CN109646471A - 一种富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷在制备口腔护理产品中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷在口腔护理产品中的应用。将富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷作为抗炎、镇痛、消肿、止血成分添加到牙膏、漱口水、牙粉等口腔护理产品中，所述富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷是将三七原型皂苷通过生物技术转化成稀有人参皂苷，并将富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷作为抗炎、镇痛、消肿、止血成分应用到口腔护理产品中。该口腔护理产品能迅速缓解牙龈红肿、减少牙龈出血、减轻口臭、帮助修复黏膜损伤、促进牙周健康，更好地排除个体代谢差异而导致的效果参差不齐，实现产品功能的标准化。

Description

一种富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷在制备口腔护理产品 中的应用

技术领域

本发明涉及一种富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷在制备口腔护理产品中的应用，属于口腔护理产品技术领域。

背景技术

三七为五加科人参属植物三七干燥根块，又称田七、人参三七、参三七、文州三七。三七是我国传统中药材，具有抗炎、止血、抗衰老、抗肿瘤等药理活性。三七主要活性成分为三七皂苷，目前已从三七的不同部位分离出70多种皂苷，分为四环三萜达玛烷型原人参二醇组皂苷和四环三萜达玛烷型原人参三醇组皂苷。三七皂苷中各单体皂苷的药理作用各有偏重，原人参二醇组皂苷主要为人参皂苷Rb1及少量Rb2、Rb3、Rc、Rd，Rh2等，具有消肿、镇痛、抗炎作用；原人参三醇组皂苷主要为人参皂苷Re、Rg1、Rg2、Rh1、R1等，具有抗衰老、抗肿瘤作用。

人参皂苷是三七、人参等五加科人参属植物中所含的一种天然主要活性成分，是在植物生长过程中产生的一种次生代谢物，可以从五加科人参属植物中直接提取，其中原人参二醇组皂苷含量占大部分。原人参二醇组皂苷如Rb1、Rb2、Rc等口服后由肠道细菌所分泌的糖苷酶选择性水解C-3位糖配体，生成仅在C-20位保留一个葡萄糖的次生皂苷，称为稀有人参皂苷(compound K，简称CK)，是原人参二醇组皂苷的最终药用形式。在天然的人参干燥根中根本不存在，仅在三七和人参果中微量存在(仅含万分之几)，因此业界称其为稀有人参皂苷，研究表明，多数原人参二醇组皂苷如Rb1、Rb2、Rc等只有在人体肠道内被肠道菌代谢为CK后才能被人体吸收，所以稀有人参皂苷是直接被体内吸收和发挥作用的真正实体，而其它皂苷只是药物前体。

稀有人参皂苷是肠道细菌代谢产物，无法从三七等人参属药材中直接分离，目前主要利用生物修饰方法进行人参皂苷糖基改造，目标主要锁定在对原人参二醇组皂苷C-3和C-20位的糖基结构修饰，使含量较高的原人参二醇组皂苷Rb、Rc等的糖基经过水解作用，定向转化为稀有人参皂苷。稀有人参皂苷的药理活性具有多靶点、高活性，是公认的一种具有良好生物活性的多功能药物，具有抗炎、抗过敏、抗肿瘤、抗衰老及保肝等效果。

三七作为抗炎、止血的传统中药应用于口腔护理产品中由来已久，但局限于技术原因，大都将三七磨粉或简单提取皂苷的形式应用到口腔护理产品中。由于三七原型皂苷需要在人体肠道内通过自身酶、菌群等微生物转化成能直接吸收的稀有人参皂苷才能起效，而稀有人参皂苷在三七中仅微量存在(仅含万分之几)。同时由于三七皂苷膜渗透性差，人体吸收不良，坚持使用很久才能见到一点点效果，起效非常慢，对于身体虚弱的人群，肠道吸收更差，几乎无效，因此，直接将三七或原三七皂苷应用于口腔护理产品中很难发挥药效。

随着生物技术和分子技术的发展，中药的现代药理和药效在不断创新和发展，给中药的应用提供了有力的理论基础和发展空间。对于传统中药三七，如何利用生物技术对原人参皂苷的结构进行转化，保持原皂苷母核的结构不变，获得活性更高的稀有人参皂苷，实现药效的快速发挥和高效利用，并实现产业化应用于口腔护理产品中，为消费者提供安全有效的口腔保健，是科研人员迫切解决的技术问题。

发明内容

为了解决现有技术问题，本发明的目的在于提供一种富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷在制备口腔护理产品中的应用，富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷在抗炎、镇痛、消肿、止血等方面效果显著。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷在口腔护理产品中的应用。

所述富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷的转化方法包括化学法(酸、碱水解)、高温裂解法、微生物转化法以及酶催化法。优选微生物转化法和酶催化法。

所述富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷是以三七(根、茎、叶)为原料，提取三七总皂苷，再模拟体内转化过程，进行体外微生物转化，通过微生物(酶和菌株)选择性水解糖基进行转化、分离、浓缩、纯化等工序。为了便于使用，制备成含稀有人参皂苷1～1.5％(HPLC)，总皂苷4～5.0％(UV)的丙二醇预配液。

所述富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷在口腔护理产品中的添加量为0.05～1.0％，优选添加量为0.1～0.5％。

所述口腔护理产品为牙膏、漱口水、牙粉等口腔护理常用产品，但并不局限于此，还可以是口腔喷雾、牙贴、泡腾片等其它口腔护理产品。

所述富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷其制备工艺具体如下：

1)以三七(根、茎、叶)为原料，提取三七总皂苷：取干燥的三七(根、茎、叶)，粉碎后，过100目筛，用70％～95％乙醇回流提取，过滤，滤液减压浓缩，得到三七浸膏；对三七浸膏采用超临界萃取脱农残，即选用10％～20％乙醇作为夹带剂，夹带剂与原料的比为1：2，超临界萃取压力为30MPa～40MPa、萃取温度为40℃～50℃，流速为10kg/h，平均用量为20kg；对三七浸膏采用螯合树脂脱重金属，100g浸膏加水稀释至1L，搅拌，静置8h，取上清液过D403树脂，95％乙醇洗脱，合并洗脱液，真空旋转浓缩至无醇味，最后干燥为三七总皂苷；

