CN103113211A - 一种外消旋2-苯丙酸的拆分方法 - Google Patents

一种外消旋2-苯丙酸的拆分方法 Download PDF

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颜继忠
童胜强
郑烨
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Abstract

本发明公开了一种外消旋2-苯丙酸的拆分方法：将有机溶剂A、有机溶剂B与含有羟丙基-β-环糊精的磷酸盐缓冲液按照体积比1~8:2~6:10组成溶剂体系，混合均匀，静置分层，得到有机相和水相；将外消旋2-苯丙酸用所得水相溶解，制成样品；采用高速逆流色谱法拆分外消旋2-苯丙酸，分别前峰洗脱液和后峰洗脱液，回收得到左旋2-苯丙酸单体和右旋2-苯丙酸单体；本发明采用本方法拆分外消旋2-苯丙酸可以达到较高的分离度，并且该方法适用于各种型号的制备型逆流色谱仪，可以分离得到左旋2-苯丙酸和右旋2-苯丙酸的单体。

Description

一种外消旋2-苯丙酸的拆分方法
（一）技术领域
本发明涉及一种从外消旋2-苯丙酸中拆分出左旋2-苯丙酸和右旋2-苯丙酸的方法。
（二）背景技术
2-苯丙酸(2-phenylpropionic acid,2-PPA)，是重要的芳基丙酸类消炎镇痛药中间体和精细化工产品，可用于合成手性药物索罗诺芬钙等。光学活性的2-苯丙酸是一种非常重要的非甾体抗炎药，而且抗炎成分主要存在于S型异构体中。因此，对外消旋2-苯丙酸进行手性拆分研究，建立快速、分离性能好的外消旋2-苯丙酸拆分方法是一个具有理论及实际意义的课题。目前，制备拆分外消旋2-苯丙酸的方法较少，主要是高效液相色谱法和手性溶剂萃取法等。
含有手性中心的药物，其异构体通常具有极为相近的理化性质，但药理和毒理作用却存在着差异，一对对映体的作用及用途往往具有相反的作用或者完全不同的作用，这使得寻找高效、便捷的拆分方法显得尤为重要。因此，如何获得单一的手性药物已成为当今药物化学研究工作的热点问题之一。
在分离科学领域中，色谱拆分是手性分离的重要手段之一，其中经典的液相色谱拆分技术占据主导位置，但该技术通常需要昂贵的手性柱仅适用于附加值非常高的对映体制备分离。逆流色谱（countercurrentchromatography,CCC)是一种连续的无需任何固体载体的现代色谱分离技术，相对于高效液相色谱来说，其不需要固相载体，可避免固相吸附带来的污染和样品损失等缺点，且一次分离进样量大，仪器简单易维修，运行成本低，对于手性分离来说最大的优点是无需手性固定相的制备过程，因此成本相对较低。
（三）发明内容
本发明目的是提供一种采用高速逆流色谱技术拆分外消旋2-苯丙酸的方法。为实现上述发明目的，本发明以外消旋2-苯丙酸为拆分对象，以羟丙基-β-环糊精作为拆分试剂，将其添加到水相中，采用高速逆流色谱法得到左旋2-苯丙酸和右旋2-苯丙酸。
本发明采用的技术方案是：
一种外消旋2-苯丙酸的拆分方法，所述方法按如下步骤进行：
（1）将有机溶剂A、有机溶剂B与含有羟丙基-β-环糊精的磷酸盐缓冲液按照体积比1~8:2~6:10组成溶剂体系，混合均匀，静置分层，得到有机相和水相；所述的含有羟丙基-β-环糊精的磷酸盐缓冲液的pH为2.0~5.0，其中羟丙基-β-环糊精的浓度为0.05~0.30mol/L；所述有机溶剂A为C1~C8的烷烃或C2~C8的醚，所述有机溶剂B为C3~C8的酯类；
（2）将外消旋2-苯丙酸用步骤（1）所得水相溶解，制成样品；
（3）采用高速逆流色谱法拆分外消旋2-苯丙酸：以步骤（1）得到的有机相为固定相，以步骤（1）得到的水相为流动相，将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为2~20℃，开启速度控制器，转速为500~1000rpm，以0.5~3.0ml/min的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后（当流动相从色谱柱出口处流出时就认为达到平衡），步骤（2）样品由进样阀进样，在波长190~400nm范围内检测流出液，根据紫外检测谱图，按谱图显示的峰型（即出现对映体峰时）分别收集含目标组分的前峰洗脱液和含目标组分的后峰洗脱液；
