CN103760257A - 一种用液相色谱法分离测定阿瑞匹坦有关物质的方法 - Google Patents

Abstract

本发明属分析化学领域，涉及了一种用液相色谱法分离测定阿瑞匹坦有关物质的方法，该方法以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以一定比例的无机酸盐缓冲溶液－有机相为流动相，可以定量测定阿瑞匹坦及其有关物质的含量，从而有效控制阿瑞匹坦及含阿瑞匹坦制剂产品的质量。本发明方法专属性强，准确度高，操作简便。

Description

一种用液相色谱法分离测定阿瑞匹坦有关物质的方法

技术领域

本发明属于分析化学领域，具体涉及液相色谱法分离测定阿瑞匹坦及其有关物质的方法。

背景技术

阿瑞匹坦是美国FDA于2003年批准上市的第一个神经激肽．1(NK-1)受体阻滞剂，通过与NK-1受体(主要存在于中枢神经系统及其外围)结合来阻滞P物质的作用。本品可以通过血脑屏障，占领大脑中的NK-1受体，具有选择性和高亲和性，而对NK.2和NK-3受体亲和性很低。同时本品对其他用于治疗化疗诱发的恶心和呕吐症状的药物的靶点(如多巴胺受体、5 HT受体)亲和作用也很低，其减少恶心、呕吐的效果优于其他药。临床上用于预防化疗引起的急性和延迟性恶心、呕吐。阿瑞匹坦化学名为5-[2-[1-(3,5-Bis-trifluoromethyl-phenyl)-ethoxy]-3-(4-fluoro-phenyl)-morpholin-4-ylmethyl]-2,4-dihydro-[1,2,4]triazol-3-one，分子式为C₂₃H₂₁F₇N₄O₃。阿瑞匹坦结构式为：

在合成该化合物的过程中，有几步重要的中间体可能会由于去除不完全而影响药物的纯度和质量，这几个中间体即药物质量控制中的有关物质，对于阿瑞匹坦的合成主要控制的有关物质有2个，分别是中间体1（2-[1-(3,5-Bis-trifluoromethyl-phenyl)-ethoxy]-3-(4-fluoro-phenyl)-morpholinechlorid）、中间体2（N'-(1-Amino-2-chloro-ethylidene)-hydrazinecarboxylic acid methyl ester），结构式分别为：

            

中间体1                            中间体2

对于合成阿瑞匹坦中引入的有关物质，在原料药中是需要进行质量控制的，因此，实现阿瑞匹坦及其有关物质的分离，在阿瑞匹坦合成过程的质量控制方面具有重要的现实意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种分析阿瑞匹坦的纯度以及分离其有关物质的方法，从而实现阿瑞匹坦与其有关物质的分离和测定，从而保证阿瑞匹坦的纯度，实现其终产品原料药的质量控制。

本发明所述的用液相色谱法分析阿瑞匹坦的纯度以及分离其有关物质的方法，是采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以一定比例的无机盐缓冲溶液－有机相为流动相。

上述所说的色谱柱以辛烷基硅烷键合硅胶为填料，选自ES-C₁₈或Alltima-C₁₈。

上述所说的有机相选自以下化合物：甲醇、乙腈、丙醇、异丙醇，优选为甲醇。

上述所说的方法中，无机盐缓冲溶液中包含的无机盐选自磷酸盐、碳酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐，优选为乙酸盐。

其中无机盐缓冲溶液中包含的无机盐的浓度为0.01～0.1mol/L，优选浓度为0.01mol/L。

本发明所述的分离测定方法，可按照以下方法实现：

1) 取阿瑞匹坦样品适量，用甲醇或流动相溶解样品，配制成每1mL含阿瑞匹坦0.1～1.5mg的样品溶液。

2) 设置流动相流速为0.5～1.5mL/min ，流动相流速优选为1.0mL/min，检测波长为210～250nm，最佳检测波长为210nm，柱温箱温度为20～50℃，柱温箱温度最佳为25℃。

3) 取1)的样品溶液10～50μL，注入液相色谱仪，完成阿瑞匹坦与有关物质的分离测定。其中：

高效液相色谱仪的型号，无特别要求，本发明采用的色谱仪为岛津：LC-20AT， CBM-20A，SIL-20AC，SPD-M20A，CTO-10ASvp

色谱柱：C₁₈（Alltima，250×4.6 mm，5μm）

流动相： 0.01 mol/L乙酸铵缓冲溶液（称取乙酸铵0.77g，十二烷基硫酸钠2.88g，加1ml甲酸，加水溶解并定容至1000ml，用甲酸调pH值为3.0）-甲醇（23:77）；

流速：1.0mL/min

检测波长：210nm

柱温：25℃

进样体积：10μL

本发明采用C₁₈（Alltima，250×4.6 mm，5μm），能够有效的分离阿瑞匹坦及其有关物质。本发明解决了阿瑞匹坦及其有关物质的分离测定问题，从而确保了阿瑞匹坦原料药的质量可控。 

