一种普瑞巴林手性异构体的分离检测方法
技术领域
本发明涉及一种普瑞巴林手性异构体的分离检测方法,属分析化学领域。
技术背景
普瑞巴林化学名为(S)-3-(胺甲基)-5-甲基己酸,用于治疗癫痫和神经疼痛。普瑞巴林手性异构体几乎没有药理活性,其化学名为(R)-3-(胺甲基)-5-甲基己酸,是普瑞巴林的重要杂质,也是控制普瑞巴林质量的重要指标。但普瑞巴林为末端吸收,且紫外吸收不强,现有技术中:中国发明专利(专利号:200510057381.8,一种普瑞巴林手性异构体的分离测定方法)、印度药典2010版第1960~1961页普瑞巴林专论及国家标准YBH02442013普瑞巴林中均是采用Nα-(5-氟-2,4-二硝基苯基)-L-氨基酸类化合物为衍生化试剂进行衍生化,再经后处理后进入液相色谱系统进行分析,这几篇文献中的衍生方法均需要先将普瑞巴林用盐酸溶解再用氢氧化钠中和再与衍生试剂溶液在加热条件下进行衍生化,且反应结束后需在五氧化二磷和氢氧化钾体系中进行减压干燥以去除沸点低的有机溶剂,再用其它溶剂溶解并过滤以制备供试品溶液,后处理非常麻烦,给定量操作带来很多不可避免的误差,尽管后来专利号为200910045925.7(普瑞巴林及其手性异构体的分离检测方法)采用微波衍生法:取样品溶液20μl,衍生试剂溶液200μl和0.05mol/L三乙胺溶液20μl,600W微波加热衍生3min,再冷却至室温后加0.05mol/L醋酸溶液20μl,作为供试品溶液,此方法虽然避免了后续处理的繁琐步骤,但其要配制样品溶液、衍生化溶液、三乙胺溶液及醋酸溶液,且加样量较小,仍比较麻烦,且易产生误差。
本发明提供的一种柱前衍生化方法与手性色谱柱即可实现普瑞巴林与其手性异构体分离的测定方法,可较为迅速准确的实现普瑞巴林及其手性异构体的分离和测定。
发明内容
本发明的目的在于提供一种普瑞巴林手性异构体的分离检测方法,该方法采用衍生化试剂芴甲氧羰酰氯与普瑞巴林及其手性异构体同时进行衍生化反应,再经手性色谱柱进行分离测定。
为实现上述目的,本发明提供了如下的技术方案:
普瑞巴林在进柱前用衍生化试剂进行衍生化,其衍生试剂为芴甲氧羰酰氯,其分离测定过程包括:
①色谱条件:
采用AD-H手性色谱柱为色谱柱,以正己烷与无水乙醇混合物(比例为98∶2~85∶15,必要时可添加不大于5%的无水甲醇)为流动相,检测波长为200~230nm,流速为0.6~1.2ml/min,柱温15~40℃,进样体积为10~20μl,等度洗脱程序。
②溶液配制:
供试品溶液:取普瑞巴林25mg,加芴甲氧羰酰氯(40~200mg)置50ml量瓶中,加无水乙醇超声溶解后,再用无水乙醇或正己烷定容至刻度,作为供试品溶液;
系统适用性溶液:取普瑞巴林混旋物25mg,加芴甲氧羰酰氯(40~200mg)置50ml量瓶中,加无水乙醇超声溶解后,再用无水乙醇或正己烷定容至刻度,作为系统适用性溶液。
③测定方法:精密量取供试品溶液和系统适用性溶液注入液相色谱仪,记录色谱图,按归一化法计算普瑞巴林异构体含量。
综上,本发明具有以下优点:
1、本发明采用芴甲氧羰酰氯普瑞巴林进行柱前衍生,不但使衍生后的产物具有较强的紫外吸收,而且不需要进行衍生后处理,可方便快捷的测定普瑞巴林的手性异构体;
2、本发明具有反应条件温和、反应速度快、过量衍生化试剂不干扰测定等优点;
3、本发明衍生化产物稳定,分析灵敏度高,普瑞巴林手性异构体的定量限为0.02%。
附图:
图1实施例1系统适用性溶液高效液相色谱图(正己烷∶无水乙醇:85∶15)
图2实施例2系统适用性溶液高效液相色谱图(正己烷∶无水乙醇:95∶5)
