CN109212093A - 一种盐酸缬更昔洛韦中间体缩合物异构体的hplc检测方法 - Google Patents
一种盐酸缬更昔洛韦中间体缩合物异构体的hplc检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN109212093A CN109212093A CN201811269753.7A CN201811269753A CN109212093A CN 109212093 A CN109212093 A CN 109212093A CN 201811269753 A CN201811269753 A CN 201811269753A CN 109212093 A CN109212093 A CN 109212093A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- condensation product
- valganciclovir hydrochloride
- isomers
- hydrochloride intermediate
- detection method
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
Abstract
本发明属于药物分析领域,具体公开了一种盐酸缬更昔洛韦中间体缩合物对映异构体的HPLC检测方法,该方法使用以纤维素‑三(4‑氯‑3‑甲基苯基氨基甲酸酯)涂覆硅胶为填充剂的手性色谱柱,并以水和腈类混合溶液作为流动相,柱温为10~20℃,流速为0.4~0.6ml/min,波长为250~260nm。本发明实现了对盐酸缬更昔洛韦中间体缩合物四种异构体的有效分离,检测结果准确性好、灵敏度高、操作简便、成本低,分析时间短,为盐酸缬更昔洛韦中间体缩合物的质量控制提供了保障。
Description
技术领域
本发明属于药物分析领域,具体涉及一种盐酸缬更昔洛韦中间体缩合物异构体的HPLC检测方法。
背景技术
盐酸缬更昔洛韦是一种疱疹病毒DNA的合成抑制剂,由瑞士Roche公司研发,2010年在瑞典和芬兰作为处方药首次上市,用于治疗获得性免疫缺陷综合症(AIDS)患者的巨细胞病毒(CMV)视网膜炎及预防高危实体器官移植患者的CMV感染。2001年3月获准美国FDA许可,2001年5月首次在美国上市销售。国内外的多项研究显示,盐酸缬更昔洛韦片药理作用明显,作用机制较新颖,毒性低,不良反应少,临床疗效显著,患者顺应性高,应用安全。
中间体缩合物是盐酸缬更昔洛韦合成过程中的关键中间体,中文化学名称为3-乙酰氧基-2-((2-氨基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基)甲氧基)丙基2-((苄基氧基)羰基)氨基-3-甲基丁酸酯,英文名称为2-Benzyloxycarbonylamino-3-methyl-butyric acid 3-acetoxy-2-(2-amino-6-oxo-1,6-dihydro-purin-9-ylmethoxy)-propyl ester,分子量为530.2,中间体缩合物及其对映异构体的结构式见表1。中间体缩合物的生成是手性中心生成的步骤,属于质量控制的关键步骤,中间体缩合物经过水解、氢化、成盐后即可得到盐酸缬更昔洛韦。对于盐酸缬更昔洛韦,目前美国药典中规定其非对映异构体比例范围为45:55~55:45,其对映异构体的含量不得超过3.0%,所以在合成过程中,开发具有专属性的方法来检测中间体缩合物四种异构体构型的纯度,并制定合理可行的非对映异构体比例范围和对映异构体杂质限度,是中间体缩合物质量控制的重要部分,也是保证盐酸缬更昔洛韦及其制剂产品质量的重要部分。
表1中间体缩合物及其对映异构体结构式
通过查阅大量中外专利与非专利文献,目前还没有采用手性色谱柱高效液相色谱的方法来检测中间体缩合物四种异构体纯度的文献报道,不利于企业对产品质量的把控。
发明内容
为了解决目前存在的技术问题,本发明通过大量理论调研和实验探索,提供了一种分离分析盐酸缬更昔洛韦中间体缩合物四种手性构型的方法,从而更好地控制盐酸缬更昔洛韦产品质量。
本发明提供的技术方案是:
一种盐酸缬更昔洛韦中间体缩合物异构体的HPLC检测方法:采用以纤维素-三(4-氯-3-甲基苯基氨基甲酸酯)涂覆硅胶为填充剂的手性色谱柱,以水和腈类化合物的混合溶液作为流动相对盐酸缬更昔洛韦中间体缩合物四种手性构型进行分离测定,所述HPLC检测采用如下的色谱条件:
流动相流速为0.4~0.6ml/min,
