CN109896904A - 促进山茶嫁接成活率的液肥的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种促进山茶嫁接成活率的液肥的制备方法，属于山茶栽培技术领域，包括以下步骤：(a)提供在酶解中程时加入异山梨醇水溶液的拐枣枝粉酶解液，(b)在步骤(a)的拐枣枝粉酶解液中添加无机盐并浓缩，(c)在步骤(b)的浓缩液中添加含腐殖酸的营养物质后稀释并控制沉降率即得。有益效果为：本方法利用糠醛渣和酒糟制备液肥组分，不仅解决了它们的处理难题，而且实现了充分利用，增加收入，液肥均一、稳定，沉降率低，并可显著提高山茶嫁接成活率。

Description

促进山茶嫁接成活率的液肥的制备方法

技术领域

本发明属于山茶栽培技术领域，具体涉及促进山茶嫁接成活率的液肥的制备方法。

背景技术

山茶(Camellia japonica L.)是灌木或小乔木，高9m左右，嫩枝无毛，叶革质，椭圆形，先端略尖，基部阔楔形，上面深绿色，干后发亮，无毛，下面浅绿色。花顶生，红色，无柄；苞片及萼片约10片，花瓣6～7片，外侧2片近圆形。蒴果圆球形，直径2.5～3cm，2～3室，每室有种子1～2个，3爿裂开，果爿厚木质，花期是1～4月。山茶原产中国，喜温暖、湿润和半阴环境，怕高温，忌烈日。中国四川、台湾、山东、江西等地有野生种，各地广泛栽培。茶花花色品种繁多，花大多数为红色或淡红色，亦有白色，多为重瓣。在红色山茶组里，它是少数几个子房秃净的代表之一供观赏，花有止血功效，种子榨油，供工业用。

山茶常用扦插、嫁接、压条、播种和组织培养等繁殖方法，通常以扦插为主。现有技术有申请号为CN201210493360.0的中国发明专利，公开了一种山茶嫁接繁殖方法，该发明方法嫁接时间为5月中旬至6月中旬，砧木为6cm长的尚未木质化的油茶胚芽，接穗为山茶树的中上部、芽体饱满、无病虫害的半木质化或木质化春梢，从油茶胚芽2cm处切断，再用薄刀片从断口中心纵切，切开长约 1cm；从穗条上切取带叶的芽，芽下端长1.5cm，上端长0.5cm，芽下部削成长 1cm的楔形面，叶子剪去一半，削剪完成后立即插入砧木内，使二者层对齐，并绑紧。所述嫁接苗培育到沙质苗床上，每10d施0.5％的尿素水溶液或0.1％的磷酸二氢钾。该发明方法中的山茶嫁接成活率只有90％和87％，成活率不高，因此其应用范围受限。

发明内容

本发明的目的在于提供一种促进山茶嫁接成活率的液肥的制备方法，本方法利用糠醛渣和酒糟制备液肥组分，不仅解决了它们的处理难题，而且实现了充分利用，增加收入，液肥均一、稳定，沉降率低，并可显著提高山茶嫁接成活率。

本发明为实现上述目的所采取的技术方案为：

促进山茶嫁接成活率的液肥的制备方法，包括：

(a)提供在酶解中程时加入异山梨醇水溶液的拐枣枝粉酶解液，

(b)在步骤(a)中的拐枣枝粉酶解液中添加无机盐并浓缩，

(c)在步骤(b)中的浓缩液中加入营养物质后稀释并控制沉降率即得。

促进山茶嫁接成活率的液肥的制备方法具体包括以下步骤：

酶解：取拐枣枝清洗并烘干，粉碎成100～140目拐枣枝粉，每1份拐枣枝粉中加入25～50份蒸馏水、0.03～0.04份纤维素酶和0.08～0.1份蛋白酶，混合均匀后加热至42～45℃，酶解15～20min，然后加入0.2～0.25份异山梨醇水溶液，继续酶解15～20min后灭酶，得到酶解液；使用纤维素酶和蛋白酶对拐枣枝粉进行酶解，首先将拐枣枝粉表面的纤维素分裂降解，然后以蛋白酶降解蛋白质，裸露出拐枣枝多糖，酶解半程时底物浓度的降低使得纤维素酶和蛋白酶的酶解效率降低，此时加入异山梨醇可剥离围绕着拐枣枝多糖的蛋白分子，使其中的拐枣枝多糖尽快溶出，加速拐枣枝多糖的析出，提高酶解目标产物拐枣枝多糖的含量与纯度。山茶嫁接成活主要是依靠接穗和砧木结合部分的形成层有分裂新细胞的作用，当两者受伤并密切结合后，喷施含有拐枣枝多糖的液肥有助于促进嫁接成活，拐枣枝多糖经母株吸收后转运至伤口处，可促进伤口处的创伤细胞形成淡褐色的薄膜，该薄膜对伤口起保护作用，薄膜下的薄壁组织细胞和形成层细胞进一步分裂形成愈合组织，在拐枣枝多糖存在、营养成分充足、生活机能旺盛的条件下，愈合组织迅速填充髓、砧间隙，冲破薄膜各层，继续分生，使维管束连接，并形成共同的形成层，这样输道组织互相沟通，使两者营养得以交流，进而长成嫁接幼枝，促进山茶嫁接成活；

