CN109030668B - 钆塞酸二钠中间体的高效液相分析方法 - Google Patents

钆塞酸二钠中间体的高效液相分析方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种钆塞酸二钠中间体的高效液相分析方法，包括如下步骤：1)将钆塞酸二钠中间体1用高氯酸溶液溶解稀释作为供试品溶液；将钆塞酸二钠中间体2用乙腈溶解稀释作为供试品溶液；将钆塞酸二钠中间体3用乙腈稀释作为供试品溶液。2)采用十八烷基硅烷键合硅胶的色谱柱，配备紫外检测器，检测波长200～280nm，以乙腈‑高氯酸水溶液作为流动相进行洗脱，流动相流速为0.5～3.0mL/min；3)取1)的供试品溶液，注入高效液相色谱仪，进样体积为1～100μL，记录色谱图。该方法简单，精密度高，稳定性好，重现性好。

Description

钆塞酸二钠中间体的高效液相分析方法
技术领域
本发明属于化学药品质量检测领域，具体涉及钆塞酸二钠中间体的检测方法。
背景技术
钆塞酸二钠(Gadoxetic aciddisodium，Gd-EOB-DTPA)，是德国先灵公司开发的具有肝脏特异性的钆螯合剂磁共振造影剂，用于肝脏病变的早期诊断，2008年7月美国FDA批准用于临床。它是由顺磁性钆离子与亲脂性的对乙氧基苄基二乙三胺五乙酸配体(EOB-DTPA)螯合而成，正常细胞选择性的吸收Gd-EOB-DTPA分子，明显提高组织的T1驰豫效率，有助于肝脏病灶的检出，特别能提高小的肝脏肿瘤的检出率，从而有助于肝脏病变的早期诊断和治疗。
钆塞酸二钠中间体1，化学名称(S)-N1-(2-氨基乙基)-3-(4-乙氧基苯基)丙烷-1,2-二胺，分子式C13H23N3O，其结构式如下：
Figure BDA0001839232900000011
钆塞酸二钠中间体2，化学名称
Figure BDA0001839232900000012
钆塞酸二钠中间体3，化学名称
Figure BDA0001839232900000021
为了保证钆塞酸二钠后续的研发和生产过程中对中间体的控制，从而能够准确的控制钆塞酸二钠原料药及制剂终产品的质量，需要对其质量进行检测。因此，研究获得一种钆塞酸二钠的中间体检测和含量测定的检测方法，这对医药生产企业来说尤为迫切。
发明内容
本发明提供一种钆塞酸二钠中间体的检测方法。该方法具有操作简单，检测结果精密度高，稳定性好，重现性好等特点。
为了解决上述问题，本发明采用高效液相检测钆塞酸二钠中间体。
本发明所述的检测方法，包括以下步骤：
1)将钆塞酸二钠中间体1用高氯酸溶液溶解稀释成每1mL含0.2～2mg钆塞酸二钠中间体1的溶液，作为供试品溶液1；将钆塞酸二钠中间体2用乙腈溶液溶解稀释成每1mL含0.2～2mg钆塞酸二钠中间体2的溶液，作为供试品溶液2；将钆塞酸二钠中间体3用乙腈溶液溶解稀释成每1mL含0.1～1mg钆塞酸二钠中间体3的溶液，作为供试品溶液3；
2)采用十八烷基硅烷键合硅胶的色谱柱，配备紫外检测器，检测波长为200～280nm，以乙腈-高氯酸水溶液作为流动相进行洗脱；
3)取1)的供试品溶液1-3，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。
优选的，本发明所述的检测方法，包括以下步骤：
1)将钆塞酸二钠中间体1用高氯酸溶液溶解稀释成每1mL含0.2～2mg钆塞酸二钠中间体1的溶液，作为供试品溶液1；将钆塞酸二钠中间体2用乙腈：水(9:1)溶解稀释成每1mL含0.2～2mg钆塞酸二钠中间体2的溶液，作为供试品溶液2；将钆塞酸二钠中间体3用乙腈：水(1:1)溶解稀释成每1mL含0.1～1mg钆塞酸二钠中间体3的溶液，作为供试品溶液3；
2)采用十八烷基硅烷键合硅胶的色谱柱，配备紫外检测器，检测波长为200～280nm，以乙腈-高氯酸水溶液作为流动相进行洗脱，流动相流速为0.5～3mL/min；
3)取1)的供试品溶液1-3，注入高效液相色谱仪，进样体积为1～100μL，记录色谱图。
其中，流动相洗脱时，优选采用梯度洗脱，过程如下：
Figure BDA0001839232900000031
在上述技术方案的基础上，所述的高氯酸溶液的体积浓度为0.01％～1％，最佳为0.1％。
在上述技术方案的基础上，检测波长最佳为225nm。
其中，供试品溶液1(含钆塞酸二钠中间体1)的浓度最佳为1mg/mL，
其中，供试品溶液2(含钆塞酸二钠中间体2)的浓度最佳为1mg/mL；
其中，供试品溶液3(含钆塞酸二钠中间体3)的浓度最佳为0.5mg/mL，
其中，进样体积最佳为10μL；
流动相流速最佳1.0mL/min。
进一步优选的，本发明的检测方法，包括以下步骤：
钆塞酸二钠中间体1的测定：取25mg钆塞酸二钠中间体1，精密称定，置25mL量瓶中，加0.1％高氯酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，即得供试品溶液1；取空白溶液和供试品溶液1各10μL注入液相色谱仪，记录色谱图，