色谱柱温度为10~20℃,
检测器采用紫外检测器,检测波长为250~260nm。
优选地,所述色谱柱为OX-3R 4.6*150mm,填充剂粒径为3μm。
优选地,所述流动相中,腈类化合物体积占流动相总体积的30~40%,最佳为37%。
优选地,所述腈类化合物为乙腈。
优选地,所述色谱柱温度为15℃。
优选地,所述检测波长为254nm。
优选地,所述流动相流速为0.5ml/min。
优选地,进样量为10ul。
进一步的,所述检测方法包括如下步骤:
1.1用稀释剂配制待测品溶液;
1.2将步骤1.1所得的待测品溶液注入到高效液相色谱仪的色谱柱中进行检测;
所述稀释剂为体积比1:1的水-乙腈混合溶液。
本发明与现有技术相比具有以下优点和积极效果:
1.本发明的方法实现了对盐酸缬更昔洛韦中间体缩合物四种异构体的有效分离和检测,因此本发明的检测方法能够更好地实现对中间体缩合物和成品盐酸缬更昔洛韦的质量控制,提高最终产品的品质,保证了其临床用药的安全有效。
2.本发明的检测方法准确度高(3个级别9份样品的回收率平均值为99.5%,RSD为1.86%)、灵敏度高(检测限为1.6ng)、操作简便、成本低、分析时间短,为产品的研发和生产提供了简便、稳定、可靠的分析检测方法。
附图说明
图1为实施例1实验(一)采用以纤维素-三(3,5-二氯苯基氨基甲酸酯)键合硅胶为填充剂的手性色谱柱,得到的D-缩合物、L-缩合物和缩合物混合对照品溶液的HPLC色谱图;
图2为实施例1实验(二)采用硅胶表面涂敷有直链淀粉-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)手性柱,得到的D-缩合物、L-缩合物溶液的HPLC色谱图;
图3为实施例1实验(三)采用硅胶表面涂敷有纤维素-三(4-甲基苯甲酸酯)手性柱,得到的D-缩合物、L-缩合物溶液的HPLC色谱图;
图4为实施例1实验(四)采用纤维素-三(4-氯-3-甲基苯基氨基甲酸酯)涂覆硅胶手性柱,得到的D-缩合物对照品溶液的HPLC色谱图;
图5为实施例1实验(四)采用纤维素-三(4-氯-3-甲基苯基氨基甲酸酯)涂覆硅胶手性柱,得到的L-缩合物对照品溶液的HPLC色谱图;
图6为实施例1实验(四)采用纤维素-三(4-氯-3-甲基苯基氨基甲酸酯)涂覆硅胶手性柱,得到的D-缩合物和L-缩合物混合对照品溶液的HPLC色谱图;
图7为实施例2中以水-乙腈(70:30,v/v)为流动相,得到的D-缩合物和L-缩合物混合对照品溶液的HPLC色谱图;
图8为实施例2中以水-乙腈(63:37,v/v)为流动相,得到的D-缩合物和L-缩合物混合对照品溶液的HPLC色谱图;
图9为实施例2中以水-乙腈(60:40,v/v)为流动相,得到的D-缩合物和L-缩合物混合对照品溶液的HPLC色谱图;
图10为实施例3中20℃柱温得到的D-缩合物和L-缩合物混合对照品溶液的HPLC色谱图;
图11为实施例3中10℃柱温得到的D-缩合物和L-缩合物混合对照品溶液的HPLC色谱图;
图12为实施例4中0.4ml/min流速得到的D-缩合物和L-缩合物混合对照品溶液的HPLC色谱图;
图13为实施例4中0.6ml/min流速得到的D-缩合物和L-缩合物混合对照品溶液的HPLC色谱图;
图14为实施例5中UV-250nm检测波长得到的D-缩合物和L-缩合物混合对照品溶液的HPLC色谱图;
图15为实施例5中UV-260nm检测波长得到的D-缩合物和L-缩合物混合对照品溶液的HPLC色谱图;
图16为实施例6中D-缩合物和L-缩合物混合溶液的HPLC色谱图;
图17~20为实施例6中各批次的缩合物样品检测的HPLC色谱图。
具体实施方式
为便于本领域技术人员理解本发明内容,下面结合具体实施例进一步描述本发明的技术方案,但以下内容不应以任何方式限制本发明权利要求书请求保护的范围。
以下诸实施例中,所用仪器与试剂如下:
仪器:Agilent 1260或1200高效液相色谱仪。
试剂:乙腈、正己烷均为色谱级;
L-缩合物对照品和D-缩合物对照品为申请人根据常规技术自制。
将更昔洛韦与CBZ-L-缬氨酸缩合得到L-缩合物对照品,L-缩合物继续进行反应,最终生成终产品经检测为盐酸缬更昔洛韦;
将更昔洛韦与CBZ-D-缬氨酸缩合得到D-缩合物对照品,D-缩合物继续反应,最终生成终产品经检测为D-缬更昔洛韦。
实施例1不同手性柱的分离分析盐酸缬更昔洛韦中间体缩合物四种手性构型,步骤如下:
(一)固定相:纤维素-三(3,5-二氯苯基氨基甲酸酯)键合硅胶;
色谱柱:IC 4.6*250mm,5um;
