CN115670964A - 一种舒缓修护作用的水解人参皂草苷类组合物的制备方法、组合物和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及水解人参皂草苷类组合物的制备方法、组合物和应用，包括：将五加科人参属植物经粉碎、研磨、乙醇提取等步骤制备原人参总皂苷；控制酶催化反应前原人参皂苷中二醇组原人参皂苷Rb1和三醇组原人参皂苷Rg1的比例，计算并配比获得中间体原料原人参皂苷混合物；然后进行酶催化水解，获得水解人参皂草苷类组合物，将水解人参皂草苷类组合物与溶剂、保湿剂等复配得到水解人参皂草苷类预配液化妆品原料（中科稀苷）。本发明水解人参皂草苷类组合物和中科稀苷化妆品原料，用于护肤品能够对处于刺激状态的人体问题皮肤达到显著的舒缓修护功效，用于口腔护理产品能够达到舒缓牙龈炎症、修护口腔溃疡、缓解牙龈出血和抗牙齿敏感性的功效。

Description

一种舒缓修护作用的水解人参皂草苷类组合物的制备方法、 组合物和应用

技术领域

本发明涉及化妆品技术领域，特别是涉及一种舒缓修护作用的水解人参皂草苷类组合物的制备方法及其制备得到的组合物和其在具有舒缓修护功效的化妆品和口腔护理产品中的应用。

背景技术

人参是中国的传统名贵中药，其美容养颜的功效记载有上千年之久。现代科学研究发现，人参的美容护肤功效主要是其所含有的人参皂苷起的作用。人参皂苷不仅存在于人参中，还广泛存在于其他五加科人参属植物中，例如三七、西洋参等。现代药理学研究表明，五加科人参属植物中含有几十种以上的人参皂苷，且功能各异，是开发功效型护肤品和日化产品原料的重要植物资源。新近研究发现，人参皂苷经过进一步的水解所产生的水解人参皂草苷类成分对人体皮肤细胞和不同组织器官具有更高的生物学活性，是功效型化妆品和日化产品原料的重要研发方向，但是人参皂苷的种类繁多，如何提取并通过酶催化工艺获得特定功效的水解人参皂草苷类组合物，目前还没有人研究。

敏感性肌肤是世界范围内常见的皮肤问题，在婴幼儿、儿童和成人群体中广泛存在，特别在0-1岁的婴幼儿群体中发生率高达30%-60%。敏感性肌肤更容易受到外界环境和自身身体因素的刺激而引发皮肤细胞的炎症反应。常表现为红、痒、干燥、皮肤屏障受损等症状。2021年《化妆品分类规则和分类目录》和《化妆品功效宣称评价规范》中，特别指出舒缓和修护可以作为化妆品的功效进行合法宣称，并明确了舒缓和修护功效的定义及评价规范，可见舒缓和修护功效对化妆品领域创新发展的重要性。另外，据报告显示，我国成年人的牙周健康率仅为9.1%，牙周炎是导致我国成年人牙齿丧失的主要原因，因此亟需研发能够减轻牙龈问题的口腔护理产品。功效性化妆品等日化产品研发的核心是功效性化妆品原料的创新。以五加科人参属植物为基础，开发具有舒缓修护炎症性敏感肌和缓解减轻牙龈问题的功效性原料，是亟待解决的技术难题，且具有广阔的应用价值。

发明内容

本发明要解决的技术问题在于提供一种具有舒缓修护肌肤和减轻牙龈问题功效的水解人参皂草苷类组合物及其制备方法。另外，本发明还提供了水解人参皂草苷类组合物在制备具有舒缓修护肌肤和减轻牙龈问题功效的外用护理产品方面的应用。

本发明实现过程如下：

一种舒缓修护作用的水解人参皂草苷类组合物的制备方法，包括如下步骤：

S1、将植物原料五加科人参属植物充分粉碎，然后研磨成粗粉，使用浓度为70%～80%的乙醇提取、过滤，滤液经减压浓缩后再过滤；

S2、将步骤S1再过滤得到的滤液经大孔吸附树脂柱吸附后，先用去离子水水洗，再用浓度为80%～95%的乙醇洗脱；

S3、将步骤S2得到的洗脱液经减压浓缩、脱色、精制，然后再减压浓缩至浸膏状态后，干燥成粉末状的原人参皂苷；

S4、检测分析不同植物来源、不同植物材料配比提取或不同批次的原人参皂苷原料中的二醇组原人参皂苷Rb1和三醇组原人参皂苷Rg1的含量，直接筛选或通过计算将不同植物来源、不同植物配比提取或不同批次的原人参皂苷干燥粉末配比获得满足以下条件的中间体原料原人参皂苷混合物，中间体原料原人参皂苷混合物需要满足以下条件：1）Rb1含量≥10%（w/w）；2）二醇组原人参皂苷Rb1和三醇组原人参皂苷Rg1的质量比值范围控制在1:3～2:1之间；

S5、将所述中间体原料原人参皂苷混合物通过酶制剂进行酶催化水解反应，对获得的酶解反应液进行提纯、浓缩、干燥，获得所述水解人参皂草苷类组合物粉末。

在一种具体实施方式中，一种水解人参皂草苷类组合物的制备方法，包括如下步骤：S1、将植物原料五加科人参属植物充分粉碎，然后研磨成粗粉，使用浓度为70%～80%的乙醇提取、过滤，滤液经减压浓缩后再过滤；S2、将步骤S1再过滤得到的滤液经大孔吸附树脂柱吸附后，先用去离子水水洗，再用浓度为80%～95%的乙醇洗脱；S3、将步骤S2得到的洗脱液经减压浓缩、脱色、精制，然后再减压浓缩至浸膏状态后，干燥成粉末状的原人参皂苷；S4、检测分析不同植物材料来源、不同植物材料配比提取或不同批次的原人参皂苷原料中二醇组原人参皂苷Rb1和三醇组原人参皂苷Rg1的含量，首先筛选出Rb1含量≥10%（w/w）的原人参皂苷原料备用（不符合要求的原料放弃使用），再通过计算获得将二醇组原人参皂苷Rb1和三醇组原人参皂苷Rg1的质量比值范围控制在1:3～2:1之间的不同植物材料或不同批次的原人参皂苷原料的重量配比方案，按照重量配比方案将不同原人参皂苷原料进行混合，从而将混合后的原料中二醇组原人参皂苷Rb1和三醇组原人参皂苷Rg1的质量比值范围控制在1:3～2:1之间，获得中间体原料原人参皂苷混合物；S5、将所述中间体原料原人参皂苷混合物通过酶制剂进行酶催化水解反应，对获得的酶解反应液进行提纯、浓缩、干燥，获得所述水解人参皂草苷类组合物粉末。

