炔基，或具有3-6个碳原子的环烷基；X代表卤素。

本发明优选的光学活性纯的式(II)化合物是其中R代表甲基、乙基、异丙基、丁基或苄基，X代表Cl或Br的那些化合物。

本发明方法中使用的更优选的光学活性纯的式(II)化合物是固体结晶形式。其中优选下述化合物的固体结晶形式：(+)α-甲基-6-甲氧基-2-萘乙酰氯，(-)α-甲基-6-甲氧基-2-萘乙酰氯，(+)α-甲基-6-乙氧基-2-萘乙酰氯和(-)α-甲基-6-乙氧基-2-萘乙酰氯。

本发明方法中使用的最优选的式(II)化合物是(+)α-甲基-6-甲氧基-2-萘乙酰氯和(+)α-甲基-6-乙氧基-2-萘乙酰氯以及它们的固体结晶形式。

在一个优选的实例中，本发明方法的步骤(3)中，检测中间体L-3-氰基-2-羟丙基三甲铵的光学纯度和其中的右旋异构体含量的方法包括以下步骤：

(1)制备衍生化试剂溶液：在避光条件下，D型-或L型光学活性纯的式(II)化合物溶解于溶剂中，制备成浓度为0.01～100mg/ml的溶液；

(2)配制供试品溶液：取适量供试品L-3-氰基-2-羟丙基三甲铵，经过盐酸进行水解；加入氨水调节溶液的PH值至中性成供试品溶液；

(3)配制对照品溶液：取适量消旋卡尼汀配制对照品溶液；

(4)衍生化反应：取适量光学活性纯式(II)化合物衍生化试剂，与含左旋卡尼汀(或右旋卡尼汀)的供试品溶液和卡尼汀对照品溶液混匀，在溶剂的存在下，在20℃～95℃的温度下，使上述步骤(1)的衍生化试剂分别与上述步骤(2)和(3)的供试样品溶液和对照品溶液接触，发生衍生化反应，产生左旋卡尼汀和右旋卡尼汀衍生物；

(5)使用HPLC法测定上述步骤(4)中供试品溶液和对照品溶液中左旋卡尼汀和右旋卡尼汀衍生物的含量，并由此计算出供试品溶液中左旋异构体L-3-氰基-2-羟丙基三甲铵和右旋异构体D-3-氰基-2-羟丙基三甲铵的含量。

本发明详述如下：

以S-环氧氯丙烷为原料人工合成左旋卡尼汀的工艺中(如化学反应式I所示)，提供了一套不同生产环节质量控制的关键技术，能够提高成品中左旋卡尼汀的光学纯度，减少有害的右旋异构体含量，大大的降低成本，制备高纯度左旋卡尼汀的方法。

一、通过气相色谱和手性柱灵敏检测S-环氧氯丙烷的光学异构体含量，控制使用的原料S-环氧氯丙烷中的左旋异构体含量在0-12％，左旋卡尼汀光学纯度达到97％以上，右旋体含量在2％以下。

二、通过旋光仪控制合成工艺中化学中间体L-3-氯-2-羟丙基三甲铵比旋度在-26.0°～-29.4°，成品左旋卡尼汀中左旋异构体光学纯度可以达到97％以上，右旋体含量在2％以下。

三、通过使用本发明的手性衍生化试剂，灵敏检测中间体L-3-氰基-2-羟丙基三甲铵的光学纯度和其中的右旋异构体含量，控制该中间体的右旋异构体含量在0～3.6％，成品中的左旋卡尼汀光学纯度达到97％以上，右旋体含量在2％以下。

本发明所提及的左旋卡尼汀手性合成工艺如下：

以手性S-环氧氯丙烷为原料，首先与三甲胺盐酸盐发生胺化生成L-季胺盐(L-氯化-3-氯-2-羟丙基三甲铵)，季铵盐与氰化钠发生氰化反应生成L-腈化物(L-氯化-3-氰基-2-羟丙基三甲铵)，在浓盐酸条件下水解生成卡尼汀盐酸盐，经过电渗析除盐、浓缩、精制得到左旋卡尼汀成品。

本发明提及的左旋卡尼汀手性合成还包括以L-季胺盐或L-腈化物为起始原料通过以上工艺流程制备左旋卡尼汀。

反应方程式：

化学反应式I

本发明公开了灵敏检测S-环氧氯丙烷的光学纯度的方法，其特征是使用手性衍生化试剂，通过气相色谱和手性柱，优选采用中泰科技公司ZT手性柱(0.25×0.5×20，生产系列号-08-01-001)，进样口温度120～180℃，柱温80～100℃，检测器温度200～240℃，氮气做载气，分流比为4∶1。

