CN103163232B - 一种来那度胺及其制剂的含量测定和杂质测定的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种药物的分析方法，特别是用高效液相色谱测定来那度胺及其制剂中的含量检测方法和杂质检测方法。本发明以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以（pH 1～5）的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，建立起一种快速、简单、有效、可靠、全面的来那度胺及其制剂的含量和杂质的检测分析方法。采用该方法可以有效检测来那度胺在生产和储存过程中杂质的变化，对该药的质量控制具有重要的现实意义。
Description
技术领域
本发明涉及一种药物的分析方法，特别是涉及一种用高效液相色谱测定来那度胺及其制剂中的含量和杂质的方法。
背景技术
药品的杂质研究是控制药品质量和安全的主要保障之一。由于一种药品从合成原料药到制备有关的制剂，再经贮藏、运输、使用，要经历一段较为复杂和漫长的过程，在此期间每一过程都可能产生有关的杂质，如生产中可能带入起始原料、试剂、中间体、副产物和异构体等；在贮藏和运输过程中可能产生降解产物、聚合物或晶型转变等特殊杂质。药品中的杂质泛指在药品的生产与储运过程中产生的工艺杂质或降解产物等。药品在临床使用中产生的不良反应除了与主成分的药理活性有关外，与药品中存在的杂质也有很大关系，药品中杂质的控制是药品研发的一个重要方面，也是临床使用安全性的保障。因此，为了保证药物的安全有效，同时也要考虑到生产实际情况，国内外在药物的研究过程中均将杂质检测作为控制药品质量的重要指标。药品杂质检测研究是目前我国药品研发中的薄弱点之一。要全面提升我国药品研发的水平、切实保证公众用药的安全性，必须重视并加强药品中有关杂质的研究。
来那度胺（lenalidomide）分子结构式：
化学名称：3-（4-氨基-1-氧代-1，3-二氢-2H-异吲哚-2-基）哌啶-2，6-二酮。
来那度胺是美国Celgene开发的新一代抗肿瘤药，于2005年12月首获FDA批准用于治疗慢性骨髓瘤和有5q缺失的骨髓增生异常综合征(Myelodysplastic syndrome,MDS)，2006年获FDA批准用于治疗多发性骨髓瘤（Multiple Myeloma，MM）。来那度胺是沙利度胺的新一代衍生物，但没有发现其具有致畸变的毒性，并且药效比沙利度胺强100倍。根据三期临床试验的结果，来那度胺是目前治疗多发性骨髓瘤疗效最显著的药品，超过一半的病人服用该药后可延长存活时间达到3年以上。另外它也是可以有效治疗骨髓增生异常综合症（MDS）唯一的药物，临床结果发现64%的MDS病人用来那度胺治疗后无需再输血来治疗MDS。近期的临床研究结果还显示，来那度胺除了可以用于治疗MDS和MM外，对骨髓瘤、白血病、转移性肾癌、实体瘤、原发性全身性淀粉洋性变和伴骨髓化生的全身性骨髓纤维化疾病具有一定疗效。
来那度胺胶囊是美国Celgene公司的拳头产品，2010年全球销售额突破20亿美元，同比增长25%。目前来那度胺在国内尚无厂家生产该品种。我国自主研发和生产该药，对于维护我国人民身体健康，及增加社会效益、经济效益方面都具有重大意义。
目前文献已经报道来那度胺及其杂质的高效液相色谱（HPLC）检测分析方法较多，其中一些方法不是以分析来那度胺中杂质为主要目标（例如，B.S.Sastry et al,Int.J.PharmTech Res.,2009年,1(3)卷，416～419页）。另外一些高效液相色谱（HPLC）方法，以分析生物体液中的来那度胺含量为目标（例如，T.M.Tohnya et al,J.Chromatography B,2004,811卷，135～141页；Qing et al,Therapeutic Drug Monitoring,2008年，30（5）卷，620～627页）。这些方法均不适合用来分析和定量来那度胺及其制剂中的总杂质含量及单个杂质含量，不能有效控制来那度胺及其制剂质量。
专利WO2011/064574公开了一种采用高效液相色谱分析来那度胺含量及其杂质的方法，该法尤其适合分析采用专利WO2010/100476合成工艺制备的来那度胺含量及其杂质。如专利WO2011/064574所述，采用专利WO2010/100476合成工艺制备的来那度胺含有的主要杂质为3-（4-硝基-1-氧代-1，3-二氢-2H-异吲哚基）-哌啶-2，6-二酮，其分子结构如下所示：
文献(S.R.Nandan et al,Journal of Liquid Chromatography and Related Technologies,33卷，654～679页,2010年)也给出了一种采用高效液相色谱分析来那度胺含量及其杂质的方法。该方法与专利WO2011/064574方法类似，除了可以用来分析来那度胺含量之外，仅能分析杂质3-（4-硝基-1-氧代-1，3-二氢-2H-异吲哚基）-哌啶-2，6-二酮（杂质1）。除此之外，该方法与WO2011/064574方法的流动相组成均较复杂，不利于色谱系统的平衡与稳定。
本发明人根据《药品注册管理办法》及《化学药物杂质研究的技术指导原则》的相关要求，仔细研究了来那度胺及其制剂在制备及其储运的过程中可能产生的杂质，经研究发现除了杂质3-（4-硝基-1-氧代-1，3-二氢-2H-异吲哚基）-哌啶-2，6-二酮（杂质1）外，还有如下两种杂质：
综上所述，目前的来那度胺及其制剂的杂质检测分析尚不能对其进行完全的质量控制，在一定程度上影响来那度胺及其制剂的生产与应用，亟待建立一种快速、简单、有效、可靠、全面的来那度胺及其制剂的含量和杂质的检测分析方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种快速、简单、有效、可靠、全面的来那度胺及其制剂的含量和杂质的高效液相色谱检测方法。
为达到上述发明目的，本发明采用以下技术方案来实现：
一种来那度胺及其制剂的含量测定和杂质测定的高效液相色谱法，其特征在于十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以pH 1～5的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：用50～60分钟的时间A流动相与B流动相的体积比从95～85:5～15逐渐降至25～35:75～65；其中，优选用50～60分钟的时间A流动相与B流动相的体积比从90:10逐渐降至30:70。
在样品洗脱过程中，优选首先在检测开始的0～10分钟的内A流动相与B流动相的体积比保持在95～85:5～15范围内；再在随后的40～50分钟内A流动相与B流动相的体积比从95～85:5～15递减至25～35:75～65。
在样品洗脱过程中更优选首先在开始的0～10分钟的内A流动相与B流动相的体积比保持在90:10；再在随后的40～50分钟内A流动相与B流动相的体积比从90:10递减至30:70。
其中，更优选按以下程序进行梯度洗脱：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 10 | 90 | 10 |
| 50 | 50 | 50 |
| 60 | 30 | 70 |
另外在样品按上述梯度洗脱程序洗脱完毕后，为了色谱柱的平衡，将系统从上一梯度的结束过渡到下一梯度的开始，优选再用10～20钟的时间洗脱，其中A流动相与B流动相的体积比例范围从25～35:75～65逐渐增至95～85:5～15；其中更优选该过程中A流动相与B流动相的体积比例范围从30:70逐渐增至90:10。
其中，最优选按以下程序进行梯度洗脱：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 10 | 90 | 10 |
| 50 | 50 | 50 |
| 60 | 30 | 70 |
| 70 | 90 | 10 |
所述的磷酸缓冲溶液的pH值优选2～3，更优选2.5。
所述的磷酸缓冲溶液可以用乙酸、甲酸、高氯酸、三氟乙酸缓冲溶液代替。
下面简单介绍本发明的研究过程：
（一）色谱检测条件的确定
1.检测波长的初步选择
取来那度胺、杂质1、杂质2、杂质3对照品适量，加甲醇溶解，照紫外-可见分光光度法（中国药典2005年版二部附录Ⅳ A）测定，结果见表1：
表1 来那度胺及其杂质的紫外吸收
| 名称 | 紫外吸收 |
| 来那度胺 | 220nm、312nm附件有最大吸收 |
| 杂质1 | 240nm有肩峰，末端吸收 |
| 杂质2 | 220nm有肩峰，末端吸收 |
| 杂质3 | 220nm有肩峰，末端吸收 |
结论：由表1可知，来那度胺、杂质1、杂质2、杂质3的吸收范围在200nm～240nm，故来那度胺含量及杂质测定的检测波长定为220nm±10nm。
2.文献色谱条件的重现：
依据根据文献(S.R.Nandan et al,Journal of Liquid Chromatography and RelatedTechnologies,33卷，654～679页,2010年)试验，色谱条件如下：
以0.01M磷酸盐缓冲液（1.36g磷酸二氢钾加入到1000ml水中，磷酸调pH值2.0）为流动相A，以乙腈-水（80：20）为流动相B，按表2梯度程序进行洗脱，流速1.0ml/min，柱温25℃。
表2 文献色谱梯度系统程序
| 时间（分钟） | 流动相A | 流动相B |
| 0 | 100 | 0 |
| 40 | 40 | 60 |
| 50 | 20 | 80 |
| 55 | 100 | 0 |
| 65 | 100 | 0 |
实验结果表明，主成分来那度胺峰纯度不好，且系统峰较多，严重干扰中间体的检测，见图1、图2。
发明人在此色谱条件基础上进行多方面的研究，包括改变磷酸盐缓冲溶液的种类、浓度、pH值、改变流动相B的配比、延长并调整梯度时间等，但是主成分峰纯度依然不好，系统峰依然较多，试验结果均不尽理想，不能满足简单、有效、可靠、全面检测定量来那度胺杂质含量的要求。
综合考虑以上研究结果，发明人发现磷酸盐缓冲溶液不利于色谱系统的平衡，故应将缓冲盐从流动相中去除。
3.流动相的选择与优化
在上述研究的基础上，发明人考虑到以乙腈-水为基本流动相，调节乙腈与水的比例，研究选择来那度胺含量及杂质测定的流动相。研究结果表明，单纯以乙腈-水（70：30～10:90）作为流动相的等度洗脱方式，不能完全有效分离和检出来那度胺中的杂质。
研究结果见表3：
表3 流动相的初步选择
| 流动相组成/配比 | 系统评价 |
| 乙腈-水（10：90） | 杂质1、杂质2保留时间过长 |
| 乙腈-水（30：70） | 来那度胺与杂质峰难于分开 |
| 乙腈-水（50：50） | 来那度胺与杂质峰难于分开 |
| 乙腈-水（70：30） | 来那度胺与杂质保留时间过短，主峰与杂质峰难以分开 |
研究结果表明，单纯以乙腈-水（70：30～10:90）作为流动相的等度洗脱方式，不能完全有效分离和检出来那度胺中的杂质。
本发明人继续以乙腈-水为流动相，采用梯度洗脱的方式探索来那度胺及其杂质的高效液相色谱分析方法。在试验中，采用以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以水为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：在0～70分钟内A流动相与B流动相的比例范围从90:10逐渐变化至30:70，再从30:70逐渐变化至90:10。记录色谱，比较有代表性的色谱图见附图图3、图4。试验结果表明，采用该色谱系统，来那度胺的峰纯度依然不好，系统峰依然较多。因此需要对该色谱系统继续优化。
本发明人在后续优化的试验中，采用以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以磷酸缓冲溶液（pH值控制在1～5）为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：用50～60分钟的时间A流动相与B流动相的体积比从95～85:5～15逐渐降至25～35:75～65。验结果表明，在该色谱系统条件下，来那度胺主成分峰纯度较好，杂质1、杂质2、杂质3能在合适的时间内洗脱，各峰之间的分离度均较好，可以较好的实现来那度胺及其杂质的检测分析。
特别是A流动相与B流动相的体积比在开始检测的0～10分钟的内A流动相与B流动相的体积比保持在95～85:5～15范围内；再在随后的40～50分钟内A流动相与B流动相的体积比从95～85:5～15递减至25～35:75～65的条件下，样品及杂质检测的精密度更好。
另外，本发明人还对样品梯度洗脱后色谱柱的平衡问题进行了研究，发现样品检测完毕后再用10～20钟的时间A流动相与B流动相的体积比例范围从25～35:75～65逐渐增至95～85:5～15，有利于色谱柱的平衡。
另外，本发明人还对缓冲溶剂进行多方面研究，发现可以用乙酸、甲酸、高氯酸、三氟乙酸缓冲溶液代替磷酸缓冲溶液，实现较好的来那度胺及其杂质的检测分析。
4.辅料干扰性实验
发明人还采用本发明技术方案对市场上常用的制备来那度胺制剂的药用辅料进行了研究，经研究发现常用的药用辅料对本技术方案没有干扰。
（二）特殊杂质检测方法学研究
1.对来那度胺方法学研究