浓缩：以160～200目细纱布过滤酶解液，在滤液中加入0.8～1份硝酸钠、 1.2～2份正磷酸盐，加热至55～58℃保温2.5～3h，冷却后低温浓缩至密度至少为1.02g/mL，得浓缩液；以细纱布过滤，可滤除酶解液中的杂质成分，提高酶解液中拐枣枝多糖的含量与纯度，并经进一步地提纯后得到酶解液浓缩液；

复配：1～2℃、避光条件下，以磷酸缓冲液调节pH至6.8～7.0，加入0.5～ 1.5份腐殖酸、1.2～1.5份尿素、0.02～0.04份复合维生素和0.01～0.02份复合氨基酸，混合均匀后以蒸馏水稀释45～100倍，搅拌直至12h沉降率低于2％即得促进山茶嫁接成活率的液肥；在酶解液浓缩液中加入糠醛渣和酒糟经发酵后得到的腐殖酸，其特质可以有效避免液肥团聚、降低沉降率，均一、稳定，腐殖酸与氮、磷、钾等元素结合制成腐植酸类肥料，具有肥料增效、改良土壤、刺激山茶生长、促进接穗成活、改善山茶质量等功能，后续加入尿素、复合维生素和复合氨基酸，丰富了液肥的营养配比，同时提高嫁接接穗和砧木的抗病抗菌能力，液肥中的拐枣枝多糖能够较大程度的发挥促进嫁接成活的功能，提高嫁接成活率。

在本发明的实施例中，对应每1份拐枣枝粉时，加入的异山梨醇水溶液的重量份存在于0.2，或0.21，或0.22，或0.23，或0.24，或0.25重量份的范围中。

进一步地，在本发明较优的实施例中，所述异山梨醇水溶液中的异山梨醇的含量为1.2～5.5wt％。使用纤维素酶和蛋白酶对拐枣枝粉进行酶解，首先将拐枣枝粉表面的纤维素分裂降解，然后以蛋白酶降解蛋白质，裸露出拐枣枝多糖，酶解半程时底物浓度的降低使得纤维素酶和蛋白酶的酶解效率降低，此时加入异山梨醇可剥离围绕着拐枣枝多糖的蛋白分子，使其中的拐枣枝多糖尽快溶出，加速拐枣枝多糖的析出，提高酶解目标产物拐枣枝多糖的含量与纯度。

在本发明的实施例中，异山梨醇水溶液中异山梨醇的含量存在于1.2，或1.3，或1.4，或1.5，或1.6，或1.7，或1.8，或1.9，或2.0，或2.1，或2.2，或2.3，或2.4，或2.5，或2.6，或2.7，或2.8，或2.9，或3.0，或3.1，或3.2，或3.3，或3.4，或3.5，或3.6，或3.7，或3.8，或3.9，或4.0，或4.1，或4.2，或4.3，或4.4，或4.5，或4.6，或4.7，或4.8，或4.9，或5.0，或5.1，或5.2，或5.3，或5.4，或5.5重量百分比的范围中。

进一步地，在本发明较优的实施例中，所述正磷酸盐是正磷酸与钠、钾、钙、镁形成的盐，优选自：磷酸三钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸三钾、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸氢钙和磷酸氢镁的至少一种。

