CN101012163A

CN101012163A - 一种高纯度丹参素的制备方法

Info

Publication number: CN101012163A
Application number: CN 200610117931
Authority: CN
Inventors: 周长新; 朱志彬; 张相宜; 尹金瑶
Original assignee: SHANGHAI LANGSA MEDICINE SCIENCE AND TECHNOLOGY Co Ltd
Current assignee: SHANGHAI LANGSA MEDICINE SCIENCE AND TECHNOLOGY Co Ltd
Priority date: 2006-11-03
Filing date: 2006-11-03
Publication date: 2007-08-08
Anticipated expiration: 2026-11-03
Also published as: CN101012163B

Abstract

本发明涉及一种高纯度丹参素的制备方法，包括(1)将丹参根及根茎用0.1～6.0mol/L酸水/醇溶液加热回流提取；(2)将提取液用填充了大孔树脂吸附剂的吸附柱吸附；(3)用水洗脱，pH为7后，以含水的亲水溶剂洗脱，收集3～5个柱体积后即可将丹参素洗脱完全；(4)蒸干加入有机溶剂加热溶解结晶或将洗脱液浓缩上聚酰胺、葡聚糖凝胶Sephadex LH－20、MCI GEL CHP20P、C4、C8或C18键合相硅胶柱制备，洗脱得到丹参素产品。该方法收率及纯度高、成本低，适合大规模生产。

Description

一种高纯度丹参素的制备方法

技术领域

本发明属植物药物领域，特别是涉及一种高纯度丹参素的制备方法。

背景技术

丹参是唇行科鼠尾草属植物，作为我国常用中药有悠久的临床应用历史，在心血管疾病的治疗中具有重要的地位，其显著的疗效已得到临床上的广泛认可。多年的研究结果表明，丹参素是其中重要的有效成分(袁恒杰，丹参素药理作用研究新进展。中国医院药学杂志2006，26(5)，604-606)。丹参素的结构式如下：

丹参素学名为D(+)-(3，4-二羟基苯基)乳酸，它不但具有扩张血管、改善心肌收缩力、减少低渗溶液中红细胞破裂的功能，还具有抑制血小板凝集、5-HT释放及血小板TX2生成等作用。近年来的研究结果表明丹参素对脑损伤也具有良好的保护作用，其作用机制可能与影响线粒体呼吸链，减轻血栓形成有关(张婷，王超云，田京伟，傅风华，刘珂。丹参素对脑损伤的保护作用。中草药，2005，36(7)，1041-1043)。总之，丹参素在治疗冠心病、抗血栓、降血脂并防止动脉粥样硬化方面具有独特的疗效，在医药上是复方丹参注射剂、复方丹参滴丸等制剂的主要有效成分。但这些产品存在的共同缺陷是有效成分丹参素的含量太低，难以开发成高技术含量的中药。

随着近年来丹参产品的进一步开发，丹参素的分离制备技术已逐渐引起人们的重视。其中纯度较高的丹参素的制备方法有两种：CN1342638A中公开了一种丹参素的提取分离方法，将丹参采用常规的方法用水提取，提取液依次通过两根离子交换树脂，再分别以氢氧化钠和氯化钠溶液将富集丹参素的提取物洗脱下来。由于洗脱液含有碱，需将pH调节至1～6后以有机溶剂萃取，萃取物再经精制可得到含量为30％以上的丹参素，收率约为0.26％。CN1670008A中公开的方法是先用水提取丹参药材，再用稀碱将丹参水提液中丹参素前体转化为丹参素，转化过程中需用抗氧保护剂并通入惰性气体保护，经过超滤、萃取得到粗品丹参素，然后用正相色谱分离出丹参素，纯度可达95％，收率约为0.54％。这两种办法主要的缺点是收率太低，此外由于采用萃取及正相色谱层析，使得后处理操作过程较复杂，可控性较差。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种高纯度丹参素的制备方法，该方法收率高、成本低，具有工业应用前景，适合大规模生产。

本发明的一种高纯度丹参素的制备方法，包括如下步骤：

(1)提取：

将药材丹参根及根茎的切片采用0.1～6.0mol/L酸水/醇溶液加热提取，温度50-100℃，时间1-2h，获得含有高浓度丹参素的提取液；

(2)吸附：

将提取液用填充了大孔树脂吸附剂的吸附柱进行吸附；

(3)洗脱：

待吸附剂饱和后，用水进行洗脱，至流出的水溶液pH为7后，以含水的亲水溶剂洗脱，收集3～5个柱体积后即可将丹参素洗脱完全；

(4)重结晶：

将洗脱液蒸干，加入有机溶剂加热溶解，结晶，得到丹参素产品。

所述的酸为无机酸，可以为盐酸、硫酸、硝酸及磷酸；

所述的大孔树脂的型号可以为弱极性吸附树脂或强极性吸附树脂中的一种，如天津海光化工厂生产的DM301、NKA-II或NKA-9型，山东鲁抗树脂厂生产的330、CAD45、DM130、860021、DM-18、D312型等；

