CN101137639A

CN101137639A - 类黄酮化合物及其用途

Info

Publication number: CN101137639A
Application number: CNA2006800078033A
Authority: CN
Inventors: 贝文·雅罗特; 克莱夫·纽顿·马伊; 欧文·卢埃林·伍德曼; 格雷戈里·詹姆士·杜斯廷
Original assignee: Howard Florey Institute of Experimental Physiology and Medicine; Neuprotect Pty Ltd
Current assignee: Neuprotect Pty Ltd; Florey Institute of Neuroscience and Mental Health
Priority date: 2005-03-11
Filing date: 2006-03-10
Publication date: 2008-03-05
Anticipated expiration: 2026-03-10
Also published as: KR101397510B1; CA2601028A1; NZ560633A; KR20070114315A; JP2008532951A; RU2431634C2; BRPI0608402B1; AU2006222556A1; US20090130051A1; SG162773A1; EP1856085B1; BRPI0608402B8; AU2006222556B2; CA2601028C; WO2006094357A1; EP1856085A1; CN101137639B; ZA200707427B; ES2552108T3; RU2007137659A

Abstract

本文描述了具有抗氧化活性的新的类黄酮化合物。所述化合物和组合物已经表现出具有抗氧化特性并在治疗缺血和再灌注损伤中特别有效。本发明还描述了化学合成这样的类黄酮化合物和测试其效力的方法。这样的化合物和相应的药学上可接受的衍生物和/或盐在药学、营养学和兽医应用领域中具有用途。

Description

类黄酮化合物及其用途

相关申请的交叉引用

本申请要求2005年3月11日提交的澳大利亚临时专利申请No.2005901214的优先权，其内容通过引用并入本文。

技术领域

本发明涉及新的化合物、含有这些化合物的组合物、它们的合成方法、以及这些化合物的用途。尤其是，本发明涉及类黄酮化合物、合成所述类黄酮化合物的方法、含有所述类黄酮化合物的组合物、以及它们的使用方法。

背景技术

缺血组织的迅速再灌注对于恢复正常功能是至关重要的。然而，这种血流的回复可能引起可逆性受损细胞的进行性破坏，因此导致组织功能障碍和梗塞。这种“再灌注损伤”具有多因素的发病原因，而且似乎与炎症反应具有强烈的关联；随着血流的回复，可发生几个炎症过程来加强缺血损伤，包括白细胞的粘附和浸润、以及反应性氧化物(ROS)例如氧自由基物质和过氧化物例如H₂O₂的释放。

许多这样的炎症反应似乎由白细胞介素(ILs)介导，所述白细胞介素是细胞因子的多功能亚类。白细胞(白血细胞)还似乎在再灌注损伤中起到关键的作用。除了损害内皮和神经细胞以外，白细胞可直接阻碍微循环。这种白细胞毛细管阻塞还可能是“无复流现象”的主要机制。因此当血流回复时，仍然可存活的的软组织区不能被充分地再灌注并且最终死亡。心肌缺血尤其引起广泛的毛细管阻塞。

缺血，并且尤其是再灌注，倾向于促进导致进一步组织损伤的白细胞的ROS释放的增加。最有损伤性的自由基类型之一是超氧化物阴离子，所述超氧化物阴离子损伤内皮功能和一氧化氮(NO)活性。由于NO已经显示出能抑制血小板聚集和防止白细胞粘附到内皮，所以这进一步恶化毛细管阻塞过程。

缺血和再灌注后达到的组织恢复程度取决于组织性质和损伤的严重程度。

缺血可由多种病症引起。例如，急性事件例如中风、心肌梗塞或机械性创伤，以及慢性病症例如动脉粥样硬化、外周血管病和糖尿病可引起缺血。高血压是可能引起缺血的病症的另一种类型。

急性事件例如阻塞冠状动脉引起的心脏病发作之后，向心脏病发作受害者静脉内递送多种药物来帮助去除任何血管阻塞，从而重新建立引起组织再灌注的血流。然而，这种类型的治疗不涉及预防或改善再灌注相关的组织损伤，造成出现再灌注环境和重新建立对组织的氧的供应可能导致通过增加自由基产生增加组织损伤。

在此方面，对于表现出缺血或有缺血风险的对象的传统治疗是不充分的。

已经建议多种物质改善血管健康和功能，以及高水果和蔬菜饮食的人口中具有更低的冠心病的发生率。这种作用已经与类黄酮的有益作用相关，所述类黄酮是在水果和蔬菜中发现的多酚化合物。

类黄酮是非常大的和分布广泛的植物源性化合物类，认为其显示出许多生物作用，包括降低低密度脂蛋白的血浆水平、抑制血小板聚集、清除自由基和降低细胞增殖以及调节血管张力。

已鉴定了大量的类黄酮并且彼此在羟基化作用或甲基化作用的取向、苯型取代基的位置、不饱和度和所连接取代基类型上不同。许多类黄酮的一般三环结构(A、B和C环)基于2-苯基-4H-1-苯并吡喃-4-酮的结构。

类黄酮的基本结构

例如，合成的类黄酮、3’，4’-二羟基黄酮醇(DiOHF)在3’，3’-和4’-位具有羟基，并且在体外研究中已经证明降低心肌缺血和再灌注相关的梗塞和损伤(Shen Wang，Gregory Dusting，Clive May和OwenWoodman，British Journal of Pharmacology(2004)142，443-452)。

然而，许多类黄酮的药物代谢动力学严重限制了它们的治疗用途。合成类黄酮倾向于是高度脂溶性分子，因此往往具有差的水溶性，导致难以作为治疗剂施用。这些特征限制它们在需要急性胃肠外施用的治疗例如血管舒张治疗中的应用。

考虑到上述问题，仍然需要开发当与已知的类黄酮相比时具有改善的水溶性和药物代谢动力学的合成的类黄酮衍生物。

发明内容

根据第一方面，本发明提供药物组合物和/或兽医组合物，其包含药学上和/或兽医上可接受的载体或稀释剂和至少一种通式I的化合物：

其中

代表单键或双键；和

R¹、R²、R³、R⁴、R⁵各自独立地选自H、OH或根据式(Ia)的基团：

--O-L-D-E (Ia)

其中

O是氧；

L是与氧以及如果D存在时和D共价键连接的连接基团，或者L是与

氧和E共价键连接的连接基团，或者L不存在；

D是链长等于约1至20个碳原子的间隔基团，或不存在；和

E是增溶基团；

条件是R¹、R²、R³、R⁴、R⁵的至少一个不是H或OH。

优选地，E选自酯、羧酸、磺酸、膦酸、磷酸酯、氨基磺酸酯/盐、磺酸酯、氨基磷酸酯/盐(phosphamate)、膦酸酯、磺酸酯/盐、两性离子物质(zwitterionic specie)、氨基酸、氨基膦酸酯/盐、非环型胺、环型胺、季铵阳离子、聚乙二醇、寡糖或树枝状聚合物。

在一个优选的实施方案中，E选自酯、羧酸、磺酸、膦酸、磷酸酯、聚乙二醇、寡糖或树枝状聚合物。

优选地，E选自酯、羧酸或磷酸酯。

在一个特别优选的实施方案中，E是根据式(Ib)的基团：

其中

W是O、NH、S、O^-、NH^-或S^-；和

X是H、单价或二价阳离子盐、或铵阳离子盐。

优选地，W是O和/或X是H。

在另一个实施方案中，E是根据式(Ic)的酯：

其中

Q是取代的或未取代的亚烷基、亚烯基、亚炔基，任选地被一个或多个杂原子中断；

W是O、NH、S、O^-、NH^-或S^-；和

X是H、取代的或未取代的烷基、烷基苄基、单价或二价阳离子盐、或铵阳离子盐。

优选地，Q是取代的或未取代的低级亚烷基。

在另一个实施方案中，E是根据式(Id)的磷酸酯：

其中

Y是O、NH、S、O^-、NH^-、或S^-；

Z是O或S；和

R⁶和R⁷各自独立地选自H、取代的或未取代的烷基、单价或二价阳离子盐、或铵阳离子盐。

优选地Y和Z是O。

在另一个实施方案中，R¹、R²、R³、R⁴、R⁵的至少一个是根据式(Ie)的磷酸酯：

其中R⁶和R⁷各自独立地选自H、单价或二价阳离子盐、或铵阳离子盐。

在一个实施方案中，存在L并且选自-CO-、酯、酚、膦酸酯、氨基甲酸酯/盐、碳酸酯/盐或Mannich碱。在一个更优选的实施方案中，L是-CO-。

在另一个实施方案中，存在D并且选自取代的或未取代的亚烷基、亚烯基、亚炔基，任选地被一个或多个杂原子、芳基、杂芳基、环烷基或杂环烷基中断。

在一个优选的实施方案中，D是取代的或未取代的亚烷基，任选地被一个或多个杂原子中断。优选地是低级亚烷基。

在另一个方面，本发明提供药物组合物和/或兽医组合物，其包含药学上和/或兽医上可接受的载体或稀释剂和至少一种通式II的化合物：

其中

代表单键或双键；和

R¹、R²和R³如上定义。

在又一另外的方面，本发明提供药物组合物和/或兽医组合物，其包含药学上和/或兽医上可接受的载体或稀释剂和至少一种通式III的化合物：

其中R³如上定义。

在又一另外的方面，本发明提供药物组合物和/或兽医组合物，其包含药学上和/或兽医上可接受的载体或稀释剂和至少一种通式IV的化合物：

其中

Q是取代的或未取代的亚烷基，任选地被一个或多个杂原子中断；

X是H、单价或二价阳离子盐、或铵阳离子盐。

优选地Q是取代的或未取代的低级亚烷基，任选地被一个或多个杂原子中断。

在另一个方面，本发明提供选自以下的化合物：3-(苄氧基羰基丁基羰基氧基)黄酮、3-半己二酸3-羟基黄酮酯、4’-(苄氧基)-3-(苄氧基羰基丁基羰基氧基)黄酮、3-半己二酸4’-羟基黄酮酯、3’，4’-二苄氧基-3-(苄氧基羰基丁基羰基氧基)黄酮、3-半己二酸3’，4’-二羟基黄酮酯、3，4’-二-(苄氧基羰基丁基羰基氧基)黄酮、3，4’-双半己二酸黄酮酯、3，7-二-(苄氧基羰基丁基羰基氧基)黄酮、3，7-双半己二酸3，7-二羟基黄酮酯、4’-羟基-3-羟基黄酮-3-季铵酯、4’-(苄氧基)-3-(二苄氧基磷酰氧基)黄酮和3-羟基黄酮-3-磷酸二钠盐。

在另一个方面，本发明提供药物组合物和/或兽医组合物，其包含药学上和/或兽医上可接受的载体或稀释剂和至少一种选自包括以下的组的化合物：3-(苄氧基羰基丁基羰基氧基)黄酮、3-半己二酸3-羟基黄酮酯、4’-(苄氧基)-3-(苄氧基羰基丁基羰基氧基)黄酮、3-半己二酸4’-羟基黄酮酯、3’，4’-二苄氧基-3-(苄氧基羰基丁基羰基氧基)黄酮、3-半己二酸3’，4’-二羟基黄酮酯、3，4’-二-(苄氧基羰基丁基羰基氧基)黄酮、3，4’-双半己二酸黄酮酯、3，7-二-(苄氧基羰基丁基羰基氧基)黄酮、3-(二苄氧基磷酰基氧基)黄酮、3，7-双半己二酸3，7-二羟基黄酮酯、4’-羟基-3-羟基黄酮-3-季铵酯、黄酮-3-磷酸二钠盐、4’-(苄氧基)-3-(二苄氧基磷酰基氧基)黄酮或3-羟基黄酮-3-磷酸二钠盐。

在又一进一步的方面，本发明提供预防和/或治疗对象中与反应性氧化物(ROS)的存在相关的疾病的方法，所述方法包括：

施用有效量的至少一种上述定义的化合物。

优选地，需要这种治疗的对象具有形成缺血的风险。更优选地，对象由于急性或慢性病症而正患有缺血和/或再灌注损伤。

在一个具体的实施方案中，慢性病症选自癌症、脑血管疾病、肺血管疾病、动脉粥样硬化、动脉疾病、充血性心脏病、冠心病、外周血管疾病、糖尿病、高血压、偏头痛、烧伤、慢性阻塞性肺病和视网膜血管疾病。

在另一个实施方案中，急性病症选自中风、心肌梗塞、由于辗压损伤或手术造成的机械性创伤。优选地所述手术是血管手术。更优选地，所述血管手术是心脏旁路和/或移植手术。

在一个具体实施方案中，在手术之前和/或在手术期间向对象施用化合物。

在另一个方面，本发明提供预防、延迟对象中动脉粥样硬化和/或冠心病的发作和/或减慢动脉粥样硬化和/或冠心病进展的方法，所述方法包括：

施用有效量的至少一种上述定义的化合物。

在又一进一步的方面，本发明提供预防和/或治疗对象中与反应性氧化物(ROS)的存在相关的疾病的治疗和/或预防的方法，所述方法包括：

施用有效量的至少一种上述定义的化合物。

在又一进一步的方面，本发明提供预防和/或至少改善由于缺血和/或再灌注损伤所引起的对象损伤的方法，所述方法包括：

施用有效量的至少一种上述定义的化合物。

在又一进一步方面，本发明提供预防和/或至少改善由于施用治疗剂引起的对象损伤的方法，所述方法包括向对象共施用：

i)治疗剂；和

ii)施用有效量的至少一种上述定义的化合物。

优选地所述治疗剂是氧化性治疗剂。

在一个具体实施方案中，所述治疗剂是抗癌剂，优选地所述抗癌剂是蒽环霉素及其衍生物。

在一个具体实施方案中，通过口服、局部、皮下、胃肠外、肌肉内、动脉内和/或静脉内施用化合物。

在另一方面，本发明提供使用上述定义的化合物制备药物的用途。

在另一个进一步方面，本发明提供通式I的化合物和其药学上和/或兽医上可接受的盐或溶剂化物：

其中；

代表单键或双键；和

--O--L--D--E (Ia)

其中

O是氧；

L是与氧以及如果D存在时和D共价键连接的连接基团，或者L是与氧和E共价键连接的连接基团，或者L不存在；

D是链长等于约1至20个碳原子的间隔基团，或不存在；和

E是增溶基团；

条件是R¹、R²、R³、R⁴、R⁵的至少一个不是H或OH，前提是所述化合物不是黄酮，3’-羟基-，乙酸酯；黄酮，4’-羟基-，乙酸酯；黄酮，3-羟基-，乙酸酯；(±)-41-乙酰氧基黄烷酮；黄烷酮，3，4’，7-三羟基-，3-乙酸酯；4H-1-苯并吡喃-4-酮，3，7-双(乙酰氧基)-2，3-二氢-2-苯基-，(2R-反式)-；4H-1-苯并吡喃-4-酮，7-(乙酰氧基)-2-[4-(乙酰氧基)苯基]-2，3-二氢-，(±)；(+)-4’，7-二乙酰氧基黄烷酮；二乙酸(2S，3S)-3，7-二羟基黄烷酮酯；黄烷酮，3，4’-二羟基-，二乙酸酯；黄烷酮，3’，4’-二羟基-，二乙酸酯；黄烷酮，3，7-二羟基-，二乙酸酯；4H-1-苯并吡喃-4-酮，3，7-双(乙酰氧基)-2-(3，4-二羟基苯基)-2，3-二氢-，(2R-反式)-；黄酮，3，3’-二羟基-，二乙酸酯；黄酮，4’，7-二羟基-，二乙酸酯；黄酮，3，7-二羟基-，二乙酸酯；黄酮，3，3’，7-三羟基-，三乙酸酯；黄酮，3，3’，4’-三羟基-，三乙酸酯；4H-1-苯并吡喃-4-酮，7-(乙酰氧基)-2-[3，4-双(乙酰氧基)苯基]-；黄酮，3，4’，7-三羟基-，三乙酸酯；黄烷酮，3’，4’，7-三羟基-，三乙酸酯；4H-1-苯并吡喃-4-酮，7-(乙酰氧基)-2-[3，4-双(乙酰氧基)苯基]-2，3-二氢-，(S)-；黄烷酮，3，4’，7-三羟基-，三乙酸酯；黄烷酮，3，4’，7-三羟基，三乙酸酯，反式-(t)-；4H-1-苯并吡喃-4-酮，3，7-双(乙酰氧基)-2-[3，4-双(乙酰氧基)苯基]-；黄颜木素，四乙酸酯；4H-1-苯并吡喃-4-酮，3，7-双(乙酰氧基)-2-[3，4-双(乙酰氧基)苯基]-2，3-二氢-，(2R-反式)-；4H-1-苯并吡喃-4-酮，3，7-双(乙酰氧基)-2-[3，4-双(乙酰氧基)苯基]-2，3-二氢-，反式-；黄烷酮，3，3’，4’，7-四羟基-，四乙酸酯；4H-1-苯并吡喃-4-酮，3-(1-氧代丙氧基)-2-苯基-；丙酸，2-甲基-，4-氧代-2-苯基-4H-1-苯并吡喃-3-基酯；丙酸，2，2-二甲基-，4-氧代-2-苯基-4H-1-苯并吡喃-3-基酯；苯乙酸，4-氧代-2-苯基-4H-1-苯并吡喃-3-基酯；苯丙酸，4-氧代-2-苯基-4H-1-苯并吡喃-3-基酯；苯乙酸，a-苯基-，4-氧代-2-苯基-4H-1-苯并吡喃-3基酯；硫代磷酸，o-[4-[3-[(二乙氧基硫膦基)氧基]-4-氧代-4H-1-苯并吡喃-2-基]苯基]o，o-二乙酯；硫代磷酸，o-[3-[3-[(二乙氧基硫膦基)氧基]-4-氧代-4H-1-苯并吡喃-2-基]苯基]o，o-二乙酯；磷酸，二乙基4-(4-氧代-4H-1-苯并吡喃-2-基)苯基酯；4H-1-苯并吡喃-4-酮，2-苯基-3-(膦酰氧基)-；黄酮，3-羟基-，磷酸二氢二铵盐；4H-1-苯并吡喃-4-酮，2-苯基-3-(膦酰氧基)-，镁盐(1∶1)，五水合物；4H-1-苯并吡喃-4-酮，2-[3-羟基-4-(膦酰氧基)苯基]-；3’，4’-二羟基黄酮-4′-磷酸盐/酯、3’，4’-二羟基黄酮-4’-β-D-吡喃葡萄糖苷钠盐；3’，4’-二羟基黄酮-4’-β-D-呋喃核糖苷钠盐。

