CN103827083B - N1-环胺-n5-取代苯基双胍衍生物及其制备方法和含有该衍生物的药物组合物 - Google Patents

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Abstract

一种如通式1所述的N1-环胺-N5-取代苯基双胍衍生物或其药学上可接受的盐，其制造方法，以及一种包含该双胍衍生物或其药学上可接受的盐的药物组合物。该双胍衍生物具有抑制癌细胞增殖的效果，还显示出包括抑制癌症转移和癌症复发在内的抗癌活性，这是因为该双胍衍生物能够有效激活AMPK，即使仅使用相比传统药物而言的小剂量，而AMPK与能量代谢有关。而且，该双胍衍生物通过激活AMPK，能够非常有效地降低血糖和血脂浓度，因此，该双胍衍生物可以有效地用于治疗糖尿病、肥胖症、高血脂症、高胆固醇血症、脂肪肝、冠状动脉疾病、骨质疏松症、多囊卵巢综合症和代谢综合征。

Description

N1-环胺-N5-取代苯基双胍衍生物及其制备方法和含有该衍生物的药物组合物
技术领域
本发明涉及：一种N1-环胺-N5-取代苯基双胍衍生物，其能够抑制癌细胞增殖、癌症转移和癌症复发，还通过激活5'-AMP-活化蛋白激酶(AMPK)对糖尿病和新城代谢疾病具有极好的疗效，即使其剂量小于传统药物用量；一种制备该衍生物的方法；以及一种含有该N1-环胺-N5-取代苯基双胍衍生物作为活性成分的药物组合物。
背景技术
AMPK是一种酶，其功能在于控制代谢途径，以维持营养供应和能量需求之间的平衡，并由此维持细胞乃至整个身体的能量平衡。低血氧状态或低血糖状态下，细胞内AMP/ATP比例提高，AMPK得到激活。激活后的AMPK引起脂肪酸氧化，以产生更大量的ATP，并抑制需要使用ATP的合成代谢。而且，激活AMPK提高了对胰岛素的敏感度，抑制了肝脏中的葡萄糖声称，还提高了肌肉中的葡萄糖吸收。由于AMPK的作用，AMPK被当作一种用于治疗类型II糖尿病和代谢疾病的合适目标。通过调节癌细胞和正常细胞中的能量代谢，AMPK抑制癌细胞增殖，并杀灭癌细胞。激活后的AMPK在癌细胞中展示出抗癌活性，能够使mTORC1、p53、脂肪酸合成酶等磷酸化，从而调节细胞循环、细胞极性、自体吞噬、细胞凋亡等等。
二甲双胍被用于治疗非胰岛素依赖型糖尿病(即，类型II糖尿病)，这是因为它对降低血糖极为有效，不会形成低血糖症或高胰岛素血症，且能防止治疗糖尿病的口服治疗药物之间的并发症。最近几年中，对二甲双胍进行了大量研究。同时，据报告，二甲双胍通过抑制线粒体电子传导系统中的复合体1的作用，来激活AMP-激活蛋白激酶(AMPK)，以阻碍细胞内的能量生产，并抑制产生生存必需蛋白的mTOR/S6K1信号通路的激活，从而阻碍癌细胞增殖和肿瘤生长(Mol.CancerTher.9(5):1092-1099(2010))。由此一来，二甲双胍作为调节癌细胞代谢的抗癌药剂，获得了大量关注。而且，一项流行病学调查证实，在用二甲双胍治疗的病人中，癌症发病率和癌症死亡率降低(BMJ.330:1304-1305(2005))。
与此同时，越来越多的临床证据表明，癌症干细胞参与了癌症的复发和转移。所述癌症干细胞指的是具有干细胞所固有的自我繁殖或分化能力的癌症细胞。癌症干细胞以0.2％的含量存在于癌组织中，其特征是缓慢的增殖。由于至今为止所开发的许多大量抗癌药剂针对的都是增殖迅速的癌细胞，因此，当以这些抗癌药剂治疗癌症干细胞时，癌症干细胞对传统抗癌疗法具有抗性，所得预后欠佳。另一方面，据报告，二甲双胍选择性地作用于乳癌细胞中的癌症干细胞并移除癌症干细胞，由此防止癌症复发(CancerRes.69(19):7507-11(2009))。而且，据发现，通过抑制Snail1、Slug、Twist、ZEB1/2和TGF-b这些与上皮-间质转化(EMT)有关的转录因子，并促进E-钙粘蛋白的表达以防止癌细胞进入EMT，二甲双胍能够干涉癌细胞的运动性和入侵，从而防止癌症的转移(CellCycle10:7，1144-1151(2011)，CellCycle9:18，3807-3814(2010)，CellCycle9:22，4461-4468(2010))。
但是，二甲双胍一般每天用药三次，单剂约500mg或以上。因此，若要将二甲双胍制成每日给药一次的缓释药片，就需要能够含有至少1500mg或以上二甲双胍的药片。这样一来，药片太大，病人难以吞服。此外，由于市面上目前有售的缓释制型的单片药片仅含有约750mg二甲双胍，因此需服用两片或以上的缓释制型药片。此外，属于同一双胍类的苯乙双胍，由于具有乳酸酸中毒等严重副作用，从上世纪70年代以来就被完全禁用。
发明内容
技术问题
本发明的目的在于提供：一种新颖的双胍衍生物，其对抑制癌细胞增殖、癌症转移和癌症复发高度有效，即使其用量低于传统药物；或一种其药学上可接受的盐；及其制备方法。而且，本发明的又一目的在于提供一种药物组合物，所述药物组合物包括上述化合物作为活性物质，对降低血糖血脂浓度高度有效，因此能够预防或治疗糖尿病、肥胖症、高血脂症、脂肪肝、高胆固醇血症、冠状动脉疾病、骨质疏松症、多囊卵巢综合症、代谢病症等等。
解决方案
本发明的其中一个方面是提供一种如通式1所述的N1-环胺-N5-取代苯基双胍衍生物，或其药学上可接受的盐。
[通式1]
通式1中，R1和R2共同连接在氮原子上以形成3至8元杂环烷基；
n是0-5中的一个整数；
当存在超过一个R3时，每个R3，都独立地选自氢、卤素、羟基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、氨基、酰胺基、磺酰胺基、硝基、杂芳基、氰基、磺酸和氨磺酰基；且
R1和R2，或R3，均独立地被至少一种选自卤素、羟基和C1-6烷基的取代基取代或不取代(即：R1和R2，或R3，均独立地未被取代或者具有选自卤素、羟基和C1-6烷基的至少一种取代基)。
本说明书中，所称“被取代的”或“具有取代基的”基团是指其至少一个氢原子被至少一个非氢原子基团所替代的基团，其前提是，该基团满足价电子要求并从该取代中形成化学稳定的化合物。本说明书中，除非明确表述为“未被取代的”，否则就应当理解为所有取代基(其氢原子)既可以不被取代，也可以被另一取代基取代，即所有取代基均可具有另一取代基。本发明所述的双胍衍生物上的取代基R1至R3(上的氢原子)都各自可被至少一个上述取代基再次取代。
术语“卤素”或“卤”指的是氟、氯、溴和碘。
术语“羟基”指的是-OH。
术语“烷基”指的是线性和分支的饱和碳氢基团，其一般具有特定数目的碳原子(例如，1-12个碳原子)。烷基基团的例子包括但不限于，甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、1-戊基、2-戊基、3-戊基、3-甲基-1-丁基、3-甲基-2-丁基、2-甲基-2-丁基、2、2、2-三甲基-1-乙基、正己基、正庚基和正辛基。所述烷基可以连接在任一环原子的母基团或底物上，除非该连接违反价电子要求。相似地，烷基基团可以包括至少一个非氢取代基，除非该连接违反价电子要求。例如，术语“卤代烷基”指的是-CH2(卤)、-CH(卤)2或C(卤)3，意为至少一个氢原子被卤素替代的甲基基团。术语“卤代烷基”包括但不限于，三氟甲基、三氯甲基、三溴甲基和三碘甲基。
术语“烷氧基”指的是：烷基-O-，前提是该烷基如上所述。所述烷氧基的例子包括但不限于，甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、仲戊氧基等。烷氧基可以连接在任一环原子的母基团或底物上，除非该连接违反价电子要求。相似地，烷氧基基团可以包括至少一个非氢取代基，除非该连接违反价电子要求。例如，术语“卤代烷氧基”指的是-O-CH2(卤)、-O-CH(卤)2或-O-C(卤)3，意为至少一个氢原子被卤素替代的甲基基团。术语“卤代烷氧基”包括但不限于，三氟甲氧基、三氯甲氧基、三溴甲氧基和三碘甲氧基。
术语“烷硫基”指的是：烷基-S-，前提是该烷基如上所述。所述烷硫基的例子包括但不限于，甲硫基、乙硫基、正丙硫基、异丙硫基、正丁硫基、仲丁硫基、叔丁硫基、正戊硫基、仲戊硫基等。烷硫基可以连接在任一环原子的母基团或底物上，除非该连接违反价电子要求。相似地，烷硫基基团可以包括至少一个非氢取代基，除非该连接违反价电子要求。
术语“环烷基”指的是饱和单环或双环碳氢基团，其一般具有特定数目的成环碳原子(例如，C3-8环烷基指的是具有3、4、5、6、7或8个成环碳原子的环烷基基团)。所述环烷基可以连接在任一环原子的母基团或底物上，除非该连接违反价电子要求。相似地，该环烷基基团可以包括至少一个非氢取代基，除非该连接违反价电子要求。术语“杂环烷基”指的是具有包括1-3个杂原子在内的3-12元环原子的单环或双环碳氢基团，所述杂原子独立地选自氮、氧和硫。杂环烷基可以连接在任一环原子的母基团或底物上，除非该连接违反价电子要求。相似地，杂环烷基基团可以包括至少一个非氢取代基，除非该连接违反价电子要求。杂环烷基基团的例子包括但不限于，氮杂环丙烷、氮杂环丁烷、咪唑基、吡咯基、吡咯烷基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基、氮杂环庚基、吲哚基、二氢吲哚基等。
术语“氨基”指的是-NH2基团。“氨基”基团可以包括至少一个非氢取代基，除非该连接违反价电子要求。例如，术语“双烷基氨基”指的是-N(烷基)2，前提是烷基如上所述。“双烷基氨基”的例子包括但不限于，二甲胺、二乙胺、二丙胺和二丁胺。
术语“酰胺基”指的是-NH-C(O)-R'。在此，残基R'代表具有1-6个碳原子的低级烷基。“酰胺基”基团的例子包括但不限于，乙酰胺、丙酰胺和丁酰胺。
术语“磺酰胺基”指的是-NH-C(O)2-R'。前提是残基R'代表，例如，具有1-6个碳原子的低级烷基。“磺酰胺基”基团的例子包括但不限于，甲磺酰胺。
术语“芳基”指的是一价和二价芳族基团，分别包括5-和6-元单环芳族基团；“杂芳基”指的是一价和二价芳族基团，分别包括含有1-4个杂原子的5-和6-元单环芳族基团，所述杂原子独立地选自氮，氧和硫。“杂芳基”基团的实例包括，但不限于，呋喃基、吡咯基、噻吩基、噻唑基、异噻唑基、咪唑基、三唑基、四唑基、吡唑基、恶唑基、异恶唑基、吡嗪基、吡嗪基、哒嗪基、嘧啶基、异喹啉基、咔唑基、苯并恶唑基、苯并二恶唑基、苯并噻唑基、苯并咪唑基、苯并噻吩基、三嗪基、酞嗪基、喹啉基、吲哚基、苯并呋喃基、呋喃妥因基和吲哚嗪基。
术语“氨磺酰基”指的是-S(O)2-NH2；术语“磺酸”指的是-S(O)2-OH。
根据一个示例性实施例，
R1和R2共同连接在氮原子上以形成4至7元杂环烷基；
n是0-5中的一个整数；
当存在超过一个R3时，每个R3都独立地选自氢、卤素、羟基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、氨基、酰胺基、磺酰胺基、硝基、杂芳基、氰基、磺酸和氨磺酰基；且
R1和R2，或R3，都独立地被至少一种选自卤素、羟基和C1-6烷基的取代基取代或不取代。
根据一个示例性实施例，
R1和R2可以共同连接在氮原子上以形成3至8元杂环烷基，所述杂环烷基选自氮杂环丁基、吡咯烷基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基、氮杂环庚基和氮杂环丙基；
n可以是0-5中的一个整数；
当存在超过一个R3时，每个R3，都可以独立地选自氢、卤素、羟基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、氨基、酰胺基、磺酰胺基、硝基、杂芳基、氰基、磺酸和氨磺酰基；且