（1）色谱条件：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以（pH为2.5）的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 10 | 90 | 10 |
| 50 | 50 | 50 |
| 60 | 30 | 70 |
按上述色谱条件对来那度胺对照品溶液进行测定，以来那度胺的峰面积为纵坐标，以样品浓度为横坐标，进行线性回归。在该色谱系统下，来那度胺在0.10～19.84μg/ml浓度范围内线性关系良好，来那度胺的定量限为0.50ng，检测限为0.15ng。
（2）色谱条件：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以（pH为1）的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 95 | 5 |
| 10 | 85 | 15 |
| 50 | 50 | 50 |
| 60 | 30 | 70 |
按上述色谱条件对来那度胺对照品溶液进行测定，以来那度胺的峰面积为纵坐标，以样品浓度为横坐标，进行线性回归。在该色谱系统下，来那度胺在0.18～17.41μg/ml浓度范围内线性关系良好，来那度胺的定量限为0.57ng，检测限为0.17ng。
（3）色谱条件：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以（pH为2）的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 40 | 40 | 60 |
| 50 | 30 | 70 |
| 65 | 90 | 10 |
按上述色谱条件对来那度胺对照品溶液进行测定，以来那度胺的峰面积为纵坐标，以样品浓度为横坐标，进行线性回归。在该色谱系统下，来那度胺在0.25～17.88μg/ml浓度范围内线性关系良好，来那度胺的定量限为0.80ng，检测限为0.24ng。
（4）色谱条件：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以（pH为3）的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 40 | 40 | 60 |
| 50 | 30 | 70 |
| 65 | 90 | 10 |
按上述色谱条件对来那度胺对照品溶液进行测定，以来那度胺的峰面积为纵坐标，以样品浓度为横坐标，进行线性回归。在该色谱系统下，来那度胺在0.5～21.01μg/ml浓度范围内线性关系良好，来那度胺的定量限为1.20ng，检测限为0.36ng。
2.杂质1的方法学研究
（1）色谱条件：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以（pH为2.5）的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 10 | 90 | 10 |
| 50 | 50 | 50 |
| 60 | 30 | 70 |
按上述色谱条件对杂质1对照品溶液进行测定，以杂质1的峰面积为纵坐标，以样品浓度为横坐标，进行线性回归。在该色谱系统下，杂质1在0.10～20.44μg/ml浓度范围内线性关系良好，杂质1的定量限为0.51ng，检测限为0.15ng。
（2）色谱条件：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以（pH为1）的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 95 | 5 |
| 10 | 85 | 15 |
| 50 | 50 | 50 |
| 60 | 30 | 70 |
按上述色谱条件对杂质1对照品溶液进行测定，以杂质1的峰面积为纵坐标，以样品浓度为横坐标，进行线性回归。在该色谱系统下，杂质1在0.18～17.41μg/ml浓度范围内线性关系良好，杂质1的定量限为0.55ng，检测限为0.17ng。
（3）色谱条件：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以（pH为2）的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 40 | 40 | 60 |
| 50 | 30 | 70 |
| 60 | 90 | 10 |
按上述色谱条件对杂质1对照品溶液进行测定，以杂质1的峰面积为纵坐标，以样品浓度为横坐标，进行线性回归。在该色谱系统下，杂质1在0.25～19.341μg/ml浓度范围内线性关系良好，杂质1的定量限为0.72ng，检测限为0.22ng。
（4）色谱条件：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以（pH为3）的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 40 | 40 | 60 |
| 50 | 30 | 70 |
| 65 | 90 | 10 |
按上述色谱条件对杂质1对照品溶液进行测定，以杂质1的峰面积为纵坐标，以样品浓度为横坐标，进行线性回归。在该色谱系统下，杂质1在0.87～22.17μg/ml浓度范围内线性关系良好，杂质1的定量限为0.94ng，检测限为0.28ng。
3.杂质2的方法学研究
（1）色谱条件：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以（pH为2.5）的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 10 | 90 | 10 |
| 50 | 50 | 50 |
| 60 | 30 | 70 |
按上述色谱条件对杂质2对照品溶液进行测定，以杂质2的峰面积为纵坐标，以样品浓度为横坐标，进行线性回归。在该色谱系统下，杂质2在0.10～20.60μg/ml浓度范围内线性关系良好，杂质2的定量限为1.03ng，检测限为0.31ng。
（2）色谱条件：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以（pH为1）的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 95 | 5 |
| 10 | 85 | 15 |
| 50 | 50 | 50 |
| 60 | 30 | 70 |
按上述色谱条件对杂质2对照品溶液进行测定，以杂质2的峰面积为纵坐标，以样品浓度为横坐标，进行线性回归。在该色谱系统下，杂质2在0.18～17.41μg/ml浓度范围内线性关系良好，杂质2的定量限为1.24ng，检测限为0.37ng。
（3）色谱条件：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以（pH为2）的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 40 | 40 | 60 |
| 50 | 30 | 70 |
| 65 | 90 | 10 |
按上述色谱条件对杂质2对照品溶液进行测定，以杂质2的峰面积为纵坐标，以样品浓度为横坐标，进行线性回归。在该色谱系统下，杂质2在0.28～25.12μg/ml浓度范围内线性关系良好，杂质2的定量限为1.32ng，检测限为0.40ng。
（4）色谱条件：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以（pH为3）的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 40 | 40 | 60 |
| 50 | 30 | 70 |
| 65 | 90 | 10 |
按上述色谱条件对杂质2对照品溶液进行测定，以杂质2的峰面积为纵坐标，以样品浓度为横坐标，进行线性回归。在该色谱系统下，杂质2在0.55μg/ml-20.14μg/ml浓度范围内线性关系良好，杂质2的定量限为1.51ng，检测限为0.45ng。
4.杂质3的方法学研究
（1）色谱条件：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以（pH为2.5）的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 10 | 90 | 10 |
| 50 | 50 | 50 |
| 60 | 30 | 70 |
按上述色谱条件对杂质3对照品溶液进行测定，以杂质3的峰面积为纵坐标，以样品浓度为横坐标，进行线性回归。在该色谱系统下，杂质3在0.10～20.20μg/ml浓度范围内线性关系良好，杂质3的定量限为1.01ng，检测限为0.30ng。
（2）色谱条件：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以（pH为1）的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 95 | 5 |
| 10 | 85 | 15 |
| 50 | 50 | 50 |
| 60 | 30 | 70 |
按上述色谱条件对杂质3对照品溶液进行测定，以杂质3的峰面积为纵坐标，以样品浓度为横坐标，进行线性回归。在该色谱系统下，杂质3在0.18～17.41μg/ml浓度范围内线性关系良好，杂质3的定量限为1.27ng，检测限为0.38ng。
（3）色谱条件：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以（pH为2）的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 40 | 40 | 60 |
| 50 | 30 | 70 |
| 65 | 90 | 10 |
按上述色谱条件对杂质3对照品溶液进行测定，以杂质3的峰面积为纵坐标，以样品浓度为横坐标，进行线性回归。在该色谱系统下，杂质3在0.45～25.41μg/ml浓度范围内线性关系良好，杂质3的定量限为1.31ng，检测限为0.39ng。
（4）色谱条件：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以（pH为3）的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 40 | 40 | 60 |
| 50 | 30 | 70 |
| 65 | 90 | 10 |
按上述色谱条件对杂质3对照品溶液进行测定，以杂质3的峰面积为纵坐标，以样品浓度为横坐标，进行线性回归。在该色谱系统下，杂质3在0.86μg/ml-20.26μg/ml浓度范围内线性关系良好，杂质3的定量限为1.91ng，检测限为0.57ng。
附图说明
图1为依据文献高效液相色谱实验条件检测来那度胺的色谱图；
图2为依据文献高效液相色谱实验条件检测来那度胺的峰纯度图；
图3为以水为A流动相，以乙腈为B流动相，梯度洗脱检测来那度胺的色谱图；
图4为以水为A流动相，以乙腈为B流动相，梯度洗脱检测来那度胺的峰纯度图；
图5为实施例3以pH为2.5的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，梯度洗脱检测来那度胺的色谱图；
图6为实施例3以pH为2.5的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，梯度洗脱检测杂质1的色谱图；
图7为实施例3以pH为2.5的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，梯度洗脱检测杂质2的色谱图；
图8为实施例3以pH为2.5的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，梯度洗脱检测杂质3的色谱图；
图9为实施例7以pH为2的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，梯度洗脱检测来那度胺的色谱图；
图10为实施例8以pH为2的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，梯度洗脱检测杂质3的色谱图；；
图11为实施例11以pH为1的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，梯度洗脱检测来那度胺的色谱图；
图12为实施例11以pH为1的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，梯度洗脱检测杂质1的色谱图；
图13为实施例11以pH为1的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，梯度洗脱检测杂质2的色谱图；
图14为实施例11以pH为1的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，梯度洗脱检测杂质3的色谱图；