优选，R¹、R²、R³、R⁴、R⁵为如上定义的。

在另一个方面，本发明提供根据通式(II)的化合物：

其中

代表单键或双键；和

R¹、R²和R³如上定义。

在又一另外的方面，本发明提供根据通式(III)的化合物：

其中R³如上定义。

在又一另外的方面，本发明提供根据通式(IV)的化合物：

其中

Q是取代的或未取代的亚烷基，任选地被一个或多个杂原子中断；X是H、单价或二价阳离子盐、或铵阳离子盐。

在另一个方面，本发明提供根据通式V的化合物：

其中R³和R⁵如上定义。

在另一个方面，本发明提供合成如上定义的化合物的方法。

根据又一另外的方面，本发明提供通式的化合物和其药学上可接受的盐或溶剂化物：

其中：

代表单键或双键；和

R¹、R²、R³、R⁴、R⁵各自独立地选自H、OH、取代或未取代的烷氧基、芳氧基、酯、碳酸酯、醚、磷酸酯和α-酰氧基烷基醚，条件是R¹、R²、R³、R⁴、R⁵的至少一个不是H或OH。

优选地，至少R³选自取代或未取代的酯、碳酸酯、醚、磷酸酯和α-酰氧基烷基醚。

优选地，R¹、R²、R³、R⁴或R⁵的至少一个选自：

i)具有通式的磷酸酯/盐

其中Y是O、NH、S、O^-、NH^-、或S^-；

Z是O或S；以及

每个R⁶和R⁷各自独立地选自取代或未取代的烷基、H、单价或二价阳离子盐、或铵阳离子盐；

ii)具有通式的酯

其中R⁸是取代或未取代的低级烷基、低级烷基烷氧基；

iii)具有通式的酯

其中Q是取代或未取代的低级亚烷基、低级烯基、和炔基；

W是O、NH、S、O^-、NH^-、或S^-；和

X是H、取代的或未取代的烷基、烷基苄基、单价或二价阳离子盐、或铵阳离子盐

和其药学上可接受的盐或溶剂化物。

在本发明的特定实施方案中，Y和Z都是O。

在一个实施方案中，本发明提供通式的化合物和其药学上可接受的盐或溶剂化物：

其中：

代表单键或双键；和

R¹、R²或R³各自独立地选自H、OH、取代或未取代的烷氧基、芳氧基、酯、碳酸酯、醚、磷酸酯和α-酰氧基烷基醚，条件是R¹、R²或R³的至少一个不是H或OH。

优选地，R¹、R²或R³的至少一个选自：

i)具有通式的磷酸酯/盐

其中Y是O、NH、S、O^-、NH^-、或S^-；

Z是O或S；以及

ii)具有通式的酯

其中R⁸是取代或未取代的低级烷基、低级烷基烷氧基；

iii)具有通式的酯

其中Q是取代或未取代的低级亚烷基、低级亚烯基、亚炔基，任选地被一个或多个杂原子中断；

W是O、NH、S、O^-、NH^-、或S^-；和

X是H、取代的或未取代的烷基、烷基苄基、单价或二价阳离子盐、或铵阳离子盐；

和其药学上可接受的盐或溶剂化物。

优选地，

R¹是H或OH；

R²是H或OH；以及

R³选自

在另一个实施方案中，本发明提供通式的化合物：

其中

R⁹是取代的或未取代的烷氧基、芳氧基、酯、碳酸酯、醚、或根据式的基团，其中U是取代的或未取代的亚烷基，任选地被一个或多个杂原子中断。

在另一个实施方案中，本发明提供通式的化合物：

其中n是2至6的整数，优选n是4。

本文给出的式意欲扩展到其所有可能的几何和光学异构体以及外消旋混合物。

在另一个方面，本发明提供合成根据式I、式II、式III、或式IV的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物的方法，其中R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R⁸、U、Q、W、X、Y、Z、n具有上述相同的意义。

在另一个方面，本发明提供药物组合物和/或兽医组合物，其包含药学上和/或兽医上可接受的载体或稀释剂和至少一种根据式I、式II、式III、或式IV的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R⁸、U、Q、W、X、Y、Z、n具有上述相同的意义。

根据本发明的另一个方面，提供预防和/或至少改善由施用治疗剂引起的对象损伤的方法，所述方法包括向对象共施用：

i)治疗剂；和

ii)有效量的至少一种根据式I、式II、式III、式IV或式V的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R⁸、U、Q、W、X、Y、Z、n具有上述相同的意义。

在又一进一步的方面，本发明提供预防和/或治疗与反应性氧化物(ROS)的存在相关的疾病的方法，所述方法包括施用有效量的至少一种根据式I、式II、式III、式IV或式V的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、Ru、U、Q、W、X、Y、Z、n具有上述相同的意义。

在又一进一步的实施方案中，本发明提供预防和/或治疗与反应性氧化物(ROS)的存在相关的疾病的方法，所述方法包括施用有效量的至少一种根据式I、式II、式III、或式IV的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R⁸、U、Q、W、X、Y、Z、n具有上述相同的意义。

典型地，需要该治疗的对象将是具有形成缺血风险的人。作为替代，所述对象可以是正患有由急性或慢性病状引起的缺血和/或再灌注的人。

在又一进一步的方面，本发明提供预防和/或至少改善由缺血和/或再灌注引起的对象损伤的方法，所述方法包括施用有效量的至少一种根据式I、式II、式III、或式IV的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R⁸、U、Q、W、X、Y、Z、n具有上述相同的意义。

优选地增溶基团使得化合物至少部分可溶解，并且更优选，完全可溶解在水溶液中，优选水中。

优选地本发明的化合物具有至少一个体内酶可裂解的取代基。

优选地所述体内酶可裂解的取代基是在生理pH时可电离的基团。

附图说明

图1举例说明合成3-羟基黄酮-3-磷酸二钠盐(5)的合成方案。

图2举例说明合成3’，4’-二羟基黄酮-3-磷酸盐(10)的合成方案。

图3举例说明通过琥珀酸单苄酯合成3-羟基黄酮-3-半琥珀酸酯(15)的合成方案。

图4举例说明通过己二酸单苄酯合成3-羟基黄酮-3-半己二酸酯(19)的合成方案。

图5举例说明合成3’，4’-二羟基黄酮-3-半己二酸酯(21)的合成方案。

图6举例说明在NADPH存在下，载体(dH₂O)、存在和不存在丁酰胆碱酯酶(BuCHE，1000U/L)的黄酮-3-半己二酸酯(19)(F3HA)、和DiOHF(10^-4M)对大鼠主动脉中产生的超氧化物阴离子水平的影响，以对照的百分率表示。

图7举例说明在NADPH存在下，载体(dH₂O)、存在和不存在丁酰胆碱酯酶(BuCHE，1000U/L)的3’，4’-二羟基黄酮-3-半己二酸酯(21)(DiOHF3HA，10^-6M至10^-4M)、和DiOHF(10^-4M)对大鼠主动脉中产生的超氧化物阴离子水平的作用，以对照的百分率表示。

图8举例说明在从大鼠分离的内皮完整主动脉环中，与DiOHF相比较，载体、存在和不存在BuCHE的3’，4’-二羟基黄酮-3-半己二酸酯(21)(DiOHF3HA，10^-4M)的存在，对Ca²⁺的浓度反应曲线。以采用DiOHF3HA治疗前观察的对Ca²⁺(3×10^-3M)的初始反应百分率表示收缩。

图9举例说明在NADPH存在下，载体(dH₂O)、含有磷酸酯酶(1000U/L)的黄酮-3-磷酸酯(F3P，10^-8M至10^-4M)、和DiOHF(10^-4M)对大鼠主动脉中产生的超氧化物阴离子水平的影响，以对照的百分率表示。

图10举例说明在大鼠分离的内皮完整主动脉环中，载体、或存在和不存在磷酸酯酶(P，1000U/L)的黄酮-3-磷酸酯(F3P，10^-8M至10^-4M)的存在，对Ca²⁺的浓度反应曲线。以采用黄酮-3-磷酸酯治疗前观察的对Ca²⁺(3×10^-3M)的初始反应的百分率表示收缩。

图11举例说明载体、1000 U/L BuCHE、DiOHF3HA(10^-4M)、DiOHF3HA(10^-4M)+1000 U/L BuCHE的直接舒张作用。载体、1000U/L BuCHE和DiOHF3HA(10^-4M)对PE预收缩血管没有作用，DiOHF3HA(10^-4M)+1000U/L BuCHE对PE预收缩的大鼠主动脉中血管张力具有显著的作用。

图12(a)举例说明指示麻醉大鼠中血管舒张对DiOHF3HA反应的MAP(mm Hg)的剂量依赖性降低。

图12(b)举例说明对DiOHF3HA反应的HR(心跳/分钟)的剂量依赖性降低。

图13举例说明MAP(mm Hg)的降低指示麻醉大鼠中血管舒张对ACh的反应，通过采用3mg/kg DiOHF3HA预处理30分钟，提高了对ACh的扩张反应。MAP(mm Hg)的增加指示麻醉大鼠中血管收缩对PE的反应，通过采用3mg/kg DiOHF3HA预处理30分钟，减少对PE的收缩反应。

图14举例说明在大鼠主动脉环中，在对照、存在和不存在BuCHE的DiOHF3HA、和DiOHF存在下，产生的对PE的浓度反应曲线。存在BuCHE的DiOHF3HA、以及DiOHF都似乎以浓度依赖方式抑制对PE的反应。

最大收缩

(百分率3mM Ca²⁺)

对照 101±1

DiOHF3HA10^-4M 101±1

DiOHF3HA10^-4M+BuCHE 35±6

DiOHF10^-4M 18±2

图15举例说明磷酸酯酶(1000U/L)、含有磷酸酯酶的黄酮-3-磷酸酯(F3P)(10^-5M至10^-4M)对大鼠内皮完整主动脉环(n＝5)中ACh的浓度反应曲线的作用。单独的磷酸酯酶似乎对ACh的舒张反应不起作用，然而，在两者都处于与对照环相比较的测试浓度的F3P与磷酸酯酶存在下，提高了对ACh的舒张反应。

pEC₅₀ R_max

对照 7.31±0.03 100±3

磷酸酯酶 10^-4M(P)7.30±0.04 100±1

F3P10^-5M+P 7.80±0.06 100±1

F3P10^-4M+P 7.70±0.07 100±1

图16a举例说明MAP(mm Hg)对麻醉大鼠中F3P和DiOHF的反应的剂量依赖性降低。

图16b举例说明HR(心跳/分钟)对麻醉大鼠中F3P和DiOHF的反应的剂量依赖性降低。

图17举例说明麻醉绵羊的对照(n＝4)、DiOHF(2mg/kg，n＝2和5mg/kg，n＝3)和DiOHF3HA(2.7mg/kg，n＝3和6.6mg/kg，n＝4)治疗组中具有风险的心肌区(左侧)和心肌梗塞大小(右侧)。AR/LV％＝以总左室容积百分率表示的具有风险的区域。IS/AR％＝以具有风险的心肌区百分率表示的梗塞大小。*表示对照和己二酸酯(6.6mg/kg)治疗动物之间梗塞大小的显著性差异。

图18举例说明在ET-1诱导中风并采用载体(A和B)或DiOHF3HA(15mg/kg/天)(C和D)治疗轻度至中度中风大鼠之后24、48和72小时，评价比较对侧前肢和同侧前肢上接触(A和C)和除去(B和D)刺激的潜伏期。

图19举例说明延迟施用DiOHF3HA(15mg/kg/天)或载体对轻度至中度中风大鼠的皮质(A)和纹状体(B)中梗塞区域的作用。

定义

本文所用的术语“烷基”包括支链或非支链的烃链，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、辛十八烷基和2-甲基戊基。这些基团可以是被一个或多个共同连接到这样的链的官能团取代或未取代以形成烷基例如三氟甲基、3-羟基己基、2-羧基丙基、2-氟乙基、羧甲基、氰基丁基等，所述官能团例如羟基、溴、氟、氯、碘、巯基或硫基、氰基、烷基硫基、杂环基、芳基、杂芳基、羧基、烷氧羰基(carbalkoyl)、烷基、烯基、硝基、氨基、烷氧基、酰胺基等。

本文的术语“低级”包括1至6个碳原子的直链或支链。

术语“亚烷基”指如上定义的二价烷基，例如亚甲基(-CH₂-)、亚丙基(-CH₂CH₂CH₂-)、氯亚乙基(-CHClCH₂-)、2-硫代亚丁基-CH₂CH(SH)CH₂CH₂、1-溴-3-羟基-4-甲基亚戊基(-CHBrCH₂CH(OH)CH(CH₃)CH₂-)、甲基亚乙基、三亚甲基、1-亚丙基、2-亚丙基、四亚甲基、1-甲基三亚甲基、2-甲基三亚甲基、3-甲基三亚甲基、1-乙基亚乙基、2-乙基亚乙基、五亚甲基、1-甲基四亚甲基、2-甲基四亚甲基、3-甲基四亚甲基、4-甲基四亚甲基和六亚甲基等。

术语“烯基”包括含有一个或多个碳-碳双键的支链或非支链的烃链。

术语“炔基”包括含有一个或多个碳-碳三键的支链或非支链的烃链。

“芳基”指具有单环(例如苯基)、多环(例如联苯基)或多稠环的芳香族碳环基团，所述多稠环中的至少一个是芳香族的，(例如1，2，3，4-四氢萘基、萘基)，其是任选地单、二、或三取代的。本文的芳基基团是未取代的或，如所定义，在一个或多个可取代位置被各种基团取代。

本文所用的术语“环烷基”指具有3至12个碳原子的饱和碳环基团。所述环烷基可以是单环、或多环稠合体系。这样的基团的实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环庚基。本文的环烷基是未取代的或，如所说明的，在一个或多个可取代位置被各种基团取代。例如，这样的环烷基可以任选地被C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、卤素、羟基、氰基、硝基、氨基、单(C₁-C₆)烷基氨基、二(C₁-C₆)烷基氨基、C₁-C₆烯基、C₁-C₆炔基、C₁-C₆卤代烷基、C₁-C₆卤代烷氧基、氨基(C₁-C₆)烷基、单(C₁-C₆)烷基氨基(C₁-C₆)烷基或二(C₁-C₆)烷基氨基(C₁-C₆)烷基。

术语“酰基”包括-C(O)R基团，其中R是如上述定义的烷基或芳基，例如甲酰基、乙酰基、丙酰基或丁酰基。

术语“烷氧基”包括-OR-，其中R是烷基。术语“低级烷氧基”可以提及的是1至6个碳原子的直链和支链烷氧基，例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、异戊氧基、己氧基和异己氧基。