R1和R2、或R3，可以都独立地被至少一种选自卤素、羟基和C1-6烷基的取代基取代或不取代。
根据一个示例性实施例，
R1和R2可以共同连接在氮原子上以形成3至8元杂环烷基，所述杂环烷基选自氮杂环丁基、吡咯烷基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基、氮杂环庚基和氮杂环丙基；
n可以是0-3中的一个整数；
当存在超过一个R3时，每个R3可以都独立地选自氢、卤素、羟基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、氨基、酰胺基、磺酰胺基、硝基、杂芳基、氰基、磺酸和氨磺酰基；且
R1和R2，或R3，可以都独立地被至少一种选自卤素、羟基和C1-6烷基的取代基取代或不取代。
根据一个示例性实施例，
R1和R2可以共同连接在氮原子上以形成4至7元杂环烷基，所述杂环烷基选自氮杂环丁基、吡咯烷基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基和氮杂环庚基；
n可以是0-3中的一个整数；
当存在超过一个R3时，每个R3可以都独立地选自氢、卤素、羟基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、氨基、酰胺基、磺酰胺基、硝基、杂芳基、氰基、磺酸和氨磺酰基；且
R1和R2、或R3，可以都独立地被至少一种选自卤素、羟基和C1-6烷基的取代基取代或不取代。
根据一个示例性实施例，
R1和R2可以是共同连接在氮原子上以形成3至8元杂环烷基，所述杂环烷基选自氮杂环丁基、吡咯烷基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基、氮杂环庚基和氮杂环丙基，其前提是所述哌嗪基由C1-6烷基所取代；
n可以是0-3中的一个整数；且
当存在超过一个R3时，每个R3都可以独立地选自氢、卤素、羟基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、氨基、酰胺基、磺酰胺基、硝基、杂芳基、氰基、磺酸、氨磺酰基，其前提是所述C1-6烷基或C1-6烷氧基可以各自独立地被卤素或羟基所取代，所述氨基可以被C1-6烷基取代或不取代，所述酰胺基可以为乙酰胺，所述磺酰胺基可以为烷基磺酰胺，且所述杂芳基可以为四唑基。
在又一个示例性实施例中，
R1和R2可以共同连接在氮原子上以形成吡咯烷基或哌啶基；
n可以是1或2；且
当存在超过一个R3时，每个R3，都独立地选自氢、卤素、卤代烷基或卤代烷氧基。
在一个示例性实施例中，如通式1所述的化合物为：
N1-哌啶基-N5-(3-溴)苯基双胍；N1-哌啶基-N5-苯基双胍；N1-哌啶基-N5-(3-甲基)苯基双胍；N1-哌啶基-N5-(3-乙基)苯基双胍；N1-哌啶基-N5-(3-羟基)苯基双胍；N1-哌啶基-N5-(3-羟基甲基)苯基双胍；N1-哌啶基-N5-(3-甲氧基)苯基双胍；N1-哌啶基-N5-(4-氟)苯基双胍；N1-哌啶基-N5-(2-氟)苯基双胍；N1-哌啶基-N5-(3-氟)苯基双胍；N1-吡咯烷基-N5-(4-氯)苯基双胍；N1-哌啶基-N5-(4-氯)苯基双胍；N1-吡咯烷基-N5-(3-氯)苯基双胍；N1-哌啶基-N5-(3-氯)苯基双胍；N1-氮杂环庚烷-N5-(3-氯)苯基双胍；N1-吗啉-N5-(3-溴)苯基双胍；N1-吡咯烷基-N5-(3-三氟甲基)苯基双胍；N1-哌啶基-N5-(3-三氟甲基)苯基双胍；N1-氮杂环丁烷-N5-(4-三氟甲基)苯基双胍；N1-吡咯烷基-N5-(4-三氟甲基)苯基双胍；N1-哌啶基-N5-(4-三氟甲基)苯基双胍；N1-吡咯烷基-N5-(3-三氟甲氧基)苯基双胍；N1-哌啶基-N5-(3-三氟甲氧基)苯基双胍；N1-哌啶基-N5-(3-双氟甲氧基)苯基双胍；N1-氮杂环丁烷-N5-(4-三氟甲氧基)苯基双胍；N1-吡咯烷基-N5-(4-三氟甲氧基)苯基双胍；N1-哌啶基-N5-(4-三氟甲氧基)苯基双胍；N1-吗啉-N5-(4-三氟甲氧基)苯基双胍；N1-(4-甲基)哌嗪基-N5-(4-三氟甲氧基)苯基双胍；N1-哌啶基-N5-(3-氨基)苯基双胍；N1-哌啶基-N5-(4-双甲基氨基)苯基双胍；N1-哌啶基-N5-(4-乙酰胺基)苯基双胍；N1-哌啶基-N5-(3-乙酰胺基)苯基双胍；N1-哌啶基-N5-(4-(1H-四唑-5-yl))苯基双胍；N1-哌啶基-N5-(3-甲基磺酰胺)苯基双胍；N1-哌啶基-N5-(4-磺酸)苯基双胍；N1-哌啶基-N5-(4-甲硫基)苯基双胍；N1-哌啶基-N5-(4-氨磺酰基)苯基双胍；N1-哌啶基-N5-(3，5-双甲氧基)苯基双胍；N1-哌啶基-N5-(4-氟-3-三氟甲基)苯基双胍；N1-哌啶基-N5-(4-氯-3-三氟甲基)苯基双胍；N1-吡咯烷基-N5-(3-氟-4-三氟甲基)苯基双胍；N1-哌啶基-N5-(3-氟-4-三氟甲基)苯基双胍；N1-哌啶基-N5-(4-氟-3-三氟甲氧基)苯基双胍；N1-哌啶基-N5-(4-氯-3-三氟甲氧基)苯基双胍；N1-氮杂环丁烷-N5-(3-氟-4-三氟甲氧基)苯基双胍；N1-吡咯烷基-N5-(3-氟-4-三氟甲氧基)苯基双胍；N1-哌啶基-N5-(3-氟-4-三氟甲氧基)苯基双胍；N1-氮杂环丁烷-N5-(3-氯-4-三氟甲氧基)苯基双胍；N1-吡咯烷基-N5-(3-氯-4-三氟甲氧基)苯基双胍；N1-哌啶基-N5-(3-氯-4-三氟甲氧基)苯基双胍；N1-哌啶基-N5-(2，4-双氟)苯基双胍；N1-哌啶基-N5-(3，4-双氟)苯基双胍；N1-哌啶基-N5-(3，5-双氟)苯基双胍；N1-哌啶基-N5-(3，5-双氯)苯基双胍；N1-哌啶基-N5-(2，4-双氯)苯基双胍；N1-吡咯烷基-N5-(3，4-双氯)苯基双胍；N1-哌啶基-N5-(3，4-双氯)苯基双胍；N1-哌啶基-N5-(3-氯-5-三氟甲氧基)苯基双胍；N1-吡咯烷基-N5-(3-溴-5-三氟甲氧基)苯基双胍；N1-哌啶基-N5-(3-溴-5-三氟甲氧基)苯基双胍；N1-哌啶基-N5-(3，4，5-三氟)苯基双胍；或N1-哌啶基-N5-(2，4，6-三氟)苯基双胍。
同时，本发明中通式1所述化合物在药学上可接受的盐可以是一种由有机酸或无机酸形成的酸加成盐。例如，所述有机酸可以包括：甲酸、乙酸、丙酸、乳酸、丁酸、异丁酸、三氟乙酸、苹果酸、马来酸、丙二酸、延胡索酸、琥珀酸、琥珀酰胺酸、谷氨酸、酒石酸、草酸、柠檬酸、乙醇酸、葡糖醛酸、抗坏血酸、苯甲酸、邻苯二甲酸、水杨酸、蒽酸、二氯乙酸、氨氧基乙酸、苯磺酸、4-甲苯磺酸和甲磺酸；所述无机酸可以包括，例如，盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、硝酸、碳酸和硼酸。例如，上述酸加成盐可以通过制备盐的传统方法来制备，包括：a)将通式1的化合物和一种酸直接混合；b)将所述化合物之一和一种酸溶解在一种溶剂或水合溶剂中，并将所得溶液与另一元素混合；或c)将通式1的化合物和一种酸分别溶解在溶剂或水合溶剂中，然后将其混合。
在一个示例性实施例中，通式1的化合物的药学上可接受的盐，可以是一种选自如下各项的酸的盐：甲酸、乙酸、丙酸、乳酸、丁酸、异丁酸、三氟乙酸、苹果酸、马来酸、丙二酸、延胡索酸、琥珀酸、琥珀酰胺酸、谷氨酸、酒石酸、草酸、柠檬酸、乙醇酸、葡糖醛酸、抗坏血酸、苯甲酸、邻苯二甲酸、水杨酸、蒽酸、苯磺酸磺酸、对甲苯磺酸、甲磺酸、二氯乙酸、氨氧基乙酸、盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、硝酸、碳酸、硼酸等。本发明的一个示例性实施例中，通式1化合物的乙酸盐可以作为通式1化合物药学上可接受的盐的一个例子。与通式1的化合物的盐酸盐相比，通式1化合物的乙酸盐显示出极高的溶解性和更理想的或相同的药理作用。
本发明中如通式1所述的化合物可以通过许多方法来制备。
在一个典型实施例中，提供一种制备如通式1所述的化合物的方法，包括：令如通式2所述的化合物在至少一种有机溶剂中与双氰胺反应，以得到如通式3所述的化合物；然后，令如通式3所述的化合物与通式4所述的化合物在水、有机溶剂或其混合物中反应，得到如通式1所述的化合物：
[通式1]
[通式2]
[通式3]
[通式4]
通式1-4中的R1、R2、R3和n的定义如通式1中所定义。
例如，制备方法可以表示在下列示意图1中，且在下文中将分操作来表述。
示意图1
通式1化合物的制备方法中，可以令通式2中的环胺在有酸的情况下在至少一种有机溶剂中与双氰胺例如双氰胺钠或双氰胺钾反应，得到作为中间体的通式3的氰胍化合物。然后，令所得的通式3的氰胍化合物在水、至少一种有机溶剂或其混合物中与通式4化合物回流反应，以获得通式1中的化合物。
用于制备通式3中的氰胍化合物的双氰胺的量，与通式2的化合物的摩尔比约为1～～3，该酸(例如，盐酸、硫酸、硝酸、氢溴酸、4-甲苯磺酸等)的量，与通式2的化合物的摩尔比为约1～～2；甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、戊醇、乙腈、苯、甲苯、1，4-二恶烷或N，N-二甲基酰胺可以用作有机溶剂。反应温度在60至140℃的范围内，反应时间在3至24小时的范围内。
取上述制得的通式3的氰胍化合物溶解于水、有机溶剂(如甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、戊醇、乙腈、苯、甲苯、1，4-二恶烷、N，N-二甲基酰胺等。)或其混合物中，加入通式4中的化合物和一种酸(如，盐酸、硫酸、硝酸、氢溴酸、4–对甲苯磺酸等)，然后在回流下搅拌。在此，通式4的化合物的量与通式3的化合物的摩尔比约等于1～2，且所述酸的量与通式3的化合物的摩尔比约为1至2。反应温度是在所用溶剂的回流温度范围内(即，对丁醇来说为120至140℃)，且反应时间在6-24小时的范围内。当反应完成后，将得到的反应溶液过滤。此后，用酸，例如盐酸，将过滤后的反应溶液的pH值控制在约4到5。然后，所得溶液可被浓缩和纯化，以生成本发明中通式1的化合物或其药学上可接受的盐。
通式1的化合物或其药学上可接受的盐可显示出抗癌活性，包括对癌症转移、癌症复发的抑制，还可以通过激活AMPK，具有降低血糖和血脂浓度的效果，哪怕用药剂量小于传统药物，下文实施例中将对此进行确认。因此，通式1的化合物或其药学上可接受的盐可以有效地用于治疗糖尿病、肥胖症、高血脂症、高胆固醇血症、脂肪肝、冠状动脉疾病、骨质疏松症、多囊卵巢综合症和代谢综合征。
相应地，本发明的又一个方面提供一种药物，包括通式1的化合物或其药学上可接受的盐，作为其活性成分。
本发明的又一方面提供：一种药物组合物，用于预防或治疗一种选自以下各项的疾病：糖尿病、肥胖症、高血脂症、高胆固醇血症、脂肪肝、冠状动脉疾病、骨质疏松症、多囊卵巢综合症、代谢综合征、肌肉疼痛、肌细胞损伤和横纹肌溶解症，该药物组合物包括通式1的化合物或其药学上可接受的盐作为其活性成分；还提供通式1的化合物或其药学上可接受的盐用于制备预防或治疗所述疾病的用途；以及提供一种用于预防或治疗所述疾病的方法，包括以具有疗效的剂量，向对象给予如通式1所述的化合物或其药学上可接受的盐。
在一个示例性实施例中，所述糖尿病可以是非胰岛素依赖型糖尿病。
本发明所述的药物组合物，除活性成分外，还包括至少一种药学上可接受的载体。本说明书中所称的术语“药学上可接受的载体”指的是已知的药学可接受辅料，其有利于将药学活性成分制剂以用于给药，且在其使用条件下基本无毒、防敏。辅料的确切比例，活性化合物的溶解度、化学特性，以及选定给药方式，都可通过标准药物实践来确定。