（4）分别从步骤（3）中收集得到的前峰洗脱液和后峰洗脱液中回收，分别得到左旋2-苯丙酸单体和右旋2-苯丙酸单体。
进一步，所述步骤（1）中有机溶剂A为正己烷、正庚烷、正戊烷、环己烷、石油醚、乙醚或甲基叔丁基醚。
进一步，所述步骤（1）中有机溶剂B为乙酸乙酯、乙酸甲酯或甲酸乙酯。
进一步，步骤（1）中所述的含有羟丙基-β-环糊精的磷酸盐缓冲液的pH=2.0~3.0，其中羟丙基-β-环糊精浓度为0.05~0.2mol/L。
进一步，所述步骤（1）中溶剂体系为正己烷、乙酸乙酯与pH为2.6的含羟丙基-β-环糊精的磷酸盐缓冲液以体积比5:5:10混合制成，所述含羟丙基-β-环糊精的磷酸盐缓冲液中羟丙基-β-环糊精浓度为0.1mol/L。
进一步，所述步骤（2）中外消旋2-苯丙酸与水相混合制成浓度为1~10mg/mL的样品。
进一步，所述步骤（3）中柱温为5~15℃，流动相泵入流速为1.0~2.0ml/min。
进一步，所述步骤（3）中回收左旋2-苯丙酸单体和右旋2-苯丙酸单体的方法为：将含目标组分的前峰洗脱液和含目标组分的后峰洗脱液分别用盐酸调节pH至1~2，再分别用乙酸乙酯萃取2~3次，分别合并乙酸乙酯层，用水洗至中性，无水硫酸钠干燥、过滤，滤液蒸除溶剂，即分别获得左旋2-苯丙酸粗品和右旋2-苯丙酸粗品；将左旋2-苯丙酸粗品和右旋2-苯丙酸粗品分别进行硅胶柱层析，洗脱剂均为正己烷、氯仿与冰醋酸以体积比5:5:0.05的混合液，分别收集含目标组分的洗脱液，即分别获得左旋2-苯丙酸单体和右旋2-苯丙酸单体，具体为：TLC跟踪检测，收集Rf值为0.38时的洗脱液，干燥获得左旋2-苯丙酸单体，收集Rf值为0.38时的洗脱液，干燥右旋2-苯丙酸单体。
本发明所述的手性拆分剂是羟丙基-β-环糊精，取代度≥7.5，取代度小于7.5时不适合作本发明中的手性拆分剂。本发明中所使用的羟丙基-β-环糊精均购于山东淄博千汇精细化工有限公司，取代度为7.5。
进一步优选本发明所述拆分方法按照如下步骤进行：
（1）将正己烷、乙酸乙酯和含有羟丙基-β-环糊精的磷酸盐缓冲液按照体积比1~8:2~6:10组成溶剂体系，混合均匀，静置分层，分离得到有机相和水相；所述的含有羟丙基-β-环糊精的磷酸盐缓冲液的pH在2.0~3.0，其中羟丙基-β-环糊精的浓度为0.05~0.1mol/L；
（2）将外消旋2-苯丙酸用步骤（1）所得水相溶解，制成样品待用；
（3）采用高速逆流色谱法拆分外消旋2-苯丙酸：分别以步骤（1）得到的有机相和水相为固定相和流动相，将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为5~15℃，开启速度控制器，转速为500~1000rpm，以1.0~3.0ml/min的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后，由进样阀进样，以波长190~400nm的紫外检测器检测，根据紫外检测谱图，分别收集前峰洗脱液和后峰洗脱液；
（4）分别从步骤（3）中收集得到的前峰洗脱液和后峰洗脱液中回收得到左旋2-苯丙酸和右旋2-苯丙酸的单体，具体为：将前峰洗脱液和后峰洗脱液分别用盐酸调节pH至1~2，再用乙酸乙酯萃取2~3次，合并乙酸乙酯层，用水洗至中性，无水硫酸钠干燥、过滤，滤液蒸除溶剂，即分别获得左旋2-苯丙酸粗品和右旋2-苯丙酸粗品；将粗品分别进行硅胶柱层析，洗脱剂为正己烷、氯仿与冰醋酸以体积比5:5:0.05的混合液，收集含目标组分的洗脱液，即分别获得左旋2-苯丙酸单体和右旋2-苯丙酸单体。
本发明可采用半制备型逆流色谱仪（上海同田生物技术有限公司，仪器型号TBE-300A，其分离柱柱体积为300ml），逆流色谱仪由恒流泵、主机（分离柱）、紫外检测器、记录仪等组成。
与现有技术相比，本发明的有益效果主要体现在：本发明首次采用逆流色谱拆分外消旋2-苯丙酸，本方法可以基本达到分离目的，并且该方法适用于各种型号的制备型逆流色谱仪，可以分离得到左旋2-苯丙酸和右旋2-苯丙酸的单体，其纯度均大于90%、收率大于50%。