图15为实施例15以pH为2.5的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，梯度洗脱检测来那度胺、杂质1、杂质2、杂质3混合溶液的色谱图。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明做进一步说明，但实施例并不限制本发明的保护范围。
实施例1
以自制来那度胺粗品及杂质1、杂质2、杂质3为待测样品。
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长210nm；柱温30℃；以（pH为1）的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 10 | 90 | 10 |
| 50 | 50 | 50 |
| 60 | 30 | 70 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺粗品适量置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为来那度胺供试品溶液；另取杂质1、杂质2、杂质3各适量，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为，分别作为杂质1、杂质2、杂质3供试品溶液。
测定法：分别取各供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺主峰、杂质峰和溶剂峰之间分离度较好，峰形对称。
实施例2
以自制来那度胺粗品及杂质1、杂质2、杂质3为待测样品。
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长220nm；柱温25℃；以（pH为2）的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 10 | 90 | 10 |
| 50 | 50 | 50 |
| 60 | 30 | 70 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺粗品适量置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为来那度胺供试品溶液；另取杂质1、杂质2、杂质3各适量，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为，分别作为杂质1、杂质2、杂质3供试品溶液。
测定法：分别取各供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺主峰、杂质峰和溶剂峰之间分离度较好，峰形对称。
实施例3
以自制来那度胺粗品及杂质1、杂质2、杂质3为待测样品。
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长220nm；柱温25℃；以（pH为2.5）的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 10 | 90 | 10 |
| 50 | 50 | 50 |
| 60 | 30 | 70 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺粗品适量置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为来那度胺供试品溶液；另取杂质1、杂质2、杂质3各适量，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为，分别作为杂质1、杂质2、杂质3供试品溶液。
测定法：分别取各供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图，其中来那度胺色谱图见附图图5、杂质1色谱图见附图图6、杂质2色谱图见附图图7、杂质3色谱图见附图图8。
检测结果表明来那度胺主峰、杂质峰和溶剂峰之间分离度较好，峰形对称。
实施例4
以自制来那度胺粗品及杂质1、杂质2、杂质3为待测样品。
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长220nm；柱温25℃；以（pH为3）的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 10 | 90 | 10 |
| 50 | 50 | 50 |
| 60 | 30 | 70 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺粗品适量置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为来那度胺供试品溶液；另取杂质1、杂质2、杂质3各适量，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为，分别作为杂质1、杂质2、杂质3供试品溶液。
测定法：分别取各供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺主峰、杂质峰和溶剂峰之间分离度较好，峰形对称。
实施例5
以自制来那度胺粗品及杂质1、杂质2、杂质3为待测样品。
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长230nm；柱温30℃；以（pH为5）的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 10 | 90 | 10 |
| 50 | 50 | 50 |
| 60 | 30 | 70 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺粗品适量置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为来那度胺供试品溶液；另取杂质1、杂质2、杂质3各适量，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为，分别作为杂质1、杂质2、杂质3供试品溶液。
测定法：分别取各供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺主峰、杂质峰和溶剂峰之间分离度较好，峰形对称。
实施例6
以自制来那度胺粗品为分析样品
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长220nm；柱温25℃；以（pH为1.0）的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 40 | 40 | 60 |
| 50 | 25 | 75 |
| 55 | 90 | 10 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺粗品适量置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
测定法：取供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺峰形对称，与杂质分离度较好。
实施例7
以自制来那度胺粗品为分析样品
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长220nm；柱温25℃；以（pH为2）的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 40 | 40 | 60 |
| 50 | 25 | 75 |
| 55 | 90 | 10 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺粗品适量置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；
测定法：取供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图，供试品色谱图见附图图9。
检测结果表明来那度胺峰形对称，与杂质分离度较好。
实施例8
以杂质3为分析样品
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长220nm；柱温25℃；以（pH为2）的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 40 | 40 | 60 |
| 50 | 25 | 75 |
| 55 | 90 | 10 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取杂质3适量置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；
测定法：取供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图，供试品色谱图见附图图10。
检测结果表明杂质峰形对称，保留时间适中。
实施例9
以自制来那度胺粗品为分析样品
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长220nm；柱温25℃；以（pH为2.5）的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 40 | 40 | 60 |
| 50 | 25 | 75 |
| 55 | 90 | 10 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺适量置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
测定法：取供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺峰形对称，与杂质分离度较好。
实施例10
以自制来那度胺粗品为分析样品
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长220nm；柱温30℃；以（pH为5）的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 40 | 40 | 60 |
| 50 | 25 | 75 |
| 55 | 90 | 10 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺适量置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
测定法：取供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺峰形对称，与杂质分离度较好。
实施例11
以自制来那度胺粗品及杂质1、杂质2、杂质3为待测样品。
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长210nm；柱温30℃；以（pH为1）的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 40 | 40 | 60 |
| 50 | 30 | 70 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺粗品适量置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为来那度胺供试品溶液；另取杂质1、杂质2、杂质3各适量，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为，分别作为杂质1、杂质2、杂质3供试品溶液。
测定法：分别取各供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图，其中来那度胺色谱图见附图图11、杂质1色谱图见附图图12、杂质2色谱图见附图图13、杂质3色谱图见附图图14。
检测结果表明来那度胺主峰、杂质峰和溶剂峰之间分离度较好，峰形对称。
实施例12
以自制来那度胺粗品及杂质1、杂质2、杂质3为待测样品。
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长220nm；柱温25℃；以（pH为2）的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 40 | 40 | 60 |
| 50 | 30 | 70 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺粗品适量置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为来那度胺供试品溶液；另取杂质1、杂质2、杂质3各适量，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为，分别作为杂质1、杂质2、杂质3供试品溶液。
测定法：分别取各供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺主峰、杂质峰和溶剂峰之间分离度较好，峰形对称。