2)再模拟体内转化过程，进行体外微生物转化，通过微生物(酶和菌株)选择性水解糖基进行转化：将菌株(从三七茎梗组织中筛选、分离、驯化得到的的专用菌株)从高氏1号斜面转接到含有1％～5％三七皂苷的培养基中，28℃培养12h，然后接种到含有2kg～10kg三七总皂苷的50L腐质酸培养基中，并加入一种糖苷水解酶(酿酒酵母发酵而得)，酶的总浓度在5g/L～10g/L之间，在100L全自动发酵罐中35℃～40℃进行酶解发酵，搅拌速度为200r/min～300r/min，用5％(w/v)氨水动态调整pH为4～6，酶解发酵时间为72h～120h；

3)对转化液进行分离、浓缩、纯化：酶解发酵结束后，按5％(w/v)加入D101大孔吸附树脂，搅拌3h后放罐，经滤布过滤后得沉淀物，用10L～20L乙醇(95％)超声提取沉淀物4h并经滤布过滤，滤渣再用1L～2L乙醇(95％)洗涤4次，合并乙醇提取液经减压浓缩干后得粗提物，通过硅胶柱层析分离，有机溶剂结晶纯化，获得富含稀有人参皂苷(CK、Rh1)的活化三七皂苷，总皂苷转化率为70％以上，HPLC检测其纯度为85％以上。

一种富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷的牙膏，包含以下重量百分比的原料组分：

0.05～1.0％的富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷，18～50％的磨擦剂，20～60％的保湿剂，0.8～1.2％的增稠剂，2～3％的发泡剂，0.1～0.25％的甜味剂，0.1～0.3％的防腐剂，0.8～1.2％的香精，去离子水添加至100％。

所述磨擦剂为碳酸钙、磷酸氢钙、二氧化硅中的一种或两种的混合物；

所述保湿剂为山梨醇、甘油、聚乙二醇、丙二醇中的一种或多种的混合物；

所述增稠剂为羧甲基纤维素钠、黄原胶、瓜儿胶、卡拉胶中的一种或多种的混合物；

所述发泡剂为月桂醇硫酸酯钠、月桂酰肌氨酸钠、椰油酰胺丙基甜菜碱中的一种或两种的混合物；

所述甜味剂为糖精钠、三氯蔗糖、阿斯巴甜、甜菊糖中的一种或两种的混合物；

所述防腐剂为苯甲酸钠、尼泊金酯类中的一种或两种的混合物。

所述一种富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷的牙膏，并不局限于以上成分，还可以根据产品需求添加其它成分，如：二氧化钛、羟基磷灰石、焦磷酸钠、植酸钠、氯化锶、硝酸钾、氯化钠、氟化物、木糖醇等。

一种富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷的漱口水，包含以下重量百分比的原料组分：

0.05～1.0％的富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷，15～25％的保湿剂，1～2％的乳化剂，0.1～0.25％的甜味剂，0.1～0.2％的防腐剂，0.2～0.3％的香精，去离子水添加至100％。

所述保湿剂为山梨醇、甘油、丙二醇中的一种或多种的混合物；

所述乳化剂为Tween-60、Poloxamer-407、PEG-40氢化蓖麻油中的一种或两种的混合物；

所述甜味剂为糖精钠、三氯蔗糖、阿斯巴甜、甜菊糖中的一种或两种的混合物；

所述防腐剂为苯甲酸钠、尼泊金酯类中的一种或多种的混合物。

所述富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷的漱口水，并不局限于以上成分，还可以根据产品需求添加其它成分，如：乙醇、木糖醇、焦磷酸钠、植酸钠、氯化锶、硝酸钾、氯化钠、氟化物、色素等。

一种富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷的牙粉，包含以下重量百分比的原料组分：

0.05～1.0％的富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷，80～85％的磨擦剂，3～5％的发泡剂，0.3～0.4％的甜味剂，0.2～0.3％的防腐剂，1.0～2.0％的香精，去离子水添加至100％。

所述磨擦剂为碳酸钙、磷酸氢钙、二氧化硅中的一种或两种的混合物；

所述发泡剂为月桂醇硫酸酯钠、月桂酰肌氨酸钠、椰油酰胺丙基甜菜碱中的一种或两种的混合物；

所述甜味剂为糖精钠、三氯蔗糖、阿斯巴甜、甜菊糖中的一种或两种的混合物；

所述防腐剂为苯甲酸钠、尼泊金酯类中的一种或两种的混合物。

所述富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷的牙粉，并不局限于以上成分，还可以根据产品需求添加其它成分，如：二氧化钛、羟基磷灰石、焦磷酸钠、植酸钠、氯化锶、硝酸钾、氯化钠、氟化物、木糖醇等。

本发明富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷应用于口腔护理产品中，具有如下优点和

有益效果：

1、三七原型皂苷膜渗透性差，人体吸收不良，药效比较缓慢，最终吸收进入体循环并发挥其生物活性的物质是经过肠道菌群代谢转化的脱糖基皂苷，即稀有人参皂苷。三七皂苷经过体外生物活化后，降解数个糖基，分子量更小，亲脂性更强，更易透过粘膜上皮细胞而被吸收。活化了的三七皂苷富含稀有人参皂苷，其生物活性比原型皂苷提高了数十倍、数百倍。

2、经活化后的富含稀有人参皂苷的三七皂苷，免去了人体肠道微生物的转化，直接是发挥活性的主体，应用于口腔护理产品中更容易被口腔黏膜和舌下静脉吸收，直接进入血液循环并迅速发挥作用，其优点是传统以原型皂苷的方式应用到口腔护理产品中无法比拟的，特别在抗炎、镇痛、消肿、止血等方面效果更加显著。

