CN105806963B - L‑脯氨醇及其对映异构体的分离检测方法 - Google Patents
L‑脯氨醇及其对映异构体的分离检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105806963B CN105806963B CN201410837717.1A CN201410837717A CN105806963B CN 105806963 B CN105806963 B CN 105806963B CN 201410837717 A CN201410837717 A CN 201410837717A CN 105806963 B CN105806963 B CN 105806963B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- dried meat
- ammonia alcohol
- meat ammonia
- derivatization
- alcohol
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 209
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 120
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 title claims abstract description 107
- 235000015177 dried meat Nutrition 0.000 title claims abstract description 105
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 39
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 claims abstract description 66
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 29
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 12
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 11
- 238000004305 normal phase HPLC Methods 0.000 claims abstract description 8
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 claims description 8
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 7
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 7
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 claims description 6
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 claims description 5
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 claims description 4
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 4
- VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N tetrachloromethane Chemical compound ClC(Cl)(Cl)Cl VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 235000011437 Amygdalus communis Nutrition 0.000 claims description 2
- 241000220304 Prunus dulcis Species 0.000 claims description 2
- 125000000218 acetic acid group Chemical group C(C)(=O)* 0.000 claims description 2
- 150000001263 acyl chlorides Chemical class 0.000 claims description 2
- 235000020224 almond Nutrition 0.000 claims description 2
- HSDAJNMJOMSNEV-UHFFFAOYSA-N benzyl chloroformate Chemical compound ClC(=O)OCC1=CC=CC=C1 HSDAJNMJOMSNEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- HPNMFZURTQLUMO-UHFFFAOYSA-N diethylamine Chemical compound CCNCC HPNMFZURTQLUMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 2
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims 2