（四）附图说明
图1：实施例1实验条件下的半制备型高速逆流色谱图；
图2：实施例2实验条件下的半制备型高速逆流色谱图；
图3：实施例3实验条件下的半制备型高速逆流色谱图；
图4：实施例4实验条件下的半制备型高速逆流色谱图；
图5：实施例5实验条件下的半制备型高速逆流色谱图；
图6：实施例6实验条件下的半制备型高速逆流色谱图；
图7：实施例7实验条件下的半制备型高速逆流色谱图；
图8：实施例8实验条件下的半制备型高速逆流色谱图；
图9：实施例9实验条件下的半制备型高速逆流色谱图；
图10：图1中A部分（119min~265min）洗脱液的高效液相色谱检测谱图，即R型2-苯丙酸；
图11：图1中B部分（282min~342min）洗脱液的高效液相色谱检测谱图，即S型2-苯丙酸。
（五）具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：
实施例1
（1）将正己烷:乙酸乙酯:含有羟丙基-β-环糊精的磷酸盐缓冲液（用0.1mol/L磷酸盐缓冲溶液配制，pH=2.6，含有0.1mol/L羟丙基-β-环糊精，取代度为7.5）按照5:5:10的体积比配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层。待平衡一段时间后，将上下相分开，有机相作为固定相，水相作为流动相。
（2）称取40mg外消旋2-苯丙酸用6ml水相溶解，溶解后制成样品溶液，待用。
（3）采用半制备型高速逆流色谱仪（上海同田生物技术有限公司，仪器型号TBE-300A）拆分外消旋2-苯丙酸：分离柱体积为300ml，进样前，将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为5℃，开启速度控制器，转速为800rpm，以2.00ml/min的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后（即当流动相从色谱柱出口处流出时），由进样阀开始进样。然后以波长254nm的紫外检测器（上海金达升华仪器有限公司，仪器型号UVD-200）检测流出液，根据紫外检测谱图（见图1所示），计算分离度为0.90。根据254nm紫外检测谱图的峰型，分别收集含目标组分的前峰洗脱液和含目标组分的后峰洗脱液，将收集得到的洗脱液进行高效液相检测（分别见图10和图11所示），两个单体洗脱液的纯度均大于90%。高效液相色谱的检测条件为：YMC-Pack ODS-A C18(5μm,150mm×4.6mm)色谱柱；柱温：45℃；流动相：0.5%乙酸(pH4.00，三乙胺调节)含25mmol·L-1羟丙基-β-环糊精:甲醇(85:15,v/v)等度洗脱；流速0.8ml/min；检测波长254nm；进样量：20μl。
（4）从洗脱液中回收样品：将前峰洗脱液和后峰洗脱液分别用盐酸调节pH至1~2，再用乙酸乙酯萃取2~3次，合并乙酸乙酯层，用水洗至中性，无水硫酸钠干燥、过滤，滤液蒸除溶剂，即分别获得左旋2-苯丙酸粗品和右旋2-苯丙酸的粗品。粗品各自通过硅胶柱层析，洗脱剂均为正己烷：氯仿：冰醋酸(5:5:0.05,v/v/v)，TLC跟踪检测，收集Rf值为0.38时的洗脱液，干燥，获得15.4mg纯化的左旋2-苯丙酸单体，纯度为99.5%，收率为76.6%，收集Rf值为0.38时的洗脱液，干燥，获得14.7mg右旋2-苯丙酸单体，纯度为99.3%，收率为73.0%。
实施例2
（1）将正己烷:乙酸乙酯:含有羟丙基-β-环糊精的磷酸盐缓冲液（用0.1mol/L磷酸盐缓冲溶液配制，pH=2.6，含有0.1mol/L羟丙基-β-环糊精，取代度为7.5）按照8:2:10的体积比配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层。待平衡一段时间后，将上下相分开，有机相作为固定相，水相作为流动相。
（2）称取40mg外消旋2-苯丙酸用6ml水相溶解，溶解后制成样品溶液，待用。
