BRPI0608402B1 - compostos de flavonóide e composições compreendendo os mesmos - Google Patents

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Gregory James Dusting
Owen Llewellyn Woodman
Bevyn Jarrott
Clive Newton May
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Howard Florey Institute
Armaron Bio Pty Ltd.
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Abstract

COMPOSTOS DE FLAVONÓIDE E USOS DOS MESMOS. Novos compostos de flavonóide tendo atividade anti- oxidante são descritos. Foi mostrado que os compostos e composições exibem propriedades anti-oxidantes e são particularmente úteis no tratamento de isquemia e lesões por reperfusão. A invenção também descreve um método para sintetizar quimicamente tais compostos de flavonóide e testar sua eficácia. Tais compostos e derivados e/ou sais farmaceuticamente aceitáveis correspondentes têm usos nas áreas farmacêuticas, nutracêuticas e aplicações veterinárias.

Description

REFERÊNCIA REMISSIVA A PEDIDOS RELACIONADOS
O presente pedido reivindica prioridade do Pedido de Patente Provisório Australiano No. 2005901214 depositado em 11 de Março de 2005, o conteúdo do qual é incorporado aqui por referência.
CAMPO DA INVENÇÃO
A presente invenção se refere a novos compostos, composições contendo esses compostos, métodos para sua sintese e usos desses compostos. Em particular, a presente invenção se refere a compostos de flavonóide, métodos de sintese de compostos de flavonóide, composições contendo os compostos de flavonóide e métodos de seu uso.
ANTECENDENTES DA INVENÇÃO
A pronta reperfusão de tecido isquêmico é critica para restauração de função normal. Contudo, esse retorno de fluxo sangüineo pode, paradoxicamente, produzir uma destruição progressiva de células reversivelmente danificadas, desse modo levando à disfunção tecidual e enfarte. Essa "lesão por reperfusão" tem causas multifatoriais de doença, mas parece estar fortemente associada a uma resposta inflamatória; com o retorno do fluxo sangüineo, vários processos inflamatórios podem ocorrer para potencializar a lesão isquêmica, incluindo adesão e infiltração de leucócitos e a liberação de espécies oxidativas (ROS), tais como espécies de radical livre de oxigênio e peróxidos, por exemplo, H2O2.
Muito dessa resposta inflamatória parece ser mediada pelas interleucinas (ILs), uma subclasse multifuncional de citocinas. Leucócitos (células sangüíneas brancas) também parecem exercer um papel critico em lesão por reperfusão. Além de lesão ao endotélio e neurônios, leucócitos podem obstruir a microcirculação diretamente. Essa obstrução de capilares de leucócitos também pode ser o principal mecanismo do "fenômeno de não-refluxo". Assim, áreas de parênquima que ainda são viáveis quando o fluxo sangüineo retorna não são reperfundidas adequadamente e, por fim, morrem. Isquemia do miocárdio em particular causa obstrução capilar extensa.
Isquemia, e particularmente reperfusão, tendem a promover uma liberação aumentada de ROS's de leucócitos, o que leva a dano tecidual adicional. Um dos principais tipos de dano de radicais livre é ânions de superóxido os quais atuam para prejudicar a função endotelial e a atividade de óxido nitrico (NO). Isso piora adicionalmente o processo de obstrução capilar porque foi mostrado que o NO inibe a agregação plaquetária e impede a aderência de leucócitos ao endotélio.
O grau de recuperação tecidual obtido após isquemia e reperfusão depende da natureza do tecido e da gravidade do dano.
Isquemia pode ser causada por uma variedade de condições. Por exemplo, incidentes agudos, tais como derrame, enfarte do miocárdio ou trauma mecânico, e condições crônicas, tais como aterosclerose, doença vascular periférica e diabetes, podem causar isquemia. Hipertensão é outro tipo de distúrbio que pode levar à isquemia.
Após um incidente agudo, tal como um ataque cardíaco causado por uma artéria coronária bloqueada, vários fármacos são distribuídos intravenosamente à vitima de ataque cardiaco para auxiliar na remoção de qualquer obstrução do vaso sangüineo, assim, re-estabelecendo o fluxo sangüineo que leva à reperfusão de tecidos. Contudo, esse tipo de tratamento não é dirigido à prevenção ou alivio de dano tecidual associado à reperfusão. Criação de um ambiente para que reperfusão ocorra e re-estabeleça o suprimento de oxigênio ao tecido pode levar a dano tecidual aumentado através de aumento da produção de radical livre.
A esse respeito, os tratamentos convencionais para indivíduos que exibem isquemia ou em risco de isquemia são inadequados.
Foi sugerido que várias substâncias melhoram a saúde e função vascular e que, em populações com uma dieta rica em frutas e vegetais, há uma menor incidência de doença arterial coronariana. Esse efeito foi relacionado aos efeitos benéficos dos flavonóides, os quais são compostos polifenólicos que são encontrados em frutas e vegetais.
Flavonóides são um grupo muito grande e difundido de compostos derivados de planta os quais acredita-se que exibam uma série de efeitos biológicos, incluindo redução dos niveis de lipoproteinas de baixa densidade no plasma, inibição da agregação plaquetária, remoção de radicais livres e redução da proliferação celular, bem como modulação do tônus vascular.
Um grande número de flavonóides foi identificado e diferem uns dos outros quanto à orientação da hidroxilação ou metilação, a posição do substituinte benzenóide, o grau de insaturação e os tipos de substituintes presos. A estrutura com três anéis geral (anéis A, B e C) de muitos flavonóides é baseada na estrutura da 2-fenil-4H-l-benzopiran-4-ona.
Figure img0001
Estrutura básica do flavonóide
Por exemplo, o flavonóide sintético, 3' , 4'-dihidróxi flavonol (DiOHF), tem um grupo hidroxila nas posições 3,3' e 4' e foi demonstrado que reduz o enfarte e lesão associados à isquemia do miocárdio e reperfusão durante estudos in vitro (Shen Wang, Gregory Dusting, Clive May e Owen Woodman, British Journal of Pharmacology (2004) 142, 443-452).
Contudo, a farmacocinética de muitos flavonóides tem limitado grandemente sua utilidade terapêutica. Flavonóides sintéticos tendem a ser moléculas altamente solúveis em lipídios e, portanto, tendem a ter pobre solubilidade em água, levando a uma dificuldade na administração como um agente terapêutico. Essas características limitam sua aplicabilidade em terapias onde administração parenteral aguda é desejável, por exemplo, em terapias de vasodilatação.
Dado os problemas acima identificados, permanece uma necessidade pelo desenvolvimento de derivados sintéticos de flavonóide com solubilidade aquosa e farmacocinética aperfeiçoada quando comparado com flavonóides conhecidos.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
De acordo com um primeiro aspecto, a presente invenção
proporciona uma composição farmacêutica e/ou veterinária compreendendo um veiculo ou diluente farmacêutica e/ou veterinariamente aceitável junto com pelo menos um composto
Figure img0002
da Fórmula geral I: na qual: ---- denota uma ligação simples ou dupla; e R1, R2, R3, R4, R5 são, independentemente, selecionados de H, OH ou um grupo de acordo com a Fórmula (Ia):
Figure img0003
(Ia) na qual: 0 é oxigênio;
L é um grupo ligante o qual é covalentemente ligado ao oxigênio e D, se presente, ou é covalentemente ligado ao oxigênio e E, ou está ausente;
D é um grupo espaçador tendo um comprimento de cadeia equivalente a cerca de 1 a 20 átomos de carbono, ou está ausente; e
E é um grupo de solubilização; contanto que pelo menos um de R1, R2, R3, R4, R5 seja outro que não H ou OH.
De preferência, E é selecionado de um éster, um ácido carboxilico, ácido sulfônico, ácido fosfônico, éster de fosfato, sulfamato, éster sulfônico, fosfamato, éster de fosfonato, sulfonato, espécie zwiteriônica, aminoácido, amino fosfonato, amina aciclica, amina ciclica, cátion de amónio quaternário, polietileno glicol, oligossacarídeo ou dendrimero.
Em uma modalidade preferida, E é um selecionado de um éster, ácido carboxilico, ácido sulfônico, ácido fosfônico, éster de fosfato, polietileno glicol, oligossacarídeo ou dendrimero.
De preferência, E é selecionado de um éster, ácido carboxilico ou éster de fosfato.
Em uma modalidade preferida em particular, E é um grupo de acordo com a Fórmula (lb):
Figure img0004
em que: W é 0, NH, S, 0-, NH" ou S"; e X é H, um sal catiônico mono- ou divalente ou um sal catiônico de amónio.
De preferência, W é 0 e/ou X é H.
Em outra modalidade, E é um éster de acordo com a Fórmula (Ic):
Figure img0005
em que: Q é um alquileno, alquenileno, alquinileno substituído ou não substituído, opcionalmente interrompido por um ou mais heteroátomo(s); W é 0, NH, S, O’, NH’, ou S'; e X é H, alquila, alquilbenzila substituída ou não substituída, um sal catiônico mono- ou divalente, ou um sal catiônico de amónio.
De preferência, Q é um alquileno inferior substituído ou não substituído.
Em outra modalidade, E é um éster de fosfato de acordo com a Fórmula (Id):
Figure img0006
R6 e R7 são, independentemente, selecionados de H, alquila substituída ou não substituída, um sal catiônico mono- ou divalente, ou um sal catiônico de amónio. De preferência, Y e Z são 0.
Em outra modalidade, pelo menos um de R1, R2, R2, R4 E R5 é éster de fosfato de acordo com a Fórmula (le):
Figure img0007
em que R6 e R7 são, independentemente, selecionados de H, um sal catiônico mono- ou divalente, ou um sal catiônico de amónio.
Em uma modalidade, L está presente e selecionado de - CO-, éster, fenol, éster de fosfonato, carbamato, carbonato ou uma base de Mannich. Em uma modalidade mais preferida, L é -C 0 -.
Em outra modalidade, D está presente e selecionado de alquileno, alquenileno, alquinileno substituído ou não substituído, opcionalmente interrompido por um ou mais heteroátomo(s), arila, heteroarila, cicloalquila ou heterocicloalquila.
Em uma modalidade preferida, D é um alquileno substituído ou não substituído, opcionalmente interrompido por um ou mais heteroátomo(s). De preferência, um alquileno inferior.
Em outro aspecto, a presente invenção proporciona uma composição farmacêutica e/ou veterinária compreendendo um veiculo ou diluente farmacêutica e/ou veterinariamente aceitável junto com pelo menos um composto da Fórmula geral II:
Figure img0008
em que: ---- denota uma ligação simples ou dupla; e R1, R2 e R3 são conforme especificado acima.
Em ainda outro aspecto, a presente invenção proporciona uma composição farmacêutica e/ou veterinária compreendendo um veiculo ou diluente farmacêutica e/ou veterinariamente aceitável junto com pelo menos um composto da Fórmula geral III:
Figure img0009
em que R3 é especificado acima.
Em ainda outro aspecto, a presente invenção proporciona uma composição farmacêutica e/ou veterinária compreendendo um veiculo ou diluente farmacêutica e/ou veterinariamente aceitável junto com pelo menos um composto da Fórmula geral IV:
Figure img0010
em que: Q é alquileno substituído ou não substituído, opcionalmente interrompido por um ou mais heteroátomo(s) X é H, um sal catiônico mono- ou divalente, ou um sal catiônico de amónio.
De preferência Q é alquileno inferior substituído ou não substituído, opcionalmente interrompido por um ou mais heteroátomo(s).
Em outro aspecto, a presente invenção proporciona a composto selecionado do grupo 3-(Benzilóxicarbonilbutil carbonilóxi)flavona; 3-Hidróxiflavona 3-hemiadipato; 4'- (Benzilóxi)-3-(benzilóxicarbonilbutilcarbonilóxi)flavona; 4'-Hidróxiflavona 3-hemiadipato; 3’,4’-Dibenzilóxi-3- (benzilóxicarbonilbutilcarbonilóxi)flavona; 3',4'- Dihidróxiflavona 3-hemiadipato; 3,4’-Di-(benzilóxicarbonil butilcarbonilóxi)flavona; Flavona 3,4’-bis(hemiadipato); 3,7-Di-(benzilóxicarbonilbutilcarbonilóxi)flavona; 3,7- Dihidróxiflavona 3,7-bis(hemiadipato); 4'-Hidróxi-3- Hidróxiflavona-3-éster de amónio quaternário; 4'- (Benzilóxi)-3-(dibenzilóxifosforilóxi)flavona e sal dissócido de 3-Hidróxiflavona-3-fostato.
Em outro aspecto, a presente invenção proporciona uma composição farmacêutica e/ou veterinária compreendendo um veículo ou diluente farmacêutica e/ou veterinariamente aceitável junto com pelo menos um composto selecionado do grupo compreendendo 3-(Benzilóxicarbonilbutilcarbonilóxi) flavona; 3-Hidróxiflavona 3-hemiadipato; 4’-(Benzilóxi)-3- (benzilóxicarbonilbutilcarbonilóxi)flavona; 4'- Hidróxiflavona 3-hemiadipato; 3',4'-Dibenzilóxi-3- (benzilóxicarbonilbutilcarbonilóxi)flavona; 3',4'- Dihidróxiflavona 3-hemiadipato;3,4'-Di-(benzilóxicarbonil butilcarbonilóxi)flavona; flavona 3,4'-bis(hemiadipato); 3,7-Di-(benzilóxicarbonilbutilcarbonilóxi)flavona; 3- (Dibenzilóxifosforilóxi)flavona; 3,7-Dihidróxiflavona 3,7- bis(hemiadipato); 4'-Hidróxi-3-Hidróxiflavona-3-éster de amónio quaternário; Flavona-3-fostato sal dissócido de; 4'- (Benzilóxi)-3-(dibenzilóxifosforilóxi)flavona ou sal dissódico de 3-Hidróxiflavona-3-fostato.
Em ainda um outro aspecto, a presente invenção proporciona um método de prevenção de e/ou tratamento de uma doença(s) em um indivíduo associada à presença de espécies oxidativas reativas (ROS), o método compreendendo: administração de uma quantidade eficaz de pelo menos um composto especificado acima.
De preferência, o indivíduo que precisa de tal tratamento está em risco de desenvolver isquemia. Mais preferivelmente, o indivíduo está sofrendo de isquemia e/ou lesão por reperfusão como um resultado de uma condição aguda ou crônica.
Em uma modalidade particular, a condição crônica é selecionada de câncer, doença cérebrovascular, doença vascular pulmonar, aterosclerose, doença da artéria, doença cardíaca congestiva, doença coronariana, doença vascular periférica, diabetes, hipertensão, enxaqueca, queimaduras, doença pulmonar obstrutiva crônica e doenças vascular retinal.
Em outra modalidade, a condição aguda é selecionada de derrame, enfarte do miocárdio, trauma mecânico resultante de ferimento por esmagamento ou cirurgia. De preferência, a cirurgia é cirurgia vascular. Mais preferivelmente, a cirurgia vascular é bypass cardíaco e/ou cirurgia de transplante.
Em uma modalidade particular, o composto é administrado ao indivíduo antes e/ou durante a cirurgia.
Em outro aspecto, a presente invenção proporciona um método de prevenção de, retardo do inicio de e/ou diminuição da progressão de aterosclerose e/ou doença cardiaca coronariana em um indivíduo compreendendo: administração de uma quantidade eficaz de pelo menos um composto especificado acima.
Em ainda um outro aspecto, a presente invenção proporciona um método terapêutico e/ou profilático de prevenção de e/ou tratamento de uma doença(s) em um indivíduo associada à presença de espécies oxidativas reativas (ROS), o método compreendendo: administração de uma quantidade eficaz de pelo menos um composto especificado acima.
Em ainda um outro aspecto, a presente invenção proporciona um método de prevenção de e/ou pelo menos alivio do dano a um indivíduo causado por isquemia e/ou lesão por reperfusão, o método compreendendo: administração de uma quantidade eficaz de pelo menos um composto especificado acima.
Em ainda um outro aspecto, a presente invenção proporciona um método de prevenção de e/ou pelo menos alivio de dano a um indivíduo causado pela administração de um agente terapêutico, o método compreendendo co- administração, a um indivíduo, de: i) um agente terapêutico; e ii) administração de uma quantidade eficaz de pelo menos um composto especificado acima.
De preferência, o agente terapêutico é um agente terapêutico oxidativo.
Em uma modalidade particular, o agente terapêutico é um agente anti-câncer. De preferência, o agente anti- câncer é antraciclina e seus derivados.
Em modalidades em particular, o composto é administrado oralmente, topicamente, subcutaneamente, parenteralmente, intramuscularmente, intra-arterialmente e/ou intravenosamente.
Em outro aspecto, a presente invenção proporciona o uso de um composto conforme especificado acima para o preparo de um medicamento.