色谱仪器:Agilent 1200高效液相色谱仪;
检测器及波长:UV-254nm;
流动相:正己烷-无水乙醇,(50:50,v/v);
流速:1.5ml/min;
进样量:5ul;
柱温:35℃;
供试品溶液制备:
D-缩合物对照品溶液:精密称取D-缩合物对照品约25mg,置25ml量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀即得。
L-缩合物对照品溶液:精密称取L-缩合物对照品约25mg,置25ml量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀即得。
L-缩合物和D-缩合物混合对照品溶液:精密量取上述制备好的D-缩合物对照品溶液5ml、L-缩合物对照品溶液5ml,置于同一10ml量瓶中,摇匀即得。
分别取上述两种对照品溶液、混合对照品溶液5μl注入液相色谱仪,记录色谱图,结果如图1所示。
L-缩合物保留时间为8.439min和15.612min,D-缩合物保留时间为9.869min和15.016min,配成混合溶液时L-缩合物峰1和D-缩合物峰1可以分开,但是L-缩合物峰2和D-缩合物峰2无法分离。
(二)固定相:硅胶表面涂敷有直链淀粉-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)
色谱柱:AD-RH 4.6*150mm,5um;
色谱仪器:Agilent 1260高效液相色谱仪;
检测器及波长:UV-254nm;
流动相:乙腈-水(30:70,v/v);
流速:0.7ml/min;
进样量:10ul;
柱温:30℃;
供试品溶液制备:
D-缩合物对照品溶液:精密称取D-缩合物对照品10mg,置50ml量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀即得。
L-缩合物对照品溶液:精密称取L-缩合物对照品10mg,置50ml量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀即得。
分别取上述两种对照品溶液10μl注入液相色谱仪,记录色谱图,结果如图2所示。
L-缩合物和D-缩合物保留时间基本一致,无法分离出缩合物4种构型。
(三)固定相:硅胶表面涂敷有纤维素-三(4-甲基苯甲酸酯)
色谱柱:OJ-RH 4.6*150mm,5um;
色谱仪器:Agilent 1260高效液相色谱仪;
检测器及波长:UV-254nm;
流动相:乙腈-水(25:75,v/v);
流速:0.5ml/min;
进样量:10ul;
柱温:25℃;
供试品溶液制备:
D-缩合物对照品溶液:精密称取D-缩合物对照品10mg,置50ml量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀即得。
L-缩合物对照品溶液:精密称取L-缩合物对照品10mg,置50ml量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀即得。
分别取上述两种对照品溶液10μl注入液相色谱仪,记录色谱图,结果如图3所示。
L-缩合物和D-缩合物保留时间基本一致,无法分离出缩合物4种构型。
可以看出,本实施例中上述3种不同固定相手性色谱柱均无法分离出缩合物4种异构体。
(四)固定相:纤维素-三(4-氯-3-甲基苯基氨基甲酸酯)涂覆硅胶
色谱仪器:Agilent 1260高效液相色谱仪;
色谱柱:OX-3R 4.6*150mm,3um;
检测器及波长:UV-254nm;
流动相:水-乙腈(63:37,v/v);
流速:0.5ml/min;
进样量:10ul;
柱温:15℃;
稀释剂:水-乙腈(50:50,v/v);
供试品溶液制备:
D-缩合物对照品溶液:精密称取D-缩合物对照品10mg,置50ml量瓶中,加稀释剂溶解并稀释至刻度,摇匀即得,作为D-缩合物储备液;
精密量取上述储备液1ml置于25ml量瓶,用稀释剂稀释至刻度,作为D-缩合物对照品溶液。
L-缩合物对照品溶液:精密称取L-缩合物对照品10mg,置25ml量瓶中,加稀释剂溶解并稀释至刻度,摇匀即得。
L-缩合物和D-缩合物混合对照品溶液:精密称取L-缩合物对照品10mg,置于25ml量瓶中,再向量瓶中加入D-缩合物储备液1ml,用稀释剂溶解并稀释至刻度,摇匀即得。
分别取上述D-缩合物对照品溶液、L-缩合物对照品溶液和混合对照品溶液10μl注入液相色谱仪,记录色谱图,结果如图4、5、6所示。