3、牙膏、漱口水、牙粉等口腔护理产品，属于洗去型产品，活性成分在口腔逗留时间很短，在短暂的逗留过程中，活性成分主要通过口腔黏膜和舌下静脉吸收进入血液循环，进入消化道的活性成分极少，这样原型皂苷被肠道细菌转化成稀有人参皂苷并吸收利用的更是微乎其微，况且人体肠道代谢皂苷的能力因人而异，因时而异，导致功效发挥个体差异明显。经过活化后的三七皂苷富含稀有人参皂苷，应用到口腔护理产品中，极大地排除了个体差异，实现了产品功能的标准化。

4、富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷应用于口腔护理产品中，具有明显的抗炎、镇痛、消肿、止血效果，能迅速缓解牙龈红肿、减少牙龈出血、减轻口臭、帮助修复黏膜损伤、促进牙周健康。

5、富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷应用于口腔护理产品中，不会引起产品变色，几乎没有药味，口感更加清爽，更易被消费者接受，赋予口腔清新洁净的全新感觉，避免了传统中药应用于产品中易变色、药味重等缺点。

具体实施方式

为了便于理解本发明，下面将结合具体的实施例对本发明进行更全面的描述。本发明给出了较佳实施方式。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施方式。相反地，提供这些实施方式的目的是使对本发明的公开内容理解的更加透彻全面。

除非另有定义，本发明所使用的技术术语与本发明技术领域的技术人员通常理解的含义相同，本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施方式的目的，不是旨在限制本发明。

本发明的一种富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷在制备口腔护理产品中的应用，是将三七原型皂苷通过生物技术转化成稀有人参皂苷，并将富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷作为抗炎、镇痛、消肿、止血成分添加到牙膏、漱口水、牙粉等口腔护理产品中。

本发明公开的一种富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷在口腔护理产品中的添加量为0.05～1.0％，优选添加量为0.1～0.5％。

本发明所述口腔护理产品为牙膏、漱口水、牙粉等口腔护理常用产品，但并不局限于此，还可以是口腔喷雾、牙贴、泡腾片等其它口腔护理产品，能迅速缓解牙龈红肿、减少牙龈出血、减轻口臭、帮助修复黏膜损伤、促进牙周健康，更好地排除个体代谢差异而导致的效果参差不齐，实现产品功能的标准化。

实施例1

一种富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷的牙膏，各成分的重量百分比为：

富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷0.1％，碳酸钙50％，聚乙二醇2％，山梨醇18％，羧甲基纤维素钠0.8％，黄原胶0.4％，月桂醇硫酸酯钠2.5％，椰油酰胺丙基甜菜碱0.5％，焦磷酸钠0.2％，糖精钠0.25％，尼泊金甲酯0.15％，尼泊金丙酯0.05％，香精1.2％，去离子水添加至100％。

其中，本实施例中原料组份：富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷的制备工艺如下：

1)以三七根为原料，提取三七总皂苷：取干燥的三七根，粉碎后，过100目筛，用95％乙醇回流提取，过滤，滤液减压浓缩，得到三七浸膏；对三七浸膏采用超临界萃取脱农残，即选用20％乙醇作为夹带剂，夹带剂与原料的比为1：2，超临界萃取压力为40MPa、萃取温度为50℃，流速为10kg/h，平均用量为20kg；对三七浸膏采用螯合树脂脱重金属，100g浸膏加水稀释至1L，搅拌，静置8h，取上清液过D403树脂，95％乙醇洗脱，合并洗脱液，真空旋转浓缩至无醇味，最后干燥为三七总皂苷；

2)再模拟体内转化过程，进行体外微生物转化，通过微生物(酶和菌株)选择性水解糖基进行转化：将菌株(从三七茎梗组织中筛选、分离、驯化得到的的专用菌株)从高氏1号斜面转接到含有5％三七皂苷的培养基中，28℃培养12h，然后接种到含有10kg三七总皂苷的50L腐质酸培养基中，并加入一种糖苷水解酶(酿酒酵母发酵而得)，酶的总浓度在10g/L之间，在100L全自动发酵罐中40℃进行酶解发酵，搅拌速度为300r/min，用5％(w/v)氨水动态调整pH为4～6，酶解发酵时间为120h；

3)对转化液进行分离、浓缩、纯化：酶解发酵结束后，按5％(w/v)加入D101大孔吸附树脂，搅拌3h后放罐，经滤布过滤后得沉淀物，用20L乙醇(95％)超声提取沉淀物4h并经滤布过滤，滤渣再用2L乙醇(95％)洗涤4次,合并乙醇提取液经减压浓缩干后得粗提物，通过硅胶柱层析分离，有机溶剂结晶纯化，获得富含稀有人参皂苷(CK、Rh1)的活化三七皂苷，总皂苷转化率为84％，HPLC检测其纯度为95％。

为了便于使用，制备成含稀有人参皂苷1～1.5％(HPLC)，总皂苷4～5.0％(UV)的丙二醇预配液。

本实施例富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷的牙膏的制作工艺如下：

1)将尼泊金甲酯、尼泊金丙酯、香精称量后加入容器A中搅拌溶解；

2)将去离子水加入预混锅中B中，然后加入糖精钠、焦磷酸钠、椰油酰胺丙基甜菜碱、富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷并搅拌溶解；