优选的，步骤S1的具体步骤为：将配比的人参三七混合植物材料或者单独的三七或人参植物材料充分粉碎，研磨成粗粉，用浓度为70%～80%的乙醇提取，过滤，滤液经减压浓缩后再过滤。

优选的，步骤S5中所述酶制剂包括纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶中的至少一种，所述酶催化水解反应条件为：酶制剂的用量为每毫克所述中间体原料原人参皂苷混合物使用酶活为2U～10U的酶量，所述中间体原料原人参皂苷混合物的投料比例为反应体系的0.5%～3%（w/v），pH5～pH6、37℃～60℃的条件下，反应时间为12小时～48小时。

更优选的，反应体系的pH值为5，酶催化反应温度为40℃。

优选的，步骤S1中所述五加科人参属植物包括三七、人参和西洋参中的至少一种。

优选的，三七经过如下步骤进行预处理：将三七原料表面喷乙醇，将三七真空密封于无菌袋中；将真空密封的三七原料进行紫外照射，待乙醇挥发后将三七原料放入100℃～120℃，30Kpa～60Kpa的环境中处理3分钟～8分钟。通过上述的预处理方法能够对三七进行高效灭菌，同时能够有效控制三七原料中二醇组原人参皂苷Rb1和三醇组原人参皂苷Rg1的耗损量。

优选的，人参经过如下步骤进行预处理：将人参切片后放置在-40℃～-30℃的温度中冰冷4小时～5小时，并且在冷冻过程中保持20pa～60pa的真空度；然后控制温度分阶梯进行上升，每次上升8℃～15℃，升温后保持3小时～4小时；分阶梯升温至45℃～55℃后获得干燥后的人参原料。通过对人参的预处理，可以提升其中的三醇组原人参皂苷Rg1的保有量，提升有效物质含量，避免采用传统加工方法对人参中有效成分的破坏，减少对人参的使用量，降低生产成本。

优选的，步骤S5中所述对获得的酶解反应液进行提纯，具体步骤为：将所述酶解反应液经膜过滤，然后用浓度为80%～95%的乙醇提取。

一种水解人参皂草苷类组合物，所述水解人参皂草苷类组合物由上述方法制备而成，所述组合物活性成分由二醇组原人参皂苷Rb1和三醇组原人参皂苷Rg1配比组合物的酶催化水解产物组成，其中配比组合物中Rb1含量≥10%（w/w）且二醇组原人参皂苷Rb1和三醇组原人参皂苷Rg1之间的质量比值范围为1:3～2:1。

一种水解人参皂草苷类预配液化妆品原料，包括：丙二醇0%～69%；丁二醇20%～89%；水解人参皂草苷类组合物1%～5%；PEG-40氢化蓖麻油10%。

在一种具体实施方式中，一种水解人参皂草苷类预配液化妆品原料，包括：丙二醇0%～69%；丁二醇20%～89%；水解人参皂草苷类组合物1%～5%；PEG-40氢化蓖麻油10%；虾青素5%。

上述的水解人参皂草苷类预配液化妆品原料，可作为活性成分，用于制备具有舒缓修护功效的外用护理产品，如驻留类化妆品和淋洗类化妆品。其中，驻留类化妆品的品类包括：膏霜类（水包油或油包水）、乳液类（水包油或油包水）、护肤水（化妆水）类、护肤啫喱、润肤油、润唇膏、贴片式面膜类和涂抹式面膜类。上述水解人参皂草苷类预配液化妆品原料在所述驻留类化妆品的添加量为0.25%～6.00%。另外，淋洗类的化妆品品类包括：洗发露、沐浴露和洗面奶等产品类型。上述水解人参皂草苷类预配液化妆品原料在所述淋洗类化妆品的添加量为0.50%～6.00%。此外，上述的水解人参皂草苷类预配液化妆品原料可作为活性成分还可以用于制备具有舒缓修护抗炎止血等减轻牙龈问题功效的口腔护理液、口腔护理牙膏或口腔抑菌膏等外用护理产品，所述水解人参皂草苷类预配液化妆品原料在所述口腔护理液或所述口腔护理牙膏或所述口腔抑菌膏中的添加量为1%～3%。

作为其中一个实施例，将通过以上提取、酶转化和再提取纯化后的水解人参皂草苷类成分通过与溶剂、保湿剂和乳化剂的配比，配制成分散均匀、透皮吸收性好、易于在不同类型化妆品配方中使用的水解人参皂草苷类预配液化妆品原料。在恒温搅拌器上进行配置，加热到40℃～60℃，在100 r/min～300 r/min的转速下依次加入溶剂、保湿剂和乳化剂，待每种成分充分溶解后再加入下一种成分，加入最后一种成分后，继续充分恒温搅拌30分钟以上，待溶液均一透明，形成分散性和稳定性良好的溶液后，停止搅拌，温度降至室温，即得水解人参皂草苷类预配液化妆品原料。

本发明中的水解人参皂草苷类预配液原料使用方法需特别注意，精密称定所需量，加热至40℃～60℃后恒温搅拌30min至澄清，加入25倍～50倍量的工艺用水，持续搅拌30min，使该预配液原料与工艺水相形成稳定均一的微乳液后，再将该微乳液用于化妆品的后续制备工艺中继续完成产品制备，既得所需化妆品。特别注意如果预配液原料不经稀释和微乳化处理直接用于后续生产工艺或无法使产品达到预期效果。

本发明的有益效果如下：

（1）从分子生物学和细胞生物学水平的功效评价试验结果表明，本发明所制备的水解人参皂草苷类预配液化妆品原料具有显著的舒缓功效。

（2）在化妆品成品的应用实例中表明，本发明所获得的水解人参皂草苷类组合物配以简单的化妆品基料即可对处于刺激状态的人体问题皮肤达到显著的舒缓修护功效。

（3）试验证明本发明所制备的水解人参皂草苷类预配液化妆品原料应用于口腔护理液和牙膏等产品时具有显著改善牙龈问题和口腔溃疡问题的功能。

附图说明

图1为本发明其中一个实施例的水解人参皂草苷类组合物的制备方法的工艺流程图；

图2为不同浓度的水解人参皂草苷类预配液化妆品原料样品对P815脱颗粒率的影响对比图；

图3为不同浓度的水解人参皂草苷类预配液化妆品原料样品对P815细胞脱颗粒的影响结果示意图；

图4为不同浓度的水解人参皂草苷类预配液化妆品原料样品对TRPV1表达能力的影响对比图；

图5为不同浓度的水解人参皂草苷类预配液化妆品原料样品对RAW264.7细胞TNF-α释放量的影响对比图；

图6为受试者使用实施例7的乳液产品前后红区变化对比图。

具体实施方式

为了能够更清楚地理解本发明的上述目的、特征和优点，下面结合附图和具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述。需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请的实施例及实施例中的特征可以相互组合。

