CN101139562A - 一种链霉菌发酵三七皂苷制备稀有人参皂苷Compound K的工艺 - Google Patents
一种链霉菌发酵三七皂苷制备稀有人参皂苷Compound K的工艺 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101139562A CN101139562A CNA200710066011XA CN200710066011A CN101139562A CN 101139562 A CN101139562 A CN 101139562A CN A200710066011X A CNA200710066011X A CN A200710066011XA CN 200710066011 A CN200710066011 A CN 200710066011A CN 101139562 A CN101139562 A CN 101139562A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- bacterial strain
- compound
- various
- streptomyces fradiae
- arasaponins
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- FVIZARNDLVOMSU-IRFFNABBSA-N ginsenoside C-K Chemical compound O([C@@](C)(CCC=C(C)C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@]([C@@]3(CC[C@H]4C(C)(C)[C@@H](O)CC[C@]4(C)[C@H]3C[C@H]2O)C)(C)CC1)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O FVIZARNDLVOMSU-IRFFNABBSA-N 0.000 title claims description 5
- 241001655322 Streptomycetales Species 0.000 title abstract description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title abstract 2
- VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N methane Chemical compound C VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 title 1
- 241000187438 Streptomyces fradiae Species 0.000 claims abstract description 33
- FVIZARNDLVOMSU-UHFFFAOYSA-N ginsenoside K Natural products C1CC(C2(CCC3C(C)(C)C(O)CCC3(C)C2CC2O)C)(C)C2C1C(C)(CCC=C(C)C)OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O FVIZARNDLVOMSU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 33
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims abstract description 26
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims abstract description 18
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims abstract description 18
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 17
- 125000003827 glycol group Chemical group 0.000 claims abstract description 16
- 230000008569 process Effects 0.000 claims abstract description 11
- 101000610620 Homo sapiens Putative serine protease 29 Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 102100040345 Putative serine protease 29 Human genes 0.000 claims abstract description 7
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 7
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims abstract description 6
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 229930182494 ginsenoside Natural products 0.000 claims description 20
- 229940089161 ginsenoside Drugs 0.000 claims description 20
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 241000180649 Panax notoginseng Species 0.000 claims description 17
- 235000003143 Panax notoginseng Nutrition 0.000 claims description 17
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 16
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 9
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 claims description 8
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 claims description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 8
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 8
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 8
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 6
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 claims description 6
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 claims description 5
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims description 5
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 claims description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 4