术语“酰胺基”包括酰胺连接：-C(O)NR-(其中R是氢或烷基)。

术语“氨基/胺基”指胺连接：-NR-，其中R是氢或烷基。

术语“羧基”指-C(O)O-，以及术语“羰基”指-C(O)-。

术语“碳酸酯”指-OC(O)O-。

术语“磺酸盐”指-S(O)₂O^-。

术语“磷酸酯”指

术语“羧酸”指-C(O)OH。

术语“磺酸”指-S(O)₂OH。

术语“膦酸”指-P(O)(OH)₂。

术语“氨基磷酸盐”指-Ar-NHPO₄ ^-。

术语“磷酸酯”指-O-P(O)(OR)₂。

术语“氨基硫酸盐”指-Ar-NHSO₃ ^-。

术语“磺酸酯”指-S(O)₂-OR。

术语“磺酸盐”指-S(O)₂O^-。

术语“膦酸酯”指R-P(O)(OR)₂。

术语“羧酸”指-C(O)OH。

术语“磺酸”指-S(O)₂OH。

术语“膦酸”指-P(O)(OH)₂。

术语“氨基磷酸盐”指-Ar-NHPO₄ ^-。

术语“氨基甲酸酯”指-NHC(O)O-。

烃链可以任选地被一个或多个杂原子中断。

当存在时，连接基团可以是本文所述领域中公知的任何的多种这样的分子。

从上述描述中可以清楚地得知，间隔基D可以不存在。也从上述描述中可以清楚地得知，连接基团可以不存在。

具体实施方式

本发明提供类黄酮衍生物和含有类黄酮衍生物的组合物，以及使用其的方法。

已经表明活组织中存在的反应性氧化物(ROS)与动物中的许多病症相关。反应性氧化物可同时含有氮和氧，或仅仅是氧原子。ROS分子的一些实例包括单态O₂、H₂O₂、自由基例如OH^·、O₂ ^-·、NO^·、和ROO^·。许多这些物质在正常代谢活动中形成，而且它们的浓度水平可在与慢性炎症、感染和其它疾病相关的氧化应激条件下提高。

许多ROS分子是自然发生过程例如氧代谢和炎症过程的结果。例如，当细胞利用氧产生能量时，由于线粒体产生ATP而产生自由基。运动可提高自由基水平，如同环境刺激一样，例如电离辐射(来自工业、日晒、宇宙射线和医疗X-射线)、环境毒素、改变的大气条件(例如缺氧和氧过多)、臭氧和氧化氮(主要来自机动车排放、治疗)。还已知生活方式压力例如吸烟和过量饮用酒精影响自由基水平。自由基物质可结合，以形成其它更具有损伤性或毒性的物质，例如过氧化亚硝酸盐阴离子ONOO^-，所述过氧化亚硝酸盐阴离子是超氧化物和一氧化氮自由基反应的产物。

ROS物质的另外一种来源是一些治疗剂，例如抗癌药物。蒽环霉素衍生物在治疗肿瘤疾病例如急性白血病、恶性淋巴瘤等中是非常有效的抗癌剂。然而，其施用不理想的特征可对组织造成氧化性损伤，这可导致心肌症和可能的心力衰竭。因此，治疗剂的存在可引起充血性心力衰竭(CHF)的形成。一些治疗剂的该特征可限制其效力并且可用于开发适当的共施用方案。

因此，在本发明的一个方面，提供预防和/或至少改善由施用治疗剂引起的对象损伤的方法，所述方法包括向对象共施用：

i)治疗剂；和

ii)有效量的至少一种根据据式I、式II、式III、或式IV的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R⁸、U、Q、W、X、Y、Z、n具有上述相同的意义。

在另一个方面，本发明提供预防和/或至少改善对象皮肤的UV损伤的方法，其包括施用治疗有效量的本发明的组合物。关于此方面，优选将组合物配制成防晒霜。组合物可局部应用于皮肤。组合物可包含润肤剂和保湿剂。

在另一个方面，本发明提供预防和/或逆转老化作用、降低明显的起皱作用和或/或治疗或预防干燥皮肤的方法。

在另一个方面，本发明提供治疗患有涉及氧化性损伤的疾病或病症的对象的方法，其包括施用治疗有效量的本发明的组合物。

优选地，涉及氧化性损伤的疾病或病症选自癌症、心脏病、神经障碍、自身免疫病症、缺血-再灌注损伤、糖尿病并发症、脓毒性休克、肝炎、动脉粥样硬化、阿尔茨海默病和HIV或肝炎(包括乙型肝炎)引起的并发症。

在另一个方面，本发明提供

在一个具体实施方案中，对象是动物。所述动物可选自人类、非人类灵长类、牛、马、猪、绵羊、山羊、狗、猫、鸟、小鸡或其它家禽、鸭、鹅、雉鸡、火鸡、鹌鹑、豚鼠、兔、仓鼠、大鼠和小鼠。

在本发明的一些方面，与一种或多种治疗剂同时、单独地或顺序地施用一种或多种类黄酮衍生物。

当以这样的组合使用时，可在相同或不同的时间以单独的药剂施用一种或多种治疗剂和一种或多种根据本发明的类黄酮衍生物，或可将它们配制成包含两种化合物的单一组合物。

自由基与细胞中关键有机底物例如脂质、蛋白质和DNA反应。这些生物分子的氧化可破坏它们，扰乱正常功能，并且可导致多种疾病状态。已经注意到某些器官系统易于受更高的氧化应激水平或亚硝基化应激(nitrosative stress)水平的影响。那些最易受到损伤的器官系统是肺系统(暴露于高水平的氧)、脑(表现出剧烈代谢活动但是具有更低的内源性抗氧化剂水平)、眼睛(经常暴露于损伤性UV光)、循环系统(波动的氧和一氧化氮水平的受害者)和生殖系统(具有来自精子细胞的剧烈代谢活动的风险)。

引起ROS产生的相关急性病症的实例包括缺血再灌注、中风、心肌梗塞或机械性创伤，例如压伤或手术。一些形式的手术例如心脏旁路或移植手术不可避免地引起组织缺血和再灌注。典型地在手术之前和/或手术期间向对象施用一种或多种根据本发明的类黄酮衍生物。

慢性病症可选自包括以下的组：癌症、脑血管疾病、动脉粥样硬化、包括冠心病的动脉疾病、外周血管疾病(包括由疾病例如糖尿病引起的损伤)、高血压、肺高压、慢性阻塞性气道疾病、肺气肿、神经障碍、自身免疫病症、糖尿病并发症、脓毒性和低血容量性休克、烧伤、肝炎、以及肝炎和HIV引起的并发症。另一种慢性病症可选自包括视网膜或其它眼睛损伤的施用高压或高氧张力气氛导致的并发症，所述高压或高氧张力气氛通常用于辅助呼吸，尤其对早产的人类婴儿。可通过分析症状、诊断检测、酶标记，或通过基因检测以确定遗传易感性，来诊断具有相关慢性病症风险的对象。某些急性病症例如心脏病发作或中风的易感性还可通过基因检测进行确定，并可提醒向具有风险的对象预防性施用一种或多种类黄酮衍生物。药物引起的病症归因于ROS例如药物引起的充血性心脏病。

如果疾病或病症是中风或中风的风险，优选在中风发生之前作为预防药施用上述组合物来降低中风发生的风险，或在发生中风12小时内(优选在4小时内)施用。

涉及病理病症的ROS的一个实例包括缺血，其中部分身体的血流缺乏导致不充分的组织氧灌注。缺血引起组织损伤，损伤的严重程度取决于组织缺氧的时间长短、和是否在缺血事件后发生充分的氧再灌注。

通过多种不同的途径，例如局部、口服、皮下、肌肉内、动脉内和/或静脉内可施用至少一种根据本发明的化合物。

化合物的合成

本发明提供根据式I、II、III或IV、V的类黄酮化合物以及合成这些化合物的方法。

类黄酮的衍生物

通过选择性保护/脱保护合成策略制备类黄酮磷酸盐衍生物。

3-羟基黄酮-3-磷酸二钠盐(5)

参照图1，显示了合成3-羟基黄酮-3-磷酸二钠盐的方法。当采用N，N-二异丙基氨基亚磷酸二苄基酯处理时，3-羟基黄酮(1)进行亚磷酸酯化，并且通过间氯过苯甲酸(mCPBA)直接将中间体磷酸酯氧化成其相应的被保护的磷酸酯。通过快速色谱随后重结晶来纯化磷酸酯，收率45％。

磷酸酯在乙醇中与氢氧化钯进行氢解作用以形成磷酸盐，其通过添加稍微过量的0.1M氢氧化钠溶液立即转化成其二钠盐。通过氢解脱保护提供73％收率的3-羟基黄酮-3-磷酸二钠盐的纯样品。

利用(5)的二乙基氨基乙基柱(DEAE)通过离子交换色谱制备相应的二铵盐。

3’，4’-二羟基黄酮-3-磷酸盐(作为二钠盐)(10)

如图2中所示，实施相同的步骤来合成三羟基黄酮类似物。

因此在1H-四唑存在下，通过二异丙基N，N-二苄氧基氨基亚磷酸酯对3’，4’-二苄氧基-3-羟基黄酮(6)进行亚磷酸酯化，来形成3’，4’-二苄氧基-黄酮-3-亚磷酸二苄氧基酯(7)，其通过mCPBA氧化成保护的磷酸酯：3’，4’-二苄氧基-黄酮-3-磷酸二苄氧基酯(8)。这两个步骤在重结晶后产生40％收率的所需化合物。

然后将磷酸酯在乙醇中与钯进行氢解作用，以形成所需的3’，3’-二羟基-黄酮-3-磷酸酯(9)，其通过添加NaOH转化成相应的二钠盐：3’，4’-二羟基-黄酮-3-磷酸二钠盐(10)。

类黄酮的酯衍生物

3-羟基黄酮-3-半琥珀酸酯(15)

根据图3中列举的反应制备3-羟基黄酮-3-半琥珀酸酯(15)。在溶解于二氯甲烷中的4-二甲氨基吡啶(DMAP)和吡啶存在下，琥珀酸酐(11)和苄醇(12)反应制备琥珀酸单苄酯(13)，为77％收率的白色晶体薄片。在DCC和DMAP存在下，该被保护的琥珀酸衍生物与3-羟基黄酮(1)相偶连，形成黄酮-3-半琥珀酸单苄酯(14)，为在静止时固化的黄色或褐色油，收率高达96％。

在THF:EtOH:乙酸溶剂系统中，利用Pd(OAc)₂将单苄酯脱保护，以形成相应的半琥珀酸酯，进行更大规模的反应得到所需的3-羟基黄酮-3-半琥珀酸酯(15)。

3-羟基黄酮-3-半己二酸酯(19)

如图4所示，按照上述半琥珀酸酯的相似步骤合成3-羟基黄酮-3-半己二酸酯(19)。

在p-TsOH存在下，由己二酸和苄醇制备己二酸单苄酯(17)，以得到所需的产物，为34％收率的无色油。

然后对保护的己二酸进行与3-羟基黄酮(1)的DCC偶连，以形成黄酮-3-半己二酸单苄酯，为黄色/褐色胶状物，收率59％。在Pd(OH)2催化剂存在下，利用基于THF的溶剂体系(9:1 THF:EtOH+0.05％乙酸)对该化合物进行氢化作用，使得单苄酯氢解，形成黄酮-3-半己二酸酯，为89％收率的黄色固体。

3’，4’-二羟基黄酮-3-半己二酸酯(21)

图5举例说明了3’，4’-二羟基黄酮-3-半己二酸酯(21)的合成方案。按照上述建立的方法，3’，4’-二苄氧基-3-羟基黄酮(6)和己二酸单苄酯(17)进行DCC偶连，来制备半己二酸单苄酯，为59％收率的褐色胶状物。

平稳地进行小规模(100至500mg)的氢解脱保护，以在3至5小时的时间完成，得到33％收率的3’，4’-二羟基黄酮-3-半己二酸酯(21)。III组合物和方法

可在多种载体和递送系统中配制本发明的化合物。待施用的治疗化合物的量和化合物浓度取决于所选的载体或设备、患者的临床状态、副作用和制剂中化合物的稳定性。因此，根据所考虑患者或相似患者的临床经验，医生应用含有适当浓度治疗化合物的适当制剂、并选择施用的制剂的量。

而且，在制剂中可包含赋形剂。实例包括共溶剂、表面活性剂、油、润湿剂、润肤剂、防腐剂、稳定剂和抗氧化剂。可使用任何药理学上可接受的缓冲剂，例如，Tris或磷酸盐缓冲剂。有效量的稀释剂、添加剂和赋形剂是关于溶解性、生物活性等有效得到药学上可接受的制剂的那些量。

因此，本发明的组合物包括治疗化合物，其可以与用于局部、口服或胃肠外施用的常规、药学上可接受的载体配制。制剂还可包含少量的佐剂，例如缓冲剂和防腐剂来维持等渗、生理和pH稳定性。

IV施用

本发明的化合物可施用给人类和动物对象。

本发明的化合物可以以组合物施用，其中活性化合物与一种或多种惰性成分充分混合，并且任选地包括一种或多种另外的活性成分。所述化合物可用于任何本领域技术人员公知的施用于人类和动物的组合物中。

可根据剂型通过适当的途径施用本发明的组合物。例如，注射剂可以静脉内、动脉内、皮下、肌肉内等施用。

对于口服施用，可制备或固体或流体单位剂型。水溶性形式可与糖、芳香调味剂和防腐剂一起溶解在水载体中来形成糖浆。利用水-醇(例如乙醇)载体和适当的甜味剂例如糖和糖精，以及芳香调味剂制备酏剂。在助悬剂例如阿拉伯胶、黄蓍胶、甲基纤维素等的帮助下，采用水载体制备混悬剂。还可与稳定剂，例如金属螯合还原剂例如乙二胺四乙酸(EDTA)或还原剂例如偏亚硫酸氢钠一起配制本发明的合成类黄酮化合物。

胃肠外使用的适当制剂对于本领域技术人员而言是显而易见的。通常，在水溶液中以约1至约100mg/mL的浓度制备治疗化合物。更典型地，浓度为约10至60mg/mL或约20mg/mL。根据选择使用的化合物的溶解性和效力，在一些情况下，低于1mg/mL的浓度可能是必需的。无菌的制剂适于多种胃肠外途径，包括皮内、关节内、肌肉内、血管内、静脉内、吸入和皮下。

根据本发明的组合物可配制成防晒霜、皮肤护理组合物、保湿剂的润肤剂。

缓慢或延长释放的递送体系，包括任何多种生物聚合物(基于生物学体系)、应用脂质体的体系、和聚合物传递体系，例如树枝状聚合物，可以与本文描述的组合物一起使用，来提供连续或长期的治疗化合物源。这样的缓慢释放体系可适用于局部、眼科、口服和胃肠外使用的制剂。

本发明的合成类黄酮化合物还可配制成营养药物或营养品。例如，合成类黄酮化合物可配制成用于口服消费的食品，例如谷类，饮料例如果汁、酒精饮料、面包等。

V类黄酮衍生物的血管舒张和抗氧化活性

在NADPH存在下，检测载体、黄酮-3-半己二酸酯(10^-8至10^-4M)和DiOHF(10^-4M)对大鼠主动脉中产生的超氧化物阴离子水平的影响，并且以对照的百分率表示。在任何浓度的黄酮-3-半己二酸酯的存在似乎对超氧化物产生没有影响。

参照图6，举例说明了在NADPH存在下，载体、存在和不存在丁酰胆碱酯酶(BuCHE，1000U/L)的黄酮-3-半己二酸酯(F3HA)、和DiOHF(10^-4M)对大鼠主动脉中产生的超氧化物阴离子水平的作用，以对照的百分率表示。在不存在酯酶下，似乎对超氧化物产生没有影响。胆碱酯酶的存在显示黄酮-3-半己二酸酯的浓度依赖性抑制作用。这与体外除去半己二酸酯基团来形成游离羟基衍生物：3-羟基黄酮相一致。与DiOHF(3’，4’-二羟基黄酮醇)的活性相比较，通过引入黄酮-3-半己二酸酯(19)和酯酶抑制超氧化物的产生是有利的。超氧化物和其它ROS浓度的降低与这些自由基存在引起的心肌损伤的可能的降低相关。

在存在载体或增加黄酮-3-半己二酸酯(15)(F3HA，10^-8至10^-4M)的浓度下，测定从大鼠分离的内皮完整主动脉环中的Ca²⁺的浓度反应曲线。在较低的浓度(10^-8至10^-5M)下，黄酮-3-半己二酸酯对主动脉环的Ca²⁺收缩没有影响。在更高的测试水平下，10^-4M，黄酮-3-半己二酸酯具有一些抑制作用，最可能归因于大鼠主动脉组织中酯酶的存在。

在NADPH存在下，载体(dH₂O)、3’，4’-二羟基黄酮-3-半己二酸酯(21)(DiOHF3HA，10^-8M至10^-4M)、和DiOHF(10^-4M)对大鼠主动脉中产生的超氧化物阴离子水平的作用以对照的百分率表示。超氧化物浓度在研究的DiOHF3HA浓度范围内保持不变，因此，DiOHF3HA对超氧化物产生没有影响。

参照图7，举例说明在NADPH存在下，载体、存在和不存在丁酰胆碱酯酶(BuCHE，1000U/L)的3’，4’-二羟基黄酮-3-半己二酸酯(21)(DiOHF3HA，10^-6M至10^-4M)对大鼠主动脉中产生的超氧化物阴离子水平的作用以对照的百分率表示。为了对比，还显示了在NADPH存在下，利用DiOHF(10^-4M)对大鼠主动脉中产生的超氧化物阴离子水平的作用并以对照的百分率表示的结果。胆碱酯酶的存在显示了对超氧化物水平的浓度依赖性抑制。