钆塞酸二钠中间体2的测定：取25mg钆塞酸二钠中间体2，精密称定，置25mL量瓶中，加乙腈：水＝9:1的溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，即得供试品溶液2；取空白溶液和供试品溶液2各10μL注入液相色谱仪，记录色谱图，
钆塞酸二钠中间体3的测定：取25mg钆塞酸二钠中间体3，精密称定，置50mL量瓶中，加乙腈：水＝1:1的溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，即得供试品溶液3；取空白溶液和供试品溶液3各10μL注入液相色谱仪，记录色谱图，色谱条件：
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱。
检测波长：225nm；
色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.1％的高氯酸溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，洗脱程序如下所示，检测波长为225nm，流速为1.0mL/min，柱温为30℃，
梯度洗脱程序
Figure BDA0001839232900000041
本案发明的有益效果：本发明利用方便快捷的高效液相色谱法，对钆塞酸二钠中间体进行检测，重复性、准确度及稳定性均十分良好，特别是钆塞酸二钠中间体的色谱峰保留时间稳定，有利于药品的质量控制。
附图说明
图1是空白溶剂的高效液相色谱图；
图2是系统适用性溶液的高效液相色谱图；从左到右峰依次为中间体1、中间体3和中间体2；
图3是钆塞酸二钠中间体1的高效液相色谱图；
图4是钆塞酸二钠中间体2的高效液相色谱图；
图5是钆塞酸二钠中间体3的高效液相色谱图。
具体实施方式
以下实施例说明本发明，但不以任何方式限制本发明。
实施例1、仪器：一套高效液相色谱仪，包括液相泵、紫外检测器、进样器。
试剂：高氯酸(分析纯)、乙腈(色谱纯)；
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱。
检测波长：225nm；
色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.1％的高氯酸溶液为流动相A。以乙腈为流动相B，洗脱程序如表1所示，检测波长为225nm，流速为1.0mL/min，柱温为30℃。
表1梯度洗脱程序
Figure BDA0001839232900000051
系统适用性试验(高效液相色谱法，中国药典2015年版四部通则0512测定)取钆塞酸二钠中间体1适量，用0.1％高氯酸溶液溶解并稀释制成每1mL中约含1mg中间体1，作为溶液1；取中间体2适量，用乙腈：水(9:1)的溶液溶解并稀释制成每1mL中约含1mg中间体2，作为溶液2；取中间体3适量，用乙腈：水(1:1)的溶液溶解并稀释制成每1mL中约含0.5mg中间体3，作为溶液3；分别取溶液1、溶液2和溶液3各2mL，置于同一10mL量瓶中，用0.1％高氯酸溶液稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液。精密量取空白溶液和系统适用性溶液各10μL注入液相色谱仪，记录色谱图，见图1和图2，由色谱图可知，杂质与主峰能够分开，经计算，各杂质与主峰之间的分离度均大于1.5，分别按中间体1、2、3计，拖尾因子均小于1.5，理论板数均大于5000。
钆塞酸二钠中间体1的测定，取中间体1约25mg，精密称定，置25mL量瓶中，加0.1％高氯酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，即得供试品溶液；取空白溶液和供试品溶液各10μL注入液相色谱仪，记录色谱图，见图3，按色谱纯度计算中间体1和各杂质峰的含量。
钆塞酸二钠中间体2的测定，取中间体2约25mg，精密称定，置25mL量瓶中，加乙腈：水(9:1)的溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，即得供试品溶液；取空白溶液和供试品溶液各10μL注入液相色谱仪，记录色谱图，见图4，按色谱纯度计算中间体2和各杂质峰的含量。
钆塞酸二钠中间体3的测定，取中间体3约25mg，精密称定，置50mL量瓶中，加乙腈：水(1:1)的溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，即得供试品溶液；取空白溶液和供试品溶液各10μL注入液相色谱仪，记录色谱图，见图5，按色谱纯度计算中间体3和各杂质峰的含量。
实施例2、
本发明对所述分析方法进行了方法学验证，验证结果表明本方法的系统适用性、专属性、线性、精密度、耐用性良好，由此表明本方法能适用于钆塞酸二钠中间体有关物质的检测。验证数据总结如下：
方法学验证汇总表
Figure BDA0001839232900000061
Figure BDA0001839232900000071

