CN113321633A - 槲皮素-3-o-乙酸-（3-氯-4-硫代氨基）-苯酯及在制备糖尿病药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于治疗糖尿病及其伤口愈合药物制备技术领域，尤其涉及一种槲皮素‑3‑O‑乙酸‑（3‑氯‑4‑硫代氨基）‑苯酯及其在制备治疗糖尿病及其伤口愈合药物中的应用。本发明以芦丁为原料，经两次取代水解反应，再还原生成槲皮素‑3‑O‑乙酸，将其与硫化氢供体2‑氯‑4‑羟基硫代苯甲酰胺通过缩合反应成功制备了能够同时治疗糖尿病及促进伤口愈合的化合物实体。在HUVECs细胞实验中，细胞增殖实验验证了其能够促进HUVECs细胞生长，划痕实验和体外成小管实验进一步验证了其能够促进糖尿病患者伤口愈合。在HepG 2细胞毒性实验中验证了此药物对肝细胞无损伤，又通过对胰岛素抵抗模型的治疗，验证了该化合物与市售药物二甲双胍具有相似的降糖作用。
Description
技术领域
本发明属于治疗糖尿病及其伤口愈合药物制备技术领域，具体涉及一种槲皮素衍生物与2-氯-4羟基硫代苯甲酰胺拼合后化合物C的设计、合成及其在制备治疗糖尿病及其伤口愈合药物中的应用，尤其涉及一种槲皮素-3-O-乙酸-(3-氯-4-硫代氨基)-苯酯及其在制备治疗糖尿病及其伤口愈合药物中的应用。
背景技术
槲皮素，又名栎精。在芦丁(芸香甙)，槲皮甙，金丝桃甙等植物中含量较高。是一种从植物中提取的天然药物，具有较好的祛痰、止咳作用，并有一定的平喘作用。有降低血压、增强毛细血管抵抗力、减少毛细血管脆性、降血脂、扩张冠状动脉，增加冠脉血流量等作用。此外，根据大量文献报到，槲皮素还具有降低血糖水平的活性，通过修饰，可以用做降血糖药物。因此长期以来人们一直致力于对槲皮素的各种改性，试图寻找选择性更好，毒副作用更低的槲皮素化合物作为治疗糖尿病的先导化合物。
人类对硫化氢(H2S)的研究已有近300年历史，1996年首次通过实验证明人体内源性H2S可能是一种神经活性物质，并且越来越多的证据支持内源性的H2S是第3种气体信号分子。H2S是一种神经调节因子或神经递质，H2S通过cAMP途径调节神经突触功能，H2S亦是一种重要的内源性血管舒张因子，它通过激活血管平滑肌KATP通道和使血管平滑肌膜电位去极化，或通过能降低外Ca2+内流而实现其血管调节功能。根据相关文献报道，硫化氢可能通过影响VEGF及ICAM-1的调控加速创面愈合。VEGF在表皮主要来源于角质形成细胞，是介导血管内皮细胞增殖和迁移最主要的生长因子，具有刺激血管生成、增加血管通透性、介导内皮细胞迁移、增殖的作用，而内皮细胞的增殖、迁移是血管新生过程中的关键环节。VEGF和其在血管内皮细胞上的受体2(VEGFR2)结合介导新生血管的形成，提示硫化氢可能通过VEGF/VEGFR2信号通路加速创面新生血管再生。硫化氢具有促进伤口愈合的功效，但是单独的硫化氢供体不适用于人体给药。所以，申请人预测，将硫化氢供体和槲皮素分子结合起来，既达到了槲皮素的修饰，又能在体内释放安全浓度范围内的硫化氢，以达到促进伤口愈合的目的。
药物拼合原理是药物化学中的一种常用的药物结构改造手段。其不足之处在于：由于拼合后药物分子结构比较大，往往会与设想的目标产生较大的出入。如：有时拼合药物分子的立体选择性会发生改变；有时药效基团会受到邻位较大基团的掩蔽，构成较大的空间位阻；并且断键的难易也与所连基团结构有关。药物结构改变后，药物在体内的吸收、转运、代谢等方面也随之发生变化，会导致药效学的复杂情况。如：拼合后的分子一般相对分子质量较大，所以它的细胞通透性较差；而且分子结构大，相对来说性质不太稳定，易分解，从而经常导致其没有实际药用价值；另外有些分子在体内过于稳定，对水解酶不敏感，不能迅速定量地释放出目标药物，所以也没有临床意义。