光学活性纯的式(II)化合物优选其固体结晶。也可以将光学活性纯式(II)化合物以其固体结晶溶于溶剂中配置成一定浓度的溶液使用。其溶剂选自：乙醚、丙醚、四氢呋喃、丙酮、甲基乙基酮、乙腈、丙腈、乙酸乙酯、正己烷、二氯甲烷、氯仿，或他们任意两种或多种的混合物；其溶液浓度为0.01～100mg/ml。特别优选乙腈为溶剂，浓度为1-10mg/ml。

本发明还公开了检测反应混合物中中间体L-3-氰基-2-羟丙基三甲铵的光学纯度和右旋异构体含量的方法，该检测方法包括以下步骤：

(1)制备衍生化试剂溶液：在避光条件下，含D型-或L型光学活性纯式

(II)化合物溶解于上述的溶剂中，配制成浓度为0.01～100mg/ml的溶液。光学活性纯式(II)化合物优选(+)α-甲基-6-甲氧基-2-萘乙酰氯，溶剂优选乙腈，溶液的浓度优选1-10mg/ml。

(2)配制供试品溶液：取适量供试品L-3-氰基-2-羟丙基三甲铵，经过盐酸进行水解。优选腈化物和30％盐酸的重量/体积比为27.5g∶40ml，在70℃～80℃保温5小时，降温至室温，加入氨水调节溶液的PH值至中性成供试品溶液。

(3)配制对照品溶液：取适量消旋卡尼汀配制对照品溶液。

(4)衍生化反应：取适量光学活性纯式(II)化合物衍生化试剂，与含左旋卡尼汀(或右旋卡尼汀)的供试品溶液和卡尼汀对照品溶液混匀，在溶剂的存在下，在20℃～95℃的温度下，使上述步骤(1)的衍生化试剂分别与上述步骤(2)和(3)的供试样品溶液和对照品溶液接触，发生衍生化反应，产生左旋卡尼汀和右旋卡尼汀衍生物。

(5)HPLC法测定：使用HPLC法测定上述步骤(4)中供试品溶液和对照品溶液中左旋卡尼汀和右旋卡尼汀衍生物的含量，并由此计算出供试品溶液中左旋异构体L-3-氰基-2-羟丙基三甲铵和右旋异构体D-3-氰基-2-羟丙基三甲铵的含量。

本发明还公开了使用HPLC法和手性衍生化试剂测定成品中左旋卡尼汀和右旋卡尼汀的含量，其中的供试品不需经过水解而直接配置成供试品溶液。

通过实施以上不同生产制备环节质量控制的关键技术，可以制得高纯度左旋卡尼汀的制备方法，其中左旋卡尼汀含量可以达到97％以上，右旋卡尼汀含量可以控制在2％以下，这可以有效控制人工合成的左旋卡尼汀中有害的右旋卡尼汀杂质对于人体的损害，而且通过对反应原料和反应物中产物和杂质的精确控制，大大地降低了成本，提高了产品的质量。

附图说明：

附图1消旋环氧氯丙烷光学纯度检测谱图

附图2深圳亚王康丽S-环氧氯丙烷光学纯度检测气相色谱图

附图3上海科利生物医药S-环氧氯丙烷光学纯度检测气相色谱图

附图4加10％消旋体后环氧氯丙烷光学纯度检测气相色谱图

附图5加20％消旋体后环氧氯丙烷光学纯度检测气相色谱图

附图6用深圳的S-环氧氯丙烷制备的左旋卡尼汀右旋体检测高效液相色谱图

附图7用上海的S-环氧氯丙烷制备的左旋卡尼汀右旋体检测高效液相色谱图

具体实施方式

下述实施例仅用于解释本发明，而不是对本发明范围的限制。

实施例1建立气相色谱检测环氧氯丙烷光学纯度方法

(1)手性气相色谱柱的选择

方法建立的过程中，选择了不同厂家生产的手性柱进行试验，不同色谱柱例表，见表1。

表1环氧氯丙烷光学纯度检测手性柱选择实验数据

通过对比试验，只有中科安泰的ZT手性柱能较好的分离环氧氯丙烷的左旋体和右旋体，分离度达到了1.87，符合要求。

中科安泰的ZT手性柱的参数如下：

ZT手性柱购自--中科安泰；最高使用温度--200℃；

固定液-ZKAT-chiral B；执行标准：Q/ZKAT01-2005；

生产系列号-08-01-001；货号--802103-4；

(2)色谱条件

进样温度：150℃；柱温：85℃；检测温度：220℃；

载气：N2气；柱前压：0.04MPa(15.9ml/min)；尾吹：0.12MPa

H₂气：0.1MPa；空气：0.08MPa；

分流速度：47ml/min(用泡沫流量计测得)；分流比＝4∶1

进样浓度：样品用乙醚稀释250倍；进样量：1μL

(2)检测限

取消旋环氧氯丙烷，用乙醚作溶剂，依次配制下面五个浓度的样品溶液0.004μl/ml、0.008μl/ml、0.016μl/ml、0.024μl/ml、0.032μl/ml，依次进样检测。