实施例13
以自制来那度胺粗品及杂质1、杂质2、杂质3为待测样品。
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长220nm；柱温25℃；以（pH为2.5）的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 40 | 40 | 60 |
| 50 | 30 | 70 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺粗品适量置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为来那度胺供试品溶液；另取杂质1、杂质2、杂质3各适量，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为，分别作为杂质1、杂质2、杂质3供试品溶液。
测定法：分别取各供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺主峰、杂质峰和溶剂峰之间分离度较好，峰形对称。
实施例14
以自制来那度胺粗品及杂质1、杂质2、杂质3为待测样品。
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长220nm；柱温25℃；以（pH为3）的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 40 | 40 | 60 |
| 50 | 30 | 70 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺粗品适量置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为来那度胺供试品溶液；另取杂质1、杂质2、杂质3各适量，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为，分别作为杂质1、杂质2、杂质3供试品溶液。
测定法：分别取各供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺主峰、杂质峰和溶剂峰之间分离度较好，峰形对称。
实施例15
以自制来那度胺粗品及杂质1、杂质2、杂质3为待测样品。
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长230nm；柱温30℃；以（pH为5）的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 40 | 40 | 60 |
| 50 | 30 | 70 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺粗品适量置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为来那度胺供试品溶液；另取杂质1、杂质2、杂质3各适量，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为，分别作为杂质1、杂质2、杂质3供试品溶液。
测定法：分别取各供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺主峰、杂质峰和溶剂峰之间分离度较好，峰形对称。
实施例16
以自制来那度胺粗品及杂质1、杂质2、杂质3为待测样品。
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长210nm；柱温30℃；以（pH为1）的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 30 | 70 | 30 |
| 40 | 50 | 50 |
| 50 | 30 | 70 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺粗品适量置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为来那度胺供试品溶液；另取杂质1、杂质2、杂质3各适量，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为，分别作为杂质1、杂质2、杂质3供试品溶液。
测定法：分别取各供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺主峰、杂质峰和溶剂峰之间分离度较好，峰形对称。
实施例17
以自制来那度胺粗品及杂质1、杂质2、杂质3为待测样品。
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长220nm；柱温25℃；以（pH为2）的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 30 | 70 | 30 |
| 40 | 50 | 50 |
| 50 | 30 | 70 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺粗品适量置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为来那度胺供试品溶液；另取杂质1、杂质2、杂质3各适量，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为，分别作为杂质1、杂质2、杂质3供试品溶液。
测定法：分别取各供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺主峰、杂质峰和溶剂峰之间分离度较好，峰形对称。
实施例18
以自制来那度胺粗品及杂质1、杂质2、杂质3为待测样品。
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长220nm；柱温25℃；以（pH为2.5）的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 30 | 70 | 30 |
| 40 | 50 | 50 |
| 50 | 30 | 70 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺粗品适量置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为来那度胺供试品溶液；另取杂质1、杂质2、杂质3各适量，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为，分别作为杂质1、杂质2、杂质3供试品溶液。
测定法：分别取各供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺主峰、杂质峰和溶剂峰之间分离度较好，峰形对称。
实施例19
以自制来那度胺粗品及杂质1、杂质2、杂质3为待测样品。
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长220nm；柱温25℃；以（pH为3）的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 30 | 70 | 30 |
| 40 | 50 | 50 |
| 50 | 30 | 70 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺粗品适量置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为来那度胺供试品溶液；另取杂质1、杂质2、杂质3各适量，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为，分别作为杂质1、杂质2、杂质3供试品溶液。
测定法：分别取各供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺主峰、杂质峰和溶剂峰之间分离度较好，峰形对称。
实施例20
以自制来那度胺粗品及杂质1、杂质2、杂质3为待测样品。
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长230nm；柱温30℃；以（pH为5）的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 30 | 70 | 30 |
| 40 | 50 | 50 |
| 50 | 30 | 70 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺粗品适量置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为来那度胺供试品溶液；另取杂质1、杂质2、杂质3各适量，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为，分别作为杂质1、杂质2、杂质3供试品溶液。
测定法：分别取各供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺主峰、杂质峰和溶剂峰之间分离度较好，峰形对称。
实施例21
以自制来那度胺胶囊为分析样品
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长220nm；柱温25℃；以（pH为2.5）的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 10 | 90 | 10 |
| 50 | 50 | 50 |
| 60 | 30 | 70 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺胶囊装量差异项下的内容物，混合均匀，适量称取置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
测定法：分别取各供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺主峰、杂质峰和溶剂峰之间分离度较好，峰形对称。
实施例22
以自制来那度胺胶囊为分析样品
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长220nm；柱温25℃；以（pH为2.5）的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 40 | 40 | 60 |
| 50 | 20 | 80 |
| 55 | 90 | 10 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺胶囊装量差异项下的内容物，混合均匀，适量称取置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
测定法：取供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺峰形对称，与杂质分离度较好。
实施例23
以自制来那度胺胶囊为分析样品
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长220nm；柱温25℃；以（pH为2.5）的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 40 | 40 | 60 |
| 50 | 30 | 70 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺胶囊装量差异项下的内容物，混合均匀，适量称取置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
测定法：分别取各供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺主峰、杂质峰和溶剂峰之间分离度较好，峰形对称。
实施例24
以自制来那度胺胶囊为分析样品
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长220nm；柱温25℃；以（pH为2.5）的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 30 | 70 | 30 |
| 40 | 50 | 50 |
| 50 | 30 | 70 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺胶囊装量差异项下的内容物，混合均匀，适量称取置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
测定法：取供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺主峰、杂质峰和溶剂峰之间分离度较好，峰形对称。
实施例25