从图6可以看出,L-缩合物的保留时间为12.119min、17.232min,D-缩合物的保留时间为13.749min、15.779min,缩合物四种构型异构体之间的最小分离度为1.72,达到基线分离。比较图5和图6可以看出,制备盐酸缬更昔洛韦中间体缩合物L-缩合物对照品中含有D-缩合物,并且通过本发明的检测方法使得L-缩合物和D-缩合物得到了有效的分离。
结论:采用纤维素-三(4-氯-3-甲基苯基氨基甲酸酯)涂覆硅胶为填充剂的手性色谱柱能够将盐酸缬更昔洛韦中间体缩合物四种手性构型成功分离。
实施例2不同流动相及比例分离分析盐酸缬更昔洛韦中间体缩合物四种手性构型,步骤如下:
色谱条件:
(1)流动相:水-乙腈(70:30,v/v);
(2)流动相:水-乙腈(63:37,v/v);
(3)流动相:水-乙腈(60:40,v/v);
固定相:纤维素-三(4-氯-3-甲基苯基氨基甲酸酯)涂覆硅胶;
色谱仪器:Agilent 1260高效液相色谱仪;
色谱柱:OX-3R 4.6*150mm,3um;
检测器及波长:UV-254nm;
流速:0.5ml/min;
进样量:10ul;
柱温:15℃;
供试品溶液制备:
稀释剂:水-乙腈(50:50,v/v)。
利用实施例1中实验(四)以纤维素-三(4-氯-3-甲基苯基氨基甲酸酯)涂覆硅胶为固定相中制备的L-缩合物和D-缩合物混合对照品溶液作为供试品进行检测。
取上述混合对照品溶液10μl注入液相色谱仪,分别以本实施例的(1)-(3)中不同体积比的水-乙腈为流动相检测,记录色谱图,结果如图7、8、9所示。
以(1)所述流动相时,L-缩合物的保留时间为24.489min、36.605min,D-缩合物的保留时间为28.909min、34.045min,缩合物四种构型异构体之间的最小分离度为1.50。
以(2)所述流动相时,L-缩合物的保留时间为12.119min、17.232min,D-缩合物的保留时间为13.749min、15.779min,缩合物四种构型异构体之间的最小分离度为1.72。
以(3)所述流动相时,L-缩合物的保留时间为9.550min、13.080min,D-缩合物的保留时间为10.650min、12.054min,缩合物四种构型异构体之间的最小分离度为1.63。
结论:采用以上流动相均能将四种手性构型成功分离,优选的流动相为水-乙腈(63:37,v/v)。
实施例3不同柱温分离分析盐酸缬更昔洛韦中间体缩合物四种手性构型,步骤如下:
(1)柱温:20℃;
(2)柱温:10℃;
固定相:纤维素-三(4-氯-3-甲基苯基氨基甲酸酯)涂覆硅胶;
色谱仪器:Agilent 1260高效液相色谱仪;
色谱柱:OX-3R 4.6*150mm,3um;
检测器及波长:UV-254nm;
流动相:水-乙腈(63:37,v/v);
流速:0.5ml/min;
进样量:10ul;
供试品溶液制备:
稀释剂:水-乙腈(50:50,v/v)。
利用实施例1中实验(四)以纤维素-三(4-氯-3-甲基苯基氨基甲酸酯)涂覆硅胶为固定相时制备的L-缩合物和D-缩合物混合对照品溶液作为供试品进行检测。
取上述混合对照品溶液10μl注入液相色谱仪,分别以本实施例的(1)和(2)中不同柱温进行检测,记录色谱图,结果如图10、11所示。
(1)柱温:20℃,L-缩合物的保留时间为12.296min、16.936min,D-缩合物的保留时间为13.822min、15.776min,缩合物四种构型异构体之间的最小分离度为1.26。
(2)柱温:10℃,L-缩合物的保留时间为13.118min、19.488min,D-缩合物的保留时间为15.051min、17.395min,缩合物四种构型异构体之间的最小分离度为1.55。
结论:降低柱温能够提高缩合物四种构型异构体之间的最小分离度,但温度太低对仪器要求较高,综合比较优选柱温15℃。
实施例4不同流速分离分析盐酸缬更昔洛韦中间体缩合物四种手性构型,步骤如下:
(1)流速:0.4ml/min;
(2)流速:0.6ml/min;
固定相:纤维素-三(4-氯-3-甲基苯基氨基甲酸酯)涂覆硅胶;
色谱仪器:Agilent 1260高效液相色谱仪;
色谱柱:OX-3R 4.6*150mm,3um;
检测器及波长:UV-254nm;
流动相:水-乙腈(63:37,v/v);
柱温:15℃;
进样量:10ul;
供试品溶液制备:
稀释剂:水-乙腈(50:50,v/v)。
利用实施例1中实验(四)以纤维素-三(4-氯-3-甲基苯基氨基甲酸酯)涂覆硅胶为固定相中制备的L-缩合物和D-缩合物混合对照品溶液作为供试品进行检测。