3)将碳酸钙、羧甲基纤维素钠、黄原胶、月桂醇硫酸酯钠加入混粉器中；

4)将聚乙二醇、山梨醇和预混锅B中的液料在真空状态下吸入制膏机，然后开动刮板和搅拌，再吸入混粉器中的粉料，粉料进完后打开均质，均质脱气30分钟；

5)真空脱气30分钟后，吸入容器A中的原料，再均质脱气10分钟，检验合格后方可出膏。

实施例2

一种富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷的牙膏，各成分的重量百分比为：

富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷0.3％，磷酸氢钙35％，二氧化硅5％，丙二醇5％，甘油10％，山梨醇15％，羧甲基纤维素钠0.5，瓜儿胶0.5％，月桂醇硫酸酯钠2.3％，月桂酰肌氨酸钠0.5％，焦磷酸钠0.2％，三氯蔗糖0.22％，苯甲酸钠0.3％，香精1.0％，去离子水添加至100％。

其中，本实施例中原料组份：富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷的制备工艺如下：

1)以三七茎、叶为原料，提取三七总皂苷：取干燥的三七茎、叶，粉碎后，过100目筛，用70％乙醇回流提取，过滤，滤液减压浓缩，得到三七浸膏；对三七浸膏采用超临界萃取脱农残，即选用10％乙醇作为夹带剂，夹带剂与原料的比为1：2，超临界萃取压力为30MPa、萃取温度为40℃，流速为10kg/h，平均用量为20kg；对三七浸膏采用螯合树脂脱重金属，100g浸膏加水稀释至1L，搅拌，静置8h，取上清液过D403树脂，95％乙醇洗脱，合并洗脱液，真空旋转浓缩至无醇味，最后干燥为三七总皂苷；

2)再模拟体内转化过程，进行体外微生物转化，通过微生物(酶和菌株)选择性水解糖基进行转化：将菌株(从三七茎梗组织中筛选、分离、驯化得到的的专用菌株)从高氏1号斜面转接到含有1％三七皂苷的培养基中，28℃培养12h，然后接种到含有2kg三七总皂苷的50L腐质酸培养基中，并加入一种糖苷水解酶(酿酒酵母发酵而得)，酶的总浓度在5g/L之间，在100L全自动发酵罐中35℃进行酶解发酵，搅拌速度为200r/min，用5％(w/v)氨水动态调整pH为4～6，酶解发酵时间为72h；

3)对转化液进行分离、浓缩、纯化：酶解发酵结束后，按5％(w/v)加入D101大孔吸附树脂，搅拌3h后放罐，经滤布过滤后得沉淀物，用10L乙醇(95％)超声提取沉淀物4h并经滤布过滤，滤渣再用1L乙醇(95％)洗涤4次,合并乙醇提取液经减压浓缩干后得粗提物，通过硅胶柱层析分离，有机溶剂结晶纯化，获得富含稀有人参皂苷(CK、Rh1)的活化三七皂苷，总皂苷转化率为72％，HPLC检测其纯度为88％。

为了便于使用，制备成含稀有人参皂苷1～1.5％(HPLC)，总皂苷4～5.0％(UV)的丙二醇预配液。

本实施例富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷的牙膏的制作工艺如下：

1)将香精称量后加入容器A中备用；

2)将去离子水加入预混锅B中，然后加入三氯蔗糖、月桂酰肌氨酸钠、焦磷酸钠、富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷并搅拌溶解；

3)将磷酸氢钙、二氧化硅、羧甲基纤维素钠、瓜儿胶、月桂醇硫酸酯钠加入混粉器中；

4)将丙二醇、甘油、山梨醇和预混锅B中的液料在真空状态下吸入制膏机，然后开动刮板和搅拌，再吸入混粉器中的粉料，粉料进完后打开均质，均质脱气30分钟；

5)真空脱气30分钟后，吸入容器A中的原料，再均质脱气10分钟，检验合格后方可出膏。

实施例3

一种富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷的牙膏，各成分的重量百分比为：

富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷0.5％，二氧化硅18％，聚乙二醇4％，山梨醇56％，羧甲基纤维素钠0.6，卡拉胶0.2％，月桂醇硫酸酯钠2％，焦磷酸钠0.5％，阿斯巴甜0.05％，甜菊糖0.05％，苯甲酸钠0.3％，香精0.8％，钛白粉0.2％，去离子水添加至100％。

其中，本实施例中原料组份：富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷的制备工艺如下：

1)以三七根为原料，提取三七总皂苷：取干燥的三七根，粉碎后，过100目筛，用80％乙醇回流提取，过滤，滤液减压浓缩，得到三七浸膏；对三七浸膏采用超临界萃取脱农残，即选用15％乙醇作为夹带剂，夹带剂与原料的比为1：2，超临界萃取压力为35MPa、萃取温度为45℃，流速为10kg/h，平均用量为20kg；对三七浸膏采用螯合树脂脱重金属，100g浸膏加水稀释至1L，搅拌，静置8h，取上清液过D403树脂，95％乙醇洗脱，合并洗脱液，真空旋转浓缩至无醇味，最后干燥为三七总皂苷；

2)再模拟体内转化过程，进行体外微生物转化，通过微生物(酶和菌株)选择性水解糖基进行转化：将菌株(从三七茎梗组织中筛选、分离、驯化得到的的专用菌株)从高氏1号斜面转接到含有2％三七皂苷的培养基中，28℃培养12h，然后接种到含有5kg三七总皂苷的50L腐质酸培养基中，并加入一种糖苷水解酶(酿酒酵母发酵而得)，酶的总浓度在8g/L之间，在100L全自动发酵罐中37℃进行酶解发酵，搅拌速度为250r/min，用5％(w/v)氨水动态调整pH为4～6，酶解发酵时间为96h；

3)对转化液进行分离、浓缩、纯化：酶解发酵结束后，按5％(w/v)加入D101大孔吸附树脂，搅拌3h后放罐，经滤布过滤后得沉淀物，用15L乙醇(95％)超声提取沉淀物4h并经滤布过滤，滤渣再用1L乙醇(95％)洗涤4次,合并乙醇提取液经减压浓缩干后得粗提物，通过硅胶柱层析分离，有机溶剂结晶纯化，获得富含稀有人参皂苷(CK、Rh1)的活化三七皂苷，总皂苷转化率为83％，HPLC检测其纯度为92％。