本发明的药物组合物可以用适合于所需给药方法的方式为制型，该方法采用生理上可接受的适当助剂作为辅料、崩解剂、甜味剂、粘合剂、覆盖剂、膨松剂、润滑剂、光泽剂或增味剂。
该药物组合物可以制型为药片、胶囊、药丸、颗粒、粉末、注射剂或液体，但本发明并不局限于此。
所述药物组合物的制型和药学可用载体可以从适当的已知技术中选择，例如，可以参考以下文件来选择：(Urquhartetal.，Lancet，16:367，1980)；(Liebermanetal.，PharmaceuticalDosageForms-DisperseSystems，2nded.，vol.3，1998)；(Anseletal.，PharmaceuticalDosageForms&DrugDeliverySystems，7thed.，2000)；(Martindale，TheExtraPharmacopeia，31sted.)；(Remington'sPharmaceuticalSciences，16th-20theditions)；(ThePharmacologicalBasisofTherapeutics，GoodmanandGilman，eds.，9thed.，1996)；和(WilsonandGisvolds'TextbookofOrganicMedicinalandPharmaceuticalChemistry，DelgadoandRemers，eds.，10thed.，1998)。而且，一种药物组合物的制型原则可以通过参考以下文件来描述:(Platt，ClinLabMed，7:289-99，1987)；(Aulton，Pharmaceutics:TheScienceofDosageFormDesign，ChurchillLivingstone，NY，1988)；(ExtemporaneousOralLiquidDosagePreparations，CSHP，1998)；和("DrugDosage，"JKansMedSoc，70(1):30-32，1969)。
在一个示例性实施例中，所述药物组合物可以与第二种药一起使用。
根据本发明所述，术语“第二种药”指的是除本发明所述的双胍衍生物之外的又一种药物活性成分。本发明所述通式1中的化合物或其药学上可接受的盐可以用来治疗各种疾病，如上所述。因此，本发明所述通式1中的化合物或其药学上可接受的盐可以与第二种药一起使用，以有效地治疗不同疾病。例如，第二种药可以是降血糖药剂、抗肥胖药剂、抗癌药剂等等。
当本发明所述通式1中的化合物或其药学上可接受的盐和第二种药可以用相同方式给药时，通式1中的化合物或其药学上可接受的盐可以与第二种药共同制型，以复合制剂的形式来提供。
同时，本发明中的术语“对象”指的是具有特定症状、失调或疾病的温血动物，例如哺乳动物。例如，哺乳动物包括人类、猩猩、小鼠、大鼠、狗、乌鸦、鸡、猪、山羊、绵羊、等等，但本发明并不局限于此。
而且，术语“治疗”包括缓解一种症状，暂时或永久地消除症状起因，以及预防或阻碍症状或上述症状、失调或疾病的加深，但本发明并不局限于此。
本发明所述的药物组合物的活性成分有效含量指的是治疗一种疾病时需要的分量。因此，活性成分有效含量可以根据多种因素进行调整，例如疾病的种类和严重程度，组合物种的活性成分及其他成分的种类和含量，制剂的种类，患者的年龄、体重、整体健康状况、性别和饮食，给药的周期和方式，组合物的释放速率，治疗期以及共同使用的药物数量。对成人来说，例如，通式1的化合物可以按50-3000mg/kg的总剂量来给药，每日给药1次至数次。
发明有益效果
本发明如通式1所述的N1-环胺-N5-取代苯基双胍衍生物对癌细胞增殖、癌症转移和癌症复发具有高效抑制效果，哪怕仅使用相比传统药物而言的小剂量；而且，其还能够高效地降低血糖和血脂浓度。因此，本发明如通式1所述的双胍衍生物可以有效地用于治疗糖尿病、肥胖症、高血脂症、高胆固醇血症、脂肪肝、冠状动脉疾病、骨质疏松症、多囊卵巢综合症和代谢综合征，以及癌症。
附图说明
图1是展示本发明中通式1所代表的化合物的非黏附性乳腺球群细胞形成效率(MFE(％))的图表；以及
图2所示为本发明中通式1所述化合物对于Snail的表达抑制作用的免疫印迹结果。
具体实施方式
以下将通过对实施例的详细描述来对本发明的优点、特征及揭示其优点和特征的方法进行说明。但是，必须清楚地理解，本发明并不局限于此，而是还可以具有其他各种实施和时间方式。显而易见，下列实施例的目的在于对本领域技术人员充分公开本发明并完整表明本发明的范围，而本发明的范围则仅由权利要求限定。
实施例
实施例1：N1-哌啶氰胍的合成
将哌啶(92.8ml，0.940mol)溶于丁醇(300ml)中，向制得的溶液中加入浓盐酸(81.7ml，0.940mol)并在0℃下搅拌30分钟。向所得混合溶液中加入二氰胺钠(92.0g，1.03mol)，并在回流条件下搅拌所得反应混合物24小时。确定反应结束后，对反应混合物进行过滤，并除去过滤中形成的氯化钠，并将滤液减压浓缩。向浓缩物中加入蒸馏水(100ml)，并于室温下搅拌1小时。对形成的固体进行过滤，以蒸馏水(2×20ml)洗涤滤饼，然后对滤饼进行减压干燥，以获得目标化合物的白色固体(93.3g，65％)。
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ7.01(br，s，2H)，3.39(m，4H)，1.54(m，2H)，1.42(m，4H)；LC-MSm/z153.2[M+1]+；mp163-165℃。
实施例2：N1-氮杂环丁烷氰胍的合成
根据实施例1中所述方法制作白色固态的目标化合物(1.13g，52％),但以氮杂环丁烷取代实施例1中所用的哌啶。
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ6.92(br，s，2H)，3.91(t，J＝7.8Hz，4H)，2.16(tt，J＝7.8，7.8Hz，2H)；LC-MSm/z125.2[M+1]+；mp188-189℃。
实施例3：N1-吡咯啶氰胍
根据实施例1中所述方法制作白色固态的目标化合物(24.5g，63％)，但以吡咯啶取代实施例1中所用的哌啶。
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ6.88(br，s，2H)，3.24(m，4H)，1.80(m，4H)；LC-MSm/z139.2[M+1]+；mp232-235℃。
实施例4：N1-氮杂环庚烷氰胍的合成
根据实施例1中所述方法制作白色固态的目标化合物(10.1g，60％)，但以氮杂环庚烷取代实施例1中所用的哌啶。
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ6.88(br，s，2H)，3.38(m，4H)，1.59(m，4H)，1.45(m，4H)；LC-MSm/z167.2[M+1]+；mp168-170℃。
实施例5：N1-吗啉氰胍的合成
根据实施例1中所述方法制作白色固态的目标化合物(2.04g，58％)，但以吗啉取代实施例1中所用的哌啶。
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ7.12(br，s，2H)，3.51(m，4H)，3.35(m，4H)；LC-MSm/z155.1[M+1]+；mp171-173℃。
实施例6：N1-(4-甲基哌嗪)氰胍的合成
根据实施例1中所述方法制作白色固态的目标化合物(1.01g，49％)，但以4-甲基哌嗪取代实施例1中所用的哌啶。
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ7.12(br，s，2H)，3.39(t，J＝4.8Hz，4H)，2.24(t，J＝4.8Hz，4H)，2.15(s，3H)；LC-MSm/z168.2[M+1]+；mp192-194℃。
实施例7：N-(N-(3-溴苯基)甲脒基)-1-哌啶-甲脒盐酸盐的制备
将(3-溴)苯胺(406mg，2.36mmol)溶于丁醇(10ml)中，向制得的溶液中加入浓盐酸(0.174ml，1.97mmol)并在室温下搅拌30分钟。向所得反应混合物中加入根据实施例1制得的N1-哌啶氰胍(300mg，1.97mmol)，并在回流条件下搅拌6小时。对反应混合物进行减压浓缩，加入6N盐酸/甲醇溶液(3ml)和乙酸乙酯(1ml)的同时溶解所得浓缩物。对形成的固体进行过滤，然后对滤饼进行减压干燥、以获得目标化合物的白色固体(596mg，70％)。
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ9.88(br，s，1H)，7.76(br，s，1H)，7.72(s，1H)，7.30(ddd，J＝7.8，1.2，0.6Hz，1H)，7.24(dd，J＝7.8，7.8Hz，1H)，7.19(dd，J＝7.8，0.6Hz，1H)，6.93(br，s，2H)，3.45(m，4H)，1.58(m，2H)，1.55(m，4H)；LC-MSm/z324.1[M+1]+；mp263-264℃。
下文中实施例8至实施例69中的目标化合物均是以根据实施例7中所述的相同方法而制备的，但为了对应于目标化合物，使用了实施例2至6中合成的氰胍和氨基化合物，而未使用实施例1中合成的N1-哌啶氰胍和实施例7中所用的(3-溴)苯胺。
实施例8：N-(N-苯基甲脒基)-1-哌啶-甲脒盐酸盐
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ9.38(br，s，1H)，7.69(br，s，2H)，7.37(m，2H)，7.28(m，2H)，7.02(dd，J＝3.9，3.9Hz，1H)，6.92(br，s，2H)，3.44(m，4H)，1.58(m，2H)，1.54(m，2H)；LC-MSm/z246.2[M+1]+；mp204-206℃。
实施例9：N-(N-m-甲苯基甲脒基)-1-哌啶-甲脒盐酸盐
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ9.34(br，s，1H)，7.56(br，s，2H)，7.12(m，3H)，6.81(s，1H)，6.77(br，s，2H)，3.39(m，4H)，2.22(s，3H)，1.55(m，2H)，1.49(m，4H)；LC-MSm/z260.2[M+1]+；mp239-240℃。
实施例10：N-(N-(3-甲基苯基)甲脒基)-1-哌啶-甲脒盐酸盐
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.46(br，s，1H)，7.61(br，s，2H)，7.18(m，3H)，6.89(m，1H)，6.83(br，s，2H)，3.43(m，4H)，2.56(m，2H)，1.58(m，6H)，1.16(m，3H)；LC-MSm/z274.2[M+1]+；mp225-227℃。
实施例11：N-(N-(3-羟基苯基)甲脒基)-1-哌啶-甲脒盐酸盐
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ9.53(s，1H)，7.69(br，s，2H)，7.04(t，J＝7.8Hz，1H)，6.88(s，1H)，6.88(br，s，2H)，6.76(d，J＝7.8Hz，1H)，6.44(d，J＝7.8Hz，1H)，3.44(m，4H)，1.58(m，2H)，1.55(m，4H)；LC-MSm/z262.2[M+H]+；mp210-212℃。