（3）采用半制备型高速逆流色谱仪（上海同田生物技术有限公司，仪器型号TBE-300A）拆分外消旋2-苯丙酸：分离柱体积为300ml，进样前，将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为5℃，开启速度控制器，转速为800rpm，以2.00ml/min的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后（即当流动相从色谱柱出口处流出时），由进样阀开始进样。然后以波长254nm的紫外检测器（上海金达升华仪器有限公司，仪器型号UVD-200）检测流出液，根据紫外检测谱图（见图2所示），计算分离度为0.38。根据254nm紫外检测谱图的峰型，分别收集含目标组分的前峰洗脱液和含目标组分的后峰洗脱液，将收集得到的洗脱液进行高效液相检测，两个单体洗脱液的纯度均大于90%。高效液相色谱的检测条件为：YMC-Pack ODS-A C18(5μm,150mm×4.6mm)色谱柱；柱温：45℃；流动相：0.5%乙酸(pH4.00，三乙胺调节)含25mmol·L-1羟丙基-β-环糊精:甲醇(85:15,v/v)等度洗脱；流速0.8ml/min；检测波长254nm；进样量：20μl。
（4）从洗脱液中回收样品：将前峰洗脱液和后峰洗脱液分别用盐酸调节pH至1~2，再用乙酸乙酯萃取2~3次，合并乙酸乙酯层，用水洗至中性，无水硫酸钠干燥、过滤，滤液蒸除溶剂，即分别获得左旋2-苯丙酸粗品和右旋2-苯丙酸的粗品。粗品各自通过硅胶柱层析，洗脱剂为正己烷：氯仿：冰醋酸(5:5:0.05,v/v/v)，TLC跟踪检测，收集Rf值为0.38时的洗脱液，干燥，获得7.5mg纯化的左旋2-苯丙酸单体，纯度为96.8%，收率为36.3%，收集Rf值为0.38时的洗脱液，干燥，获得7.1mg右旋2-苯丙酸单体，纯度为96.5%，收率为34.2%。
实施例3
（1）将正己烷:乙酸乙酯:含有羟丙基-β-环糊精的磷酸盐缓冲液（用0.1mol/L磷酸盐缓冲溶液配制，pH=3.2，含有0.1mol/L羟丙基-β-环糊精，取代度7.5）按照5:5:10的体积比配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层。待平衡一段时间后，将上下相分开，有机相作为固定相，水相作为流动相。
（2）称取40mg外消旋2-苯丙酸用6ml水相溶解，溶解后制成样品溶液待用。
（3）采用半制备型高速逆流色谱仪（上海同田生物技术有限公司，仪器型号TBE-300A）拆分外消旋2-苯丙酸，分离柱体积为300ml。进样前，将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为5℃，开启速度控制器，转速为800rpm，以2.00ml/min的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后，进样。然后以波长254nm的紫外检测器（上海金达升华仪器有限公司，仪器型号UVD-200）检测流出液，根据紫外检测谱图（见图3所示），计算分离度为0.65。根据254nm紫外检测谱图的峰型，分别收集前峰洗脱液和后峰洗脱液，将收集得到的洗脱液进行高效液相检测，两个单体洗脱液的纯度均大于90%。高效液相色谱的检测条件同实施例1。
（4）从洗脱液中回收样品：将前峰洗脱液和后峰洗脱液分别用盐酸调节pH至1~2，再用乙酸乙酯萃取2~3次，合并乙酸乙酯层，用水洗至中性，无水硫酸钠干燥、过滤，滤液蒸除溶剂，即分别获得左旋2-苯丙酸粗品和右旋2-苯丙酸的粗品。粗品各自通过硅胶柱层析，洗脱剂为正己烷：氯仿：冰醋酸(5:5:0.05,v/v/v)，TLC跟踪检测，收集Rf值为0.38时的洗脱液，干燥，获得11.2mg纯化的左旋2-苯丙酸单体，纯度为98.6%，收率为55.2%，收集Rf值为0.38时的洗脱液，干燥，获得10.6mg右旋2-苯丙酸单体，纯度为98.5%，收率为52.2%。
实施例4