在载体或增加的3’，4’-二羟基黄酮-3-半己二酸酯(21)(DiOHF3HA，10^-6至10^-4M)浓度下，从大鼠分离的内皮完整主动脉环内，Ca²⁺的浓度反应曲线。以采用DiOHF3HA治疗前观察的对Ca²⁺(3×10^-3M)的初始反应百分率表示收缩。在10^-4M时，DiOHF3HA似乎具有轻微的Ca²⁺抑制作用。该作用可能归因于大鼠主动脉组织中一些酯酶的存在。

参考图8，举例说明与DiOHF相比较，在载体或存在和不存在BuCHE的3’，4’-二羟基黄酮-3-半己二酸酯(21)(DiOHF3HA，10^-4M)存在下，在从大鼠分离的内皮完整主动脉环内对Ca²⁺的浓度反应曲线。以采用DiOHF3HA治疗前观察的对Ca²⁺(3×10^-3M)的初始反应百分率表示收缩。胆碱酯酶的存在显著提高了DiOHF3HA的抑制作用。

参照图9，在NADPH存在下，载体、存在磷酸酯酶(1000U/L)的黄酮-3-磷酸酯(F3P，10^-8M至10^-4M)、和DiOHF(10^-4M)对大鼠主动脉中产生的超氧化物阴离子水平的作用，以对照的百分率表示。黄酮-3-磷酸酯的存在引起超氧化物水平的浓度依赖性降低。该作用与先前的已经显示出B环中3’，4’-二羟基的存在决定超氧化物水平降低的研究相反。

在载体或增加黄酮-3-磷酸酯(F3P，10^-6至10^-4M)的浓度下，测定从大鼠分离的内皮完整主动脉环中Ca²⁺的浓度反应曲线。在最高浓度时，黄酮-3-磷酸酯引起钙诱导收缩的部分抑制。

参照图10，显示在载体、或存在和不存在磷酸酯酶(P，1000U/L)的黄酮-3-磷酸酯(F3P，10^-8M至10^-4M)存在下，在从大鼠分离的内皮完整主动脉环中Ca²⁺的浓度反应曲线。以采用黄酮-3-磷酸酯治疗前观察的对Ca²⁺(3×10^-3M)的初始反应百分率表示收缩。磷酸酯酶的存在显著提高了黄酮-3-磷酸酯的抑制作用。

通过下面的非限定性实施例举例说明本发明。

类黄酮衍生物的合成

3-(苄氧基羰基丁基羰基氧基)黄酮

将3-羟基黄酮(0.105g，0.442mmol)、二环已基碳二亚胺(0.193g，0.933mmol)和4-二甲基氨基吡啶(9.80mg，0.0802mmol)添加到己二酸单苄酯(0.168g，0.754mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液中，在N₂和室温下搅拌混合物19小时。加入水(50μL)并搅拌所得的混合物10分钟，然后加入二乙醚(10mL)。过滤混合物，浓缩滤液并通过快速色谱(甲苯中15至40％的EtOAc)纯化得到单苄酯，为黄色胶状物(0.16g，80％)。从EtOAc/汽油中重结晶小部分得到无色粉末。

mp＝74-76℃；¹H NMR(399.7MHz，CDCl₃)δ1.60-1.75(m，4H，CO₂CH₂CH₂)；2.31(t，J＝6.8Hz，2H，CO₂CH₂)；2.55(t，J＝6.8Hz，2H，CO₂CH₂)；5.02(s，2H，CH₂Ph)；7.20-7.28，7.39-7.45(2m，H，PhCH₂，H3’，4’，5’)；7.34(dd，1H，J_5，6＝8.0Hz，J_6，7＝7.6Hz，H6)；7.46(d，1H，J_7，8＝8.0Hz，H8)；7，62(ddd，1H，J_5，7＝1.6Hz，J_6，7＝7.6Hz，J_7，8＝8.0Hz，H7)；7.73-7.77(m，2H，H2’，6’)；8.16(dd，1H，J_5，7＝1，6Hz，H5).¹³C NMR(100.5MHz，CDCl₃)δ25.29(2C，CO₂CH₂CH₂)；34.62，34.91(2C，CO₂CH₂)；67.30(1C，CH₂Ph)；119.21，124.68，126.29，127.17，129.29，129.40，129.63，129.75，131.05，132.36，134.72，135.06，137.03，156.71，157.45(20C，Ar)；171.54，173.27，174.16(3C，C＝O).分析发现：C，73.54；H，5.27；C₄₂H₃₆O₈理论值C，73.67；H，5.30％.HRMS(ESI⁺)m/z479.1469，C₂₈H₂₄NaO₆[M+Na]⁺理论值479.1471。

3-羟基黄酮3-半己二酸酯

将3-(苄氧基羰基丁基羰基氧基)黄酮(312mg，0.7mmol)和Pd(OH)₂(49.4mg)在9:1 THF:EtOH+0.05％乙酸(15mL)中混合物用H₂处理5小时。过滤粗产物(硅藻土)，浓缩滤液，通过快速色谱(甲苯中10至25％的EtOAc+1％乙酸)纯化剩余物，得到半己二酸酯为浅黄色固体(0.211g，89％)。从EtOAc/汽油中重结晶小部分；

mp＝118-121℃；

¹H NMR(399.7MHz，CDCl₃)δ1.66-1.83(m，4H，CH₂CH₂CO₂)；2.38(t，J＝6.8Hz，2H，CH₂CO₂)；2.63(t，J＝6.8Hz，2H，CH₂CO₂)；7.42(dd，1H，J_5，6＝8.0Hz，J_6，7＝8.0Hz，H6)；7.47-7.53(m，3H，H3’，4’，5’)；7.54(d，1H，J_7，8＝8.4Hz，H8)；7.70(ddd，1H，J_5，7＝1.6Hz，J_6，7＝8.0Hz，J_7，8＝8.4Hz，H7)；7.81-7.86(m，2H，H2’，6’)；8.24(dd，1H，J_5，6＝8.0Hz，J_5，7＝1.6Hz，H5).¹³C NMR(100.5MHz，CDCl₃)δ25.01，25.20(2C，CO₂CH₂CH₂)；34.57(2C，CO₂CH₂)；119.20，124.66，126.33，127.21，129.41，129.76，131.04，132.40，134.70，135.10，156.74，157.60(14C，Ar)；171.52，173.38，179.36(3C，C＝O).分析发现：C，68.89；H，4.91；C₂₁H₁₈O₆理论值C，68.85；H，4.95％，HRMS(ESI⁺)m/z389.1000，C₂₁H₁₈NaO₆[M+Na]⁺理论值389.1001]

4’-(苄氧基)-3-(苄氧基羰基丁基羰基氧基)黄酮

将二氯乙烯(EDC)(843mg，4.40mmol)添加到4’-苄氧基-3-羟基黄酮(1.00g，2.90mmol)、己二酸单苄酯(1.30g，5.50mmol)和DMAP(354mg，2.89mmol)的二氯甲烷(110mL)溶液中，室温下搅拌混合物过夜。然后浓缩反应混合物并将剩余物溶解在乙酸乙酯中。用水(×3)、1M HCl(×3)、饱和NaHCO₃(×3)、盐水(×3)洗有机相，干燥(MgSO₄)并浓缩。通过快速色谱(50％EtOAc/汽油)纯化剩余物得到苄酯，为褐色油，从EtOAc/汽油中重结晶所述褐色油，得到无色固体(900mg，55％)。

mp93℃；¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ1.77-1.83(m，4H，CH₂CH₂)，2.42(t，2H，J＝7.5Hz，CH₂CO)，2.67(t，2H，J＝6.5Hz，CH₂CO)，5.13(s，2H，CH₂Ph)，5.15(s，2H，CH₂Ph).7.09(d，1H，J_7，8＝8.5Hz，H8)，7.35(app.d，2H，J＝8.5Hz，H2’，6’)，7.40-7.46(m，11H，2×Ph，H6).7.69(ddd，1H，J_5，7＝1.5，J_6，7＝7.0，J_7，8＝8.5Hz，H7)，7.85(app.d，2H，J＝8.5Hz，H3’，5’)，8.25(d，1H，J_5，6＝8Hz，H5)；¹³C NMR(125MHz，CDCl₃)δ24：2(×2)，33.6，33.8(4C，CH₂)，66.2，70.1(2C，CH₂Ph)，115.0，117，9，122.4，123.5，125.0，126.0，127.4，128.1，128.2，128.5，128.7,130.0，133.0，133.7，135.9，136.2，155.5，156.1，161.1(Ar)，170.4，172.0，173.0(3C，C＝O)；IR(薄膜)2937，1760，1730，1646，1602，1507，1468，899cm^-1；分析发现C，74.67；H，5.29，C₃₅H₃₀O₇理论值C，74.72；H，5.37％。

4’-羟基黄酮-3-半己二酸酯

将4’-(苄氧基)-3-(苄氧基羰基丁基羰基氧基)黄酮(400mg，0.711mmol)和Pd(OH)₂(56mg)在THF(10mL)、乙醇(1.2mL)和AcOH(100μL)中的混合物用氢气(50psi)处理18小时。然后过滤反应混合物(硅藻土)，并用THF冲洗滤饼。浓缩滤液，通过快速色谱(70％THF/甲苯+1％AcOH)纯化固体剩余物，从THF/汽油中重结晶所得的固体，得到所述酸，为无色固体(150mg，55％)；

mp177-180℃；¹H NMR(500MHz，d₆-DMSO)δ1.56-1.66(m，4H，CH₂CH₂)，2.25(t，2H，J＝7.0Hz，CH₂CO).2.64(t，2H，J＝7.0Hz，CH₂CO)，6.96(app.d，2H，J＝8.5Hz，H2’，6’)，7.52(t，1H，J_6，7＝J_7，8＝7.5Hz，H7)，7.80(app.d，2H，J＝7.5Hz，H3’，5’)，7.78(m，1H，H8)，7.85(t，1H，J_5，6＝J_6，7＝7.5Hz，H6)，8.06(d，1H，J_5，6＝8.0Hz，H5)；¹³C NMR(125MHz，d₆-DMSO)δ23.8，23.9，32.9，33.3(4C，CH₂)，115.9，118.5，119.7，122.7，125.0，125.6，130.1，131.9，134.5，154.9，155.8160.6(Ar)，170.4170.9，174.3(3C，C＝O)；IR 3257，2944，2869，1765，1706，1595，854cm^-1；HRMS(ESI⁺)m/z383.1123，C₂₁H₁₉O₇[M+H]⁺理论值383.1131。

3’，4’-二苄氧基-3-(苄氧基羰基丁基羰基氧基)黄酮

将己二酸单苄酯(1.91g，5.04mmol)，随后将EDC盐酸盐(0.764g，3.98mmol)和DMAP(0.324g，2.65mmol)添加到3’，4’-二苄氧基黄酮醇(1.21g，2.68mmol)的干燥二氯甲烷(100mL)的搅拌溶液中，在室温和N2下搅拌所得混合物3小时。减压浓缩反应混合物并重新悬浮于乙酸乙酯(100mL)中。然后用水(3×50mL)、1M HCl(3×50mL)、饱和NaHCO₃(3×50mL)和盐水(3×50mL)洗悬浮液。干燥(MgSO₄)、过滤、减压浓缩有机萃取物，从EtOAc/汽油中结晶黄色剩余物，得到苄酯为蓬松的黄色固体(1.58g，88％)。

mp＝84-85℃；¹H NMR.(399.8MHz，CDCl₃)；δ1.70-1.80(m，4H，CH₂CH₂)；2，38(t，2H，J＝6.8Hz，CH₂CO)；2.55(m，2H，CH₂CO)；5.10(s，2H，CH₂Ph)；5.20(s，2H，CH₂Ph)；5.24(s，2H，CH₂Ph)；7.01(d，1H，J_7，8＝8.4Hz，H8)；7.26-7.49(m，19H，Ar，H6，2’，5’，6’)；7.62(ddd，1H，J_5，7＝1.2Hz，J_6，7＝7.2Hz，J_7，8＝8，4Hz，H7)；8.22(dd，1H，J_5，6＝7.6Hz，J_5，7＝1.2Hz，H5).¹³CNMR(100.5MHz，CDCl₃)δ25.33(2C，CH₂CH₂CO₂)；34.59，34.93(2C，CH₂CO₂)；67.30，71.91，72.59(2C，CH₂Ph)；114.77，115.84，119.06，123.76，123.84，124.60，126.19，127.12，128.25，128.36，129.15，129，29，129.64，129.73，130.12，134.23，134.89，137.05，137.54，137.85，149.61，152.64，156.53，157.00(32C，Ar)；171.49，173.12，174.183C，C＝O).分析发现：C，75.39；H，5.47；C₄₂H₃₆O₈理论值C，75.43；H，5.43％.HRMS(ESI⁺)m/z691.2303，C₄₂H₃₆NaO₈[M+Na]⁺理论值691.2308.

3’，4’-二羟基黄酮-3-半己二酸酯

将3’，4’-二苄氧基-3-(苄氧基羰基丁基羰基氧基)黄酮(2.12g，3.16mmol)和Pd(OH)₂(107mg)在含有0.05％乙酸(50.0mL)的9∶1THF：EtOH中的混合物在高压下用H₂处理5小时。过滤反应混合物(硅藻土)并浓缩，以得到深绿色固体。通过快速色谱(30至90％THF/甲苯+1％乙酸)纯化所述绿色剩余物，随后从EtOAc/汽油中结晶，得到纯的半己二酸酯为浅褐色固体(0.70g，56％)。

mp＝194-197℃；¹H NMR(399.8MHz，CDCl₃)；δ1.44-1.62(m，4H，CH₂CH₂)；2.10(t，2H，J＝6.8Hz，CH₂CO)；2.44(t，2H，J＝6.8Hz，CH₂CO)；6.73(d，1H，J_5，6＝8.4Hz，H5’)；7.09(dd，1H，J_2，6＝2.0Hz，J_5，6＝8.4Hz，H6’)；7.16-7.22(m，2H，H6，2’)；7.32(d，1H，J_7，8＝8.0Hz，H8)；7.48(ddd，1H，J_5，7＝1.6Hz，J_6，7＝6.8Hz，J_7，8＝8.0Hz，H7)；7.94(dd，1H，J_5，6＝8.4Hz，J_5，7＝1.6Hz，H5).¹³CNMR(100.5MHz，d₆-DMSO)δ25.30，25.62(2C，CH₂CH₂CO₂)；34.43，34.81(2C，CH₂CO₂)；116，59，117.42，119.98，121.41，122.06，124.13，126.51，127.07，133.32，136.04，146.97，150.65，156.35，157.27(14C，Ar)；171.97，173.46，179.95(3C，C＝O)。

分析发现：C，68.89；H，4.91；C₂₁H₁₈O₆理论值C，68.85；H，4.95％.HRMS(ESI⁺)m/z389.1000，C₂₁H₁₈NaO₆[M+Na]⁺理论值389.1001。

3’，4’-二-(苄氧基羰基丁基羰基氧基)黄酮

将二氯乙烯(1.13g，5.91mmol)添加到3，4’-二羟基黄酮(500mg，1.97mmol)、己二酸单苄酯(1.86g，7.88mmol)和DMAP(481mg，3.94mmol)的二氯甲烷(30mL)溶液中，室温下搅拌混合物50分钟。然后浓缩反应混合物，并将剩余物溶解在乙酸乙酯中。用水(×3)、1M HCl(×3)、饱和NaHCO₃(×3)、盐水(×3)洗有机相，干燥(MgSO₄)并浓缩。通过快速色谱(50％EtOAc/汽油)纯化剩余物，得到二酯，为无色油，从EtOAc/汽油中结晶所述无色油，得到无色固体(850mg，62％)。

mp79℃；¹H NMR(500MHz，CDCl₃)61.76-1.82(m，8H，2×CH₂CH₂)，2.42(t，2H，J＝7.0Hz，CH₂CO)，2.45(t，2H，J＝7.0Hz，CH₂CO)，2.62(t，2-H，J＝7.0Hz，CH₂CO)，2.65(t，2H，J＝7.0Hz，CH₂CO)，5.12(s，2H，CH₂Ph)，5.14(s，2H，CH₂Ph)，7.25(d，2H，J＝8.5Hz，H2’，6’)，7.31-7.37(m，10H，2×Ph)，7.44(t，1H，J_5，6＝J_6，7＝8.5Hz，H6)，7.55(d，1H，J_7，8＝8.5Hz，H8)，7.72(td，1H，J_6，7＝J_7，8＝8.5，J_7，5＝1.5Hz，H7)，7，89(d，2H，J＝8.5Hz，H3’，5’)，8.25(dd，1H，J_5，6＝8.5，J_5，7＝1.5Hz，H8)；¹³CNMR(125MHz，CDCl₃)824.16，24.17，24.21，33.5，33.8，33.9，66.1，66.3(CH₂)，118.0，121.9，123.5，125.2，126.1，127，4，128.1，128.18，128.22，128.49，128.53，129.7，133.7，134.0，135.9，136.0，152.8，155.4，155.5(Ar)，170.3，171.2，172.1，173.97，173.0(5C，C＝O)；IR 2943，1765，1732，1652，1501，1465，902cm^-1；