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims 2
- SBTVLCPCSXMWIQ-UHFFFAOYSA-N (3,5-dimethylphenyl) carbamate Chemical compound CC1=CC(C)=CC(OC(N)=O)=C1 SBTVLCPCSXMWIQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 150000002240 furans Chemical class 0.000 claims 1
- 239000003292 glue Substances 0.000 claims 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 claims 1
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000010703 silicon Substances 0.000 claims 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 abstract description 12
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 12
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 10
- 230000006340 racemization Effects 0.000 description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 8
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 7
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 7
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 7
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N hexane Substances CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 5
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 5
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 5
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 4
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 2
- KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M Carbamate Chemical compound NC([O-])=O KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 150000001414 amino alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004130 chiral capillary electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 1
- 238000009795 derivation Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- -1 formic acid fluorenes methyl esters Chemical class 0.000 description 1
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000007529 inorganic bases Chemical class 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000711 polarimetry Methods 0.000 description 1
- 239000002861 polymer material Substances 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 238000009790 rate-determining step (RDS) Methods 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
本发明提供了一种L‑脯氨醇及其对映异构体的分离检测方法，属于分析化学领域。本发明使用衍生化试剂和L‑脯氨醇及其异构体进行衍生化反应，制备得到衍生化产品，然后使用正相高效液相色谱法进行分离和检测。该方法实用方便、稳定可靠，可用于L‑脯氨醇化工品中对映异构体的分离检测和质量控制。
Description
技术领域
本发明涉及氨基醇对映异构体的分离检测方法，具体涉及L-脯氨醇对映异构体的分离检测方法，属于分析化学领域。
背景技术
L-脯氨醇是重要的手性化学试剂，既是合成优良光学材料NPP和手性聚合物材料的原料，又是合成手性药物的重要手性源。其化学名为(S)-pyrrolidin-2-ylmethanol，其结构式如下所示：
L-脯氨醇的对映异构体为D-脯氨醇，其结构式如下所示：