所述的亲水溶剂可以是甲醇、乙醇、乙腈及丙酮；

所述的重结晶有机溶剂可以是水、甲醇、乙醇、乙腈、丙酮、乙酸乙酯、1，2二氯乙烷中的一种或两种组合；

所述的步骤(4)重结晶可以采用步骤二次层析：

将洗脱液经过浓缩至适当体积后，直接上聚酰胺、葡聚糖凝胶Sephadex LH-20、MCIGEL CHP20P、C4、C8或C18键合相硅胶柱进行制备，以亲水溶剂或含水的亲水溶剂洗脱，得到丹参素产品。

所述的亲水溶剂可以是甲醇、乙醇、乙腈及丙酮，洗脱液经浓缩冷冻干燥、喷雾干燥或真空干燥。

获得的丹参素产品采用高效液相色谱的方法测定含量，结果显示丹参素含量为90％以上，收率不低于1.8％。

步骤1的主要目的在于通过采用酸性溶液提取的新方法，使得丹参素的含量大幅度提高。因为丹参中的酚酸类化合物除了丹参素外，还有很多丹参素的多聚体，这些化合物均通过酯键相连，利用酸水解可以得到高含量的丹参素提取液。虽然通常用碱水解酯较彻底，但由于该类化合物含有对碱敏感的邻二酚羟基，用碱水解会使转化的丹参素遭到一定程度的破坏。图1与图2分别为用酸及碱提取的丹参水溶液，其中tR＝5.06分钟的峰为丹参素，从中可以看出酸提取的丹参素含量比碱提取高出3～4倍，且杂质峰也明显比碱提取的少。

步骤2的可采用的吸附剂为弱极性吸附树脂或强极性吸附树脂中的一种，如天津海光化工厂生产的DM301、NKA-II或NKA-9型，山东鲁抗树脂厂生产的330、CAD45、DM130、860021、DM-18、D312型等。提取液的上样量以固含物计算不得超过吸附剂的10％，在酸性条件下大孔树脂可以较好地吸附丹参素。

步骤3的主要目的在于将丹参素初步得以有效的分离提纯。以水洗脱可有效除去无机酸及提取液中的多糖、单糖、蛋白，随后用含水的亲水溶剂可将丹参素洗下。

步骤4的主要目的在于将丹参素进一步精制，获得高纯度产品。重结晶的溶剂可选用水、甲醇、乙醇、乙腈、丙酮、乙酸乙酯、1，2二氯乙烷中的一种或两种组合。

步骤4为另一种可供选择的纯化丹参素的方法，若不通过重结晶纯化，经步骤3后也可用聚酰胺、葡聚糖凝胶Sephadex LH-20、MCI GEL CHP20P、C4、C8或C18键合相硅胶柱进行制备纯化，以亲水溶剂或含水的亲水溶剂洗脱，洗脱液经浓缩后可选择喷雾干燥、冷冻干燥或真空干燥，可直接得到丹参素产品。

本发明所述的一种高纯度丹参素的制备方法具有如下优点：

1、本发明工艺过程简单、可控。用酸性溶液提取丹参药材实现了提取、转化丹参素一步到位，设计合理，避开了用碱进行化学转化时需要加入抗氧剂通氮气的过程，大大简化了操作程序。

2、本发明工艺过程污染小、成本低。本发明在整个工艺过程中仅用稀酸，避免了一般工艺常用的酸碱两种试剂(如离子交换层析及后续的萃取处理)，以及正相色谱制备方法(使用大量有机溶剂)，减少了环境污染，用反相柱色谱分离使溶剂消耗及能耗都大大降低，非常适合工业化生产。

3、本发明分离速度快，生产周期短。本发明主要的工艺过程仅3～4步，即提取、柱层析分离、重结晶或二次柱层析精制，2～3天即可完成一个生产周期，因此具有很好的应用前景。

4、本发明产品收率高。从图1与图2的液相色谱图上可以看出，本工艺对丹参素的转化率很高，产品收率不低于1.8％。

说明书附图

图1丹参经1.0mol/L盐酸水溶液提取获得的液相色谱图；

图2丹参经0.5mol/LNaOH水溶液提取获得的液相色谱图。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

实施例1.