发明内容
针对现有技术中存在的不足和为了填补本领域的技术空白，本发明的第一个目的在于提供了一种化合物C：槲皮素-3-O-乙酸-(3-氯-4-硫代氨基)-苯酯，其结构式如下：
分子式：C24H16ClNO9S
分子量：529
本发明是以芦丁为原料，依次通过取代反应、水解反应、取代反应、水解反应、还原反应生成槲皮素-3-O-乙酸，然后与硫化氢供体2-氯-4羟基硫代苯甲酰胺通过缩合反应成功制备了一种全新化合物实体。其溶解性好，生物利用度得到提高，可作为前药。在服用该种药物后，在体内酯酶水解的作用下释放出槲皮素用以治疗糖尿病；释放出硫化氢供体在体内释放低浓度硫化氢进而促进伤口愈合。在糖尿病患者出现伤口时只需要服用一种药物，就能同时达到治疗糖尿病和促进伤口愈合的目的。这样不仅减少了糖尿病患者的治疗成本，同时也提高了患者的用药依从性。因此，本发明制备的化合物C不仅具有潜在的药物开发价值，还具有广阔的市场前景，有着较为深远的社会意义。
本发明的第二个目的在于提供了一种所述化合物C在制备治疗糖尿病及其伤口愈合药物中的应用。
本发明对其进行了初步的生物活性评价，结果显示，该化合物具有明显的促进HUVECs细胞增殖，增强HUVECs迁移能力，促进HUVECS细胞体外成小管的作用。在HepG2细胞实验中，显示了该化合物对高糖环境下造成的胰岛素抵抗有着显著的治疗作用。
本发明的实验证明：将槲皮素衍生物与2-氯-4羟基硫代苯甲酰胺拼合起来增加了H2S促进HUVECs细胞增殖的活性，提高了HUVECs细胞迁移能力以及促进小管形成能力，说明槲皮素衍生物对H2S的促伤口愈合有协同作用。在HepG2细胞实验中，将槲皮素衍生物与2-氯-4羟基硫代苯甲酰胺拼合起来增加了胰岛素抵抗模型的葡萄糖消耗量，证明了硫化氢与槲皮素衍生物对治疗糖尿病也有协同作用。
所述化合物C可以采取以下合成工艺路线来制备：
与现有技术相比，本发明的优点和有益效果在于：
1、提供了一种新的、优势突出的药用化合物；
2、制备本发明新化合物的操作步骤简单、副反应少、原料易得、溶剂绿色环保。
附图说明
图1为实施例一合成的3’,4’,7-O-三苄基槲皮素的13C NMR图谱；
图2为实施例一合成的3’,4’,7-O-三苄基槲皮素的1H NMR图谱；
图3为实施例二合成的3’,4’,7-O-三苄基槲皮素-3-O-乙酸乙酯的13C NMR图谱；
图4为实施例二合成的3’,4’,7-O-三苄基槲皮素-3-O-乙酸乙酯的1H NMR图谱；
图5为实施例三合成的3’,4’,7-O-三苄基槲皮素-3-O-乙酸的13C NMR图谱；
图6为实施例三合成的3’,4’,7-O-三苄基槲皮素-3-O-乙酸的1H NMR图谱；
图7为实施例四合成的槲皮素-3-O-乙酸的13C NMR图谱；
图8为实施例四合成的槲皮素-3-O-乙酸的1H NMR图谱；
图9为实施例五合成的槲皮素-3-O-乙酸-(3-氯-4-硫代氨基)-苯酯的13C NMR图谱；
图10为实施例五合成的槲皮素-3-O-乙酸-(3-氯-4-硫代氨基)-苯酯的1H NMR图谱；
图11为实施例五合成的槲皮素-3-O-乙酸-(3-氯-4-硫代氨基)-苯酯的MS[M+Na]+图谱；
图12为实施例六的在低糖环境下化合物C干预的HUVECs细胞增殖预实验结果图；
图13为实施例六的在低糖环境下槲皮素干预的HUVECs细胞增殖预实验结果图；
图14为实施例六的在低糖环境下2-氯-4-羟基硫代苯甲酰胺干预的HUVECs细胞增殖预实验结果图；
图15为实施例六的在低糖环境下药物干预的HUVECs细胞增殖实验结果图；
图16为实施例六的在高糖环境下药物干预的HUVECs细胞增殖实验结果图；
图17为实施例七的在低糖环境下药物干预的HUVECs细胞划痕实验结果图；