附图说明

图1为实施例1时的阿瑞匹坦及其有关物质HPLC图；

图2为实施例1时阿瑞匹坦HPLC图；

图3为实施例2时的阿瑞匹坦及其有关物质HPLC图；

图4为实施例2时的阿瑞匹坦的HPLC图；

图5为实施例3时的溶剂HPLC图；

图6为实施例3时的阿瑞匹坦及其有关物质HPLC图；

图7为实施例3时的阿瑞匹坦的HPLC图。

具体实施方式：

以下实施例用于进一步理解本发明，但不限于本实施的范围。

实施例1  

仪器与条件

高效液相色谱仪：岛津：LC-20AT， CBM-20A，SIL-20AC，SPD-M20A，CTO-10ASvp；

色谱柱：C₁₈（Alltima，250×4.6 mm，5μm） 

流动相：0.01 mol/L乙酸铵缓冲溶液（称取乙酸铵0.77g，加1ml甲酸，加水溶解并定容至1000ml）-甲醇（20:80）

流速：1.0mL/min

检测波长：210nm

柱温：25℃

进样体积：10μL

实验步骤

取阿瑞匹坦及其中间体适量，分别用甲醇溶解样品，配制成含阿瑞匹坦及其中间体约0.5 mg/mL的样品溶液。按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见附图1~2，图1中保留时间为8.865min的色谱峰为阿瑞匹坦，其余色谱峰为阿瑞匹坦各有关物质的色谱峰；图2中保留时间为8.838min的色谱峰为阿瑞匹坦。

实施例 2 

仪器与条件

高效液相色谱仪：岛津：LC-10ATvp，SPD-M10Avp；

色谱柱：C₈（Apollo ，250×4.6 mm，5μm）

流动相：0.01 mol/L乙酸铵缓冲溶液（称取乙酸铵0.77g，庚烷磺酸钠2.02g，加1ml甲酸，加水溶解并定容至1000ml）-甲醇（25:75）

流速：1.0mL/min

检测波长：210nm

柱温：25℃

进样体积：10μL

实验步骤

取阿瑞匹坦及其中间体适量，分别用甲醇溶解样品，配制成含阿瑞匹坦及其中间体约0.5 mg/mL的样品溶液；另取甲醇适量作为空白溶剂。按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见附图3~4，图3中保留时间为14.840min的色谱峰为阿瑞匹坦，其余色谱峰为阿瑞匹坦各有关物质的色谱峰；图4中保留时间为14.845min的色谱峰为阿瑞匹坦。

实施例3  

仪器与条件

色谱柱：C₈（Apollo ，250×4.6 mm，5μm）

流动相：0.01 mol/L乙酸铵缓冲溶液（称取乙酸铵0.77g，十二烷基硫酸钠2.88g，加1ml甲酸，加水溶解并定容至1000ml，用甲酸调pH值为3.0）-甲醇（23:77）

流速：1.0mL/min

检测波长：210nm

柱温：25℃

进样体积：10μL

实验步骤

取阿瑞匹坦及其中间体适量，分别用甲醇溶解样品，配制成含阿瑞匹坦约0.5 mg/mL的样品溶液；另取甲醇适量作为空白溶剂。按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见附图5~7，图5为溶剂色谱图；图6中保留时间为14.492min的色谱峰为阿瑞匹坦，其余色谱峰为阿瑞匹坦各有关物质的色谱峰，由图可以看出，阿瑞匹坦与其有关物质能够达到基线分离，符合中国药典的要求；图7中保留时间为14.451min的色谱峰为阿瑞匹坦，可以看出在该条件下阿瑞匹坦与其有关物质可以完全分离。

从图1－图7表明：本发明的方法，可以清楚地将阿瑞匹坦与其中间体分离，并可以准确进行检测定量，以计算出阿瑞匹坦的含量，从而有效控制阿瑞匹坦的产品质量。

Claims (10)

1.一种液相色谱法分离测定阿瑞匹坦有关物质的方法，其特征在于：十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以一定比例的无机盐缓冲溶液－有机相为流动相。

2.根据权利要求1所述的分离测定方法，色谱柱选自品牌为Agilent、ES 和Alltima的色谱柱。

3.根据权利要求1 所述的分离测定方法，所说的有机相选自以下化合物中的一种：甲醇、乙腈、丙醇、异丙醇。

4.根据权利要求3 所述的分离测定方法，所说的有机相为甲醇或乙腈。

5.根据权利要求1所述的分离测定方法，所说的无机盐缓冲溶液中无机盐为磷酸盐、碳酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐中的一种。

6.根据权利要求1所述的分离测定方法，所说的无机盐缓冲溶液中所含无机盐的浓度为0.01mol/L。

7.根据权利要求5 所述的分离测定方法，所说的无机盐缓冲溶液中无机盐优选乙酸盐。

8.根据权利要求1所述的分析分离方法，无机盐缓冲溶液的pH值优选为3.0。

9.根据权利要求1 所述的分离测定方法，其特征在于，包括以下几个步骤：

1）取阿瑞匹坦样品适量，分别用甲醇或流动相溶解样品，配制成每1mL含阿瑞匹坦及其中间体0.1～1.5mg的样品溶液；

2） 设置流动相流速为0.5～1.5mL/min，检测波长为205～250nm，色谱柱柱箱温度为20～40℃；

3）取1）的样品溶液10～50μL，注入液相色谱仪，完成阿瑞匹坦及其有关物质的分离测定。

10.根据权利要求8所述的分析分离方法，步骤2）所说的流动相流速优选为1.0mL/min，所说的检测波长为210 nm。

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