（1）将正己烷:乙酸乙酯:含有羟丙基-β-环糊精的磷酸盐缓冲液（用0.1mol/L磷酸盐缓冲溶液配制，pH=2.6，含有0.05mol/L羟丙基-β-环糊精，取代度7.5）按照6:4:10的体积比配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层。待平衡一段时间后，将上下相分开，有机相作为固定相，水相作为流动相。
（2）称取40mg外消旋2-苯丙酸用6ml水相溶解，溶解后制成样品溶液待用。
（3）采用半制备型高速逆流色谱仪（上海同田生物技术有限公司，仪器型号TBE-300A）拆分外消旋2-苯丙酸，分离柱体积为300ml。进样前，将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为5℃，开启速度控制器，转速为800rpm，以2.00ml/min的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后，进样。然后以波长254nm的紫外检测器（上海金达升华仪器有限公司，仪器型号UVD-200）检测流出液，根据紫外检测谱图（见图4所示），计算分离度为0.67。根据254nm紫外检测谱图的峰型，分别收集前峰洗脱液和后峰洗脱液，将收集得到的洗脱液进行高效液相检测，两个单体洗脱液的纯度均大于90%。高效液相色谱的检测条件同实施例1。
（4）从洗脱液中回收样品：将前峰洗脱液和后峰洗脱液分别用盐酸调节pH至1~2，再用乙酸乙酯萃取2~3次，合并乙酸乙酯层，用水洗至中性，无水硫酸钠干燥、过滤，滤液蒸除溶剂，即分别获得左旋2-苯丙酸粗品和右旋2-苯丙酸的粗品。粗品各自通过硅胶柱层析，洗脱剂为正己烷：氯仿：冰醋酸(5:5:0.05,v/v/v)，TLC跟踪检测，收集Rf值为0.38时的洗脱液，干燥，获得11.5mg纯化的左旋2-苯丙酸单体，纯度为98.6%，收率为56.6%，收集Rf值为0.38时的洗脱液，干燥，获得11.0mg右旋2-苯丙酸单体，纯度为98.6%，收率为54.2%。
实施例5
（1）将石油醚:乙酸乙酯:含有羟丙基-β-环糊精的磷酸盐缓冲液（用0.1mol/L磷酸盐缓冲溶液配制，pH=2.6，含有0.1mol/L羟丙基-β-环糊精，取代度为7.5）按照5:5:10的体积比配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层。待平衡一段时间后，将上下相分开，有机相作为固定相，水相作为流动相。
（2）称取40mg外消旋2-苯丙酸用6ml水相溶解，溶解后制成样品溶液待用。
（3）采用半制备型高速逆流色谱仪（上海同田生物技术有限公司，仪器型号TBE-300A）拆分外消旋2-苯丙酸，分离柱体积为300ml。进样前，将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为5℃，开启速度控制器，转速为800rpm，以2.00ml/min的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后，由进样阀进样。然后以波长254nm的紫外检测器（上海金达升华仪器有限公司，仪器型号UVD-200）检测流出液，根据紫外检测谱图（见图5所示），计算分离度为0.61。根据254nm紫外检测谱图的峰型，分别收集前峰洗脱液和后峰洗脱液，将收集得到的洗脱液进行高效液相检测，两个单体洗脱液的纯度均大于90%。高效液相色谱的检测条件同实施例1。
（4）从洗脱液中回收样品：将前峰洗脱液和后峰洗脱液分别用盐酸调节pH至1~2，再用乙酸乙酯萃取2~3次，合并乙酸乙酯层，用水洗至中性，无水硫酸钠干燥、过滤，滤液蒸除溶剂，即分别获得左旋2-苯丙酸粗品和右旋2-苯丙酸的粗品。粗品各自通过硅胶层析，展开剂为正己烷：氯仿：冰醋酸(5:5:0.05,v/v/v)，TLC跟踪检测，收集Rf值为0.38时的洗脱液，干燥，获得10.6mg纯化的左旋2-苯丙酸单体，纯度为98.3%，收率为52.1%，收集Rf值为0.38时的洗脱液，干燥，获得10.2mg右旋2-苯丙酸单体，纯度为98.3%，收率为50.1%。
实施例6