图18为实施例七的在高糖环境下药物干预HUVECs细胞划痕实验结果图；
图19为实施例八的HUVECs细胞体外成小管实验结果图；
图20为实施例九的在低糖环境下化合物C干预的HepG2细胞毒性预实验结果图；
图21为实施例九的在低糖环境下2-氯-4-羟基硫代苯甲酰胺干预的HepG2细胞毒性预实验结果图；
图22为实施例九的在低糖环境下槲皮素干预的HepG2细胞毒性预实验结果图；
图23为实施例九的在高糖环境下药物干预的HepG2细胞毒性实验结果图；
图24为实施例十的HepG2细胞胰岛素抵抗模型治疗实验结果图。
具体实施方式
下面申请人将结合具体的实施例对本发明化合物C的制备过程及应用过程做详细说明，便于本领域技术人员清楚地理解本发明。但应该理解，以下实施例不应以任何方式被解释为对本申请权利要求书请求保护范围的限制。
实施例一-五是化合物C的制备实施例，所用试剂均为常见市售商品，纯度级别均为分析纯，浓盐酸浓度为37wt％。
实施例一、3’,4’,7-O-三苄基槲皮素的合成
将8mmol芦丁溶于40ml DMF中，再加入无水碳酸钾28mmol，氮气下搅拌0.5h，滴加溴化苄32mmol，60℃反应3h，然后，用10％(指体积百分比浓度为10％的冰乙酸水溶液)冰乙酸调节pH至5，过滤，取固体溶于120ml乙醇，加入18ml浓盐酸，回流2h，冷却至室温，过滤得黄色固体，过滤烘干，得3.5g黄色粗品，收率为71.7％。1H NMR(400MHz,dmso)δ12.40(s,1H),9.67(s,1H),7.88(s,1H),7.81(s,1H),7.49-7.33(m,15H),7.24(s,1H),6.83(s,1H),6.42(s,1H),5.22(s,6H).13C NMR(101MHz,dmso)δ176.53,164.44,160.87,156.43,150.44,148.21,146.75,137.43,137.24,137.09,136.57,128.89,128.32,128.08,124.00,122.42,114.20,104.63,98.44,93.48,70.94,70.45,70.35.m.p.190～192℃.
实施例二、3’,4’,7-O-三苄基槲皮素-3-O-乙酸乙酯的合成
取4mmol(2.3g)实施例一制备的3’,4’,7-O-三苄基槲皮素溶于60ml DMF中，加入无水K2CO3 5mmol，室温搅拌30min，然后慢慢滴加含4.4mmol溴乙酸乙酯的15ml DMF溶液，室温反应2h，用冰乙酸调节pH至6，用乙酸乙酯萃取3次，收集乙酸乙酯层，用饱和食盐水洗，旋蒸浓缩，过柱(洗脱液为丙酮/石油醚的体积比为1：4)，得0.5g淡黄色丝状固体，收率21.7％。1H NMR(400MHz,dmso)δ12.47-12.31(m,1H),7.88(d,J＝2.1Hz,1H),7.84-7.72(m,1H),7.69-6.85(m,14H),6.84-6.59(m,1H),6.57-5.96(m,2H),5.54-5.21(m,4H),5.21-4.93(m,2H),4.79(d,J＝16.9Hz,2H),4.21-3.97(m,2H),1.35-0.99(m,3H).13C NMR(101MHz,dmso)δ177.98,168.83,164.67,161.29,156.53,155.12,151.29,148.06,137.47,137.18,136.91,136.49,128.91,128.29,127.97,122.78,114.92,113.96,105.61,98.92,93.80,70.70,70.50,70.31,68.45,60.99,14.37.m.p.121～122℃.