试验结果表明，样品浓度为0.032μl/ml的(R)-环氧氯丙烷色谱峰的信噪比约为3∶1。即(R)-环氧氯丙烷的检测限浓度为0.016μl/ml，因进样量为1μl，所以其检测限为1.6×10^-5μl。

实施例2测定反应中间体(L-3-氰基-2-羟丙基三甲铵)的右旋异构体含量

精密称取L-3-氰基-2-羟丙基三甲铵27.5mg于100mL容量瓶中，加40μL30％盐酸75℃水解5h后滴加氨水调节溶液的PH值至7.0，加水定容，再精密移取10ml于100ml容量瓶中，加水定容，作为供试品溶液。

另精密称量消旋卡尼汀20mg于100mL的容量瓶中，加水溶解，定容，再精密移取1ml于100ml容量瓶中，加水定容，作为对照品溶液。

分别精密吸取30μL对照品溶液、供试品溶液至5mL棕色容量瓶中，再各自加入0.05mol/L碳酸缓冲液(pH＝10.3)30μL、吡啶乙腈溶液(每1ml乙腈中含吡啶5ul)100ul和0.5％的衍生化试剂100μL，混匀，密塞于60℃水浴中反应90min，取出，用0.05mol/L乙酸缓冲液(pH＝4.0)稀释至刻度，过滤。分别精密吸取供试品和对照品衍生化反应后的溶液各10ul注入液相色谱仪，记录色谱图；按外标法分别以峰面积计算样品中右旋异构体的含量。

HPLC检测方法如下：

Agilent 1100型高效液相色谱仪；荧光检测器；色谱柱：C18-ODS柱(4.6×150mm，5μm)；总流速：1ml/min；流动相：以三乙胺缓冲溶液(磷酸8ml，三乙胺15ml，加水1500ml，调pH至5.4)-四氢呋喃混合液为流动相，时间梯度如下表2：

表2HPLC时间梯度表

测得L-3-氰基-2-羟丙基三甲铵中右旋异构体的含量见表3。

表3L-3-氰基-2-羟丙基三甲铵的右旋异构体含量测定结果

实施例3以不同光学纯度的S-环氧氯丙烷为原料制备左旋卡尼汀

步骤1L-3-氯-2-羟丙基三甲铵的制备

先按照实施例1方法测定原料S-环氧氯丙烷中左旋异构体的含量。

其次，向250ml三口烧瓶中加入三甲铵盐酸盐水溶液60g，搅拌，冷却物料至10～20℃，滴加S-环氧氯丙烷35g，滴加完毕，继续搅拌保温2～4小时，然后将反应液升温至30～70℃，保温2～4小时。减压旋蒸至适量，冷冻析晶，烘干得L-3-氯-2-羟丙基三甲铵55.2克，收率89.0％，熔点：212.0～215.6℃。使用旋光仪器测定旋光度。

步骤2L-3-氰基-2-羟丙基三甲铵的制备

向250ml三口烧瓶中加入50克L-3-氯-2-羟丙基三甲铵，加水40ml，搅拌，升温至30℃～70℃，加入氰化钠48g，保温4小时，减压浓缩，冷冻至0℃以下，抽滤烘干得L-3-氰基-2-羟丙基三甲铵43.8g，收率92.1％，熔点252.8～253.4℃。

步骤3左旋卡尼汀的制备

向250ml单口烧瓶内加入L-3-氰基-2-羟丙基三甲铵27.5g和30％盐酸40ml，开搅拌，升温至70℃～80℃，保温5小时。保温结束后，70℃减压蒸馏去除过量的盐酸，蒸馏结束后降温至到20℃，加入20％的氨水20g，降温至0℃，抽滤除去氯化铵，母液加入活性炭3g，脱色后将料液除盐并减压蒸馏，蒸干后，加入50ml乙醇50℃～80℃回流1小时，回流结束后，降温至20℃，滴加125ml丙酮。滴加完毕后，抽滤烘干得左旋卡尼汀产品18.6克，收率75.4％。