分析发现C，71.30；H，5.56，C₄₁H₃₈O₁₀理论值C，71.29；H，5.55％。

3，4’-双半己二酸黄酮酯

将3，4’-二-(苄氧基羰基丁基羰基氧基)黄酮(435mg，0.629mmol)和Pd(OH)₂(50mg)在EtOAc(5mL)中的混合物用氢处理2小时，得到灰色沉淀。加入THF溶解沉淀并过滤混合物(硅藻土)。用THF洗滤饼，浓缩滤液。从THF/汽油中重结晶固体剩余物，得到双(半己二酸酯)，为无色固体(183mg，50％)。

mp133C；¹H NMR·(500MHz，d₆-DMSO)δ1.55-1.70(m，8H，CH₂CH₂)，2.24(t，2H，J＝7.0Hz，CH₂CO)，2.27(t，2H，J＝7.0Hz，CH₂CO)，2.63(t，2H，J＝7.0Hz，CH₂CO)，2.64(t，2H，J＝7.0Hz，CH₂CO)，7.37(app.d，2H，J＝9.0Hz，H3’，5’)，7.55(dd，1H，J_5，6＝8，5，J_6，7＝7.5，Hz，H6)，7.80(d，1H，J_7，8＝8.5Hz，H8)，7.88(ddd，1H，J_6，7＝7.5，J_7，8＝8，5，J_5，7＝1.5Hz，H7)，7.96(app.d，2H，J＝9.0Hz，H2’，6’)，8.08(dd，1H，J_5，6＝8.5，J_5，7＝1.5Hz，H5)；¹³C NMR(125MHz，d₆-DMSO)δ23.77，23.82，32.6，33.2，33.3；44.3(CH2)，118.7，122.5，122.6，122.7，125.1，126.8，129.7，132.9，134.8，152.7，154.9，155.1(Ar)，170.4，171.1，171.4，174.3，174.3(5C，C＝O)；IR3059，2940，2873，1768，1706，1504，759cm^-1；HRMS(ESI^-)m/z509.1441，C₂₇H₂₅O₁₀[M-H]^-理论值509.1442。

3，7-二-(苄氧基羰基丁基羰基氧基)黄酮

将二氯乙烯(EDC)(517mg，2.7mmol)添加到3，7-二羟基黄酮(250mg，0.983mmol)、己二酸单苄酯(921mg，3.90mmol)和DMAP(220mg，1.80mmol)的二氯甲烷(25mL)溶液中，室温下搅拌混合物1小时。然后浓缩反应混合物并将剩余物溶解在乙酸乙酯中。用水(×2)、1M HCl(×2)、饱和NaHCO₃(×2)、盐水(×2)洗有机相、干燥(MgSO₄)并浓缩。通过二氧化硅垫过滤剩余物用50％EtOAc/汽油洗脱，得到固体，从EtOAc/汽油中重结晶所述固体，得到二酯，为无色固体(565mg，91％)。

mp58℃；¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ1.74-I.82(m，8H，CH₂CH₂×2)，2.39(t，2H，J＝7.0Hz，CH₂CO)，2.45(t，2H，J＝7.0Hz，CH₂CO)，2.62-2.64(m，4H，CH₂CO×2)，7.15-7.17(m，2H，H2’，6’)，7.30-7.36(m，10H，2×Ph)，7.39(d，1H，J_6，8＝1.6Hz，，H8)，7.48-7.51(m，2H，H3’，5’)，7.81-7.83(m，2H，4’H6)8.25(d，1H，J_5，6＝9，H5)；¹³C NMR(125MHHz，CDCl₃)δ24.1，24.20，24.21，33.5，33.80，33.82，34.0，44.7，66.2，66.3，(CH₂)，111.0，119.5，121.5，172.5，128.19，128.22，126.3，128.5，128.6，128.7，129.8，131.3，133.7，135.9，136.0，154.8，156.1，156.6(Ar)，170.3，170.8，171.5，172.96，173.0(5C，C＝O)R 3071，3035，2944，2876，1760，1726，1615，848cm^-1；

分析发现C，71.34；H，5.60％，C₄₁H₃₈O₁₀理论值C，71.29；H，5.55％。

3，7-双半己二酸3，7-二羟基黄酮酯

将3，7-二-(苄氧基羰基丁基羰基氧基)黄酮(565mg，0.818mmol)和Pd(OH)₂(65mg)的EtOAc(10mL)混合物用氢处理3小时。形成灰色沉淀并加入THF直到沉淀溶解。过滤混合物(硅藻土)，用THF洗滤饼，浓缩滤液。从THF/汽油中重结晶固体剩余物，得到二酸，为无色固体(311mg，76％)。

mp128℃；¹H NMR(400MHz，d₆-DMSO)δ1.55-1.74(m，8H，CH₂CH₂×2)，2.23(t，2H，J＝7.0Hz，CH₂CO)，2.28(t，2H，J＝7.0Hz，CH₂CO)，2.61-2.68(m，4H，CH₂CO×2)，7.34(m，1H，H4’)，7.58-7.61(m，3H，H6，H2’，6’)，7.68(d，1H，J_6，8＝1.6Hz，H8)，7.87-7.89(m，2H，H3’，5’)，8.12(d，1H，J_5，6＝8.8，H5)；¹³CNMR(100MHz，d₆-DMSO)δ23.7，23.76，23.78，23.9，32.9，33.19，33.24，33.28(CH₂)，111.9，120.5，120.6，126.6，128.1，129.0，129.2，131.7，133.0，154.9，155.6.155.9(Ar)，170.4，170.6，171.1，174.2，174.3(5C，C＝O)；IR 3035，2952，2920，1762，1708，1112cm^-1；分析发现C，63.64；H，5.14％，C₂₇H₂₆O₁₀理论值C，63，53；H，5.13％。

黄酮醇磷酸酯的制备

3-(二苄氧基磷酰氧基)黄酮

将二异丙基氨基亚磷酸二苄基酯(12.5mL，38.0mmol)和1H-四唑(74.0mL，31.7mmol)添加到3-羟基黄酮(3.00g，12.6mmol)的干燥二氯甲烷(150mL)的溶液中。在N₂和室温下搅拌反应混合物2小时。然后将混合物冷却到-78℃并加入m-CPBA(8.72g，50.6mmol)。然后使得混合物回到室温并进一步搅拌45分钟。用0.25M Na₂S₂O₄(3×100mL)、饱和NaHCO₃(3×100mL)和水(2×100mL)洗反应混合物。干燥(MgSO₄)有机萃取物，过滤并减压浓缩得到粗的白色固体。通过快速色谱(甲苯中20％至50％的EtOAc)，并随后通过从EtOAc/汽油中结晶来纯化粗物质，得到保护的磷酸酯，为白色蓬松固体(5.28g，84％)。

mp＝85-88℃；¹H NMR(399.7MHz，CDCl₃)；δ5.09-5.17(m，4H，CH₂Ph)；7.22-7.30，7.38-7.47(2×m，14H，Ar，H3’，4’，5’，6’)；7.51(d，J_7，8＝8.5Hz，H8)；7.69(ddd，J_5，7＝1.5Hz，J_6，7＝7.2Hz，J_7，8＝8.5Hz，1H，H7)；7.93-7.96(m，2H，H2’，6’)；8.29(dd，J_5，6＝7，5Hz，J_5，7＝1.5H2，1H，H5)¹³C NMR(100，5MHz，CDCl₃)；δ78.13(2C，CH₂Ph)；119.13，124.86，126.23，127.22，128.90，129.36，129.48，129.62，130.06，131.03，132.29，135.06，157.03，157.10(25C，Ar)；136.89(1C，J_C，P＝8.0Hz，C-O-磷酸酯)；173.87(1C，C＝O).³¹P NMR(161.8MHz，CDCl₃)；δ-7.45(s，P＝O).分析发现：C，69.81；H，4.60；C₂₉H₂₃O₆P理论值C，69.88；H，4.65％.HRMS(ESI⁺)m/z 521，1126，C₂₉H₂₃NaO₆P[M+Na]⁺理论值521.1130]。

3-羟基黄酮-3-磷酸二钠盐

将3-(二苄氧基磷酰氧基)黄酮(2.05g，4.09mmol)和钯碳(10％，0.25g)的EtOH∶水(4∶1，250mL)溶液用H2在大气压下处理3.5小时。过滤反应混合物(硅藻土)并用NaOH(0.50g在100mL水中)处理滤液。减压浓缩含水混合物，然后从水/丙酮中结晶得到磷酸酯，为浅黄色晶体(1.03g，87％收率)，

¹H NMR(499.7MHz，D₂O)7.33(dd，1H，J_5，6＝8.0Hz，J_5，7＝1.2Hz，H6)；7.40-7.46(m，3H，H3’，4’，5’)；7.52(d，1H，J_7，8＝8.5Hz，H8)；7.64(ddd，1H，J_5，7＝1.2Hz，J_6，7＝7.5Hz，J_7，8＝8.5Hz，H7)；7.97(dd，1H，J_5，6＝8.0Hz，J_5，7＝1.2Hz，H5)；8.10(m，2H，H2’，6’).¹³C NMR(100.5MHz，D₂O)δ118.29，122.92，124.97，125.06，128.50，129.15，130.92，131.33，134.22，155.06，156.68(13C，Ar)；136.11(1C，J_C，P＝6.8Hz，C-O-P)；177.15(1C，C＝O).³¹PNMR(161.8MH2，D₂O)δ2.98(s，P).，分析发现：C，49.68；H，2.51；C₁₅H₁₁Na₂O₆P理论值C，49，74；H，2.50％。

4’-(苄氧基)-3-(二苄氧基磷酰氧基)黄酮

将1H-四唑(483mg，6.89mmol)添加到4’-苄氧基-3-羟基黄酮(1.00g，2.72mmol)、N，N-二异丙基氨基亚磷酸二苄基酯(1.5mL，1.6g，4.4mmol)的二氯甲烷(30mL)的混合物中，在室温下搅拌反应2小时。添加另外的N，N-二异丙基氨基亚磷酸二苄基酯(1.0mL，1.1g，1.5mmol)，并进一步搅拌反应1小时。然后将反应混合物冷却到-78℃，并加入m-CPBA(3.00g，12.1mmol，70％w/w)。然后将反应升温到室温，并搅拌45分钟。用0.25M Na₂S₂O₃(×3)、饱和NaHCO₃(×3)和盐水(×3)洗有机层，干燥(MgSO₄)并浓缩。通过快速色谱(50％EtOAc/汽油)纯化剩余物，得到黄色固体，从EtOAc/汽油中重结晶所述黄色固体得到磷酸酯，为无色固体(1.01g，58％)。

mp101℃；¹H NMR(500MHz，CDCl³)δ5.02(s，2H，CH²Ph)，5.16(s，2H，CH²Ph)，5.17(s，2H，CH²Ph)，6.97(app.d，2H，J＝8.8Hz，H3’，5’)，7.29-7.36(m，15H，3×Ph)，7.41(t，1H，J_5，6＝J_6，7＝8.0Hz，H6)，7.51(d，J_7，8＝8.5Hz，H8)，7.68(dd，1H，J_6，7＝8.0，J_7，8＝8.5Hz，H7)，7.96(app.d，2H，J＝8.8，H2’，6’)，8.30(dd，1H，J_7，8＝8.5，J_6，8＝1.5Hz，H8)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)δ69.9，70.0(CH₂)，144.7，117.9，122.3，123.7，125.0，126.1，127.4，127.8，128.2，128.4，128.7，130.7，133.8，135.8，135.9，136.1，155.2，155.7，161.0(Ar)，172.6(1C，C＝O)；³¹P NMR(162MHz，CDCl₃)δ-5.3(s，P)；IR 3063，3031，1647，1601，1506，983cm^-1；分析发现C；72.60；H，5.05％，C₃₆H₂₉O₇P理论值C，71.52；H，4.83％。

黄酮-3-磷酸二钠盐

将4’-(苄氧基)-3-(二苄氧基磷酰氧基)黄酮(1.00g，1.65mmol)和Pd(OH)₂(120mg)在THF(10mL)和水(15mL)中的混合物用氢处理3天。过滤混合物(硅藻土)，用THF和水洗滤饼，浓缩滤液。将固体剩余物溶解在THF(20mL)和水(10mL)中，并加入三乙胺(600μL，4.3mmol)，在室温下搅拌30分钟。浓缩混合物，并将剩余物溶解在水中。通过过滤除去不溶解的物质，并将溶液通过离子交换柱。浓缩洗脱剂得到固体，从丙酮/水中重结晶所述固体得到磷酸盐，为褐色固体(226mg，36％)。

mp 182-184℃；¹H NMR(500MHz，D₂O)δ7.07(app.d，2H，J＝8.5Hz，H3’，5’)，7.62(t，1H，J_5，6＝J_6，7＝7.5Hz，H6)，7.72(d，J_7，8＝8.5Hz，H8)，7.92(t，1H，J_6，7＝J_7，8＝7.5H7)，8.18(d，1H，J_5，6＝7.5Hz，H5)8.19(app.d，2H，J＝8.5，H2’，6，)；¹³CNMR(100MHz，D₂O)δ118.4，122.5，122.6，124.9，125，3，131.2，134.4，155.0，157.1，157.2，158.5(Ar)，176.3(1C，C＝O)；³¹P NMR(162MHz，CDCl₃)δ0.60(s，P)；IR3281，1597，1579，1542，1393，903cm^-1；HRMS(ESI^-)m/z333.0160，C₁₅H₁₀O₇P[M+H]^-理论值333.0159。

4’-(苄氧基)-3-(三甲基铵基丙基羰基氧基)黄酮氯化物

室温下搅拌羧基丙基三甲基铵氯化物(0.5g，2.7mmol)和亚硫酰氯(2mL，3.26g，27mmol)过夜。蒸发溶剂，并将剩余物溶解在硝基苯(2mL)中，加入4’-苄氧基黄酮醇(344mg，1.00mmol)。室温下搅拌溶液30分钟，然后在65℃搅拌5小时。减压除去硝基苯(80℃水浴)，通过二氧化硅(7∶2∶1 EtOAc∶MeOH∶H₂O)塞过滤纯化剩余物。用THF洗剩余物，并从乙醇/汽油中重结晶所述剩余物，得到黄色粉末(30mg)。

¹H NMR(399.7MHz，CDCl₃)δ2.01-2.13(2H，m，CH₂)，2.78(2H，d，J6.8Hz，CH₂)，3.09(9H，s，NMe₃)：3.25-3.35(2H，m，CH₂N)，5.21(2H，m，CH₂Ph)，7.24(2H，app.d，J9.2Hz，H2’，6’)，7.33-7.49(m，5H，Ph)，7.54(1H，dd，J8.0，8.0Hz，H6)，7.81(1H，d，J_7，88.4Hz，H8)，7.88(1H，d，J8.0，8.4Hz，H7)，7.92(2H，app.d，J9.2Hz，H3’，5’)，8.07(1H，d；J_5，68.0Hz，H5)。

4’-(羟基)-3-(三甲基铵基丙基羰基氧基)黄酮氯化物

在氢气氛下搅拌黄酮(30mg)和Pd/C(5％，5mg)在EtOH(5mL)中的混合物2小时。过滤混合物并蒸发溶剂得到黄色固体。类黄酮衍生物的血管舒张和抗氧化活性

类黄酮衍生物对Ca²⁺诱导的收缩的作用

为了测定类黄酮对细胞外Ca²⁺内流反应的作用，在存在类黄酮的不含Ca²⁺的高K⁺溶液(60mM，KPSS)中，研究了对外源性应用Ca²⁺的收缩反应。最初将主动脉环在1g静止张力的标准不含Ca²⁺的PSS中平衡45分钟。然后采用不含Ca²⁺的KPSS代替浴介质45分钟，来测定对Ca²⁺(3×10^-3M)的参照收缩。用不含Ca²⁺的PSS再次平衡30分钟之后，在KPSS中，在浓度范围(10^-8至10^-4M)的载体、3’，4’-二羟基黄酮醇、3-羟基黄酮-3-半己二酸酯、3’，4’-二羟基-3-半己二酸酯、3-羟基黄酮-3-磷酸酯/盐的存在下，测定对Ca²⁺(10^-5至3×10^-3M)的累积收缩反应。在研究对Ca²⁺的反应之前，允许对类黄酮进行20分钟的培养期。