为了便于使用，制备成含稀有人参皂苷1～1.5％(HPLC)，总皂苷4～5.0％(UV)的丙二醇预配液。

本实施例富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷的牙膏的制作工艺如下：

1)将香精称量后加入容器A中备用；

2)将去离子水加入预混锅中B中，然后加入阿斯巴甜、甜菊糖、焦磷酸钠、苯甲酸钠、富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷并搅拌溶解；

3)将二氧化硅、羧甲基纤维素钠、卡拉胶、月桂醇硫酸酯钠、钛白粉加入混粉器中；

4)将聚乙二醇、山梨醇和预混锅B中的液料在真空状态下吸入制膏机，然后开动刮板和搅拌，再吸入混粉器中的粉料，粉料进完后打开均质，均质脱气30分钟；

5)真空脱气30分钟后，吸入容器A中的原料，再均质脱气10分钟，检验合格后方可出膏。

实施例4

一种富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷的漱口水，各成分的重量百分比为：

富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷0.05％，甘油10％，山梨醇10％，乙醇5％，Tween-60 2％，三氯蔗糖0.15％，甜菊糖0.1％，尼泊金甲酯0.1％，香精0.2％，色素适量，去离子水添加至100％。

其中，本实施例中原料组份：富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷的制备工艺如下：

1)以三七茎、叶为原料，提取三七总皂苷：取干燥的三七茎、叶，粉碎后，过100目筛，用95％乙醇回流提取，过滤，滤液减压浓缩，得到三七浸膏；对三七浸膏采用超临界萃取脱农残，即选用20％乙醇作为夹带剂，夹带剂与原料的比为1：2，超临界萃取压力为40MPa、萃取温度为50℃，流速为10kg/h，平均用量为20kg；对三七浸膏采用螯合树脂脱重金属，100g浸膏加水稀释至1L，搅拌，静置8h，取上清液过D403树脂，95％乙醇洗脱，合并洗脱液，真空旋转浓缩至无醇味，最后干燥为三七总皂苷；

2)再模拟体内转化过程，进行体外微生物转化，通过微生物(酶和菌株)选择性水解糖基进行转化：将菌株(从三七茎梗组织中筛选、分离、驯化得到的的专用菌株)从高氏1号斜面转接到含有1％～5％三七皂苷的培养基中，28℃培养12h，然后接种到含有10kg三七总皂苷的50L腐质酸培养基中，并加入一种糖苷水解酶(酿酒酵母发酵而得)，酶的总浓度在10g/L之间，在100L全自动发酵罐中40℃进行酶解发酵，搅拌速度为300r/min，用5％(w/v)氨水动态调整pH为4～6，酶解发酵时间为120h；

3)对转化液进行分离、浓缩、纯化：酶解发酵结束后，按5％(w/v)加入D101大孔吸附树脂，搅拌3h后放罐，经滤布过滤后得沉淀物，用20L乙醇(95％)超声提取沉淀物4h并经滤布过滤，滤渣再用2L乙醇(95％)洗涤4次,合并乙醇提取液经减压浓缩干后得粗提物，通过硅胶柱层析分离，有机溶剂结晶纯化，获得富含稀有人参皂苷(CK、Rh1)的活化三七皂苷，总皂苷转化率为75％，HPLC检测其纯度为90％。

为了便于使用，制备成含稀有人参皂苷1～1.5％(HPLC)，总皂苷4～5.0％(UV)的丙二醇预配液。

本实施例富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷的牙膏的制作工艺如下：

将富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷、三氯蔗糖、甜菊糖、色素加入去离子水中并搅拌溶解形成水相；将尼泊金甲酯、香精加入乙醇中搅拌溶解后再加入Tween-60、甘油和山梨醇，继续搅拌至透明，然后将其加入水相，搅拌形成透明液体，静置、过滤后灌装。

实施例5

一种富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷的漱口水，各成分的重量百分比为：

富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷0.2％，丙二醇10％，山梨醇5％，木糖醇5％，糖精钠0.02％，阿斯巴甜0.08％，Poloxamer-407 0.5％，PEG-40氢化蓖麻油0.5％，苯甲酸钠0.2％，香精0.3％，色素适量，去离子水添加至100％。

其中，本实施例中原料组份：富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷的制备工艺如下：

1)以三七根为原料，提取三七总皂苷：取干燥的三七根，粉碎后，过100目筛，用70％乙醇回流提取，过滤，滤液减压浓缩，得到三七浸膏；对三七浸膏采用超临界萃取脱农残，即选用10％乙醇作为夹带剂，夹带剂与原料的比为1：2，超临界萃取压力为30～40MPa、萃取温度为40℃，流速为10kg/h，平均用量为20kg；对三七浸膏采用螯合树脂脱重金属，100g浸膏加水稀释至1L，搅拌，静置8h，取上清液过D403树脂，95％乙醇洗脱，合并洗脱液，真空旋转浓缩至无醇味，最后干燥为三七总皂苷；

2)再模拟体内转化过程，进行体外微生物转化，通过微生物(酶和菌株)选择性水解糖基进行转化：将菌株(从三七茎梗组织中筛选、分离、驯化得到的的专用菌株)从高氏1号斜面转接到含有1％三七皂苷的培养基中，28℃培养12h，然后接种到含有2kg三七总皂苷的50L腐质酸培养基中，并加入一种糖苷水解酶(酿酒酵母发酵而得)，酶的总浓度在5g/L之间，在100L全自动发酵罐中38℃进行酶解发酵，搅拌速度为200r/min，用5％(w/v)氨水动态调整pH为4～6，酶解发酵时间为72h；