Em ainda outro aspecto, a presente invenção proporciona um composto da Fórmula geral I:
Figure img0011
em que: ---- denota uma ligação simples ou dupla; e R1, R2, R3, R4, R5 são, independentemente, selecionados de H, OH ou um grupo de acordo com a Fórmula (Ia):
Figure img0012
em que: 0 é oxigênio; L é um grupo ligante o qual é covalentemente ligado ao oxigênio e D, se presente, ou é covalentemente ligado ao oxigênio e E, ou está ausente;
D é um grupo espaçador tendo um comprimento de cadeia equivalente a cerca de 1 a 20 átomos de carbono, ou está ausente; e
E é um grupo de solubilização; contanto que pelo menos um de R1, R2, R3, R4, R5 seja outro que não H ou OH, contanto que o composto não seja flavona, 3'-hidróxi-, acetato; Flavona, 4'-hidróxi-, acetato; Flavona, 3-hidróxi- , acetato; (±)-41-Acetóxiflavanona; Flavanona, 3, 4',7- trihidróxi-, 3-acetato; 4H-l-Benzopiran-4-ona, 3,7- bis(acetilóxi)-2,3-dihidro-2-fenil-, (2R-trans)-; 4H-1- Benzopiran-4-ona, 7-(acetilóxi)-2-[4-(acetilóxi)fenil]-2,3- dihidro-, (±); (+)-4',7-Diacetóxiflavanona; (2S,3S)-3,7- Dihidróxiflavanona diacetato; Flavanona, 3,4'-dihidróxi-, diacetato; Flavanona, 3',4'-dihidróxi-, diacetato;
Flavanona, 3,7-dihidróxi-, diacetato; 4H-l-Benzopiran-4- ona, 3,7-bis(acetilóxi)-2-(3,4-dihidróxifenil)-2,3-dihidro- , (2R-trans)-; Flavona, 3,3'-dihidróxi-, diacetato; Flavona, 4',7-dihidróxi-, diacetato; Flavona, 3,7- dihidróxi-, diacetato; Flavona, 3,3',7-trihidróxi-, triacetatos; Flavona, 3,3',4'-trihidróxi-, triacetato; 4H- l-Benzopiran-4-ona, 7-(acetilóxi)-2-[3,4-bis(acetilóxi) fenil]-; Flavona, 3,4',7-trihidróxi-, triacetato; Flavanona, 3',4',7-trihidróxi-, triacetato; 4H-1- Benzopiran-4-ona, 7-(acetilóxi)-2-[3,4-bis(acetilóxi)fenil] -2,3-dihidro-, (S)-; Flavanona, 3,4',7-trihidróxi-, triacetato; Flavanona, 3,4',7-trihidróxi , triacetato, trans-(t)-; 4H-l-Benzopiran-4-ona, 3,7-bis(acetilóxi)-2- [ 3,4-bis(acetilóxi)fenil]-; Fustina, tetraacetato; 4H-1- Benzopiran-4-ona, 3,7-bis(acetilóxi)-2-[3,4-bis(acetilóxi) fenil]-2,3-dihidro-, (2R-trans)-; 4H-l-Benzopiran-4-ona, 3,7-bis(acetilóxi)-2-[3,4-bis(acetilóxi)fenil]-2,3-dihidro- , trans-; Flavanona, 3,3',4',7-tetrahidróxi-, tetraacetate; 4H-l-Benzopiran-4-ona, 3-(1-oxopropóxi)-2-fenil-; Ácido propanóico, 2-metil-, 4-oxo-2-fenil-4H-l-benzopiran-3-il éster; Ácido propanóico, 2,2-dimetil-, 4-oxo-2-fenil-4H-l- benzopiran-3-il éster; Ácido benzenoacético, 4-oxo-2-fenil- 4H-l-benzopiran-3-il éster; Ácido benzenopropanóico, 4-oxo- 2-fenil-4H-l-benzopiran-3-il éster; Ácido benzenoacético, a-fenil-, 4-oxo-2-fenil-4H-l-benzopiran-3 il éster; Ácido fosforotióico, o-[4-[3-[(dietóxifosfinotioil)óxi]-4-oxo-4H- l-benzopiran-2-il]fenil ] o,o-dietil éster; Ácido fosforotióico, o-[3-[3-[(dietóxifosfinotioil)óxi]-4-oxo-4H- l-benzopiran-2-il]fenil] o,o-dietil éster; Ácido fosfórico, dietil 4-(4-oxo-4H-l-benzopiran-2-il)fenil éster; 4H-1- Benzopiran-4-ona, 2-fenil-3-(fosfonoóxi)-; Flavona, 3- hidróxi-, sal de diamônio de dihidrogen fosfato; 4H-1- Benzopiran-4-ona, 2-fenil-3-(fosfonoóxi)-, sal de magnésio (1:1), pentahidrato; 4H-l-Benzopiran-4-ona, 2-[3-hidróxi-4- (fosfonoóxi)fenil]-; 3',4'-dihidróxiflavona-4'-fosfato; 3', 4'-dihidróxiflavona-4'-β-D-glicopiranosideo, sal de sódio; 3', 4'-dihidróxiflavona-4'-β-D-ribofluranosideo, sal de sódio; e sais ou solvatos farmacêutica e/ou veterinariamente aceitáveis dos mesmos.
De preferência, R1, R-, R3, R4 e R5 são conforme especificado acima.
Em outro aspecto, a presente invenção proporciona um composto de acordo com a Fórmula geral (II):
Figure img0013
em que: ---- denota uma ligação simples ou dupla; e R1, R2 e R3 são conforme especificado acima.
Em ainda outro aspecto, a presente invenção proporciona um composto de acordo com a Fórmula geral (III):
Figure img0014
em que R3 e R5 são especificado acima.
Em ainda um outro aspecto, a presente invenção proporciona um composto de acordo com a Fórmula geral (IV):
Figure img0015
Q é alquileno substituído ou não substituído, opcionalmente interrompido por um ou mais heteroátomo(s) X é H, um sal catiônico mono- ou divalente, ou um sal catiônico de amônio.
De preferência, Q é alquileno inferior substituído ou não substituído, opcionalmente interrompido por um ou mais heteroátomo(s)
Em outro aspecto, a presente invenção proporciona um composto de acordo com a Fórmula geral V:
Figure img0016
Em outro aspecto, a presente invenção proporciona um método para a sintese de compostos conforme especificado acima.
De acordo com ainda outro aspecto, a presente invenção proporciona compostos de Fórmula geral:
Figure img0017
---- denota uma ligação simples ou dupla; e R1, R2, R3, R4, R5 os quais são, independentemente, selecionados de H, OH, alcóxi, arilóxi, ésteres, carbonato ésteres, éteres, éster de fosfatos e a-acilóxialquil éteres substituídos ou não substituídos, contanto que pelo menos um de R1, R2, R3, R4, R5 seja outro que não H ou OH; e sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.
De preferência, pelo menos R3 é selecionado de ésteres, carbonato ésteres, éteres, éster de fosfatos e a- acilóxialquil éteres substituídos ou não substituídos.
De preferência, pelo menos um de R1, R2, R3, R4 ou R5 é selecionado de: i) fosfato tendo a Fórmula geral:
Figure img0018
em que Y é 0, NH, S, 0“, NH~, ou S“; Z é 0 ou S; e cada um de R6 e R7 são, independentemente, selecionados de alquila substituída ou não substituída, H, um sal catiônico mono- ou divalente, ou um sal catiônico de amónio; ii) éster tendo a Fórmula geral:
Figure img0019
onde R8 é uma alquila inferior substituída ou não substituída, alquilalcóxi inferior; iii) éster tendo a Fórmula geral:
Figure img0020
onde Q é um alquileno inferior substituído ou não substituído, alquenila e alquinila inferior; W é 0, NH, S, 0“, NH“, ou S“; e X é H, alquila, alquilbenzila substituída ou não substituída, um sal catiônico mono- ou divalente, ou um sal catiônico de amónio, e sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.
Em modalidades em particular da invenção, Y e Z são ambos 0.
Em uma modalidade, a presente invenção proporciona compostos de Fórmula geral:
Figure img0021
na qual: Ò ---- denota uma ligação simples ou dupla; e R1, R2 ou R3 os quais são, independentemente, selecionados de H, OH, alcóxi, arilóxi, ésteres, carbonato ésteres, éteres, éster de fosfatos e a-acilóxialquil éteres substituídos ou não substituídos, contanto que pelo menos um de R1, R2 ou R3 seja outro que não H ou OH; e sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos. De preferência, pelo menos um de R1, R2 ou R3 é selecionado de: i) fosfato tendo a Fórmula geral:
Figure img0022
em que Y é 0, NH, S, Cr, NH- ou S~; Z é 0 ou S; e cada um de R6 e R7 são, independentemente, selecionados de alquila substituída ou não substituída, H, um sal catiônico mono- ou divalente ou um sal catiônico de amónio; ii) éster tendo a Fórmula geral:
Figure img0023
onde R8 é uma alquila inferior substituída ou não substituída, alquilalcóxi inferior; iii) éster tendo a Fórmula geral:
Figure img0024
onde Q é um alquileno inferior substituído ou não substituído, alquenileno inferior, alquinileno, opcionalmente interrompido por um ou mais heteroátomo(s); W é 0, NH, S, 0", NH’ ou S’; e X é H, alquila, alquilbenzila substituída ou não substituída, um sal catiônico mono- ou divalente ou um sal catiônico de amónio; e sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.
De preferência: R1 é H ou OH; R2 é H ou OH; e RJ é selecionado de:
Figure img0025
Em outra modalidade, a presente invenção proporciona um composto de Fórmula geral: na qual: R9 é alcóxi, arilóxi, éster, carbonato éster, éter substituído ou não substituído ou um grupo de acordo com a Fórmula
Figure img0026
onde U é alquileno substituído não substituído, opcionalmente interrompido por um ou mais heteroátomo(s).
Em outra modalidade, a presente invenção proporciona
Figure img0027
um composto de Fórmula geral:
Figure img0028
onde n é um número inteiro de 2 a 6
As fórmulas fornecidas aqui se destinam a se estender a todos os possíveis isômeros geométricos e ópticos, bem como misturas racêmicas dos mesmos.
Em outro aspecto, a presente invenção proporciona métodos para a sintese de compostos de acordo com a Fórmula I, Fórmula II, Fórmula III ou Fórmula IV, em que R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R8, U, Q, W, X, Y, Z, n têm o mesmo significado conforme acima ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável dos mesmos.
Em outro aspecto, a presente invenção proporciona uma composição farmacêutica e/ou veterinária compreendendo um veiculo ou diluente farmacêutica e/ou veterinariamente aceitável junto com pelo menos um composto de acordo com a Fórmula I, Fórmula II, Fórmula III ou Fórmula IV, em que R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R8, U, Q, W, X, Y, Z, n têm o mesmo significado conforme acima ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável dos mesmos.
De acordo com outro aspecto da presente invenção, é proporcionado um método de prevenção de e/ou pelo menos alivio de dano a um indivíduo causado pela administração de um agente terapêutico, o método compreendendo co- administração, a um indivíduo, de: i) um agente terapêutico; e ii) uma quantidade eficaz de pelo menos um composto de acordo com Fórmula I, Fórmula II, Fórmula III, Fórmula IV ou Fórmula V, em que R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R8, U, Q, W, X, Y, Z, n têm o mesmo significado conforme acima ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável dos mesmos.
Em ainda um outro aspecto, a presente invenção proporciona um método de prevenção de e/ou tratamento de uma doença(s) associada(s) à presença de espécies oxidativas reativas (ROS), o método compreendendo administração de uma quantidade eficaz de pelo menos um composto de acordo com Fórmula I, Fórmula II, Fórmula III , Fórmula IV ou Fórmula V, em que R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R8, U, Q, W, X, Y, Z, n têm o mesmo significado conforme acima ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável dos mesmos.
Em ainda uma outra modalidade, a presente invenção proporciona um método de prevenção de e/ou tratamento de uma doença(s) associada(s) à presença de espécies oxidativas reativas (ROS), o método compreendendo administração de uma quantidade eficaz de pelo menos um composto de acordo com Fórmula I, Fórmula II, Fórmula III ou Fórmula IV, em que R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R8, U, Q, W, X, Y, Z, n têm o mesmo significado conforme acima ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável dos mesmos.
Tipicamente, o indivíduo que precisa de tal tratamento será uma pessoa em risco de desenvolver isquemia. Alternativamente, o indivíduo pode ser uma pessoa que está sofrendo atualmente de isquemia e/ou reperfusão como um resultado de uma condição aguda ou crônica.
Em ainda um outro aspecto, a presente invenção proporciona um método de prevenção de e/ou pelo menos alivio do dano a um indivíduo causado por isquemia e/ou reperfusão, o método compreendendo administração de uma quantidade eficaz de pelo menos um composto uma quantidade eficaz de pelo menos um composto de acordo com Fórmula I, Fórmula II, Fórmula III ou Fórmula IV, em que R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R8, U, Q, W, X, Y, Z, n têm o mesmo significado conforme acima ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável dos mesmos.
De preferência, o grupo de solubilização torna o composto pelo menos parcialmente solúvel e, mais preferivelmente, totalmente solúvel em solução aquosa, de preferência, água.
De preferência, o compostos da invenção têm pelo menos um substituinte de clivagem enzimática in vivo.
De preferência, o substituinte de clivagem enzimática in vivo é um grupo ionizável em pH fisiológico.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
A Figura 1 ilustra o esquema sintético para a sintese de sal dissódico de 3-hidróxiflavona-3-fostato (5).
A Figura 2 ilustra o esquema sintético para a sintese de 3',4'-dihidróxiflavona-3-fosfato (10).
A Figura 3 ilustra o esquema sintético para a sintese de 3-hidróxiflavona-3-hemisuccinato (15) via o monobenzil éster de ácido succinico.
A Figura 4 ilustra o esquema sintético para a sintese de 3-hidróxiflavona-3-hemiadipato (19) via monobenzil éster de ácido adipico.
A Figura 5 ilustra o esquema sintético para a sintese de 3',4'-dihidróxiflavona-3-hemiadipato (21).
A Figura 6 ilustra os efeitos do veiculo (dJAO), Flavona-3-hemiadipato (19) (F3HA), na presença e ausência de butiril colinesterase (BuCHE, 1000 U/L) e DiOHF (10“4 M) sobre o nivel de ânions de superóxido gerados na aorta de rato na presença de NADPH expresso como um percentual do controle.
A Figura 7 ilustra os efeitos do veiculo (dJAO), 3',4'-dihidróxiflavona-3-hemiadipato (21) (DÍOHF3HA, 10-6 M - IO-4 M) na presença e ausência de butiril colinesterase (BuCHE, 1000 U/L) e DiOHF (10-4 M) sobre o nível de ânions de superóxido gerados na aorta de rato na presença de NADPH expresso como um percentual do controle.
A Figura 8 ilustra as curvas de resposta à concentração de Ca2+ na presença de veiculo ou 3',4'- dihidróxiflavona-3-hemiadipato (21) (DÍOHF3HA, 10“4 M), na presença e ausência de BuCHE, comparado com DiOHF em anéis aórticos com endotélio intacto isolados de ratos. As contrações são expressas como um percentual da resposta inicial ao Ca2+ (3xl0“3 M) observada antes de tratamento com DÍOHF3HA.
A Figura 9 ilustra os efeitos do veiculo (dH2O) , Flavona-3-fosf ato (F3P, 10-8 M a 10-4 M) na presença fosfatase (1000 U/L) e DiOHF (10-4 M) sobre o nivel de ânions de superóxido gerados na aorta de rato na presença de NADPH expresso como um percentual do controle.
A Figura 10 ilustra as curvas de resposta à concentração de Ca2+ na presença de veiculo ou flavona-3- fosfato (F3P, IO-8 M a IGF4 M) na presença e ausência de fosfatase (P, 1000 U/L) em anéis aórticos com endotélio intacto isolados de ratos. As contrações são expressas como um percentual da resposta inicial ao Ca2+ (3xl0-3 M) observada antes de tratamento com flavona-3-fosfato.
A Figura 11 ilustra o efeito de relaxamento direto do veiculo, 1000U/L BuCHE, DÍOHF3HA (1Q-4M), DÍOHF3HA (10’4M) mais 1000U/L BuCHE. Veiculo, 1000U/L BuCHE e DÍOHF3HA (10~ 4M) não tiveram efeito sobre os vasos pré-contraidos com PE. D1OHF3HA (10~4M) mais 1000U/L BuCHE tiveram um efeito acentuado sobre o tônus vascular em aorta de rato pré- contraida com PE.
A Figura 12(a) ilustra a diminuição dose-dependente na MAP (mm Hg), indicando vasodilatação em resposta ao D10HF3HA em ratos anestesiados.
A Figura 12(b) ilustra a diminuição dose-dependente no HR (batimentos/min) em resposta ao DÍ0HF3HA.
A Figura 13 ilustra a diminuição na MAP (mm Hg) , indicando vasodilatação em resposta ao ACh em ratos anestesiados, a resposta de dilatação ao ACh foi intensificada através de pré-tratamento de 30 min com 3 mg/kg de DÍOHF3HA. Um aumento na MAP (mm Hg) , indicando vasoconstrição em resposta ao PE em ratos anestesiados, respostas de contração ao PE foram diminuídas através de pré-tratamento de 30 min de 3 mg/kg de DÍOHF3HA.
A Figura 14 ilustra as curvas de resposta à concentração de PE gerada na presença de controle, D1OHF3HA com e sem BuCHE e DiOHF em anéis aórticos de rato. D1OHF3HA na presença de BuCHE e DiOHF pareciam inibir a resposta ao PE em de uma maneira dependente da concentração.
Figure img0029
A Figura 15 ilustra o efeito de fosfatase (1000U/L) e f lavona-3-fosf ato, (F3P) (10~5M-10“4M) com fosfatase sobre as curvas de resposta à concentração de ACh em anéis aórticos com endotélio intacto de ratos (n = 5). A resposta relaxante ao ACh não parece ser afetada pela fosfatase sozinha, contudo, respostas relaxantes ao ACh foram intensificadas na presença de F3P com fosfatase em ambas as concentrações testadas quando comparado com anéis de controle.
Figure img0030
A Figura 16a ilustra as diminuições dose-dependentes na MAP (mm Hg) em resposta ao F3P e DiOHF em ratos anestesiados.
A Figura 16b ilustra a diminuição dose-dependente no HR (batimentos/min) em resposta ao F3P e DiOHF em ratos anestesiados.
A Figura 17 ilustra a área de miocárdio em risco (painel esquerdo) e tamanho de enfarte do miocárdio (painel direito) em grupos tratados com Controle (n = 4), DiOHF (2 mg/kg, n = 2 e 5 mg/kg, n = 3) e DÍ0HF3HA (2,7 mg/kg, n = 3 e 6,6 mg/kg, n = 4) de ovelha anestesiada. AR/LV% = área em risco expressa como um percentual do volume ventricular esquerdo total. IS/AR1 = tamanho do enfarte expresso como um percentual da área de miocárdio em risco. * indica diferença significativa no tamanho do enfarte entre animais tratados com Controle e Adipato (6,6 mg/kg).
A Figura 18 ilustra a latência até toque (A & C) e até remoção (B & D) por um estimulo sobre a pata dianteira contra-lateral comparado com a pata dianteira ipsilateral avaliado 24, 48, e 72 horas após derrame ET-l-induzido e tratamento com veiculo (A & B) ou DÍOHF3HA (15 mg/kg/dia) (C & D) em ratos com derrame brando a moderado.
A Figura 19 ilustra o efeito de administração retardada de DÍ0HF3HA (15 mg/kg/dia) ou veiculo sobre a área de enfarte no córtex (A) e estriato (B) em ratos com derrame brando a moderado.
Definições
Conforme usado aqui, o termo "alquila" inclui cadeias de hidrocarboneto ramificadas ou não ramificadas, tais como metila, etila, n-propila, iso-propila, n-butila, sec- butila, iso-butila, terc-butila, octa-decila e 2- metilpentila. Esses grupos podem ser não substituídos ou substituídos por um ou mais grupos funcionais os quais são comumente presos a tais cadeias, tais como hidroxila, bromo, fluoro, cloro, iodo, mercapto ou tio, ciano, alquiltio, heterociclila, arila, heteroarila, carboxila, carbalcoila, alquila, alquenila, nitro, amino, alcoxila, amido e semelhantes para formar grupos alquila, tais como trifluorometila, 3-hidróxihexila, 2-carbóxipropila, 2- fluoroetila, carbóximetila, cianobutila e semelhantes.
O termo "inferior" aqui inclui uma cadeia linear ou ramificada de 1 to 6 átomos de carbono..