进一步地，在本发明较优的实施例中，所述腐殖酸的提取方法包括：

1)将物料堆积至堆体温度为55～58℃并堆肥，得到一次堆肥；

2)向步骤1)得到的堆肥产物中添加发酵菌和发酵助剂，在温度为35～45℃条件下进行发酵，得到发酵产物；

3)用碱的水溶液对步骤2)得到的发酵产物进行提取，得到提取物，即腐植酸。

所述步骤1)中，所述物料按照如下方法制备：将糠醛渣和酒糟混合，调节其 C/N比至35～50:1，调节含水量至55～70wt％，得到堆体物料。

所述步骤1)中，堆肥时间为2～5d。

所述步骤2)中，发酵菌的添加量是物料干重的1.2～1.5wt％，发酵助剂的添加量是发酵菌重量的0.5～0.55wt％。

在本发明的实施例中，发酵助剂的添加量存在于占发酵菌重量的0.5，或 0.51，或0.52，或0.53，或0.54，或0.55重量百分比的范围内。

所述步骤2)中，将所述堆肥产物以尿素或鸡粪调节C/N比至25～30:1，调节含水量至45～55wt％，以磷酸盐缓冲溶液调整pH至6.2～7.0。

所述步骤2)中，所述发酵时间是25～35d。

所述步骤2)中，所述发酵菌是重量比为10～15:5～10:2～4:1的植物乳杆菌、放线菌、胶质芽孢杆菌和纳豆菌的混合物；各种发酵菌种均有不同的特性，发酵后产生不同的代谢产物和生理功能，因此，应用混合菌种发酵可避免产物之间相互之间产生不利的影响，发酵菌中的数种菌种的生长繁殖不会相互抑制，代谢产物又可以优势互补，发挥多种菌种的相互互补作用，提高最终发酵产物中腐殖酸等营养物质的含量。

所述步骤2)中，所述发酵助剂是将重量比为20～22:1的奎尼酸和松醇的混合物溶解于8～10重量倍的蒸馏水中得到的混合溶液。为了能使微生物正常生长活动，从而将大分子有机物转化为易于植物吸收的小分子有机物如腐殖酸等，需加入辅助物质调节，以使发酵体系适合微生物生存；首先，松醇可降解酒糟中的抗营养因子植物凝集素，松醇可高效地使植物凝集素的蛋白变性，从而使植物凝集素失活，降低其在酒糟中的含量，使酒糟适于被发酵菌发酵；其次，特殊配比的奎尼酸和松醇的混合物有助于促进发酵，两者之间的协同增益作用可强化微生物体内乙酰辅酶A的分泌，从而提高体内乙酰辅酶A的含量和活性，进而增进其与草酰乙酸的缩合反应，加速柠檬酸的生成，并进一步地大幅度强化微生物的三羧酸循环，促进微生物的生长繁殖，及其对底物的降解代谢，提高发酵速率，增加发酵产物中目标产物腐殖酸的含量与纯度，提高液肥肥效和经济效益。

在本发明的实施例中，发酵助剂中奎尼酸和松醇的重量比值存在于20:1，或20.2:1，或20.4:1，或20.6:1，或20.8:1，或21:1，或21.2:1，或21.4:1，或21.6:1，或21.8:1，或22:1的范围内。

所述步骤3)中，所述用碱的水溶液对步骤2)得到的发酵产物进行提取的方法包括如下步骤：将所述碱的水溶液与所述发酵产物混合，分离，取分离出的液体，得到提取物。

所述步骤3)中，所述碱的水溶液与所述发酵产物的体积比为3～10:1；所述碱的水溶液的浓度为2.4～3wt％；所述混合时间为5h。

所述步骤3)中，所述分离为压榨分离；所述碱为氢氧化钾或氢氧化钠。

所述步骤3)后，还包括将所述提取物进行过滤和浓缩的步骤。

利用工业废弃物糠醛渣和酒糟生产含腐殖酸有机肥，可实现变废为宝和资源综合利用，既解决了糠醛行业糠醛渣和酒糟的处理难题，又充分利用了糠醛渣和酒糟中的腐殖酸等有机物质，为改善土壤物化性质、提高农产品品质和增加农民收入提供了保障。

应当知道的是，通过生物技术分解纤维素等获得的生物腐植酸与传统的矿物腐植酸相比，具有如下特点：一是分子量小，渗透能力强，容易被生物吸收利用；二是水溶性好，抗硬水，不絮凝，不沉淀，使用方便；三是活性基团含量高，生理活性大，对金属离子络合、螯合能力强；四是饱和溶解度大，与微量元素有良好的相溶性；五是不含重金属与其他有害物质。利用生物腐植酸的络合、刺激植物生长等特性，配以无机肥料提供养分，可以制成生物腐植酸肥料，有利于增强应用效果。本发明的出发点就是在于充分利用和发挥生物腐植酸的这些优异功能。