实施例12：N-(N-(3-(羟基甲基)苯基)甲脒基)-1-哌啶-甲脒盐酸盐
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ9.35(br，s，1H)，7.61(br，s，2H)，7.29(s，1H)，7.23(m，2H)，6.98(d，J＝5.4Hz，1H)，6.79(br，s，2H)，5.20(t，J＝5.2Hz，1H)，4.45(d，J＝6.0Hz，2H)，3.43(m，4H)，1.59(m，2H)，1.54(m，4H)；LC-MSm/z276.2[M+1]+；mp225-227℃。
实施例13：N-(N-(3-甲氧基苯基)甲脒基)-1-哌啶-甲脒盐酸盐
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ9.42(br，s，1H)，7.65(br，s，2H)，7.18(t，J＝7.8Hz，1H)，7.04(s，1H)，6.88(d，J＝7.2Hz，1H)，6.81(br，s，2H)，6.61(m，1H)，3.71(s，3H)，3.43(m，4H)，1.59(m，2H)，1.54(m，4H)；LC-MSm/z276.2[M+1]+；mp230-232℃。
实施例14：N-(N-(4-氟苯基)甲脒基)-1-哌啶-甲脒盐酸盐
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ9.58(br，s，1H)，7.63(br，s，2H)，7.37(dd，J＝9.0，4.8Hz，2H)，7.13(dd，J＝9.0，9.0Hz，2H)，6.83(br，s，2H)，3.42(m，4H)，1.58(m，2H)，1.53(m，4H)；LC-MSm/z264.2[M+1]+；mp269-270℃。
实施例15：N-(N-(2-氟苯基)甲脒基)-1-哌啶-甲脒盐酸盐
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ9.61(br，s，1H)，7.66(br，s，2H)，7.35(m，1H)，7.30(m，1H)，7.14(dd，J＝8.4，8.4Hz，2H)，6.86(br，s，2H)，3.42(m，4H)，1.55(m，6H)；LC-MSm/z264.2[M+1]+；mp155-157℃。
实施例16：N-(N-(3-氟苯基)甲脒基)-1-哌啶-甲脒盐酸盐
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ9.96(br，s，1H)，7.79(br，s，2H)，7.37(s，1H)，7.28(s，1H)，7.20(s，1H)，7.11(d，J＝8.4Hz，1H)，6.93(br，s，2H)，3.46(m，4H)，1.56(m，6H)；LC-MSm/z264.2[M+1]+；mp201-202℃。
实施例17：N-(N-(4-氯苯基)甲脒基)-1-吡咯烷-甲脒盐酸盐
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ9.61(br，s，1H)，7.58(br，s，1H)，7.42(m，2H)，7.33(m，2H)，6.82(br，s，2H)，3.38(m，4H)，1.94(m，2H)，1.83(m，2H)；LC-MSm/z266.2[M+1]+；mp260-261℃。
实施例18：N-(N-(4-氯苯基)甲脒基)-1-哌啶-甲脒盐酸盐
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ9.96(br，s，1H)，7.70(br，s，1H)，7.39(d，J＝8.7Hz，2H)，7.22(dd，J＝8.7，1.8Hz，2H)，6.85(br，s，2H)，3.43(m，4H)，1.58(m，2H)，1.54(m，4H)；LC-MSm/z280.2[M+1]+；mp275-276℃。
实施例19：N-(N-(3-氯苯基)甲脒基)-1-吡咯烷-甲脒盐酸盐
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ10.04(br，s，1H)，7.63(br，s，2H)，7.58(s，1H)，7.26(m，2H)，7.00(d，J＝6.0Hz，1H)，6.91(br，s，2H)，3.26(m，4H)，1.80(m，4H)；LC-MSm/z266.2[M+1]+；mp170-172℃。
实施例20：N-(N-(3-氯苯基)甲脒基)-1-哌啶-甲脒盐酸盐
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ10.10(br，s，1H)，7.81(br，s，2H)，7.60(s，1H)，7.49(s，1H)，7.28(m，1H)，7.05(d，J＝7.2Hz，1H)，6.98(br，s，2H)，3.38(m，4H)，1.55(m，4H)；LC-MSm/z280.2[M+1]+；mp172-174℃。
实施例21：N-(N-(3-氯苯基)甲脒基)-1-氮杂环庚烷-甲脒盐酸盐
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ8.82(br，s，1H)，7.71(d，J＝7.8Hz，1H)，7.62(br，s，1H)，7.46(d，J＝7.8Hz，1H)，7.29(dd，J＝7.8，7.8Hz，1H)，7.16(br，s，2H)，7.12(dd，J＝7.8，7.8Hz，1H)，3.41(m，4H)，1.68(m，2H)，1.49(m，6H)；LC-MSm/z294.2[M+1]+；mp213-215℃。
实施例22：N-(N-(3-溴苯基)甲脒基)-4-吗啉-甲脒盐酸盐
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ9.80(br，s，1H)，7.86(br，s，1H)，7.65(br，s，1H)，7.30(d，J＝7.8Hz，1H)，7.25(dd，J＝7.8，7.8Hz，1H)，7.21(dd，J＝7.8，1.2Hz，1H)，7.01(br，s，2H)，3.64(t，J＝4.8Hz，2H)，3.46(t，J＝4.8Hz，2H)；LC-MSm/z326.3[M+1]+；mp264-265℃。
实施例23：N-(N-(3-(三氟甲基)苯基)甲脒基)-1-吡咯烷-甲脒盐酸盐
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ9.93(br，s，1H)，7.86(s，1H)，7.68(br，s，2H)，7.65(d，J＝8.4Hz，1H)，7.51(dd，J＝8.4，7.2Hz，1H)，7.34(d，J＝7.2Hz，1H)，6.92(br，s，2H)，3.35(m，4H)，1.94(m，2H)，1.84(m，2H)；LC-MSm/z300.1[M+1]+；mp286-287℃。
实施例24：N-(N-(3-(三氟甲基)苯基)甲脒基)-1-哌啶-甲脒盐酸盐
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ9.94(br，s，1H)，7.77(br，s，2H)，7.59(d，J＝7.8Hz，1H)，7.51(dd，J＝7.8，7.8Hz，1H)，7.35(d，J＝7.8Hz，1H)，6.94(br，s，2H)，3.45(m，4H)，1.59(m，2H)，1.54(m，4H)；LC-MSm/z314.3[M+1]+；mp264-265℃。
实施例25：N-(N-(4-(三氟甲基)苯基)甲脒基)-1-氮杂环丁烷-甲脒盐酸盐
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ9.91(br，s，1H)，7.64(br，s，2H)，7.63(d，J＝9.0Hz，2H)，7.59(d，J＝9.0Hz，2H)，7.06(br，s，2H)，4.04(m，4H)，2.26(m，2H)；LC-MSm/z286.2[M+1]+；mp258-259℃。
实施例26：N-(N-(4-(三氟甲基)苯基)甲脒基)-1-吡咯烷-甲脒盐酸盐
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ10.07(br，s，1H)，7.71(br，s，2H)，7.63(m，4H)，6.97(br，s，2H)，3.35(m，4H)，1.95(m，2H)，1.84(m，2H)；LC-MSm/z300.1[M+1]+；mp283-284℃。
实施例27：N-(N-(4-(三氟甲基)苯基)甲脒基)-1-哌啶-甲脒盐酸盐
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ10.03(br，s，1H)，7.84(br，s，2H)，7.64(d，J＝9.0Hz，2H)，7.59(d，J＝9.0Hz，2H)，6.96(br，s，2H)，3.44(m，4H)，1.58(m，2H)，1.56(m，4H)；LC-MSm/z314.3[M+1]+；mp273-274℃。
实施例28：N-(N-(3-(三氟甲基)苯基)甲脒基)-1-吡咯烷-甲脒盐酸盐
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ9.78(br，s，1H)，7.64(br，s，2H)，7.55(s，1H)，7.39(dd，J＝8.4，8.4Hz，1H)，7.35(d，J＝8.4Hz，1H)，6.97(d，J＝8.4Hz，1H)，6.85(br，s，2H)，3.35(m，4H)，1.95(m，2H)，1.84(m，2H)；LC-MSm/z316.2[M+1]+；mp261-262℃。
实施例29：N-(N-(3-(三氟甲基)苯基)甲脒基)-1-哌啶-甲脒盐酸盐
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ9.57(br，s，1H)，7.76(br，s，2H)，7.53(s，1H)，7.40(t，J＝8.4Hz，1H)，7.29(d，J＝7.2Hz，1H)，6.99(d，J＝7.8Hz，1H)，6.82(br，s，2H)，3.43(m，4H)，1.60(m，2H)，1.54(m，4H)；LC-MSm/z330.2[M+1]+；mp264-266℃。
实施例30：N-(N-(3-(二氟甲氧基)苯基)甲脒基)-1-哌啶-甲脒盐酸盐
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ9.43(br，s，1H)，7.71(br，s，2H)，7.33(d，J＝8.4Hz，2H)，7.15(s，1H)，6.82(m，2H)，6.80(br，s，2H)，3.44(m，4H)，1.59(m，2H)，1.54(m，4H)；LC-MSm/z312.3[M+1]+；mp244-245℃。
实施例31：N-(N-(4-(三氟甲氧基)苯基)甲脒基)-1-氮杂环丁烷-甲脒盐酸盐
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ9.91(br，s，1H)，7.53(br，s，2H)，7.47(d，J＝9.0Hz，2H)，7.30(d，J＝9.0Hz，2H)，6.94(br，s，2H)，4.02(m，4H)，2.26(m，2H)；LC-MSm/z302.1[M+1]+；mp257-259℃。