（1）将正己烷:乙酸乙酯:含有羟丙基-β-环糊精的磷酸盐缓冲液（用0.1mol/L磷酸盐缓冲溶液配制，pH=2.6，含有0.1mol/L羟丙基-β-环糊精，取代度为7.5）按照5:5:10的体积比配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层。待平衡一段时间后，将上下相分开，有机相作为固定相，水相作为流动相。
（2）称取40mg外消旋2-苯丙酸用6ml水相溶解，溶解后制成样品溶液待用。
（3）采用半制备型高速逆流色谱仪（上海同田生物技术有限公司，仪器型号TBE-300A）拆分外消旋2-苯丙酸，分离柱体积为300ml。进样前，将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为15℃，开启速度控制器，转速为800rpm，以2.00ml/min的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后，进样。然后以波长254nm的紫外检测器（上海金达升华仪器有限公司，仪器型号UVD-200）检测流出液，根据紫外检测谱图（见图6所示），计算分离度为0.38。根据254nm紫外检测谱图的峰型，分别收集前峰洗脱液和后峰洗脱液，将收集得到的洗脱液进行高效液相检测，两个单体洗脱液的纯度均大于90%。高效液相色谱的检测条件同实施例1。
（4）从洗脱液中回收样品：将前峰洗脱液和后峰洗脱液分别用盐酸调节pH至1~2，再用乙酸乙酯萃取2~3次，合并乙酸乙酯层，用水洗至中性，无水硫酸钠干燥、过滤，滤液蒸除溶剂，即分别获得左旋2-苯丙酸粗品和右旋2-苯丙酸的粗品。粗品各自通过硅胶柱层析，洗脱剂为正己烷：氯仿：冰醋酸(5:5:0.05,v/v/v)，根据254nm紫外检测谱图的峰型，TLC跟踪检测，收集Rf值为0.38时的洗脱液，干燥，获得7.7mg纯化的左旋2-苯丙酸单体，纯度为96.9%，收率为37.3%，收集Rf值为0.38时的洗脱液，干燥，获得7.0mg右旋2-苯丙酸单体，纯度为96.8%，收率为33.9%。
实施例7
（1）将正己烷:乙酸乙酯:含有羟丙基-β-环糊精的磷酸盐缓冲液（用0.1mol/L磷酸盐缓冲溶液配制，pH=2.6，含有0.1mol/L羟丙基-β-环糊精，取代度为7.5）按照5:5:10的体积比配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层。待平衡一段时间后，将上下相分开，有机相作为固定相，水相作为流动相。
（2）称取40mg外消旋2-苯丙酸用6ml水相溶解，溶解后制成样品溶液，待用。
（3）采用半制备型高速逆流色谱仪（上海同田生物技术有限公司，仪器型号TBE-300A）拆分外消旋2-苯丙酸，分离柱体积为300ml。进样前，将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为5℃，开启速度控制器，转速为800rpm，以1.50ml/min的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后，进样。然后以波长254nm的紫外检测器（上海金达升华仪器有限公司，仪器型号UVD-200）检测流出液，根据紫外检测谱图（见图7所示），计算分离度为0.83。根据254nm紫外检测谱图的峰型，分别收集前峰洗脱液和后峰洗脱液，将收集得到的洗脱液进行高效液相检测，两个单体洗脱液的纯度均大于90%。高效液相色谱的检测条件同实施例1。
（4）从洗脱液中回收样品：将前峰洗脱液和后峰洗脱液分别用盐酸调节pH至1~2，再用乙酸乙酯萃取2~3次，合并乙酸乙酯层，用水洗至中性，无水硫酸钠干燥、过滤，滤液蒸除溶剂，即分别获得左旋2-苯丙酸粗品和右旋2-苯丙酸的粗品。粗品各自通过硅胶柱层析，洗脱剂为正己烷：氯仿：冰醋酸(5:5:0.05,v/v/v)，TLC跟踪检测，收集Rf值为0.38时的洗脱液，干燥，获得14.2mg纯化的左旋2-苯丙酸单体，纯度为99.2%，收率为70.4%，收集Rf值为0.38时的洗脱液，干燥，获得13.6mg右旋2-苯丙酸单体纯度为99.2%，收率为67.5%。