类黄酮衍生物的舒张

测试内皮完整性之后，反复冲洗环，并在添加PE(10^-8至2×10^-7M)和9，11-二脱氧-9_α，11_α-环氧亚甲基-前列腺素F_2α(U46619，10^-9至10^-8M)之前再次平衡30分钟，以在40％至60％的KPSS诱导的收缩范围内产生主动力(active force)。通过调节PE和U46619的浓度使得各组之间的预收缩水平相匹配。在10^-8至10^-4M范围内对3’，4’-二羟基黄酮醇、3-羟基黄酮-3-半己二酸酯、3’，4’-二羟基-3-半己二酸酯、3-羟基黄酮-3-磷酸盐/酯的浓度范围进行累积浓度-反应曲线。

在酯酶、丁酰胆碱酯酶(BuCHE，1000U/L)存在下，对半己二酸酯衍生物进行试验，和在磷酸盐/酯衍生物的情况下，在磷酸酯酶(1000U/L)存在下进行试验。

体外分析中类黄酮衍生物对超氧化物水平的作用

采用光泽精化学发光法测定从大鼠分离的主动脉段中的超氧化物阴离子的产生。如上所述制备主动脉环，然后置于冰冷却的Krebs-(N-[2-羟基乙基]哌嗪-N’-[2-乙磺酸](HEPES缓冲剂)(组成(mM)：NaCl99.0、KCl4.7、KH₂PO₄ 1.0、MgSO₄·7H₂O 1.2、D-葡萄糖11.0、NaHCO₃ 25.0、CaCl₂·2H₂O 2.5、Na-HEPES 20.0)中。主动脉环在37℃、pH7.4的含有二乙基硫代氨基甲酸(DETCA，10^-3M)的Krebs-HEPES缓冲剂中预培养45分钟，以使超氧化物岐化酶失活，和β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH，10^-4M)作为NADPH氧化酶的底物，或者3’，4’-二羟基黄酮醇(10^-4M)作为阳性对照、载体、3-羟基黄酮-3-半己二酸酯、3’，4’-二羟基-3-半己二酸酯、3-羟基黄酮-3-磷酸盐/酯(10^-8至10^-4M)。在每孔含有0.3ml Krebs-HEPES缓冲剂和光泽精(5×10^-5M)以及载体或类黄酮(10^-8至10^-4M)的96-孔Optiplate中，检测12个循环的背景光子发射。每1分钟计数每次循环。完成背景读取后，将培养的主动脉环转移到适当的孔中，并如上所述再次计数光子发射。然后将组织在65℃烘箱中放置48小时，以将超氧化物的产生标准化成干组织重量。

在存在或不存在酯酶下在体外分析中类黄酮衍生物对超氧化物水平的作用

以对照的百分率表示在NADPH存在下，载体、存在和不存在丁酰胆碱酯酶(BuCHE，100、300和1000U/L)的3’，4’-二羟基黄酮-3-半己二酸酯(21)(DiOHF3HA，10^-8M至10^-4M)和DiOHF(10^-4M)对从大鼠分离的主动脉段中产生的超氧化物阴离子水平的作用。除了添加丁酰胆碱酯酶以外，所用的方法如上所述。

在存在或不存在磷酸酯酶下在体外分析中类黄酮衍生物对超氧化物水平的作用

如上所述，对于3’，4’-二羟基黄酮-3-半己二酸酯测定：以对照的百分率表示的在NADPH存在下，载体、存在或不存在磷酸酯酶(1000U/L)的3-羟基黄酮-3-磷酸盐/酯(10^-8M至10^-4M)对大鼠主动脉中产生的超氧化物阴离子水平的作用。在不存在磷酸酯酶下，采用3-羟基黄酮-3-磷酸盐/酯观察到对超氧化物阴离子产生的可检测作用。认为这是由于分离的大鼠组织中天然磷酸酯酶的存在引起的。

类黄酮衍生物对大鼠血管功能作用的体内研究

向雄性麻醉Sprague Dawley大鼠静脉内施用单位剂量的3-羟基黄酮-3-半己二酸酯(15)的水溶液，并在一段时间内监测血压。

观察到大鼠血压显著降低，所述血压显著降低表明类黄酮衍生物引起的体内血管舒张。当向另一组大鼠施用水溶液时，没有观察到影响。

采用其它合成类黄酮衍生物的水溶液重复试验，也能引起大鼠血压的显著降低。

活性和药物动力学的筛选

大鼠主动脉的制备

迅速切开大鼠的胸降主动脉并置于Krebs-碳酸氢盐溶液中。去除主动脉周围的表面结缔组织和脂肪，将主动脉切成2至3mm长度的段并固定在器官槽中。

类黄酮对ACh和SNP舒张的作用

冲洗并再次平衡30分钟后，然后亚最大地(submaximally)采用PE和U46619预收缩主动脉环，所述PE和U46619被用于产生45％至60％的KPSS诱导的最大收缩的主动张力。当研究类黄酮、黄酮醇、黄酮-3-半己二酸酯(F3HA)、3’，4’-二羟基黄酮、3’，4’-二羟基黄酮醇、3’，4’-二羟基黄酮-3-半己二酸酯(DiOHF3HA)、和黄酮-3-磷酸盐/酯(F3P)对血管舒张的反应作用时，在环被亚最大地预收缩之前采用化合物之一培养环20分钟，随后是对ACh(100nM至10μM)或SNP(10pM至1μM)的累积浓度反应曲线。在使用F3P的试验中，在一些试验中利用1000U/L的磷酸酯酶来裂解磷酸酯。在存在和不存在丁酰胆碱酯酶(BuCHE，1000U/L)下进行一些试验来裂解DiOHF3HA和F3HA的己二酸酯。

黄酮醇和黄酮对PE诱导的收缩的作用

将环与浓度范围(10^-7M至10^-4M)的DiOHF3HA或载体(0.1％二甲基亚砜，DMSO)培养20分钟。然后进行内皮完整(EI)主动脉环对PE(10^-9至10^-5M)的浓度反应曲线。在存在和不存在BuCHE(1000U/L)下进行试验，来裂解DiOHF3HA的己二酸酯。

黄酮醇对Ca²⁺诱导的收缩的作用

为了测定类黄酮对细胞外Ca²⁺内流反应的作用，在存在类黄酮的不含Ca²⁺的高K⁺溶液(60mM，K⁺-PSS)中研究了对外源性应用Ca²⁺的收缩反应。最初将主动脉环在1g静止张力的不含Ca²⁺的PSS中平衡45分钟。然后采用不含Ca²⁺的K⁺-PSS代替浴介质45分钟，来测定添加的Ca²⁺(3mM)的参照收缩。用不含Ca²⁺的PSS再次平衡30分钟之后，在K⁺PSS中，在载体(0.1％DMSO)、或浓度范围(10^-7M至10^-4M)的3’-羟基黄酮醇、F3HA、DiOHF3HA、或F3P存在下，测定Ca²⁺(10^-5至3×10^-3M)的累积收缩反应。在研究对Ca²⁺的反应之前，允许对类黄酮进行20分钟的培养期。在存在和不存在BuCHE(1000U/L)下进行试验来裂解F3HA和DiOHF3HA的己二酸酯。在使用F3P的试验中，在一些试验中使用磷酸酯酶(1000U/L)来裂解磷酸酯。

类黄酮的舒张作用

测试内皮完整性之后，反复洗环，并在添加PE(10^-8至2×10^-7M)和9，11-二脱氧-9_α，11_α-环氧亚甲基-前列腺素F_2α(U46619，10^-9至10^-8M)之前再次平衡30分钟，以在40％至60％的KPSS诱导的收缩范围内产生主动力。在10^-7至10^-4M范围内对载体、3’-羟基黄酮醇、F3HA、DiOHF3HA、F3P进行累积浓度-反应曲线。在存在和不存在1000U/L的BuCHE下进行试验，来裂解F3HA和DiOHF3HA的己二酸酯。在使用F3P的试验中，在一些试验中使用磷酸酯酶(1000U/L)来裂解磷酸酯。

在氧化应激存在下黄酮醇和黄酮对ACh的血管舒张的作用

将对ACh的对照累积舒张反应与得自采用连苯三酚(2×10^-5M)处理的内皮完整的主动脉环的那些相比较。还测定了暴露于连苯三酚(2×10^-5M)的从大鼠分离的主动脉环中载体(0.1％DMSO)、磷酸酯酶(1000U/L)或F3P(10^-6至10^-4M)对ACh反应的作用。当主动脉环在50％至70％KPSS诱导张力水平达到稳定的PE和U44619的收缩水平时，添加连苯三酚，在测定对ACh的累积浓度-反应曲线之前允许进行10分钟。在一些使用F3P的试验中，1000U/L的磷酸酯酶用于裂解磷酸酯。

DiOHF3HA和F3P在麻醉大鼠中的作用

采用戊巴比妥钠(60mg kg^-1，ip)麻醉雄性Sprague-Dawley大鼠(250至350g)。分离气管并插入聚乙烯气管导管(I.D.2.0mm)，并使得大鼠自主呼吸。

动脉压和心率的检测

向右颈动脉中插入导管，并连接充满肝素化盐水的插管(O.D.0.75，I.D，0.58mm)并连接于压力传感器。连续测量平均和相位动脉压并记录在多道记录仪上。使用流速计由相位动脉压导出心率。

黄酮醇和二羟基黄酮的抗氧化和血管作用

黄酮醇和二羟基黄酮(DiOHFne)引起大鼠主动脉环产生的超氧化物水平的浓度依赖性降低。在检测的最高浓度(0.1mM)下，黄酮醇和DiOHFne都使得超氧化物水平降低至对照的36±3％。黄酮醇不影响ACh或SNP的舒张作用。DiOHFne引起比DiOHF作用更弱的大鼠主动脉的浓度依赖性降低。黄酮醇引起钙-诱导的大鼠主动脉环收缩的浓度依赖性降低，这与之前的DiOHF的观测相比是相对微弱的。

黄酮-3-半己二酸酯(F3HA)的抗氧化和血管作用

F3HA(10^-7M至10^-4M)对大鼠主动脉产生的超氧化物没有抑制作用，但是在F3HA的抑制作用中，丁酰胆碱酯酶(BuCHE，100至1000U/ml)的存在引起浓度依赖性增加(图6)。F3HA仅仅在最高检测浓度(0.1mM)抑制对增加外源性钙浓度的收缩反应。

二羟基黄酮-3-半己二酸酯(DiOHF3HA)的抗氧化和血管作用

DiOHF3HA(10^-7M至10^-4M)对大鼠主动脉产生的超氧化物没有抑制作用，但是丁酰胆碱酯酶(BuCHE，1000U/ml)的存在显示浓度依赖性的抑制作用。单独的DiOHF3HA对ACh或SNP的舒张反应没有影响。相比之下，在BuCHE(1000U/ml)的存在下，DiOHF3HA显著增加了对SNP舒张反应的敏感性。相似地，DiOHF3HA单独对钙诱导的大鼠主动脉收缩具有很小的作用，但是在BuCHE(1000U/ml)的存在下，DiOHF3HA(0.1mM)具有与DiOHF相等的抑制作用。这提示当通过酯酶除去己二酸酯时，半己二酸酯的活性与母体DiOHF相同。还发现DiOHF3HA仅仅在酯酶存在下引起预收缩的大鼠主动脉环的直接舒张(图11)。

静脉内注射DiOHF3HA(0.1、0.3、1、3mg/kg)，在注射之间至少空出30分钟，并测量平均动脉压和心率的峰值变化。DiOHF3HA引起动脉压(图12a)和心率(图12b)的剂量依赖性降低。在一个单独的试验组中，在DiOHF3HA(3mg/kg iv)之前和30分钟之后，当动脉压和心率已经返回到对照水平时，注射ACh(0.3mg/kg iv)和去氧肾上腺素(PE，30mg/kg iv)。DiOHF3HA显著提高对ACh的抑制反应、并减弱PE-诱导的动脉压增加(图13)。

在大鼠主动脉环中，存在和不存在胆碱酯酶的DiOHF3HA(0.1mM)对响应于钙离子载体A23187或异丙肾上腺素的内皮依赖性舒张没有作用。单独给予DiOHF3HA(0.1mM)对PE-诱导的收缩没有作用，但是在酯酶存在下引起显著的抑制。抑制水平与观察的对存在相同浓度(0.1mM)DiOHF的反应相似。

黄酮-3-磷酸盐/酯(F3P)的抗氧化和血管作用

F3P或磷酸酯酶(1000U/l)对大鼠主动脉段产生的超氧化物没有影响，而在磷酸酯酶存在下，F3P引起超氧化物水平的浓度-依赖性抑制。存在磷酸酯酶的F3P增加大鼠主动脉环对ACh舒张的敏感性，但是对于SNP不是这样。氧化应激是由于连苯三酚(2×10^-5M)的存在而引起的，其显著降低对ACh的最大反应，但是F3P加上磷酸酯酶的存在恢复该反应。对SNP的反应未被任何的那些处理影响。F3P引起对钙-诱导的收缩的较小抑制，但是磷酸酯酶的存在显著提高该作用。

静脉内注射F3P(0.1、0.3、1、3、10mg/kg)，使得注射之间空出至少30分钟，并测量平均动脉压和心率的峰值变化(图16a)。DiOHF3HA引起动脉压和心率的剂量依赖性降低(图12a和12b)，但是与DiOHF(1mg/kg iv)相比，所述抑制反应是小的。

总结

这些研究包括评价黄酮醇、3’，4’-二羟基黄酮(DiOHFne)、3’，4’-二羟基黄酮醇(DiOHF)、黄酮-3-半己二酸酯(F3HA)、3’，4’-二羟基黄酮-3-半己二酸酯(DiOHF3HA)和黄酮-3-磷酸盐/酯的血管和抗氧化活性。

当单独应用时，单独的黄酮-3-半己二酸酯(F3HA)没有抗氧化或血管活性，但是裂解己二酸酯取代基的胆碱酯酶的存在，提示F3HA抑制钙诱导收缩的能力。

当单独应用时，单独的二羟基黄酮-3-半己二酸酯(DiOHF3HA)没有抗氧化或血管活性，但是裂解己二酸酯取代基的胆碱酯酶的存在，显示DiOHF3HA能抑制大鼠主动脉产生的超氧化物水平、抑制钙诱导的收缩并引起大鼠主动脉环的直接舒张。在酯酶存在下，DiOHF3HA的活性水平与DiOHF相似。在麻醉大鼠中，DiOHF3HA引起动脉压和心率的浓度依赖性降低。

黄酮-3-磷酸酯(F3P)单独没有抗氧化或血管活性，但是裂解磷酸酯取代基的磷酸酯酶的存在，显示F3P抑制大鼠主动脉产生的超氧化物水平、抑制钙诱导的收缩、并在氧化应激存在下提高内皮依赖性舒张的能力。在磷酸酯酶存在下，F3P的活性水平与DiOHF相似。在麻醉大鼠中，F3P仅仅引起动脉压和心率的小的浓度依赖性降低。该作用比从DiOHF观察到的更小。

心肌缺血再灌注后3’，4’-二羟基黄酮醇己二酸酯(DiOHF3HA)的心脏保护作用

评价了合成黄酮醇、3’，4’-二羟基黄酮醇己二酸酯(DiOHF3HA)预防麻醉绵羊的心肌缺血和再灌注损伤的能力。与母体化合物DiOHF不同，己二酸酯衍生物可溶于水溶液中，尤其是水中。

以水溶液施用DiOHF3HA引起梗塞大小的剂量相关性降低，这与溶解在DMSO中时相似摩尔剂量的DiOHF引起的作用相似。

静脉内DiOHF3HA输注不改变血液动力学指数(动脉血压、心率、左心室舒张末压(LV-EDP))。

由于DiOHF3HA在麻醉绵羊的心脏缺血-再灌注损伤之后，引起与母体化合物相等程度的心脏保护作用，这些数据支持该新的衍生化合物在体内有效转变成母体化合物的假设。

手术准备

研究了5组麻醉成年美利奴绵羊(35至45kg阉羊)：

(1)对照(n＝5)

(2)DiOHF(2mg/kg，n＝2)

(3)DiOHF3HA(2.7mg/kg，n＝3)

(4)DiOHF(5mg/kg，n＝3)

(5)DiOHF3HA(6.6mg/kg，n＝4)。

静脉内注射硫喷妥钠(15mg/kg)诱导麻醉，并在气管插管之后通过异氟烷(1.5％至2％)维持麻醉。在右边面动脉内插入导管进行动脉血取样，并监测动脉压。通过插入到颈静脉内的导管进行静脉内输注。通过在第四肋间隙进行的左胸廓切开术暴露心脏。将4F catheter-tipped血压计通过左心房插入到左心室来测量左心室压(LVP)。将另外的硅橡胶套管插入到左心房附件中用于注射利诺卡因和输注伊文思蓝。从紧邻其第二个对角支末端的心外膜切开左前降支冠状动脉(LAD)，将渡越时间(transit-time)2mm流量探头置于其周围来监测LAD血流。在最接近探头的LAD下面穿过丝缝线，丝线的两个末端穿过塑料管形成血管圈套器(snare)。