实施例32：N-(N-(4-(三氟甲氧基)苯基)甲脒基)-1-吡咯烷-甲脒盐酸盐
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ9.60(d，J＝5.4Hz，1H)，7.58(br，s，2H)，7.51(d，J＝9.0Hz，2H)，7.28(d，J＝9.0Hz，2H)，6.81(br，s，2H)，3.34(m，4H)，1.94(m，2H)，1.84(m，2H)；LC-MSm/z316.2[M+1]+；mp281-282℃。
实施例33：N-(N-(4-(三氟甲氧基)苯基)甲脒基)-1-哌啶-甲脒盐酸盐
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ9.55(br，s，1H)，7.71(br，s，2H)，7.47(d，J＝8.4Hz，2H)，7.30(d，J＝9.0Hz，2H)，6.82(br，s，2H)，3.42(m，4H)，1.59(m，2H)，1.55(m，4H)；LC-MSm/z330.2[M+H]+；mp277.3℃。
实施例34：N-(N-(4-(三氟甲氧基)苯基)甲脒基)-4-吗啉-甲脒盐酸盐
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ9.64(br，s，1H)，7.83(br，s，2H)，7.45(d，J＝8.4Hz，2H)，7.31(d，J＝8.4Hz，2H)，6.97(br，s，2H)，3.63(t，J＝4.8Hz，2H)，3.44(t，J＝4.8Hz，2H)；LC-MSm/z332.2[M+1]+；mp263-264℃。
实施例35：4-甲基-N-(N-(4-(三氟甲氧基)苯基)甲脒基)-1-哌嗪-甲脒盐酸盐
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ10.10(br，s，1H)，7.84(br，s，2H)，7.47(d，J＝8.8Hz，2H)，7.29(d，J＝8.8Hz，2H)，7.04(br，s，2H)，3.46(m，4H)，2.35(m，4H)，2.19(s，3H)；LC-MSm/z345.1[M+1]+；mp258-259℃。
实施例36：N-(N-(3-氨基苯基)甲脒基)-1-哌啶-甲脒盐酸盐
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ9.12(br，s，1H)，7.53(br，s，2H)，6.90(t，J＝7.8Hz，1H)，6.73(br，s，2H)，6.55(s，1H)，6.51(d，J＝6.0Hz，1H)，6.25(d，J＝6.0Hz，1H)，5.06(br，s，2H)，3.42(m，4H)，1.59(m，2H)，1.54(m，4H)；LC-MSm/z261.2[M+1]+；mp220-222℃。
实施例37：N-(N-(4-(二甲基氨基)苯基)甲脒基)-1-哌啶-甲脒盐酸盐
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ8.95(br，s，1H)，7.40(br，s，2H)，7.12(d，J＝9.0Hz，2H)，6.68(m，4H)，3.39(m，4H)，2.85(s，6H)，1.57(m，2H)，1.51(m，4H)；LC-MSm/z289.1[M+H]+；mp253-255℃。
实施例38：N-(4-(3-(氨基(哌啶-1-基)甲基)胍基)苯基)乙酰胺盐酸盐
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ9.96(br，s，1H)，9.34(br，s，1H)，7.57(br，s，2H)，7.49(d，J＝9.6Hz，2H)，7.24(d，J＝9.6Hz，2H)，6.79(br，s，2H)，3.41(m，4H)，1.58(m，2H)，1.52(m，4H)；LC-MSm/z303.2[M+1]+；mp258-260℃。
实施例39：N-(3-(3-(氨基(哌啶-1-基)甲基)胍基)苯基)乙酰胺盐酸盐
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ10.01(br，s，1H)，9.47(br，s，1H)，7.67(br，s，2H)，7.65(s，1H)，7.16(m，2H)，7.09(m，1H)，6.80(br，s，2H)，3.43(m，4H)，2.02(s，3H)，1.55(m，6H)；LC-MSm/z303.2[M+1]+；mp265-267℃。
实施例40：N-(N-(4-(1H-四唑-5-基)苯基)甲脒基)-1-哌啶-甲脒盐酸盐
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ9.91(br，s，1H)，7.99(d，J＝9.0Hz，2H)，7.80(br，s，2H)，7.58(d，J＝9.0Hz，2H)，6.95(br，s，2H)，3.46(m，4H)，1.58(m，6H)；LC-MSm/z314.2[M+1]+；mp241-242℃。
实施例41：N-(N-(3-(甲基磺酰氨基)苯基)甲脒基)-1-哌啶-甲脒盐酸盐
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ9.22(br，s，1H)，7.63(br，s，2H)，7.28(s，1H)，7.22(t，J＝8.4Hz，1H)，7.09(d，J＝7.8Hz，1H)，6.85(m，1H)，6.70(br，s，2H)，3.45(m，4H)，2.97(s，3H)，1.59(m，2H)，1.55(m，4H)；LC-MSm/z339.2[M+1]+；mp251-253℃。
实施例42：4-(3-(亚氨基(哌啶-1-基)甲基)胍基)苯磺酸盐
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ9.10(br，s，1H)，7.58(br，s，2H)，7.47(d，J＝4.8Hz，2H)，7.23(d，J＝5.4Hz，2H)，6.66(br，s，2H)，3.38(m，4H)，1.55(m，2H)，1.50(m，4H)；LC-MSm/z341.1[M+H]+；mp305-307℃。
实施例43：N-(N-(4-(甲硫基)苯基)甲脒基)-1-哌啶-甲脒盐酸盐
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ.34(br，s，1H)，7.58(br，s，2H)，7.26(d，J＝7.8Hz，2H)，7.18(d，J＝4.8Hz，2H)，6.74(br，s，2H)，3.38(m，4H)，2.39(s，3H)，1.55(m，2H)，1.50(m，4H)；LC-MSm/z292.3[M+H]+；mp264-265℃。
实施例44：N-(N-(4-氨磺酰基苯基)甲脒基)-1-哌啶-甲脒盐酸盐
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ10.22(br，s，1H)，7.84(br，s，2H)，7.71(d，J＝8.4Hz，2H)，7.56(d，J＝8.4Hz，2H)，7.22(br，s，2H)，7.01(br，s，2H)，3.45(m，4H)，1.58(m，6H)；LC-MSm/z325.2[M+H]+；mp263-365℃。
实施例45：N-(N-(3,5-二甲氧基苯基)甲脒基)-1-哌啶-甲脒盐酸盐
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ9.55(br，s，1H)，7.70(br，s，2H)，6.88(br，s，2H)，6.59(s，2H)，6.20(s，1H)，3.70(s，6H)，3.45(m，4H)，1.59(m，2H)，1.55(m，4H)；LC-MSm/z306.3[M+1]+；mp234-236℃。
实施例46：N-(N-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)甲脒基)-1-哌啶-甲脒盐酸盐
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ10.37(br，s，1H)，7.88(m，1H)，7.83(br，s，2H)，7.65(m，1H)，7.45(dd，J＝9.6，9.6Hz，1H)，7.03(br，s，2H)，3.45(m，4H)，1.58(m，2H)，1.53(m，4H)；LC-MSm/z332.2[M+1]+；mp269-270℃。
实施例47：N-(N-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)甲脒基)-1-哌啶-甲脒盐酸盐
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ9.87(br，s，1H)，7.97(s，1H)，7.82(br，s，2H)，7.64(d，J＝9.0Hz，1H)，7.61(d，J＝9.0Hz，1H)，6.94(br，s，2H)，3.44(m，4H)，1.59(m，2H)，1.54(m，4H)；LC-MSm/z348.1[M+1]+；mp269-270℃。
实施例48：N-(N-(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)甲脒基)-1-吡咯烷-甲脒盐酸盐
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.42(br，s，1H)，7.80(br，s，2H)，7.73(d，J＝14.0Hz，1H)，7.66(dd，J＝9.0，8.4Hz，1H)，7.30(d，J＝8.4Hz，1H)，7.03(br，s，2H)，3.36(m，4H)，1.95(m，2H)，1.84(m，2H)；LC-MSm/z318.2[M+1]+；mp253-254℃。
实施例49：N-(N-(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)甲脒基)-1-哌啶-甲脒盐酸盐
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ10.35(br，s，1H)，7.94(br，s，2H)，7.68(s，1H)，7.66(d，J＝8.4Hz，1H)，7.28(d，J＝8.4Hz，1H)，7.03(br，s，2H)，3.45(m，4H)，1.51(m，6H)；LC-MSm/z332.2[M+1]+；mp263-264℃。
实施例50：N-(N-(4-氟-3-(三氟甲氧基)苯基)甲脒基)-1-哌啶-甲脒盐酸盐
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ9.95(br，s，1H)，7.78(br，s，2H)，7.70(m，1H)，7.44(dd，J＝9.6，9.6Hz，1H)，7.34(m，1H)，6.93(br，s，2H)，3.44(m，4H)，1.59(m，2H)，1.53(m，4H)；LC-MSm/z348.2[M+1]+；mp260-261℃。
实施例51：N-(N-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)甲脒基)-1-哌啶-甲脒盐酸盐
