CN103728392A - 一种用液相色谱法分离测定琥珀酸普卡必利有关物质的方法 - Google Patents
一种用液相色谱法分离测定琥珀酸普卡必利有关物质的方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明属分析化学领域，本发明公开了一种用液相色谱法分离测定琥珀酸普卡必利有关物质的方法，该方法以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以一定比例的无机酸盐缓冲溶液－有机相为流动相，可以定量测定琥珀酸普卡必利及其有关物质的含量，从而有效控制琥珀酸普卡必利的质量。本发明方法专属性强，准确度高，操作简便。
Description
技术领域
本发明属于分析化学领域，具体涉及液相色谱法分离测定琥珀酸普卡必利及其有关物质的方法。
背景技术
琥珀酸普卡必利用于治疗成年女性患者中通过轻泻剂难以充分缓解的慢性便秘症状。琥珀酸普卡必利化学名为4-amino-5-chloro-2,3-dihydro-N-[1-(3-methylpropyl)-4-piperidinyl]-7-Benzofurancarboxmide分子式为C22H32ClN3O7。琥珀酸普卡必利结构式为：
在合成该化合物的过程中，有几步重要的中间体可能会由于去除不完全而影响药物的纯度和质量；降解杂质是在药物的生产或贮藏过程中产生的，无治疗作用或影响药物的稳定性和疗效，甚至危害人体健康，对于琥珀酸普卡必利的合成主要控制的有关物质有4个，分别是中间体1：1-（3-Methoxy-propyl）-piperidin-4-one oxime；中间体2：4-Amino-5-chloro-2,3-dihydro-benzofuran-7-carboxylic acid；中间体3：4-Amino-5-chloro-2,3-dihydro-benzofuran-7-carboxylic acid [1-(3-methoxy-propyl)-piperidin-4-yl]-amide；氧化杂质：4-Amino-5-chloro-2,3-dihydro-benzofuran-7-carboxylic acid [1-(3-methoxy-propyl)-1-oxy-piperidin-4-yl]-amide，结构式分别为：
中间体1 中间体2
对于合成琥珀酸普卡必利中引入的有关物质，在原料药中是需要进行质量控制的，因此，实现琥珀酸普卡必利及其有关物质的分离，在琥珀酸普卡必利的合成过程的质量控制方面具有重要的现实意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种分析琥珀酸普卡必利的纯度以及分离其有关物质的方法，从而实现琥珀酸普卡必利与其有关物质的分离和测定，保证琥珀酸普卡必利的纯度，实现其终产品原料药的质量控制。
本发明所述的用液相色谱法分析琥珀酸普卡必利的纯度以及分离其有关物质的方法，是采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以一定比例的无机盐缓冲溶液－有机相为流动相。
上述所说的色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，选自ES-C18或Alltima –C18。
上述所说的有机相选自以下化合物：甲醇、乙腈、丙醇、异丙醇、四氢呋喃等，优选为甲醇。
上述所说的方法中，无机盐缓冲溶液中包含的无机盐选自磷酸盐、碳酸盐、柠檬酸盐，优选为磷酸盐。
其中无机盐缓冲溶液中包含的无机盐的浓度为0.01～0.1mol/L，优选浓度为0.02mol/L。
本发明所述的分离测定方法，可按照以下方法实现：
1) 取琥珀酸普卡必利或含琥珀酸普卡必利的制剂样品适量，用甲醇或流动相溶解样品，配制成每1mL含琥珀酸普卡必利0.1～1.5mg的样品溶液。
2) 设置流动相流速为0.5～1.5mL/min ，流动相流速优选为1.0mL/min，检测波长为200～250nm，最佳检测波长为205nm，柱温箱温度为20～50℃，柱温箱温度最佳为25℃。
3) 取1)的样品溶液10～50μL，注入液相色谱仪，完成琥珀酸普卡必利与有关物质的分离测定。其中：
高效液相色谱仪的型号，无特别要求，本发明采用的色谱仪为岛津：LC-20AT泵，SPD-M20A检测器，SIL-20AC自动进样器，CBM-20A控制器，CTO-10AS柱温箱，LC solution工作站
色谱柱：C18（ES，250×4.6 mm，5μm）
流动相：0.02 mol/L磷酸二氢钾缓冲液（称取2.72g磷酸二氢钾和2.02g庚烷磺酸钠，加水1000ml使溶解，稀磷酸溶液调节pH至3.0）-甲醇（60:40）
流速：1.0mL/min
检测波长：205nm
进样体积：10μL
本发明采用C18（ES ，250×4.6 mm，5μm），能够有效的分离琥珀酸普卡必利及其有关物质。本发明解决了琥珀酸普卡必利及其有关物质的分离测定问题，从而确保了琥珀酸普卡必利原料药的质量可控。
附图说明
图1为实施例1时琥珀酸普卡必利及其有关物质HPLC图；
图2为实施例1时的琥珀酸普卡必利HPLC图；
图3为实施例2时的琥珀酸普卡必利及其有关物质HPLC图；
图4为实施例2时的琥珀酸普卡必利的HPLC图；
图5为实施例3时的溶剂HPLC图；
图6为实施例3时的琥珀酸普卡必利及其有关物质HPLC图；
图7为实施例3时的琥珀酸普卡必利的HPLC图。
具体实施方式：