3)对转化液进行分离、浓缩、纯化：酶解发酵结束后，按5％(w/v)加入D101大孔吸附树脂，搅拌3h后放罐，经滤布过滤后得沉淀物，用10L乙醇(95％)超声提取沉淀物4h并经滤布过滤，滤渣再用1L乙醇(95％)洗涤4次,合并乙醇提取液经减压浓缩干后得粗提物，通过硅胶柱层析分离，有机溶剂结晶纯化，获得富含稀有人参皂苷(CK、Rh1)的活化三七皂苷，总皂苷转化率为85％以上，HPLC检测其纯度为95％。

为了便于使用，制备成含稀有人参皂苷1～1.5％(HPLC)，总皂苷4～5.0％(UV)的丙二醇预配液。

本实施例富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷的牙膏的制作工艺如下：

将富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷、木糖醇、糖精钠、阿斯巴甜、苯甲酸钠、色素加入去离子水中并搅拌溶解形成水相；将香精加入丙二醇中搅拌后加入Poloxamer-407、PEG-40氢化蓖麻油、山梨醇，继续搅拌至透明，然后将其加入水相，搅拌形成透明液体，静置、过滤后灌装。

实施例6

一种富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷的牙粉，各成分的重量百分比为：

富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷1.0％，碳酸钙75％，二氧化硅5％，月桂醇硫酸酯钠3％，椰油酰胺丙基甜菜碱2％，植酸钠2％，糖精钠0.1％，三氯蔗糖0.3％，尼泊金甲酯0.15％，尼泊金丙酯0.05％，香精2％，去离子水添加至100％。

其中，本实施例中原料组份：富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷的制备工艺如下：

1)以三七根、茎、叶为原料，提取三七总皂苷：取干燥的三七根、茎、叶，粉碎后，过100目筛，用85％乙醇回流提取，过滤，滤液减压浓缩，得到三七浸膏；对三七浸膏采用超临界萃取脱农残，即选用15％乙醇作为夹带剂，夹带剂与原料的比为1：2，超临界萃取压力为35MPa、萃取温度为45℃，流速为10kg/h，平均用量为20kg；对三七浸膏采用螯合树脂脱重金属，100g浸膏加水稀释至1L，搅拌，静置8h，取上清液过D403树脂，95％乙醇洗脱，合并洗脱液，真空旋转浓缩至无醇味，最后干燥为三七总皂苷；

2)再模拟体内转化过程，进行体外微生物转化，通过微生物(酶和菌株)选择性水解糖基进行转化：将菌株(从三七茎梗组织中筛选、分离、驯化得到的的专用菌株)从高氏1号斜面转接到含有3％三七皂苷的培养基中，28℃培养12h，然后接种到含有6kg三七总皂苷的50L腐质酸培养基中，并加入一种糖苷水解酶(酿酒酵母发酵而得)，酶的总浓度在10g/L之间，在100L全自动发酵罐中38℃进行酶解发酵，搅拌速度为200r/min，用5％(w/v)氨水动态调整pH为4～6，酶解发酵时间为96h；

3)对转化液进行分离、浓缩、纯化：酶解发酵结束后，按5％(w/v)加入D101大孔吸附树脂，搅拌3h后放罐，经滤布过滤后得沉淀物，用20L乙醇(95％)超声提取沉淀物4h并经滤布过滤，滤渣再用2L乙醇(95％)洗涤4次,合并乙醇提取液经减压浓缩干后得粗提物，通过硅胶柱层析分离，有机溶剂结晶纯化，获得富含稀有人参皂苷(CK、Rh1)的活化三七皂苷，总皂苷转化率为80％，HPLC检测其纯度为92％。

为了便于使用，制备成含稀有人参皂苷1～1.5％(HPLC)，总皂苷4～5.0％(UV)的丙二醇预配液。

本实施例富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷的牙膏的制作工艺如下：

将富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷、植酸钠、糖精钠、三氯蔗糖加入去离子水中溶解，然后加入椰油酰胺丙基甜菜碱形成液相；将碳酸钙、二氧化硅、月桂醇硫酸酯钠混合均匀，然后将液相喷洒于粉体中，边喷洒边搅拌，最后将溶解在香精中的尼泊金甲酯、尼泊金丙酯同样喷洒在粉体中，边喷洒边搅拌，然后将粉体输送至研磨机研磨均匀至目测无颗粒，过150目筛后包装。

效果实验例

一、动物试验部分

1、小鼠止血试验

采用对小鼠凝血时间的影响的实验方法：

取18～20g健康昆明小鼠30只(雌雄各半)，随机分为3组，称重后用不同颜色标记，三组均通过灌胃给药。分别给予生理盐水，原三七皂苷，富含稀有人参皂苷CK的活化三七皂苷。1小时后用毛细玻璃管旋转插入小鼠内呲静脉取血，自血流进入管内开始计时，至血柱达5cm取出毛细管平放于桌上，隔30s折断毛细管记录凝血时间。见表1。

表1对小鼠凝血时间的影响

组别	动物数量	1h后凝血时间
			生理盐水	10	98.5±21.4
原三七皂苷	10	67.4±20.3
			富含稀有人参皂苷CK的活化三七皂苷	10	41.2±18.5

由表1知，富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷对小鼠凝血时间明显少于原三七皂苷，说明富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷在止血方面更优于原三七皂苷。

2、小鼠抗炎试验

采用对二甲苯致小鼠耳廓急性炎症肿胀的抗炎作用实验方法：

取健康雄性昆明种小白鼠40只，体重18～22g，随机均分4组，每组10只。空白对照组(生理盐水0.1ml/只)，醋酸氟轻松乳膏组(醋酸氟轻松乳膏0.1g/只)，原三七皂苷组(0.1g/只)，富含稀有人参皂苷CK的活化三七皂苷组(0.1g/只)。每只动物右耳廓内外两面均匀涂抹二甲苯0.1ml/只致炎，左耳不加处理作自身空白对照。涂抹二甲苯30分钟后,每只动物右耳廓内外两面分别均匀涂抹各组受试物样品0.1g/只。给药1小时后，小鼠颈椎脱臼处死，剪下两耳廓，用生理盐水洗去右耳廓受试物样品，干棉球擦净，重叠两耳廓，用内径8毫米的打孔器在同一部位凿取两圆耳片，分别在FA1004型电子分析天平上称重，右耳片重量减去左耳片重量为肿胀值，数据进行统计学t检验。