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ10.21(br，s，1H)，7.85(br，s，2H)，7.79(s，1H)，7.58(d，J＝8.4Hz，1H)，7.35(dd，J＝8.4，2.4Hz，1H)，6.99(br，s，2H)，3.45(m，4H)，1.60(m，2H)，1.54(m，4H)；LC-MSm/z364.1[M+1]+；mp251-252℃。
实施例52：N-(N-(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)甲脒基)-1-氮杂环丁烷-甲脒盐酸盐
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ9.87(br，s，1H)，7.66(m，3H)，7.47(dd，J＝8.4，8.4Hz，1H)，7.16(d，J＝8.4Hz，1H)，7.01(br，s，2H)，4.03(m，4H)，2.26(m，2H)；LC-MSm/z320.2[M+1]+；mp260-261℃。
实施例53：N-(N-(3-氟-4-(三氟甲氧基)苯基)甲脒基)-1-吡咯烷-甲脒盐酸盐
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.82(br，s，1H)，7.68(m，3H)，7.47(dd，J＝9.2，8.8Hz，1H)，7.20(d，J＝9.2Hz，1H)，6.87(br，s，2H)，3.35(m，4H)，1.93(m，2H)，1.83(m，2H)；LC-MSm/z334.1[M+1]+；mp278-279℃。
实施例54：N-(N-(3-氟-4-(三氟甲氧基)苯基)甲脒基)-1-哌啶-甲脒盐酸盐
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ10.09(br，s，1H)，7.85(br，s，2H)，7.64(d，J＝9.0Hz，1H)，7.48(dd，J＝9.0，9.0Hz，1H)，7.19(dd，J＝9.0，1.2Hz，1H)，6.95(br，s，2H)，3.44(m，4H)，1.57(m，6H)；LC-MSm/z348.3[M+1]+；mp262-263℃。
实施例55：N-(N-(3-氯-4-(三氟甲氧基)苯基)甲脒基)-1-氮杂环丁烷-甲脒盐酸盐
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.91(br，s，1H)，7.79(dd，J＝1.6，0.8Hz，1H)，7.66(br，s，2H)，7.49(d，J＝9.2Hz，1H)，7.37(ddd，J＝9.2，1.6，0.8Hz，1H)，7.05(br，s，2H)，4.04(m，4H)，2.26(m，2H)；LC-MSm/z336.1[M+1]+；mp254-255℃。
实施例56：N-(N-(3-氯-4-(三氟甲氧基)苯基)甲脒基)-1-吡咯烷-甲脒盐酸盐
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.23(br，s，1H)，7.82(d，J＝2.4Hz，1H)，7.71(br，s，2H)，7.48(d，J＝9.0Hz，1H)，7.37(dd，J＝9.0，2.4Hz，1H)，6.93(br，s，2H)，3.36(m，4H)，1.94(m，2H)，1.85(m，2H)；LC-MSm/z250.1[M+1]+；mp275-276℃。
实施例57：N-(N-(3-氯-4-(三氟甲氧基)苯基)甲脒基)-1-哌啶-甲脒盐酸盐
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ9.91(br，s，1H)，7.83(br，s，2H)，7.78(d，J＝3.0Hz，1H)，7.49(d，J＝9.0Hz，1H)，7.37(dd，J＝9.0，3.0Hz，1H)，6.94(br，s，2H)，3.44(m，4H)，1.59(m，2H)，1.56(m，4H)；LC-MSm/z364.1[M+1]+；mp261-262℃。
实施例58：N-(N-(2,4-二氟苯基)甲脒基)-1-哌啶-甲脒盐酸盐
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ9.00(br，s，1H)，7.67-7.63(m，3H)，7.30(m，1H)，7.06(m，1H)，7.01(br，s，2H)，3.40(m，4H)，1.57(m，2H)，1.51(m，4H)；LC-MSm/z282.3[M+1]+；mp256-257℃。
实施例59：N-(N-(3,4-二氟苯基)甲脒基)-1-哌啶-甲脒盐酸盐
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ9.67(br，s，1H)，7.73(br，s，2H)，7.54(ddd，J＝13.2，7.2，3.0Hz，1H)，7.36(dd，J＝13.2，9.0Hz，1H)，7.10(m，1H)，6.85(br，s，2H)，3.43(m，4H)，1.58(m，2H)，1.54(m，4H)；LC-MSm/z282.3[M+1]+；mp257-258℃。
实施例60：N-(N-(3,5-二氟苯基)甲脒基)-1-哌啶-甲脒盐酸盐
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ10.31(br，s，1H)，7.88(br，s，2H)，7.14(dd，J＝9.6，2.0Hz，2H)，6.98(br，s，2H)，6.82(ddd，J＝9.6，9.6，2.0Hz，1H)，3.45(m，4H)，1.58(m，6H)；LC-MSm/z282.3[M+1]+；mp243-244℃。
实施例61：N-(N-(3,5-二氯苯基)甲脒基)-1-哌啶-甲脒盐酸盐
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ10.22(br，s，1H)，7.86(br，s，2H)，7.49(s，2H)，7.20(s，1H)，7.00(br，s，2H)，3.47(m，4H)，1.44(m，6H)；LC-MSm/z314.3[M+1]+；mp230-231℃。
实施例62：N-(N-(2,4-二氯苯基)甲脒基)-1-哌啶-甲脒盐酸盐
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ8.90(br，s，1H)，7.74(d，J＝9.0Hz，1H)，7.73(br，s，2H)，7.63(d，J＝2.4Hz，1H)，7.39(dd，J＝9.0，2.4Hz，1H)，7.20(br，s，2H)，3.39(m，4H)，1.56(m，2H)，1.51(m，4H)；LC-MSm/z314.0[M+1]+；mp262-263℃。
实施例63：N-(N-(3,4-二氯苯基)甲脒基)-1-吡咯烷-甲脒盐酸盐
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ10.13(br，s，1H)，7.80(d，J＝3.0Hz，1H)，7.69(br，s，2H)，7.51(d，J＝9.0Hz，1H)，7.36(dd，J＝9.0，3.0Hz，1H)，6.97(br，s，2H)，3.35(m，4H)，1.95(m，2H)，1.84(m，4H)；LC-MSm/z300.2[M+1]+；mp282-283℃。
实施例64：N-(N-(3,4-二氯苯基)甲脒基)-1-哌啶-甲脒盐酸盐
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ10.12(br，s，1H)，7.80(br，s，2H)，7.74(d，J＝2.4Hz，1H)，7.05(dd，J＝8.4，2.4Hz，1H)，7.28(d，J＝8.4Hz，1H)，6.95(br，s，2H)，3.40(m，4H)，1.54(m，6H)；LC-MSm/z314.2[M+1]+；mp267-269℃。
实施例65：N-(N-(3-氯-5-(三氟甲氧基)苯基)甲脒基)-1-哌啶-甲脒盐酸盐
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ.97(br，s，1H)，7.85(br，s，2H)，7.52(s，1H)，7.45(s，1H)，7.15(s，1H)，6.94(br，s，2H)，3.45(m，4H)，.59(m，2H)，1.56(m，4H)；LC-MSm/z364.2[M+H]+；mp208-209℃。
实施例66：N-(N-(3-溴-5-(三氟甲氧基)苯基)甲脒基)-1-吡咯烷-甲脒盐酸盐
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ10.18(br，s，1H)，7.74(br，s，2H)，7.69(s，2H)，7.52(s，1H)，7.23(s，1H)，6.95(br，s，2H)，3.35(m，4H)，1.96(m，2H)，1.85(m，2H)；LC-MSm/z394.2[M+1]+；mp241-242℃。
实施例67：N-(N-(3-溴-5-(三氟甲氧基)苯基)甲脒基)-1-哌啶-甲脒盐酸盐
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ10.03(br，s，1H)，7.85(br，s，2H)，7.65(s，1H)，7.50(s，1H)，7.26(s，1H)，6.96(br，s，2H)，3.45(m，4H)，1.60(m，2H)，1.55(m，4H)；LC-MSm/z408.0[M+H]+；mp205-207℃。
实施例68：N-(N-(3,4,5-三氟苯基)甲脒基)-1-哌啶-甲脒盐酸盐
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ10.38(br，s，1H)，7.88(br，s，2H)，7.34(dd，J＝10.2，6.6Hz，2H)，6.97(br，s，2H)，3.45(m，4H)，1.57(m，6H)；LC-MSm/z300.2[M+1]+；mp248-249℃。
实施例69：N-(N-(2,4,6-三氟苯基)甲脒基)-1-哌啶-甲脒盐酸盐
1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ8.78(br，s，1H)，7.62(br，s，2H)，7.26(dd，J＝8.4，8.4Hz，2H)，7.05(br，s，2H)，3.35(m，4H)，1.55(m，2H)，1.48(m，4H)；LC-MSm/z300.3[M+1]+；mp243-244℃。
实施例70：N-(N-(4-(三氟甲基)苯基)甲脒基)-1-吡咯烷-甲脒乙酸盐
(1-1)N1-吡咯啶-N5-(4-三氟甲基)苯基双胍的游离碱
将A26(OH)离子交换树脂(30g)溶于甲醇(20ml)中，并将制得溶液在室温下搅拌10分钟，然后将离子交换树脂填入柱中(直径:3cm，高度:80cm)。然后，以甲醇(200ml)通过柱。将实施例26中所制备的盐酸盐(2.82g，7.67mmol)溶解于甲醇(3ml)中，并将所得溶液装入柱中，再以甲醇(200ml)通过柱。将所收集的溶液低压浓缩，获得白色固体。然后，向白色固体中加入乙酸乙酯(100ml)，并搅拌10分钟。将所得混合物过滤，所得滤液低压浓缩，制得白色固态的N1-吡咯啶-N5-(4-三氟甲基)苯基双胍盐酸盐的游离碱(2.37g，93％)。该游离碱不再进一步纯化，而是直接运用于接下来的操作中。