通常在手性药物及其制剂产品的制备和生产过程中，需要对其对映异构体的含量进行研究和控制。而合成手性化合物的手性源的对映异构体含量的研究和控制进一步保证了手性药物及其制剂产品的光学纯度。现代色谱分离分析技术在对映体的分离与测定方面显示出巨大的优越性。常用的手性药物测定技术有手性高效液相色谱法、手性毛细管电泳法和手性气相色谱法等，其中以手性高效液相色谱法最为常用。手性高效液相色谱法又包括手性固定相法、手性流动相添加剂法和手性衍生化法。
作为手性合成重要的手性源，L-脯氨醇的对映异构体的检测和控制是手性药物控制对映异构体的重要控制步骤，一方面可以保证目标手性药物的光学纯度，另一方面减少了手性药物光学纯化的成本，例如手性药物阿伐那非的合成。
手性高效液相色谱法是最为普遍的方法，但是由于脯氨醇几乎无紫外吸收，故需要将其衍生化为有较强紫外吸收的化合物，利用高效液相色谱仪在正相色谱柱上进行分离。
发明内容
本发明的目的在于提供一种实用方便、稳定可靠的手性衍生化高效液相色谱法来分离和检测L-脯氨醇及其对映异构体，可用于L-脯氨醇中对映异构体的分离检测和质量控制。
为实现上述目的，本发明的技术方案如下：
一种L-脯氨醇及其对映异构体的分离检测方法，是在有机溶剂中，使用衍生化试剂和L-脯氨醇及其异构体进行衍生化反应，制备得到L-脯氨醇及其异构体的衍生化产品，然后使用正相高效液相色谱法进行分离和检测。
上述衍生化试剂选自乙酰扁桃酰氯、9-氯甲酸芴甲酯和氯甲酸苄酯中的一种，优选9-氯甲酸芴甲酯。
上述有机溶剂可以是下列溶剂中的一种或多种：二氯甲烷、乙腈、氯仿、四氯化碳、四氢呋喃，优选乙腈。
上述衍生化反应的温度从-10℃到所使用有机溶剂的常压沸点温度均可，优选室温。
上述衍生化反应中，当使用9-氯甲酸芴甲酯作为衍生化试剂时，L-脯氨醇及其异构体与衍生化试剂9-氯甲酸芴甲酯用量的摩尔比为1∶1～1∶5，优选1∶1.1～1∶1.5。
在本发明的一些实施例中，衍生化反应包括以下步骤：
1)室温下，在反应器中加入C1～C4的有机胺和L-脯氨醇及其异构体，C1～C4的有机胺与L-脯氨醇及其异构体的摩尔比为5∶1～1∶1，加入有机溶剂，搅拌均匀；
2)在步骤1)得混合物中加入衍生化试剂，搅拌反应5～60min，即得到L-脯氨醇及其异构体的衍生化产品。其中，反应时间优选30min。
优选的，所述C1～C4的有机胺选自三乙胺、二乙胺和二异丙基乙胺中的一种或多种。
C1～C4的有机胺在此处用作缚酸剂，用于中和反应中产生的酸，采用C1～C4的有机胺的原因在于，相比于无机碱来说，它能溶于有机溶液。
上述步骤2)所用衍生化试剂优选为9-氯甲酸芴甲酯，L-脯氨醇及其异构体与9-氯甲酸芴甲酯用量的摩尔比优选为1∶1.1～1∶1.5。
上述正向高效液相色谱以正相色谱柱为分离柱，以正己烷-C1～C4低级醇组成正相流动相系统。
所述正相色谱柱优选以硅胶表面涂敷有直链淀粉－(二甲苯基氨基甲酸酯)或表面涂敷有纤维素－(二甲苯基氨基甲酸酯)为固定相的手性色谱柱，更优选硅胶表面涂敷有直链淀粉－三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)为固定相的色谱柱。
所述正相流动相系统中的低级醇优选C1～C4的一元醇，更优选异丙醇和/或乙醇，最优选异丙醇。
所述正相流动相系统中低级醇占流动相的体积百分比为10％～30％，优选15％～25％。
进一步的，色谱条件优选为：流速为0.7～1.3mL/min，优选为0.8mL/min；检测波长为255nm-275nm，优选为265nm；色谱柱柱温为25℃～40℃，优选为35℃。
在本发明的一些具体实施例中，按照以下步骤进行正相高效液相色谱法，实现L-脯氨醇及其对映异构体衍生化产品的分离检测：
(a)取L-脯氨醇及其异构体衍生化产品，用流动相溶解，配制成每1mL含L-脯氨醇及其异构体0.03mg～0.08mg的样品溶液；
(b)设置流动相流速为1.0mL/min，检测波长为265nm，色谱柱柱温为35℃；
(c)取步骤(a)的样品溶液10μL注入色谱仪，记录色谱图。
本发明的优点如下：
1、在现有技术中，L-脯氨醇的纯度分析使用旋光法测量，定量不准确。本发明创造性地将L-脯氨醇及其对映异构体进行衍生化，然后使用高效液相色谱进行定量分析，准确性更高。满足了对药用原料L-脯氨醇的纯度分析的要求。
2、本发明方法可有效分离L-脯氨醇及其对映异构体D-脯氨醇，使用本发明方法，两者可完全分离，分离度达到《中国药典》的要求，即分离度大于1.5。
3、本发明方法基线平稳、峰形好，对称因子在1.0左右。
4、本发明方法专属性强，在D-脯氨醇出峰位置附近没有其它杂质峰的影响，可准确定量。
5、本发明方法检测灵敏度高，完全满足对药用原料L-脯氨醇进行纯度检测的要求。
综上，本发明的方法简便有效，稳定可靠，有利于准确、快速地检测L-脯氨醇中的对映异构体的含量。
附图说明
图1是分离检测方法实施例1消旋脯氨醇衍生化产品分离检测的高效液相色谱图。
图2是分离测试方法实施例2消旋脯氨醇衍生化产品分离检测的高效液相色谱图。
图3是分离测试方法实施例3D-脯氨醇衍生化产品的高效液相色谱图。
图4是分离测试方法实施例4L-脯氨醇及其对映异构体衍生化产品的高效液相色谱图。
图5是分离测试方法实施例5L-脯氨醇及其对映异构体衍生化产品的高效液相色谱图。
具体实施方式
以下通过实施例对本发明作进一步说明，但这并非是对本发明的限制，本领域技术人员根据本发明的基本思想，可以做出各种修改或改进，但是只要不脱离本发明的基本思想，均在本发明的范围之内。
制备实施例1：L-脯氨醇及其对映异构体衍生化产品的制备
室温下，在25mL圆底烧瓶中加入L-脯氨醇及其对映异构体40mg，然后加入乙腈4mL、70μL三乙胺，搅拌均匀，加入9-氯甲酸芴甲酯113mg，密闭反应容器，搅拌反应30min，即得到L-脯氨醇及其异构体衍生化产品。