- 238000002386 leaching Methods 0.000 claims description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 3
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 abstract description 2
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 abstract description 2
- 229930189092 Notoginsenoside Natural products 0.000 abstract 3
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 abstract 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N ammonia Natural products N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 abstract 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 abstract 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 19
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 19
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 description 7
- 244000131316 Panax pseudoginseng Species 0.000 description 7
- 241000131482 Bifidobacterium sp. Species 0.000 description 6
- 235000003140 Panax quinquefolius Nutrition 0.000 description 6
- 244000309464 bull Species 0.000 description 6
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 6
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 6
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 5
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 5
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 5
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 5
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 5
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 description 5
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 5
- 235000005035 Panax pseudoginseng ssp. pseudoginseng Nutrition 0.000 description 4
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 235000008434 ginseng Nutrition 0.000 description 4
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- 241001112078 Aspergillus usamii Species 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 235000003181 Panax pseudoginseng Nutrition 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 description 3
- 239000000469 ethanolic extract Substances 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 3
- -1 Beta-glucan glycosides Chemical class 0.000 description 2
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 101000874334 Dalbergia nigrescens Isoflavonoid 7-O-beta-apiosyl-glucoside beta-glycosidase Proteins 0.000 description 2
- 101000757733 Enterococcus faecalis (strain ATCC 700802 / V583) Autolysin Proteins 0.000 description 2
- 101000757734 Mycolicibacterium phlei 38 kDa autolysin Proteins 0.000 description 2
- 240000005373 Panax quinquefolius Species 0.000 description 2
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 230000034659 glycolysis Effects 0.000 description 2
- 244000005709 gut microbiome Species 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 2
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 2
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 2
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 2
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 2
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GMKMEZVLHJARHF-ROLXFIACSA-N (6s)-2,6-diaminoheptanedioic acid Chemical class OC(=O)C(N)CCC[C@H](N)C(O)=O GMKMEZVLHJARHF-ROLXFIACSA-N 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 241000606125 Bacteroides Species 0.000 description 1
- 229920002498 Beta-glucan Polymers 0.000 description 1
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000186394 Eubacterium Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 241000605909 Fusobacterium Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-HWQSCIPKSA-N L-arabinopyranose Chemical compound O[C@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-HWQSCIPKSA-N 0.000 description 1
