CN102268100A - 一种委陵菜多糖的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种委陵菜多糖的制备方法，包括如下步骤：以委陵菜全草为原料，加入蒸馏水搅拌，保温浸泡12-24h后，补加水至料液比为1:10-1:20，再进行微波提取，得到提取液，将提取液浓缩，加酸调至适当pH，加入淀粉酶和蛋白酶进行酶解反应，酶解液经过大孔树脂除杂，透过液再采用醇沉或透析法纯化，最后洗涤干燥得到高纯度委陵菜多糖。该方法生产委陵菜多糖，收率高，过程简单，能源消耗少，产量大，纯度高。
Description
技术领域
本发明属于天然产物分离领域，尤其是涉及一种多糖的制备方法，具体是涉及一种采用大孔树脂纯化委陵菜多糖的方法。
背景技术
多糖(Polysaccharide)是由单糖之间脱水形成糖苷键，并以糖苷键线性或分枝连接而成的链状聚合物。多糖种类繁多、结构复杂、具有特殊生物学活性，生物体内多糖的研究可追溯到上世纪30年代。到目前已有300多种多糖类化合物从天然产物中提取分离出来，从中药中提取的水溶性多糖具有无细胞毒性，分子量通过化学手段易控制等特点，加之实验证明多糖与感染、肿瘤、炎症及一些自身免疫性疾病的治疗有关，已成为新药开发研究的发展方向之一。
委陵菜多糖（Potentilla AnserinePolysaccharide，PAP）是由蔷薇科委陵菜属鹅绒委陵菜（Potentilla Anserine L.）中提取分离得到的。委陵菜中含有糅质、糖类、蛋白质、脂肪酸及委陵菜苷等。现代药理研究表明，其水提物具有提高机体免疫力、抗疲劳、耐缺氧和止泻抑菌的作用。委陵菜在青海、甘肃、西藏等高海拔地区广泛分布，有“人参果”的美誉。此外，刘素君等研究表明委陵菜多糖具有抗肿瘤作用，且其抗肿瘤作用和其免疫调节作用有明显的相关性，由此推断委陵菜多糖的抗肿瘤作用可能与激活体内免疫系统有关。
委陵菜多糖是鹅绒委陵菜的主要活性成分之一，从该植物中提取分离多糖成分的技术已有陆续报道。多是采用有机溶剂萃取等方法制备，后续处理麻烦，且存在毒性有机溶剂残留问题。
发明内容
本发明的目的是提供一种委陵菜多糖的制备方法，该方法操作简单，提取率高，产品含量高，品质好，活性强。
本发明的目的通过以下技术方案实现：
一种委陵菜多糖的制备方法，其特征在于：以委陵菜全草为原料，加入蒸馏水搅拌，保温浸泡12-24h后，补加水至料液比为1:10-1:20，再进行微波多次提取，得到提取液，提取液浓缩至小体积，加酸调pH至5-6，加入淀粉酶和蛋白酶进行酶解反应，酶解液经过大孔树脂除杂，过柱液再采用醇沉或透析法纯化，最后沉淀物用95%乙醇、无水乙醇、丙酮、乙醚依次洗涤，挥去乙醚，干燥得到高纯度委陵菜多糖。
所述的淀粉酶和蛋白酶，酶的加入量为浓缩液量的2-5‰，酶解条件为：时间5-10h，温度40-45℃。
所述的大孔树脂为非极性大孔树脂，可选用D101、HZ802、XAD-16等型号中的一种。
所述的醇沉操作为，向过柱液中缓缓加入95%乙醇，使醇浓度达45%～60%，冷藏过夜，离心收集沉淀。
所述的透析纯化步骤为，过柱液经过截留分子量2000的超滤膜截留多糖，再采用5-20倍量60~85%乙醇液透析1~3次，收集截留液，浓缩干燥得沉淀物。
所述的干燥步骤可采用冷冻干燥或喷雾干燥。
本发明的优势在于：采用微波提取结合酶水解法纯化委陵菜多糖，与传统水提法相比，不需要高温、缩短了操作时间，提高了生产效率，且节约了能耗，脱蛋白效率高；采用大孔树脂吸附非极性杂质，减少有毒有机溶剂应用，所得产品质量好，活性高。
下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
具体实施方式
实施例1：
将鹅绒委陵菜破碎，称取1kg置于提取器中，加2L蒸馏水充分搅匀，保温浸泡12小时，补加水至料液比为1:15，微波提取1小时，反复提取4次，过滤，合并提取液，浓缩至500ml，加酸调pH至5，按淀粉酶：蛋白酶=5:1的重量配比配制成酶制剂，加入1g，在45℃温度下反应6小时，将酶解液通过HZ802大孔吸附树脂柱，透过液缓缓加入95%乙醇，使醇浓度达60%，冷藏过夜，离心15分钟，收集沉淀物用95%乙醇、无水乙醇、丙酮、乙醚依次洗涤，挥去乙醚，喷雾干燥得到高纯度委陵菜多糖得到25.6g。
