CN101963603B - 用hplc法分析精氨酸、盐酸精氨酸原料及制剂的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种用HPLC法分析精氨酸、盐酸精氨酸原料及制剂的方法，所述的分析方法选用LiChroCART250-4，NH2，5μm，4.0×250mm氨基色谱分离柱，以不同pH的有机相和不同离子浓度的缓冲液作为流动相，其中有机相为甲醇、乙醇和乙腈，缓冲液为磷酸氢二铵溶液。所述的分析方法的具体操作步骤如下：（1）取精氨酸4.12-4.20mg、组氨酸4.13-4.25mg和盐酸赖氨酸4.12-4.37mg加流动相20ml溶解并混匀，制成每1ml溶液中含精氨酸为0.206mg/ml-0.21mg/ml、组氨酸为0.206mg/ml-0.212mg/ml和盐酸赖氨酸为0.206mg/ml-0.215mg/ml的混合溶液，作为分析溶液；（2）设置流动相流速为0.8-1.2ml/min，检测波长为205nm，柱温为15-25°C；（3）取制成的分析溶液5-40μL注入液相色谱仪中，进行色谱分析，并记录色谱图。

Description

用HPLC法分析精氨酸、盐酸精氨酸原料及制剂的方法
技术领域
本发明涉及到分析化学领域，特别涉及到用HPLC法分析精氨酸、盐酸精氨酸原料及制剂的方法。
背景技术
精氨酸是鸟氨酸的前体，可促进体内鸟氨酸循环，加速血氨生成尿素而排出，从而降低血氨；精氨酸具有促进人体蛋白质代谢正常，纠正负氮平衡，补充蛋白质，从而起到加快伤口愈合，恢复肝功、保护肝脏的作用。同时，精氨酸是内皮源性一氧化氮（EDNO)的合成底物，在氧化氮合酶(NOS)及其辅酶的共同作用下，末端胍基氮原子可脱氨氧化生成NO，通过NO来发挥其对免疫系统、心血管系统、消化系统等的有益作用。其盐酸盐主要用于肝性脑病，适用于忌钠的患者，也适用于其它原因引起血氨增高所致的精神症状治疗。其结构式分别为：
Figure GDA0000211123171
其在水解提取的过程中有其他氨基酸（有关物质）需要严格控制（组氨酸、盐酸赖氨酸），其结构式为：
Figure GDA0000211123172
对于提取精氨酸（盐酸精氨酸）中存在的有关物质，无论是在原料药还是制剂中都是需要进行质量控制的。因此，实现精氨酸（盐酸精氨酸）及其有关物质的分离，在精氨酸（盐酸精氨酸）提取和制剂过程的质量控制方面具有现实意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种采用HPLC法分析测定精氨酸、盐酸精氨酸的有关物质分析分离的方法，从而保证精氨酸、盐酸精氨酸的纯度，实现其原料及制剂的质量控制。
为达到上述目的，本发明的具体技术方案为：
一种用HPLC法分析精氨酸、盐酸精氨酸原料及制剂的方法，其特征在于：所述的分析方法选用LiChroCART250-4，NH2，5μm，4.0×250mm氨基色谱分离柱，以不同PH的有机相和不同离子浓度的缓冲液作为流动相，其中有机相为甲醇、乙醇或乙腈，优选乙腈，缓冲液为磷酸氢二铵溶液, 在流动相中有机相与缓冲液的体积比为：50:50-90:10，优选50:50-80:20，缓冲液磷酸氢二缓铵的浓度为0.01mol/L-0.07mol/L，优选为：0.02mol/L-0.05mol/L，缓冲液磷酸氢二铵的PH值范围为2-6，优选PH值为2.0-3.5，流速1.0mL/min，检测波长：205nm，柱温15-25℃，进样体积为20μL。
所述的分析方法的具体操作步骤如下：
（1）、取精氨酸4.12-4.20mg、组氨酸4.13-4.25mg和盐酸赖氨酸4.12-4.37mg加入缓冲液20ml溶解混匀，其中缓冲液中磷酸氢二铵：乙腈体积比为1:1,制成每1ml溶液中含精氨酸为0.206mg/ml-0.21mg/ml、组氨酸为0.206mg/ml-0.212mg/ml和盐酸赖氨酸为0.206mg/ml-0.215mg/ml的混合溶液，作为分析溶液；
（2）、设置流动相流速为1.0ml/min，检测波长为205nm，柱温为15-25°C；
（3）、取步骤（1）制成的分析溶液20μL注入液相色谱仪中，进行色谱分析，并记录色谱图。
本发明的积极效果为：
1、本发明采用氨基键和硅胶为填充剂（LiChroCART250-4，NH2，5μm，4.0×250mm），能够有效的分离精氨酸（盐酸精氨酸）及其有关物质，准确测定精氨酸（盐酸精氨酸）纯度；
2、本发明解决了精氨酸（盐酸精氨酸）及其有关物质的分离，从而确保了精氨酸（盐酸精氨酸）原料及其制剂的质量可控；
3、本发明的方法能简便、快速、准确地分析精氨酸（盐酸精氨酸）的纯度和含量并能有效的控制其有关物质。
附图说明
图1、缓冲液与乙腈的比例为35:65，PH值为4.0的HPLC图；
图2、缓冲液与乙腈的比例为35:65，PH值为4.5的HPLC图；
图3、缓冲液与乙腈的比例为35:65，PH值为5.0的HPLC图。
具体实施方式
下面结合实施例进一步说明本发明的具体实施方式。
实施例一
（1）、仪器与条件
高效液相色谱仪：美国戴安UltiMate 3000高效液相色谱系统及工作站；
色谱柱：LiChroCART250-4，NH2，5μm，4.0×250mm；
流动相：取0.02mol/L磷酸氢二铵溶液，用磷酸调节pH至4.0－乙腈（35：65），流速：1.0mL/min，检测波长：205nm，柱温：15℃，进样体积：20μL。
（2）、实验步骤
取盐酸赖氨酸4.12mg、组氨酸4.25mg和精氨酸4.15mg,加入流动相20ml溶解并混匀，其中流动相中磷酸氢二铵：乙腈体积比为1:1，即得含盐酸赖氨酸0.206mg/ml、组氨酸0.212mg/ml和精氨酸为0.208mg/ml的混合溶液，作为系统适用性试验溶液。
取混合样品溶液，按（1）所述的条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。
结果见附图1，图中9.753处为精氨酸，11.060处为组氨酸，11.840处为赖氨酸，可以看出在该条件下精氨酸峰可以和两个其他氨基酸完全分离。
实施例二
（1）、仪器与条件
高效液相色谱仪：美国戴安UltiMate 3000高效液相色谱系统及工作站；
色谱柱：LiChroCART250-4，NH2，5μm，4.0×250mm ；
流动相：取0.03mol/L磷酸氢二铵溶液，用盐酸调节pH至4.5－乙腈（35：65），流速：1.0mL/min，检测波长：205nm，柱温：20℃，进样体积：20μL。
（2）、实验步骤
取盐酸赖氨酸4.15mg、组氨酸4.13mg和精氨酸4.20mg,加入流动相20ml溶解并混匀，其中流动相中磷酸氢二铵：乙腈体积比为1:1，即得含盐酸赖氨酸0.208mg/ml、组氨酸0.206mg/ml和精氨酸为0.21mg/ml的混合溶液，作为系统适用性试验溶液。
取混合样品溶液，按(1)所述的条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。
结果见附图2，图中11.173处为精氨酸，12.700处为组氨酸，13.800处为赖氨酸，可以看出在该条件下精氨酸峰可以和两个其他氨基酸完全分离。
实施例三
（1）、仪器与条件
高效液相色谱仪：美国戴安UltiMate 3000高效液相色谱系统及工作站；
色谱柱：LiChroCART250-4，NH2，5μm，4.0×250mm；
流动相：取0.05mol/L磷酸氢二铵溶液，用盐酸调节pH至5.0－乙腈（35：65），流速：1.0mL/min，检测波长：205nm，柱温：25℃，进样体积：20μL。
（2）、实验步骤
取盐酸赖氨酸4.37mg、组氨酸4.20mg和精氨酸4.12mg,加入流动相20ml溶解并混匀，其中流动相中磷酸氢二铵：乙腈体积比为1:1，即得含盐酸赖氨酸0.215mg/ml、组氨酸0.21mg/ml和精氨酸为0.206mg/ml的混合溶液，作为系统适用性试验溶液。
取混合样品溶液，按（1）所述的条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。
结果见附图3，图中14.927处为精氨酸，16.853处为组氨酸，18.393处为赖氨酸，可以看出在该条件下精氨酸峰可以和两个其他氨基酸完全分离。
以上所述仅是本发明的非限定实施方式，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明创造构思和不作出创造性劳动的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。