(1-2)N1-吡咯啶-N5-(4-三氟甲基)苯基双胍乙酸盐的制备
将操作(1-1)中制备的游离碱(2.37g，7.15mmol)溶解于甲醇(10ml)中，向所得溶液中加入乙酸(0.614ml，10.7mmol)，并在室温下搅拌30分钟。将反应混合物低压浓缩。向浓缩液中加入乙酸乙酯(10ml)，并在室温下搅拌30分钟。过滤所得固体，得到白色固态的目标化合物(2.43g，81％)。
1HNMR(600MHz，CD3OD)δ7.61(d，J＝9.0Hz，2H)，7.57(d，J＝9.0Hz，2H)，3.51(t，J＝6.0Hz，2H)，3.43(t，J＝6.0Hz，2H)，2.07(m，2H)，1.94(m，2H)，1.90(s，3H)；LC-MSm/z300.2[M+1]+；mp202-204℃。
以下实施例71-77中的目标化合物是根据实施例70中的操作(1-1)和(1-2)的相同方法所制备的，但对应于目标化合物，以实施例27、32、33、48、49、53和54中制备的盐酸盐分别替代了实施例70中的操作(1-1)中所用的实施例26的盐酸盐。
实施例71：N-(N-(4-(三氟甲基)苯基)甲脒基)-1-哌啶-甲脒乙酸盐
1HNMR(600MHz，CD3OD)δ7.58(m，4H)，3.54(t，J＝5.4Hz，4H)，1.89(s，3H)，1.71(m，2H)，1.66(m，4H)；LC-MSm/z314.3[M+1]+；mp198-200℃。
实施例72：N-(N-(4-(三氟甲氧基)苯基)甲脒基)-1-吡咯烷-甲脒乙酸盐
1HNMR(400MHz，CD3OD)δ7.49(d，J＝8.8Hz，2H)，7.21(d，J＝8.8Hz，2H)，3.48(m，2H)，3.40(m，2H)，2.05(m，2H)，1.95(m，2H)，1.90(s，3H)；LC-MSm/z316.2[M+1]+；mp196-198℃。
实施例73：N-(N-(4-(三氟甲氧基)苯基)甲脒基)-1-哌啶-甲脒乙酸盐
1HNMR(600MHz，CD3OD)δ7.45(d，J＝8.4Hz，2H)，7.22(d，J＝8.4Hz，2H)，3.52(t，J＝5.4Hz，4H)，1.89(s，3H)，1.69(m，2H)，1.64(m，4H)；LC-MSm/z330.2[M+1]+；mp200-202℃。
实施例74：N-(N-(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)甲脒基)-1-吡咯烷-甲脒乙酸盐
1HNMR(400MHz，CD3OD)δ7.70(d，J＝13.2Hz，1H)，7.55(dd，J＝8.8，8.8Hz，1H)，7.26(d，J＝8.8Hz，1H)，3.50(m，2H)，3.42(m，2H)，2.07(m，2H)，1.95(m，2H)，1.90(s，3H)；LC-MSm/z318.2[M+1]+；mp204-205℃。
实施例75：N-(N-(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)甲脒基)-1-哌啶-甲脒乙酸盐
1HNMR(600MHz，CD3OD)δ7.63(dd，J＝13.2，1.2Hz，1H)，7.56(dd，J＝7.8，7.8Hz，1H)，7.25(d，J＝7.8Hz，1H)，3.55(t，J＝5.4Hz，4H)，1.90(s，3H)，1.72(m，2H)，1.67(m，4H)；LC-MSm/z332.2[M+1]+；mp206-208℃。
实施例76：N-(N-(3-氟-4-(三氟甲氧基)苯基)甲脒基)-1-吡咯烷-甲脒乙酸盐
1HNMR(600MHz，CD3OD)δ7.62(dd，J＝12.6，2.4Hz，1H)，7.32(dd，J＝9.0，1.2Hz，1H)，7.17(ddd，J＝9.0，2.4，1.2Hz，1H)，3.49(m，2H)，3.42(m，2H)，2.06(m，2H)，1.96(m，2H)，1.90(s，3H)；LC-MSm/z334.1[M+1]+；mp203-205℃。
实施例77：N-(N-(3-氟-4-(三氟甲氧基)苯基)甲脒基)-1-哌啶-甲脒乙酸盐
1HNMR(600MHz，CD3OD)δ7.58(dd，J＝12.6，2.4Hz，1H)，7.32(d，J＝9.0Hz，1H)，7.15(ddd，J＝9.0，2.4，1.2Hz，1H)，3.54(t，J＝5.4Hz，4H)，1.90(s，3H)，1.71(m，2H)，1.66(m，4H)；LC-MSm/z348.3[M+1]+；mp202-204℃。
对比实施例26、27、32、33、48、49、53和54中所制备的盐酸盐的水溶性和实施例70-77中所制备的乙酸盐的水溶性。
实验条件和方法如下所述。
1)在室温下，向含有5mg盐的容器中加入1ml蒸馏水。
2)搅拌所得混合物10分钟，然后在室温下放置1小时。
3)回收未溶解的残余盐并称重。
4)计算回收到的盐量和溶解的盐量的比率。
5)重复进行操作1)至4)并增加盐量(即、10、15、20、25和30mg)。
对实施例26、27、32、33、48、49、53和54中所制备的每种盐酸盐的水溶性和实施例70-77中所制备的每种乙酸盐重复实验步骤。从实施例26、27、32、33、48、49、53和54中所制备的盐酸盐的水溶性和实施例70-77中所制备的乙酸盐取得的对比溶解度列举在如下表1中。
表1
从表1中列举的结果可以看出，乙酸盐的水溶性普遍比盐酸盐增加得多。
实验例
下文实验例中、将描述评估按照本发明的实施例中所述的方法所合成的化合物对AMPK激活和癌细胞增殖的抑制效果。
实验例1：AMPK激活效果的测量
采用源于人类乳癌细胞的MCF7细胞(韩国细胞株银行(KoreanCellLineBank)有售)，并使用AMPKα免疫检验试剂盒(英杰公司(Invitrogen)，货号KHO0651)来确认双胍衍生物的AMPK激活效果。
在补充了10％牛胎血清的DMEM培养基中培养MCF7细胞。然后，将培养后的MCF7细胞放入6孔板中，每孔中约5×105细胞，再在5％CO2的培养箱中培养。培养基以5、10、50μM本文实施例中合成的衍生物处理，然后培养24小时。用盐酸二甲双胍作为对照，以0.05、0.5、1、2、5和10mM的盐酸二甲双胍处理培养基，然后对其进行与实施例中合成的衍生物方式相同的实验。随后，按照AMPKα免疫检验试剂盒的操作手册中的方法进行细胞溶解，取20μg细胞溶解产物进行蛋白质分析。然后，按照AMPKα免疫检验试剂盒的操作手册中的方法，确定172nd苏氨酸残基的磷酸化程度，以得到AMPK活化效果。双胍衍生物对AMPK的激活程度展示为：相对于未以双胍衍生物来处理的培养细胞中的AMPKα磷酸化程度而言，与实施例中所合成的化合物共同培育的细胞中的AMPKα磷酸化程度。根据所得的AMPKα激活结果，绘制出显示AMPK激活的曲线图；采用GraphPadPrism5.0程序，计算出达到150％AMPK激活度的化合物的浓度值(激活浓度150，AC150)；然后，在双胍衍生物处理浓度为10μM和50μM且盐酸二甲双胍浓度为50μM处，获得AMPK活化程度。
实验结果列举在如下表2中。
表2
实验例2：癌细胞增殖抑制效果的测量
采用源于人类结肠直肠癌细胞的HCT116细胞(韩国细胞株银行(KoreanCellLineBank)有售)，以3-(4，5-二甲基吡啶-2-基)-2，5-二苯基溴化(MTT)试剂测量细胞生长抑制率为50％时的双胍衍生物浓度值(细胞生长抑制浓度，GIC50)，以确定双胍衍生物的癌细胞增殖抑制效果。
首先，将HCT116细胞置于96孔板上，在含有10％牛胎血清的DMEM中培养16小时，以令每孔中的细胞数为约5000。随后，为获得每种化合物的GIC50，以100μM、25μM、6.25μM、1.56μM或0.39μM的化合物处理培养基，然后培养48小时。采用盐酸二甲双胍作为对照，以25、12.5、2.5、0.5、0.1m盐酸二甲双胍处理培养基，然后按照与实施例中合成的衍生物相同的方式进行实验。为确定细胞在以所述化合物处理后能否存活，向培养基汇总加入MTT并再培养3小时。取形成的甲臜晶体，以二甲亚砜(DMSO)溶解，然后在560nm测定所得溶液的吸光度。培养48小时后，用未以所述化合物处理的孔板上的细胞计数与以实施例中合成的所述化合物处理的孔板上的活细胞计数的比率来表示每种处理浓度下的细胞活性(％)。以细胞存活率绘制曲线图，并计算生长抑制率为50％时的化合物浓度值(GIC50)，来确认癌细胞增殖的抑制效果。而且，还展示了双胍衍生物处理浓度和盐酸二甲双胍作为对照的浓度为100μM时的细胞生长活性(％)。
癌细胞生长抑制效果的实验结果列举在下面表3中。
表3
实验例3：非黏附性乳腺球群细胞形成抑制效果的测量
肿瘤干细胞是指具有自我繁殖或分化能力等干细胞固有能力的癌细胞。由此，肿瘤干细胞对传统抗癌疗法具有抗性，且具有不良预后。因此，通过抑制肿瘤干细胞的形成和增殖，双胍衍生物具有抑制癌症复发的效果，尤其是乳癌干细胞(非黏附性乳腺球群细胞)。因此，采用源自形成人类乳癌的非黏附性乳腺球群细胞的MCF7细胞株，来测量双胍衍生物对乳癌干细胞(非黏附性乳腺球群细胞)形成的抑制效果，简要试验方法如下所述。
以补充10％(v/v)牛胎血清(Gibco生命科技公司(GibcoLifeTechnologies)(美国)有售)的DMEM培养基培养源自人类乳癌的MCF7细胞(培养温度：37℃，pH:7.0至7.4)，令MCF7细胞生长至约80％融合度，然后进行非黏附性乳腺球群细胞形成能力的测定实验。将MCF7细胞分散为单个细胞并进行细胞计数，然后将MCF7置于24孔板上，每孔2000个细胞，所用的孔板是不受细胞附着的超低吸附24孔板(康宁公司(Corning)，货号#3473)。此外，还制备了用于形成非黏附性乳腺球群细胞的培养基，该培养基为包含2％B27(Invitrogen有售)、20ng/mlEGF(西格玛公司(Sigma)有售)、5μg/ml胰岛素(Sigma有售)和1μg/ml氢化可的松(Sigma有售)的无血清DMEM/F12培养基。细胞在CO2培养箱中培养24小时，并用实施例中合成的每种化合物以0.1μM、1μM、5μM和10μM的浓度进行处理。然后，向用于非黏附性乳腺球群细胞形成的培养基中加入培养后的细胞，使液体培养基的最终体积可以调整为1ml。作为对照，以相同浓度的盐酸苯乙双胍处理细胞，并在CO2培养箱中培养8天。然后，观察非黏附性乳腺球群细胞形成效率和细胞大小。8天后，测定大小为50μM或以上的非黏附性乳腺球群细胞的数量，以计算非黏附性乳腺球群细胞形成效率(MFE(％))。根据以下公式1计算MFE(％)。
公式1
细胞培养8天后、将以盐酸苯乙双胍和实施例中合成的化合物处理的板上的细胞MFE(％)与未以化合物处理的板上的细胞MFE(％)相比较。所得结果作为非黏附性乳腺球群细胞形成效率(％)列在如下表4中、且各化合物的非黏附性乳腺球群细胞形成效率分别显示在图1中。
表4
基于实验结果，可以确认，实施例中合成的化合物对肿瘤干细胞的形成和增殖具有抑制效果。
实验例4：抑制Snail表达的EMT抑制效果的确认
借由各种细胞因子和生长因子而进行EMT的细胞，能够获得移动能力，由此移动一段距离而在新组织中形成肿瘤。因此，可以通过控制EMT相关转录因子的表达，来阻碍EMT，从而抑制癌细胞的转移。基于这些事实，对双胍衍生物对Snail(在源自人类乳癌的MCF7细胞株中引发EMT的转录因子)表达的抑制活性进行了测定，简要实验方法如下所述。