实施例2：
将鹅绒委陵菜破碎，称取1kg置于提取器中，加5L蒸馏水充分搅匀，保温浸泡18小时，补加水至料液比为1:20，微波提取1.5小时，反复提取2次，过滤，合并提取液，将提取液浓缩至500ml，加酸调pH至6，按淀粉酶：蛋白酶=5:1的重量配比配制成酶制剂，加入2.5g，在40℃温度下反应5小时，将酶解液通过D101大孔吸附树脂柱，透过液缓缓加入95%乙醇，使醇浓度达45%，冷藏过夜，离心15分钟，收集沉淀物用95%乙醇、无水乙醇、丙酮、乙醚依次洗涤，挥去乙醚，喷雾干燥得到高纯度委陵菜多糖得到21.9g。
实施例3：
将鹅绒委陵菜破碎，称取2kg置于提取器中，加4.5L蒸馏水充分搅匀，浸泡16小时，补加水至料液比为1:15，微波提取1小时，反复提取5次，过滤，合并提取液，将提取液浓缩至2L，加酸调pH至5，按淀粉酶：蛋白酶=5:1的重量配比配制成酶制剂，加入5.0g，在43℃温度下反应6小时，将酶解液通过XAD-16大孔吸附树脂柱，透过液过截留分子量2000的超滤膜截留多糖，再采用5倍量60%乙醇液透析3次，收集截留液，浓缩干燥得沉淀物，沉淀物用95%乙醇、无水乙醇、丙酮、乙醚依次洗涤，挥去乙醚，喷雾干燥得到高纯度委陵菜多糖得到35.9g。
实施例4：
将鹅绒委陵菜破碎，称取5kg置于提取器中，加40L蒸馏水充分搅匀，浸泡20小时，补加水至料液比为1:18，微波提取1.5小时，反复提取5次，过滤，合并提取液，将提取液浓缩至5L，加酸调pH至5.5，按淀粉酶：蛋白酶=5:1的重量配比配制成酶制剂，加入17.5g，在42℃温度下反应8小时，将酶解液通过D101大孔吸附树脂柱，透过液过截留分子量2000的超滤膜截留多糖，再采用20倍量85%乙醇液透析1次，收集截留液，浓缩干燥得沉淀物，沉淀物用95%乙醇、无水乙醇、丙酮、乙醚依次洗涤，挥去乙醚，冷冻干燥得到高纯度委陵菜多糖得到89.5g。
实施例5：
将鹅绒委陵菜破碎，称取10kg置于提取器中，加30L蒸馏水充分搅匀，浸泡24小时，补加水至料液比为1:15，微波提取2小时，反复提取3次，过滤，合并提取液，将提取液浓缩至10L，加酸调pH至6，按淀粉酶：蛋白酶=5:1的重量配比配制成酶制剂，加入45g，在40℃温度下反应10小时，将酶解液通过XAD-16大孔吸附树脂柱，透过液缓缓加入95%乙醇，使醇浓度达55%，冷藏过夜，离心15分钟，收集沉淀物用95%乙醇、无水乙醇、丙酮、乙醚依次洗涤，挥去乙醚，喷雾干燥得到高纯度委陵菜多糖得到192.5g。
Claims (5)
1.一种委陵菜多糖的制备方法，其特征在于：以委陵菜全草为原料，加入蒸馏水搅拌，保温浸泡12-24h后，补加水至料液比为1:10-1:20，再进行微波多次提取，得到提取液，提取液浓缩至小体积，加酸调pH至5-6，加入淀粉酶和蛋白酶进行酶解反应，酶解液经过大孔树脂除杂，过柱液再采用醇沉或透析法纯化，最后沉淀物用95%乙醇、无水乙醇、丙酮、乙醚依次洗涤，挥去乙醚，干燥得到高纯度委陵菜多糖。
2.如权利要求1所述的一种委陵菜多糖的制备方法，其特征在于所述的淀粉酶和蛋白酶，加入量为浓缩液量的2-5‰，酶解条件为：时间5-10h，温度40-45℃。
3.如权利要求1所述的一种委陵菜多糖的制备方法，其特征在于所述的大孔树脂为非极性大孔树脂，可选用D101、HZ802、XAD-16等型号中的一种。
4.如权利要求1所述的一种委陵菜多糖的制备方法，其特征在于所述的醇沉操作为，向过柱液中缓缓加入95%乙醇，使醇浓度达45%～60%，冷藏过夜，离心收集沉淀。
5.如权利要求1所述的一种委陵菜多糖的制备方法，其特征在于所述的透析纯化步骤为，过柱液经过截留分子量2000的超滤膜截留多糖，再采用5-20倍量60~85%乙醇液透析1~3次，收集截留液，浓缩干燥得沉淀物。
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