取上述混合对照品溶液10μl注入液相色谱仪,分别以本实施例的(1)和(2)中不同流速进行检测,记录色谱图,结果如图12、13所示。
(1)流速:0.4ml/min时,L-缩合物的保留时间为15.782min、22.579min,D-缩合物的保留时间为17.902min、20.589min,缩合物四种构型异构体之间的最小分离度为1.81。
(2)流速:0.6ml/min时,L-缩合物的保留时间为10.527min、14.937min,D-缩合物的保留时间为11.910min、13.653min,缩合物四种构型异构体之间的最小分离度为1.57。
结论:降低流速能够提高缩合物四种构型异构体之间的分离度,但异构体峰出峰时间较长,故在保证分离效果同时,提高流速最好。故最优选流速可以为0.5ml/min。
实施例5不同波长分离分析盐酸缬更昔洛韦中间体缩合物四种手性构型,步骤如下:
(1)检测波长:UV-250nm;
(2)检测波长:UV-260nm;
固定相:纤维素-三(4-氯-3-甲基苯基氨基甲酸酯)涂覆硅胶;
色谱仪器:Agilent 1260高效液相色谱仪;
色谱柱:OX-3R 4.6*150mm,3um;
流速:0.5ml/min;
流动相:水-乙腈(63:37,v/v);
柱温:15℃;
进样量:10ul;
供试品溶液制备:
稀释剂:水-乙腈(50:50,v/v)。
利用实施例1中实验(四)以纤维素-三(4-氯-3-甲基苯基氨基甲酸酯)涂覆硅胶为固定相中制备的L-缩合物和D-缩合物混合对照品溶液作为供试品进行检测。
取上述混合对照品溶液10μl注入液相色谱仪,分别以本实施例的(1)和(2)中不同检测波长进行检测,记录色谱图,结果如图14、15所示。
(1)波长:UV-250nm时,L-缩合物的保留时间为12.305min、17.215min,D-缩合物的保留时间为13.862min、15.842min,缩合物四种构型异构体之间的最小分离度为1.49。
(2)UV-260nm时,L-缩合物的保留时间为12.306min、17.209min,D-缩合物的保留时间为13.856min、15.839min,缩合物四种构型异构体之间的最小分离度为1.48。
结论:检测波长主要影响峰高/峰面积,采用UV-254nm检测波长能够获得最好的信号相应。
实施例6盐酸缬更昔洛韦中间体缩合物异构体纯度检测
色谱条件:
固定相:纤维素-三(4-氯-3-甲基苯基氨基甲酸酯)涂覆硅胶;
色谱仪器:Agilent 1260高效液相色谱仪;
色谱柱:OX-3R 4.6*150mm,3um;
检测器及波长:UV-254nm;
流动相:水-乙腈(63:37,v/v);
流速:0.5ml/min;
进样量:10ul;
柱温:15℃;
稀释剂:水-乙腈(50:50,v/v);
供试品溶液制备:
利用实施例1中实验(四)以纤维素-三(4-氯-3-甲基苯基氨基甲酸酯)涂覆硅胶为固定相中制备的L-缩合物和D-缩合物混合对照品溶液作为混合对照品溶液。
供试品溶液:按照常规方法制备了盐酸缬更昔洛韦中间体L-缩合物,见表2中4个批号的样品,分别精密称取样品10mg,置于25ml量瓶中,用稀释剂溶解并稀释至刻度,摇匀即得。分别取上述供试品溶液和混合对照品溶液10μl注入液相色谱仪,记录色谱图,计算其L-缩合物两个峰(互为非对映体)的峰面积的比值和非对映异构体的纯度,结果见表2。
混合对照品溶液的色谱图结果如图16。
180228-07批的色谱图如图17,180409-02批的色谱图如图18,180509-03批的色谱图如图19,180523-03批的色谱图如图20。
供试品溶液色谱图中L-缩合物两个峰(互为非对映体)的峰面积的比值应在45:55~55:45之间,供试品溶液色谱图中如有D-缩合物(对映异构体)峰,按照峰面积归一化法计不得大于2.0%。
表2中间体缩合物异构体比例及纯度测定结果
供试品批号 | 非对映异构体比例 | 对映异构体(%) |
180228-07 | 49.9:50.1 | 1.36 |
180409-02 | 49.7:50.3 | 0.81 |
180509-03 | 49.4:50.6 | 0.99 |
180523-03 | 49.5:50.5 | 1.23 |
实施例7盐酸缬更昔洛韦中间体缩合物异构体检测方法准确度的测定
色谱条件:
固定相:纤维素-三(4-氯-3-甲基苯基氨基甲酸酯)涂覆硅胶;
色谱仪器:Agilent 1260高效液相色谱仪;
色谱柱:OX-3R 4.6*150mm,3um;
检测器及波长:UV-254nm;
流动相:水-乙腈(63:37,v/v);