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长220nm；柱温25℃；以（pH为2.5）的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 10 | 90 | 10 |
| 50 | 50 | 50 |
| 60 | 30 | 70 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺、杂质1、杂质2、杂质3各约5mg，混合均匀，置同一容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
测定法：取供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图，供试品色谱图如图15所示。
检测结果表明来那度胺主峰、杂质峰和溶剂峰之间分离度较好，峰形对称。
实施例26
以自制来那度胺粗品及杂质1、杂质2、杂质3为待测样品。
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长210nm；柱温30℃；以（pH为1）的乙酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 10 | 90 | 10 |
| 50 | 50 | 50 |
| 60 | 30 | 70 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺粗品适量置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为来那度胺供试品溶液；另取杂质1、杂质2、杂质3各适量，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为，分别作为杂质1、杂质2、杂质3供试品溶液。
测定法：分别取各供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺主峰、杂质峰和溶剂峰之间分离度较好，峰形对称。
实施例27
以自制来那度胺粗品及杂质1、杂质2、杂质3为待测样品。
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长220nm；柱温25℃；以（pH为2）的乙酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 10 | 90 | 10 |
| 50 | 50 | 50 |
| 60 | 30 | 70 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺粗品适量置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为来那度胺供试品溶液；另取杂质1、杂质2、杂质3各适量，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为，分别作为杂质1、杂质2、杂质3供试品溶液。
测定法：分别取各供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺主峰、杂质峰和溶剂峰之间分离度较好，峰形对称。
实施例28
以自制来那度胺粗品及杂质1、杂质2、杂质3为待测样品。
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长220nm；柱温25℃；以（pH为2.5）的三氟乙酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 10 | 90 | 10 |
| 50 | 50 | 50 |
| 60 | 30 | 70 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺粗品适量置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为来那度胺供试品溶液；另取杂质1、杂质2、杂质3各适量，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为，分别作为杂质1、杂质2、杂质3供试品溶液。
测定法：分别取各供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺主峰、杂质峰和溶剂峰之间分离度较好，峰形对称。
实施例29
以自制来那度胺粗品及杂质1、杂质2、杂质3为待测样品。
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长220nm；柱温25℃；以（pH为3）的甲酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 10 | 90 | 10 |
| 50 | 50 | 50 |
| 60 | 30 | 70 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺粗品适量置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为来那度胺供试品溶液；另取杂质1、杂质2、杂质3各适量，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为，分别作为杂质1、杂质2、杂质3供试品溶液。
测定法：分别取各供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺主峰、杂质峰和溶剂峰之间分离度较好，峰形对称。
实施例30
以自制来那度胺粗品及杂质1、杂质2、杂质3为待测样品。
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长230nm；柱温30℃；以（pH为5）的高氯酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 10 | 90 | 10 |
| 50 | 50 | 50 |
| 60 | 30 | 70 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺粗品适量置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为来那度胺供试品溶液；另取杂质1、杂质2、杂质3各适量，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为，分别作为杂质1、杂质2、杂质3供试品溶液。
测定法：分别取各供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺主峰、杂质峰和溶剂峰之间分离度较好，峰形对称。
实施例31
以自制来那度胺粗品为分析样品
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长220nm；柱温25℃；以（pH为1.0）的高氯酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 40 | 40 | 60 |
| 50 | 25 | 75 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺粗品适量置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
测定法：取供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺峰形对称，与杂质分离度较好。
实施例32
以自制来那度胺粗品为分析样品
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长220nm；柱温25℃；以（pH为2）的三氟乙酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 40 | 40 | 60 |
| 50 | 25 | 75 |
| 55 | 90 | 10 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺粗品适量置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；
测定法：取供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺峰形对称，与杂质分离度较好。
实施例33
以杂质3为分析样品
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长220nm；柱温25℃；以（pH为2）的乙酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 40 | 40 | 60 |
| 50 | 25 | 75 |
| 55 | 90 | 10 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取杂质3适量置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；
测定法：取供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺峰形对称，与杂质分离度较好。
实施例34
以自制来那度胺粗品为分析样品
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长220nm；柱温25℃；以（pH为2.5）的甲酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 40 | 40 | 60 |
| 50 | 25 | 75 |
| 55 | 90 | 10 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺适量置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
测定法：取供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺峰形对称，与杂质分离度较好。
实施例35
以自制来那度胺粗品为分析样品
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长220nm；柱温30℃；以（pH为5）的三氟乙酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 40 | 40 | 60 |
| 50 | 25 | 75 |
| 55 | 90 | 10 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺适量置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
测定法：取供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺峰形对称，与杂质分离度较好。
实施例36
以自制来那度胺粗品及杂质1、杂质2、杂质3为待测样品。
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长210nm；柱温30℃；以（pH为1）的甲酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 40 | 40 | 60 |
| 50 | 30 | 70 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺粗品适量置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为来那度胺供试品溶液；另取杂质1、杂质2、杂质3各适量，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为，分别作为杂质1、杂质2、杂质3供试品溶液。
测定法：分别取各供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺主峰、杂质峰和溶剂峰之间分离度较好，峰形对称。
实施例37
以自制来那度胺粗品及杂质1、杂质2、杂质3为待测样品。
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长220nm；柱温25℃；以（pH为2）的乙酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 40 | 40 | 60 |
| 50 | 30 | 70 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺粗品适量置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为来那度胺供试品溶液；另取杂质1、杂质2、杂质3各适量，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为，分别作为杂质1、杂质2、杂质3供试品溶液。