在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明，但是，本发明还可以采用其他不同于在此描述的其他方式来实施，因此，本发明的保护范围并不受下面公开的具体实施例的限制。

三七原料购自云南植物药业有限责任公司，人参原料购自吉林省北山市诚信人参合作社，大孔吸附树脂柱购自沧州宝恩吸附材料科技有限公司，牌号为D101大孔吸附树脂，Rb1和Rg1分别采用高效液相色谱法测定。

实施例1

本实施例用于说明本发明所提供的水解人参皂草苷类预配液化妆品原料的其中一种制备技术方法，如图1所示，具体步骤为：以五加科人参属植物三七和人参植物全株材料按照干重比例为6:1的比例混合。将按照上述配比混合后的植物材料充分粉碎，研磨成粗粉，用70%的乙醇提取、过滤，滤液经减压浓缩后再过滤，经大孔吸附树脂柱吸附后，先用去离子水水洗，再用80%的乙醇洗脱，洗脱液经减压浓缩、脱色、精制，然后再减压浓缩至浸膏状态后，干燥成中间体皂苷。经测定该混合提取后的总皂苷中Rb1含量为15%（w/w），Rb1/Rg1的质量比值为2:5，参数在合理控制范围内，因此直接进行酶催化水解反应。用纤维素酶和半纤维素酶对上述中间体原料进行酶催化水解反应。中间体原料的投料比例为反应体系的2%（w/v），每毫克中间体投料加入总酶活为5U的酶量，其中，酶活力单位（U）的定义是：在最适反应条件下，以对硝基苯基-糖苷为底物，每分钟水解产生1μmol对硝基苯酚的酶量为一个酶活力单位（U）。酶反应条件为pH5，40℃，催化反应24小时后，反应液经膜过滤，95%的乙醇再提取，浓缩，干燥后获得水解人参皂草苷类组合物粉末。

将获得的水解人参皂草苷类组合物粉末通过与表1中的其他成分按照表中比例混合，配制成预配液。在恒温搅拌器上进行配置，加热到45℃，在300 r/min的转速下依次加入如下表1所示成分，待每种成分充分溶解后再加入下一种成分，加入最后一种成分后，继续充分恒温搅拌30min，待溶液均一透明，形成分散性和稳定性良好的溶液后，停止搅拌，温度降至室温，即得水解人参皂草苷类预配液化妆品原料。

表1 实施例1中水解人参皂草苷类预配液化妆品原料的成分组成

实施例2

本实施例用于说明本发明所提供的水解人参皂草苷类预配液化妆品原料的另外一种制备技术方法。具体步骤为：将五加科人参属植物三七根材料充分粉碎，研磨成粗粉，同时将人参根材料充分粉碎，研磨成粗粉。其中，粉碎前的三七原料经过如下步骤进行预处理：将三七原料表面喷乙醇，将三七真空密封于无菌袋中，将真空密封的三七原料进行紫外照射，待乙醇挥发后将三七原料放入120℃，30Kpa的环境中处理8分钟。粉碎前的人参原料经过如下步骤进行预处理：将人参切片后放置在-40℃的温度中冰冷4小时，并且在冷冻过程中保持20pa的真空度；控制温度分阶梯进行上升，每次上升8℃，升温后保持3小时，分阶梯升温至55℃后获得干燥后的人参原料。将三七根粗粉和人参根粗粉按照1:1的质量比配比混合后，用80%的乙醇提取、过滤，滤液经减压浓缩后再过滤，经大孔吸附树脂柱吸附后，先用去离子水水洗，再用95%的乙醇洗脱，洗脱液经减压浓缩、脱色、精制，然后再减压浓缩至浸膏状态后，干燥成中间体总皂苷，经测定该混合提取后的总皂苷中Rb1含量为23%（w/w），Rb1/Rg1的质量比值为3:2，参数在合理控制范围内，因此直接进行酶催化水解反应。用纤维素酶、半纤维素酶以及果胶酶对上述中间体原料进行酶催化水解反应。中间体原料的投料比例为反应体系的3%（w/v），每毫克中间体投料加入总酶活为10U的酶量，其中，酶活力单位（U）的定义是：在最适反应条件下，以对硝基苯基-糖苷为底物，每分钟水解产生1μmol对硝基苯酚的酶量为一个酶活力单位（U）。酶反应条件为pH6，37℃，催化反应48小时后，反应液经膜过滤，80%的乙醇再提取，浓缩，干燥后获得水解人参皂草苷类组合物粉末。

将获得的水解人参皂草苷类组合物粉末通过与表2中的其他成分按照表中比例混合，配制成预配液。在恒温搅拌器上进行配置，加热到45℃，在100 r/min的转速下依次加入如下表2所示成分，待每种成分充分溶解后再加入下一种成分，加入最后一种成分后，继续充分恒温搅拌30min，待溶液均一透明，形成分散性和稳定性良好的溶液后，停止搅拌，温度降至室温，即得水解人参皂草苷类预配液化妆品原料。