实施例三、3’,4’,7-O-三苄基槲皮素-3-O-乙酸的合成
取4mmol实施例二制备的3’,4’,7-O-三苄基槲皮素-3-O-乙酸乙酯和含200mmolNaOH的蒸馏水溶液100ml，回流3h后，冷至室温，调pH至2-3，用乙酸乙酯萃取，有机层水洗后，旋蒸浓缩，干燥后得2.36g深黄色粉末固体，收率90％。13C NMR(101MHz,dmso)δ178.11,170.36,164.63,161.30,156.49,154.91,151.25,148.09,137.48,137.18,136.97,136.48,128.95,128.27,127.99,122.81,114.85,113.89,105.60,98.86,93.69,70.66,70.49,70.32,68.33.1H NMR(400MHz,dmso)δ13.01(s,1H),12.45(s,1H),7.98(s,1H),7.75(s,1H),7.48-7.33(m,15H),7.18(s,1H),6.80(s,1H),6.42(s,1H),5.21(s,6H),4.74(s,2H).m.p.164～165℃.
实施例四、槲皮素-3-O-乙酸的合成
取600mg实施例三制备的3’,4’,7-O-三苄基槲皮素-3-O-乙酸溶于60ml甲醇中，加入60mg的10％Pd/C，置于加氢反应釜中进行加氢反应(1.3mpa，30℃)，反应7h，将反应液离心，取上清液，过0.45μm有机系微孔滤膜，有机溶剂旋蒸至干，得淡黄色粉末固体314mg，收率为52％。1H NMR(400MHz,dmso)δ12.51(s,1H),10.84(s,1H),9.74(s,1H),9.28(s,2H),7.53(s,1H),6.85(d,J＝9.1Hz,1H),6.84(s,1H),6.38(s,1H),6.17(s,1H),4.65(s,2H).13CNMR(101MHz,dmso)δ177.86,170.27,164.57,161.59,156.66,155.63,149.14,145.54,136.29,121.56,121.23,116.07,104.43,99.06,93.98,68.24,49.02.m.p.283～284℃.
实施例五、槲皮素-3-O-乙酸-(3-氯-4-硫代氨基)-苯酯(化合物C)的合成
取0.2778mmol实施例四制备的槲皮素-3-O-乙酸溶于10ml无水DMF，加入0.4167mmol EDC(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐)，0.4167mmol HObt(1-羟基苯并三唑)。在0℃下搅拌1h，再加入0.4167mmol 2-氯-4-羟基硫代苯甲酰胺，反应1h，再升温至30℃反应5h，减压浓缩后，加入水搅拌，得48mg黄色粉末固体，收率48％。1H NMR(400MHz,dmso)δ12.53(s,1H),9.77(s,1H),9.30(s,2H),7.62(s,2H),7.54(s,1H),7.35(s,1H),7.30(s,1H),6.87(s,1H),6.80(s,1H),6.73(s,1H),6.40(d,J＝1.7Hz,1H),6.19(s,1H),4.66(s,2H).13C NMR(101MHz,dmso)δ177.87,170.30,168.50,164.59,161.60,159.37,156.67,155.64,149.15,145.55,136.30,131.29,130.82,127.67,121.57,121.24,116.63,116.00,114.33,104.45,99.08,94.01,68.27,49.04.m.p.229.1～233.4℃.