- 101100010166 Mus musculus Dok3 gene Proteins 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 241000235546 Rhizopus stolonifer Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 241000736131 Sphingomonas Species 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000000049 anti-anxiety effect Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000118 anti-neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002249 anxiolytic agent Substances 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 108010059485 brain synaptic membrane glycoprotein gp 50 Proteins 0.000 description 1
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 239000003183 carcinogenic agent Substances 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- RCTYPNKXASFOBE-UHFFFAOYSA-M chloromercury Chemical compound [Hg]Cl RCTYPNKXASFOBE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000007621 cluster analysis Methods 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002447 crystallographic data Methods 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000002550 fecal effect Effects 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 210000004051 gastric juice Anatomy 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 1
- 241000411851 herbal medicine Species 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- HVGQWHMSVYODLJ-GFCCVEGCSA-N melanochrome Natural products CC1(C)Oc2cc3OC(=CC(=O)c3c(O)c2C[C@H]1O)CO HVGQWHMSVYODLJ-GFCCVEGCSA-N 0.000 description 1
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 1
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 1
- JUJWROOIHBZHMG-RALIUCGRSA-N pyridine-d5 Chemical compound [2H]C1=NC([2H])=C([2H])C([2H])=C1[2H] JUJWROOIHBZHMG-RALIUCGRSA-N 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 description 1
- 244000000000 soil microbiome Species 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 238000010025 steaming Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 229960003487 xylose Drugs 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明属于生物、医药技术领域，涉及一株保藏编号为CGMCC No.2074的弗氏链霉菌(Streptomyces fradiae NTGA－334)菌株，以及该菌株发酵转化各种三七皂苷中的二醇组人参皂苷，制备20－O－β－D－吡喃葡萄糖基－20(S)－原人参二醇(人参皂苷Compound K)的工艺。培养基选用高氏一号、ISP2、腐质酸(HSG培养基)以及天门冬酰胺培养基。发酵过程中，各种三七皂苷投料比例为0.1－10％(w/v)，发酵温度18－50℃，0.1－35％(w/v)氨水动态调节pH＝2－8，通气比0.1－10(v/v)，搅拌速率10－900r/min，发酵时间5h－120h，大孔吸附树脂添加量0.1－30％(w/v)。本发明为规模化发酵转化各种三七皂苷、制备Compound K提供一株性状稳定、营养要求简单、生长良好的链霉菌菌株，以及实用简便的全自动发酵罐发酵、分离提取工艺。用该菌株及该工艺来制备Compound K，生产成本低、杂质少，产物得率高。
Description
技术领域
本发明属于生物、医药技术领域，涉及一种链霉菌发酵转化各种三七皂苷中的二醇组人参皂苷、制备20-O-β-D-吡喃葡萄糖基-20(S)-原人参二醇(人参皂苷Compound K，以下简称Compound K)的工艺。特别提供一株人工驯化的弗氏链霉菌(Streptomyces fradiaeNTGA-334)菌株，以及用该菌株在全自动发酵罐中发酵转化各种三七皂苷、分离提取Compound K的工艺。
背景技术
Rb1、Rb2、Rc、Rg3和Rh2等多种天然二醇组人参皂苷均报道有抗肿瘤作用(SteveHelms ND：Alternat.Med.Rev.，2004，9(3)，259-274；Shoji S：J.Korean Med.Sci.，2001，16(Suppl.)，S28-37.)。人体代谢实验表明，口服后的人参皂苷在胃液、胆汁的作用下仅发生了轻微的氧化作用，不能被降解，只有在肠内菌的作用下，糖苷键才发生断裂，形成一系列代谢产物。最新的药理学研究表明：被吸收入血并发挥抗肿瘤活性的不是二醇组人参皂苷本身，而是经肠道菌群代谢转化后的代谢产物Compound K(C36H64O8)(Tawab MA et al：DrugMetab.Dispos.，2003，31(8)，1065-1071)。自Yosioka I等1972年用土壤细菌水解Rb1、Rb2和Rc时首次发现Compound K以来(Yosioka I et al：Chem.Pharm.Bull.，1972，20(11)，2418-2421)，目前普遍认为Compound K是天然二醇组人参皂苷抗肿瘤的活性代谢产物，而Rb、Rc、Rd等可能是抗肿瘤天然前体药物。近年来的体内体外试验研究发现，Compound K除了抑制肿瘤细胞的增殖、浸润和转移，诱导肿瘤细胞凋亡，抑制化学致癌剂诱导的染色体基因突变，以及逆转肿瘤细胞的多重耐药外(Hasegawa H et al：Planta Med.，1994，60(3)，240-243；1995，61(5)，409-413；1998，84(8)，696-700；Pharm.Res.，1997，20(6)，539-544；Wakabayashi C et al：Oncol.Res.