图3实施例3系统适用性溶液高效液相色谱图(正己烷∶无水乙醇∶无水甲醇90∶5∶5)
图4实施例4系统适用性溶液高效液相色谱图(正己烷∶无水乙醇:90∶10)
具体实施方式
以下对本发明的优选实施例进行说明,应当理解,此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明,并不用于限定本发明。
实施例1
(1)仪器与条件
流动相∶正己烷-无水乙醇=85∶15
检测波长:208nm
色谱柱:AD-H 250×4.5mm,5μm
流速:1.0ml/min
柱温:35℃
进样量:20ul
(2)实验步骤
取普瑞巴林混旋物25mg,加芴甲氧羰酰氯50mg置50ml容量瓶中,加无水乙醇超声溶解后再用无水乙醇定容至刻度摇匀,作为系统适用性溶液。
取系统适用性溶液在上述条件下进行分析。结果见图1,其中保留时间为8.393min的为普瑞巴林,其中保留时间为9.835min为普瑞巴林异构体,其余峰为未反应完的衍生试剂的峰,两者分离度为2.352。
实施例2
(1)仪器与条件
流动相∶正己烷-无水乙醇=95∶5
检测波长:205nm
色谱柱:AD-H 250×4.5mm,5μm
流速:1.0ml/min
柱温:25℃
进样量:20ul
(2)实验步骤
取普瑞巴林混旋物25mg,加芴甲氧羰酰氯75mg置50ml容量瓶中,加无水乙醇20ml超声溶解后在用正己烷定容至刻度摇匀,作为系统适用性溶液。
取系统适用性溶液在上述条件下进行分析。结果见图2,其中保留时间为23.027min为普瑞巴林,其中保留时间为28.313min为普瑞巴林异构体,其余峰为未反应完的衍生试剂的峰,分离度为3.32。
实施例3
(1)仪器与条件
流动相∶正己烷-无水乙醇-无水甲醇=90∶5∶5
检测波长:210nm
色谱柱:AD-H 250×4.5mm,5μm
流速:0.8ml/min
柱温:25℃
进样量:20ul
(2)实验步骤
取普瑞巴林混旋物25mg,加芴甲氧羰酰氯100mg置50ml容量瓶中,加无水乙醇20ml超声溶解后再用正己烷定容至刻度摇匀,作为系统适用性溶液。
取系统适用性溶液在上述条件下进行分析。结果见图3,其中保留时间为21.426min为普瑞巴林,其中保留时间为25.807min为普瑞巴林异构体,其余峰为未反应完的衍生试剂的峰,分离度为3.09。
实施实例4
(1)仪器与条件
流动相∶正己烷-无水乙醇=90∶10
检测波长:205nm
色谱柱:AD-H 250×4.5mm,5μm
流速:1.0ml/min
柱温:30℃
进样量:20ul
(2)实验步骤
取普瑞巴林混旋物25mg,加芴甲氧羰酰氯50mg置50ml容量瓶中,加无水乙醇20ml超声溶解后再用正己烷定容至刻度摇匀,作为系统适用性溶液。
取系统适用性溶液在上述条件下进行分析。结果见图4,其中保留时间为18.436min为普瑞巴林,其中保留时间为22.198min为普瑞巴林异构体,其余峰为未反应完的衍生试剂的峰,分离度为2.99。
最后应说明的是:以上所述仅为本发明的优选实施例而已,并不用于限制本发明,尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明,对于本领域的技术人员来说,其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改,或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。