CN102002108A - 一种拐枣多糖的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种拐枣多糖的制备方法，包括如下步骤：以拐枣为原料，加入蒸馏水搅拌，浸泡12-24h后，补加水至料液比为1∶10-1∶20，再进行超声提取，得到提取液，将提取液浓缩，加酸调至适当pH，加入淀粉酶和蛋白酶进行酶解反应，酶解液经过大孔树脂除杂，透过液加入乙醇，再离心分离，冷冻干燥得到高纯度拐枣多糖，产品中拐枣多糖的含量在60％以上。本发明的有益效果为：该方法生产拐枣多糖，收率高，过程简单，能源消耗少，产量大，纯度高，保留了多糖风味。

Description

一种拐枣多糖的制备方法

技术领域：

本发明属于植物活性成分提取技术领域，具体的说，是一种从拐枣中提取水溶性多糖的方法。

背景技术：

多糖是天然有机化合物中的大分子物质，某些活性多糖有抗肿瘤和增强免疫功能的作用，一些多糖则具有复杂的控制细胞分裂和分化、调节细胞生长与衰老等多方面功能，改性的多糖则有抗HIV感染的作用，一些重要的生理过程如炎症反应，受体识别，免疫反应等都与多糖分子密切相关。已有的大量药理研究表明，植物多糖，特别是中药中的多糖具有免疫调节、抗肿瘤、抗病毒、抗感染、降血糖等多种生理活性，其原生药大多属补益类中药。虽然目前有很多合成化疗药物，但它们在杀死癌细胞的同时也同样累及正常细胞，临床上表现出很多副作用，特别是化疗药物对患者的免疫系统造成损害，但植物药的遗传毒性不太明显，表明中草药在抗癌抗突变方面有其独特的优势和广阔的应用前景。因此，多糖类免疫调节剂在肿瘤上的治疗很有吸引力。

拐枣(Hovenia cerba Lindl.)为鼠李科拐枣属落叶乔木，俗称椇子、钩子、鸡脚爪、万字果、万寿果、龙爪。它全身都是宝，是一种果、药、材兼用的名贵树，有广阔的开发前景。果实中含葡萄糖计苹果酸钙，种子含枳椇皂苷，具有镇静、抗惊厥和降血压等功效。肉质可治风湿，有清热利尼奥止渴降火解毒功效，树皮可活血，舒筋解毒，果梗性甘平，有健胃补血的作用，无毒，主治头风，润五脏利大小便。木质部含二羧酸三萜类化合物枳椇子酸(Hobenia aced，C30H80O5)。朱炯波等采用蒽酮-硫酸比色法测定其多糖含量为13.83％，目前国内外对拐枣活性多糖的作用研究尚未见报道。

发明内容：

本发明的目的是提供一种拐枣多糖的制备方法，该制备方法收率高，过程简单，能源消耗少，产量大，纯度高，保留了多糖风味，有利于制备各种与拐枣多糖相关的药品和食品，大大提高了拐枣的经济效益。

为达到上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种拐枣多糖的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)水提：将拐枣洗净，阴干，粉碎成粗粉，加蒸馏水浸泡12-24h，再补加水至料液比为1∶10-1∶20，反复超声提取，过滤，合并提取液；

(2)酶解：将提取液浓缩至小体积，加酸调pH至5-6，加入淀粉酶和蛋白酶进行酶解反应，酶解条件为：时间5-10h，温度40-45℃；

(3)除杂：将酶解液通过非极性大孔树脂柱，收集透过液；

(4)醇沉：将透过液加入乙醇使溶液的乙醇浓度为70％-80％，静置2-4h，再离心分离，冷冻干燥得拐枣多糖成品。

所述步骤(1)中超声提取条件为：超声波功率为200-500W，提取时间为1-2h，提取2-5次。

所述步骤(2)中加入一定量的淀粉酶和蛋白酶，酶的加入量为脱色液量的2-5‰，淀粉酶和蛋白酶的重量比为5∶1。

所述步骤(3)中非极性大孔树脂柱可用D101、HZ802、XAD-1600大孔树脂。

本发明通过反复实验，对影响提取效率的因素如提取时间、料液比、温度、酶解pH、醇沉用乙醇浓度等分别进行考察，确定拐枣多糖的最佳提取条件，为拐枣多糖的开发提供依据。本发明采用超声波辅助提取结合酶水解法纯化拐枣多糖，与传统水提法相比，不需要高温、缩短了操作时间，提高了生产效率，且节约了能耗，脱蛋白效率高。本发明提取纯化后的拐枣多糖的得率为10.4％，含量在60％以上。本发明采用安全无毒的溶剂提取，方法安全，对环境无污染，有利于进一步研究拐枣多糖在保健品和药品的作用效果。