，1997，9(8)，411-417；Biochem Biophys Res Commun.，1998，246(3)，725-730；Lee BH et al：Planta Med.，1998，64(6)，500-503；Lee SJ et al：Cancer Lett.，1999，144(1)，39-43；Biochem.Pharmacol.，2000，60(5)，677-685；Kang J et al：Reprod.Toxicol.，2002，16(3)，291-298；Choi HH et al：Int.J.Oncol.，2003，23(4)，1087-1093；Oh SH et al：Arch.Pharm.Res.，2004，27(4)，402-406；Toxicol.Appl.Pharmacol.，2004，194(3)，221-229；Lee JY et al：Carcinogenesis，2005，26(2)，359-367；Kang KA et al：Arch.Pharm.Res.，2005，28(6)，685-690；Yim HW et al：Cancer Res.，2005，65(5)，1952-1960；Jung SH et al：Int.J.Cancer，2006，118(2)，490-497；Park EJ et al：Planta Med.，2006，72(13)，1250-1253；Zhou W et al：J.Asian Nat.Prod.Res.，2006，8(6)，519-527.)，还具有抗炎、抗过敏、抗紧张和免疫调节等许多生物学活性(PopovAM et al：Dokl.Biochem.Biophys.，2001，380，309-312；Bae EA et al：Biol.Pharm.Bull.，2002，25(6)，743-747；Kim DH et al：Biol.Pharm.Bull.，2003，26(7)，1035-1038；Tachikawa E et al：Biochem.Pharmacol.，2003，66(11)，2213-2221；Kim S et al：Biochem.Biophys.Res.Commun.，2004，316(2)，348-355；Lee HU et al：Liver Int.，2005，25(5)，1069-1073；Shin YW et al：J.Pharmacol Sci.，2005.99(1)，83-88；Int.Immunopharmacol.，2005，5(7-8)，1183-1191；Park EK etal：Biol.Pharm.Bull.，2005，28(4)，652-656；Chang TC et al：J.Agric.Food Chem.，2007，55(5)，993-998；Choi K et al：Neurosci.Lett.，2007，421(1)，37-41.)，因此对它的研究越来越受到重视。
由于Compound K在天然人参、三七和西洋参中并不存在，以往国内外学者主要通过人体肠道菌代谢、其它微生物或酶转化二醇组人参皂苷单体来制备。人体肠道菌群代谢作用存在显著的个体差异，不同的种族、身体状况、饮食方式、压力和习惯等因素直接影响肠道菌代谢活力；而且肠道代谢菌群多为厌氧型，培养条件苛刻，需用专用设备，用于制备CompoundK极不经济。使用商品酶制剂，虽然操作简便，但价格昂贵，存在酶源不便、成本高的问题，因此应用受到限制。目前国内外通过发酵法和酶法获得Compound K的现状见表1和表2，其中以二醇组人参皂苷单体为底物可以获得较高的转化率，但原料成本很高，并不具备产业化价值；而以真菌发酵转化三七叶总皂苷、人参总皂苷和西洋参总皂苷来制备Compound K，原料成本低，产业化前景较好，但目前仍停留在实验室小试水平。涉及链霉菌发酵转化各种三七皂苷中的二醇组人参皂苷、大批量制备Compound K的研究，国内外尚未见文献报道。
表1.发酵法制备Compound K的现状
| 菌株 | 底物 | 转化率％ | 参考文献 |
| Human fecal microfloraBacteroides JY-6Bifidobacterium K-506Eubacterium A-44Fusobacterium K-60 | Rc | 65.210.810.45.31.2 | Bae EA et al：Biol.Pharm.Bull.，2002，25(6)，743-747 |
| Sphingomonas echinoids GP50 | Rb1 | - | Kim MK et al：J.Microbiol.，2005，43(5)，456-462 |
| Aspergillus niger | 三七叶总皂苷 | 12.0 | 周佩等：一种制备人参皂苷Compound-K的方法。中国专利申请号：200410018000.0。公开号：CN 1570133A。 |
| Aspergillus nigerAbsidic corymbiferaYeast A8 | 人参总皂苷西洋参总皂苷三七叶总皂苷 | 8.06.8- | 韩颖等：中药研究与信息，2005，7(2)，17-19 |
| Aspergillus nigerr var.Tiegh | Rb1Rd | 59.476.1 | 杨凌等：一种黑曲霉及用其酵解人参皂苷制备稀有低极性人参皂苷的方法。中国专利号：CN02132403.4。 |
表2.酶法制备Compound K的现状
| 酶 | 底物 | 转化率％ | 参考文献 |
| 从Bifidobacterium sp.Int57提取的粗酶从Bifidobacterium sp.SJ32提取的粗酶从Aspergillus niger KCTC 6906提取的粗酶从Aspergillus usamii var.shirousamii KCTC 6956提取的粗酶 | Rb1 | 96.793.995.655.2 | Chi H et al：Biotechnol.Lett.，2005，27(11)，765-771 |
| 从Bifidobacterium sp.Int57提取的粗酶从Bifidobacterium sp.SJ32提取的粗酶从Aspergillus niger KCTC 6906提取的粗酶从Aspergillus usamii var.shirousamii KCTC 6956提取的粗酶 | Rb2 | 92.587.39.710.4 | Chi H et al：Biol Pharm.Bull.，2005，28(11)，2102-2105 |
| 从Bifidobacterium sp. Int57提取的粗酶从Bifidobacterium sp.SJ32提取的粗酶从Aspergillus niger KCTC 6906提取的粗酶从Aspergillus usamii var.shirousamii KCTC 6956提取的粗酶 | Rc | 77.060.99.752.0 | |
| 从Rhizopus nigricans提取的粗酶从Trichonderma viride提取的粗酶 | 人参总皂苷 | -- | 杨凌等：一种黑曲霉及用其酵解人参皂苷制备稀有低极性人参皂苷的方法。中国专利号：CN02132403.4。 |
| β-葡聚糖苷酶 | 三七叶总皂苷 | - | 姜彬慧等：中草药，2004，35(9)，986-988。 |
发明内容
为了简便、高效、规模化发酵制备Compound K，本发明首先提供一株由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏的弗氏链霉菌(Streptomyces fradiae NTGA-334)菌株，菌株保藏编号为CGMCCNo.2074，保藏日期为2007年6月7日。