流速:0.5ml/min;
进样量:10ul;
柱温:15℃;
稀释剂:水-乙腈(50:50,v/v);
对照品溶液的制备:取实施例1中实验(四)以纤维素-三(4-氯-3-甲基苯基氨基甲酸酯)涂覆硅胶为固定相中制备的D-缩合物对照品溶液作为对照品溶液。
供试品溶液的制备:精密称取L-缩合物样品(批号:180228-07)共9份,每份20mg,9份样品中分别精密加入实施例1中实验(四)以纤维素-三(4-氯-3-甲基苯基氨基甲酸酯)涂覆硅胶为固定相中制备的D-缩合物储备液1.6ml、1.6ml、1.6ml、2.0ml、2.0ml、2.0ml、2.4ml、2.4ml、2.4ml,用稀释剂溶解并稀释至刻度,摇匀即得。
取供试品溶液和对照品溶液注入液相色谱仪,记录色谱图,计算D-缩合物回收率,结果如表3所示,结果表明本发明的检测方法准确度高。
表3
实施例8盐酸缬更昔洛韦中间体缩合物异构体检测方法检测限的测定
色谱条件:
固定相:纤维素-三(4-氯-3-甲基苯基氨基甲酸酯)涂覆硅胶;
色谱仪器:Agilent 1260高效液相色谱仪;
色谱柱:OX-3R 4.6*150mm,3um;
检测器及波长:UV-254nm;
流动相:水-乙腈(63:37,v/v);
流速:0.5ml/min;
进样量:10ul;
柱温:15℃;
稀释剂:水-乙腈(50:50,v/v);
D-缩合物储备液:精密称取D-缩合物对照品约10mg,置50ml量瓶中,用稀释剂溶解并稀释至刻度,作为储备液。L-缩合物储备液:精密称取L-缩合物对照品约10mg,置50ml量瓶中,用稀释剂溶解并稀释至刻度,作为储备液。将上述两个储备液分别适当稀释至信噪比约为3:1进行检测,结果L-缩合物和D-缩合物的检测限均约为1.6ng。
Claims (9)
1.一种盐酸缬更昔洛韦中间体缩合物异构体的HPLC检测方法,其特征在于:采用以纤维素-三(4-氯-3-甲基苯基氨基甲酸酯)涂覆硅胶为填充剂的手性色谱柱,并以水和腈类化合物的混合溶液作为流动相对盐酸缬更昔洛韦中间体缩合物四种手性构型进行分离测定,所述HPLC检测采用如下色谱条件:
流动相流速为0.4~0.6ml/min,
色谱柱温度为10~20℃,
检测器采用紫外检测器,检测波长为250~260nm。
2.如权利要求1所述盐酸缬更昔洛韦中间体缩合物异构体的HPLC检测方法,其特征在于:所述流动相中,腈类化合物的体积占流动相总体积的30~40%。
3.如权利要求2所述盐酸缬更昔洛韦中间体缩合物异构体的HPLC检测方法,其特征在于:所述腈类化合物为乙腈。
4.如权利要求3所述盐酸缬更昔洛韦中间体缩合物异构体的HPLC检测方法,其特征在于:所述色谱柱温度为15℃。
5.如权利要求4所述盐酸缬更昔洛韦中间体缩合物异构体的HPLC检测方法,其特征在于:所述检测波长为254nm。
6.如权利要求5所述盐酸缬更昔洛韦中间体缩合物异构体的HPLC检测方法,其特征在于:进样量为10ul。
7.如权利要求6所述盐酸缬更昔洛韦中间体缩合物异构体的HPLC检测方法,其特征在于:所述流动相流速为0.5ml/min。
8.如权利要求7所述盐酸缬更昔洛韦中间体缩合物异构体的HPLC检测方法,其特征在于:所述色谱柱为CHIRALCEL®OX-3R 4.6*150mm,填充剂粒径为3μm。
9.如权利要求1-8任一项所述的HPLC检测方法,其特征在于,所述检测方法包括如下步骤:
1.1用稀释剂配制待测品溶液;
1.2将步骤1.1所得的待测品溶液注入到高效液相色谱仪的色谱柱中进行检测;
所述稀释剂为体积比1:1的水-乙腈混合溶液。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201811269753.7A CN109212093B (zh) | 2018-10-29 | 2018-10-29 | 一种盐酸缬更昔洛韦中间体缩合物异构体的hplc检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201811269753.7A CN109212093B (zh) | 2018-10-29 | 2018-10-29 | 一种盐酸缬更昔洛韦中间体缩合物异构体的hplc检测方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN109212093A true CN109212093A (zh) | 2019-01-15 |
CN109212093B CN109212093B (zh) | 2021-06-01 |