除非另有指明，否则与液肥组合物相关地指定的重量数字(wt％)在每种情况下总是指液肥组合物的总重量。本领域技术人员认识到，对于液肥的任何任意小的子量，指定的组分和重量数字不需要满足，而是满足所产生液肥的代表性量的平均值。

本发明的有益效果为：

1)酶解半程时底物浓度的降低使得纤维素酶和蛋白酶的酶解效率降低，此时加入异山梨醇可剥离围绕着拐枣枝多糖的蛋白分子，使其中的拐枣枝多糖尽快溶出，加速拐枣枝多糖的析出，提高酶解目标产物拐枣枝多糖的含量与纯度；

2)液肥中的拐枣枝多糖经母株吸收后转运至伤口处，可促进伤口处的创伤细胞形成淡褐色的薄膜，该薄膜对伤口起保护作用，在拐枣枝多糖存在、营养成分充足、生活机能旺盛的条件下，愈合组织迅速生成，山茶嫁接成活大大提高；

3)发酵制备腐殖酸时，发酵助剂中的松醇可降解酒糟中的抗营养因子植物凝集素，松醇可高效地使植物凝集素的蛋白变性，从而使植物凝集素失活，降低其在酒糟中的含量，使酒糟适于被发酵菌发酵；

4)发酵助剂中特殊配比的奎尼酸和松醇有助于促进发酵，两者之间的协同增益作用可强化微生物体内乙酰辅酶A的分泌，经过一系列反应最终大幅度强化微生物的三羧酸循环，促进微生物的生长繁殖及代谢，提高发酵速率，增加发酵产物中目标产物腐殖酸的含量与纯度，提高液肥肥效和经济效益；

5)在酶解液浓缩液中加入糠醛渣和酒糟经发酵后得到的腐殖酸，其与氮、磷、钾等元素结合制成腐植酸类肥料，具有肥料增效、改良土壤、刺激山茶生长、促进接穗成活、改善山茶质量等功能；

6)在液肥中加入尿素、复合维生素和复合氨基酸，丰富了液肥的营养配比，同时提高嫁接接穗和砧木的抗病抗菌能力，液肥中的拐枣枝多糖能够较大程度的发挥促进嫁接成活的功能，提高嫁接成活率。

本发明采用了上述技术方案提供促进山茶嫁接成活率的液肥的制备方法，弥补了现有技术的不足，设计合理，操作方便。

具体实施方式

在本发明及实施例中，除非另有所指且特别说明外或者意思通俗易懂外，“份”指重量份，“％”指重量百分比，“wt％”指重量百分比，“‰”指重量千分比，“wt‰”指重量千分比，“倍”指重量倍。

以下结合实施例对本发明作进一步详细描述：

实施例1：

本实施例示出一种促进山茶嫁接成活率的液肥的制备方法，包括以下步骤：

酶解：取拐枣枝清洗并烘干，粉碎成100目拐枣枝粉，每1份拐枣枝粉中加入25份蒸馏水、0.03份纤维素酶和0.08份蛋白酶，混合均匀后加热至42℃，酶解15min，然后加入0.2份异山梨醇水溶液，继续酶解15min后灭酶，得到酶解液；使用纤维素酶和蛋白酶对拐枣枝粉进行酶解，首先将拐枣枝粉表面的纤维素分裂降解，然后以蛋白酶降解蛋白质，裸露出拐枣枝多糖，酶解半程时底物浓度的降低使得纤维素酶和蛋白酶的酶解效率降低，此时加入异山梨醇可剥离围绕着拐枣枝多糖的蛋白分子，使其中的拐枣枝多糖尽快溶出，加速拐枣枝多糖的析出，提高酶解目标产物拐枣枝多糖的含量与纯度。山茶嫁接成活主要是依靠接穗和砧木结合部分的形成层有分裂新细胞的作用，当两者受伤并密切结合后，喷施含有拐枣枝多糖的液肥有助于促进嫁接成活，拐枣枝多糖经母株吸收后转运至伤口处，可促进伤口处的创伤细胞形成淡褐色的薄膜，该薄膜对伤口起保护作用，薄膜下的薄壁组织细胞和形成层细胞进一步分裂形成愈合组织，在拐枣枝多糖存在、营养成分充足、生活机能旺盛的条件下，愈合组织迅速填充髓、砧间隙，冲破薄膜各层，继续分生，使维管束连接，并形成共同的形成层，这样输道组织互相沟通，使两者营养得以交流，进而长成嫁接幼枝，促进山茶嫁接成活；