实施例六、细胞增殖实验
人脐静脉内皮细胞HUVECs为本申请发明人购买自澳赛尔斯生物技术(上海)有限公司。用人脐静脉内皮细胞完全培养基培养细胞至可传代，消化细胞并计数，将HUVECs细胞接种于96孔板，使每孔有(1～2)×104个细胞，将96孔板放入培养箱培养(37℃，5％CO2)24h，待细胞生长至70％-80％融合，将化合物C(储存浓度为10mM，溶剂为DMSO)、槲皮素(储存浓度为10mM，溶剂为DMSO)、2-氯-4羟基硫代苯甲酰胺(储存浓度为10mM，溶剂为DMSO)用低糖完全培养基(葡萄糖浓度为5.5mM)和高糖完全培养基(葡萄糖浓度为25.5mM)分别倍减稀释配制成不同浓度，弃去96孔板上层培养基，换为含有不同浓度的槲皮素、2-氯-4羟基硫代苯甲酰胺以及化合物C的培养液。将96孔板继续放入细胞培养箱培养24h。于实验终止前4h，每孔加入20μL新配制的5mg·mL-1MTT溶液，继续培养4h后取出，弃去上清液，然后每孔加入150μLDMSO，振荡10～20分钟，直至蓝紫色颗粒完全溶解后，于酶标仪上490nm波长测定吸光度值，计算细胞增长率。对照组(对照组在给药干预这一步骤中用的是不含药物的培养基，除此步骤外其余步骤以及处理方式和实验组相同，以下对照组同，不赘述)增长率为0，每组实验设有5组重复实验。
分组情况为：对照组(Control)、高糖组(HG)、槲皮素(HPS)、2-氯-4羟基硫代苯甲酰胺(c)、化合物C(C)、物理混合(HPS+c)、高糖+槲皮素(HG+HPS)、高糖+2-氯-4羟基硫代苯甲酰胺(HG+c)、高糖+化合物C(HG+C)、高糖+物理混合(HG+HPS+c)，以下所有分组简写同上。细胞实验结果见图12-16，对应的数据见表1-3：
表1在低糖环境下药物干预的HUVECs细胞增殖预实验结果
表2在低糖环境下药物干预的HUVECs细胞增殖实验结果
表3在高糖环境下药物干预的HUVECs细胞增殖实验结果
从图中可以看出，首先，化合物C对细胞促进增殖的最佳浓度为48μM；其次，高糖能够抑制HUVECs细胞的增殖，这可以从侧面解释糖尿病患者伤口为何久久不能愈合。在实验中，化合物C在低糖环境和高糖环境中均能促进HUVECs细胞增殖，证明了化合物C能够促进糖尿病患者伤口的内皮细胞增长，进一步促进伤口愈合。同时，在单一的硫化氢供体实验组以及槲皮素和硫化氢供体简单的物理混合实验组的增长率都没有通过酯键连接的化合物C实验组增长率高。进一步显示了槲皮素对H2S促进HUVECs细胞增长有协同作用。
实施例七、细胞迁移实验(划痕实验)
取对数期细胞HUVECs(细胞来源同实施例六)接种于24孔板，使每孔为1.5×105个细胞，将24孔板放入细胞培养箱培养(37℃，5％CO2)，待HUVEC生长至90％融合，用不含FBS的培养基将细胞饥饿12小时以抑制细胞增殖。使用移液器吸头(200μL)划伤创面，用PBS(浓度为0.01M，pH为7.4，下同)洗涤分离的细胞3次，然后将剩余的细胞用基础培养基(1％FBS)配置的槲皮素，2-氯-4羟基硫代苯甲酰胺、化合物C培养24小时，划伤后和24小时后立即拍摄受伤部位的图。结果见图17、图18。
本实施例所用培养基为不含FBS的培养基、基础培养基(1％FBS)。