表2 实施例2中水解人参皂草苷类预配液化妆品原料的成分组成

实施例3

本实施例用于说明本发明所提供的水解人参皂草苷类预配液化妆品原料的另外一种制备技术方法。具体步骤为：先将三七根和人参根材料分别单独提取总皂苷其中，三七和人参材料在提取前经过如下步骤进行预处理：将三七原料表面喷洒乙醇，将三七真空密封于无菌袋中，将真空密封的三七原料进行紫外照射，待乙醇挥发后将三七原料放入100℃，60Kpa的环境中处理3分钟。人参材料经过如下步骤进行预处理：将人参切片后放置在-30℃的温度中冰冷5小时，并且在冷冻过程中保持60pa的真空度，控制温度分阶梯进行上升，每次上升15℃，升温后保持4小时，分阶段升温至45℃后获得干燥后的人参原料。将经过上述预处理后的三七根和人参根材料分别单独提取总皂苷，步骤如下：将原料充分粉碎，研磨成粗粉，用65%的乙醇提取、过滤，滤液经减压浓缩后再过滤，经大孔吸附树脂柱吸附后，先用去离子水水洗，再用90%的乙醇洗脱，洗脱液经减压浓缩、脱色、精制，然后再减压浓缩至浸膏状态后，分别干燥成总皂苷粉末，经测定三七根材料总皂苷中Rb1含量为12%（w/w），Rb1/Rg1的质量比值为1:5，人参根材料总皂苷中Rb1含量为20%（w/w），Rb1/Rg1的质量比值为4:1。通过计算得出将三七和人参总皂苷混合物中Rb1/Rg1的质量比值控制为1:1时（目标值为1:3～2:1之间，人为设定目标为1:1），上述三七材料总皂苷：人参材料总皂苷的配比比例为5:16，按比例配比后Rb1含量为18.1%（w/w）。用纤维素酶和半纤维素酶对上述配比后的中间体原料进行酶催化水解反应。中间体原料的投料比例为反应体系的0.5%（w/v），每毫克中间体投料加入总酶活为2U的酶量，其中，酶活力单位（U）的定义是：在最适反应条件下，以对硝基苯基-糖苷为底物，每分钟水解产生1μmol对硝基苯酚的酶量为一个酶活力单位（U）。酶反应条件为pH5，60℃，催化反应12小时后，反应液经膜过滤，90%的乙醇再提取，浓缩，干燥后获得水解人参皂草苷类组合物粉末。

将获得的水解人参皂草苷类组合物粉末通过与表3中的其他成分按照表中比例混合，配制成预配液。在恒温搅拌器上进行配置，加热到60℃，在200 r/min的转速下依次加入如下表3所示成分，待每种成分充分溶解后再加入下一种成分，加入最后一种成分后，继续充分恒温搅拌30min，待溶液均一透明，形成分散性和稳定性良好的溶液后，停止搅拌，温度降至室温，即得水解人参皂草苷类预配液化妆品原料，本实施例加入了虾青素成分，溶液呈红色均一透明状。

表3 实施例3中水解人参皂草苷类预配液化妆品原料的成分组成

试验例

本试验例用于说明酶解前中间体原人参皂苷混合物中Rb1和Rg1的合理配比是制备出具有舒缓功效显著的水解人参皂草苷类功效成分的关键，且在一定范围内效果不受其他人参皂苷含量变化的影响。

本试验例使用分析纯度的Sigma-Aldrich® 品牌人参皂苷Rb1、Rg1、Rd和Re进行配比测试，人参皂苷纯品的配比比例如下表所示。将人参皂苷纯品配比后的固体粉末按照实施例1中的酶解和水解人参皂草苷预配液配制方案制备成可直接应用的化妆品原料。用实施例6中的脱颗粒实验方案对细胞水平的舒缓效果进行验证。按照实施例6中的试验方法用P815细胞进行脱颗粒试验，试验体系中添加的水解人参皂草苷类预配液化妆品原料的量为0.1%（v/v），各种人参皂苷纯品的配比处理制备出的原料对应的脱颗粒试验结果及差异显著性分析结果如下表4所示。

表4 不同人参皂苷纯品原料配比所制备的化妆品原料的脱颗粒效果

试验组1、2和模型对照组的结果分析表明单独的人参皂苷Rb1或Rg1处理未达到显著的脱颗粒效果，试验组3和模型对照组的结果对比分析表明同时使用Rb1和Rg1且按照一定比例配比能够达到显著的脱颗粒效果，试验组4、5、6、7的结果表明添加除Rb1和Rg1以外的其他人参皂苷Rd和Re的处理也达到了显著的脱颗粒效果，试验组3、4、5、6、7间脱颗粒结果差异不显著表明其他人参皂苷Rd和Re没有影响到Rb1和Rg1配比处理的效果。基于以上结果，优选以人参皂苷Rb1和Rg1的合理配比（Rb1含量≥10%（w/w））为本发明制备舒缓型化妆品原料的主要参数。

实施例4

本实施例用于说明在总皂苷中Rb1含量≥10%（w/w）条件下，以精确控制Rb1／Rg1的比值范围的方法，通过对不同植物来源、不同植物材料配比提取或不同批次的总皂苷的配比控制，可制备出舒缓功效显著的水解人参皂草苷类功效成分。

在配比过程中通过检测分析不同植物来源、不同植物材料配比提取或不同批次的总皂苷中的二醇组原人参皂苷Rb1和三醇组原人参皂苷Rg1的含量，首先筛选出Rb1含量≥10%（w/w）的总皂苷备用，通过计算获得将二醇组原人参皂苷Rb1和三醇组原人参皂苷Rg1的质量比值范围控制在1:3～2:1之间的不同植物来源、不同植物材料配比提取或不同批次的总皂苷原料的重量配比，按照所计算出的重量配比将不同总皂苷原料进行混合。

按照实施例1中的提取和制备方法，只改变其中的Rb1／Rg1比值和植物材料的配比方式，所用配比方式如表5中所列，制备的成品化妆品原料，用实施例6中的脱颗粒实验方案对细胞水平的舒缓效果进行验证。按照实施例6中的试验方法用P815细胞进行脱颗粒试验，试验体系中添加的水解人参皂草苷类预配液化妆品原料的量为0.1%（v/v），各种植物材料配比所制备的原料的脱颗粒试验结果及差异显著性分析结果如表5所示。

表5不同Rb1／Rg1比值的中间体原料所制备的成品化妆品原料的脱颗粒效果

表5中的试验结果表明，不论是单独提取、混合提取，还是先单独提取后再将总皂苷混合，只要将酶解前原人参皂苷底物中Rb1／Rg1的比值范围控制在1:3 ～2:1范围内，利用本发明实施例1中提供的制备方法所制备的水解人参皂草苷类预配液化妆品原料即可具有显著的舒缓功效。说明酶解前原人参皂苷底物中Rb1／Rg1的比值控制是制备出舒缓功效化妆品原料的关键参数。

实施例5

本实施例用于证明本发明预配置液配方对原料舒缓功效的重要性。

按照实施例1中的制备方法获得水解人参皂草苷类组合物粉末后，使用不同的溶剂配比，按照实施例1中的溶解和配置方法，配制成不同的水解人参皂草苷预配液化妆品原料，不同水解人参皂草苷预配液化妆品原料的成分比例如表6所示。用实施例6中的脱颗粒实验方案对细胞水平的舒缓效果进行验证。按照实施例6中的试验方法用P815细胞进行脱颗粒试验，试验体系中添加的水解人参皂草苷类预配液化妆品原料的量均为0.1%（v/v），各种溶剂比例的水解人参皂草苷类预配液化妆品原料脱颗粒试验结果如表6所示。