Claims (8)

1.一种钆塞酸二钠中间体的检测方法，包括以下步骤：
1)将钆塞酸二钠中间体1用高氯酸溶液溶解稀释成每1mL含0.2～2mg钆塞酸二钠中间体1的溶液，作为供试品溶液1；将钆塞酸二钠中间体2用乙腈溶液溶解稀释成每1mL含0.2～2mg钆塞酸二钠中间体2的溶液，作为供试品溶液2；将钆塞酸二钠中间体3用乙腈溶液溶解稀释成每1mL含0.1～1mg钆塞酸二钠中间体3的溶液，作为供试品溶液3；
2)采用十八烷基硅烷键合硅胶的色谱柱，配备紫外检测器，检测波长为200～280nm，以高氯酸溶液作为流动相A，以乙腈作为流动相B，进行洗脱；
3)取1)的供试品溶液1-3，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，
其中，钆塞酸二钠中间体1，其结构式如下：
Figure FDA0002882997420000011
其中，钆塞酸二钠中间体2，其结构式如下：
Figure FDA0002882997420000012
其中，钆塞酸二钠中间体3，其结构式如下：
Figure FDA0002882997420000021
其特征在于，流动相洗脱时，采用梯度洗脱，过程如下：
Figure FDA0002882997420000022
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)将钆塞酸二钠中间体1用高氯酸溶液溶解稀释成每1mL含0.2～2mg钆塞酸二钠中间体1的溶液，作为供试品溶液1；将钆塞酸二钠中间体2用乙腈：水9:1溶解稀释成每1mL含0.2～2mg钆塞酸二钠中间体2的溶液，作为供试品溶液2；将钆塞酸二钠中间体3用乙腈：水1:1溶解稀释成每1mL含0.1～1mg钆塞酸二钠中间体3的溶液，作为供试品溶液3；
2)采用十八烷基硅烷键合硅胶的色谱柱，配备紫外检测器，检测波长为200～280nm，以乙腈-高氯酸溶液作为流动相进行洗脱，流动相流速为0.5～3mL/min；
3)取1)的供试品溶液1-3，注入高效液相色谱仪，进样体积为1～100μL，记录色谱图。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，高氯酸溶液的体积浓度为0.01％～1％。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，检测波长最佳为225nm。
5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，
其中，供试品溶液1的浓度为1mg/mL，
其中，供试品溶液2的浓度为1mg/mL，
其中，供试品溶液3的浓度为0.5mg/mL。
6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，进样体积为10μL。
7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，流动相流速为1.0mL/min。
8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
钆塞酸二钠中间体1的测定：取25mg钆塞酸二钠中间体1，精密称定，置25mL量瓶中，加0.1％高氯酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，即得供试品溶液1；取空白溶液和供试品溶液1各10μL注入液相色谱仪，记录色谱图，
钆塞酸二钠中间体2的测定：取25mg钆塞酸二钠中间体2，精密称定，置25mL量瓶中，加乙腈：水＝9:1的溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，即得供试品溶液2；取空白溶液和供试品溶液2各10μL注入液相色谱仪，记录色谱图，
钆塞酸二钠中间体3的测定：取25mg钆塞酸二钠中间体3，精密称定，置50mL量瓶中，加乙腈：水＝1:1的溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，即得供试品溶液3；取空白溶液和供试品溶液3各10μL注入液相色谱仪，记录色谱图，色谱条件：
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；
检测波长：225nm；
色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.1％的高氯酸溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，洗脱程序如下所示，检测波长为225nm，流速为1.0mL/min，柱温为30℃，
梯度洗脱程序
Figure FDA0002882997420000031
Figure FDA0002882997420000041
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