从采自云南省文山县的三七茎梗组织中分离得到本发明所用的链霉菌菌株。该菌株通过七叶苷-柠檬酸铁培养基的筛选，反复接种于含三七皂苷的培养基，经过68代的驯化和筛选，得到能够将各种三七皂苷中的二醇组人参皂苷转化为Compound K的菌株-“NTGA-334”。经16S rDNA、形态学，细胞化学以及生理生化指标考察，将该菌株鉴定为弗氏链霉菌(Streptomyces fradiae NTGA-334)菌株(见图1)。该菌株的菌落呈圆形、白色；基内菌丝浅黄色，不规则分支，不断裂；气生菌丝上形成灰黄色孢子链，直形或螺旋形，孢子椭圆形，表面光滑。细胞壁化学组成为I型(含有L，L-2，6二氨基庚二酸)；全细胞糖组成为C型(无特征性糖)；菌株能液化明胶，牛奶胨化，水解淀粉，不产生黑色素和H2S，在ISP2培养基上分泌浅黄色水溶性色素；具有β-糖苷酶活性；能利用的碳源有：蔗糖、D-葡萄糖、L-阿拉伯糖、D-木糖、L-鼠李糖以及各种三七皂苷。该菌株与弗氏链霉菌标准菌株Streptomyces.fradiaeNBRC 12215在16S rDNA上的相似度为99.83％。
在本发明弗氏链霉菌(Streptomyces fradiae NTGA-334)发酵转化各种三七皂苷、制备Compound K的工艺中，弗氏链霉菌(Streptomyces fradiae NTGA-334)菌株经过长时间的驯化培养后对营养的要求不高，可在高氏一号、ISP2、腐质酸或天门冬酰胺培养基上生长。
在本发明弗氏链霉菌(Streptomyces fradiae NTGA-334)发酵转化各种三七皂苷、制备Compound K的工艺中，各种三七皂苷投料量比例为0.1-10％(w/v)；发酵温度18-50℃，通气比0.1-10(v/v)，搅拌速率10-900r/min，发酵时间5h-120h。产物提取过程中添加0.1-30％(w/v)的Amberlite XAD-16或DH101大孔吸附树脂，10-900r/min，18-50℃处理1h～10h。
在本发明弗氏链霉菌(Streptomyces fradiae NTGA-334)发酵转化各种三七皂苷、制备Compound K的工艺中，弗氏链霉菌(Streptomyces fradiae NTGA-334)在全自动发酵罐中发酵转化各种三七皂苷产生Compound K，经过柱层析分离及有机溶剂结晶后得到Compound K的单晶，通过测定其波谱数据(表3)和X-单晶衍射，确证其结构与文献报道Compound K的结构一致(见图2)。
表3.Compound K核磁共振分析数据表(溶剂：吡啶-d5)
| No | δC(mult.)(125MHz) | δH(int.，mult.，JHH Hz)(500MHz) | No | δC(mult.)(125MHz) | δH(int.，mult.，JHH Hz)(500MHz) |
| 123456789101112131415161718 | 39.6(t)28.4(t)78.4(d)39.7(s)56.5(d)18.9(t)35.3(t)40.2(s)50.5(d)37.5(s)30.9(t)70.4(d)49.6(d)51.6(s)31.1(t)26.8(t)51.9(d)16.5(q) | 3.41(1H，dd，10.7，5.4)0.79(1H，d，11.5)3.92(1H，ddd)0.92(3H，s) | 192021222324252627282930313233343536 | 16.2(q)83.5(s)22.5(q)36.3(t)23.4(t)126.1(d)131.1(s)25.9(q)17.9(q)28.8(q)16.5(q)17.5(q)98.4(d)75.3(d)79.4(d)71.8(d)78.2(d)63.0(t) | 0.86(3H，s)1.61(3H，s)5.25(1H，t，6.7)1.21(3H，s)1.02(3H，s)0.96(3H，s)5.17(1H，d，7.8) |
Compound K的X-单晶衍射数据：Empirical formula：C36H64O8·2MeOH·H2O。Formulaweight：704.96。Crystal size：0.25×0.23×0.17mm。Colorless，at 293(2)K。Monoclinic：p2(1)，a＝11.484(2)_，b＝12.366(2)_，c＝14.060(3)_，α＝90°，β＝97.071(3)°，γ＝90°，V＝1981.5(6)_3，Z＝2，DX＝1.182Mg m-3，μ＝0.085mm-1。
本发明中采用的三七总皂苷中含Rb1 30％、Rg1 38％；三七叶总皂苷中含Rb1 5％，Rb2 30％；从三七总皂苷提取的二醇组人参皂苷中含Rb1 64％、Rg1 10.5％。
附图说明
图1是Streptomyces fradiae NTGA-334菌株16S rDNA聚类分析图及其16S rDNA序列图。图2是本发明获得的Compound K的X-单晶衍射图和平面结构图。
具体实施方式
在本发明实施例中所用的弗氏链霉菌(Streptomyces fradiae NTGA-334)发酵转化各种三七皂苷、制备Compound K的方法中，发酵步骤是：在100L全自动发酵罐中接种培养和投料5-24h后，调整通气比0.1-10(v/v)；之后根据Compound K含量的动态监测，将发酵温度调整为18-50℃，pH2-8，搅拌速率10-900r/min。产物收集步骤为：在100L全自动发酵罐中添加0.1-30％(w/v)的Amberlite XAD-16或DH101大孔吸附树脂，18-50℃、10-900r/min处理1h-10h。发酵液经过固液分离所得菌丝体和大孔吸附树脂在乙醇(95％)中超声提取1h～24h。提取液减压蒸去乙醇，经正相硅胶色谱分离，有机溶剂结晶，获得高含量的CompoundK产品。
实施例1 分离菌株：将采自云南省文山县的新鲜三七茎梗切成小段(3-4cm)，用70％的酒精浸泡0.5min，进行表面消毒，再以0.1％的氯化汞消毒8min，取出后用无菌水冲洗4～5次，接种于植物组织MS培养基，在三七茎梗切口周围首先出现直径0.1-0.5mm白色颗粒状菌丝，6d后菌丝上出现灰色粉状孢子并覆盖茎梗切口。挑取茎梗处灰色孢子于七叶苷-柠檬酸铁平板培养基，28℃培养12h后出现浅褐绿色不规则水解圈，表明该菌株具有胞外β-糖苷酶活性。将茎梗处灰色孢子接种到三七粉固体培养基中培养，待出现一定量孢子后再继续转接，直到该菌株生长速度逐渐加快且处理之后的三七粉药味消失，重量大幅度减轻；菌株随后转接到含有5％-10％(w/v)各种三七皂苷的液体培养基中进行持续驯化。经过68代驯化培养，获得能够将各种三七皂苷中的二醇组人参皂苷转化为Compound K的菌株-“NTGA-334”。该菌株被鉴定为弗氏链霉菌(Streptomyces fradiae)，已于2007年6月7日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，菌株保藏编号为CGMCC No.2074。
实施例2 将弗氏链霉菌(Streptomyces fradiae NTGA-334)从高氏1号斜面转接到含有1％(w/v)三七总皂苷的ISP2种子培养基中，28℃培养12h；然后接种到含有3000g三七总皂苷的60L腐质酸培养基中，在100L全自动发酵罐中28℃进行发酵。36h后调整提高通气比为1∶3(v/v)，搅拌速率调整为400r/min。48h后调整发酵温度至40℃，5％(w/v)氨水动态调整pH＝5.0。72h发酵结束，按3％(w/v)加入Amberlite XAD-16大孔吸附树脂，搅拌处理2h后放罐。发酵液经滤布过滤后得湿重5112g沉淀物，用30L乙醇(95％)超声提取沉淀物2h并经滤布过滤，滤渣再用1L乙醇(95％)洗涤5次。乙醇提取液经过减压浓缩干后得粗提取物1631g，通过硅胶柱层析分离，有机溶剂结晶，获得Compound K 367g(质量转化率35.2％；摩尔转化率62.7％)，HPLC检测其纯度为86.3％。
实施例3 将弗氏链霉菌(Streptomyces fradiae NTGA-334)从高氏1号斜面转接到含有1％(w/v)三七叶总皂苷的ISP2培养基中，28℃培养12h；然后接种到含有3000g三七叶总皂苷的60L腐质酸培养基中，在100L全自动发酵罐中28℃进行发酵。36h后调整提高通气比为1∶2(v/v)，搅拌速率调整为350r/min。48h后调整发酵温度至38℃，5％(w/v)氨水动态调整pH＝5.0。96h发酵结束，按4％(w/v)加入DH101大孔吸附树脂，搅拌处理4h后放罐。发酵液经滤布过滤后得湿重5909g沉淀物，用20L乙醇(95％)超声提取沉淀物3h并经滤布过滤，滤渣再用1L乙醇(95％)洗涤5次。乙醇提取液经过减压浓缩干后得粗提物1407g，通过硅胶柱层析分离，有机溶剂结晶，获得Compound K 462g(质量转化率37.5％；摩尔转化率66.8％)，HPLC检测其纯度为85.2％。