表6 不同配方的水解人参皂草苷预配液化妆品原料的脱颗粒效果

表6中的结果所示，试验组1用95%的纯水直接溶解5%水解人参皂草苷类物质获得的原料与模型对照组相比脱颗粒率没有明显的降低（51.13±1.96 vs 50.13±2.80），说明简单用水溶解核心成分水解人参皂草苷类物质无法实现舒缓效果。试验组2用45%的纯水和50%丙二醇溶解5%水解人参皂草苷类，试验组3用用45%的纯水和50%丁二醇溶解5%水解人参皂草苷类分别获得预配液原料，但与模型对照组相比脱颗粒率也没有明显的降低。试验组4用45%的纯水、40%丙二醇和10% PEG-40 氢化蓖麻油溶解5%水解人参皂草苷类，试验组5用45%的纯水、40%丁二醇和10% PEG-40 氢化蓖麻油溶解5%水解人参皂草苷类所获得的预配液原料与模型对照组相比脱颗粒率明显的降低，从51.13±1.96分别降低到40.19±1.15和40.23±1.15，说明添加10% PEG-40氢化蓖麻油对预配液中核心成分水解人参皂草苷类物质发挥预期的舒缓功效是必要的。试验组6用85%的丙二醇和10%的PEG-40氢化蓖麻油溶解5%水解人参皂草苷类，试验组7用85%的丁二醇和10%的PEG-40氢化蓖麻油溶解5%水解人参皂草苷类所获得的预配液原料比试验组4和5的脱颗粒率更低，而且试验组7的脱颗粒率远低于试验组6的结果，说明不含水的配方效果更好，而且只用丁二醇和10%的PEG-40 氢化蓖麻油的试验组7的配方比只用丙二醇和10%的PEG-40氢化蓖麻油的试验组6的配方更优。在试验组6的基础上进一步优化配方，降低丙二醇含量，提高丁二醇含量，按照试验组8、9、10、11的配方进行脱颗粒试验，试验结果表明，当丙二醇含量降低到69%以下时，可与试验组7具有相似的脱颗粒率。将水解人参皂草苷类成分的比例调整到1%，再按照试验组12，13，14，15，16，17的配方进行试验，获得了与5%水解人参皂草苷类成分含量预配液成分相似的规律。因此，使水解人参皂草苷类成分能够充分发挥舒缓效果的预配液配方为：丙二醇0～69%，丁二醇20%～89%，PEG-40 氢化蓖麻油10%，水解人参皂草苷类1%～5%。

实施例6

本实施例用于证明本发明所制备的水解人参皂草苷类预配液化妆品原料的舒缓功效。

将实施例1中制备的水解人参皂草苷类预配液化妆品原料的样品（以下简称预配液原料样品）经60℃预热的PBS稀释至5%（稀释20倍），冷却至室温后经DMEM培养基稀释至0.5%，然后使用含10%PBS的DMEM为溶剂，稀释至不同的浓度，过滤除菌后备用。

（1）脱颗粒试验

用P815细胞进行脱颗粒试验，P815细胞购自中国科学院细胞库（SCSP-516）。首先进行细胞毒性试验（CCK8法）以确定脱颗粒试验中本发明原料样品合适的浓度梯度。收集对数生长期P815细胞，按照细胞密度为10⁴个/孔接种至96孔板，每孔含培养液100μL。在培养箱（37℃，5% CO₂）中培养24h后，1000r/min，离心5min，吸去培养基，用PBS缓冲液洗涤细胞两次，然后按照表7加入预配液原料样品，每孔100μL，以未处理细胞作为阴性对照，以样品溶剂处理细胞作为溶剂对照，每组设置3个重复孔。

表7样品细胞毒性浓度设计表

加样后在培养箱（37℃，5% CO₂）中继续培养1h，1000r/min离心5min后进行CCK8细胞毒性试验，450nm下读取吸光度OD值。计算细胞存活率，空白孔中仅添加细胞培养液。

用P815细胞进行细胞毒性试验的结果如表8所示。

表8 P815细胞毒性试验结果分析

根据细胞毒性试验结果选定脱颗粒试验的预配液原料加样浓度（V/V）为0.05%、0.1%和0.2%，如表9所示。

表9 脱颗粒试验浓度设计表

按照以下步骤进行脱颗粒试验。收集对数生长期P815细胞，按照细胞密度为1.4×10⁵个/孔接种至24孔板。在培养箱（37℃，5% CO₂）中培养24h后，试验设置阴性对照组/溶剂对照组（如有）、模型对照组及样品组，按照表10向各组细胞培养孔中加样，每孔900μL，每组设置3个重复孔。

表10 脱颗粒试验分组信息

加样后在培养箱（37℃，5% CO₂）中继续培养30min后，模型对照组和样品组加入终浓度10μg/mL的C48/80共同孵育30min，冰水浴10min终止反应，然后1000r/min，离心5min，弃去上清，中性红染色后显微镜下观察并计数。

本发明的水解人参皂草苷类预配液化妆品原料的脱颗粒试验的结果如图2和图3的结果所示。与溶剂对照组相比，模型对照组的脱颗粒率显著升高（p<0.01），表明造模成功，该模型可用于评价样品的舒缓功效。在本试验中，样品在0.0500%、0.100%、0.200%浓度下，作用P815细胞后，能够显著降低细胞脱颗粒率，且与模型对照相比具有统计学差异（p<0.01）。说明该预配液原料样品具有抑制P815细胞脱颗粒的能力，并通过抑制细胞脱颗粒达到舒缓功效。

（2）TRPV1表达能力测定试验

用HaCaT细胞进行TRPV1表达能力测定试验，HaCaT细胞购自北京协和细胞资源中心（1101HUM-PUMC000273）。首先进行细胞毒性试验（CCK8法）以确定脱颗粒试验中本发明原料样品合适的浓度梯度。收集对数生长期HaCaT细胞，按照细胞密度为10⁴个/孔接种至96孔板，每孔含培养液100μL。在培养箱（37℃，5% CO₂）中培养24h后，吸去培养基，用PBS缓冲液洗涤细胞两次，然后按照表11加入药物，每孔100μL，以未处理细胞作为阴性对照，以样品溶剂处理细胞作为溶剂对照，每组设置3个重复孔。