O termo "alquilene" refers to a divalent alquil conforme definido acima, tais como metileno (-CH2-), propileno (-CH2CH2CH2-) , cloroetileno (--CHCICH2-) , 2- tiobuteno -CH2CH (SH) CH2CH2, l-bromo-3-hidroxila-4- metilpentene (-CHBrCH2CH (OH) CH (CH3) CH2-) , metiletileno, trimetileno, 1-propileno, 2-propileno, tetrametileno, 1- metiltrimetileno, 2-metiltrimetileno, 3-metiltrimetileno, 1-etiletileno, 2-etiletileno, pentametileno, 1- metiltetrametileno, 2-metiltetrametileno, 3- metiltetrametileno, 4-metiltetrametileno e hexametileno e semelhantes.
O termo "alquenila" inclui cadeias de hidrocarboneto ramificadas ou não ramificadas contendo uma ou mais ligações duplas carbono-carbono.
O termo "alquinila" inclui cadeias de hidrocarboneto ramificadas ou não ramificadas contendo uma ou mais ligações triplas carbono-carbono.
Por "arila" entenda-se um grupo carbociclico aromático tendo um único anel (por exemplo, fenila), múltiplos anéis (por exemplo, bifenila) ou múltiplos anéis condensados nos quais pelo menos um é aromático (por exemplo, 1,2,3,4- tetrahidronaftila, naftila), o qual é opcionalmente mono-, dl- ou tri-substituido. Os grupos arila aqui são não substituídos ou, conforme especificado, substituídos em uma ou mais posições substituíveis por vários grupos.
Conforme usado aqui, o termo "cicloalquila" se refere a radicais carbociclicos saturados tendo três a doze átomos de carbono. A cicloalquila pode ser um sistema fundido monociclico ou policiclico. Exemplos de tais radicais incluem ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclohexila e cicloheptila. Os grupos cicloalquila aqui são não substituídos ou, conforme especificado, substituídos em uma ou mais posições substituíveis por vários grupos. Por exemplo, tais grupos cicloalquila podem ser opcionalmente substituídos por Ci-Ce alquila, Ci-Cs alcóxi, halogênio, hidróxi, ciano, nitro, amino, mono (Ci-Cg) alquilamino, di(Ci- Ce) alquilamino, Ci-Ce alquenila, Ci-Ce alquinila, Ci-Ce haloalquila, Ci-Ce haloalcóxi, amino (Ci-Ce) alquila, mono(Ci- Ce) alquilamino (CI-CG) alquil ou di (Ci-Ce) alquilamino (Ci- Ce) alquil.
O termo "acila" inclui um grupo -C(O)R, em que R é alquila ou arila conforme definido acima, tais como formila, acetila, propionila ou butirila.
O termo "alcóxi" inclui -0R-, em que R é alquila. 0 termo "radicais alcóxi inferior" pode ser mencionado como grupos alcóxi lineares e ramificados de 1 a 6 átomos de carbono, tais como grupos metóxi, etóxi, propóxi, isopropóxi, butóxi, isobutóxi, sec-butóxi, terc-butóxi, pentilóxi, isopentilóxi, hexilóxi e isohexilóxi.
O termo "amido" inclui uma ligação de amida: -C(O)NR- (em que R é hidrogênio ou alquila).
O termo "amino" indica uma ligação de amina: -NR-, em que R é hidrogênio ou alquila.
O termo "carboxila" indica -C(0)0- e o termo "carbonil" indica -C(0)-.
O termo "carbonato" indica -0C(0)0-.
O termo "sulfonato" indica -S(0)20“.
O termo "éster de fosfonato" indica
O termo "ácido carboxilico" indica -C(O)OH.
O termo 'ácido sulfônico" indica -S(O)2OH.
O termo "ácido fosfônico" indica -P(0)(OH)?
O termo "fosfamato" indica -Ar-NHPOzT.
O termo "éster de fosfato" indica -O-P(o)(0R)2
O termo "sulfamato" indica -Ar-NHSOa-.
O termo "éster sulfônicos" indica -S(O)2-QR
O termo "sulfonato" indica -S(0)20~.
O termo "éster de fosfonato" indica R-p(p)(QR)2
O termo "ácido carboxilico" indica ~C(O)OH
O termo 'ácido sulfônico" indica ~S(O)2OH
O termo "ácido fosfônico" indica -P(0)(0H)2
O termo "fosfamato" indica -Ar-NHPCu-.
O termo "carbamato" indica -NHC(O)O-.
As cadeias de hidrocarboneto podem ser opcionalmente interrompidas por um ou mais heteroátomos.
Quando presente, o grupo ligante pode ser qualquer um de uma série de tais moléculas conhecidas na área descrita aqui .
Conforme é evidente a partir da descrição acima, o grupo espaçador D pode estar ausente. Também é evidente a partir da descrição acima que o grupo ligante pode estar ausente.
DESCRIÇÃO DAS MODALIDADES
A presente invenção proporciona derivados de flavonóide e composições contendo derivados de flavonóide e métodos de uso das mesmas.
Foi mostrado que a presença de espécies oxidativas reativas (ROS) em tecido vivo está associada a muitos distúrbios em animais. Espécies oxidativas reativas podem conter nitrogênio e oxigênio ou apenas átomos de oxigênio. Alguns exemplos de moléculas de ROS incluem O2 simples, H2O2, radicais livres tais como OH’, 02“’, NO’ e ROO’. Muitas dessas espécies são formadas durante atividade metabólica normal, mas seus niveis de concentração podem estar elevados sob condições de estresse oxidativo associadas à inflamação, infecções e outras doenças.
Muitas moléculas de ROS são o resultado de processos que ocorrem naturalmente, tais como processos inflamatórios e do metabolismo de oxigênio. Por exemplo, quando células usam oxigênio para gerar energia, radicais livres são criados como uma conseqüência da produção de ATP pelas mitocôndrias. Exercício pode aumentar os níveis de radicais livres, assim como estímulos ambientais, tais como radiação ionizante (da indústria, exposição ao sol, radicais cósmicos e raios-X médicos), toxinas ambientais, condições atmosféricas alteradas (por exemplo, hipóxia e hiperóxia), ozônio e óxido de nitrogênio (primariamente de escapamento de automóveis, produtos terapêuticos). Estressantes do estilo de vida, tais como fumo de cigarros e consumo excessivo de álcool, também são conhecidos por afetar os níveis de radicais livres. Espécies reativas podem se combinar para formar outras espécies tóxicas ou que causam dano, tais como peróxinitrito ONOO“, um produto da reação de superóxido e radical óxido nítrico.
Outra fonte de espécies ROS é alguns agentes terapêuticos, tais como drogas anti-câncer. Derivados de antraciclina são agentes anti-câncer altamente úteis no tratamento de doenças neoplásicas, tais como leucemia aguda, linfoma maligno, etc. contudo, uma característica indesejável de sua administração pode ser dano oxidativo ao tecido, o qual pode levar à cardiomiopatia e possível insuficiência cardíaca. A presença do agente terapêutico pode, portanto, causar o desenvolvimento de insuficiência cardíaca congestiva (CHF). Essa característica de alguns agentes terapêuticos pode limitar sua eficácia e seria útil para desenvolver um regime de co-administração apropriado.
Assim, em um aspecto da presente invenção, é proporcionado um método de prevenção de e/ou pelo menos alívio de dano a um indivíduo causado pela administração de um agente terapêutico, o método compreendendo co- administração, a um indivíduo, de: i) um agente terapêutico; e ii) uma quantidade eficaz de pelo menos um composto de acordo com Fórmula I, Fórmula II, Fórmula III ou Fórmula IV, em que R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R8, U, Q, W, X, Y, Z, n têm o mesmo significado conforme acima ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável dos mesmos.
Em outro aspecto, a presente invenção proporciona um método de prevenção de e/ou pelo menos alivio de UV dano à pele de um indivíduo, compreendendo administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz da composição da invenção. Com esse aspecto, de preferência, a composição é formulada em um protetor solar. A composição pode ser topicamente aplicada à pele. A composição pode conter emolientes e umidificantes.
Em outro aspecto, a presente invenção proporciona um método de prevenção de e/ou reversão dos efeitos de envelhecimento, de redução de rugas evidentes e/ou tratamento de ou prevenção de pele seca.
Em outro aspecto, a presente invenção proporciona um método de tratamento de um indivíduo tendo uma doença ou distúrbio envolvendo dano oxidativo compreendendo administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz da composição da invenção.
De preferência, a doença ou distúrbio envolvendo dano oxidativo é selecionado do grupo consistindo de câncer, doença cardíaca, distúrbios neurológicos, distúrbios auto- imunes, isquemia-lesão por reperfusão, complicações diabéticas, choque séptico, hepatite, aterosclerose, mal de Alzheimer e complicações originárias de HIV ou Hepatite, incluindo Hepatite B.
Em outro aspecto, a presente invenção proporciona a Em uma modalidade particular, o indivíduo é um animal. 0 animal pode ser selecionado do grupo consistindo de seres humanos, primatas não-humanos, gado, cavalos, porcos, ovelha, cabras, cães, gatos, pássaros, galinhas ou outras aves, patos, ganso, faisões, perus, codornas, porcos-da- india, coelhos, hâmsters, ratos e camundongos.
Em alguns aspectos da invenção, o um ou mais derivados de flavonóide são administrados simultaneamente, separadamente ou seqüencialmente com o um ou mais agente(s) terapêutico(s).
Quando usados em tal combinação, o um ou mais agente (s) terapêutico (s) e o um ou mais derivado (s) de flavonóide de acordo com a presente invenção podem ser administrados como agentes distintos ao mesmo ou em tempos diferentes ou eles podem ser formulados como uma única composição compreendendo ambos os compostos.
Radicais livres reagem com substratos orgânicos chave em células tais como lipidios, proteínas e DNA. A oxidação dessas biomoléculas pode danificar as mesmas, perturbando as funções normais e pode contribuir para uma variedade de estados doentios. Observou-se que determinados sistemas de órgãos são predispostos a maiores niveis de estresse oxidativo ou estresse nitrosativo. Aqueles sistemas de órgão que são mais suscetíveis a dano são o sistema pulmonar (exposto a altos niveis de oxigênio), o cérebro (exibe atividade metabólica intensa, ao mesmo tempo em que tem niveis menores de antioxidantes endógenos), os olhos (constantemente expostos a danos pela luz UV), sistema circulatório (sujeito a niveis flutuantes de oxigênio e óxido nítrico) e sistemas reprodutivos (em risco pela intensa atividade metabólica das células espermais).
Exemplos de distúrbios agudos relevantes que causam a produção de ROS incluem isquemia por reperfusão, derrame, enfarte do miocárdio ou trauma mecânico, tais como um ferimento por esmagamento ou cirurgia. Algumas formas de cirurgia, tais como bypass cardíaco ou cirurgia de transplante causam, necessariamente, isquemia e reperfusão tecidual. Tipicamente, um ou mais derivados de flavonóide de acordo com a presente invenção são administrados ao indivíduo antes e/ou durante cirurgia.
Distúrbios crônicos podem ser escolhidos do grupo incluindo câncer, doença cérebrovascular, aterosclerose, doença da artéria incluindo doença coronariana, doença vascular periférica (incluindo dano causado por doenças tais como diabetes), hipertensão, hipertensão pulmonar, doença obstrutiva crônica das vias aéreas, enfisema, distúrbios neurológicos, distúrbios auto-imunes, complicações diabéticas, choque séptico e hipovolêmico, queimaduras, hepatite e complicações originárias de hepatite e HIV. Outro distúrbio crônico pode ser escolhido de complicações resultantes de administração de atmosferas hiperbáricas ou com alta tensão de oxigênio, freqüentemente aplicadas para auxiliar na respiração, particularmente em um bebê prematuro, incluindo dano retinal ou outro aos olhos. Indivíduos em risco de distúrbios crônicos relevantes podem ser diagnosticados através de análise dos sintomas, testagem diagnóstica, marcadores enzimáticos ou através de testagem genética para identificar uma predisposição genética. Predisposição a determinados distúrbios agudos, tais como ataque cardiaco ou derrame, também podem ser identificados através de testagem genética e podem requerer a aplicação profilática de um ou mais derivados de flavonóide ao indivíduo em risco. Distúrbios fármaco-induzidos em virtude de ROS, por exemplo, doença cardíaca congestiva fármaco-induzida.
Se a doença ou distúrbio é derrame ou risco ou derrame, a composição descrita acima é, de preferência, administrada antes que o derrame ocorra como um produto profilático para reduzir o risco de ocorrência de derrame ou dentro de doze horas (de preferência, dentro de quatro horas) de ocorrência de derrame.
Um exemplo de uma condição patológica envolvida com ROS é isquemia, onde uma deficiência de fluxo sangüineo para partes do corpo resulta em perfusão tecidual inadequada com oxigênio. A isquemia causa dano tecidual, a gravidade do dano dependendo da extensão de tempo em que o tecido é privado de oxigênio e se reperfusão adequada de oxigênio ocorre após o evento isquêmico.
Pelo menos um composto de acordo com a presente invenção pode ser administrado através de uma série de diferentes vias, por exemplo, topicamente, oralmente, subcutaneamente, intramuscular, intra-arterialmente e/ou intravenosamente.
Sintese de Composto
A presente invenção proporciona compostos de flavonóide de acordo com as Fórmulas I, II, III ou IV, V e métodos de sintese de tais compostos.
Derivados de Flavonóides
Derivados de fosfato de flavonóide são produzidos através de uma estratégia sintética seletiva de proteção/desproteção.
Sal dissódico de 3-Hidróxiflavona-3-fostato (5)
Com referência à Figura 1, a abordagem à sintese de sal dissódico de 3-hidróxiflavona-3-fostato é mostrada. 3- Hidróxiflavona (1) sofreu fosfitilação quando tratada com N,N-diisopropilfosforamidita de dibenzila e o fosfato intermediário foi diretamente oxidado por ácido m- cloroperbenzóico (mCPBA) em seu fosfato protegido correspondente. 0 éster de fosfato foi purificado através de cromatografia luminosa, seguido por recristalização, rendimento de 45%.
O éster de fosfato sofreu hidrogenólise em etanol com hidróxido de paládio para formar o fosfato, o qual foi imediatamente convertido a seu di-sal de sódio através de adição de um ligeiro excesso de solução de hidróxido de sódio a 0,1 M. Deproteção através de hidrogenólise proporcionou uma amostra pura de sal dissódico de 3- hidróxiflavona-3-fostato em um rendimento de 73%.
O sal de diamônio correspondente foi produzido através de cromatografia de troca de ions usando uma coluna de dietilaminoetila (DEAE) de (5).
3',4'-Dihidróxiflavona-3-fosfato (como di-sal de sódio) (10)
Um procedimento idêntico foi implementado para a sintese do análogo de trihidróxiflavona, conforme mostrado na Figura 2.
Assim 3',4'-dibenzilóxi-3-hidróxiflavona (6) sofreu fosfitilação através de N,N-dibenzilóxifosforamidito de diisopropila na presença de IH-tetrazola para formar o dibenzilóxi éster de 3',4'-dibenzilóxi-flavona-3-fosfita (7), o qual foi oxidado por mCPBA ao éster de fosfato protegido, dibenzilóxi éster de 3',4'-dibenzilóxi-flavona- 3-fosfato (8) . Essas duas etapas produziram o composto desejado em um rendimento de 40% após recristalização.
O éster de fosfato foi, então, submetido à hidrogenólise em etanol com paládio para formar o 3',3'- dihidroxila-flavona-3-fosfato desejado (9), o qual foi convertido ao di-sal de sódio correspondente, sal dissódico de 3' , 4'-dihidroxila-flavona-3-fostato (10), através de adição de NaOH.
Derivados de Éster de Flavonóides 3-Hidróxiflavona-3-hemisuccinato (15)
3-Hidróxiflavona-3-hemisuccinato (15) foi produzido de acordo com a reação esboçada na Figura 3. Reação de anidrido succinico (11) e álcool benzilico (12) na presença de 4-dimetilaminopiridina (DMAP) e piridina em diclorometano produziu o monobenzil éster de ácido succinico (13) como flocos cristalinos brancos em um rendimento de 77%. Esse derivado de ácido succinico protegido foi acoplado à 3-hidróxiflavona (1) na presença de DCC e DMAP, formando monobenzil éster de flavona-3- hemisuccinato (14) como um óleo amarelo ou marrom que se solidificou quando de descanso, com rendimentos de até 96% produzidos.
A desproteção do monobenzil éster para formar o hemisuccinato correspondente usou Pd(OAc)2 no sistema de solvente THE:EtOH:ácido acético, uma reação em escala maior foi conduzida para proporcionar o 3-hidróxiflavona-3- hemisuccinato requerido (15).
3-Hidróxiflavona-3-hemiadipato (19)
3-Hidróxiflavona-3-hemiadipato (19) foi sintetizado seguindo um procedimento similar àquele que foi discutido acima para o hemisuccinato, conforme mostrado na Figura 4.
Monobenzil éster de ácido adipico (17) foi produzido a partir de ácido adipico e álcool benzilico na presença de p-TsOH a fim de proporcionar o produto desejado como um óleo incolor em um rendimento de 34%.
O ácido adipico protegido, então, sofreu um acoplamento a DCC com 3-hidróxiflavona (1) para formar monobenzil éster de flavona-3-hemiadipato como uma goma amareloa/marrom em um rendimento de 59%. Hidrogenação desse composto na presença de catalisador de Pd(OH)2, usando um sistema de solvente baseado em THF (THF:EtOH a 9:1 + ácido acético a 0,05%) resultou em hidrogenólise do monobenzil éster, formando flavona-3-hemiadipato como um sólido amarelo em um rendimento de 89%.
3',4'-dihidróxiflavona-3-hemiadipato (21)
O esquema para a sintese de 3',4'-dihidróxiflavona-3- hemiadipato (21) é ilustrado na Figura 5. Seguindo a metodologia estabelecida acima, 3',4'-dibenzilóxi-3- hidróxiflavona (6) e monbenzil éster de ácido adipico (17) sofreram um acoplamento a DCC para produzir o monobenzil éster de hemiadipato como uma goma marrom em um rendimento de 59%.
Desproteção através de hidrogenólise em pequena escala (100-500 mg) prosseguiu uniformemente até término em 3-5 horas para proporcionar o 3',4'-dihidróxiflavona-3- hemiadipato (21) em um rendimento de 33%.
III Composições e Métodos
O compostos da presente invenção podem ser formulados em uma variedade de sistemas de distribuição. A quantidade do composto terapêutico a ser administrada e a concentração do composto são dependentes do veiculo e do dispositivos selecionado, da condição clinica do paciente, dos efeitos colaterais e da estabilidade do composto na formulação. Assim, o médico emprega o preparado apropriado contendo a concentração apropriada do composto terapêutico e seleciona a quantidade de formulação administrada, dependendo da experiência clinica com o paciente em questão ou com pacientes similares.
Além disso, excipientes podem ser incluídos na formulação. Exemplos incluem co-solventes, tensoativos, óleos, umectantes, emolientes, conservantes, estabilizantes e antioxidantes. Qualquer tampão farmacologicamente aceitável pode ser usado, por exemplo, tampões de Tris ou fosfato. Quantidades eficazes de diluentes, aditivos excipientes são aquelas quantidades as quais são eficazes para obter uma formulação farmaceuticamente aceitável em termos de solubilidade, atividade biológica, etc.
Assim, a composição da invenção inclui um composto terapêutico o qual pode ser formulado com veículos farmaceuticamente aceitáveis convencionais para administração tópica, oral ou parenteral. Formulações também podem incluir pequenas quantidades de adjuvantes, tais como tampões e conservantes, para manter a isotonicidade, estabilidade e pH fisiológicos.
IV Administração
O compostos da invenção podem ser administrados a seres humanos e animais.
O compostos da presente invenção podem ser administrados em composições em que o composto ativo é intimamente misturado com ou mais ingredientes inertes e opcionalmente incluindo um ou mais ingredientes ativos adicionais. Os compostos podem ser usados em qualquer composição conhecida por aqueles habilitados na técnica para administração a seres humanos e animais.
A composição da invenção pode ser administrada através de uma via apropriada de acordo com a forma de dosagem. Por exemplo, a injeção pode ser administrada intravenosa, intra-arterial, subcutânea, intramuscularmente e semelhantes.
Para administração oral, formas de dosagem unitária sólidas ou fluidas podem ser preparadas. As formas solúveis em água podem ser dissolvidas em um veiculo aquoso junto com açúcar, agentes de flavorização aromáticos e conservantes para formar um xarope. Um elixir é preparado através de uso de um veiculo hidro-alcoólico (por exemplo, etanol) com adoçantes adequados, tais como açúcar e sacarina, junto com um agente de flavorização aromático. Suspensões podem ser preparadas com um veiculo aquoso com o auxilio de um agente de suspensão, tal como acácia, tragacanta, metilcelulose e semelhantes. Os compostos de flavonóide sintéticos da presente invenção também podem ser formulados com agentes de estabilização, por exemplo, agentes de redução de quelador de metal, tal como ácido etilenodiaminetetracético (EDTA) ou um agente de redução, tal como metabi-sulfito de sódio.
Formulações apropriadas para uso parenteral são evidentes para aqueles habilitados na técnica. Usualmente, o composto terapêutico é preparado em uma solução aquosa em uma concentração de cerca de 1 a cerca de 100 mg/mL. Mais tipicamente, a concentração é de cerca de 10 a 60 mg/mL ou cerca de 20 mg/mL. Concentrações abaixo de 1 mg/mL podem ser necessárias em alguns casos, dependendo da solubilidade e potência do composto selecionado para uso. A formulação, a qual é estéril, é adequada para várias vias parenterais, incluindo intra-dérmica, intra-articular, intramuscular, intravascular, intravenosa, inalação e subcutânea.
Composições de acordo com a presente invenção podem ser formuladas em protetores solares, composições para cuidados com a pele, emolientes e umidificantes.
Sistemas de distribuição com liberação lenta ou prolongada, incluindo qualquer um de uma série de biopolimeros (sistemas biológicos-baseados), sistemas empregando lipossomas e sistemas de distribuição poliméricos, por exemplo, dendrimeros, podem ser utilizados com as composições descritas aqui para proporcionar uma fonte continua ou a longo prazo do composto terapêutico. Tais sistemas com liberação lenta são aplicáveis à formulações para uso tópico, oftálmico, oral e parenteral.
O(s) composto(s) de flavonóide sintético (s) da presente invenção pode(m) também ser formulado(s) como um nutrafarmacêutico ou um nutracêutico. Por exemplo, o(s) composto (s) de flavonóide sintético(s) pode(m) ser formulado(s) em um alimento, tal como um cereal, bebidas, tais como sucos de frutas, bebidas alcoólicas, pão, etc. para consumo oral.
V Atividade Vaso-relaxante e Antioxidante de Derivados de Flavonóide
Os efeitos do veiculo, flavona-3-hemiadipato (10~8 a 10-4 M) e DiOHF (10-4 M) sobre o nivel de ânions de superóxido gerados na aorta de rato na presença de NADPH foram determinados e expressos como um percentual do controle. A presença do flavona-3-hemiadipato parece não ter efeito sobre a produção de superóxido em qualquer concentração.
Com referência à Figura 6, os efeitos do veiculo, Flavona-3-hemiadipato (F3HA), na presença e ausência de butiril colinesterase (BuCHE, 1000 U/L) e DiOHF (10“4 M) sobre o nivel de ânions de superóxido gerados na aorta de rato na presença de NADPH expresso como um percentual do controle são ilustrados. Na ausência da esterase, parece não haver efeito sobre a produção de superóxido. A presença de colinesterase revela um efeito inibitório concentração-dependente de flavona-3-hemiadipato. Isso é consistente com o grupo hemiadipato sendo removido in vitro para formar o derivado de hidroxila livre, 3-hidróxi flavona. A supressão da produção de superóxido pela inclusão do flavona-3-hemiadipato (19) e esterase se compara, favoravelmente, à atividade de DiOHF (3',4'- dihidróxi flavonol). Uma redução na concentração de superóxido e outras ROS foi relacionada a uma possivel redução no dano ao miocárdio induzido pela presença desses radicais.
As curvas de resposta à concentração de Ca2+ na presença de veiculo ou concentrações crescentes de flavona- 3-hemiadipato (15) (F3HA, 10-8 M - 10-4 M) em anéis aórticos com endotélio intacto isolados de ratos foram determinadas. Nas menores concentrações (10-8 a 10-5 M) , o flavona-3- hemiadipato não teve efeito sobre a contração por Ca2+ do anel aórtico. No maior nivel testado, IO-4 M, o flavona-3- hemiadipato teve algum efeito inibitório, mais provavelmente em virtude da presença de uma esterase no tecido aórtico do rato.
Os efeitos do veiculo (dJNO), 3',4'-dihidróxiflavona- 3-hemiadipato (21) (DÍ0HF3HA, lCr8M - IO-4 M) e DiOHF (10~4 M) sobre o nivel de ânions de superóxido gerados na aorta de rato na presença de NADPH expresso como um percentual do controle. A concentração de superóxido permaneceu constante no decorrer da faixa de concentração de D10HF3HA estudada, assim, o DÍ0HF3HA não tive efeito sobre a geração de superóxido.
Fazendo referência à Figura 7, os efeitos do veiculo, 3',4'-dihidróxiflavona-3-hemiadipato (21) (DÍ0HF3HA, 10-6 M - 10-4 M) na presença e ausência de butiril colinesterase (BuCHE, 1000 U/L) sobre o nivel de ânions de superóxido gerados na aorta de rato na presença de NADPH expresso como um percentual do controle são ilustrados. Por comparação, os resultados usando DiOHF (10-4 M) sobre o nivel de ânions de superóxido gerados na aorta de rato na presença de NADPH expresso como um percentual do controle são também mostrados. A presença da colinesterase revelou uma inibição dependente da concentração dos niveis de superóxido.
As curvas de resposta à concentração de Ca2+ na presença de veiculo ou concentrações crescentes de 3',4'- dihidróxiflavona-3-hemiadipato (21) (DÍOHF3HA, 10~6 M - 10“4 M) em anéis aórticos com endotélio intacto isolados de ratos. As contrações são expressas como um percentual da resposta inicial ao Ca2+ (3xl0-3 M) observada antes de tratamento com DÍOHF3HA. D1OHF3HA parece ter uma leve ação inibitório de Ca2+ a IO-4 M. Esse efeito é possivelmente em virtude da presença de alguma esterase no tecido aórtico de rato.
Voltando à Figura 8, as curvas de resposta à concentração de Ca2+ na presença de veiculo ou 3',4'- dihidróxiflavona-3-hemiadipato (21) (DÍ0HF3HA, IO'4 M), na presença e ausência de BuCHE foram comparadas com DiOHF em anéis aórticos com endotélio intacto isolados de ratos. As contrações são expressas como um percentual da resposta inicial ao Ca2+ (3xl0-2 M) observada antes de tratamento com DÍ0HF3HA. A presença de colinesterase intensificou acentuadamente o efeito inibitório de DÍ0HF3HA.
Fazendo referência à Figura 9, os efeitos do veiculo, f lavona-3-fosf ato (F3P, 10-8 M - 10-4 M) na presença fosfatase (1000 U/L) e DiOHF (10“4 M) sobre o nivel de ânions de superóxido gerados na aorta de rato na presença de NADPH expresso como um percentual do controle. A presença do flavona-3-fosfato causou uma diminuição dependente da concentração nos niveis de superóxido. Esse efeito é contrário aos estudos anteriores, que mostraram que a presença do grupo 3' , 4'-dihidroxila no anel B é determinante na diminuição dos niveis de superóxido.
As curvas de resposta à concentração de Ca2+ na presença de veiculo ou concentrações crescentes de flavona- 3-fosfato (F3P, 10-2 M - 10-4 M) em anéis aórticos com endotélio intacto isolados de ratos foram determinadas. Flavona-3-fosfato causou inibição parcial da contração cálcio-induzida na concentração mais alta.
Fazendo referência à Figura 10, as curvas de resposta à concentração de Ca2+ na presença de veiculo ou flavona-3- fosfato (F3P, 10-8 M-10-4 M) na presença e ausência de fosfatase (P, 1000 U/L) em anéis aórticos com endotélio intacto isolados de ratos é mostrada. As contrações são expressas como um percentual da resposta inicial ao Ca2+ (3xl0-3 M) observada antes de tratamento com flavona-3- fosfato. A presença de fosfatase intensificou acentuadamente os efeitos inibitórios de flavona-3-fosfato.
A invenção é ilustrada pelos exemplos não limitativos a seguir.
Sintese de Derivados de Flavonóide 3-(Benzilóxicarbonilbutilcarbonilóxi)flavona
Figure img0031
3-Hidróxiflavona (0,105 g, 0,442 mmoles), diciclohexilcarbodiimida (0,193 g, 0,933 mmoles) e 4- dimetilaminopiridine (9,80 mg, 0,0802 mmoles) foram adicionados a uma solução de monobenzil éster de ácido adipico (0,168 g, 0,754 mmoles) em diclorometano (10 mL) e a mistura foi agitada sob N2 em temperatura ambiente durante 19 h. Água (50 p,L) foi adicionada e a mistura resultante foi agitada durante 10 min, então, dietil éter (10 mL) foi adicionado. A mistura foi filtrada, o filtrado concentrado e purificado através de cromatografia luminosa (EtOAc a 15-40% em tolueno) para proporcionar o monobenzil éster como uma goma amarela (0,16 g, 80%) . Uma pequena porção foi recristalizada a partir de EtOAc/aguarráz a fim de proporcionar um pó incolor; mp = 74-7 6°C; 2H NMR (399,7 MHz, CDCls) δ 1,60 - 1,75 (m, 4H, CO2CH2CH2); 2,31 (t, J = 6,8 Hz, 2H, CO2CH2) ; 2,55 (t, J = Q F Q Hz, 2H, CO2CH2) ; 5,02 (s, 2H, CH2Ph); 7,20 - 7,28, 7,39 - 7,45 (2m, H, PhCH2, H3', 4', 5'); 7,34 (dd, 1H, J.5,6 = 8,0 Hz, Je,7 7,6 Hz, H6) ; 7,46 (d, 1H, J/, 8 = 8,0 Hz, H8); 7,62 (ddd, 1H, Js,7 = 1,6 Hz, J6,7 = 7,6 Hz, J7,8 = 8,0 Hz, H7); 7,73 - 7, 77 (m, 2H, H2', 6'); 8,16 (dd, 1H, J5,7 1,6 Hz, H5) . 13C NMR (100,5 MHz, CDCI3) δ 25,29 (2C, CO2CH2CH2) ; 34,62, 34,91 (2C, CO2CH2); 67,30 Qc, CH2Ph) ; 119,21, 124,68, 126, 29, 127,17, 129, 29, 129, 40, 129, 63, 129,75, 131,05, 132,36, 134,72, 135,06, 137,03, 156,71, 157,45 (20C, Ar); 171,54, 173,27, 174,16 (3C, C = 0). Anal. Encontrado: C, 73,54; H, 5,27; C42H36O8 requer C, 73, 67; H, 5,30%. HRMS (ESI + ) m/z 479, 1469, C28H24Naθ6 [M + Na]+ requer 479,1471,
3-Hidróxiflavona 3-hemiadipato
Figure img0032
Uma mistura de 3-(benzilóxicarbonilbutilcarbonilóxi) flavona (312 mg, 0,7 mmoles) e Pd(OH)2 (49,4 mg) em THF:EtOH a 9:1 + ácido acético a 0,05% (15 mL) foi tratada com H2 durante 5 h. O produto bruto foi filtrado (Celite) , o filtrado foi concentrado e o residue foi purificado através de cromatografia luminosa (EtOAc a 10-25% em tolueno + ácido acético 1%) a fim de proporcionar o hemiadipato como um sólido amarelo claro (0,211 g, 89%) . Uma pequena porção foi cristalizado a partir de EtOAc/aguarráz; mp = 118-121°C; XH NMR (399, 7 MHz, CDCI3) δ 1, 66 - 1,83 (m, 4H, CH2CH2CO2); 2,38 (t, J = 6,8 Hz, 2H, 6,8 Hz, 2H, CH2CO2) ; 7,42 (dd, 1H, Js,6 = 8,0 Hz, Jo,7 = 8,0 Hz, H6) ; 7,47 - 7,53 (m, 3H, H3', 4', 5'); 7,54 (d, 1H, J7,8 = 8,4 Hz, H8); 7,70 (ddd, 1H, J5f7 = 1,6 Hz, Je,7 = 8,0 Hz, J7,s = 8,4 Hz, H7); 7,81 - 7,86 (m, 2H, H2', 6'); 8,24 (dd, 1H, J5,o = 8,0 Hz, Js,7 = 1,6 Hz, H5) . 13C NMR (100,5 MHz, CDC13) δ 25,01, 25,20 (2C, CO2CH2CH2) ; 34,57 (2C, CO2CH2); 119, 20, 124, 66, 126,33, 127,21, 129, 41, 129,76, 131,04, 132,40, 134,70, 135,10, 156,74, 157,60 (14C, Ar); 171,52, 173,38, 179,36 (3C, C = 0) . Anal. Encontrado: C, 68,89; H, 4,91; C21H18O6 requer C, 68,85; H, 4,95%. HRMS (ESI+) m/z 389,1000, C2iHisNaθ6 [M + Na]+ requer 389, 1001].
4'-(Benzilóxi)-3-(benzilóxicarbonilbutilcarbonilóxi)flavona
Figure img0033
Dicloreto de etileno (EDC) (843 mg, 4,40 mmoles) foi adicionado a uma solução de 4'-benzilóxi-3-hidróxiflavona (1,00 g, 2,90 mmoles), monobenzil éster de ácido adipico (1,30 g, 5,50 mmo les) e DMAP (354 mg, 2,89 mmo les) em diclorometano (110 mL) e a mistura foi agitada em rt durante a noite. A mistura de reação foi, então, concentrado e o residue dissolvido em acetato de etila. A fase orgânica foi lavada com água (x 3), HCI a 1 M (x 3), NaHCOs sat (x 3), salmoura (x 3), seca (MgSθ4) e concentrada. 0 residue foi purificado através de cromatografia luminosa (EtOAc/petrol a 50%) a firn de proporcionar o benzil éster como um óleo marrom, o qual foi cristalizado a partir de EtOAc/petrol a fim de proporcionar um sólido incolor (900 mg, 55%); mp 93 °C; XH NMR (500 MHz, CDCI3) δ 1, 77-1,83 (m, 4H, CH2CH2) , 2,42 (t, 2H, J = 7,5 Hz, CH2CO) , 2,67 (t, 2H, J = 6,5 Hz, CH2CO) , 5,13 (s, 2H, CH2Ph), 5,15 (s, 2H, CH2Ph) , 7,09 (d, 1H, J7,8 = 8,5 Hz, H8), 7,35 (app. d, 2H, J = 8,5 Hz, H2,,6'), 7,40-7,46 (m, 11H, 2 x Ph, H6), 7,69 (ddd, 1H, J5,7 = 1,5, J6,7 = 7,0, J7,8 = 8,5 Hz, H7), 7,85 (app. d, 2H, J = 8,5 Hz, H3',5'), 8,25 (d, 1H, J5,6 = 8 Hz, H5); 13C NMR (125 MHz, CDClj) δ 24,2 (x 2), 33,6, 33,8 (4C, CH2), 66, 2, 70, 1 (2C, CH7Ph) , 115, 0, 117,9, 122,4, 123,5, 125,0, 126, 0, 127,4, 128,1, 128,2, 128,5, 128, 7, 130,0, 133,0, 133,7, 135,9, 136, 2, 155, 5, 156, 1, 161, 1 (Ar), 170, 4, 172, 0, 173, 0 (3C, C = 0); IR (thin film) 2937, 1760, 1730, 1646, 1602, 1507, 1468, 899 cm-1; Anal. Encontrado C, 74, 67; H, 5,29, CtsHjoO/ requer C, 74,72; H, 5,37%.
4'-Hidróxiflavona 3-hemiadipato
Figure img0034
Uma mistura da 4'-(benzilóxi)-3-(benzilóxicarbonil butilcarbonilóxi) flavona (400 mg, 0,711 mmoles) e Pd(OH)8 (56 mg) em THE (10 mL) , etanol (1,2 mL) e AcOH (100 p,L) foi tratada com hidrogênio (50 psi) durante 18 h. A mistura de reação foi, então, filtrada (Celite) e a almofada lavada com THE. O filtrado foi concentrado e o residue sólido foi purificado através de cromatografia luminosa (THF/tolueno a 70% + AcOH a 1%) e o sólido resultante recristalizado a partir de THF/petrol a fim de proporcionar o ácido como um sólido incolor (150 mg, 55%); mp 177-180°C; 3H NMR (500 MHz, de-DMSO) δ 1,56-1, 66 (m, 4H, CH2CH2), 2,25 (t, 2H, J = 7,0 Hz, CH2CO) , 2,64 (t, 2H, J = 7,0 Hz, CH2CO) , 6,96 (app. d, 2H, J = 8,5 Hz, H2',6'), 7,52 (t, 1H, J6,7 J/,a = 7,5 Hz, H7), 7,80 (app. d, 2H, J = 7,5 Hz, H3',5'), 7,78 (m, 1H, H8), 7,85 (t, 1H, J5,e = J6,7 = 7,5 Hz, H6), 8,06 (d, 1H, J5,e = 8,0 Hz, H5); 13C NMR (125 MHz, de-DMSO) δ 23, 8, 23, 9, 32, 9, 33,3 (4C, CH2) , 115,9, 118,5, 119, 7, 122,7, 125, 0, 125, 6, 130, 1, 131,9, 134,5, 154,9, 155, 8 160, 6 (Ar), 170,4 170,9, 174,3 (3C, C = 0); IR 3257, 2944, 2869, 1765, 1706, 1595, 854 cm’1; HRMS (ESI+) m/z 383, 1123, C21H19O7 [M + H]+ requer 383, 1131,
3',4'-Dibenzilóxi-3-(benzilóxicarbonilbutilcarbonilóxi)
Figure img0035
Monobenzil éster de ácido adipico (1,91 g, 5,04 mmoles) seguido por hidrocloreto de EDC (0,764 g, 3,98 mmoles) e DMAP (0,324 g, 2,65 mmoles) foram adicionado a uma solução agitada de 3',4'-dibenzilóxiflavonol (1,21 g, 2,68 mmoles) em diclorometano seco (100 mL) e a mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente sob N2 durante 3 h. A mistura de reação foi concentrado sob pressão reduzida e resuspensa em acetato de etila (100 mL). A suspensão foi, então, lavada com água (3 x 50 mL), HC1 a 1M (3 x 50 mL), NaHCCç saturado (3 x 50 mL) e salmoura (3 x 50 mL) . O extrato orgânico foi seco (MgSCg)/ filtrado, concentrado sob pressão reduzida e o residue amarelo cristalizado a partir de EtOAc/ aguarráz para proporcionar o benzil éster como um sólido amarelo fofo (1,58 g, 88%); mp = 84-85 °C; 3H NMR (399,8 MHz, CDCI3); δ 1,70 - 1,80 (m, 4H, CH2CH2) ; 2,38 (t, 2H, J = 6,8 Hz, CH2CO) ; 2,55 (m, 2H, CH2CO) ; 5,10 (s, 2H, CH2Ph) ; 5,20 (s, 2H, CH2Ph) ; 5,24 (s, 2H, CH2Ph) ; 7,01 (d, 1H, J7,3 = 8,4 Hz, H8); 7,26 - 7,49 (m, 19H, Ar, H6, 2', 5', 6'); 7,62 (ddd, 1H, J5,7 1,2 Hz, J6,7 = 7,2 Hz, J7,δ = 8,4 Hz, H7); 8,22 (dd, 1H, Js,6 = 7,6 Hz, Js,7 = 1,2 Hz, H5). 13C NMR (100,5 MHz, CDCls) δ 25,33 (2C, CH2CH2CO2); 34,59, 34,93 (2C, CH2CO2); 67,30, 71,91, 72,59 (2C, CH2Ph); 114,77, 115, 84, 119, 06, 123,76, 123, 84, 124, 60, 126, 19, 127,12, 128,25, 128,36, 129,15, 129,29, 129,64, 129,73, 130,12, 134,23, 134,89, 137,05, 137,54, 137,85, 149,61, 152,64, 156,53, 157,00 (32C, Ar); 171,49, 173,12, 174,18 3C, C = 0). Anal. Encontrado: C, 75, 39; H, 5,47; C42H36O3 requer C, 75, 43; H, 5,43%. HRMS (ESI+) m/z 691,2303, C42H36NaO8 [M + Na]+ requer 691,2308,
3’,4’-Dihidróxiflavona 3-hemiadipato
Figure img0036
Uma mistura de 3',4'-dibenzilóxi-3-(benzilóxicarbonil butilcarbonilóxi)flavona (2,12 g, 3,16 mmoles) e Pd(OH)2 (107 mg) em THF:EtOH a 9:1 contendo ácido acético a 0,05% (50,0 mL) foi tratada com H2 sob alta pressão durante 5 h. A mistura de reação foi filtrada (Celite) e concentrada a fim de proporcionar um sólido verde escuro. O residuo verde foi purificado através de cromatografia luminosa (THF/tolueno a 30 - 90% + 1% ácido acético) , seguido por cristalização a partir de THF/aguarráz para proporcionar o hemiadipato puro como um sólido marrom claro (0,70 g, 56%); mp = 194-197°C; 2H NMR (399, 8 MHz, CDCI3); δ 1,44 - 1,62 (m, 4H, CH2CH2) ; 2,10 (t, 2H, J = 6,8 Hz, CH2CO) ; 2,44 (t, 2H, J = 6,8 Hz, CH2CO) ; 6,73 (d, 1H, J5',e' = 8,4 Hz, H5' ) ; 7,09 (dd, 1H, J2',β' = 2,0 Hz, J5',6' = 8,4 Hz, H6'); 7,16 - 7,22 (m, 2H, H6, 2’ ) ; 7,32 (d, 1H, J7,8 = 8,0 Hz, H8); 7,48 (ddd, 1H, J5,7 = 1,6 Hz, J6,7 = 6,8 Hz, J7,s = 8,0 Hz, H7); 7,94 (dd, 1H, J5,e = 8,4 Hz, J5,7 = 1,6 Hz, H5) . 13C NMR (100,5 MHz, d6-DMSO) δ 25, 30, 25, 62 (2C, CH2CH2CO2) ; 34,43, 34, 81 (2C, CH2CO2); 116, 59, 117,42, 119,98, 121,41, 122,06, 124,13, 126,51, 127,07, 133,32, 136, 04, 146, 97, 150, 65, 156, 35, 157,27 (14C, Ar); 171,97, 173,46, 179,95 (3C, C = 0). Anal. Encontrado: C, 68,89; H, 4,91; C21H18O6 requer C, 68,85; H, 4,95 %. HRMS (ESI + ) m/z 389, 1000, C2iHiδNaOe [M + Na]+ requer 389, 1001,
3, 4' -Di-(benzilóxicarbonilbutilcarbonilóxi)flavona
Figure img0037
Dicloreto de etileno (1,13 g, 5,91 mmoles) foi adicionado a uma solução de 3,4'-dihidrbxiflavona (500 mg, 1,97 mmoles), monobenzil éster de ácido adipico (1,86 g, 7,88 mmoles) e DMAP (481 mg, 3,94 mmoles) em diclorometano (30 mL) e a mistura agitada em rt durante 50 min. A mistura de reação foi, então, concentrada e o residue dissolvido em acetato de etila. A fase orgânica lavada com água (x 3), HCI a 1 M (x 3), NaHCCc sat (x 3), salmoura (x 3), seca (MgSCg) e concentrada. 0 residuo foi purificado através de cromatografia luminosa (EtOAc/petrol a 50%) a firn de proporcionar o diéster como um óleo incolor, o qual foi cristalizado a partir de EtOAc/petrol a fim de proporcionar um sólido incolor (850 mg, 62%); mp 79°C; 3H NMR (500 MHz, CDCI3) δ 1, 76-1, 82 (m, 8H, 2 x CH2CH2) , 2,42 (t, 2H, J 7,0 Hz, CH2CO) , 2,45 (t, 2H, J = 7,0 Hz, CH2CO) , 2,62 (t, 2H, J = 7,0 Hz, CH2CO) , 2,65 (t, 2H, J = 7,0 Hz, CH2CO) , 5,12 (s, 2H, CH2Ph) , 5,14 (s, 2H, CH2Ph), 7,25 (d, 2H, J = 8,5 Hz, H2',6'), 7,31-7,37 (m, 10H, 2 x Ph), 7,44 (t, 1H, J.5,6 = Je,7 = 8,5 Hz, H6), 7,55 (d, 1H, J7,8 8,5 Hz, H8), 7,72 (td, 1H, J6,7 = J?,8 = 8,5, J7,5 = I,5 Hz, H7), 7,89 (d, 2H, J = 8,5 Hz, H3',5'), 8,25 (dd, 1H, J5,6 = 8,5, J5,7 = 1,5 Hz, H8); 13C NMR (125 MHz, CDCI3) δ 24,16, 24,17, 24,21, 33,5, 33, 8, 33, 9, 66, 1, 66, 3 (CH2)/ 118,0, 121,9, 123,5, 125, 2, 126, 1, 127,4, 128,1, 128,18, 128,22, 128,49, 128,53, 129,7, 133,7, 134,0, 135,9, 136,0, 152,8, 155,4, 155,5 (Ar), 170,3, 171,2, 172,1, 173,97, 173,0 (5C, C = 0); IR 2943, 1765, 1732, 1652, 1501, 1465, 902 cm-1; Anal. Encontrado C, 71,30; H, 5,56, CoHasOio requer C, 71,29; H, 5,55%.
Flavona 3,4'-bis(hemiadipato)
Figure img0038
Uma mistura de 3,4'-di- (benzilóxicarbonilbutilcarbonilóxi)flavona (435 mg, 0,629 mmoles) e Pd(OH)7 (50 mg) em EtOAc (5 mL) foi tratada com hidrogênio durante 2 h, resultando em um precipitado cinza. THE foi adicionado para dissolver o precipitado e a mistura foi filtrada (Celite) . A almofada lavada com THE e o filtrado concentrado. 0 residue sólido foi recristalizado a partir de THF/petrol a fim de proporcionar o bis(hemiadipato) como um sólido incolor (183 mg, 50%); mp 133°C; 3H NMR (500 MHz, d6-DMSO) δ 1,55-1,70 (m, 8H, 7,0 Hz, CH2CO) , 2,27 (t, 2H, J = 7,0 Hz, CH2CO) , 2,63 (t, 2H, J = 7,0 Hz, CH2CO) , 2,64 (t, 2H, J = 7,0 Hz, CH2CO) , 7,37 (app. d, 2H, J = 9,0 Hz, H3',5'), 7,55 (dd, 1H, J5,6 = 8,5, J6,7 = 7,5, Hz, H6), 7,80 (d, 1H, J7,8 = 8,5 Hz, H8), 7,88 (ddd, 1H, J6,7 = 7,5, J7,8 = 8,5, J2,7 = 1,5 Hz, H7), 7,96 (app. d, 2H, J = 9,0 Hz, H2',6'), 8,08 (dd, 1H, J2,6 = 8,5, J5,7 1,5 Hz, H5) ; 13C NMR (125 MHz, d6-DMSO) δ 23, 77, 23, 82, 32, 6, 33,2, 33,3, 44,3 (CH2), 118,7, 122,5, 122, 6, 122,7, 125,1, 126, 8, 129, 7, 132,9, 134,8, 152,7, 154,9, 155,1 (Ar), 170,4, 171, 1, 171,4, 174,3, 174,3 (5C, C = 0); IR 3059, 2940, 2873, 1768, 1706, 1504, 759 cm’1; HRMS (ESI-) m/z 509, 1441, C27H25θio [M - H]- requer 509, 1442,
3,7-Di-(benzilóxicarbonilbutilcarbonilóxi)flavona
Figure img0039
Dicloreto de etileno (EDC) (517 mg, 2,7 mmoles) foi adicionado a uma solução de 3, 7-dihidróxiflavona (250 mg, 0,983 mmoles), monobenzil éster de ácido adipico (921 mg, 3,90 mmoles) e DMAP (220 mg, 1,80 mmoles) em diclorometano (25 mL) e a mistura foi agitada em rt durante 1 h. A mistura de reação foi, então, concentrada e o residue dissolvido em acetato de etila. A fase orgânica foi lavada com água (x 2), HCI a 1 M (x 2), NaHCO2 sat (x 2), salmoura (x 2), seca (MgS04) e concentrada. 0 residue foi filtrado através de uma almofada de silica eluindo com EtOAc/petrol a 50% a fim de proporcionar um sólido, o qual foi recristalizado a partir de EtOAc/petrol a fim de proporcionar o diéster como um sólido incolor (565 mg, 91%); mp 58 °C; 1H NMR (500 MHz, CDCls) δ 1,74-1,82 (m, 8H, CH2CH2 x 2), 2,39 (t, 2H, J = 7,0 Hz, CH2CO) , 2,45 (t, 2H, J = 7,0 Hz, CH2CO) , 2,62-2, 64 (m, 4H, CH2CO * 2), 7,15- 7,17 (m, 2H, H2', 6'), 7,30-7,36 (m, 10H, 2 x Rh) , 7,39 (d, 1H, J6,8 = 1,6 Hz, H8), 7,48-7,51 (m, 2H, H3', 5'), 7,81- 7,83 (m, 2H, 4' H6) 8,25 (d, 1H, J5,6 = 9, H5); 13C NMR (125 MHz, CDClj) δ 24, 1, 24,20, 24,21, 33,5, 33, 80, 33, 82, 34,0, 44,7, 66, 2, 66, 3, (CH2), 111,0, 119,5, 121,5, 172,5, 128,19, 128,22, 128,3, 128,5, 128,6, 128,7, 129,8, 131,3, 133,7, 135, 9, 136, 0, 154,8, 156,1, 156, 6 (Ar), 170,3, 170, 8, 171,5, 172,96, 173, 0 (5C, C = O) IR 3071, 3035, 2944, 2876, 1760, 1726, 1615, 848 cm-1; Anal. Encontrado C, 71,34; H, 5,60%, C.nHsaOio requer C, 71,29; H, 5,55%.
3,7-Dihidróxiflavona 3,7-bis(hemiadipato)
Figure img0040
Uma mistura de 3,7-di-(benzilóxicarbonilbutil carbonilóxi)flavona (565 mg, 0,818 mmoles) e Pd(OH)2 (65 mg) em EtOAc (10 mL) foi tratada com hidrogênio durante 3 h. Um precipitado cinza se formou e THE foi adicionado até estar dissolvido. A mistura foi filtrada (Celite) e a almofada lavada com THE e o filtrado foi concentrado. O residue sólido foi recristalizado a partir de THF/petrol a fim de proporcionar o diácido como um sólido incolor (311 mg, 76%); mp 128 °C; 3H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 1,55-1,74 (m, 8H, CH2CH2 x 2), 2,23 (t, 2H, J = 7,0 Hz, CH2CO) , 2,28 (t, 2H, J = 7,0 Hz, CH2CO) , 2,61-2,68 (m, 4H, CH2CO x 2), 7,34 (m, 1H, H4'), 7,58-7,61 (m, 3H, H6, H2', 6'), 7,68 (d, 1H, J6,8 = 1,6 Hz, H8), 7, 87-7, 89 (m, 2H, H3', 5'), 8,12 (d, 1H, J5,6 = 8,8, H5) ; 13C NMR (100 MHz, d6-DMSO) δ 23,7, 23,76, 23,78, 23, 9, 32,9, 33, 19, 33,24, 33,28 (CH2), 111,9, 120,5, 120, 6, 126, 6, 128,1, 129, 0, 129, 2, 131,7, 133, 0, 154,9, 155, 6, 155, 9 (Ar), 170,4, 170, 6, 171, 1, 174,2, 174,3 (5C, C = 0); IR 3035, 2952, 2920, 1762, 1708, 1112 cm’1; Anal. Encontrado C, 63, 64; H, 5,14%, C27H26O1C1 requer C, 63,53; H, 5,13%.
Preparação de flavonol fosfatos 3-(Dibenzilóxifosforilóxi)flavona
Figure img0041
Diisopropilfosforamidita de dibenzila (12,5 mL, 38,0 mmoles) e IH-tetrazola (74,0 mL, 31,7 mmoles) foi adicionado a uma solução de 3-hidróxiflavona (3,00 g, 12,6 mmoles) em diclorometano seco (150 mL). A mistura de reação foi agitada sob N2 em temperatura ambiente durante 2 h. A mistura foi, então, esfriada para -78 °C e m-CPBA (8,72 g, 50,6 mmoles) foi adicionado. A mistura foi deixada retornar para a temperatura ambiente e agitada durante mais 45 min. A mistura de reação foi lavada com Na2S2Ü4 a 0,25 M (3 x 100 mL) , NaHCOs saturado (3 x 100 mL) e água (2 x 100 mL) . 0 extrato orgânico foi seco (MgSCg) , filtrado e concentrado sob pressão reduzida para proporcionar um sólido branco bruto. O material bruto foi purificado através de cromatografia luminosa (EtOAc em tolueno a 20-50%) seguido por cristalização sobre EtOAc/aguarráz a fim de proporcionar o fosfato protegido como um sólido fofo branco (5,28 g, 84 %); mp = 85-88°C; 3H NMR (399,7 MHz, CDCls); δ 5,09 - 5,17 (m, 4H, CH2Ph); 7,22 - 7,30, 7,38 - 7,47 (2 x m, 14H, Ar, H3', 4' , 5',6') ; 7,51 (d, J7,8 = 8,5 Hz, H8); 7,69 (ddd, J.5,7 = 1,5 Hz, J6,7 = 7,2 Hz, J7,8 = 8,5 Hz, 1H, H7); 7,93 - 7,96 (m, 2H, H2',6'); 8,29 (dd, J5,6 = 7,5 Hz, J5,7 = 1,5 Hz, 1H, H5) . 13C NMR (100,5 MHz, CDCI3); δ 78,13 (2C, CH2Ph); 119, 13, 124,86, 126, 23, 127,22, 128,90, 129, 36, 129, 48, 129, 62, 130, 06, 131,03, 132,29, 135, 06, 157,03, 157,10 (25C, Ar); 136, 89 (1C, Jc,p = 8,0 Hz, C-O- fosfato); 173, 87 (1C, C = 0) . 31P NMR (161,8 MHz, CDCI3) ; δ -7,45 (s, P = 0) . Anal. Encontrado: C, 69,81; H, 4,60; C29H23O6P requer C, 69, 88; H, 4,65%. HRMS (ESI + ) m/z 521,1126, C29H23Naθ6P [M + Na] + requer 521,1130].
Sal dissódico de 3-Hidróxiflavona-3-fostato
Figure img0042
Uma solução de 3-(dibenzilóxifosforilóxi)flavona (2,05 g, 4,09 mmoles) e paládio sobre carbono (10%, 0,25 g) em EtOH:água (4:1, 250 mL) foi tratada com H2 em pressão atmosférica durante 3,5 h. A mistura de reação foi filtrada (Celite) e o filtrado tratado com NaOH (0,50 g em 100 mL água). A mistura aquosa foi concentrada sob pressão reduzida, então, cristalizada a partir de água/acetona para proporcionar o fosfato como cristais amarelos claros (1,03 g, rendimento de 87%). 3H NMR (499,7 MHz, D2O) δ 7,33 (dd, 1H, J5,6 = 8,0 Hz, Js,7 = 1,2 Hz, H6); 7,40 - 7,46 (m, 3H, H3', 4', 5'); 7,52 (d, 1H, J7,8 = 8,5 Hz, H8); 7,64 (ddd, 1H, J5,7 = 1,2 Hz, Je,7 = 7,5 Hz, J7,8 = 8,5 Hz, H7); 7,97 (dd, 1H, J5,e = 8,0 Hz, J5,7 = 1,2 Hz, H5) ; 8,10 (m, 2H, H2', 6'). 13C NMR (100,5 MHz, D2O) δ 118,29, 122,92, 124,97, 125,06, 128,50, 129,15, 130,92, 131,33, 134,22, 155,06, 156, 68 (13C, Ar); 136,11 (IC, Jc, P = 6,8 Hz, C-O-P) ; 177,15 (IC, C = 0) . 31P NMR (161,8 MHz, D2O) δ 2,98 (s, P). Anal.: Encontrado: C, 49,68; H, 2,51; Ci5HnNa2O6P requer C, 49, 74; H, 2,50%.
4' -(Benzilóxi)-3-(dibenzilóxifosforilóxi)flavona
Figure img0043
1H-Tetrazola (483 mg, 6,89 mmoles) foi adicionada a uma mistura de 4'-benzilóxi-3-hidróxiflavona (1,00 g, 2,72 mmoles), N,N-diisopropilfosforamidita de dibenzila (1,5 mL, 1,6 g, 4,4 mmoles) em diclorometano (30 mL) e a reação foi agitada em rt durante 2 h. N,N-diisopropilfosforamidita de dibenzila adicional (1,0 mL, 1,1 g, 1,5 mmoles) foi adicionada e a reação agitada durante mais 1 h. A mistura de reação foi, então, esfriada para -78 °C e m-CPBA (3,00 g, 12,1 mmoles, 70% peso/peso) foi adicionado. A reação foi, então, aquecida para a rt e agitada durante 45 min. A camada orgânica foi lavada com Na2S2O2 a 0,25 M (* 3), NaHCOs sat (x 3), salmoura (x 3), seca (MgSCL) e concentrada. 0 residuo foi purificado através de cromatografia luminosa (EtOAc/petrol a 50%) a fim de proporcionar um sólido amarelo, o qual foi recristalizado a partir de EtOAc/petrol para proporcionar a fosfato como um sólido incolor (1,01 g, 58%); mp 101°C; XH NMR (500 MHz, CDC13) δ 5,02 (s, 2H, CH2Ph) , 5,16 (s, 2H, CH2Ph) , 5,17 (s, 2H, CH2Ph) , 6,97 (app. d, 2H, J = 8,8 Hz, H3', 5'), 7,29-7,36 (m, 15H, 3 x ph) , 7,41 (t, 1H, J5,õ = Je,7 = 8,0 Hz, H6), 7,51 (d, J7,8 = 8,5 Hz, H8), 7,68 (dd, 1H, J6,7 = 8,0, J7,8 = 8,5 Hz, H7), 7,96 (app. d, 2H, J = 8,8, H2',6'), 8,30 (dd, 1H, J7,8 = 8,5, J6,8 = 1,5 Hz, H8); 13C NMR (100 MHz, CDCla) δ 69, 9, 70, 0 (CH2), 144, 7, 117, 9, 122,3, 123, 7, 125, 0, 126, 1, 127,4, 127,8, 128,2, 128,4, 128,7, 130,7, 133,8, 135,8, 135, 9, 136, 1, 155, 2, 155,7, 161,0 (Ar), 172,6 (1C, C = 0) ; 31P NMR (162 MHz, CDC13) δ -5,3 (s, P) ; IR 3063, 3031, 1647, 1601, 1506, 983 cm-1; Anal. Encontrado C, 72, 60; H, 5,05%, C36H29θ7P requer C, 71,52; H, 4,83%.
Sal dissódico de flavona-3-fostato
Figure img0044
Uma mistura de 4' -(benzildxi)-3-(dibenzilóxi fosforilóxi)flavona (1,00 g, 1,65 mmoles) e Pd(OH)2 (120 mg) em THE (10 mL) e água (15 mL) foi tratada com hidrogênio durante 3 d. A mistura foi filtrada (Celite) e a almofada lavada com THE e água e o filtrado foi concentrado. O residuo sólido foi dissolvido em THF (20 mL) e água (10 mL) e trietilamina (600 |1L, 4,3 mmoles) adicionadas e agitada em rt durante 30 min. A mistura foi concentrada e o residuo foi dissolvido em água. Material insolúvel foi removido através de filtração e a solução passada através de uma coluna de troca de ions. O eluente foi concentrado a fim de proporcionar um sólido, o qual foi recristalizado a partir de acetona/água a fim de proporcionar o fosfato como um sólido marrom (226 mg, 36%); mp 182-184°C; 3H NMR (500 MHz, D2O) δ 7,07 (app. d, 2H, J 8,5 Hz, H3',5'), 7,62 (t, 1H, J5,6 = J6,/ = 7,5 Hz, H6), 7,72 (d, J7,8 = 8,5 Hz, H8), 7,92 (t, 1H, J6,7 = J7,s = 7,5 H7), 8,18 (d, 1H, Js,6 = 7,5 Hz, H5) 8,19 (app. d, 2H, J = 8,5, H2',6'); 13C NMR (100 MHz, D2O) δ 118,4, 122,5, 122, 6, 124,9, 125, 3, 131,2, 134,4, 155, 0, 157,1, 157,2, 158,5 (Ar), 176,3 (IC, C = O); 31P NMR (162 MHz, CDC13) δ 0,60 (s, P) ; IR 3281, 1597, 1579, 1542, 1393, 903 cm'1; HRMS (ESI-) m/z 333, 0160, C15H10O7P [M + H]“ requer 333,0159.
Cloreto de 4'-(Benzilóxi)-3- (trimetilamôniopropilcarbonilóxi) flavona
Figure img0045
Uma mistura de cloreto de carbóxipropiltrimetilamônio (0,5 g, 2,7 mmoles) e cloreto de tionila (2 mL), 3,26 g, 27 mmoles) foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. O solvente foi evaporado e o residue dissolvido em nitrobenzeno (2 mL) e 4' -benzilóxiflavonol (344 mg, 1,00 mmol) foi adicionado. A solução foi agitada em temperatura ambiente durante 30 min, então, a 65 C durante 5 h. O nitrobenzeno foi removido sob pressão reduzida (banho de água a 80 °C) e o residuo foi purificado através de filtração através de um tampão de silica (EtOAc:MeOH:H2O a 7:2:1). O residuo foi lavado com THE e recristalizado a partir de etanol/aguarráz a fim de proporcionar um pó amarelo (30 mg); 3H NMR (399,7 MHz, CDC13) δ 2,01-2,13 (2H, m, CH2), 2,78 (2H, d, J 6, 8 Hz, CH2) , 3,09 (9H, s, NMe3), 3,25-3,35 (2H, m, CH2N) , 5,21 (2H, m, CH2Ph) , 7,24 (2H, app. d, J 9,2 Hz, H2', 6'), 7,33-7,49 (m, 5H, Ph) , 7,54 (1H, dd, J 8,0, 8,0 Hz, H6) , 7,81 (1H, d, Ji,e 8,4 Hz, H8), 7,88 (1H, d, J 8,0, 8,4 Hz, H7), 7,92 (2H, app. d, J 9,2 Hz, H3',5'), 8,07 (1H, d, J5,6 8,0 Hz, H5).
Cloreto de 4' -(Hidróxi)-3-(trimetilamôniopropilcarbonilóxi) flavona
Figure img0046
Uma mistura da flavona (30 mg) e Pd/C (5%, 5 mg) em EtOH (5 mL) foi agitada sob uma atmosfera de hidrogênio durante 2 h. A mistura foi filtrada e o solvente evaporado a fim de proporcionar um sólido amarelo.
Atividade Vaso-relaxante e Antioxidante de Derivados de Flavonóide Efeito de Derivados de Flavonóide sobre a Contração Ca2+- Induzida
Para determinar o efeito de flavonóides sobre as respostas ao influxo de Ca2+ extracelular, respostas contráteis à aplicação exógena de Ca2+ foram examinadas na presença de flavonóides solução com elevado teor de K+ isenta de Ca2+ (60 mM, KPSS). Anéis aórticos foram inicialmente equilibrados em uma tensão de repouso de 1 g em PBS normal isento de Ca2+ durante 45 minutos. O meio de banho foi, então, substituído por KPSS isento de Ca2+ durante 45 minutos para determinar uma contração de referência ao Ca2+ (3 x 10“3 M) . Após um periodo de reequilibrio de 30 minutos com PSS isento de Ca2+, as respostas contráteis cumulativas ao Ca2+ (10~5 - 3 x 10“3 M) foram determinadas em KPSS na presença de uma faixa de concentrações (10-8 - 10-4 M) de veiculo, 3',4'- dihidróxiflavonol, 3-hidróxiflavona-3-hemiadipato, 3',4'- dihidróxi-3-hemiadipato, 3-hidróxiflavona-3-fosfato. Um periodo de incubação de 20 minutos foi permitido para os flavonóides antes de exame das respostas ao Ca2+.
Relaxamento Pelos Derivados de flavonóide
Após testagem da integridade endotelial, os anéis foram repetidamente lavados e re-equilibrados durante 30 minutos antes da adição de PE (10-8 - 2 x 10-7 M) e 9,11- dideóxi-9a, 1 la-epóximetano-prostaglandina F2a (U46619, 10-9 - 10-8 M) para produzir uma força ativa na faixa de 40-60% de contração KPSS-induzida. O nivel de pré-contração foi combinado entre os vários grupos através de ajuste das concentrações de PE e U46619. Curvas de concentração- resposta cumulativas na faixa de 10-8 - 10-4 M foram conduzidas para 3',4'-dihidróxiflavonol, 3-hidróxiflavona- 3-hemiadipato, 3',4'-dihidróxi-3-hemiadipato, 3- hidróxiflavona-3-fosfato.
Experiments foram conduzidos na presença de um ésterase, butiril colinesterase (BuCHE, 1000 U/L) for the hemiadipato derivates e a fosfatase (1000 U/L) em the case de the fosfato derivados.
Efeitos de Derivados de Flavonóide sobre os Niveis de Superóxidoem um Ensaio in vitro
A produção de ânios de superóxido em segmentos aórticos isolados de rato foi determinada usando quimioluminescência com lucigenina. Anéis aórticos foram preparados conforme descrito acima e, então, colocados em Krebs-ácido N-[2-Hidróxietil]piperazina-N'-[2-etano sulfônico] gelado (tampão de HEPES) (composição (mM) ; NaCl 99,0, KC1 4,7, KH2PO4 1,0, MgSOí. 7H2O 1,2, D-glicose 11,0, NaHCOa 25,0, CaC12,2H2O 2,5, Na-HEPES 20,0).
Anéis aórticos foram pré-incubados durante 45 minutos a 37°C com urn pH de 7,4, em tampão de Krebs-HEPES contendo ácido dietiltiocarbâmico (DETCA, 10-3 M) para inativar a dismutase de superóxido e fosfato de dinucleotideo de β- nicotinamida adenina (NADPH, 10-4 M) como um substrato para oxidase de NADPH e 3',4'-dihidróxiflavonol (10“4 M) como um controle positivo, veiculo, 3-hidróxiflavona-3- hemiadipato, 3 ' , 4'-dihidróxi-3-hemiadipato, 3- hidróxiflavona-3-fosfato (10-8 - 10“4 M) . A emissão de fótons de base foi medida durante 12 ciclos em uma Optiplate com 96 cavidades contendo 0,3 ml por cavidade de tampão de Krebs-HEPES junto com lucigenina (5 x 10“5 M) e veiculo ou flavonóide (10-8 - 10-4 M) . Cada ciclo foi contado a cada um minuto. Após leitura de base ter sido realizada, os anéis aórticos incubados foram transferidos para as cavidades apropriadas e a emissão de fótons foi recontada conforme acima. O tecido foi, então, colocado em um forno a 65°C durante 48 horas para permitir que a produção de superóxido fosse normalizada para o peso do tecido seco.
Efeitos de Derivados de Flavonóide sobre os Niveis de Superóxido em um Ensaio in vitro na Presença ou Ausência de uma Esterase
Os efeitos do veiculo, 3',4'-dihidróxiflavona-3- hemiadipato (21) (DÍOHF3HA, IO’8 M - 10’4 M) e DiOHF (IO’4 M) na presença e ausência de Butiril colinesterase (BuCHE), 100, 300 e 1000 U/L) sobre o nivel de ânions de superóxido gerados em segmentos aórticos isolados de rato na presença de NADPH foram expressos como um percentual do controle. O método usado foi conforme descrito acima, exceto quanto à adição da butiril colinesterase.
Efeitos de Derivados de Flavonóide Sobre os Niveis de Superóxidoem um Ensaio in vitro na Presença ou Ausência de uma Fosfatase
O efeito de veiculo, 3-hidróxiflavona-3-fosfato (IO-8 to 10-4 M) na presença ou ausência de fosfatase (1000 U/L) sobre o nivel de ânions de superóxido gerados na aorta de rato na presença de NADPH expresso como um percentual do controle foi determinado conforme descrito acima para o 3' , 4'-dihidróxiflavona-3-hemiadipato. Um efeito mensurável sobre a geração de ânions de superóxido foi observado usando o 3-hidróxiflavona-3-fosfato na ausência da fosfatase. Acredita-se que isso ocorre em virtude da presença de fosfatases naturais no tecido isolado de rato.
Estudo in vivo dos Efeitos de Derivados de Flavonóide sobre a Função Vascular de um Rato
Uma dosagem unitária de uma solução aquosa de 3- hidróxiflavona-3-hemiadipato (15) foi administrada a um grupo de ratos Sprague Dawley machos anestesiados intravenosamente e a pressão sangüinea monitorada durante um periodo de tempo.
Uma redução significativa na pressão sangüinea de ratos foi observada, a qual é indicativa de vaso- relaxamento in vivo causado pelo derivado de flavonóide. Nenhum efeito foi observado quando uma solução aquosa foi administrada a um segundo grupo de ratos.
O experimento foi repetido com soluções aquosas de outros derivados de flavonóide sintetizados, as quais também resultaram em reduções distintas nas pressões sangüineas dos ratos.
Seleção Com Relação à Atividade e Farmacocinética Preparo da Aorta de Rato
A aorta torácica descendente de ratos foi rapidamente dissecada e colocada em solução de Krebs-bicarbonato. Tecido conectivo superficial e a gordura que circundava a aorta foram removidos e a aorta foi cortada em segmentos de 2-3 mm de comprimento e montada em banhos de órgãos.
Efeito de Flavonóides sobre o Relaxamento de ACh e SNP
Após lavagem e re-equilibrio durante 30 min, os anéis aórticos foram, então, submaximamente pré-contraidos com PE e U46619, os quais foram usados para produzir uma tensão ativa de 45-60% da contração máxima KPSS-induzida. Quando de investigação dos efeitos dos flavonóides flavonol, flavona-3-hemiadipato (F3HA), 3', 4' -dihidróxiflavona, 3', 4'-dihidróxiflavonol, 3', 4'-dihidróxiflavona-3-hemiadipato (DÍOHF3HA) e flavona-3- fosfato (F3P) sobre as respostas de vaso-relaxamento, os anéis foram incubados com um dos compostos durante 20 mins antes que fossem pré-contraidos submaximamente, seguido por uma curva de resposta à concentração cumulativa ao ACh (100 nM - 10 pM) ou SNP (10 pM -1 pM). Em experimentos usando F3P, fosfatase a 1000U/L foi usado em alguns experimentos para clivar o fosfato. Alguns experimentos foram conduzidos na presença e ausência de butiril colinesterase (BuCHE, 1000U/L) para clivar o adipato em DÍOHF3HA e F3HA.
Efeito de Flavonóis e Flavonas sobre a Contração PE- Induzida
Anéis foram incubados durante 20 minutos com DÍOHF3HA em uma faixa de concentrações (10-7 - 10-4 M) ou veiculo (sulfóxido de dimetila a 0,1%, DMSO). Uma curva de resposta à concentração de PE (10-9 -10-5 M) em (EI) anéis aórticos com endotélio intacto (EI) foi, então, realizada.
Experimentos foram conduzidos na presença e ausência de BuCHE (1000U/L) para clivar o adipato em DÍOHF3HA.
Efeito de Flavonóis sobre a Contração Ca2+-Induzida
Para determinar o efeito de flavonóides sobre as respostas ao influxo de Ca2+ extracelular, as respostas contráteis à aplicação exógena de Ca2+ foram examinadas na presença de flavonóides em solução com elevado teor de K+ isenta de Ca2+ (60 mM, KH—PSS) . Anéis aórticos foram inicialmente equilibrados em uma tensão de repouso de 1 g em PSS isento de Ca2+ durante 45 minutos. O meio de banho foi, então, substituído por PSS-K+ isento de Ca2+ durante 45 minutos para determinar uma contração de referência ao Ca2+ adicionado (3 mM) . Após um periodo de re-equilibrio de 30 minutos com PSS isento de Ca2+, as respostas contráteis cumulativas ao Ca2+ (10-5 - 3 x IO-3 M) foram determinadas em K+ PSS na presença de veiculo (DMSO a 0,1%) ou uma faixa de concentrações (10~7 - 10~4 M) de 3'-hidróxiflavonol, F3HA, DÍOHF3HA ou F3P. Um periodo de incubação de 20 minutos foi permitido para os flavonóides antes de exame das respostas ao Ca2+. Experimentos foram conduzidos na presença e ausência de BuCHE (1000U/L) para clivar o adipato em F3HA e DÍOHF3HA. Em experimentos usando F3P, fosfatase (1000U/L) foi usada em alguns experimentos para clivar o fosfato
Relaxamento pelos Flavonóides
Após testagem da integridade endotelial, os anéis foram repetidamente lavados e re-equilibrados durante 30 minutos antes da adição de PE (10-8 - 2 x 10-7 M) e 9, ll-dideóxi-9«, 11a- epóximetano-prostaglandina F2αD(U46619, 10-9 - IO-8 M) para produzir uma força ativa na faixa de contração KPSS- induzida de 40 - 60%. Curvas de concentração-resposta cumulativas na faixa de 10-7 - IO-4 M foram conduzidas para veiculo, 3'-hidróxiflavonol, F3HA, D1OHF3HA, F3P. Experimentos foram conduzidos na presença e ausência de BuCHE a 1000U/L para clivar o adipato em F3HA e DÍOHF3HA. Em experimentos usando F3P, fosfatase a 1000U/L foi usada em alguns experimentos para clivar o fosfato.
Efeito de Flavonóis e Flavonas sobre o Vaso-relaxamento ao ACh na Presença de Estresse Oxidativo
Respostas de relaxamento cumulativas de controle ao ACh foram comparadas com aquelas obtidas de anéis aórticos com endotélio intacto tratados com pirogalol (2 x 10-5 M) . Os efeitos do veiculo (DMSO a 0,1%), fosfatase (1000U/L) ou F3P (10“6-10-4 M) sobre as respostas ao ACh nos anéis aórticos isolados de rato expostos ao pirogalol (2 x 10-5 M) foram também determinados. Pirogalol foi adicionado quando os anéis aórticos tinham atingido um nivel estável de contração com PE e U44619 em um nivel de tensão KPSS- induzida entre 50 e 70% e 10 minutos foram permitidos antes de determinação das curvas de concentração-resposta cumulativas ao ACh. Em alguns experimentos usando F3P, fosfatase a 1000U/L foi usada para clivar o fosfato.
Efeito de DÍOHF3HA e F3P em ratos anestesiados
Ratos machos Sprague-Dawley (250-350 g) foram anestesiados com pentobarbitona sódica (60 mg kg-1, ip) . A traquéia foi isolada e uma cânula com tubo traqueal de polietileno inserida (I.D. de 2,0 mm) e o rato foi deixado respirar espontaneamente.
Medições de Pressão Arterial e Débito Cardíaco
Uma cânula foi inserida na artéria carótida direita e conectada com uma cânula cheia de solução salina heparinizada (O.D. de 0,75, I.D. de 0,58 mm) e conectada a um transdutor de pressão. A pressão arterial média e fásica foi continuamente medida e registrada em um poligrafo. 0 débito cardiaco foi derivado da pressão arterial fásica usando um tacómetro.
Efeitos Antioxidantes e Vasculares de flavonol e dihidróxiflavona
Flavonol e dihidróxiflavona (DiOHFne) causaram diminuições concentração-dependentes nos niveis de superóxido gerados por anéis aórticos de rato. Na concentração mais alta testada (0,1 mM), flavonol e DiOHFne reduziram os niveis de superóxido para 36+3% do controle. Flavonol não afeta os efeitos relaxantes do ACh ou SNP. DiOHFne causou relaxamento concentração-dependente de aorta de rato, o qual era mais fraco do que o efeito de DiOHF. Flavonol causou diminuições concentração-dependente na contração cálcio-induzida de anéis aórticos de rato, as quais eram relativamente fracas em comparação com as observações anteriores com DiOHF.
Efeitos Antioxidantes e Vasculares de flavona-3-hemiadipato (F3HA)
F3HA (10“7 M-10-4 M) não teve efeito inibitório sobre a geração de superóxido pela aorta de rato, mas a presença de butiril colinesterase (BuCHE, 100-1000 U/ml) causou um aumento concentração-dependente no efeito inibitório de F3HA (Figura 6) . F3HA inibiu as respostas contráteis à concentrações crescentes de cálcio extracelular somente na concentração mais alta testada (0,1 mM).
Efeitos Antioxidantes e Vasculares de Dihidróxi flavona-3- hemiadipato (DÍOHF3HA)
DÍ0HF3HA (10“7M-10“4M) não teve efeito inibitório sobre a geração de superóxido pela aorta de rato, mas a presença de butiril colinesterase (BuCHE, 1000 U/ml) revelou um efeito inibitório concentração-dependente. D1OHF3HA sozinho não teve efeito sobre as respostas relaxantes ao ACh ou SNP. Em contraste, na presença de BuCHE (1000 U/ml), DÍOHF3HA aumentou significativamente a sensibilidade da resposta relaxante ao SNP. Similarmente, o DÍOHF3HA sozinho teve pouco efeito sobre a contração cálcio-induzida de aorta de rato, mas na presença de BuCHE (1000 U/ml), o D1OHF3HA (0,1 mM) tinha um efeito inibitório equivalente ao DiOHF. Isso sugere que, quando o adipato foi removido pela esterase, o hemiadipato era igualmente ativo ao DiOHF precursor. Descobriu-se também que o DÍOHF3HA causa relaxamento direto dos anéis aórticos pré-contraidos de rato apenas na presença da esterase (Figura 11).
DÍOHF3HA (0,1, 0,3, 1, 3 mg/kg) foi injetado intravenosamente, permitindo pelo menos 30 min entre as injeções e as alterações de pico na pressão arterial média e débito cardíaco medidas. DÍOHF3HA causou diminuição dose- dependente na pressão arterial (Figura 12a) e débito cardiaco (Figura 12b). Em um grupo distinto de experimentos, ACh (0,3 mg/kg iv) e fenilefrina (PE, 30 mg/kg iv) foram injetados antes e 30 minutos após DÍOHF3HA (3 mg/kg iv), um momento quando a pressão arterial e débito cardiaco tinham retornado para os niveis de controle. D1OHF3HA intensificou significativamente a resposta depressora ao ACh e atenuou o aumento PE-induzido na pressão arterial (Figura 13).
Em anéis aórticos de rato, DÍOHF3HA (0,1 mM), na ausência ou presença de colinesterase, não teve efeito sobre o relaxamento endotélio-dependente em resposta ao ionoforo de cálcio A23187 ou à isoprenalina. DÍ0HF3HA (0,1 mM) fornecido sozinho não teve efeito sobre a contração PE- induzida, mas causou inibição acentuada na presença de esterase. O nivel de inibição era similar àquele observado em resposta à presença da mesma concentração (0,1 mM) de DiOHF.
Efeitos Antioxidantes e Vasculares de flavona-3-fosfato (F3P)
F3P ou fosfatase (1000 U/l) não tiveram efeito sobre a geração de superóxido pelos segmentos aórticos de rato, enquanto que F3P causou uma inibição concentração- dependente dos niveis de superóxido na presença de fosfatase. F3P, na presença de fosfatase, aumentou a sensibilidade de anéis aórticos de rato ao relaxamento pelo ACh, mas não SNP. Estresse oxidativo causado pela presença de pirogalol (2xl0-5 M) reduziu significativamente a resposta máxima ao ACh, mas a resposta foi restaurada pela presença de F3P mais fosfatase. Respostas ao SNP não foram alteradas por qualquer um desses tratamentos. F3P causou uma pequena inibição de contração cálcio-induzida, mas o efeito foi significativamente intensificado pela presença de fosfatase.
F3P (0,1, 0,3, 1, 3, 10 mg/kg) foi injetado intravenosamente, permitindo pelo menos 30 minutos entre as injeções e as alterações de pico na pressão arterial média e débito cardíaco medido (Figura 16a). D1OHF3HA causou uma diminuição dose-dependente na pressão arterial e débito cardiaco (Figura 12 a e 12b), mas a resposta depressora foi menor comparado com o DiOHF (1 mg/kg iv).
Sumário
Esses estudos envolveram uma avaliação da atividade vascular e antioxidante de flavonóis, 3', 4'- dihidróxiflavona (DiOHFne), 3', 4'-dihidróxiflavonol (DiOHF), flavona-3-hemiadipato (F3HA), 3', 4'-dihidróxi flavona-3-hemiadipato (DÍOHF3HA) e flavona-3-fosfato.
Flavona-3-hemiadipato (F3HA) sozinho não tinha atividade antioxidante ou vascular quando aplicado sozinho, mas a presença de uma colinesterase para clivar a substituição de adipato revelou a capacidade do F3HA de inibir a contração cálcio-induzida.
Dihidróxi flavona-3-hemiadipato (DÍ0HF3HA) não teve atividade antioxidante ou vascular quando aplicado sozinho, mas a presença de uma colinesterase para clivar a substituição de adipato revelou a capacidade do D10HF3HA de inibir os niveis de superóxido produzidos pela aorta de rato, inibir a contração cálcio-induzida e causar relaxamento direto de anéis aórticos de rato. Na presença da esterase, o nivel de atividade de DÍ0HF3HA era similar ao DiOHF. No rato anestesiado, o DÍ0HF3HA causou concentração diminuição dependente da concentração na pressão arterial e débito cardiaco.
Flavona-3-fosfato (F3P) sozinho não tinha efeito antioxidante ou vascular, mas a presença de uma fosfatase para clivar a substituição de fosfato revelou a capacidade do F3P de inibir os niveis de superóxido produzidos pela aorta de rato, inibir a contração cálcio-induzida e intensificar o relaxamento endotélio-dependente na presença de estresse oxidante. Na presença da fosfatase, o nivel de atividade de F3P era similar ao DiOHF. No rato anestesiado, F3P causou apenas uma pequena diminuição concentração- dependente na pressão arterial e débito cardíaco. Os efeitos eram muito menores do que observado com DiOHF.
Cardioproteção de 3’,4’-dihidróxi flavonol adipato (DÍOHF3HA) após isquemia do miocárdio e reperfusão
A capacidade do flavonol sintético, 3',4' dihidróxi flavonol adipato (DÍOHF3HA), de prevenir isquemia do miocárdio e lesão por reperfusão em ovelhas anestesiadas foi avaliada. Diferente do composto precursor, DiOHF, o derivado de adipato era solúvel em solução aquosa, particularmente água.
D1OHF3HA administrado em solução aquosa causou uma redução dose-relacionada no tamanho do enfarte, o qual era similar àquele causado por uma dose molar similar de DiOHF quando dissolvido em DMSO.
Infusão intravenosa de DÍOHF3HA não alterou os indices hemodinâmicos (pressão sangüinea arterial, débito cardiaco, pressão diastólica final do ventrículo esquerdo (LV-EDP).
Uma vez que o D1OHF3HA causou um grau equivalente de cardioproteção ao composto precursor após isquemia cardiaca-lesão por reperfusão em ovelhas anestesiadas, esses dados sustentam a hipótese de que esse novo composto derivado é eficazmente convertido ao composto precursor ín vivo. Preparo Cirúrgico
Cinco grupos de ovelhas merino anestesiadas (peso de 35-45 kg) foram examinados: (1) Controle (n = 5) (2) DiOHF (2 mg/kg, n = 2) (3) D10HF3HA (2,7 mg/kg, n = 3) (4) DiOHF (5 mg/kg, n = 3) (5) DÍOHF3HA (6,6 mg/kg, n = 4).
Anestesia foi induzida através de tiopentona sódica intravenosa (15 mg/kg) e, após intubação traqueal, foi mantida através de isoflurano (1,5-2%). Um cateter foi inserido na artéria facial direita para amostragem de sangue arterial e monitoramento da pressão arterial. Infusões intravenosas foram feitas via um cateter inserido na veia jugular. 0 coração foi exposto através de uma toracotomia esquerda realizada no quarto espaço intercostal. Um manómetro com ponta de cateter 4F foi inserido através do átrio esquerdo no ventrículo esquerdo para medir a pressão ventricular esquerda (LVP). Uma cânula silástica adicional foi inserida no apêndice atrial esquerdo para a injeção de lignocaina e para infusão de azul de Evan. A artéria coronária descendente anterior esquerda (LAD) foi dissecada do epicárdio imediatamente distal a seu segundo ramo diagonal e uma sonda de fluxo de 2 mm de tempo de trânsito foi colocada em torno do mesmo para monitorar o fluxo sangüineo na LAD. Um fio de seda foi passado sob a LAD proximal à sonda e ambas as extremidades do fio foram presas a um tubo plástico para formar um laço vascular.
Projeto Experimental
Os animais foram deixados estabilizar durante 10-15 minutos após o término do procedimento cirúrgico. As ovelhas foram, então, aleatoriamente divididas em diferentes grupos de tratamento. Todas as ovelhas tinham registros de linha de base de 30 minutos, seguido por 1 hora de isquemia e 3 horas de reperfusão.
Durante o curso do experimento, medições hemodinâmicas foram registradas em intervalos de 5 minutos e amostras do sangue foram tomadas em pontos de tempo designados. Após 30 minutos de isquemia, tratamento com flavonol foi administrado. DiOHF foi dissolvido em 2 ml de DMSO mais 14 ml de polietileno glicol:água (1:1) . DÍOHF3HA foi dissolvido em 20 ml de Na2COa a 0,1 M. Os fármacos foram fornecidos a 1 ml/min i.v. As duas doses de DÍOHF3HA (2,7 mg/kg e 6,6 mg/kg) foram escolhidas para obter doses molares equivalentes ao composto DiOHF precursor (a 2 mg/kg e 5 mg/kg, respectivamente). Animais de controle não receberam quaisquer soluções intravenosas. Lignocaina foi usada, conforme requerido, para aliviar as arritmias.
Determinação da Área Em Risco e Tamanho do Enfarte
A área de miocárdio em risco e tamanho do enfarte foram delineaados através de coloração com azul de Evan e cloreto de trifeniltetrazólio (TTC). Após 3 horas de reperfusão, a LAD foi re-ocluida no local de oclusão original. Imediatamente após injeção intravenosa de pentobarbitona (100 mg kg-1) para parar o coração, o corante azul de Evan (1,5%, 40 ml) foi injetado no átrio esquerdo para definir o risco de miocárdio. O coração foi rapidamente removido e o ventrículo esquerdo foi dividido em seções transversais de cerca de 1 cm de espessura. A área de risco não corada foi rastreada sobre as mesmas transparências. As seções foram, então, incubadas em tampão de fosfato de sódio a 0,1 M contendo TTC a 1% durante 20 min (37°C, pH de 7,4). A área enfartada foi rastreada sobre as transparências. A área de miocárdio em risco e tamanho do enfarte foram medidos através de planimetria computadorizada. A primeira foi expressa como um percentual do volume ventricular esquerdo total (AR/LV%) e o tamanho do enfarte foi expresso como um percentual da área de miocárdio em risco (IS/AR%).
Marcadores Plasmáticos para Enfarte do Miocárdio
Amostras de sangue arterial (5 ml) foram coletadas em tubos heparinizados resfriados na linha de base, durante isquemia e em três pontos de tempo durante o periodo de reperfusão (1 hora, 2 horas e 3 horas) . Após centrifugação a 4°C, amostras de plasma foram armazenadas a -20°C até medição para determinar os niveis de dehidrogenase de lactado e quinase de creatinina.
Resultados
No resumo a seguir dos resultados, o tamanho de enfarte do miocárdio nos 5 diferentes grupos de tratamento é reportado. Dada a eficácia da maior dose de DÍ0HF3HA, alterações em todos os outros parâmetros são reportadas apenas com relação aos animais do grupo de Controle versus os animais do grupo com DÍ0HF3HA (6,6 mg/kg).
No grupo de Controle, uma das ovelhas morreu em virtude de fibrilação ventricular nos primeiros 10 minutos de reperfusão. Assim, os dados de controle são baseados em n = 4 ovelhas.
Tamanho de Enfarte do Miocárdio
Nesse estudo, a área do ventrículo esquerdo submetida à isquemia (AR) entre os 5 diferentes grupos de tratamento nas ovelhas era similar, (11%-20%, Figura 17, painel esquerdo). Em contraste, o tamanho do enfarte, normalizado para a AR, era menor nos grupos tratados com DiOHF e DÍ0HF3HA comparado com os animais de controle (Figura 17, painel direito) . Especificamente, o tamanho do enfarte normalizado para a área em risco (IS/AR) foi reduzido em 8314% em controles para 4918% pelo DÍ0HF3HA (6,7 mg/kg) e para 4718% pelo DiOHF (5 mg/kg) . Com as menores doses de DÍ0HF3HA (2,7 mg/kg) e DiOHF (2 mg/kg), a IS/AR era de 64% e 73%, respectivamente.
Fluxo de LAD
O fluxo de LAD de linha de base era similar nos grupos de ovelhas com Controle e DÍ0HF3HA (6,6 mg/kg) (7-9 ml/min). Durante isquemia, o fluxo de LAD caiu para zero em todos os animais. Durante o estágio precoce de reperfusão, hiperperfusão coronariana ocorreu em todas as ovelhas. Geralmente, esse aumento transitório no fluxo de LAD retornou para os niveis de linha de base após 30-60 mins de reperfusão. A regressão do fluxo pareceu ser mais rápida no grupo com DÍOHF3HA.
Resposta Hemodinâmica à Isquemia/Reperfusão
A pressão arterial de linha de base não era diferente entre os dois grupos de ovelha (média durante 30 mins, ~80 mmHg) . Em contraste, HR em repouso era menor (P<0, 05) nas ovelhas de controle (9014 bpm) comparado com as ovelhas tratadas com DÍOHF3HA (10513 bpm). Essa diferença permaneceu no decorrer do curso do experimento. A MAP e HR ficaram inalterados durante o periodo de infusão de 20-min de administração de D1OHF3HA. Além disso, nenhuma alteração acentuada na pressão arterial ou HR foi observada no grupo de ovelhas durante isquemia do miocárdio e reperfusão.
Resting LV-EDP em repouso não era diferente entre os dois grupos de ovelha (~11 mmHg), mas o valor positivo máximo do primeiro derivado de LVP (dP/dtmax) era menor (P<0,05) na ovelha de controle (1454162 mmHg/s) comparado com a ovelha tratada com D1OHF3HA (19671103 mmHg/s). Essa diferença permaneceu no decorrer do curdo do experimento. LV-EDP e dP/dtma estavam inalteradas durante o periodo de infusão de 20-min de administração de DÍOHF3HA. Além disso, nenhuma alteração acentuada na LV-EDP e dP/dtmax foi observada em qualquer grupo de ovelhas durante isquemia do miocárdio e reperfusão. Os benefícios hemodinâmicos do fármaco se mostraram mais claramente após 24 horas de reperfusão.
Em ovelhas anestesiadas, após 1 hora de isquemia e 3 horas de reperfusão, a dehidrogenase de lactato no plasma aumentou em 227 1 141 U/L no grupo de controle (n = 3) e em 67 1 32 U/L no grupo tratado com D1OHF3HA (n = 4) . Nessas ovelhas, a quinase de creatina no plasma aumentou em 2411 1 958 U/L no grupo de controle e em 1579 1 936 U/L no grupo tratado com D1OHF3HA.
Recuperação de derrame isquêmico em ratos usando flavonóides sintéticos Marcadores Plasmáticos Para Enfarte do Miocárdio
Derrame isquêmico foi estudado em ratos conscientes, com monitoramento diário da função neurológica e avaliação morfológica post mortem de enfartes cerebrais a 72 horas após derrame. Isquemia cerebral transitória unilateral e reperfusão foram induzidas em ratos conscientes através de injeção do potente vasoconstrictor endotelina-1 fora, mas próximo da artéria cerebral mediana direita, MCA, (via um tubo guia pré-implantado). O subseqüente derrame foi graduado em uma escala de 0 a 5 pelo comportamento imediato e compostos neuroprotetores potenciais foram injetados intravenosamente 3 h após o derrame e em intervalos de 24 horas após.
Preparo Cirúrgico
Ratos machos Hooded Wistar (280-340 g) foram anestesiados com pentobarbitona sódica em um volume de 0,6 ml (60 mg/kg i.p.) para inserção de um catéter intravenoso (i.v.) na veia jugular para administração aguda de droga. Uma cânula guia de aço inoxidável de 23-gauge foi, então, estereotaxicamente implantada no córtex piriforme 2 mm dorsal à MCA direta (0,2 mm anterior, -5,2 mm lateral e - 5,9 mm ventral). A cânula foi presa com cimento de acrilato dental e dois pequenos parafusos inseridos no crânio. O escalpo foi fechado com suturas. Ratos foi alojados individualmente em um ciclo de dia/noite de 12h em uma temperatura de 18-22 °C e deixados se recuperar durante 5 dias antes de indução de derrame.
Indução de Derrame
Vaso constrição da artéria cerebral mediana direita (MCA) foi induzida em ratos conscientes através de administração do potente agente vasoconstrictor endotelina- 1 (ET-1) (60 pmoles em 3 pl de solução salina durante 10 min) via um injetor de 30-gauge que se projetava 2 mm além da extremidade da cânula de guia estereotáxica previamente implantada. O injetor foi mantido no lugar através de um manguito com poli-tubulação e o rato foi colocado em uma caixa de Plexiglass transparente para observação durante injeção de ET-1. Durante indução de derrame, nós observamos andar em círculos no sentido contrário aos ponteiros do relógio, encolhimento e andar com dificuldade na pata dianteira contra-lateral, validando a colocação correta da cânula. Essas alterações comportamentais ocorreram dentro de 2 a 10 minutos do inicio da injeção de ET-1 e comportamentos similares foram reportados por outros pesquisadores empregando esse modelo. Nós atribuímos uma escala de classificação de gravidade de derrame baseado nessas alterações comportamentais durante o derrame e demonstramos que ratos tratados com veiculo atribuídos com maiores classificações de derrame têm maiores volumes de enfarte e déficits neurológicos. Ratos que não mostraram qualquer alteração comportamental foram considerados não tendo derrame e foram excluídos do estudo. Ratos sham- injetados sofreram implante da cânula, mas não receberam qualquer injeção de ET-1. As temperaturas retais foram tomadas com uma sonda com termistor antes de derrame e em intervalos de 30 ou 60 minutos durante 3 horas após o derrame.
Avaliação de Conseqüências Funcionais
Todos os testes comportamentais foram conduzidos antes de quaisquer procedimentos (pré-cirurgia, dia 1), imediatamente antes de oclusão de MCA ET-l-induzida (pré- isquemia, dia 6) e 24, 48 e 72 horas após oclusão da MCA ET-l-induzida. O comportamento de cada rato foi comparado com pré-derrame, assim, cada rato atuava como seu próprio controle. Todos os ratos receberam uma etiqueta, de modo que o investigador estava às cegas com relação à condição de tratamento. Anormalidades neurológicas foram avaliadas com o uso de um escore de déficit neurológico baseado na detecção de postura anormal e hemiplegia. Posturas anormais foram avaliadas suspendendo-se os ratos pela cauda e classificando-se a contorção do tórax e extensão das patas dianteiras. Hemiplegia foi avaliada quando os ratos foram colocados sobre uma plataforma elevada. Os déficits foram considerados como estando presentes quando a pata traseira contra-lateral ao hemisfério enfartado deslizava da borda da plataforma e/ou quando a pata dianteira contra-lateral deslizava quando o focinho e bigodes não estavam em contato com a superfície. Todos os comportamentos foram classificados sobre a seguinte escala: 0 = sem déficit; 1 = leve; 2 = moderado; e 3 = grave. Assim, quando os escores foram totalizados, o escore de déficit neurológico máximo era de 12. Um escore de 0 era considerado normal.
Hemi-neglect sensório foi avaliado usando um teste consistindo de colocação de fitas adesivas (etiqueta adesiva Avery, circulos de 100 mm de diâmetro) sobre a região distal-radial de cada pulso. Colocação da primeira fita foi aleatória entre os membros contra-lateral e ipsilateral. A fita sobre ambas as patas dianteiras foi tocada simultaneamente antes de colocação do animal em uma gaiola de Plexiglass e, medindo com um cronômetro, a latência até toque e a latência até remoção por cada estimulo das patas dianteiras contra-lateral e ipsilateral foram registradas. O teste foi terminado a 180 segundos se as fitas já não tivessem sido removidas.
Tratamento com Fármaco
Todos os compostos foram fornecidos intravenosamente como uma única dose em bolo 3 horas pós-derrame em uma concentração a qual proporcionou 37 pmoles/kg. Controles com veiculo também foram usados e eram específicos para cada composto. Após a primeira dose 3 horas pós-derrame, os animais foram injetados uma vez ao dia com fármaco ou veiculo a 24 e 48 h. 0 volume total de injeção para cada composto foi de aproximadamente 300 pl para um rato de 300 g, com um fluxo de solução salina de imediato de 200 pl para assegurar administração total do fármaco.
Quantificação de Dano Isquêmico
Ratos foram decapitados 72h após isquemia e seus cérebros foram removidos e congelados em nitrogênio liquido e armazenados a -80°C. Seções coronais de criostato (16 pm) foram cortadas em oito planos coronais predeterminados através de do cérebro de -3,2 a 6,8 mm com relação a Bregma. O enfarte foi medido em seções não coradas triplas baseado na observação de que as áreas danificadas nas seções de cérebro montadas em lâminas não coradas estão visíveis a olho nu como áreas escuras ou congeladas claramente definidas, enquanto que tecido normal é essencialmente translúcido. Através de aplicação do principio de propagação de luz balística e usando um aparelho simples combinado com um sistema de análise de imagem computadorizado, a seção montada na lâmina não corada mostrando áreas danificadas era claramente visivel sobre o monitor. A luz passa diretamente através do tecido não danificado transparente para a câmera, enquanto que os raios de luz sofrem difração pelo tecido danificado. As áreas de dano podem, então, ser facilmente esboçadas, selecionadas e registradas usando o sistema de análise de imagem. O volume total de enfarte foi calculado através de integração da área seccional transversal de dano em cada nivel estereotáxico com as distâncias entre os niveis. A influência do edema sobre a área de enfarte foi corrigida aplicando-se a seguinte fórmula: (área de hemisfério normal/área de hemisfério enfartado) x área de enfarte. As lâminas também receberam uma etiqueta, de modo que o investigador não estive ciente da condição de tratamento.
Classificação de Derrame
Ratos mostraram déficits comportamentais neurológicos indicativos de derrame dentro de 2-10 minutos de injeção de ET-1, mas não após um volume igual de solução salina apenas. Esses déficits incluíam respostas comportamentais especificas, tais como encolhimento e falha em estender a pata dianteira contra-lateral e andar em círculos na direção contra-lateral à oclusão. Comportamento de arrumação precedeu o andar em círculos e foi observado em quase todos os ratos. Arrumação ocorreu de uma maneira estereotipada, com arrumação facial sendo seguido por arrumação do corpo todo em um movimento continuo. Outros comportamentos, tal como batimento dos dentes, mordidas na gaiola e ir dormir ou ferimentos da lingua foram observados menos freqüentemente. Essas respostas comportamentais observadas no momento de derrame puderam ser classificadas baseado em seu grau e gravidade. Nós também mostramos que há uma correlação positiva entre a classificação do derrame e o escore de déficit neurológico e classificação do derrame e volume de enfarte em ratos tratados com veiculo (n = 40). Após classificação, ratos com derrame foram agrupados baseado em uma classificação de derrame igual, de modo que as classificações de derrame estivessem uniformemente distribuídas entre os grupos de tratamento com veiculo e fármaco. Esses ratos foram, então, etiquetados de modo que as avaliações restantes pudessem ser realizadas às cegas com relação ao tratamento.
Estratificação de tratamento com fármaco
Modelos prognósticos são usados para prever as conseqüências funcionais e sobrevivência em pacientes humanos com derrame de forma a sustentar o tratamento clinico de pacientes com derrame e estratificar corretamente os grupos de tratamento em experimentos clinicos. 0 uso de modelos similares em animais experimentais com derrame não foi tentado anteriormente. No modelo ET-1 de oclusão de MCA, é possível observar respostas comportamentais durante indução de derrame e atribuir uma escala de classificação de gravidade do derrame baseado nessas respostas. Portanto, é possivel prever quais animais terão derrames graves e quais animais terão derrames brandos a moderados. Esse processo também permite alguma previsão da área de risco, a qual é potencialmente poupada por agentes neuroprotetores após derrame. Derrames graves deixam pouca área de risco para neuroproteção fornecida, pelo fato de que o enfarte ocupa mais de 70% do volume do hemisfério total. Derrames brandos a moderados, contudo, revelam uma maior área de risco para preservar e, portanto, apresentam uma maior oportunidade para neuroproteção. Na verdade, estudos clinicos por MRI em pacientes estão sendo usados agora para estratificar pacientes de uma maneira similar de forma a determinar quem é mais provável de se beneficiar de futuro tratamento com fármaco. Por essa razão, nós removemos animais que tinham classificações de derrame grave de 4 ou 5 no final de análise do tratamento com fármaco e re-analisamos os dados em grupos com derrame brando a moderado (classificações 1- 3) para todos os futuros compostos testados.
34'-Dihidróxiflavonol (DiOHF)
Experimentos iniciais conduzidos em nosso laboratório avaliaram o potencial neuroprotetor retardado de DiOHF (10 mg/kg) fornecido intravenosamente 3 horas pós-inicio de derrame. Cada rato recebeu 3 doses em bolo de DiOHF dissolvidas em DMSO a 20%, polietileno glicol a 40% e água para injeção estéril a 40%. Administração de 3',4'- Dihidróxiflavonol (DiOHF) em ratos com derrames modestos (escores 2-3, n = 6 e 5, composto e veiculo, respectivamente) reduziu os déficits neurológicos a 48 e 72 h e eliminou o aumento nos escores de hemineglect ("teste com fita adesiva") após derrame, gue foram observados nos ratos de controle aos quais foi fornecida endotelina mais veiculo para fármaco apenas. De modo importante, DiOHF reduziu o volume de enfarte produzido no córtex cerebral e impediu completamente o desenvolvimento de enfarte no estriato do cérebro.
Tratamento com DiOHF (10 mg/kg) em ratos com derrame brando a moderado reduziu significativamente a área de enfarte através do córtex e do estriato comparado com tratamento com veiculo. Tratamento com DiOHF também melhorou significativamente as conseqüências neurológicas em ratos com derrame brando a moderado, em comparação com ratos tratados com veiculo.
3 ' , 4 ' -Dihidróxif lavona-3-hemiadipato(DÍOHF3HA)for tratamento de Derrame
Cada um rato recebeu 3 doses em bolo de DÍOHF3HA (15mg/kg/dia i.v.) dissolvidas em uma solução salina tamponada com NacCOa (O,1M, pH de 7,8) para injeção.
Figure img0047
Após derrame, não houve perda de peso significativa em qualquer grupo de tratamento. A temperatura de núcleo antes de derrame em ambos os grupos de tratamento estava dentro dos limites fisiológicos normais. Após derrame, houve um aumento significativo na temperatura a 30 minutos em ambos os grupos de tratamento, contudo, a temperatura retornou para dentro dos niveis normais após esse momento. Após injeção intravenosa de veiculo ou D1OHF3HA, a temperatura pareceu aumentar em ambos os grupos de tratamento, mas essa não era significativamente diferente da temperatura pré- derrame.
Após derrame, os ratos em ambos os grupos de tratamento exibiram escores de déficit neurológico significativamente maiores 24, 48 e 72 horas pós-derrame quando comparado com escores pré-derrame. Tratamento com DÍOHF3HA (15 mg/kg/dia) melhorou, mensuravelmente, os escores de déficit neurológico a 24, 48 ou 72 horas pós- derrame quando comparado com ratos tratados com veiculo. Ratos tratados com veiculo mostraram latência aumentada até remover as etiquetas adesivas da pata dianteira contralateral afetada com derrame quando comparado com o lado ipsilateral (P<0,05, RM-ANOVA bifatorial com repetição de 2-fatores, horas após derrame e lado). Esse efeito foi eliminado após tratamento com DÍOHF3HA (15 mg/kg/dia).
A área de enfarte através do córtex foi significativamente reduzida após tratamento com DÍOHF3HA (15 mg/kg i.v.) quando comparado com veiculo.
Em resumo, tratamento com DÍOHF3HA (15 mg/kg) melhorou significativamente a função neurológica no teste hemineglect e também reduziu a área de dano no após derrame comparado com tratamento com veiculo.
Efeito de DÍ0HF3HA em derrames brando a moderado
Um grupo selecionado de ratos foi estudado com derrames brando a moderado.
Figure img0048
Os ratos não perderam peso apos derrame brando a moderado em qualquer grupo de tratamento. A temperatura do núcleo antes de derrame em ambos os grupos de tratamento estava dentro dos limites fisiológicos normais. Após derrame brando a moderado, houve um aumento significativo na temperatura a 30 minutos em ambos os grupos de tratamento, mas a temperatura retornou para dentro dos niveis normais após esse momento.
Após derrames brando a moderado, ratos em ambos os grupos de tratamento exibiram escores de déficit neurológico pré-derrame e 24, 48 e 72h pós-derrame significativamente maiores quando comparado com escores pré-cirurgia. Tratamento com DÍOHF3HA (15 mg/kg/dia) não tive efeito sobre os escores de déficit neurológico quando comparado com ratos tratados com veiculo. Ratos tratados com veiculo com derrames brando a moderado mostraram uma latência aumentada até toque das etiquetas adesivas da pata dianteira contra-lateral afetada com derrame quando comparado com o lado ipsilateral, a 24 e 48 horas (P<0,05, RM-ANOVA bifatorial com repetição de 2-fatores, h após derrame e lado). Ratos tratados com veiculo também mostraram uma latência aumentada até remover as etiquetas adesivas a 24 hr (P<0,05, RM-ANOVA bifatorial com repetição de 2-fatores, horas após derrame e lado). Esses efeitos foram eliminados após tratamento com DÍOHF3HA (15 mg/kg/dia) (Figura 18).
A área de enfarte em ratos com derrame brando a moderado através do córtex foi significativamente reduzida após tratamento com DÍOHF3HA (15 mg/kg i.v. por dia) quando comparado com veiculo (Figura 19). Tratamento com DÍOHF3HA também reduziu significativamente a área de enfarte através do estriato.
Em resumo, tratamento com DÍOHF3HA (15 mg/kg) em ratos com derrame brando a moderado reduziu significativamente a área de enfarte através do córtex e do estriato comparado ao tratamento com veiculo. Tratamento com DÍOHF3HA também restaurou significativamente a função neurológica no teste hemineglect.
A menos que de outro modo indicado, todos os valores nos gráficos são as médias, com média s.e. mostrada pelas linhas verticais.
Qualquer discussão de documentos, atos, materiais, dispositivos, artigos ou semelhante os quais tenham sido incluídos na presente especificação é unicamente para fins de proporcionar um contexto para a presente invenção. Esses não devem ser tomados como uma admissão de que qualquer um ou todos esses assuntos formam parte da base da técnica anterior ou eram o conhecimento geral no campo relevante à presente invenção, uma vez que existiam antes da data de prioridade de cada uma das reivindicações do presente pedido.
No decorrer da presente especificação, a palavra "compreende" ou variações, tais como "compreendem" ou "compreendendo", deverá ser entendida como implicando na inclusão de um elemento, inteiro ou etapa ou grupo de elementos, inteiros ou etapas estabelecido, mas não a exclusão de qualquer outro elemento, inteiro ou etapa ou grupo de elementos, inteiros ou etapas.
Será apreciado por aqueles habilitados na técnica que numerosas variações e/ou modificações podem ser feitas na invenção conforme mostrado nas modalidades especificas sem se desviar do conceito inventivo ou escopo da invenção, conforme amplamente descrito. As presentes modalidades, portanto, devem ser consideradas, em todos os aspectos, como ilustrativas e não restritivas.

Claims (22)

1. Composto caracterizado pelo fato de ser da fórmula geral I:
Figure img0049
em que: ----indica uma ligação simples ou dupla; e (i) Rl, R2, R3, R4, R5 são selecionados independentemente a partir de H, OH ou um grupo conforme a Fórmula (Ia):
Figure img0050
em que O é oxigênio; L e D estão ausentes e E é um éster conforme a Fórmula (Ic):
Figure img0051
em que Q é um alquileno linear ou ramificado não substituído de 1 a 6 átomos de carbono; W é O; e X é H, alquil substituído ou não substituído, de 1 a 6 átomos de carbono, um sal mono-catiônico ou um sal catiônico de amónio; e desde que um de Rl, R2, R3, R4, R5 seja diferente de H ou OH; ou o seu sal farmaceuticamente aceitável.
2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R4 e R5 são ambos H.
3. Composto, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que RI e R2 são ambos OH.
4. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que cada um de Rl, R2 e R4 é H.
5. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que denota uma ligação dupla, Q é (CH2) n, em que n é um número inteiro de2a6eXéH.
6. Composto, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que n é 4.
7. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser selecionado do grupo que compreende 3- (benziloxicarbonilbutilcarboniloxi) flavona; 3- hemiadipato de 3-hidroxifavona; 4 (Benziloxi) -3- (benziloxicarbonilbutilcarboniloxi) flavona; 3-hemiadipato de 4'-hidroxifavona; 3 ', 4'-dibenziloxi-3- (benziloxicarbonilbutilcarboniloxi) flavona; 3 ', 4'-Di- hidroxifavavona 3-hemiadipato; 3,4'-Di- (benziloxicarbonilbutilbutilcarboniloxi) flavona; flavona 3,4'- bis (hemiadipato); 3,7-di- (benziloxicarbonilbutilcarboniloxi) flavona; 3,7-di-hidroxifavavona 3,7-bis (hemiadipato); Éster de amónio 4'-hidroxi-3-hidroxiflavona-3-quaternário; Sal dissódico de 4 '- (benziloxi) -3- (dibenziloxifosforiloxi) flavona ou sal dissódico de 3-hidroxifavavona-3-fosfato.
8. Composição caracterizada por compreender um veiculo ou diluente farmaceuticamente e/ou veterinariamente aceitável, juntamente com um composto conforme definido em qualquer uma das reivindicações anteriores.
9. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado para uso na prevenção e/ou tratamento de uma (s) doença (s) em um indivíduo associado à presença de espécies oxidantes reativas (ROS).
10. Composto, de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que o sujeito necessitado de tal tratamento está em risco de desenvolver isquemia.
11. Composto, de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que o sujeito está sofrendo lesão de isquemia e/ou reperfusão como resultado de uma condição aguda ou crônica.
12. Composto, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que a condição crônica é selecionada a partir de câncer, doença cerebrovascular, doença vascular pulmonar, aterosclerose, doença arterial, doença cardíaca congestiva, doença coronariana, doença vascular periférica, diabetes, hipertensão, enxaqueca, queimaduras, crônica, doença pulmonar obstrutiva e doença vascular da retina.
13. Composto, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que a condição aguda é selecionada a partir de acidente vascular cerebral, infarto do miocárdio, trauma mecânico resultante de lesão por esmagamento ou cirurgia.
14. Composto, de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que a cirurgia é cirurgia vascular.
15. Composto, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que a cirurgia vascular é ponte de safena e / ou cirurgia de transplante.
16. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado para uso na prevenção, atraso no inicio e/ou lentidão na progressão da aterosclerose e/ou doença cardiaca coronária em um sujeito.
17. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado para uso na prevenção e/ou na melhoria de danos a um indivíduo causados por isquemia e/ou lesão por reperfusão.
18. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado para uso na prevenção e/ou na melhoria de danos a um indivíduo causados pela administração de um agente terapêutico.
19. Composto, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que o agente terapêutico é um agente terapêutico oxidativo.
20. Composto, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que o agente terapêutico é um agente anticâncer.
21. Composto, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que o agente anticâncer é antraciclina e seus homólogos.
22. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 9 a 21, caracterizado pelo fato de que o composto é administrado ao sujeito por via oral.
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