测定法：分别取各供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺主峰、杂质峰和溶剂峰之间分离度较好，峰形对称。
实施例38
以自制来那度胺粗品及杂质1、杂质2、杂质3为待测样品。
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长220nm；柱温25℃；以（pH为2.5）的三氟乙酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 40 | 40 | 60 |
| 50 | 30 | 70 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺粗品适量置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为来那度胺供试品溶液；另取杂质1、杂质2、杂质3各适量，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为，分别作为杂质1、杂质2、杂质3供试品溶液。
测定法：分别取各供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺主峰、杂质峰和溶剂峰之间分离度较好，峰形对称。
实施例39
以自制来那度胺粗品及杂质1、杂质2、杂质3为待测样品。
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长220nm；柱温25℃；以（pH为3）的高氯酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 40 | 40 | 60 |
| 50 | 30 | 70 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺粗品适量置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为来那度胺供试品溶液；另取杂质1、杂质2、杂质3各适量，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为，分别作为杂质1、杂质2、杂质3供试品溶液。
测定法：分别取各供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺主峰、杂质峰和溶剂峰之间分离度较好，峰形对称。
实施例40
以自制来那度胺粗品及杂质1、杂质2、杂质3为待测样品。
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长230nm；柱温30℃；以（pH为5）的甲酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 40 | 40 | 60 |
| 50 | 30 | 70 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺粗品适量置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为来那度胺供试品溶液；另取杂质1、杂质2、杂质3各适量，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为，分别作为杂质1、杂质2、杂质3供试品溶液。
测定法：分别取各供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺主峰、杂质峰和溶剂峰之间分离度较好，峰形对称。
实施例41
以自制来那度胺粗品及杂质1、杂质2、杂质3为待测样品。
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长210nm；柱温30℃；以（pH为1）的高氯酸酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 30 | 70 | 30 |
| 40 | 50 | 50 |
| 50 | 30 | 70 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺粗品适量置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为来那度胺供试品溶液；另取杂质1、杂质2、杂质3各适量，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为，分别作为杂质1、杂质2、杂质3供试品溶液。
测定法：分别取各供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺主峰、杂质峰和溶剂峰之间分离度较好，峰形对称。
实施例42
以自制来那度胺粗品及杂质1、杂质2、杂质3为待测样品。
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长220nm；柱温25℃；以（pH为2）的三氟乙酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 30 | 70 | 30 |
| 40 | 50 | 50 |
| 50 | 30 | 70 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺粗品适量置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为来那度胺供试品溶液；另取杂质1、杂质2、杂质3各适量，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为，分别作为杂质1、杂质2、杂质3供试品溶液。
测定法：分别取各供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺主峰、杂质峰和溶剂峰之间分离度较好，峰形对称。
实施例43
以自制来那度胺粗品及杂质1、杂质2、杂质3为待测样品。
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长220nm；柱温25℃；以（pH为2.5）的甲酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 30 | 70 | 30 |
| 40 | 50 | 50 |
| 50 | 30 | 70 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺粗品适量置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为来那度胺供试品溶液；另取杂质1、杂质2、杂质3各适量，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为，分别作为杂质1、杂质2、杂质3供试品溶液。
测定法：分别取各供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺主峰、杂质峰和溶剂峰之间分离度较好，峰形对称。
实施例44
以自制来那度胺粗品及杂质1、杂质2、杂质3为待测样品。
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长220nm；柱温25℃；以（pH为3）的乙酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 30 | 70 | 30 |
| 40 | 50 | 50 |
| 50 | 30 | 70 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺粗品适量置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为来那度胺供试品溶液；另取杂质1、杂质2、杂质3各适量，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为，分别作为杂质1、杂质2、杂质3供试品溶液。
测定法：分别取各供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺主峰、杂质峰和溶剂峰之间分离度较好，峰形对称。
实施例45
以自制来那度胺粗品及杂质1、杂质2、杂质3为待测样品。
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长230nm；柱温30℃；以（pH为5）的高氯酸酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 30 | 70 | 30 |
| 40 | 50 | 50 |
| 50 | 30 | 70 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺粗品适量置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为来那度胺供试品溶液；另取杂质1、杂质2、杂质3各适量，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为，分别作为杂质1、杂质2、杂质3供试品溶液。
测定法：分别取各供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺主峰、杂质峰和溶剂峰之间分离度较好，峰形对称。
实施例46
以自制来那度胺胶囊为分析样品
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长220nm；柱温25℃；以（pH为2.5）的乙酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 10 | 90 | 10 |
| 50 | 50 | 50 |
| 60 | 30 | 70 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺胶囊装量差异项下的内容物，混合均匀，适量称取置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
测定法：分别取各供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺主峰、杂质峰和溶剂峰之间分离度较好，峰形对称。
实施例47
以自制来那度胺胶囊为分析样品
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长220nm；柱温25℃；以（pH为2.5）的甲酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 40 | 40 | 60 |
| 50 | 25 | 75 |
| 55 | 90 | 10 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺胶囊装量差异项下的内容物，混合均匀，适量称取置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
测定法：取供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺峰形对称，与杂质分离度较好。
实施例48
以自制来那度胺胶囊为分析样品
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长220nm；柱温25℃；以（pH为2.5）的三氟乙酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 40 | 40 | 60 |
| 50 | 30 | 70 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺胶囊装量差异项下的内容物，混合均匀，适量称取置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
测定法：分别取各供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺主峰、杂质峰和溶剂峰之间分离度较好，峰形对称。
实施例49
以自制来那度胺胶囊为分析样品
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长220nm；柱温25℃；以（pH为2.5）的高氯酸酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 30 | 70 | 30 |
| 40 | 50 | 50 |
| 50 | 30 | 70 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺胶囊装量差异项下的内容物，混合均匀，适量称取置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