分离检测方法实施例1：消旋脯氨醇衍生化产品的分离检测
本实施例的目的是定位L-脯氨醇衍生化产品和D-脯氨醇衍生化产品的出峰位置。
仪器与条件：
高效液相色谱仪：Agilent 1200，二极管检测器，Chemstation色谱工作站；
色谱柱：CHIRALPAK AD-H(4.6mm×250mm，5μm)
流动相：正己烷∶异丙醇＝80:20(体积比)
流速：0.8mL/min；
检测波长：265nm；
柱温：35℃；
进样体积：10μL。
实验步骤：
按照制备实施例1的方法，制得消旋脯氨醇衍生化产品，所述消旋的脯氨醇衍生化产品中，含有L-脯氨醇衍生化产品和D-脯氨醇衍生化产品的比例为1：1。
取消旋脯氨醇衍生化产品适量，用流动相溶解，配制成每1mL含消旋脯氨醇衍生化产品(以脯氨醇计)0.04mg的样品溶液，作为供试品溶液。取供试品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见图1，保留时间12.043min的为衍生化的L-脯氨醇，保留时间13.511min的为衍生化的D-脯氨醇。
可以观察到，L-脯氨醇和D-脯氨醇的峰形完全分离，峰形好，基线平稳，出峰位置附近没有其它杂质峰影响。
分离检测方法实施例2：消旋脯氨醇衍生化产品的分离检测
本实施例的目的是定位L-脯氨醇衍生化产品和D-脯氨醇衍生化产品的出峰位置。
仪器与条件：
高效液相色谱仪：Agilent 1120，VWD检测器，Chemstation色谱工作站；
色谱柱：CHIRALPAK AD-H(4.6mm×250mm，5μm)
流动相：正己烷∶乙醇＝80:20(体积比)
流速：1.0mL/min；
检测波长：265nm；
柱温：40℃；
进样体积：10μL。
实验步骤：
按照制备实施例1的方法，制得消旋脯氨醇衍生化产品，所述消旋的脯氨醇衍生化产品中，含有L-脯氨醇衍生化产品和D-脯氨醇衍生化产品的比例为1：1。
取消旋-脯氨醇衍生化产品适量，用流动相溶解，配制成每1mL含消旋-脯氨醇衍生化产品(以脯氨醇计)0.04mg的样品溶液，作为供试品溶液。取供试品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见图2，保留时间5.843min的为衍生化的L-脯氨醇，保留时间6.311min的为衍生化的D-脯氨醇。
可以观察到，L-脯氨醇和D-脯氨醇的峰形完全分离，峰形好，基线平稳，出峰位置附近没有其它杂质峰影响。
分离检测方法实施例3：D-脯氨醇衍生化产品的分离检测
本实施例的目的是定位D-脯氨醇衍生化产品的出峰位置。
仪器与条件：
高效液相色谱仪：Agilent 1200，二极管检测器，Chemstation色谱工作站；
色谱柱：CHIRALPAK AD-H(4.6mm×250mm，5μm)
流动相：正己烷∶异丙醇＝80:20(体积比)
流速：0.8mL/min；
检测波长：265nm；
柱温：35℃；
进样体积：10μl。
实验步骤：
按照制备实施例1的方法，制得D-脯氨醇衍生化产品，取D-脯氨醇衍生化产品适量，用流动相溶解，配制成每1mL含D-脯氨醇衍生化产品(以D-脯氨醇计)0.04mg的样品溶液，作为供试品溶液。取供试品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见图3，保留时间12.995min的为衍生化的D-脯氨醇。
可以观察到，D-脯氨醇的峰峰形好，基线平稳，出峰位置附近没有其它杂质峰影响。
分离检测方法实施例4：L-脯氨醇及其对映异构体衍生化产品的分离检测
本实施例目的是检测正式样品。
正式样品中含有主要量的L-脯氨醇以及杂质量的D-脯氨醇。
仪器与条件：
高效液相色谱仪：Agilent 1200，二极管检测器，Chemstation色谱工作站；
色谱柱：CHIRALPAK AD-H(4.6mm×250mm，5μm)
流动相：正己烷∶异丙醇＝80:20(体积比)
流速：0.8mL/min；
检测波长：265nm；
柱温：35℃；
进样体积：10μL。
实验步骤：
按照制备实施例1的方法，制得L-脯氨醇及其对映异构体衍生化产品适量，用流动相溶解，配制成每1mL含L-脯氨醇及其对映异构体衍生化产品(以L-脯氨醇计)0.04mg的样品溶液，作为供试品溶液。取供试品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见图4，保留时间11.829min的为衍生化的L-脯氨醇，保留时间13.242min的为衍生化的D-脯氨醇。
可以观察到，L-脯氨醇和D-脯氨醇的峰形完全分离，峰形好，基线平稳，出峰位置附近没有其它杂质峰影响。检测灵敏度高。本发明方法检测灵敏度高，完全满足对药用原料L-脯氨醇进行纯度检测的要求。
分离检测方法实施例5
L-脯氨醇及其对映异构体衍生化产品的分离检测
本实施例目的是检测正式样品。
正式样品中含有主要量的L-脯氨醇以及杂质量的D-脯氨醇。
仪器与条件：
高效液相色谱仪：Agilent 1120，VWD检测器，Chemstation色谱工作站；
色谱柱：CHIRALPAK AD-H(4.6mm×250mm，5μm)
流动相：正己烷∶乙醇＝75:25(体积比)
流速：0.8mL/min；
检测波长：265nm；
柱温：35℃；
进样体积：10μL。
实验步骤：
按照制备实施例1的方法，制得L-脯氨醇及其对映异构体衍生化产品适量，用流动相溶解，配制成每1mL含L-脯氨醇及其对映异构体衍生化产品(以L-脯氨醇计)0.04mg的样品溶液，作为供试品溶液。取供试品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见图5，保留时间7.967min的为衍生化的L-脯氨醇，保留时间8.806min的为衍生化的D-脯氨醇。