结果见表2。

表2受试样对二甲苯所致小鼠耳廓急性炎症肿胀的影响(X±SD，n＝10)

组别	动物数量	耳廓肿胀值(mg)
			空白对照组	10	17.65±5.82
原三七皂苷组	10	13.43±3.47*
			醋酸氟轻松乳膏组	10	9.81±4.38***△△
富含稀有人参皂苷CK的活化三七皂苷	10	11.28±2.87**△

与空白对照组比较：*--P＜0.05，**--P＜0.01，***--P＜0.001

与原三七皂苷组比较：△--P＜0.05，△△--P＜0.01

由表2知：原三七皂苷组、富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷和醋酸氟轻松乳膏组均能使小鼠急性炎症肿胀耳廓重量显著减轻，均能抑制二甲苯所致小鼠耳廓急性炎症肿胀，表明对急性炎症具有明显的抗炎作用，且富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷与原三七皂苷对比有显著差异，说明富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷在抗炎方面更优于原三七皂苷。

3、小鼠镇痛试验

采用热板法：

取18～20g健康昆明小鼠30只(雌雄各半)，随机分为3组，称重后用不同颜色标记，三组均通过灌胃给药。分别给予生理盐水，原三七皂苷和富含稀有人参皂苷CK的活化三七皂苷。给药后15、30、45、60、90min，分别将小鼠放于55摄氏度的热板上，以秒表来测定其痛觉反应时间(以舔后足为指标)，如在60s内无痛觉反应，以60s计算，计算痛阈，见表3所示。

表3受试样对热板法小鼠镇痛阈值的影响

由表3可知，原三七皂苷组、富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷组均能明显提高小鼠的痛阈，延缓痛觉出现时间，且富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷组比原三七皂苷组镇痛阈值提高率更高，说明富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷在镇痛方面更优于原三七皂苷。

二、临床试验部分

1.单纯性龈炎的临床效果评价

选择70例符合单纯性龈炎者纳入研究对象，年龄为18～60岁，按龈炎指数、性别和年龄将研究对象进行均衡分组，随机分为试验组和对照组，每组35人。一周洗脱期后，对两组受试者的龈炎指数进行初始基线评估并记录。4周、8周后受试者需要回访，接受龈炎指数评估并记录。试验组派发实施例1牙膏，对照组派发实施例1中不添加功效成分的牙膏，受试者每天早晚两次刷牙，每次三分钟，并进行刷牙指导。试验期间用统一派发的牙膏牙刷，禁止使用任何其它口腔护理品。

采用龈炎指数，检查使用钝头牙周探针，结合视诊和探诊。检查每颗牙周围的牙龈，将其周围牙龈分为近中唇(颊)乳头、正中唇(颊)缘、远中唇(颊)乳头及近中舌(腭)乳头、正中舌(腭)缘、远中舌(腭)乳头。每颗牙的记分为6个牙面记分的平均值，每人记分为全部受检牙记分的平均值。

记分标准：

0＝牙龈健康；

1＝牙龈轻度炎症：牙龈的颜色有轻度改变并轻度水肿，探诊不出血；

2＝牙龈中等炎症：牙龈色红，水肿光亮，探诊出血；

3＝牙龈严重炎症：牙龈明显红肿或有溃疡，并有自动出血倾向；

试验8周后龈炎指数见表4。

表4两组龈炎指数比较(x±s)

时间	试验组龈炎指数(x±s)	对照组龈炎指数(x±s)
			基线	1.472±0.19	1.432±0.16
4周后	1.108±0.21*	1.380±0.13△
			8周后	1.026±0.22**	1.348±0.15△△

基线检查试验组和对照组龈炎指数没有显著性意义(P＝0.455)；

与基线比较比较：*--P＜0.05，**--P＜0.01；

与基线比较比较：△--P﹥0.05，△△--P﹥0.01；

与对照组比较：*△--P＜0.05，**△△--P＜0.01，

由表4知：试验组和对照组龈炎指数的下降有显著性差异(P＜0.05)，具有减轻龈炎的临床疗效，整个试验过程中无不良反应发生。说明富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷的牙膏具有有效性和安全性。

2、口臭临床效果评价

试验仪器：Halimeter口气测定仪。

选择70例符合口源性口臭者纳入研究对象，年龄为18～60岁，分为2组，每组35人。按漱口前测试口腔中硫化氢气体的浓度值、性别和年龄将研究对象进行均衡分组，随机分为试验组和对照组，每组35人，试验组用实施例4漱口水，对照组使用实施例4不含活性成分的漱口水，每次使用15ml，含漱1分钟。

受试者在上午9:30漱口前，第1次测试口腔中硫化氢气体的浓度，在漱口5min后，第2次测试口腔中硫化氢气体的浓度；在漱口20min后，第3次测试口腔中硫化氢气体的浓度；在漱口60min后，第4次测试口腔中硫化氢气体的浓度；在漱口120min后，第5次测试口腔中硫化氢气体的浓度，见表5所示。

表5不同时段测量口腔中硫化氢气体的平均浓度值

由表5知，在漱口5分钟后，试验组和对照组口气平均值都有下降，说明试验组和对照组都有瞬时祛口气的效果，且试验组口气平均值下降明显，说明试验组祛口气效果最好。一个产品能否祛口气，关键判断口气的反弹速度，在120min后，试验组口气平均值反弹很小，对照组口气平均值反弹明显，基本达到漱口前口气平均值，说明试验组漱口水具有祛口气的效果，对照组漱口水不具有祛口气的效果。

以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，故凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰,均仍属于本发明技术方案的范围内。

Claims (10)