表11 样品细胞毒性浓度设计表

加样后在培养箱（37℃，5% CO₂）中继续培养24h，然后进行CCK8细胞毒性试验，450nm下读取吸光度OD值。计算细胞存活率，空白孔中仅添加细胞培养液。

用HaCaT细胞进行细胞毒性试验的结果如表12所示。

表12 HaCaT细胞毒性试验结果分析

根据细胞毒性试验结果选定TRPV1表达能力测定试验的预配液原料加样浓度（V/V）为0.0031%、0.0063%和0.0125%，如表13所示。

表13 TRPV1表达能力试验浓度设计表

按照以下步骤进行TRPV1表达能力试验。收集对数生长期HaCaT细胞，按照细胞密度为3×10⁵个/孔接种至6孔板。在培养箱（37℃，5% CO₂）中培养24h后，试验设置阴性对照组/溶剂对照组、模型对照组、阳性对照组及样品组，按照表14向各组细胞培养孔中加入样品，每组设置4个重复孔。

表14 TRPV1表达能力试验分组信息

加样后在培养箱（37℃，5% CO₂）中继续培养2h，模型对照组、阳性对照组和样品组加入终浓度1μmol/L CAP共同孵育24h后，去除培养液，用预温的PBS轻洗两次，去除清洗溶液。使用RNeasy® Mini Kit试剂盒提取RNA，之后使用One Step TB Green® PrimeScript™ RT-PCR Kit II进行real time-qPCR反应并测定Ct值，以β-肌动蛋白（β-actin）为内参基因，计算其他各组与阴性对照组/溶剂对照组相比，辣椒素受体（TRPV1）的相对表达量。

TRPV1表达能力测定试验的结果如图4所示。图4中TRPV1表达能力测定试验结果显示，与阴性对照组相比，模型对照组的TRPV1相对表达倍数显著升高（p<0.01），表明造模成功，该模型可用于评价样品的舒缓功效。在本试验中，预配液原料样品在0.0125%浓度下作用HaCaT细胞后，能够降低TRPV1相对表达倍数，且与模型对照相比具有统计学差异（p<0.05）。结果表明该预配液原料样品具有抑制HaCaT细胞TRPV1 mRNA表达的能力，并通过抑制TRPV1 mRNA表达达到舒缓功效。

（3）TNF-α含量测定试验

用RAW264.7细胞进行TNF-α含量测定试验，RAW264.7细胞购自中国科学院细胞库（SCSP-516）。首先进行细胞毒性试验（CCK8法）以确定脱颗粒试验中本发明原料样品合适的浓度梯度。收集对数生长期RAW264.7细胞，按照细胞密度为2×10⁴个/孔接种至96孔板，每孔含培养液100μL。在培养箱（37℃，5% CO₂）中培养24h后，吸去培养基，用PBS缓冲液洗涤细胞两次，然后按照表15加样，每孔100μL，以未处理细胞作为阴性对照，以样品溶剂处理细胞作为溶剂对照，每组设置3个重复孔。

表15 样品细胞毒性浓度设计表

加样后在培养箱（37℃，5% CO₂）中继续培养24h，然后进行CCK8细胞毒性试验，450nm下读取吸光度OD值。计算细胞存活率，空白孔中仅添加细胞培养液。

用RAW264.7细胞进行细胞毒性试验的结果如表16所示。

表16 RAW264.7细胞毒性试验结果分析

根据细胞毒性试验结果选定TNF-α含量测定试验的预配液原料加样浓度（V/V）为0.0016%、0.0031%和0.0063%，如表17所示。

表17 TNF-α含量测定试验浓度设计表

按照以下步骤进行TNF-α含量测定试验。收集对数生长期RAW264.7细胞，按照细胞密度为2×10⁵个/孔接种至24孔板。在培养箱（37℃，5% CO₂）中培养24h后，试验设置阴性对照组/溶剂对照组、模型对照组、阳性对照组及样品组，按照表18向各组细胞培养孔中加入样品，每组设置4个重复孔。

表18 TNF-α含量测定试验分组信息

加药后在培养箱（37℃，5% CO₂）中继续培养2h，模型对照组、阳性对照组和样品组加入终浓度1μg/mL LPS共同孵育24h后，使用小鼠TNF-α ELISA试剂盒进行培养液中TNF-α含量的检测。

TNF-α含量测定试验的结果如图5所示。从图5的TNF-α含量测定试验结果显示，与阴性对照组相比，模型对照组的TNF-α含量显著升高（p<0.01），表明造模成功，该模型可用于评价样品的舒缓功效。在本试验中，样品在0.0031%、0.0063%浓度下作用RAW264.7细胞后，能够显著降低细胞TNF-α释放量，且与模型对照相比具有统计学差异（p<0.01）。结果表明该预配液原料样品具有抑制RAW264.7细胞TNF-α释放的能力，并通过抑制TNF-α释放达到舒缓功效。

根据上述的P815细胞脱颗粒试验、HaCaT细胞的TRPV1表达能力测定试验、RAW264.7细胞的TNF-α含量测定试验，体外舒缓功效评估试验结果表明本发明中水解人参皂草苷类预配液化妆品原料能够通过降低细胞脱颗粒率，能够抑制HaCaT细胞TRPV1 mRNA的表达，能够抑制炎性细胞因子TNF-α的释放来达到舒缓功效。

实施例7

本实施例用于证明本发明所制备的水解人参皂草苷类预配液化妆品原料应用于化妆品时的舒缓修护功效。本实施例按照下表19中的配方制备化妆品乳液的实施例和对比例产品。

表19 实施例7的乳液配方

按照表19中的配方分别配制实施例和对比例的产品，按照以下人体测试方法进行舒缓修护功效的人体功效测评。选择60个年龄20-50岁之间的符合相关测试要求的健康女性受试者。这些受试者都自述为敏感性皮肤，且乳酸刺痛试验为阳性（总分≥3分）。将60人随机分成两组测试者，每组30人。第一组30人测试者使用含1%本发明水解人参皂草苷类预配液的实施例产品，第二组30人测试者使用不含本发明预配液的对比例产品。受试者按照要求分别于早晚用清水洗脸后，均匀足量涂抹所测试产品，试验测试期间不允许涂抹其他任何化妆品。分别于使用前（第0周）、使用产品后4周进行检查和测试。

主要测试以下指标：

（1）皮肤经表皮失水率（TEWL）测定。使用芬兰Delfin公司的经表皮水分流失测试仪测定皮肤经表皮失水率（TEWL），测定3次取平均。

（2）皮肤红区面积分析。使用脸部VISIA扫描测试仪对受试者正侧面进行图像采集，正侧位共3张。选择受试者面颊部中心点附近作为分析靶部位，采用专业皮肤分析软件分析靶部位区域的红区面积。