试验设计

完成手术过程后允许动物稳定10至15分钟。然后将绵羊随机分到不同的治疗组中。所有绵羊具有30分钟的基线记录，随后是1小时的缺血和3小时的再灌注。

实验过程中，以5分钟的间隔记录血液动力学检测，并在指定的时间点采集血样。缺血30分钟后，施用黄酮醇治疗。将DiOHF溶解在2ml DMSO和14ml聚乙二醇∶水(1∶1)中。将DiOHF3HA溶解在20ml0.1M Na₂CO₃中。以1ml/分钟i.v.给予药物。选择两种剂量的DiOHF3HA(2.7mg/kg和6.6mg/kg)，以达到与母体DiOHF化合物相同的摩尔剂量(分别在2mg/kg和5mg/kg)。对照动物不接受任何静脉内溶液。如果需要，使用利诺卡因来改善心律不齐。

具有风险的区域和梗塞大小的测定

通过伊文思蓝和氯化三苯基四氮唑(TTC)染色描绘具有风险的心肌区和梗塞大小。再灌注3小时后，在最初的闭塞部位再次闭塞LAD。静脉内注射戊巴比妥(100mg kg^-1)使得心脏停搏后，立即将伊文思蓝(1.5％，40ml)注射到左心房中来确定具有风险的心肌。迅速除去心脏并将左心室切成约1cm厚度的横切片(transverse section)。未染色的风险区被描绘到相同的透明物上。然后将切片在含有1％TTC的0.1M磷酸钠缓冲液中培养20分钟(37℃，pH7.4)。梗塞区被描绘到透明物上。通过计算机化的测面积法测量具有风险的心肌区和梗塞大小。以总左心室体积百分率(AR/LV％)表示前者，以具有风险的心肌区的百分率(IS/AR％)表示梗塞大小。

心肌梗塞的血浆标记

在基线、缺血期间以及再灌注期间的3个时间点(1小时、2小时和3小时)将动脉血样(5ml)收集到冷冻的肝素化管中。在4℃离心后，在-20℃储存血浆样品，直到测量以检测乳酸脱氢酶和肌酸酐激酶水平。

结果

在下面的总结结果中，记录5个不同治疗组的心肌梗塞大小。假定最高剂量DiOHF3HA的效力，所有其它参数的变化仅仅记录关于对照组动物相对于DiOHF3HA(6.6mg/kg)组的动物。

在对照组中，1只绵羊在再灌注的第一个10分钟由于心室纤颤而死亡。因此，对照数据是基于n＝4只绵羊。

心肌梗塞大小

在该研究中，5个不同治疗组的绵羊中遭受缺血(AR)的左心室区是相似的，(11％至20％，图17，左图)。相比之下，与对照动物相比较，DiOHF和DiOHF3HA治疗组中标准化成AR的梗塞大小较小(图17，右图)。具体而言，标准化成具有风险区的梗塞大小(IS/AR)从对照的83±4％降低到DiOHF3HA(6.7mg/kg)的49±8％和DiOHF(5mg/kg)的47±8％。较低剂量的DiOHF3HA(2.7mg/kg)和DiOHF(2mg/kg)的IS/AR分别为64％和73％。

LAD流

对照和DiOHF3HA(6.6mg/kg)组绵羊的基线LAD流相似(7至9ml/分钟)。缺血期间，所有动物中LAD流降至零。在再灌注早期，所有绵羊出现冠状高灌注。通常，该LAD流的短暂增加在再灌注30至60分钟后返回到基线水平。在DiOHF3HA组中，流动的消退似乎更快。

对缺血/再灌注的血液动力学反应

两组绵羊之间的基线动脉压没有差异(超过30分钟的平均值，约80mmHg)。相比之下，与DiOHF3HA治疗的绵羊(105±3bpm)相比较，对照组绵羊(90±4bpm)的静止HR更低(p<0.05)。整个试验过程中保持该差异。在施用DiOHF3HA的20分钟输注期间，MAP和HR都没有变化。而且，在心肌缺血和再灌注期间，在任何组的绵羊中没有观察到动脉压或HR的显著变化。

两组绵羊之间的静止LV-EDP没有差异(-11mmHg)，但是与DiOHF3HA治疗的绵羊(1967±103mmHg/秒)相比较，对照组绵羊(1454±62mmHg/秒)的LVP的一阶导数(dP/dtmax)的最大正值更低(p<0.05)。整个试验过程中保持该差异。在施用DiOHF3HA的20分钟输注期间，LV-EDP和dP/dt_max都没有变化。而且，在心肌缺血再灌注期间，在任何组的绵羊中没有观察到LV-EDP和dP/dt_max的显著变化。在再灌注24小时后，药物的血液动力学益处表现的更加清楚。

在麻醉绵羊中，在1小时缺血和3小时再灌注之后，对照组(n＝3)中血浆乳酸脱氢酶增加227±141U/L，DiOHF3HA治疗组(n＝4)增加67±32U/L。在对照组中，这些绵羊的血浆肌酸酐激酶增加2411±958U/L，DiOHF3HA治疗组增加1579±936U/L。

使用合成类黄酮恢复大鼠缺血中风

心肌梗塞的血浆标记

在有知觉的大鼠中研究缺血中风，每日监测神经功能并在中风后72小时进行脑梗塞的死后形态学评价。单侧，通过在右大脑中动脉MCA以外但是接近右大脑中动脉MCA的地方注射有效的血管收缩内皮素-1(通过预先植入导管)诱导有知觉大鼠的短暂脑缺血和再灌注。通过知觉行为将随之发生的中风分成0至5的等级，在中风后3小时和其后的24小时间隔静脉内注射潜在的神经保护性化合物。

手术准备

用0.6ml体积的戊巴比妥钠(60mg/kg，i.p.)诱导雄性HoodedWistar(280至340g)大鼠麻醉，将静脉内(i.v.)导管插入到颈静脉内来进行急性药物施用。然后将23号不锈钢导管立体地植入到背向右MCA2mm的梨状皮质(前面0.2mm、侧面-5.2mm和腹侧-5.9mm)中。采用牙科丙烯酸酯粘固粉固定所述导管，并将2个小螺丝钉插入到头骨中。用缝合线封闭头皮。在12小时白天/黑夜循环和18至22℃温度下单独地养大鼠，在诱导中风之前允许恢复5天。

中风诱导

通过插入超过之前植入的立体导管末端2mm的30号注射器，施用有效的血管收缩剂内皮素-1(ET-1)(10分钟时间施用3μl盐水中的60pmol)，来诱导有知觉大鼠的右大脑中动脉(MCA)的血管收缩。通过多管环箍(poly-tubing cuff)将注射器固定，在ET-1注射期间将大鼠置于干净的有机玻璃盒中观察。在中风诱导期间，我们发现对侧前脚的逆时针转圈、紧握和拖拽，证明正确放置了导管。这些行为变化发生在ET-1注射开始的2至10分钟内，运用该模型的其他研究者已经报道了相似的行为。基于中风期间的这些行为的变化，我们制定了中风严重程度的等级量表，并且已经显示被指定为较高中风等级的载体治疗大鼠具有更大的梗塞体积和神经缺失。我们认为不显示任何行为变化的大鼠不患有中风并且被排除在研究之外。假注射的大鼠遭受导管植入但是不接受任何的ET-1注射。中风之前和中风之后3小时的30-或60-分钟间隔，利用热敏电阻探针量取直肠温度。

功能结果的评价

在任何手术(手术前，1天)之前、ET-1诱导的MCA闭塞之前(缺血前，6天)立即、ET-1诱导的MCA闭塞之后24、48和72小时进行所有的行为试验。每只大鼠的行为与中风前进行比较，因此每只大鼠作为其自身的对照。对所有大鼠进行编码，使得研究者不了解治疗状况。利用基于异常姿势和偏瘫检测的神经缺失分数评价神经异常。通过用尾部悬置大鼠并对胸部扭曲和前肢伸展评分，来评价异常姿势。当将大鼠置于升高的平台上时，评价偏瘫。当梗塞半球对侧的后肢滑落平台的边缘和/或当对侧前肢滑落、当口鼻部和胡须不与表面相接触时认为存在缺失。按下面分数对所有行为进行评分：0＝无缺失；1＝轻度；2＝中度；和3＝重度。因此，当分数总计到最大时，神经缺失分数是12。认为0分数是正常的。

利用在每个手腕的远端-桡区上放置粘带(Avery粘合标签，100mm直径圆圈)组成的试验评价感官半侧忽视。在对侧和同侧肢之间随机放置第一带。在将动物置于有机玻璃盒和利用秒表测量之前，同时接触两个前脚上的带，记录从对侧和同侧前脚上接触每次刺激的潜伏期和除去每次刺激的潜伏期。如果没有已经除去带时在180秒时终止试验。

药物治疗

在中风后3小时，以得到37μmol/kg的浓度、作为单次推注剂量静脉内给予所有化合物。还使用载体对照并且载体对照对于每个化合物是特定的。中风后3小时的首次剂量后，每日一次在24和48小时向动物注射任何一种药物或载体。对于300g的大鼠，每种化合物的总注射体积是约300μl，采用200μl直接盐水冲洗以保证施用了全部的药物。

缺血损伤的量化

缺血后72小时断头处死大鼠，取下它们的脑，并在液氮中冷冻，储存在-80℃。在8个预定的相对于前囱-3.2至6.8mm的脑的冠状面上，切割冠状冷冻切片(16μm)。基于在未染色玻片固定的脑切片中损伤区域是作为清楚地分界的模糊区域或暗区肉眼可见、而正常组织基本上是半透明的观察，测量3个未染色切片中的梗塞。通过运用弹道光传播原理并使用与计算机图像分析系统相结合的简单设备，显示损伤区域的未染色玻片固定的切片在显示器上清晰可见。光直接通过透明的、未损伤组织到达照相机，而损伤组织衍射光线。然后利用图像分析系统容易地描绘、选择和记录损伤区域。在水平之间距离的每个立体水平，通过对损伤的横切面积进行积分，来计算总梗塞体积。运用下式校正水肿对梗塞面积的影响：(正常半球面积/梗塞半球面积)×梗塞面积。还对玻片进行编号使得研究者不了解处理条件。

中风等级

ET-1注射的2至10分钟内，大鼠显示指示中风的神经行为缺失，但是在单独的等体积盐水后不存在这种情况。这些缺失包括特异的行为反应例如紧握和不能伸展对侧前肢、以及在闭塞的对侧方向上转圈。在转圈之前出现理毛行为，并且几乎在所有大鼠中观察到理毛行为。在一个连续的动作中，理毛以面部理毛之后的全身理毛的典型方式发生。较少观察到其它行为例如牙齿打颤、咬笼子和睡觉或伸舌头。根据它们的程度和严重度，可将中风时观察的这些行为反应进行分级。我们还显示了在载体治疗大鼠(n＝40)中，中风等级和神经缺失分数之间、以及中风等级和梗塞体积之间具有正的相关性。分级之后，根据相等的中风等级对中风大鼠进行配对，使得中风等级在载体和药物治疗组之间平均分布。然后将这些大鼠进行编码，使得可以以盲法处理进行剩余的评价。

将药物治疗分级

为了支持中风患者的临床管理和在临床试验中正确地对治疗组进行分级，使用预测模型预测人类中风患者的功能结果和存活性。之前还没有尝试过在试验中风动物中使用相似的模型。在MCA闭塞的ET-1模型中，可在中风诱导期间观察行为反应，并根据这些反应对中风严重程度进行分级评分。因此，能预测那些动物将患有重度的中风以及那些动物将患有轻度至中度的中风。该方法还能对风险区进行一些预测，所述风险区可在中风后通过神经保护剂潜在地挽救。如果梗塞占据总半球体积的70％以上，重度中风剩下很少的用于神经保护的风险区。然而，轻度至中度中风显示更大的用于挽救的风险区，因此表现出更大的神经保护机会。实际上，为了确定哪个患者会从将来的药物治疗中受益，现在使用患者的临床MRI研究以相似方式对患者进行分级。因为这个原因，我们在药物治疗分析结束时，除去等级为4或5的重度中风的动物，并对于所有将测试的化合物重新分析轻度至中度中风组(等级1至3)的数据。

3’，4’-二羟基黄酮醇(DiOHF)

在我们的实验室中进行的最初试验评价了中风开始后3小时静脉内给予的DiOHF(10mg/kg)的延迟的神经保护潜能。每只大鼠接受3个推注剂量的用于注射的溶解在20％DMSO、40％聚乙二醇和40％无菌水中的DiOHF。施用3’，4’-二羟基黄酮醇(DiOHF)的适度中风大鼠(分数2至3，化合物和载体分别为n＝6和5)在48和72小时降低神经缺失，并且取消了中风后在给予内皮素加单独药物载体的对照大鼠中观察到的半忽视分数(“粘带试验(sticky tape test)”)的增加。重要地，DiOHF降低了脑皮质中产生的梗塞体积，并且完全预防脑纹状体中的梗塞形成。

与载体治疗相比较，轻度至中度中风大鼠的DiOHF(10mg/kg)治疗显著降低皮质和纹状体中的梗塞面积。与载体治疗的大鼠相比较，DiOHF治疗还显著提高轻度至中度中风大鼠的神经结果。

用于治疗中风的3’，4’-二羟基黄酮-3-半己二酸酯(DiOHF3HA)

每只大鼠接受3个推注剂量的用于注射的溶解在Na₂CO₃缓冲盐水(0.1M，pH7.8)中的DiOHF3HA(15mg/kg/每天i.v.)。

载体 DiOHF3HA

等级#2(n＝3) #2(n＝1)

等级#3(n＝4) #3(n＝4)

等级#4(n＝7) #4(n＝6)

中风后，任何治疗组中的体重没有显著减轻。在两个治疗组中，中风之前的体核温度在正常生理极限内。中风后在30分钟时两个治疗组中的温度显著升高，但是在此时间之后温度返回到正常水平内。静脉内注射载体或DiOHF3HA后，两个治疗组的温度似乎升高，但这与中风前温度没有显著性差异。

与中风前的分数相比，中风后两个治疗组的大鼠显示出明显更高的中风后24、48和72小的神经缺失分数。与载体治疗的大鼠相比较，DiOHF3HA(15mg/kg/天)的治疗显著提高中风后24、48或72小时的神经缺失分数。与同侧相比时，载体治疗的大鼠显示增加的从中风影响的对侧前肢除去粘合标签的潜伏期(P<0.05，两因素RM-ANOVA以及2-因子重复，中风后小时和侧)。DiOHF3HA(15mg/kg/每天)治疗后，这些影响消除。

与载体相比较时，DiOHF3HA(15mg/kg i.v.)治疗后，皮质的梗塞面积显著降低。

总之，与载体治疗相比较，DiOHF3HA(15mg/kg)治疗在半忽视试验中显著提高神经功能，并且还降低中风后纹状体中的损伤面积。DiOHF3HA对轻度至中度中风的作用

研究所选轻度至中度中风大鼠的组

载体 DiOHF3HA

等级#3(n＝4) #2(n＝1)

等级#4(n＝3) #3(n＝4)

在任何治疗组中，轻度至中度中风后大鼠体重没有减轻。在两个治疗组中，中风之前的体核温度在正常生理极限内。轻度至中度中风后，在30分钟时两个治疗组中的温度显著升高，但是此时间之后温度返回到正常水平内。

与手术前的分数相比时，轻度至中度中风后，两个治疗组的大鼠显示中风前以及中风后24、48和72小时的显著更高的神经缺失分数。与载体治疗的大鼠相比较，DiOHF3HA(15mg/kg/天)治疗对神经缺失分数没有影响。与同侧相比时，在24和48小时时，载体治疗的轻度至中度中风大鼠显示出增加的中风影响的对侧前肢接触粘合标签的潜伏期(P<0.05，两因素RM-ANOVA以及2-因子重复，中风后小时和侧)。在24小时时，载体治疗的大鼠还显示增加的除去粘合标签的潜伏期(P<0.05，两因素RM-ANOVA以及2-因子重复，中风后小时和侧)。DiOHF3HA(15mg/kg/天)治疗后，这些作用消除(图18)。

与载体相比较时，DiOHF3HA(15mg/kg i.v.每天)治疗后显著降低轻度至中度中风大鼠皮质的梗塞面积(图19)。DiOHF3HA治疗还显著降低纹状体中的梗塞面积。

总之，与载体治疗相比较，轻度至中度中风大鼠的DiOHF3HA(15mg/kg)治疗显著降低皮质和纹状体中的梗塞面积。在半忽视试验中，DiOHF3HA治疗还显著恢复神经功能。

除非另外指出，图表中所有值是由垂直线表示的s.e.平均值。

已经包括在本发明说明书中的任何文献、影响、材料、设备、制品或类似的讨论仅仅是为了提供本发明的情形。不应当认为是承认任何所有这些主题构成部分现有技术或是本发明相关领域的一般常识，如同其在本申请要求的每一个优先权日之前存在。