实施例4 将弗氏链霉菌(Streptomyces fradiae NTGA-334)从高氏1号斜面转接到含有1％(w/v)二醇组人参皂苷的ISP2培养基中，28℃培养12h；然后接种到含有1440g二醇组人参皂苷的60L腐质酸培养基中，在100L全自动发酵罐中28℃进行发酵。36h后调整提高通气比为1∶2，搅拌速率调整为300r/min。48h后调整发酵温度至42℃，5％(w/v)氨水动态调整pH＝5.0。60h发酵结束，按2％(w/v)加入Amberlite XAD-16大孔吸附树脂，搅拌处理1h后放罐。发酵液经滤布过滤后得湿重2623g沉淀物，用20L乙醇(95％)超声提取沉淀物1h并经滤布过滤，滤渣再用1L乙醇(95％)洗涤5次。乙醇提取液经过减压浓缩干后得粗提物845g，通过硅胶柱层析分离，有机溶剂结晶，获得Compound K 413g(质量转化率39.5％；摩尔转化率70.3％)，HPLC检测其纯度为88.1％。
本发明所用Streptomyces fradiae NTGA-334菌株的16S rDNA序列如下：
CACATGCAAGTCGAACGATGAACCACCTTCGGGTGGGGATTAGTGGCGAACGGGTGAG
TAACACGTGGGCAATCTGCCCTGCACTCTGGGACAAGCCCTGGAAACGGGGTCTAATAC
CGGATACTGACCTGCCAAGGCATCTTGGCGGGTCGAAAGCTCCGGCGGTGCAGGATGA
GCCCGCGGCCTATCAGCTTGTTGGTGAGGTAATGGCTCACCAAGGCGACGACGGGTAGC
CGGCCTGAGAGGGCGACCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGG
AGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGCAAGCCTGATGCAGCGACGCCGCGTG
AGGGATGACGGCCTTCGGGTTGTAAACCTCTTTCAGCAGGGAAGAAGCGAAAGTGACG
GTACCTGCAGAAGAAGCGCCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGG
CGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGAGCTCGTAGGCGGCTTGTCGCGTCGG
TTGTGAAAGCCCGGGGCTTAACCCCGGGTCTGCAGTCGATACGGGCAGGCTAGAGTTCG
GTAGGGGAGATCGGAA
Claims (2)
1.一株由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏的弗氏链霉菌(Streptomycesfradiae NTGA-334)菌株，菌株保藏编号为CGMCC No.2074，保藏日期为2007年6月7日。
2.一种用权利要求1所述菌株在100L全自动发酵罐中发酵转化各种三七皂苷中的二醇组人参皂苷、制备20-O-β-D-吡喃葡萄糖基-20(S)-原人参二醇(人参皂苷Compound K)的工艺，其特征在于：
(1)所述培养基为高氏一号、ISP2、腐质酸(HSG培养基)或天门冬酰胺培养基；
(2)培养基中各种三七皂苷投料量比例为0.1-10％(w/v)；发酵温度18-50℃，0.1-35％(w/v)氨水动态调节pH＝2-8，通气比0.1-10(v/v)，搅拌速率10-900r/min，发酵时间5h～120h；
(3)在产物提取过程中添加0.1-30％(w/v)的Amberlite XAD-16或DH101大孔吸附树脂，10-900r/min，18-50℃处理1h～10h。发酵液经过固液分离所得菌丝体和大孔吸附树脂在乙醇(95％)中超声提取1h～24h；
(4)弗氏链霉菌(Streptomyces fradiae NTGA-334)菌株发酵转化各种三七皂苷(三七总皂苷、三七叶总皂苷、从三七总皂苷提取的二醇组人参皂苷)中的二醇组人参皂苷，得到Compound K。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN200710066011XA CN101139562B (zh) | 2007-07-02 | 2007-07-02 | 一种链霉菌发酵三七皂苷制备稀有人参皂苷Compound K的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN200710066011XA CN101139562B (zh) | 2007-07-02 | 2007-07-02 | 一种链霉菌发酵三七皂苷制备稀有人参皂苷Compound K的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101139562A true CN101139562A (zh) | 2008-03-12 |
| CN101139562B CN101139562B (zh) | 2010-06-09 |
Family
ID=39191665
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN200710066011XA Expired - Fee Related CN101139562B (zh) | 2007-07-02 | 2007-07-02 | 一种链霉菌发酵三七皂苷制备稀有人参皂苷Compound K的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101139562B (zh) |
Cited By (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101508965B (zh) * | 2008-10-27 | 2011-08-03 | 昆明诺唯金参生物工程有限责任公司 | 一种链霉菌发酵三七皂苷制备20(S)-人参皂苷Rh1的方法 |
| CN102229890A (zh) * | 2010-12-15 | 2011-11-02 | 福建福大百特科技发展有限公司 | 一种复合蛋白酶及其制备方法和用途 |
| CN101921304B (zh) * | 2009-06-17 | 2013-04-03 | 浙江海正药业股份有限公司 | 一种运用大孔树脂纯化人参皂甙compound-K的方法 |
| CN103073611A (zh) * | 2013-01-10 | 2013-05-01 | 天津大学 | 一种人参皂苷c-k半水合物晶体及制备方法 |
| CN103146794A (zh) * | 2012-12-22 | 2013-06-12 | 桂林理工大学 | 一种利用微生物发酵提高剑麻皂苷产率的方法 |
| CN103205365A (zh) * | 2013-03-27 | 2013-07-17 | 沈阳药科大学 | 塔宾曲霉及其在制备人参皂苷Rh4及其苷元中的应用 |
| CN103627771A (zh) * | 2012-08-23 | 2014-03-12 | 云南云百草实验室有限公司 | 利用长枝木霉重构三七中的皂苷成分 |
| CN103923150A (zh) * | 2014-04-15 | 2014-07-16 | 厦门华侨亚热带植物引种园 | 绞股蓝皂苷及其制备方法 |
| CN103923149A (zh) * | 2014-04-15 | 2014-07-16 | 厦门华侨亚热带植物引种园 | 绞股蓝皂苷XLV Ed及其制备方法 |
| JP2015511608A (ja) * | 2012-04-01 | 2015-04-20 | 浙江海正薬業股▲ふん▼有限公司Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｈｉｓｕｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ＣＯ．，ＬＴＤ． | ジンセノシドｃ−ｋの２つの結晶形およびその製造方法 |