实施例8
（1）将正己烷:乙酸乙酯:含有羟丙基-β-环糊精的磷酸盐缓冲液（用0.1mol/L磷酸盐缓冲溶液配制，pH=2.6，含有0.1mol/L羟丙基-β-环糊精，取代度为7.5）按照8:2:10的体积比配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层。待平衡一段时间后，将上下相分开，有机相作为固定相，水相作为流动相。
（2）称取40mg外消旋2-苯丙酸用4ml水相溶解，溶解后制成样品溶液，待用。
（3）采用半制备型高速逆流色谱仪（上海同田生物技术有限公司，仪器型号TBE-200V）拆分外消旋2-苯丙酸：分离柱体积为300ml，进样前，将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为5℃，开启速度控制器，转速为800rpm，以2.00ml/min的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后（即当流动相从色谱柱出口处流出时），由进样阀开始进样。然后以波长254nm的紫外检测器（上海金达升华仪器有限公司，仪器型号UVD-200）检测流出液，根据紫外检测谱图（见图8所示），计算分离度为0.63。根据254nm紫外检测谱图的峰型，分别收集前峰洗脱液和后峰洗脱液，将收集得到的洗脱液进行高效液相检测，两个单体洗脱液的纯度均大于90%。高效液相色谱的检测条件为：YMC-Pack ODS-A C18(5μm,150mm×4.6mm)色谱柱；柱温：45℃；流动相：0.5%乙酸(pH4.00，三乙胺调节)含25mmol·L-1羟丙基-β-环糊精:甲醇(85:15,v/v)等度洗脱；流速0.8ml/min；检测波长254nm；进样量：20μl。
（4）从洗脱液中回收样品：将前峰洗脱液和后峰洗脱液分别用盐酸调节pH至1~2，再用乙酸乙酯萃取2~3次，合并乙酸乙酯层，用水洗至中性，无水硫酸钠干燥、过滤，滤液蒸除溶剂，即分别获得左旋2-苯丙酸粗品和右旋2-苯丙酸的粗品。粗品各自通过硅胶柱层析，洗脱剂为正己烷：氯仿：冰醋酸(5:5:0.05,v/v/v)，TLC跟踪检测，收集Rf值为0.38时的洗脱液，干燥，获得11.1mg纯化的左旋2-苯丙酸单体，纯度为98.6%，收率为54.7%，收集Rf值为0.38时的洗脱液，干燥，获得10.5mg右旋2-苯丙酸单体，纯度为98.6%，收率为51.8%。
实施例9
（1）将正己烷:乙酸甲酯:含有羟丙基-β-环糊精的磷酸盐缓冲液（用0.1mol/L磷酸盐缓冲溶液配制，pH=2.6，含有0.1mol/L羟丙基-β-环糊精，取代度为7.5）按照5:5:10的体积比配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层。待平衡一段时间后，将上下相分开，有机相作为固定相，水相作为流动相。
（2）称取20mg外消旋2-苯丙酸用20ml水相溶解，溶解后制成样品溶液，待用。
（3）采用半制备型高速逆流色谱仪（上海同田生物技术有限公司，仪器型号TBE-200V）拆分外消旋2-苯丙酸：分离柱体积为300ml，进样前，将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为5℃，开启速度控制器，转速为800rpm，以2.00ml/min的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后（即当流动相从色谱柱出口处流出时），由进样阀开始进样。然后以波长254nm的紫外检测器（上海金达升华仪器有限公司，仪器型号UVD-200）检测流出液，根据紫外检测谱图（见图9所示），计算分离度为0.34。根据254nm紫外检测谱图的峰型，分别收集前峰洗脱液和后峰洗脱液，将收集得到的洗脱液进行高效液相检测，两个单体洗脱液的纯度均大于90%。高效液相色谱的检测条件为：YMC-Pack ODS-A C18(5μm,150mm×4.6mm)色谱柱；柱温：45℃；流动相：0.5%乙酸(pH4.00，三乙胺调节)含25mmol·L-1羟丙基-β-环糊精:甲醇(85:15,v/v)等度洗脱；流速0.8ml/min；检测波长254nm；进样量：20μl。