结果：

采用不同光学纯度的S-环氧氯丙烷制备成品左旋卡尼汀实验数据见表4：

表4不同光学纯度的S-环氧氯丙烷制备成品左旋卡尼汀实验数据

实施例4以L-3-氯-2-羟丙基三甲铵为原料制备左旋卡尼汀

参照实施例3所用方法，步骤2采用不同比旋度的L-3-氯-2-羟丙基三甲铵制备成品左旋卡尼汀实验数据见表5：

表5不同比旋度的L-3-氯-2-羟丙基三甲铵制备成品左旋卡尼汀实验数据

实施例5以L-3-氰基-2-羟丙基三甲铵为原料制备左旋卡尼汀

参照实施例3所用方法，步骤3采用不同光学纯度的L-3-氰基-2-羟丙基三甲铵制备成品左旋卡尼汀实验数据见表6：

表6不同光学纯度的L-3-氰基-2-羟丙基三甲铵制备成品左旋卡尼汀实验数据

Claims (8)

1.一种制备高纯度左旋卡尼汀的方法，其特在在于，在以S-环氧氯丙烷为原料人工合成左旋卡尼汀的工艺过程中，通过检测和控制手性原料和手性中间体的含量，从而得纯度按重量计高于97％的左旋卡尼汀产物，其中右旋卡尼汀含量低于2％，该方法包括下述步骤：

(1).通过气相色谱和手性柱检测起始原料S-环氧氯丙烷的光学异构体含量，控制S-环氧氯丙烷中的左旋异构体含量在0-12％W/W；

(2).通过旋光仪检测合成工艺中化学中间体L-3-氯-2-羟丙基三甲铵的比旋度，控制其比旋度的值在-26.0°～-29.4°；

(3).使用手性衍生化试剂检测中间体混合物中L-3-氰基-2-羟丙基三甲铵的光学纯度和其中右旋异构体的含量，控制该右旋异构体的含量在0～3.6％W/W；

其中所述手性衍生化试剂为光学活性纯的D型或L型下式(II)化合物：

式中带*的碳原子是手性碳原子；R代表具有1-6个碳原子的直链或支链烷基，或具有6-10个碳原子的芳烷基，或具有2-6个碳原子的直链或支链烯基或炔基，或具有3-6个碳原子的环烷基；X代表卤素。

2.权利要求1所述的方法，其中在所述光学活性纯的式(II)化合物中，R代表甲基、乙基、异丙基、丁基或苄基；X代表Cl或Br。

3.权利要求1所述的方法，其中所述光学活性纯的式(II)化合物是固体结晶形式。

4.权利要求3所述的方法，其中所述的式(II)化合物选自(+)α-甲基-6-甲氧基-2-萘乙酰氯，(-)α-甲基-6-甲氧基-2-萘乙酰氯，(+)α-甲基-6-乙氧基-2-萘乙酰氯和(-)α-甲基-6-乙氧基-2-萘乙酰氯。

5.权利要求4所述的方法，其中所述的式(II)化合物是(+)α-甲基-6-甲氧基-2-萘乙酰氯。

6.权利要求1-5任一项所述的方法，其中所述的衍生化试剂溶于溶剂中配置成0.01～100mg/ml浓度的溶液使用，其溶剂选自：乙醚、丙醚、四氢呋喃、丙酮、甲基乙基酮、乙腈、丙腈、乙酸乙酯、正己烷、二氯甲烷、氯仿，或他们任意两种或多种的混合物。

7.权利要求6所述的方法，其中所述的溶剂是乙腈，溶液浓度为1～10mg/ml。

8.权利要求1所述的方法，其中步骤(3)中检测中间体L-3-氰基-2-羟丙基三甲铵的光学纯度和其中的右旋异构体含量的方法包括以下步骤：

(1)制备衍生化试剂溶液：在避光条件下，D型或L型光学活性纯的式(II)化合物溶解于溶剂中，制备成浓度为0.01～100mg/ml的溶液；

(2)配制供试品溶液：取适量供试品L-3-氰基-2-羟丙基三甲铵，经过盐酸进行水解；加入氨水调节溶液的PH值至中性成供试品溶液；

(3)配制对照品溶液：取适量消旋卡尼汀配制对照品溶液；

(4)衍生化反应：取适量光学活性纯式(II)化合物衍生化试剂，与含左旋卡尼汀(或右旋卡尼汀)的供试品溶液和卡尼汀对照品溶液混匀，在溶剂的存在下，在20℃～95℃的温度下，使上述步骤(1)的衍生化试剂分别与上述步骤(2)和(3)的供试样品溶液和对照品溶液接触，发生衍生化反应，产生左旋卡尼汀和右旋卡尼汀衍生物；

(5)使用HPLC法测定上述步骤(4)中供试品溶液和对照品溶液中左旋卡尼汀和右旋卡尼汀衍生物的含量，并由此计算出供试品溶液中左旋异构体L-3-氰基-2-羟丙基三甲铵和右旋异构体D-3-氰基-2-羟丙基三甲铵的含量。

Images