测定法：取供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺主峰、杂质峰和溶剂峰之间分离度较好，峰形对称。实施例50以自制来那度胺粗品及杂质1、杂质2、杂质3为待测样品。
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长220nm；柱温30℃；以（pH为1）的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 10 | 90 | 10 |
| 30 | 70 | 30 |
| 50 | 50 | 50 |
| 60 | 30 | 70 |
样品溶液的配置：取来那度胺粗品适量置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为来那度胺供试品溶液；另取杂质1、杂质2、杂质3各适量，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为，分别作为杂质1、杂质2、杂质3供试品溶液。
测定法：分别取各供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺主峰、杂质峰和溶剂峰之间分离度较好，峰形对称。
实施例51
以自制来那度胺粗品及杂质1、杂质2、杂质3为待测样品。
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长220nm；柱温25℃；以（pH为2）的乙酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 95 | 5 |
| 10 | 95 | 5 |
| 30 | 70 | 25 |
| 50 | 50 | 50 |
| 60 | 25 | 75 |
| 75 | 95 | 5 |
样品溶液的配置：取来那度胺粗品适量置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为来那度胺供试品溶液；另取杂质1、杂质2、杂质3各适量，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为，分别作为杂质1、杂质2、杂质3供试品溶液。
测定法：分别取各供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺主峰、杂质峰和溶剂峰之间分离度较好，峰形对称。
实施例52
以自制来那度胺粗品及杂质1、杂质2、杂质3为待测样品。
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长220nm；柱温25℃；以（pH为2.5）的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 85 | 15 |
| 10 | 85 | 15 |
| 40 | 65 | 35 |
| 50 | 50 | 50 |
| 60 | 35 | 65 |
| 75 | 85 | 15 |
样品溶液的配置：取来那度胺粗品适量置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为来那度胺供试品溶液；另取杂质1、杂质2、杂质3各适量，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为，分别作为杂质1、杂质2、杂质3供试品溶液。
测定法：分别取各供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺主峰、杂质峰和溶剂峰之间分离度较好，峰形对称。
实施例53
以自制来那度胺粗品及杂质1、杂质2、杂质3为待测样品。
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长220nm；柱温25℃；以（pH为3）的三氟乙酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 85 | 15 |
| 10 | 85 | 15 |
| 40 | 65 | 35 |
| 50 | 50 | 50 |
| 60 | 35 | 65 |
样品溶液的配置：取来那度胺粗品适量置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为来那度胺供试品溶液；另取杂质1、杂质2、杂质3各适量，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为，分别作为杂质1、杂质2、杂质3供试品溶液。
测定法：分别取各供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺主峰、杂质峰和溶剂峰之间分离度较好，峰形对称。
实施例54
以自制来那度胺粗品及杂质1、杂质2、杂质3为待测样品。
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长230nm；柱温30℃；以（pH为5）的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 95 | 5 |
| 10 | 90 | 10 |
| 30 | 70 | 30 |
| 50 | 50 | 50 |
| 60 | 30 | 70 |
| 70 | 95 | 5 |
样品溶液的配置：取来那度胺粗品适量置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为来那度胺供试品溶液；另取杂质1、杂质2、杂质3各适量，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为，分别作为杂质1、杂质2、杂质3供试品溶液。
测定法：分别取各供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺主峰、杂质峰和溶剂峰之间分离度较好，峰形对称。
实施例55
以自制来那度胺粗品为分析样品
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长220nm；柱温25℃；以（pH为1.0）的甲酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 95 | 5 |
| 40 | 40 | 60 |
| 50 | 25 | 75 |
| 55 | 95 | 5 |
| 70 | 95 | 5 |
样品溶液的配置：取来那度胺粗品适量置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
测定法：取供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺峰形对称，与杂质分离度较好。
实施例56
以自制来那度胺粗品为分析样品
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长220nm；柱温25℃；以（pH为2）的高氯酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 95 | 5 |
| 40 | 40 | 60 |
| 50 | 25 | 75 |
| 55 | 95 | 5 |
| 70 | 95 | 5 |
样品溶液的配置：取来那度胺粗品适量置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；
测定法：取供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺峰形对称，与杂质分离度较好。
实施例57
以自制来那度胺粗品为分析样品
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长220nm；柱温30℃；以（pH为5）的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 40 | 40 | 60 |
| 50 | 35 | 65 |
| 55 | 90 | 10 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺适量置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
测定法：取供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺峰形对称，与杂质分离度较好。
实施例58
以自制来那度胺粗品及杂质1、杂质2、杂质3为待测样品。
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长220nm；柱温25℃；以（pH为2）的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 40 | 40 | 60 |
| 50 | 25 | 75 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺粗品适量置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为来那度胺供试品溶液；另取杂质1、杂质2、杂质3各适量，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为，分别作为杂质1、杂质2、杂质3供试品溶液。
测定法：分别取各供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺主峰、杂质峰和溶剂峰之间分离度较好，峰形对称。
实施例59
以自制来那度胺粗品及杂质1、杂质2、杂质3为待测样品。
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长220nm；柱温25℃；以（pH为2.5）的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 40 | 40 | 60 |
| 50 | 35 | 65 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺粗品适量置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为来那度胺供试品溶液；另取杂质1、杂质2、杂质3各适量，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为，分别作为杂质1、杂质2、杂质3供试品溶液。
测定法：分别取各供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺主峰、杂质峰和溶剂峰之间分离度较好，峰形对称。
实施例60
以自制来那度胺粗品及杂质1、杂质2、杂质3为待测样品。
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长230nm；柱温30℃；以（pH为5）的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 40 | 40 | 60 |
| 50 | 35 | 65 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺粗品适量置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为来那度胺供试品溶液；另取杂质1、杂质2、杂质3各适量，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为，分别作为杂质1、杂质2、杂质3供试品溶液。
测定法：分别取各供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺主峰、杂质峰和溶剂峰之间分离度较好，峰形对称。
实施例61
以自制来那度胺粗品及杂质1、杂质2、杂质3为待测样品。
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长210nm；柱温30℃；以（pH为1）的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 30 | 70 | 30 |
| 40 | 50 | 50 |
| 50 | 25 | 75 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺粗品适量置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为来那度胺供试品溶液；另取杂质1、杂质2、杂质3各适量，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为，分别作为杂质1、杂质2、杂质3供试品溶液。