浓缩：以160目细纱布过滤酶解液，在滤液中加入0.8份硝酸钠、1.2份正磷酸盐，加热至55℃保温2.5h，冷却后低温浓缩至密度为1.02g/mL，得浓缩液；以细纱布过滤，可滤除酶解液中的杂质成分，提高酶解液中拐枣枝多糖的含量与纯度，并经进一步地提纯后得到酶解液浓缩液；

复配：1℃、避光条件下，以磷酸缓冲液调节pH至6.8，加入0.5份腐殖酸、 1.2份尿素、0.02份复合维生素和0.01份复合氨基酸，混合均匀后以蒸馏水稀释 45倍，搅拌直至12h沉降率低于2％即得促进山茶嫁接成活率的液肥；在酶解液浓缩液中加入糠醛渣和酒糟经发酵后得到的腐殖酸，其特质可以有效避免液肥团聚、降低沉降率，均一、稳定，腐殖酸与氮、磷、钾等元素结合制成腐植酸类肥料，具有肥料增效、改良土壤、刺激山茶生长、促进接穗成活、改善山茶质量等功能，后续加入尿素、复合维生素和复合氨基酸，丰富了液肥的营养配比，同时提高嫁接接穗和砧木的抗病抗菌能力，液肥中的拐枣枝多糖能够较大程度的发挥促进嫁接成活的功能，提高嫁接成活率。

所述异山梨醇水溶液中异山梨醇的含量为1.2wt％。使用纤维素酶和蛋白酶对拐枣枝粉进行酶解，首先将拐枣枝粉表面的纤维素分裂降解，然后以蛋白酶降解蛋白质，裸露出拐枣枝多糖，酶解半程时底物浓度的降低使得纤维素酶和蛋白酶的酶解效率降低，此时加入异山梨醇可剥离围绕着拐枣枝多糖的蛋白分子，使其中的拐枣枝多糖尽快溶出，加速拐枣枝多糖的析出，提高酶解目标产物拐枣枝多糖的含量与纯度。

所述正磷酸盐是正磷酸与钠、钾、钙、镁形成的盐，具体为磷酸三钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸三钾、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸氢钙和磷酸氢镁的混合物。

在本发明实施例中腐殖酸的提取方法包括：

1)将物料堆积至堆体温度为55℃并堆肥，得到一次堆肥；

2)向步骤1)得到的堆肥产物中添加发酵菌和发酵助剂，在温度为35℃条件下进行发酵，得到发酵产物；

3)用碱的水溶液对步骤2)得到的发酵产物进行提取，得到提取物，即腐植酸。

所述步骤1)中，所述物料按照如下方法制备：将糠醛渣和酒糟混合，调节其 C/N比至35:1，调节含水量至55wt％，得到堆体物料。利用工业废弃物糠醛渣和酒糟生产含腐殖酸有机肥，可实现变废为宝和资源综合利用，既解决了糠醛行业糠醛渣和酒糟的处理难题，又充分利用了糠醛渣和酒糟中的腐殖酸等有机物质，为改善土壤物化性质、提高农产品品质和增加农民收入提供了保障。

所述步骤1)中，堆肥时间为2d。

所述步骤2)中，发酵菌的添加量是物料干重的1.2wt％，发酵助剂的添加量是发酵菌重量的0.5wt％。

所述步骤2)中，将所述堆肥产物以尿素或鸡粪调节C/N比至25:1，调节含水量至45wt％，以磷酸盐缓冲溶液调整pH至6.2。

所述步骤2)中，所述发酵时间是25d。

所述步骤2)中，所述发酵菌是重量比为10:5:2:1的植物乳杆菌、放线菌、胶质芽孢杆菌和纳豆菌的混合物；各种发酵菌种均有不同的特性，发酵后产生不同的代谢产物和生理功能，因此，应用混合菌种发酵可避免产物之间相互之间产生不利的影响，发酵菌中的数种菌种的生长繁殖不会相互抑制，代谢产物又可以优势互补，发挥多种菌种的相互互补作用，提高最终发酵产物中腐殖酸等营养物质的含量。