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式：

实施例1：

将拐枣洗净并阴干，粉碎成粗粉，过40目筛，称取500g置于超声波提取器中，加1L蒸馏水充分搅匀，浸泡12小时，补加水至料液比为1∶10，在200W的超声波功率下，超声提取1小时，反复提取4次，过滤，合并提取液，浓缩至500ml，加酸调pH至5，按淀粉酶∶蛋白酶＝5∶1的重量配比配制成酶制剂，加入1.25g，在45℃温度下反应6小时，将酶解液通过HZ802大孔吸附树脂柱，透过液加入乙醇，使乙醇浓度为80％，静置3小时，再离心15分钟，得到拐枣多糖，冷冻干燥得52g成品，含量为64.8％。

实施例2：

将拐枣洗净并阴干，粉碎成粗粉，过60目筛，称取500g置于超声波提取器中，加1.5L蒸馏水充分搅匀，浸泡18小时，补加水至料液比为1∶20，在250W的超声波功率下，超声提取1.5小时，反复提取2次，过滤，合并提取液，将提取液浓缩至500ml，加酸调pH至6，按淀粉酶∶蛋白酶＝5∶1的重量配比配制成酶制剂，加入2.5g，在40℃温度下反应5小时，将酶解液通过D101大孔吸附树脂柱，透过液加入乙醇，使乙醇浓度为80％，静置4小时，再离心15分钟，得到拐枣多糖，冷冻干燥得50g成品，含量为62.4％。

实施例3：

将拐枣洗净并阴干，粉碎成粗粉，过60目筛，称取1000g置于超声波提取器中，加2.2L蒸馏水充分搅匀，浸泡14小时，补加水至料液比为1∶14，在400W的超声波功率下，超声提取2小时，反复提取4次，过滤，合并提取液，将提取液浓缩至1L，加酸调pH至5.5，按淀粉酶∶蛋白酶＝5∶1的重量配比配制成酶制剂，加入4.0g，在45℃温度下反应7小时，将酶解通过HZ802大孔吸附树脂柱，透过液加入乙醇，使乙醇浓度为75％，静置4小时，再离心15分钟，得到拐枣多糖，冷冻干燥得106g成品，含量为64.4％。

实施例4：

将拐枣洗净并阴干，粉碎成粗粉，过40目筛，称取2kg置于超声波提取器中，加4.5L蒸馏水充分搅匀，浸泡16小时，补加水至料液比为1∶16，在300W的超声波功率下，超声提取1小时，反复提取5次，过滤，合并提取液，将提取液浓缩至2L，加酸调pH至5，按淀粉酶∶蛋白酶＝5∶1的重量配比配制成酶制剂，加入5.0g，在43℃温度下反应6小时，将酶解液通过XAD-1600大孔吸附树脂柱，透过液加入乙醇，使乙醇浓度为70％，静置3小时，再离心15分钟，得到拐枣多糖，冷冻干燥得218g成品，含量为62.0％。

实施例5：

将拐枣洗净并阴干，粉碎成粗粉，过40目筛，称取5kg置于超声波提取器中，加10L蒸馏水充分搅匀，浸泡20小时，补加水至料液比为1∶18，在400W的超声波功率下，超声提取1.5小时，反复提取5次，过滤，合并提取液，将提取液浓缩至5L，加酸调pH至5.5，按淀粉酶∶蛋白酶＝5∶1的重量配比配制成酶制剂，加入17.5g，在42℃温度下反应8小时，将酶解液通过D101大孔吸附树脂柱，透过液加入乙醇，使乙醇浓度为80％，静置3小时，再离心15分钟，得到拐枣多糖，冷冻干燥得510g成品，含量为62.1％。

实施例6：

将拐枣洗净并阴干，粉碎成粗粉，过60目筛，称取10kg置于超声波提取器中，加24L蒸馏水充分搅匀，浸泡24小时，补加水至料液比为1∶15，在500W的超声波功率下，超声提取2小时，反复提取3次，过滤，合并提取液，将提取液浓缩至10L，加酸调pH至6，按淀粉酶∶蛋白酶＝5∶1的重量配比配制成酶制剂，加入45g，在40℃温度下反应10小时，将酶解液通过XAD-1600大孔吸附树脂柱，透过液加入乙醇，使乙醇浓度为75％，静置4小时，再离心15分钟，得到拐枣多糖，冷冻干燥得1050g成品，含量为64.3％。

Claims (4)

1.一种拐枣多糖的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)水提：将拐枣洗净，阴干，粉碎成粗粉，加蒸馏水浸泡12-24h，再补加水至料液比为1∶10-1∶20，反复超声提取，过滤，合并提取液；

(2)酶解：将提取液浓缩至小体积，加酸调pH至5-6，加入淀粉酶和蛋白酶进行酶解反应，酶解条件为：时间5-10h，温度40-45℃；

(3)除杂：将酶解液通过非极性大孔树脂柱，收集透过液；

(4)醇沉：将透过液加入乙醇使溶液的乙醇浓度为70％-80％，静置2-4h，再离心分离，冷冻干燥得拐枣多糖成品。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(1)中超声提取条件为：超声波功率为200-500W，提取时间为1-2h，提取2-5次。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(2)中加入一定量的淀粉酶和蛋白酶，酶的加入量为脱色液量的2-5‰，淀粉酶和蛋白酶的重量比为5∶1。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(3)中非极性大孔树脂柱可用D101、HZ802、XAD-1600大孔树脂。