| JP2015511607A (ja) * | 2012-04-01 | 2015-04-20 | 浙江海正薬業股▲ふん▼有限公司Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｈｉｓｕｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ＣＯ．，ＬＴＤ． | ギンセノシドｃ−ｋ多形化合物およびその調製方法 |
| CN105838770A (zh) * | 2016-05-24 | 2016-08-10 | 西北大学 | 一种氧化微杆菌发酵二醇组人参皂苷制备稀有人参皂苷ck的方法 |
| CN106047978A (zh) * | 2016-06-06 | 2016-10-26 | 浙江大学 | 一种利用天然皂苷生物转化合成稀有人参皂苷ck的方法 |
| CN106086146A (zh) * | 2016-06-30 | 2016-11-09 | 江苏省中国科学院植物研究所 | 一种精制珍贵稀有人参皂苷的制备方法及用途 |
| CN106148229A (zh) * | 2016-07-08 | 2016-11-23 | 金正大生态工程集团股份有限公司 | 一种弗氏链霉菌固体培养基、培养方法及农用微生物菌剂的制备方法 |
| CN108588054A (zh) * | 2018-05-11 | 2018-09-28 | 上海中医药大学 | 一种三七皂苷糖苷水解酶及其突变体在生产越南人参皂苷r7中的应用 |
| CN109971818A (zh) * | 2018-04-19 | 2019-07-05 | 沈阳药科大学 | 一种制备稀有人参皂苷的方法 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109646471A (zh) * | 2019-01-22 | 2019-04-19 | 名臣健康用品股份有限公司 | 一种富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷在制备口腔护理产品中的应用 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN100487131C (zh) * | 2004-04-27 | 2009-05-13 | 复旦大学 | 一种制备人参皂甙Compound-K的方法 |
| CN1300160C (zh) * | 2004-06-28 | 2007-02-14 | 吉林农业大学 | 人参皂苷次级苷compound K的脂肪酸酯类化合物及制备方法 |
-
2007
- 2007-07-02 CN CN200710066011XA patent/CN101139562B/zh not_active Expired - Fee Related
Cited By (28)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101508965B (zh) * | 2008-10-27 | 2011-08-03 | 昆明诺唯金参生物工程有限责任公司 | 一种链霉菌发酵三七皂苷制备20(S)-人参皂苷Rh1的方法 |
| CN101921304B (zh) * | 2009-06-17 | 2013-04-03 | 浙江海正药业股份有限公司 | 一种运用大孔树脂纯化人参皂甙compound-K的方法 |
| CN102229890B (zh) * | 2010-12-15 | 2014-04-02 | 福建福大百特科技发展有限公司 | 一种复合蛋白酶及其制备方法和用途 |
| CN102229890A (zh) * | 2010-12-15 | 2011-11-02 | 福建福大百特科技发展有限公司 | 一种复合蛋白酶及其制备方法和用途 |
| US9670245B2 (en) | 2012-04-01 | 2017-06-06 | Zhejiang Hisun Pharmaceutical Co., Ltd. | Ginsenoside C-K polymorphic compounds and method for preparing same |
| US9643992B2 (en) | 2012-04-01 | 2017-05-09 | Zhejiang Hisun Pharmaceutical Co., Ltd. | Two crystal forms of ginsenoside C-K and method for preparing same |
| JP2015511608A (ja) * | 2012-04-01 | 2015-04-20 | 浙江海正薬業股▲ふん▼有限公司Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｈｉｓｕｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ＣＯ．，ＬＴＤ． | ジンセノシドｃ−ｋの２つの結晶形およびその製造方法 |
| JP2015511607A (ja) * | 2012-04-01 | 2015-04-20 | 浙江海正薬業股▲ふん▼有限公司Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｈｉｓｕｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ＣＯ．，ＬＴＤ． | ギンセノシドｃ−ｋ多形化合物およびその調製方法 |
| CN103627771A (zh) * | 2012-08-23 | 2014-03-12 | 云南云百草实验室有限公司 | 利用长枝木霉重构三七中的皂苷成分 |
| CN103146794A (zh) * | 2012-12-22 | 2013-06-12 | 桂林理工大学 | 一种利用微生物发酵提高剑麻皂苷产率的方法 |
| CN103146794B (zh) * | 2012-12-22 | 2014-11-05 | 桂林理工大学 | 一种利用微生物发酵提高剑麻皂苷产率的方法 |
| CN103073611A (zh) * | 2013-01-10 | 2013-05-01 | 天津大学 | 一种人参皂苷c-k半水合物晶体及制备方法 |
| CN103073611B (zh) * | 2013-01-10 | 2015-10-28 | 天津大学 | 一种人参皂苷c-k半水合物晶体及制备方法 |
| CN103205365B (zh) * | 2013-03-27 | 2014-05-21 | 沈阳药科大学 | 塔宾曲霉及其在制备人参皂苷Rh4及其苷元中的应用 |
| CN103205365A (zh) * | 2013-03-27 | 2013-07-17 | 沈阳药科大学 | 塔宾曲霉及其在制备人参皂苷Rh4及其苷元中的应用 |
| CN103923149A (zh) * | 2014-04-15 | 2014-07-16 | 厦门华侨亚热带植物引种园 | 绞股蓝皂苷XLV Ed及其制备方法 |
| CN103923150B (zh) * | 2014-04-15 | 2017-03-01 | 厦门华侨亚热带植物引种园 | 绞股蓝皂苷及其制备方法 |
| CN103923150A (zh) * | 2014-04-15 | 2014-07-16 | 厦门华侨亚热带植物引种园 | 绞股蓝皂苷及其制备方法 |
| CN105838770A (zh) * | 2016-05-24 | 2016-08-10 | 西北大学 | 一种氧化微杆菌发酵二醇组人参皂苷制备稀有人参皂苷ck的方法 |
| CN105838770B (zh) * | 2016-05-24 | 2019-06-21 | 西北大学 | 一种氧化微杆菌发酵二醇组人参皂苷制备稀有人参皂苷ck的方法 |