可以观察到，L-脯氨醇和D-脯氨醇的峰形完全分离，峰形好，基线平稳，出峰位置附近没有其它杂质峰影响。检测灵敏度高。本发明方法检测灵敏度高，完全满足对药用原料L-脯氨醇进行纯度检测的要求。
Claims (9)
1.一种L-脯氨醇及其对映异构体的分离检测方法，其特征在于，在有机溶剂中，使用衍生化试剂和L-脯氨醇及其异构体进行衍生化反应，制备得到L-脯氨醇及其异构体的衍生化产品，然后使用正相高效液相色谱法进行分离和检测；
所述衍生化试剂选自乙酰扁桃酰氯、9-氯甲酸芴甲酯和氯甲酸苄酯中的一种；
所述有机溶剂选自下列溶剂中的一种或多种：二氯甲烷、乙腈、氯仿、四氯化碳和四氢呋喃；
所述正相高效液相色谱法以正相色谱柱为分离柱，以正己烷-C1～C4低级醇组成正相流动相系统；所述C1～C4低级醇为异丙醇或乙醇；所述正相色谱柱是以表面涂敷有直链淀粉－(二甲苯基氨基甲酸酯)的硅胶，或表面涂敷有纤维素－(二甲苯基氨基甲酸酯)的硅胶，或表面涂敷有直链淀粉－三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)的硅胶为固定相的手性色谱柱。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述衍生化反应包括以下步骤：
1)室温下，在反应器中加入C1～C4的有机胺和L-脯氨醇及其异构体，C1～C4的有机胺与L-脯氨醇及其异构体的摩尔比为5∶1～1∶1，加入有机溶剂，搅拌均匀；
2)在步骤1)得混合物中加入衍生化试剂，搅拌反应5～60min，即得到L-脯氨醇及其异构体的衍生化产品；
所述C1～C4的有机胺选自三乙胺、二乙胺和二异丙基乙胺中的一种或多种。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤2)中搅拌反应30min。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述衍生化试剂是9-氯甲酸芴甲酯，L-脯氨醇及其异构体与9-氯甲酸芴甲酯用量的摩尔比为1∶1.1～1∶1.5。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述正相流动相系统中低级醇占流动相的体积百分比为10％～30％。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述正相流动相系统中低级醇占流动相的体积百分比为15％～25％。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述正相高效液相色谱法的色谱条件为：以正相色谱柱为分离柱，以正己烷-C1～C4低级醇组成正相流动相系统；流速为0.7～1.3mL/min；检测波长为255nm-275nm；色谱柱柱温为25℃～40℃。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述正相高效液相色谱法的色谱条件为：以正相色谱柱为分离柱，以正己烷-C1～C4低级醇组成正相流动相系统；流速为0.8mL/min；检测波长为265nm；色谱柱柱温为35℃。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述正相高效液相色谱法包括以下步骤：
(a)取L-脯氨醇及其异构体衍生化产品，用流动相溶解，配制成每1mL含L-脯氨醇及其异构体0.03mg～0.08mg的样品溶液；
(b)设置流动相流速为1.0mL/min，检测波长为265nm，色谱柱柱温为35℃；
(c)取步骤(a)的样品溶液10μL注入色谱仪，记录色谱图。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410837717.1A CN105806963B (zh) | 2014-12-29 | 2014-12-29 | L‑脯氨醇及其对映异构体的分离检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410837717.1A CN105806963B (zh) | 2014-12-29 | 2014-12-29 | L‑脯氨醇及其对映异构体的分离检测方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN105806963A CN105806963A (zh) | 2016-07-27 |
| CN105806963B true CN105806963B (zh) | 2018-01-23 |
Family
ID=56980814
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201410837717.1A Expired - Fee Related CN105806963B (zh) | 2014-12-29 | 2014-12-29 | L‑脯氨醇及其对映异构体的分离检测方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN105806963B (zh) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107085058A (zh) * | 2017-05-12 | 2017-08-22 | 成都丽凯手性技术有限公司 | 一种phba对映异构体杂质检测方法 |
| CN107941970B (zh) * | 2017-11-08 | 2021-06-08 | 常州合全药业有限公司 | D-对羟基苯甘氨酸及其对映异构体的分离检测方法 |