（3）乳酸刺激性试验。随机选取受试者左右两侧鼻唇沟至颧骨区域为试验侧和对照侧。试验侧使用5%乳酸溶液，对照侧使用蒸馏水对照。实验开始前，由同一技术人员同时将0.4 ml的5%乳酸和0.4 ml蒸馏水分别均匀涂于试验侧和对照侧，反复涂抹5次。涂抹完毕后，询问受试者并记录0、2.5、5和10 min等4个时间点的感受（主要包括刺痛感、瘙痒感和灼热感），并对每种感受的程度进行评分。评分标准：没有刺激感（0分），轻度刺激感（1分），中等刺激感（2分），强烈的严重刺激感（3分）。将4个时间点的评分相加，总分≥3分为阳性。

本发明的水解人参皂草苷类预配液的人体功效测评试验结果如下表20所示。

表20 人体皮肤舒缓修护功效测评结果

试验结果如表20所示，使用含有1%本发明水解人参皂草苷类预配液的实施例7的产品4周后，皮肤经表皮失水率TEWL、皮肤红区面积和乳酸试验评分值三个指标与使用前相比均显著降低（p<0.01）；而使用不含本发明预配液但其他成分完全相同的产品，受试者使用前后这三个指标均未出现显著差异。该试验结果说明本发明水解人参皂草苷类预配液原料添加到化妆品中，能起到显著的舒缓修护功效。如图6所示，受试者在使用含本发明预配液原料的实施例7的产品4周后，面部红区显著减少。实施例7的试验结果表明，本发明水解人参皂草苷类预配液原料加入到简单的化妆品基料（只有简单保湿润肤功效）中所制备的产品，具有显著的舒缓修护功效。

实施例8

本实施例用于证明本发明技术范围内所制备的原料，应用于化妆品时对不同年龄段人群处于刺激状态的皮肤均具有显著的舒缓修护功效。

按照实施例1中的技术方法和参数进行水解人参皂草苷类预配液原料的制备，仅修改以下两点。

（1）以五加科人参属植物三七（Panax notoginseng）和人参（Panax ginseng）的根为材料分别提取原型人参皂苷，然后再通过混合配比的方式，将原人参皂苷混合物中的Rb1/Rg1的比值调整到1:2，再进行下一步的酶促水解反应。

（2）将制备的水解人参皂草苷类物质粉末通过与表21中的其他成分按照表中比例配制成预配液原料。

表21 水解人参皂草苷类预配液化妆品原料实施例8的成分组成

将本实施例中制备的水解人参皂草苷类预配液以2%的添加量，按照下表22的配方来制备舒缓修护霜/膏。

表22 实施例8的舒缓修护霜/膏配方

将以上配方的舒缓修护霜/膏用于受试者测试，选择100名皮肤处于刺激状态的受试者，包括湿疹、红痒、干皴、脱皮和皮肤屏障受损等症状。其中60名受试者为年龄在0-14岁之间的儿童，40名受试者为年龄在18岁以上的成年人。受试者每日早晚各涂抹一次本实施例制备的舒缓修护霜/膏。在使用后3天、10天、20天、30天分别统计有效率，并且于30天统计痊愈率。有效是指出现明显缓解或痊愈，痊愈是指皮肤完全恢复到正常健康状态，试验结果如表23所示。

表23 舒缓修护霜使用效果统计表

本实施例试验结果证明，本发明水解人参皂草苷类预配液以2%的添加量添加到膏霜类护肤品中，例如面霜或全身护肤霜，对儿童和成人处于刺激状态的皮肤都具有显著的舒缓修护功效。

实施例9

本实施例用于证明本发明技术范围内所制备的原料，应用于口腔护理产品时所具有的舒缓牙龈炎症性问题和修护口腔粘膜溃疡的功效。

按照实施例1中的技术方法和参数进行水解人参皂草苷类预配液原料的制备，仅修改以下两点。

（1）以五加科人参属植物三七（Panax notoginseng）和人参（Panax ginseng）的根为材料分别提取原型人参皂苷，然后再通过混合配比的方式，将原人参皂苷混合物中的Rb1/Rg1的比值调整到1:1，再进行下一步的酶促水解反应。

（2）将获得的水解人参皂草苷类物质粉末通过与表24中的其他成分按照表中比例混合，配制成预配液。

表24 水解人参皂草苷类预配液化妆品原料实施例9的成分组成

将本实施例中制备的水解人参皂草苷类预配液以2%的添加量，按照表25的配方来制备实施例的口腔护理液，对比例中不添加水解人参皂草苷类预配液。

表25 口腔护理液配方表

口腔护理液配制工艺如下：

（1）A相的配制

将水解人参皂草苷预配液预热至60℃，搅拌30min，搅匀后按配方量称取漱口水用水解人参皂草苷预配液，加入配方量L-薄荷醇，60℃搅拌30min，至固体完全溶解，溶液澄清均匀。将上述溶液加入预热至60℃的A相配方水中，60℃搅拌30min，降至室温，既得A相溶液。

（2）B相的配制

按配方量称取甜菊糖苷，加入少量配方水，室温搅拌溶解，备用。

按配方量称取西比氯铵，加入适量配方水，室温搅拌溶解，备用。

按配方量依次称取B相其余组分，补足B相中的配方水，室温搅拌溶解后，再加入3.1及3.2中预配的溶液，搅拌均匀，既得B相溶液。

（3）C相的配制

0.6M山梨酸钾预配液的配制：称取90.1g山梨酸钾加入1L纯水，搅拌溶解，制得0.6M山梨酸钾预配液，备用。

0.6M乳酸预配液的配制：称取54.0g乳酸加入1L纯水，搅拌溶解，制得0.6M乳酸预配液，备用。

（4）漱口水的配制

室温，在反应釜中依次加入配制好的A相和B相溶液，搅拌均匀后，按配方量称取C相中预配液，加入反应釜，搅拌均匀，既得。

将所配制的实施例和对比例口腔护理液用于受试者调查试验，选择20名有牙龈肿痛、20名有牙龈出血和20名有口腔溃疡的共计60名受试者，其中针对每种口腔问题一半的受试者（10名）使用实施例口腔护理液，另一半的10名受试者使用不添加水解人参皂草苷预配液的对比例口腔护理液。每日早晚各使用一次，使用前先刷牙后用清水漱口30秒，然后使用20ml口腔护理液含漱2分钟吐出，无需再用清水漱口。使用2周后统计受试者的牙龈肿痛和牙龈出血缓解率，对于口腔溃疡的受试者统计康复所需时间。试验结果如下表26所示。

表26 实施例9口腔护理产品效果统计

表26的试验结果表明，使用添加2%的水解人参皂草苷类预配液的实施例口腔护理液的受试者牙龈肿痛缓解率和牙龈出血缓解率分别为90%和80%，远高于对比例中的30%；实施例的口腔溃疡康复时间平均为4.4天，显著优于对比例的7.1天（p<0.01）。可见添加2%的水解人参皂草苷类预配液的口腔护理液具有显著的舒缓牙龈炎症性问题和修护口腔粘膜溃疡的功效。