测定法：分别取各供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺主峰、杂质峰和溶剂峰之间分离度较好，峰形对称。
实施例62
以自制来那度胺粗品及杂质1、杂质2、杂质3为待测样品。
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长220nm；柱温25℃；以（pH为2）的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 30 | 70 | 30 |
| 40 | 50 | 50 |
| 50 | 25 | 75 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺粗品适量置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为来那度胺供试品溶液；另取杂质1、杂质2、杂质3各适量，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为，分别作为杂质1、杂质2、杂质3供试品溶液。
测定法：分别取各供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺主峰、杂质峰和溶剂峰之间分离度较好，峰形对称。
实施例63
以自制来那度胺粗品及杂质1、杂质2、杂质3为待测样品。
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长220nm；柱温25℃；以（pH为2.5）的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 30 | 70 | 30 |
| 40 | 50 | 50 |
| 50 | 25 | 75 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺粗品适量置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为来那度胺供试品溶液；另取杂质1、杂质2、杂质3各适量，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为，分别作为杂质1、杂质2、杂质3供试品溶液。
测定法：分别取各供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺主峰、杂质峰和溶剂峰之间分离度较好，峰形对称。
实施例64
以自制来那度胺粗品及杂质1、杂质2、杂质3为待测样品。
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长220nm；柱温25℃；以（pH为3）的甲酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 30 | 70 | 30 |
| 40 | 50 | 50 |
| 50 | 25 | 75 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺粗品适量置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为来那度胺供试品溶液；另取杂质1、杂质2、杂质3各适量，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为，分别作为杂质1、杂质2、杂质3供试品溶液。
测定法：分别取各供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺主峰、杂质峰和溶剂峰之间分离度较好，峰形对称。
实施例65
以自制来那度胺粗品及杂质1、杂质2、杂质3为待测样品。
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长230nm；柱温30℃；以（pH为5）的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 90 | 10 |
| 30 | 70 | 30 |
| 40 | 50 | 50 |
| 50 | 25 | 75 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺粗品适量置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为来那度胺供试品溶液；另取杂质1、杂质2、杂质3各适量，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为，分别作为杂质1、杂质2、杂质3供试品溶液。
测定法：分别取各供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺主峰、杂质峰和溶剂峰之间分离度较好，峰形对称。
实施例66
以自制来那度胺胶囊为分析样品
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长220nm；柱温25℃；以（pH为2.5）的高氯酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 95 | 5 |
| 10 | 95 | 5 |
| 50 | 50 | 50 |
| 60 | 30 | 70 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺胶囊装量差异项下的内容物，混合均匀，适量称取置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
测定法：分别取各供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺主峰、杂质峰和溶剂峰之间分离度较好，峰形对称。
实施例67
以自制来那度胺胶囊为分析样品
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长220nm；柱温25℃；以（pH为2.5）的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 85 | 15 |
| 40 | 40 | 60 |
| 50 | 25 | 75 |
| 55 | 90 | 10 |
| 70 | 90 | 10 |
样品溶液的配置：取来那度胺胶囊装量差异项下的内容物，混合均匀，适量称取置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
测定法：取供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺峰形对称，与杂质分离度较好。
实施例68
以自制来那度胺胶囊为分析样品
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长220nm；柱温25℃；以（pH为2.5）的三氟乙酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 88 | 12 |
| 40 | 40 | 60 |
| 50 | 28 | 72 |
| 70 | 88 | 12 |
样品溶液的配置：取来那度胺胶囊装量差异项下的内容物，混合均匀，适量称取置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
测定法：分别取各供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺主峰、杂质峰和溶剂峰之间分离度较好，峰形对称。
实施例69
以自制来那度胺胶囊为分析样品
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长220nm；柱温25℃；以（pH为2.5）的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 85 | 15 |
| 30 | 70 | 30 |
| 40 | 50 | 50 |
| 50 | 35 | 65 |
| 70 | 85 | 15 |
样品溶液的配置：取来那度胺胶囊装量差异项下的内容物，混合均匀，适量称取置容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
测定法：取供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺主峰、杂质峰和溶剂峰之间分离度较好，峰形对称。
实施例70
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长220nm；柱温25℃；以（pH为2.5）的乙酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：
| 时间（分钟） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 95 | 5 |
| 10 | 95 | 5 |
| 50 | 50 | 50 |
| 60 | 25 | 75 |
| 70 | 95 | 5 |
样品溶液的配置：取来那度胺、杂质1、杂质2、杂质3各约5mg，混合均匀，置同一容量瓶中，加乙腈-水（50:50）溶液溶解，并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
测定法：取供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图。
检测结果表明来那度胺主峰、杂质峰和溶剂峰之间分离度较好，峰形对称。
Claims (16)
1.一种来那度胺及其制剂的含量测定和杂质测定的高效液相色谱法，其特征在于十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以pH1～5的磷酸缓冲溶液为A流动相，以乙腈为B流动相，其中A流动相与B流动相的梯度洗脱程序为：用50～60分钟的时间A流动相与B流动相的体积比从95～85:5～15逐渐降至25～35:75～65。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述梯度洗脱程序为：用50～60分钟的时间A流动相与B流动相的体积比从90:10逐渐降至30:70。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述梯度洗脱程序为：首先在开始的0～10分钟的内A流动相与B流动相的体积比保持在95～85:5～15范围内；再在随后的40～50分钟内A流动相与B流动相的体积比从95～85:5～15递减至25～35:75～65。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于所述梯度洗脱程序为：首先在开始的0～10分钟的内A流动相与B流动相的体积比保持在90:10；再在随后的40～50分钟内A流动相与B流动相的体积比从90:10递减至30:70。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于优选按以下程序进行梯度洗脱：
6.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于在所述的50～60分钟的时间之后，再继续洗脱10～20分钟，该过程中A流动相与B流动相的体积比例范围从25～35:75～65逐渐增至95～85:5～15。
7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于在所述的随后的40～50分钟之后，再继续洗脱10～20分钟，该过程中A流动相与B流动相的体积比例范围从25～35:75～65逐渐增至95～85:5～15。
8.根据权利要求4所述的方法，其特征在于在所述的随后的40～50分钟之后，再继续洗脱10～20分钟，该过程中A流动相与B流动相的体积比例范围从30:70逐渐增至90:10。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于优选按以下程序进行梯度洗脱：
10.根据权利要求1、2、3、4、5、7、8或9所述的方法，其特征在于所述的磷酸缓冲溶液的pH值优选2～3。
11.根据权利要求6所述的方法，其特征在于所述的磷酸缓冲溶液的pH值优选2～3。
12.根据权利要求10所述的方法，其特征在于所述的磷酸缓冲溶液的pH值优选2.5。
13.根据权利要求11所述的方法，其特征在于所述的磷酸缓冲溶液的pH值优选2.5。
14.根据权利要求1、2、3、4、5、7、8、9、11、12或13所述的方法，其特征在于所述的磷酸缓冲溶液可以用乙酸、甲酸、高氯酸、三氟乙酸缓冲溶液代替。
15.根据权利要求6所述的方法，其特征在于所述的磷酸缓冲溶液可以用乙酸、甲酸、高氯酸、三氟乙酸缓冲溶液代替。
16.根据权利要求10所述的方法，其特征在于所述的磷酸缓冲溶液可以用乙酸、甲酸、高氯酸、三氟乙酸缓冲溶液代替。
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