1.一种富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷在制备口腔护理产品中的应用，其特征在于：是将三七原型皂苷通过生物技术转化成稀有人参皂苷，并将富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷作为抗炎、镇痛、消肿、止血成分应用到口腔护理产品中。

2.根据权利要求1所述的富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷在制备口腔护理产品中的应用，其特征在于：

所述口腔护理产品可以是牙膏、漱口水、牙粉，还可以是口腔喷雾、牙贴、泡腾片等其它口腔护理产品。

3.根据权利要求1所述的富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷在制备口腔护理产品中的应用，其特征在于：

所述富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷是以三七(根、茎、叶)为原料，提取三七总皂苷，再模拟体内转化过程，进行体外微生物转化，通过微生物(酶和菌株)选择性水解糖基进行转化、分离、提取、纯化、浓缩、干燥后制得；

为了便于使用，制备成含稀有人参皂苷1～1.5％(HPLC)，总皂苷4～5.0％(UV)的丙二醇预配液。

4.根据权利要求1所述的富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷在制备口腔护理产品中的应用，其特征在于：

所述富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷在口腔护理产品中的添加量为0.05～1.0％，优选添加量为0.1～0.5％。

5.根据权利要求1所述的富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷在制备口腔护理产品中的应用，其特征在于：

所述富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷其制备工艺具体如下：

1)以三七(根、茎、叶)为原料，提取三七总皂苷：取干燥的三七(根、茎、叶)，粉碎后，过100目筛，用70％～95％乙醇回流提取，过滤，滤液减压浓缩，得到三七浸膏；对三七浸膏采用超临界萃取脱农残，即选用10％～20％乙醇作为夹带剂，夹带剂与原料的比为1：2，超临界萃取压力为30MPa～40MPa、萃取温度为40℃～50℃，流速为10kg/h，平均用量为20kg；对三七浸膏采用螯合树脂脱重金属，100g浸膏加水稀释至1L，搅拌，静置8h，取上清液过D403树脂，95％乙醇洗脱，合并洗脱液，真空旋转浓缩至无醇味，最后干燥为三七总皂苷；

2)再模拟体内转化过程，进行体外微生物转化，通过微生物(酶和菌株)选择性水解糖基进行转化：将菌株(从三七茎梗组织中筛选、分离、驯化得到的的专用菌株)从高氏1号斜面转接到含有1％～5％三七皂苷的培养基中，28℃培养12h，然后接种到含有2kg～10kg三七总皂苷的50L腐质酸培养基中，并加入一种糖苷水解酶(酿酒酵母发酵而得)，酶的总浓度在5g/L～10g/L之间，在100L全自动发酵罐中35℃～40℃进行酶解发酵，搅拌速度为200r/min～300r/min，用5％(w/v)氨水动态调整pH为4～6，酶解发酵时间为72h～120h；

3)对转化液进行分离、浓缩、纯化：酶解发酵结束后，按5％(w/v)加入D101大孔吸附树脂，搅拌3h后放罐，经滤布过滤后得沉淀物，用10L～20L乙醇(95％)超声提取沉淀物4h并经滤布过滤，滤渣再用1L～2L乙醇(95％)洗涤4次，合并乙醇提取液经减压浓缩干后得粗提物，通过硅胶柱层析分离，有机溶剂结晶纯化，获得富含稀有人参皂苷(CK、Rh1)的活化三七皂苷，总皂苷转化率为70％以上，HPLC检测其纯度为85％以上。

6.根据权利要求2所述的富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷在制备口腔护理产品中的应用，其特征在于：所述口腔护理产品为牙膏，该牙膏是由以下重量百分比的原料组分组成：

0.05～1.0％的富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷，18～50％的磨擦剂，20～60％的保湿剂，0.8～1.2％的增稠剂，2～3％的发泡剂，0.1～0.25％的甜味剂，0.1～0.3％的防腐剂，0.8～1.2％的香精，去离子水添加至100％。

7.根据权利要求6所述的富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷在制备口腔护理产品中的应用，其特征在于：所述磨擦剂为碳酸钙、磷酸氢钙、二氧化硅中的一种或两种的混合物；

所述保湿剂为山梨醇、甘油、聚乙二醇、丙二醇中的一种或多种的混合物；

所述增稠剂为羧甲基纤维素钠、黄原胶、瓜儿胶、卡拉胶中的一种或多种的混合物；

所述发泡剂为月桂醇硫酸酯钠、月桂酰肌氨酸钠、椰油酰胺丙基甜菜碱中的一种或两种的混合物；

所述甜味剂为糖精钠、三氯蔗糖、阿斯巴甜、甜菊糖中的一种或两种的混合物；

所述防腐剂为苯甲酸钠、尼泊金酯类中的一种或两种的混合物。

8.根据权利要求6所述的富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷在制备口腔护理产品中的应用，其特征在于：所述牙膏并不局限于以上成分，还可以根据产品需求添加其它成分，如：二氧化钛、羟基磷灰石、焦磷酸钠、植酸钠、氯化锶、硝酸钾、氯化钠、氟化物、木糖醇等。

9.根据权利要求2所述的富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷在制备口腔护理产品中的应用，其特征在于：

所述口腔护理产品为漱口水，该漱口水是由以下重量百分比的原料组分组成：

0.05～1.0％的富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷，15～25％的保湿剂，1～2％的乳化剂，0.1～0.25％的甜味剂，0.1～0.2％的防腐剂，0.2～0.3％的香精，去离子水添加至100％。

10.根据权利要求2所述的富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷在制备口腔护理产品中的应用，其特征在于：

所述口腔护理产品为牙粉，该牙粉是由以下重量百分比的原料组分组成：

0.05～1.0％的富含稀有人参皂苷的活化三七皂苷，80～85％的磨擦剂，3～5％的发泡剂，0.3～0.4％的甜味剂，0.2～0.3％的防腐剂，1.0～2.0％的香精，去离子水添加至100％。