所述步骤2)中，所述发酵助剂是将重量比为20:1的奎尼酸和松醇的混合物溶解于8重量倍的蒸馏水中得到的混合溶液。为了能使微生物正常生长活动，从而将大分子有机物转化为易于植物吸收的小分子有机物如腐殖酸等，需加入辅助物质调节，以使发酵体系适合微生物生存；首先，松醇可降解酒糟中的抗营养因子植物凝集素，松醇可高效地使植物凝集素的蛋白变性，从而使植物凝集素失活，降低其在酒糟中的含量，使酒糟适于被发酵菌发酵；其次，特殊配比的奎尼酸和松醇的混合物有助于促进发酵，两者之间的协同增益作用可强化微生物体内乙酰辅酶A的分泌，从而提高体内乙酰辅酶A的含量和活性，进而增进其与草酰乙酸的缩合反应，加速柠檬酸的生成，并进一步地大幅度强化微生物的三羧酸循环，促进微生物的生长繁殖，及其对底物的降解代谢，提高发酵速率，增加发酵产物中目标产物腐殖酸的含量与纯度，提高液肥肥效和经济效益。

所述步骤3)中，所述用碱的水溶液对步骤2)得到的发酵产物进行提取的方法包括如下步骤：将所述碱的水溶液与所述发酵产物混合，分离，取分离出的液体，得到提取物。

所述步骤3)中，所述碱的水溶液与所述发酵产物的体积比为3:1；所述碱的水溶液的浓度为2.4wt％；所述混合时间为5h。

所述步骤3)中，所述分离为压榨分离；所述碱为氢氧化钾。

所述步骤3)后，还包括将所述提取物进行过滤和浓缩的步骤。

对比例1：

对比例1与实施例1基本相同，不同之处在于制备促进山茶嫁接成活率的液肥时，其酶解步骤中未加入异山梨醇水溶液。

实施例2：

本实施例示出一种促进山茶嫁接成活率的液肥的制备方法，包括：

(a)提供在酶解中程时加入异山梨醇水溶液的拐枣枝粉酶解液；

(b)在步骤(a)中的拐枣枝粉酶解液中添加无机盐并浓缩；

(c)在步骤(b)中的浓缩液中加入营养物质后稀释并控制沉降率即得。

具体为：

(a)酶解：取拐枣枝清洗并烘干，粉碎成140目拐枣枝粉，每1份拐枣枝粉中加入50份蒸馏水、0.04份纤维素酶和0.1份蛋白酶，混合均匀后加热至45℃，酶解20min，然后加入0.25份异山梨醇水溶液，继续酶解20min后灭酶，得到酶解液；使用纤维素酶和蛋白酶对拐枣枝粉进行酶解，首先将拐枣枝粉表面的纤维素分裂降解，然后以蛋白酶降解蛋白质，裸露出拐枣枝多糖，酶解半程时底物浓度的降低使得纤维素酶和蛋白酶的酶解效率降低，此时加入异山梨醇可剥离围绕着拐枣枝多糖的蛋白分子，使其中的拐枣枝多糖尽快溶出，加速拐枣枝多糖的析出，提高酶解目标产物拐枣枝多糖的含量与纯度。山茶嫁接成活主要是依靠接穗和砧木结合部分的形成层有分裂新细胞的作用，当两者受伤并密切结合后，喷施含有拐枣枝多糖的液肥有助于促进嫁接成活，拐枣枝多糖经母株吸收后转运至伤口处，可促进伤口处的创伤细胞形成淡褐色的薄膜，该薄膜对伤口起保护作用，薄膜下的薄壁组织细胞和形成层细胞进一步分裂形成愈合组织，在拐枣枝多糖存在、营养成分充足、生活机能旺盛的条件下，愈合组织迅速填充髓、砧间隙，冲破薄膜各层，继续分生，使维管束连接，并形成共同的形成层，这样输道组织互相沟通，使两者营养得以交流，进而长成嫁接幼枝，促进山茶嫁接成活；

(b)浓缩：以200目细纱布过滤酶解液，在滤液中加入1份硝酸钠、2份正磷酸盐，加热至58℃保温3h，冷却后低温浓缩至密度为1.04g/mL，得浓缩液；以细纱布过滤，可滤除酶解液中的杂质成分，提高酶解液中拐枣枝多糖的含量与纯度，并经进一步地提纯后得到酶解液浓缩液；

(c)复配：2℃、避光条件下，以磷酸缓冲液调节pH至7.0，加入1.5份腐殖酸、1.5份尿素、0.04份复合维生素和0.02份复合氨基酸，混合均匀后以蒸馏水稀释100倍，搅拌直至12h沉降率低于2％即得促进山茶嫁接成活率的液肥；在酶解液浓缩液中加入糠醛渣和酒糟经发酵后得到的腐殖酸，其特质可以有效避免液肥团聚、降低沉降率，均一、稳定，腐殖酸与氮、磷、钾等元素结合制成腐植酸类肥料，具有肥料增效、改良土壤、刺激山茶生长、促进接穗成活、改善山茶质量等功能，后续加入尿素、复合维生素和复合氨基酸，丰富了液肥的营养配比，同时提高嫁接接穗和砧木的抗病抗菌能力，液肥中的拐枣枝多糖能够较大程度的发挥促进嫁接成活的功能，提高嫁接成活率。