从图17、18中可以看出，在低糖环境下，对照组HUVECs细胞可以按照正常的愈合速度愈合，使用化合物C干预后可以加快细胞伤口愈合，在高糖环境下，对照组细胞不能正常愈合，使用化合物C干预后，可以加快伤口愈合。划痕实验是对细胞迁移能力的判断，在伤口愈合过程中，伤口部位的细胞会向伤口中心迁移，迁移能力强则伤口愈合得快，在本实验中，使用化合物C干预后，细胞迁移能力得到提升，同时也能改善高糖环境下细胞迁移能力的降低，使高糖环境下的细胞也能有着不错的迁移能力。
实施例八、体外成小管实验
将200μL的基质胶添加到24孔培养板的每个孔中，并在培养箱中(37℃，5％CO2)培养45min，直到基质胶固化。然后，将HUVECs以5×104个细胞/孔的密度接种到基质胶上，用不含FBS的基础培养基给药干预8h，然后，用钙黄绿素AM荧光染料，用DMSO制备1mM的钙黄绿素溶液，并用PBS将其稀释制成1～50μM的钙黄绿素溶液。将1/10细胞培养基体积的钙黄绿素AM溶液加入到细胞培养基中。在37℃培养细胞15-30分钟。用PBS洗涤细胞两次。用490nm激发波长，515nm发射波长的滤光片的荧光显微镜观察，拍照，结果见图19。
本实施例所用培养基为不含FBS的基础培养基。
本实施例用到了钙黄绿素AM染色剂，购买于上海源叶生物科技有限公司；
本实施例用到的Corning Matrigel基质胶，购买于美国康宁公司。
根据实验结果，可以看到，在低糖环境下，HUVECs细胞在不使用化合物C干预时，也可以生成一些管状结构；使用化合物C干预后，生成的管状结构增多。在高糖环境下，HUVECs细胞不能正常形成管状结构，因为高糖对细胞有着损伤。在使用化合物C干预后，高糖环境中，也能形成一定数量的管状结构。实验结果可以证明，化合物C可以促进静脉内皮微血管的生成。在糖尿病患者的伤口处，高糖环境使血管细胞坏死，从而阻止了能够运输营养物质和药物的内皮血管的生成，使伤口组织得不到营养物质和药物治疗，所以糖尿病患者一般有了伤口才会久久不能愈合。本实验结果可以揭示，化合物C能够促进内皮微血管的生成，进而促进伤口愈合。
实施例九、HepG2细胞毒性试验
HepG2细胞为本申请发明人实验室的冻存材料，将HepG2细胞培养至可传代，消化细胞，计数，将HepG2细胞接种于96孔板，使每孔有(1～2)×104个细胞，将96孔板放入培养箱培养(37℃，5％CO2)24h，待细胞生长至90％融合，将化合物C(储存浓度为10mM，溶剂为DMSO)、槲皮素(储存浓度为10mM，溶剂为DMSO)、2-氯-4羟基硫代苯甲酰胺(储存浓度为10mM，溶剂为DMSO)用低糖完全培养基和高糖完全培养基分别倍减稀释配制成不同浓度，弃去96孔板上层培养基，换为含有不同浓度的槲皮素、2-氯-4羟基硫代苯甲酰胺以及化合物C的培养基。将96孔板继续放入细胞培养箱培养24h。于实验终止前4h，每孔加入20μL新配制的5mg·mL-1MTT溶液，继续培养4h后取出，弃去上清液，然后加入150μL DMSO，振荡10～20分钟，直至蓝紫色颗粒完全溶解后，于酶标仪上490nm波长测定吸光度值，计算细胞存活率。每组实验设有5组复实验，对照组存活率为100％，化合物C处理过的细胞存活率＝(实验组吸光度-空白组吸光度)/(对照组吸光度-空白组吸光度)×100％。实验结果如图20-23。数据见表4-5。空白组未接种细胞，其余处理方式和对照组相同。
表4在低糖环境下药物干预的HepG2细胞毒性预实验结果
表5在高糖环境下药物干预的HepG2细胞毒性实验结果