以下实施例用于进一步理解本发明，但不限于本实施的范围。
实施例1
仪器与条件
高效液相色谱仪：岛津：LC-20AT， CBM-20A，SIL-20AC，SPD-M20A，CTO-10ASvp；
色谱柱：C18（Apollo ，250×4.6 mm，5μm）；
流动相： 0.02 mol/L磷酸二氢钾缓冲液（称取2.72g磷酸二氢钾，加水1000ml使溶解，稀磷酸溶液调节pH至3.0）-甲醇（70:30）
流速：1.0mL/min
检测波长：205nm
进样体积：10μL
实验步骤
取琥珀酸普卡必利及其中间体和杂质适量，分别用甲醇溶解样品，配制成含琥珀酸普卡必利及其中间体约0.25mg/mL的样品溶液。按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见附图1~3，图2中保留时间为26.274min的色谱峰为琥珀酸普卡必利，其余色谱峰为琥珀酸普卡必利各有关物质的色谱峰；图3中保留时间为26.217min的色谱峰为琥珀酸普卡必利。
实施例 2
仪器与条件
高效液相色谱仪：岛津：LC-20AT， CBM-20A，SIL-20AC，SPD-M20A，CTO-10ASvp；
色谱柱：C18（Unitary ，250×4.6 mm，5μm）；
流动相： 0.02 mol/L磷酸二氢钾缓冲液（称取2.72g磷酸二氢钾和2.02g庚烷磺酸钠，加水1000ml使溶解，稀磷酸溶液调节pH至3.0）-甲醇（55:45）
流速：1.0mL/min
检测波长：205nm
进样体积：10μL
实验步骤
取琥珀酸普卡必利及其中间体适量，分别用甲醇溶解样品，配制成含琥珀酸普卡必利及其中间体约0.25mg/mL的样品溶液。按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见附图4~5，图4中保留时间为21.239min的色谱峰为琥珀酸普卡必利，其余色谱峰为琥珀酸普卡必利各有关物质的色谱峰；图5中保留时间为21.796min的色谱峰为琥珀酸普卡必利。
实施例3
仪器与条件
高效液相色谱仪：岛津：LC-20AT， CBM-20A，SIL-20AC，SPD-M20A，CTO-10ASvp；
色谱柱：C18（ES，250×4.6 mm，5μm）；
流动相A：0.02 mol/L磷酸二氢钾缓冲液（称取2.72g磷酸二氢钾和2.02g庚烷磺酸钠，加水1000ml使溶解，稀磷酸溶液调节pH至3.0）-甲醇（60:40）
流速：1.0mL/min
检测波长：205nm
进样体积：10μL
实验步骤
取琥珀酸普卡必利及其中间体适量，分别用甲醇乙腈溶解样品，配制成含琥珀酸普卡必利及其中间体约0.25mg/mL的样品溶液。按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见附图6~7，图6中保留时间为27.245min的色谱峰为琥珀酸普卡必利，其余色谱峰为琥珀酸普卡必利各有关物质的色谱峰，由图可以看出，琥珀酸普卡必利与其有关物质能够达到基线分离，符合中国药典的要求；图7中保留时间为27.268min的色谱峰为琥珀酸普卡必利，可以看出在该条件下琥珀酸普卡必利与其有关物质可以完全分离。
从图1－图7表明：本发明的方法，可以清楚地将琥珀酸普卡必利与其中间体分离，并可以准确进行检测定量，以计算出琥珀酸普卡必利的含量，从而有效控制琥珀酸普卡必利的产品质量。
Claims (10)
1.一种液相色谱法分离测定琥珀酸普卡必利有关物质的方法，其特征在于：十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以一定比例的无机盐缓冲溶液－有机相为流动相。
2.根据权利要求1所述的分离测定方法，色谱柱选自品牌为ES和Alltima的色谱柱。
3.根据权利要求1 所述的分离测定方法，所说的有机相选自以下化合物中的一种：甲醇、乙腈、丙醇、异丙醇、四氢呋喃。
4.根据权利要求3 所述的分离测定方法，所说的有机相为甲醇。
5.根据权利要求1所述的分离测定方法，所说的无机盐缓冲溶液中无机盐选自以下无机盐：磷酸盐、碳酸盐、柠檬酸盐。
6.根据权利要求1所述的分离测定方法，所说的无机盐缓冲溶液中所含无机盐的浓度最优为0.02mol/L，无机盐缓冲溶液的pH值为3.0。
7.根据权利要求5 所述的分离测定方法，所说的无机盐缓冲溶液中无机盐优选磷酸盐。
8.根据权利要求1 所述的分离测定方法，其特征在于，包括以下几个步骤：
1）取琥珀酸普卡必利原料药适量，分别用甲醇或流动相溶解样品，配制成每1mL含琥珀酸普卡必利及其中间体0.1～1.5mg的样品溶液；
2） 设置流动相流速为0.5～1.5mL/min，检测波长为200～250nm，柱温箱温度为10～40℃；
3）取1）的样品溶液10～50μL，注入液相色谱仪，完成琥珀酸普卡必利及其有关物质的分离测定。
9.根据权利要求7所述的分离测定方法，无机盐优选磷酸二氢钾。
10.根据权利要求8所述的分离测定方法，步骤2）所说的流动相流速优选为1.0mL/min，所说的检测波长为205 nm。
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| CN112500398A (zh) * | 2020-12-24 | 2021-03-16 | 艾希尔（深圳）药物研发有限公司 | 一种普鲁卡必利氧化物的制备方法 |
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