所述异山梨醇水溶液中的异山梨醇的含量为5.5wt％。使用纤维素酶和蛋白酶对拐枣枝粉进行酶解，首先将拐枣枝粉表面的纤维素分裂降解，然后以蛋白酶降解蛋白质，裸露出拐枣枝多糖，酶解半程时底物浓度的降低使得纤维素酶和蛋白酶的酶解效率降低，此时加入异山梨醇可剥离围绕着拐枣枝多糖的蛋白分子，使其中的拐枣枝多糖尽快溶出，加速拐枣枝多糖的析出，提高酶解目标产物拐枣枝多糖的含量与纯度。

所述正磷酸盐是正磷酸与钠、钾、钙、镁形成的盐，具体为磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸三钾、磷酸氢钙和磷酸氢镁的混合物。

进一步地，所述腐殖酸的提取步骤包括：

1)将物料堆积至堆体温度为58℃并堆肥，得到一次堆肥；

2)向步骤1)得到的堆肥产物中添加发酵菌和发酵助剂，在温度为45℃条件下进行发酵，得到发酵产物；

3)用碱的水溶液对步骤2)得到的发酵产物进行提取，得到提取物，即腐植酸。

所述步骤1)中，所述物料按照如下方法制备：将糠醛渣和酒糟混合，调节其 C/N比至50:1，调节含水量至70wt％，得到堆体物料。

所述步骤1)中，堆肥时间为5d。

所述步骤2)中，发酵菌的添加量是物料干重的1.5wt％，发酵助剂的添加量是发酵菌重量的0.55wt％。

所述步骤2)中，将所述堆肥产物以尿素或鸡粪调节C/N比至30:1，调节含水量至55wt％，以磷酸盐缓冲溶液调整pH至7.0。

所述步骤2)中，所述发酵时间是35d。

所述步骤2)中，所述发酵菌是重量比为15:10:4:1的植物乳杆菌、放线菌、胶质芽孢杆菌和纳豆菌的混合物；各种发酵菌种均有不同的特性，发酵后产生不同的代谢产物和生理功能，因此，应用混合菌种发酵可避免产物之间相互之间产生不利的影响，发酵菌中的数种菌种的生长繁殖不会相互抑制，代谢产物又可以优势互补，发挥多种菌种的相互互补作用，提高最终发酵产物中腐殖酸等营养物质的含量。

所述步骤2)中，所述发酵助剂是将重量比为22:1的奎尼酸和松醇的混合物溶解于10重量倍的蒸馏水中得到的混合溶液。为了能使微生物正常生长活动，从而将大分子有机物转化为易于植物吸收的小分子有机物如腐殖酸等，需加入辅助物质调节，以使发酵体系适合微生物生存；首先，松醇可降解酒糟中的抗营养因子植物凝集素，松醇可高效地使植物凝集素的蛋白变性，从而使植物凝集素失活，降低其在酒糟中的含量，使酒糟适于被发酵菌发酵；其次，特殊配比的奎尼酸和松醇的混合物有助于促进发酵，两者之间的协同增益作用可强化微生物体内乙酰辅酶A的分泌，从而提高体内乙酰辅酶A的含量和活性，进而增进其与草酰乙酸的缩合反应，加速柠檬酸的生成，并进一步地大幅度强化微生物的三羧酸循环，促进微生物的生长繁殖，及其对底物的降解代谢，提高发酵速率，增加发酵产物中目标产物腐殖酸的含量与纯度，提高液肥肥效和经济效益。

所述步骤3)中，所述用碱的水溶液对步骤2)得到的发酵产物进行提取的方法包括如下步骤：将所述碱的水溶液与所述发酵产物混合，分离，取分离出的液体，得到提取物。

所述步骤3)中，所述碱的水溶液与所述发酵产物的体积比为10:1；所述碱的水溶液的浓度为3wt％；所述混合时间为5h。

所述步骤3)中，所述分离为压榨分离；所述碱为氢氧化钠。

所述步骤3)后，还包括将所述提取物进行过滤和浓缩的步骤。

利用工业废弃物糠醛渣和酒糟生产含腐殖酸有机肥，可实现变废为宝和资源综合利用，既解决了糠醛行业糠醛渣和酒糟的处理难题，又充分利用了糠醛渣和酒糟中的腐殖酸等有机物质，为改善土壤物化性质、提高农产品品质和增加农民收入提供了保障。