（4）从洗脱液中回收样品：将前峰洗脱液和后峰洗脱液分别用盐酸调节pH至1~2，再用乙酸乙酯萃取2~3次，合并乙酸乙酯层，用水洗至中性，无水硫酸钠干燥、过滤，滤液蒸除溶剂，即分别获得左旋2-苯丙酸粗品和右旋2-苯丙酸的粗品。粗品各自通过硅胶柱层析，洗脱剂为正己烷：氯仿：冰醋酸(5:5:0.05,v/v/v)，TLC跟踪检测，收集Rf值为0.38时的洗脱液，干燥，获得6.6mg纯化的左旋2-苯丙酸单体，纯度为96.2%，收率为31.7%，收集Rf值为0.38时的洗脱液，干燥，获得6.3mg右旋2-苯丙酸单体，纯度为96.2%，收率为30.3%。

Claims (8)

1.一种外消旋2-苯丙酸的拆分方法，其特征在于所述方法按如下步骤进行：
（1）将有机溶剂A、有机溶剂B与含有羟丙基-β-环糊精的磷酸盐缓冲液按照体积比1~8:2~6:10组成溶剂体系，混合均匀，静置分层，得到有机相和水相；所述的含有羟丙基-β-环糊精的磷酸盐缓冲液的pH为2.0~5.0，其中羟丙基-β-环糊精的浓度为0.05~0.30mol/L；所述有机溶剂A为C1~C8的烷烃或C2~C8的醚，所述有机溶剂B为C3~C8的酯类；
（2）将外消旋2-苯丙酸用步骤（1）所得水相溶解，制成样品；
（3）采用高速逆流色谱法拆分外消旋2-苯丙酸：以步骤（1）得到的有机相为固定相，以步骤（1）得到的水相为流动相，将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为2~20℃，开启速度控制器，转速为500~1000rpm，以0.5~3.0ml/min的流速将流动相泵入柱内，当流动相从色谱柱出口处流出时，步骤（2）样品由进样阀进样，在波长190~400nm范围内检测流出液，根据紫外检测谱图，分别收集含目标组分的前峰洗脱液和含目标组分的后峰洗脱液；
（4）分别从步骤（3）中收集得到的前峰洗脱液和后峰洗脱液中回收，分别得到左旋2-苯丙酸单体和右旋2-苯丙酸单体。
2.如权利要求1所述外消旋2-苯丙酸的拆分方法，其特征在于所述步骤（1）中有机溶剂A为正己烷、正庚烷、正戊烷、环己烷、石油醚、乙醚或甲基叔丁基醚。
3.如权利要求1所述外消旋2-苯丙酸的拆分方法，其特征在于所述步骤（1）中有机溶剂B为乙酸乙酯、乙酸甲酯或甲酸乙酯。
4.如权利要求1所述外消旋2-苯丙酸的拆分方法，其特征在于步骤（1）中所述的含有羟丙基-β-环糊精的磷酸盐缓冲液的pH=2.0~3.0，其中羟丙基-β-环糊精浓度为0.05~0.2mol/L。
5.如权利要求1所述外消旋2-苯丙酸的拆分方法，其特征在于所述步骤（1）中溶剂体系为正己烷、乙酸乙酯与pH为2.6的含羟丙基-β-环糊精的磷酸盐缓冲液以体积比5:5:10混合制成，所述含羟丙基-β-环糊精的磷酸盐缓冲液中羟丙基-β-环糊精浓度为0.1mol/L。
6.如权利要求1所述外消旋2-苯丙酸的拆分方法，其特征在于所述步骤（2）中外消旋2-苯丙酸与水相混合制成浓度为1~10mg/mL的样品。
7.如权利要求1所述外消旋2-苯丙酸的拆分方法，其特征在于所述步骤（3）中柱温为5~15℃，流动相泵入流速为1.0~2.0ml/min。
8.如权利要求1所述外消旋2-苯丙酸的拆分方法，其特征在于所述步骤（3）中回收左旋2-苯丙酸单体和右旋2-苯丙酸单体的方法为：将含目标组分的前峰洗脱液和含目标组分的后峰洗脱液分别用盐酸调节pH至1~2，再分别用乙酸乙酯萃取2~3次，分别合并乙酸乙酯层，用水洗至中性，无水硫酸钠干燥、过滤，滤液蒸除溶剂，即分别获得左旋2-苯丙酸粗品和右旋2-苯丙酸粗品；将左旋2-苯丙酸粗品和右旋2-苯丙酸粗品分别进行硅胶柱层析，洗脱剂均为正己烷、氯仿与冰醋酸以体积比5:5:0.05的混合液，分别收集含目标组分的洗脱液，即分别获得左旋2-苯丙酸单体和右旋2-苯丙酸单体。
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