Family
ID=64997130
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201811269753.7A Active CN109212093B (zh) | 2018-10-29 | 2018-10-29 | 一种盐酸缬更昔洛韦中间体缩合物异构体的hplc检测方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN109212093B (zh) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110988246A (zh) * | 2019-11-29 | 2020-04-10 | 荆门医药工业技术研究院 | 一种检测z-l-缬氨酸及其中间体(s)-4-异丙基恶唑-2,5-二酮含量的方法 |
CN114441659A (zh) * | 2020-11-03 | 2022-05-06 | 沈阳兴齐眼药股份有限公司 | 检测更昔洛韦眼用凝胶中更昔洛韦和有关物质的方法 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2010036904A2 (en) * | 2008-09-26 | 2010-04-01 | Dr. Reddy's Laboratories Ltd. | Preparation of valganciclovir and its salts |
CN103562207A (zh) * | 2011-05-31 | 2014-02-05 | 法尔玛赞公司 | 用于制备缬更昔洛韦的2-氨基-9-((2-苯基-1,3-二噁烷-5-基氧基)甲基)-1h-嘌呤-6(9h)-酮化合物的制备方法 |
CN104749286A (zh) * | 2015-04-14 | 2015-07-01 | 湖北丽益医药科技有限公司 | 一种盐酸缬更昔洛韦杂质的分析检测方法 |
CN108267519A (zh) * | 2017-12-05 | 2018-07-10 | 湖北丽益医药科技有限公司 | 一种盐酸缬更昔洛韦中间体水解物异构体的hplc检测方法 |
-
2018
- 2018-10-29 CN CN201811269753.7A patent/CN109212093B/zh active Active
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2010036904A2 (en) * | 2008-09-26 | 2010-04-01 | Dr. Reddy's Laboratories Ltd. | Preparation of valganciclovir and its salts |
CN103562207A (zh) * | 2011-05-31 | 2014-02-05 | 法尔玛赞公司 | 用于制备缬更昔洛韦的2-氨基-9-((2-苯基-1,3-二噁烷-5-基氧基)甲基)-1h-嘌呤-6(9h)-酮化合物的制备方法 |
CN104749286A (zh) * | 2015-04-14 | 2015-07-01 | 湖北丽益医药科技有限公司 | 一种盐酸缬更昔洛韦杂质的分析检测方法 |
CN104749286B (zh) * | 2015-04-14 | 2017-03-08 | 湖北丽益医药科技有限公司 | 一种盐酸缬更昔洛韦杂质的分析检测方法 |
CN108267519A (zh) * | 2017-12-05 | 2018-07-10 | 湖北丽益医药科技有限公司 | 一种盐酸缬更昔洛韦中间体水解物异构体的hplc检测方法 |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
CH. SURYA NAGA MALLESWARA RAO1 ET AL: "A Validated LC Method for the Determination of Chiral Purity of (S)-2-azido-3-methylbutanoic acid: A key Raw material of Valganciclovir hydrochloride", 《JOURNAL OF CHEMICAL AND PHARMACEUTICAL RESEARCH》 * |
徐红蓉 等: "液相色谱-串联质谱法测定缬更昔洛韦血药浓度及其在健康人体的药代动力学研究", 《中国临床药理学杂志》 * |