对比例2：

对比例2与实施例2基本相同，不同之处在于提取腐殖酸时，堆肥产物中未添加发酵助剂。

对比例3：

对比例3与对比例2基本相同，不同之处在于促进山茶嫁接成活率的液肥时，其酶解步骤中未加入异山梨醇水溶液。

实验例：

分别统计实施例1～2以及对比例1～3中的液肥的性状以及12h时的沉降率，统计入表1；然后以市售液肥为对照组，以普通嫁接方式嫁接山茶后喷施全部六种液肥，统计接穗成活率以及长势，统计入表1。

表1液肥的表征以及喷施后接穗的长势统计

例别	液肥性状	12h的沉降率	接穗成活率	接穗长势
					实施例1	稳定、不分层	0.55％	99.5％	良好
实施例2	稳定、不分层	0.60％	100.0％	良好
					对比例1	稳定、不分层	0.85％	95.0％	稍枯萎
对比例2	不稳定、微分层	1.55％	98.5％	稍枯萎
					对比例3	不稳定、微分层	1.80％	93.5％	稍枯萎
对照组	/	/	88.5％	较枯萎

由表1可知，在本发明的优选实施例1～2中，液肥的性状稳定、不分层，其12h的沉降率不超过0.6％，同时喷施其之后山茶插穗长势较好，插穗成活率接近100％，说明本发明中的促进山茶嫁接成活率的液肥是一种能够有效提高嫁接成活率的液肥。

上述实施例中的常规技术为本领域技术人员所知晓的现有技术，故在此不再详细赘述。

以上实施方式仅用于说明本发明，而并非对本发明的限制，本领域的普通技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，还可以做出各种变化和变型。因此，所有等同的技术方案也属于本发明的范畴，本发明的专利保护范围应由权利要求限定。

Claims (10)

1.促进山茶嫁接成活率的液肥的制备方法，其特征在于包括：在酶解拐枣枝粉中程时加入异山梨醇水溶液，拐枣枝粉酶解液中添加无机盐并浓缩，浓缩液中添加含腐殖酸的营养物质后稀释并控制12h沉降率低于2％即得。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于包括：

酶解：取拐枣枝清洗、烘干并粉碎成拐枣枝粉，加入、纤维素酶和蛋白酶，混合均匀后酶解，然后加入异山梨醇水溶液继续酶解后灭酶，得到酶解液；

浓缩：以细纱布过滤酶解液，在滤液中加入无机盐，加热保温，冷却后低温浓缩至密度至少为1.02g/mL，得浓缩液；

复配：调节pH至6.8～7.0，加入腐殖酸、尿素、复合维生素和复合氨基酸，混合均匀后以蒸馏水稀释，搅拌直至12h沉降率低于2％即得。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述异山梨醇水溶液中异山梨醇的含量为1.2～5.5wt％。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述拐枣枝粉的粒度为100～140目，所述细纱布的孔隙为160～200目。

5.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述无机盐为硝酸钠和正磷酸盐，所述正磷酸盐是正磷酸与钠、钾、钙、镁形成的盐。

6.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述酶解时温度是42～45℃，加入异山梨醇水溶液前后均分别酶解15～20min。

7.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述腐殖酸的提取步骤为：

1)将物料堆积至堆体温度为55～58℃并堆肥，得到一次堆肥；

2)向步骤1)得到的堆肥产物中添加发酵菌和发酵助剂，在温度为35～45℃条件下进行发酵，得到发酵产物；

3)用碱的水溶液对步骤2)得到的发酵产物进行提取，得到提取物，即腐植酸。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述发酵助剂是将重量比为20～22:1的奎尼酸和松醇的混合物溶解于8～10重量倍的蒸馏水中得到的混合溶液。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：发酵前，将所述堆肥产物以尿素或鸡粪调节C/N比至25～30:1，调节含水量至45～55wt％，调整pH至6.2～7.0。

10.利用权利要求1-9任一项所述的方法制备的促进山茶嫁接成活率的液肥，其特征在于以1重量份拐枣枝粉计，包括：

拐枣枝粉酶解液浓缩液；

0.8～1重量份硝酸钠；

1.2～2重量份正磷酸盐；

0.5～1.5重量份腐殖酸；

1.2～1.5重量份尿素；

0.02～0.04重量份复合维生素；

0.01～0.02重量份复合氨基酸；

上述混合组分以蒸馏水稀释45～100倍。