实施例10

本实施例提供了一种使用本发明的水解人参皂草苷类组合物制备口腔护理牙膏的工艺方法。

按照实施例1中的技术方法和参数进行水解人参皂草苷类预配液原料的制备。

（1）以五加科人参属植物三七（Panax notoginseng）和人参（Panax ginseng）的根为材料分别提取原型人参皂苷，然后再通过混合配比的方式，将原人参皂苷混合物中的Rb1/Rg1的比值调整到2:1，再进行下一步的酶促水解反应。

（2）将获得的水解人参皂草苷类物质粉末通过与表27中的其他成分按照表中比例混合，配制成预配液。

表27 水解人参皂草苷类预配液化妆品原料实施例10的成分组成

将本实施例中制备的水解人参皂草苷类预配液以3%的添加量，按照表28的配方来制备实施例10的口腔护理牙膏。

表28 口腔护理牙膏配方表

口腔护理牙膏的配制工艺如下：

根据表28的工艺配方，先将香料、糖精、水解人参皂草苷预配液、甘油、山梨醇、L-薄荷醇、赤藓糖醇、木糖醇、西比氯胺、HEC在预浴锅中用去离子水溶解至均匀，加入制膏锅，再在制膏锅中加入焦磷酸钙、硅酸镁铝、氟化亚锡等粉料。粉料添加完毕后再添加香料，进行刮板搅拌、均质搅拌、研磨。在捏和、研磨过程中对膏料在-0.096Mpa状态下抽真空50分钟。捏合、研磨结束后，打出少量膏体进行检验，合格后，再打入膏体储存锅进行陈化，使物料自然冷却至常温，同时使物料充分膨胀形成均相的贴合体，提高物料的弹性，陈化时间为120分钟得到本实施例的口腔护理牙膏膏体。

本实施例制备的口腔护理牙膏可以有效减轻牙龈炎症（舒缓）、牙龈出血和牙齿敏感等问题。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (10)

1.一种舒缓修护作用的水解人参皂草苷类组合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、将植物原料五加科人参属植物充分粉碎，然后研磨成粗粉，使用浓度为70%～80%的乙醇提取、过滤，滤液经减压浓缩后再过滤；

S2、将步骤S1再过滤得到的滤液经大孔吸附树脂柱吸附后，先用去离子水水洗，再用浓度为80%～95%的乙醇洗脱；

S3、将步骤S2得到的洗脱液经减压浓缩、脱色、精制，然后再减压浓缩至浸膏状态后，干燥成粉末状的原人参皂苷；

S4、检测分析不同植物来源、不同植物材料配比提取或不同批次的原人参皂苷原料中的二醇组原人参皂苷Rb1和三醇组原人参皂苷Rg1的含量，直接筛选或通过计算将不同植物来源、不同植物配比提取或不同批次的原人参皂苷干燥粉末配比获得满足以下条件的中间体原料原人参皂苷混合物，中间体原料原人参皂苷混合物需要满足以下条件：1）Rb1含量≥10%（w/w）；2）二醇组原人参皂苷Rb1和三醇组原人参皂苷Rg1的质量比值范围控制在1:3～2:1之间；

S5、将所述中间体原料原人参皂苷混合物通过酶制剂进行酶催化水解反应，对获得的酶解反应液进行提纯、浓缩、干燥，获得所述水解人参皂草苷类组合物粉末。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S5中所述酶制剂包括纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶中的至少一种，所述酶催化水解反应条件为：酶制剂的用量为每毫克所述中间体原料原人参皂苷混合物使用酶活为2U～10U的酶量，所述中间体原料原人参皂苷混合物的投料比例为反应体系的0.5%～3%（w/v），pH5～pH6、37℃～60℃的条件下，反应时间为12小时～48小时。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S1中所述五加科人参属植物包括三七、人参和西洋参中的至少一种。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述三七经过如下步骤进行预处理：

将三七原料表面喷乙醇，将三七真空密封于无菌袋中；

将真空密封的三七原料进行紫外照射，待乙醇挥发后将三七原料放入100℃～120℃，30Kpa～60Kpa的环境中处理3分钟～8分钟。

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述人参经过如下步骤进行预处理：

将人参切片后放置在-40℃～-30℃的温度中冰冷4小时～5小时，并且在冷冻过程中保持20pa～60pa的真空度；

然后控制温度分阶梯进行上升，每次上升8℃～15℃，升温后保持3小时～4小时；

分阶梯升温至45℃～55℃后获得干燥后的人参原料。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S5中所述对获得的酶解反应液进行提纯，具体步骤为：将所述酶解反应液经膜过滤，然后用浓度为80%～95%的乙醇提取。

7.一种舒缓修护作用的水解人参皂草苷类组合物，其特征在于，所述水解人参皂草苷类组合物由权利要求1至6中任意一项所述的方法制备而成，所述组合物活性成分由二醇组原人参皂苷Rb1和三醇组原人参皂苷Rg1配比组合物的酶催化水解产物组成，其中配比组合物中Rb1含量≥10%（w/w）且二醇组原人参皂苷Rb1和三醇组原人参皂苷Rg1之间的质量比值范围为1:3～2:1。

8.一种舒缓修护作用的水解人参皂草苷类预配液化妆品原料，其特征在于，包括：

丙二醇0%～69%；丁二醇20%～89%；权利要求7所述的水解人参皂草苷类组合物1%～5%；PEG-40氢化蓖麻油10%。

9.一种舒缓修护作用的水解人参皂草苷类组合物的应用，其特征在于，权利要求8所述的水解人参皂草苷类预配液化妆品原料在制备具有舒缓修护功效的外用护理产品方面的应用。

10.根据权利要求9所述的水解人参皂草苷类组合物应用，其特征在于，所述外用护理产品为驻留类化妆品，所述水解人参皂草苷类预配液化妆品原料在所述驻留类化妆品的添加量为0.25%～6.00%；或

所述外用护理产品为淋洗类化妆品，所述水解人参皂草苷类预配液化妆品原料在所述淋洗类化妆品的添加量为0.50%～6.00%；或

所述外用护理产品为口腔护理液、口腔护理牙膏或口腔抑菌膏中的任意一种，所述水解人参皂草苷类预配液化妆品原料在所述口腔护理液或所述口腔护理牙膏或所述口腔抑菌膏中的添加量为1%～3%。

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