美国药典委员会: "《美国药典 USP 35》", 1 May 2012 * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110988246A (zh) * | 2019-11-29 | 2020-04-10 | 荆门医药工业技术研究院 | 一种检测z-l-缬氨酸及其中间体(s)-4-异丙基恶唑-2,5-二酮含量的方法 |
CN114441659A (zh) * | 2020-11-03 | 2022-05-06 | 沈阳兴齐眼药股份有限公司 | 检测更昔洛韦眼用凝胶中更昔洛韦和有关物质的方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN109212093B (zh) | 2021-06-01 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN109870521B (zh) | 一种正相色谱法分离磷酸奥司他韦对映异构体的方法 | |
CN104422743B (zh) | 一种抗凝血药物的分离检测方法 | |
CN109212093A (zh) | 一种盐酸缬更昔洛韦中间体缩合物异构体的hplc检测方法 | |
CN104237408B (zh) | 复方氯己定达克罗宁乳膏的检测方法 | |
CN110057959A (zh) | 一种高效液相色谱法测定非布司他中间体有关物质的分析方法 | |
CN110672734B (zh) | 一种盐酸胺碘酮注射液中有关物质的分析方法 | |
CN108061767A (zh) | Hplc法分离测定利伐沙班中间体及其相关杂质的方法 | |
CN105806963B (zh) | L‑脯氨醇及其对映异构体的分离检测方法 | |
CN106706796B (zh) | 通过高效液相色谱法检测硼替佐米关键中间体1r-三氟醋酸盐光学异构体的方法 | |
Salsbury et al. | Quantitative 1H NMR method for the routine spectroscopic determination of enantiomeric purity of active pharmaceutical ingredients fenfluramine, sertraline, and paroxetine | |
CN108267519A (zh) | 一种盐酸缬更昔洛韦中间体水解物异构体的hplc检测方法 | |
CN111398465B (zh) | 一种pet显像剂前体fcpha及其顺式异构体的测定方法 | |
CN108152394A (zh) | 一种分离测定依折麦布中异构体的方法 | |
CN107991408B (zh) | 四味珍层冰硼滴眼液中指标成分含量测定方法 | |
CN103864646A (zh) | 甲磺酸雷沙吉兰的杂质制备及分析方法 | |
CN102507830B (zh) | 一种测定拉萨大黄中曲札茋苷含量的高效液相色谱方法 | |
Baker et al. | Derivatization with acetic anhydride: applications to the analysis of biogenic amines and psychiatric drugs by gas chromatography and mass spectrometry | |
CN1679811A (zh) | 一种丹参提取物、其制备方法、药物制剂及检测方法 | |
CN110873761A (zh) | 草酸艾司西酞普兰中间体有关物质的气相色谱检测方法 | |
CN112415104B (zh) | 一种有柄石韦药材及其饮片、标准汤剂、配方颗粒的特征图谱、构建方法和检测方法 | |
CN101169396A (zh) | 化妆品中倍他米松的高效液相色谱检测方法 | |
CN110412164B (zh) | 一种盐酸美西律的有关物质的检测方法 | |
CN109085255B (zh) | 一种hplc法分析及制备3-(n-对甲苯磺酰基-l-丙氨酰氧基)-5-苯基吡咯及其对映异构体的方法 | |
CN103616344A (zh) | 一种藏药材塞北紫堇的检测方法 | |
CN113866309A (zh) | 蟾酥中11种蟾毒配基类成分的hplc指纹图谱建立方法及应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |