CN104592246A - 一种黄酮类化合物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明关于一种脱水淫羊藿素的水溶性衍生物及其制备方法，具体涉及一种黄酮类化合物及其制备方法和应用。该衍生物一方面保留了脱水淫羊藿素治疗冠心病、脑缺血和脑梗死疾病的药理活性，同时改善了脱水淫羊藿素的水溶性，从而可以广泛应用于溶液剂、注射剂或颗粒剂等各种药物制剂中供临床使用，为临床上预防和/或治疗冠心病、脑缺血或脑梗死疾病提供了一种新的用药选择。此外，本发明所述化合物或其衍生物或其盐制备方法简单，便于产业化推广应用。

Description

一种黄酮类化合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于药物化学领域，具体涉及一种脱水淫羊藿素的水溶性衍生物及其制备方法，以及该化合物作为活性物质在制备治疗冠心病、脑梗死和脑梗死疾病药物中的应用。

背景技术

脱水淫羊藿素（AICA，anhydroicaritin），又名环淫羊藿苷元（CIT，cycloicaritin），化学名为5-二羟基-2-（4-甲氧基-苯基）-8,8-二甲基-9,10-二氢-8H-吡喃并[2,3-f]色烯-黄酮，属黄酮类化合物，结构式为：

脱水淫羊藿素可以从传统中药材淫羊藿中分离得到，或由淫羊藿苷酸水解制备。发明专利CN1919191B公开了脱水淫羊藿素在制备防治冠心病、脑梗死疾病药物中的应用，脱水淫羊藿素作为活性成分所制备药物制剂的给药途径包括口服、注射和局部给药。

但脱水淫羊藿素的水溶性和脂溶性都很差，口服给药吸收率低，生物利用度低。为解决这一问题，贾晓斌等在《环淫羊藿苷元微乳的制备及肠吸收研究》（中国中药杂志，2010年2月，第35卷第4期，第435-438页）一文中公开了将脱水淫羊藿素制成微乳体系，能够促进其肠吸收；席与斌等在《环淫羊藿苷元脂质体的制备及其理化性质研究》（广东药学院学报，2010年12月，第26第6期，第556-560页）一文中公开了一种将脱水淫羊藿素制成脂质体混悬液的方法，以制备注射剂。但是，上述方法未能提高脱水淫羊藿素本身的水溶性，载体材料对药物的包载能力有限，而各种溶剂或载体材料的引入会对药物的安全性和稳定性造成不利影响，且制备工艺复杂，成本较高，使其推广应用受到限制。

中国专利（CN101637467A）公开了一种环淫羊藿苷元，即脱水淫羊藿素的磷脂复合物及其制备方法，以及在制备治疗骨质疏松症药物中的应用。该专利公开的制备方法是将脱水淫羊藿素与磷脂按照一定质量比例加入到有机溶剂中反应，制得脱水淫羊藿素磷脂复合物。依据该专利说明书记载的溶解度实验数据，脱水淫羊藿素不溶于水，而脱水淫羊藿素磷脂复合物在水中的溶解度为0.91mg/ml，属于微溶，不易制成对药物有效成分的溶解度要求较高的药物剂型，如溶液剂、注射液或冻干粉针剂等。

因此，实有必要开发一种既能保留脱水淫羊藿素在冠心病或脑缺血等疾病方面的药理活性，同时又具有较好水溶性的物质，使其可以在溶液剂、注射剂或颗粒剂等制剂中应用，拓宽其临床用药的剂型选择。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明旨在寻找一类脱水淫羊藿素衍生物，该类衍生物一方面能够保留脱水淫羊藿素药理活性，为临床上预防和/或治疗心脑血管疾病，例如冠心病、脑缺血或脑梗死提供一种新的用药选择；另一方面具有良好的水溶性，可以用于制备溶液剂、注射剂或颗粒剂等各种药物制剂，适于推广应用。

为实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案：

本发明提供式Ⅰ化合物或其衍生物或其盐：

其中，R₁和R₄各自为OH或OA，A为低级烷基；R₂、R₃、R₅和R₆各自为H或低级烷基；R₇为OH、低级烷氧基或低级酰氧基；X为卤素；n为1至8中任一自然数。

优选地，R₁和R₄各自为OH或OMe；R₂、R₃、R₅和R₆各自为H；R₇为OMe或OAc；X为Cl；n为1、2、3或4。

在一具体实例中，本发明所述式Ⅰ化合物中R₁为OH；R₄为OMe；R₂、R₃、R₅和R₆各自为H；R₇为OAc；X为Cl；n为1，其化学结构式如式II所示：

本发明所述式I化合物的盐是指式I化合物的制药学上可接受的盐，根据取代基的种类，有时形成酸加成盐或与碱所成的盐。具体可例举：与盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、硝酸、磷酸等无机酸的酸加成盐；或者，与甲酸、乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸、扁桃酸、酒石酸、二苯甲酰酒石酸、二甲苯酰酒石酸、柠檬酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、天冬氨酸、谷氨酸等有机酸的酸加成盐；与钠、钾、镁、钙、铝等无机碱所成的盐；或者，与甲胺、乙胺、乙醇胺、赖氨酸、鸟氨酸等有机碱所成的盐；与乙酰基亮氨酸等各种氨基酸及氨基酸衍生物所成的盐或铵盐等。

本发明的另一目的在于提供一种制备式Ⅰ化合物的方法，包括如下步骤：将反应原料式Ⅲ化合物和式Ⅳ化合物混合，使式Ⅲ化合物的酰氯与式Ⅳ化合物的羟基发生酯化反应，其化学反应式为：

其中R₁和R₄各自为OH或OA，A为低级烷基；R₂、R₃、R₅和R₆各自为H或低级烷基；R₇为OH、低级烷氧基或低级酰氧基；X为卤素；n为1至8中任一自然数。

优选地，在上述化学反应原料混合过程在加入任意一或多种常见的溶剂，以溶解各反应原料，所述溶剂的例子包括但不限于，二氯甲烷、氯仿、N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜。在一具体实例中，以二氯甲烷作为溶剂被加入上述化学反应原料中。

进一步优选地，在所述反应原料中加入缚酸剂。所述缚酸剂优选为有机胺类，例如二异丙基乙基胺、三乙胺、吡啶，进一步优选为二异丙基乙基胺。

在本发明的一具体实施方式中，所述化学反应式可表达为：

本发明所述式Ⅰ化合物可以按上述化学反应合成得到，其中，式Ⅲ化合物可以参照申请号为200810014212.X的中国发明专利公开的实施例2所示的方法制备得到，也可以是从商业渠道购买得到；所述式Ⅳ化合物可以参照第CN1919191号中国发明专利公开的方法制备，也可以购买得到。对于原料来源及制备方法本发明不作任何限制。

进一步地，还可以将上述化学反应得到的产物进一步纯化。可以由本发明例举的纯化方法，也可以是通过本领域技术人员所能想到的其它常规分离纯化方法得到，只要能实现本发明目的，都在本发明保护范围之内。本发明对该化学反应产物是否纯化或采用何种纯化手段不作限制。

式I化合物及其盐可利用基于其基本结构或取代基种类的特征，采用各种公知的合成方法来制备。下面对式I化合物的代表性化合物式Ⅱ化合物的制备方法进行说明。应予说明，式Ⅰ化合物即脱水淫羊藿素衍生物的例子也不限于其代表性化合物式Ⅱ化合物，只要能实现本发明目的，均属于本发明保护范围。在一具体实例中，式Ⅰ化合物中R₁和R₄各自为OH或OA，A为低级烷基（例如为乙基或丙基）；R₂、R₃、R₅和R₆各自为H或低级烷基；R₇为OH、低级烷氧基（例如OCH₂CH₃）或低级酰氧基例（例如甲酰氧基）；X为卤素（例如溴或碘）；n为1至8中任一自然数。

式Ⅱ化合物可按如下合成路线制备，应予说明，本发明所述式Ⅱ化合物的制备方法不局限于以下所示的例子，

在一具体实施方式中，将L-肉碱酰氯与脱水淫羊藿素混合，反应摩尔比为1～10:1，优选为1～5:1，更优选为1～2:1，进一步更优选为1.5:1。在上述混合物中加入无水二氯甲烷和二异丙基乙基胺，然后在40-80℃回流2.0-12小时，冷却，以水泵减压，于25-60℃旋转蒸发浓缩反应液，残余物为结构式II化合物。

在另一些具体实施方式中，还可以进一步对上述所得残余物进一步分离、纯化，例如采用柱层析、高效液相色谱柱分离等本领域技术人员能想到的分离纯化手段。

本发明还提供一种药物组合物，其含有式Ⅰ化合物或其衍生物或其盐以及药学上可接受的载体。

特别地，所述药物组合物是心脑血管疾病的预防和/或治疗用的药物组合物，所述心脑血管疾病优选为冠心病、脑梗死或脑缺血；更优选为心肌梗死或脑缺血。

本发明的又一目的在于提供式Ⅰ化合物或其衍生物或其盐在制备用于预防和/或治疗心脑血管疾病药物中的应用。

优选地，所述心脑血管疾病为冠心病、脑缺血或脑梗死；所述心脑血管疾病更优选为心肌梗死、脑缺血或脑梗死。

本发明还提供一种含有式Ⅰ化合物或其衍生物或其盐的制剂，所述制剂为注射剂、冻干粉针剂、溶液剂、喷雾剂、气雾剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、散剂、酊剂、霜剂、软膏剂、凝胶剂、贴剂、缓释制剂或控释制剂。

所述药学上可接受载体是指药学领域常规的药物载体，例如：稀释剂、赋形剂如水等；填充剂如淀粉、蔗糖等；粘合剂如纤维素衍生物、明胶等；崩解剂如琼脂、碳酸钙等；表面活性剂如十六烷醇等；润滑剂如滑石粉、硬脂酸钙等；此外还可以加入芳香剂、甜味剂等。上述药学上可接受的载体可以单独使用，也可以联合使用。本领域的普通技术人员可以理解，只要能够实现本发明的目的，任何药学上可接受的辅料或赋形剂均可用于制备本发明所述药物组合物。

本发明可获得的有益效果至少包括：

1、本发明提供一种新化合物，可为临床上防治心脑血管疾病，特别是冠心病、脑缺血或脑梗死提供一种新的用药选择；

2、本发明所述式Ⅰ化合物的制备方法简单，仅需一步反应即可制得目标反应物，易于工业推广；

3、本发明所述式Ⅰ化合物或其衍生物或其盐大大提高了现有产品脱水淫羊藿素的水溶性，从而有利于提高其生物利用度，并且便于将其制备成溶液剂、注射剂或颗粒剂等多种药物制剂，拓宽了其临床应用剂型，无需加入其它载体材料，从而确保了产品质量更可靠，药物更安全、更稳定；

4、本发明所述式Ⅰ化合物在提高了水溶性的同时，申请人意外发现，该水溶性衍生物仍然保留脱水淫羊藿素在冠心病、脑缺血或脑梗死疾病治疗方面的药理活性，并且在某些方面表现出更高的活性。

附图说明

图1是各实验组大脑梗死体积测定代表图；

其中，A代表假手术组大脑梗死体积测定结果；B代表模型组大脑梗死体积测定结果；C代表阳性药尼莫地平组大脑梗死体积测定结果；D代表式II化合物20mg/kg剂量组大脑梗死体积测定结果。E代表式II化合物10mg/kg剂量组大脑梗死体积测定结果。

图2是式II化合物的质谱图谱。

图3是式II化合物的核磁氢谱图谱。

图4是式II化合物的核磁碳谱图谱。

具体实施方式

为使本发明更加容易理解，下面将结合实施例来详细说明本发明，这些实施例仅起说明性作用，并不局限于本发明的应用范围，下列实施例中未提及的具体实验方法，通常按照常规实验方法进行。

本说明书中，“卤素”是指F、Cl、Br或I。优选例举Cl。

“低级烷基”是指直链或支链的碳数为1～6(简记为C1-6)的烷基，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、正己基等。

“低级烷氧基”是指直链或支链的碳数为1～6(简记为C1-6)的烷氧基，例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、正己氧基等。

“低级酰氧基”指直链或支链的碳数为1～6(简记为C1-6)的酰氧基，例如甲酰氧基（HCOO-）、乙酰氧基（AcO-）或丙酰氧基（C₂H₅COO-）等。

未特别说明，“%”表示重量百分比；AICA表示脱水淫羊藿素；AICA-Carnitine表示脱水淫羊藿素-肉毒碱，即本发明所述式Ⅱ化合物；CK表示肌酸激酶；CK-MB表示肌酸激酶同工酶；LDH表示乳酸脱氢酶；SOD表示超氧化物歧化酶；MDA表示丙二醛。

特别说明，本申请人意外发现，式Ⅰ化合物取代基R₁～R₇并非该化合物的活性基团部位，在一定范围内变动，例如本发明所定义的R₁和R₄各自为OH或OA，A为低级烷基；R₂、R₃、R₅和R₆各自为H或低级烷基；R₇为OH、低级烷氧基或低级酰氧基时，并不会对该化合物的活性产生很大影响，同时，在一定程度上能提高脱水淫羊藿素的水溶性。另外，卤素在F、Cl、Br或I之间的变动以及n在1至8中任选也都可以实现本发明目的，因此，下面仅以式Ⅰ化合物的代表性化合物式Ⅱ作为例子进一步阐述本发明，但需要说明的是，实施例仅仅是例举性说明而已，并非对本发明做任何形式的限制。

一、化合物制备实施例

实施例1式II化合物的制备与鉴定

1、原料和试剂的来源

表1原料和试剂的来源

2、L-肉碱酰氯的制备

依据第200810014212.X号中国专利中公开的实施例2的制备方法，制备出其L-肉碱酰氯。取盐酸左旋肉碱3g(0.015mol)，加入三氟乙酸10ml,搅拌溶解，0℃分次加入乙酰氯4.3mL，滴毕升温至45-50℃，保温反应20小时。反应完毕取出冷却至室温，加入丙酮100ml，搅拌2小时，过滤，滤液中加入乙醚100ml，搅拌至有白色沉淀析出，放入冰箱冷藏12小时。取出后，搅拌1小时，过滤，干燥，得白色固体5.36g,即为盐酸氯化乙酰左旋肉碱。取盐酸氯化乙酰左旋肉碱5.36g，加入二氯甲烷35ml，搅拌溶解，0℃分次加入草酰氯2.5ml（0.02mol），滴毕升温至45-50℃，保温反应4小时，蒸除溶剂，得白色固体5.76g，即为盐酸氯化乙酰左旋肉碱酰氯，即L-肉碱酰氯。

3、式II化合物的制备

向250mL茄形瓶中加入无水二氯甲烷150mL、二异丙基乙基胺（DIEPA）2.4mL、脱水淫羊藿素5.44g（0.0148mol）和L-肉碱酰氯5.72g（0.0222mol），于50℃油浴下回流4.5小时，使用氩气球保护。停止反应，冷却后以水泵减压，于35℃旋转蒸发浓缩反应液，残余物用硅胶柱进行层析纯化，洗脱液由二氯甲烷和甲醇组成，依次使用二氯甲烷和甲醇体积比为100:1、80:1、60:1、40:1、30:1、20:1、15:1、10:1和5:1的洗脱液进行梯度洗脱，并采用薄层层析监测洗脱液中式II化合物的浓度，紫外灯检测。收集体积比为15:1的二氯甲烷和甲醇洗脱液6000mL，以水泵减压，于35℃旋转蒸发除去溶剂，得3.24g黄色固体粉末，即式II化合物。

取本实施例制得的式II化合物进行相关测试的结果如下：

性状：黄色粉末

熔点：按照《中国药典》（2010年版二部）附录C熔点测定法，测定式II化合物的熔点为144-147℃。

比旋度：按照《中国药典》（2010年版二部）附录E比旋度测定法，测定式II化合物的比旋度[α]20D=-44.2(c=0.05,H₂O)。

水中溶解度：按照《中国药典》（2010年版二部）凡例第十五条的规定，测定式II化合物在水中的溶解度为15mg/mL。

质谱：按照《中国药典》（2010年版二部）附录ⅨJ质谱法测定式II化合物，如附图2所示：

MS-ESI+：554.1[M-Cl]+

核磁共振波谱：按照《中国药典》（2010年版二部）附录ⅨK核磁共振波谱法测定式II化合物。

核磁氢谱如附图3所示：¹H NMR(400MHz，CDCl3)：δ:1.35（s，6H），1.87（t，J=6.44Hz，2H）,2.03（s，3H），2.87（t，J=6.40Hz，2H）,3.14（s，9H）,3.24（d，J=5.76Hz，2H）3.74（m，1H），3.88（s，3H），3.95(m，1H)，5.75（m，1H）,6.25（s，1H）,7.16（d，J=8.80Hz，2H），7.94（d，J=8.80Hz，2H）,11.84（s，1H）.

核磁碳谱如附图4所示：¹³C-Apt（100MHz，CDCl3）：δ:15.51，20.86，26.18，30.72，36.65，53.05，55.54，64.53，66.55，76.53，99.72，100.59，104.11，114.62，120.91，129.97，153.50，155.50，158.18，160.09，161.94，166.74，169.67，174.64.

将上述式II化合物的核磁谱图与脱水淫羊藿素核磁谱图进行比较，发现脱水淫羊藿素与L-肉碱相连接后，其分子中烯醇羟基的¹H-NMR信号（9.16ppm）消失，而酚羟基的¹H-NMR信号（11.8ppm）依然存在，因此确认L-肉碱是通过烯醇羟基与脱水淫羊藿素相连接。据此，确认式II化合物的分子式为C₃₀H₃₆ClNO₉，分子量为590.06，化学名称为乙酰-L-肉碱-3-脱水淫羊藿素酯，结构式如前所述。

实施例2式II化合物的制备

向250mL茄形瓶中加入无水二氯甲烷150mL、二异丙基乙基胺（DIEPA）2.4mL、脱水淫羊藿素3.68克（0.010mol）和按实施例1方法制备得到的L-肉碱酰氯2.60g（0.010mol），于40℃油浴下回流2小时，使用氩气球保护。停止反应，冷却后以水泵减压，于25℃旋转蒸发浓缩反应液，残余物用硅胶柱进行层析纯化，洗脱液由二氯甲烷和甲醇组成，依次使用二氯甲烷和甲醇体积比为100:1、80:1、60:1、40:1、30:1、20:1、15:1、10:1和5:1的洗脱液进行梯度洗脱，并采用薄层层析监测洗脱液中式II化合物的浓度，紫外灯检测。收集并浓缩二氯甲烷与甲醇体积比为20:1-5:1的洗脱液6000mL，以水泵减压，于25℃旋转蒸发除去溶剂，得1.2g黄色固体粉末，即式II化合物。

实施例3式II化合物的制备

向250mL茄形瓶中加入无水二氯甲烷150mL、二异丙基乙基胺（DIEPA）2.4mL、脱水淫羊藿素1.85克（0.005mol）和按实施例1所述方法制备得到的L-肉碱酰氯12.96g（0.05mol），于80℃油浴下回流12小时，使用氩气球保护。停止反应，冷却后以水泵减压，于60℃旋转蒸发浓缩反应液，残余物用硅胶柱进行层析纯化，洗脱液由二氯甲烷和甲醇组成，依次使用二氯甲烷和甲醇体积比为100:1、80:1、60:1、40:1、30:1、20:1、15:1、10:1和5:1的洗脱液进行梯度洗脱，并采用薄层层析监测洗脱液中式（I）化合物的浓度，紫外灯检测。收集并浓缩二氯甲烷与甲醇体积比为30:1-5:1的洗脱液6000mL，以水泵减压，于60℃旋转蒸发除去溶剂，得1.1g黄色固体粉末，即式II化合物。

二、水溶性测定试验

试验材料：实施例1～3所制备的式II化合物；脱水淫羊藿素；脱水淫羊藿素磷脂复合物。

试验方法与评价标准：参照2010版《中国药典》凡例第十五条规定。

实验结果：见表2。

表2水溶性测定结果

*注：15mg/ml是实施例1～3所制备的乙酰-L-肉碱-3-脱水淫羊藿素酯（即式II化合物）的三个样品测得溶解度的平均值。

实验结论：由表2可见，本发明所述式II化合物大大提高了脱水淫羊藿素在水中的溶解度。并且比现有技术通过将脱水淫羊藿素与磷脂混合制备成复合物的方法在提高水溶性方面具有更好的效果。

三、制剂制备实施例

下面以式II作为代表性化合物，采用常规辅料和设备，运用本领域常规制剂手段制备各种符合临床需要的剂型。应予说明，本发明的剂型以及剂型的制备方法不局限于以下所示的例子。

实施例4

式II化合物片剂的制备

取式II化合物50g，研磨粉碎并过80目筛，加微晶纤维素50g混合均匀后，加入2%的羟丙甲纤维素作为粘合剂进行制软材，制粒干燥，加入崩解剂4%的羧甲基淀粉钠和润滑剂0.5%硬脂酸镁，混合均匀，压片，即得。每片含式II化合物0.05g，口服给药，每日3次，每次1片。

实施例5

式II化合物注射液的制备

取式II化合物100g，加注射用水适量使溶解，加配制量的0.02%活性炭搅拌5-10min，滤过，滤液稀释至10L左右，加氯化钠调节渗透压至等渗，调pH7.5-8.0，超滤，灌封成1000支（10ml/支），灭菌，包装，即得式II化合物注射液。注射给药，每日2次，每次1支。

实施例6

式II化合物冻干粉针剂的制备

无菌条件下称取式II化合物100g，置于无菌容器内，加注射用水至约950ｍl，搅拌使溶解，调节pH值至6.5-7.5，加注射用水至1000ml,然后加配制量的0.02%活性炭搅拌5-10min，用无菌抽滤漏斗过滤，再用灭菌垂熔漏斗精滤或超滤，滤液检验合格后分装2ml安瓶中，低温冷冻干燥，无菌熔封即得。每支100mg，临用前加注射用水适量使溶解，用氯化钠输液250-500ml稀释后缓慢静脉滴注。注射给药，每次1次，每次1支。

四、化合物的药效学实施例

实施例7式II化合物（AICA-Carnitine）十二指肠给药对冠脉结扎致大鼠实验性心肌梗死的影响

假手术组、模型组以及AICA-Carnitine和AICA的各剂量组大鼠心肌梗死体积百分比的统计结果见表3。

表3AICA-Carnitine和AICA各剂量组对急性心肌梗死大鼠的心肌梗死体积的影响

*注1：与模型组相比，*P<0.05，**P<0.01。

*注2：表3中梗死体积的测定以及相对梗死体积的计算方法如下：

大体标本形态学观察，采用TTC染色显示梗塞区及缺血区。用数码相机对出现梗死的心肌进行照相，应用图像处理软件计算梗死心肌面积占总面积的百分比。按照公式V=t（A1+A2+…+An）计算梗死体积和心肌总体积（公式中V为梗死体积或心肌总体积；t为心肌片厚度；A为梗死面积或心肌片总面积；n为心肌片数，在本试验中，n=5）。相对梗死体积(V%)=梗死体积/心肌总体积×100%。

由表3可见，冠脉结扎后，模型组心肌梗死严重。与模型组相比，地尔硫卓组、AICA-Carnitine和AICA的中、高及极高剂量组均能显著降低心肌梗死体积，改善心肌缺血导致的心肌梗死。

2、AICA-Carnitine和AICA的ED50

AICA-肉毒碱的ED50为0.01698mmol/kg；AICA的ED50为0.02428mmol/kg。结果提示，AICA-Carnitine的ED50低于AICA，故AICA-肉毒碱治疗急性心肌梗死的效果优于AICA，结果见表4。

表4AICA-Carnitine和AICA的ED50的结果

3、AICA-Carnitine和AICA各剂量组对急性心肌梗死大鼠心电图T波的影响

与假手术组相比，结扎后15min模型组即出现显著的T波增高（P＜0.01），与模型组相比，给药后各用药组T波值均有所降低，但没有统计学差异，直至60min，AICA-Carnitine高、中剂量组及AICA的极高和中剂量组有显著降低T波（P＜0.01/0.05）；120min时AICA-Carnitine和AICA的极高。高、中剂量组均使T波值降低有统计学差异（P＜0.01/0.05），这种心电图的保护作用一直持续到300min（见表5）。

4、AICA-Carnitine和AICA各剂量组对急性心肌梗死大鼠心肌酶的影响

与模型组相比，AICA-Carnitine和AICA各剂量组均能显著减低急性心肌梗死大鼠血清中CK活性；AICA-Carnitine和AICA的中，高及极高剂量组均能降低急性心肌梗死大鼠血清中CK-MB和LDH活性。同时，AICA-Carnitine极高剂量组较AICA极高剂量组更能显著降低血清中CK和CK-MB活性（见表6）。

5、AICA-Carnitine和AICA各剂量组对急性心肌梗死大鼠血清指标的影响

与模型组相比，AICA-Carnitine和AICA的各剂量组均能降低急性心肌梗死大鼠血清中MDA含量，同时AICA-Carnitine和AICA高剂量组能增强SOD活力；同时对AICA-Carnitine和AICA的各剂量进行平行比较发现，AICA-Carnitine极高剂量组和AICA极高剂量组更能降低血清中MDA含量（P<0.05）（见表7）。

表5各实验组大鼠不同时间点的T波值统计结果

与模型组相比，*P<0.05，**P<0.01；与假手术组比，#P<0.05，##P<0.01。

表6各实验组大鼠血清中CK、CK-MB、LDH活力的统计结果

与模型组相比，*P<0.05，**P<0.01；与假手术组比，#P<0.05，##P<0.01；与AICA极高剂量组相比，^△P<0.05，^△△P<0.01。

表7各实验组大鼠血清中SOD活性和MDA含量的统计结果

与模型组相比，*P<0.05，**P<0.01；与假手术组比，#P<0.0，5##P<0.01；与AICA极高剂量组相比，△P<0.05，△△P<0.01。

综上，AICA-Carnitine和AICA对冠状动脉结扎致大鼠急性心肌梗死、心肌缺血具有很好的治疗作用，这种治疗作用与它们能降低梗死体积、降低心肌酶活性和抑制氧化应激有关，且AICA-Carnitine的效果优于AICA。因此，本发明还可提供一种AICA-Carnitine在制备降低心肌梗死、降低心肌酶活性或抑制氧化应激药物中的应用。

实施例8式II化合物经十二指肠给药对犬急性心肌梗死的保护作用

1、式II化合物（AICA-Carnitine）各剂量组对犬急性心肌梗死模型心肌梗死体积的影响，结果见表8。

表8式II化合物对犬急性心肌梗死模型心肌梗死体积的影响（M±SD）

注：与模型组相比，**P＜0.01，*P＜0.05。

如表8所示，与模型组相比，式II化合物中、高剂量组能显著降低犬的心肌梗死体积百分比（P＜0.05），低剂量组有降低犬心肌梗死体积百分比的趋势，但没有统计学差异（P＞0.05）。

2、式II化合物（AICA-Carnitine）对犬急性心肌梗死模型心外膜心电图心肌梗死程度（∑-ST）和心肌梗死范围（N-ST）的影响，结果见表9和表10。

如表9、表10所示，与假手术组相比，结扎后30min，模型组心外膜心电图中∑-ST升高，并且N-ST的导联数增加，差异有统计学意义（P＜0.05），随着梗死时间的延长，∑-ST升高和N-ST的导联数增加趋势越来越明显，60min至80min差异性均显著（P＜0.01），说明造模成功。各给药组（包括盐酸地尔硫卓组和式II化合物的高、中、低剂量组）与模型组相比，给药后240min时式II化合物中剂量组能显著降低∑-ST和N-ST的均值（P＜0.01），直至300min，低剂量组有降低的趋势，但没有统计学差异。

根据以上的统计结果显示，式II化合物中剂量组（4mg/kg）有降低心肌梗死体积百分比和心肌梗死程度，以及减小心肌梗死范围的作用，而低剂量组（2mg/kg）的这种作用不明显，说明4mg/kg的式II化合物能对急性心肌梗死的犬起到保护作用，高剂量组对犬急性心肌梗死也是有保护作用的。研究结果提示式II化合物具有防治心肌梗死的药理活性，启示我们在临床上可以用于治疗人类心血管疾病的预防或治疗，特别是冠心病，可以减少冠心病心绞痛、心肌缺血或心肌梗死的发生率和死亡率。为临床上防治心血管疾病，例如冠心病提供一种新的用药选择。

实施例9式II化合物对大脑中动脉阻断致大鼠局灶性脑缺血的保护作用

1、式II化合物对大鼠大脑中动脉结扎致局灶性脑缺血行为障碍的影响，结果见表11。

表11式II化合物对大脑中动脉阻断致局灶性脑缺血大鼠神经功能评分的影响（M±SD）

注：各给药组与模型组相比，*P<0.05，**P<0.01。

注：神经功能缺损症状评分方法如下：参考Zea Longa法对术后1d对大鼠进行行为障碍评分，神经功能缺损症状评分的标准：0分为无神经功能缺损症状；1分为不能完全伸展对侧前爪，即左侧前肢内收、屈曲；2分为自主运动时身体向左侧转圈；3分为身体向左侧倾倒；4分为不能自主行走并伴有意识障碍。模型成功的标准为：神经功能缺损症状评分为1-3分的大鼠，将建模成功的大鼠随机分组，纳入后续实验。将纳入实验的大鼠连续灌胃给药3天，并于术后2天和3天进行第二次和第三次神经功能评分。

如表11所示，各给药组与模型组相比，式II化合物高剂量组在术后1天对大脑中动脉阻断致局灶性脑缺血大鼠的神经功能评分影响不显著，术后2天能降低神经功能评分（P＜0.05），术后3天这种差异更为显著（P＜0.01）。式II化合物低剂量组在术后1d和2d对大脑中动脉阻断致局灶性脑缺血大鼠的神经功能评分影响不显著，直到术后3d，能显著降低神经功能评分（P＜0.01）。

2、式II化合物对大脑中动脉阻断致局灶性脑缺血大鼠梗死体积百分比的影响，结果见表12。

表12式II化合物对大脑中动脉阻断致局灶性脑缺血大鼠梗死体积百分比的影响（M±SD）

注：与模型组相比，*P<0.05，**P<0.01。

注：脑梗死体积测方法如下：TTC染色可区分梗死区（白色）与非梗死区（红色），大脑经TTC染色后进行大体标本形态学观察，并照相；应用图像分析软件project测算梗死区（白色）体积与大脑总体积，并计算比较各实验组梗死体积百分比。

如表12和图1所示，式II化合物高剂量组能显著降低大脑中动脉阻断致局灶性脑缺血大鼠的大脑梗死体积百分比（P＜0.01）。式II化合物低剂量组亦能降低大脑中动脉阻断致局灶性脑缺血大鼠的大脑梗死体积百分比（P＜0.05），但效果不如高剂量组显著。

根据以上的统计结果显示，式II化合物高剂量组（20mg/kg）和中剂量组（10mg/kg）均能够有效降低神经功能评分及大脑梗死体积百分比，其中高剂量组效果更为显著。说明10mg/kg的式II化合物能对局灶性脑缺血的大鼠起到保护作用。研究结果提示式II化合物具有防治脑缺血的药理活性，启示我们在临床上可以用于治疗人类脑血管疾病，特别是脑缺血或脑梗死等，减少脑缺血或脑梗死发生率和死亡率。为临床上防治脑血管疾病提供一种新的用药选择。

显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非是对实施方式和实验方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式和实验方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (10)

1.式Ⅰ化合物或其衍生物或其盐：

其中，R₁和R₄各自为OH或OA，A为低级烷基；R₂、R₃、R₅和R₆各自为H或低级烷基；R₇为OH、低级烷氧基或低级酰氧基；X为卤素；n为1至8中任一自然数。

2.如权利要求1所述式Ⅰ化合物或其衍生物或其盐，其特征在于，R₁和R₄各自为OH或OMe；R₂、R₃、R₅和R₆各自为H；R₇为OMe或OAc；X为Cl；n为1、2、3或4。

3.如权利要求2所述式Ⅰ化合物或其衍生物或其盐，其特征在于，R₁为OH；R₄为OMe；R₂、R₃、R₅和R₆各自为H；R₇为OAc；X为Cl；n为1，其化学结构式如式II所示：

4.一种制备式Ⅰ化合物的方法，包括如下步骤：将反应原料式Ⅲ化合物和式Ⅳ化合物混合，使式Ⅲ化合物的酰氯与式Ⅳ化合物的羟基发生酯化反应，其化学反应式为：

其中R₁和R₄各自为OH或OA，A为低级烷基；R₂、R₃、R₅和R₆各自为H或低级烷基；R₇为OH、低级烷氧基或低级酰氧基；X为卤素；n为1至8中任一自然数。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，在所述反应原料中加入缚酸剂，所述缚酸剂优选为有机胺类，进一步优选为二异丙基乙基胺。

6.一种药物组合物，其含有权利要求1至3中任一项所述化合物或其衍生物或其盐以及药学上可接受的载体。

7.如权利要求6所述药物组合物，其是心脑血管疾病的预防和/或治疗用药物组合物，所述心脑血管疾病优选为冠心病、脑缺血或脑梗死；更优选为心肌梗死、脑缺血或脑梗死。

8.如权利要求1至3中任一项所述化合物或其衍生物或其盐在制备用于预防和/或治疗心脑血管疾病药物中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述心脑血管疾病为冠心病、脑缺血或脑梗死；所述心脑血管疾病优选为心肌梗死、脑缺血或脑梗死。

10.一种含有如权利要求1至3中任一项所述化合物或其衍生物或其盐的制剂，所述制剂为注射剂、冻干粉针剂、溶液剂、喷雾剂、气雾剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、散剂、酊剂、霜剂、软膏剂、凝胶剂、贴剂、缓释制剂或控释制剂。