1.提取、转化：称取200g丹参药材，以10倍量3mol/L盐酸水溶液在75℃下加热提取2小时，提取2次，合并过滤得到提取液。

2.柱层析分离：称取200g DM301型大孔树脂，预处理后装柱。将提取液加入层析柱上方，待完全进入柱床后用水洗脱，至流出液以pH试纸检测显中性为止，用30％乙醇洗脱3个柱体积，合并此部分洗脱液。

3.重结晶：洗脱液减压浓缩除去溶剂，以甲醇∶丙酮1∶1加热溶解，室温放置，可析出丹参素的结晶，得率1.8％，HPLC测得纯度为92.2％。

实施例2.

1.提取、转化：称取200g丹参药材，以8倍量2mol/L盐酸50％乙醇溶液，回流提取2小时，提取2次，合并过滤得到提取液。

2.柱层析分离：称取200g 330型大孔树脂，预处理后装柱。将提取液适当浓缩除去乙醇后加入层析柱上方，待完全进入柱床后用水洗脱，至流出液以pH试纸检测显中性为止，用50％乙醇洗脱4个柱体积，合并此部分洗脱液。

3.重结晶：洗脱液减压浓缩除去溶剂，以水∶乙醇4∶1加热溶解，2℃放置，可析出丹参素的结晶，得率2.0％，HPLC测得纯度为91.6％。

实施例3.

1.提取、转化：称取500g丹参药材，以8倍量0.1mol/L硫酸50％甲醇溶液回流提取2小时，提取2次，合并过滤得到提取液。

2.柱层析分离：称取500g NKA-II型大孔树脂，预处理后装柱。将提取液适当浓缩除去甲醇后加入层析柱上方，待完全进入柱床后用水洗脱，至流出液以pH试纸检测显中性为止，用50％乙腈洗脱5个柱体积，合并此部分洗脱液。

3.重结晶：洗脱液减压浓缩除去溶剂，以乙腈∶丙酮1∶4加热溶解，-10℃放置，可析出丹参素的结晶，得率2.1％，HPLC测得纯度为90.9％。

实施例4.

1.提取、转化：称取500g丹参药材，以8倍量0.2mol/L硝酸50％甲醇溶液回流提取2小时，提取2次，合并过滤得到提取液。

2.柱层析分离：称取500g NKA-9型大孔树脂，预处理后装柱。将提取液适当浓缩除去甲醇后加入层析柱上方，待完全进入柱床后用水洗脱，至流出液以pH试纸检测显中性为止，用20％丙酮洗脱3个柱体积，合并此部分洗脱液。

3.重结晶：洗脱液减压浓缩除去溶剂，以乙醇：1，2二氯乙烷1∶1加热溶解，室温下放置，可析出丹参素的结晶，得率1.9％，HPLC测得纯度为91.5％。

实施例5

1.提取、转化：称取500g丹参药材，以8倍量6mol/L磷酸50％乙醇溶液回流提取2小时，提取2次，合并过滤得到提取液。

2.柱层析分离：称取500g CAD45型大孔树脂，预处理后装柱。将提取液适当浓缩除去甲醇后加入层析柱上方，待完全进入柱床后用水洗脱，至流出液以pH试纸检测显中性为止，用30％乙醇洗脱3个柱体积，合并此部分洗脱液。

3.重结晶：洗脱液减压浓缩除去溶剂，以乙酸乙酯加热溶解，在2℃放置，可析出丹参素的结晶，得率2.2％，HPLC测得纯度为90.8％。

实施例6

1.提取、转化：称取200g丹参药材，以8倍量0.5mol/L盐酸50％甲醇溶液回流提取2小时，提取2次，合并过滤得到提取液。

2.柱层析分离：称取200g DM130型大孔树脂，预处理后装柱。将提取液适当浓缩除去甲醇后加入层析柱上方，待完全进入柱床后用水洗脱，至流出液以pH试纸检测显中性为止，用30％甲醇洗脱3个柱体积，合并此部分洗脱液。

3.二次柱层析：洗脱液减压浓缩至适当体积，用聚酰胺柱进行制备纯化，以45％乙醇洗脱，洗脱液经浓缩除去乙醇后冷冻干燥，得到丹参素产品。得率1.8％，HPLC测得纯度为92.4％。