整个说明书中，单词“包含”(“comprise”)或变体，例如“(包括)comprises”或“(含有)comprising”应当被理解为意味着包括所述的元素、整数或步骤，或元素、整数或步骤的组，但是不排除任何其它元素、整数或步骤，或元素、整数或步骤的组。

本领域技术人员应当理解，如具体实施方案中所示，可对本发明进行许多变化和/或改动而不背离广泛描述的本发明的精神或范围。因此，可认为本发明实施方案在所有方面是举例说明的，而不是限制性的。

Claims

1.一种药物组合物和/或兽医组合物，其包含药学上和/或兽医上可接受的载体或稀释剂和至少一种通式I的化合物：

其中

代表单键或双键；和

R¹、R²、R³、R⁴、R⁵独立地选自H、OH或根据式(Ia)的基团：

-O-L-D-E (Ia)

其中

O是氧；

D是链长等于约1至20个碳原子的间隔基团，或不存在；和

E是增溶基团；

条件是R¹、R²、R³、R⁴、R⁵的至少一个不是H或OH。

2.根据权利要求1的组合物，其中E选自酯、羧酸、磺酸、膦酸、磷酸酯、氨基磺酸酯/盐、磺酸酯、氨基磷酸酯/盐、膦酸酯、磺酸盐、两性离子物质、氨基酸、氨基膦酸酯/盐、非环型胺、环型胺、季铵阳离子、聚乙二醇、寡糖或树枝状聚合物。

3.根据权利要求1或权利要求2的组合物，其中E选自酯、羧酸、磺酸、膦酸、磷酸酯、聚乙二醇、寡糖或树枝状聚合物。

4.根据前述权利要求中任何一项的组合物，其中E选自酯、羧酸、或磷酸酯。

5.根据前述权利要求中任何一项的组合物，其中E是根据式(Ib)的基团：

其中

W是O、NH、S、O-、NH^-或S^-；和

X是H、单价或二价阳离子盐、或铵阳离子盐。

6.根据权利要求5的组合物，其中W是O。

7.根据权利要求5或权利要求6的组合物，其中X是H。

8.根据权利要求1至4中任何一项的组合物，其中E是根据式(Ic)的酯：

其中

W是O、NH、S、O^-、NH^-或S^-；和

9.根据权利要求8的组合物，其中Q是取代的或未取代的低级亚烷基。

10.根据权利要求8或权利要求9的组合物，其中W是O。

11.根据权利要求1至4中任何一项的组合物，其中E是根据式(Id)的磷酸酯：

其中

Y是O、NH、S、O^-、NH^-、或S^-；

Z是O或S；和

12.根据权利要求11的化合物，其中Y和Z是O。

13.根据前述权利要求中任何一项的化合物，其中R¹、R²、R³、R⁴和R⁵的至少一个是根据式(Ie)的磷酸酯：

其中R⁶和R⁷独立地选自H、取代或未取代的烷基、单价或二价阳离子盐、或铵阳离子盐。

14.根据前述权利要求中任何一项的组合物，其中存在L，并且L选自-CO-、酯、酚、膦酸酯、氨基甲酸酯/盐、碳酸酯/盐或Mannich碱。

15.根据前述权利要求中任何一项的组合物，其中L是-CO-。

16.根据前述权利要求中任何一项的组合物，其中存在D，并且D选自取代的或未取代的亚烷基、亚烯基、亚炔基，任选地被一个或多个杂原子、芳基、杂芳基、环烷基或杂环烷基中断。

17.根据权利要求16的组合物，其中D是取代的或未取代的亚烷基，任选地被一个或多个杂原子中断。

18.一种药物组合物和/或兽医组合物，其包含药学上和/或兽医上可接受的载体或稀释剂和至少一种通式II的化合物：

其中

代表单键或双键；和

R¹、R²和R³如前述权利要求中任何一项所定义的。

19.一种药物组合物和/或兽医组合物，其包含药学上和/或兽医上可接受的载体或稀释剂和至少一种通式III的化合物：

其中R³如前述权利要求中任何一项所定义的。

20.一种药物组合物和/或兽医组合物，其包含药学上和/或兽医上可接受的载体或稀释剂和至少一种通式IV的化合物：

其中

X是H、单价或二价阳离子盐、或铵阳离子盐。

21.权利要求20的组合物，其中Q是取代的或未取代的低级亚烷基，任选地被一个或多个杂原子中断。

22.一种药物组合物和/或兽医组合物，其包含药学上和/或兽医上可接受的载体或稀释剂和至少一种选自包括以下的组的化合物：3-(苄氧基羰基丁基羰基氧基)黄酮、3-半己二酸3-羟基黄酮酯、4’-(苄氧基)-3-(苄氧基羰基丁基羰基氧基)黄酮、3-半己二酸4’-羟基黄酮酯、3’，4’-二苄氧基-3-(苄氧基羰基丁基羰基氧基)黄酮、3-半己二酸3’，4’-二羟基黄酮酯、3，4’-二-(苄氧基羰基丁基羰基氧基)黄酮、3，4’-双半己二酸黄酮酯、3，7-二-(苄氧基羰基丁基羰基氧基)黄酮、3-(二苄氧基磷酰基氧基)黄酮、3，7-双半己二酸3，7-二羟基黄酮酯、4’-羟基-3-羟基黄酮-3-季铵酯、黄酮-3-磷酸二钠盐、4’-(苄氧基)-3-(二苄氧基磷酰基氧基)黄酮或3-羟基黄酮-3-磷酸二钠盐。

23.一种预防和/或治疗对象中与反应性氧化物(ROS)的存在相关的疾病的方法，所述方法包括：

施用有效量的至少一种前述权利要求中任何一项定义的化合物。

24.根据权利要求23的方法，其中需要这样治疗的对象具有形成缺血的风险。

25.根据权利要求23的方法，其中对象由于急性或慢性病症正在患有缺血和/或再灌注损伤。

26.根据权利要求25的方法，其中所述慢性病症选自癌症、脑血管疾病、肺血管疾病、动脉粥样硬化、动脉疾病、充血性心脏病、冠心病、外周血管疾病、糖尿病、高血压、偏头痛、烧伤、慢性阻塞性肺病和视网膜血管疾病。

27.根据权利要求25的方法，其中所述急性病症选自中风、心肌梗塞、由于挤压损伤或手术造成的机械性创伤。

28.根据权利要求27的方法，其中所述手术是血管手术。

29.根据权利要求27的方法，其中所述血管手术是心脏旁路和/或移植手术。

30.根据权利要求27至29中任何一项的方法，其中在手术之前和/或在手术期间向对象施用所述化合物。

31.一种预防、延迟对象中动脉粥样硬化和/或冠心病的发作和/或减慢动脉粥样硬化和/或冠心病的进展的方法，其包括：

32.一种预防和/或治疗对象中与反应性氧化物(ROS)的存在相关的疾病的治疗和/或预防方法，所述方法包括：

施用有效量的至少一种权利要求1至22中任何一项定义的化合物。

33.一种预防和/或至少改善由于缺血和/或再灌注损伤导致的对象损伤的方法，所述方法包括：

34.一种预防和/或至少改善由于施用治疗剂导致的对象损伤的方法，所述方法包括向对象共施用：

i)治疗剂；和

ii)施用有效量的至少一种权利要求1至22中任何一项定义的化合物。

35.根据权利要求34的方法，其中所述治疗剂是氧化性治疗剂。

36.根据权利要求34的方法，其中所述治疗剂是抗癌剂。

37.根据权利要求36的方法，其中所述抗癌剂是蒽环霉素及其同系物。

38.权利要求23至37中任何一项的方法，其中通过口服、局部、皮下、胃肠外、肌肉内、动脉内和/或静脉内施用所述化合物。

39.权利要求1至22中任何一项定义的化合物在制备药物中的用途。

40.通式I的化合物和其药学上和/或兽医上可接受的盐或溶剂化物：

其中

代表单键或双键；和

R¹、R²、R³、R⁴、R⁵独立地选自H、OH或根据式(Ia)的基团：

-O-L-D-E (Ia)

其中

O是氧；

D是链长等于约1至20个碳原子的间隔基团，或不存在；和

E是增溶基团；

条件是R¹、R²、R³、R⁴、R⁵的至少一个不是H或OH，

前提是所述化合物不是黄酮，3’-羟基-，乙酸酯；黄酮，4’-羟基-，乙酸酯；黄酮，3-羟基-，乙酸酯；(±)-41-乙酰氧基黄烷酮；黄烷酮，3，4’，7-三羟基-，3-乙酸酯；4H-1-苯并吡喃-4-酮，3，7-双(乙酰氧基)-2，3-二氢-2-苯基-，(2R-反式)-；4H-1-苯并吡喃-4-酮，7-(乙酰氧基)-2-[4-(乙酰氧基)苯基]-2，3-二氢-，(±)；(+)-4’，7-二乙酰氧基黄烷酮；二乙酸(2S，3S)-3，7-二羟基黄烷酮酯；黄烷酮，3，4’-二羟基-，二乙酸酯；黄烷酮，3’，4’-二羟基-，二乙酸酯；黄烷酮，3，7-二羟基-，二乙酸酯；4H-1-苯并吡喃-4-酮，3，7-双(乙酰氧基)-2-(3，4-二羟基苯基)-2，3-二氢-，(2R-反式)-；黄酮，3，3’-二羟基-，二乙酸酯；黄酮，4’，7-二羟基-，二乙酸酯；黄酮，3，7-二羟基-，二乙酸酯；黄酮，3，3’，7-三羟基-，三乙酸酯；黄酮，3，3’，4’-三羟基-，三乙酸酯；4H-1-苯并吡喃-4-酮，7-(乙酰氧基)-2-[3，4-双(乙酰氧基)苯基]-；黄酮，3，4’，7-三羟基-，三乙酸酯；黄烷酮，3’，4’，7-三羟基-，三乙酸酯；4H-1-苯并吡喃-4-酮，7-(乙酰氧基)-2-[3，4-双(乙酰氧基)苯基]-2，3-二氢-，(S)-；黄烷酮，3，4’，7-三羟基-，三乙酸酯；黄烷酮，3，4’，7-三羟基，三乙酸酯，反式-(t)-；4H-1-苯并吡喃-4-酮，3，7-双(乙酰氧基)-2-[3，4-双(乙酰氧基)苯基]-；黄颜木素，四乙酸酯；4H-1-苯并吡喃-4-酮，3，7-双(乙酰氧基)-2-[3，4-双(乙酰氧基)苯基]-2，3-二氢-，(2R-反式)-；4H-1-苯并吡喃-4-酮，3，7-双(乙酰氧基)-2-[3，4-双(乙酰氧基)苯基]-2，3-二氢-，反式-；黄烷酮，3，3’，4’，7-四羟基-，四乙酸酯；4H-1-苯并吡喃-4-酮，3-(1-氧代丙氧基)-2-苯基-；丙酸，2-甲基-，4-氧代-2-苯基-4H-1-苯并吡喃-3-基酯；丙酸，2，2-二甲基-，4-氧代-2-苯基-4H-1-苯并吡喃-3-基酯；苯乙酸，4-氧代-2-苯基-4H-1-苯并吡喃-3-基酯；苯丙酸，4-氧代-2-苯基-4H-1-苯并吡喃-3-基酯；苯乙酸，a-苯基-，4-氧代-2-苯基-4H-1-苯并吡喃-3基酯；硫代磷酸，o-[4-[3-[(二乙氧基硫膦基)氧基]-4-氧代-4H-1-苯并吡喃-2-基]苯基]o，o-二乙酯；硫代磷酸，o-[3-[3-[(二乙氧基硫膦基)氧基]-4-氧代-4H-1-苯并吡喃-2-基]苯基]o，o-二乙酯；磷酸，二乙基4-(4-氧代-4H-1-苯并吡喃-2-基)苯基酯；4H-1-苯并吡喃-4-酮，2-苯基-3-(膦酰氧基)-；黄酮，3-羟基-，磷酸二氢二铵盐；4H-1-苯并吡喃-4-酮，2-苯基-3-(膦酰氧基)-，镁盐(1∶1)，五水合物；4H-1-苯并吡喃-4-酮，2-[3-羟基-4-(膦酰氧基)苯基]-；3’，4’-二羟基黄酮-4′-磷酸盐/酯、3’，4’-二羟基黄酮-4’-β-D-吡喃葡萄糖苷钠盐；3’，4’-二羟基黄酮-4’-β-D-呋喃核糖苷钠盐。

41.根据权利要求40的化合物，其中E选自酯、羧酸、磺酸、膦酸、磷酸酯、氨基磺酸酯/盐、磺酸酯、氨基磷酸酯/盐、膦酸酯、磺酸酯/盐、两性离子物质、氨基酸、氨基膦酸酯/盐、非环型胺、环型胺、季铵阳离子、聚乙二醇、寡糖或树枝状聚合物。

42.根据权利要求40或权利要求41的化合物，其中E选自酯、羧酸、磺酸、膦酸、磷酸酯、聚乙二醇、寡糖或树枝状聚合物。

43.根据权利要求40至42中任何一项的化合物，其中E选自酯、羧酸或磷酸酯。

44.根据权利要求40至43中任何一项的化合物，其中E是根据式(Ib)的基团：

其中

W是O、NH、S、O-、NH^-或S^-；和

X是H、单价或二价阳离子盐、或铵阳离子盐。

45.根据权利要求44的化合物，其中W是O。

46.根据权利要求44或权利要求45的化合物，其中X是H。

47.根据权利要求40至44中任何一项的化合物，其中E是根据式(Ic)的酯：

其中

W是O、NH、S、O^-、NH^-或S^-；和

48.根据权利要求47的化合物，其中Q是取代的或未取代的低级亚烷基。

49.根据权利要求47或权利要求48的化合物，其中W是O。

50.根据权利要求39至44中任何一项的化合物，其中E是根据式(Id)的磷酸酯：

其中

Y是O、NH、S、O^-、NH^-、或S^-；

Z是O或S；和

R⁶和R⁷独立地选自H、取代的或未取代的烷基、单价或二价阳离子盐、或铵阳离子盐。

51.根据权利要求50的化合物，其中Y和Z是O。

52.根据权利要求40至51中任何一项的化合物，其中R¹、R²、R³、R⁴和R⁵的至少一个是根据式(Ie)的磷酸酯：

其中R⁶和R⁷独立地选自H、单价或二价阳离子盐、或铵阳离子盐。

53.根据权利要求40至52中任何一项的化合物，其中存在L，并且L选自-CO-、酯、酚、膦酸酯、氨基甲酸酯/盐、碳酸酯/盐或Mannich碱。

54.根据权利要求40至53中任何一项的化合物，其中L是-CO-。

55.根据权利要求40至54中任何一项的化合物，其中存在D，并且D选自取代的或未取代的亚烷基、亚烯基、亚炔基，任选地被一个或多个杂原子、芳基、杂芳基、环烷基或杂环烷基中断。

56.根据权利要求55的化合物，其中D是取代的或未取代的亚烷基，任选地被一个或多个杂原子中断。

57.根据通式(II)的化合物：

其中

代表单键或双键；和

R¹、R²和R³如权利要求40至56中任何一项所定义的。

58.根据通式(III)的化合物：

其中R³如权利要求40至56中任何一项所定义的。

59.根据通式(IV)的化合物：

其中

X是H、单价或二价阳离子盐、或铵阳离子盐。

60.权利要求59的化合物，其中Q是取代的或未取代的低级亚烷基，任选地被一个或多个杂原子中断。

61.根据通式(V)的化合物：

其中R³和R⁵如权利要求40至56中任何一项所定义的。

62.选自以下的组的化合物：3-(苄氧基羰基丁基羰基氧基)黄酮、3-半己二酸3-羟基黄酮酯、4’-(苄氧基)-3-(苄氧基羰基丁基羰基氧基)黄酮、3-半己二酸4’-羟基黄酮酯、3’，4’-二苄氧基-3-(苄氧基羰基丁基羰基氧基)黄酮、3-半己二酸3’，4’-二羟基黄酮酯、3，4’-二-(苄氧基羰基丁基羰基氧基)黄酮、3，4’-双半己二酸黄酮酯、3，7-二-(苄氧基羰基丁基羰基氧基)黄酮、3，7-双半己二酸3，7-二羟基黄酮酯、4’-羟基-3-羟基黄酮-3-季铵酯、4’-(苄氧基)-3-(二苄氧基磷酰基氧基)黄酮或3-羟基黄酮-3-磷酸二钠盐。

63.一种合成根据权利要求1至22中任何一项的化合物的方法。

64.一种营养品组合物，其包含营养学上可接受的载体或稀释剂和至少一种通式I的化合物：

其中：

代表单键或双键；和

R¹、R²、R³、R⁴、R⁵独立地选自H、OH或根据式(Ia)的基团：

-O-L-D-E (Ia)

其中

O是氧；

D是链长等于约1至20个碳原子的间隔基团，或不存在；和

E是增溶基团；

条件是R¹、R²、R³、R⁴、R⁵的至少一个不是H或OH。