| CN106047978A (zh) * | 2016-06-06 | 2016-10-26 | 浙江大学 | 一种利用天然皂苷生物转化合成稀有人参皂苷ck的方法 |
| CN106047978B (zh) * | 2016-06-06 | 2019-08-27 | 浙江大学 | 一种利用天然皂苷生物转化合成稀有人参皂苷ck的方法 |
| CN106086146A (zh) * | 2016-06-30 | 2016-11-09 | 江苏省中国科学院植物研究所 | 一种精制珍贵稀有人参皂苷的制备方法及用途 |
| CN106148229A (zh) * | 2016-07-08 | 2016-11-23 | 金正大生态工程集团股份有限公司 | 一种弗氏链霉菌固体培养基、培养方法及农用微生物菌剂的制备方法 |
| CN106148229B (zh) * | 2016-07-08 | 2020-01-10 | 金正大生态工程集团股份有限公司 | 一种弗氏链霉菌固体培养基、培养方法及农用微生物菌剂的制备方法 |
| CN109971818A (zh) * | 2018-04-19 | 2019-07-05 | 沈阳药科大学 | 一种制备稀有人参皂苷的方法 |
| CN108588054A (zh) * | 2018-05-11 | 2018-09-28 | 上海中医药大学 | 一种三七皂苷糖苷水解酶及其突变体在生产越南人参皂苷r7中的应用 |
| CN108588054B (zh) * | 2018-05-11 | 2021-11-26 | 上海中医药大学 | 一种三七皂苷糖苷水解酶及其突变体在生产越南人参皂苷r7中的应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN101139562B (zh) | 2010-06-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101139562B (zh) | 一种链霉菌发酵三七皂苷制备稀有人参皂苷Compound K的方法 | |
| KR101330864B1 (ko) | 펙티나아제를 이용한 진세노사이드 Rd가 강화된 발효인삼 또는 발효홍삼의 제조방법 | |
| CN105174493A (zh) | 一种水产养殖用发酵型中草药水质改良剂的制备方法及其应用 | |
| CN103255193A (zh) | 一种人参内生多粘类芽孢杆菌转化人参皂苷的方法 | |
| CN110507681A (zh) | 一种高值化利用人参花的工艺 | |
| CN102199565B (zh) | 一种屎肠球菌及其产生雌马酚的方法与应用 | |
| CN101928671B (zh) | 一种链格孢属菌及其发酵人参茎叶总皂苷制备人参皂苷Rg3的方法 | |
| CN104087645B (zh) | 一种固体发酵人参花及制备方法 | |
| CN102206692B (zh) | 采用中药发酵技术提高黄芩苷提取量的工艺 | |
| CN101358173A (zh) | 黑曲霉zjut712及其在固态发酵炮制牛蒡子中的应用 | |
| CN102965288A (zh) | 一株生物合成3β,7α,15α-三羟基雄甾-5-烯-17-酮的菌株及其应用 | |
| CN110218656A (zh) | 利用空气压力脉动的灵芝-药渣双向固体发酵方法及应用 | |
| CN103614429B (zh) | 一种微生物转化银杏花粉黄酮苷的方法 | |
| CN110063409A (zh) | 一种有效提高豆渣饲料中大豆异黄酮苷元含量的发酵方法 | |
| CN101508965B (zh) | 一种链霉菌发酵三七皂苷制备20(S)-人参皂苷Rh1的方法 | |
| CN113502230B (zh) | 猴头菇菌株及其培养方法、猴头菌-人参双向固体发酵方法和高效转化稀有人参皂苷的方法 | |
| CN105192592A (zh) | 一种具降血糖功能的腊八豆及其加工方法 | |
| Chen et al. | Biotransformation of saponins to astragaloside IV from Radix Astragali by immobilized Aspergillus niger | |
| CN104371950B (zh) | 耐氧梭菌及其在去氧甲基安哥拉紫檀素有氧合成中的应用 | |
| CN104830736B (zh) | 一株戊糖片球菌及其应用 | |
| CN108277180A (zh) | 一株产环糊精葡萄糖基转移酶的罗汉果内生菌菌株及其筛选方法和应用 | |
| CN104087647B (zh) | 一种用于发酵人参花的固体培养基c-y-2 | |
| CN102584615A (zh) | 一种生物碱化合物及其制备方法和应用 | |
| Senthil et al. | Microbial conversion of major ginsenoside Rb1 to minor ginsenoside Rd by Indian fermented food bacteria | |
| CN102533892A (zh) | 一种生物转化沙棘叶黄酮制备高活性苯并吡喃-4-酮的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C57 | Notification of unclear or unknown address | ||
| DD01 | Delivery of document by public notice |
Addressee: Du Gang Document name: the First Notification of an Office Action |
|
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| DD01 | Delivery of document by public notice |
Addressee: Du Gang Document name: patent for invention |
|
| DD01 | Delivery of document by public notice |
Addressee: Du Gang Document name: Notification of Passing Examination on Formalities |
|
| C56 | Change in the name or address of the patentee |
Owner name: YUNNAN YU'NUO BIOENGINEERING LLC Free format text: FORMER NAME: KUNMING WEINUO JINSHEN BIOLOGICAL ENGINEERING CO., LTD. |
|
| CP03 | Change of name, title or address |
Address after: Two B2 building, No. 16, PUFA Road, export processing zone, Kunming, Yunnan, 650117, China Patentee after: YUNNAN YUNUO BIOLOGICAL ENGINEERING CO., LTD. Address before: Comprehensive building 650106 Yunnan province Kunming Haiyuan Kunming high tech Industrial Development Zone No. 658 North Road, Yunnan Biological Technology Innovation Center No. 604 Patentee before: Kunming Nuowei Jinsheng Biological Engineering Co., Ltd. |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20100609 Termination date: 20190702 |