| CN108226329A (zh) * | 2017-12-25 | 2018-06-29 | 浙江天宇药业股份有限公司 | L-脯氨酰胺的液相色谱分析方法 |
| CN113917027B (zh) * | 2021-10-11 | 2023-03-21 | 山东省药学科学院 | 一种阿伐那非及其中间体的光学异构体分离检测方法 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5832862A (ja) * | 1981-08-20 | 1983-02-25 | Sumitomo Chem Co Ltd | 不斉なアミド誘導体およびそれを固定相とする鏡像本混合物のガスクロマトグラフイ−分析法 |
| WO1996018895A2 (en) * | 1994-12-16 | 1996-06-20 | The Government Of The United States Of America, Asrepresented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Chiral separation of enantiomers by high-speed countercurrent chromatography |
| WO2001057526A1 (en) * | 2000-02-07 | 2001-08-09 | President And Fellows Of Harvard College | Method for analysis of reaction products |
| CN101016260A (zh) * | 2004-10-18 | 2007-08-15 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 一种基于脯胺醇的手性磺酰胺胺醇配体及制备方法和应用 |
| CN101830920B (zh) * | 2010-05-20 | 2012-12-26 | 大连理工大学 | 一种脯氨醇衍生物诱导具有不对称催化作用的手性MOFs材料 |
-
2014
- 2014-12-29 CN CN201410837717.1A patent/CN105806963B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5832862A (ja) * | 1981-08-20 | 1983-02-25 | Sumitomo Chem Co Ltd | 不斉なアミド誘導体およびそれを固定相とする鏡像本混合物のガスクロマトグラフイ−分析法 |
| WO1996018895A2 (en) * | 1994-12-16 | 1996-06-20 | The Government Of The United States Of America, Asrepresented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Chiral separation of enantiomers by high-speed countercurrent chromatography |
| WO2001057526A1 (en) * | 2000-02-07 | 2001-08-09 | President And Fellows Of Harvard College | Method for analysis of reaction products |
| CN101016260A (zh) * | 2004-10-18 | 2007-08-15 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 一种基于脯胺醇的手性磺酰胺胺醇配体及制备方法和应用 |
| CN101830920B (zh) * | 2010-05-20 | 2012-12-26 | 大连理工大学 | 一种脯氨醇衍生物诱导具有不对称催化作用的手性MOFs材料 |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| chiral derivatization reagents for drug enantioseparation by high-performance liquid chromatography based upon pre-column derivatization and formation of diastereomers:enantioselectivity and related structure;Xian Xiang Sun 等;《BIOMEDICAL CHROMATOGRAPHY》;20010430;第15卷(第2期);第116-132页 * |
| HPLC法测定创新药Y101片剂中3个光学异构体的含量;张芳 等;《药物分析杂志》;20130228;第33卷(第2期);第189-192页 * |
| L-脯氨醇的合成;龚大春 等;《精细化工》;20050531;第22卷(第5期);第384-386页 * |
| Separation of Amino Acid Enantiomers and Chiral Amines Using Precolumn Derivatization with (+)-1-(9-Fluorenyl)ethyl Chloroformate and Reversed-Phase Liquid Chromatography;Stefan Einarsson 等;《Anal.Chem.》;19870415;第59卷(第8期);第1191-1195页 * |