从图中可以看出，在使用与HUVECs细胞相同给药浓度时，在低糖环境下，化合物C，槲皮素，硫化氢供体，以及槲皮素和硫化氢供体物物理混合组对HepG2细胞既没有促进生长也没有毒性作用，在高糖干预下，细胞存活率下降，说明肝细胞在高糖作用下会有损伤，在给药物干预后，对细胞存活率依然没有影响，HepG2细胞为肝细胞，同时，也为肿瘤细胞，该实验结果显示，化合物C对肝细胞无毒性，同时也不会使肿瘤细胞增殖，说明该化合物具有一定的安全性。
实施例十、胰岛素抵抗模型治疗实验
将HepG2细胞(同实施例九)接种于96孔板，使每孔有(1～2)×104个细胞，将96孔板放入培养箱培养(37℃，5％CO2)，HepG2细胞培养达到70％-80％汇合后，用PBS洗涤两次，分别用含正常葡萄糖(5.5mM)或高糖(25.5mM)培养基孵育24h，建立高糖诱导胰岛素抵抗的细胞模型。弃去上清培养液，替换为用高糖培养基配置的含有化合物C、槲皮素、2-氯-4羟基硫代苯甲酰胺、二甲双胍以及槲皮素和2-氯-4羟基硫代苯甲酰胺物理混合的药液，继续培养12h，然后弃去含有药液的培养基，替换为0％FBS的低糖培养基(葡萄糖5.5mM)培养12h。建立葡萄糖标准曲线，用葡萄糖检测试剂盒检测96孔板中每个实验组的葡萄糖含量，计算出每组实验的葡萄糖消耗量，实验数据如表，实验结果如图24，数据见表6。
表6 HepG2细胞胰岛素抵抗模型治疗实验结果
从图上可以看到，仅有高糖干预而不进行药物治疗的实验组葡萄糖消耗量低于正常对照组葡萄糖消耗量，而在有药物干预的实验组，可以明显看到化合物C以及二甲双胍实验组葡萄糖消耗量显著提高，槲皮素组和物理混合组的葡萄糖消耗量相比高糖实验组也有提高，但不及化合物C实验组。说明单一的槲皮素和简单的物理混合的药用效果不及用酯键拼合起来的化合物C，同时，从结果上我们也可以看到，化合物C具有和市售药物二甲双胍相似的实验效果。揭示化合物C有望成为一种良好的治疗糖尿病的新药。
Claims (9)
1.化合物槲皮素-3-O-乙酸-(3-氯-4-硫代氨基)-苯酯，其结构式为：
2.一种权利要求1所述的化合物槲皮素-3-O-乙酸-(3-氯-4-硫代氨基)-苯酯的合成方法，其反应路线如下：
3.一种权利要求1所述的化合物槲皮素-3-O-乙酸-(3-氯-4-硫代氨基)-苯酯的合成方法，其反应路线及反应条件如下：
4.根据权利要求2或3所述的合成方法，其步骤为：以芦丁为原料，依次经过取代反应、水解反应、取代反应、水解反应、还原反应生成槲皮素-3-O-乙酸，然后与硫化氢供体2-氯-4-羟基硫代苯甲酰胺通过酯化反应得到化合物槲皮素-3-O-乙酸-(3-氯-4-硫代氨基)-苯酯。
5.权利要求1所述的化合物槲皮素-3-O-乙酸-(3-氯-4-硫代氨基)-苯酯在制备治疗糖尿病及其伤口愈合药物中的应用。
6.权利要求1所述的化合物槲皮素-3-O-乙酸-(3-氯-4-硫代氨基)-苯酯在制备促进HUVECs细胞生长的药物中的应用。
7.权利要求1所述的化合物槲皮素-3-O-乙酸-(3-氯-4-硫代氨基)-苯酯在制备增强HUVECs细胞迁移能力的药物中的应用。
8.权利要求1所述的化合物槲皮素-3-O-乙酸-(3-氯-4-硫代氨基)-苯酯在制备促进HUVECs细胞体外成小管的药物中的应用。
9.权利要求1所述的化合物槲皮素-3-O-乙酸-(3-氯-4-硫代氨基)-苯酯在制备治疗HepG2细胞胰岛素抵抗的药物中的应用。
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