以补充10％(v/v)牛胎血清(Gibco生命科技公司(GibcoLifeTechnologies)(美国)有售)的DMEM培养基培养源自人类乳癌的MCF7细胞(韩国细胞株银行有售)，放入6孔板中，令每孔中约含5×105细胞，然后在5％CO2的培养箱中培养(培养温度:37℃，pH:7.0to7.4)。培养基分别以1μM和10μM的盐酸苯乙双胍和本文实施例中合成的衍生物进行处理，然后培养48小时。48小时后，在含有0mMTrisHCl(pH7.4)、100mMNaCl、1mMEDTA、1mMEGTA、1mMNaF、20mMNa4P2O7、2mMNa3VO4、1％TritonX-100、10％丙三醇、0.5％脱氧胆酸盐和1mMPMSF的细胞溶解缓冲液中，对细胞进行溶解。然后，取25μg细胞溶解产物，在SDS-PAGE凝胶中进行电泳，然后转移至PMSF膜(安玛西亚生命科学公司(AmershamLifeScience))有售)。然后，令该膜与鼠抗人Snail单克隆抗体(赛信通公司(CellsignalingTechnology)有售)或鼠抗β-肌动蛋白单克隆抗体(圣克鲁斯生物技术公司(SantacruzBiotechnology)有售)反应，并移除未结合的抗体。在此情况下，用抗β-肌动蛋白抗体作为抗体，以确认装载到SDS-PAGE凝胶的蛋白数量等同。再次让该膜与二级抗体大鼠抗IgG抗体(赛信通公司(CellsignalingTechnology)有售)或小鼠抗IgG抗体(圣克鲁斯生物技术公司(SantacruzBiotechnology)有售)反应。最后，用ECLPlus体系(安玛西亚生命科学公司(AmershamLifeScience)有售)对与膜结合的抗体进行检测。实验结果如图2所示。而且，还采用Scion图像分析技术对涉及β-肌动蛋白的Snail表达水平进行了分析。在此，当假设未处理对照的表达水平为100％时，以实施例中合成的化合物处理的Snail表达水平表示为百分比(％)，结果如下表5所示。
表5
因此，认为实施例中合成的化合物能够通过抑制Snail表达来阻碍EMT，同时具有抑制癌症转移的效果。

Claims (13)

1.一种通式1化合物或其药学上可接受的盐，
其中，R1和R2一起连接至氮原子以形成吡咯烷基、哌啶基、吗啉基、或由C1-6烷基所取代的哌嗪基；
n是1至3的整数；每个R3都独立地选自羟基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、氨基、乙酰胺基、烷基磺酰胺、四唑基、磺酸和氨磺酰基；其中C1-6烷基或C1-6烷氧基都独立地被至少一种选自卤素或羟基的取代基取代，氨基被C1-6烷基取代或不取代，或者
R1和R2一起连接至氮原子以形成氮杂环丁基或氮杂环庚基；
n是0至3的整数；以及
当存在一个以上R3时，每个R3都独立地选自氢、卤素、C1-6烷基和C1-6烷氧基，其中C1-6烷基或C1-6烷氧基都独立地被至少一种选自卤素或羟基的取代基取代或不取代。
2.根据权利要求1所述的通式1化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，R1和R2一起连接至氮原子以形成吡咯烷基或哌啶基；n是1或2；每个R3都独立地选自卤代烷基或卤代烷氧基。
3.一种通式1化合物或其药学上可接受的盐，
其中通式1化合物为：
N-(N-(3-溴苯基)甲脒基)-1-哌啶基-甲脒；
N-(N-m-甲苯基甲脒基)-1-哌啶基-甲脒；
N-(N-(3-甲苯基)甲脒基)-1-哌啶基-甲脒；
N-(N-(3-羟苯基)甲脒基)-1-哌啶基-甲脒；
N-(N-(3-(羟甲基)苯基)甲脒基)-1-哌啶基-甲脒；
N-(N-(3-氟苯基)甲脒基)-1-哌啶基-甲脒；
N-(N-(3-氯苯基)甲脒基)-1-吡咯烷-甲脒；
N-(N-(3-氯苯基)甲脒基)-1-哌啶基-甲脒；
N-(N-(3-氯苯基)甲脒基)-1-氮杂环庚烷-甲脒；
N-(N-(3-(三氟甲基)苯基)甲脒基)-1-吡咯烷-甲脒；
N-(N-(3-(三氟甲基)苯基)甲脒基)-1-哌啶基-甲脒；
N-(N-(4-(三氟甲基)苯基)甲脒基)-1-氮杂环丁烷-甲脒；
N-(N-(4-(三氟甲基)苯基)甲脒基)-1哌啶基-甲脒；
N-(N-(3-(三氟甲氧基)苯基)甲脒基)-1-吡咯烷-甲脒；
N-(N-(3-(三氟甲氧基)苯基)甲脒基)-1-哌啶基-甲脒；
N-(N-(3-(二氟甲氧基)苯基)甲脒基)-1-哌啶基-甲脒；
N-(N-(4-(三氟甲氧基)苯基)甲脒基)-1-氮杂环丁烷-甲脒；
N-(N-(4-(三氟甲氧基)苯基)甲脒基)-1-哌啶基-甲脒；
N-(N-(4-(三氟甲氧基)苯基)甲脒基)-4-吗啉-甲脒；
4-甲基-N-(N-(4-(三氟甲氧基)苯基)甲脒基)-1-哌嗪-甲脒；
N-(N-(3-氨基苯基)甲脒基)-1-哌啶基-甲脒；
N-(N-(4-(二甲氨基)苯基)甲脒基)-1-哌啶基-甲脒；
N-(4-(3-(亚氨基(哌啶-1-基)甲基)胍基)苯基)乙酰胺；
N-(3-(3-(亚氨基(哌啶-1-基)甲基)胍基)苯基)乙酰胺；
N-(N-(4-(1H-四唑-5-基)苯基)甲脒基)-1-哌啶基-甲脒；
N-(N-(3-(甲磺酰胺基)苯基)甲脒基)-1-哌啶基-甲脒；
4-(3-(亚氨基(哌啶-1-基)甲基)胍基)苯磺酸；
N-(N-(4-(甲硫基)苯基)甲脒基)-1-哌啶基-甲脒；
N-(N-(4-氨磺酰基苯基)甲脒基)-1-哌啶基-甲脒；
N-(N-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)甲脒基)-1-哌啶基-甲脒；
N-(N-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)甲脒基)-1-哌啶基-甲脒；
N-(N-(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)甲脒基)-1-吡咯烷-甲脒；
N-(N-(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)甲脒基)-1-哌啶基-甲脒；
N-(N-(4-氟-3-(三氟甲氧基)苯基)甲脒基)-1-哌啶基-甲脒；
N-(N-(4-氯-3-(三氟甲氧基)苯基)甲脒基)-1-哌啶基-甲脒；
N-(N-(3-氟-4-(三氟甲氧基)苯基)甲脒基)-1-氮杂环丁烷-甲脒；
N-(N-(3-氟-4-(三氟甲氧基)苯基)甲脒基)-1-吡咯烷-甲脒；
N-(N-(3-氟-4-(三氟甲氧基)苯基)甲脒基)-1-哌啶基-甲脒；
N-(N-(3-氯-4-(三氟甲氧基)苯基)甲脒基)-1-氮杂环丁烷-甲脒；
N-(N-(3-氯-4-(三氟甲氧基)苯基)甲脒基)-1-吡咯烷-甲脒；
N-(N-(3-氯-4-(三氟甲氧基)苯基)甲脒基)-1-哌啶基-甲脒；
N-(N-(3,4-二氟苯基)甲脒基)-1-哌啶基-甲脒；
N-(N-(3,5-二氟苯基)甲脒基)-1-哌啶基-甲脒；
N-(N-(3,5-二氯苯基)甲脒基)-1-哌啶基-甲脒；
N-(N-(3,4-二氯苯基)甲脒基)-1-吡咯烷-甲脒；
N-(N-(3,4-二氯苯基)甲脒基)-1-哌啶基-甲脒；
N-(N-(3-氯-5-(三氟甲氧基)苯基)甲脒基)-1-哌啶基-甲脒；
N-(N-(3-溴-5-(三氟甲氧基)苯基)甲脒基)-1-吡咯烷-甲脒；
N-(N-(3-溴-5-(三氟甲氧基)苯基)甲脒基)-1-哌啶基-甲脒；或
N-(N-(3,4,5-三氟苯基)甲脒基)-1-哌啶基-甲脒。
4.根据权利要求1所述的通式1化合物或其药学上可接受的盐，
其特征在于，所述通式1化合物为N-(N-(4-(三氟甲基)苯基)甲脒基)-1-吡咯烷-甲脒。
5.根据权利要求1所述的通式1化合物或其药学上可接受的盐，
其特征在于，所述通式1化合物为N-(N-(4-(三氟甲氧基)苯基)甲脒基)-1-吡咯烷-甲脒。
6.根据权利要求1所述的通式1化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述药学上可接受的盐是一种选自以下各项的酸的盐：甲酸、乙酸、丙酸、乳酸、丁酸、异丁酸、三氟乙酸、苹果酸、马来酸、丙二酸、延胡索酸、琥珀酸、琥珀酰胺酸、谷氨酸、酒石酸、草酸、柠檬酸、乙醇酸、葡糖醛酸、抗坏血酸、苯甲酸、邻苯二甲酸、水杨酸、蒽酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、甲磺酸、二氯乙酸、氨氧基乙酸、盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、硝酸、碳酸和硼酸。
7.一种制造通式1化合物的方法，其特征在于，包括以下步骤：令如通式2所述的化合物在有机溶剂中与双氰胺反应、得到如通式3所述的化合物；令如通式3所述的化合物与通式4所述的化合物在水、有机溶剂或其混合物中反应、得到通式1化合物：
其中，R1和R2一起连接至氮原子以形成吡咯烷基、哌啶基、吗啉基、或由C1-6烷基所取代的哌嗪基；n是1至3的整数；每个R3都独立地选自羟基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、氨基、乙酰胺基、烷基磺酰胺、四唑基、磺酸和氨磺酰基；其中C1-6烷基、C1-6烷氧基都独立地被至少一种选自卤素或羟基的取代基取代，氨基被C1-6烷基取代或不取代，或者
R1和R2一起连接至氮原子以形成氮杂环丁基或氮杂环庚基；
n是0至3的整数；以及
当存在一个以上R3时，每个R3都独立地选自氢、卤素、C1-6烷基和C1-6烷氧基，其中C1-6烷基、C1-6烷氧基都独立地被至少一种选自卤素或羟基的取代基取代或不取代。
8.一种包含根据权利要求1-6中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐作为活性成分的药物。
9.一种包含作为活性成分的、通式1化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物，所述药物组合物用于预防或治疗一种选自以下集合的疾病：糖尿病、肥胖症、高血脂症、高胆固醇血症、脂肪肝、冠状动脉疾病、骨质疏松症、多囊卵巢综合症、代谢综合征、癌症、肌肉疼痛、肌细胞损伤和横纹肌溶解症，
其中，R1和R2一起连接至氮原子以形成氮杂环丁基、吡咯烷基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基、氮杂环庚基或氮杂环丙基，其中所述哌嗪基由C1-6烷基所取代；
n是0至3的整数；
当存在一个以上R3时，每个R3都独立地选自氢、卤素、羟基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、氨基、乙酰胺、烷基磺酰胺、硝基、四唑基、氰基、磺酸和氨磺酰基；其中C1-6烷基、C1-6烷氧基都独立地被至少一种选自卤素或羟基的取代基取代或不取代，氨基被C1-6烷基取代或不取代。
10.如权利要求9所述的药物组合物，其特征在于，所述糖尿病是非胰岛素依赖型糖尿病。
11.如权利要求9所述的药物组合物，其特征在于，所述对癌症的治疗包括抑制癌症的复发和转移。
12.如权利要求9所述的药物组合物，其特征在于，所述癌症是一种选自以下各项的疾病：子宫癌、乳腺癌、胃癌、脑癌、结肠直肠癌、肺癌、皮肤癌、血癌和肝癌。
13.如权利要求9所述药物组合物，其特征在于，所述药学组合物制型为药片、胶囊、药丸、颗粒、粉末、注射剂或液体。
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