| 保健食品中牛磺酸的9-氯甲酸芴甲酯柱前衍生-高效液相色谱测定法;王晓莺 等;《环境与健康杂志》;20101130;第27卷(第11期);第1017-1018页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN105806963A (zh) | 2016-07-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN105806963B (zh) | L‑脯氨醇及其对映异构体的分离检测方法 | |
| CN113433257B (zh) | 保健食品中肉碱对映体拆分和测定方法 | |
| CN106442771B (zh) | 一种测定十四烷基硫酸钠及其有关物质的检测方法 | |
| CN111983074B (zh) | 一种用高效液相色谱测定帕拉米韦中间体异构体的方法 | |
| CN104965041A (zh) | 一种帕瑞昔布钠异构体的高效液相色谱检测方法 | |
| CN110441449A (zh) | 盐酸法舒地尔原料或注射剂中有关物质的检测方法 | |
| CN102928527B (zh) | 一种r-3-奎宁环醇光学纯度的测定方法 | |
| CN106706796B (zh) | 通过高效液相色谱法检测硼替佐米关键中间体1r-三氟醋酸盐光学异构体的方法 | |
| CN113791145A (zh) | 基于超高效合相色谱技术的克伦特罗对映体拆分和测定方法 | |
| CN110646520A (zh) | 一种阿托伐他汀钙中杂质的分离和/或检测方法 | |
| Patti et al. | Chiral HPLC analysis of milnacipran and its FMOC‐derivative on cellulose‐based stationary phases | |
| Zhao et al. | Capillary electrophoresis enantioselective separation of vigabatrin enantiomers by precolumn derivatization with dehydroabietylisothiocyante and UV–vis detection | |
| CN108956827B (zh) | 一种hplc法分析及制备3-(n-对甲苯磺酰基-l-丙氨酰氧基)吲哚及其对映异构体的方法 | |
| CN103113211A (zh) | 一种外消旋2-苯丙酸的拆分方法 | |
| CN109212093A (zh) | 一种盐酸缬更昔洛韦中间体缩合物异构体的hplc检测方法 | |
| CN107064336B (zh) | 一种柱前衍生化分析分离科立内酯二醇对映异构体的方法 | |
| CN109115934A (zh) | 甘草次酸硬脂基酯中18α-和18β-差向异构体的高压液相定量检测方法及其应用 | |
| Luo et al. | Analytical and semipreparative resolution of ranolazine enantiomers by liquid chromatography using polysaccharide chiral stationary phases | |
| CN108267519A (zh) | 一种盐酸缬更昔洛韦中间体水解物异构体的hplc检测方法 | |
| CN104777263B (zh) | 一种普瑞巴林手性异构体的分离检测方法 | |
| CN105738533B (zh) | 一种采用气相色谱法分离测定1,2-丙二醇对映异构体的方法 | |
| CN112964822B (zh) | 一种d-2-氨基丁醇中有关物质l-2-氨基丁酸的分析和分离方法 | |
| CN104483400B (zh) | 一种用液相色谱法分离测定奥拉西坦及其中间体的方法 | |
| CN103207247A (zh) | 一种用液相色谱法分离测定阿利吉仑中间体及其光学异构体的方法 | |
| CN107976506A (zh) | 一种奥贝胆酸有关物质的检测方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20221014 Address after: 3007, Hengqin international financial center building, No. 58, Huajin street, Hengqin new area, Zhuhai, Guangdong 519031 Patentee after: New founder holdings development Co.,Ltd. Patentee after: PKUCARE PHARMACEUTICAL R&D CENTER Patentee after: Peking University Medical Management Co.,Ltd. Address before: 100871, fangzheng building, 298 Fu Cheng Road, Beijing, Haidian District Patentee before: PEKING UNIVERSITY FOUNDER GROUP Co.,Ltd. Patentee before: PKUCARE PHARMACEUTICAL R&D CENTER Patentee before: PKU HEALTHCARE INDUSTRY Group |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20180123 |