Claims (2)

1.一种用HPLC法分析精氨酸、盐酸精氨酸原料及制剂的方法，其特征在于：所述的分析方法选用LiChroCART250-4，NH2，5μm，4.0×250mm氨基色谱分离柱，取0.02-0.05mol/L磷酸氢二铵溶液，用磷酸调节pH至4.0-5.0，流动相中水相-乙腈的比例为35:65,流速1.0mL/min，检测波长：205nm，柱温15-25℃，进样体积为20μL。
2.根据权利要求1所述的用HPLC法分析精氨酸、盐酸精氨酸原料及制剂的方法，其特征在于：所述的分析方法的具体操作步骤如下：
（1）、取精氨酸4.12-4.20mg、组氨酸4.13-4.25mg和盐酸赖氨酸4.12-4.37mg加入以磷酸氢二铵和乙腈构成的缓冲液20ml溶解混匀，其中磷酸氢二铵：乙腈体积比为1:1，制成每1ml溶液中含精氨酸为0.206mg/ml-0.21mg/ml、组氨酸为0.206mg/ml-0.212mg/ml和盐酸赖氨酸为0.206mg/ml-0.215mg/ml的混合溶液，作为分析溶液；
（2）、设置流动相流速为1.0ml/min，检测波长为205nm，柱温为15-25℃；
（3）、取步骤（1）制成的分析溶液20μL注入液相色谱仪中，进行色谱分析，并记录色谱图。
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