实施例7

1.提取、转化：称取200g丹参药材，以10倍量0.5mol/L盐酸水溶液回流提取2小时，提取2次，合并过滤得到提取液。

2.柱层析分离：称取200g 860021型大孔树脂，预处理后装柱。将提取液适当浓缩除去甲醇后加入层析柱上方，待完全进入柱床后用水洗脱，至流出液以pH试纸检测显中性为止，用30％乙醇洗脱3个柱体积，合并此部分洗脱液。

3.二次柱层析：洗脱液减压浓缩至适当体积，用葡聚糖凝胶Sephadex LH-20柱进行制备纯化，以甲醇洗脱，洗脱液经浓缩除去甲醇后真空干燥，得到丹参素产品。得率2.0％，HPLC测得纯度为92.6％。

实施例8

1.提取、转化：称取500g丹参药材，以8倍量0.2mol/L硫酸50％乙醇溶液回流提取2小时，提取2次，合并过滤得到提取液。

2.柱层析分离：称取500g DM-18型大孔树脂，预处理后装柱。将提取液适当浓缩除去乙醇后加入层析柱上方，待完全进入柱床后用水洗脱，至流出液以pH试纸检测显中性为止，用30％乙醇洗脱3个柱体积，合并此部分洗脱液。

3.二次柱层析：洗脱液减压浓缩至适当体积，用MCI GEL CHP20P柱进行制备纯化，以35％乙醇洗脱，洗脱液经浓缩除去乙醇后喷雾干燥，得到丹参素产品。得率1.8％，HPLC测得纯度为93.1％。

实施例9

1.提取、转化：称取500g丹参药材，以10倍量0.2mol/L盐酸水溶液回流提取2小时，提取2次，合并过滤得到提取液。

2.柱层析分离：称取500g D312型大孔树脂，预处理后装柱。将提取液直接加入层析柱上方，待完全进入柱床后用水洗脱，至流出液以pH试纸检测显中性为止，用30％甲醇洗脱4个柱体积，合并此部分洗脱液。

3.二次柱层析：洗脱液减压浓缩至适当体积，用C18键合硅胶柱进行制备纯化，以40％甲醇洗脱，洗脱液经浓缩除去甲醇后冷冻干燥，得到丹参素产品。得率1.9％，HPLC测得纯度为92.7％。

Claims

1.一种高纯度丹参素的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)提取：将药材丹参根及根茎的切片采用0.1～6.0mol/L酸水/醇溶液加热提取，温度50-100℃，时间1-2h，得到提取液；

(2)吸附：将提取液用填充了大孔树脂吸附剂的吸附柱进行吸附；

(3)洗脱：待吸附剂饱和后，用水洗脱，至流出的水溶液pH为7后，以含水的亲水溶剂洗脱，收集3～5个柱体积后即可将丹参素洗脱完全；

(4)重结晶或二次层析：得到丹参素产品。

2.根据权利要求1所述的一种高纯度丹参素的制备方法，其特征在于所述的步骤(4)重结晶是将洗脱液蒸干，加入有机溶剂加热溶解，结晶得到丹参素产品。

3.根据权利要求1所述的一种高纯度丹参素的制备方法，其特征在于所述的步骤(4)二次层析是将步骤(3)洗脱液浓缩，直接上聚酰胺、葡聚糖凝胶Sephadex LH-20、MCI GELCHP20P、C4、C8或C18键合相硅胶柱进行制备，以亲水溶剂或含水的亲水溶剂洗脱，经浓缩后干燥即得到丹参素产品。

4.根据权利要求1所述的一种高纯度丹参素的制备方法，其特征在于所述的酸是无机酸。

5.根据权利要求1或4所述的一种高纯度丹参素的制备方法，其特征在于所述的无机酸是盐酸、硫酸、硝酸或磷酸。

6.根据权利要求1所述的一种高纯度丹参素的制备方法，其特征在于所述的大孔树脂的型号选自弱极性吸附树脂或强极性吸附树脂中的一种。

7.根据权利要求1所述的一种高纯度丹参素的制备方法，其特征在于所述的亲水溶剂是甲醇、乙醇、乙腈或丙酮。

8.根据权利要求1所述的一种高纯度丹参素的制备方法，其特征在于所述的重结晶有机溶剂选自水、甲醇、乙醇、乙腈、丙酮、乙酸乙酯、1，2二氯乙烷中的一种或两种组合。

9.根据权利要求3所述的一种高纯度丹参素的制备方法，其特征在于所述的亲水溶剂是甲醇、乙醇、乙腈或丙酮。

10.根据权利要求3所述的一种高纯度丹参素的制备方法，其特征在于所述的洗脱液经浓缩后干燥是喷雾干燥、冷冻干燥或真空干燥。